CN110095551B - 一种人参皂苷的分离检测方法 - Google Patents

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Abstract

一种人参皂苷的分离检测方法，包括以下步骤：将水与正丁醇等体积混合，待静置分层后取正丁醇相，然后加入人参粉末，超声处理后过滤并收集液相；然后制备硼酸修饰的介孔硅材料；将硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到萃取液中，然后将得到的液相加入萃取液中震荡萃取并最后离心分离；然后再经过清洗和解析，最后将得到的洗脱液分别进行硼亲和色谱分析和基质辅助激光解析电离质谱分析，然后将色谱分析与质谱分析的人参皂苷含量取平均值即可。本方法不需要复杂的预处理过程，而且具有优异的选择性，排除干扰。

Description

一种人参皂苷的分离检测方法
技术领域
本发明涉及一种人参皂苷的分离检测方法。
背景技术
人参是中国着名的传统中草药之一，在东亚和北美地区，它在制药工业中发挥着重要的作用，已有数千年的历史。人参的主要医学活性成分是根中的人参皂苷，有机酸，维生素等。其中，人参皂苷是一类复杂的三萜皂苷衍生的糖缀合物，被认为是具有多种药理功能的主要生物活性成分，包括抗癌(M.J.Kim,H.Yun,D.H.Kim,I.Kang,W.Choe,S.S.Kim,J.Ha,J.Ginseng Res.2014,38,16-21.)，免疫系统调节功能(K.R.Vinoth,T.W.Oh,Y.K.Park,Neurochem.Res.2016,41,951-957.)，治疗白血病(Y.Y.Wu,Y.N.Cui,T.Y.Zhang,W.Li,M.Y.Zhang,J.Cheng,Y.Wang,J,Wang,Y.Q.Zhao,Y.X.Zhang,Phytochem.Lett.2018,27,123-128.)，缺血性脑损伤的神经保护作用(J.Tian,F.Fu,M.Geng,Y.Jiang,J.Yang,W.Jiang,C.Wang,K.Liu,Neurosci.Lett.2005,374,92-97.)。因此，人参皂苷的选择性分析对于人参的药理作用理解和质量控制都具有重要意义。
迄今为止，许多分离策略已应用于人参皂苷的分析，如薄层色谱(TLC)，液/气相色谱(R.J.Vanhaelen-Fastré,M.L.Faes,M.H.Vanhaelen,J Chromatogr A 2000,868,269–276；J.F.Cui,I.
Figure BDA0002092432190000011
P.Eneroth,J Chromatogr B 1997,689,349–355.)。在实践中，反相色谱(RPLC)是最常用的技术，特别是在各种药典中(例如USP-NF33，JP2011和ChP2015)，因为它具有广泛的适用范围和良好的重现性。然而，由于它们的强极性糖侧链，大多数人参皂苷不适合RPLC(X.J.Guo,X.L.Zhang,Z.M.Guo,Y.F.Liu,A.J.Shen,G.W.Jin,X.M.Liang,J Chromatogr A,2014,1325,121–128.)。虽然已经使用不同的分离策略来克服这个问题，包括亲水作用色谱(HILIC)，毛细管电泳和2D-LC(S.Y.Wang,L.Z.Qiao,X.Z.Shi,C.X.Hu,H.W.Kong,G.W.Xu,Anal.Bioanal.Chem.,2015,407,331-341；S.Qiu,W.Z.Yang,X.J.Shi,C.L.Yao,M.Yang,X.Liu,B.H.Jiang,W.Y.Wu,D.A.Guo,Anal.Chim.Acta,2015,893,65-76；Y.L.Tian,Y.Y.lu,J.Xie,Y.Cheng,R.B.Qi,Y.J.Wu,S.S.Zhang,Anal.Methods,2009,1,203-207；J.P.Qin,J.Feng,Y.H.Li,K.F.Mo,S.Y.Lu,J.Pharm.Biomed.,2011,56,836-840.)，他们仍然有些缺点。特别是在人参的某些加工程序(例如蒸汽)之后，人参皂苷的极性可能会发生变化，这对传统的分配色谱来说是一个巨大的挑战(S.D.Jia,J.Li,N.Yunusova,J.H.Park,S.W.Kwon,J.Lee,Phytochem.Anal.,2013,24,374-380.)。作为一个结果，有必要建立一种新颖有效的人参皂苷分离方法，以实现人参的质量评估和控制。
硼亲和色谱(BAC)是一种独特的亲和色谱机制，能够特异性识别和分离含顺式二醇的分子。BAC的原理基于硼酸和顺式二醇之间的可逆共价相互作用。硼酸盐亲和力表现出几种吸引人的特征，包括对含有顺式二醇的分子的高特异性，易于操作提取/洗脱过程以及与质谱法相容的洗脱条件。因此，BAC已被用于分离和分析各种含顺式二醇的分子，如核苷，核酸，儿茶酚，碳水化合物和糖蛋白/糖肽(D.J.Li,Y.Chen,Z.Liu,Chem.Soc.Rev.,2015,44,8097-8123.)。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种人参皂苷的分离检测方法，该方法不需要复杂的预处理过程，而且具有优异的选择性，排除干扰。
为解决上述技术问题本发明提供了一种人参皂苷的分离检测方法，包括以下步骤：
(1)将水与正丁醇等体积混合，待静置分层后取正丁醇相10mL，然后加入1.0g人参粉末，超声处理60min后过滤并收集液相，超声频率为50kHz，然后加热蒸干液相中的水分得到母液；
(2)取1.0g的CTAB和280mg的氢氧化钠溶解于480ml、80℃的水中，然后边搅拌边滴加5ml的TEOS，然后保持体系温度为80℃保持搅拌，反应2h，反应结束后将所的产物自然冷却，抽滤，依次用去离子水和乙醇洗涤，然后在40℃下真空干燥12h，得到的白色固体记做M1；
(3)将M1超声分散于150mL甲醇中，随后加入1.5mL、质量分数为37.2％的浓盐酸中，在90℃下冷凝回流6h，反应结束后，将所的产物自然冷却，抽滤，用去离子水和乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到介孔硅纳米颗粒记做M2；
(4)将M2超声分散于80mL新制备的无水甲苯中，随后加入1.0mL APTES并在130℃下搅拌回流20h，所得的材料依次用去离子水和乙醇洗涤后在40℃下真空干燥12h，产物记做M3；
(5)将M3溶于DMSO中，配置成混合液，混合液中M3的质量分数为20mg/mL，然后取0.15g的CPBA、0.2g的EDC和0.1g的NHS溶于5.0mL的DMSO中在室温下搅拌30min，随后加入到20mL混合液，保持室温搅拌24h后，依次用DMSO、去离子水、乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到的材料即为硼酸修饰的介孔硅材料；
(6)将硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到萃取液中，萃取液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.1-2mL/mg，所述的萃取液由pH为7.4-9.0磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述萃取液中甲醇所占比例为5％-30％，然后将步骤(1)得到的母液加入萃取液中震荡萃取，萃取时间为20-60min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(7)将步骤(6)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到清洗液中，清洗液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为1-3mL/mg，所述的清洗液由pH为7.4-9.0磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述清洗液中甲醇所占比例为5％-30％，然后进行震荡清洗，清洗时间为3-5min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(8)将步骤(7)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到解析液中，解析液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.1-0.5mL/mg，所述的解析液由100mmol/L的醋酸溶液与甲醇混合而成，所述解析液中甲醇所占比例为50％，解析时间为20-60min，最后离心分离出洗脱液，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(9)将步骤(8)得到的洗脱液分别进行硼亲和色谱分析和基质辅助激光解析电离质谱分析，然后将色谱分析与质谱分析的人参皂苷含量取平均值即可。
为简单说明问题起见，以下对本发明所述的一种人参皂苷的分离检测方法均简称为本方法。
本方法的优点：本方法采用硼亲和材料对于样品中的人参皂苷进行选择性萃取，在经过合适的萃取，清洗与解析步骤以后，可将样品中的人参皂苷选择性的溶于解析溶液之中。与现有人参皂苷分离手段相比，本方法将硼亲和色谱技术用于人参皂苷的选择性分离，与常规RPLC分析(中国药典ChP2015中使用策略)相比，所提出的方法不需要繁琐的样品预处理，但提供了显着改善的性能，包括优异的选择性，简化的操作程序，高结合能力和快速结合平衡。并且所得材料对于印迹分子表现出优秀的专一性识别能力。由于通过硼亲和的选择性萃取作用可以排除绝大部分的干扰，本方法定量检测的精密度及准确度等都能得到很好的保证。
附图说明
图1是实验二中两组样品的色谱(A)与质谱(B)结果对比。
具体实施方式
实施例一：
一种人参皂苷的分离检测方法，包括以下步骤：
(1)将水与正丁醇等体积混合，待静置分层后取正丁醇相10mL，然后加入1.0g人参粉末，超声处理60min后过滤并收集液相，超声频率为50kHz，然后加热蒸干液相中的水分得到母液；
(2)取1.0g的CTAB和280mg的氢氧化钠溶解于480ml、80℃的水中，然后边搅拌边滴加5ml的TEOS，然后保持体系温度为80℃保持搅拌，反应2h，反应结束后将所的产物自然冷却，抽滤，依次用去离子水和乙醇洗涤，然后在40℃下真空干燥12h，得到的白色固体记做M1；
(3)将M1超声分散于150mL甲醇中，随后加入1.5mL、质量分数为37.2％的浓盐酸中，在90℃下冷凝回流6h，反应结束后，将所的产物自然冷却，抽滤，用去离子水和乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到介孔硅纳米颗粒记做M2；
(4)将M2超声分散于80mL新制备的无水甲苯中，随后加入1.0mL APTES并在130℃下搅拌回流20h，所得的材料依次用去离子水和乙醇洗涤后在40℃下真空干燥12h，产物记做M3；
(5)将M3溶于DMSO中，配置成混合液，混合液中M3的质量分数为20mg/mL，然后取0.15g的CPBA、0.2g的EDC和0.1g的NHS溶于5.0mL的DMSO中在室温下搅拌30min，随后加入到20mL混合液，保持室温搅拌24h后，依次用DMSO、去离子水、乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到的材料即为硼酸修饰的介孔硅材料；
(6)将硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到萃取液中，萃取液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.1mL/mg，所述的萃取液由pH为7.4磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述萃取液中甲醇所占比例为5％，然后将步骤(1)得到的母液加入萃取液中震荡萃取，萃取时间为20min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(7)将步骤(6)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到清洗液中，清洗液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为1mL/mg，所述的清洗液由pH为7.4磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述清洗液中甲醇所占比例为5％，然后进行震荡清洗，清洗时间为3min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(8)将步骤(7)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到解析液中，解析液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.1mL/mg，所述的解析液由100mmol/L的醋酸溶液与甲醇混合而成，所述解析液中甲醇所占比例为50％，解析时间为20min，最后离心分离出洗脱液，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(9)将步骤(8)得到的洗脱液分别进行硼亲和色谱分析和基质辅助激光解析电离质谱分析，然后将色谱分析与质谱分析的人参皂苷含量取平均值即可。
实施例二：
一种人参皂苷的分离检测方法，包括以下步骤：
(1)将水与正丁醇等体积混合，待静置分层后取正丁醇相10mL，然后加入1.0g人参粉末，超声处理60min后过滤并收集液相，超声频率为50kHz，然后加热蒸干液相中的水分得到母液；
(2)取1.0g的CTAB和280mg的氢氧化钠溶解于480ml、80℃的水中，然后边搅拌边滴加5ml的TEOS，然后保持体系温度为80℃保持搅拌，反应2h，反应结束后将所的产物自然冷却，抽滤，依次用去离子水和乙醇洗涤，然后在40℃下真空干燥12h，得到的白色固体记做M1；
(3)将M1超声分散于150mL甲醇中，随后加入1.5mL、质量分数为37.2％的浓盐酸中，在90℃下冷凝回流6h，反应结束后，将所的产物自然冷却，抽滤，用去离子水和乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到介孔硅纳米颗粒记做M2；
(4)将M2超声分散于80mL新制备的无水甲苯中，随后加入1.0mL APTES并在130℃下搅拌回流20h，所得的材料依次用去离子水和乙醇洗涤后在40℃下真空干燥12h，产物记做M3；
(5)将M3溶于DMSO中，配置成混合液，混合液中M3的质量分数为20mg/mL，然后取0.15g的CPBA、0.2g的EDC和0.1g的NHS溶于5.0mL的DMSO中在室温下搅拌30min，随后加入到20mL混合液，保持室温搅拌24h后，依次用DMSO、去离子水、乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到的材料即为硼酸修饰的介孔硅材料；
(6)将硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到萃取液中，萃取液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为1mL/mg，所述的萃取液由pH为8.2磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述萃取液中甲醇所占比例为17.5％，然后将步骤(1)得到的母液加入萃取液中震荡萃取，萃取时间为40min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(7)将步骤(6)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到清洗液中，清洗液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为2mL/mg，所述的清洗液由pH为8.2磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述清洗液中甲醇所占比例为17.5％，然后进行震荡清洗，清洗时间为4min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(8)将步骤(7)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到解析液中，解析液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.3mL/mg，所述的解析液由100mmol/L的醋酸溶液与甲醇混合而成，所述解析液中甲醇所占比例为50％，解析时间为40min，最后离心分离出洗脱液，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(9)将步骤(8)得到的洗脱液分别进行硼亲和色谱分析和基质辅助激光解析电离质谱分析，然后将色谱分析与质谱分析的人参皂苷含量取平均值即可。
实施例三：
一种人参皂苷的分离检测方法，包括以下步骤：
(1)将水与正丁醇等体积混合，待静置分层后取正丁醇相10mL，然后加入1.0g人参粉末，超声处理60min后过滤并收集液相，超声频率为50kHz，然后加热蒸干液相中的水分得到母液；
(2)取1.0g的CTAB和280mg的氢氧化钠溶解于480ml、80℃的水中，然后边搅拌边滴加5ml的TEOS，然后保持体系温度为80℃保持搅拌，反应2h，反应结束后将所的产物自然冷却，抽滤，依次用去离子水和乙醇洗涤，然后在40℃下真空干燥12h，得到的白色固体记做M1；
(3)将M1超声分散于150mL甲醇中，随后加入1.5mL、质量分数为37.2％的浓盐酸中，在90℃下冷凝回流6h，反应结束后，将所的产物自然冷却，抽滤，用去离子水和乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到介孔硅纳米颗粒记做M2；
(4)将M2超声分散于80mL新制备的无水甲苯中，随后加入1.0mL APTES并在130℃下搅拌回流20h，所得的材料依次用去离子水和乙醇洗涤后在40℃下真空干燥12h，产物记做M3；
(5)将M3溶于DMSO中，配置成混合液，混合液中M3的质量分数为20mg/mL，然后取0.15g的CPBA、0.2g的EDC和0.1g的NHS溶于5.0mL的DMSO中在室温下搅拌30min，随后加入到20mL混合液，保持室温搅拌24h后，依次用DMSO、去离子水、乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到的材料即为硼酸修饰的介孔硅材料；
(6)将硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到萃取液中，萃取液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为2mL/mg，所述的萃取液由pH为9.0磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述萃取液中甲醇所占比例为30％，然后将步骤(1)得到的母液加入萃取液中震荡萃取，萃取时间为60min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(7)将步骤(6)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到清洗液中，清洗液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为3mL/mg，所述的清洗液由pH为9.0磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述清洗液中甲醇所占比例为30％，然后进行震荡清洗，清洗时间为5min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(8)将步骤(7)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到解析液中，解析液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.5mL/mg，所述的解析液由100mmol/L的醋酸溶液与甲醇混合而成，所述解析液中甲醇所占比例为50％，解析时间为60min，最后离心分离出洗脱液，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(9)将步骤(8)得到的洗脱液分别进行硼亲和色谱分析和基质辅助激光解析电离质谱分析，然后将色谱分析与质谱分析的人参皂苷含量取平均值即可。
验证实验：
实验一：
按照实施例二所述的步骤进行操作，用从中国食品药品检定研究院购买的浓度为1mg/mL的三种人参皂苷标准溶液(人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2)代替步骤(1)所得到的母液，其余步骤与实施例二相一致，分别将测定结果与中国药典2015的所测定的标准值进行比较，结果如表1所示，所述的中国药典2015中检测所用策略为RPLC分析。
表1.基于本方法的人参中人参皂苷的定量分析与中国药典2015比较
人参皂苷 本方法测定值 ChP2015测定值
人参皂苷Re 0.42％ 0.39％
人参皂苷Rb1 0.70％ 0.67％
人参皂苷Rb2 0.17％ 0.13％
其中人参皂苷Re的产品批号为110754-201827；人参皂苷Rb1的产品批号为110704-201827；人参皂苷Rb2的产品批号为111715-201203。
实验二：
原料选用采购于抚松县泉阳镇子丰山货庄的东北长白山鲜林下参进行实验，将原料分为两组均按照实施例二所述的步骤进行实验，其中第一组按照中国药典2015所要求的预处理过程进行处理，然后直接进行色谱和质谱分析，第二组完成整个实施例二所述的步骤，实验的到的谱线如图1所示。
参见图1，*表示人参皂苷Re，Δ表示人参皂苷Rb1，#表示人参皂苷Rb2。可以看出经过硼亲和材料萃取后峰的位置没有改变，峰面积增加了，结果更为显著，体现出了优良的选择性。
上述实施例和验证实验中色谱分析和质谱分析均是采用常规分析方式，具体参数以及操作步骤属于本领域技术人员的常识，在此就不进行详细介绍了。

Claims (1)

1.一种人参皂苷的分离检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将水与正丁醇等体积混合，待静置分层后取正丁醇相10mL，然后加入1.0g人参粉末，超声处理60min后过滤并收集液相，超声频率为50kHz，然后加热蒸干液相中的水分得到母液；
(2)取1.0g的CTAB和280mg的氢氧化钠溶解于480ml、80℃的水中，然后边搅拌边滴加5ml的TEOS，然后保持体系温度为80℃保持搅拌，反应2h，反应结束后将所的产物自然冷却，抽滤，依次用去离子水和乙醇洗涤，然后在40℃下真空干燥12h，得到的白色固体记做M1；
(3)将M1超声分散于150mL甲醇中，随后加入1.5mL、质量分数为37.2％的浓盐酸中，在90℃下冷凝回流6h，反应结束后，将所的产物自然冷却，抽滤，用去离子水和乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到介孔硅纳米颗粒记做M2；
(4)将M2超声分散于80mL新制备的无水甲苯中，随后加入1.0mL APTES并在130℃下搅拌回流20h，所得的材料依次用去离子水和乙醇洗涤后在40℃下真空干燥12h，产物记做M3；
(5)将M3溶于DMSO中，配置成混合液，混合液中M3的质量分数为20mg/mL，然后取0.15g的CPBA、0.2g的EDC和0.1g的NHS溶于5.0mL的DMSO中在室温下搅拌30min，随后加入到20mL混合液，保持室温搅拌24h后，依次用DMSO、去离子水、乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到的材料即为硼酸修饰的介孔硅材料；
(6)将硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到萃取液中，萃取液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.1-2mL/mg，所述的萃取液由pH为7.4-9.0磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述萃取液中甲醇所占比例为5％-30％，然后将步骤(1)得到的母液加入萃取液中震荡萃取，萃取时间为20-60min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(7)将步骤(6)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到清洗液中，清洗液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为1-3mL/mg，所述的清洗液由pH为7.4-9.0磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述清洗液中甲醇所占比例为5％-30％，然后进行震荡清洗，清洗时间为3-5min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(8)将步骤(7)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到解析液中，解析液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.1-0.5mL/mg，所述的解析液由100mmol/L的醋酸溶液与甲醇混合而成，所述解析液中甲醇所占比例为50％，解析时间为20-60min，最后离心分离出洗脱液，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；
(9)将步骤(8)得到的洗脱液分别进行硼亲和色谱分析和基质辅助激光解析电离质谱分析，然后将色谱分析与质谱分析的人参皂苷含量取平均值即可。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006115307A1 (en) * 2005-04-26 2006-11-02 Ko, Boong-Kyung Method of extracting ginsengnoside rg2m, pharmaceutical composition including ginsengnoside rg2, and uses thereof
KR20130040354A (ko) * 2011-10-14 2013-04-24 경희대학교 산학협력단 인삼 뿌리의 원산지 및 연근의 판별 방법
CN107607640A (zh) * 2017-08-30 2018-01-19 复旦大学 一种硼酸修饰的纳米复合材料的糖肽富集与质谱检测方法
CN109709223A (zh) * 2018-12-28 2019-05-03 杭州师范大学 一种人参叶中皂苷类活性成分的提取检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006115307A1 (en) * 2005-04-26 2006-11-02 Ko, Boong-Kyung Method of extracting ginsengnoside rg2m, pharmaceutical composition including ginsengnoside rg2, and uses thereof
KR20130040354A (ko) * 2011-10-14 2013-04-24 경희대학교 산학협력단 인삼 뿌리의 원산지 및 연근의 판별 방법
CN107607640A (zh) * 2017-08-30 2018-01-19 复旦大学 一种硼酸修饰的纳米复合材料的糖肽富集与质谱检测方法
CN109709223A (zh) * 2018-12-28 2019-05-03 杭州师范大学 一种人参叶中皂苷类活性成分的提取检测方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
4-Mercaptophenylboronic acid-modified spirally-curved mesoporous silica nanofibers coupled with ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry for determination of brassinosteroids in plants;Chen, Miao 等;《FOOD CHEMISTRY》;20181231;第263卷;第51-58页 *
Discrimination and Classification of Ginsenosides and Ginsengs Using Bis-Boronic Acid Receptors in Dynamic Multicomponent Indicator Displacement Sensor Arrays;Zhang, Xiaojun 等;《CHEMISTRY-A EUROPEAN JOURNAL》;20121231;第18卷(第4期);第1102-1110页 *
Insights into the effect of nanoconfinement on molecular interactions;Yang Chen等;《NANOSCALE》;20141231;第6卷(第16期);第9563-9567页 *
Mesoporous Silica Nanoparticle-Based Double Drug Delivery System for Glucose-Responsive Controlled Release of Insulin and Cyclic AMP;Zhao, Yannan等;《JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY》;20091231;第131卷(第24期);第8398-8400页 *
硼亲和材料的研究进展;包建民等;《化学通报》;20180511;第81卷(第05期);第394-401页 *
硼酸亲和材料的制备及其在生物样品顺式二醇类物质分析中的应用进展;吴建元等;《武汉大学学报 （医学版）》;20180131;第39卷(第1期);第168-172页 *
胶束电动毛细管色谱法分离分析人参中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re;王淑美等;《中药材》;20090725;第32卷(第07期);第1069-1071页 *

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