JP2015505477A5 - - Google Patents

Description

一態様では、本明細書で記載されるマウスにおいて作製されるか、または本明細書で記載されるマウスにおいて作製された配列に由来する、抗体またはその抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、ｓｃＦｖ）が提供される。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
非ヒト動物であって、以下：
（ａ）１つまたは複数のヒトＶ _Ｌ 遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪ _Ｌ 遺伝子セグメントの、非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域の上流への挿入、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＶ _Ｌ 遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪ _Ｌ 遺伝子セグメントの、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域の上流への挿入、および
（ｃ）ＡＤＡＭ６タンパク質またはその機能的断片をコードするヌクレオチド配列であって、該ＡＤＡＭ６タンパク質が異所性ＡＤＡＭ６核酸配列から発現するヌクレオチド配列を含む、
非ヒト動物。
（項目２）
前記非ヒト重鎖および／または軽鎖定常領域が、齧歯動物定常領域である、項目１に記載の非ヒト動物。
（項目３）
前記軽鎖定常領域がマウスＣκである、項目１または２に記載の非ヒト動物。
（項目４）
前記非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域の上流の前記ヒトＶ _Ｌ 遺伝子セグメントおよびヒトＪ _Ｌ 遺伝子セグメントがヒトＶκ遺伝子セグメントおよびヒトＪκ遺伝子セグメントである、先行する項目のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
（項目５）
前記非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域の上流の前記ヒトＶ _Ｌ 遺伝子セグメントおよびヒトＪ _Ｌ 遺伝子セグメントがヒトＶκ遺伝子セグメントおよびヒトＪκ遺伝子セグメントである、先行する項目のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
（項目６）
ＡＤＡＭ６タンパク質またはその機能的断片をコードする前記ヌクレオチド配列が、野生型非ヒトＡＤＡＭ６遺伝子座に比較して同じ場所に存在する、先行する項目のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
（項目７）
ＡＤＡＭ６タンパク質またはその機能的断片をコードする前記ヌクレオチド配列が、免疫グロブリン遺伝子セグメント内に存在する、先行する項目のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
（項目８）
前記免疫グロブリン遺伝子セグメントが、ヒトκ軽鎖遺伝子セグメントである、項目７に記載の非ヒト動物。
（項目９）
前記免疫グロブリン遺伝子セグメントが、前記非ヒト動物の内因性重鎖遺伝子セグメントである、項目７または８に記載の非ヒト動物。
（項目１０）
前記非ヒト動物が、該非ヒト動物において免疫グロブリンＶ _Ｌ ドメインを形成するように再配列することができない、内因性免疫グロブリンＶ _Ｌ および／またはＪ _Ｌ 遺伝子セグメントを含む、先行する項目のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
（項目１１）
（ａ）前記非ヒト動物の内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座における１つまたは複数の再配列していないヒトＶκ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数の再配列していないヒトＪκ遺伝子セグメント、
（ｂ）該非ヒト動物の内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座における１つまたは複数の再配列していないヒトＶκ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数の再配列していないヒトＪκ遺伝子セグメント
を含む遺伝子改変された非ヒト動物であって、ＡＤＡＭ６タンパク質またはその機能的断片を発現することができる、非ヒト動物。
（項目１２）
項目１または１１に記載の非ヒト動物由来の細胞。
（項目１３）
前記細胞がＢ細胞である、項目１２に記載の細胞。
（項目１４）
項目１３に記載のＢ細胞から生成されたハイブリドーマ。
（項目１５）
前記非ヒト動物が齧歯動物である、項目１２に記載の細胞。
（項目１６）
前記齧歯動物がマウスおよびラットから選択される、項目１５に記載の細胞。
（項目１７）
（ａ）項目１または１１に記載の非ヒト動物を、対象の抗原に曝露させる工程と；
（ｂ）該非ヒト動物の１つまたは複数のＢリンパ球を単離する工程であって、該１つまたは複数のＢリンパ球が、対象の該抗原を結合するＶ _Ｌ 結合タンパク質を発現する、工程と；
（ｃ）対象の該抗原を結合する該Ｖ _Ｌ 結合タンパク質のＶ _Ｌ ドメインをコードする核酸配列を同定する工程であって、該Ｖ _Ｌ 結合タンパク質が、ヒトＶκドメインおよび非ヒト軽鎖定常ドメイン、ならびにヒトＶκドメインおよび非ヒト重鎖定常ドメインを含む、工程と；
（ｄ）（ｃ）の該核酸配列を、ヒト免疫グロブリン定常領域核酸配列と共に用いて、対象の該抗原を結合するヒト抗原結合タンパク質を作製する工程とを含む、対象の抗原に結合する抗原結合タンパク質を作製するための方法が提供される。
（項目１８）
前記Ｖ _Ｌ 結合タンパク質の非ヒト軽鎖定常領域がマウスＣκであり、且つ前記非ヒト重鎖定常領域がマウス重鎖定常領域である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記非ヒト動物がマウスである、項目１７または１８に記載の方法。
（項目２０）
非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結した１つまたは複数のヒト免疫グロブリン軽鎖遺伝子セグメントを含む齧歯動物であって、１つまたは複数のＡＤＡＭ６タンパク質を発現する、齧歯動物。
（項目２１）
前記１つまたは複数のヒト免疫グロブリン軽鎖遺伝子セグメントがヒトＶκ遺伝子セグメントおよびヒトＪκ遺伝子セグメントである、項目２０に記載の齧歯動物。
（項目２２）
前記非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子がマウスまたはラット重鎖定常領域遺伝子である、項目２０または２１に記載の齧歯動物。
（項目２３）
前記免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子がＣ _Ｈ １領域および／またはヒンジ領域を含む、項目２０〜２２のいずれか１項に記載の齧歯動物。
（項目２４）
１つまたは複数の内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子配列の欠失または置き換えを含む、項目２０〜２３のいずれか１項に記載の齧歯動物。
（項目２５）
前記内因性Ｖ _Ｈ 遺伝子セグメント、Ｄ _Ｈ 遺伝子セグメント、およびＪ _Ｈ 遺伝子セグメントが、再配列したＶ／Ｄ／Ｊ配列を形成するように再配列することができない、項目２０〜２４のいずれか１項に記載の齧歯動物。
（項目２６）
内因性ＡＤＡＭ６遺伝子の欠失を含み、且つ異所性マウスＡＤＡＭ６遺伝子をさらに含む、項目２０〜２５のいずれか１項に記載の齧歯動物。
（項目２７）
マウスまたはラットから選択される、項目２０〜２６のいずれか１項に記載の齧歯動物。
（項目２８）
（ａ）雄齧歯動物において内因性ＡＤＡＭ６活性の低減または消失をもたらす齧歯動物重鎖免疫グロブリン遺伝子座の第１の改変を行う工程であって、該第１の改変が、１つまたは複数のヒトＶ _Ｌ 遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪ _Ｌ 遺伝子セグメント、およびそれらの組み合わせから選択される遺伝子セグメントの挿入を包含する、工程；ならびに
（ｂ）雄齧歯動物において機能的であるＡＤＡＭ６活性を該齧歯動物に付与する核酸配列を該齧歯動物に付加するように第２の改変を行う工程
を含む、齧歯動物の重鎖免疫グロブリン遺伝子座を改変するための方法。
（項目２９）
前記第１の改変が、１つまたは複数のＶ _Ｌ 遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のＪ _Ｌ 遺伝子セグメントと共に再配列することができる１つまたは複数のヒトＤ _Ｈ 遺伝子セグメントの挿入をさらに含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記１つまたは複数のＶ _Ｌ 遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪ _Ｌ 遺伝子セグメントが、Ｖκ遺伝子セグメントおよびＪκ遺伝子セグメント、またはＶλ遺伝子セグメントおよびＪλ遺伝子セグメントである、項目２８に記載の方法。
（項目３１）
雄齧歯動物において機能的であるＡＤＡＭ６活性を前記齧歯動物に付与する前記核酸配列が、前記１つまたは複数のヒトＶ _Ｌ 遺伝子セグメントおよび／または前記１つまたは複数のヒトＪ _Ｌ 遺伝子セグメントに近接している、項目２８〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記第１および前記第２の改変が、単一ＥＳ細胞において行われ、且つ該単一ＥＳ細胞が、前記齧歯動物を作製するために宿主胚へと導入される、項目２８〜３１のいずれか１項に記載の方法。

Claims (25)

1. 非ヒト動物であって、そのゲノムが、以下：
   （ａ）１つまたは複数のヒトＶ_Ｌ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪ_Ｌ遺伝子セグメントの、非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子の上流への挿入であって、該１つまたは複数のヒトＶ _Ｌ 遺伝子セグメントおよび該１つまたは複数のヒトＪ _Ｌ 遺伝子セグメントは、該非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結されている、挿入、
   （ｂ）１つまたは複数のヒトＶ_Ｌ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪ_Ｌ遺伝子セグメントの、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子の上流への挿入であって、該１つまたは複数のヒトＶ _Ｌ 遺伝子セグメントおよび該１つまたは複数のヒトＪ _Ｌ 遺伝子セグメントは、該非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結されている、挿入、および
   （ｃ）ＡＤＡＭ６タンパク質またはその機能的断片をコードする異所性核酸配列であって、該ＡＤＡＭ６タンパク質またはその機能的断片が該異所性核酸配列から発現する、異所性核酸配列
   を含む、
   非ヒト動物。
2. 前記非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、齧歯動物免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子であり、および／または前記非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子が、齧歯動物免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子である、請求項１に記載の非ヒト動物。
3. 前記非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子がマウスＣκである、請求項１または２に記載の非ヒト動物。
4. 前記非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子の上流の前記１つまたは複数のヒトＶ_Ｌ遺伝子セグメントおよび前記１つまたは複数のヒトＪ_Ｌ遺伝子セグメントが１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
5. 前記非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子の上流の前記１つまたは複数のヒトＶ_Ｌ遺伝子セグメントおよび前記１つまたは複数のヒトＪ_Ｌ遺伝子セグメントが１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
6. ＡＤＡＭ６タンパク質またはその機能的断片をコードする前記核酸配列が、野生型非ヒトＡＤＡＭ６遺伝子座に比較して同じ場所に存在する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
7. ＡＤＡＭ６タンパク質またはその機能的断片をコードする前記核酸配列が、免疫グロブリン遺伝子セグメント内に存在する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
8. 前記免疫グロブリン遺伝子セグメントが、ヒトκ軽鎖遺伝子セグメントである、請求項７に記載の非ヒト動物。
9. 前記免疫グロブリン遺伝子セグメントが、前記非ヒト動物の内因性重鎖遺伝子セグメントである、請求項７に記載の非ヒト動物。
10. 前記非ヒト動物が、該非ヒト動物において免疫グロブリン軽鎖可変領域配列を形成するように再配列することができない、内因性Ｖ _Ｌ 遺伝子セグメントおよび／または内因性Ｊ_Ｌ遺伝子セグメントを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
11. そのゲノムが、
    （ａ）前記非ヒト動物の内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座における１つまたは複数の再配列していないヒトＶκ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数の再配列していないヒトＪκ遺伝子セグメント、
    （ｂ）該非ヒト動物の内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座における１つまたは複数の再配列していないヒトＶκ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数の再配列していないヒトＪκ遺伝子セグメント
    を含む遺伝子改変された非ヒト動物であって、ＡＤＡＭ６タンパク質またはその機能的断片を発現することができる、非ヒト動物。
12. 前記非ヒト動物がマウスである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の非ヒト動物。
13. 請求項１〜１２のいずれか１項に記載の非ヒト動物由来の細胞。
14. 前記細胞がＢ細胞である、請求項１３に記載の細胞。
15. 請求項１４に記載のＢ細胞から生成されたハイブリドーマ。
16. 前記非ヒト動物が齧歯動物である、請求項１３に記載の細胞。
17. 前記齧歯動物がマウスおよびラットから選択される、請求項１６に記載の細胞。
18. （ａ）請求項１〜１２のいずれか１項に記載の非ヒト動物を、対象の抗原に曝露させる工程と；
    （ｂ）該非ヒト動物の１つまたは複数のＢリンパ球を単離する工程であって、該１つまたは複数のＢリンパ球が、対象の該抗原を結合する軽鎖可変ドメイン結合タンパク質を発現する、工程と；
    （ｃ）対象の該抗原を結合する該軽鎖可変ドメイン結合タンパク質の軽鎖可変ドメインのうちの１つをコードする該１つまたは複数のＢリンパ球由来の核酸配列を同定する工程であって、該軽鎖可変ドメイン結合タンパク質が、非ヒト軽鎖定常ドメインに作動可能に連結されたヒトκ軽鎖可変ドメイン、ならびに非ヒト重鎖定常ドメインに作動可能に連結されたヒトκ軽鎖可変ドメインを含む、工程と；
    （ｄ）（ｃ）の該核酸配列を、ヒト免疫グロブリン定常領域核酸配列と共に用いて、対象の該抗原を結合するヒト抗原結合タンパク質を作製する工程とを含む、対象の抗原に結合する抗原結合タンパク質を作製するための方法。
19. （ｃ）の前記軽鎖可変結合タンパク質の非ヒト軽鎖定常ドメインがマウスＣκによってコードされ、且つ前記非ヒト重鎖定常ドメインがマウス重鎖定常領域遺伝子によってコードされる、請求項１８に記載の方法。
20. 前記非ヒト動物がマウスである、請求項１８または１９に記載の方法。
21. （ａ）雄齧歯動物において内因性ＡＤＡＭ６活性の低減または消失をもたらす齧歯動物免疫グロブリン重鎖遺伝子座の第１の改変を行う工程であって、該第１の改変が、１つまたは複数のヒトＶ_Ｌ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪ_Ｌ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせを含む挿入を包含する、工程；ならびに
    （ｂ）雄齧歯動物において機能的であるＡＤＡＭ６活性を該齧歯動物に付与する核酸配列を該齧歯動物に付加するように第２の改変を行う工程
    を含む、齧歯動物の免疫グロブリン重鎖遺伝子座を改変するための方法。
22. 前記１つまたは複数のヒトＶ_Ｌ遺伝子セグメントおよび前記１つまたは複数のヒトＪ_Ｌ遺伝子セグメントが、（１）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメント、または（２）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントである、請求項２１に記載の方法。
23. 雄齧歯動物において機能的であるＡＤＡＭ６活性を前記齧歯動物に付与する前記核酸配列が、前記１つまたは複数のヒトＶ_Ｌ遺伝子セグメントおよび／または前記１つまたは複数のヒトＪ_Ｌ遺伝子セグメントに近接している、請求項２１または２２に記載の方法。
24. 前記第１および前記第２の改変が、単一ＥＳ細胞において行われ、且つ該単一ＥＳ細胞が、前記齧歯動物を作製するために宿主胚へと導入される、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
25. 前記齧歯動物がマウスである、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の方法。