JP2011511636A - 修飾RNAiポリヌクレオチドおよびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
相補的なオリゴヌクレオチド配列は、有望な治療剤であり、遺伝子の機能を解明するのに有用な研究ツールである。しかしながら、従来技術のオリゴヌクレオチド分子は、それらの臨床開発を妨げ得、かかる組成物を用いた遺伝子発現(タンパク質合成を含む)の意図された効果的な阻害の達成を頻繁に難しくさせる幾つかの問題に悩まされる。
ある態様において、dsRNAのセンス鎖が、該センス鎖の3’−末端から10番目および11番目のヌクレオチドの間の単一部位において、RISCによって切断可能である。
ある態様において、dsRNAコンストラクトが、平滑末端である。
ある態様において、センス鎖の各末端が、一続き(continuous stretch)の2’−修飾リボース糖を含む。
ある態様において、センス鎖の各末端が、4つ一続きの2’−修飾リボース糖を含む。
ある態様において、アンチセンス鎖が、非連続的な2’−修飾リボース糖を含み、10番目および11番目のアンチセンスヌクレオチドが修飾されていない。
ある態様において、アンチセンス鎖が、2’−修飾リボース糖を、2、3、4、5、6、7、8または9ヌクレオチドごとに含む。
ある態様において、dsRNAコンストラクトが、12〜35ヌクレオチドの長さ、25〜30ヌクレオチドの長さ、25、26、27、28、29または30ヌクレオチドの長さ、22ヌクレオチドより長い長さ、25ヌクレオチドより長い長さ、または31〜49ヌクレオチドの長さである。
ある態様において、センス鎖の各末端が、独立して、4〜16個の2’−修飾リボース糖および/または非加水分解性ヌクレオチド間結合を含む。
ある態様において、2’−修飾リボース糖が、2’−O−アルキルヌクレオチド、2’−デオキシ−2’−フルオロヌクレオチド、2’−デオキシヌクレオチド、2’−H−(デオキシリボヌクレオチド)またはそれらの組み合わせである。
ある態様において、2’−O−アルキルヌクレオチドが、2’−O−メチルヌクレオチドである。
ある態様において、2’−O−アルキルヌクレオチドが、2’−O−アリルヌクレオチドである。
ある態様において、dsRNAが、2’−修飾を前記の位置に含まない類似のコンストラクトと比較して、増強された標的特異性または減少したオフターゲットサイレンシングを有する。
ある態様において、アンチセンス鎖が、ホスホチオエート結合を有する少なくとも4つの連続した2’−O−メチル修飾3’−末端ヌクレオチドを含む。
ある態様において、dsRNAのセンス鎖が、センス鎖の3’−末端から2番目のヌクレオチドにおいて、ミスマッチヌクレオチドを含む。
ある態様において、センス鎖の3’−末端における最後から2〜8番目のヌクレオチドが、それらの対応するアンチセンス鎖ヌクレオチドとミスマッチである。
ある態様において、dsRNAが、初代細胞(primary cells)においてインターフェロン応答を誘導しない。
ある態様において、センス鎖のいずれかの末端および/またはアンチセンス鎖の3’−末端が、保護基によってブロックされている。
ある態様において、反転ヌクレオチドが、反転デオキシヌクレオチドを含む。
ある態様において、反転脱塩基部分が、反転デオキシ脱塩基部分を含む。
ある態様において、反転デオキシ脱塩基部分が、3’,3’−連結または5’,5’−連結デオキシ脱塩基部分である。
ある態様において、センスおよび/またはアンチセンス鎖の末端の交互(alternating)ヌクレオチドが、2’−修飾リボース糖を含み、各2’−修飾リボース糖が、逆鎖上の非修飾ヌクレオチドと向き合う。
ある態様において、標的遺伝子が、SOD1、PPIB、RIP140、PCSK9、TNFα、AP2(脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質)またはMAP4K4である。
ある態様において、2’−修飾リボースヌクレオチドの間のセンス鎖ヌクレオチドが、2’−F修飾である。
ある態様において、2’−修飾リボースヌクレオチドの間のセンス鎖ヌクレオチドが、プリンヌクレオチドであり、任意に2’−F修飾修飾および/またはホスホロチオエート結合を有する。
ある態様において、各一続きの2’−修飾リボース糖が、末端ヌクレオチド、末端ヌクレオチドから二番目のヌクレオチド、または末端ヌクレオチドから三番目のヌクレオチドから独立して開始される。
ある態様において、アンチセンス鎖のピリミジンヌクレオチドの50〜100%が、独立して2’−F修飾または2’−O−メチル修飾である。
ある態様において、アンチセンス鎖の5’−末端が、リン酸化されている。
本発明の別の側面は、主題のベクターまたは主題のdsRNAを含む細胞を提供する。
ある態様において、細胞が、培養哺乳類細胞である。
ある態様において、細胞が、ヒト細胞である。
本発明の別の側面は、主題のdsRNA、および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物を提供する。
ある態様において、哺乳類細胞が、培養されている。
ある態様において、哺乳類細胞が、ヒト細胞である。
ある態様において、哺乳類細胞を、送達試薬の存在下で接触させる。
ある態様において、送達試薬が、脂質である。
ある態様において、脂質が、カチオン性脂質である。
ある態様において、送達試薬が、リポソームである。
本発明の別の側面は、短鎖干渉RNA(siRNA)の遺伝子サイレンシング効果を改善するための方法であって、siRNAのセンスおよび/またはアンチセンスヌクレオチドを修飾して、主題のdsRNAコンストラクトとすることを含む、前記方法を提供する。
本発明の別の側面は、siRNAコンストラクトの標的部位へのin vivo送達を評価する方法であって、siRNAコンストラクトとともにPPIBを標的とする主題のdsRNAコンストラクトを共送達し、標的部位におけるPPIB機能の阻害をアッセイすることを含み、ここでPPIB機能の標的部位における阻害の成功が、標的部位へのsiRNAコンストラクトのin vivo送達成功の指標となる、前記方法を提供する。
さらに、ここでおよび本明細書中のどこかで記載されたあらゆる態様は、適用可能な場合には他のあらゆる態様と組み合わせることができるものとする。
本発明は、あるより長いdsRNA(例として、21塩基対を超える二本鎖領域を有するもの)が、センス鎖が修飾された(例として、センス鎖の両末端が例えば2’−O−メチル基によって)場合に、ダイサーまたは他のダイサー様RNAseIIIによって切断されず、かかるdsRNAのアンチセンス鎖が、該アンチセンス鎖の5’−末端が21マー(すなわちダイサー切断産物)の5’末端と並んだ状態でRISC複合体に取り込まれ得るという驚くべき発見に部分的に基づいている。先行技術が、化合物がダイサーの基質を形成する場合、RNAi化合物活性は(siRNAと比較して)増大すると教示しているにもかかわらず、本出願人らは実際に、ダイサーの基質ではない非常に活性なRNAi化合物を見出した。本発明はまた、かかるより長いアンチセンス(ガイド)鎖を取り込んだRISC複合体が、標的mRNAを、アンチセンス(ガイド)配列の5’−末端から10番目および11番目のヌクレオチドの間の位置に対応する単一位置で切断するものであるという発見に部分的に基づいている。
さらに、より長いdsRNAがダイサー切断に対して抵抗性であるように操作することができるという知識、およびダイサー抵抗性アンチセンス鎖が定義された場所でRISC複合体に取り込まれて単一種の活性RNAi試薬を創造することができるという知識により、人はセンスおよび/またはアンチセンス鎖に付加的な特徴または修飾を施し、RNAi試薬または治療薬の特性を改善することができる。特に、5’−末端に関するガイド鎖中の修飾位置を今や定義することができ、この位置がかかる修飾RNAi化合物の特異性および活性の定義に重要である。
本明細書で用いられる場合、「2’−修飾リボース糖」は、2’−OH基を有さないリボース糖を含む。例えば、2’−修飾リボース糖は2’−O−アルキルヌクレオチド、2’−デオキシ−2’−フルオロヌクレオチド、2’−デオキシヌクレオチド、2’−H(デオキシリボヌクレオチド)、またはそれらの組み合わせであってよい。
例えば、本発明の全ての適用可能な側面について、アンチセンス鎖は、2’−O−メチル修飾ヌクレオチドなどの2’−修飾リボース糖を、該アンチセンス鎖の5’−末端から2番目のヌクレオチドに含んでよく、好ましくは他の修飾ヌクレオチドを含まない。かかる修飾を有するdsRNAは、前記位置に2’−O−メチル修飾を有さない類似のコンストラクトと比較して、増強された標的特異性または減少したオフターゲットサイレンシングを有する。
本発明の全ての適用可能な側面について、dsRNAは、センス鎖の3’−末端の10番目と11番目のヌクレオチドの間の単一部位において、RISCによって切断されてよい。
特定のアンチセンスおよびセンス鎖修飾のある組み合わせは、標的遺伝子発現を阻害する増強された能力、増強された血清安定性、および/または増大した標的特異性などによって部分的に明らかにされたように、予測できない利点となり得る。
ある態様において、dsRNAのセンス鎖が、該センス鎖の3’−末端から10番目および11番目のヌクレオチドの間の単一部位において、RISCによって切断可能である。
25マーコンストラクトについて、センス鎖の各末端が、独立して、4〜16個の2’−修飾ヌクレオチドおよび/または非加水分解性結合(例として、ホスホチオエート結合)を含んでよい。修飾塩基の数はコンストラクトの全体的な長さに依存して調整されてよい。例えば27マーについて、センス鎖の各末端が、独立して、4〜18個の2’−修飾ヌクレオチドおよび/またはホスホチオエート結合を含んでよい、などである。
ある態様において、センス鎖の各末端は同じ数または異なる数の2’−修飾リボース糖を有してよいが、各末端が一続きの2’−修飾リボース糖を含む。
ある態様において、センス鎖の各末端が4つ一続きの2’−修飾リボース糖を含む。
ある態様において、2’−修飾ヌクレオチドが、ピリミジンヌクレオチド(例として、C/U)である。
例えば、2’−O−メチルヌクレオチド、または2’−O−アリルヌクレオチドであってよい。
ある態様において、修飾dsRNAが、同一の配列を有する非修飾のdsRNAと比較して、血清および/または脳脊髄液中での改善された安定性を有し得る。
ある態様において、dsRNAが、2’−修飾を前記の位置に含まない類似のコンストラクトと比較して、増強された標的特異性または減少したオフターゲットサイレンシングを有する。
ある態様において、dsRNAのセンス鎖が、センス鎖の3’−末端から2番目のヌクレオチドにおいて、ミスマッチヌクレオチドを含む。
ある態様において、センス鎖の3’−末端における最後から2〜8番目のヌクレオチドが、それらの対応するアンチセンス鎖ヌクレオチドとミスマッチである。
ある態様において、dsRNAが、無脊椎動物中の標的遺伝子の発現を阻害するために用いられてもよい。
ある態様において、5’−末端から10番目および11番目のアンチセンスヌクレオチドが修飾されていない。
例えば、ある態様において、2’−修飾ヌクレオチドの間のセンス鎖ヌクレオチド(例として、センス鎖の中央部分または一続きの部分)が2’−F修飾である。代替的にまたはそれに加えて、センス鎖の同一の部分が、それぞれ約1〜5ヌクレオチドのバルジなど、1または2以上のバルジを形成してもよい。
ある関連した態様において、本発明はまた、標的遺伝子の発現を阻害するためのRNAコンストラクト、ここで該コンストラクトのセンス鎖上の単一ニック以外は上述の任意のdsRNAと同一である、を提供する。したがって、これらの態様において、RNAコンストラクトは実際のところ、ハイブリダイゼーションによって、二本鎖構造を形成する3つのポリヌクレオチドを含む。アンチセンス鎖は一本鎖ポリヌクレオチドであり、一方で他の2つのポリヌクレオチドは両方ともアンチセンスポリヌクレオチドにハイブリダイズし、本明細書に記載された他の任意のdsRNAコンストラクトに対応する「センス鎖」を形成する。
本発明はさらに、主題のdsRNA、および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物に関する。
本方法は、例えば培養ヒト細胞などの培養哺乳類細胞において、in vitroまたはin vivoで行われてよい。
標的細胞(例として、哺乳類細胞)は、脂質(例としてカチオン性脂質)またはリポソームなどの送達試薬の存在下で接触させてよい。
本発明の別の側面は、短鎖干渉RNA(siRNA)の遺伝子サイレンシング効果を改良するための方法であって、siRNAのセンスおよび/またはアンチセンスヌクレオチドを修飾して、主題のdsRNAコンストラクトとすることを含む、前記方法を提供する。
本発明のより詳細な側面は、以下のセクションにおいて記載される。
デュプレックスの特徴
本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドは、2つの別々の相補的核酸鎖によって形成されてよい。デュプレックス形成は標的遺伝子を含む細胞の内側または外側で起こり得る。
本明細書で使用される場合、「二本鎖」という語は、少なくともヌクレオモノマーの一部が相補的であり、水素結合してデュプレックスを形成する分子の領域を含む1または2以上の核酸分子を含む。
本発明のヌクレオチドは、糖部分、ホスホジエステル結合および/または塩基を含む様々な場所で修飾されていてよい。
糖部分は、例としてモノサッカライド(ペントース、例としてリボース、デオキシリボース、など)、天然の非修飾糖、修飾糖および糖アナログを含む。一般的に、ヌクレオモノマー、特に糖部分、の可能な修飾は、例えば1または2以上のヒドロキシル基のハロゲン、ヘテロ原子、脂肪族基との置き換え、またはヒドロキシル基のエーテル、アミン、チオールなどとしての官能化を含む。
エンド−およびエクソ−ヌクレアーゼ抵抗性をさらに最大化するために、2’−修飾ヌクレオモノマーを末端に使用するのに加えて、ホスホジエステル以外のヌクレオモノマー間結合を用いてよい。例えば、かかる末端ブロックは単独でまたは2’−O−メチル連結の間のホスホチオエート結合と組み合わせて用いてよい。好ましい2’−修飾ヌクレオモノマーは2’−修飾末端ヌクレオチドである。
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」という語は、−OHまたは−O−(適切な対イオンを伴って)を含む。
「ハロゲン」という語は、フッ素、臭素、塩素、ヨウ素などを含む。「パーハロゲン化」は一般的に、全ての水素原子がハロゲン原子で置き換えられた基をいう。
「ヌクレオシド」という語は、糖部分、好ましくはリボースまたはデオキシリボース、に共有結合している塩基を含む。好ましいヌクレオシドの例は、リボヌクレオシドおよびデオキシリボヌクレオシドを含む。ヌクレオシドはまた、遊離カルボキシル基、遊離アミノ基、または保護基を含んでもよいアミノ酸またはアミノ酸アナログに連結する塩基を含む。好適な保護基は当該技術分野において周知である(P. G. M. Wuts and T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2nd Ed., Wiley-Interscience, New York, 1999参照)。
本明細書で使用される場合、「連結(linkage)」という語は、隣接するヌクレオモノマーを共有的に結びつける、天然の、非修飾ホスホジエステル部分(−O−(PO2−)−O−)を含む。本明細書で使用される場合、「置換連結」という語は、隣接するヌクレオモノマーを共有的に結びつける、自然のホスホジエステル基の任意のアナログまたは誘導体を含む。置換連結は、ホスホジエステルアナログ、例としてホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、およびP−エチオキシホスホジエステル、P−エトキシホスホジエステル、P−アルキルオキシホスホトリエステル、メチルホスホネート、および非リン含有連結、例としてアセタールおよびアミド、を含む。かかる置換連結は当該技術分野において公知である(例として、Bjergarde et al., 1991, Nucleic Acids Res. 19:5843; Caruthers et al., 1991, Nucleosides Nucleotides, 10:47)。ある態様において、非加水分解性連結は、好ましくは、ホスホロチエート結合などである。
ある態様において、ほとんどまたは全てのセンス鎖ヌクレオチド(2’−修飾であるかまたはない)は、ホスホロチオエート結合によって連結されている。かかるコンストラクトは、その血清タンパク質との高い親和性に起因して、改善された薬物動態を有する傾向にある。センス鎖におけるホスホチオエート結合は一般的に、一旦ガイド鎖がRISCに取り込まれれば、ガイド鎖活性を妨げない
本発明のオリゴヌクレオチドを、当該技術分野において知られた任意の方法、例として酵素合成および/または化学合成の使用、によって合成することができる。本オリゴヌクレオチドを、in vitroで(例として、酵素合成および化学合成の使用)またはin vivoで(当該技術分野において周知の組換えDNA技術の使用)合成することができる。
細胞によるオリゴヌクレオチドの取り込み
オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド組成物は、1または2以上の細胞または細胞溶解物に接触され(すなわち、接触に至らされる、また本明細書において投与されるまたは送達されるともいわれる)、および取り込まれる。「細胞」という語は、原核および真核細胞を含み、好ましくは脊椎動物細胞であり、およびより好ましくは哺乳類細胞である。好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチド組成物は、ヒト細胞と接触される。
抱合剤はオリゴヌクレオチドと共有的に結合している。1つの態様において、オリゴヌクレオチドは、抱合体と結合して細胞取り込みを促進するために、誘導体化するか、または化学的に修飾してもよい。例えば、コレステロール部分とオリゴヌクレオチドとの共有結合は、細胞取り込みを5〜10倍改善することができ、そしてその結果DNA結合を約10倍改善することができる(Boutorin et al., 1989, FEBS Letters 254:129-132)。オクチル、ドデシルおよびオクタデシル残基の抱合は、非修飾のオリゴヌクレオチドと比較して、細胞取り込みを3、4および10倍増強する(Valassov et al., 1994, Biochimica et Biophysica Acta 1197:95-108)。同様に、ポリ−L−リジンによるオリゴヌクレオチドの誘導体化は、細胞によるオリゴヌクレオチドの取り込みを助けることができる(Schell, 1974, Biochem. Biophys. Acta 340:323,およびLemaitre et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci USA 84:648)。
封入剤は、オリゴヌクレオチドをベシクル内に閉じ込める。本発明の別の態様において、オリゴヌクレオチドは担体またはビヒクル、例としてリポソームまたはミセルであるが、当業者に十分理解されるように他の担体も用いることができる、と会合していてよい。リポソームは、生体膜と類似の構造を有する、脂質二重膜で作られるベシクルである。かかる担体は、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みまたはターゲティングを促進するために用いられ、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的または毒物学的特性を改善するために用いられる。
錯化剤は、本発明のオリゴヌクレオチドと、強いが非共有結合性の引力(例として、静電気的、ファンデルワールス、パイスタッキングなどの相互作用)によって結合する。1つの態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは錯化剤と複合し、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを増大する。錯化剤の例は、カチオン性脂質を含む。カチオン性脂質はオリゴヌクレオチドの細胞への送達に使用可能である。
オリゴヌクレオチドの送達はまた、オリゴヌクレオチドを細胞のレセプターにターゲティングすることによっても改善することができる。ターゲティング部分は、オリゴヌクレオチドと抱合することができ、またはオリゴヌクレオチドに連結した担体基(すなわちポリ(L−リジン)またはリポソーム)に取り付けることができる。この方法は、特異的レセプター媒介性エンドサイトーシスを呈する細胞に良く適している。
最適なオリゴヌクレオチドの投与または送達は所望の結果および/または処置される対象に依存して変化してよい。本明細書で使用される場合、「投与」は細胞とオリゴヌクレオチドとを接触させることをいい、in vitroまたはin vivoで実行され得る。オリゴヌクレオチドの用量は標的核酸分子から翻訳されるタンパク質の発現、例としてRNA安定性からの読み出しまたは治療応答から計測されるような、を過度の実験なしに最適に低減するように調整されてよい。
経口投与のための医薬製剤は、粉末または顆粒、水または非水媒体中の懸濁液または溶液、カプセル、小袋または錠剤を含む。加えて、増粘剤、香味剤、希釈剤、乳化剤、分散剤または結合剤を、経口投与のための医薬製剤に用いてもよい。
本発明の医薬製剤はエマルジョンとして調製および処方できる。エマルジョンは通常、1つの液体が別のものの中に通常直径0.1μmを超える液滴の形状で分散した不均一系である。本発明のエマルジョンは、乳化剤、安定化剤、染料、脂肪、油脂、ワックス、脂肪酸、脂肪族アルコール、脂肪族エステル、保湿剤、親水コロイド、保存料などの賦形剤を含んでもよく、および抗酸化剤もまたエマルジョン中に必要に応じて存在してよい。これらの賦形剤は水相中、油相中またはそれら自身が別の相として、溶液として存在してよい。
好ましくは、本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドは安定である、すなわちエンドヌクレアーゼおよびエクソヌクレアーゼ分解に実質的に抵抗性である。オリゴヌクレオチドは、内因性の細胞性ヌクレアーゼによる攻撃に対して少なくとも約3倍より抵抗性である場合に、ヌクレアーゼに対して実質的に抵抗性であると定義され、対応する一本鎖オリゴヌクレオチドよりも少なくとも約6倍より抵抗性である場合に、高度にヌクレアーゼ抵抗性である。このことは、当業者に既知の技術を用いて、本発明のオリゴヌクレオチドが実質的にヌクレアーゼに対して抵抗性であることを示すことにより実証することができる。
遺伝子の発現を阻害することにより、本発明のオリゴヌクレオチド組成物は、遺伝子の発現を伴う任意の疾患を処置するのに用いることができる。オリゴヌクレオチド組成物により処置されることができる疾患の例は、単なる例示として、ガン、網膜症、自己免疫疾患、炎症性疾患(すなわちICAM−1関連疾患、乾癬、潰瘍性大腸炎、クローン病)、ウィルス性疾患(すなわち、HIV、C型肝炎)および心臓血管疾患を含む。
上記で本発明が一般的に記載され、以下の例の参照によってより容易に理解されるだろうが、これらは、単に本発明のある側面および態様を描写する目的のために含まれているのであって、本発明を制限することを意図しない。
主題の修飾されたRNAiコンストラクト(「代替RNAi化合物」)が、標準的なsiRNAまたは異なる化学的修飾を伴うsiRNAと比較したときに、もし優位でなくとも、少なくとも同等に効果的であるということを実証するために、以下の対照比較実験を実施した。
本例は、標的遺伝子(この場合、SOD1遺伝子)上のいくつかの標的領域が他よりも良い標的部位であり得ることを実証する。
本例は、ある主題の代替RNAi化合物(平滑末端を有する25−Merで、センス鎖の各末端に4個の2’OMeを有する)がSOD1の発現抑制のために効果的であることを証明する。
SOD1を標的とする代替RNAi化合物を、0.01nMから10nMの濃度を用いて、HEK293細胞にトランスフェクトした。これらの実験では、標的を持たないフィラーRNAデュプレックス種をトランスフェクション反応へ添加することによって、各濃度におけるデュプレックスの総濃度を25nMに保った。この方法は、製造者からの推奨に基づく、細胞のトランスフェクションを維持するやり方で、非常に低濃度の標的デュプレックスを試験することを可能とした。ヒトSOD1のmRNAを、QuantiGeneのbDNAアッセイによって、トランスフェクション後48時間目に測定した。代替RNAi化合物10014は過去の研究において複数回試験済みであり、ここではそれを比較のための対照として含めた。本研究において試験されたもう片方のデュプレックスは、単一濃度実験においてヒットとして同定し、ここにおいてEC50決定のために追跡調査した。デュプレックス10011、10014および10097はマウス/ヒト相同であり、マウスおよびヒト細胞培養での確認された活性を有している。デュプレックス10089および10097の活性はマウス細胞では確認されていないが、これらのデュプレックスはヒト/マウス配列相同性を有する。
SOD1遺伝子中の他の部位または、ほとんど(全てではないにしても)の組織で発現するユビキタス遺伝子であるシクロフィリンB(PPIB)遺伝子を標的とする修飾および非修飾デュプレックスを比較したときに、強力な遺伝子サイレンシング活性もまたみられるため、例4の結果は部位特異的でも遺伝子特異的でもない。
出願人によってなされた鍵となる知見の一つは、従来技術が「21−merより長いdsRNAはダイサーにより切断されて21−merの産物になる」と説いているにもかかわらず、ある修飾二本鎖RNAはダイサー切断されないことである。加えて、出願人は、ダイサー抵抗性dsRNA上のアンチセンス鎖がRISC複合体に取り込まれる可能性があり、RNA干渉のためのガイド配列としての役割を果たすことを示した。このダイサー抵抗性dsRNAの5’−末端のヌクレオチド(3’−末端または他のヌクレオチドではなく)は、RISC複合体においてダイサー切断された21−merの5’−末端とぴったり合う。
本例は、本発明のダイサー抵抗性dsRNAがRISC複合体に取り込まれ、遺伝子サイレンシング活性を有することを実証する。
本例は、代替RNAi化合物中のダイサー抵抗性アンチセンス鎖(ガイド配列)の5’−末端がダイサー切断産物(21−mer)の5’−末端と合致し、(標的mRNA上の)切断部位がガイド鎖の5’−末端から10番目および11番目のヌクレオチドの間であることを実証する。
上記の研究は、25−bpRNAデュプレックスが強力な遺伝子サイレンシングの達成、Ago2:RISCへの完全な取り込み、およびガイド鎖のヌクレオチド10の向かいにある意図する標的の切断を可能とすることを示す。過去の研究は、核酸のメチル化修飾がエンドヌクレアーゼ活性を防ぐことが可能で、それは潜在的にダイサーが21−bp以上のデュプレックスをプロセシングする能力を阻害し得ることを示してきた。これらの化学的に修飾されたRNAデュプレックスについてのダイサープロセシングを調査するために、修飾形状群(a panel of modification configuration)を、インビトロにおけるダイサー切断に対する感受性について試験した(図17A)。活性および標的特異性が、RISCに組み込まれたガイド鎖配列の5’位置によって定義づけられるため、切断産物の知見が少しでもあるのであれば、RNAi活性におけるダイサープロセシングの役割の解明の助けとなるだろう。
本例は、主題の代替RNAi化合物コンストラクトの多くの可能な設計を記載し、様々な2’OMeを含む代替RNAi化合物の代表的な活性比較データを提供する。
所定のデュプレックスの活性度合いにおいてセンス鎖上の2’OMeが有する位置効果を理解するために、10015または10023のいずれかの配列に基づく多様な代替RNAi化合物を、センス鎖への2’OMe修飾の量を変動させたものと比較した(図12A、12B、12C)。全てのデュプレックスは非修飾アンチセンス鎖(すなわち、化学構造011である。図10Bを参照のこと)を有する。図12Aは、PPIB(ハウスキーピング遺伝子)に対して正規化したSOD1サイレンシングの相対活性を示す。図12Bおよび12Cは、(アンチセンス鎖番号に関して)どの位置に2’OMeが配置され、オリジナルの001化学構造(図10Bを参照のこと)と比較されたかを示すビジュアルマップである。グラフは各デュプレックスの活性を、011化学構造よりも上または下の相対的パーセンテージとして図示する。025、024、009、036、021、010、039、033、および008に相当する10015配列(図12B)のIDは、より良い活性を示し、そのいくつかをさらなる活性分析のために選択した。10023配列についての類似の分析もまた図12Cに示される。
10015または10023いずれかの配列に基づく多様な代替RNAi化合物を、広範なセンス鎖のみの2’OMe分析の追跡調査として試験した。図13A(24時間)および13B(48時間)は、PPIB(ハウスキーピング遺伝子)に対して正規化したSOD1サイレンシングの相対活性を示す。図13Cおよび13Dは、2’OMeの(アンチセンス鎖番号に関する)相対位置を示すビジュアルマップであり、それらをオリジナル化学構造(001)と比較した。デュプレックス上に存在するアンチセンスの化学構造のタイプを表すためにグラフを色づけした。これらの図中に表される活性は001−011(オリジナル代替RNAi化合物)に関連付けられている。042化学構造(位置2における2’OMe)を有するアンチセンス鎖を含むデュプレックスに相当するIDは、この実験においてより良い活性を示した。
・001−011
・001−042
・001−013
・039−011
・039−042
・039−013
・MMOOl−011
本例は、上述の利点に加えて、主題の代替RNAi化合物コンストラクトが血清中でより安定であり、これによってより良いin vivo有効性を有すると期待されることを示す。
本例は、21−27bpデュプレックスでRNAiをもたらすのにダイサーが必要とされないことを実証する。ここでは、ダイサー酵素が欠損したマウス胚性幹細胞株(Murchison et al., 2005)における標的遺伝子のサイレンシングを、合成の、化学的に修飾されたデュプレックスでのRNAiにおけるダイサーの役割をより直接的に試験することを可能とするために研究した。ダイサーがホモ接合のヌル(−/−)またはヘテロ接合(+/−)の変異細胞をRNAデュプレックスでトランスフェクトして、標的mRNAの減少を定量した。
本明細書中の例で用いた特定の方法を、例示の目的のみのために、以下に提供する。
一本鎖RNAをIntegrated DNA technologiesまたはThermoFisher Dharmacon製品により合成した。等モル比の一本鎖RNAを混合して、90℃で1分間インキュベートしたあとに37℃で1時間インキュベートすることによって、RNAデュプレックスを形成した。全ての一本鎖RNAおよびRNAデュプレックスを−20℃で保存した。RNA配列情報については、オンラインの表3および表4を参照のこと。
HEK293細胞(ATCC)を10%ウシ胎仔血清および1%ペニシリン−ストレプトマイシンとともにダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)中で培養した。NIH3T3細胞(ATCC)を10%仔ウシ血清および1%ペニシリン−ストレプトマイシンとともにDMEM中で培養した。ATCC社が推奨するように、全ての細胞を10%CO2とともに37℃でインキュベートした。RNAデュプレックスを、Lipofectamine RNAiMAX(Invitrogen)試薬を用いて、製造者が記載するようにおよび至適化条件で、用量依存的なやり方(0.005nMから5nM)でリバーストランスフェクトした。最終濃度25nMのトランスフェクトされるRNAデュプレックスを作るために、RNAデュプレックスを非標的対照デュプレックスと一緒に混合した。化学構造および長さが一致する非標的対照デュプレックスはルシフェラーゼ遺伝子を標的とする。抗生物質を含まない培地入りの96−ウェルプレートでトランスフェクションを実施して、通常の成長条件下で48時間インキュベートした。遺伝子サイレンシングを、QuantiGene bDNAハイブリダイゼーションアッセイ(Panomics)を用いて測定した。細胞を溶解し、製造者が記載するアッセイ条件下でmRNAレベルを測定した。SOD1遺伝子およびPPIB遺伝子について、種特異的なプローブのセット(Panomics)を用いて遺伝子発現を測定した。遺伝子発現値を、その発現がSOD1サイレンシングの影響を受けないためにハウスキーピング対照として用いたPPIB遺伝子に対して正規化した。サイレンシングのパーセントおよびEC50値は、非標的対照デュプレックスの正規化SOD1発現に基づく。KaleidaGraph(Synergy Software)を用いて、その値を計算し、グラフで表した。
RNAデュプレックスを、記載のようにアニールして、c−myc Ago2を安定的に発現する293T細胞(Hannon lab、 Cold Spring Harbor Labs)へトランスフェクトした。c−myc Ago2を選択的に発現させるために、293細胞を前述のように0.5μg/mlのG418の存在下で培養した。製造者が記載するように、10cmのプレートでLipofectamine RNAiMAX(Invitrogen)を用いて、RNAデュプレックスのトランスフェクションを実行した。抗生物質を含まないおよび25nMのRNAデュプレックスの最終濃度を有する培地で、細胞をトランスフェクトした。採取およびc−myc Ago2の免疫沈降(IP)の前に、細胞を48時間インキュベートした。細胞採取およびIPを前述したとおりに実施した。細胞をプレートから収集し、1×PBSで一度および2mlの低張溶解緩衝液(HLB)(10mMのTris pH7.5、10mMのKCl、2mMのMgCl2、5mMのDTT、およびプロテアーゼ阻害剤)で一度、洗浄した。次に細胞を0.5mlのHLB中で再構成して、氷上で15分間膨潤させた。細胞溶解物の画分(50μl)を採取し、続くQuantiGene bDNAハイブリダイゼーションアッセイ(Panomics)を用いた遺伝子サイレンシングアッセイのために、200μlのTrizol(Invitrogen)へと添加した。細胞溶解物を微調整用ペストル(tight pestle)付きの1mlのDounceホモジナイザーへと添加して、細胞を氷上でホモジナイズ(30ストローク)した。細胞溶解物を遠心分離(14,000rpm、4℃で30分間)によって清澄化し、上清を新しい試験管へと移した。上清またはサイトゾル画分には、1mlの緩衝液(LB650)(0.5%のNP40、150mMのNaCl、2mMのMgCl2、2mMのCaCl2、20mMのTris pH7.5、5mMのDTT、650mMのKCl、およびプロテアーゼ阻害剤)を添加した。アガロースビーズ(Sigma)に結合させた抗−c−myc抗体を各試験管へ添加し、試験管を4℃で一晩、回転させながらインキュベートした。一晩のインキュベーション後、IP反応物を3,000rpmで2分間遠心沈降して、ビーズをLB650緩衝液で3回洗浄した。ビーズ洗浄後、Ago2を捕捉した抗体からRNAを解離するために200μlのTrizol(Invitrogen)を添加した。エタノール洗浄に先立ち、製造者からの説明書に記載されるように、RNAを沈降した。RNAを20μlのTE緩衝液中で再構成した。
RNAを15%のポリアクリルアミドTBE−Urea変性ゲルに装填した。捕捉したRNAのサイズを決定するために、21から25ntの範囲内の事前に標識化した32P−末端サイズマーカーをIP反応物と並べて流した。ゲルをナイロン膜へ移して、RNAを紫外線架橋した。UltraHyb−Oligo緩衝液(Ambion)を用いて、膜を30分間42℃でプレハイブリダイズ処理したあと、事前に準備した、ガイド鎖に相補的な32P−標識化ロックド核酸プローブをハイブリダイゼーション緩衝液へ添加した。42℃で一晩インキュベーション後、洗浄緩衝液(1×SSC緩衝液、0.1%SDS)中で膜を2回30分間洗浄した。ブロットを、BioMAXオートラジオグラフフィルム(Kodak)に露光することで可視化した。自動フィルムプロセシングユニットを用いてフィルムを現像した。
c−myc Ago2を発現する293細胞を、前述のようにRNAデュプレックスでトランスフェクトした。Ago2の免疫沈降もまた前述のように実施した。最終洗浄後、トランスフェクトしたRNAを組み込んだAgo2複合体を含むアガロースビーズを10μlの緩衝液(100mMのKCl、2mMのMgCl2、および10mMのTris pH 7.5)中で再構成した。トランスフェクトされた25−bpデュプレックスまたは19−bp+2ntのsiRNAが標的とするヒトSOD1遺伝子の50nt領域と一致する、化学的に合成された合成基質を、32P−5’標識化およびゲル精製した。合成基質を、19−bp+2ntのsiRNAまたは25−bpデュプレックスのガイド鎖中の位置10に相当する塩基21を有するように特に設計した。標識化RNAをゲル精製してイソプロパノール中で沈殿させた。20μlの最終容量で切断反応を設定した。IP反応物(10μl)を4μlの標識化合成基質、1μlのRNAsin、および5μlの緩衝液(100mMのKCl、2mMのMgCl2、および10mMのTris pH 7.5)へ添加した。反応物を30℃で2時間インキュベートした。インキュベーション後、反応物を15%のポリアクリルアミドTBE−ureaゲル上に流した。ゲルをオートラジオグラフフィルムに露光して、上述のやり方を用いて現像した。切断アッセイ反応物と並べて流した32P−標識化サイズマーカーRNAを用いて切断産物のサイズを決定した。
製造者の推奨およびすでに記載された条件に基づいて、RNAデュプレックスを組換ヒトダイサー酵素(Genlantis)とともにインキュベートした。ダイサー酵素とともにおよび無しで、サンプルを37℃で一晩(〜16時間)インキュベートした。TBEゲル添加液を加えて反応を停止させ、液体窒素中で瞬間冷凍した。停止させた反応物の画分(16pmoles)を天然TBE緩衝20%のポリアクリルアミドゲルに流した。siRNAマーカー(New England Biolabs)をゲル上のサンプルと並べて流した。ゲルをSYBRグリーンII(Invitrogen)を用いて20分間染色し、それからUVトランスイルミネーターおよびCCDカメラを用いて可視化した。UVP BioChemi imaging station with LabWorks software(UVP)を用いて、UV撮像および相対定量分析を実施した。
ダイサーヌル細胞を、すでに記載されたように生成および培養した。すでに記載された条件を上記の96−ウェル用量反応方法へと適用することによって、用量反応トランスフェクションを実施した。マウスSOD1と100%相同性を有するヒトSOD1遺伝子を標的としたRNAデュプレックスを、0.05nMから10nMの範囲の濃度でトランスフェクトした。DY547標識化対照デュプレックスを用いてトランスフェクション効率をモニターした。細胞をトランスフェクション後48時間インキュベートし、それから遺伝子サイレンシング活性をQuantiGene bDNAハイブリダイゼーションアッセイ(Panomics)を用いて測定した。細胞を溶解して、前述のようにおよび製造者の推奨に基づいてアッセイを実施した。
当業者は、本明細書中に記載の本発明の特定の態様の多数の等価物を、ルーチンの実験以上のものを用いずとも認識または確認することが可能だろう。かかる等価物は以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。本明細書中で引用する全ての特許、公開特許出願およびその他の参考文献の全内容は、その全体を参照文献として明示的に本明細書に組込まれる。
Claims (60)
- 標的遺伝子の発現を阻害するための、12〜49ヌクレオチドの長さの二本鎖RNA(dsRNA)コンストラクトであって、該dsRNAが、
(1)5’−末端および3’−末端を有するセンス鎖、ここで該センス鎖の前記5’−および3’−末端のそれぞれにおける1または2以上のヌクレオチドが、2’−修飾リボース糖を有する、および
(2)前記センス鎖および前記標的遺伝子のmRNAとハイブリダイズする、5’−末端および3’−末端を有するアンチセンス鎖、ここで該アンチセンス鎖が、該アンチセンス鎖の5’−末端から2番目のヌクレオチドにおいて、2’−修飾リボース糖を含む、
を含み、ここで、(a)前記dsRNAがダイサーによる切断に抵抗性であり、(b)前記アンチセンス鎖がRISCと会合し、および(c)dsRNAが、配列依存的な様式で標的遺伝子の発現を阻害する、前記二本鎖RNAコンストラクト。 - 標的遺伝子の発現を阻害するための、12〜49ヌクレオチドの長さの二本鎖RNA(dsRNA)コンストラクトであって、該dsRNAが、
(1)5’−末端および3’−末端を有するセンス鎖、ここで該センス鎖の前記5’−および3’−末端のそれぞれにおける1または2以上のヌクレオチドが、2’−修飾リボース糖を有する、および
(2)前記センス鎖および前記標的遺伝子のmRNAとハイブリダイズする、5’−末端および3’−末端を有するアンチセンス鎖、ここで該アンチセンス鎖が、該アンチセンス鎖の3’−末端において、
(i)非加水分解性のヌクレオチド間結合を有する少なくとも4つの連続した2’−修飾リボース糖
(ii)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12個の2’−修飾リボース糖、好ましくは2’−O−メチル修飾リボース糖、または
(iii)保護基
を含む、
を含み、ここで、(a)前記dsRNAがダイサーによる切断に抵抗性であり、(b)前記アンチセンス鎖がRISCと会合し、および(c)dsRNAが、配列依存的な様式で標的遺伝子の発現を阻害する、前記二本鎖RNAコンストラクト。 - 標的遺伝子の発現を阻害するための、12〜49ヌクレオチドの長さの二本鎖RNA(dsRNA)コンストラクトであって、該dsRNAが、
(1)5’−末端および3’−末端を有するセンス鎖、ここで該センス鎖の前記5’−および3’−末端のそれぞれにおける1または2以上のヌクレオチドが、2’−修飾リボース糖を有し、該センス鎖が、該センス鎖の3’−末端から2番目のヌクレオチドにおいてミスマッチヌクレオチドを含む、および
(2)前記センス鎖および前記標的遺伝子のmRNAとハイブリダイズする、5’−末端および3’−末端を有するアンチセンス鎖、
を含み、ここで、(a)前記dsRNAがダイサーによる切断に抵抗性であり、(b)前記アンチセンス鎖がRISCと会合し、および(c)dsRNAが、配列依存的な様式で標的遺伝子の発現を阻害する、前記二本鎖RNAコンストラクト。 - 標的遺伝子の発現を阻害するための、12〜49ヌクレオチドの長さの二本鎖RNA(dsRNA)コンストラクトであって、該dsRNAが、
(1)5’−末端および3’−末端を有するセンス鎖、ここで、該センス鎖の前記5’−および3’−末端のそれぞれに4つの連続した2’−O−メチルヌクレオチドが存在し、
(2)前記センス鎖および前記標的遺伝子のmRNAとハイブリダイズする、5’−末端および3’−末端を有するアンチセンス鎖、ここで該アンチセンス鎖が、
(a)ホスホチオエート結合を有する4つの連続した2’−O−メチル修飾3’−末端ヌクレオチドを含む、または
(b)5’−末端から2番目のヌクレオチドに2’−O−メチル修飾ヌクレオチドを含み、他の修飾ヌクレオチドを含まない、
を含み、ここで、(a)前記dsRNAがダイサーによる切断に抵抗性であり、(b)前記アンチセンス鎖がRISCと会合し、および(c)dsRNAが、配列依存的な様式で標的遺伝子の発現を阻害する、前記二本鎖RNAコンストラクト。 - 標的遺伝子の発現を阻害するための、12〜49ヌクレオチドの長さの二本鎖RNA(dsRNA)コンストラクトであって、該dsRNAが、
(1)5’−末端および3’−末端を有するセンス鎖、ここで、12および10の連続した2’−O−メチルヌクレオチドをそれぞれ5’−末端および3’−末端に含む、および、
(2)前記センス鎖および前記標的遺伝子のmRNAとハイブリダイズする、5’−末端および3’−末端を有するアンチセンス鎖、ここで該アンチセンス鎖が、
(a)非修飾である、
(b)ホスホチオエート結合を有する4つの連続した2’−O−メチル修飾3’−末端ヌクレオチドを含む、または
(c)5’−末端から2番目のヌクレオチドに2’−O−メチル修飾ヌクレオチドを含み、他の修飾ヌクレオチドを含まない、
を含み、ここで、(a)前記dsRNAがダイサーによる切断に抵抗性であり、(b)前記アンチセンス鎖がRISCと会合し、および(c)dsRNAが、配列依存的な様式で標的遺伝子の発現を阻害する、前記二本鎖RNAコンストラクト。 - アンチセンス鎖が、アンチセンス鎖の5’−末端から10番目および11番目のヌクレオチドの間の単一部位における、標的遺伝子のmRNAの一様な切断を導く、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsDNA。
- dsRNAのセンス鎖が、該センス鎖の3’−末端から10番目および11番目のヌクレオチドの間の単一部位において、RISCによって切断可能である、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsDNA。
- dsRNAコンストラクトが、平滑末端である、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsDNA。
- センス鎖の5’−末端の12ヌクレオチドおよび3’−末端の10ヌクレオチドが2’−修飾リボース糖である、請求項1〜4のいずれか一項に記載のdsDNA。
- センス鎖の各末端が、一続きの2’−修飾リボース糖を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsDNA。
- センス鎖の各末端が、4つ一続きの2’−修飾リボース糖を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsDNA。
- アンチセンス鎖が、非連続的な2’−修飾リボース糖を含み、10番目および11番目のアンチセンスヌクレオチドが修飾されていない、請求項1〜3のいずれか一項に記載のdsDNA。
- アンチセンス鎖が、2’−修飾リボース糖を、2、3、4、5、6、7、8または9ヌクレオチドごとに含む、請求項12に記載のdsRNA。
- アンチセンス鎖の最も5’−末端側の2’−修飾リボース糖が、2番目のヌクレオチドである、請求項13に記載のdsRNA。
- dsRNAコンストラクトが、12〜35ヌクレオチドの長さ、25〜30ヌクレオチドの長さ、25、26、27、28、29または30ヌクレオチドの長さ、22ヌクレオチドより長い長さ、25ヌクレオチドより長い長さ、または31〜49ヌクレオチドの長さである、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- センス鎖の各末端が、独立して、4〜16個の2’−修飾リボース糖および/または非加水分解性ヌクレオチド間結合を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- センス鎖の各末端が、対称的なまたは非対称的な数の2’−修飾リボース糖を含む、請求項16に記載のdsRNA。
- 2’−修飾リボース糖が、2’−O−アルキルヌクレオチド、2’−デオキシ−2’−フルオロヌクレオチド、2’−デオキシヌクレオチド、2’−H−(デオキシリボヌクレオチド)またはそれらの組み合わせである、請求項16に記載のdsRNA。
- 2’−O−アルキルヌクレオチドが、2’−O−メチルヌクレオチドである、請求項18に記載のdsRNA。
- 2’−O−アルキルヌクレオチドが、2’−O−アリルヌクレオチドである、請求項18に記載のdsRNA。
- アンチセンス鎖が、アンチセンス鎖の5’−末端から2番目のヌクレオチドに2’−O−メチル修飾ヌクレオチドを含み、他の修飾ヌクレオチドを含まない、請求項1および3〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- dsRNAが、2’−修飾を前記の位置に含まない類似のコンストラクトと比較して、増強された標的特異性または減少したオフターゲットサイレンシングを有する、請求項21に記載のdsRNA。
- アンチセンス鎖が、ホスホチオエート結合を有する少なくとも4つの連続した2’−O−メチル修飾3’−末端ヌクレオチドを含む、請求項1および3〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- dsRNAのセンス鎖が、センス鎖の3’−末端から2番目のヌクレオチドにおいて、ミスマッチヌクレオチドを含む、請求項1、4および5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- dsRNAが、同一の配列を有する非修飾のdsRNAと比較して、血清および/または脳脊髄液中での改善された安定性を有する、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- センス鎖の3’−末端における最後から2〜8番目のヌクレオチドが、それらの対応するアンチセンス鎖ヌクレオチドとミスマッチである、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- dsRNAが、初代細胞においてインターフェロン応答を誘導しない、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- センス鎖のいずれかの末端および/またはアンチセンス鎖の3’−末端が、保護基によってブロックされている、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- 保護基が、反転ヌクレオチド、反転脱塩基部分、またはアミノ末端修飾ヌクレオチドである、請求項28に記載のdsRNA。
- 反転ヌクレオチドが、反転デオキシヌクレオチドを含む、請求項29に記載のdsRNA。
- 反転脱塩基部分が、反転デオキシ脱塩基部分を含む、請求項29に記載のdsRNA。
- 反転デオキシ脱塩基部分が、3’,3’−連結または5’,5’−連結デオキシ脱塩基部分である、請求項31に記載のdsRNA。
- センスおよび/またはアンチセンス鎖の末端の交互ヌクレオチドが、2’−修飾リボース糖を含み、各2’−修飾リボース糖が、逆鎖上の非修飾のヌクレオチドと向き合う、請求項1または3に記載のdsRNA。
- 最初の2’−修飾アンチセンスヌクレオチドが、最も5’−末端のアンチセンスヌクレオチドであるか、またはアンチセンス鎖の5’−末端から2番目のヌクレオチドである、請求項33に記載のdsRNA。
- 標的遺伝子が、SOD1、PPIB、RIP140、PCSK9、TNFα、AP2(脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質)またはMAP4K4である、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- 2’−修飾リボースヌクレオチドの間のセンス鎖ヌクレオチドが、2’−F修飾である、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- 2’−修飾リボースヌクレオチドの間のセンス鎖ヌクレオチドが、プリンヌクレオチドであり、任意に2’−F修飾修飾および/またはホスホロチオエート結合を有する、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- 2’−修飾リボースヌクレオチドの間のセンス鎖ヌクレオチドが、1または2以上の、各1〜5ヌクレオチドのバルジを形成する、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- 各一続きの2’−修飾リボース糖が、末端ヌクレオチド、末端ヌクレオチドから二番目のヌクレオチド、または末端ヌクレオチドから三番目のヌクレオチドから独立して開始される、請求項10に記載のdsRNA。
- アンチセンス鎖のピリミジンヌクレオチドの50〜100%が、独立して2’−F修飾または2’−O−メチル修飾である、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- アンチセンス鎖の5’−末端が、リン酸化されている、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA。
- 標的遺伝子の発現を阻害するためのRNAコンストラクトであって、該コンストラクトが、センス鎖上の単一ニック以外は請求項1〜41のいずれか一項に記載のdsRNAと同一である、前記RNAコンストラクト。
- ニックが、アンチセンス鎖の5’末端から約10塩基のヌクレオチドの逆位置を占める、請求項42に記載のRNAコンストラクト。
- ニックが、アンチセンス鎖の5’末端から約5〜15塩基のヌクレオチドの逆位置を占める、請求項42に記載のRNAコンストラクト。
- 各二本鎖領域のΔGが、約−13kcal/モル未満である、請求項42〜44のいずれか一項に記載のRNAコンストラクト。
- 請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNAの少なくとも1本の鎖を発現するベクター。
- 請求項46に記載のベクターまたは請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNAを含む細胞。
- 細胞が、培養哺乳類細胞である、請求項47に記載の細胞。
- 細胞が、ヒト細胞である、請求項47に記載の細胞。
- 請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNA、および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物。
- 哺乳類細胞において標的遺伝子の発現を阻害する方法であって、哺乳類細胞と請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNAコンストラクトとを接触させることを含む、前記方法。
- 哺乳類細胞が、培養されている、請求項51に記載の方法。
- 哺乳類細胞が、ヒト細胞である、請求項51に記載の方法。
- 哺乳類細胞を、送達試薬の存在下で接触させる、請求項51に記載の方法。
- 送達試薬が、脂質である、請求項54に記載の方法。
- 脂質が、カチオン性脂質である、請求項55に記載の方法。
- 送達試薬が、リポソームである、請求項54に記載の方法。
- 哺乳類細胞において標的遺伝子の発現を阻害する方法であって、哺乳類細胞と、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNAコンストラクトの鎖の少なくとも1つを発現するベクターとを接触させることを含む、前記方法。
- 短鎖干渉RNA(siRNA)の遺伝子サイレンシング効果を改善するための方法であって、siRNAのセンスおよび/またはアンチセンスヌクレオチドを修飾して、請求項1〜5のいずれか一項に記載のdsRNAコンストラクトとすることを含む、前記方法。
- siRNAコンストラクトの標的部位へのin vivo送達を評価する方法であって、siRNAコンストラクトとともにPPIBを標的とする請求項1〜5のいずれかに記載のdsRNAコンストラクトを共送達し、標的部位におけるPPIB機能の阻害をアッセイすることを含み、ここでPPIB機能の標的部位における成功裡の阻害が、標的部位へのsiRNAコンストラクトのin vivo送達成功の指標となる、前記方法。
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Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014084354A1 (ja) | 2012-11-29 | 2014-06-05 | 国立大学法人岐阜大学 | Rna干渉剤、その製造方法及びその利用 |
JP2017510298A (ja) * | 2014-03-18 | 2017-04-13 | ユニバーシティ オブ マサチューセッツ | 筋萎縮性側索硬化症を処置するためのrAAVベースの組成物および方法 |
JP2018519835A (ja) * | 2015-07-06 | 2018-07-26 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | スーパーオキシドディスムターゼ1(sod1)を標的とする核酸分子 |
JP2019534005A (ja) * | 2016-11-07 | 2019-11-28 | ナノスール エルエルシー | 転写後化学修飾二重鎖rna |
US11396654B2 (en) | 2008-09-22 | 2022-07-26 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Neutral nanotransporters |
US11739330B2 (en) | 2017-09-22 | 2023-08-29 | University Of Massachusetts | SOD1 dual expression vectors and uses thereof |
US11859179B2 (en) | 2017-05-09 | 2024-01-02 | University Of Massachusetts | Methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (ALS) |
Families Citing this family (98)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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US9074211B2 (en) * | 2008-11-19 | 2015-07-07 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of MAP4K4 through RNAI |
WO2010078536A1 (en) | 2009-01-05 | 2010-07-08 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of pcsk9 through rnai |
WO2010090762A1 (en) | 2009-02-04 | 2010-08-12 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rna duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality |
EP2454371B1 (en) | 2009-07-13 | 2021-01-20 | Somagenics, Inc. | Chemical modification of small hairpin rnas for inhibition of gene expression |
US20110268761A1 (en) | 2010-03-02 | 2011-11-03 | Hapten Pharmaceuticals, Llc | Effective Sensitizing Dose of a Gelled Immunomodulating Topical Composition |
WO2011112516A1 (en) | 2010-03-08 | 2011-09-15 | Ico Therapeutics Inc. | Treating and preventing hepatitis c virus infection using c-raf kinase antisense oligonucleotides |
EP3578183B1 (en) | 2010-03-24 | 2021-09-08 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Rna interference in ocular indications |
RU2615143C2 (ru) * | 2010-03-24 | 2017-04-04 | Адвирна | Самодоставляющие PHKi соединения уменьшенного размера |
WO2011119887A1 (en) * | 2010-03-24 | 2011-09-29 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rna interference in dermal and fibrotic indications |
JO3756B1 (ar) | 2010-11-23 | 2021-01-31 | Regeneron Pharma | اجسام مضادة بشرية لمستقبلات الجلوكاجون |
US9255154B2 (en) | 2012-05-08 | 2016-02-09 | Alderbio Holdings, Llc | Anti-PCSK9 antibodies and use thereof |
JP2015529685A (ja) | 2012-09-17 | 2015-10-08 | ザ・リサーチ・インスティテュート・アット・ネイションワイド・チルドレンズ・ホスピタルThe Research Institute Atnationwide Children’S Hospital | 筋萎縮性側索硬化症の処置のための組成物および方法 |
PT3702466T (pt) | 2013-08-27 | 2023-01-24 | Res Inst Nationwide Childrens Hospital | Produtos e métodos para tratamento de esclerose lateral amiotrófica |
AU2014346987A1 (en) * | 2013-11-05 | 2016-06-23 | The Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Compositions and methods for inhibiting NF-kB and SOD-1 to treat amyotrophic lateral sclerosis |
EP3079707A4 (en) | 2013-12-02 | 2017-10-18 | RXi Pharmaceuticals Corporation | Immunotherapy of cancer |
CN105960265A (zh) | 2013-12-04 | 2016-09-21 | 阿克赛医药公司 | 利用经化学修饰的寡核苷酸处理伤口愈合的方法 |
WO2015153800A2 (en) | 2014-04-01 | 2015-10-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for modulating sod-1 expression |
WO2015161184A1 (en) * | 2014-04-18 | 2015-10-22 | University Of Massachusetts | Exosomal loading using hydrophobically modified oligonucleotides |
CA2947270A1 (en) | 2014-04-28 | 2015-11-05 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Methods for treating cancer using nucleic acids targeting mdm2 or mycn |
JP2017514908A (ja) | 2014-05-01 | 2017-06-08 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 核酸分子を利用する目の前部における障害の処置のための方法 |
SG10201913791QA (en) * | 2014-08-20 | 2020-03-30 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Modified double-stranded rna agents |
US10900039B2 (en) | 2014-09-05 | 2021-01-26 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating aging and skin disorders using nucleic acids targeting Tyr or MMP1 |
WO2016044337A1 (en) | 2014-09-16 | 2016-03-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-glucagon antibodies and uses thereof |
MX2017006216A (es) * | 2014-11-14 | 2018-08-29 | Voyager Therapeutics Inc | Composiciones y métodos para tratar la esclerosis lateral amiotrófica (ela). |
DK3218386T3 (da) | 2014-11-14 | 2021-06-07 | Voyager Therapeutics Inc | Modulatorisk polynukleotid |
JP6997623B2 (ja) | 2014-12-12 | 2022-02-04 | エム. ウルフ、トッド | オリゴヌクレオチドを利用して細胞内の核酸を編集するための組成物および方法 |
WO2016158124A1 (ja) | 2015-03-31 | 2016-10-06 | 武藤工業株式会社 | 三次元造形装置、改質体供給器、造形物及び造形物の製造方法 |
US10808247B2 (en) | 2015-07-06 | 2020-10-20 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating neurological disorders using a synergistic small molecule and nucleic acids therapeutic approach |
EP3334499A4 (en) | 2015-08-14 | 2019-04-17 | University of Massachusetts | BIOACTIVE CONJUGATES FOR THE RELEASE OF OLIGONUCLEOTIDES |
WO2017070151A1 (en) | 2015-10-19 | 2017-04-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding rna |
AU2017210726B2 (en) | 2016-01-31 | 2023-08-03 | University Of Massachusetts | Branched oligonucleotides |
MA45469A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques de bêta-caténine et leurs utilisations |
MA45470A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques kras et leurs utilisations |
MA45328A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci |
MA45349A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques egfr et leurs utilisations |
CN109414449A (zh) | 2016-05-06 | 2019-03-01 | 托德·M·伍尔夫 | 利用和不利用可设计核酸酶编辑基因组的改进方法 |
IL302748A (en) | 2016-05-18 | 2023-07-01 | Voyager Therapeutics Inc | modulatory polynucleotides |
CA3033368A1 (en) | 2016-08-12 | 2018-02-15 | University Of Massachusetts | Conjugated oligonucleotides |
CN106244590B (zh) * | 2016-08-18 | 2019-10-01 | 广州市锐博生物科技有限公司 | 经修饰的siRNA分子、RNAi分子混合物及其应用 |
WO2018075792A1 (en) | 2016-10-20 | 2018-04-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of lowering blood glucose levels |
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CN110913866A (zh) | 2017-05-05 | 2020-03-24 | 沃雅戈治疗公司 | 治疗肌萎缩性侧索硬化(als)的组合物和方法 |
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JP7502991B2 (ja) * | 2017-10-16 | 2024-06-19 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 筋萎縮性側索硬化症(als)の治療 |
US20200237799A1 (en) | 2017-10-16 | 2020-07-30 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) |
CR20200251A (es) | 2017-11-17 | 2020-07-17 | Iovance Biotherapeutics Inc | Expansión de til de aspirados con aguja fina y biopsias por punción |
EP3714041A1 (en) | 2017-11-22 | 2020-09-30 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Expansion of peripheral blood lymphocytes (pbls) from peripheral blood |
WO2019105419A1 (zh) | 2017-12-01 | 2019-06-06 | 苏州瑞博生物技术有限公司 | 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途 |
CA3083968C (en) * | 2017-12-01 | 2024-04-23 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Double-stranded oligonucleotide, composition and conjugate comprising double-stranded oligonucleotide, preparation method thereof and use thereof |
CA3083526A1 (en) | 2017-12-06 | 2019-06-13 | Andrew John Geall | Compositions and methods of treating muscle atrophy and myotonic dystrophy |
CN109957565B (zh) * | 2017-12-26 | 2023-04-07 | 广州市锐博生物科技有限公司 | 一种修饰的siRNA分子及其应用 |
US11633482B2 (en) | 2017-12-29 | 2023-04-25 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Conjugates and preparation and use thereof |
SG11202006541UA (en) | 2018-01-08 | 2020-08-28 | Iovance Biotherapeutics Inc | Processes for generating til products enriched for tumor antigen-specific t-cells |
WO2019136459A1 (en) | 2018-01-08 | 2019-07-11 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Processes for generating til products enriched for tumor antigen-specific t-cells |
US11713446B2 (en) | 2018-01-08 | 2023-08-01 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Processes for generating TIL products enriched for tumor antigen-specific T-cells |
SG11202101288TA (en) | 2018-08-10 | 2021-03-30 | Univ Massachusetts | Modified oligonucleotides targeting snps |
EP3833757A4 (en) | 2018-08-10 | 2022-05-18 | City of Hope | PROGRAMMABLE CONDITIONAL SIRNAS AND USES THEREOF |
WO2020038377A1 (zh) | 2018-08-21 | 2020-02-27 | 苏州瑞博生物技术有限公司 | 一种核酸、含有该核酸的药物组合物和缀合物及其用途 |
JP7376952B2 (ja) | 2018-09-30 | 2023-11-09 | スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド | siRNA複合体及びその調製方法と使用 |
JP2022506586A (ja) | 2018-11-05 | 2022-01-17 | アイオバンス バイオセラピューティクス,インコーポレイテッド | 腫瘍浸潤リンパ球の産生のためのプロセスおよび免疫療法におけるその使用 |
SG11202104630PA (en) | 2018-11-05 | 2021-06-29 | Iovance Biotherapeutics Inc | Selection of improved tumor reactive t-cells |
AU2019377422A1 (en) | 2018-11-05 | 2021-05-27 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Treatment of NSCLC patients refractory for anti-PD-1 antibody |
EP3877511A1 (en) | 2018-11-05 | 2021-09-15 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Expansion of tils utilizing akt pathway inhibitors |
JP2022514023A (ja) | 2018-12-19 | 2022-02-09 | アイオバンス バイオセラピューティクス,インコーポレイテッド | 操作されたサイトカイン受容体対を使用して腫瘍浸潤リンパ球を拡大培養する方法及びその使用 |
US20220088051A1 (en) * | 2019-01-15 | 2022-03-24 | Bioneer Corporation | Double-stranded oligonucleotide targeting dkk1 gene, construct including same, and hair loss prevention or hair growth composition containing same |
CN113614232A (zh) * | 2019-01-18 | 2021-11-05 | 马萨诸塞大学 | 动态药代动力学修饰锚 |
EP3931310A1 (en) | 2019-03-01 | 2022-01-05 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof |
US20220249559A1 (en) | 2019-05-13 | 2022-08-11 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Methods and compositions for selecting tumor infiltrating lymphocytes and uses of the same in immunotherapy |
WO2020236600A1 (en) * | 2019-05-17 | 2020-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oral delivery of oligonucleotides |
JP2022545118A (ja) * | 2019-08-23 | 2022-10-25 | ユニバーシティー オブ マサチューセッツ | O-メチルリッチ完全安定化オリゴヌクレオチド |
EP4055167A2 (en) | 2019-11-08 | 2022-09-14 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Chemically modified oligonucleotides targeting bromodomain containing protein 4 (brd4) for immunotherapy |
KR20210063137A (ko) | 2019-11-22 | 2021-06-01 | (주)바이오니아 | Ctgf 유전자 특이적 이중가닥 올리고뉴클레오티드 및 이를 포함하는 섬유증 관련 질환 및 호흡기 관련 질환 예방 및 치료용 조성물 |
US20230220341A1 (en) | 2019-12-11 | 2023-07-13 | lovance Biotherapeutics, Inc. | Processes for the production of tumor infiltrating lymphocytes (tils) and methods of using the same |
CA3172111A1 (en) | 2020-03-19 | 2021-09-23 | Barbora MALECOVA | Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy |
EP4146794A1 (en) | 2020-05-04 | 2023-03-15 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Processes for production of tumor infiltrating lymphocytes and uses of the same in immunotherapy |
JP2023524108A (ja) | 2020-05-04 | 2023-06-08 | アイオバンス バイオセラピューティクス,インコーポレイテッド | 改良された腫瘍反応性t細胞の選択 |
CN111546631B (zh) * | 2020-07-01 | 2020-11-20 | 深圳市深华科科技有限公司 | 一种光固化3d打印机 |
CA3190097A1 (en) * | 2020-08-04 | 2022-02-10 | Tuojie Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | Modified sirna with reduced off-target activity |
US20230372397A1 (en) | 2020-10-06 | 2023-11-23 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies |
WO2022076606A1 (en) | 2020-10-06 | 2022-04-14 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies |
TW202241468A (zh) | 2020-12-11 | 2022-11-01 | 美商艾歐凡斯生物治療公司 | 用腫瘤浸潤性淋巴球療法與braf抑制劑及/或mek抑制劑組合治療癌症患者 |
JP2023554395A (ja) | 2020-12-17 | 2023-12-27 | アイオバンス バイオセラピューティクス,インコーポレイテッド | Ctla-4及びpd-1阻害剤と併用した腫瘍浸潤リンパ球療法による治療 |
EP4262827A1 (en) | 2020-12-17 | 2023-10-25 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Treatment of cancers with tumor infiltrating lymphocytes |
IL304880A (en) | 2021-02-12 | 2023-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Superoxide dismutase 1 (SOD1) IRNA compositions and methods of using them to treat or prevent superoxide dismutase 1- (SOD1-) associated neurodegenerative diseases |
BR112023021665A2 (pt) | 2021-04-19 | 2023-12-19 | Iovance Biotherapeutics Inc | Método para tratar um câncer, e, composição |
CA3174095A1 (en) | 2021-06-23 | 2022-12-29 | Vignesh Narayan HARIHARAN | Optimized anti-flt1 oligonucleotide compounds for treatment of preeclampsia and other angiogenic disorders |
TW202327631A (zh) | 2021-07-28 | 2023-07-16 | 美商艾歐凡斯生物治療公司 | 利用腫瘤浸潤性淋巴球療法與kras抑制劑組合治療癌症患者 |
CA3235824A1 (en) | 2021-10-27 | 2023-05-04 | Frederick G. Vogt | Systems and methods for coordinating manufacturing of cells for patient-specific immunotherapy |
WO2023081908A2 (en) * | 2021-11-08 | 2023-05-11 | University Of Massachusetts | Oligonucleotides for sod1 modulation |
AU2022388729A1 (en) | 2021-11-10 | 2024-05-16 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Methods of expansion treatment utilizing cd8 tumor infiltrating lymphocytes |
WO2023201369A1 (en) | 2022-04-15 | 2023-10-19 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment |
WO2023245060A2 (en) | 2022-06-15 | 2023-12-21 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Rnai agents for inhibiting expression of superoxide dismutase 1 (sod1), compositions thereof, and methods of use |
WO2023246935A1 (zh) * | 2022-06-23 | 2023-12-28 | 安沛治疗有限公司 | 包含喹啉修饰的靶特异性核酸分子 |
WO2024030758A1 (en) | 2022-08-01 | 2024-02-08 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies |
WO2024098024A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030143732A1 (en) * | 2001-04-05 | 2003-07-31 | Kathy Fosnaugh | RNA interference mediated inhibition of adenosine A1 receptor (ADORA1) gene expression using short interfering RNA |
Family Cites Families (251)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3687808A (en) | 1969-08-14 | 1972-08-29 | Univ Leland Stanford Junior | Synthetic polynucleotides |
US4235871A (en) | 1978-02-24 | 1980-11-25 | Papahadjopoulos Demetrios P | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles |
US4201860A (en) * | 1978-05-09 | 1980-05-06 | Bristol-Myers Company | Purine derivatives |
US4415732A (en) | 1981-03-27 | 1983-11-15 | University Patents, Inc. | Phosphoramidite compounds and processes |
US4426330A (en) * | 1981-07-20 | 1984-01-17 | Lipid Specialties, Inc. | Synthetic phospholipid compounds |
US5023243A (en) * | 1981-10-23 | 1991-06-11 | Molecular Biosystems, Inc. | Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same |
US4501728A (en) | 1983-01-06 | 1985-02-26 | Technology Unlimited, Inc. | Masking of liposomes from RES recognition |
US5643889A (en) | 1984-07-11 | 1997-07-01 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Pennsylvania | Cholesterol conjugates of 2'5'-oligoadenylate derivatives and antiviral uses thereof |
US4897355A (en) | 1985-01-07 | 1990-01-30 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US4737323A (en) * | 1986-02-13 | 1988-04-12 | Liposome Technology, Inc. | Liposome extrusion method |
DE3788914T2 (de) | 1986-09-08 | 1994-08-25 | Ajinomoto Kk | Verbindungen zur Spaltung von RNS an eine spezifische Position, Oligomere, verwendet bei der Herstellung dieser Verbindungen und Ausgangsprodukte für die Synthese dieser Oligomere. |
US4837028A (en) * | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US5264423A (en) | 1987-03-25 | 1993-11-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
US5276019A (en) | 1987-03-25 | 1994-01-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
US4904582A (en) * | 1987-06-11 | 1990-02-27 | Synthetic Genetics | Novel amphiphilic nucleic acid conjugates |
US4924624A (en) * | 1987-10-22 | 1990-05-15 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof |
US5188897A (en) * | 1987-10-22 | 1993-02-23 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates |
DE3738460A1 (de) * | 1987-11-12 | 1989-05-24 | Max Planck Gesellschaft | Modifizierte oligonukleotide |
US5750666A (en) * | 1988-05-26 | 1998-05-12 | Competitve Technologies, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioate compounds |
US5278302A (en) | 1988-05-26 | 1994-01-11 | University Patents, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioates |
ZA902710B (en) | 1989-05-22 | 1991-12-24 | Univ Georgia Res Found | Enzyme luminescence assay |
US4958013A (en) * | 1989-06-06 | 1990-09-18 | Northwestern University | Cholesteryl modified oligonucleotides |
US5591722A (en) * | 1989-09-15 | 1997-01-07 | Southern Research Institute | 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity |
US5495009A (en) * | 1989-10-24 | 1996-02-27 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs containing thioformacetal linkages |
US5264562A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
WO1991006556A1 (en) | 1989-10-24 | 1991-05-16 | Gilead Sciences, Inc. | 2' modified oligonucleotides |
US5486603A (en) * | 1990-01-08 | 1996-01-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide having enhanced binding affinity |
US6005087A (en) * | 1995-06-06 | 1999-12-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-modified oligonucleotides |
US6358931B1 (en) * | 1990-01-11 | 2002-03-19 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating RNA |
US6399754B1 (en) * | 1991-12-24 | 2002-06-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar modified oligonucleotides |
US5459255A (en) | 1990-01-11 | 1995-10-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-2 substituted purines |
US5914396A (en) * | 1990-01-11 | 1999-06-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-modified nucleosides and phosphoramidites |
US5578718A (en) | 1990-01-11 | 1996-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Thiol-derivatized nucleosides |
US5646265A (en) | 1990-01-11 | 1997-07-08 | Isis Pharmceuticals, Inc. | Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites |
US6395492B1 (en) * | 1990-01-11 | 2002-05-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Derivatized oligonucleotides having improved uptake and other properties |
US5670633A (en) | 1990-01-11 | 1997-09-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
US5514786A (en) * | 1990-01-11 | 1996-05-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for inhibiting RNA activity |
US5681941A (en) | 1990-01-11 | 1997-10-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted purines and oligonucleotide cross-linking |
US6153737A (en) | 1990-01-11 | 2000-11-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Derivatized oligonucleotides having improved uptake and other properties |
US5658731A (en) | 1990-04-09 | 1997-08-19 | Europaisches Laboratorium Fur Molekularbiologie | 2'-O-alkylnucleotides as well as polymers which contain such nucleotides |
US5470967A (en) | 1990-04-10 | 1995-11-28 | The Dupont Merck Pharmaceutical Company | Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
US5151510A (en) | 1990-04-20 | 1992-09-29 | Applied Biosystems, Inc. | Method of synethesizing sulfurized oligonucleotide analogs |
WO1991017424A1 (en) | 1990-05-03 | 1991-11-14 | Vical, Inc. | Intracellular delivery of biologically active substances by means of self-assembling lipid complexes |
ATE154246T1 (de) * | 1990-07-27 | 1997-06-15 | Isis Pharmaceuticals Inc | Nuklease resistente, pyrimidin modifizierte oligonukleotide, die die gen-expression detektieren und modulieren |
US5386023A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-31 | Isis Pharmaceuticals | Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling |
US5602240A (en) * | 1990-07-27 | 1997-02-11 | Ciba Geigy Ag. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US5623070A (en) * | 1990-07-27 | 1997-04-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
US5489677A (en) * | 1990-07-27 | 1996-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms |
CA2089376C (en) | 1990-08-13 | 2010-05-04 | Phillip Dan Cook | Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
WO1992003464A1 (en) | 1990-08-28 | 1992-03-05 | Microprobe Corporation | Solid support synthesis of 3'-tailed oligonucleotides via a linking molecule |
US5561225A (en) | 1990-09-19 | 1996-10-01 | Southern Research Institute | Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages |
EP0549686A4 (en) * | 1990-09-20 | 1995-01-18 | Gilead Sciences Inc | Modified internucleoside linkages |
US5432272A (en) | 1990-10-09 | 1995-07-11 | Benner; Steven A. | Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases |
WO1994008003A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-04-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE INHIBITION OF THE ras GENE |
US5214135A (en) | 1991-08-30 | 1993-05-25 | Chemgenes Corporation | N-protected-2'-O-methyl-ribonucleosides and N-protected 2'-O-methyl-3'-cyanoethyl-N-,N-diisopropyl phosphoramidite ribonucleosides |
US5525719A (en) | 1991-08-30 | 1996-06-11 | Chemgenes Corporation | N-protected-2'-O-methyl-and N-protected-3'-O-methyl-ribonucleosides and their phosphoramidite derivatives |
US5661134A (en) | 1991-10-15 | 1997-08-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides for modulating Ha-ras or Ki-ras having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US5607923A (en) * | 1991-10-15 | 1997-03-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides for modulating cytomegalovirus having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US5599797A (en) * | 1991-10-15 | 1997-02-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US6335434B1 (en) * | 1998-06-16 | 2002-01-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc., | Nucleosidic and non-nucleosidic folate conjugates |
US5594121A (en) * | 1991-11-07 | 1997-01-14 | Gilead Sciences, Inc. | Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines |
TW393513B (en) | 1991-11-26 | 2000-06-11 | Isis Pharmaceuticals Inc | Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines |
US5359044A (en) | 1991-12-13 | 1994-10-25 | Isis Pharmaceuticals | Cyclobutyl oligonucleotide surrogates |
US5856455A (en) * | 1991-12-24 | 1999-01-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped 2'-modified oligonucleotides |
IL104461A (en) | 1992-01-22 | 2001-05-20 | Hoechst Ag | Analogs of oligonucleotide, their preparation and pharmaceutical preparations containing them |
US5633360A (en) * | 1992-04-14 | 1997-05-27 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation |
US5817781A (en) * | 1992-06-01 | 1998-10-06 | Gilead Sciences, Inc. | Modified internucleoside linkages (II) |
EP0577558A2 (de) | 1992-07-01 | 1994-01-05 | Ciba-Geigy Ag | Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte |
US6346614B1 (en) * | 1992-07-23 | 2002-02-12 | Hybridon, Inc. | Hybrid oligonucleotide phosphorothioates |
JP3351476B2 (ja) | 1993-01-22 | 2002-11-25 | 三菱化学株式会社 | リン脂質誘導体及びそれを含有するリポソーム |
CN1124980A (zh) | 1993-03-31 | 1996-06-19 | 海布里顿公司 | 具有改良抗流感活性的经修饰寡核苷酸 |
HU9501974D0 (en) | 1993-03-31 | 1995-09-28 | Sterling Winthrop Inc | Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages |
FR2705099B1 (fr) * | 1993-05-12 | 1995-08-04 | Centre Nat Rech Scient | Oligonucléotides phosphorothioates triesters et procédé de préparation. |
ES2128535T3 (es) | 1993-05-12 | 1999-05-16 | Novartis Ag | Nucleosidos y oligonucleotidos con grupos 2'-eter. |
US6015886A (en) * | 1993-05-24 | 2000-01-18 | Chemgenes Corporation | Oligonucleotide phosphate esters |
US5428149A (en) * | 1993-06-14 | 1995-06-27 | Washington State University Research Foundation | Method for palladium catalyzed carbon-carbon coulping and products |
US5580972A (en) | 1993-06-14 | 1996-12-03 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Purine nucleoside modifications by palladium catalyzed methods |
US5534259A (en) | 1993-07-08 | 1996-07-09 | Liposome Technology, Inc. | Polymer compound and coated particle composition |
US5532130A (en) | 1993-07-20 | 1996-07-02 | Dyad Pharmaceutical Corporation | Methods and compositions for sequence-specific hybridization of RNA by 2'-5' oligonucleotides |
US5417978A (en) * | 1993-07-29 | 1995-05-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Liposomal antisense methyl phosphonate oligonucleotides and methods for their preparation and use |
US5614621A (en) | 1993-07-29 | 1997-03-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for preparing oligonucleotides using silyl-containing diamino phosphorous reagents |
PT748382E (pt) * | 1993-09-02 | 2003-03-31 | Ribozyme Pharm Inc | Acidos nucleicos enzimaticos contendo nao-nucleotidos |
CA2170869C (en) * | 1993-09-03 | 1999-09-14 | Phillip Dan Cook | Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides |
US5502177A (en) | 1993-09-17 | 1996-03-26 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
JPH09504297A (ja) | 1993-10-27 | 1997-04-28 | リボザイム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド | 2′−アミドおよび2′−ペプチド修飾オリゴヌクレオチド |
AU687492B2 (en) | 1993-11-16 | 1998-02-26 | Genta Incorporated | Synthetic oligomers having phosphonate internucleosidyl linkages of undefined chirality mixed with non-phosphonate internucleosidyl linkages |
CA2181546A1 (en) | 1994-02-18 | 1995-08-24 | Robert E. Kilkuskie | Oligonucleotides with anti-respiratory syncytial virus activity |
US5646126A (en) | 1994-02-28 | 1997-07-08 | Epoch Pharmaceuticals | Sterol modified oligonucleotide duplexes having anticancer activity |
US5596091A (en) * | 1994-03-18 | 1997-01-21 | The Regents Of The University Of California | Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides |
US5651981A (en) | 1994-03-29 | 1997-07-29 | Northwestern University | Cationic phospholipids for transfection |
US5625050A (en) * | 1994-03-31 | 1997-04-29 | Amgen Inc. | Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics |
US5777153A (en) | 1994-07-08 | 1998-07-07 | Gilead Sciences, Inc. | Cationic lipids |
US5580731A (en) | 1994-08-25 | 1996-12-03 | Chiron Corporation | N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith |
US5591721A (en) * | 1994-10-25 | 1997-01-07 | Hybridon, Inc. | Method of down-regulating gene expression |
US5681940A (en) | 1994-11-02 | 1997-10-28 | Icn Pharmaceuticals | Sugar modified nucleosides and oligonucleotides |
US5767099A (en) | 1994-12-09 | 1998-06-16 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles containing amino acid or dervatized amino acid groups for intracellular delivery of therapeutic molecules |
US5948767A (en) | 1994-12-09 | 1999-09-07 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphile/DNA complexes |
US5830430A (en) | 1995-02-21 | 1998-11-03 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Cationic lipids and the use thereof |
US6420549B1 (en) | 1995-06-06 | 2002-07-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide analogs having modified dimers |
US5981501A (en) | 1995-06-07 | 1999-11-09 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers |
WO1996040961A1 (en) | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Life Technologies, Inc. | Peptide-enhanced cationic lipid transfections |
US5851548A (en) | 1995-06-07 | 1998-12-22 | Gen-Probe Incorporated | Liposomes containing cationic lipids and vitamin D |
ATE285477T1 (de) | 1995-06-07 | 2005-01-15 | Inex Pharmaceutical Corp | Herstellung von lipid-nukleinsäure partikeln duch ein hydrophobische lipid-nukleinsäuree komplexe zwischenprodukt und zur verwendung in der gentransfer |
US5734041A (en) | 1995-10-20 | 1998-03-31 | Mcgill University | Preparation of chiral phosphorothioate oligomers |
US5705621A (en) * | 1995-11-17 | 1998-01-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric phosphite, phosphodiester, Phosphorothioate and phosphorodithioate compounds and intermediates for preparing same |
US5684143A (en) | 1996-02-21 | 1997-11-04 | Lynx Therapeutics, Inc. | Oligo-2'-fluoronucleotide N3'->P5' phosphoramidates |
US6331617B1 (en) | 1996-03-21 | 2001-12-18 | University Of Iowa Research Foundation | Positively charged oligonucleotides as regulators of gene expression |
US6444806B1 (en) | 1996-04-30 | 2002-09-03 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Conjugates and methods of forming conjugates of oligonucleotides and carbohydrates |
US5898031A (en) | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
US5789416B1 (en) | 1996-08-27 | 1999-10-05 | Cv Therapeutics Inc | N6 mono heterocyclic substituted adenosine derivatives |
US6111085A (en) | 1996-09-13 | 2000-08-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbamate-derivatized nucleosides and oligonucleosides |
US5849902A (en) | 1996-09-26 | 1998-12-15 | Oligos Etc. Inc. | Three component chimeric antisense oligonucleotides |
US6248878B1 (en) | 1996-12-24 | 2001-06-19 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleoside analogs |
US6287591B1 (en) * | 1997-05-14 | 2001-09-11 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Charged therapeutic agents encapsulated in lipid particles containing four lipid components |
US6028183A (en) * | 1997-11-07 | 2000-02-22 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives and oligonucleotides containing same |
AU1507199A (en) | 1997-12-15 | 1999-07-05 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel pyrimidine-5-carboxamide derivatives |
US6506559B1 (en) * | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
US6020475A (en) * | 1998-02-10 | 2000-02-01 | Isis Pharmeuticals, Inc. | Process for the synthesis of oligomeric compounds |
JP2003525017A (ja) * | 1998-04-20 | 2003-08-26 | リボザイム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド | 遺伝子発現を調節しうる新規な化学組成を有する核酸分子 |
US20040241845A1 (en) | 1998-05-22 | 2004-12-02 | Luc Desgroseillers | Mammalian staufen and use thereof |
US6277967B1 (en) | 1998-07-14 | 2001-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate or 2′-modified oligonucleotides having alternating internucleoside linkages |
US6242589B1 (en) | 1998-07-14 | 2001-06-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Phosphorothioate oligonucleotides having modified internucleoside linkages |
US6271358B1 (en) | 1998-07-27 | 2001-08-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | RNA targeted 2′-modified oligonucleotides that are conformationally preorganized |
US20040009938A1 (en) * | 1998-08-07 | 2004-01-15 | Muthiah Manoharan | Methods of enhancing renal uptake of oligonucleotides |
US6043352A (en) * | 1998-08-07 | 2000-03-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides |
US6020483A (en) * | 1998-09-25 | 2000-02-01 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Nucleoside modifications by palladium catalyzed methods |
US6328765B1 (en) | 1998-12-03 | 2001-12-11 | Gore Enterprise Holdings, Inc. | Methods and articles for regenerating living tissue |
US6455586B1 (en) | 1998-12-15 | 2002-09-24 | Leonard L. Kaplan | Topical immunomodulating compositions for treatment of aids, Hepatitis B & C, other infectious diseases, and cancer |
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
US6465628B1 (en) | 1999-02-04 | 2002-10-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for the synthesis of oligomeric compounds |
NZ513402A (en) | 1999-02-12 | 2003-06-30 | Sankyo Co | Novel nucleosides and oligonucleotide analogues |
US6207819B1 (en) * | 1999-02-12 | 2001-03-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds, processes and intermediates for synthesis of mixed backbone oligomeric compounds |
US6121437A (en) | 1999-03-16 | 2000-09-19 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Phosphate and thiophosphate protecting groups |
US6033910A (en) * | 1999-07-19 | 2000-03-07 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense inhibition of MAP kinase kinase 6 expression |
GB9925459D0 (en) | 1999-10-27 | 1999-12-29 | Plant Bioscience Ltd | Gene silencing |
DE10160151A1 (de) | 2001-01-09 | 2003-06-26 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens |
US7829693B2 (en) | 1999-11-24 | 2010-11-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
US20050032733A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-02-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA) |
EP1272630A2 (en) * | 2000-03-16 | 2003-01-08 | Genetica, Inc. | Methods and compositions for rna interference |
AU2001249622B2 (en) * | 2000-03-30 | 2007-06-07 | Massachusetts Institute Of Technology | RNA sequence-specific mediators of RNA interference |
EP1303495B1 (en) * | 2000-07-24 | 2010-05-26 | Krenitsky Pharmaceuticals, Inc. | Substituted 5-alkynyl pyrimidines having neurotrophic activity |
US20020132788A1 (en) | 2000-11-06 | 2002-09-19 | David Lewis | Inhibition of gene expression by delivery of small interfering RNA to post-embryonic animal cells in vivo |
HU230458B1 (hu) * | 2000-12-01 | 2016-07-28 | Europäisches Laboratorium für Molekularbiologie (EMBL) | Az RNS interferenciát közvetítő kis RNS molekulák |
FR2818642B1 (fr) * | 2000-12-26 | 2005-07-15 | Hoechst Marion Roussel Inc | Nouveaux derives de la purine, leur procede de preparation, leur application a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et nouvelle utilistion |
JP2004532616A (ja) | 2000-12-28 | 2004-10-28 | ジョンソン・アンド・ジョンソン・リサーチ・ピー・ティー・ワイ・リミテッド | 二本鎖rna仲介遺伝子抑制 |
US20030077829A1 (en) * | 2001-04-30 | 2003-04-24 | Protiva Biotherapeutics Inc.. | Lipid-based formulations |
US20070173473A1 (en) * | 2001-05-18 | 2007-07-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of proprotein convertase subtilisin Kexin 9 (PCSK9) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050239731A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-10-27 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of MAP kinase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20070032441A1 (en) * | 2001-05-18 | 2007-02-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (sina) |
WO2003070884A2 (en) * | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MDR P-GLYCOPROTEIN GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20050019915A1 (en) | 2001-06-21 | 2005-01-27 | Bennett C. Frank | Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression |
WO2003000707A2 (en) | 2001-06-21 | 2003-01-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression |
US20030158403A1 (en) | 2001-07-03 | 2003-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Nuclease resistant chimeric oligonucleotides |
DE10133858A1 (de) | 2001-07-12 | 2003-02-06 | Aventis Pharma Gmbh | Synthetische doppelsträngige Oligonucleotide zur gezielten Hemmung der Genexpression |
AU2002329667A1 (en) | 2001-07-30 | 2003-02-17 | Uta Griesenbach | Specific inhibition of gene expression by small double stranded rnas |
US7534774B2 (en) * | 2001-10-03 | 2009-05-19 | Tissue Repair Company | Traversal of nucleic acid molecules through a fluid space and expression in repair cells |
EP2325193A3 (en) | 2001-11-02 | 2012-05-02 | Insert Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference |
US20040087526A1 (en) | 2001-11-12 | 2004-05-06 | Shi-Lung Lin | Therapeutically useful compositions of DNA-RNA hybrid duplex constructs |
US20060009409A1 (en) * | 2002-02-01 | 2006-01-12 | Woolf Tod M | Double-stranded oligonucleotides |
WO2003064625A2 (en) * | 2002-02-01 | 2003-08-07 | Sequitur, Inc. | Oligonucleotide compositions with enhanced efficiency |
AU2003202376B2 (en) * | 2002-02-01 | 2008-10-30 | Mcgill University | Oligonucleotides comprising alternating segments and uses thereof |
US20030166282A1 (en) | 2002-02-01 | 2003-09-04 | David Brown | High potency siRNAS for reducing the expression of target genes |
WO2003099840A1 (en) * | 2002-05-24 | 2003-12-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having modified nucleoside units |
AU2003260370B2 (en) | 2002-08-05 | 2008-05-22 | Silence Therapeutics Gmbh | Further novel forms of interfering RNA molecules |
US20040032733A1 (en) * | 2002-08-08 | 2004-02-19 | Gabriel Frederick V. | Candle carrier for use with candle accessories burning tea light candles |
WO2004027030A2 (en) | 2002-09-18 | 2004-04-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Efficient reduction of target rna’s by single- and double-stranded oligomeric compounds |
CA2881743A1 (en) * | 2002-09-25 | 2004-04-08 | University Of Massachusetts | In vivo gene silencing by chemically modified and stable sirna |
CA2502649A1 (en) * | 2002-10-18 | 2004-04-29 | Nucleonics Inc. | Double-stranded rna structures and constructs, and methods for generating and using the same |
ATE443764T1 (de) | 2002-11-04 | 2009-10-15 | Univ Massachusetts | Allelspezifische rna-interferenz |
US7892793B2 (en) * | 2002-11-04 | 2011-02-22 | University Of Massachusetts | Allele-specific RNA interference |
US9150605B2 (en) * | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
JP2006507841A (ja) | 2002-11-14 | 2006-03-09 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 機能的siRNAおよび超機能的siRNA |
DE60332277D1 (de) | 2002-11-26 | 2010-06-02 | Univ Massachusetts | Verabreichung von sirnas |
WO2004065600A2 (en) | 2003-01-17 | 2004-08-05 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Rna interference by palindromic or modified rna molecules |
DE10302421A1 (de) | 2003-01-21 | 2004-07-29 | Ribopharma Ag | Doppelsträngige Ribonukleinsäure mit verbesserter Wirksamkeit |
EP1589931A2 (en) | 2003-02-05 | 2005-11-02 | University of Massachusetts | RNAi TARGETING OF VIRUSES |
US20040167090A1 (en) | 2003-02-21 | 2004-08-26 | Monahan Sean D. | Covalent modification of RNA for in vitro and in vivo delivery |
DK2216407T3 (en) | 2003-03-07 | 2016-03-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | therapeutic compositions |
US20040198640A1 (en) * | 2003-04-02 | 2004-10-07 | Dharmacon, Inc. | Stabilized polynucleotides for use in RNA interference |
WO2004090105A2 (en) | 2003-04-02 | 2004-10-21 | Dharmacon, Inc. | Modified polynucleotides for use in rna interference |
ES2702942T3 (es) * | 2003-04-17 | 2019-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Agentes de ARNi modificados |
US20060178327A1 (en) | 2003-05-30 | 2006-08-10 | Yeung Wah Hin A | Inhibition of gene expression by delivery of specially selected double stranded or other forms of small interfering RNA precursors enabling the formation and function of small interfering RNA in vivo and in vitro |
US7750144B2 (en) * | 2003-06-02 | 2010-07-06 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of RNA silencing |
US8309704B2 (en) | 2003-06-02 | 2012-11-13 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of RNAi |
DK3604537T3 (da) | 2003-06-13 | 2022-02-28 | Alnylam Europe Ag | Dobbeltstrenget ribonukleinsyre med forøget effektivitet i en organisme |
US20050106594A1 (en) | 2003-08-22 | 2005-05-19 | Andrew Ellington | In vitro selection of aptamer beacons |
EP2123759B1 (en) | 2004-02-06 | 2014-01-15 | Thermo Fisher Scientific Biosciences Inc. | Stabilized RNAS as transfection controls and silencing reagents |
US20060069050A1 (en) | 2004-02-17 | 2006-03-30 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for mediating gene silencing |
US20080071068A1 (en) * | 2004-02-20 | 2008-03-20 | Hideki Oba | Cytoplasmic Localization Dna and Rna |
KR101147147B1 (ko) * | 2004-04-01 | 2012-05-25 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | Rna 간섭의 오프 타겟 효과 감소를 위한 변형된폴리뉴클레오타이드 |
WO2005096781A2 (en) | 2004-04-06 | 2005-10-20 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for treating gain-of-function disorders using rna interference |
WO2006019430A2 (en) | 2004-04-20 | 2006-02-23 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Methods and compositions for enhancing delivery of double-stranded rna or a double-stranded hybrid nucleic acid to regulate gene expression in mammalian cells |
EP1765415A4 (en) | 2004-06-03 | 2010-03-24 | Isis Pharmaceuticals Inc | OLIGOMERIC COMPOUNDS FACILITATING THE "RISC" LOAD |
US20060211766A1 (en) | 2004-09-30 | 2006-09-21 | Kaplan Leonard L | Gelled immunomodulating topical compositions and a method of treating warts and other human papilloma virus skin infections |
EP1796732B1 (en) | 2004-10-01 | 2013-10-30 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Modified small interfering rna molecules and methods of use |
US7923207B2 (en) * | 2004-11-22 | 2011-04-12 | Dharmacon, Inc. | Apparatus and system having dry gene silencing pools |
US7790693B2 (en) | 2004-12-02 | 2010-09-07 | University Of Massachusetts | Glucose-transport related genes, polypeptides, and methods of use thereof |
US20100069620A1 (en) * | 2004-12-02 | 2010-03-18 | Rxi Pharmaceuticals Corp. | Novel compositions of chemically modified small interfering rna |
CA2589084A1 (en) | 2004-12-15 | 2006-06-22 | Merck & Co., Inc. | Inhibitors of akt activity |
WO2006066203A2 (en) | 2004-12-16 | 2006-06-22 | Alsgen, Llc | Small interfering rna (sirna) molecules for modulating superoxide dismutase (sod) |
WO2006128141A2 (en) | 2005-05-27 | 2006-11-30 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of stromal cell-derived factor-1 (sdf-1) gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
WO2007030167A1 (en) * | 2005-09-02 | 2007-03-15 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Modification of double-stranded ribonucleic acid molecules |
WO2007056604A2 (en) * | 2005-11-09 | 2007-05-18 | Irm Llc | Methods and compositions for modulating cell motility and inhibiting tumor metastasis |
WO2007069068A2 (en) | 2005-12-16 | 2007-06-21 | Diatos | Cell penetrating peptide conjugates for delivering nucleic acids into cells |
US7825099B2 (en) | 2006-01-20 | 2010-11-02 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Treatment or prevention of oto-pathologies by inhibition of pro-apoptotic genes |
US20070231392A1 (en) | 2006-01-23 | 2007-10-04 | Ernst Wagner | CHEMICALLY MODIFIED POLYCATION POLYMER FOR siRNA DELIVERY |
EP1986609A2 (en) | 2006-01-26 | 2008-11-05 | University of Massachusetts | Rna silencing agents for use in therapy and nanotransporters for efficient delivery of same |
CN103554205A (zh) | 2006-05-05 | 2014-02-05 | Isis制药公司 | 调节gccr的表达的化合物和方法 |
JP5570806B2 (ja) | 2006-05-11 | 2014-08-13 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | Pcsk9遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法 |
US7572618B2 (en) * | 2006-06-30 | 2009-08-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants |
CA2663601C (en) * | 2006-09-22 | 2014-11-25 | Dharmacon, Inc. | Duplex oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by rna interference |
MX2009005527A (es) | 2006-11-27 | 2009-06-08 | Isis Pharmaceuticals Inc | Metodos para el tratamiento de hipercolesterolemia. |
WO2008109353A1 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting map2k gene expression and uses thereof |
WO2008109105A2 (en) | 2007-03-06 | 2008-09-12 | Flagship Ventures | Methods and compositions for improved therapeutic effects with sirna |
EP2205740A2 (en) * | 2007-10-02 | 2010-07-14 | Rxi Pharmaceuticals Corp. | Tripartite rnai constructs |
EP2231168A4 (en) | 2007-10-03 | 2012-01-04 | Quark Pharmaceuticals Inc | NEW STRUCTURES OF ARNSI |
JP2011511004A (ja) | 2008-01-31 | 2011-04-07 | アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | PCSK9遺伝子を標的とするdsRNAを送達するための最適化された方法 |
CN104975020B (zh) | 2008-02-11 | 2020-01-17 | 菲奥医药公司 | 经修饰的RNAi多核苷酸及其用途 |
WO2009114475A2 (en) | 2008-03-09 | 2009-09-17 | Intradigm Corporation | Compositions comprising human pcsk9 and apolipoprotein b sirna and methods of use |
US20110218334A1 (en) | 2008-07-11 | 2011-09-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | PHOSPHOROTHIOATE OLIGONUCLEOTIDES AND NON-NUCLEOSIDIC PHOSPHOROTHIOATES AS DELIVERY AGENTS FOR iRNA AGENTS |
WO2010008582A2 (en) * | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Phagocytic cell drug delivery system |
US20110251258A1 (en) | 2008-07-24 | 2011-10-13 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rnai constructs and uses thereof |
NZ591416A (en) | 2008-08-25 | 2012-11-30 | Excaliard Pharmaceuticals Inc | Antisense oligonucleotides directed against connective tissue growth factor and uses thereof |
WO2010027830A2 (en) | 2008-08-25 | 2010-03-11 | Excaliard Pharmaceuticals, Inc. | Methods for modulation of connective tissue growth factor expression by administering antisense oligonucleotides through a delivery system so as to reduce scarring from wound healing and threat fibrotic diseases |
EP2949752B1 (en) | 2008-09-22 | 2017-12-20 | RXi Pharmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering rnai compounds |
US9074211B2 (en) * | 2008-11-19 | 2015-07-07 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of MAP4K4 through RNAI |
WO2010078536A1 (en) | 2009-01-05 | 2010-07-08 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of pcsk9 through rnai |
WO2010090762A1 (en) * | 2009-02-04 | 2010-08-12 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rna duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality |
US20110268761A1 (en) | 2010-03-02 | 2011-11-03 | Hapten Pharmaceuticals, Llc | Effective Sensitizing Dose of a Gelled Immunomodulating Topical Composition |
WO2011109698A1 (en) | 2010-03-04 | 2011-09-09 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Formulations and methods for targeted delivery to phagocyte cells |
WO2011119887A1 (en) * | 2010-03-24 | 2011-09-29 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rna interference in dermal and fibrotic indications |
EP3578183B1 (en) * | 2010-03-24 | 2021-09-08 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Rna interference in ocular indications |
RU2615143C2 (ru) * | 2010-03-24 | 2017-04-04 | Адвирна | Самодоставляющие PHKi соединения уменьшенного размера |
US20140072613A1 (en) | 2012-09-10 | 2014-03-13 | Cynthia Lander | Compositions and Methods for Treating Cutaneous Scarring |
EP3004170A1 (en) | 2013-05-28 | 2016-04-13 | VIB vzw | Single domain antibodies against sod1 and their use in medicine |
PT3702466T (pt) | 2013-08-27 | 2023-01-24 | Res Inst Nationwide Childrens Hospital | Produtos e métodos para tratamento de esclerose lateral amiotrófica |
EP3079707A4 (en) | 2013-12-02 | 2017-10-18 | RXi Pharmaceuticals Corporation | Immunotherapy of cancer |
CN105960265A (zh) | 2013-12-04 | 2016-09-21 | 阿克赛医药公司 | 利用经化学修饰的寡核苷酸处理伤口愈合的方法 |
CA2947270A1 (en) | 2014-04-28 | 2015-11-05 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Methods for treating cancer using nucleic acids targeting mdm2 or mycn |
JP2017514908A (ja) | 2014-05-01 | 2017-06-08 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 核酸分子を利用する目の前部における障害の処置のための方法 |
US10900039B2 (en) | 2014-09-05 | 2021-01-26 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating aging and skin disorders using nucleic acids targeting Tyr or MMP1 |
JP2018502837A (ja) | 2014-12-03 | 2018-02-01 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 遺伝子調節アプローチを用いた円形脱毛症の処置方法 |
LT3277814T (lt) | 2015-04-03 | 2020-10-26 | University Of Massachusetts | Oligonukleotidų junginiai, skirti nukreipimui į hantingtino mrnr |
HUE057431T2 (hu) | 2015-04-03 | 2022-05-28 | Univ Massachusetts | Oligonukleotid vegyületek preeklampszia és más angiogén rendellenességek kezelésére |
US20160319278A1 (en) | 2015-04-03 | 2016-11-03 | University Of Massachusetts | Fully stabilized asymmetric sirna |
US10808247B2 (en) | 2015-07-06 | 2020-10-20 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating neurological disorders using a synergistic small molecule and nucleic acids therapeutic approach |
JP6983752B2 (ja) | 2015-07-06 | 2021-12-17 | フィオ ファーマシューティカルズ コーポレーションPhio Pharmaceuticals Corp. | スーパーオキシドディスムターゼ1(sod1)を標的とする核酸分子 |
US20190029974A1 (en) | 2015-09-11 | 2019-01-31 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Methods for treating skin disorders and conditions utilizing haptens |
WO2017070151A1 (en) | 2015-10-19 | 2017-04-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding rna |
-
2009
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030143732A1 (en) * | 2001-04-05 | 2003-07-31 | Kathy Fosnaugh | RNA interference mediated inhibition of adenosine A1 receptor (ADORA1) gene expression using short interfering RNA |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6013060666; Mol. Ther. 13[4](2006) p.644-670 * |
JPN6013060676; RNA, 12[1](2006) p.13-176 * |
JPN6013060678; EMBO Rep., 7[3](2006) p.314-320 * |
Cited By (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11396654B2 (en) | 2008-09-22 | 2022-07-26 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Neutral nanotransporters |
US10006024B2 (en) | 2012-11-29 | 2018-06-26 | Gifu University | RNA interference agent, method for producing same, and use therefor |
WO2014084354A1 (ja) | 2012-11-29 | 2014-06-05 | 国立大学法人岐阜大学 | Rna干渉剤、その製造方法及びその利用 |
JP2017510298A (ja) * | 2014-03-18 | 2017-04-13 | ユニバーシティ オブ マサチューセッツ | 筋萎縮性側索硬化症を処置するためのrAAVベースの組成物および方法 |
US11760999B2 (en) | 2014-03-18 | 2023-09-19 | University Of Massachusetts | RAAV-based compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis |
JP2020019772A (ja) * | 2014-03-18 | 2020-02-06 | ユニバーシティ オブ マサチューセッツ | 筋萎縮性側索硬化症を処置するためのrAAVベースの組成物および方法 |
US10851375B2 (en) | 2014-03-18 | 2020-12-01 | University Of Massachusetts | RAAV-based compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis |
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JP2018519835A (ja) * | 2015-07-06 | 2018-07-26 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | スーパーオキシドディスムターゼ1(sod1)を標的とする核酸分子 |
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JP2019534005A (ja) * | 2016-11-07 | 2019-11-28 | ナノスール エルエルシー | 転写後化学修飾二重鎖rna |
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