JP2008539225A - 人参サポニンRg2の抽出方法及びその抽出物を含む医薬組成物とその用途 - Google Patents
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Abstract
また、本発明は、人参サポニンRg2を活性成分にした医薬組成物及びこの痴呆、憂鬱症及び末梢循環障害などの関連疾病を予防し、治療する予防及び治療剤に関するものである。
Description
本発明のまた別の目的は、人参サポニンRg2を含有する痴呆症、憂鬱症、末梢循環障害などの関連疾患を予防または治療する治療剤を提供することにある。
b.前記のように加熱して得られた抽出液を濃縮し、その3〜4倍量に該当する低級アルコールを混合する。前記低級アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アミルアルコールの中から選択される一つまたは二つ以上の混合物である;
c.前記混合液を撹拌して異物質を沈殿させ、濾過処理して得られた上澄み液を脱色処理した後、溶媒に使用されたアルコールを回収する;
d.前記溶媒の除去された溶液に塩析剤を飽和濃度まで添加し、8時間のあいだ沈殿させて沈殿物を得て、前記沈殿物を20倍量の水に再溶解させた後、再び塩析剤を添加しながらグラジエント塩析を行って、各々ちがう塩析剤濃度ごとに生成される沈殿物たちを分離して回収する。前記塩析剤には、前述した塩化ナトリウム、塩化カルシウム、硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、この他にも毒性のない無機塩の中から選択される一つまたは二つ以上の混合物が使用される;
e.前記グラジエント塩析法によって各自異なる塩析剤濃度から得られた沈殿物たちを、薄層クロマトグラフィ分析を実施して、人参サポニンRg2集中部分と人参サポニンRg2非集中部分とに分けて収集する;
f.前記収集された人参サポニンRg2集中部分だけを選択して脱塩剤で脱塩、脱色した後再び濃縮する。前記脱塩剤には、陰陽イオン交換樹脂または吸着樹脂、充填剤などが使用されるのだが、イオン交換樹脂を使用の際は、人参サポニンRg2集中部分の沈殿物をその10倍量の95%エタノールに溶解させ濾過して得られた濾過液を1倍の蒸留水で希釈した後、脱塩を行い、吸着樹脂を使用の際は、人参サポニンRg2集中部分の沈殿物をその20倍量の水に溶解させた後、吸着樹脂に通して無機物を除去し、50%エタノールで洗浄して脱塩を行う;
g.前記脱塩及び濃縮された人参サポニンRg2濃縮液にエタノールまたはメタノールなどのようなアルコールを投入しながら、50%以上の濃度から析出される人参サポニンRg2粗製品(crude product)を獲得する;
h.前記人参サポニンRg2粗製品を、再び各自異なるアルコールの濃度下で溶解度の差による再結晶を行い、高純度の各構造型人参サポニンRg2を収得する。例えば、人参サポニンRg2粗製品をまず70%アルコールに溶解させ、常温で12時間放置して、単一型C-20(R)人参サポニンRg2を析出し、その上澄み液を取ってアルコール濃度を80%に調節し、4℃で24時間再結晶して結晶体を析出した後、前記結晶体を再び90%アルコールに投入し80℃まで加熱して溶解させた後、10℃で24時間放置して、混合構造型C-20(SR)人参サポニンRg2を析出し、その上澄み液を再び-20℃で12時間放置して、単一型C-20(S)人参サポニンRg2を析出する。
−人参の葉からの人参サポニンRg2の抽出−
まず、100kgの人参の葉を16倍量の水に入れて3時間加熱して煮る。前記過程を3回繰り返して得られた液体を全て合わせて濾過器で濾過した後、前記濾過液を濃縮機で概略100kgになるまで濃縮した。前記濃縮液にその3倍量に該当する95%エタノールを添加して撹拌し、異物質を沈殿させた後、再び濾過処理して沈殿された異物質を除去し、分離された上澄み液は活性炭を利用して脱色した後、溶媒に使用したエタノールを回収した。
−洋参の葉からの人参サポニンRg2の抽出−
洋参の葉50kgを原料にして、実施例1と同一な方法で混合構造型C-20(SR)人参サポニンRg275gを獲得し、実施例1と同一な方法で収得率と純度を測定した結果、収得率は0.15%、純度は表5と図5のデータのように97.41%と現れた。
−人参の実からの人参サポニンRg2の抽出−
人参の実50kgを取って少量の水を添加した後、果肉をつぶして種を取り除いた後、濃縮してシロップを作り、前記シロップから実施例1と同一な方法で混合構造型C-20(SR)人参サポニンRg2125gを獲得し、実施例1と同一な方法で収得率と純度を測定した結果、収得率は0.25%で、純度は表6と図6のデータのように98.55%と現れた。
−ベータアミロイド(Aβ1-40)性痴呆症に対する人参サポニンRg2の治療効果−
実験はアルツハイマー痴呆(AD)モデルを採択した。白ネズミ(Rat)70匹を各10匹ずつ計7グループに分け、抱水クロラール(Chloralhydrate)で麻酔させた後、仮施術グループ以外の残りのグループには、海馬CA1区域内にベータアミロイド(Aβ1-40)4とイボテン酸(Ibotenic acid;IBA)1μgを注射して痴呆モデルを作った。この時、仮施術グループには、ベータアミロイド及びイボテン酸の代わりに、同一量の生理食塩水を注入した。
−多発梗塞性痴呆症に対する人参サポニンRg2の治療効果−
本実験では、多発梗塞性痴呆症(Multiple Infact Dementia:MID)モデルを採択した。白ネズミ(Rat)56匹を各8匹ずつ計7グループに分け、10%の抱水クロラール麻酔下で、仮施術グループ以外の残りのグループには、各々複合血栓誘導体0.13ml/100gを頸動脈内に注入した後、解剖構造を復帰させ、層に沿って皮膚を縫合した痴呆モデルをつくった。この時、仮施術グループには複合血栓誘導体の代わりに同一量の生理食塩水だけを注入した。
−PC12細胞損傷後、MTT代謝に対する人参サポニンRg2の治療効果−
105個/mlの密度を有するPC12培養細胞を96孔プレートに各孔ごとに100μlずつ接種し、PC12細胞が壁に付着されるのを待った後、前記孔を計六グループに分け、各グループごとに6孔ずつ割り当てた。
−憂鬱症に対する人参サポニンRg2の治療効果−
憂鬱症の一般的なモデルは薬物またはストレス性刺激法を採択するが、本発明では虚血/再潅流(ischemia/reperfusion)法を採択し、脳組織のNE,DA,5-HT含量を低め憂鬱症モデルを採択した。
−ペントバルビタールソジウム(Pentobarbital Sodium)睡眠時間に対する人参サポニンRg2の治療効果−
雄ハツカネズミ(mouse)38匹をもって、表18に記載されたとおり、三つのグループに分け、実験群には混合型人参サポニンRg2を各々10,20mg・kg-1ずつ静脈内に投与した後、同時に50mg・kg-1のペントバルビタールソジウム(Pentobarbital Sodium)を再度静脈内注射し、その反面対照群には人参サポニンRg2の代わりに20%の1.2ポリエチレングリコール10mg・kg-1を静脈内注射した後、ライティングレフレックス(Lighting reflex)消失を指標にして各グループに属したハツカネズミの睡眠時間を記録し、グループ間(t)検測を行い、その結果を表18に示した。
−耳殻末梢循環障害に対する人参サポニンRg2の治療効果−
雄ハツカネズミ(mouse)68匹を表19のように6グループに分け、ウレタン(Urethane)で麻酔させた後、顕微鏡下で耳殻の一筋の微静脈(V)と微動脈(A)とを探して各々その血管の直径を測定し、その流動形態を観察記録した。
−ウサギの耳潅流量に対する人参サポニンRg2の治療効果−
大耳白ウサギ33匹を下記表22のように4グループに分け、ペントバルビタールソジウムの麻酔下で耳根動脈を剥離してチューブを挿入した後、Locke溶液で残留血液を洗浄し、ウサギの耳を切断した後、潅流を行った。
Claims (9)
- たらの木科人参属原料から人参サポニンRg2を抽出する方法において、
原料を水で熱水抽出し、濃縮して得られた濃縮液を、低級アルコールを加えて沈殿された異物質を除去した後、残った上澄み液を脱色処理し、添加された低級アルコールを回収した後、塩析剤を投与して飽和濃度下で得られた沈殿物を水に再溶解させ、再びグラジエント塩析法を施行し、各自異なる塩析剤の濃度ごとに差等沈殿物を得た後、前記沈殿物を分析して人参サポニンRg2集中部分と非集中部分とに区分し、このうち人参サポニンRg2集中部分だけを取って脱塩剤で脱塩及び脱色し、濃縮した後、再び低級アルコールで精製して再結晶化することを特徴とする人参サポニンRg2の抽出方法。 - 前記原料は、たらの木科人参属植物の人参の葉、洋参の葉、人参の実の中から選択されることを特徴とする請求項1に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記熱水抽出は、たらの木科人参属の原料を、その16倍量の水に入れて3時間の間加熱抽出する過程を3回繰り返すことを特徴とする請求項2に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記低級アルコールは、メチルアルコール、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、アミルアルコールの中から選択されることを特徴とする請求項3に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記塩析剤は、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、その他無毒性無機塩の中から選択されることを特徴とする請求項4に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記沈殿物から人参サポニンRg2集中部分と非集中部分とを区分する方法は、薄層クロマトグラフィ分析を介してなされることを特徴とする請求項5に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記脱塩剤は、陰陽イオン交換樹脂または吸着樹脂、充填剤の中から選択された一つであることを特徴とする請求項6に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記再結晶化過程は、人参サポニンRg2濃縮液に95%のアルコールを投与しながら、溶液内のアルコール濃度が50%以上になる時から析出される結晶体を獲得する1次析出過程と、前記結晶体を再び各自異なるアルコールの濃度下で溶解度の差による再結晶を行い、各々の結晶体を収得する2次析出過程とからなることを特徴とする請求項7に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
- 前記2次析出過程は、1次析出された結晶体を70%アルコールに溶解させ、常温で12時間のあいだ放置して、単一型C-20(R)人参サポニンRg2を析出し、その上澄み液を取ってアルコール濃度を80%に調節し、4℃で24時間再結晶させて結晶体を析出した後、前記結晶体を再び90%アルコールに投入して80℃まで加熱して溶解させた後、10℃で24時間のあいだ放置して、混合構造型C-20(SR)人参サポニンRg2を析出し、その上澄み液を再び-20℃で12時間のあいだ放置して、単一型C-20(S)人参サポニンRg2を析出することを特徴とする請求項8に記載の人参サポニンRg2の抽出方法。
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