CN107625800A - 一种白凤菜总黄酮提取物及其制备方法与抗炎镇痛的用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于药品或保健品领域，具体涉及一种白凤菜总黄酮提取物及其制备方法与抗炎镇痛的用途。该提取物中，以重量百分含量计，含有80～85％的芦丁。小鼠耳肿胀实验和大鼠角叉菜胶致足肿胀实验的实验结果表明，该提取物具有一定的抗炎作用；小鼠热板法实验和醋酸扭体实验的实验结果表明，该提取物高、中剂量具有较好的镇痛作用，因此，本发明白凤菜总黄酮提取物可以作为潜在的抗炎镇痛药物；本发明白凤菜总黄酮提取物的制备方法，在提取步骤后，通过选择特定组成、特定配比的酶组成的复合酶进行酶解，进一步通过大孔树脂萃取浓缩和大孔树脂分离纯化步骤，使得制备得到的白凤菜总黄酮提取物中芦丁的HPLC纯度可达80～85％。

Description

一种白凤菜总黄酮提取物及其制备方法与抗炎镇痛的用途

技术领域

本发明属于药品或保健品领域，具体涉及一种白凤菜总黄酮提取物及其制备方法与抗炎镇痛的用途。

背景技术

炎症是机体对外界不良刺激的一种防御性反应。在炎症过程中，各种炎性因子如前列腺素、5-羟色胺、缓激肽等，可直接或间接造成组织和细胞的破坏，引起疼痛，同时炎症组织因充血和渗出物增加造成局部肿胀，压迫神经末梢也引起疼痛。通常因感染引起的炎症是机体的防御反应，在一定程度上是有益的。但是，某些过敏反应如过敏性鼻炎、荨麻疹、抗基底膜性肾小球肾炎和自身免疫性疾病如溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等疾病中炎症均表现为严重的病理过程。

近年来，有许多关于具有抗炎镇痛作用的天然产物的报道，如：皂苷、多糖、生物碱、黄酮、香豆素等。

白凤菜(Gynura formosana Kitam.)是菊科菊三七属多年生草本植物，又名白背天葵、片仔癀草，其含有丰富的维生素、生物碱类以及黄酮类物质，是一种药食两用的植物。研究表明，白凤菜主要用于肺炎、肺癌、肝炎、肝硬化、高血压等疾病的治疗，其还有解热解毒的功效。

然而，目前，现有技术中尚没有白凤菜具有抗炎镇痛作用的相关报道，更没有白凤菜提取物具有抗炎镇痛作用的相关报道。

发明内容

为此，本发明提供一种白凤菜总黄酮提取物，进而提供其制备方法与用途。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：

本发明提供一种白凤菜总黄酮提取物，以重量百分含量计，含有80～85％的芦丁。

本发明还提供一种上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)提取：取白凤菜加入提取溶剂进行提取，调节提取液的pH值为4-8，得反应液；

(2)酶解：然后向反应液中加入复合酶进行酶解，30-50℃强制循环反应1-4小时，抽滤，收集滤液；

(3)萃取、浓缩：将滤液用大孔树脂A进行萃取，合并萃取液，将萃取液浓缩，得浓缩液；

(4)分离、纯化：将浓缩液离心，取上清液用大孔树脂B分离纯化，在波长为510nm下测定吸光度，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得。

优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述酶解步骤中，采用由木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶组成的复合酶进行酶解。

进一步优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述复合酶与所述白凤菜的重量之比为：1:5～1:3。

进一步优选地，白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述复合酶中，木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶三者的重量比为(0.5-1.5)：(2-5)：(1-3)；

进一步优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述复合酶中，木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶三者的重量比为1：3：2。

进一步优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，

所述大孔树脂A选自AB-8、DM-130、HZ841、ZH-00、ZH-01、ZH-02、ZH-03、CAD-40、CAD-45、BS-30中的至少一种；

所述大孔树脂B选自D-101、D-140、D-141、XAD-3、XAD-4、HP-20、HP-21、LD-605、LSA-10中的至少一种。

进一步优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述提取步骤中，提取溶剂为水，所述白凤菜与所述水的重量之比为1：(20-60)。

进一步优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述分离、纯化步骤中，洗脱溶剂为体积浓度为70-80％的乙醇水溶液，洗脱速度为3-15m/h。

进一步优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述分离、纯化步骤中，洗脱溶剂为体积浓度为75％的乙醇水溶液，洗脱速度为5m/h。

进一步优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述浓缩液中，白凤菜总黄酮的浓度为0.5mg/mL。

进一步优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述萃取、浓缩步骤中，将滤液加入至盛有大孔树脂A的提取罐中，在30℃、80-150rpm下搅拌6-24小时，过滤，以大孔树脂A的重量计，取吸附后的大孔树脂A加入10-30重量倍量的体积浓度为70-95％的乙醇溶液，然后在30℃、80-150rpm下搅拌6-24小时，过滤，即得萃取液。

进一步优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述提取步骤中，采用盐酸或氢氧化钠调节提取液的pH值为4-8。

进一步优选地，上述白凤菜总黄酮提取物的制备方法，所述干燥为冷冻干燥。

本发明还提供上述制备方法制备得到的白凤菜总黄酮提取物。

本发明还提供一种药物制剂，以上述白凤菜总黄酮提取物、或者上述制备方法制备得到的白凤菜总黄酮提取物为活性成分，按照常规工艺，加入常规辅料制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、贴膏剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂。

所述常规辅料为：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素纳等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000、PEG4000、虫蜡等。

本发明还提供上述白凤菜总黄酮提取物、上述制备方法制备得到的白凤菜总黄酮提取物、或者上述药物制剂在制备抗炎镇痛的药品或保健品中的应用。

本发明的技术方案具有如下优点：

(1)本发明提取分离得到一种含有80～85％的芦丁的白凤菜总黄酮提取物，小鼠耳肿胀实验和大鼠角叉菜胶致足肿胀实验的实验结果表明，该提取物具有一定的抗炎作用；小鼠热板法实验和醋酸扭体实验的实验结果表明，该提取物高、中剂量具有较好的镇痛作用，因此，本发明白凤菜总黄酮提取物可以作为潜在的抗炎镇痛药物；

(2)本发明白凤菜总黄酮提取物的制备方法，在提取步骤后，通过选择特定组成、特定配比的酶组成的复合酶在30-50℃下进行酶解，不仅避免了白凤菜总黄酮化合物的结构在高温下被破坏，而且使得白凤菜总黄酮化合物能够最大程度地被提取出来，进一步通过大孔树脂萃取浓缩和大孔树脂分离纯化步骤，使得白凤菜总黄酮化合物的提取率可达1.8％-2.0％，比现有方法中白凤菜总黄酮化合物的提取率提高可达30％以上，制备得到的白凤菜总黄酮提取物中芦丁的HPLC纯度可达80～85％。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：

图1是本发明实验例1中洗脱液的图谱；

图2是本发明实施例1制备的白凤菜总黄酮提取物的红外光谱图；

图3是本发明实施例1中芦丁对照品溶液的HPLC色谱图；

图4是本发明实施例1制备的白凤菜总黄酮提取物的HPLC色谱图。

具体实施方式

本发明以下实施例和实验例中，白凤菜采自福建省漳州市龙文区登科村，经鉴定为白凤菜。

实施例1

本实施例白凤菜总黄酮提取物按照以下方法制备而成：

(1)提取：取白凤菜100g，加入30重量倍量的水进行提取，用稀盐酸调节提取液的pH值为5，得反应液；

(2)酶解：然后向反应液中加入25g复合酶(该复合酶由重量比为1：3：2的木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶组成)进行酶解，40℃强制循环反应3小时，抽滤，收集滤液；

(3)萃取、浓缩：将滤液加入至盛有AB-8大孔树脂的提取罐中，在30℃、100rpm下搅拌12小时，过滤，以AB-8大孔树脂的重量计，取吸附后的AB-8大孔树脂加入20重量倍量的体积浓度为75％的乙醇溶液，然后在30℃、120rpm下搅拌12小时，过滤，即得萃取液，合并萃取液，将萃取液减压浓缩至白凤菜总黄酮的浓度为0.5mg/mL，得浓缩液；

(4)分离、纯化：将浓缩液10000rpm高速离心10分钟，取上清液加入装有大孔树脂D-101的层析柱内静止吸附60min，用体积浓度为75％的乙醇水溶液以5m/h的速度洗脱，在波长为510nm下测定吸光度，以吸光度值为纵坐标、以洗脱时间为横坐标作洗脱曲线图(其图谱如图1所示)，收集洗脱曲线中吸收峰范围内的洗脱液，浓缩、冷冻干燥，即得白凤菜总黄酮提取物。

经过计算，本实施例白凤菜总黄酮化合物的提取率为2.0％。

由图1可知，洗脱液在340min处出现一个明显的吸收峰，峰形较为单一，说明洗脱液中黄酮相对较纯。

A、本实施例白凤菜总黄酮提取物按照以下方法进行红外光谱鉴定：

取一定质量烘干后的芦丁标准品，以1：100加入烘干后的溴化钾，经研磨后制成固体压片，用傅立叶红外分光光度计在扫描范围4000-400cm^-1、分辨率4、扫描次数为4的条件下绘制红外光谱图；同法绘制纯化后的白背天葵提取物的红外光谱图，对比鉴定。结果如图2所示。

由图2可知，芦丁标准品和白凤菜总黄酮提取物的红外光谱分别在3685.455～3018.177cm^-1左右均出现宽而强的吸收峰，是-OH的伸缩振动峰，表明存在酚羟基或糖上的羟基，且数目较大；在2914.036cm^-1处出现弱吸收峰，是碳氢键的伸缩振动峰，说明饱和碳上的氢较少；在1654.694cm^-1处出现C＝O的伸缩振动中强峰，两者位置和峰型基本一致，说明提取物是黄酮类物质；在1371.88、1362.89cm^-1处出现羟基的弯曲振动峰；在804.80、810.56cm^-1处出现苯环邻位氢引起的吸收峰；在1010.07～696.62cm^-1处出现苯环上取代基位置引起的吸收峰，但峰位置不同，说明提取物与芦丁的羟基取代位置不同；这些表明，提取物中含有羟基、羰基以及不同位置取代的苯环等官能团，特征吸收峰基本一致。因此可确定提取物是黄酮类化合物。

B、按照以下方法通过液相色谱分析本实施例白凤菜总黄酮提取物中的芦丁的含量:

B1、液相色谱条件的确定

液相色谱条件:保护柱:Eclipse XDB-C18AnalyticalGuard Column(4.6×12.5mm，5μm)：ZOR BZX Eclipse XDB-C18(4.6×150mm，5μm)；流速：0.5mL/min；柱温：35℃；检测波长：368nm、254nm、210nm；进样体积：10μL；流动相:0.03％甲酸水溶液(A)，乙腈(B)；梯度洗脱程序如下：0～10min，20％B；10～12min，20％～24％B；12～20min，24％B；20～25min，24％～30％B；25～48min，30％B。

B2、对照品溶液的配置

准确称取芦丁0.001g，溶解于1mL甲醇中，制成1mg/mL的单一对照品溶液。并用一次性滤膜过滤，装入小试管中待用。

B3、测定

精密吸取对照品溶液、供试品溶液(实施例1制备的白凤菜黄酮提取物，配制成浓度为1μg/μL的甲醇溶液)，按照液相色谱检测条件分别进行检测分析。

对照品溶液的HPLC色谱图如图3所示，供试品溶液的HPLC色谱图如图4所示。

由图3可知，芦丁对照品溶液可在10分钟内完全分离，芦丁在本实验的色谱条件下，色谱基线基本平直，呈现色谱峰无拖尾现象，杂质也无干扰，且出峰较早，其保留时间为2.745min。

由图4，通过面积归一法计算可知，白凤菜提取物中芦丁的含量为81.29％。

实施例2

本实施例白凤菜总黄酮提取物按照以下方法制备而成：

(1)提取：取白凤菜100g，加入20重量倍量的水进行提取，用稀氢氧化钠溶液调节提取液的pH值为8，得反应液；

(2)酶解：然后向反应液中加入20g复合酶(该复合酶由重量比为0.5：5：1的木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶组成)进行酶解，30℃强制循环反应4小时，抽滤，收集滤液；

(3)萃取、浓缩：将滤液加入至盛有DM-130大孔树脂的提取罐中，在30℃、80rpm下搅拌24小时，过滤，以DM-130大孔树脂的重量计，取吸附后的DM-130大孔树脂加入10重量倍量的体积浓度为95％的乙醇溶液，然后在30℃、80rpm下搅拌24小时，过滤，即得萃取液，合并萃取液，将萃取液减压浓缩至白凤菜总黄酮的浓度为0.5mg/mL，得浓缩液；

(4)分离、纯化：将浓缩液6000rpm高速离心8分钟，取上清液加入装有大孔树脂HP-21的层析柱内静止吸附60min，用体积浓度为80％的乙醇水溶液以3m/h的速度洗脱，在波长为510nm下测定吸光度，以吸光度值为纵坐标、以洗脱时间为横坐标作洗脱曲线图，收集洗脱曲线中吸收峰范围内的洗脱液，浓缩、冷冻干燥，即得白凤菜总黄酮提取物。

经过计算，本实施例白凤菜总黄酮化合物的提取率为1.82％。

按照实施例1中“B项下”测定本实施例白凤菜总黄酮提取物中的芦丁。通过测定分析可知，HPLC图谱中，本实施例白凤菜总黄酮提取物中的芦丁含量为80％。

实施例3

本实施例白凤菜总黄酮提取物按照以下方法制备而成：

(1)提取：取白凤菜100g，加入60重量倍量的水进行提取，用稀盐酸调节提取液的pH值为4，得反应液；

(2)酶解：然后向反应液中加入32g复合酶(该复合酶由重量比为1.5：2：3的木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶组成)进行酶解，50℃强制循环反应1小时，抽滤，收集滤液；

(3)萃取、浓缩：将滤液加入至盛有ZH-01大孔树脂的提取罐中，在30℃、150rpm下搅拌6小时，过滤，以ZH-01大孔树脂的重量计，取吸附后的ZH-01大孔树脂加入30重量倍量的体积浓度为70％的乙醇溶液，然后在30℃、150rpm下搅拌6小时，过滤，即得萃取液，合并萃取液，将萃取液减压浓缩至白凤菜总黄酮的浓度为0.5mg/mL，得浓缩液；

(4)分离、纯化：将浓缩液8000rpm高速离心5分钟，取上清液加入装有大孔树脂XAD-3的层析柱内静止吸附60min，用体积浓度为70％的乙醇水溶液以15m/h的速度洗脱，在波长为510nm下测定吸光度，以吸光度值为纵坐标、以洗脱时间为横坐标作洗脱曲线图，收集洗脱曲线中吸收峰范围内的洗脱液，浓缩、冷冻干燥，即得白凤菜总黄酮提取物。

经过计算，本实施例白凤菜总黄酮化合物的提取率为1.91％。

按照实施例1中“B项下”测定本实施例白凤菜总黄酮提取物中的芦丁。通过测定分析可知，HPLC图谱中，本实施例白凤菜总黄酮提取物中的芦丁含量为85％。

实验例1白凤菜总黄酮提取物的抗炎镇痛研究

1、实验目的

通过小鼠耳肿胀、大鼠足趾角叉菜胶致肿法观察白凤菜总黄酮提取物的抗炎作用；通过热板法、醋酸扭体实验观察白凤菜总黄酮提取物的镇痛作用。

2、实验材料

2.1实验动物

清洁级昆明小鼠60只，雄性，26±3g；清洁及SD大鼠60只，雄性，200±20g；清洁级昆明小鼠100只，20±2g，其中75只为雌性，25只为雄性，均饲养于空调室内，室温(22±2)℃，湿度(60±5)％，喂标准颗粒饲料，自由饮水和摄食。

2.2药物

白凤菜总黄酮提取物，复方醋酸地塞米松乳膏(江西吉安三力制药有限公司，批号：131202)；布洛芬缓释胶囊(福建太平洋制药有限公司，批号：140302)，地塞米松磷酸钠注射液(福建海王福药制药有限公司，批号：1402141)，二甲苯，角叉菜胶，醋酸。

2.3实验器材

打孔器，电子称，鼠笼，灌胃针，分析天平，足趾肿胀仪，智能热板仪(YLS-6A，山东省医学科学院设备站)。

3、实验内容

3.1供试药物

按照实施例1的方法制备白凤菜总黄酮提取物作为供试药物。

3.2抗炎实验

3.2.1小鼠耳肿胀实验

雄性昆明小鼠60只，体重约为26±3g，随机分为5组，分别为模型对照组、阳性组、白凤菜总黄酮提取物高、中、低剂量组。阳性组适量涂抹地塞米松软膏，白凤菜总黄酮提取物高、中、低剂量组分别按照24mg/10mL、12mg/10mL、6mg/10mL灌服白凤菜提取物，模型对照物灌服等体积的生理盐水，连续7天，于末次给药1h后，将0.1mL二甲苯涂布于小鼠右耳两面，左耳不涂作对照。造模1h后，处死小鼠，沿轮廓耳线剪下耳片，用打孔器分别在左右耳同一部位打下圆耳片，分析天平上称重，计算左、右耳片重量之差为肿胀度。

3.2.2大鼠足跖角叉菜胶致肿实验

大鼠随机分为5组，分别为模型对照组、阳性组、白凤菜总黄酮提取物高、中、低剂量组。阳性组腹腔注射适量地塞米松注射液，白凤菜总黄酮提取物高、中、低剂量组按照24mg/10mL、12mg/10mL、6mg/10mL灌服白凤菜提取物，模型对照物灌服等体积的生理盐水，连续7天，1次/天，末次给药1h后，左后足跖腱膜下，皮下注射1％角叉菜胶(灭菌NS配制)100μL，采用容积法分别测量造模前及造模后6h大鼠左后足跖至踝关节部的容积。

3.3镇痛实验

3.3.1热板实验

雌性昆明小鼠60只，体重约为20±2g，首先进行实验前的痛阈筛选，方法如下：将小鼠置于55℃±0.5℃的热板仪上，记录器足底接触热板到出现舔后足的时间，即热板反应潜伏期，作为痛阈指标，筛选出痛阈值在5-30s的合格小鼠做正式试验，痛阈值<5s或>30s者以及喜跳跃者剔除。

将符合标准的小鼠随机分为5组，分别为模型对照组、阳性组、白凤菜总黄酮提取物高、中、低剂量组。阳性组给予布洛芬混悬液(0.0012g/10g)，白凤菜总黄酮提取物高、中、低剂量组分别按照24mg/10mL、12mg/10mL、6mg/10mL灌服白凤菜提取物，模型对照组灌服等体积的生理盐水，3h后再次灌胃，于给药后0.5h、1h取小鼠置于热板仪中，加热后作为热刺激，记录小鼠自投入热板至出现舔足后的时间(s)作为该小鼠的痛阈值，痛阈值超过60s，即停止测试而按60s计。

3.3.2醋酸扭体实验

热板实验结束，各组随机抽取6只雌性小鼠用于扭体实验。另取雄性昆明小鼠30只，体重20±2g，随机分组，每组10只(雌性各半)，即空白对照组、阳性组、白凤菜总黄酮提取物低、中、高剂量组。各组灌胃给药剂量同“3.3.1热板实验”，给药后，每只小鼠以0.2mL/10g腹腔注射0.6％冰醋酸溶液，观察潜伏期(小鼠第一次出现扭体反应的时间)和第一次出现扭体反应后记录10min内的扭体次数。

3.4数据统计分析

所有实验结果的数据以均数±标准差表示，所有数据分析在SPSS20.0计软件包上进行，以单因素方差分析进行多组间差异的比较，以Dunnett-t检验比较两组间均数的差异；P<0.05差异表示有统计学差异。

4、实验结果

4.1小鼠耳肿胀实验

各组小鼠耳肿胀实验的实验结果如表1所示。

表1各组小鼠耳肿胀实验的实验结果

组别	鼠数(n)	剂量(mg/10mL)	耳肿胀度(mg)
				模型对照组	12	-	8.45±1.32
阳性组	12	-	5.64±1.20
				白凤菜总黄酮提取物低剂量组	12	6	7.08±1.23
白凤菜总黄酮提取物中剂量组	12	12	6.19±0.60
				白凤菜总黄酮提取物高剂量组	12	24	5.87±1.08

由表1可知，与模型对照组相比，阳性组和白凤菜总黄酮提取物高、中、低三种剂量均能降低二甲苯致小鼠耳肿胀度；而且，白凤菜总黄酮提取物各剂量组呈良好的量效关系。

4.2大鼠足趾肿胀实验

各组大鼠足跖角叉菜胶致肿实验的实验结果如表2所示。

表2各组大鼠足跖角叉菜胶致肿实验的实验结果(mL，x±s)

注：与模型组相比，*P<0.05

由表2可知，与模型对照组相比，给药6h时，阳性组和白凤菜总黄酮提取物高、中、低剂量组均能减少小鼠足体积，但白凤菜总黄酮提取物低剂量组与模型对照组相比无统计学差异，白凤菜总黄酮提取物中、高剂量有明显统计学差异(P<0.05)。

4.3小鼠热板法实验

各组小鼠热板法实验的实验结果如表3所示。

表3各组小鼠热板法实验的实验结果(x±s)

注：与同一时间的空白组相比，*P<0.05

由表3可知，给药后，除空白组痛阈值外，各组痛阈值均有一定程度的延长，30min时，与空白组相比，白凤菜总黄酮提取物中、高剂量组的痛阈值明显延长(P<0.05)，表现出较好的镇痛作用。给药60min时，与空白组相比，各组的痛阈值延长不明显，无统计学差异。

4.4小鼠醋酸扭体实验

各组小鼠醋酸扭体实验的实验结果如表4所示。

表4各组小鼠醋酸扭体实验的实验结果(x±s)

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

由表4可知，(1)模型组出现了明显的扭体反应，且潜伏时间短，频率较高，表明造模成功；(2)与模型组相比，白凤菜总黄酮提取物低剂量组潜伏时间和扭体次数无明显差异，但白凤菜高剂量组较空白组潜伏时间延长，扭体次数显著减少，具有明显的统计学差异(P<0.01)，白凤菜总黄酮提取物中剂量组潜伏时间略有延长，但无统计学差异，扭体次数显著减少，具有明显的统计学差异(P<0.05)；这表明，白凤菜总黄酮提取物高、中剂量组对小鼠醋酸扭体镇痛作用显著。

5、实验结论

小鼠耳肿胀实验和大鼠角叉菜胶致足肿胀实验的实验结果表明，白凤菜总黄酮提取物具有一定的抗炎作用；小鼠热板法实验和醋酸扭体实验的实验结果表明，白凤菜总黄酮提取物高、中剂量具有较好的镇痛作用。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种白凤菜总黄酮提取物，其特征在于，以重量百分含量计，含有80～85％的芦丁。

2.一种权利要求1所述的白凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取：取白凤菜加入提取溶剂进行提取，调节提取液的pH值为4-8，得反应液；

(2)酶解：然后向反应液中加入复合酶进行酶解，30-50℃强制循环反应1-4小时，抽滤，收集滤液；

(3)萃取、浓缩：将滤液用大孔树脂A进行萃取，合并萃取液，将萃取液浓缩，得浓缩液；

(4)分离、纯化：将浓缩液离心，取上清液用大孔树脂B分离纯化，在波长为510nm下测定吸光度，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得。

3.根据权利要求2所述的白凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，

所述酶解步骤中，采用由木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶组成的复合酶进行酶解；

所述复合酶与所述白凤菜的重量之比为：1:5～1:3。

4.根据权利要求2或3所述的白凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，所述复合酶中，木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶三者的重量比为(0.5-1.5)：(2-5)：(1-3)。

5.根据权利要求4所述的白凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，所述复合酶中，木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶三者的重量比为1：3：2。

6.根据权利要求2-5任一项所述的白凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，

所述大孔树脂A选自AB-8、DM-130、HZ841、ZH-00、ZH-01、ZH-02、ZH-03、CAD-40、CAD-45、BS-30中的至少一种；

所述大孔树脂B选自D-101、D-140、D-141、XAD-3、XAD-4、HP-20、HP-21、LD-605、LSA-10中的至少一种。

7.根据权利要求2-6任一项所述的白凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，

所述提取步骤中，提取溶剂为水，所述白凤菜与所述水的重量之比为1：(20-60)。

8.根据权利要求2-7任一项所述的白凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，

所述分离、纯化步骤中，洗脱溶剂为体积浓度为70-80％的乙醇水溶液，洗脱速度为3-15m/h；

所述浓缩液中，白凤菜总黄酮的浓度为0.5mg/mL。

9.一种药物制剂，其特征在于，以权利要求1所述的白凤菜总黄酮提取物、或者权利要求2-8任一项所述的制备方法制备得到的白凤菜总黄酮提取物为活性成分，按照常规工艺，加入常规辅料制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、贴膏剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂。

10.权利要求1所述的白凤菜总黄酮提取物、权利要求2-8任一项所述的制备方法制备得到的白凤菜总黄酮提取物、或者权利要求9所述的药物制剂在制备抗炎镇痛的药品或保健品中的应用。