JP2008539225A5 - - Google Patents
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Description
人参にはいろいろな種類の人参サポニンが含有されているが、現在既に明かされた成分は３０余種で、そのうち人参サポニンRg2（Ginsenoside Rg2）は、かなり以前から分離されて命名されたプロトパナキサトリオールグルコシド（Protopanaxatriol glycoside）に属する物質である。
前記のような目的を達成するために、本発明は、ウコギ科トチバニンジン属原料から人参サポニンRg2を抽出する方法において、原料を水で熱水抽出し、濃縮して得られた濃縮液を、低級アルコールを加えて沈殿された異物質を除去した後、残った上澄み液を脱色処理し、添加された低級アルコールを回収した後、塩析剤を投与して飽和濃度下で得られた沈殿物を水に再溶解させ、再びグラジエント塩析法を施行し、各自異なる塩析剤の濃度ごとに差等沈殿物を得た後、前記沈殿物を分析して人参サポニンRg2集中部分と非集中部分とに区分し、このうち人参サポニンRg2集中部分だけを取って脱塩剤で脱塩及び脱色し、濃縮した後、再び低級アルコールで精製して再結晶化することを特徴とする人参サポニンRg2の抽出方法を提供することによって達成される。
本発明で抽出しようとする人参サポニンRg2は、ウコギ科トチバニンジン属（Araliaceae panax）の原料中から抽出できるところ、前記原料に対して優先的に選択した方法は下記のような段階を含む。
ａ．ウコギ科トチバニンジン属の原料を１６倍量の水に入れて３時間のあいだ加熱抽出する過程を３回繰り返す。ウコギ科トチバニンジン属の原料は、人参（Panax ginseng）と洋参（Panax quinquefolius Linn.）などの植物の葉、根または実を含む；
ｂ．前記のように加熱して得られた抽出液を濃縮し、その３〜４倍量に該当する低級アルコールを混合する。前記低級アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アミルアルコールの中から選択される一つまたは二つ以上の混合物である；
ｃ．前記混合液を撹拌して異物質を沈殿させ、濾過処理して得られた上澄み液を脱色処理した後、溶媒に使用されたアルコールを回収する；
ｄ．前記溶媒の除去された溶液に塩析剤を飽和濃度まで添加し、８時間のあいだ沈殿させて沈殿物を得て、前記沈殿物を２０倍量の水に再溶解させた後、再び塩析剤を添加しながらグラジエント塩析を行って、各々ちがう塩析剤濃度ごとに生成される沈殿物たちを分離して回収する。前記塩析剤には、前述した塩化ナトリウム、塩化カルシウム、硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、この他にも毒性のない無機塩の中から選択される一つまたは二つ以上の混合物が使用される；
ｅ．前記グラジエント塩析法によって各自異なる塩析剤濃度から得られた沈殿物たちを、薄層クロマトグラフィ分析を実施して、人参サポニンRg2集中部分と人参サポニンRg2非集中部分とに分けて収集する；
ｆ．前記収集された人参サポニンRg2集中部分だけを選択して脱塩剤で脱塩、脱色した後再び濃縮する。前記脱塩剤には、陰陽イオン交換樹脂または吸着樹脂、充填剤などが使用されるのだが、イオン交換樹脂を使用の際は、人参サポニンRg2集中部分の沈殿物をその１０倍量の９５％エタノールに溶解させ濾過して得られた濾過液を１倍の蒸留水で希釈した後、脱塩を行い、吸着樹脂を使用の際は、人参サポニンRg2集中部分の沈殿物をその２０倍量の水に溶解させた後、吸着樹脂に通して無機物を除去し、５０％エタノールで洗浄して脱塩を行う；
ｇ．前記脱塩及び濃縮された人参サポニンRg2濃縮液にエタノールまたはメタノールなどのようなアルコールを投入しながら、５０％以上の濃度から析出される人参サポニンRg2粗製品（crude product）を獲得する；
ｈ．前記人参サポニンRg2粗製品を、再び各自異なるアルコールの濃度下で溶解度の差による再結晶を行い、高純度の各構造型人参サポニンRg2を収得する。例えば、人参サポニンRg2粗製品をまず７０％アルコールに溶解させ、常温で１２時間放置して、単一型Ｃ-２０(Ｒ)人参サポニンRg2を析出し、その上澄み液を取ってアルコール濃度を８０％に調節し、４℃で２４時間再結晶して結晶体を析出した後、前記結晶体を再び９０％アルコールに投入し８０℃まで加熱して溶解させた後、１０℃で２４時間放置して、混合構造型Ｃ-２０(ＳＲ)人参サポニンRg2を析出し、その上澄み液を再び-２０℃で１２時間放置して、単一型Ｃ-２０(Ｓ)人参サポニンRg2を析出する。
ｂ．前記のように加熱して得られた抽出液を濃縮し、その３〜４倍量に該当する低級アルコールを混合する。前記低級アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アミルアルコールの中から選択される一つまたは二つ以上の混合物である；
ｃ．前記混合液を撹拌して異物質を沈殿させ、濾過処理して得られた上澄み液を脱色処理した後、溶媒に使用されたアルコールを回収する；
ｄ．前記溶媒の除去された溶液に塩析剤を飽和濃度まで添加し、８時間のあいだ沈殿させて沈殿物を得て、前記沈殿物を２０倍量の水に再溶解させた後、再び塩析剤を添加しながらグラジエント塩析を行って、各々ちがう塩析剤濃度ごとに生成される沈殿物たちを分離して回収する。前記塩析剤には、前述した塩化ナトリウム、塩化カルシウム、硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、この他にも毒性のない無機塩の中から選択される一つまたは二つ以上の混合物が使用される；
ｅ．前記グラジエント塩析法によって各自異なる塩析剤濃度から得られた沈殿物たちを、薄層クロマトグラフィ分析を実施して、人参サポニンRg2集中部分と人参サポニンRg2非集中部分とに分けて収集する；
ｆ．前記収集された人参サポニンRg2集中部分だけを選択して脱塩剤で脱塩、脱色した後再び濃縮する。前記脱塩剤には、陰陽イオン交換樹脂または吸着樹脂、充填剤などが使用されるのだが、イオン交換樹脂を使用の際は、人参サポニンRg2集中部分の沈殿物をその１０倍量の９５％エタノールに溶解させ濾過して得られた濾過液を１倍の蒸留水で希釈した後、脱塩を行い、吸着樹脂を使用の際は、人参サポニンRg2集中部分の沈殿物をその２０倍量の水に溶解させた後、吸着樹脂に通して無機物を除去し、５０％エタノールで洗浄して脱塩を行う；
ｇ．前記脱塩及び濃縮された人参サポニンRg2濃縮液にエタノールまたはメタノールなどのようなアルコールを投入しながら、５０％以上の濃度から析出される人参サポニンRg2粗製品（crude product）を獲得する；
ｈ．前記人参サポニンRg2粗製品を、再び各自異なるアルコールの濃度下で溶解度の差による再結晶を行い、高純度の各構造型人参サポニンRg2を収得する。例えば、人参サポニンRg2粗製品をまず７０％アルコールに溶解させ、常温で１２時間放置して、単一型Ｃ-２０(Ｒ)人参サポニンRg2を析出し、その上澄み液を取ってアルコール濃度を８０％に調節し、４℃で２４時間再結晶して結晶体を析出した後、前記結晶体を再び９０％アルコールに投入し８０℃まで加熱して溶解させた後、１０℃で２４時間放置して、混合構造型Ｃ-２０(ＳＲ)人参サポニンRg2を析出し、その上澄み液を再び-２０℃で１２時間放置して、単一型Ｃ-２０(Ｓ)人参サポニンRg2を析出する。
前記した担体及び補助剤は、澱粉、滑石粉、糖、矯味剤、デキストリン類、医学用エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、植物油、ゼラチン及びツイン８０（tween80；Polyoxyethylene Sorbitan Monooleate）またはその他界面活性剤から選択することができる。
より詳細に説明すると、水のような希釈剤及び賦形剤；澱粉、蔗糖などのような充填剤；繊維素派生物質、アルギン酸塩、ゼラチン及びポリビニールピロリドン（Polyvinylpyrolidone）などのような接合剤；グリセリンのような湿潤剤；アガ（Agar）、炭酸カルシウムと炭酸水素ナトリウムのような崩解剤；４価アンモニウム（Quaternary Ammonium）化合物のような吸収促進剤；ヘキサデカノール（Hexadecanol）のような表面活性剤；高嶺土及び粗粘土のような吸着担体；滑石粉、カルシウムステアレート（Calcium Stearate）とマグネシウム及びポリエチレンなどのような潤滑剤を更に含む。この他にも、構成物質として、香味剤、甘味剤などのその他補助剤を添加することができる。
既に公知の抗うつ薬であるイミプラミン（imipramine）は、シナプス間隔（Synaptic cleft）のノルアドレナリン（NA）と5-ヒドロキシトリプタミン（5-HT）の濃度を増加させるものであり、若干のモノアミン酸化酵素（Monoamine oxidase）抑制剤も、脳内のモノアミン類神経伝達物質を増加させている。
Claims (9)
- ウコギ科トチバニンジン属原料から人参サポニンRg2を抽出する方法において、
原料を水で熱水抽出し、濃縮して得られた濃縮液を、低級アルコールを加えて沈殿された異物質を除去した後、残った上澄み液を脱色処理し、添加された低級アルコールを回収した後、塩析剤を投与して飽和濃度下で得られた沈殿物を水に再溶解させ、再びグラジエント塩析法を施行し、各自異なる塩析剤の濃度ごとに差等沈殿物を得た後、前記沈殿物を分析して人参サポニンRg2集中部分と非集中部分とに区分し、このうち人参サポニンRg2集中部分だけを取って脱塩剤で脱塩及び脱色し、濃縮した後、再び低級アルコールで精製して再結晶化することを特徴とする人参サポニンRg2の抽出方法。 - 前記原料は、ウコギ科トチバニンジン属植物の人参の葉、洋参の葉、人参の実の中から選択されることを特徴とする請求項１に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記熱水抽出は、ウコギ科トチバニンジン属の原料を、その１６倍量の水に入れて３時間の間加熱抽出する過程を３回繰り返すことを特徴とする請求項２に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記低級アルコールは、メチルアルコール、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、アミルアルコールの中から選択されることを特徴とする請求項３に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記塩析剤は、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、その他無毒性無機塩の中から選択されることを特徴とする請求項４に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記沈殿物から人参サポニンRg2集中部分と非集中部分とを区分する方法は、薄層クロマトグラフィ分析を介してなされることを特徴とする請求項５に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記脱塩剤は、陰陽イオン交換樹脂または吸着樹脂、充填剤の中から選択された一つであることを特徴とする請求項６に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記再結晶化する過程は、人参サポニンRg2濃縮液に９５％のアルコールを投与しながら、溶液内のアルコール濃度が５０％以上になる時から析出される結晶体を獲得する１次析出過程と、前記結晶体を再び各自異なるアルコールの濃度下で溶解度の差による再結晶を行い、各々の結晶体を収得する２次析出過程とからなることを特徴とする請求項７に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記２次析出過程は、１次析出された結晶体を７０％アルコールに溶解させ、常温で１２時間のあいだ放置して、単一型Ｃ-２０(Ｒ)人参サポニンRg2を析出し、その上澄み液を取ってアルコール濃度を８０％に調節し、４℃で２４時間再結晶させて結晶体を析出した後、前記結晶体を再び９０％アルコールに投入して８０℃まで加熱して溶解させた後、１０℃で２４時間のあいだ放置して、混合構造型Ｃ-２０（ＳＲ）人参サポニンRg2を析出し、その上澄み液を再び-２０℃で１２時間のあいだ放置して、単一型Ｃ-２０（Ｓ）人参サポニンRg2を析出することを特徴とする請求項８に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
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