CN104013659A - 一种提纯的雪菊黄酮片剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提纯的雪菊黄酮片剂及其制备方法。以粉碎的雪菊为原料,将雪菊粉加水后超声处理,在55℃,15min,160W,再加入2.5%(G/G)生物复合酶,经50-55℃酶解3h,经灭酶、离心、后经AB-8大孔树脂吸附解析,AB-8大孔树脂用量为雪菊黄酮提取液的1/15(G/V)倍进行吸附,再用15倍的70%乙醇解析洗脱收集洗脱液,液浓缩后加入β-环糊精,麦芽糊精,β-环糊精和麦芽糊精(1:1)的与固形物的质量比为2:3,粉粒中加的物质与粉粒的质量比为7:3,其中β-环糊精占70%,麦芽糊精占30%,再加入2%的木糖醇和1%的硬脂酸镁,制备的雪菊黄酮片剂具有抑菌、抗氧化作用及增强免疫力。
Description
技术领域
本发明涉及片剂制备技术领域。具体的说,本发明涉及一种高效提纯雪菊黄酮并制成片剂方法技术领域。
背景技术
新疆昆仑雪菊学名双色金鸡菊,属菊科金鸡菊属一年生草本植物,又名“血菊”,维吾尔语“古丽恰尔”,是目前新疆唯一与雪莲齐名,具有独特功效的稀有高寒植物。昆仑雪菊富含有黄酮类、皂甙类、氨基酸类物质,还含有蛋白质、糖类、生物碱、有机酸、酚类、蒽醌类、挥发油、油脂、内酯及香豆素类等活性成分,具有调节三高、消除疲劳、减肥养颜、抗菌消炎、调节免疫力、抗氧化衰老、营养心肌、改善睡眠质量等功效。雪菊是药食两用植物,除药用外,也可以被作为食品工业的原料,加工成各种高级饮料和各种营养保健食品。雪菊的功效与其所含的黄酮成分有很大的关系。近年随着人民生活水平的提高,在崇尚自然的今天,人们对于天然植物有效成分的需求日益增多。雪菊与黄酮的功效有很大的相关性,多数药理研究表明雪菊的药理功效就是雪菊黄酮的作用,揭示了雪菊黄酮类成分就是雪菊的主要活性成分。
目前,雪菊提取的研究主要集中在乙醇回流法,近年来出现了超声、微波新型辅助提取技术的研究,未见报道有生物复合酶解联用超声处理技术提取雪菊黄酮;黄酮纯化的研究主要集中在柱层析技术的研究,主要利用大孔树脂柱,纯度高,但以雪菊黄酮为主的相应的产品在市场上很少出现,特别是片剂,本研究开发一种效率高、成本低的新提取方法与片剂产品具有重要意义。
发明内容
针对目前国内外未见采用生物复合酶解联用超声处理技术提取雪菊功能性黄酮的现状。本发明的目的是采用生物复合酶解联用超声处理技术提取并采用AB-8大孔树脂静态吸附解析技术纯化雪菊黄酮并制成片剂的方法,不仅解决了目前提取方法提取率低、产品生物活性低、无以黄酮为主的片剂产品等问题,还为雪菊加工企业提升技术水平提供了切实可行的方法。
本发明采用的技术方案:
选用清洗干净的雪菊经粉碎加水后进行超声处理后,加入复合酶酶解,酶解后进行灭酶,离心取上清液,得到黄酮粗提取液;取AB-8大孔树脂放入粗提取液中,在摇床上一定时间吸附,取出大孔树脂再用70%乙醇解析洗脱收集洗脱液;洗脱液浓缩后加入β-环糊精,麦芽糊精,β-环糊精与麦芽糊精的壁材能够有效的保护提取液的有效成分,经喷雾干燥,得粉粒获得微胶囊的主要成分,粉粒中加入β-环糊精,麦芽糊精,木糖醇,硬脂酸镁,进行压片制备获得雪菊黄酮片剂。
一种提纯的雪菊黄酮片剂及其制备方法
本发明具体提供了一种提纯的雪菊黄酮片剂的制备方法,具体步骤如下:
(1)把干净雪菊放入粉碎机中粉碎30s过60目的筛子,以质量体积比1:30将雪菊粉加入水,后进行超声处理,经在55℃,15min,160W超声处理后。
(2)超声处理后,加入复合酶酶解,按重量百分比计加入2.5%生物复合酶,在50-55℃的条件下酶解3h,酶解后进行灭酶,灭酶在100℃沸水浴中5min,离心取上清液,得到雪菊黄酮粗提取液。
(3)取AB-8大孔树脂放入上述步骤(2)制备的雪菊黄酮粗提取液中,AB-8大孔树脂用量与雪菊黄酮提取液的用量按质量体积比1:15混匀,树脂吸附提取液的有效成分,吸附在摇床上115r/min,37℃,吸附10h,取出大孔树脂再用70%的乙醇解析洗脱收集洗脱液。
(4)将洗脱液浓缩后加入β-环糊精和麦芽糊精,经喷雾干燥,得粉粒,此粉粒是微胶囊的成分,粉粒中加入β-环糊精、麦芽糊精、木糖醇和硬脂酸镁,通过进行压片制备获得雪菊黄酮片剂。
(5)β-环糊精和麦芽糊精的用量总质量与浓缩液中的黄酮及有效成分的质量比为2:3,β-环糊精和麦芽糊精按质量比1:1配比混合,β-环糊精与麦芽糊精的壁材能够有效的保护提取液的有效成分,混合液经喷雾干燥得到粉粒中加人β-环糊精,麦芽糊精,木糖醇,硬脂酸镁与粉粒的质量比为7:3,其中β-环糊精占70%,麦芽糊精占30%,再加入2%的木糖醇,加入1%的硬脂酸镁。
本发明中,生物复合酶按照纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶按照质量比计以 2:2:3混合。
同时,本发明提供一种提纯的雪菊黄酮片剂,通过如上方式制备方法获得,具体而言,按照重量百分比计,雪菊黄酮片剂含有总黄酮13.8%、β-环糊精53.3%、麦芽糊精26.2%、木糖醇2%、硬脂酸镁1%、另有3.7%为多糖生物碱蛋白质类物质,具体为提取中残留的多糖、蛋白质、生物碱等。
本发明采用生物复合酶解联用超声处理技术提取,并采用AB-8大孔树脂静态吸附解析技术纯化雪菊黄酮并制成片剂的方法,不仅解决了目前提取方法提取率低、产品生物活性低、无以黄酮为主的片剂产品等问题,还为雪菊加工企业提升技术水平提供了切实可行的方法。
本发明采用的粉碎、温水提取、酶处理、超声处理、离心分离、静态吸附、解析、旋转蒸发浓缩、喷雾干燥、压片等等技术环节具有上下一体,紧密不可分割的特点,特别是黄酮提取率技术,由于雪菊特有的结构在提取中经粉碎有利于提取,经过单因素多因素和响应面实验,总黄酮的提取率大幅度的提高,特别在超声复合酶联用的技术更能增加提取率,黄酮大多数在细胞内部,经超声可以破坏细胞结构大大的释放黄酮,在超声中由于不完全,可能造成浪费,再加入复合酶可以有效提高细胞的破碎,增大总黄酮的提取率。整个提取过程中温度控制在50度左右不会破坏黄酮的有效成分,纯化采用了技术较为成熟的静态吸附解析,动态纯化耗时长费用高,经多次实验证明AB-8大孔树脂吸附解析效果好,纯化率高,有利于反复利用,节约成本,能达到预期的效果。选择合适的壁材有利于保护有效成分提高包埋率,选择的β-环糊精、麦芽糊精经实验证明包埋率高,进行喷雾干燥的选择有利于保护有效成分,压片中加入β-环糊精,麦芽糊精,木糖醇,硬脂酸镁,其中各物质的含量一定,能保持片剂的状态和口感。通过选用合适的工艺和相应的技术参数,利用技术手段合理的提取方式,以及通过采用合理的工艺制备片剂具有重要的作用,对于本领域普通技术人员不通过科学的试验,合理的科学组配,随意采用常见的提取方法、纯化技术、加入壁材影响总黄酮的含量及功效、成本等。本发明依据现有技术通过不断科学研究及无数次实验得出制备本发明提供的雪菊黄酮片剂,本发明制备的雪菊黄酮片剂具有如下典型的质量指标及相应的口感指标:
1.感官指标:色泽为褐色,具有雪菊特有的香味,片剂形态完整,表面光滑,组织细腻紧密。
2.理化指标:雪菊黄酮片剂含有总黄酮13.8%、β-环糊精53.3%、麦芽糊精26.2%、木糖醇2%、硬脂酸镁1%、其中有3.7%为提取中残留的水、多糖、蛋白质、生物碱等。
本发明提供的雪菊黄酮片剂的方法具有纯度高和功效好等多种优越性,对开发一种雪菊黄酮片剂具有重要意义;对于物质的效价分析,目前的研究多集中在某种物质中单一成分具有的功能性,而对于产品具有的功效的研究很少见,但是进入市场的是以产品的方式,因此本发明制备的雪菊黄酮片剂产品的功效更加具有价值。本发明具体采用本发明提供的工艺制备的雪菊黄酮片剂产品的效价分析:
一是本发明制备的雪菊黄酮片剂具有明显的抑菌作用:将片剂粉碎加入水溶解制成溶液,在涂布有均匀的黑曲霉平板和涂布有均匀的金黄色葡萄球菌的平板内,将浸有片剂溶解液的滤纸片贴在平板上以浸有无菌生理盐水的滤纸片作为对照。带有金黄色葡萄球菌的平板在37℃下培养24h,黑曲霉在28℃下培养48h。通过观察并测定抑菌圈的直径来比较抑菌效果。实验结果表明,本发明制备的雪菊黄酮片剂的抑菌作用显著(p<0.05)。
二是本发明制备的雪菊黄酮片剂的增强机体免力:首先采用环磷酰胺( cyclophosphamide ,Cy ) 50mg/kg腹腔给药,每天1次,连续2天,诱导大鼠免疫低下模型。然后对大鼠进行30d的灌胃实验,片剂粉碎加入水中溶解得到雪菊黄酮溶解液,实验大鼠灌胃雪菊黄酮溶解液,对照组灌胃生理盐水。30d后测定各项免疫指标:体重及免疫器官/体重的检验,NK细胞活性检验,单核-巨噬细胞吞噬功能检测。实验结果表明:本发明制备的雪菊黄酮片剂具有提高机体免疫力的能力。
三是本发明制备的雪菊黄酮片剂的抗氧化作用:测定了雪菊黄酮片剂对自由基DPPH、羟基自由基的清除能力,以及雪菊黄酮片剂的还原能力。以Vc作为对照。实验中Vc的氧化能力与雪菊黄酮片剂相当,说明雪菊黄酮片剂对自由基DPPH、羟基自由基具有一定的清除能力以及一定的还原能力。实验结果表明:本发明制备的雪菊黄酮片剂对自由基DPPH、羟基自由基具有明显的清除能力和还原能力。
通过上述提供的技术方案,与现有技术相比,本发明的具体发明内容可以达到以下显著的技术效果:
通过本发明提供的雪菊黄酮片剂制备方法,利用生物复合酶解联用超声处理提取技术提纯的黄酮得率为13.8%,较传统水浴浸提技术的得率9%,有明显的提高。采用本发明提供的雪菊黄酮片剂制备方法获得雪菊黄酮片剂能最大保持有效成分,经提取、纯化、喷雾干燥、压片,在提取、纯化中没有经过高温,不会破坏有效成分,在液体中加入壁材,再经过喷雾干燥与压片中最大程度的保护有效成分,经过此工艺能最大的提取和保留有效成分。此片剂经功能性实验证明:具有抑菌、抗氧化作用及增强免疫力。
附图说明
图1显示为雪菊黄酮片剂的制备工艺流程图。
具体实施方式
本发明中涉及到的主要原辅材料、试剂和仪器设备:
主要原辅材料:雪菊、β-环糊精,麦芽糊精,木糖醇,硬脂酸镁、木糖醇、硬脂酸镁。
主要仪器与试剂:粉碎机、恒温罐、超声破碎仪、喷雾干燥机、压片机、无水乙醇、纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶酶。
本发明中选用的所有试剂和仪器都为本领域熟知选用的,但不限制本发明的实施,其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。
实施例一:提纯的雪菊黄酮片剂的制备
参见附图1,雪菊黄酮片剂通过以下具体步骤制备获得:
(1)把干净雪菊放入粉碎机中粉碎30s过60目的筛子,以质量体积比1:30将雪菊粉加入水,后进行超声处理,经在55℃,15min,160W超声处理后。
(2)超声处理后,加入复合酶酶解,按重量百分比计加入2.5%生物复合酶,在50-55℃的条件下酶解3h,酶解后进行灭酶,灭酶在100℃沸水浴中5min,离心取上清液,得到雪菊黄酮粗提取液。
(3)取AB-8大孔树脂放入上述步骤(2)制备的雪菊黄酮粗提取液中,AB-8大孔树脂用量与雪菊黄酮提取液的用量按质量体积比1:15混匀,树脂吸附提取液的有效成分,吸附在摇床上115r/min,37℃,吸附10h,取出大孔树脂再用70%的乙醇解析洗脱收集洗脱液。
(4)将洗脱液浓缩后加入β-环糊精和麦芽糊精,经喷雾干燥,得粉粒,此粉粒是微胶囊的成分,粉粒中加入β-环糊精、麦芽糊精、木糖醇和硬脂酸镁,通过进行压片制备获得雪菊黄酮片剂。
(5)β-环糊精和麦芽糊精的用量总质量与浓缩液中的黄酮及有效成分的质量比为2:3,β-环糊精和麦芽糊精按质量比1:1配比混合,β-环糊精与麦芽糊精的壁材能够有效的保护提取液的有效成分,混合液经喷雾干燥得到粉粒中加人β-环糊精,麦芽糊精,木糖醇,硬脂酸镁与粉粒的质量比为7:3,其中β-环糊精占70%,麦芽糊精占30%,再加入2%的木糖醇,加入1%的硬脂酸镁。
本发明中,生物复合酶按照纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶按照质量比计以 2:2:3混合。
通过上述提供的雪菊黄酮片剂制备方法,利用生物复合酶解联用超声处理提取技术提纯的黄酮得率为13.8%,较传统水浴浸提技术的得率9%,有明显的提高。
经上述实施例制备的雪菊黄酮片剂,按照重量百分比计,雪菊黄酮片剂含有总黄酮13.8%、β-环糊精53.3%、麦芽糊精26.2%、木糖醇2%、硬脂酸镁1%、另有3.7%为多糖生物碱蛋白质类物质,具体为提取中残留的多糖、蛋白质、生物碱等。
实施例二:提纯的雪菊黄酮片剂的制备
为了进一步说明本发明,以600g雪菊为例。
(1)挑选600g匀整度高、花骨饱满、花蕊花瓣色泽橙黄、不含叶梗、花蕊细末或其他非雪菊类的杂质的干制雪菊,将选好的600g雪菊在万能粉碎机内粉碎,粉碎后的雪菊粉末的粒度在100目左右。
(2)在粉碎好的雪菊粉末中加入18L的蒸馏水,用搅拌机搅拌均匀,放入到已经加热到55℃恒温水浴锅内预热半小时。
(3)将上述步骤(2)处理后的溶液利用超声波破碎仪进行超声处理,超声处理时的温度为55℃,时间15min,功率160w;
(4)将上述步骤(3)处理后的雪菊溶液倒入到恒温罐,在恒温罐内加入纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶同时搅拌。纤维素酶为6g,果胶酶的用量6g,木瓜蛋白酶的用量为7.5g,酶促反应3h,温度55℃,pH值自然。
(5)酶反应结束后将酶反应器内的雪菊溶液灭酶处理,灭酶的温度为100℃,时间为5min,使溶液内的酶失活。
(6)将步骤(5)结束后的浸提液进行离心处理,取上清液。
(7)吸附与解析:称取1.2kg的AB-8大孔树脂,放入18L的提取液中,并不断的摇动,摇动12h后,过滤取树脂加入70%的乙醇18L解析,再过滤取上清液。
(8)浓缩:将18L解析液旋转蒸发,并不断测液体的固体含量,达到15%即可。
(9)干燥:将液浓缩后加入35gβ-环糊精,35g麦芽糊精,进行喷雾干燥得177g的粉粒。
(10)制片:将粉粒中加的物质与粉粒的质量比为7:3,加入289.1gβ-环糊精、123.9g麦芽糊精,再加入12.2g木糖醇,加入6g硬脂酸镁,在压片机中得压片608g。
实施例三:提纯的雪菊黄酮片剂的效价分析实验
提纯的雪菊黄酮片剂具有抑菌作用:
将上述实施例制备的雪菊黄酮片剂粉碎融入水中得溶解液,在无菌操作台上将金黄色葡萄球菌均匀的涂布在盛有牛肉膏蛋白胨的平板培养基上,将平板分成四份,在一对对角的位置将浸有溶解液的滤纸片贴在平板上,另一对对角的位置将浸有无菌生理盐水的滤纸片贴在平板上。做三个平行。将平板在37℃下的恒温培养箱内培养24h。通过观察并测定抑菌圈的直径来比较抑菌作用的大小。实验结果表明,雪菊黄酮片剂溶液的抑制金黄色葡萄球菌生长的作用显著(p<0.05)。同理,处理黑曲霉。黑曲霉的培养基为马铃薯蔗糖培养基。黑曲霉在28℃下培养48h。实验结果表明,雪菊黄酮片剂溶液的抑制黑曲霉生长的作用显著(p<0.05)。因此,本发明制备的雪菊黄酮片剂就有明显的抑菌作用。
提纯的雪菊黄酮片剂的提高机体免疫力的动物实验:
大鼠为昆明种大鼠,体重在150-200g,首先采用环磷酰胺( cyclophosphamide ,Cy ) 50mg/kg腹腔给药,每天1次,连续2天,诱导大鼠免疫低下模型。将10g雪菊黄酮片剂粉碎溶解20ml水中制成浑浊液,每天给小鼠灌胃20ml的浑浊液,连续灌胃30d,阴性对照组给予去离子水。实验测定的指标:免疫器官、半数溶血值及PFC的测定:给小鼠腹腔注射2%(v/v)绵羊红细胞5d后,摘其眼球取血,进行血清半数溶血值的测定,然后处死动物,取胸腺,脾脏称重,计算脏/体的比值;脾淋巴细胞的转化实验:小鼠无菌取脾,制成脾细胞悬液,用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×1000000个/ml,按照MTT法在570nm波长测定吸光度值,用加ConA孔的吸光度值减去不加ConA孔的吸光度值代表淋巴细胞的增殖能力;腹腔内巨噬细胞吞噬功能的测定:给小鼠腹腔注射2%(v/v)绵羊红细胞4d后,经腹腔注射给予小鼠2mlHanks液,立即处死动物,轻柔腹部30s,抛开腹壁,暴露腹腔。取腹腔洗液0.25ml滴于载玻片上,与油镜下对每只动物计数100个巨噬细胞,计算吞噬率和吞噬指数。实验结果表明:细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能三方面结果为阳性。因此本发明制备的雪菊黄酮片剂可以提高机体的免疫功能。
提纯的雪菊黄酮片剂的抗氧化作用:
雪菊黄酮片剂对自由基DPPH、羟基自由基的清除能力,以及雪菊黄酮片剂的还原能力。以Vc作为对照。雪菊黄酮片剂的抗氧化能力与Vc相当,说明雪菊黄酮片剂对自由基DPPH、羟基自由基具有一定的清除能力以及一定的还原能力。实验结果表明:本发明制备的雪菊黄酮片剂对自由基DPPH、羟基自由基具有明显的清除能力和还原能力。
以上阐述本发明中的实施例,并不是对本发明作其它形式上的限制,本专业的人员可以对上述阐述的技术内容进行变更等效实施例。但是只要是没有脱离本发明技术方案内容,根据本发明的技术实质,只是对以上实例进行简单修改、等同变化与改型,仍然属于本发明技术的保护范围。
Claims (3)
1.一种提纯的雪菊黄酮片剂的制备方法,其特征在于,所述的具体制备方法步骤如下:
(1)把干净雪菊放入粉碎机中粉碎30s过60目的筛子,以质量体积比1:30将雪菊粉加入水,后进行超声处理,经在55℃,15min,160W超声处理后;
(2)超声处理后,加入复合酶酶解,按重量百分比计加入2.5%生物复合酶,在50-55℃的条件下酶解3h,酶解后进行灭酶,灭酶在100℃沸水浴中5min,离心取上清液,得到雪菊黄酮粗提取液;
(3)取AB-8大孔树脂放入上述步骤(2)制备的雪菊黄酮粗提取液中,AB-8大孔树脂用量与雪菊黄酮提取液的用量按质量体积比1:15混匀,树脂吸附提取液的有效成分,吸附在摇床上115r/min,37℃,吸附10h,取出大孔树脂再用70%的乙醇解析洗脱收集洗脱液;
(4)将洗脱液浓缩后加入β-环糊精和麦芽糊精,经喷雾干燥,得粉粒,此粉粒是微胶囊的成分,粉粒中加入β-环糊精、麦芽糊精、木糖醇和硬脂酸镁,通过进行压片制备获得雪菊黄酮片剂;
(5)β-环糊精和麦芽糊精的用量总质量与浓缩液中的黄酮及有效成分的质量比为2:3,β-环糊精和麦芽糊精按质量比1:1配比混合,β-环糊精与麦芽糊精的壁材能够有效的保护提取液的有效成分,混合液经喷雾干燥得到粉粒中加人β-环糊精,麦芽糊精,木糖醇,硬脂酸镁与粉粒的质量比为7:3,其中β-环糊精占70%,麦芽糊精占30%,再加入2%的木糖醇,加入1%的硬脂酸镁。
2.如权利要求1所述一种提纯的雪菊黄酮片剂的制备方法,其特征在于,所述的生物复合酶按照纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶按照质量比计以 2:2:3混合。
3.如权利要求1所述一种提纯的雪菊黄酮片剂的制备方法制备的雪菊黄酮片剂,其特征在于,按照重量百分比计,所述的雪菊黄酮片剂含有总黄酮13.8%、β-环糊精53.3%、麦芽糊精26.2%、木糖醇2%、硬脂酸镁1%、另有3.7%为多糖生物碱蛋白质类物质。
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