CN102416028A

CN102416028A - 熟三七提取物和熟三七总皂苷的制备方法

Info

Publication number: CN102416028A
Application number: CN2011102684562A
Authority: CN
Inventors: 王东; 张颖君; 许敏; 朱宏涛; 杨崇仁
Original assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Current assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date: 2011-09-12
Filing date: 2011-09-12
Publication date: 2012-04-18

Abstract

提供一种与现有技术不同的熟三七提取物和熟三七总皂苷的制备方法，利用本发明的方法，采用蒸制生三七提取物以获得熟三七提取物，由于提取物处于水溶液状态，利于皂甙的结构转化，热量传导更快，在蒸制时受热更均匀，皂苷成分的转化一致，同时缩短蒸制时间、降低能耗。此外，使用浓缩的三七提取物进行蒸制，大大减小了蒸制原料的体积，有利于简化蒸制设备，降低生产成本，同时便于操作，制备过程简单易行，生产周期短，易于规模化制备和工业化生产。按本发明的方法生产的熟三七提取物和熟三七总皂苷，其化学组成与现行的蒸制方法所得产品完全一致，且产品质量易于控制，易于实现生产的规范化。

Description

熟三七提取物和熟三七总皂苷的制备方法

技术领域：

本发明属于药物领域，具体地，涉及一种熟三七提取物的制备方法和熟三七总皂苷的制备方法。

背景技术：

三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)又名田七、金不换等，为五加科(Araliaceae)人参属植物，是我国著名的珍贵中药材。三七为中医血症之要药，用于内外伤等出血症，并有补血养血的作用。三七历来有“生撵熟补”之说，生三七用于散瘀止血，消肿定痛。熟三七则有补血活血、强壮补虚的作用。三七的炮制始见于明代的文献记载，传统的炮制方法有蒸制、炒制、烤制、蒸制、酒制、黄精汁制等。由于烤制便于操作，部分生产者以三七药材的干品为原料，采用烤制工艺加工生产熟三七。油炸法则仅在个别小型作坊或个体家庭作坊中使用。目前较常使用的三七炮制方法是蒸制，但目前尚缺乏统一、规范的加工工艺和质量标准。三七的蒸制需要水分与高温的共同参与。现有技术的蒸制方法用干燥的三七或三七粉进行蒸制，在蒸制过程中先要使干燥的原料被水分浸润，大大增加了蒸制所需时间，因而能耗也较高。而且，由于在蒸制过程中，水分的逐渐不同步浸润使得原料内、外部的水分及热量分布都不均一，从而使皂苷成分的转化程度也不一致，产品质量不易稳定。在用三七粉进行蒸制时，由于三七含有大量淀粉，表面容易产生糊化，又阻止了水蒸气进一步透入内部，不仅延长了蒸制时间，增加能耗，还加剧了受热不均，产品质量不易控制的问题。

发明内容：

针对现有技术存在的上述不足，本发明旨在提供一种与现有技术不同的熟三七提取物和熟三七总皂苷的制备方法，利用本发明的方法，采用蒸制生三七提取物以获得熟三七提取物，由于提取物处于水溶液状态，利于皂甙的结构转化，热量传导更快，在蒸制时受热更均匀，皂苷成分的转化一致，同时缩短蒸制时间、降低能耗。此外，使用浓缩的三七提取物进行蒸制，大大减小了蒸制原料的体积，有利于简化蒸制设备，降低生产成本，同时便于操作，制备过程简单易行，生产周期短，易于规模化制备和工业化生产。按本发明的方法生产的熟三七提取物和熟三七总皂苷，其化学组成与现行的蒸制方法所得产品完全一致，且产品质量易于控制，易于实现生产的规范化。

下面的技术方案是用来实现上述的发明目的的：

熟三七提取物的制备方法，包括生三七提取物提取、蒸制、干燥步骤，取干燥或新鲜的三七地下部分经破碎，以乙醇或甲醇或不同浓度的乙醇或不同浓度的甲醇加热提取或冷浸提取，减压回收有机溶剂，得到生三七粗提物；将生三七粗提物置于高压锅内经100℃蒸汽或高于100℃高压蒸汽蒸制3-10小时得熟三七提取物。

所述的熟三七提取物的制备方法，将熟三七提取物进一步纯化、干燥后得熟三七总皂苷，所说的纯化是将熟三七提取物通过大孔吸附树脂柱层析进行纯化，用水充分洗涤，除去糖、蛋白质、有机酸等杂质后，以50-100％浓度乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部分，减压回收洗脱液，浓缩后干燥得熟三七总皂苷。

所述的熟三七提取物的制备方法，其干燥方法用热风干燥或真空干燥或冷冻干燥或喷雾干燥。

在蒸制加工过程中三七的皂苷成分发生转化，水分是转化的必要条件，不仅直接参与了皂苷转化的化学反应，同时也是热量传导的媒介，而高温则可加速皂苷成分的转化。现有的三七蒸制方法系用生三七直接进行蒸制得到熟三七，再进行后续加工。本发明采用先制备生三七提取物再对其进行蒸制的方法制备熟三七提取物和总皂苷。HPLC分析结果表明，两种方法所得的提取物及总苷的化学组成完全一致。但本发明的方法与现有方法比较有如下优点：

1、三七的蒸制需要水分的参与。现行的蒸制方法用干燥的三七或三七粉进行蒸制，在蒸制过程中首先需要使干燥的原料被水分浸润，大大增加了蒸制所需时间，因而能耗也较高。而且在蒸制过程中，水分的浸润是一个逐渐的过程，使得原料内、外部的水分及热量分布都不均一，从而使皂苷成分的转化程度也不一致，产品质量不易稳定。在用三七粉进行蒸制时，由于三七含有大量淀粉，表面容易产生糊化，可阻止水蒸气进一步透入内部，不仅延长了蒸制时间，增加能耗，还加剧了受热不均，产品质量不易控制。

2、本发明使用三七提取物进行蒸制，提取物处于水溶液状态，有利于皂甙的结构转化，同时热量传导更快，可缩短蒸制时间、降低能耗。对比实验结果表明，达到同样的蒸制效果，蒸制三七提取物与蒸制干三七比较，至少可节省2-5小时的蒸制时间(根据三七的破碎程度而不等)。

3、本发明使用三七提取物进行蒸制，由于热量传导快，在蒸制时受热更均匀，皂苷成分的转化一致，产品质量容易控制，生产的规范化更易于实现。

4、本发明使用浓缩的三七提取物进行蒸制，大大减小了蒸制原料的体积，有利于简化蒸制设备，可降低生产成本，同时便于操作和规模化生产。

附图说明：

图1为本发明的熟三七提取物的薄层层析图(1.Rb₁，2.Rg₁，3.Rg₅，4.Rh₄，5.熟三七提取物)；

图2为本发明的熟三七取物的HPLC分析图谱[1：20-(S)Rh₁，2：20-(R)Rh₁，3：Rk₃，4：Rh₄，5：20-(S)Rg₃，6：20-(R)Rg₃，7：Rk₁，8：Rg₅]。

具体实施方式：

下面结合附图，用本发明实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

一、本发明熟三七提取物和熟三七总皂苷提取物的制备方法：

1.熟三七提取物的制备方法：

用于制备熟三七提取物的植物原料为五加科人参属植物三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)的新鲜或干燥的全根或各个不同的地下部位，包括根茎(俗称剪口、芦头)、主根(俗称头子)、支根(俗称筋条、大筋)和须根以及按各种比例混合的上述不同部位。

本发明制备熟三七提取物的具体步骤如下：

生三七粗提物制备：干燥或新鲜的三七地下部分通过机械破碎为一定的粒度。以乙醇或甲醇或不同浓度的乙醇或不同浓度的甲醇，加热提取或不加热提取，减压回收有机溶剂，得到不同含水量生三七粗提物。

蒸制：将生三七粗提物置于高压锅内经蒸制得到熟三七提取物。蒸制方法中使用100℃蒸汽或高于100℃高压蒸汽蒸制。蒸制时间3-10小时。蒸制时间不同，所得到的产物中皂苷的转化程度有所不同。

干燥：根据需要与条件选择不同方法进行干燥，干燥方法包括但不限于热风干燥、真空干燥法、冷冻干燥法，喷雾干燥法等。

按该方法制备的熟三七提取物及熟三七总苷具有与生三七不同的化学组成。以人参皂甙Rh₄和人参皂甙Rg₅为主要成分，并含有一定量的人参皂甙20(S)-Rg₃，20(R)-Rg₃，20(S)-Rh₁，20(R)-Rh₁，Rk₁和Rk₃以及其它微量的达玛烷型四环三萜配糖体。

薄层层析分析：按本发明制备的熟三七提取物，薄层层析的主要斑点与人参皂甙Rh₄和人参皂甙Rg₅标准对照品的Rf值相同(图1)。

高效液相色谱(HPLC)分析：按本发明制备的熟三七提取物具有如图2所示的高压液相色谱指纹图谱。定量分析结果表明，人参皂甙Rh₄和人参皂甙Rg₅为主要的化学成分。

2.熟三七总皂苷的制备方法：

制备熟三七总皂苷的具体步骤如下：

按照1所述熟三七提取物的制备方法制备得到熟三七提取物，通过大孔吸附树脂柱层析进行纯化。用水充分洗涤，除去糖、蛋白质、有机酸等杂质后，以乙醇洗脱。收集乙醇洗脱部分，减压回收溶剂。减压回收洗脱液，浓缩后干燥，得到粉末状的熟三七总皂苷。根据需要与条件选择不同方法进行干燥，干燥方法包括但不限于热风干燥、真空干燥法、冷冻干燥法，喷雾干燥法等。薄层层析检测和高压液相色谱(HPLC)分析方法同1。

二、熟三七提取物及熟三七总皂苷的检测方法(适应于本发明全部实施例)：

检测熟三七提取物及熟三七总皂苷中皂甙成分使用薄层层析和高效液相色谱(HPLC)分析方法：

1.薄层层析检测

取熟三七提取物及标准对照品适量，加甲醇分别制成10mg/ml和1mg/ml的溶液，吸取供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(8∶2∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液显色。结果见图1。

2.高效液相色谱(HPLC)检测：

色谱条件：HPLC条件色谱柱以用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱规格：4.6×250mm，5μm或4.6×150mm，5μm)；以流动相A：乙腈，流动相B：水，按表1进行梯度洗脱；流速每分钟为1.0ml，；检测波长为203nm；柱温25℃。

表1HPLC检测梯度洗脱

时间(分钟)	A(％)	B(％)
			0	20	80
20	22	78
			45	45	55
55	55	45
			90	90	10

对照品溶液的制备：精密称取在60℃减压干燥至恒重的皂苷对照品，以甲醇溶解配制为1mg/ml的浓度即得。

供试品溶液的制备：精密称取样品粉末适量，于10ml容量瓶中加入70％甲醇定容，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过即得。

测定法：对照品溶液以不同体积进样，并制作标准曲线。供试液进样10μl，根据标准曲线计算样品的各皂苷成分的含量。

表2.本发明的熟三七取取物三七皂苷含量

实施例2：

熟三七提取物的制备：

取干燥三七主根5kg粉碎，70％乙醇80℃回流提取3次，浓缩蒸去醇，得约2L粗提液。

三七粗提液于5L玻璃三角瓶内，置于高压灭菌锅内120℃下蒸制8小时。

待液体冷却后将浓缩液置于冷冻干燥器中，冷冻干燥，得到皂苷转化完全的熟三七提取物720g。

实施例3：

熟三七提取物的制备：

取干燥三七剪口5kg粉碎，70％甲醇冷浸提取3次，浓缩蒸去醇，得棕黑色三七浸膏约1.3kg。

三七浸膏于白搪瓷盘中，置于高压灭菌锅内100℃下蒸制6小时。

待液体冷却后将浓缩液置于冷冻干燥器中，冷冻干燥，得到熟皂苷转化完全的三七提取物764g。

实施例4：

熟三七提取物的制备：

取干燥三七剪口5kg粉碎，70％乙醇80℃回流提取3次，浓缩蒸去醇，干燥后得三七粗提物760g，保存待用。

三七粗提物加3L水混悬，于5L玻璃三角瓶内，置于高压灭菌锅内100℃下蒸制10小时。

待液体冷却后将浓缩液置于冷冻干燥器中，冷冻干燥，得到熟皂苷转化完全的三七提取物748g。

实施例5：

熟三七总皂苷的制备：

取新鲜三七主根25kg切碎，用工业乙醇80℃回流提取3次，浓缩蒸去醇，得约3L粗提液。

三七粗提液于不锈钢桶内，置于高压灭菌锅内蒸制，待温度达到120℃后保持温度6小时。

将蒸制的粗提液加5倍体积水稀释，过滤后上D101大孔吸附树脂柱，用水洗脱至洗脱液无色无味。继以乙醇洗脱至洗脱液用硫酸-乙醇试剂检查为负反应。乙醇洗脱部分减压回收溶剂。

将浓缩液喷雾干燥，得到熟三七总皂苷481g。

Claims

1.熟三七提取物的制备方法，包括生三七提取物提取、蒸制、干燥步骤，其特征在于取干燥或新鲜的三七地下部分经破碎，以乙醇或甲醇或不同浓度的乙醇或不同浓度的甲醇加热提取或不加热提取，减压回收有机溶剂，得到生三七粗提物，将生三七粗提物置于高压锅内经100℃或高于100℃高压蒸汽蒸制3-10小时得熟三七提取物。

2.如权利要求1所述的熟三七提取物的制备方法，其特征在于将熟三七提取物进一步纯化、干燥后得熟三七总皂苷，所说的纯化是将熟三七提取物通过大孔吸附树脂柱层析进行纯化，用水充分洗涤，除去糖、蛋白质、有机酸等杂质后，以50-100％浓度的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部分，减压回收洗脱液，浓缩后干燥得熟三七总皂苷。

3.如权利要求1所述的熟三七提取物的制备方法，其特征在于干燥方法用热风干燥或真空干燥或冷冻干燥或喷雾干燥。