CN111239270B - 一种参葵通脉颗粒的质量检测方法 - Google Patents

一种参葵通脉颗粒的质量检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111239270B
CN111239270B CN202010066939.3A CN202010066939A CN111239270B CN 111239270 B CN111239270 B CN 111239270B CN 202010066939 A CN202010066939 A CN 202010066939A CN 111239270 B CN111239270 B CN 111239270B
Authority
CN
China
Prior art keywords
internal standard
granules
taking
mixed
astragaloside
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010066939.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111239270A (zh
Inventor
严士海
李七一
刘顺
王海丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Provincial Hospital of Chinese Medicine
Original Assignee
Jiangsu Provincial Hospital of Chinese Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu Provincial Hospital of Chinese Medicine filed Critical Jiangsu Provincial Hospital of Chinese Medicine
Priority to CN202010066939.3A priority Critical patent/CN111239270B/zh
Publication of CN111239270A publication Critical patent/CN111239270A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111239270B publication Critical patent/CN111239270B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/12—Preparation by evaporation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/045—Standards internal
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/12—Preparation by evaporation
    • G01N2030/126—Preparation by evaporation evaporating sample
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明公开了一种参葵通脉颗粒的质量检测方法，本发明采用UPLC‑MS/MS法同时测定参葵通脉颗粒中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B等7种主要有效成分的方法，该方法检测效率高，分离度好，灵敏度高，准确性和稳定性好；对控制参葵通脉颗粒的质量具有重要意义。

Description

一种参葵通脉颗粒的质量检测方法
技术领域
本发明涉及一种中药复方颗粒的质量检测方法，具体涉及一种参葵通脉颗粒的质量检测方法。属于中药检测和质量控制技术领域。
背景技术
参葵通脉颗粒是项目组传承中医经典理论(五脏系统论、双心同治)、立足于临床实践而创立的复方制剂，它由炙黄芪、灵芝、仙灵脾、桂枝、丹参、黄蜀葵、茯苓和陈皮组成，对心阳不振，血脉瘀阻型慢性心力衰竭属治疗效果显著，用于气虚血瘀证慢性心衰患者，总有效率达到90.32％，可以改善心功能，抗氧化应激、抑制免疫炎症反应，是治疗心血管疾病的重要药物。但是关于该制剂的质量检测方法目前还没有报道，为了更好的控制其疗效，很有必要在现有技术的基础之上，设计研发一种能同时检测多种有效成分的方法。
发明内容
发明目的：本发明的目的是为了克服现有技术的不足，建立一种采用UPLC-MS/MS法同时测定参葵通脉颗粒中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B等7种主要有效成分的方法，该方法检测效率高，分离度好，灵敏度高，准确性和稳定性好；对控制参葵通颗粒的质量具有重要意义。
技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
一种参葵通脉颗粒的质量检测方法，其包括以下步骤：
(1)参葵通脉颗粒(20190301、20190302、20190303)，由江苏省中医院制剂室生产：称取处方量的黄芪、灵芝、丹参、淫羊藿、黄蜀葵花、桂枝、茯苓、陈皮，依据优选的最佳提取工艺，加入12倍水量，浸泡0.5h，加热回流提取3次，每次1.5h，提取液合并，过滤。滤液减压浓缩，离心，以适量糊精为辅料，置流化床中喷雾制粒，干燥，即得参葵通脉颗粒30g。
取参葵通脉颗粒0.625g，至50mL容量瓶中，加适量90％甲醇溶解，超声30min(280W，50kHz)，放至室温，补足甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，收集续滤液。取适量续滤液于离心浓缩机蒸干，并用初始流动相30％乙腈，复溶至原体积的一半，加入适量混合内标溶液，混匀，即得供试品溶液。
(2)混合对照品溶液的制备：
分别精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的对照品，分别置于10mL的容量瓶中，甲醇溶解、超声，并定容至刻度，制得质量浓度分别为783μg/mL、852μg/mL、823μg/mL、1795μg/mL、804μg/mL、1064μg/mL和1828μg/mL的对照品溶液；然后分别吸取以上7种对照品溶液适量，置于同一10mL容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度并混匀，制得浓度分别为142.636μg/mL、90.237μg/mL、299.823μg/mL、147.726μg/mL、324.526μg/mL、173.628μg/mL、617.404μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的混合对照品溶液；
(3)内标溶液的制备：
分别精密称取替硝唑和咖啡酸对照品适量，置于10mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制得质量浓度分别为400μg/ml和390μg/ml的内标溶液；分别取适量内标溶液，用30％乙腈水溶液稀释，得到浓度分别为16μg/mL和15.6μg/mL的替硝唑和咖啡酸的混合内标溶液；
(4)线性关系建立：
分别吸取步骤(2)的混合对照品溶液，用30％乙腈水溶液依次稀释5倍，得到5个系列质量浓度的混合对照品溶液；然后取5个不同浓度的混合对照品溶液各180μL，分别加入25μL步骤(3)制备得到的混合内标溶液，涡旋混匀，然后依次取2μL注入超高效液相色谱仪进行测定；以质量浓度为横坐标X，对照品与内标峰面积比值为纵坐标Y，进行线性回归；得到毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的线性回归方程；
(5)含量测定
取步骤(1)的供试品溶液，加入适量混合内标溶液，混匀，然后取2μL注入超高效液相色谱仪进行测定；并根据步骤(4)的线性回归方程，测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的含量。
作为优选方案，以上步骤(1)参葵通脉颗粒供试品溶液的制备方法为：
参葵通脉颗粒(20190301、20190302、20190303)，由江苏省中医院制剂室生产：称取处方量的黄芪、灵芝、丹参、淫羊藿、黄蜀葵花、桂枝、茯苓、陈皮，依据优选的最佳提取工艺，加入12倍水量，浸泡0.5h，加热回流提取3次，每次1.5h，提取液合并，过滤。滤液减压浓缩，离心，以适量糊精为辅料，置流化床中喷雾制粒，干燥，即得参葵通脉颗粒30g。
取参葵通脉颗粒0.625g，至50mL容量瓶中，加适量90％甲醇溶解，超声30min(280W，50kHz)，放至室温，补足甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，收集续滤液。取适量续滤液于离心浓缩机蒸干，并用初始流动相30％乙腈，复溶至原体积的一半，加入适量混合内标溶液，混匀，即得供试品溶液。
作为优选方案，以上所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，步骤(4)和步骤(5)的色谱条件为：色谱柱：预柱Kromasil 100-3.5-C18，色谱柱Kromasil 100-3.5-C18，规格150×2.1mm；流动相：6.5mmoL/L乙酸铵水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱；自动进样器温度：10℃；柱温：30℃；流速：0.2mL·min-1。
作为优选方案，以上所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，梯度洗脱条件为：0～1.5min，30％B；1.5～6min，30～80％B；6～7.2min，80％B→95％B；7.2～7.8min，95％B；7.8～10.5min，95％B→30％B；10.5～12min，30％B。
作为优选方案，以上所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B和内标物替硝唑和咖啡酸的质谱参数如下：
Figure BDA0002376257910000031
作为优选方案，以上所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的线性回归方程如下：
成分 回归方程 r<sup>2</sup>
毛蕊异黄酮葡萄糖苷 Y＝0.0714845+0.172954*X 0.9923
淫羊藿苷 Y＝0.105823+0.650492*X 0.9974
黄芪甲苷 Y＝0.00112711+0.0024567*X 0.9930
丹参素钠 Y＝-0.133008+0.0740296*X 0.9944
金丝桃苷 Y＝-1.18138+0.200215*X 0.9944
橙皮苷 Y＝-1.06837+0.394587*X 0.9908
丹酚酸B Y＝-0.794318+0.0198573*X 0.9941
中药复方制剂中由于含有结构复杂的化学成分，采用常规的HPLC-DAD不能完全覆盖，如本制剂中的君药黄芪，其特征性成分黄芪甲苷，在紫外下无吸收，HPLC-DAD并不能检测黄芪甲苷的含量，而UPLC-MS/MS相对于HPLC-DAD,涵盖性更广，可以快速、精准同时测定多种化学成分，具有速度快、灵敏度高、分离度好等优点，本发明选用毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B作为参葵通脉颗粒的考察指标。考虑到丹参素钠的峰形波动较大，故本发明通过大量实验筛选了不同类型的流动相，实验发现，使用6.5mmoL/L乙酸铵水溶液时，丹参素钠及其他成分的出峰效果较甲酸、磷酸等其他系统更好，峰形更美观，分离度更高。同时由于该中药复方，各黄酮结构极性接近，本发明通过大量实验筛选不同的梯度洗脱程序，发现不同的洗脱方式，各峰分离度明显不同，最终优选梯度洗脱条件为：0～1.5min，30％B；1.5～6min，30～80％B；6～7.2min，80％B→95％B；7.2～7.8min，95％B；7.8～10.5min，95％B→30％B；10.5～12min，30％B。可使各黄酮等化合物达到良好的分离度。
时本发明考察不同比例的甲醇-水溶液和乙醇-水溶液作为提取溶剂对样品提取率和出峰效果的影响。综合各成分的出峰量、峰形、峰面积等多重因素考虑，选用90％甲醇作为提取溶剂。随后又对供试品的进样浓度进行了考察，分别吸取1mL、2mL、5mL的参葵通脉颗粒，稀释至50mL制备成供试品溶液并进样，考察丹参素钠、金丝桃苷及其他成分的出峰效果，最终确定以2mL样品进行实验。
有益效果：本发明提供的参葵通脉颗粒的质量检测方法具有以下优点：
本发明提供的参葵通脉颗粒的质量检测方法，工艺设计合理，可操作性强，优选出供试品制备方法，然后通过大量实验筛选出最佳的流动相的组成、梯度系统条件，质谱检测条件等参数。本发明建立的UPLC-MS/MS的方法可同时检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B等7种主要有效成分的方法，该方法检测效率高，分离度好，灵敏度高，准确性和稳定性好；对控制参葵通脉颗粒的质量具有重要意义。
附图说明
图1为参葵通脉颗粒4种有效成分的化学结构及二级质谱图。
图2为参葵通脉颗粒3种有效成分和内标物质的化学结构及二级质谱图。
图3为对照品及内标的提取离子流色谱图。
图4参葵通脉颗粒7种成分及内标的提取离子流色谱图。
具体实施方式
下面通过实施例详细描述本发明，该实施例不应解释为对本发明的限制。以下实施例所用仪器与试药如下
1.仪器与试药
1.1仪器ThermoFisher TSQ QuantumAccessMAX三重四级杆质谱仪(电喷雾离子源；Xcalibar 1.4工作站；LCQuan数据处理软件)，Dionex超高效液相色谱系统(美国ThermoScientific公司)，BP-211D型电子分析天平(德国)，离心浓缩机(Labconco)，KQ-1000E型医用超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)等。
1.2试药毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，批号：Y27F9H54731；丹酚酸B对照品，批号：P18J9F65871；淫羊藿苷对照品，批号：T21S8B40264；金丝桃苷对照品，批号：Y05J8X39277，上述对照品均购自上海源叶生物科技有限公司。黄芪甲苷对照品，批号：110781-201717；丹参素钠对照品，批号：110855-201614；橙皮苷对照品，批号：110721-201818，购自中国食品药品检定研究院。参葵通脉颗粒(20190301、20190302、20190303)，由江苏省中医院制剂室生产；甲醇、乙腈、磷酸为色谱纯级，液相用水为超纯水，其余化学试剂为分析纯。
实施例1
一种参葵通脉颗粒的质量检测方法，其包括以下步骤：
(1)参葵通脉颗粒供试品溶液的制备：
参葵通脉颗粒(20190301、20190302、20190303)，由江苏省中医院制剂室生产：称取处方量的黄芪、灵芝、丹参、淫羊藿、黄蜀葵花、桂枝、茯苓、陈皮，依据优选的最佳提取工艺，加入12倍水量，浸泡0.5h，加热回流提取3次，每次1.5h，提取液合并，过滤。滤液减压浓缩，离心，以适量糊精为辅料，置流化床中喷雾制粒，干燥，即得参葵通脉颗粒30g。
取参葵通脉颗粒0.625g，至50mL容量瓶中，加适量90％甲醇溶解，超声30min(280W，50kHz)，放至室温，补足甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，收集续滤液。取适量续滤液于离心浓缩机蒸干，并用初始流动相30％乙腈，复溶至原体积的一半，加入适量混合内标溶液，混匀，即得供试品溶液。
(2)混合对照品溶液的制备：
分别精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的对照品，分别置于10mL的容量瓶中，甲醇溶解、超声，并定容至刻度，制得质量浓度分别为783μg/mL、852μg/mL、823μg/mL、1795μg/mL、804μg/mL、1064μg/mL和1828μg/mL的对照品溶液；然后分别吸取以上7种对照品溶液适量，置于同一10mL容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度并混匀，制得浓度分别为142.636μg/mL、90.237μg/mL、299.823μg/mL、147.726μg/mL、324.526μg/mL、173.628μg/mL、617.404μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的混合对照品溶液；
(3)内标溶液的制备：
分别精密称取替硝唑和咖啡酸对照品适量，置于10mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制得质量浓度分别为400μg/ml和390μg/ml的内标溶液；分别取适量内标溶液，用30％乙腈水溶液稀释，得到浓度分别为16μg/mL和15.6μg/mL的替硝唑和咖啡酸的混合内标溶液；
(4)线性关系建立：
分别吸取步骤(2)的混合对照品溶液，用30％乙腈水溶液依次稀释5倍，得到5个系列质量浓度的混合对照品溶液；然后取5个不同浓度的混合对照品溶液各180μL，分别加入25μL步骤(3)制备得到的混合内标溶液，涡旋混匀，然后依次取2μL注入超高效液相色谱仪进行测定(二级质谱图如图1和图2，图1中a为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、b为淫羊藿苷、c为黄芪甲苷、d为替硝唑，图2中e为丹参素钠、f为金丝桃苷、g为橙皮苷、h为丹酚酸B、i为咖啡酸；对照品及内标的提取离子流色谱图如3)；以质量浓度为横坐标X，对照品与内标峰面积比值为纵坐标Y，进行线性回归；得到毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的线性回归方程如下：
表1各化合物的线性回归方程
Figure BDA0002376257910000071
(5)含量测定
取步骤(1)的3批次的供试品溶液，加入适量步骤(3)混合内标溶液，混匀，然后取2μL注入超高效液相色谱仪进行测定(如图4为参葵通脉颗粒7种成分及内标的提取离子流色谱图)；并根据步骤(4)的线性回归方程，测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的含量如下表2：
表2 7种化合物的含量
批次20190301 批次20190302 批次20190303 RSD％
毛蕊异黄酮葡萄糖苷(μg·g<sup>-1</sup>) 339.428 322.943 326.684 2.62132
淫羊藿苷(μg·g<sup>-1</sup>) 1182.340 1205.773 1221.371 1.632877
黄芪甲苷(μg·g<sup>-1</sup>) 11.176 11.943 12.200 4.522215
丹参素钠(μg·g<sup>-1</sup>) 1546.478 1489.313 1488.974 2.194752
金丝桃苷(μg·g<sup>-1</sup>) 2394.424 2490.652 2532.240 2.859115
橙皮苷(μg·g<sup>-1</sup>) 6575.200 6793.373 6773.622 1.797203
丹酚酸B(μg·g<sup>-1</sup>) 3511.670 3406.400 3328.624 2.689694
。
以上步骤(4)和步骤(5)的色谱条件为：色谱柱：预柱Kromasil 100-3.5-C18，色谱柱Kromasil 100-3.5-C18，规格150×2.1mm；流动相：6.5mmoL/L乙酸铵水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱(0～1.5min，30％B；1.5～6min，30～80％B；6～7.2min，80％B→95％B；7.2～7.8min，95％B；7.8～10.5min，95％B→30％B；10.5～12min，30％B)；自动进样器温度：10℃；柱温：30℃；流速：0.2mL·min-1。
以上步骤(4)和(5)毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B和内标物替硝唑和咖啡酸的质谱参数如下表3：
表3各化合物和内标物的质谱参数
Figure BDA0002376257910000081
实施例2含量测定方法的方法学验证
1、精密度实验
取同一供试品溶液(批号20190303)，按实施例1的色谱条件连续进样6次进行测定，以对照品和内标峰面积的比值计算，7个成分的RSD分别为毛蕊异黄酮葡萄糖苷1.580％、淫羊藿苷1.072％、黄芪甲苷2.538％、丹参素钠1.225％、金丝桃苷1.596％、橙皮苷2.163％、丹酚酸B2.197％，实验结果表明精密度良好。
2、稳定性实验取同一供试品溶液(批号20190303)，室温放置，于0、2、4、8、16、24h分别按实施例1的色谱条件进样测定。以对照品和内标峰面积的比值计算RSD，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的RSD分别为1.927％、1.152％、1.005％、0.918％、2.177％、1.308％、2.283％，实验结果表明供试品溶液在24h内基本稳定。
3、重复性实验取同一批样品(批号20190303)，平行6份，按按实施例1方法制备得到6份供试品溶液，并按实施例1的色谱条件进样测定，以对照品和内标峰面积的比值计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的RSD分别为0.807％、1.548％、3.609％、0.757％、2.074％、1.367％、3.135％，表明该方法重复性良好。
4、加样回收率实验取已知含量的样品(批号20190303)适量，平行6份，并加入3种浓度水平的混合对照品溶液适量，按实施例1方法分别制备供试品溶液。按实施例1色谱条件测定得7种成分的质量浓度，计算回收率，结果见表4。
表4UPLC-MS/MS测定参葵通脉颗粒加样回收率实验结果
Figure BDA0002376257910000091
以上实验结果表明，本发明建立的参葵通脉颗粒的质量检测方法精密度、重复性、稳定性和准确度好，对保证参葵通脉颗粒的质量和临床疗效具有重要的应用价值。

Claims (2)

1.一种参葵通脉颗粒7种有效成分的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)参葵通脉颗粒供试品溶液的制备：
参葵通脉颗粒，由江苏省中医院制剂室制备：称取处方量的黄芪、灵芝、丹参、淫羊藿、黄蜀葵花、桂枝、茯苓、陈皮，依据优选的最佳提取工艺，加入12倍水量，浸泡0.5h，加热回流提取3次，每次1.5h，提取液合并，过滤，滤液减压浓缩，离心，以适量糊精为辅料，置流化床中喷雾制粒，干燥，即得参葵通脉颗粒30g；
取参葵通脉颗粒0.625g，至50mL容量瓶中，加适量90％甲醇溶解，超声30min，280W，50kHz，放至室温，补足甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，收集续滤液，取适量续滤液于离心浓缩机蒸干，并用初始流动相30％乙腈，复溶至原体积的一半，加入适量混合内标溶液，混匀，即得供试品溶液；
(2)混合对照品溶液的制备：
分别精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的对照品，分别置于10mL的容量瓶中，甲醇溶解、超声，并定容至刻度，制得质量浓度分别为783μg/mL、852μg/mL、823μg/mL、1795μg/mL、804μg/mL、1064μg/mL和1828μg/mL的对照品溶液；然后分别吸取以上7种对照品溶液适量，置于同一10mL容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度并混匀，制得浓度分别为142.636μg/mL、90.237μg/mL、299.823μg/mL、147.726μg/mL、324.526μg/mL、173.628μg/mL、617.404μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的混合对照品溶液；
(3)内标溶液的制备：
分别精密称取替硝唑和咖啡酸对照品适量，置于10mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制得质量浓度分别为400μg/ml和390μg/ml的内标溶液；分别取适量内标溶液，用30％乙腈水溶液稀释，得到浓度分别为16μg/mL和15.6μg/mL的替硝唑和咖啡酸的混合内标溶液；
(4)线性关系建立：
分别吸取步骤(2)的混合对照品溶液，用30％乙腈水溶液依次稀释5倍，得到5个系列质量浓度的混合对照品溶液；然后取5个不同浓度的混合对照品溶液各180μL，分别加入25μL步骤(3)制备得到的混合内标溶液，涡旋混匀，然后依次取2μL注入超高效液相色谱仪进行测定；以质量浓度为横坐标X，对照品与内标峰面积比值为纵坐标Y，进行线性回归；得到毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的线性回归方程；
(5)含量测定
取步骤(1)的供试品溶液，加入适量混合内标溶液，混匀，然后取2μL注入超高效液相色谱仪进行测定；并根据步骤(4)的线性回归方程，测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的含量；
步骤(4)和步骤(5)的色谱条件为：色谱柱：预柱Kromasil 100-3.5-C18，色谱柱Kromasil 100-3.5-C18，规格150×2.1mm；流动相：6.5mmoL/L乙酸铵水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱；自动进样器温度：10℃；柱温：30℃；流速：0.2mL·min-1；
梯度洗脱条件为：0～1.5min，30％B；1.5～6min，30～80％B；6～7.2min，80％B→95％B；7.2～7.8min，95％B；7.8～10.5min，95％B→30％B；10.5～12min，30％B；
毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B和内标物替硝唑和咖啡酸的质谱参数如下：
Figure FDA0003772023880000021
2.根据权利要求1所述的参葵通脉颗粒7种有效成分的质量检测方法，其特征在于：毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的线性回归方程如下：
成分 回归方程 r<sup>2</sup> 毛蕊异黄酮葡萄糖苷 Y＝0.0714845+0.172954*X 0.9923 淫羊藿苷 Y＝0.105823+0.650492*X 0.9974 黄芪甲苷 Y＝0.00112711+0.0024567*X 0.9930 丹参素钠 Y＝-0.133008+0.0740296*X 0.9944 金丝桃苷 Y＝-1.18138+0.200215*X 0.9944 橙皮苷 Y＝-1.06837+0.394587*X 0.9908 丹酚酸B Y＝-0.794318+0.0198573*X 0.9941
。
CN202010066939.3A 2020-01-20 2020-01-20 一种参葵通脉颗粒的质量检测方法 Active CN111239270B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010066939.3A CN111239270B (zh) 2020-01-20 2020-01-20 一种参葵通脉颗粒的质量检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010066939.3A CN111239270B (zh) 2020-01-20 2020-01-20 一种参葵通脉颗粒的质量检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111239270A CN111239270A (zh) 2020-06-05
CN111239270B true CN111239270B (zh) 2022-09-09

Family

ID=70872859

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010066939.3A Active CN111239270B (zh) 2020-01-20 2020-01-20 一种参葵通脉颗粒的质量检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111239270B (zh)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107271577B (zh) * 2016-04-08 2020-10-30 天士力医药集团股份有限公司 一种芪苓温肾消囊制剂的有效成分分析方法
CN110579553B (zh) * 2019-09-29 2023-08-01 江苏省中医院 一种参葵通脉颗粒的质量检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN111239270A (zh) 2020-06-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111443142B (zh) 一种保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法
CN109324126B (zh) 一种利用uplc-ms/ms同时测定酸枣仁中9种化学成分的方法
CN114252532B (zh) 一种防风通圣颗粒指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
CN111289648B (zh) 一种中药复方制剂指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
CN111239270B (zh) 一种参葵通脉颗粒的质量检测方法
CN104447892A (zh) 一种精氨酸双糖苷检测方法及其医用用途
CN108414667B (zh) 一种参桂益心颗粒质量标准的检测方法
CN105675734B (zh) 一种复方丹参浸膏中低聚糖成分的含量测定方法
CN114994220A (zh) 一种七清败毒颗粒的指纹图谱的构建方法和其成分含量的测定方法及应用
CN112858550B (zh) 一种不同厂家和/或相同厂家不同批次银杏叶药物相似度的分析方法
CN109917045B (zh) 一种同时测定制狗脊饮片中5种成分含量的hplc方法
CN107102087A (zh) 一种离子色谱检测黄连中多种有机酸含量的方法
CN107957452A (zh) 一种检测血浆中酚酸类物质的方法
CN107941927B (zh) 一种uplc/q-tof-ms测定党参炔苷含量的方法
CN113759011A (zh) 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法
CN105203469A (zh) 一种治疗股骨头坏死药物的检测方法
CN113917031B (zh) Uhplc-ms/ms法测定补肺活血胶囊在体内血药浓度的方法
CN112763609A (zh) 一种针对洋甘菊抗哮喘活性成分筛选提取工艺的研究方法
CN111704593A (zh) 基于响应面的生物酶法优化提取丹参中丹参酮iia和丹酚酸b的工艺方法
CN110907581B (zh) 复方丹参制剂七种成分血浆或组织浓度的质谱检测方法
CN111537652B (zh) 一种双黄痛风胶囊的多成分含量的测定方法
CN110095551B (zh) 一种人参皂苷的分离检测方法
CN115166066B (zh) 芪珠升白口服液的质量评价方法
CN113533563B (zh) 一种同时检测舒肝和胃止痛中药四种成分含量的方法
CN117388397A (zh) 一种益肾清利活血方的质量检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant