JP2006023297A - 高分子由来の微粒子を含有する組成物の方法および使用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 水性の高分子溶液を脱水し、そして脱水した高分子を水相中で、または加熱しながら架橋剤で架橋結合して形成する高分子微粒子の作成方法。ここで、脱水剤がポリビニルピロリドンおよびポリエチレングリコールのポリマー混合物であり、架橋剤がグルタルアルデヒドであり、そして高分子がタンパク質、最も好ましくは免疫グロブリンであるものが好ましい。
【選択図】 なし
Description
b)インキューベーション混合物から微粒子を分離する工程、を含んで成り、かつ、高分子が、脱水剤とインキューベーションされる間またはインキューベーションの前後に架橋剤により架橋される、ことを特徴とする微粒子の作成方法。
b)インキューベーション混合物から微粒子を分離し、ここで、高分子が、脱水剤とインキューベーションされる間またはインキューベーションの前後に架橋剤により架橋される工程、
c)微粒子を、標的分子を含有する複合混合物と該微粒子が該標的分子に結合するのに十分な時間混合する工程であって、ここで、微粒子は標的分子に親和性を有するものである、工程、および
d)結合した標的分子を複合混合物から分離する工程、
を含むことを特徴とする標的分子を含有する複合混合物から標的分子の単離方法。
b)検出可能な造影剤を検出する工程、
を含むことを特徴とする試料中の標的分子の検出方法。
[発明を実施するため具体的な態様]
微粒子、調製法およびキットを診断、治療および研究使用のために提供する。微粒子は大きな表面積を有する架橋結合された高分子構造物である。微粒子を形成する高分子には限定するわけではないが、タンパク質、炭水化物、多糖、核酸、ウイルス、ウイルス粒子、有機または無機合成医薬化合物またはそれらの混合物であり、これらを脱水条件下の液相中で架橋結合することができる。
<ポリマー性微粒子の形成>
微粒子は粒子が形成するために十分量の架橋剤または加熱時間で、高分子を脱水剤が存在する溶液中で、あるいは液相中でインキューベーションすることにより形成される。高分子を始めに水性溶媒中に溶解し、次に高分子溶液を脱水剤に加えるか、あるいは脱水剤を高分子溶液に加えるかのいずれか、好ましくは後者である。微粒子を形成するために、脱水された高分子溶液を次に好ましくは予め定めた時間の長さで加熱する。あるいは微粒子を形成するために、架橋剤を脱水高分子溶液に室温の前後または室温のような様々な温度で加える。生成した微粒子を、次にインキューベーション混合物中に存在する未反応成分から当該技術分野で周知な物理的分離法により分離する。
<高分子>
微粒子を形成する高分子は液相で架橋することができる任意の分子である。最も好ましくは、高分子はタンパク質、炭水化物、多糖、核酸、ウイルス、ウイルス粒子またはそれらの混合物である。高分子は架橋することができる天然または合成の医薬化合物でもよい。当業者は架橋することができない化合物は、本明細書にて提供される方法により続いて架橋されるキャリアー分子中に化合物を取り込んだ微粒子を形成することができることを理解するだろう。さらに当業者は高分子も、例えばペプチド、二本鎖の核酸分子の一本鎖区分またはウイルス粒子のようなリガンドと結合または相互作用するのに必要な活性を有する分子の一部であることができると理解するだろう。また当業者は、「高分子」という用語は複数の高分子を含み、そして例えば医薬化合物と、医薬化合物を治療が必要な組織、器官または腫瘍へ標的化するための親和性分子との組み合わせなどのような各種高分子の組み合わせ物を含むことも理解するだろう。
<標識化高分子>
高分子を検出しうるラベルで標識することができる。タンパク質および核酸分子を標識する様々な種類の標識またはラベルおよび方法が当該技術分野で周知である。当業者は、例えば金属のような磁気性物質または磁気粒子はラベルという用語の定義内に含まれると理解するだろう。例えば高分子を金属のような金属性物質で標識して、微粒子を磁気性デバイスにより溶液中の他の物質から分離できるようにすることができる。
<脱水剤>
脱水剤は水を高分子から高イオン性媒質に拡散させることができる化合物または化合物の混合物である。適当な脱水剤には、硫酸塩、亜硫酸塩、チオ硫酸塩、リン酸塩、あるいはアルカリ金属、アンモニウムまたはマグネシウムのハロゲン塩のような天然の塩;グリシン;エタノールのような水溶性有機溶媒;高分子量の水溶性非イオン性直鎖または分枝ポリマー;亜鉛のような金属イオン;乳酸2−エトキシ−6,9−ジアミノ−アクリジンのような有機カチオン;小さいアニオン;ならびにポリリン酸およびポリアクリル酸のようなポリアニオンがある。
<加熱を利用するインキューベーション条件>
微粒子は高分子および脱水剤混合物を室温よりも高い温度で予め定めた時間インキューベーションすることにより形成される。好ましくは混合物を水浴中で37℃以上で、かつ80℃以下の温度で約5分から2時間インキューベーションする。最も好ましくは混合物を50℃から70℃の温度で15−30分間インキューベーションする。
<架橋剤>
また、微粒子は脱水した高分子を架橋結合させるために架橋剤を加えて形成される。架橋剤は高分子を物理的に連結するニ官能性または多官能性化学試薬であり、そして場合によっては脱水剤を連結することもある。適当な架橋剤の例には、ジアルデヒドまたはアミン類、多価イオンおよび架橋される高分子上の特定の反応性基に「親和性」を有する多官能性分子のような他の試薬がある。
<架橋するためのインキューベーション条件>
微粒子を形成するために、アンモニウムまたはナトリウム塩、有機溶媒、亜鉛のような二価イオンまたはカオトロピック剤のようなポリマー溶液以外の脱水剤を使用するときは、微粒子を形成するための正しい架橋剤の組み合わせを注意深く選択しなければならない。なぜならば脱水剤と架橋剤との間に相互作用が起こることがあるからである。微粒子は硫酸アンモニウム、グルタルアルデヒドおよびタンパク質を使用して形成されるが、反応物濃度は直鎖ポリマーを使用して形成される微粒子に必要であるものとは異なる。
<結合性部位のクエンチング>
当業者は後の非特異的結合を減らすために、架橋剤の任意の未反応結合性部位をブロックするために、インキューベーション後に生成した微粒子にクエンチング(停止)剤を加えることができると考えるだろう。脱水剤がPVP/PEGのような直鎖ポリマー溶液である場合には、適当なクエンチング剤はアミノ酸またはアルブミンのような化合物であり、これらは相当数のアミノ基を含有する。好ましくはクエンチング剤はリシンまたはグリシンを含む溶液である。最も好ましくはクエンチング剤はアミノ酸グリシンであり、その濃度は0.1から0.5Mの範囲である。
<微粒子の精製>
生成した微粒子をインキューベーション混合物中の未反応成分から、当該技術分野で周知の通常の分離法により分離する。好ましくはインキューベーション混合物を微粒子が遠心管の底に落ちるように遠心し、そして未反応成分は上清に残り、これを次にデカントする。あるいは生成した微粒子を含むインキューベーション混合物を、微粒子がフィルターに残り、そして未反応成分がフィルターを通過するように濾過する。
<微粒子の特性>
前述の方法で生成した微粒子は、温度、ポリマーサイズおよび混合物、ならびにタンパク質濃度に応じて1つ以上の活性部位が各微粒子の表面に存在する球状または非球状の形状であることができる。長円形および顆粒状の微粒子は、球状の微粒子ビーズよりもより大きな表面積を持つ粒子を作り、そして従来の球状ビーズで達成されるよりも微粒子あたり、より多くの数の高分子の取り込みを可能にする。
<インビトロ 診断>
<インビトロ アッセイ>
本明細書に記載された微粒子はアッセイ(酵素−結合免疫吸着体アッセイ、ドット−ブロットまたはウエスタンブロットのような)における固体相粒子として、生物試料中の特定の標的(細胞、生体分子または薬剤のような)を検出するために有用である。この使用のために設計された微粒子は標的分子に特異的な親和性分子を含む。例えば高分子が免疫グロブリンであり、細胞レセプターまたはオリゴヌクレオチドプローブであり、そして高分子が試験管またはマイクロタイタープレートに結合している。
<組織病理学>
本明細書に記載された微粒子は組織学的試料中の病理学上の視覚的プローブまたはマーカーとして有用である。この使用に設計された微粒子の高分子は特定の病理状態に現れる生体分子に特異的であり、検出できるラベルで標識される。例えば高分子は免疫グロブリン、細胞レセプターまたはオリゴヌクレオチドプローブであり、これらは急速に増殖する細胞のような異常な細胞または病原体(例えばウイルス)に特異的である。
<インビボ診断−画像化>
本明細書に記載された微粒子は上記の組織病理学用の微粒子の使用について記載されたものと同様に、特定分子、細胞のタイプまたは病理状態のインビボでの位置に関する造影剤として有用である。この使用のために設計された微粒子上の高分子は、特定の細胞または病原生物により発現されている分子に特異的であり、そして検出できるラベルで標識される。例えば、高分子は免疫グロブリン、細胞レセプターまたはオリゴヌクレオチドプローブであり、これらは腫瘍細胞またはウイスルのような病原体に特異的である。
<治療−ドラッグデリバリーシステム>
微粒子は架橋結合医薬品化合物または架橋結合キャリアー(アルブミンのような)含有治療剤から成るとき、治療に有用である。微粒子は薬剤を全身に徐放して提供するか、あるいは微粒子は標的組織、腫瘍に特異的な親和性分子を含むこができ、そして治療薬(抗腫瘍、抗ウイルス、抗菌、抗寄生虫または抗関節炎剤、あるいはサイトカイン、ホルモンもしくはインスリンのような)の標的送達のような治療が必要な部位に直接患者に注射するかのいずれかで提供できる。
<研究への応用>
微粒子は複雑な混合物から生体分子を精製するために研究の道具として、生体分子を検出または定量するための試薬として、または抗体のような生体分子の生産のためにも有用である。
<微粒子を調製するためのキット>
微粒子を調製するためのキットを提供する。キットは以下の試薬を含む:脱水剤および架橋剤。キットの使用者はカスタム微粒子の調製用キットとして使用することができ、ここでは使用者が微粒子中に形成される高分子を供給することになるだろう。あるいはキットは使用者が目的とする微粒子の調製用に1つ以上の高分子を溶液状または凍結乾燥状で含むことができる。形成された微粒子は次に研究、治療または診断を目的として上記のように使用できる。キットは好ましくはリン緩衝塩溶液のような緩衝液も含み、架橋剤による非特異的結合をブロックするためのグリシンのようなクエンチング剤を含む。キットは試料または患者の微粒子の存在を検出するための手段を提供するために検出しうるラベル、またはあらかじめ標識した高分子も含むことができる。
<微粒子の形成>
微粒子をガンマグロブリン、5つのうちの1つの分子量調製物(MW 10,000−360,000)の5−25%ポリビニルピロリドン溶液、および一定分子量(MW 3,500)調製物の25%ポリエチレングリコール溶液(両方とも以下の実施例2に記載されたように調製した)を、グルタルアルデヒドの存在下で、6.9から7.75の間の反応pH範囲で、以下の工程で混合することにより形成した。微粒子は酸性および塩基性溶液中で安定であった。
<微粒子安定性分析>
微粒子の安定性に対する酸性または塩基性溶液の影響を分析するために、3種の反応を反応#3の第一再懸濁沈殿物について以下のように行った。
抗−CEA(がん胎児性抗原)微粒子は一般的に実施例1の反応#3について記載したように形成し、そしてより詳細には以下に記載した。形成した微粒子を次に種々の濃度の放射性CEAと混合し、抗−CEA抗体がCEAリガンドに親和性を保持したまま微粒子中に取り込まれたかどうかを測定した。
抗−CEA微粒子の調製
14.3%の各ポリマー溶液、ポリビニルピロリドン(MW 40,000)およびポリエチレングリコール(MW3500)(シグマ化学社、セントルイス、モンタナ州から得た)は、14.3グラムのポリマーを100mlの蒸留水に加えて調製した。14.3%の各ポリマー溶液のpHはおよそ6.25に調整した。このポリマー溶液を1:1で混合し、PVP/PEGポリマー混合物を作成した。
<結合性分析>
放射性CEA(I125)を10%の液体魚ゼラチンを含有するリン酸塩緩衝液で希釈した。希釈したI125CEAは100μlあたり39313カウントを含有した。
この実験ではIgG微粒子形成能力に対するpHの影響を実証した。
PVP/PEGのポリマー混合物を一般的に実施例2(48%の全ポリマー)に記載したように調製し、そしてpHを表4に示すように調整した。1ミリリットルの各溶液を各々7本の遠心管に入れた。
<観察>
精製IgGを試験管に加え、そして20分間混合した後、凝集サイズの傾向を観察した。PVP/PEG混合物のpHが上昇すると、形成する凝集物のサイズも大きくなった。
<第一沈殿物>
PVP/PEG混合物のpHが上昇すると、沈殿物は小さくなり、より湿っており、そしてオレンジ色になった。これらの特徴のこのような注目すべき変化はpH6.6で起こった。
<第一再懸濁液>
PVP/PEG混合物のpHと形成した粒子サイズの間には直接的な関係がある。pHが上昇すると粒子サイズは大きくなった。pH6.6で粒子はpH5.8よりも顕著に大きかった。
<第二沈殿物>
pH6.6以上で、沈殿物は試験管の壁に付着せず、そして極めて容易に試験管の壁から落ちた。pHが上昇すると沈殿物は黄色からオレンジ色になった。
<第二再懸濁液>
第一再懸濁液と同一。
<結論>
PVP/PEG混合物のpHが9.2から4.6に下がると、グルタルアルデヒドの架橋結合作用により形成した粒子のサイズはより小さくなり、そしてサイズがより均一になった。
1.60ミリグラムの鶏卵アルブミンを、実施例2に記載したように調製した2mlのPVP/PEGポリマー混合物に溶解した。pHを4.5に1N HClで調整した。200μlのカッペル(Cappell)アフィニティー精製ウサギ抗−ヤギIgG西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合物を加えた。
2.混合物を30分間、回転させた。
3.10%のグルタルアルデヒド溶液を1:4に希釈し、そして200μlを混合物に加えた。
4.混合物を30分間、回転させた。
5.混合物を1500rpmで30分間、20℃にて遠心し、そして上清を取り出した。
6.沈殿物をグリシン緩衝液に再懸濁し、そして1500rpmで10分間、20℃にて2回遠心することにより洗浄した。
7.沈殿物を1%魚ゼラチを含む0.15M Tris塩、pH7.4、2ml全容量、に再懸濁し、そして粒子を含有した。
<分析>
1.4滴のHRP基質を2つのガラス試験管に加えた。
2.工程7の4滴の再懸濁沈殿物を1つの試験管に加え混合した。
3.工程5の4滴の上清を別のガラス試験管に加え、そして混合した。
<結果>
1.工程5からの上清を含む試験管は透明だった(無色)。
2.工程7からの再懸濁沈殿物を含む試験管はマリンブルー色で、5分間以内で粒子がHRPにより標識されていることを示した。
蛍光標識した抗−ヒト絨毛膜ゴナドトロピン(抗−HCG)微粒子をBalb/cマウスに注射し、そしてクリアランスを検査した:
体重が35gのメスのマウスにフェノバルビタールを5分間注射した。腹腔を外科的に露出し、そして27 1/2 ゲージ針を使用して大動脈に蛍光標識した抗−HCGを注入した。
<分析>
1.1滴の血液(5分および10分)を、試料用のくぼみを持つスライドガラスに沈殿させ、そして試料をガラスカバースリップで覆った。1滴の油をスリップカバーに塗った。
2.血液試料を高出力を使用して蛍光顕微鏡(Zeiss IIIRS)で検査した。
3.強い蛍光が5分の細胞の回りに観察され、微粒子が動物にすぐには吸収されないことを示した。
4.弱い蛍光が10分の試料に観察された。
この実験は抗体微粒子の形成に対するPVP/PEGポリマー濃度の影響を測定するために行った。
<方法>
1容量のPVP/PEGポリマー混合物を実施例2に記載したように調製し、53.3%濃度のポリマーを有するポリマー混合物を形成し、pHを4.8に調整した。ポリマーの希釈は0.1M 酢酸ナトリウム、pH5.0を使用して以下の表5に説明するように作成した:
<結果>
各試験管には反応の開始から異なる外観が現れた。5.3%ポリマーを含有する試験管はわずかに沈殿し、そのほとんどが試験管の壁に一緒に凝集していた。53.3%ポリマーを含有する試験管は一緒に粘着しない、または試験管の壁に付かないきわめて微細な粒子を含んでいた。
<結論>
ポリマー濃度は、ポリマー混合物で作成された抗体粒子の特性の決定に明らかな役割を果たす。40%以上のポリマー濃度では付着しない大変微細な粒子が生成する。またポリマー混合物中のポリマー濃度が高いほど、より多数の抗体分子を形成することができる。
この実験は抗体粒子の形成に対するポリマー混合物をpHの影響を決定するために行った。
<方法>
8本の遠心管のそれぞれに1mlのヤギ血清アリコートを入れた。血清を15分間、1.8% Triton/3%Brij(シグマ化学社、セントルイス、モンタナ州)溶液と一緒にインキューベーションした。続いて2mlの40%ポリマー混合物と反応させた。ポリマー混合物の添加はボルテックス混合しながら行い、そして試験管を30分間混合した。試験管を次に30分間、3600rpm、20℃で遠心した。上清をデカントし、そして沈殿物を1mlの0.5M Imidazole(ベーカーケミカル社:Baker Chemical Co.)に再懸濁した。すべての試料は容易に、そして透明に再懸濁した。
<結果>
遠心後、試料はpHに関連して大きさおよび色の両方について明らかな勾配を表した。1X PBS中に再懸濁する前に、試料1、2および七中の沈殿は他の試験管中のものよりもわずかに小さかった。高アルカリ性ではポリマー混合物がタンパク質を沈殿させる能力を阻害するので、pH9.3の試料中では外観上の沈殿がなかった。酸性pH値の試料は白色で、勾配にそって黄色−オレンジ色が増加した。また、粒子サイズはpHに直接比例し、試料1の粒子が大変細かかった。pHが上昇するにつれて、粒子は大きく、そしてより凝集し易くなった。
<結論>
抗体粒子のサイズはポリマー混合物のpHを変化させることにより容易に制御できた。高pHで、グルタルアルデヒドはタンパク質のアミノ基と大変強い結合を形成し、塩基性試料の黄色−オレンジ色および全体の粘着性の原因となった。しかし酸性pH値で、グルタルアルデヒドの効果は低下した。粒子はそれでも形成することができるが、それらははるかに微細であり、塩基性ポリマー混合物で作成された粒子よりも凝集し易い傾向が弱くなる。
この実施例はグルタルアルデヒド量を上昇させてIgG微粒子形成に対する効果を示すために行った。
<実験法>
実施例2に記載した1.0mlのポリマー混合物(48%全ポリマー、pH4.8を含む)を7本の遠心管に入れた。各試験管に表7に示す様々な容量のグルタルアルデヒドを加えた。
<観察>
グルタルアルデヒドの量が増加すると、粒子数およびより濃いオレンジ色が増した。
<結論>
ポリマー混合物(48%全ポリマー)に加えたグルタルアルデヒド量の増加と、形成した粒子量の増加の間には直接的な関係があった。グルタルアルデヒドの量(25%水溶液2μlから200μlの間)は粒子サイズの上昇または減少に対して効果がないようだった。
この実験はPVP/PEGポリマー混合物および種々の濃度のグルタルアルデヒドで、ヒト絨毛膜ゴナドトロピン(HCG)特異的モノクローナル抗体微粒子を形成し、そして微粒子がHCG提示抗原に結合する能力を免疫アッセイで実証するために行った。
<実験法>
実施例2に記載した方法により調製した、一緒にプールしておいた2つの1ml精製HCG抗体試料を解凍した。よく混合した。グルタルアルデヒドのより低比率溶液(25%水溶液から)を以下の表8に説明するように増加させながら作成した。
<観察>
粒子サイズの傾向に注目した。グルタルアルデヒドの量が減少すると、粒子数は減少したが、粒子のサイズは上昇した。試験管#7(対照)に粒子は観察されなかった。
<免疫アッセイ>
上記のように調製した粒子を含む各試料50μlを6本の試験管の3組(A、BおよびC)中に入れた(全部で18本)。
グルタルアルデヒド濃度が減少すると、より少ない抗−HCGモノクローナル抗体微粒子が形成されたが、その粒子サイズはより大きかった。抗−HCG微粒子はヨード化HCG抗原と免疫アッセイで結合できる。抗−HCG微粒子は、FSHおよびエストラジオールのような他のヨード化抗原と免疫アッセイで非特異的に結合できない。
この実験はPVPおよびPEGポリマー混合物ならびにグルタルアルデヒドで破傷風トキソイド微粒子を調製するために行った。
<実験法>
1.0mlの54%PVP/PEGポリマー混合物を遠心管に入れた。100μlのグルタルアルデヒド(25%水溶液)を1つの試験管に入れ、そして10μlのグルタルアルデヒドを別の試験管に入れて徹底的にボルテックス混合した。0.5mlの破傷風トキソイド(1.0mg/ml)(公衆衛生部)を両方の試験管に加え徹底的にボルテックス混合した。
<観察>
100μlのグルタルアルデヒドを含む反応は10μlのグルタルアルデヒドを含む反応よりもより多い粒子を有した。両反応の粒子はサイズが同じであった。粒子は目で見たところ大変小さい。
この実験はPVP/PEGポリマー混合物ならびにグルタルアルデヒドでウシ血清アルブミン(BSA)微粒子の形成を実証し、そしてこの方法で使用する様々な容量のグルタルアルデヒドの効果を観察するために行った。
<実験法>
110mgのBSAを0.1M 11mlのTris(商標)塩基、pH9.0中に入れた。11mgのFITCを加え、pHを塩基で9.5に調整し、そして20℃で30分間混合し、蛍光標識BSAを生成した。
<結論>
各試験管にウシ血清アルブミン微粒子が形成した。グルタルアルデヒドの量を減少させると、より大きな凝集が形成し、さらに小さく細かな粒子がすべての容量のグルタルアルデヒド(1μlから200μl)で見られた。また、グルタルアルデヒド量を増加すると、小さい微粒子の数が増加した。
この実験はpH勾配にわたって、飽和硫酸アンモニウムを脱水剤として、そしてグルタルアルデヒドを架橋剤として使用して免疫グロブリン微粒子を調製するために行った。
<実験法>
100mlの飽和硫酸アンモニウム溶液は76.1gの硫酸アンモニム(フィッシャー科学社:Fisher Scientific、ピッツバーグ、ペンシルべニア州)を100mlの脱イオン水、pH5.2に入れて調製した。
<観察>
精製IgGをグルタルアルデヒドを含む硫酸アンモニウム(飽和)溶液に加えた直後に、試験管を混合すると粒子が見られた。
免疫グロブリン微粒子の調製
この実験は脱水剤として飽和硫酸アンモニウムおよびポリエチレングリコール(PEG)混合物を、そして架橋剤としてグルタルアルデヒドを使用して免疫グロブリン微粒子を調製するために行った。
<実験法>
100ml容量の飽和硫酸アンモニウム溶液を実施例12に記載したように調製した。20%のポリエチレングリコール(シグマ、セントルイス、モンタナ州)溶液(0.1M 酢酸ナトリウム、pH4.8中)も調製した。硫酸アンモニウム溶液を小増分で10mlのPEG溶液に硫酸アンモニウムが沈殿するまで加えた。溶液中に存在した最大の硫酸アンモニウム容量は1.2mlであった。1mlのこの硫酸アンモニウム/PEG溶液を8本の各試験管に小分けした。試験管に次に25%グルタルアルデヒド(シグマ、セントルイス、モンタナ州)を、以下の表12に特定する量で加えた。
<結果>
初めの遠心後、沈殿物はサイズおよび色が異なり、沈殿物はグルタルアルデヒド濃度が増すとより大きく、そして暗くなった。沈殿物を分散させ、そしてよく混合した後、試験管#1(これはグルタルアルデヒドを加えていない)を除いてすべての試験管に粒子が現れた。試験管2−7には均一サイズに見える微細な粒子が存在した。しかし、粒子は粘着性であり、そしてすべての試験管中で凝集する傾向があった。試験管中の粒子量に比べて凝集化の割合がより大きいのは20μl未満のグルタルアルデヒドを加えた試験管であった。これらの結果は最後の2回の洗浄でも一定していた。
この実験はPVPおよびPEGのポリマー混合物ならびにグルタルアルデヒドを使用してインスリン微粒子を調製し、形成した微粒子の濃度を測定し、そしてそれらの免疫活性をアッセイするために行った。
<微粒子の調製>
ウシ膵臓由来の30mgインスリン(シグマ、セントルイス、モンタナ州)を、3.0mlの3M HClに加え、乾燥したインスリンを溶解した。pHを8.4から9.0の間に25μlの2N NaOHを加えて調整した。
<結果>
形成した粒子は大変小さく、そして細かかった。リシン溶液中で遠心中に、粒子は完全に固くなることができなかった。リン酸塩緩衝液で洗浄した後、粒子はかなりの程度固くなることができ、そして粒子の凝集も形成した。
<ヒツジ抗−インスリンペルオキシダーゼアッセイ>
インスリン微粒子の免疫活性は、微粒子が抗−ヒツジインスリンに結合できる能力をヒツジ抗−インスリンペルオキシダーゼアッセイで測定することにより決定した。
<結果>
以下の表13に示す結果は、インスリン微粒子が抗−ヒツジインスリンと結合できることを実証し、これはこれらの粒子が免疫的に活性であることを示している。
インスリン微粒子の免疫活性を、微粒子が抗−ヒツジインスリンに結合する能力を阻害アッセイで測定することにより決定した。
<結果>
阻害アッセイを使用した以下の表14に示す結果は、インスリン微粒子が抗−ヒツジインスリンと結合できることを実証し、これはこれらの粒子が免疫的に活性であることを示している。
この実験は破傷風トキソイド微粒子でインビボ免疫化の効果を測定するために行った。
<方法>
破傷風トキソイド微粒子は一般的に実施例10に記載されているように次のように調製した:
モンタナ州、セントルイスのシグマ化学社から得たポリビニルピロリドン(MW40,000)およびポリエチレングリコール(MW3500)の27%の各ポリマー溶液を、27グラムのポリマーを100mlの蒸留水に添加することにより調製した。各ポリマー溶液のpHは約pH6.25に調整した。このポリマー溶液を1:1で混合してPVP/PEGポリマー混合物(54%全ポリマー)を作成した。
<結果>
図2に示すように、抗体力価は一次接種4週間目のおよそ10から一次接種10週間目にはおよそ3000に上昇した。点線は破傷風トキソイドから2アンチトキシン単位の防御を付与する力価を示す。点線より上の力価はFDA標準により2つの陽性免疫応答を示す。したがって図2に示すように、マウスは破傷風トキソイド微粒子を接種後、わずか4週間目に陽性の免疫応答を示した。4から10週間目の抗体力価の上昇は、この微粒子が破傷風トキソイド抗原をゆっくりと放出していることを示す。 14週間目に投与した致死量の破傷風トキソイドによる攻撃後に、100%のマウスが生存した。この生存率は破傷風トキソイドに対して防御を付与する強い免疫応答を示す。
この実験はアルブミンとPVPおよびPEG混合物とを様々な温度でインキューベーションすることによりアルブミン微粒子を調製するために行った。
<実験法>
4本の反応試験管に1.0mlのウシ血清アルブミン−FITC溶液(1%のウシ血清アルブミン(BSA)および10μlの透析したフルオレセインイソチオシアネート(FITC)アルブミンを含む)を入れた。2.0mlのポリマー混合物(8.0%PVPおよび20%のPEGを0.1M 酢酸ナトリウム、pH5.0に含む)をボルテックス混合しながら各試験管に加えた。
<結果>
反応混合物1には微粒子が見られなかった。反応混合物2は非−凝集性の直径約1から10μmの微粒子を含んだ。反応混合物3は非−凝集性の直径約10μmの微粒子と多くの1μm未満の直径の微粒子を含んだ。反応混合物4は非−凝集性の直径約10μmから25μmの微粒子、および1μm未満の直径の微粒子をいくらか含んだ。
<実験法>
2連の6本の反応試験管に、1.0mlのウシ血清アルブミン−FITC溶液(1%のウシ血清アルブミン(BSA)および10μlの透析したフルオレセインイソチオシアネート(FITC)アルブミンを含む)を入れた。0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0mlまたは5.0mlのポリマー混合物(8.0%のPVP(MW90,000)および20%のPEG(MW3350)を含む、pH5.0)をAの一連の各試験管にボルテックス混合しながら加えた。0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0mlまたは5.0mlのポリマー混合物(20%のPVP(MW40,000)および20%のPEG(MW3350)を含む、pH5.0)をBの一連の各試験管にボルテックス混合しながら加えた。
<結果>
<A連(8.0% PVP/20% PEG)>
0.5mlのポリマー混合物を使用して形成した微粒子は最も均一で、1から3μmの間の範囲の直径を有した。小さなクラスターが観察された。直径が約25μmの幾つかの大きい微粒子が見つかった。
<B連(20% PVP/20% PEG)>
0.5mlのポリマー混合物を使用して形成した微粒子は小さい凝集状態で、それぞれが1μm未満の直径の10から20個の間の微粒子を含んだ。直径が約5から20μmの間の幾つかの大きい微粒子が観察された。
<実験法>
7本の反応試験管に1.0mlのウシ血清アルブミン−FITC溶液を入れた。0.5ml、0.75ml、1.0ml、1.25ml、1.5ml、1.75mlまたは2.0mlのポリマー混合物(20%のPVP(MW40,000)および20%のPEG(MW3350)を0.1M 酢酸ナトリウム、pH5.0中に含む)を各試験管にボルテックス混合しながら加えた。 反応混合物を室温で30分間静置し、そして次に試験管を37−40℃で30分間、水浴中に置き、次に試験管を56−60℃の水浴中で30分間移した。2mlの10%エタノールを加え、そして20℃で30分間、3000rpmで遠心した。上清を吸引し、そして微粒子を2.0mlの10%エタノールに再懸濁した。再度15分間遠心し、2.0mlの脱イオン水に再懸濁し、そして蛍光顕微鏡で検査した。
<結果>
0.5mlのポリマー混合物を使用して形成した微粒子は、直径が1μm未満の小さい微粒子の小さな凝集物(凝集物あたり10−20個の間)の状態であった。時折、大きな単一の微粒子(直径が1−10μmの間)が観察された。
1.脱水剤が中性塩、グリシン、可溶性直鎖または分枝ポリマー、金属イオン、有機カチオン、小アニオンおよびポリアニオンから成る群から選択される化合物である、脱水剤に近接して位置する架橋結合した高分子を含んで成る微粒子組成物。
2.高分子がタンパク質、炭水化物、多糖、核酸分子、ウイルス、ウイルス粒子、医薬品およびその混合物から成る群から選択される、上記態様1記載の微粒子組成物。
3.タンパク質が免疫グロブリン、抗原および細胞レセプターから成る群から選択される、上記態様2記載の微粒子組成物。
4.さらに治療用分子を含んで成る上記態様1記載の微粒子組成物。
5.治療用分子が化学療法剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗寄生虫剤、免疫抑制物質、サイトカイン、ホルモン、酵素およびその混合物から成る群から選択される、上記態様1記載の微粒子組成物。
6.さらに磁気物質を含んで成る上記態様1記載の微粒子組成物。
7.高分子が検出できるラベルで標識されている上記態様1記載の微粒子組成物。
8.検出できるラベルが蛍光色素、化学発光ラベル、磁気粒子、酵素、酵素基質および放射性ラベルから成る群から選択される、上記態様7記載の微粒子組成物。
9.微粒子がインビトロおよびインビボで安定である上記態様1記載の微粒子組成物。
10.脱水剤がポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよびその混合物から成る群から選択される可溶性の直鎖ポリマーである、上記態様1記載の微粒子組成物。
11.高分子が、ジアルデヒド、アミン、多価イオン、架橋結合された高分子上の特別な反応基に親和性を有する多官能性分子、N−置換マレイミド、二官能性アルキルハライド、アリールハライド、イソシアネート、脂肪族または芳香族ジカルボン酸、脂肪族または芳香族ジスルホン酸、二官能性イミドエステルおよびビニルスルホンから成る群から選択される化合物で架橋結合されている上記態様1記載の微粒子組成物。
12.微粒子の作成法であって、
a)高分子を脱水剤と、予め定めた温度で粒子が形成するに十分な量の時間インキューベーションし、
b)インキューベーション混合物から粒子を分離する、
工程を含んで成る上記方法。
13.インキューベーション温度が室温よりも高い上記態様1記載の方法。
14.インキューベーション温度が37℃以上で、かつ80℃以下である上記態様12記載の方法。
15.インキューベーション混合物が5分から24時間の間インキューベーションされる上記態様12記載の方法。
16.工程a)のインキューベーション混合物がさらに架橋剤を含んで成る上記態様12記載の方法。
17.インキューベーション温度が室温以下である上記態様16記載の方法。
18.さらにクエンチング剤を含む緩衝液で粒子を洗浄する工程を含んで成る上記態様16記載の方法。
19.インキューベーション工程がpH5から8の間で行われる上記態様12記載の方法。
20.脱水剤が中性塩、グリシン、水溶性有機溶媒、可溶性直鎖または分枝ポリマー、金属イオン、有機カチオン、小アニオンおよびポリアニオンから成る群から選択される化合物である請求の範囲第12項記載の方法。
21.脱水剤がポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよびその混合物から成る群から選択される可溶性の直鎖ポリマーである、上記態様12記載の方法。
22.脱水剤が分子量約40,000のポリビニルピロリドンおよび分子量約3500のポリエチレングリコールの混合物である、上記態様12記載の方法。
23.架橋剤がジアルデヒド、アミン、多価イオン、架橋結合された高分子上の特別な反応基に親和性を有する多官能性分子、N−置換マレイミド、二官能性アルキルハライド、アリールハライド、イソシアネート、脂肪族または芳香族ジカルボン酸、脂肪族または芳香族ジスルホン酸、二官能性イミドエステルおよびビニルスルホンから成る群から選択される上記態様16記載の方法。
24.高分子がタンパク質、炭水化物、多糖、核酸分子、ウイルス、ウイルス粒子、医薬品およびその混合物から成る群から選択される、上記態様12記載の方法。
25.標的分子を該分子を含む複雑な混合物から単離する方法であって、
a)複雑な混合物を、標的分子に親和性を有する高分子微粒子と標的分子が高分子に結合するのに十分な時間混合し、
ここで微粒子は脱水剤に近接して架橋結合された液相中の高分子
を含んでなる、そして
b)結合した標的分子を複雑な混合物から分離する、
工程を含んで成る、上記方法。
26.微粒子が固定されている請求の範囲第25項記載の方法。
27.高分子がタンパク質、炭水化物、多糖、核酸分子、ウイルス、ウイルス粒子、医薬品およびその混合物から成る群から選択される、上記態様25記載の方法。
28.標的分子がタンパク質、炭水化物、核酸分子、ウイルスおよび細胞から成る群から選択される、上記態様25記載の方法。
29.治療薬を患者に送達する方法であって、患者に脱水剤に近接して架橋結合された高分子を含んで成る微粒子組成物を治療的に有効な量を投与することを含んで成り、ここで高分子が治療薬を含んで成る上記方法。
30.治療薬が化学療法剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗寄生虫剤、免疫抑制物質、サイトカイン、ホルモン、酵素およびその混合物から成る群から選択される、上記態様29記載の方法。
31.高分子がタンパク質、炭水化物、多糖、核酸分子、ウイルスおよびウイルス粒子、医薬品およびその混合物から成る群から選択される、上記態様29記載の方法。
32.患者の標的組織を検出する方法であって、
a)患者に脱水剤に近接して架橋結合された高分子を含んで成る微粒子組成物を有効量で投与し、
ここで高分子は検出できる造影剤で標識された標的組織に特異的
な親和性分子を含んでなるものであり、そして
b)検出できる造影剤を検出する、
工程を含んで成る、上記方法。
33.検出できる造影剤が蛍光色素、化学発光ラベル、磁気粒子、酵素、酵素基質および放射性ラベルから成る群から選択される、上記態様31記載の方法。
34.高分子がタンパク質、炭水化物、多糖、核酸分子、ウイルスおよびウイルス粒子およびその混合物から成る群から選択される、上記態様32記載の方法。
35.試料中の標的生体分子を検出する方法であって、
a)脱水剤に近接して架橋結合された高分子を含んで成る微粒子組成物を試料と混合し、
ここで高分子は検出できる造影剤で標識された標的生体分子に特異的な親和性分子を含んでなる、そして
b)検出でき造影剤を検出する、
工程を含んで成る、上記方法。
36.検出できる造影剤が蛍光色素、化学発光ラベル、磁気粒子、酵素、酵素基質および放射性ラベルから成る群から選択される、上記態様35記載の方法。
37.高分子がタンパク質、炭水化物、多糖、核酸分子、ウイルスおよびウイルス粒子およびその混合物から成る群から選択される、上記態様35記載の方法。
38.a)中性塩、グリシン、可溶性直鎖または分枝ポリマー、金属イオン、有機カチオン、小アニオンおよびポリアニオンから成る群から選択される脱水剤、および
b)ジアルデヒド、アミン、多価イオン、架橋結合された高分子上の特別な反応基に親和性を有する多官能性分子、N−置換から成る群から選択される架橋剤、
を含んで成る微粒子を調製するためのキット。
Claims (14)
- a)高分子を、硫酸塩、亜硫酸塩、チオ硫酸塩、リン酸塩、アルカリ金属もしくはアンモニウムもしくはマグネシウムのハロゲン塩、グリシン、水溶性有機溶媒、水溶性直鎖または分枝ポリマー、二価のイオン、ポリアニオン、カオトロピック剤およびそれらの混合物からなる群から選択される脱水剤と微粒子が形成するに十分な時間インキューベーションする工程、および
b)インキューベーション混合物から微粒子を分離する工程、を含んで成り、かつ、高分子が、脱水剤とインキューベーションされる間またはインキューベーションの前後に架橋剤により架橋される、ことを特徴とする微粒子の作成方法。 - a)高分子を、硫酸塩、亜硫酸塩、チオ硫酸塩、リン酸塩、アルカリ金属もしくはアンモニウムもしくはマグネシウムのハロゲン塩、グリシン、水溶性有機溶媒、水溶性直鎖または分枝ポリマー、二価のイオン、ポリアニオン、カオトロピック剤およびそれらの混合物からなる群から選択される脱水剤と微粒子が形成するのに十分な時間インキューベーションし、そして
b)インキューベーション混合物から微粒子を分離し、ここで、高分子が、脱水剤とインキューベーションされる間またはインキューベーションの前後に架橋剤により架橋される工程、
c)微粒子を、標的分子を含有する複合混合物と該微粒子が該標的分子に結合するのに十分な時間混合する工程であって、ここで、微粒子は標的分子に親和性を有するものである、工程、および
d)結合した標的分子を複合混合物から分離する工程、
を含むことを特徴とする標的分子を含有する複合混合物から標的分子の単離方法。 - a)微粒子と試料を組み合わせる工程であって、ここで、微粒子が、硫酸塩、亜硫酸塩、チオ硫酸塩、リン酸塩、アルカリ金属もしくはアンモニウムもしくはマグネシウムのハロゲン塩、グリシン、水溶性有機溶媒、水溶性直鎖または分枝ポリマー、二価のイオン、ポリアニオン、カオトロピック剤およびそれらの混合物からなる群から選択される脱水剤と、高分子を微粒子が形成するのに十分な時間インキューベーションすることにより調製され、かつ、高分子が脱水剤とインキューベーションされる間またはインキューベーションの前後に架橋剤により架橋されており、かつ、高分子が標的生体分子に特異的な親和性分子を含んでなり、そして検出可能な造影剤で標識されているものである、工程、および
b)検出可能な造影剤を検出する工程、
を含むことを特徴とする試料中の標的分子の検出方法。 - インキューベーション混合物が37℃〜80℃の温度でインキュベートされる請求項1記載の方法。
- インキューベーション混合物が5分間〜24時間インキュベートされる請求項1記載の方法。
- インキューベーション混合物が室温以下の温度でインキュベートされる請求項1記載の方法。
- 微粒子をクエンチング剤を含有する緩衝液で洗浄する工程をさらに含む請求項1記載の方法。
- インキュベーションをpH4.2〜9.2にて実施する請求項1記載の方法。
- 脱水剤が、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、デキストラン、ノニルフェノールエトキシレート、ポリビニルアルコールならびにこれらの混合物および誘導体からなる群より選ばれる請求項1記載の方法。
- 架橋剤が、ジアルデヒド、アミン、多価イオン、N−置換マレイミド、ニ官能性アルキルハライド、アリールハライド、イソシアネート,脂肪族もしくは芳香族ジカルボン酸、脂肪族もしくは芳香族ジスルホン酸、ニ官能性イミドエステル、カルボジイミドおよびビニルスルホンからなる群より選ばれる請求項1記載の方法。
- 高分子が、タンパク質、炭水化物、多糖、核酸分子、ウイルス、医薬化合物、およびそれらの混合物からなる群より選ばれる請求項1記載の方法。
- 微粒子が固定化されている請求項2記載の方法。
- 標的生体分子が、タンパク質、炭水化物、核酸分子、ウイルスおよび細胞からなる群より選ばれる請求項3記載の方法。
- 検出可能な造影剤が、蛍光色素、化学発光標識,磁気粒子,酵素,酵素基質および放射性標識からなる群より選ばれる請求項3記載の方法。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP2007279028A (ja) * | 2006-03-13 | 2007-10-25 | Mitsubishi Chemicals Corp | 孔を有する生体物質構造体及びその製造方法、並びに、それを用いた生体物質担持体、対象物質の精製方法、アフィニティークロマトグラフィー用容器、分離用チップ、対象物質の解析方法、対象物質の解析用分離装置、及びセンサーチップ |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO1996020012A2 (en) * | 1994-12-23 | 1996-07-04 | Middlesex Sciences, Inc. | Methods for preparing and purifying macromolecular conjugates |
US6197333B1 (en) | 1996-03-28 | 2001-03-06 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Materials and methods for making improved liposome compositions |
US6217886B1 (en) | 1997-07-14 | 2001-04-17 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Materials and methods for making improved micelle compositions |
SE512663C2 (sv) | 1997-10-23 | 2000-04-17 | Biogram Ab | Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer |
US6660301B1 (en) | 1998-03-06 | 2003-12-09 | Biosphere Medical, Inc. | Injectable microspheres for dermal augmentation and tissue bulking |
ATE283709T1 (de) | 1998-03-06 | 2004-12-15 | Biosepra Medical Inc | Implantierbare partikel zur erhöhung des gewebevolumens und zur behandlung von gastroösophagalreflux, inkontinenz und hautfalten |
WO2000004916A1 (en) * | 1998-07-23 | 2000-02-03 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques Sas | Encapsulation of water soluble peptides |
US20070009605A1 (en) * | 1998-07-23 | 2007-01-11 | Ignatious Francis X | Encapsulation of water soluble peptides |
US6270700B1 (en) | 1998-07-23 | 2001-08-07 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, Sas | Encapsulation of water soluble peptides |
FR2784580B1 (fr) | 1998-10-16 | 2004-06-25 | Biosepra Inc | Microspheres de polyvinyl-alcool et procedes de fabrication de celles-ci |
EP1074248A1 (en) * | 1999-07-08 | 2001-02-07 | Arnold Hilgers | Delivery system for biological material |
US6822086B1 (en) * | 1999-08-09 | 2004-11-23 | The General Hospital Corporation | Drug-carrier complexes and methods of use thereof |
US8106098B2 (en) * | 1999-08-09 | 2012-01-31 | The General Hospital Corporation | Protein conjugates with a water-soluble biocompatible, biodegradable polymer |
US6458387B1 (en) * | 1999-10-18 | 2002-10-01 | Epic Therapeutics, Inc. | Sustained release microspheres |
JP4751556B2 (ja) | 2000-02-28 | 2011-08-17 | ジーンシーグス, インコーポレイテッド | ナノカプセルカプセル化システムおよび方法 |
WO2001070289A2 (en) | 2000-03-20 | 2001-09-27 | Biosphere Medical, Inc. | Injectable and swellable microspheres for tissue bulking |
US6436424B1 (en) * | 2000-03-20 | 2002-08-20 | Biosphere Medical, Inc. | Injectable and swellable microspheres for dermal augmentation |
US7338657B2 (en) * | 2001-03-15 | 2008-03-04 | Biosphere Medical, Inc. | Injectable microspheres for tissue construction |
AU2001245988A1 (en) | 2000-03-24 | 2001-10-08 | Biosphere Medical, Inc. | Microspheres for active embolization |
SE517422C2 (sv) | 2000-10-06 | 2002-06-04 | Bioglan Ab | Farmaceutiskt acceptabel stärkelse |
WO2002028375A1 (en) | 2000-10-06 | 2002-04-11 | Jagotec Ag | A controlled-release, parenterally administrable microparticle preparation |
SE517421C2 (sv) | 2000-10-06 | 2002-06-04 | Bioglan Ab | Mikropartiklar, lämpade för parenteral administration, väsentligen bestående av stärkelse med minst 85 % amylopektin och med reducerad molekylvikt, samt framställning därav |
DE60138641D1 (de) | 2000-10-27 | 2009-06-18 | Baxter Healthcare Sa | Herstellung von mikrokügelchen |
SE518007C2 (sv) | 2000-11-16 | 2002-08-13 | Bioglan Ab | Förfarande för framställning av mikropartiklar |
SE518008C2 (sv) * | 2000-11-16 | 2002-08-13 | Bioglan Ab | Parenteralt administrerbara mikropartiklar och förfarande för framställning av desamma |
US20070142325A1 (en) * | 2001-01-08 | 2007-06-21 | Gustavsson Nils O | Starch |
ES2330312T5 (es) * | 2001-03-29 | 2014-01-31 | Synergy Pharmaceuticals, Inc. | Agonistas de receptor de guanilato ciclasa para el tratamiento de la inflamación de tejidos y de la carcionogénesis |
JP4799749B2 (ja) * | 2001-03-29 | 2011-10-26 | 花王株式会社 | 樹脂複合体 |
WO2002100444A1 (en) * | 2001-06-08 | 2002-12-19 | Biosphere Medical Inc. | Colloidal metal labelled microparticles, their production and use |
ES2307779T3 (es) * | 2001-08-16 | 2008-12-01 | Baxter International Inc. | Formulaciones de microparticulas a base de propelentes. |
US7105181B2 (en) | 2001-10-05 | 2006-09-12 | Jagotec, Ag | Microparticles |
SE0201599D0 (sv) | 2002-03-21 | 2002-05-30 | Skyepharma Ab | Microparticles |
US7053134B2 (en) * | 2002-04-04 | 2006-05-30 | Scimed Life Systems, Inc. | Forming a chemically cross-linked particle of a desired shape and diameter |
US20040038303A1 (en) * | 2002-04-08 | 2004-02-26 | Unger Gretchen M. | Biologic modulations with nanoparticles |
AU2003245589A1 (en) * | 2002-06-21 | 2004-01-06 | Reuven Avrohom Cyrulnik | System and method for noninvasive diagnostic imaging |
US20050142205A1 (en) * | 2003-07-18 | 2005-06-30 | Julia Rashba-Step | Methods for encapsulating small spherical particles prepared by controlled phase separation |
US20070092452A1 (en) * | 2003-07-18 | 2007-04-26 | Julia Rashba-Step | Methods for fabrication, uses, compositions of inhalable spherical particles |
SG135204A1 (en) * | 2003-07-18 | 2007-09-28 | Baxter Int | Methods for fabrication, uses and compositions of small spherical particles prepared by controlled phase separation |
EP1646354A4 (en) * | 2003-07-22 | 2010-03-17 | Baxter Int | SMALL SPHERICAL PARTICLES OF LOW MOLECULAR WEIGHT MOLECULES AND PROCESSES FOR THEIR PREPARATION AND USE |
US9176121B2 (en) | 2004-02-13 | 2015-11-03 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Identification of blood elements using inverted microscopy |
CN103393601A (zh) | 2004-05-12 | 2013-11-20 | 巴克斯特国际公司 | 含有蛋白并在高浓度蛋白下显示可注射性的微球体 |
CN103432079A (zh) | 2004-05-12 | 2013-12-11 | 巴克斯特国际公司 | 含有寡核苷酸的微球体及其在制备用于治疗1型糖尿病的药物中的应用 |
MXPA06012990A (es) | 2004-05-12 | 2007-02-12 | Baxter Int | Microesferas de acidos nucleicos, produccion y suministro de las mismas. |
US8728525B2 (en) * | 2004-05-12 | 2014-05-20 | Baxter International Inc. | Protein microspheres retaining pharmacokinetic and pharmacodynamic properties |
EP3085362B1 (en) | 2005-05-09 | 2021-01-13 | Biosphere Medical, S.A. | Compositions and methods using microspheres and non-ionic contrast agents |
US8017152B2 (en) * | 2005-05-27 | 2011-09-13 | Stratosphere Pharma Ab | Cores and microcapsules suitable for parenteral administration as well as process for their manufacture |
US8298565B2 (en) | 2005-07-15 | 2012-10-30 | Micell Technologies, Inc. | Polymer coatings containing drug powder of controlled morphology |
US20090062909A1 (en) | 2005-07-15 | 2009-03-05 | Micell Technologies, Inc. | Stent with polymer coating containing amorphous rapamycin |
US7846445B2 (en) * | 2005-09-27 | 2010-12-07 | Amunix Operating, Inc. | Methods for production of unstructured recombinant polymers and uses thereof |
US20090099031A1 (en) * | 2005-09-27 | 2009-04-16 | Stemmer Willem P | Genetic package and uses thereof |
CA2622441A1 (en) * | 2005-09-27 | 2007-04-05 | Amunix, Inc. | Proteinaceous pharmaceuticals and uses thereof |
US7855279B2 (en) * | 2005-09-27 | 2010-12-21 | Amunix Operating, Inc. | Unstructured recombinant polymers and uses thereof |
US20070081972A1 (en) * | 2005-09-30 | 2007-04-12 | The University Of Iowa Research Foundation | Polymer-based delivery system for immunotherapy of cancer |
US9301919B2 (en) * | 2005-12-22 | 2016-04-05 | Oakwood Laboratories, Llc | Sublimable sustained release delivery system and method of making same |
RU2457854C2 (ru) | 2005-12-30 | 2012-08-10 | Цзэньсунь (Шанхай) Сайенс Энд Текнолоджи Лимитед | Длительное высвобождение нейрегулина для улучшения сердечной функции |
KR102180849B1 (ko) * | 2006-01-24 | 2020-11-20 | 안선 바이오파르마, 아이엔씨. | 고분자 미소 구체들의 조제를 위한 기술 |
EP1986707A2 (en) | 2006-01-30 | 2008-11-05 | Surgica Corporation | Compressible intravascular embolization particles and related methods and delivery systems |
WO2007090130A2 (en) * | 2006-01-30 | 2007-08-09 | Surgica Corporation | Porous intravascular embolization particles and related methods |
ES2540059T3 (es) | 2006-04-26 | 2015-07-08 | Micell Technologies, Inc. | Recubrimientos que contienen múltiples fármacos |
US7964574B2 (en) | 2006-08-04 | 2011-06-21 | Baxter International Inc. | Microsphere-based composition for preventing and/or reversing new-onset autoimmune diabetes |
JP5603598B2 (ja) | 2007-01-08 | 2014-10-08 | ミセル テクノロジーズ、インコーポレイテッド | 生物分解層を有するステント |
US11426494B2 (en) | 2007-01-08 | 2022-08-30 | MT Acquisition Holdings LLC | Stents having biodegradable layers |
EP2146691A2 (en) | 2007-04-17 | 2010-01-27 | Baxter International Inc. | Nucleic acid microparticles for pulmonary delivery |
US20090098110A1 (en) * | 2007-05-30 | 2009-04-16 | Duke University | Injectable forms of solid-forming crosslinked bioelastic biopolymers for local drug delivery |
US7879802B2 (en) | 2007-06-04 | 2011-02-01 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal disorders, inflammation, cancer and other disorders |
US8969514B2 (en) | 2007-06-04 | 2015-03-03 | Synergy Pharmaceuticals, Inc. | Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of hypercholesterolemia, atherosclerosis, coronary heart disease, gallstone, obesity and other cardiovascular diseases |
US20100120694A1 (en) * | 2008-06-04 | 2010-05-13 | Synergy Pharmaceuticals, Inc. | Agonists of Guanylate Cyclase Useful for the Treatment of Gastrointestinal Disorders, Inflammation, Cancer and Other Disorders |
PL2014280T3 (pl) | 2007-07-13 | 2015-04-30 | Cc Ery Gmbh | Mikrocząsteczki, substytut krwi i sposób ich formowania |
MX2010001684A (es) | 2007-08-15 | 2010-04-21 | Amunix Inc | Composiciones y metodos para modificar propiedades de polipeptidos biologicamente activos. |
JP2011500054A (ja) * | 2007-10-15 | 2011-01-06 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | 安定な保存用中間体を使用した生物製剤の製造方法 |
US20110129857A1 (en) * | 2009-11-27 | 2011-06-02 | Msdx, Inc. | Methods Of Detecting Or Monitoring Activity Of An Inflammatory Condition Or Neurodegenerative Condition |
US8506933B2 (en) * | 2007-11-30 | 2013-08-13 | Msdx, Inc. | Methods of detecting a neurological condition via analysis of circulating phagocytes |
EP3360586B1 (en) | 2008-04-17 | 2024-03-06 | Micell Technologies, Inc. | Stents having bioabsorbable layers |
MX2010011508A (es) | 2008-04-18 | 2011-05-03 | Baxter Int | Composicion basada en microesferas para prevenir y/o revertir la nueva presentacion de diabetes autoinmune. |
EP2278999A4 (en) | 2008-04-21 | 2015-04-22 | Otonomy Inc | EARLY TREATMENT FORMULATIONS FOR THE TREATMENT OF EARLY DISEASES AND DRESSES |
US9017610B2 (en) | 2008-04-25 | 2015-04-28 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Method of determining a complete blood count and a white blood cell differential count |
US9602777B2 (en) | 2008-04-25 | 2017-03-21 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Systems and methods for analyzing body fluids |
WO2009149278A1 (en) | 2008-06-04 | 2009-12-10 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal disorders, inflammation, cancer and other disorders |
EP2321341B1 (en) | 2008-07-16 | 2017-02-22 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal, inflammation, cancer and other disorders |
CA2946195A1 (en) | 2008-07-17 | 2010-01-21 | Micell Technologies, Inc. | Drug delivery medical device |
WO2011009096A1 (en) | 2009-07-16 | 2011-01-20 | Micell Technologies, Inc. | Drug delivery medical device |
US8784870B2 (en) * | 2008-07-21 | 2014-07-22 | Otonomy, Inc. | Controlled release compositions for modulating free-radical induced damage and methods of use thereof |
CN102105133B (zh) | 2008-07-21 | 2015-06-17 | 奥德纳米有限公司 | 控制释放型耳结构调节和先天性免疫系统调节组合物以及治疗耳部病症的方法 |
US8323615B2 (en) | 2008-08-20 | 2012-12-04 | Baxter International Inc. | Methods of processing multi-phasic dispersions |
US8367427B2 (en) | 2008-08-20 | 2013-02-05 | Baxter International Inc. | Methods of processing compositions containing microparticles |
US8323685B2 (en) * | 2008-08-20 | 2012-12-04 | Baxter International Inc. | Methods of processing compositions containing microparticles |
EP2344578A2 (en) * | 2008-10-30 | 2011-07-20 | David Liu | Micro-spherical porous biocompatible scaffolds and methods and apparatus for fabricating same |
CA2745694C (en) | 2008-12-03 | 2018-03-27 | Synergy Pharmaceuticals, Inc. | Formulations of guanylate cyclase c agonists and methods of use |
MX362028B (es) | 2009-02-03 | 2019-01-04 | Amunix Pharmaceuticals Inc | Polipeptidos recombinantes extendidos y composiciones que comprenden los mismos. |
CN102481195B (zh) | 2009-04-01 | 2015-03-25 | 米歇尔技术公司 | 涂覆支架 |
WO2010121187A2 (en) | 2009-04-17 | 2010-10-21 | Micell Techologies, Inc. | Stents having controlled elution |
AU2010290077C1 (en) | 2009-08-24 | 2015-12-03 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Coagulation factor IX compositions and methods of making and using same |
EP2493918A4 (en) | 2009-10-30 | 2013-04-10 | Ntf Therapeutics Inc | IMPROVED NEURTURINE MOLECULES |
US11369498B2 (en) | 2010-02-02 | 2022-06-28 | MT Acquisition Holdings LLC | Stent and stent delivery system with improved deliverability |
WO2011133655A1 (en) | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Micell Technologies, Inc. | Stents and other devices having extracellular matrix coating |
EP2593039B1 (en) | 2010-07-16 | 2022-11-30 | Micell Technologies, Inc. | Drug delivery medical device |
US9616097B2 (en) | 2010-09-15 | 2017-04-11 | Synergy Pharmaceuticals, Inc. | Formulations of guanylate cyclase C agonists and methods of use |
AU2011302006A1 (en) | 2010-09-15 | 2013-03-07 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Formulations of guanylate cyclase C agonists and methods of use |
US9111343B2 (en) | 2011-01-18 | 2015-08-18 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Microscope slide coordinate system registration |
US8673309B2 (en) | 2011-02-11 | 2014-03-18 | Msdx, Inc. | Methods for measuring high molecular weight complexes of fibrinogen with fibronectin and fibulin-1 |
WO2013012689A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | Micell Technologies, Inc. | Drug delivery medical device |
US10188772B2 (en) | 2011-10-18 | 2019-01-29 | Micell Technologies, Inc. | Drug delivery medical device |
EP2809780B1 (en) | 2012-02-01 | 2018-05-02 | Protalix Ltd. | Dnase i polypeptides, polynucleotides encoding same, methods of producing dnase i and uses thereof in therapy |
ES2771208T3 (es) | 2012-02-15 | 2020-07-06 | Bioverativ Therapeutics Inc | Composiciones de factor VIII y métodos de preparación y uso de las mismas |
EP3549953A1 (en) | 2012-02-15 | 2019-10-09 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Recombinant factor viii proteins |
US20140099380A1 (en) | 2012-06-28 | 2014-04-10 | Ansun Biopharma, Inc. | Microparticle Formulations for Delivery to the Lower and Central Respiratory Tract and Methods of Manufacture |
MX362838B (es) | 2012-07-12 | 2019-02-19 | SpecGx LLC | Composiciones farmacéuticas de liberación prolongada para disuadir el abuso de opioides que comprenden un plastómero, un elastómero y un plastificante delicuescente. |
WO2014077629A1 (ko) * | 2012-11-15 | 2014-05-22 | 재단법인 유타 인하 디디에스 및 신의료기술개발공동연구소 | 알부민 및 덱스트란 설페이트를 포함하는 항암제 흡착능력이 향상된 생분해성 마이크로 비드 및 이의 제조방법 |
KR101569482B1 (ko) | 2012-11-27 | 2015-11-17 | 재단법인 유타 인하 디디에스 및 신의료기술개발 공동연구소 | 음이온성 고분자를 포함하는 항암제 흡착능력이 향상된 생분해성 마이크로 비드 및 이의 제조방법 |
EP2967803B1 (en) | 2013-03-12 | 2023-12-27 | Micell Technologies, Inc. | Bioabsorbable biomedical implants |
EP2970384A1 (en) | 2013-03-15 | 2016-01-20 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Agonists of guanylate cyclase and their uses |
US10272606B2 (en) | 2013-05-15 | 2019-04-30 | Micell Technologies, Inc. | Bioabsorbable biomedical implants |
WO2015023891A2 (en) | 2013-08-14 | 2015-02-19 | Biogen Idec Ma Inc. | Factor viii-xten fusions and uses thereof |
KR20170054429A (ko) | 2014-09-03 | 2017-05-17 | 제네세규스 인코포레이티드 | 치료용 나노입자 및 관련 조성물, 방법, 및 시스템 |
US20170304459A1 (en) | 2014-10-10 | 2017-10-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhalation delivery of conjugated oligonucleotide |
EP3303585A4 (en) | 2015-06-03 | 2018-10-31 | Board of Regents of the University of Nebraska | Dna editing using single-stranded dna |
KR20180037994A (ko) | 2015-07-28 | 2018-04-13 | 오토노미, 인코포레이티드 | TrkB 또는 TrkC 아고니스트 조성물 및 귀 병태의 치료 방법 |
EA201890423A1 (ru) | 2015-08-03 | 2018-07-31 | Биовератив Терапьютикс Инк. | Слитые белки фактора ix, способы их получения и применения |
WO2018005830A1 (en) | 2016-06-29 | 2018-01-04 | Otonomy, Inc. | Triglyceride otic formulations and uses thereof |
WO2018031771A1 (en) | 2016-08-11 | 2018-02-15 | University Of Iowa Research Foundation | CATIONIC CaMKII INHIBITING NANOPARTICLES FOR THE TREATMENT OF ALLERGIC ASTHMA |
WO2021076794A1 (en) | 2019-10-15 | 2021-04-22 | Cornell University | Methods for modulating level of expression from gene therapy expression cassette |
JP2023500793A (ja) | 2019-10-16 | 2023-01-11 | コーネル・ユニバーシティー | アルツハイマー病に対する遺伝子治療方法 |
WO2021086973A2 (en) | 2019-10-28 | 2021-05-06 | University Of Iowa Research Foundation | Formulation for delivery of lubricin gene |
WO2021108809A1 (en) | 2019-11-25 | 2021-06-03 | Cornell University | Apoe gene therapy |
US20230158125A1 (en) | 2020-04-20 | 2023-05-25 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Pulmonary Administration of ACE2 Polypeptides |
CA3176547A1 (en) | 2020-04-23 | 2021-10-28 | Milad ROUHIMOGHADAM | Gper proteolytic targeting chimeras |
WO2022040564A1 (en) | 2020-08-21 | 2022-02-24 | University Of Iowa Research Foundation | Cationic nanoparticle adjuvants |
WO2022047201A1 (en) | 2020-08-27 | 2022-03-03 | University Of Iowa Research Foundation | Gene knock-out for treatment of glaucoma |
WO2022125963A1 (en) | 2020-12-11 | 2022-06-16 | University Of Iowa Research Foundation | Compositions comprising molecules for cystic fibrosis treatment |
EP4340894A1 (en) | 2021-05-21 | 2024-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Anti-oxidant containing particles and methods of use |
WO2022271951A1 (en) | 2021-06-23 | 2022-12-29 | University Of Iowa Research Foundation | Sustained release formulations comprising a selective androgen receptor modulator |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3137631A (en) * | 1959-12-01 | 1964-06-16 | Faberge Inc | Encapsulation in natural products |
US3663687A (en) * | 1968-06-26 | 1972-05-16 | Minnesota Mining & Mfg | Biodegradable parenteral microspherules |
BE789195A (fr) * | 1971-09-24 | 1973-03-22 | Gist Brocades Nv | Compositions d'enzymes |
CA1077842A (en) * | 1975-10-09 | 1980-05-20 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Albumin medicament carrier system |
US4169804A (en) * | 1976-08-19 | 1979-10-02 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Magnetically responsive composite microparticle |
US4115534A (en) * | 1976-08-19 | 1978-09-19 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | In vitro diagnostic test |
CH621479A5 (ja) * | 1977-08-05 | 1981-02-13 | Battelle Memorial Institute | |
US4377567A (en) * | 1978-10-02 | 1983-03-22 | The Procter & Gamble Company | Lipid membrane drug delivery |
JPS5719660A (en) * | 1980-07-09 | 1982-02-01 | Fuji Photo Film Co Ltd | Microcapsule for immune reaction |
JPS5951355A (ja) * | 1982-09-17 | 1984-03-24 | Fujirebio Inc | 抗ウイルス抗体検出用試薬 |
US5141738A (en) * | 1983-04-15 | 1992-08-25 | Schering Aktiengesellschaft | Ultrasonic contrast medium comprising gas bubbles and solid lipophilic surfactant-containing microparticles and use thereof |
US4794000A (en) * | 1987-01-08 | 1988-12-27 | Synthetic Blood Corporation | Coacervate-based oral delivery system for medically useful compositions |
US4963367A (en) * | 1984-04-27 | 1990-10-16 | Medaphore, Inc. | Drug delivery compositions and methods |
SE8404467D0 (sv) * | 1984-09-06 | 1984-09-06 | Ferrosan Ab | Controlled-release medical preparations |
US5223263A (en) * | 1988-07-07 | 1993-06-29 | Vical, Inc. | Liponucleotide-containing liposomes |
SE459005B (sv) * | 1985-07-12 | 1989-05-29 | Aake Rikard Lindahl | Saett att framstaella sfaeriska polymerpartiklar |
SE462894B (sv) * | 1985-10-28 | 1990-09-17 | Biogram Ab | Mikrokapslar, foerfarande foer framstaellning daerav samt anvaendning |
JPS6317904A (ja) * | 1986-07-09 | 1988-01-25 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 多孔質架橋ポリビニルアルコ−ル粒子の製造法 |
JPS6377821A (ja) * | 1986-09-19 | 1988-04-08 | Teikoku Seiyaku Kk | 安定なプロスタグランジンe組成物 |
IL83451A (en) * | 1987-08-06 | 1991-06-10 | Univ Ramot | Stabilized water soluble enzymes and a method for their preparation |
DE69027560T2 (de) * | 1989-08-23 | 1997-01-09 | Canon K.K., Tokio/Tokyo | Methode zur Messung eines immunologisch aktiven Materials und Vorrichtung, die dazu geeignet ist |
US5264618A (en) * | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
US5525519A (en) * | 1992-01-07 | 1996-06-11 | Middlesex Sciences, Inc. | Method for isolating biomolecules from a biological sample with linear polymers |
US6090925A (en) * | 1993-03-09 | 2000-07-18 | Epic Therapeutics, Inc. | Macromolecular microparticles and methods of production and use |
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007279028A (ja) * | 2006-03-13 | 2007-10-25 | Mitsubishi Chemicals Corp | 孔を有する生体物質構造体及びその製造方法、並びに、それを用いた生体物質担持体、対象物質の精製方法、アフィニティークロマトグラフィー用容器、分離用チップ、対象物質の解析方法、対象物質の解析用分離装置、及びセンサーチップ |
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