JP2000501383A - トランスフェクション剤としてのリポポリアミン及びその医薬的使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は式（Ｉ）のリポポリアミンに関し、式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は各々独立して水素原子又は−（ＣＨ₂）_q−ＮＲＲ’基を表し、ｑはＲ１、Ｒ２及びＲ３の各基で独立して１、２、３、４、５及び６であり、ｍ、ｎ及びｐは各々独立して０〜６の整数を表し、Ｒ４は一般式（ＩＩ）の基を表し、式中、Ｒ６及びＲ７は各々独立して水素原子又は飽和もしくは不飽和Ｃ１０〜Ｃ２２脂肪族基を表し、２個の基の少なくとも一方は水素以外のものであり、ｕは０〜１０から選択される整数であり、Ｘは酸素原子、硫黄原子又はモノアルキルもしくは非モノアルキルアミン基を表し、Ｙはカルボニル基又はメチレン基を表し、Ｒ５は水素原子又は場合により置換された天然アミノ酸側鎖を表し、ｒは１〜１０の整数を表し、但しｒが１であるとき、Ｒ５は置換又は非置換天然アミノ酸側鎖を表し、ｒが２以上であるとき、Ｒ５は水素原子を表す。本発明は更に、前記リポポリアミンを含有する医薬組成物と、核酸のｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏ細胞トランスフェクションのためのその適用にも関する。

Description

【発明の詳細な説明】トランスフェクション剤としてのリポポリアミン及びその医薬的使用 本発明はリポポリアミンファミリーに属する新規化合物、該化合物を含有する 医薬組成物、核酸のｉｎ ｖｉｖｏ及び／又はｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェク ションのためのその適用並びにその製造方法に関する。 多数の遺伝病は１種以上の核酸の発現障害及び／又は異常発現即ち発現不足又 は過剰発現に関連している。遺伝子治療はクローン化遺伝子のｉｎ ｖｉｖｏ又 はｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞発現によりこのような遺伝異常を治療することを主眼と する。 今日、この種の遺伝情報の細胞内送達方法として数種の方法が提案されている 。特に、化学的又は生化学的ベクターを利用するものが挙げられる。合成ベクタ ーはトランスフェクトしようとするＤＮＡを圧縮する機能と、その細胞固定並び にその細胞質膜及び場合により２つの核膜通過を助長する機能との２つの主機能 をもつ。 このトランスフェクション方法は、カチオン脂質の利用に基 づく技術の開発により著しい進歩を遂げた。例えば、正電荷をもつカチオン脂質 であるＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリ メチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）は、負電荷をもつＤＮＡとリポソー ム又は小ベジクル形態で自然に相互作用し、細胞膜と融合することが可能な脂質 −ＤＮＡ複合体を形成し、こうしてＤＮＡの細胞内送達を可能にすることが判明 した。しかし、この分子はトランスフェクションの点では有効であるが、非生分 解性であり、細胞に毒性であるという欠点がある。 ＤＯＴＭＡ以来、所謂「スペーサー」アームを介してアミノ基に結合した親油 基というこの構造モデルで他のカチオン脂質も開発された。そのうちでは、親油 基として２個の脂肪酸又は１個のコレステロール誘導体を含み、更に、場合によ りアミノ基として第４級アンモニウム基を含むものを挙げることができる。この カチオン脂質の分類の代表例として、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＢＴ又はＣｈＯＴＢを特 に挙げることができる。この他、ＤＯＳＣやＣｈＯＳＣ等のように、第４級アン モニウム基の代わりにコリン基の存在を特徴とする化合物もある。しかし、一般 にこれらの化合物のトランスフェクション活性は依然として かなり低い。 別の分類のカチオン脂質であるリポポリアミンも報告されている。本発明の意 味では、リポポリアミンなる用語は所謂スペーサー領域を介して親油領域と結合 した少なくとも１個の親水ポリアミン領域を含む両親媒性分子を意味する。リポ ポリアミンの正電荷をもつポリアミン領域は負電荷をもつ核酸と可逆的に結合す ることができる。この相互作用は核酸を著しく圧縮する。親油領域は脂質膜から 形成される核脂質粒子を覆うことにより、このイオン相互作用を外部媒質に対し て非感受性にする。この種の化合物では、カチオン基は２個の第１級アンモニウ ム基と２個の第２級アンモニウム基との４個のアンモニウム基を含むＬ−５−カ ルボキシスペルミン基により置換することができる。この種の化合物としては特 にＤＯＧＳとＤＰＰＥＳが挙げられる。これらのリポポリアミンは一次内分泌細 胞のトランスフェクションに特に有効である。 実際に、理想的な合成トランスフェクション剤は広い細胞範囲で高いトランス フェクションレベルをもち、使用用量で無毒性であるか又は非常に低毒性であり 、更に処理細胞のレベルで副作用が全くないように生分解性でなければならない 。 本発明は詳細には、独自のポリアミンフラクションをもち、ｉｎ ｖｉｔｒｏ 及び／又はｉｎ ｖｉｖｏ細胞トランスフェクション、特に核酸のベクター導入 に有効に使用可能な新規リポポリアミンを提案することを目的とする。 本発明の第１の目的は一般式Ｉ：［式中、 Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は各々独立して水素原子又は−（ＣＨ₂）ｑ−ＮＲＲ’基を 表し、 ｑはＲ１、Ｒ２及びＲ３の各基で独立して１、２、３、４、５及び６であり、 Ｒ及びＲ’は各々独立して水素原子又は−（ＣＨ₂）ｑ’−ＮＨ₂基を表し、ｑ’ はＲ及びＲ’の各基で独立して１、２、３、４、５及び６であり、 ｍ、ｎ及びｐは、各々独立して０〜６の整数を表し、但しｎが２ 以上のとき、ｍは異なる値をとることができ、Ｒ３は一般式Ｉ中で異なる意味を もち、 Ｒ４は一般式ＩＩ： の基を表し、式中、 Ｒ６及びＲ７は各々独立して水素原子又は飽和もしくは不飽和Ｃ１０〜Ｃ２２脂 肪族基を表し、２個の基の少なくとも一方は水素以外のものであり、 ｕは０〜１０から選択される整数であり、但しｕが２以上の整数であるとき、Ｒ ５、Ｘ、Ｙ及びｒは各モチーフ［Ｘ−（ＣＨＲ５）ｒ−Ｙ］中で異なる意味をも つことができ、 Ｘは酸素原子、硫黄原子又はモノアルキルもしくは非モノアルキルアミン基を表 し、 Ｙはカルボニル基又はメチレン基を表し、 Ｒ５は水素原子又は場合により置換された天然アミノ酸側鎖を表し、 ｒは１〜１０の整数を表し、但しｒが１であるとき、Ｒ５は天 然アミノ酸側鎖を表し、ｒが２以上であるとき、Ｒ５は水素原子を表す］により 表されることを特徴とするＤ、Ｌ又はＤＬ形リポポリアミン及びその塩を提供す ることである。 天然アミノ酸側鎖とは、特に本発明の意味では例えばアルギニン側鎖のように アミジニウムモチーフを含む鎖を意味する。上述のように、この鎖は飽和もしく は不飽和のＣ１〜Ｃ２４直鎖、分枝鎖もしくは環状脂肪族基（例えばコレステリ ル基、アラキドニル基又はレチノイル基）又はモノもしくはポリ芳香族基（例え ば置換又は非置換ベンジルオキシカルボニル、ベンジルエステル及びローダミニ ル誘導体）により置換されていてもよい。 一般式（Ｉ）のこれらの新規生成物は医薬的に許容可能な非毒性塩の形態をと ることができる。これらの非毒性塩は鉱酸（塩酸、硫酸、臭化水素酸、リン酸、 硝酸）、有機酸（酢酸、プロピオン酸、コハク酸、マレイン酸、ヒドロキシマレ イン酸、安息香酸、フマル酸、メタンスルホン酸又は蓚酸）、無機塩（水酸化ナ トリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム）又は有機塩（ トリエチルアミン、ピペリジン、ベンジルアミン等の第３級アミン）との塩を含 む。 本発明による化合物の例としては、特に下記亜一般式： （式中、Ｒ４、Ｒ６及びＲ７は上記と同義である）の化合物を挙げることができ る。上記式中、好ましくはＲ４はＮＲ６Ｒ７であり、Ｒ６及びＲ７は亜式ＩＩＩ 〜ＸＩＩにおいて（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₁ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₃ＣＨ₃又は （ＣＨ₂）₁₂ＣＨ₃から選択される同一基を表す。 特に有利な態様において、本発明の化合物は該化合物が結合した核酸の移送を 指向させることが可能なターゲティング成分を更に含む。好ましくは、このター ゲティング成分はＲ５置換 基により表されるアミノ酸側鎖のレベルで一般式Ｉの化合物に組み込まれる。よ り好ましくは、ターゲティング成分は本発明による化合物に共有又は非共有的に 結合される。 このようなターゲティング成分としては、所定細胞型又は所望の所定組織（腫 瘍細胞、肝細胞、造血細胞等）に核酸の移送を指向させることが可能な細胞外タ ーゲティング成分が挙げられる。例えば、標的細胞型の表面に存在する細胞レセ プターのリガンドが挙げられ、例えば糖、葉酸、トランスフェリン、インスリン 、アシアロオロソムコイドタンパク質又は細胞外レセプターにより認識される任 意の生物活性分子等である。また、例えばトランスフェクトされるＤＮＡを核の 内部に優先的に蓄積する核局在シグナル配列（ｎｌｓ）のように、所定の優先的 細胞区画（ミトコンドリア、核等）に向けて核酸移送を指向させることが可能な 細胞内ターゲティングでもよい。 より一般には、本発明の範囲で利用可能なターゲティング成分としては糖類、 ペプチド、オリゴヌクレオチド、ステロイド又は脂質が挙げられる。好ましくは 、糖類及び／又はペブチド（例えば抗体又は抗体フラグメント、細胞レセプター のリガンド又はそのフラグメント、レセプター又はレセプターフラグメ ント等）である。特に、成長因子レセプター、サイトカインレセプター、細胞レ クチンレセプター又は接着タンパク質レセプター（例えばインテグリン）のリガ ンドが挙げられる。また、トランスフェリンのレセプター、脂質ＨＤＬ及びＬＤ Ｌも挙げられる。ターゲティング成分は更に、アシアロ糖タンパク質レセプター 等のレクチンをターゲティングすることが可能な糖や、イムノグロブリンのＦｃ フラグメントのレセプターをターゲティングすることが可能な抗体Ｆａｂフラグ メントでもよい。 同様に、一般式Ｉの化合物の例えばアミノ酸側鎖Ｒ５にビオチン、ローダミン 、葉酸型のマーカー物質を結合することも考えられる。このマーカー物質は更に 、インテグリン型の接着タンパク質の一次及び／又は二次レセプターの認識エピ トープＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを含む直鎖又は環状ペプチド又はプソイドペプチ ド配列でもよい。 本発明のリポポリアミンの例としては、後記実施例に詳細に記載する下記化合 物を特に挙げることができる。 H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂CON[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COArgN[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COArg(Z)₂N[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys(ローダミン)N[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys(ビオチニル.)N[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₃}₂N(CH₂)₄N{(CH₂)₃NH₂}(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₃}₂N(CH₂)₄N{(CH₂)₃NH₂}(CH₂)₃NHCH₂CON[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₂}₂N(CH₂)₂NHCH₂COGlyN[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₂}₂N(CH₂)₂NHCH₂CON[(CH₂)_17-CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄N[(CH₂)₃NH₂]CH₂COGlyN[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLysN[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys[Cl-Z]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys[CHO]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys[コレステリル]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys[アラキドニル]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGluN[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlu[N(CH₃)₂]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlu[O-Bz]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlu[ガラクトサミド]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlu[グルコサミド]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlu[マンノサミド]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NH(CH₂)₃CON[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂CONH(CH₂)₅CON[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)₁₁CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)₁₂CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)₁₃CH₃]₂ 本発明の特に代表的な化合物としては、下記一般式の化合物を特に挙げること ができる。 本発明の範囲内で、本発明によるリポポリアミンを誘導する非対称官能化ポリ アミンを製造するための新規固相方法も開発された。 従来、非対称官能化ポリアミンの製造は直鎖又は分枝鎖対称ポリアミンに選択 的に修飾を導入する必要により制限されている。ポリアミンの第１アミノ基と第 ２アミノ基の化学的差異により、アルキル化、ミカエリス型付加又はアシル化等 の反応を実施するためには高い選択性が必要である。更に、このような化学的差 異により要求される選択性は、ポリアミンで行われるような複数の第１及び第２ アミン群での選択的アシル化に適合しない。このような制約に対する従来の対応 は、「ポリアミノ化」することが可能なアミノ基と適当に保護された非対称官能 基をもつモノマーブロックから非対称官能化ポリアミンを構築する方法であった 。従って、このアプローチには複数段階からなる面倒な合成ストラテジーが必要 であり、特に官能基の直交保護が必要であった。 本発明の範囲内で開発された方法は、詳細には上記型の合成に伴う従来の欠点 を解消するを目的とする。この方法は、対称ポリアミンのアルキル化又は還元ア ルキル化により一次アミノ 基のみで選択的に官能化されたポリアミンを容易且つ迅速に得られるという顕著 な利点がある。 本発明の方法の原理は固相合成法の利用に基づき、アルキル化剤とポリアミン の二分子反応を助長し、ポリアミンのポリアルキル化を回避する。より詳細には 、本発明は固体支持体に共有結合したアルキル化剤と対称ポリアミンの二分子反 応により予め得られた少なくとも１個の非対称ポリアミンフラクションに少なく とも１個の脂質フラクションを結合することを特徴とする方法に関する。このア プローチによると、アルキル化剤はエステル化又はアミド化によりポリマー支持 体に共有結合している。対称ポリアミンは二分子反応により固相アルキル化剤と 反応し、支持体に結合した単官能化非対称ポリアミンを生じる。生成物の遊離ア ミンは一般にＢＯＣ又はＺ型の保護基により固相で保護されており、最終的に生 成物は固相支持体から分離される。これらのポリアミノ酸を適宜脂質フラクショ ンに結合すると、所望のトランスフェクション剤が得られる。この結合には、例 えばＢＯＰ、Ｐｙｂｏｐ、ＢｏｐＣｌ及びＤＣＣ等の慣用ペプチド結合剤を利用 することができる。本方法は、場合によりトレーサーペプチド、糖類又は蛍光プ ローブを分子に導入 して完全トランスフェクション剤を固体支持体に結合することも可能である。当 然のことながら、遊離リポポリアミンにこの型のグラフトを実施できることが判 明した。 本方法の実施可能性は、複数の直鎖又は分枝鎖非対称官能化ポリアミノ酸の合 成により立証された。 本発明は更に、上記のようなリポポリアミンの直接又は医薬組成物としての任 意の治療的適用にも関する。 上述のように、一般式Ｉの化合物は核酸のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖ ｏトランスフェクションに特に有利であることが判明した。これらの化合物はＤ ＮＡを有効に圧縮し、非常に低毒性であるという利点がある。 本発明の組成物から最大限の効果を得るためには、核酸の負電荷に対する該当 リポポリアミンの正電荷の比であるＲ比が最適となるように、一般式Ｉの化合物 と核酸の夫々の比率を決定することが好ましい。この最適比は特にｉｎ ｖｉｖ ｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏの使用方式や、トランスフェクトしようとする細胞型に より異なり、場合に応じて最適化される。この最適化は当業者に自明である。 本発明の医薬組成物において、ポリヌクレオチドはデオキシ リボ核酸でもリボ核酸でもよい。天然又は人工起源のいずれの配列でもよく、特 にゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ハイブリッド配列 又は修飾もしくは非修飾オリゴヌクレオチドの合成もしくは半合成配列が挙げら れる。これらの核酸はヒト、動物、植物、細菌、ウイルス等に由来するものであ り得る。これらの核酸は当業者に公知の任意方法により得られ、特に、バンクス クリーニング、化学的合成又はバンクスクリーニングにより得られた配列の化学 的もしくは酵素的修飾を含む混合方法により得られる。更に、プラスミドベクタ ー等のベクターに組み込んでもよい。 特にデオキシリボ核酸については、１本鎖でも２本鎖でもよいし、短いオリゴ ヌクレオチドでもより長い配列でもよい。これらのデオキシリボ核酸は治療遺伝 子、転写又は複製調節配列、修飾又は非修飾アンチセンス配列、他の細胞成分と の結合領域等を含み得る。 本発明の意味では、治療遺伝子とは特に治療効果をもつタンパク質産物をコー ドする任意遺伝子を意味する。こうしてコードされるタンパク質産物はタンパク 質、ペプチド等であり得る。このタンパク質産物はターゲット細胞に対して同種 であり得る （即ちターゲット細胞が疾病をもたないときにターゲット細胞で正常に発現され る産物）。この場合、タンパク質の発現は例えば細胞における不十分な発現や、 不活性であるか又は修飾により弱活性となったタンパク質の発現を解消し、ある いは前記タンパク質を過剰発現させることができる。治療遺伝子は安定性の増加 、活性改変等の性質をもつ細胞タンパク質の突然変異体をコードするものでもよ い。タンパク質産物はターゲット細胞に対して異種でもよい。その場合には、発 現されるタンパク質は例えば細胞に欠失している活性を補充又は付加し、疾病に 対抗するこ又は免疫応答を刺激することができる。 本発明の意味での治療物質としては、より特定的には酵素、血液誘導体、ホル モン、リンホカイン（インターロイキン、インターフェロン、ＴＮＦ等（仏国特 許出願第９２０３１２０号））、成長因子、神経伝達物質又はその前駆物質もし くは合成酵素、栄養因子（ＢＤＮＦ、ＣＮＴＦ、ＮＧＦ、ＩＧＦ、ＧＭＦ、ａＦ ＧＦ、ｂＦＧＦ、ＮＴ３、ＮＴ５、ＨＡＲＰ／プレイオトロフィン等、ジストロ フィン又はミニジストロフィン（仏国特許出願第９１１１９４７号））、膵臓線 維症に関連するタンパク質ＣＦＴＲ、腫瘍抑制遺伝子（ｐ５３、Ｒｂ、Ｒａｐ １Ａ、ＤＣＣ、ｋ−ｒｅｖ等（仏国特許出願第９３０４７４５号））、凝血に関 与する因子（ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ因子）をコードする遺伝子、ＤＮＡの修復 に関与する遺伝子、自殺遺伝子（チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ）、 ヘモグロビン又は他の輸送タンパク質の遺伝子、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ、Ａ −ＩＩ、Ａ−ＩＶ、Ｂ、Ｃ−Ｉ、Ｃ−ＩＩ、Ｃ−ＩＩＩ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、 Ｊ及びアポ（ａ）から選択されるアポリポタンパク質型の脂質の代謝に関与する タンパク質に対応する遺伝子、代謝酵素（例えばリポタンパク質リパーゼ、肝性 リパーゼ、レシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼ、７−α−コレス テロールヒドロキシラーゼ、ホスファチジン酸ホスファターゼ）、脂質輸送タン パク質（例えばコレステロールエステル輸送タンパク質やリン脂質輸送タンパク 質）、ＨＤＬ結合タンパク質又は例えばＬＤＬレセプター、レムナントキロミク ロンレセプター及びスカベンジャーレセプター等から選択されるレセプターを挙 げることができる。 治療核酸は更に、ターゲット細胞で発現されると遺伝子発現又は細胞ｍＲＮＡ 転写を調節することが可能なアンチセンス遺伝子又は配列でもよい。このような 配列は、ヨーロッパ特許第 １４０３０８号に記載の技術により、例えば細胞ｍＲＮＡの相補的ＲＮＡターゲ ット細胞に転写され、こうしてそのタンパク質翻訳を阻止することができる。治 療遺伝子は更に、ターゲットＲＮＡを選択的に破壊することが可能なリボソーム をコードする配列も含む（ヨーロッパ特許第３２１２０１号）。 上述のように、核酸は更に、ヒト又は動物で免疫応答を発生することが可能な 抗原ペプチドをコードする１個以上の遺伝子を含んでいてもよい。従って、この 特定態様によると、本発明はヒト又は動物で特に微生物、ウイルス又は癌に対す るワクチン又は免疫治療を実現することができる。特に、エプスタイン・バール ウイルス、ＨＩＶウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ヨーロッパ特許第１８５５７３ 号）、偽狂犬病ウイルス、シンシチウム形成ウイルス、他のウイルスの特異的抗 原ペプチド又は腫瘍特異的抗原ペプチド（ヨーロッパ特許第２５９２１２号）を 挙げることができる。 好ましくは、核酸は更に細胞又は所望臓器において治療遺伝子及び／又は抗原 ペプチドをコードする遺伝子の発現を可能にする配列も含む。このような配列と しては、これらの配列が感染細胞で機能できるときに該当遺伝子の発現に天然に 関与する 配列が挙げられる。異なる起源の配列でもよい（他のタンパク質の発現に関与、 あるいは合成配列でもよい）。特に、真核又はウイルス遺伝子のプロモーター配 列が挙げられる。例えば、感染させようとする細胞のゲノムに由来するプロモー ター配列が挙げられる。また、ウイルスのゲノムに由来するプロモーター配列で もよい。この点では、例えばＥ１Ａ、ＭＬＰ、ＣＭＶ、ＲＳＶ等の遺伝子のプロ モーターを挙げることができる。更に、活性化配列や調節配列等を付加してこれ らの発現配列を修飾してもよい。誘導又は抑制プロモーターでもよい。 更に、核酸は合成治療物質をターゲット細胞の分泌経路に導くシグナル配列も 特に治療遺伝子の上流に含んでいてもよい。このシグナル配列は治療物質の天然 シグナル配列でもよいし、他の任意の機能的シグナル配列又は人工シグナル配列 でもよい。核酸は更に合成治療物質を細胞の特定区画に導くシグナル配列も含ん でいてもよい。 別の態様において、本発明は核酸と、本発明のリポポリアミンと、リポポリア ミン／核酸複合体に結合してトランスフェクション能を改善することが可能なア ジュバントを含む組成物に関する。本願出願人は実際に、リポポリアミン／核酸 複合体に 結合することが可能な所定のアジュバント（例えば脂質、ペプチド又はタンパク 質）の存在下でリポポリアミンのトランスフェクション能を予想外に増加できる ことを立証した。 この点で、本発明の組成物はアジュバントとして１種以上の中性脂質を含み得 る。このような組成物は特にＲ比が小さいときに特に有利である。本願出願人は 実際に、中性脂質を加えると核脂質粒子の形成を改善し、驚くべきことに細胞膜 を撹乱して粒子の細胞侵入を助長できることを立証した。 より好ましくは、本発明の範囲内で使用する中性脂質は２個の脂肪鎖をもつ脂 質である。 生理的条件下で両性イオン性又はイオン電荷をもたない天然又は合成脂質を使 用すると特に有利である。脂質は特にジオレオイルホスファチジルエタノールア ミン（ＤＯＰＥ）、オレオイルパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ ＰＯＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイル ホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールア ミン及びその１〜３倍Ｎ−メチル化誘導体、ホスファチジルグリセロール、ジア シルグリセロール、グリコシルジアシルグリセロール、セレブロシド（例えば 特にガラクトセレブロシド）、スフィンゴ脂質（例えば特にスフィンゴミエリン ）又はアシアロガングリオシド（例えば特にアシアロＧＭ１及びＧＭ２）から選 択することができる。 これらの種々の脂質は当業者に周知の慣用技術により合成するか又は臓器（例 えば脳）もしく胎児から抽出することにより得られる。特に、天然脂質の抽出は 有機溶媒を用いて実施することができる（Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ ｉｓｔｒｙ参照）。 ごく最近になって本願出願人は前記核酸の凝縮レベルに直接又は間接的に作用 する化合物をアジュバントとして使用すると特に有利であることも立証した（Ｗ Ｏ９６／２５５０８）。 リポポリアミンをベースとするトランスフェクション組成物中にこのような化 合物が存在すると、この組成物の量を著しく低減でき、この組成物のトランスフ ェクション活性を損なわずに毒物学的面で有益な結果が得られる。それどころか 、組成物のトランスフェクションレベルは向上するという利点がある。 核酸の凝縮レベルに作用する化合物とは、核酸を直接又は間接的に圧縮する化 合物として定義される。より詳細には、この化合物はトランスフェクトしようと する核酸のレベルに直接作 用するか、又はこの核酸の凝縮に直接関与する付加化合物のレベルに作用するこ とができる。核酸のレベルに直接作用するものが好ましい。 好ましい態様によると、核酸の凝縮レベルに作用するこの物質は全体又は一部 をペプチドモチーフ（ＫＴＰＫＫＡＫＫＰ）及び／又は（ＡＴＰＡＫＫＡＡ）か ら構成され、モチーフ数は２〜１０である。本発明による化合物の構造において 、これらのモチーフは連続又は不連続的に反復し得る。従って、これらのモチー フは生化学的結合（例えば１個以上のアミノ酸）又は化学的結合により分離する ことができる。このような物質は全体又は一部がヒストン、ヌクレオリン、プロ タミン及び／又はそれらの誘導体の１種から誘導されるものでもよい。 好ましくは、本発明の組成物は核酸１当量当たりアジュバント０．０１〜２０ 当量（重量／重量）、より好ましくは０．５〜５当量を含む。 本発明による組成物は局所、皮膚、経口、直腸、膣、非経口、鼻腔内、静脈内 、筋肉内、皮下、眼内、経皮等の経路で投与するように調剤することができる。 好ましくは、本発明の医薬組成物は特に所望臓器のレベルに直接注射するための 注射用製剤 又は局所投与（皮膚及び／又は粘膜）用として医薬的に許容可能なキャリヤーを 含有する。このようなキャリヤーとしては、特に等張滅菌溶液又は場合に応じて 滅菌水もしくは生理的血清を加えると注射可能な溶質を構成することが可能な乾 燥組成物、特に凍結乾燥組成物が挙げられる。注射に使用する核酸の用量及び投 与回数は種々のパラメーター、特に使用する投与方法、該当疾病、発現させよう とする遺伝子、又は所望の治療期間に応じて選択できる。特に投与方法について は、組織又は循環経路への直接注射や、培養細胞処理後の注射又は移植によるｉ ｎ ｖｉｖｏ再移植が挙げられる。 従って、本発明は上記条件下で上記疾病を治療することが可能な核酸と一般式 Ｉの化合物のｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏ併用投与を特徴とする、疾病 治療に特に有利な方法を提供する。より詳細には、この方法はタンパク質又は核 酸産物の不足に起因する疾病に適用することができ、投与する核酸は前記タンパ ク質産物をコードするか又は前記核酸産物を含む。 本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞トランスフェクションの ための本発明のリポポリアミンの全使用に及ぶ。 以下、実施例及び図面により本発明をより詳細に説明するが、これらの説明は 例示に過ぎず、本発明を制限するとみなすべきではない。図面 図１：種々のカチオン脂質によるＮＩＨ ３Ｔ３細胞（マウス胎児繊維芽細胞 ）の処理後のトランスフェクション効率の測定。 図２：種々のカチオン脂質によるウサギＳＭＣ細胞（ウサギ大動脈平滑筋細胞 の一次培養物）の処理後のトランスフェクション効率の測定。 図３：種々のカチオン脂質による３ＬＬ細胞（ルイス肺癌）の処理後のトラン スフェクション効率の測定。 図４：種々のカチオン脂質によるＮＩＨ ３Ｔ３細胞（マウス胎児繊維芽細胞 ）の処理後のトランスフェクション効率の測定。 図５：３ＬＬ細胞のトランスフェクション効率に及ぼすＤＯＰＥ濃度の効果。 図６：ナノモルリポフェクタント／μｇＤＮＡ比を一定にしてＤＮＡ量を変え た場合のＮＩＨ ３Ｔ３細胞のトランスフェ クション。略語及び記号 ＡｃＯＥｔ：酢酸エチル ＢＯＣ：ｔ−ブトキシカルボニル ＢＯＰ：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホ ニウムヘキサフルオロホスフェート ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド ＤＣＵ：ジシクロヘキシル尿素 ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド ＤＯＤＡ：ジオクタデシルアミン ＥＰ：石油エーテル ＥｔＯＨ：エタノール ＮＥｔ３：トリエチルアミン Ｒｆ：前端保持率 ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸 ＴＨＦ：テトラヒドロフラン ＴＭＳ：テトラメチルシラン ＵＶ：紫外線 ＳＰＰＳ：固相ペプチド合成 ＨＰＬＣ：高圧液体クロマトグラフィー Ｚ：ベンジルオキシカルボニル ＣｌＺ：ｐ−クロロベンジルオキシカルボニルＡ−化学合成用材料及び方法 １．材料 ａ）化合物 ス（２−アミノエチル）アミン、フェニレンジアミン、ジアミノエタン（プロパ ン、ブタン、ペンタン、ヘキサン等）等の市販品でもよいし、分枝鎖ポリアミン 製造用として市販されている例えばジアミノエタン（プロパン、ブタン、ペンタ ン、ヘキサン等）、アミン、スペルミジン、スペルミン等のアミンの完全なシア ノエチル化により常法で合成してもよい。 れる。慣用アルキル化にはブロモ酢酸、ω−ハロゲノカルボン 酸を使用し、還元アルキル化にはω−アルデヒドカルボン酸（例えばグリオキサ ル酸、コハク酸準アルデヒド等）又はケト酸（例えばアセト酢酸又はピルビン酸 等）を使用する。 成）用に市販されている樹脂、例えば遊離酸基をもつ生成物を提供するＯ−クロ ロトリチルクロリド樹脂、ＨＭＰ樹脂や、Ｒｉｎｋ型樹脂である。ポリアミノ酸 は、固相で予備合成したブロモアルキル基をもつペプチド又はω−アルデヒド酸 で直接合成することができる。 ミン、トリフルオロ酢酸、ＢＯＰ、ＤＭＡＰ、クロロギ酸ベンジルは市販品であ る。ＮａＣｌ及びＮａＨＣＯ₃溶液は飽和溶液であり、ＫＨＳＯ₄溶液は０．５Ｍ である。 ｂ）物理的測定 陽子ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ ４００スペクトロメーターで６００Ｍ Ｈｚで記録した。 質量スペクトルはＡＰＩ−ＭＳ／ＩＩＩで測定した。 ｃ）クロマトグラフィー技術ＨＰＬＣ分析はＭｅｒｃｋ−Ｈｉｔａｃｈｉ装置にオート サンプラーＡＳ−２０００Ａ、インテリジェントポンプＬ−６２００Ａ及び紫外 −可視検出器Ｌ−４０００を取り付け、分析用分離には２２０ｎｍ、分取用分離 には２３５ｎｍの波長に調節して実施した。分析用分離カラムはＰｅｒｋｉｎ− Ｅｌｍｅｒ製ＢＵ−３００ ａｑｕａｐｏｒｅ Ｂｕｔｙｌ ７ｍ，３００Ａ ３００×４．６ｍｍカラムを使用し、分取用分離カラムはＢｉｏｒａｄ製Ｂｉｏ ｓｉｌ Ｃ１８ ＨＬ ９０−１０ ２５０×１０ｍｍカラムを使用した。移動 相はＨ₂Ｏ（０．１％ＴＦＡ）及びアセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）である。 分析用分離流速は１ｍｌ／ｍｉｎ、分取用分離流速は４ｍｌ／ｍｉｎに調節する 。 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は厚さ０．２ｍｍのＭｅｒｃｋシリカゲル プレートで実施した。 カラムクロマトグラフィーは粒度０．０６３〜０．２００ｍｍのシリカゲル６ ０ Ｍｅｒｃｋで実施した。 カラムクロマトグラフィーの検出は紫外線（２５４ｎｍ）を用いるか、アミン 又はアミドの検出にはニンヒドリンを用いて１５０℃に加熱しながらニンヒドリ ンのエタノール溶液（４０ｍｇ／１００ｍｌ ＥｔＯＨ）を噴霧（弱いスプレー ）し、第 １級アミンの検出にはフルオレサミンを用いて溶液（４０ｍｇ／１００ｍｌアセ トン）を噴霧し、あるいはヨードを用いてヨード粉末でプレートを覆うことによ り実施した。 カラムクロマトグラフィーは粒度０．０６３〜０．２００ｍｍのシリカゲル６ ０ Ｍｅｒｃｋで実施した。 ｄ）固相合成ＳＰＰＳ法 固相合成は手動製造用ＳＰＰＳペプチド合成用手動反応器で実施し、撹拌機は Ｆｌａｓｋ Ｓｈａｋｅｒ モデルＡ５−６０２１である。ＳＰＰＳでポリアミ ンの固相結合及びポリアミンの保護後にＫａｉｓｅｒ試験を行う［Ｋａｉｓｅｒ ，Ｅ.，Ｃｏｌｅｓｃｏｌｔ，Ｄ．Ｌ．，Ｂｏｓｓｉｎｅｒ，Ｃ．Ｄ．及びＣｏ ｏｋ,Ｐ．Ｉ．Ａｎａｌ.Ｂｉｏｃｈｅｍ．３４（２），５９５（１９７０）］。 実施例でＳＰＰＳに使用した樹脂はスイス、ＮＯＶＡＢＩＯＣＨＥＭ製クロロト リチルクロリド樹脂である。 ２．一般操作方法 ａ）（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラアミノプロピル）−１−４−ジアミノブタン の製造により例示する対称ポリアミンの合成 ２リットル容三頚丸底フラスコに１−４−ジアミノブタン １４７ｇと脱イオン水１０００ｍｌを仕込む。溶液を磁気撹拌する。温度を３８ ℃に維持しながら等圧フラスコによりアクリロニトリル４４３ｇを１時間かけて 加える。次いで還流冷却器を取り付け、１時間かけて混合物を水浴で８０℃まで 昇温させる。フルオレサミン試験は陰性であり、過剰のアクリロニトリルを４０ ℃で減圧蒸発させる。 ２相が得られる。下部の有機相を分離し、水３００ｍｌで洗浄し、１０００ｍ ｌ容丸底フラスコに移す。水／メタノール（１：１ｖ／ｖ）混合物１７０ｍｌを 加える。一晩結晶化させる。翌日、結晶を細孔度３の５００ｍｌ容ガラス濾過器 で濾過する。 ケーキをガラス濾過器でメタノール（２×１７０ｍｌ）とエーテル（２×１５ ０ｍｌ）で洗浄する。生成物を減圧デシケーター（２６ｍｍ）で一晩連続乾燥す る。こうして生成物４６１ｇ（収率９３％）が得られる。生成物をＮＭＲとＭＳ により分析した処、分析値は整合していた。生成物を精製せずに水素化する。 １リットル容イノックスオートクレーブに上記ポリニトリル３０ｇ（０．１モ ル）を仕込む。同時にビーカーでエタノール １４０ｍｌ（９５％）とＮａＯＨ８ｇ（０．２モル）の溶液を調製する。ＮａＯ Ｈが可溶化したらこの溶液をオートクレーブに加える。オートクレーブに窒素を 通し、炭素担持ラネーニッケル８ｍｌを加える。オートクレーブを閉じる。初期 水素化圧は５２気圧であり、周囲温度で５時間かけて２８．５気圧まで下げる。 懸濁液を濾紙で濾過し、濾渣をエタノール（２×２５ｍｌ）で洗浄し、濾液を減 圧乾燥して濃縮する。油状物を水３０ｍｌと混合し、ＣＨ₂Ｃｌ₂ １００ｍｌで 抽出する。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過した後、減圧蒸発させる。黄色っ ぽい液体油状物（２７ｇ、収率８５％）が得られる。 生成物をＴＬＣ（単スポット）、ＮＭＲ及びＭＳにより分析した処、分析値は 整合していた。生成物を精製せずに使用する。 ｂ）方法Ａ：酸基のポリマー支持体固定 クロロトリチルクロリド樹脂（５ｇ、１．２ｍｍｏｌ Ｃｌ／ｇ樹脂）をＳＰ ＰＳ反応器に仕込み、ＣＨ₂Ｃｌ₂ ５０ｍｌを加え、混合物を５分間撹拌する。 ブロモ酢酸（１．０５ｇ、７ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＥＡ（０.９５ｍｌ，７.５ ｍｍｏｌ）を加える。反応器を周囲温度で２時間撹拌する。液体を濾過し、樹脂 をＣＨ₂Ｃｌ₂とｉＰｒＯＨ（１０×５０）及びＭｅＯＨ （２×５０ｍｌ）で洗浄する。最後に樹脂を窒素流下に乾燥する。 ｃ）方法Ｂ：ポリアミンとブロモアセチル樹脂の反応 ポリアミン（１０モル倍）をＣＨ₂Ｃｌ₂ ５０ｍｌに溶かし、方法Ａにより得 られた生成物を収容する反応器に加える。反応器を周囲温度で２時間撹拌する。 溶媒を濾過し、樹脂をＣＨ₂Ｃｌ₂とｉＰｒＯＨ（１０×５０ｍｌ）で洗浄すると 、Ｋａｉｓｅｒ試験は陽性である。 ｄ）樹脂上のポリアミノ酸の保護 方法Ｃ： ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（４８ｍｍｏｌ）とＤＩＥＡ（５０ｍｍ ｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍｌ）に溶かし、方法Ｂにより得られた生成物を収容 する反応器に加える。反応器を一晩撹拌する。翌日、Ｋａｉｓｅｒ試験は陰性で ある。溶媒を濾過し、樹脂をＣＨ₂Ｃｌ₂とｉＰｒＯＨ（１０×５０ｍｌ）、Ｍｅ ＯＨ（２×５０ｍｌ）及びエーテル（２×５０ｍｌ）で交互に洗浄する。樹脂を 窒素流下に乾燥する。Ｋａｉｓｅｒ試験は依然として陰性である。 方法Ｄ： 方法Ｂにより得られた樹脂（１．５ｇ）を丸底フラスコに入れ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（ ２０ｍｌ）、次いでＤＩＥＡ（２０ｍｍｏｌ）を加える。混合物を磁気撹拌し、 クロロギ酸ベンジル（１４ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下する。ｐＨはＤＩＥＡ を加えて１１に維持する。一晩後、樹脂をＳＰＰＳ反応器に移し、濾過し、ＣＨ₂ Ｃｌ₂とｉＰｒＯＨ（１０×２０ｍｌ）及びエーテル（２×２０ｍｌ）で交互に 洗浄する。樹脂を窒素流下に乾燥する。 ｅ）方法Ｅ：樹脂からの保護ポリアミノ酸の分離 磁気棒を備える２５０ｍｌ容丸底フラスコに、方法Ｃ及びＤにより得られた樹 脂を加える。ＣＨ₂Ｃｌ₂ ５０ｍｌとＣＦ₃ＣＨ₂ＯＨ ２５ｍｌからなる溶液を 加え、混合物を２時間撹拌する。溶液を濾過し、樹脂をＣＨ₂Ｃｌ₂（２×１０ｍ ｌ）で洗浄し、こうして得られた有機相を集めて減圧蒸発させる。次に、ＣＨＣ ｌ₃／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離剤としてＳｉＯ₂上でフラッシュクロマトグラフ ィーにより生成物を精製する。生成物を含むフラクションをＴＬＣにより同定す る。（詳細については下記実施例参照。） ｆ）方法Ｆ：アミノ酸とジリピジルアミンの結合 Ｂｏｃ−アミノ酸（１０ｍｍｏｌ）とＣ１２〜Ｃ２２ジリピジルアミン（１０ ｍｍｏｌ）を２５０ｍｌ容丸底フラスコに加える。ＣＨＣｌ₃（１００ｍｌ）を 加え、完全に溶解するまで混合物を撹拌する。次いでＴＥＡ（３０ｍｍｏｌ）と ＢＯＰ（３３ｍｍｏｌ）を加える。ＴＥＡを加えてｐＨを１０に維持し、反応物 を２時間撹拌する。反応の完了後（ＴＬＣ）、クロロホルムを蒸発させ、固形分 を酢酸エチル（３００ｍｌ）にとる。有機相をＫＨＳＯ₄（４×１００ｍｌ）、 ＮａＨＣＯ₃（４×１００ｍｌ）及びＮａＣｌ（４×１００ｍｌ）で洗浄する。 有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過し、減圧蒸発させる。生成物をＴＬＣ、ＮＭ Ｒ及びＭＳにより分析し、精製せずに使用する。収率は約９０％である。 ｇ）保護ポリアミノ酸とジリピジルアミド酸の結合と、Ｂｏｃ及びＺ保護基の分 離 方法Ｇ： 方法Ｆにより得られた生成物（９ｍｍｏｌ）を磁気棒を備える丸底フラスコに 入れ、冷ＴＦＡ（４℃）を加える（３０ｍｌ）。溶液を１時間撹拌する。ＴＦＡ を減圧蒸発させる。ＤＭＦ （７０ｍｌ）を加えて生成物を溶かす。ＴＥＡ（３０ｍｍｏｌ）を加えた後、方 法Ｅにより得られた保護ポリアミノ酸（９ｍｍｏｌ）を加える。ｐＨを１０に調 整し、ＢＯＰ（３３ｍｍｏｌ）を加える。溶液を２時間撹拌後、ＴＬＣを行う。 結合の完了後（ＴＬＣ）、ＫＨＳＯ₄溶液（７００ｍｌ）を加え、生成物を酢酸 エチル（３×１００ｍｌ）で抽出する。有機相をＫＨＳＯ₄（３×５０）、Ｎａ ＨＣＯ₄（３×５０）及びＮａＣｌ（３×５０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥 し、濾過し、減圧蒸発させる。生成物をＮＭＲ、ＴＬＣ及びＭＳにより分析し、 予備精製せずに脱保護する。ＴＦＡ（５０ｍｌ）を生成物に加え、溶液を１．５ 時間撹拌し、ＴＦＡを蒸発させる。生成物がＴＦＡで分離可能なＺ又はＣｌＺ基 をまだ含んでいる場合には、方法Ｈを直接実施する。最終生成物を準分取ＨＰＬ Ｃにより精製する（実施例参照）。 方法Ｈ： 方法Ｇにより得られた生成物がＺ又はＣｌＺ基を含んでいる場合には、磁気棒 を備える丸底フラスコに入れ、１０ｍｌ ＭｅＯＨ／ｇ生成物に溶かす。Ｐｄ／ Ｃ（１０％、１ｇ／ｇ生成物）とギ酸アンモニウム（１ｇ／ｇ生成物）を周囲温 度で加 える。ＨＰＬＣにより水素化を行う。２時間後に反応を終了し、混合物を濾過し 、濾渣をＭｅＯＨ １０ｍｌで洗浄する。軟蒸留水を加え、溶液を凝固させ、凍 結乾燥する。最終生成物を分取ＨＰＬＣにより精製する。 ｈ）方法Ｉ：Ｂｏｃ保護基の脱保護 丸底フラスコ中のＢｏｃ基（１ｍｍｏｌ）を含む生成物にトリフルオロ酢酸（ ５０ｍｌ）を加える。溶液を１．５時間撹拌し、ＴＦＡを蒸発させる。アミンを 完全に脱保護し、精製せずに結合に使用する。Ｂ−生物学的試験材料及び方法 １．ｉｎ ｖｉｔｒｏ遺伝子導入に使用したプラスミド プラスミドｐＣＭＶ−ＬＵＣは、ベクタープラスミドｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉ ｔｒｏｇｅｎ）から抽出したヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）のプロモータ ーを含むＭｌｕ Ｉ−Ｈｉｎｄ ＩＩＩフラグメントの挿入により、プラスミド ｐＧＬ２−Ｂａｓｉｃ Ｖｅｃｔｏｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）又はプラスミドｐＧＬ ２−Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｖｅｃｔｏｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）から誘導される構築物で ある。 ２．トランスフェクションに使用した溶液の調製プロトコール 本発明に記載する生成物はエタノール又は水に２０ｍＭに溶かした後、最終エ タノール濃度が１０％未満となるように水で希釈する。 生理的血清（０．１５Ｍ ＮａＣｌ）で希釈した核酸溶液を１／１（ｖ／ｖ） の比でリポフェクタント溶液に加える。ボルテックス均質化と周囲温度で１５分 間のインキュベーション後、ＤＮＡ／リポフェクタント溶液を最終濃度９％（ｖ ／ｖ）でウェルに分配し、無タンパク質（血清）成長培地で洗浄し、無血清又は 非無血清培地で再培養した。Ｃ−ｉｎ ｖｉｖｏアッセイ材料 １．材料 ａ）実験モデル： −雌成体（＞８週）マウスＣ５７／ＢＬ６。 −腫瘍フラグメントを脇腹の皮下に移植して動物間で継代することにより得られ る３ＬＬ（ルイス肺癌）型腫瘍。 ｂ）使用したプラスミド： ｐＸＬ２６２２：ルシフェラーゼをコードする遺伝子の上流にｐＣＤＮＡ３（ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）から抽出したサイト メガロウイルス（ＣＭＶ）のプロモーターを挿入することにより、基本プラスミ ドｐＧＬ２（Ｐｒｏｍｅｇａ）から誘導される。このプラスミドはＰＥＧ沈殿法 （Ａｕｓｕｂｅｌ）により得られ、ＤＮＡ約１０μｇ／μｌの濃度で４℃で １ ０ｍＭ Ｔｒｉｓ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，ｐＨ８中に保存する。 ２．プロトコール 注射溶液：まずトランスフェクトしようとするＤＮＡを緩衝液に可溶化した後 、配列番号１のペプチド（ＫＴＰＫＫＡＫＫＰ）２を加え、２０分後に高濃度（ ２０又は４０ｍＭ）のカチオン脂質溶液を混合物に加える。全生成物の添加後、 混合物はＤＮＡ（最終濃度０．５ｍｇ／ｍｌ）、ペプチド（０．７５ｍｇ／ｍｌ ）及びカチオン脂質以外に、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５％ Ｄ−グルコース及び ５ｍＭ ＭＥＳ，ｐＨ６．２を含有している。溶液の調製から２０〜３０分後に 注射を行う。 実施例１： Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｙＮ［（ＣＨ₂ ）₁₇ＣＨ₃］₂（６）の合成 ａ―｛Ｂｏｃ−［３−（Ｂｏｃ−｛４−［Ｂｏｃ−（３−Ｂｏｃ−アミノプロピ ル）アミノ］ブチル｝アミノ）プロピル］ アミノ｝酢酸（３）の合成 方法Ａにより得られた樹脂を方法Ｂ、Ｃ及びＥによりスペルミンと反応させる 。保護生成物をＳｉＯ₂上でクロマトグラフィーにより精製する。収率は４０％ である。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３２（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ，９：１）。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝４．２２分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[４０／６０]、３〜２０ 分[０／１００]、３５分[０／１００]）。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６にＣＤ₃ＣＯＯＤ ｄ４数滴を滴下，ｄ（ｐｐｍ））：１．４０（４ｓ，３６Ｈ：Ｃ（ＣＨ₃）₃）； １．４６（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心のＣＨ₂ＣＨ₂）； １．６４及び１．７ ４（２ｍｔ，各２Ｈ：プロピルの中心のＣＨ₂）； ２．９６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ ，２Ｈ：ＣＨ₂ＮＣＯＯ）； ３．１５（ｍｔ，８Ｈ：ＣＨ₂ＮＣＨ₂）； ３． ２３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ：ＣＨ₂ＮＣＯＯ）； ３．８３（ｓ，２Ｈ： ＯＣＯＮＣＨ₂ＣＯＯ）。 ＭＨ⁺：６６１。 ｂ―｛Ｚ−［３−（Ｚ−｛４−［Ｚ−（３−Ｚ−アミノプロピル）アミノ］ブチ ル｝アミノ）プロピル］アミノ｝酢酸（４）の合成 方法Ａにより得られた樹脂を方法Ｂ、Ｃ及びＤによりスペルミンと反応させる 。保護生成物をＳｉＯ₂上でクロマトグラフィーにより精製する。収率は２０％ である。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８５（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ，８：２）。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝６．９２分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[４０／６０]、３〜２０ 分[０／１００]、３５分[０／１００]）。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度４１３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：１．４９（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心のＣＨ₂ＣＨ₂）； １． ７４及び１．８１（２ｍｔ，各２Ｈ：プロピルの中心のＣＨ₂）； ３．０７（ ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ：ＣＨ₂ＮＣＯＯベンジル）； ３．１５−３．３０（ｍ ｔ，８Ｈ：ＣＨ₂ＮＣＨ₂）； ３．３３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ ＣＯＯ）； ３．７０（ｓ，２Ｈ：ＯＣＯＮＣＨ₂ＣＯＯ）； ５．０７，５． １０，５．１２及び５．１３（４ｓ，各２Ｈ：ＡｒＣＨ₂ＯＣＯＮ）； ６．６ ５（ｍｆ，１Ｈ：ＮＨＣＯ）； ７．２５−７．４０（ｍｔ，２０Ｈ：芳香族Ｈ ）。 ＭＨ⁺：７９７。 ｃ―Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ジオクタデシルアミド（５） 方法ＦによりＢｏｃ−Ｇｌｙをジオクタデシルアミンに結合する（収率９０％ ）。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．９（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ，９：１）。 ＭＨ⁺：６７９。¹ ＨＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，ｄ（ｐｐｍ））：０．８９（ ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：ＣＨ₃）； １．２９（ｍｔ，６０Ｈ；脂肪鎖の中心の ＣＨ₂）； １．４９（ｓ，９Ｈ：Ｃ（ＣＨ₃）₃）； １．５５（ｍｔ，４Ｈ； 各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； ３．１５及び３．３３（２ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，各２ Ｈ：脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．９５（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，２Ｈ：ＯＣＯＮＣＨ₂Ｃ ＯＮ）； ５．５７（ｍｆ，１Ｈ：ＣＯＮＨ）。 ｄ―Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｙＮ［（ ＣＨ₂）₁₈］₂（６） 生成物（３）と（５）又は（４）と（５）を方法Ｇにより結合する。生成物を Ｂｏｃ保護生成物は方法Ｇ、Ｚ保護生成物は方法Ｈに記載したように脱保護する 。生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションをＨＰＬＣにより分析す る。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１５．３５分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[４０／６０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＢＹＫ２０５３¹ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６に ＣＤ₃ＣＯＯＤ ｄ４数滴を滴下，温度３００Ｋ，ｄ（ｐｐｍ））：０．８３（ ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：ＣＨ₃）；１．２３（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心のＣ Ｈ₂）； １．４３及び１．５３（２ｍｔ，各２Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； １ ．６３（ｍ，４Ｈ：ブチルの中心のＣＨ₂ＣＨ₂）； １．９６（ｍｔ，４Ｈ：プ ロピルの中心のＣＨ₂）； ２．９３，３．００及び３．２２（３ｍｔ，合計１ ６Ｈ：ＮＣＨ₂）； ３．８３（ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．０３（ｓ， ２Ｈ：ＣＯＮＣＨ₂ＣＯＮ）。 ＭＨ⁺：８２１。 実施例２： Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＮ［（ＣＨ₂）₁₈ ］₂（７）の合成 生成物（３）を方法Ｆによりジオクタデシルアミンと結合し、方法Ｇにより脱 保護する。生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションをＨＰＬＣによ り分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１５．２分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[４０／６０]、３〜２０ 分[０／１００]、３５分[０／１００]）。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＣＦ₃ＣＯＯＤ ２／３とＣＤ₃ＣＯＯＤ ｄ４ １／３の混合物中，ｄ（ｐｐｍ））：０．７８（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ： ＣＨ₃）； １．２０（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心のＣＨ₂）； １．５２（ｍ ｔ，４Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； １．８０（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心のＣ Ｈ₂ＣＨ₂）； ２．２３及び２．３２（２ｍｔ，各２Ｈ：プロピルの中心のＣＨ₂ ）； ３．１０−３．４０（３ｍｔ，合計１６Ｈ：ＮＣＨ₂）； ４．１５（ｓ ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）。 ＭＨ⁺：７６４。 実施例３： Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＡｒｇＮ［（ＣＨ₂ ）₁₈］₂（９）の合成 本生成物は、方法ＦによりＢｏｃＡｒｇ（Ｚ₂）とジオクタデシルアミンを結 合して合成する（収率９１％）。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．９（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ，９：１）。 ＭＨ⁺：１０４６。 ＣＨ₂ＣＯＡｒｇＮ［（ＣＨ₂）₁₈］₂（９） 生成物（３）又は（４）を方法Ｇにより生成物（８）と結合し、方法Ｇ（Ｂｏ ｃ）及び／又はＨ（Ｚ）により脱保護する。最終生成物を準分取ＨＰＬＣにより 精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１３．８３分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[４０／６０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，ｄ（ｐｐｍ）） ）：０．９０（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：ＣＨ₃）；１．２８（ｍｔ，６０Ｈ：脂 肪鎖のＣＨ₂）； １．４０−１．８０（ｍｔ，１２Ｈ：ＣＨ₂）； １．９３（ ｍ，４Ｈ：プロピルの中心のＣＨ₂）； ２．８０−３．１０（３ｍｔ，１６Ｈ ：ＮＣＨ₂及び脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．４２（ｍｔ，２Ｈ：アミドのＣＨ₂Ｎ ）； ３．７７（ｍｔ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．６７（ｍｔ，１Ｈ：Ｎ ＣＨＣＯＮ）； ６．８０−７．５０（広幅ｍｆ，２Ｈ：ＮＨ₂）； ７．７８ ，７．９２，８．８０及び９．０３（夫々ｍｔ及び３ｍｆ、夫々 １Ｈ，２Ｈ，４Ｈ及び１Ｈ：ＣＯＮＨ，ＮＨ及びＮＨ₂）。 ＭＨ⁺：９２０。 実施例４： Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＡｒｇ（Ｚ）₂Ｎ ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（１０）の合成 生成物（３）を方法Ｇにより生成物（８）と結合し、同一方法によりＢｏｃ基 を分離する。生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬ Ｃにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１７．７５分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[４０／６０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ，ｄ（ｐｐｍ））：０． ８７（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：ＣＨ₃）； １．２５（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の 中心のＣＨ₂）； １．４０及び１．５７（２ｍｔ，各２Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂ ）； １．６５（ｍｔ，８Ｈ：ブチルの中心のＣＨ₂ＣＨ₂）； １．９５（ｍｔ ，４Ｈ：プロピルの中心のＣＨ₂）； ２．８５−３．０５（ｍｔ，合計１４Ｈ ：ＮＣＨ₂）； ３．２３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ：ＮＣＨ₂）； ３．７５ （ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ３．８５及び３．９５（２ｍｔ，各１Ｈ： ＣＨ₂ＮＣ）； ４．６７（ｍｔ，１Ｈ：ＣＯＮＣＨＣＯＮ）；５．０７及び５ ．２５（夫々限界ＡＢ及びｓ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，各２Ｈ：ＮＣＯＯＣＨ₂Ａｒ ）； ７．２５−７．４５（ｍｔ，１０Ｈ：芳香族Ｈ）； ７．９５，８．８５ ，９．９０及び９．２０（４ｍｆ：互換Ｈ）。 ＭＨ⁺：１１８８。 実施例５： Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＬｙｓ（ローダミ ン）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（１３）の合成 本生成物は、方法ＦによりＢｏｃＬｙｓ（ＣｌＺ）をジオクタデシルアミンと 結合することにより合成した（収率８９％）。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．９２（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ，９：１）。 ＭＨ⁺：９１８。 Ｈ₂）₃ＮＢｏｃＣＨ₂ＣＯＬｙｓ（ＣｌＺ）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（１２） （Ｂｏｃを脱保護せずに）生成物（３）を方法Ｇにより生成 物（１１）に結合する。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度４２３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．９２（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ：ＣＨ₃）； １．３２ （ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心のＣＨ₂）； １．４４（２ｓ，合計３６Ｈ：Ｃ （ＣＨ₃）₃）；１．５０−１．８０（ｍｔ，１６Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂，ブチ ルの中心のＣＨ₂ＣＨ₂,ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂及びプロピルの中心のＣＨ₂）； ３． ００（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ：ＯＣＯＮＣＨ₂）； ３．０５（ｑ，Ｊ＝６ ．５Ｈｚ，２Ｈ：ＣＨ₂ＮＣＯＯ）； ３．１５−３．４０（ｍｔ，１４Ｈ：脂 肪鎖のＮＣＨ₂，ＣＨ₂ＮＣＨ₂及びＣＨ₂ＮＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ）； ３．８０（ｓ，２ Ｈ：ＯＣＯＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．７５（ｍｔ，１Ｈ：ＣＯＮＣＨＣＯＮ）； ５．１５（ｓ，２Ｈ：ＮＣＯＯＣＨ₂Ａｒ）； ５．９７及び６．５３（２ｍ ｔ，各１Ｈ：ＯＣＯＮＨ及びＮＨＣＯＯ）； ７．０８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ：ＣＯＮＨ）； ７．３０−７．５０（ｍｔ，４Ｈ：芳香族Ｈ）。 Ｈ₂ＣＯＬｙｓ（ローダミン）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（１３） 生成物（１２）のリジン上のＣｌＺ基を方法Ｈにより分離し、こうして得られ た生成物を減圧乾燥し、エーテルにとり、ＮａＨＣＯ₃とＮａＣｌで濯ぐ。エー テルをＭｇＳＯ₄で乾燥し、減圧蒸発させる。 脱保護生成物７７ｍｇ（６０μＭ）をＭｅＯＨ ３ｍｌに溶かし、ＤＩＥＡ（ ６４μＬ）を加えた後、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（３０ｍｇ ，６８μＭ）を加え、溶液を１７時間撹拌し、反応をＴＬＣによりモニターする 。翌日、溶液を減圧乾燥して濃縮する。次にＴＦＡ（４ｍｌ）を加え、１時間撹 拌する。ＴＦＡを蒸発させ、粗生成物を準分取ＨＰＣＬにより精製する（最終収 率３０％）。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．０５（ＭｅＯＨ）。 ＨＰＬＣ（準分取），Ｒｔ＝６１．５５分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分［１００／ ０］、３〜４５分［０／１００］、４５〜１４０分［０／１００］）。 ＭＨ⁺：１３３５。 実施例６： Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＬｙｓ（ビオチニ ル）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（１４） の合成 生成物（１２）を方法Ｈにより脱保護し（２７１ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）、 ＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶かす。ＤＩＥＡ（０.１１ｍｌ）を加えた後、ビオチン （５６．４ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）とＢＯＰ（１０２ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ ；ｐＨは１０（ＤＩＥＡ）に維持）を加え、反応の終了をフルオレサミン試験に より確認する。生成物を方法Ｆに記載したように回収し、精製せずにＴＦＡ（５ ｍｌ）で１時間脱保護する。ＴＦＡを蒸発させ、生成物を準分取ＨＰＬＣにより 精製する（収率５０％）。 ＨＰＬｃ，Ｒｔ＝１３．１２分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[４０／６０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：１１１８。 実施例７： ｛Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₃｝₂Ｎ（ＣＨ₂）₄Ｎ｛（ＣＨ₂）₃ＮＨ₂｝（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ ＣＯＧｌｙＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（１６）の合成 ＮＨＢｏｃ｝（ＣＨ₂）₃ＮＢｏｃＣＨ₂ＣＯＯＨ（１５） 生成物（１）を方法Ｂによりポリマーに固定し、方法Ｃによ り保護し、方法Ｅにより樹脂から分離する。生成物をＳｉＯ₂上で精製する（収 率３５％）。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ，８：２）。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６にＣＤ₃ＣＯＯＤ ｄ４数滴を滴下，温度４３３Ｋ，ｄ（ｐｐｍ））：１．４２（ｓ，３６Ｈ：Ｃ（ ＣＨ₃）₃）； １．５６（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心のＣＨ₂ＣＨ₂）； １．６ ５−１．８５（ｍｔ，８Ｈ：プロピルの中心のＣＨ₂）； ２．７６（ｍｔ，１ ２Ｈ：ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂）₂）； ３．０６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ：ＯＣＯ ＮＣＨ₂）； ３．２９（ｍｔ，２Ｈ：ＮＣＨ₂）； ３．８６（ｓ，２Ｈ：ＯＣ ＯＮＣＨ₂ＣＯＯ）。 ＭＨ⁺：７７５。 Ｈ₂｝（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｙＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（１６） 生成物（１５）を方法Ｇにより生成物（５）と結合する。生成物を方法Ｇによ り脱保護し、準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより 分析し、凍結乾燥する（収率５５％）。 ＨＰＬＣ（準分取），Ｒｔ＝３８．７２分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：１０分［１００ ／０］、１０〜４５分［０／１００］、４５〜１４０分［０／１００］）。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度３８６Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．９０（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：ＣＨ₃）； １．３０（ｍ ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心のＣＨ₂）； １．５５（ｍｔ，４Ｈ：各脂肪鎖の１Ｃ Ｈ₂）； １．６５（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心のＣＨ₂ＣＨ₂）； １．９７（ ｍｔ，８Ｈ：プロピルの中心のＣＨ₂）； ２．８０−３．０５，３．０６及び ３．２８（夫々ｍｔ及び２ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１８Ｈ，２Ｈ及び４Ｈ：ＮＣＨ₂ ）； ３．８０（ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．０３（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈ ｚ，２Ｈ：ＣＯＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ６．００−９．００（広幅ｍｆ：ＮＨ₂及び ＮＨ）； ８．２７（ｍｔ，１Ｈ：ＣＯＮＨ）。 ＭＨ⁺：９３５。 実施例８： ｛Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₃｝₂Ｎ（ＣＨ₂）₄Ｎ｛（ＣＨ₂）₃ＮＨ₂｝（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ ＣＯＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（１７）の合成 （３）の代わりに生成物（１５）を使用することにより生成物（７）と同様に 合成する。生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣ により分析し、凍結乾燥する。 ＨＰＬＣ（準分取），Ｒｔ＝３８分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：１０分［１００／０］ 、１０〜４５分［０／１００］、４５〜１４０分［０／１００］）。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６にＣＤ₃ＣＯＯＤ ｄ４数滴を滴下，ｄ（ｐｐｍ））：０．８８（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：ＣＨ₃） ； １．２９（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心のＣＨ₂）； １．５２（ｍｔ，４ Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； １．６８（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心のＣＨ₂ＣＨ₂ ）； １．９０−２，１０（ｍｔ，８Ｈ：プロピルの中心のＣＨ₂）； ２．９ ０，２．９５−３．１５，３．１８及び３．１５（夫々ｔ，ｍｔ及び広幅２ｔ， Ｊ＝７．５Ｈｚ，合計２４Ｈ：ＮＣＨ₂）； ４．０２（ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯ Ｎ）。 ＭＨ⁺：８７８。 実施例９： ｛Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₂｝₂Ｎ（ＣＨ₂）₂ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｙＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃ ］₂（１９）の合成ＣＯＯＨ（１８） 生成物（１）の代わりにトリス（アミノエチル）アミンを使用することにより 生成物（１５）と同様に合成する（収率２９％）。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５５（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ，８：２）。 １ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度３９３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：１．４４（ｓ，２７Ｈ：Ｃ（ＣＨ₃）₃）； ２．５８（ｔ，Ｊ ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ：ＣＨ₂ＮＣＨ₂）； ２．６６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ：Ｎ ＣＨ₂）；３．０４（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ：ＯＣＯＮＣＨ₂）；３．２８（ ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ：ＯＣＯＮＣＨ₂）；３．７６（ｓ，２Ｈ：ＯＣＯＮＣＨ₂ ＣＯＯ）； ６．０６（ｍｆ，２Ｈ：ＣＯＮＨ）。 ＭＨ⁺：５０５。 ｌｙＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（１９） （１５）の代わりに（１８）を使用することにより生成物（１７）と同様に合 成する（収率６５％）。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１２２分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：１０分［１００／０］、１０〜 ４５分［０／１００］、４５〜１４０分［０／１００］）。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６にＣＤ₃ＣＯＯＤ ｄ４数滴を滴下，ｄ（ｐｐｍ））：０．８７（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：ＣＨ₃） ； １．１５−１．３５（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心のＣＨ₂）； １．４５ 及び１．５５（２ｍｔ，各２Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； ２．６４（ｔ，Ｊ＝ ５．５Ｈｚ，４Ｈ：ＣＨ₂ＮＣＨ₂）； ２．７５（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ：ＮＣ Ｈ₂）； ２．９５（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，４Ｈ：ＮＣＨ₂）； ３．０８（ｔ， Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ：ＮＣＨ₂）； ３．２５（ｍｔ，４Ｈ：脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．８８（ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．０６（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，２Ｈ ：ＣＯＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ７．７５（残留広幅ｍｆ：ＮＨ）； ８．６８（残 留ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ：ＣＯＮＨ）。 ＭＨ⁺：７６５。 実施例１０： ｛Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）₂｝₂Ｎ（ＣＨ₂）₂ＮＨＣＨ₂ＣＯＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（２ ０）の合成 （５）の代わりにジオクタデシルアミンを使用することにより生成物（１９） と同様に合成する（収率７３％）。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１００．１分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：１０分［１００／０］、１ ０〜４５分［０／１００］、４５〜１４０分［０／１００］）。 ＭＨ⁺：７０８。 実施例１１： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＬｙｓＮ［（ＣＨ₂ ）₁₇ＣＨ₃］₂（２１）（ＲＰＲ１２７８８８Ａ）の合成 生成物（１２）を方法Ｈ（Ｃｌ−Ｚ）、次いで方法Ｉにより脱保護する。最終 生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより分析 する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１１．７６分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：８９２。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度３９３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．９１（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）； １． ３１（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅）； １．３５−１．７５（ ｍｔ，１０Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂，リシルの中心の（ＣＨ₂）₃）； １．７５ （ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂）； ２．００（ｍｔ，４Ｈ：プロピ ルの中心のＣＨ₂）； ２．８２，２．９８，３．０６及び３．１０−３．５０ （夫々２ｔ，ｍｔ及び２ｍｆ、Ｊ＝７Ｈｚ，合計１８Ｈ：リシルのＮＣＨ₂，ブ チルのＮＣＨ₂，プロピルのＮＣＨ₂及び脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．６２（ｓ， ２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．７３（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ：リシルのＣＯＮ ＣＨＣＯＮ）； ８．１８（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ：リシルのＣＯＮＨ）。 実施例１２： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＬｙｓ（Ｃｌ−Ｚ ）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（２２）（ＲＰＲ１２２７５９Ａ）の合成 生成物（１２）を方法Ｉにより脱保護する。最終生成物を準 分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬｃ，Ｒｔ＝１６．７９分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：１０６０。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度３７３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．９１（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）； １． ３１（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅）； １．３０−１．７５（ ｍｔ，１０Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂，リシルの中心の（ＣＨ₂）₃）； １．７２ （ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂）； １．９５（ｍｔ，４Ｈ：プロピ ルのＣＨ₂）； ２．９８，３．０６及び２．９０−３．５０（夫々２ｍｔ及び ｍｆ，合計１８Ｈ：リシルのＮＣＨ₂，ブチルのＮＣＨ₂，プロピルのＮＣＨ₂及 び脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．５９（ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）；４．７５（ｑ ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ：リシルのＣＯＮＣＨＣＯＮ）；５．１６（ｓ，２Ｈ：ＣＯ ＯＣＨ₂Ａｒ）； ６．８５（ｍｆ，１Ｈ：ＯＣＯＮＨ）； ７．３５−７．５ ５（ｍｔ，５Ｈ：芳香族Ｈ）； ８．１５（ｍｆ，１Ｈ：リシルのＣＯＮＨ）。 実施例１３： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＬｙｓ（ＣＨＯ） Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（２４）（ＲＰＲ１２２７６０Ａ）の合成 Ｈ₂）₃ＮＢｏｃＣＨ₂ＣＯＬｙｓＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（２３） 生成物（１２）を方法Ｈ（Ｃｌ−Ｚ）により脱保護し（収率６５％）、精製せ ずに使用する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝２０．８２分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＣＨ₂ＣＯＬｙｓ（ＣＨＯ）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（２４） 生成物（２３）を方法Ｇによりギ酸と結合する。生成物を準分取ＨＰＬＣによ り精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１３．６０分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：９２０。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度３８３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．９２（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）； １． ３１（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅）； １．３５−１．７０（ ｍｔ，１０Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂，リシルの中心の（ＣＨ₂）₃）； １．７３ （ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂）； １．９８（ｍｔ，４Ｈ：プロピ ルのＣＨ₂）； ２．８５−３．５０（ｍｔ，１８Ｈ：リシルのＮＣＨ₂，ブチル のＮＣＨ₂，プロピルのＮＣＨ₂及び脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．６２（ｓ，２Ｈ ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．７５（ｍｔ，１Ｈ：リシルのＣＯＮＣＨＣＯＮ）； ７．６０（ｍｆ，１Ｈ：ＣＯＮＨ）； ８．０５（広幅ｓ，１Ｈ：アルデヒド のＣＨ）； ８．１８（ｍｆ，１Ｈ：リシルのＣＯＮＨ）。 実施例１４： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＬｙｓ［コレステ リル］Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（２５）（ＲＰＲ１２８１４２Ａ）の合成 （ＢＯＰ試薬を使用せずに）生成物（２３）を方法Ｇによりクロロギ酸コレス テリルと結合する。生成物を準分取ＨＰＬＣ により精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝２１．６６分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：１３０４。¹ ＨＮＭＲスペクトル（６００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，ｄ（ｐｐｍ）） ：０．６８及び０．９８（２ｓ，各３Ｈ：コレステリルの１８位ＣＨ₃及び１９ 位ＣＨ₃）； ０．８６（ｍｔ，１２Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃並びにコレステリルの２ ６及び２７位ＣＨ₃）； ０．９１（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ：コレステリルの２ １位ＣＨ₃）； １．３１（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅）； ０ ．８０−２．３０（ｍｔ，４２Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂，コレステリルの１、２ 、４、７、１１、１２、１５、１６、２２、２３及び２４位のＣＨ₂，コレステ リルの８、９、１４、１７、２０及び２５位のＣＨ，リシルの中心の（ＣＨ₂）₃ 並びにプロピルのＣＨ₂）； １．６５（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂ ）； ２．８８及び２．９６（２ｍｔ，合計１４Ｈ：リシルのＮＣＨ₂，ブチル のＮＣＨ₂，プロピルのＮＣＨ₂）； ３．２０−３．５０（ｍｔ，４Ｈ：脂肪鎖 のＮＣＨ₂）； ３．６４（ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯ Ｎ）； ４．２３（ｍｔ，１Ｈ：コレステリルの３位ＣＨ）； ４．６３（ｍｔ ，１Ｈ：リシルのＣＯＮＣＨＣＯＮ）； ５．３０（ｍｔ，１Ｈ：コレステリル の６位ＣＨ）； ６．９８（ｍｔ，１Ｈ：ＮＨＣＯＯ）； ７．９０（ｍｔ，１ Ｈ：リシルのＣＯＮＨ）； ８．６０−９．０１（互換ｍｆ）。 実施例１５： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＬｙｓ［アラキド ニル］Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（２６）（ＲＰＲ１３０６０５）の合成 生成物（２３）を方法Ｇにより窒素流下で遮光下にアラキドン酸と結合する。 生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより分析 する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝２０．６７分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：１１７７。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６にＣＤ₃ＣＯＯＤ ｄ４数滴を滴下，温度３９３Ｋ，ｄ（ｐｐｍ））：０．９０（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ， ６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）；０．９１（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ：アラキドニルのＣ Ｈ₃）； １．３１（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅）；１．３５−１．７５ （ｍｔ，１８Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂，アラキドニルの中心の（ＣＨ₂）₃，アラ キドニルの中心のＣＨ₂及びリシルの中心の（ＣＨ₂）₃）； １．７５（ｍｔ， ４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂）； ２．０２（ｍｔ，４Ｈ：プロピルのＣＨ₂ ）； ２．１０（ｍｔ，６Ｈ：ＣＯＣＨ₂及びアラキドニルの２個の＝ＣＣＨ₂ ）； ２．８０，２．９７，３．０６及び３．１０−３．５０（夫々ｍｔ，ｔ， ｍｔ及び２ｍｆ，Ｊ＝７Ｈｚ，合計２４Ｈ：アラキドニルの＝ＣＣＨ₂Ｃ＝，リ シルのＮＣＨ₂，ブチルのＮＣＨ₂，プロピルのＮＣＨ₂及び脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．６２（ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）；４．７３（ｄｄ，Ｊ＝８及び５Ｈｚ ，１Ｈ：リシルのＣＯＮＣＨＣＯＮ）； ５．３８（ｍｔ，８Ｈ：アラキドニル のＣＨ＝ＣＨ）。 実施例１６： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｕＮ［（ＣＨ₂ ）₁₇ＣＨ₃］₂（２８）（ＲＰＲ１２６０９７Ａ）の合成 （２７） 本生成物は方法ＦによりＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ）とジオクタデシルアミンを 結合して合成する（収率９０％）。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８８（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ，９：１）。 ＣＨ₂ＣＯＧｌｕＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（２８） 生成物（３）又は（４）を方法Ｇ、次いで方法Ｈ（Ｃｌ−Ｚ脱保護）により生 成物（２７）と結合する。最終生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクシ ョンを分析ＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１４．６４分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：８９３。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度３８３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．９０（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）； １． ３０（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅）； １．５６（ｍｆ，４Ｈ ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； １．６０−２．００（ｍｔ，２Ｈ：グルタリルの中 心のＣＨ₂）； １．７３（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心 のＣＨ₂）₂）； １．９８（ｍｔ，４Ｈ：プロピルのＣＨ₂）；２．３２（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ：グルタリルのＣＯＣＨ₂）；３．００，３．０６及び３．４ ５（夫々ｔ及び２ｍｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，合計１６Ｈ：ブチルのＮＣＨ₂，プロピル のＮＣＨ₂及び脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．６５（広幅ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ ）； ４．８５（ｍｔ，１Ｈ：グルタリルのＣＯＮＣＨＣＯＮ）； ８．１９（ 広幅ｓ，１Ｈ：グルタリルのＣＯＮＨ）。 実施例１７： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｕ（Ｏ−Ｂｚ ）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（２９）（ＲＰＲ１２３０２７Ａ）の合成 生成物（３）を方法Ｇにより生成物（２７）と結合し、脱保護（Ｂｏｃ）する 。最終生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣによ り分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１６．０２分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：９８３。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度４１３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．８９（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ， ６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）； １．３０（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅ ）； １．５５（ｍｆ，４Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； １．７２（ｍｔ，４ Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂）； １．７５−２．００（ｍｔ，２Ｈ：グルタ リルの中心のＣＨ₂）； １．９９（ｍｔ，４Ｈ：プロピルのＣＨ₂）；２．４７ （ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ：グルタリルのＣＯＣＨ₂）；２．９５，３．０５及び ３．４０（３ｍｔ，合計１６Ｈ：ブチルのＮＣＨ₂，プロピルのＮＣＨ₂及び脂肪 鎖のＮＣＨ₂）；３．６２（広幅ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．８５（ｍｔ ，１Ｈ：グルタリルのＣＯＮＣＨＣＯＮ）； ５．１４（限界ＡＢ，Ｊ＝１２Ｈ ｚ，２Ｈ：ベンジルのＣＨ₂）； ７．３５（ｍｔ，５Ｈ：ベンジルの芳香族Ｈ ）； ８．２３（ｍｆ，１Ｈ：グルタリルのＣＯＮＨ）。 実施例１８： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｕ（ガラクト サミド）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（３１）（ＲＰＲ１３０５９６Ａ）の合成 Ｈ₂）₃ＮＢｏｃＣＨ₂ＣＯＧｌｕＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂ （３０） 生成物（３）を生成物（２７）に結合し、側鎖のＯＢｚ保護基を方法Ｈ（Ｃｌ −Ｚ）により分離し、精製せずに使用する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝２２．８４分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：１２９３。 ＣＨ₂ＣＯＧｌｕ（ガラクトサミド）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（３１） 生成物（３０）を方法Ｇにより塩酸Ｄ（＋）−ガラクトサミンと結合する。生 成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより分析す る。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１３．７１分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：１０５４。 実施例１９： ＮＨ２（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｕ（ガラク トサミド）Ｎ[（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃]₂（３２）（ＲＰＲ１３０５９５Ａ）の合成 生成物（３０）を方法Ｇにより塩酸Ｄ（＋）−ガラクトサミンと結合する。生 成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより分析す る。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１２．２７分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：１０５４。 実施例２０： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｕ（マンノサ ミド）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（３３）（ＲＰＲ１３０５９８Ａ）の合成 生成物（３０）を方法Ｇにより塩酸Ｄ（＋）−マンノサミンと結合する。生成 物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより分析する 。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１２．９８分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：１０５４。 実施例２１： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｕ（Ｎ（ＣＨ₃ ）₂）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（３４） （ＲＰＲ１３１１１１Ａ）の合成 生成物（３０）を方法Ｇによりジメチルアミンと結合する。生成物を準分取Ｈ ＰＬＣにより精製し、フラクションを分析ＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１４．４４分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：９２０。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，ｄ（ｐｐｍ）） ：０．８９(ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃); １.２５（ｍｔ，６０Ｈ ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅）；１．４３及び１．６０（２ｍｔ，各２Ｈ：各 脂肪鎖の１ＣＨ₂）；１．６５（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂）； １．６５及び１．８５−２．００（２ｍｔ，各１Ｈ：グルタリルの中心のＣＨ₂ ）； １．９５（ｍｔ，４Ｈ：プロピルのＣＨ₂）；２．３２（限界ＡＢ，２Ｈ ：グルタリルのＣＯＣＨ₂）； ２．８０及び２．９２（２ｓ，各３Ｈ：ＣＯＮ （ＣＨ₃）₂）； ２．８５−３．０５（ｍｔ，１２Ｈ：ブチルのＮＣＨ₂，プロ ピルのＮＣＨ₂）； ３．００，３．２２，３．４５及び３．５８（４ｍｔ，各 １Ｈ：脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．７８（ＡＢ， Ｊ＝１６Ｈｚ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．７５（ｍｔ，１Ｈ：グルタリル のＣＯＮＣＨＣＯＮ）； ８．７２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ：グルタリル のＣＯＮＨ）； ８．８５及び８．９０−９．１５（互換ｍｆ）。 実施例２２： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｙＮ［（ＣＨ₂ ）₁₁ＣＨ₃］₂（３５）（ＲＰＲ１２２７６７Ａ）の合成 ジオクタデシルアミンの代わりにジドデシルアミンを使用する以外は生成物（ ６）と同様に合成する。生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションを ＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝９．５４分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２０ 分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：６５３。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度４０３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．９３（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）； １． ３３（ｍｔ，３６Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₉）； １．５８（ｍｔ，４Ｈ： 各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； １．７５（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂） ； １．９５及び２．００（２ｍｔ，各２Ｈ：プロピルの中心のＣＨ₂）； ２．９ ８及び３．００（２ｍｔ，合計１２Ｈ：ブチルのＮＣＨ₂及びプロピルのＮＣＨ₂ ）； ３．３０（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，４Ｈ：脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．５８（ｓ ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．０５（ｓ，２Ｈ：グルシルのＣＯＮＣＨ₂ＣＯ Ｎ）。 実施例２３： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｙＮ［（ＣＨ₂ ）₁₂ＣＨ₃］₂（３６）（ＲＰＲ１２２７７４Ａ）の合成 ジオクタデシルアミンの代わりにジトリドデシルアミンを使用する以外は生成 物（６）と同様に合成する。生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクショ ンをＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１０．６４分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：６８１。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度３９３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．９１（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ， ６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）； １．３３（ｍｔ，４０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂） １０）； １．５８（ｍｔ，４Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； １．７５（ｍｔ， ４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂）； ２．００（ｍｔ，４Ｈ：プロピルの中心 のＣＨ₂）；２．９８及び３．００（２ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，合計１２Ｈ：ブチルの ＮＣＨ₂及びプロピルのＮＣＨ₂）； ３．３２（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，４Ｈ：脂肪鎖 のＮＣＨ₂）； ３．６５（ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．０６（ｄ，Ｊ＝ ４Ｈｚ，２Ｈ：グルシルのＣＯＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ８．６０（広幅ｓ，１Ｈ： グルシルのＣＯＮＨ）。 実施例２４： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｙＮ［（ＣＨ₂ ）₁₃ＣＨ₃］₂（３７）（ＲＰＲ１２２７６６Ａ）の合成 ジオクタデシルアミンの代わりにジテトラドデシルアミンを使用する以外は生 成物（６）と同様に合成する。生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクシ ョンをＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝９．９２分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０ ／４０]、３〜２０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：７０９。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度３９３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．９０（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）； １． ３１（ｍｔ，４４Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₁）； １．５８(ｍｔ，４Ｈ： 各脂肪鎖の１ＣＨ₂)； 1.７６(ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂)； ２ ．００（ｍｔ，４Ｈ：プロピルの中心のＣＨ₂）； ２．９８及び３．０８（夫 々ｍｔ及びｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，合計１２Ｈ：ブチルのＮＣＨ₂及びプロピルのＮＣ Ｈ₂）； ３．３０（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，４Ｈ：脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．６５（ ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．０６（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ：グルシルの ＣＯＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ８．１０（ｍｆ，１Ｈ：グルシルのＣＯＮＨ）。 実施例２５： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄Ｎ［（ＣＨ₂）₃ＮＨ₂］ＣＨ₂ＣＯＧｌｙＮ［（ ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（３９）（ＲＰＲ１２６０９６Ａ）の合成 ＮＨＢｏｃ］ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ（３８）の合成 生成物（３）の合成中にＳｉＯ₂上で精製時に副産物（３８）を回収する。収 率は８％である。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３２（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ，９：１）。 ＭＨ⁺：５６１。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，ｄ（ｐｐｍ）） ：１．３０−１．６１（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂）； １．４０ （ｓ，２７Ｈ：Ｃ（ＣＨ₃）₃）；１．５６（ｍｔ，４Ｈ：プロピルのＣＨ₂）； ２．６８及び３．１１（夫々広幅ｔ及びｔ、Ｊ＝７Ｈｚ，各４Ｈ：ブチルのＮ ＣＨ₂及びプロピルのＮＣＨ₂）； ２．９０及び２．９６（２ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ， 各２Ｈ：プロピルのＢｏｃＮＨＣＨ₂）； ３．１８（ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＯ ）。 ＣＨ₂ＣＯＧｌｙＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（３９） 生成物（３８）と（５）を方法Ｇにより結合する。生成物を準分取ＨＰＬＣに より精製し、フラクションをＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１３．６０分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分 ［６０／４０］、３〜２０分［０／１００］、３５分［０／１００］）。 ＭＨ⁺：８２１。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６にＣＤ₃ＣＯＯＤ ｄ４数滴を滴下，ｄ（ｐｐｍ））：０．８７（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：各脂肪鎖 のＣＨ₃）； １．２８（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅）； １． ４６及び１．５４（２ｍｔ，各２Ｈ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； １．６３（ｍｔ ，４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）２）； １．９１（ｍｔ，４Ｈ：プロピルの ＣＨ₂）； ２．８５−３．１５（ｍｔ，１２Ｈ：ブチルのＮＣＨ₂及びプロピル のＮＣＨ₂）； ３．２４（ｍｔ，４Ｈ：脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．７６（ｍｆ ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ＣＯＮ）； ４．０５（広幅ｓ，２Ｈ：グリシルのＣＯＮＣＨ₂ ＣＯＮ）。 実施例２６： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＣＯＮ［（ＣＨ₂ ）₁₇ＣＨ₃］₂（４１）（ＲＰＲ１２２７８６Ａ）の合成 Ｈ₂）₃ＮＢｏｃ（ＣＨ₂）₃ＣＯ₂Ｈ（４０） 溶液としてのＮａＣＮＢＨ³とコハク酸準アルデヒドの存在下にスペルミンで アルキル還元を実施することにより生成物（４０）を合成する。 ２００ｍｌ容丸底フラスコにスペルミン１．８ｇ、メタノール６０ｍｌ及びＮ ａＣＮＢＨ₃ ０．１３８ｇを仕込む。溶液を激しく磁気撹拌する。等圧フラスコ によりコハク酸準アルデヒド５．５ｍｌ（１５％）とメタノール３０ｍｌの溶液 を１００分間かけて注入する。撹拌を１００分間維持する。アミンをＢｏｃ基に より次のように保護する。媒質にＴＥＡ２．８ｍｌを注いだ後、メタノール３０ ｍｌに可溶化したジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート８．８ｇを加える。撹拌 下に一晩維持する。媒質を減圧濃縮し、生成物を酢酸エチルにとり、ＮａＨＣＯ₃ ３×５０ｍｌで抽出し、水相を集めてエーテル（３×１００ｍｌ）で濯ぐ。Ｋ ＨＳＯ₄を加えて水相のｐＨを３まで下げ、生成物４１の沈殿による濁りを確認 し、混合物を酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出する。有機相をＭｇＳＯ₄で 乾燥し、減圧蒸発させる。生成物を精製せずに使用する。 （ＣＨ₂）₃ＣＯＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（４１） 生成物（４０）とジオクタデシルアミンを方法Ｇにより結合する。生成物を準 分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクションをＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１５．０４分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：７９２。¹ ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，温度３８３Ｋ， ｄ（ｐｐｍ））：０．８５（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）； １． ２２（ｍｔ，６０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅）； １．４８（ｍｔ，４Ｈ ：各脂肪鎖の１ＣＨ₂）； １．７２（ｍｔ，４Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂ ）； １．８８（ｍｔ，２Ｈ：アミノペンタノイルの中心のＣＨ₂）； １．９ ９（ｍｔ，４Ｈ：プロピルのＣＨ₂）； ２．４２（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ：ア ミノペンタノイルのＣＯＣＨ₂）； ２．９６，３．０３及び３．２２（３ｍｔ ，合計１８Ｈ：アミノペンタノイルのＮＣＨ₂，ブチルのＮＣＨ₂，プロピルのＮ ＣＨ₂及び脂肪鎖のＮＣＨ₂）。 実施例２７： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＮＨ（ＣＨ₂）５ ＣＯＮ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（４２）（ＲＰＲ１２８５０６Ａ）の合成 ＢｏｃＧｌｙの代わりにＢｏｃ６−アミノカプロン酸を使用する以外は生成物 （６）と同様に合成する。生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクション をＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１３．９４分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：８７７。¹ ＨＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，（ＣＤ₃）₂ＳＯ ｄ６，ｄ（ｐｐｍ）） ：０．８７（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ：脂肪鎖のＣＨ₃）； １．２８（ｍｔ，６ ０Ｈ：脂肪鎖の中心の（ＣＨ₂）₁₅）； １．４８（ｍｔ，１０Ｈ：各脂肪鎖の １ＣＨ₂及びアミノヘキサノイルの中心の（ＣＨ₂）₃）； １．６５（ｍｔ，４ Ｈ：ブチルの中心の（ＣＨ₂）₂）； １．９５（ｍｔ，４Ｈ：プロピルのＣＨ₂ ）； ２．２７（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ：アミノヘキサノイルのＣＯＣＨ₂）； ２．８５−３．３０（ｍｔ，１８Ｈ：アミノヘキサノイルのＮＣＨ₂，ブチル のＮＣＨ₂， プロピルのＮＣＨ₂及び脂肪鎖のＮＣＨ₂）； ３．７０（広幅ｓ，２Ｈ：ＮＣＨ₂ ＣＯＮ）； ７．９０−９．１０（互換ｍｆ）。 実施例２８： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＧｌｕ（１１−ア ミドウンデカニルヘプタ−Ｏ−アセチルラクトース）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂ （４３）（ＲＰＲ１３０７６５Ａ）の合成 生成物（３０）を方法Ｇにより１１−アミノウンデカニルヘプタ−Ｏ−アセチ ルラクトースと結合する。生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクション を分析ＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１５．９１分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：１６８０。 実施例２９： ＮＨ₂（ＣＨ₂）₃ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨ₂ＣＯＡｓｍ（β−ＮＡ ｃ（Ａｃ）₃）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（４５）（ＲＰＲ１３１２８３Ａ）の合 成 オクタデシルアミン（４４） 本生成物は方法ＦによりＦｍｏｃ−Ａｓｍ−β−Ｇｌｃ−ＮＡｃ（Ａｃ）₃− ＯＨとジオクタデシルアミンを結合することにより合成する。 ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６７（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ，９：１）。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝２５．３１分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＣＨ₂ＣＯＡｓｍ（β−ＮＡｃ（Ａｃ）₃）Ｎ［（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃］₂（４５） 生成物（４５）のＦｍｏｃ基を分離する。 生成物（４５）０．７ｇにＤＭＦ２０ｍｌとジエチルアミン２ｍｌを注ぐ。撹 拌下に６時間維持した後、媒質を減圧濃縮する。得られた生成物を方法Ｇにより 生成物（３）に結合する。生成物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、フラクション を分析ＨＰＬＣにより分析する。 ＨＰＬＣ，Ｒｔ＝１５．３５分（Ｈ₂Ｏ／ＭｅＣＮ：３分[６０／４０]、３〜２ ０分[０／１００]、３５分[０／１００]）。 ＭＨ⁺：１２０７。 実施例３０： 生成物（６）の大規模溶液合成 溶液としてのＮａＣＮＢＨ₃とグリオキシル酸の存在下にスペルミンでアルキ ル還元を実施することにより生成物（６）を合成する。 ２１容丸底フラスコにスペルミン１８．２ｇ、メタノール５００ｍｌ及びＮａ ＣＮＢＨ₃ ２ｇを仕込む。溶液を激しく磁気撹拌する。等圧フラスコによりメ タノール３００ｍｌ中のグリオキシル酸８．４５ｇの溶液を１００分間かけて注 入する。撹拌を一晩維持する。アミンをＢｏｃ基により次のように保護する。媒 質にＴＥＡ１４ｍｌを注いだ後、ＴＨＦ２００ｍｌに可溶化したジ−ｔｅｒｔ− ブチルジカーボネート１００ｇを加える。撹拌下に一晩維持する。媒質を減圧濃 縮し、生成物を酢酸エチル（２５０ｍｌ）にとり、ＫＨＳＯ₄（６×１００ｍｌ ）、次いで飽和ＮａＣｌ溶液（３×１００）で濯ぎ、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、減圧 蒸発させる。ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離剤としてシリカカラムで生 成物を精製する。生成物を含むフラクションをＴＬＣにより同定し、再び集めて 減圧蒸発させ ると、生成物（６）１０ｇが得られる（合計合成収率１７％）。 分析ＨＰＬＣ、質量スペクトル及びＮＭＲの分析値は固相法により得られる生 成物に一致する。 実施例３１：（７）ＲＰＲ１２０５３４Ａ、（６）１２０５３５Ａ及び（９）ＲＰＲ１２０５ ３１Ａによるトランスフェクション効率に及ぼす電荷比（アミン／リン酸）の効 果 ２ｃｍ²の指数増殖期の細胞［ＮＩＨ ３Ｔ３、３ＬＬ又はウサギＳＭＣ］１ ×１０⁵個のサンプルを、５％ＣＯ₂下で電荷比を変えてリポフェクタント／ｐＣ ＭＶ−ＬＵＣ溶液により３７℃で２時間処理し、各サンプルに核酸２μｇを投与 する。最終濃度８％のウシ胎児血清を添加後、ＣＯ₂インキュベーターで４０時 間インキュベーション後にリポーター遺伝子の発現を調べる。 ルシフェラーゼ活性はルシフェリン、補酵素Ａ及びＡＴＰの存在下で１０秒間 の発光［ＲＬＵ＝相対光単位］により定量し、処理細胞２０００個に対する割合 として表す。得られた結果を図１、２及び３に示す。 これらの図から明らかなように、脂質部分とポリアミンの間 の「スペーサー」アームにグリシンが存在すると、低いナノモルカチオン脂質／ μｇＤＮＡ比で良好なトランスフェクション効率が得られる。 実施例３２：（２０）ＲＰＲ１２０５２７Ａ、（１９）１２０５２８Ａ、（１７）ＲＰＲ１２ ０５２６Ａ及び（１６）ＲＰＲ１２０５２５Ａによるトランスフェクション効率 に及ぼす電荷比（アミン／リン酸）の効果 ２ｃｍ²の指数増殖期のＮＩＨ ３Ｔ３細胞１×１０⁵個のサンプルを、５％Ｃ Ｏ₂下で電荷比を変えてリポフェクタント／ｐＣＭＶ−ＬＵＣ溶液により３７℃ で２時間処理し、各サンプルに核酸１μｇを投与する。最終濃度８％のウシ胎児 血清を添加後、ＣＯ２インキュベーターで４０時間インキュベーション後にリポ ーター遺伝子の発現を調べる。 ルシフェラーゼ活性は細胞の溶解後に得られる上清中で１０秒間の発光［ＲＬ Ｕ＝相対光単位］により定量し、タンパク質１ｍｇに対する割合として表す。得 られた結果を図４に示す。「スペーサー」アームにグリシン残基が存在すると有 利であることは本実施例からも明白である。 実施例３３：（６）１２０５３５、（４１）ＲＰＲ１２２７８６及び（４２）ＲＰＲ１２８５ ０６によるトランスフェクション効率に及ぼすスペーサー長の効果 ２ｃｍ²の指数増殖期の細胞［ＮＩＨ ３Ｔ３及びＨｅＬａ］１×１０⁵個のサ ンプルを、血清タンパク質の不在下で３７℃、５％ＣＯ２下の湿潤雰囲気でカチ オン脂質濃度を変えてカチオン脂質／ｐＣＭＶ−Ｌｕｃ混合物により２時間処理 する。次いで細胞増殖培地に最終濃度８％のウシ胎児血清を加え、ＣＯ₂インキ ュベーターで更に４０時間インキュベーション後にトランス遺伝子の発現を測定 する。 スペーサーの構造特性は以下の通りである。 下表Ｉは得られた結果を示し、試験材料の各々で得られた最大効率を表す。 トランスフェクション効率は処理細胞２１０３個当たりのＲＬＵ／１０秒とし て与える。括弧内はナノモル脂質／μｇＤＮＡ比を示す。 実験１及び２では異なるプラスミドを使用し、実験１及び２で夫々細胞１１０ ５個当たりＤＮＡ１μｇ及び０．５μｇの用量とする。 実施例３４：（６）ＲＰＲ１２０５３５によるトランスフェクション効率に及ぼすスペーサー 構造の効果 補助細胞系（３ＬＬ細胞）を導入した以外は上記実施例に記載したと同一の実 験条件下で、Ａｒｇ型、Ｌｙｓ型又はＧｌｕ型の基で「スペーサー」を置換する ことにより修飾したカチオン脂質（６）ＲＰＲ１２０５３５を用いて得られたト ランスフェクション効率を比較した。 種々のスペーサーの構造は以下の通りである。 トランスフェクション効率は処理細胞２１０３個当たりのＲＬＵ／１０秒とし て与える。 実験１及び２では異なるプラスミドを使用し、実験１及び２で夫々細胞１１０ ５個当たりＤＮＡ０．５μｇ及び１μｇの用量とした。結果を分析した処、該当 細胞に応じて、好ましくは置換したアミノ酸鎖の存在は良好なトランスフェクシ ョン効率をもたらすことが判明した。実施例３４：（９）ＲＰＲ１２０５３１Ａによるリポフェクタント／ＤＮＡ混合物中のＤＯＰ Ｅの存在の効果 実施例３１で使用したと同一のプロトコールに従い、トランスフェクション混 合物にＤＮＡを添加する前にカチオン脂質 （９）ＲＰＲ１２０５３１Ａに種々のモル比でＤＯＰＥ（ジオレオイルホスファ チジルエタノールアミン）を加えた。 細胞の溶解後に上清中のルシフェラーゼ活性を定量し、タンパク質１ｍｇに対 する割合を計算する（図５）。 リポフェクタント混合物中にＤＯＰＥが存在すると、（９）ＲＰＲ１２０５３ １Ａの濃度が低い場合にトランスフェクション効率を改善することができる。 実施例３５：（６）ＲＰＲ１２０５３５Ａ、（９）１２０５３１Ａ及び（１０）ＲＰＲ１２１ ６５０Ａによるトランスフェクション効率に及ぼす血清の効果 ２ｃｍ²の指数増殖期の細胞［ＮＩＨ ３Ｔ３又はＨｅＬａ］１×１０⁵個のサ ンプルを、血清の不在下で２時間又は培地中の血清の存在下でリポフェクタント ／ｐＣＭＶ−ＬＵＣ溶液（リポフェクタント３ナノモル／μｇＤＮＡ）により処 理する。本実施例では各サンプルに核酸２μｇを投与する。細胞溶解液の上清中 のルシフェラーゼの発現を調べ、ＲＬＵ／１０秒で表し、タンパク質１ｍｇに対 する割合を計算する。結果を分析した処、血清の存在はトランスフェクションに さほど影響し ないことが判明した。 実施例３６：（２０）ＲＰＲ１２０５２７Ａ、（１９）１２０５２８Ａ、（１７）ＲＰＲ１２ ０５２６Ａ及び（１６）ＲＰＲ１２０５２５ＡによるＤＮＡ／リポフェクタント 混合物中の核酸濃度の効果 実施例３１に記載した条件下で、ナノモルリポフェクタント／μｇＤＮＡ比を 最適化し、ＮＩＨ ３Ｔ３細胞のサンプルにトランスフェクトする（実施例３２ 参照、（２０）ＲＰＲ１２０５２７Ａ及び（１９）ＲＰＲ１２０５２８Ａでは比 ＝６、（１７）ＲＰＲ１２０５２６Ａ及び（１６）ＲＰＲ１２０５２５Ａでは比 ＝３）。各サンプルに加えるＤＮＡの量は０．５〜２μｇとする。結果を図６に 示す。 指数増殖期の細胞１×１０⁵個にプラスミドＤＮＡ１μｇをトランスフェクト するのが好ましい選択であると思われ、実際に、ＤＮＡの使用量が増加すると細 胞に接触するカチオン脂質の濃度が増加し、場合によっては毒性の問題を生じる 。ＤＮＡ濃度が低いと、トランスフェクション効率との比例が得られなくなる。 実施例３７： 本発明によるリポポリアミンのｉｎ ｖｉｖｏトランスフェクション試験 腫瘍移植後７日のマウスをケタミン＋キシラジンで麻酔し、上記のように調製 した本発明によるリポポリアミンを含む溶液を注射する。注射から２日後に腫瘍 組織を取り出し、計量後に細切し、溶解用緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｅｌｌ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ Ｅ１５３ Ａ）５００μｌ中で粉砕する。遠心分離 （２００００ｇで１０分間）後、１０μｌを分取し、試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｌ ｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）５０μｌと混合後に得 られた合計発光をルミノメーターＬｕｍａｔ ＬＢ ９５０１（Ｂｅｒｔｈｏｌ ｄ）で測定し、１０秒間積分することによりルシフェラーゼ活性を評価する。得 られた活性を腫瘍溶解液の合計上清中の推定ＲＬＵ（相対光単位）又は注射ＤＮ Ａμｇ当たりのＲＬＵとして表す。表ＩＩＩは得られた結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 5/02 Ｃ０７Ｋ 5/02 7/02 ＺＮＡ 7/02 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ， ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，Ｌ Ｔ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ， ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ドユベルトレ，カトリーヌ フランス国、エフ−92310・セーブル、リ ユ・デ・ブリユイエール、14

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 一般式Ｉ： ［式中、 Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は各々独立して水素原子又は−（ＣＨ₂）_q−ＮＲＲ’基を表 し、 ｑはＲ１、Ｒ２及びＲ３の各基で独立して１、２、３、４、５及び６であり、 Ｒ及びＲ’は各々独立して水素原子又は−（ＣＨ₂）_q'−ＮＨ₂基を表し、ｑ’は Ｒ及びＲ’の各基で独立して１、２、３、４、５及び６であり、 ｍ、ｎ及びｐは各々独立して０〜６の整数を表し、但しｎが２以上のとき、ｍは 異なる値をとることができ、Ｒ３は一般式Ｉ中で異なる意味をもち、 Ｒ４は一般式ＩＩ： の基を表し、式中、 Ｒ６及びＲ７は各々独立して水素原子又は飽和もしくは不飽和Ｃ１０〜Ｃ２２脂 肪族基を表し、２個の基の少なくとも一方は水素以外のものであり、 ｕは０〜１０から選択される整数であり、但しｕが２以上の整数であるとき、Ｒ ５、Ｘ、Ｙ及びｒは各モチーフ［Ｘ−（ＣＨＲ５）ｒ−Ｙ］中で異なる意味をも つことができ、 Ｘは酸素原子、硫黄原子又はモノアルキルもしくは非モノアルキルアミン基を表 し、 Ｙはカルボニル基又はメチレン基を表し、 Ｒ５は水素原子又は場合により置換された天然アミノ酸側鎖を表し、 ｒは１〜１０の整数を表し、但しｒが１であるとき、Ｒ５は置換又は非置換天然 アミノ酸側鎖を表し、ｒが２以上であるとき、 Ｒ５は水素原子を表す］により表されることを特徴とするＤ、Ｌ又はＤＬ形リポ ポリアミン及びその塩。 ２． 下記亜式： （式中、Ｒ４、Ｒ６及びＲ７は請求項１に定義した意味をもつ）の１個により表 されることを特徴とする請求項１に記載のリポポリアミン。 ３． Ｒ４がＮＲ６Ｒ７基であり、Ｒ６及びＲ７は式ＩＩＩ〜ＸＩＩにおいて（ ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₁ＣＨ₃、（ＣＨ₂）₁₃ＣＨ₃又は（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ₃か ら選択される同一基を表すことを特徴とする請求項２に記載のリポポリアミン。 ４． 細胞外又は細胞内ターゲティング成分に結合していることを特徴とする請 求項１から３のいずれか一項に記載のリポポリアミン。 ５． Ｒ５置換基により表されるアミノ酸側鎖のレベルにターゲティング成分を 含むことを特徴とする請求項４に記載のリポポリアミン。 ６． 前記ターゲティング成分が標的細胞型の表面に存在する細胞レセプターの リガンドであることを特徴とする請求項４又は５に記載のリポポリアミン。 ７． 前記ターゲティング成分が糖類、ペプチド、例えば抗体もしくは抗体フラ グメント、細胞レセプターのリガンドもしくはそのフラグメント、レセプターも しくはレセプターフラグメント、例えば成長因子レセプター、サイトカインレセ プター、細胞レクチンレセプターもしくはインテグリン型の接着タンパク質レセ プターのリガンド、トランスフェリンのレセプター、脂質ＨＤＬもしくはＬＤＬ 及び／又はオリゴヌクレオチドから選択されることを特徴とする請求項４から６ のいずれか一項に記載のリポポリアミン。 ８． 前記ターゲティング成分が核局在シグナル配列により表されることを特徴 とする請求項４又は５に記載のリポポリアミン。 ９． Ｒ５により表されるアミノ酸側鎖のレベルにビオチン、ローダミン、葉酸 又はエピトープＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを含む直鎖もしくは環状ペプチドもしく はプソイドペプチド配列型のマーカー物質を含むことを特徴とする請求項１から ８のいず れか一項に記載のリポポリアミン。 １０． 下記化合物から選択されることを特徴とする請求項１から９のいずれか 一項に記載のリポポリアミン。 H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂CON[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COArgN[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COArg(Z)₂N[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys(ローダミン)N[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys(ビオチニル)N[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₃}₂N(CH₂)₄N{(CH₂)₃NH₂}(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₃}₂N(CH₂)₄N{(CH₂)₃NH₂}(CH₂)₃NHCH₂CON[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₂}₂N(CH₂)₂NHCH₂COGlyN[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₂}₂N(CH₂)₂NHCH₂CON[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)₁₇]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂CON[(CH₂)₁₇]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COArgN[(CH₂)₁₇]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COArg(Z)₂N[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys(ローダミン)N[(CH₂)_17-CH₃]₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys(ビオチニル)N[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₃}₂N(CH₂)₄N{(CH₂)₃NH₂}(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₃}₂N(CH₂)₄N{(CH₂)₃NH₂}(CH₂)₃NHCH₂CON[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₂}₂N(CH₂)₂NHCH₂COGlyN[(CH₂)_17-CH₃]₂ {H₂N(CH₂)₂}₂N(CH₂)₂NHCH₂CON[(CH₂)_17-CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄N[(CH₂)₃NH₂]CH₂COGlyN[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLysN[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys[Cl-Z]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys[CHO]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys[コレステリル]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COLys[アラキドニル]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGluN[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlu[N(CH₃)₂]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlu[O-Bz]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlu[ガラクトサミド]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COG1u[グルコサミド]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlu[マンノサミド]N[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NH(CH₂)₃CON[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂CONH(CH₂)₅CON[(CH₂)₁₇CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)₁₁CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)₁₂CH₃]₂ NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCH₂COGlyN[(CH₂)₁₃CH₃]₂. １１． 請求項１から１０のいずれか一項に記載の少なくとも１種のリポポリ アミンと少なくとも１種の核酸を含むことを特徴とする医薬組成物。 １２． 核酸がデオキシリボ核酸であることを特徴とする請求項１１に記載の 組成物。 １３． 核酸がリボ核酸であることを特徴とする請求項１１に記載の組成物。 １４． 核酸が化学的に修飾されていることを特徴とする請求項１１、１２又 は１３に記載の組成物。 １５． 核酸がアンチセンスであることを特徴とする請求項１１から１４のいず れか一項に記載の組成物。 １６． 核酸が治療遺伝子を含むことを特徴とする請求項１１から１４のいずれ か一項に記載の組成物。 １７． 核酸と、請求項１から６のいずれか一項に記載のリポポリアミンと、リ ポポリアミン／核酸複合体に結合すること及び／又はそのトランスフェクション 能を改善することが可能なアジュバントを含む医薬組成物。 １８． アジュバントが１種以上の中性脂質であることを特徴とする請求項１７ に記載の組成物。 １９． 中性脂質が生理的条件下で両性イオン性又はイオン電荷をもたない合成 又は天然脂質から選択されることを特徴とする請求項１８に記載の組成物。 ２０． 中性脂質が２個の脂肪鎖をもつ脂質であることを特徴とする請求項１９ に記載の組成物。 ２１． 中性脂質がジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ） 、オレオイルパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジス テアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエ タノール アミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン及びその１〜３倍Ｎ− メチル化誘導体、ホスファチジルグリセロール、ジアシルグリセロール、グリコ シルジアシルグリセロール、セレブロシド（例えば特にガラクトセレブロシド） 、スフィンゴ脂質（例えば特にスフィンゴミエリン）及びアシアロガングリオシ ド（例えば特にアシアロＧＭ１及びＧＭ２）から選択されることを特徴とする請 求項１９又は２０に記載の組成物。 ２２． アジュバントが前記核酸の凝縮レベルに作用する化合物であるか又はこ のような化合物を含むことを特徴とする請求項１１から２１のいずれか一項に記 載の医薬組成物。 ２３． 前記化合物が全体又は部分的にヒストン、ヌクレオリン及び／又はプロ タミンから誘導されることを特徴とする請求項２２に記載の医薬組成物。 ２４． 前記化合物が全体又は部分的に連続又は不連続に反復するペプチドモチ ーフ（ＫＴＰＫＫＡＫＫＰ）及び／又は（ＡＴＰＡＫＫＡＡ）から構成され、モ チーフ数が２〜１０であることを特徴とする請求項２２に記載の医薬組成物。 ２５． 核酸１当量当たりアジュバント０．０１〜２０当量（重量／重量）、よ り好ましくは０．５〜５当量を含むことを特徴 とする請求項１１から２４のいずれか一項に記載の組成物。 ２６． 注射用製剤用として医薬的に許容可能なキャリヤーを含むことを特徴と する請求項１１から２５のいずれか一項に記載の組成物。 ２７． 皮膚及び／又は粘膜に施用するために医薬的に許容可能なキャリヤーを 含むことを特徴とする請求項１１から２５のいずれか一項に記載の組成物。 ２８． ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞トランスフェクションのため の請求項１から１０のいずれか一項に記載のリポポリアミンの使用。 ２９． 固体支持体に共有結合したアルキル化剤と対称ポリアミンの二分子反応 により予め得られた少なくとも１個の非対称ポリアミンフラクションに少なくと も１個の脂質フラクションを結合することを特徴とする請求項１から１０のいず れか一項に記載のリポポリアミンの製造方法。 ３０． 脂質フラクションと非対称ポリアミンフラクションの結合が、該非対称 ポリアミンフラクションを固定した固体支持体のレベルで実施され、こうして得 られた前記リポポリアミンを回収することを特徴とする請求項２９に記載の方法 。 ３１． 更に、固体支持体に固定されているか又はされていないリポポリアミン にマーカー物質、糖類又は蛍光プローブを導入することを特徴とする請求項３０ に記載の方法。