CN102151305A - 文冠果提取物、其提取方法及其用途 - Google Patents

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李滨生
刘沭军
姜生
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Abstract

本发明提供了文冠果提取物的制备,包括水提物的制备,醇提物的制备,粗提物的制备和混合提取物的制备。本发明还提供了文冠果提取物对大鼠多尿模型的作用、对膀胱平滑肌活动的作用和对小鼠中枢兴奋性的作用。本发明的文冠果提取物能够制成各种药物剂型,优选包括注射剂、片剂、胶囊、软胶囊、口服液或滴丸等。

Description

文冠果提取物、其提取方法及其用途
技术领域
本发明涉及一种药物提取物、提取方法和用途,特别涉及一种文冠果植物提取物、其提取方法及其用途。
背景技术
文冠果别名文官果、岩木瓜,为无患子科文冠果属多年生草本植物Xanthoceras sorbifolia Bunge的果实。文冠果为多年生植物,原产于我国北方,现多栽培。文冠果主要用于祛风湿性关节炎、风湿内热、皮肤风湿等症的治疗,1977年收载于中国药典。
近几年的研究发现文冠果及其醇提取物可以改善学习记忆功能,治疗智力低下及老年痴呆症。《中国民族医药杂志》1997年(第3卷)第1期,报道了直接用文冠果(干品)治疗遗尿症120例临床观察,CN1092991A报道了文冠果的醇提取物用于提高脑功能的用途及其制备方法。但是从文冠果中提取文冠果皂苷难度较大,现有技术的文冠果提取物中总皂苷含量通常为18~28%,其中文冠果果壳中提取的文冠果总皂苷含量可达到15-25%(参见CN1350001,发明名称为“可提取包括文冠果总皂苷、粗脂肪、粗蛋白、糖的果壳”)。目前计算文冠果总皂苷含量的方法不准确,这直接影响到药物的用量、药物的质量控制和药物的疗效等问题。
但是关于文冠果的其他提取方法,尤其是水提取方法所得的水提取物的研究还没有报道,也未检索到相关的文献资料,本发明文冠果水提取物作为植物药物制剂补充这一空白,能够达到治疗效果。
同时现有文献中从未公开文冠果提取物对实验动物膀胱平滑肌舒张作用。
发明内容
本发明目的在于提供文冠果提取物及其提取方法,本发明第二个目的在于提供所述文冠果提取物的用途。本发明目的是通过如下技术方案实现的:
一种文冠果提取物,由如下方法提取而成:
水提法:
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加4~20倍重量/体积水,在50-100℃下提取2-4次,每次1~8小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩干燥,即得文冠果水提取物。
上述水提取物还可以继续通过离心后,再过层析柱或大孔树脂,制得文冠果水精致提取物。
醇提法:
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加2~12倍重量/体积醇提取1~4次,在30-80℃,每次约1~6小时,合并滤过,收集醇提取液,浓缩干燥,即得文冠果醇提取物。
混合提取法A:
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,用浓度为30%~95%的醇溶液2~12倍重量/体积提取1~4次,在30-80℃每次约1~6小时;将醇提取液过滤,合并,减压回收醇至无醇味,得提取液A;将沉淀物(滤渣)加水4~20倍重量/体积提取1~4次,每次约1~4小时,合并滤过,收集提取液B;将提取液A、B混合,浓缩干燥,即得文冠果提取物。
混合提取法B:
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加水4~20倍重量/体积提取1~4次,每次约1~6小时,合并滤过,收集提取液A,将沉淀物(滤渣)加浓度为30%~95%的醇溶液2~12倍重量/体积提取1~4次,在30-80℃每次约1~6小时;将醇提取液过滤,合并,减压回收醇至无醇味,得提取液B;将提取液A、B混合,浓缩干燥,即得文冠果提取物。
粗提法A:
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加入为饼粉重量2~8倍重量/体积的正己烷、石油醚、乙醚、氯仿或醇溶液提取1~6次,从残渣中回收溶剂至尽,残渣干燥粉碎,即得文冠果粗提取物。
粗提法B:
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,饼粉 加入超临界CO2提取,得文冠果子仁霜。超临界CO2提取的技术参数如下:提取压力为10-50MPa,提取温度为20-60℃,提取次数为2-5次,以体积分数为60-95%的乙醇作为携带剂,携带剂用量1-6%。
精提法:
a、取文冠果子仁霜,加水4~20倍量,40~100℃浸提1~3次,每次0.5~4小时,合并浸液,浓缩至适量,滤过。
b、加正丁醇溶液提取,提取1~3倍量,提取1~3次,合并醇层,减压回收醇溶液。
c、提取物加入适量甲醇或乙醇溶解,加于已处理好的层析柱(硅胶、键和硅胶、中性氧化铝等填充)上,用甲醇,乙醇、氯仿,乙腈,氯仿-甲醇溶液梯度洗脱(8∶2~2∶8),用甲酸,乙酸,三氯乙酸,三氟乙酸,三乙胺,二乙胺等调节PH值,收集特定部份;或大孔树脂上,用水、甲醇-水(1∶9~9∶1)、乙醇-水(1∶9~9∶1)、乙醇或甲醇依次洗脱,收集特定部份。回收溶剂至干,粉碎,过筛,即得。
在a步骤滤过后,可用50%-90%乙醇溶液沉淀,后进行超滤处理,或不经过醇沉步骤进行超滤处理,所得物质即可药用,或经过醇沉步骤后所得物质即药用。
在b步骤中提取醇溶液优选水饱和正丁醇,提取后可用稀碱液(含有氨水)洗涤1~2次,在减压回收正丁醇。
在C步骤开始前可增加如下步骤:
提取物加水或适当浓度的乙醇适量使溶解,加于已处理好的离子交换树脂上,待交换平衡后,先用水洗脱,再用酸溶液或碱溶液洗脱,收集特定部份,回收溶剂至适量。
在c步骤结束后可进行超滤处理。
文冠果油的提取方法,该方法步骤如下:
A取文冠果原料进行干燥,提油(优选榨油机压榨),得文冠果油和饼粉;
B文冠果的饼粉过筛,向饼粉中加入为饼粉重量2~3倍重量的正己烷、乙 醚、氯仿或石油醚提取3~5次,从提取液中减压回收溶剂,干燥后得文冠果油和文冠果霜;
C合并A步骤文冠果油和B步骤文冠果油。
其中B步骤可以用超临界CO2提取替代;得文冠果油和提取物;
在用超临界CO2提取时,将饼粉加入超临界CO2提取,超临界CO2提取的技术参数如下:提取压力为20MPa、30MPa,提取温度为40℃、50℃,提取次数为2-5次。
D文冠果油水浴加热至80℃,加适量活性炭(或高岭土),充分搅拌,采用优选的精制加热温度和加热时间进行加热处理,趁热过滤;即得精制文冠果油。
本发明方法得到的植物提取物可以与药物上可接受的载体一起制成药物组合物,例如:片剂、胶囊、口服液、颗粒剂、散剂。注射剂或滴丸等。用本发明方法得到的植物提取物制备所需药物的各种剂型时,可以按照药学领域的常规生产方法制备。优选本发明的这类药物制剂可以被口服、肠胃外给药。优选制剂是口服给药的。
本发明药物组合物可以按任意口服可接受的剂型口服给药,包括但不限于胶囊剂、片剂、水性混悬剂或溶液剂。在口用片剂的情况下,常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂,例如硬脂酸镁。就按胶囊剂型口服给药而言,有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当口用需要水性混悬剂时,活性成分是与乳化和悬浮剂联用的。如果需要的话,还可以加入某些甜味剂、矫味剂或着色剂。
在优选的实施方式中,本发明的口服可接受剂型含有10%-90%(优选40%-80%)的文冠果提取物,本发明药物提取物的无菌可注射形式可以是水性或油性混悬剂。这些混悬剂可以按照本领域已知的技术、利用适合的分散或润湿剂和悬浮剂加以配制。无菌的可注射制剂还可以是在无毒的肠胃外可接 受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂,例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的载体和溶剂有水、林格氏溶液和等渗的氯化钠溶液。另外,无菌的不挥发油也经常被用作溶剂或悬浮介质。
如果必要的话,一旦患者的条件有所改善,可以给以本发明化合物、组合物或组合的维持剂量。随后,可以根据症状减少给药的剂量或频率或者剂量与频率至已改善的条件得以保留的水平,当症状已经减轻至所需水平,应当停止治疗。不过,一旦疾病症状有任何复发,患者可能需要在长期基础上接受间歇性治疗。
本发明各种提取方法制备药品或保健食品,还可包含其他用于治疗老年痴呆性或膀胱退化性尿失禁、尿频及儿童遗尿、小儿智力低下、脑老化、中老年痴呆症或帕金森综合症的活性剂或药物,或与之一起或顺序给药。
本发明水提物能够调节细胞组成或受体,加强细胞功能,包括生长和凋亡;调节细胞线粒体脱氢酶和其它酶的活力;,用以治疗遗尿或加强泌尿道功能;加强膀胱功能、尿道括约肌,或其相关的组成和受体;用以增强骨细胞功能、肺细胞功能,或促进大脑皮层和小脑的反应;用以防止个体睡眠过深;用以促进膀胱壁牵张感受器,向中枢神经传递集尿信号;用以促进神经系统;用以激发细胞活力,抵御疾病;,通过调节膀胱应力、紧张、老化、或反射亢进,(减缓或治疗)所导致的尿急和尿频;用以松驰膀胱组织由Ach引起的收缩;用以抑制乙酰胆碱酯酶;用以治疗遗尿、尿频、尿失禁;用以治疗和预防需要增加神经生长因子供给的疾病;用以刺激金属巯蛋白基因活化;用以诱导细胞增殖。
本发明的精制文冠果油已经完全达到口服用油的标准,基本达到注射用油的标准。精制文冠果油相对未精制文冠果油提高生物利用度30%,杂质减少。
还应当理解的是,任何特定患者的具体剂量和治疗制度将依赖于多种因素,包括所采用的具体提取物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、 给药时间、排泄速率、药物组合、主治医师的判断和所治疗的特定疾病的严重性。
附图说明
图1不同浓度水提物对膀胱平滑肌作用
图2不同浓度醇提物对膀胱平滑肌作用
图3文冠果水提物和醇提物对小鼠自主活动的影响,*P<0.05 vs空白.
图4文冠果水提物和醇提物对小鼠睡眠时间的影响,*P<0.05 vs空白
具体实施方式
下列实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实施例1:文冠果水提物对大鼠多尿模型的影响
实验动物:istar大鼠,200~220g,SPF级动物,购自中国医学科学院动物研究所,动物合格证号:SCXK(京)2005--0013。饲养于本所动物中心。酒石酸托特罗定片:南京美瑞制药有限公司,批号:20070801,规格:2mg/片;垂体后叶注射液:南京新百药业有限公司,批号:061202,规格:1ml:6U;水提取物、醇提取物
表1 各组大鼠不同时间段排尿量
Figure BSA00000427498700061
Figure BSA00000427498700071
注:n=10,###P<0.001 vs空白组;***P<0.001,*P<0.05 vs模型组
表2 各组大鼠不同时间段排泄次数
Figure BSA00000427498700072
注:n=10,###P<0.001 vs空白组;***P<0.001,**P<0.01 vs模型组
本次实验中给水负荷后2h内大鼠的排泄率及排尿次数较空白组明显增加, 表明大鼠多尿模型成功;水提物在300-800mg/kg及剂量范围内可明显推迟多尿模型大鼠的排尿量和排尿次数。
实施例2:文冠果醇提物对大鼠多尿模型的影响
本次实验中给水负荷后2h内大鼠的排泄率及排尿次数较空白组明显增加,表明大鼠多尿模型成功;通过表1,表2表明醇提物(400、800mg/kg)对多尿模型大鼠的排尿量也具有一定的延迟作用。
实施例3:水提物对动物离体膀胱平滑肌收缩活动的影响
实验药物:文冠果水提物和醇提物配成20mg/ml的初始浓度;阳性药:阿托品;实验动物:比格犬。
由试验结果可以看出文冠果水提物以及醇提物对于实验动物膀胱平滑肌肌条具有不同的作用。水提物具有舒张作用,参见图1。
实施例4:醇提物对动物离体膀胱平滑肌收缩活动的影响
由试验结果可以看出文冠果水提物以及醇提物对于实验动物膀胱平滑肌肌条具有不同的作用。.醇提物具有收缩作用,同时这种收缩作用可能与M受体的兴奋有关,参见图2。
实施例5:水提物和醇体物对小鼠中枢兴奋性的影响
实验动物:清洁级昆明小鼠,雌雄各半,体重18-22g。药品的配制:水提物及醇提物的小鼠用量分别为130、260、390、780mg/kg/d。用单蒸水溶解水提物及醇提物,灌胃给药前摇匀再行灌胃。阳性药选择有遗尿丁和具中枢兴奋作用的氨茶碱。睡眠觉醒实验中应用的戊巴比妥钠为生理盐水配制,给药剂量50mg/kg,参见图3,图4。
文冠果水提物260mg/kg明显增加小鼠自主活动。通过睡眠觉醒实验,发现 文冠果水提物和醇提物在高剂量(780mg/kg)具有镇静催眠作用。
具体制备方法如下
制备实施例1:水提法制备
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加10倍重量/体积水,在50-100℃下提取3次,每次4小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩干燥,即得文冠果水提取物。
文冠果水提取物还可以离心过大孔树脂柱得到文冠果水精提物。
制备实施例2:醇提法制备
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加5倍重量/体积醇提取2次,在30-80℃,每次约4小时,合并滤过,收集醇提取液,浓缩干燥,即得文冠果醇提取物。
制备实施例3:混合提取法A制备
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,用浓度为30%~95%的醇溶液6倍重量/体积提取2次,在30-80℃每次约3小时;将醇提取液过滤,合并,减压回收醇至无醇味,得提取液A;将沉淀物(滤渣)加水10倍重量/体积提取4次,每次约2小时,合并滤过,收集提取液B;将提取液A、B混合,浓缩干燥,即得文冠果提取物。
制备实施例4:混合提取法B制备
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加水13倍重量/体积提取3次,每次约2小时,合并滤过,收集提取液A,将沉淀物(滤渣)加浓度为60%的醇溶液6倍重量/体积提取2次,在30-80℃每次约3小时;将醇提取液过滤,合并,减压回收醇至无醇味,得提取液B;将提取液A、B混合,浓缩干燥,即得文冠果提取物。
制备实施例5:粗提法A制备
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加入为饼粉重量4倍重量/体积的正己烷、石油醚、乙醚、氯仿或醇溶液提取3次,从 残渣中回收溶剂至尽,残渣干燥粉碎,即得文冠果粗提取物。
制备实施例6:粗提法B制备
取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,饼粉加入超临界CO2提取,得文冠果子仁霜。超临界CO2提取的技术参数如下:提取压力为30MPa,提取温度为40℃,提取次数为3次,以体积分数为75%的乙醇作为携带剂,携带剂用量3%。
制备实施例7:精提法制备
a、取文冠果子仁霜,加水6倍量,60℃浸提2次,每次2小时,合并浸液,浓缩至适量,滤过。
b、加正丁醇溶液提取,提取2倍量,提取2次,合并醇层,减压回收醇溶液。
c、提取物加入适量甲醇或乙醇溶解,加于已处理好的层析柱(硅胶、键和硅胶、中性氧化铝等填充)上,用氯仿-甲醇溶液梯度洗脱(8∶2~2∶8),用乙酸调节PH值,收集特定部份;或大孔树脂上,用乙醇-水(1∶9~9∶1)洗脱,收集特定部份。回收溶剂至干,粉碎,过筛,即得。
在a步骤滤过后,可用60%乙醇溶液沉淀,后进行超滤处理,或不经过醇沉步骤进行超滤处理,所得物质即可药用,或经过醇沉步骤后所得物质即药用。
在b步骤中提取醇溶液优选水饱和正丁醇,提取后可用稀碱液(含有氨水)洗涤2次,在减压回收正丁醇。
在C步骤开始前可增加如下步骤:
提取物加水或适当浓度的乙醇适量使溶解,加于已处理好的离子交换树脂上,待交换平衡后,先用水洗脱,再用酸溶液或碱溶液洗脱,收集特定部份,回收溶剂至适量。
在c步骤结束后可进行超滤处理。

Claims (10)

1.一种文冠果水提取物,其特征是该水提取物由如下方法制备:取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加4~20倍重量/体积水在30-80℃下煎煮三次,每次1~8小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩干燥,即得文冠果水提取物。
2.一种文冠果醇提取物,其特征是该醇提取物由如下方法制备:取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加水4~12倍重量/体积提取1~2次,每次约1~6小时,合并滤过,收集醇提取液,浓缩干燥,即得文冠果醇提取物。
3.一种文冠果提取物,其特征是该提取物由如下方法制备:取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,用浓度为50%~90%的醇溶液4~12倍重量/体积提取1~2次,在30-80℃每次约1~6小时;将醇提取液过滤,合并,减压回收醇至无醇味,得提取液A;将沉淀物(滤渣)加水4~20倍重量/体积提取1~2次,每次约1~8小时,合并滤过,收集提取液B;将提取液A、B混合,浓缩干燥,即得文冠果提取物。
4.一种文冠果提取物,其特征是该提取物由如下方法制备:取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加水4~20倍重量/体积提取1~2次,每次约1~8小时,合并滤过,收集提取液A,将沉淀物(滤渣)加浓度为50%~90%的醇溶液2~12倍重量/体积提取1~2次,在30-80℃每次约2~4小时;将醇提取液过滤,合并,减压回收醇至无醇味,得提取液B;将提取液A、B混合,浓缩干燥,即得文冠果提取物。
5.一种文冠果提取物,其特征是该提取物由如下方法制备:取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,加入为饼粉重量1~5倍重量/体积的正己烷、石油醚、乙醚、氯仿或醇溶液提取2~6次,从提取液中减压回收溶剂,浓缩干燥,即得文冠果粗提取物。
6.一种文冠果提取物,其特征是该提取物由如下方法制备:取文冠果子仁进行干燥,除油(优选榨油机压榨),得文冠果的饼粉,饼粉加入超临界CO2提取,得文冠果粗提取物。超临界CO2提取的技术参数如下:提取压力为10-50MPa,提取温度为20-60℃,提取次数为2-5次,以体积分数为60-95%的乙醇作为携带剂,携带剂用量1-6%。
7.如权利要求1所述的文冠果水提取物制备治疗具有舒张膀胱平滑肌作用或膀胱过度活动症(简称OAB)型尿失禁的药物中的应用。
8.如权利要求2所述的文冠果醇提取物制备治疗具有收缩膀胱平滑肌作用或充盈型尿失禁的药物中的应用。
9.如权利要求2所述的文冠果醇提取物在制备治疗儿童遗尿、抑郁症或老年痴呆的药物中的应用。
10.文冠果油的提取方法,该方法步骤如下:
A取文冠果原料进行干燥,提油(优选榨油机压榨),得文冠果油和饼粉;
B文冠果的饼粉过筛,向饼粉中加入为饼粉重量2~3倍重量的正己烷、乙醚、氯仿或石油醚提取3~5次,从提取液中减压回收溶剂,干燥后得文冠果油和文冠果霜;
C合并A步骤文冠果油和B步骤文冠果油;
其中B步骤可以用超临界CO2提取替代;得文冠果油和提取物;
在用超临界CO2提取时,将饼粉加入超临界CO2提取,超临界CO2提取的技术参数如下:提取压力为20MPa、30MPa,提取温度为40℃、50℃,提取次数为2-5次;
D文冠果油水浴加热至80℃,加适量活性炭(或高岭土),充分搅拌,采用优选的精制加热温度和加热时间进行加热处理,趁热过滤;即得精制文冠果油。
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