BRPI0706865A2 - método para preparar extrato de shinyleaf yellowhorn e extrato de shinyleaf yellowhorn - Google Patents
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Abstract
MéTODO PARA PREPARAR EXTRATO DE SHINYLEAF YELLOWHORN E EXTRATO DE SHINYLEAF YELLOWHORN. A presente invenção divulga uma espécie de extrato de Shinyleaf Yellowhorn consistindo principalmente de saponinas totais de Shinyleaf Yellowhorn, que representam mais que 50% do peso total do extrato de Shinyleaf Yellowhorn. A presente invenção também provê um método para a preparação do extrato acima, bem como seu uso no tratamento da incontinência urinária e micção freqúente devido à demência senil ou degradação da bexiga urinária, enurese infantil, retardamento mental pediátrico, demência da meia idade e senil e síndrome de Parkinson. As preparações farmacêuticas da presente invenção incluem injeções, comprimidos, cápsulas, cápsulas macias, líquido oral, pílulas, etc.
Description
"MÉTODO PARA PREPARAR EXTRATO DE SHINYLEAF YELLOWHORN EEXTRATO DE SHINYLEAF YELLOWHORN".
Campo da invenção
A presente invenção relaciona-se com extrato de ShinyleafYellowhorn [chifre amarelo de folha brilhante], métodospara extração, e usos do mesmo na preparação de fármacopara o tratamento de incontinência urinária e micçãofreqüente devido à demência senil ou degradação da bexigaurinária, e enurese infantil.
Antecedentes da invenção
Shinyleaf Yellowhorn, também conhecida como Wenguanguo eYanmugua, é a fruta da erva vivaz Xanthoceras sorbifoliaBunge (família: Soapberry; gênero: Xanthoceras). A origemda Xanthoceras sorbifolia selvagem é a parte norte daChina, correntemente a Xanthoceras sorbifolia é na maiorparte cultivada. Shinyleaf Yellowhorn tem sido usadaprincipalmente para o tratamento de artrite reumática,calor interno reumático e reumatismo dérmico, e foiregistrada na Farmacopéia Chinesa em 1977.
Em anos recentes Shinyleaf Yellowhorn e seu extratoalcoólico tem se provado a melhorar as funções deaprendizado e memória, e tem sido usada para tratamentode retardamento mental e demência senil. O Journal ofMedicine & Pharmacy of Chinese Minorities [Jornal deMedicina e Farmácia de Minorias Chinesas], 1997, vol.3(1) relatou uma observação clínica de usar diretamenteShinyleaf Yellowhorn seca para tratar 120 casos deenurese. A CN1092991A relatou o uso de extrato de álcoolde Shinyleaf Yellowhorn para melhorar as funções docérebro, e a preparação do mesmo. Entretanto, é difícilde extrair as saponinas de Shinyleaf Yellowhorn. 0conteúdo de saponinas totais em extrato de ShinyleafYellowhorn obtido por técnicas existentes é geralmente 18a 28%, e aquele de cascas de noz de Shinyleaf Yellowhorné 15 a 25% (veja, CN1250001 xNutshells for extration ofShinyleaf Yellowhorn saponin, crude fat, crude proteinand sugar' [Cascas de nozes para a extração de saponina,gordura bruta, proteína bruta e açúcar de ShinyleafYellowhorn]. 0 método existente para avaliar o conteúdode saponinas totais em extrato de Shinyleaf Yellowhorn éde pouca precisão, o que impede diretamente a precisão dadosagem, controle de qualidade e efeito terapêutico dosfármacos.
Devido aos componentes químicos de Shinyleaf Yellowhornserem razoavelmente complexos, é muito difícil usar atécnica cromatográfica, que é adequada e amplamenteadotada em produção industrial, para obter alto teor(>50%) de saponinas totais de Shinyleaf Yellowhorn. Atéagora, não existe relato sobre a preparação de extrato deShinyleaf Yellowhorn contendo alto teor (>50%) desaponinas totais, nem método para a preparação de extratode Shinyleaf Yellowhorn contendo alto teor de saponinastotais por técnica cromatográfica.
Correntemente não há fármaco seguro, efetivo eeuterapêutico para o tratamento de incontinência urináriae micção freqüente devido à demência senil ou degradaçãoda bexiga urinária, enurese infantil e retardamentomental pediátrico, envelhecimento do cérebro e demênciade média idade e senil. A presente invenção resolveu estanecessidade provendo extrato de Shinyleaf Yellowhorn comouma preparação farmacêutica de planta que tem bonsefeitos terapêuticos sem efeitos tóxicos e laterais.
Descrição da invenção
0 propósito da presente invenção é prover uma espécie deextrato de Shinyleaf Yellowhorn com alto teor desaponinas totais. Um segundo propósito da presenteinvenção é prover um método para preparar o citadoextrato. Um outro propósito é prover um método para mediro teor de saponinas totais no extrato de ShinyleafYellowhorn. Ainda um outro propósito é lidar com o uso doextrato de Shinyleaf Yellowhorn na preparação de fármacospara o tratamento da incontinência urinária e micçãofreqüente devido à demência senil ou degradação da bexigaurinária e enurese infantil Ainda um outro propósito éprover um método para o tratamento das doenças acima como extrato acima.
Os propósitos acima são alcançados pela configuraçãopreferida seguinte:
A presente invenção provê uma espécie de extrato deShinyleaf Yellowhorn compreendendo principalmente assaponinas totais, que representam mais que 50% do pesobruto do extrato de Shinyleaf Yellowhorn seco (mais que60% na configuração preferida, mais preferivelmente maisque 70%, o mais preferivelmente mais que 80%, e até mesmo90% ou mais). A saponina B no extrato de ShinyleafYellowhorn representa mais que 15%, mais que 18% naconfiguração preferida, mais preferivelmente mais que21%, baseado no peso total de extrato de ShinyleafYellowhorn seco.
A presente invenção também provê um método para prepararo extrato acima. 0 presente inventor descobriu que épossível obter extrato de Shinyleaf Yellowhorn contendomais que 50% de saponinas totais por uma técnica deextração e refino única.
O método para preparar o extrato de Shinyleaf Yellowhorncompreende as seguintes etapas:
A. Matéria-prima de Shinyleaf Yellowhorn é secada edesoleada (preferivelmente usando uma prensa de óleo)para conseguir pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn. O póde torta é extraído com Extrator A ou extraído porextração com CO2 supercrítico. Então o extrato resultanteé secado para conseguir creme de extrato de ShinyleafYellowhorn. O Extator A é selecionado de n-hexano, éterde petróleo, dietil éter e clorofórmio, com n-hexanopreferido.
Β. O creme de extrato de Shinyleaf Yellowhorn é extraídocom Extrator B. Os extratos líquidos resultantes sãofiltrados, combinados, adicionados a água para dissolver,e então filtrados para conseguir Extrato Líquido I. OExtrator B pode ser metanol ou etanol;
C. 0 Extrato Líquido I é adicionalmente extraído comExtrator C. Os extratos líquidos resultantes sãofiltrados, combinados, adicionados a água para dissolver,e então filtrados para conseguir Extrato Líquido II. OExtrator C pode ser selecionado de n-butanol, n-propanol,isopropanol, isobutanol, e pentanol, preferivelmente n-butanol, n-propanol, e isopropanol.
D. O Extrato Líquido II é carregado na coluna de resinamacroporosa de estireno para processo de adsorção. Entãoeluído com solução de metanol ou etanol. O eluato écoletado, concentrado e secado para obter extrato deShinyleaf Yellowhorn refinado.
De acordo com uma configuração preferida da presenteinvenção, o método para preparar extrato de ShinyleafYellowhorn compreende as seguintes etapas:A. Matérias-prima de Shinyleaf Yellowhorn é secada edesoleada (preferivelmente usando uma prensa de óleo)para obter pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn. O pó detorta é extraído com extrator A ou por extração com CO2supercrítico. O extrato resultante é secado para obtercreme de extrato de Shinyleaf Yellowhorn.
No caso de extração com Extrator A, é preferido extraircom Extrator A em uma razão de peso/peso de 1-5:1,preferivelmente 2-3:1, e executar o procedimento deextração 2-6 vezes, preferivelmente 3-5 vezes. O solventeé então recuperado do extrato resultante sob pressãoreduzida, e secado para obter creme de extrato deShinyleaf Yellowhorn.
No caso de extraíção por extração supercrítica de CO2, opó de torta é adicionado a CO2 supercrítico para executara extração. Os parâmetros técnicos para extração com CO2supercrítico são como seguem: pressão de extração: 10-50MPa (preferivelmente 20-30 MPa); temperatura de extração:20-60 0C (preferivelmente 40~50°C); tempos executados:2-5; agente de arraste: etanol, fração em volume: 60-95%,quantidade: 1-6% (preferivelmente 2-4%).
Β. 0 creme de extrato de Shinyleaf Yellowhorn é extraídocom Extrator B por 1 ou 2 vezes, cada uma durando cercade 2-4 horas, pref erivelmente com Extrator B de umaconcentração de 50-90% (preferivelmente 55-85%, maispreferivelmente 65-80%) em uma razão de volume/peso de2-9:1 (preferivelmente 4-8:1). Os extratos líquidosresultantes são filtrados e combinados, e então álcool érecuperado sob pressão reduzida, preferivelmente a60-70 °C, até que não haja odor de álcoois. Adicionados0,5-3 volumes (preferivelmente 1-2 volumes) de água efiltrado novamente para obter o Extrato Líquido I.C. O Extrato Líquido I é adicionado a Extrator C paraexecutar extração 1-3 vezes. É preferido usar o ExtratorC de uma razão de volume/volume de 0,5-3:1(preferivelmente 1-2:1), cada uma por 2-4 horas. Osextratos líquidos resultantes são filtrados, combinados,e então o álcool recuperado sob pressão reduzida(preferivelmente a 60-70°C) , até que não haja odor deál coois. Adicionados 0,2-2 volumes (preferivelmente 0,5-1volume) de água e filtrado novamente para obter o ExtratoLíquido II.
D. O Extrato Líquido II é carregado na coluna de resinamacroporosa de estireno para processo de adsorção. Épreferido para o processo de adsorção executá-lo por10-60 min (mais preferivelmente por 20-40 min) . Eluídocom 600-1500 ml de água, preferido uma taxa de fluxo de1,0-4,0 ml/min. Então eluato com 800-3000 ml de soluçãode etanol a 30-80% (preferivelmente 40-70%, maispreferivelmente 60-70%), preferivelmente a uma taxa defluxo de 0,5-2 ml/min. Um eluato de álcool a 20-30% écoletado e o álcool recuperado sob pressão reduzida(preferivelmente a 60~70°C), até que não haja odor deálcoois. A solução resultante é concentrada e secada paraobter um extrato de Shinyleaf Yellowhorn refinado.Os procedimentos de extração preferidos mencionados acimasão preferivelmente extração por refluxo térmico ouextração ultra-sônica. A razão de peso/volume como usadaaqui é kg/l.
De acordo com uma configuração da presente invenção, acoluna de resina macroporosa de estireno como usada aquipode ser polar, polar fraca, ou não polar. Antes doprocesso de adsorção, a coluna de resina pode ser pré-tratada com metanol ou etanol e lavada com água antes deadicionada com extrator. Em configuração particular dapresente invenção, a resina usada pode ser qualquer umadas seguintes: DA201 (polímeros de alto peso molecular depoliestireno macroporoso polar com partículas esféricasopacas leitosas ou amarelo claro, produzidas por TianjinUniversity Chemical Plant), AB8 (polímeros de alto pesomolecular de poliestireno macroporoso não polar com aspartículas esféricas opacas leitosas ou amarelo claro,produzidas pela Tianjin AAA Plant), DlOl (polímeros dealto peso molecular de poliestireno microporoso polarfraco com as partículas esféricas opacas leitosas ouamarelo claro, produzidas pela Tianjin UniversityChemical Plant), HP20 (polímeros de alto peso molecularde poliestireno macroporoso polar fraco com as partículasesféricas leitosas, produzidas pela Japanese MitsubishiChemical Industrial Corporation), SP825 (polímeros dealto peso molecular de poliestireno macroporoso polarfraco com as partículas esféricas opacas marrons,produzidas pela Japanese Mitsubishi Chemical IndustrialCorporation).
Os experimentos mostraram que as saponinas totais deShinyleaf Yellowhorn consistem principalmente desaponinas A, B, C e D, e estes componentes têm uma razãorelativamente estável. Foi relatado (veja iProgress inthe study of chemical components of Shinyleaf Yellowhornand their pharmacological actions [Progresso no estudode componentes químicos de Shinyleaf Yellowhorn e suasações farmacológicas], Journal of Shenyang PharmaceuticalUniversity, 2004, 21(6)) que o núcleo de saponinas totaisde Shinyleaf Yellowhorn é uma classe de compostos comtriterpenóides pentacíclicos tipo oleanano. A fórmulamolecular da saponina B em Shinyleaf Yellowhorn é C60H92O24com um peso molecular de 1196, e sua estrutura química écomo segue:
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Em Shinyleaf Yellowhorn e seu extrato, a razão desaponina B (C60H92O24) em relação às saponinas totais érazoavelmente constante. A saponina B representa 30 a 35%da soma das saponinas A, B, CeD. Assim, o inventordescobriu que a determinação precisa do teor de saponinaB em Shinyleaf Yellowhorn permitirá o cálculo do teorrelativo de saponinas totais.
A análise racional para determinar o conteúdo desaponinas totais é: 1 g de extrato de ShinyleafYellowhorn obtido pelo método de extração da presenteinvenção contém mais que 150 mg da saponina B (C60H92O24) ,isto é, o teor de saponina B de Shinyleaf Yellowhornexcede 15%. Conseqüentemente, dado o fato que a saponinaB representa 3 0% da soma das saponinas A, B, CeD, Igde extrato de Shinyleaf Yellowhorn contém mais que 500 mgde saponinas totais, isto é, o teor de saponinas totaisem extrato de Shinyleaf Yellowhorn excede 50% calculado apartir do teor de saponina B.
Na presente invenção, as saponinas totais representammais que 50% do extrato de Shinyleaf Yellowhorn total,baseado em massa seca. Entretanto, a saponina B (C60H92O24)representa 30-35% das saponinas totais. Conseqüentemente,o teor de saponina B no extrato de Shinyleaf Yellowhornseco é maior que 15%. 0 método para preparar extrato deShinyleaf Yellowhorn divulgado na presente invenção éestável e confiável, e pode produzir um extrato contendoalto teor de saponinas totais, dessa forma habilitando aqualidade estável de preparações farmacêuticas, a dosagemdiminuída de fármaco, o efeito terapêutico aumentado, e afacilidade para preparações farmacêuticas.
Mostrando os efeitos de extrato de Shinyleaf Yellowhornna freqüência de urinação do camundongo cheio de água,sobre o músculo liso excisado de bexiga de ratos, e sobrea bioeletricidade do eletrodo extracelular do esfíncterexterno da bexiga urinária de coelhos, bem como sua açãoantagonista na contração induzida por Ach (acetilcolina)do músculo liso excisado de bexiga de ratos, a presenteinvenção demonstrou que o extrato de Shinyleaf Yellowhorné efetivo no tratamento da incontinência urinária emicção freqüente devido à demência senil ou degradação dabexiga urinária. Mostrando os efeitos de extrato deShinyleaf Yellowhorn no tempo de sono de camundongos, apresente invenção provou que o extrato de ShinyleafYellowhorn é efetivo no tratamento de enurese infantil.Mostrando os efeitos melhorados de extrato de ShinyleafYellowhorn na incapacidade da memória de rato induzidapor anisodina, e seu efeito na anulação do reflexocondicionado do modelo de rato com demência com gangliabasal de Meynert e neurônio colinérgico destruídos, apresente invenção demonstrou a eficácia do extrato deShinyleaf Yellowhorn no tratamento de demência. Foiprovado que o extrato de Shinyleaf Yellowhorn divulgadona presente invenção tem os efeitos de melhorar asfunções cerebrais e intensificar a atividade do cérebro,e pode ser usado para tratar a incontinência urinária emicção freqüente devido à demência senil ou degradação dabexiga urinária, enurese infantil, retardamento mental,envelhecimento do cérebro, demência de meia idade e senile síndrome de Parkinson.
O extrato de planta obtido pelo método da presenteinvenção pode ser usado junto com portadoresfarmaceuticamente aceitáveis, para fabricar composiçõesde fármacos, por exemplo na forma de comprimidos,cápsulas, líquidos orais, injeções, e pílulas. Os métodosconvencionais de produção de fármaco no campofarmacêutico podem ser usados para a produção de váriaspreparações farmacêuticas com o presente extrato deplanta. A preparação farmacêutica é preferivelmente paraadministração oral ou parenteral, mais preferivelmentepara administração oral.
A composição de fármaco divulgada na presente invençãopode ser administrada oralmente como qualquer tipo depreparações farmacêuticas adequadas para administraçãooral, incluindo mas não limitada a cápsulas, comprimidos,suspensões e soluções aquosas. No caso de comprimidooral, os portadores comumente usados incluem lactose eamido de milho, e usualmente adicionados comlubrificantes, tais como estearato de magnésio. Como paracápsulas administradas oralmente, os diluentes adequadosincluem lactose e amido de milho. Como para as suspensõesaquosas administradas oralmente, os ingredientes ativossão combinados com agentes emulsificantes e de suspensão.Se necessário, agente adoçante, ou agente aromatizante oucorante podem ser adicionados à composição do fármaco.Em uma configuração preferida da presente invenção, aforma de dosagem aceitável oralmente contém 10-90%(preferivelmente 40-80%) de extrato de ShinyleafYellowhorn. Se calculado em termos de saponinas totais deShinyleaf Yellowhorn, o teor é de 5-80% (preferivelmente20-40%). A forma de dosagem é preferivelmenteadministrada 1-4 (preferivelmente 2-3) vezes por dia,cada dose de 0,1-1 g (preferivelmente 0,2-0,4 g).As formas injetáveis estéreis da composição de fármacodivulgada na presente invenção podem ser as suspensõesaquosas ou oleosos. Estas suspensões podem ser preparadascom os agentes dispersantes ou umidificantes adequadosjuntos com o agente de suspensão por técnicasestabelecidas na arte. As preparações farmacêuticasinjetáveis estéreis também podem ser o licor ou suspensãoinjetável estéril no agente diluente ou solventeparenteralmente aceitável, não tóxico, tal como umasolução de 1,3-butanodiol. Os portadores e solventesaceitáveis incluem água, solução de Ringer e solução decloreto de sódio isotônica. Em adição, o óleo fixadoestéril é freqüentemente usado como solvente ou meio desuspensão.
Se necessário, a dose de manutenção da presentecomposição de composto ou combinações da mesma podem serprescritas para o paciente uma vez que seu status desaúde tenha melhorado. Subseqüentemente, a dose e/oufreqüência de administração de fármaco pode ser reduzidaao nível mínimo requerido para manter o status de saúdemelhorado. Uma vez que a melhoria dos sintomas alcance onível requerido, o tratamento deve ser descontinuado.Entretanto, uma vez que os sintomas da doença tenhamqualquer recorrência, o paciente pode necessitartratamentos intermitentes durante um longo período.
As preparações farmacêuticas divulgadas na presenteinvenção também podem conter ou podem ser usadas emcombinação com ou em ordem correta com, outro agenteativo ou fármacos para incontinência urinária e micçãofreqüente devido à demência senil ou degradação da bexigaurinária, enurese infantil, retardamento mentalpediátrico, envelhecimento do cérebro, demência de meiaidade e senil e síndrome de Parkinson.
Também é notado que a dose específica de administração defármaco e o regime específico de tratamento para umpaciente específico dependem de uma variedade de fatores,incluindo a atividade do extrato específico, a idade, opeso corporal, o status de saúde geral, o gênero, a dietado paciente, o tempo de administração, a taxa deexcreção, a composição do fármaco, o julgamento do médicoacompanhando e a gravidade da doença específica a sertratada.
As configurações preferidas da presente invençãoOs exemplos seguintes são usados para a ilustraçãoadicional de, mas não a limitação de, a presenteinvenção.
Exemplo 1. Efeitos de diferentes solventes na preparaçãode creme de extrato de Shinyleaf Yellowhorn
Matéria-prima de Shinyleaf Yellowhorn é secada edesoleada (preferivelmente por esmagamento com uma prensade óleo) para conseguir pó de torta de ShinyleafYellowhorn. 0,15 g do pó de torta é precisamente pesado eextraído com o dobro de peso de Extrator A. A extração éexecutada 4 vezes, cada uma durando 5 horas. 0 solvente érecuperado sob pressão reduzida e secado para obterextrato de Shinyleaf Yellowhorn.
0 Extrator A pode ser hexano, dietil éter, clorofórmio,ou éter de petróleo. A extração também pode ser conduzidapor procedimento de extração com CO2 supercrítico. Osparâmetros técnicos para extração com CO2 supercríticosão como segue: pressão de extração: 25-30 MPa,temperatura de extração: 45°C; vezes executadas: 4;
agente de arraste: etanol, fração de volume: 70%,quantidade: 3%. Secar o extrato resultante para obtercreme de extrato de Shinyleaf Yellowhorn.
Extraindo pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn com oscitados solventes ou extraído pelo método de extração comCO2 supercrítico, e medindo e comparando os respectivosresultados, nós descobrimos que todos estes solventespodem realizar uma eficiência de extração de 70% ou mais,enquanto o método de extração com CO2 supercrítico poderealizar 80% ou mais. Levando em conta que o dietil éteré um anestésico e que clorofórmio é altamente tóxico, eque a produção de éter de petróleo é insegura, é maispreferido selecionar N-hexano como Extrator A. Enquantoisso, o método de extração com CO2 supercrítico tem orendimento de extração mais alto, livre de impurezastóxicas, e pode ser adotado ao invés do método deextração convencional com Extrator A.
Exemplo II:5 kg de pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn são pesados eadicionados a 10 kg de éter de petróleo para extração. Oprocesso de extração é executado 4 vezes, cada um durando6 horas. O solvente é recuperado sob pressão reduzida e oextrato líquido resultante é secado para obter creme deextrato de Shinyleaf Yellowhorn. 1 kg do creme de extratoé pesado e adicionado a 6 1 da solução de metanol a 55%.O processo de extração é executado 2 vezes, cada umdurando 2 horas. Os extratos líquidos são filtrados ecombinados, e o solvente é recuperado a 60°C sob pressãoreduzida, até que não haja odor de álcoois. O extratoresultante é dissolvido em 1 l de água e então filtradopara obter Extrato Líquido I. O Extrato Líquido I éadicionalmente extraído com 1 1 de isobutanol por 3vezes, cada uma durando 2 horas. Os extratos líquidos sãofiltrados e combinados, e então o solvente é recuperado a70 °C sob pressão reduzida, até que não haja odor deálcoois. O extrato resultante é dissolvido com 1 1 deágua, então a solução é filtrada para obter o ExtratoLíquido II. Para o propósito de análise, uma porção doExtrato Líquido II é evaporada até a secura para obter umextrato bruto de Shinyleaf Yellowhorn.
Exemplo III:
5 kg de pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn são pesados eadicionados a 15 kg de dietil éter para extração. Oprocesso de extração é executado 3 vezes, cada umadurando 5 horas. O solvente é recuperado sob pressãoreduzida e o extrato líquido resultante é secado paraobter creme de extrato de Shinyleaf Yellowhorn. 1 kg docreme de extrato é pesado e adicionado a 7 l da soluçãode etanol a 65% para executar extração por 3 horas. Osextratos líquidos são filtrados e combinados, e osolvente é recuperado a 650C sob pressão reduzida, atéque não haja odor de álcoois. O extrato resultante édissolvido em 2 l de água e então filtrado para obter oExtrato Líquido 1. O Extrato Líquido I é adicionalmenteextraído com 2 l de pentanol por 3 horas. Os extratoslíquidos são filtrados e combinados e então o solvente érecuperado a 620C sob pressão reduzida, até que não hajaodor de álcoois. 0 extrato resultante é dissolvido com0,5 1 de água, então a solução é filtrada para obter5 Extrato Líquido II. Para o propósito de análise, umaporção do Extrato Líquido II é evaporada até a securapara obter um extrato bruto de Shinyleaf Yellowhorn.
Exemplo IV:
5 kg de pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn são pesados eadicionados a 15 kg de éter de petróleo para extração. 0processo de extração é executado 5 vezes, cada umadurando 4 horas. 0 solvente é recuperado sob pressãoreduzida e o extrato líquido resultante é secado paraobter creme de extrato de Shinyleaf Yellowhorn. 1 kg docreme de extrato é pesado e adicionado a 8 1 da soluçãode etanol a 75% para extração. O processo de extração éexecutado duas vezes, cada uma durando 2 horas. Osextratos líquidos são filtrados e combinados, e osolvente é recuperado a 70 0C sob pressão reduzida, atéque não haja odor de álcoois. 0 extrato resultante édissolvido em 1 1 de água e então filtrado para obter oExtrato Líquido 1. 0 Extrato Líquido I é adicionalmenteextraído com 2 1 de n-butanol por 2 vezes, cada umadurando 4 horas. Os extratos líquidos são filtrados ecombinados, e então o solvente é recuperado a 650C sobpressão reduzida, até que não haja odor de álcoois. 0extrato resultante é dissolvido com 0,7 1 de água, entãofiltrado para obter o Extrato Líquido II. Para opropósito de análise, uma porção do Extrato Líquido II éevaporada até a secura para obter um extrato bruto deShinyleaf Yellowhorn.
Exemplo V:
5 kg de pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn são pesados eadicionados a 10 kg de éter de petróleo para extração. 0processo de extração é executado 3 vezes, cada umadurando 6 horas. 0 solvente é recuperado sob pressãoreduzida e o extrato líquido resultante é secado paraobter creme de extrato de Shinyleaf Yellowhorn. 1 kg docreme de extrato é pesado e adicionado a 4 1 da soluçãode metanol a 85% para executar a extração por 4 horas. Osextratos líquidos são filtrados e combinados, e osolvente é recuperado a 67 0C sob pressão reduzida, atéque não haja odor de álcoois. O extrato resultante édissolvido em 2 1 de água e então filtrado para obterExtrato Líquido I. O Extrato Líquido I é adicionalmenteextraído com 1 1 de n-propanol por 3 vezes, cada umadurando 2-4 horas. Os extratos líquidos são filtrados ecombinados, e então o solvente é recuperado a 600C sobpressão reduzida, até que não haja odor de álcoois. 0extrato resultante é dissolvido com 1 1 de água, entãofiltrado para obter Extrato Líquido II. Para o propósitode análise, uma porção do Extrato Líquido II é evaporadaaté a secura para obter um extrato bruto de ShinyleafYellowhorn.
Exemplo VI:
5 kg de pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn são pesados eadicionados a 10 kg de n-hexano para extração. 0 processode extração é executado 4 vezes, cada uma durando 6horas. 0 solvente é recuperado sob pressão reduzida e oextrato líquido resultante é secado para obter creme deextrato de Shinyleaf Yellowhorn. 1 kg do creme de extratoé pesado e adicionado a 6 1 da solução de metanol a 55%.A extração é executada 2 vezes, cada uma durando 2 horas.Os extratos líquidos são filtrados e combinados, e osolvente é recuperado a 600C sob pressão reduzida, atéque não haja odor de álcoois. 0 extrato resultante édissolvido em 1 1 de água e então filtrado para obterExtrato Líquido 1. 0 Extrato Líquido I é adicionalmenteextraído com 1 1 de isobutanol por 3 vezes, cada umadurando 2 horas. Os extratos líquidos são filtrados ecombinados, e então o solvente é recuperado a 700C sobpressão reduzida, até que não haja odor de álcoois. 0extrato resultante é dissolvido com 1 1 de água, entãofiltrado para obter o Extrato Líquido II. Para opropósito de análise, uma porção do Extrato Líquido II éevaporada até a secura para obter um extrato bruto deShinyleaf Yellowhorn.
Exemplo VII:
5 kg de pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn são pesados eadicionados a 15 kg de n-hexano para extração. O processode extração é executado 3 vezes, cada uma durando 5horas. O solvente é recuperado sob pressão reduzida e oextrato líquido resultante é secado para obter creme deextrato de Shinyleaf Yellowhorn. 1 kg do creme de extratoé pesado e adicionado a 7 1 da solução de etanol a 65%para executar extração por 3 horas. Os extratos líquidosresultantes são filtrados e combinados, e o solvente érecuperado a 650C sob pressão reduzida, até que não hajaodor de álcoois. O extrato resultante é dissolvido em 2 1de água e então filtrado para obter o Extrato Líquido I.
O Extrato Líquido I é adicionalmente extraído com 2 1 depentanol por 3 horas. Os extratos líquidos são filtradose combinados, e então o solvente é recuperado a 620C sobpressão reduzida, até que não haja odor de álcoois. 0extrato resultante é dissolvido com 0,5 1 de água, entãofiltrado para obter o Extrato Líquido II. Para opropósito de análise, uma porção do Extrato Líquido II éevaporada até a secura para obter um extrato bruto deShinyleaf Yellowhorn.
Exemplo VIII:
5 kg de pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn são pesados eadicionados a 15 kg de n-hexano para extração. O processode extração é executado 5 vezes, cada uma durando 4horas. O solvente é recuperado sob pressão reduzida e oextrato líquido resultante é secado para obter creme deextrato de Shinyleaf Yellowhorn. 1 kg do creme de extratoé pesado e adicionado a 8 1 da solução de etanol a 75%. Aextração é executada 2 vezes, cada uma durando 2 horas.
Os extratos líquidos são filtrados e combinados, e osolvente é recuperado a 700C sob pressão reduzida até quenão haja odor de álcoois. 0 extrato resultante édissolvido em 1 1 de água e então filtrado para obter oExtrato Líquido 1. 0 Extrato Líquido I é adicionalmenteextraído com 2 1 de n-butanol, a extração executada 2vezes, cada uma durando 4 horas. Os extratos líquidos sãofiltrados e combinados e então o solvente é recuperado a65 0C sob pressão reduzida, até que não haja odor deálcoois. 0 extrato resultante é dissolvido com 0,7 1 deágua, então filtrado para obter Extrato Líquido II. Parao propósito de análise, uma porção de Extrato Líquido IIé evaporada até a secura para obter um extrato bruto deShinyleaf Yellowhorn.
Exemplo IX:
5 kg de pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn são pesados eadicionados a 10 kg de n-hexano para extração. 0 processode extração é executado 3 vezes, cada uma durando 6horas. 0 solvente é recuperado sob pressão reduzida e oextrato líquido resultante é secado para obter creme deextrato de Shinyleaf Yellowhorn. 1 kg do creme de extratoé pesado e adicionado a 4 1 da solução de metanol a 85%para executar extração por 4 horas. Os extratos líquidossão filtrados e combinados, e o solvente é recuperado a67 °C sob pressão reduzida, até que não haja odor deálcoois. 0 extrato resultante é dissolvido em 2 1 de águae então filtrado para obter o Extrato Líquido I. 0
Extrato Líquido I é adicionalmente extraído com 1 1 deisopropanol, a extração executada 3 vezes, cada umadurando 2-4 horas. Os extratos líquidos são filtrados ecombinados, e então o solvente é recuperado a 600C sobpressão reduzida, até que não haja odor de álcoois. 0extrato resultante é dissolvido com 1 1 de água, entãofiltrado para obter Extrato Líquido II. Para o propósitode análise, uma porção de Extrato Líquido II é evaporadaaté a secura para obter um extrato bruto de ShinyleafYellowhorn.
Exemplo Comparativo I:
5 kg de pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn são pesados eadicionados a 10 kg de água para extração. 0 processo deextração é executado 4 vezes, cada uma durando 5 horas. 0solvente é recuperado sob pressão reduzida e o extratolíquido resultante é secado para obter creme de extratode Shinyleaf Yellowhorn. 1 kg do creme de extrato épesado e adicionado a 6 1 da solução de metanol a 70%. 0processo de extração é executado 2 vezes, cada umadurando 2 horas. Os extratos líquidos são filtrados ecombinados, e o solvente é recuperado a 60-700C sobpressão reduzida, até que não haja odor de álcoois. 0extrato resultante é dissolvido em 2 1 de água e entãofiltrado para obter o Extrato Líquido I. 0 ExtratoLíquido I é adicionalmente extraído com 1 1 de n-butanol,a extração executada 3 vezes, cada uma durando 2-4 horas.Os extratos líquidos são filtrados e combinados e então osolvente é recuperado a 65°C sob pressão reduzida, atéque não haja odor de álcoois. 0 extrato resultante édissolvido com 1 1 de água, então filtrado para obter oExtrato Líquido II. Para o propósito de análise, umaporção de Extrato Líquido II é evaporada até a securapara obter um extrato bruto de Shinyleaf Yellowhorn.
Exemplo Comparativo II:
5 kg de pó de torta de Shinyleaf Yellowhorn são pesados eadicionados a 10 kg de metanol para extração. 0 processode extração é executado 4 vezes, cada uma durando 5horas. 0 solvente é recuperado sob pressão reduzida e oextrato líquido resultante é secado para obter creme deextrato de Shinyleaf Yellowhorn. 1 kg do creme de extratoé pesado e adicionado a 6 1 de solução de n-butanol. 0processo de extração é executado 2 vezes, cada umadurando 2 horas. Os extratos líquidos são filtrados ecombinados e o solvente é recuperado a 60-700C sobpressão reduzida, até que não haja odor de álcoois. 0extrato resultante é dissolvido em 2 1 de água e entãofiltrado para obter o Extrato Líquido I. 0 ExtratoLíquido I é adicionalmente extraído com 1 1 de água, aextração é executada 3 vezes, cada uma durando 2-4 horas.Os extratos líquidos são filtrados e combinados, e entãoo solvente é recuperado a 650C sob pressão reduzida. 0extrato resultante é dissolvido com 1 1 de água, entãofiltrado para obter o Extrato Líquido II. Para opropósito de análise, uma porção de Extrato Líquido II éevaporada até a secura para obter um extrato bruto deShinyleaf Yellowhorn.
Exemplo de refinamento I:
O Extrato Líquido II obtido a partir do Exemplo VI écarregado na coluna de resina microporosa de estirenoD201 e adsorvido por 20 min. A coluna é lavada com 1500ml de água a uma taxa de fluxo de 3,0 ml/min e entãoeluída com 1500 ml de solução de metanol ou etanol a 35%como o agente eluente em uma taxa de fluxo de 1,5 ml/min.Um eluato de álcool a 20% é coletado e o solvente érecuperado sob pressão reduzida a 68 0C até que não hajaodor de álcoois. 0 extrato resultante é concentrado esecado para obter o extrato refinado de ShinyleafYellowhorn.
Exemplo de refinamento II:
0 Extrato Líquido II obtido do Exemplo VII é carregado nacoluna de resina microporosa de estireno AB8 e adsorvidopor 3 0 min. A coluna é lavada com 13 00 ml de água a umataxa de fluxo de 4,0 ml/min e então eluída com 1000 ml desolução de metanol ou etanol a 80% como o agente eluentea uma taxa de fluxo de 2 ml/min. Um eluato de álcool a30% é coletado e o solvente é recuperado sob pressãoreduzida a 65 0C até que não haja odor de álcoois. 0extrato resultante é concentrado e secado para obter oextrato refinado de Shinyleaf Yellowhorn.
Exemplo de refinamento III:
0 Extrato Líquido II obtido do Exemplo VIII é carregadoem coluna de resina microporosa de estireno HP2 0 eadsorvido por 35 min. A coluna é lavada com 900 ml deágua a uma taxa de fluxo de 1,0 ml/min e então eluída com3 000 ml de solução de metanol ou etanol a 60% como oagente eluente a uma taxa de fluxo de 1 ml/min. Um eluatode álcool a 25% é coletado e o solvente é recuperado sobpressão reduzida a 600C até que não haja odor de álcoois.O extrato resultante é concentrado e secado para obter oextrato refinado de Shinyleaf Yellowhorn.
Exemplo de refinamento IV:
0 Extrato Líquido II obtido do Exemplo IX é carregado nacoluna de resina microporosa de estireno DlOl e adsorvidopor 4 0 min. A coluna é lavada com 600 ml de água a umataxa de fluxo de 2,0 ml/min e então eluída com 2000 ml desolução de metanol ou etanol a 40% como o agente eluentea uma taxa de fluxo de 0,5 ml/min. Um eluato de álcool a22% é coletado e o solvente é recuperado sob pressãoreduzida a 60 0C até que não haja odor de álcoois. 0extrato resultante é concentrado e secado para obter oextrato refinado de Shinyleaf Yellowhorn.
Exemplo de análise: Determinação do teor de saponina B deShinyleaf Yellowhorn
Determinar o teor de saponina B por HPLC.
Preparação de amostra de controle: creme de extrato deShinyleaf Yellowhorn é extraído com metanol ou etanol a55-85%, e o extrato líquido resultante é então carregadona coluna de resina microporosa de estireno paraabsorção. Eluído com solução de etanol a 20-80% comoagente eluente. Um eluato de álcool a 50-70% é coletado ecarregado na coluna de sílica. Eluído comclorofórmio/metanol como o agente eluente. Uma 45:55(V/V, clorofórmio/metanol) do eluato é coletada ecromatografada com um cromatógrafo de líquido preparativousando metanol/água (V/V de 75/25) como a fase móvel. 0eluato resultante é concentrado e secado para obter aamostra de controle de saponina B. Como determinado pelodetector de luz evaporativa para cromatografia líquida, apureza da amostra de controle de saponina B é maior que97% .
Condições de detecção cromatográfica e testes deadaptabil idade do sistema: ODS usado como o agente decarga, e a metanol-água-ácido fosfórico (com V/V/V de75/25/0/01) usada como a fase móvel, o comprimento deonda de detecção é 215 nm; e o número de placas teóricas(N.T.P.) deve ser não menor que 3000 calculado de acordocom o pico de saponina B de Shinyleaf Yellowhorn.Preparação da solução de amostra de controle: Algumasamostras de controle de saponina B são precisamentepesadas e misturadas na fase móvel para preparar asolução de 0,04 mg/ml.
Preparação da solução de amostra de teste: 4 g de extratode Shinyleaf Yellowhorn são pesados e extraídos ultra-sônicamente com etanol a 70%. Uma porção de 10 ml éevaporada até a secura, então dissolvida em água ecarregada na coluna de resina; de acordo com o teste de'cromatografia de coluna', um eluato de etanol a 70% écoletado e então filtrado com uma membrana-filtro de 0,45μτη para obter a solução de amostra de teste.
Método de determinação: 10 μl de cada uma de a amostra decontrole e a solução de amostra de teste são extraídos edeterminada a área pico para o cálculo do teor desaponina B.
Comparação de teores de saponina B nos extratospreparados por vários métodos de extração
O teor de saponina B em extrato de Shinyleaf Yellowhornobtido a partir de cada exemplo é determinado com ométodo acima, e então os teores de saponinas totais sãoextrapolados assumindo que a saponina B represente 3 0%das saponinas totais. Os resultados são como seguem:
Tabela 1: Teores de saponina B e saponinas totais emextratos de Shinyleaf Yellowhorn
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Exemplo Experimental 1: efeito de extrato de ShinyleafYellowhorn na freqüência de urinação de camundongo cheiode água
As cepas de animais experimentais usadas aqui são oscamundongos SPF KM e ratos Wistar. Cada rato oucamundongo recebe administração de fármaco poralimentação por sonda esofágica. Extrato de ShinyleafYellowhorn é o extrato refinado do Exemplo de RefinamentoIV, na forma de cápsulas. O fármaco de controle éimipramina, que tem uma forte ação antidepressiva e umafraca ação similar à atropina, e é freqüentemente usadopara o tratamento de depressão e enurese infantil. Ométodo experimental é calcular a freqüência de urinaçãode camundongo baseado na reação colorifica ocorrendoquando iodeto de potássio seco e amido são misturados coma urina.
Tabela 2 . Efeitos de Extrato de Shinyleaf Yellowhorn nafreqüência de urinação de camundongo carregado com água
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*: P<0,05 comparado com o grupo de controle
Os resultados experimentais mostram que a administraçãode uma certa dose de extrato de Shinyleaf Yellowhornlevará à diminuição na freqüência de urinação docamundongo cheio de água dentro de um certo período detempo.
Exemplo Experimental II: Efeitos de extrato de ShinyleafYellowhorn e imipramina em músculo liso excisado debexiga de ratos
A cepa de animal experimental usada aqui são os ratos SPFWistar. O processo de experimento é como segue: a bexigado rato é excisada cirurgicamente para preparar as tirasde jnúsculo liso; colocar o músculo liso na solução denutriente termostática, e então adicionar extrato deShinyleaf Yellowhorn (o extrato refinado do Exemplo deRefinamento IV, na forma de cápsulas) e a imipraminarespectivamente, sob as condições de suprimento deoxigênio, para observar as mudanças no músculo liso.Critério para graduação: depois da calibração por umtransdutor, uma queda de 0,5 mm da linha base indica orelaxamento completo do músculo liso, uma linha baseinalterada indica a não resposta do músculo liso,enquanto uma subida da linha base mostra a contração domúsculo liso.
Tabela 3. Concentrações de soluções à medida que omúsculo liso mostra relaxamento completo
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O resultado experimental mostra que extrato de ShinyleafYellowhorn pode atuar diretamente no músculo liso debexiga de ratos, fazendo-o relaxar.
Exemplo Experimental III: a ação antagonística de extratode Shinyleaf Yellowhorn em contração induzida por Ach domúsculo liso excisado da bexiga de ratos
O método experimental é o mesmo que aquele descrito noExemplo Experimental II.
Tabela 4: EC50 Determinação da ação de extrato deShinyleaf Yellowhorn e/ ou Ach na concentração do músculoliso excisado de bexiga do rato
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Os resultados experimentais mostram que extrato deShinyleaf Yellowhorn (o extrato refinado do Exemplo deRefinamento IV, produzido na forma de cápsulas) tem aação antagonística na contração induzida por Ach domúsculo liso excisado de bexiga do rato, tornando omúsculo liso contraído completamente relaxado.Exemplo Experimental IV: Efeito de extrato de ShinyleafYellowhorn na bioeletricidade do eletrodo extracelular doesfíncter externo da bexiga do coelho
Método experimental: implantar cirurgicamente eletrodoresidente e registrar as mudanças do esfíncter externo dabexiga do coelho com um gravador fisiológico. Modo deadministração: administração por sonda esofágica. Ofármaco adrenomimético Midodrina é um agonistaadrenoceptor αχ seletivo, comumente usado para tratamentode incontinência por estresse clinicamente.Tabela 5. Efeitos de extrato de Shinyleaf Yellowhorn noesfíncter externo de bexiga do coelho (X±DP)
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*: P<0,05, comparado com o grupo de controle**: P<0,01, comparado com o grupo de controleOs resultados experimentais mostram que tanto extrato deShinyleaf Yellowhorn (o extrato refinado do Exemplo deRefinamento IV, na forma de cápsulas) quanto a Midodrinapodem elevar significativamente a freqüência e amplitudede onda da bioeletricidade do eletrodo extracelular doesfíncter externo da bexiga do coelho, provendo assim seuefeito para significativamente intensificar aexcitabilidade do esfíncter da bexiga.
Exemplo Experimental V: Efeito de extrato de ShinyleafYellowhorn nas horas de sono do camundongo
Estabelecer o modelo animal de sono do camundongo por umainjeção intraperitoneal de pentobarbital. Administrarfármaco por administração por sonda esofágica uma horaantes da injeção, de modo a observar o tempo derecuperação para o reflexo de normalização do camundongo.Modo de administração: administração por sonda esofágica.A telucidona (meclofenoxato ou centrofenoxina) tem umaação excitante no nervo central e é comumente usada para15 o tratamento clínico de perturbação inconscientetraumática e enurese infantil.
Tabela 6. Efeito de extrato de Shinyleaf Yellowhorn nashoras de sono de camundongo (X±DP)
<table>table see original document page 25</column></row><table>
*: P<0,05, comparado com o grupo de controle de sono**: P<0,01, comparado com o grupo de controle de sono
Os resultados experimentais mostram que extrato deShinyleaf Yellowhorn (o extrato refinado do Exemplo deRefinamento IV, na forma de cápsulas) pode encurtarsignificativamente as horas de sono prolongadas pelopentobarbital de sódio em camundongo, indicando que elepode intensificar significativamente a excitabilidade donervo central.
Exemplo Experimental VI: Efeitos de extrato de ShinyleafYellowhorn em deterioração da memória
Estabelecer o modelo animal de deterioração da memóriaconforme o método divulgado em "Memory Impairment AnimalModels" [Modelos animais de deterioração de memória](Pharmacological Experimental Methodology, TerceiraEdição, P829). Anisodina é um fármaco anticolinérgico,com toxicidade menor do que aquela da atropina.Modo de administração: administração por sonda esofágica.O fármaco colinomimético Donepezil (Aricept) é umnootrópico do metabolismo cerebral e é um inibidorreversível específico de acetilcolinesterase. O fármacopode retardar a decomposição de acetilcolina na aberturasináptica, reforçando assim o teor de acetilcolina, e écomumente usado para tratamento clínico da demência senilde Alzheimer.
Tabela 7. Efeito melhorador de extrato de ShinyleafYellowhorn na deterioração induzida por anisodina damemória do camundongo
<table>table see original document page 26</column></row><table>
*: P<0,05, comparado com o grupo controle modelo;
**: P<0,01, comparado com o grupo controle modelo
Os resultados experimentais mostram que extrato deShinyleaf Yellowhorn (o extrato refinado do Exemplo deRefinamento IV, na forma de cápsulas) pode prolongarsignificativamente o tempo evitando eletricidade emcamundongo com deterioração de memória, e reduzir onúmero de erros, indicando que o extrato de ShinyleafYellowhorn pode melhorar significativamente adeterioração da memória.
Exemplo Experimental VII: Efeito de extrato de ShinyleafYellowhorn na anulação de reflexo condicionado de modelode rato com demência com neurônio colinérgico destruído egânglia basal de Meynert
0 modelo animal de demência senil é estabelecido deacordo com o método divulgado em "ExperimentalAlzheimer's Disease Animal Model with DestructedCholinergic Neuron" [Modelo animal de doença de Alzheimerexperimental com neurônio colinérgico destruído] ,Terceira Edição, P848). O ácido caínico é um agonistareceptor para o glutamato neurotransmissor excitantecentral, que foi amplamente usado como um fármaco deferramenta para estabelecer o modelo de neurotoxicidadepela comunidade internacional.
Modo de administração: administração por sonda esofágica.A Piracetama-NEGPF [piracetama, topiramato de acetamida,anel de amido pirrol (cetona)] é um nootrópico dometabolismo do cérebro que pode proteger e repararcélulas nervosas do crânio, promover a transformação deADP em ATP no cérebro e a síntese de acetilcolina eprevenir contra o dano das funções do cérebro provocadaspelos fatores físicos e químicos, e é usada em clínicapara o tratamento de desordem de funcionamento do cérebrodevido ao envelhecimento, acidente vascular cerebral,ferimento traumático do cérebro, e envenenamento por CO.<table>table see original document page 28</column></row><table>Os resultados experimentais mostram que extrato deShinyleaf Yellowhorn (o extrato refinado do Exemplo deRefinamento IV, na forma de cápsulas) pode reforçarsignificativamente a taxa positiva de resposta deanulação no modelo animal com demência e encurtar alatência da resposta de anulação, o que indica que elepode melhorar as funções do cérebro em modelo animal comdemência.
Exemplo Experimental VIII: Relatório da tentativa clínicade tratamento de demência senil com extrato de ShinyleafYellowhorn
Fontes de casos: Um total de 3 0 pacientes externos,diagnosticados com demência senil, foram selecionadosrandomicamente para análise. Os 30 sujeitos incluíam 30machos (76,66%) e sete fêmeas (23,33%). Entre elesestavam 6 casos com idades de 68 a 70 anos, 17 casos comidade de 7 0 a 80 e sete com idade de 80 a 86, com umaidade média de 77,5.
Os critérios de diagnóstico para demência senil, emitidopela Associação Médica da China em 1989, foram usadospara o diagnóstico. 0 extrato de Shinyleaf Yellowhorn éobtido a partir do Exemplo de Refinamento III e na formade comprimidos. A dose é 0,2 grama por vez (três vezes aodia) . Após a administração sucessiva por três meses, oefeito terapêutico é avaliado.
Critérios para o efeito terapêutico: os critérios para oefeito terapêutico como revisados na Conferência Nacionalsobre Demência Senil realizada pela SociedadeGerontológica e a Sociedade Médica Interna da AssociaçãoNacional de Medicinas Chinesas Tradicionais em maio de1990 foram usados para o julgamento do efeito terapêuticodo tratamento.
Cura: Os sintomas subjetivos desapareceram completamente;a consciência é clara; a orientação é perfeita; o sujeitopode responder questões corretamente e a resposta ésensível; o sujeito tem a capacidade de cuidar de si, e écapaz de participar em atividades sociais;Eficácia notada: Os sintomas principais desapareceram; aconsciência é clara; a orientação é perfeita; o sujeitopode responder questões substancialmente corretamente e aresposta é razoavelmente sensível; o sujeito tem acapacidade de cuidar de si, e é capaz de participar ematividades sociais normais;
Eficácia: Os sintomas psiquiátricos principais diminuíramou desapareceram parcialmente; o sujeito tem a capacidadede cuidar de si; o sujeito pode responder a questõessubstancialmente corretamente mas a resposta é retardada;ainda existem algumas perturbações intelectuais e depersonalidade;
Ineficácia: Os sintomas psiquiátricos principais nãomostraram sinais de melhoria ou a condição patogênicaainda está piorando; o sujeito é incapaz de cuidar de si,não pode responder questões corretamente, e a consciênciaé completamente retardada.
Análise de resultados de eficácia: Após a administraçãosucessiva por três meses, o efeito terapêutico éavaliado. Do total de 30 sujeitos, nove (30%) mostrarameficácia notável, e 19 (63%) mostraram alguma eficácia,enquanto dois (7%) não mostraram sinal de eficácia; ataxa de eficácia total é 93%.
Exemplo Experimental IX: Tentativa clínica de tratamentode retardamento pediátrico com extrato de ShinyleafYellowhorn
Fontes de casos: Um total de 3 0 pacientes externos,diagnosticados a terem retardamento mental pediátrico,foram selecionados randomicamente para análise. Os 3 0sujeitos incluíram 18 machos (60%) e 12 fêmeas (40%).Entre eles estavam 16 casos com idade de 5-8, e 14 comidade de 8-13, com uma idade média de 8,1. A graduação dacondição do paciente é como segue: 3 com condiçõesgraves, 14 médias e 13 suaves, respectivamente.Tabela 9: Distribuição de QI em grupos de idadesdiferentes antes do tratamento<table>table see original document page 31</column></row><table>
O padrão de diagnóstico: De acordo com a Escala deInteligência de Crianças Jovens China-Wechsler (CWYCSI) ,se o placar de QI é menor que 70, o sujeito foidiagnosticado a ter um retardamento mental, o qual éadicionalmente dividido em três graüs: grave (com umplacar de QI de 20-34), médio (35-49) e leve (50-70).O extrato de Shinyleaf Yellowhorn é obtido a partir doExemplo de Refinamento III e na forma de comprimidos. Adose é 0,1 grama cada vez (três vezes ao dia) . Após aadministração sucessiva por três meses, o QI édeterminado.
Análise dos resultados de eficácia: Após a administraçãosucessiva por três meses, o QI é determinado. 11 do totalde 30 sujeitos mostraram efeito notável, representando36,66%, e 2 (6,67%) mostraram efeito, enquanto 17 nãomostraram efeito, representando 56,55%. A taxa efetiva é43,33%.
Tabela 10. Distribuição de QI em grupos de idadesdiferentes após tratamento
<table>table see original document page 31</column></row><table>
Todos os sujeitos não mostraram reação adversa durante otratamento. Portanto, é aparente que o extrato deShinyleaf Yellowhorn divulgado na presente invenção temefeito terapêutico no tratamento de retardamento mentalpediátrico, e é seguro e confiável.
Claims (9)
1. Método para preparar extrato de Shinyleaf Yellowhorn,caracterizado pelo fato de compreender as seguintesetapas:A. Matéria-prima de Shinyleaf Yellowhorn ser seca edesoleada (preferivelmente por esmagamento com uma prensade óleo) para preparar o pó de torta de ShinyleafYellowhorn, o pó de torta é extraído com Extrator A ouusando método de extração com CO2 supercrítico, o extratoresultante é secado para obter creme de extrato deShinyleaf Yellowhorn, sendo que o Extrator A éselecionado de n-hexano, éter de petróleo, clorofórmio edietil éter, com n-hexano preferido;B. Creme de extrato de Shinyleaf Yellowhorn seradicionalmente extraído com Extrator B com umaconcentração de 50-90%, preferivelmente 55-85%, ou maispreferivelmente 65-80% em uma razão de volume/peso de2-9:1 (preferivelmente 4-8:1), o processo de extração serexecutado 1-2 vezes, cada uma durando 2-4 horas, com oextrato resultante filtrado e combinado, e entãodissolvido em água e filtrado novamente para obterExtrato Líquido I, sendo que o Extrator B é metanol ouetanol;C. 0 Extrato Líquido I ser adicionalmente extraído comExtrator C, com o extrato resultante filtrado ecombinado, e então dissolvido na água e filtradonovamente para obter Extrato Líquido II, sendo que oExtrator C é selecionado de n-butanol, n-propanol,isopropanol, isobutanol, e pentanol, com n-butanol, n-propanol, ou isopropanol preferidos;D. Extrato Líquido II ser carregado em uma coluna deresina microporosa de estireno para absorção. Entãoeluído usando a solução de metanol ou etanol como oeluente, o eluato ser coletado, concentrado e secado paraobter o extrato refinado de Shinyleaf Yellowhorn.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de na etapa A, quando extraído com Extrator A,ser preferido adicionar Extrator A ao pó de torta em umarazão de peso/peso de 1-5:1 (preferivelmente 2-3:1), eexecutar o processo de extração 2-6 vezes,preferivelmente 3-5 vezes, então o solvente serrecuperado sob pressão reduzida e o extrato resultanteser secado para obter creme de extrato de ShinyleafYellowhorn.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de na etapa A, quando extraído pelo método deextração com CO2 supercrítico, o pó de torta ser colocadono CO2 supercrítico para a extração, os parâmetrostécnicos para a extração com CO2 supercrítico serem comosegue: a pressão de extração ser 10-50 MPa(preferivelmente 2 0-3 0 MPa) , a temperatura de extraçãoser 20-600C (preferivelmente 40-50°C), o número de vezesde extração ser 2-5, o agente de arraste ser etanol comuma fração em volume de 60-95% e a quantidade de agentede arraste usada ser 1-6% (preferivelmente 2-4%); oextrato resultante ser secado para obter creme de extratode Shinyleaf Yellowhorn.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de na etapa B, os extratos líquidos resultantesserem filtrados e combinados, e então o solvente serrecuperado sob pressão reduzida preferivelmente a-60~70°C, até que não haja odor de álcoois; o extratoresultante ser dissolvido em 0,5-3 volumes,preferivelmente 1-2 volumes de água e então filtrado paraobter Extrato Líquido I.
5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de na etapa C, para extração adicional deExtrato Líquido I com Extrator C, ser preferido usar-0,5-3 volumes, preferivelmente 1-2 volumes de Extrator C,e extrair 1-3 vezes, cada uma por 2-4 horas; então oextrato resultante ser filtrado e combinado, e o solventeser recuperado sob pressão reduzida, preferivelmente a-60~70°C, até que não haja odor de álcoois; o extratoresultante ser dissolvido em 0,2-2 volumes,preferivelmente 0,5-1 volume de água, e filtrado paraobter Extrato Líquido II.
6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de na etapa D, quando Extrato Líquido II écarregado na coluna de resina macroporosa de estirenopara absorção, ser preferido executar a absorção por-10-60 minutos (preferivelmente 20-40 minutos) , e então acoluna ser lavada com 600-1500 ml de água em uma taxa defluxo preferida de 1,0-4,0 ml/min, então eluído usando-800-3000 ml da solução de metanol ou etanol com umaconcentração de 30-80%, preferivelmente 40-70%, ou maispreferivelmente 60-70% como eluente, em uma taxa de fluxopreferida de 0,5 a 2,0 ml/min; o eluato de álcool a-20-30% ser coletado e o solvente ser recuperado sobpressão reduzida, preferivelmente a 60-70°C, até que nãohaja odor de álcoois; a solução resultante serconcentrada e secada para obter o extrato refinado deShinyleaf Yellowhorn.
7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizadopelo fato de na etapa D, a coluna de resina macroporosoade estireno a ser usada ser polar, ou polar fraca, ou nãopolar.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações-1-7, caracterizado pelo fato de o método de extração serextração por refluxo térmico ou extração ultra-sônica.
9. Extrato de Shinyleaf Yellowhorn, caracterizado pelofato de ser preparado pelo método como identificado emqualquer uma das reivindicações 1-7, consistindoprincipalmente de saponinas totais de ShinyleafYellowhorn, as quais representam mais que 50%,preferivelmente mais que 60%, mais preferivelmente maisque 70%, e o mais pref erivelmente mais que 80% do pesototal do extrato de Shinyleaf Yellowhorn.
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