WO2017148414A1 - 褐藻多糖及其制备方法和用途 - Google Patents

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fucoidan
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李志雄
孙兆林
陈明苍
田小亭
高羽
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中国科学院上海药物研究所
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Definitions

  • the brown algae comprises a brown algae plant.
  • the plant polysaccharide has a molar content of mannose units of 60 to 93%, preferably 70 to 92%, more preferably 75 to 91%, most preferably 80 to 90%, according to The total amount of all monosaccharide units in the plant polysaccharide.
  • the molar ratio of fucose to mannose is 1-10:20-30, preferably 1-5:20-30, more preferably 1-3:20-30 , best, 1-2:20-30.
  • the administration comprises one or more cycles, each cycle being from 2 to 30 days, preferably from 3 to 7 days.
  • the obtained fucoidan polysaccharide was determined to contain a monosaccharide mainly composed of fucose, mannose, galactose (1 to 2:20 to 40:1) and a small amount of glucose. Among them, the ratio of glucose is 2%.
  • the molecular weight distribution of the brown algae polysaccharide was measured to range from 140 kDa to 300 kDa.
  • the sugar connections of the test samples 1-5 were basically the same. Combined with the standard map, it is determined that the monosaccharides constituting the brown algae polysaccharide have the following connection methods:
  • Continuous oral administration of donepezil for 2 months significantly prolonged the distance and time of the mouse in the range I around the platform, significantly shortening the time for the mouse to cross the platform for the first time, and increasing the number of crossing the platform.
  • the test 1 of 300mg/kg and 200mg/kg significantly prolonged the activity distance and time of the animal in the range I around the platform, which significantly shortened the time for the mouse to cross the platform for the first time, and increased the number of crossing the platform, indicating the supply.
  • the continuous oral administration of the test sample 1 at a dose of 200 mg/kg for 2 months significantly improved the spatial memory disorder of the APP/PS1 double transgenic mice.
  • Ethanol is a central inhibitor that inhibits the neurological activity of the cerebral cortex, inhibits the conditioned reflex process in animals, blocks the synthesis of proteins and RNA in the brain, and changes the system of cholinergic and dopamine. Giving before retesting can significantly interfere with the reproduction of memory. Ethanol is cheap and easy to obtain. At a suitable concentration, the results are stable, easy to repeat, and have no significant effect on the central and general motor function. Drugs with improved learning and memory can reduce the latency and number of errors from the bright room to the dark room after 24 hours in mice with memory-rehabilitation caused by ethanol.
  • Example 12 Effect of Test Sample 4 and Test Specimen 5 on Ethanol-induced Memory Reproduction Disorder in Mice

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Abstract

提供了褐藻多糖及其制备方法和用途。所述褐藻多糖的分子量为100kDa-300kDa，并且主要包括甘露糖和岩藻糖等单糖单元。还提供了所述褐藻多糖的制备方法和应用。试验表明，所述褐藻多糖可显著改善哺乳动物空间记忆能力并可用于预防和/或治疗神经退行性疾病。

Description

褐藻多糖及其制备方法和用途 技术领域
本发明涉及药物领域，具体地，涉及一类新颖的褐藻多糖及其制备方法和在治疗神经退行性疾病的应用。
背景技术
早老性痴呆即阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)，是一类神经退行性疾病，其症状表现主要是病人记忆和认知能力不同程度地丧失，行为活动发生障碍。AD的发病机制还不十分清楚，可能与细胞的衰老、遗传基因、神经递质损伤和炎症等多种因素有关。
目前临床应用或处于临床研究中的抗AD药物主要是从提高脑神经中的Ach水平出发，恢复Ach神经传导，改善病人的记忆、认知和行为能力，延缓病情的发展。其中一类药物是拟胆碱药物，另一类药物是促进脑神经中Ach释放的药物。
常用的防治药物包括中枢兴奋剂、改善胆碱能的物质和脑血液循环改善剂等，然而这些药物存在疗效不确切、特异性不强或毒副作用大，口服吸收差，治标不治本等缺点，因而限制了它们的应用。
综上所述，本领域迫切需要开发新的能够有效用于改善记忆和/或治疗神经退行性疾病的药物。
发明内容
本发明的目的是提供一种预防和/或治疗神经退行性疾病的药物。
本发明第一方面，提供了一种植物多糖，所述的植物多糖是由单糖单元组成的杂多糖，并且所述的单糖单元包括(i)岩藻糖，(ii)甘露糖，以及(iii)任选的葡萄糖和/或半乳糖。
在另一优选例中，所述的植物多糖中单糖单元包括岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。
在另一优选例中，所述的植物多糖中单糖单元包括岩藻糖、甘露糖和葡萄糖。
在另一优选例中，所述的植物多糖中单糖单元包括岩藻糖、甘露糖和半乳糖。
在另一优选例中，所述的植物多糖还含有选自下组的单糖单元：木糖、鼠李糖、或其组合。
在另一优选例中，所述的植物多糖中单糖单元包括2、3、4、5、6种单糖单元。
在另一优选例中，所述的植物多糖中单糖单元包括木糖、鼠李糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、和半乳糖。
在另一优选例中，所述的植物多糖为褐藻多糖。
在另一优选例中，所述的褐藻包括褐藻门马尾藻科植物。
在另一优选例中，所述的褐藻包括马尾藻羊栖菜。
在另一优选例中，所述的植物多糖中甘露糖单元的摩尔含量≥50％,较佳地≥70％，更佳地≥80％，最佳地≥85％，按植物多糖中所有单糖单元的总量计。
在另一优选例中，所述的植物多糖中甘露糖单元的摩尔含量为60-93％,较佳地70-92％，更佳地75-91％，最佳地80-90％，按植物多糖中所有单糖单元的总量计。
在另一优选例中，所述的植物多糖选自下组：
(a)一种植物多糖，其中所含的单糖的摩尔比为，岩藻糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖＝1～2∶20～30∶0.5～2∶1；
(b)一种植物多糖，其中所含的单糖的摩尔比为，岩藻糖∶甘露糖∶半乳糖＝1～2∶20～40∶1；
(c)一种植物多糖，其中所含的单糖的摩尔比为，岩藻糖∶甘露糖∶葡萄糖＝1～2∶25～30∶0.5～2；
(d)一种植物多糖，其中所含的单糖的摩尔比为，岩藻糖∶甘露糖＝1～2∶20～30。
在另一优选例中，所述的植物多糖的分子量为100～350KDa。
在另一优选例中，所述的植物多糖的分子量小于250KDa的组分占全部多糖分子的百分比≥70％(如70-90％)。
在另一优选例中，所述的植物多糖的分子量分布指数为1.2～2.0。
在另一优选例中，所述植物多糖具有选自下组的一个或多个特征：
(1)糖残基摩尔比为岩藻糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖＝1.96:21.00:1.88:1.00；
(2)分子量为140～300KDa；
(3)分子量分布指数为1.2～2.0；
(4)甘露糖的含量为25～40wt％，按植物多糖总重量计；
(5)糖醛酸8～20wt％，按植物多糖总重量计；
(6)蛋白质含量0.1～1wt％，按植物多糖总重量计；
(7)硫酸基含量10～15wt％，按植物多糖总重量计；
(8)连接方式包括选自下组的单糖连接方式：末端、1,2-、1,2,3-、1,2,3,4-和1,2,4,6-连接的甘露糖；末端、1,2,4-、1,4-、1,6-连接的半乳糖和葡萄糖；末端、1,2,4-、1,3-和1,4-连接的岩藻糖；
(9)硫酸基位置选自下组：甘露糖的4位及6位，岩藻糖的2、3、4位(部分岩藻糖可同时存在2个硫酸基)。
在本发明的第二方面，提供了一种褐藻多糖，所述褐藻多糖的分子量为100kDa-350kDa(较佳地，140kDa-300kDa，更佳地，140kDa-250kDa)；
并且所述褐藻多糖中含有以下单糖单元：甘露糖和岩藻糖，
其中，按褐藻多糖中所有单糖单元的总量计，所述甘露糖的摩尔含量为50％-93％(较佳地，60％-90％；更佳地，80％-90％)；以及
所述岩藻糖的摩尔含量为3％-10％(较佳地，4％-8％，更佳地，5％-6％)。
在另一优选例中，所述褐藻多糖分子量分布指数为1-4，较佳地，1.5-3或1-2，更佳地1.2-2.0。
在另一优选例中，所述褐藻多糖还包括葡萄糖和半乳糖。
在另一优选例中，所述褐藻多糖还包括木糖和鼠李糖。
在另一优选例中，所述岩藻糖和甘露糖的摩尔比为1-10：20-30，较佳地，1-5：20-30，更佳地，1-3：20-30，最佳地，1-2：20-30。
在另一优选例中，所述葡萄糖和半乳糖的摩尔比为0.2-10：1，较佳地，0.5-10：1，更佳地，0.5-5：1，最佳地，0.5-2：1。
在另一优选例中，所述岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的摩尔比为1-10：20-40：0.2-10：1，较佳地，1-5：20-35：0.5-6：1，更佳地，1-3：20-30：0.5-5：1，最佳地，1-2：20-30：0.5-1：1。
在另一优选例中，在所述褐藻多糖中，当岩藻糖的摩尔比率为1时，所述甘露糖的摩尔比率为2-30，较佳地，15-30，更佳地，20-30；所述半乳糖的摩尔比率为0.02-5，较佳地，0.02-4，更佳地，0.1-3，最佳地，0.5-2；所述葡萄糖的摩尔比率为1，较佳地，0.5-2，更佳地，0.5-1。
在另一优选例中，所述甘露糖在所述褐藻多糖的摩尔比为60％-93％，较佳地，70％-90％，更佳地，80％-90％。
在另一优选例中，所述褐藻多糖来自马尾藻科植物，如羊栖菜。
在另一优选例中，所述褐藻多糖具有如下式所示的结构单元：
Figure PCTCN2017075440-appb-000001
Hex＝[Gal、Man或Glc]
其中，m＝大于10的正整数。
在另一优选例中，m为50-300，更佳地为80-230。
在本发明的第三方面，提供了本发明第一方面所述的植物多糖或第二方面所述褐藻多糖的用途，它们被用于制备一组合物，所述组合物用于(a)改善记忆能力；和/或(b)用于预防和/或治疗神经退行性疾病。
在另一优选例中，所述神经退行性疾病选自下组：阿尔茨海默病、帕金森氏病、原发性侧索硬化或其组合。
在另一优选例中，所述的组合物包括：药物组合物、保健品组合物、或食品组合物、或膳食补充剂组合物。
在另一优选例中，所述的组合物为药物组合物。
在另一优选例中，所述的食品组合物包括饮料组合物。
在另一优选例中，所述的药物组合物含有(a)本发明第一方面所述的植物多糖或第二方面所述褐藻多糖；和(b)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述组分(a)占所述药物组合物总重量的0.1-99.9wt％,较佳地10-99.9wt％，更佳地70％-99.9wt％。
在另一优选例中，所述组分(a)占所述药物组合物总重量的60.0％-99.5wt％，较佳地70.0-99.5wt％，更佳地80.0％-99.5wt％。
在另一优选例中，所述药物组合物为液态、固体、或半固体。
在另一优选例中，所述药物组合物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、或注射剂。
在另一优选例中，所述组合物或药物还用于改善哺乳动物的记忆能力。
在另一优选例中，所述的记忆能力包括空间记忆能力。
在另一优选例中，所述改善哺乳动物的空间记忆能力包括(i)延长哺乳动物在在站台周围范围I的路程和时间；和/或(ii)缩短哺乳动物第一次穿越平台的时间，增加穿越平台的次数。
在另一优选例中，所述哺乳动物包括人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物，如小鼠、大鼠。
在本发明的第四方面，提供了一种药物组合物，包括：
(a)本发明第一方面所述的植物多糖或第二方面所述褐藻多糖；和
(b)药学上可接受的载体。
在本发明的第五方面，提供了一种治疗神经退行性疾病的方法，包括：给需要的哺乳动物施用本发明第一方面所述的植物多糖、或第二方面所述褐藻多糖、或第四方面所述的药物组合物。
在另一优选例中，所述的哺乳动物包括人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物，如大鼠、小鼠。
在另一优选例中，施用剂量为100-2000mg/kg/天，较佳地，250-10000mg/kg/天，更佳地，500-10000mg/kg/天。
在另一优选例中，施用频率为1-5次/天，较佳地1-2次/天。
在另一优选例中，施用包括一个或多个周期，各周期为2-30天，较佳地3-7天。
在本发明的第五方面，提供了一种改善哺乳动物空间记忆的方法，包括：给需要的哺乳动物施用本发明第一方面所述的植物多糖或第二方面所述褐藻多糖。
在另一优选例中，所述的方法是治疗性或非治疗性的。
在另一优选例中，所述的哺乳动物包括人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物，如大鼠、小鼠。
在另一优选例中，施用剂量为100-2000mg/kg/天，较佳地，250-10000mg/kg/天，更佳地，500-10000mg/kg/天。
在另一优选例中，施用频率为1-5次/天，较佳地1-2次/天。
在另一优选例中，施用包括一个或多个周期，各周期为2-30天，较佳地3-7天。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施 例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了本发明中一个实例中的褐藻多糖的高效凝胶色谱图。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，通过大量筛选和试验，意外地发现，可从褐藻中分离获得一类新颖的、水溶性高且具有改善神经系统功能的植物多糖。所述植物多糖是多种单糖单元(包括甘露糖、岩藻糖、以及葡萄糖和/或半乳糖等)按特定比例构成的褐藻多糖。试验证明，本发明的褐藻多糖能够显著改善哺乳动物的空间记忆能力，并可用于预防和/或治疗神经退行性疾病。在此基础上，本发明人完成了本发明。
褐藻
适用于本发明的植物主要为褐藻。
典型的褐藻包括褐藻门马尾藻科的植物。一种典型的褐藻为羊栖菜。
羊栖菜(Sargassum fusiforme(Harv.)Setchel)属于褐藻门马尾藻科，又名海大麦、鹿角尖、海菜等。羊栖菜主要生长在北太平洋西部的暖温带水域，在我国分布十分广泛，北起辽东半岛，沿山东和浙江，南至福建和广东的浅海海域均有分布。羊栖菜肉厚多汁，营养价值高，在民间早已入药，是我国传统常用的药食两用药材，以干燥藻体全藻入药，性味苦、咸、寒而无毒，主要功效为软坚散结、消痰、清凉解毒、破血祛瘀、利水消肿，用于瘿瘤、睾丸肿痛、痰饮水肿。马尾藻科植物羊栖菜作为药用海藻被2015版中国药典所收载。
褐藻多糖
如本文所用，术语“本发明多糖”、“本发明植物多糖”、“本发明褐藻多糖”可互换使用，指本发明第一方面中所所述的植物多糖或褐藻多糖。本发明的植物多糖是主要由二种或多种单糖单元(如甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖)构成的杂多糖。
在本发明中，所述褐藻多糖的来源没有特别限制。在一优选实施方式中， 所述褐藻多糖可提取自海洋植物，如马尾藻科植物的羊栖菜。
典型地，本发明的植物多糖是由单糖单元组成的杂多糖，并且所述的单糖单元包括(i)岩藻糖，(ii)甘露糖，以及(iii)任选的葡萄糖和/或半乳糖。此外，本发明的植物多糖还含有选自下组的其它单糖单元：木糖、鼠李糖、或其组合。
在本发明的褐藻多糖中，为甘露糖为主。典型地，甘露糖单元的摩尔含量≥50％,较佳地≥70％，更佳地≥80％，最佳地≥85％，按植物多糖中所有单糖单元的总量计。例如，所述甘露糖的摩尔含量为50％-95％，较佳地，60％-90％，更佳地，70-90％，最佳地，80％-90％。
在本发明的褐藻多糖中，岩藻糖、葡萄糖、半乳糖或其它微量单糖单元之间的比例没有限制。
优选地，所述岩藻糖和甘露糖的摩尔比为1-10：20-30，较佳地，1-5：20-30，更佳地，1-3：20-30，最佳地，1-2：20-30。
优选地，所述葡萄糖和半乳糖的摩尔比为0.2-10：1，较佳地，0.5-10：1，更佳地，0.5-5：1，最佳地，0.5-2：1。
优选地，所述岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的摩尔比为1-10：20-40：0.2-10：1，较佳地，1-5：20-35：0.5-6：1，更佳地，1-3：20-30：0.5-5：1，最佳地，1-2：20-30：0.5-1：1。
在本发明所述的褐藻多糖中，当岩藻糖的摩尔比率为1时，
所述甘露糖的摩尔比率为2-30，较佳地，15-30，更佳地，20-30；
所述半乳糖的摩尔比率为0.02-5，较佳地，0.02-4，更佳地，0.1-3，最佳地，0.5-2；和/或
所述葡萄糖的摩尔比率为0.2-2，较佳地，0.5-2，更佳地，0.5-1。
在一优选实施方式中，所述褐藻多糖还包括微量或少量的其它单糖单元，例如木糖和鼠李糖。
试验表明，本发明的褐藻多糖可显著改善哺乳动物(如小鼠)的空间记忆能力，因此，可用于治疗神经退行性疾病。
制备方法
本发明还提供了制备本发明褐藻多糖的方法。用于制备褐藻多糖的试剂和设备为常规的，可市售获得。
在一优选实施方式中，本发明的制备方法包括：
步骤一提取-过滤：取褐藻(如羊栖菜)加水，加热至沸腾后，提取一段时间(如1-24小时，较佳地2-12小时，更佳地3～4小时)，然后过滤。其中，该提取-过滤步骤可重复提取，如重复2次或多次(如2-6次)，并合并滤液。
步骤二浓缩-醇沉(高浓度醇沉)：取步骤一的滤液，进行浓缩(通常浓缩至滤液体积的约1/6-1/15，较佳地1/9～1/11)，得到浓缩液；在浓缩液中加入醇溶剂(如乙醇)，至溶液中醇的体积分数达到一定比例(如70％～80％(v/v)的高浓度)，并搅拌形成沉淀(如搅拌1-6小时，较佳地3～4小时)；离心并收集第一高浓度醇溶剂的醇沉沉淀物；沉淀加水溶解，溶解后再加入醇溶剂(如乙醇)至溶液中直至醇溶剂的体积分数70％～80％；本醇沉步骤一般可重复2次或多次(如2-6次，较佳地2-4次，更佳地2-3次)，并收集最后一次醇沉沉淀物。
步骤三醇沉(低浓度醇沉)-浓缩：步骤二收集沉淀物加水溶解，然后加入醇溶剂(如乙醇)，至溶液中醇溶剂的体积分数为30％～40％，搅拌一段时间(如1-12小时，较佳地3～4小时)形成沉淀后，离心并收集低浓度醇溶剂的醇沉沉淀物和上清液；低浓度醇溶剂的醇沉沉淀物加水溶解，再加入醇溶剂(如乙醇)至溶液中乙醇体积分数为30％～40％，本醇沉步骤一般可重复2次或多次(如2-6次，较佳地2-4次，更佳地2-3次)；收集各次上清液合并，然后进行浓缩(通常浓缩至上清液总体积的约1/6-1/15，较佳地1/9～1/11)，得到浓缩的上清液。
步骤四醇沉(高浓度醇沉)：向步骤三浓缩上清液中加入醇溶剂(如乙醇)，至溶液中醇溶剂的体积分数为70％～80％，搅拌3～4小时后，离心，得第二高浓度醇溶剂醇沉沉淀物，沉淀加水溶解，加入醇溶剂(如乙醇)至溶液中醇溶剂的体积分数为70％～80％；本醇沉步骤一般可重复2次或多次(如2-6次，较佳地2-4次，更佳地2-3次)；收集最后一次的第二高浓度醇溶剂醇沉的沉淀物，即得褐藻多糖。
组合物及其应用
本发明还提供了一种组合物，其中包括有效量的褐藻多糖。本发明组合物包括药物组合物、保健品组合物、或食品组合物、或膳食补充剂组合物；优选药物组合物。
在一优选例中，所述的组合物为液态制剂、固态制剂、半固态制剂。在一 优选例中，所述的液态制剂选自下组：溶液制品或悬浮液制品。
在一优选例中，所述的组合物的剂型选自下组：粉末剂、散剂、片剂、糖衣剂、胶囊剂、颗粒剂、悬浮剂、溶液剂、糖浆剂、滴剂、和舌下含片。
本发明药物组合物可以以药物片剂，针剂或胶囊的任一种形式给药，所述药物制剂包括赋形剂、药物允许的媒介和载体，这些物质可根据给药途径进行选择。本发明中药物制剂可进一步包含辅助的活性组份。
乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、细结晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁或矿物油等都可用作本发明中药物组合物的载体、赋形剂或稀释剂等。
此外，本发明的药物组合物可进一步包括润滑剂、润湿剂、乳化剂、悬浮液稳定剂、防腐剂、甜味剂和香料等。本发明的药物组合物可通过多种公知的方法以肠衣制剂生产，以便于药物组合物的活性成分能顺利通过胃而不被胃酸所破坏。
说明书中“药物有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。比如，在本发明中，可制备含有1％-99％(特别的，可含有30％—90％；更特别地，可含有50％—80％)的褐藻多糖的制剂。
当用于制备药物组合物时，所用的褐藻多糖的有效剂量可随施用的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体密切混合的约含有1％-99％(特别的，可含有30％—90％；更特别地，可含有0％—80％)的褐藻多糖。可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。
所述的褐藻多糖可通过口服等途径给予。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括：培养基、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合褐藻多糖的特性和所需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。
从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。口服给药是优选的。
将本发明组合物施用给所述个体，每天给药1次或多次。给药剂量单位表示其形式上能分开且适用于人类或其他所有哺乳动物个体的剂量。每一单位含 有药物允许的载体和有效治疗量的本发明的褐藻多糖。给药量随病人病情、所包括的补充活性组份和所使用的褐藻多糖而变化。此外如可能，可分开给药，并且如需要可连续给药。因此，所述给药量不会对本发明造成限制。此外，本发明中的“组合物”不仅意味着药品而且表示可作为功能性食品和健康补充食品。在一个优选例中，所述组合物包括：食品、保健品、药品等。在本发明的一个优选例中，还提供了一种食品组合物，它含有有效量的磷结合剂，以及余量的食品上可接受的载体，所述的食物组合物的剂型选自固体、乳品、溶液制品、粉末制品、或悬浮液制品。
在一优选例中，所述组合物的配方如下：
0.01-95wt％(较佳地0.1-90wt％，更佳地1-50wt％)的褐藻多糖；以及食品上或药学上可接受的载体和/或赋形剂。
在另一优选例中，所述组合物的配方如下：
10-80wt％的褐藻多糖；以及食品上或药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本发明褐藻多糖或含有褐藻多糖的组合物能够显著改善哺乳动物的记忆能力(包括空间记忆能力)。
本发明褐藻多糖或含有褐藻多糖的组合物可以用来治疗和/或预防哺乳动物的神经退行性疾病。
在本发明中，哺乳动物包括啮齿动物和灵长目，尤其人。
本发明的主要优点包括：
(1)本发明首次提取了含有甘露糖、岩藻糖、葡萄糖和半乳糖的褐藻多糖，本发明的褐藻多糖可显著改善哺乳动物的空间记忆能力，因此可以用来治疗和/或预防哺乳动物的神经退行性疾病。
(2)本发明的褐藻多糖来源于海洋植物(如马尾藻科植物的羊栖菜)，因此具有副作用小、成本低、安全性好的特点。
(3)本发明的褐藻多糖制备工艺简单，易于工业生产。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
本发明所用的试剂若未明确指明，则均购自于西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich公司)。
实施例1褐藻多糖(供试品1)
步骤一，取羊栖菜药材(2000g)，用20倍量的水浸泡并搅拌清洗，换水三次，滤干，加入20倍体积的水，加热至沸腾后，提取4h，过滤，重复提取2次，合并滤液。
步骤二，取滤液，浓缩至滤液体积的1/10，得到浓缩液，在浓缩液中加入乙醇，搅拌，直至溶液中乙醇的体积分数达到80％，搅拌4h后，离心并第一次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心并第二次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇体积分数为80％，搅拌4h后，离心，第三次收集沉淀物。
步骤三，第三次收集沉淀物加水溶解，然后加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为40％，搅拌4h后，离心并第四次收集沉淀物和上清液，然后第四次收集沉淀加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇体积分数为40％，搅拌4h后，离心并第五次收集沉淀物和上清液，然后第五次收集沉淀物再次加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为40％，搅拌4h后，离心并第六次收集上清液，合并第四次、第五次和第六次收集的上清液，浓缩至上清液总体积的1/10，得到浓缩的上清液。
步骤四，向浓缩的上清液中加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心，第七次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心，第八次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心，第九次收集沉淀物52g，即为褐藻多糖(供试品1)。
经测定(见实施例5-7)，该制得的褐藻多糖中含有岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖(1～2∶20～30∶0.5～2∶1)为主的部位。分子量为140kDa～300kDa。
供试品1的褐藻多糖的高效凝胶色谱结果如图1所示，表明褐藻多糖的纯度很高。
基于分析，该褐藻多糖中具有下式所示的结构单元：
Figure PCTCN2017075440-appb-000002
其中，m＝80-230。
实施例2褐藻多糖(供试品2)
步骤一，取羊栖菜药材(1500g)，用20倍量的水浸泡并搅拌清洗，换水三次，滤干，加入20倍体积的水，加热至沸腾后，提取4h，过滤，重复提取2次，合并滤液。
步骤二，取滤液，浓缩至滤液体积的1/10，得到浓缩液，在浓缩液中加入乙醇，搅拌，直至溶液中乙醇的体积分数达到80％，搅拌4h后，离心并第一次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心并第二次收集沉淀物。
步骤三，第二次收集沉淀物加水溶解，然后加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为40％，搅拌4h后，离心并第三次收集沉淀物和上清液，然后第三次收集沉淀加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇体积分数为40％，搅拌4h后，离心并第四次收集沉淀物和上清液，合并第三次和第四次上清液并浓缩至上清液总体积的1/10，得到浓缩的上清液。
步骤四，向浓缩的上清液中加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心，第五次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心，第六次收集沉淀物，烘干沉淀物，得到褐藻多糖60g(供试品2)。
经测定，该制得的褐藻多糖中，含有岩藻糖、甘露糖、半乳糖(1～2∶25～30∶1)为主的单糖，以及少量葡萄糖的部位。其中，葡萄糖的比例为1％。
实施例3褐藻多糖(供试品3)的制备
步骤一，取羊栖菜药材(1500g)，用20倍量的水浸泡并搅拌清洗，换水三次，滤干，加入20倍体积的水，加热至沸腾后，提取4h，过滤，重复提取2次，合并滤液。
步骤二，取滤液，浓缩至滤液体积的1/10，得到浓缩液，在浓缩液中加入乙醇，搅拌，直至溶液中乙醇的体积分数达到30％，搅拌4h后，离心并第一次收集滤液和沉淀物，沉淀物然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为30％，搅拌4h后，离心并第二次收集滤液及沉淀物，沉淀物然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇体积分数为30％，搅拌4h后，离心，第三次收集滤液和沉淀物，合并滤液。
步骤三，取步骤二的滤液浓缩至无醇，然后加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心并第四次收集沉淀物和上清液，然后第四次收集沉淀加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇体积分数为80％，搅拌4h后，离心并第五次收集沉淀物和上清液，然后第五次收集沉淀物再次加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心并第六次收集沉底物和上清液，合并第四次、第五次和第六次收集的上清液，浓缩至上清液总体积的1/10，得到浓缩的上清液，蒸干，得到褐藻多糖85g(供试品3)。
经测定，该制得的褐藻多糖中，含有岩藻糖、甘露糖、半乳糖(1～2∶20～40∶1)为主的单糖，以及少量葡萄糖的部位。其中，葡萄糖的比例为2％。
实施例4褐藻多糖(供试品4和5)
步骤一，取羊栖菜药材(1500g)，用20倍量的水浸泡并搅拌清洗，换水三次，滤干，加入20倍体积的水，加热至沸腾后，提取4h，过滤，重复提取2次，合并滤液。
步骤二，取滤液，浓缩至滤液体积的1/10，得到浓缩液，在浓缩液中加入乙醇，搅拌，直至溶液中乙醇的体积分数达到30％，搅拌4h后，离心并第一次收集滤液和沉淀物，沉淀物然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为30％，搅拌4h后，离心并第二次收集滤液及沉淀物，沉淀物然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇体积分数为30％，搅拌4h后，离心，第三次收集滤 液和沉淀物，合并滤液。
步骤三，取步骤二的滤液浓缩至无醇，然后加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心并第四次收集沉淀物和上清液，然后第四次收集沉淀加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇体积分数为80％，搅拌4h后，离心并第五次收集沉淀物和上清液，然后第五次收集沉淀物再次加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的体积分数为80％，搅拌4h后，离心并第六次收集沉底物和上清液，第六次沉淀物烘干，然后用0.2MNaCl水溶，经Sepharcryl S300凝胶柱进行分离，洗脱液为0.2M NaCl，分离得到两个流份，分别透析，浓缩至干，得到褐藻多糖15g(供试品4)和褐藻多糖24g(供试品5)。
经测定，该制得的褐藻多糖(供试品4)中，含有岩藻糖，甘露糖，半乳糖(1～2∶25～30∶1)为主、以及少量葡萄糖的部位。
经测定，该制得的褐藻多糖(供试品5)中，含有岩藻糖，甘露糖，葡萄糖(1～2∶25～30∶1)为主、以及少量半乳糖的部位。
实施例5褐藻多糖的分子量表征
以供试品1为例，采用凝胶色谱法，以标准多糖(葡聚糖)为对照品，通过GPC软件计算获得。
检测条件：Agilent 1100高效液相色谱仪，配备示差检测器，KS-802和KS-804串联柱(Shodex公司)，流动相为0.2mol/L氯化钠溶液，柱温40℃，流速0.8mL/min。
具体方法如下：
1mg～2mg标准多糖(葡聚糖)和褐藻多糖样品，用流动相配成2mg/mL溶液，12,000rpm离心10min，吸取上清液转入液相样品瓶。将标准多糖和褐藻多糖样品溶液依次进样，进样体积20μL，测定保留时间，用GPC软件计算褐藻多糖的分子量。
测得褐藻多糖的分子量分布范围为140kDa～300kDa。
实施例6褐藻多糖的糖组成和连接方式分析
以供试品1为例，取0.1mg～1mg样品，置10ml安瓿中，加1ml 2mol/L TFA 溶液，封口，120℃烘箱中水解反应1.5h～2h，取出，放冷至室温后，将水解液转入25mL梨形烧瓶，60℃水浴减压蒸干，加200μL水溶解，然后加1ml0.5mol/L NaBH4的DMSO溶液，混匀，于40℃水浴还原反应90min。再逐滴加入100μL冰醋酸，混匀，然后加入200μL 1-甲基咪唑和1mL乙酸酐，混匀，于40℃水浴乙酰化反应10min。反应结束即加入2mL蒸馏水，混匀，再加入2mL氯仿，充分混匀萃取乙酰化产物，小心吸出并弃去大部分上层水液，下层溶液加2mL水洗涤一次，吸取下层溶液，用1g无水硫酸钠干燥，置样品瓶中备用。采用GC分析。
标准品不水解，其余操作同样品。
采用如下气相色谱条件对糖组成进行分析：Hp-5(Agilent)色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；程序升温条件为：起始温度140℃，以10℃/min升温至170℃，保持4min；再以0.5℃/min升温至175℃；然后以10℃/min升温至190℃；然后以0.5℃/min升温至200℃；最后以10℃/min升温至250℃。进样口温度为250℃；载气为N2，流速为1mL/min。
经分析，所制得的褐藻多糖含有岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖等四种单糖，按摩尔比岩藻糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖＝1～2∶20～30∶0.5～2∶1。并且，所制得的褐藻多糖还含有微量的木糖和鼠李糖。
实施例7褐藻多糖的糖连接方式分析
在本实施例中，对供试品1-5分别进行分析。
甲基化分析：参照文献方法(Carbohydr Res.1993,245,1～10)将褐藻多糖进行甲基化，甲基化后的产物用90％甲酸解聚，2mol/L TFA全水解，NaBH4还原和醋酐乙酰化制成部分甲基化的阿尔迪醇乙酸酯衍生物，然后进行GC-MS分析。
供试品1-5的糖连接方式基本相同。结合标准图谱，确定组成褐藻多糖的单糖具有如下几种连接方式：
甘露糖：位于糖链末端，或其上1,2位羟基成糖苷，3位及6位或被取代；其上1,4位羟基成糖苷，或2位，3位和6位被取代；
岩藻糖：位于糖链末端，或其上1,3位羟基成糖苷，4位或被取代；或其 上1,4位羟基成糖苷，2，3位或被取代；
半乳糖：其上1,4位羟基成糖苷或6位被取代，或其上1,2位羟基成糖苷或4位被取代；
葡萄糖：其上1,4位羟基成糖苷或6位被取代，或其上1,2位羟基成糖苷或4位被取代。
基于上述分析，得出褐藻多糖的结构式：
Figure PCTCN2017075440-appb-000003
其中，m＝80-230。
实施例8褐藻多糖对APP/PS1双转基因小鼠空间记忆障碍的影响
本实施例中，使用的褐藻多糖为实施例1中制备供试品1。
APP/PS1双转基因小鼠单只单笼饲养致20周龄时，各组小鼠以10ml/kg体重的药液容积按应给予药液经口灌胃(i.g)给药，每天1次，连续60天。野生对照及模型组给予等体积溶媒，给药组分别给予200mg/kg(低剂量)和300mg/kg(高剂量)供试品1，阳性药组给予1.6mg/kg盐酸多奈哌齐，每组10只。随后进行Morris水迷宫训练，连续5天。每次均为口服给药1h后训练。
训练方式：先将小鼠放在位于第IV象限的平台上使其熟悉30秒(sec)。然后再将小鼠于第IV象限面朝壁投入水中，使其寻找平台，游泳时间为60sec。若在60sec内找不到平台，则将小鼠放到平台上，停留10sec。休息2min后，再次将小鼠放入第I象限游泳以寻找平台，其余过程同上。依次再将小鼠分别投入II、III象限。每日按上述方法进行训练，连续4天。
第5天进行撤台实验。将位于第IV象限的平台撤除。给药后1h将小鼠从水池的任意一点贴壁放入水中，游泳寻找平台1min。Morris水迷宫统计软 件将记录每只小鼠穿越平台的次数，分别在4个象限的活动时间和路程，以及在平台中心区域及外围区域的活动时间及路程等，并进行统计处理。
表1 第5天撤台后供试品1对小鼠在站台周围范围I的活动路程和时间的影响
Figure PCTCN2017075440-appb-000004
*P<0.05，**P<0.01与模型组相比
表2 第5天撤台后供试品1对小鼠第一次穿越平台时间和平台穿越次数的影响
Figure PCTCN2017075440-appb-000005
*P<0.05，**P<0.01与模型组相比
在撤台试验中，模型组动物在站台(平台所在区域)周围范围I的活动路程和时间明显短于阴性对照组的小鼠，第一次穿越平台的时间和平台的穿越次数也明显少于阴性对照组的小鼠(P值均小于0.01)，说明APP/PS1双转基因小鼠饲养至8个月时，其空间记忆能力明显降低。
多奈哌齐连续口服给药2个月，明显延长了小鼠在站台周围范围I的活动路程和时间，明显缩短了小鼠第一次穿越平台的时间，增加了穿越平台的次数， 说明多奈哌齐连续口服给药2个月明显改善了APP/PS1双转基因小鼠的空间记忆障碍。300mg/kg和200mg/kg的供试品1均明显延长了动物在站台周围范围I的活动路程和时间，明显缩短了小鼠第一次穿越平台的时间，增加了穿越平台的次数，说明供试品1在200mg/kg剂量下连续口服给药2个月就可明显改善APP/PS1双转基因小鼠的空间记忆障碍。
实施例9供试品1对乙醇诱导的小鼠记忆再现障碍影响
乙醇为中枢抑制剂，可抑制大脑皮层的神经功能活动，抑制动物的条件反射过程，使脑内蛋白质和RNA合成受阻，胆碱能和多巴胺等系统发生改变。在重测前给予，可明显干扰记忆的再现。乙醇价廉易得，在适宜的浓度下，结果稳定，易于重复，对中枢和一般运动功能无明显影响。有改善学习记忆的药物可减少乙醇所致记忆再现障碍小鼠24h后由明室到暗室的潜伏期及错误次数。
雄性ICR小鼠(上海西普尔-毕凯实验动物有限公司，动物合格证号：SCXK(沪)2008-0016)，经口灌胃(i.g.)给药，其中空白对照组和模型组均给予等体积0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，给药组分别给予150mg/kg供试品1，阳性药组给予1.6mg/kg盐酸多奈哌齐，每组10只，1次/天，10ml/kg体重，连续给药3周。末次给药后1h，以避暗法训练一次。将小鼠放入避暗箱内，背朝洞口放入明室，同时启动视屏分析装置，动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时自动停止。取出小鼠，视屏分析将记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24h后进行测试，测试前30min经口灌胃给予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)，空白对照组给予等体积生理盐水。视屏分析系统将摄制并自动记录动物所有相关数据，实验结果参见表3。
表3 供试品1对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响
Figure PCTCN2017075440-appb-000006
Figure PCTCN2017075440-appb-000007
Figure PCTCN2017075440-appb-000008
注：“*”表示P<0.05，“**”表示P<0.01，均为与模型组相比。
由表3可见，记忆再现障碍模型组在记忆受损后动物由明室进入暗室的潜伏期明显缩短，其受电击的动物数和5min内出现的错误总次数也显著多于阴性对照组(P<0.01/0.05)，显示了记忆再现障碍。
多奈哌齐延长了小鼠由明室进入暗室的潜伏期(P<0.01)，受电击的动物数和5分钟内错误次数也显著少于模型组(P<0.01)，显示了改善记忆障碍的作用。供试品1明显延长了小鼠由明室进入暗室的潜伏期(P<0.05)，并显著降低了受电击的动物数和5min内出现的错误总次数(P<0.01/0.05)，显示出良好的改善记忆再现障碍的作用。
实施例10供试品2对乙醇诱导的小鼠记忆再现障碍影响
乙醇为中枢抑制剂，可抑制大脑皮层的神经功能活动，抑制动物的条件反射过程，使脑内蛋白质和RNA合成受阻，胆碱能和多巴胺等系统发生改变。在重测前给予，可明显干扰记忆的再现。乙醇价廉易得，在适宜的浓度下，结果稳定，易于重复，对中枢和一般运动功能无明显影响。有改善学习记忆的药物可减少乙醇所致记忆再现障碍小鼠24h后由明室到暗室的潜伏期及错误次数。
雄性ICR小鼠(上海西普尔-毕凯实验动物有限公司，动物合格证号：SCXK(沪)2008-0016)，经口灌胃(i.g.)给药，其中空白对照组和模型组均给予等体积0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，给药组给予250mg/kg供试品3，阳性药组给予1.6mg/kg盐酸多奈哌齐，每组10只，1次/天，10ml/kg体重，连续给药3周。末次给药后1h，以避暗法训练一次。将小鼠放入避暗箱内，背朝洞口放入明室，同时启动视屏分析装置，动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时自动停止。取出小鼠，视屏分析将记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24h后进行测试，测试前30min经口灌胃给予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)，空白对照组给予等体积生理盐水。视屏分析系统将摄制并自动记录动物所有相关数据，实验结果参见表4。
表4 供试品2对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响
Figure PCTCN2017075440-appb-000009
Figure PCTCN2017075440-appb-000010
注：“*”表示P<0.05，“**”表示P<0.01，均为与模型组相比。
由表4可见，记忆再现障碍模型组在记忆受损后动物由明室进入暗室的潜伏期明显缩短，其受电击的动物数和5min内出现的错误总次数也显著多于阴性对照组(P<0.01)，显示了记忆再现障碍。
多奈哌齐延长了小鼠由明室进入暗室的潜伏期(P<0.01)，受电击的动物数也显著少于模型组(P<0.05)，显示了改善记忆障碍的作用。供试品2明显延长了小鼠由明室进入暗室的潜伏期(P<0.05)，并显著降低了受电击的动物数和5min内出现的错误总次数(P<0.01/0.05)，显示出良好的改善记忆再现障碍的作用。
实施例11供试品3对东莨菪碱诱导的小鼠记忆获得障碍影响
东莨菪碱为M胆碱受体阻断剂，从而引发受试动物胆碱能神经受损型的记忆障碍。有改善学习记忆的药物可减少东莨菪碱造成记忆获得障碍小鼠24h后受电击的动物数，降低3min内的错误次数，以及缩短第一次跳下平台的潜伏期。训练前数小时至几分钟内给药可观察对学习成绩和记忆获得的影响。
雄性ICR小鼠(上海西普尔-毕凯实验动物有限公司，动物合格证号：SCXK(沪)2008-0016)，经口灌胃(i.g.)给药，其中空白对照组和模型组均给予等体积0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，给药组分别给予150mg/kg供试品3，阳性药组给予1.6mg/kg盐酸多奈哌齐，每组10只，1次/天，10ml/kg体重，连续给药3周。末次给药后1h，以避暗法训练一次。将小鼠放入避暗箱内，背朝洞口放入明室，同时启动视屏分析装置，动物穿过洞口进入暗室受到电击， 计时自动停止。取出小鼠，视屏分析将记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24h后进行测试，测试前30min经口灌胃给予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)，空白对照组给予等体积生理盐水。视屏分析系统将摄制并自动记录动物所有相关数据，实验结果参见表5。
表5 供试品3对东莨菪碱诱导的小鼠记忆获得障碍的影响
Figure PCTCN2017075440-appb-000012
注：“*”表示P<0.05，“**”表示P<0.01，均为与模型组相比。
由表5可见，模型组记忆受损24小时后第一次跳下平台的潜伏期明显缩短，受电击的动物总数和5min内动物的错误总次数均比阴性对照组明显增多(P<0.01/0.05)，显示了记忆障碍。
多奈哌齐明显延长了小鼠第一次跳下平台的潜伏期，并减少了受电击的动物总数和5min内的错误总次数，与模型组相比，P值小于0.01/0.05，显示了促进记忆障碍的改善。供试品3明显延长了小鼠第一次跳下平台的潜伏期，并显著减少了5min内的错误总次数，与模型组相比，P值小于0.05，提示供试品3具有记忆获得障碍改善作用。
实施例12供试品4和供试品5对乙醇诱导的小鼠记忆再现障碍影响
乙醇为中枢抑制剂，可抑制大脑皮层的神经功能活动，抑制动物的条件反射过程，使脑内蛋白质和RNA合成受阻，胆碱能和多巴胺等系统发生改变。在重测前给予，可明显干扰记忆的再现。乙醇价廉易得，在适宜的浓度下，结果稳定，易于重复，对中枢和一般运动功能无明显影响。有改善学习记忆的药物可减少乙醇所致记忆再现障碍小鼠24h后由明室到暗室的潜伏期及错误次数。
雄性ICR小鼠(上海西普尔-毕凯实验动物有限公司，动物合格证号： SCXK(沪)2008-0016)，经口灌胃(i.g.)给药，其中空白对照组和模型组均给予等体积0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，给药组分别给予150mg/kg及300mg/kg供试品4，或300mg/kg供试品5，阳性药组给予1.6mg/kg盐酸多奈哌齐，每组10只，1次/天，10ml/kg体重，连续给药3周。末次给药后1h，以避暗法训练一次。将小鼠放入避暗箱内，背朝洞口放入明室，同时启动视屏分析装置，动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时自动停止。取出小鼠，视屏分析将记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24h后进行测试，测试前30min经口灌胃给予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)，空白对照组给予等体积生理盐水。视屏分析系统将摄制并自动记录动物所有相关数据，实验结果参见表6。
表6 供试品4和供试品5对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响
Figure PCTCN2017075440-appb-000013
Figure PCTCN2017075440-appb-000014
注：“*”表示P<0.05，“**”表示P<0.01，均为与模型组相比。
由表6可见，记忆再现障碍模型组在记忆受损后动物由明室进入暗室的潜伏期明显缩短，其受电击的动物数和5min内出现的错误总次数也显著多于阴性对照组(P<0.01/0.05)，显示了记忆再现障碍。
多奈哌齐延长了小鼠由明室进入暗室的潜伏期(P<0.01)，受电击的动物数和5分钟内错误次数也显著少于模型组(P<0.05)，显示了改善记忆障碍的作用。供试品4明显延长了小鼠由明室进入暗室的潜伏期(P<0.05)，并显著降低了受电击的动物数和5min内出现的错误总次数(P<0.01/0.05)，显示出良好的改善记忆再现障碍的作用。供试品5明显延长了小鼠由明室进入暗室的潜伏期 (P<0.05)，并显著降低了受电击的动物数和5min内出现的错误总次数(P<0.05)，显示出良好的改善记忆再现障碍的作用。
上述试验结果表明，本发明新颖的褐藻多糖可显著显著改善哺乳动物空间记忆能力并可用于预防和/或治疗神经退行性疾病。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

  1. 一种植物多糖，其特征在于，所述的植物多糖是由单糖单元组成的杂多糖，并且所述的单糖单元包括(i)岩藻糖，(ii)甘露糖，以及(iii)任选的葡萄糖和/或半乳糖。
  2. 如权利要求1所述的植物多糖，其特征在于，所述的植物多糖为褐藻多糖。
  3. 如权利要求1所述的植物多糖，其特征在于，所述的植物多糖中甘露糖单元的摩尔含量≥50％,较佳地≥70％，更佳地≥80％，最佳地≥85％，按植物多糖中所有单糖单元的总量计。
  4. 如权利要求1～3中任一所述的植物多糖，其特征在于，所述的植物多糖选自下组：
    (a)一种植物多糖，其中所含的单糖的摩尔比为，岩藻糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖＝1～2∶20～30∶0.5～2∶1；
    (b)一种植物多糖，其中所含的单糖的摩尔比为，岩藻糖∶甘露糖∶半乳糖＝1～2∶20～40∶1；
    (c)一种植物多糖，其中所含的单糖的摩尔比为，岩藻糖∶甘露糖∶葡萄糖＝1～2∶25～30∶0.5～2；
    (d)一种植物多糖，其中所含的单糖的摩尔比为，岩藻糖∶甘露糖＝1～2∶20～30。
  5. 如权利要求1～3中任一所述的植物多糖，其特征在于，所述植物多糖具有选自下组的一个或多个特征：
    (1)糖残基摩尔比为岩藻糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖＝1.96:21.00:1.88:1.00；
    (2)分子量为140～300KDa；
    (3)分子量分布指数为1.2～2.0；
    (4)甘露糖的含量为25～40wt％，按植物多糖总重量计；
    (5)糖醛酸8～20wt％，按植物多糖总重量计；
    (6)蛋白质含量0.1～1wt％，按植物多糖总重量计；
    (7)硫酸基含量10～15wt％，按植物多糖总重量计；
    (8)连接方式包括选自下组的单糖连接方式：末端、1,2-、1,2,3-、1,2,3,4-和1,2,4,6-连接的甘露糖；末端、1,2,4-、1,4-、1,6-连接的半乳糖和葡萄糖；末端、1,2,4-、1,3-和1,4-连接的岩藻糖；
    (9)硫酸基位置选自下组：甘露糖的4位及6位，岩藻糖的2、3、4位。
  6. 一种褐藻多糖，其特征在于，所述褐藻多糖的分子量为100kDa-350kDa；并且所述褐藻多糖中含有以下单糖单元：甘露糖和岩藻糖，
    其中，按褐藻多糖中所有单糖单元的总量计，所述甘露糖的摩尔含量为50％-93％；以及所述岩藻糖的摩尔含量为3％-10％。
  7. 如权利要求6所述的褐藻多糖，其特征在于，所述褐藻多糖具有如下式所示的结构单元：
    Figure PCTCN2017075440-appb-100001
    Hex＝[Gal、Man或Glc]
    其中，m＝大于10的正整数。
  8. 如权利要求1所述的植物多糖或权利要求6所述的褐藻多糖的用途，其特征在于，用于制备一组合物，所述组合物用于(a)改善记忆能力；和/或(b)用于预防和/或治疗神经退行性疾病。
  9. 如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述神经退行性疾病选自下组：阿尔茨海默病、帕金森氏病、原发性侧索硬化或其组合；
    和/或，所述的记忆能力包括空间记忆能力。
  10. 一种药物组合物，其特征在于，包括：
    (a)如权利要求1所述的植物多糖或权利要求6所述的褐藻多糖；和
    (b)药学上可接受的载体。
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