JP2007510409A5 - - Google Patents

Claims (13)

1. ウイルス及び／又は細胞遺伝子の組合せ、すなわち網膜芽細胞腫タンパク質とＥ２Ｆ転写因子の間の複合体の破壊を仲介することによって網膜芽細胞腫タンパク質の機能に影響を及ぼす少なくとも１個の第一遺伝子とｐ５３タンパク質又はそのファミリー成員に影響を及ぼす少なくとも１個の第二遺伝子の組合せを用いて非ウイルストランスフェクションによって不死化されたトリ細胞株であって、ここで前記第二遺伝子は、ｐ５３による成長停止とアポトーシスの誘導を妨げるタンパク質をコードするウイルス遺伝子であるか、又はｐ５３による成長停止とアポトーシスを阻害する細胞遺伝子である、トリ細胞株。
2. 前記第一遺伝子がＧ１チェックポイント制御を克服し、前記第二遺伝子が第一遺伝子によって誘導されるアポトーシスを阻害する、請求項１に記載のトリ細胞株。
3. （ｉ）前記細胞株が、胚又は孵化ニワトリ、アヒル、ガチョウ、又はウズラ、好ましくはニワトリ又はアヒルに由来する；及び／又は
   （ｉｉ）不死化に供する細胞が、線維芽細胞を含む初代細胞、すなわち単離された体分節（体節）又は神経、脳、網膜、腎臓、肝臓、心臓、筋肉及び胚を保護する胚体外組織及び膜を含む分離された個別器官からの細胞である；及び／又は
   （ｉｉｉ）不死化が、リポソーム及びデンドリマーを介したトランスフェクション及び電気穿孔法を含むがこれらに限定されない、非ウイルス性トランスフェクションによって行われる；及び／又は
   （ｉｖ）前記第一遺伝子が、網膜芽細胞腫タンパク質とＥ２Ｆ転写因子の複合体の破壊を仲介するウイルス遺伝子、例えばマストアデノウイルスから、好ましくはＣ群のマストアデノウイルスからのアデノウイルスＥ１Ａ遺伝子、パピローマウイルス、好ましくは低リスクヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（ＨＰＶ１、ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１など、ＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８は含まない）のＥ７遺伝子、トリアデノウイルスのｏｒｆ２２遺伝子、ヒツジアットアデノウイルス（ｏｖｉｎｅ ａｔｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）のＥ４３オープンリーディングフレーム等であるか、又は網膜芽細胞腫タンパク質とＥ２Ｆ転写因子の複合体の破壊を仲介する細胞遺伝子、例えばサイクリンＤ１、Ｄ２又はＤ３、ｐ１６ＩＮＫ４ａによる不活化に感受性でない突然変異型ＣＤＫ４等である；及び／又は
   （ｖ）前記第二遺伝子が、ｐ５３による成長停止とアポトーシスの誘導を妨げるタンパク質、例えば全ての群のアデノウイルスＥ１Ｂ５５Ｋタンパク質、ＣＥＬＯのＧＡＭ−１、パピローマウイルス、好ましくは低リスクＨＰＶ（ＨＰＶ１、ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１など、ＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８は含まない）のＥ６タンパク質をコードするウイルス遺伝子であるか、又はｐ５３による成長停止とアポトーシスを阻害する細胞遺伝子、例えばｍｄｍ２等である；及び／又は
   （ｖｉ）前記第一遺伝子と第二遺伝子が、異種配列によって空間的に切り離されているか又は異なる核酸セグメント又はプラスミド上に位置する、
   請求項１または２に記載の細胞株。
4. （ｉ）好ましくは、前記Ｅ１Ａ及びＥ１Ｂ領域はアデノウイルス５型に由来し、より好ましくは、前記Ｅ１Ａ領域は配列番号７のｂｐ１１９３−２３０９の配列又は配列番号９のｂｐ４２３０−３１１３に相補的な配列を有し、及び前記Ｅ１Ｂ領域は配列番号８のｂｐ１１４５−３００７の配列又は配列番号９のｂｐ２３４５−５５０に相補的な配列を有する、マストアデノウイルス属からのアデノウイルスのＥ１Ａ（第一遺伝子）及びＥ１Ｂ（第二遺伝子）領域；及び／又は
   （ｉｉ）好ましくは、それぞれ配列番号１０のｂｐ１２５２−６３５に相補的な配列及び配列番号１０のｂｐ３１３８−２２９０に相補的な配列によって表わされる配列を有する、アデノウイルス、好ましくはアデノウイルスＣＥＬＯ属からのｏｒｆ２２（第一遺伝子）及びＧＡＭ−１（第二遺伝子）遺伝子；及び／又は
   （ｉｉｉ）上記（ｉ）及び（ｉｉ）で定義したＧＡＭ−１及び／又はＯｒｆ２２を有する、Ｅ１Ａ及び／又はＥ１Ｂをコードする核酸の組合せ
   で不死化される、請求項３に記載の細胞株。
5. （ｉ）導入遺伝子、例えば欠損ウイルスを補う遺伝子（例えばＥＢＮＡ１等）、プロモーター（例えばＰＧＫ−、ＥＦ１．α−、ＣＭＶプロモーター、ｔｋ−プロモーター等）、エンハンサー（例えばＲＳＶ−ＬＴＲ）、選択マーカー、例えばネオマイシン耐性、ピューロマイシン耐性等を含むがこれらに限定されない、非天然機能性配列を付加的に担持する；及び／又は
   （ｉｉ）ワクチン株及び組換えウイルスベクターを含む、生物学的製剤又はウイルスの生産に適する、
   請求項１から４のいずれか一項に記載の細胞株。
6. （ｉ）逆転写酵素活性を持たない；及び／又は
   （ｉｉ）アヒル胚又は孵化アヒルを起源とする初代細胞の不死化に由来する；及び／又は
   （ｉｉｉ）胚体外膜に由来する；及び／又は
   （ｉｖ）好ましくは動物血清を含まない、化学的に規定された培地で培養される、
   請求項１から５のいずれか一項に記載の細胞株。
7. トリ細胞株１２Ａ０７−Ａ１０（ＤＳＭ ＡＣＣ２６９５）である、請求項１又は６に記載の細胞株。
8. 第一及び第二遺伝子で出発細胞を形質転換／トランスフェクトすることを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の細胞株を作製するための方法。
9. 出発細胞の非ウイルス性トランスフェクションを含む、請求項８に記載の方法。
10. 生物学的製剤又はウイルスの生産のための、請求項１から７のいずれか一項に記載の細胞株の使用。
11. （ｉ）前記ウイルスを請求項１から７のいずれか一項に記載の細胞株と接触させること；及び／又は
    （ｉｉ）前記細胞株上で前記ウイルスを培養すること
    を含む、ウイルスを生産するための方法。
12. アヒル細胞株、好ましくはアヒル体節又はアヒル神経組織、さらに一層好ましくはアヒル網膜を起源とする細胞株において、好ましくはＭＶＡ株の、ポックスウイルスを生産するための請求項１１に記載の方法。
13. （ｉ）プロモーターに作動可能に連結された、組換えタンパク質をコードする遺伝子を、請求項１から７のいずれかに記載の細胞株に導入すること、
    （ｉｉ）前記改変細胞株を培養すること、及び
    （ｉｉｉ）組換えタンパク質を回収すること、
    を含む、組換えタンパク質を生産するための方法。