CN1411466A

CN1411466A - 化合物(i),其提取方法及包含所述化合物的药物组合

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Publication number: CN1411466A
Application number: CN01803432A
Authority: CN
Inventors: 关永源; 范富林
Original assignee: Science And Technology Development Department Of Zhongshan Medical University; Taihe Biopharmaceutical Co ltd Guangdong
Current assignee: Science and Technology Development Centre of Zhongshan Medical College of Zhongs; Taihe Biologic Pharmaceutical Co., Ltd., Guangdong; Guizhou Xinbang Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2000-01-03
Filing date: 2001-01-03
Publication date: 2003-04-16
Anticipated expiration: 2021-01-03
Also published as: US6897298B2; WO2001049704A1; US20030148962A1; CN1176101C; CN1302811A; AU2499701A

Abstract

本发明涉及一种如右式所述的化合物(I)、其提取方法以及包含该化合物的药物组合物。所述提取方法包括：取人参属植物人参或三七的主根和/或须根，经工业酒精提取、正丁醇提取总皂甙、经硅胶柱色谱和反相柱色谱纯化，得化合物(I)。所述药物组合物可用于治疗急性缺血性脑血管疾病。

Description

化合物（1 )，其提取方法及包含所述化合物的药物组合物发明领域

本发明涉及一种化合物，特别是一种从人参或三七中提取的天然化合物，还涉及该化合物的提取方法及包含该化合物的治疗缺血性脑血管疾病的药物组合物。发明背景

急性缺血性脑血管病是严重危害人类健康的疾病，其发病率呈逐渐增加趋势。当脑缺血发生时，脑组织细胞很快地出现能量代谢障碍，从而导致神经末梢大量释放出以谷氨酸为主的兴奋性神经递质，然后激活 NMDA及非 NMDA受体，引起一系列导致脑损伤、. 脑梗死的病理变化。受体激活可促进大量 Ca 内流，而细胞内 Ca 超负荷是使脑细胞死亡的关键因素及共同的通路。当缺血的脑组织在恢复血流供应时，又可产生再灌注损伤。这种脑组织缺血性再灌注后产生的脑损伤是脑梗死形成的另一个主要途径，往往与 Ca²—内流增加、 Ca²⁺超负荷相关。细胞内 Ca²⁺ 超负荷，大量 Na—内流及氧自由基剧增又可导致神经细胞凋亡，而后者是缺血性脑细胞坏死的重要形式，是形成脑梗死的机理之一。

目前对急性缺血性脑血管病（急性缺血性脑卒中、急性脑梗死）仍未有理想的治疗药物。针对上述发病机理，最常用的治疗方法是在发病超确认本早期或早期使用溶栓药（如 tpA 等）或降纤药物（如蛇毒降纤酶、巴曲酶及 ancrode 等）。溶解血栓可使脑组织缺血区重新恢复血流供应。然而随着缺血区的血液重新供应，将不可避免地产生脑细胞缺血 /再灌注损伤。其临床疗效仍有待评估。此外，临床还采用脑保护药，阻断缺血后细胞坏死的不同机理，延长细胞的生存能力，也可用于病危患者的预防，促进后期神经元功能的恢复，以达到治疗目的。该领域是当今研究的热点。目前可用的脑保护药有： 1、 Ca²⁺通道拮抗药：此类药物主要是通过阻断电压依赖性 Ca²⁺通道，抑制细胞 Ca²一内流，减轻细胞内 Ca²⁺超负荷，达到治疗目的；临床应用的药物例如包括尼莫地平（mmodipme ) 及氟桂利嗪类。但急性缺血性脑血管病中导致脑组织损害的细胞内 Ca²⁺超负荷主要是与受体操纵的 Ca²⁺通道相关，故这类阻断电压依赖性 Ca²⁺拮抗药的治疗效果仍有待证实。 2、稳定细胞膜药物：胞磷胆碱，其疗效仍有待证实。至于其他脑保护药，如谷氨酸拮抗剂、 Na⁺通道拮抗剂、 Y—氨基丁酸增强剂等，在理论上有一定依据，但至今还未被临床研究证实其疗效。

人参、三七是中国名贵^？药，作为活血化瘀药方广泛应用于治疗与中医 "血瘀证"相关的疾病，如冠心病、偏头痛等，并取得良好的疗效。但对其中治疗急性缺血性脑血管病的有效成分的研究较少，更无从知道其治疗 "血瘀证" 的作用机理。

本发明的目的就是为了克服目前无治疗效果好、毒副作用小的急性缺血性脑血管病的治疗药物的缺点，提供一种治疗效果好但毒副作用小的治疗急性缺血性脑血管病的药物。

本发明的另一个目的就是提供一种从三七或人参中提取的化合物及其提取方法，该化合物具有抗脑缺血 /再灌注损伤、治疗急性缺血性脑血管病的作用。

本发明的再一个目的是提供包含上述化合物（I) 的治疗缺血性脑血管疾病的药物组合物。

根据本发明的另一个方面，其提供一种提取上述化合物（I) 的方法，其依次包括以下步骤：

(1) 取人参属植物人参或三七的主根和 /或须根并粉碎，以工业酒精冷提 1次，再热提 0〜3次，浓缩后加正丁醇提取得粗总皂甙；

(2) 粗总皂甙先经硅胶柱色谱用梯度洗脱液分离，然后浓缩所希望的部分，得到煎膏状浓缩液；

(3) 煎膏状浓缩液用适量甲醇溶解后，在反相柱上用梯度洗脱液分离及纯化，收集所需组分；收集液经回收甲醇，再静置 24h 以上，即析出白色沉淀；沉淀经干燥处理即得到高纯度单体。

根据本发明的再一个方面，其提供包含上述化合物（I) 的药物组合物。发明详细描述

本发明是如下实现的。

本发明的化合物 [以下称化合物（I) ]的化学名为： 20— (S) 一原人参二醇一 3— [0— β— D—吡喃葡萄糖（1—2)— β—D_吡喃葡萄糖]一 20 一 0— β— D—吡喃葡萄糖苷 (20- (S) -protopanaxadiol - 3 - [0 - β — D— glucopyranosyl (1—2) ― β— D— glucopyranosyl]— 20— 0— β— D — glucopyranoside), 其结构口上所示。

本发明的提取工艺步骤主要为：

1、取人参属植物人参或三七的主根和 /或须根并粉碎，以工业酒精（如含 80%〜90%乙醇浓度）冷提 1次，再热提 0〜3次，合并滤液，经回收乙醇后，加正丁醇提取得粗总皂甙。所述人参包括北美参。

2、粗总皂甙先经硅胶柱色谱用梯度洗脱液分离，如以氯仿（85%〜60 %) —甲醇（15%〜30%) —水（0%〜10%) 按不同比例配制洗脱液，进行梯度洗脱，以柱体积的 i/3〜l/5为 1 份收集洗脱液，以 TLC检测，收集 Rf值与对照相近似的组分，合并后，回收溶剂，得到煎膏状浓缩液。

3、煎膏状浓缩液用适量甲醇溶解后，于 C_S〜C₁₈反相柱用梯度洗脱液分离及纯化，共进行一至两次反相柱色谱，如采用甲醇（50%〜100% ) 一水（50%〜0% )不同比例的洗脱液进行梯度洗脱，以柱体积的 1/3〜1/5 为 1 份洗脱液，经 TLC检测，收集所需组分。在第一次反相柱色谱后，单体纯度可达 90%，第二次反相柱色谱后，单体纯度已达 95 %，最佳时可达 98 %以上的纯度。收集液经回收甲醇，再静置 24h 以上，即析出白色沉淀。倾去上层液后的沉淀于真空干燥处理，即得到所需的高纯度化合物（1)。

化合物（I ) 对大鼠局部性脑缺血 /再灌注损伤的治疗作用结果为：采用 SD 大鼠局部性脑缺血 /再灌注损伤模型观察化合物（I) 的治疗作用，试验结果表明，静脉注射 50 mg/kg、 10 mg/kg及 2 mg/kg剂量的化合物（1)，均能明显减少大脑中动脉栓塞 /再灌注引起的脑组织坏死区面积、减轻神经细胞坏变及神经纤维变性、减少氧自由基的生成、减轻脑组织水肿程度及脑电幅度下降程度、改善受试动物的行为障碍，其治疗作用呈剂量依赖性。主要药效学试验结果同时说明，化合物（I ) 的治疗作用优于阳性对照药物尼莫地平。

具体实施如下：实验动物

采用 longa法制备大脑中动脉栓塞 /再灌注损伤大鼠模型。静脉注射 25 %乌拉坦（0.4 ml/lOOg体重）麻醉动物，用加热灯保持鼠体温 37±0.5 °C (肛温）。将大鼠仰卧固定于方板上，颈部正中切口，通过显微外科技术分离左颈总动脉及其分叉，游离颈外动脉。电凝切断颈外动脉发出的枕动脉、甲状腺上动脉、咽外动脉，再向头端游离颈外动脉，用 5— 0丝线尽量靠远端结扎颈外动脉。用血管夹夹闭颈外动脉的起始部，在血管夹与结扎线之间，用 5— 0 丝线穿过颈外动脉打松结。靠近结扎剪断颈外动脉，把一根长 5 cm的头端成鼓锤状的 3— 0单丝尼龙线置入颈外动脉，扎紧颈外动脉上的丝线避免出血。去掉血管夹，将尼龙线缓慢推入颈内动脉，调整方向将尼龙线插进颅腔，感受到阻力时即达大脑前动脉。从颈内动脉起始部开始计算，尼龙线插入深度一般在 20〜21 mm时，大脑中动脉起始处被阻断，同时也阻断了来自前脑动脉、颈内动脉及后脑动脉的侧枝血流。然后将松结于颈外动脉残端的丝线再打三结结扎，缝合切口，把尼龙线引出皮肤切口处，以便拔出形成再灌注时使用。拔出尼龙线时，动作缓慢轻柔，感到阻力后即停止抽拔，此时己表明栓塞的尼龙线膨大的头端已经退至颈外动脉的残端内，再灌注己形成。试验分组

各组实验中，化合物（I ) 及对照药物均采用静脉注射方式给药，注射容量相同。

动物用随机抽样分组。

本实验规定栓塞缺血 1小时后形成再灌注，再灌注 5小时后观察规定指标。并设实验分组如下：给药剂量注射时间组别动物数量观察指标化合物（I ) 尼莫地平 1、柱塞 2、再灌注 mg/kg μ g/kg 后分钟后分钟

I 10 1、 2、 3 50 10 10 5

II 10 1、 2、 3 50 10 30 30

III 10 1、 2、 3 10 20 10 5

IV 10 1、 2、 3 2 40 10 5

V 10 4、 5 50 20 10 5

观察指标

1、脑梗塞范围测定：

开颅取全脑，去除嗅球、小脑及脑干，以 2.7 mm为间隔将大脑冠状切成厚度相等的 ό 个切片。从额端向枕端依次定为 1、 2、 3、 4、 5、 6，每个切片的额端为 Α面，枕端为 B面。将切片 2、 3、 4放入 1 %TTC (氯化三苯基四氮唑，使用时用蒸馏水溶解并避光保存）中，避光，在 37 水浴中染色 10分钟。正常组织内含脱氢酶与 TTC反应呈红色，梗塞组织因脱氢酶丢失不能与 TTC产生反应而呈白色。组织与 TTC反应呈现的白色显色程度反映了梗塞脑组织的变性坏死程度。脑组织梗塞范围通过全自动图象分析系统（型号： EPAS— C，德国 Kontror 公司）测定，组织变性坏死程度可通过该分析系统用灰度表示出来，程度越严重灰度越大。本实验采用切片 2、 3测定值的平均数作为每动物梗塞区范围的测定结果。 2、脑组织含水量测定：

参考 Gotoh法，快速取出鼠脑，把左右大脑半球用十万分之一电子自动天平分别称重，然后置 160Γ烤箱内烤干至恒重，分别称量大脑半球干重，按以下公式计算脑组织含水量：含水量（％) = [ (湿重一干重） /湿重] X 100%

3、病理检査：

经 TTC染色后的脑切片置于 10%福尔马林中固定，经脱水、浸蜡、包埋、切片等步骤后采用常规苏木素伊红（HE) 染色，显示神经细胞坏变；采用髓鞘染色显示神经纤维是否脱髓鞘及脱髓鞘程度。

4、脑电图描记：

将一根针电极置于额顶区，另一电极置于栓塞侧的鼠耳皮下作为参考电极，用日本光电公司 8导生理记录仪记录栓塞前后的皮层外脑电变化。

5、生化试验：

大鼠 38只，脑缺血 /再灌注损伤后随机分为对照组（等容量生理盐水），尼莫地平治疗组（40 w g/kg ) 及化合物（I) 治疗组（50 mg/kg)，于堵塞脑缺血后 10分钟及再灌注后 5分钟，分二次舌下 iv给药。缺血 1小时，再灌注 5 小时后按 Gotoh 方法，快速剥出大鼠脑，将左、右大脑半球分别称重，然后置于一 70°C冰箱内保存。将待测组织（约 0.3〜0.5 ) 用生理盐水洗净，然后用冷蒸馏水（4Ό ) 在玻璃匀浆器上制成 10%匀浆。在 0°C , 1500转 /分离心 15 分钟，取上清液进行超氧化物歧化酶（SOD) 活性及丙二醛（MDA) 含量测定。

( 1 ) SOD测定（邻苯三酚自氧化法）：取 15 ml试管，依次加入 pH 8.2 Tns— HCl缓冲液 4.5 ml、双蒸水 4.3 ml、样本匀浆液 0.1 ml、 7 mmol/L 邻苯三酚 0.1 ml (空白管加 10 mmol/L HCl 0.1 ml )。将空白管校零。用紫外分光光度计（UV 1601 PC，日本岛津公司），在波长 325 nm、狭缝 2 的条件下测定吸光度变化。然后按以下公式求出 SOD活性单位。组织匀浆 SO ( » / 脑组织） = (对照官一样官） Z对照官 _x i /脑组织重 (g)

( 2 ) MDA测定：按下表程序进行

摇匀加盖， 95°C水浴加热 60 min，冷却后， 3000 r/min离心 15 min。取上清液用分光光度计在 532 ran波长下测定吸光度值，然后在 MDA的标准曲线上求得 MDA含量。 6、参考 Longa方法，于再灌注后 5小时观察行为变化并进行评分。评分标准如下：无行为改变， 0 分；右前肢不能伸直， 1 分；偏向右侧但无主动打圈， 2分；右侧行走， 3分；原地右旋转， 4分；右偏瘫， 5分。实验结果

1、对梗塞面积的影响：

实验结果表明， 2〜50 mg/kg 化合物（I ) 能够减轻脑缺血 /再灌注所致的脑组织损伤，明显减小脑组织栓塞面积，减轻受损脑组织的坏死程度。其治疗作用呈剂量依赖性。尼莫地平治疗组表现出减小脑组织梗塞面积的倾向，但是只有在 40 w g/kg 高剂量组才与盐水组有统计学上的显著性差异（p<0.05 )，但总的治疗作用弱于化合物（I ) 的治疗组。

2、对脑电影响：

实验结果表明，盐水组大脑动脉栓塞 1小时，再灌注 5小时后脑电幅度明显减低。 50 mg/kg及 10 mg/kg剂量的化合物（I ) 能明显改善脑电的变化，脑电幅度的降低明显减小（p<0.01 )。 2 mg/kg 剂量组有改善脑电变化的倾向，但统计学上没显著性差异。尼莫地平在剂量为 40 g/kg 的剂量组时能表现出改善脑电变化的作用（p<0.05 )。

3、对神经细胞及神经纤维病理变化的影响：

实验结果表明，静脉注射 50 mg/kg、 10 mg/kg及 2 mg/kg化合物（I ) 均可减轻神经细胞的坏变数目及神经纤维变性的程度，其保护作用呈剂量依赖性并强于尼莫地平。

4、对行为改变的影响：

实验结果表明，生理盐水对照组行为评分为 3.3 ± 1.0; 尼莫地平组为 2.9± 1.2 ( P〉0.05，与生理盐水比较）。化合物（I) 治疗组为 1.9土 0.8 (P <0.01，与生理盐水组比较）。化合物（I) 治疗组能明显改善由脑组织损伤所致的严重行为障碍。尼莫地平治疗组与盐水组比较没有统计学上的显著性差异。

5、对 SOD活性及 MDA含量的影响：

实验结果表明生理盐水组的 SOD 活性明显降低，从正常对照组（假手术组）的 70.30土 24.7 u/g明显降至 46.7± 16.6 u/g (P<0.05 )。用化合物（I) 治疗组及尼莫地平治疗组的 SOD活性与正常对照组比较无统计学上的显著性差异（P〉0.05 盐水组的 MDA含量为 87.7±27.5 nmol/mg 组织重，与正常对照组（假手术组）（60.0± 14.8 nmol/mg组织重）相比，明显升高（P<0.01 )。化合物（I) 治疗组和尼莫地平治疗组可使 MDA含量降下近至正常组，分别为 65.8± 19及 67.0±21.8 nmol/mg组织重（与正常组比较 P〉0.05 )。

6、对脑组织含水量的影响：

实验结果表明，静脉注射化合物（I) 能明显减少因脑缺血 /再灌注引起的梗塞区脑组织含水量增加。而 20 g/kg尼莫地平虽有减少倾向，但与生理盐水组比较统计学上没有显著性差异。结论

实验结果表明，静脉注射 50 mgkg, 10 mg/kg及 2 mg/kg剂量的化合物（1 ) 均能明显减少大脑中动脉栓塞, /再灌注引起的脑组织坏死面积、减轻祌经细胞坏变及神经纤维变性、减轻脑组织水肿程度、减少氧自由基的生成及脑电幅度下降程度、改善受试动物的行为障碍，其治疗作用呈剂量依赖性并优于阳性对照药物尼莫地平。

综合以上资料表明，化合物（1〕对脑栓塞 /再灌注引起的脑组织损伤坏死有明显的治疗作用。可用于治疗急性缺血性脑血管病。

化合物（I) 的急性毒性试验的结果为：

小鼠静脉给药 LD50 356.18 mg/kg

95 %可信限为： 346.01〜366.64 mg/kg 肌肉注射 LD50 583.96 mg/kg

95 %可信限为： 564.77〜603.79 mg/kg 化合物（I) 的慢性试验的结果为：

大鼠 IV给药化合物（I ) 14天，主要引起大鼠注射局部尾静脉内膜炎。病变的损伤程度与药物剂量成正相关。 10、 30 mg/kg有轻微局部刺激， 100 mg/kg为有毒剂量。

三致试验结果表明，化合物（I ) 无三致作用，即无致畸、致癌、致突变作用。骨髓微核试验表明，化合物 Π ) 并不诱发骨髓嗜多染红细胞微核的形成。

总之，化合物（I) 对脑缺血 /再灌注损伤有良好的治疗作用，且毒性作用小，临床上可应用于急性缺血性脑血管疾病、中风、脑出血、脑栓塞引起的脑缺血 /再灌注引起的脑细胞损伤、坏死的治疗。

药理实理表明，化合物（I ) 具有与目前临床使用的 Ca^2÷通道阻断剂不同的特性，后者只对电压依赖性 Ca 通道有阻断作用，而对受体操纵 Ca²⁺通道极少作用。相反，化合物（I ) 只对受体操纵的 Ca^2÷通道有特异阻断。急性缺血性脑血管病相关的 Ca²""内流增多，主要与受体操纵 Ca²⁺ 通道相关，化合物（I ) 是通过这一新作用靶点，干扰促使脑细胞死亡的共同通路一 Ca²⁺内流增多、胞内 Ca²一超负荷，达到治疗脑缺血 /再灌注损伤、脑梗死的目的。因而其治疗效果好。

化合物（I ) 治疗急性缺血性脑血管病，通常采用以下治疗方案：制备成粉针剂或注射液，肌注或静脉注射 10〜30 mg/次，每 12小时一次， ₇〜14 天为一疗程。也可以采用口服剂型，不过剂量应加倍。也可以与其它药物作成复方制剂，如与溶栓药（如 tpA等）复方，如与降纤药物（蛇毒降纤酶等）复方，如与胞磷胆碱复方等，能达到增强作用甚至协同治疗效果。

化合物（I) 在 3 位上的葡萄糖基减少一个，也具有类似的效果，即为化合物 20— ( S ) 一原人参二醇一 3— [0— β— D—吡喃葡萄糖 ]一20— 0— β— D—吡喃葡萄糖苷。化合物（I) 在 3位上的一个葡萄糖基为其它的单糖取代，如鼠李糖等，也具有相类似的效果。化合物（I) 也可以制备成琥珀酸盐衍生物（如钾、钠）供药用。

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例 1

取三七的主根和须根，粉碎， 1 kg 生药粉末用含乙醇 85%的工业酒精冷浸过夜，滤过，残渣再用 85%酒精热提 3次，每次 2h，取滤液合并，回收乙醇后，浓缩液经正丁醇提取得粗总皂甙。将粗总皂甙在 65 X 1300 mm 的色谱柱（装填 100〜200 目的柱层析硅胶 1200_g) 上，依次用氯仿（83 % ) 一甲醇（16%) —水（1%)、氯仿（76%) —甲醇（22%) —水（2 %)、氯仿（68%) —甲醇（28%) —水（4%)、氯仿（65%) —甲醇（30 %) 一水（5%)、氯仿（61%)、甲醇（33%)、水（6%) 等不同比例的洗脱液进行梯度洗脱，每 550 ml为 i份收集洗脱液，以 TLC捡测， R_f相近组分合并后，回收溶剂，得到煎膏状浓缩液。将煎膏状浓缩液用少量甲醇溶解后，于 C18 反相柱分离及纯化，依次用甲醇（60%) —水（40 %)、甲醇（65%) —水（35%)、甲醇（70%) —水（30%)、甲醇（80 %) —水（20%)、甲醇（85%) —水（15%)、甲醇（100%) —水（0 %)不同比例的洗脱液进行梯度洗脱，以每份 100 ml收集洗脱液，经 TLC 检测，收集与标准品 R_f值相同的组分。经回收甲醇浓缩后，再按上述方法经第二次反相柱纯化。收集液回收甲醇，再静置 24h，即析出白色沉淀。倾去上层液，沉淀物于 40 °C真空干燥，即得到纯度达 98%的单体 3.0 _g。

对该单体进行理化性质检测和元素分析，并测定其质谱、红外、紫外光谱、 'Η和 ^l3C核磁共振，其条件和结果为：理化性质：白色或微黄色粉末，熔点 209〜214°C，易溶于低级醇、丙酮、氯仿、热水。

比旋度 [a]_D ²²+ 19.38° (c=1.03, MeOH)

元素分析： C₄₈H₈₂0,₈ - 3H₂0, 计算（％) C 57.62, H 8.79, 实验（％ ) C 57.32， H 8.93

FAB-MS(m/e):969[M-Na]⁺,946[M]⁺,789[M+Na-180]⁺,721[789 — 68] +， 627[789— 163+H]—， 587[789— 179— Na]+， 407[789— 341— H₂0 一 Na]+， 203[180+Na]⁺, 145[180— 2H₂0+H]+， 109 (基峰)

IR (v^KBr _maxcm—')_: 3395[s, b， v (OH, H₂0) ]， 2945、 2882[s， v (CH₃， CH₂， CH) ]， 165[m， b， v (C二 C) +v (OH) ]， 1454[m, v (CH₃) + v (CH₂) ]， 1384[m, v (CH₃) +v (CH) ]， 1082、 1032[s, v (C— O) ]

'H-NMR[C₅D₅N, 谱宽 5037.5 Hz (10 ppm) ]共有 82个质子峰，其中甙元含 50个，葡萄糖和木糖含 32个。在 0.8〜1.6 ppm之间有 8个甲基， 0.789、 1.070、 1.245 ppm峰为连在 8位和 4位碳上的 18— CH₃、 29- CH₃、 28—CH₃峰; 0.84 (2XCH₃) 和 1.598 ppm (3XCH₃) 峰为连在 10、 14位和 25、 20位碳上的 19—CH₃、 30— CH₃和 26— CH₃、 27— CH₃、 21 一 CH₃峰。 3.24 ppm峰为 3位连氧的叔碳质子峰， 4.04 ppm峰包含 12位连羟基的叔碳质子峰。 5.24 ppm峰为 24位烯氢峰。 3.8〜5.3 ppm峰组主要为葡萄糖和木糖的 CH、（：质子峰。 5.7〜7.9 ppm宽峰组为糖环中的 11个羟基质子峰。其氢谱数据如下： δ： 0.65 (1H， d, J-11.5 Hz, 5— H)， 0.73 (1H， q， J=ll Hz, 1— H)， 0.789 (3H, s， 18— CH₃)， 0.84 (6H, s， 19、 30-CH₃), 1.00 (3H, t， J=12Hz， CH₃)， 1.07 (3H, s， 29— CH₃)， 1.21 (1H， t， J二 7.5 Hz, — H)， 1.245 (3H， s， 28— CH₃)， 1.34 (3H, m, 6、 11、 15-H), 1.52 (3H, m， 1、 9、 15— H), 1.598 (9H， s, 21、 26、 27— CH₃)， 1.81 (3H， m, J=10.5 Hz, 2、 16、 22— H)， 1.94 (2H, t， J二 10Hz， 13、 16— H)， 2.16 (1H， d， J=12.5Hz， 2— H)， 2.21 (1H， m， 23— H)， 2.34 (1H， t， J=ll Hz, 22— CH)， 2.44 (1H， s (br)， 23 — H)， 2.50 (1H， q， = 9 Hz, 17— H)， 3.24 (IH, dd， J=8， 3.5 Hz, 3位连氧 CH)， 3.87 (1H， s， OH), 3.94 (1H， t， J=8Hz, 20— glc— 2H)， 4.04 (4H， q， J=8 Hz， 12— H， OH, glc— 2H)， 4.11 (2H， t, J二 9Hz， 3—glc— 2H， 20-glc-3H), 4.18 (3H， m， J=8 Hz, CH), 4.24 (4H， m， J=9Hz, CH), 4.41 (3H， m， J=11.5Hz, CH), 4.50 (1H， d， J= 11 Hz, CH), 4.86 (1H， d， J = 7.5 Hz, 20— glc— 1H)， 5.12 (1H， d， J =8 Hz, glc-lH), 5.24 (1H， t， 24— H)， 5.29 (1H， d， J = 7.5 Hz, 3 — glc— 1H)， 5.61 (1H， s， CH), 5.71 (IH, s (br)， OH), 6.08 (1H， s (br)， OH), 6.28 (1H， s (br)， OH), 7.03 (3H， s (br)， OH), 7.22

(3H， s (br)， OH), 7.49 (1H， s (br)， OH), 7.84 (1H， s (br)， OH) ,³C-NMR[C₅D₅N, 500M Hz, 谱宽 26016.3 Hz (200 ppm) ]共 48个有效峰，由 DEPT谱确定 CH₃碳峰 8个， CH₂碳峰 12个， CH碳峰 22个，季碳峰 6个，其中甙元 30个碳峰，余下的 18个分属 3个吡喃糖。其碳谱数据如下： δ： 15.88 (q， CH₃)， 16.19 (q， CH₃)， 16.50 (q， CH₃)， 17.27 (q, CH₃)， 17.72 (q， CH₃)， 18.35 (t, CH₂)， 22.37 (q， CH₃), 23.17 (t， CH₂)， 25.70 (q， CH₃)， 26.55 (t， CH₂)， 26.63 (t, CH₂)， 28.00

(q， CH₃)， 30.71 (t， CH₂)， 30.71 (s， C)， 35.06 (t， CH₂)， 35.96 (t， CH₂ 36.81 (s C 39.11 (t CH_:), 39.60 (s C 39.93 (s C 49.29 (d CH 50.08 (d CH 51.35 (s C 51.65 (d CH 56.32 (d CH 62.65 (t CH₂ 62.73 (t CH₂ 62.73 (t CH.₂ 70.18 (d CH 71.38 (d CH 71.54 (d CH 71.54 (d CH 74.97 (d CH 76.85 (d, CH 77.67 (d, CH 77.88 (d CH 78.05 (d CH 78.05 (d CH 78.16 (d, CH 78.97 (d CH 83.17 (d CH 83.26 (d CH 88.94 (d CH 98.12 (d CH 104.93 (d CH 105.76 (d CH 125.82 (d CH), 130.86 (s C)

UV ( λ , nm): 200.80

经 7% ≤0₄及 50%乙酸水解，证明甙元为人参二醇，糖部份为葡萄糖，有 1分子葡萄糖结合于 C20位。实施例 2

取人参的主根和须根，其余同实施例 1。实施例 3

取三七的主根和须根，第一次梯度洗脱液为氯仿（80%〜55%) — 乙酸乙酯（15%〜30%) —水（5%〜15%)，极性逐渐增强，反相柱纯化梯度洗脱液为乙醇（60%〜100%) —水（40%〜0%)，极性逐渐减弱。

本发明的各实施例经二次柱层析洗脱，均达到较高的单体纯度。

本发明不限于上述实施例。

Claims

1, 一种如下式所示的化合物（I):

2、一种如权利要求 1所述的化合物（I) 的提取方法，其依次包括以下步骤：

(1) 取人参属植物人参或三七的主根和 /或须根并粉碎，以工业酒精冷提 1次，再热提 G〜； 3次，浓缩后加正丁醇提取得粗总皂甙；

(₂) 粗总皂甙先经硅胶柱色谱用梯度洗脱液分离，然后浓缩所希望的部分，得到煎膏状浓缩液；

(3) 煎膏状浓缩液用适量甲醇溶解后，在反相柱上用梯度洗脱液分离及纯化，收集所需组分；收集液经回收甲醇，再静置 ₂₄h 以上，即析出白色沉淀；沉淀经干燥处理即得到高纯度单体。 3、根据权利要求 2 所述的提取方法，其特征在于硅胶柱色谱的梯度洗脱液为氯仿（85%〜60%) —甲醇（15%〜30%) —水（0%〜10%)，极性逐渐增强。

4、根据权利要求 2或 3所述的提取方法，其特征在于硅胶柱色谱的梯度洗脱液为氯仿（83%) —甲醇（16%) —水（1%)、氯仿（76%) —甲醇（22%) —水（2%)、氯仿（68%) —甲醇（28%) —水（4%)、氯仿（65%) —甲醇（30%) —水（5%)、氯仿（61%) —甲醇（33%) —水（6%)。

5、根据权利要求 2 所述的提取方法，其特征在于 CS〜C1S柱色谱的梯度洗脱液为甲醇（50%〜100%) —水（50%〜0%)，极性逐渐减弱。

6、根据权利要求 2或 5所述的提取方法，其特征在于 CS〜C18反相柱色谱的梯度洗脱液依次为甲醇（60%) —水（40%)、甲醇（65%) — 水（35%)、甲醇（70%) —水（30%)、甲醇（80%) —水（20%)、甲醇（85%) —水（15%)、甲醇（100%) —水（0%)。

7、根据权利要求 2 所述的提取方法，其特征在于所述人参包括北美参。 8、一种用于治疗急性缺血性脑血管病的药物组合物，其包含如权利要求 1所述的化合物（I) 以及药物学上可接受的载体或赋形剂。

9、根据权利要求 8 所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的剂型为粉针剂或注射液。

10、根据权利要求 8 所述的药物组合物，其特征在于化合物（I) 与其它药物复方制成复方制剂。