JP2002531468A

JP2002531468A - 新規核酸導入剤、前記核酸導入剤を含有する組成物及びその使用

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Publication number: JP2002531468A
Application number: JP2000585434A
Authority: JP
Inventors: エルスコビシ，ジヤン; ホフランド，ハンス; ジアコパン，クリストフ; シエルマン，ダニエル
Original assignee: アバンテイス・フアルマ・エス・アー
Priority date: 1998-12-03
Filing date: 1999-12-02
Publication date: 2002-09-24
Also published as: PL348513A1; NO20012684D0; WO2000032803A3; NO20012684L; KR20010101116A; CA2353576A1; CZ20011909A3; CN1348498A; HUP0200345A3; AU772033B2; WO2000032803A2; IL142704A0; BR9915897A; AU1564600A; HUP0200345A2; EP1137793A2

Abstract

(57)【要約】本発明は新規導入剤、前記導入剤を含有する組成物、及び細胞に核酸をｉｎｖｉｔｒｏ、ｉｎｖｉｖｏ又はｅｘｖｉｖｏ導入するためのその使用に関する。より詳細には、本発明はポリカチオンと少なくとも１個の親水性置換基に化学的に結合した疎水性スペーサーを含む新規核酸導入剤に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は新規導入剤、前記導入剤を含有する組成物、及び細胞に核酸をｉｎ
ｖｉｔｒｏ、ｉｎｖｉｖｏ又はｅｘｖｉｖｏ導入するためのその使用に関す
る。

【０００２】バイオテクノロジーの発展に伴い、核酸を細胞に効率的に導入できることは多
数のバイオテクノロジー用途で基本技術となっている。例えば組換えタンパク質
の製造や、実験室で遺伝子発現の調節研究、遺伝子クローニング又は他の任意の
ＤＮＡ操作を行うには核酸のｉｎｖｉｔｒｏ細胞導入が必要である。また、例
えばワクチンの製造、標識試験又は治療アプローチには核酸のｉｎｖｉｖｏ細
胞導入が必要である。更に、例えばトランスジェニック動物の創製には後で再投
与する目的で生物から抽出した細胞に遺伝子を導入する。

【０００３】現在、遺伝子を細胞に導入する手段として最も普及しているのはウイルスベク
ターの使用である。しかし、ウイルスベクターは全く危険がないとは言えないの
で、合成ベクターの使用に基づく他の数種の方法も提案されている。これらの合
成ベクターはトランスフェクトしようとする核酸を複合体化して圧縮する機能と
、細胞膜及び場合により２つの核膜の通過を助長する機能の２つの主機能をもつ
。

【０００４】例えばポリマーや（細胞レセプターに結合したカチオンタンパク質から構成さ
れる）生化学ベクター等の数種の合成ベクターが開発されているが、リポフェク
タント、より詳細にはカチオン脂質の開発に伴い、非ウイルストランスフェクシ
ョンは特に著しく進歩した。即ち、カチオン脂質は総体的に正電荷をもつため、
総体的に負電荷のＤＮＡと自然反応し、細胞膜と融合することが可能な核脂質複
合体を形成し、こうしてＤＮＡの細胞内遊離を可能にすることが判明した。

【０００５】種々のカチオン脂質が合成されており、第４級アンモニウム基を含む脂質（例
えばＤＯＴＭＡ、ＤＯＴＡＰ、ＤＭＲＩＥ、ＤＬＲＩＥ等）、リポポリアミン（
例えばＤＯＧＳ、ＤＣ−Ｃｈｏｌ又は特許出願ＷＯ９７／１８１８５に開示され
ているリポポリアミン）、第４級アンモニウム基とポリアミンの両方に結合した
脂質（例えばＤＯＳＰＡ）、又は種々の他のカチオン部分、特にアミジニウム基
を含む脂質（例えばＡＤＰＤＥ、ＡＤＯＤＥ又は特許出願ＷＯ９７／３１９３５
の脂質）が挙げられる。実際に、カチオン脂質の構造多様性は構造−活性関係に
も反映する。

【０００６】しかし、これらの合成ベクターにはまだ多くの問題があり、効率を改善する必
要がある。特に、以下に述べる種々の理由により、非カチオン又は低カチオンベ
クターを入手できるならば望ましい。

【０００７】 −核酸と導入剤により形成される複合体は総体正電荷をもつため、網内系に捕
獲され、失われ易い。

【０００８】 −形成される複合体は総体正電荷をもつため、血漿タンパク質がその表面に吸
着する傾向があるのでトランスフェクション能が低下し易い。

【０００９】 −局所注入の場合、高い総体正電荷が存在すると複合体が細胞外マトリックス
に吸着するので、投与部位から核酸複合体が拡散できない。従って、複合体は標
的細胞に到達できず、その結果、複合体の注入量に対する導入効率が低下する。

【００１０】 −最後に、遺伝子の非ウイルストランスフェクション分野の多数の当業者はカ
チオン脂質又はポリマーには炎症作用があると指摘している。

【００１１】他方、今日までに開発されている合成ベクターを低電荷比で安全に処方するこ
とは一般に困難又は不可能であり、低電荷比では多くの場合には導入効率が低い
ことも認められている（Ｐｉｔａｒｄら，ＰＮＡＳＵＳＡ，９４，ｐｐ．１４
４１２−１４４１７，１９９７）。以下の文中で、「電荷比」とはＤＮＡの負電
荷に対する導入剤の正電荷の比を意味する。この比はＤＮＡ１μｇ当たりの導入
剤ｎｍｏｌで表すことが多い。

【００１２】本発明者らは本発明の目的である新規トランスフェクタント剤を開発し、これ
らの問題を解決しようとするものである。実際に、その特殊な構造は核酸との複
合体の形成を可能にするポリカチオンと、非ウイルストランスフェクションに従
来使用されているカチオン脂質又はポリマーに対してこれらのトランスフェクタ
ント剤の見掛けの総体電荷密度を低下することが可能な少なくとも１個の親水性
ヘッドに結合した疎水性アンカーを形成する。少なくとも１個の親水性ヘッドの
存在は核酸と共に形成される複合体のゼータ電位の低下により一種の「電荷バリ
ヤー」を生成する。このため、前記複合体は生物に対して低カチオン性であり、
有益な効果が得られると思われる。更に、本発明のトランスフェクト剤は低電荷
比で核酸と接触させた場合に特に安定であるため、物理化学的観点から特に有利
であることも判明した。

【００１３】従って、本発明の第１の目的はポリカチオンと少なくとも１個の親水性置換基
に化学的に結合した疎水性スペーサーを含む新規核酸導入剤に関する。

【００１４】ポリカチオンは核酸のアニオン電荷との相互作用により核酸と複合体を形成す
ることができる。疎水性スペーサーには二重の機能がある。まず、細胞膜の通過
を可能にし、他方では核酸との間に形成された複合体を生体環境で生存可能にす
る。実際に、疎水性スペーサーは核酸を外部環境から保護できるように物理的制
約を複合体に加える。複合体が生存可能であるために必要な疎水性は通常の探索
法の適用や慣用試行錯誤法により当業者が容易に決定することができる。更に、
親水基の存在は形成される複合体のゼータ電位を低下させるため、前記複合体は
外部環境に対して低カチオン性になると思われる。

【００１５】本発明の意味では、ポリカチオンとは核酸と結合することが可能な直鎖又は分
枝鎖ポリカチオン分子のことである。本発明の意味では、核酸と結合とは例えば
共有結合、静電相互作用、イオン相互作用、水素橋等の任意型の結合を意味する
。ポリカチオンは直鎖又は分枝鎖ポリアミンであり、各アミノ基が１個以上のメ
チレン基により分離されていることが好ましい。場合により、ポリアミンは更に
例えばアミジニウム基、グアニジニウム基、環状グアニジン等の他のカチオン官
能基で置換されていてもよい。特に、例えば特許出願ＷＯ９６／１７８２３、Ｗ
Ｏ９７／１８１８５、ＷＯ９７／３１９３５、ＷＯ９８／５４１３０又はＷＯ９
９／５１５８１や、一般に当業者に公知のカチオン脂質構造に関する任意文献に
記載されているようなポリカチオンが挙げられる。本発明の好適側面によると、
ポリカチオンは一般式（ＩＩ）：

【００１６】

【化７】［式中、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は相互に独立して水素原子又は（ＣＨ_２）_ｑＮＲ’
Ｒ”基を表し、ｑはＲ_１、Ｒ_２及びＲ_３基の間で独立して１〜６の整数であり、
但し、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３の少なくとも１個は水素原子以外のものであり、Ｒ’
及びＲ”は相互に独立して水素原子又は（ＣＨ_２）_ｑＮＨ_２を表し、ｑは上記と
同義であり、ｍは１〜６の整数を表し、ｎ及びｐは相互に独立して０〜６の整数
を表し、但し、ｎが２以上であるとき、ｍは種々の値をとることができ、Ｒ_３は
一般式（ＩＩ）中で種々の意味をもち、ｎが０であるとき、Ｒ_１及びＲ_２置換基
の少なくとも一方は水素原子以外のものである］のポリアミンに相当する。

【００１７】他の利用可能なポリカチオンとして、スペルミン、スペルミジン、カダベリン
、プトレシン、ヘキサメチレンテトラミン（ヘキサミン）、メタクリルアミドプ
ロピルトリメチルアンモニウムクロリド（ＡＭＢＴＡＣ）、３−アクリルアミド
−３−メチルブチルトリメチルアンモニウムクロリド（ＡＭＢＴＡＣ）、ポリビ
ニルアミン、ポリエチレンイミン又はイオネンから選択してもよい（Ｂａｒｔｏ
ｎら，ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖ
ｏｌ．２，ＰｅｒｇａｍｏｎＰｒｅｓｓ編，ｐ．９０；Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅ
ｄｉａｏｆＰｏｌｙｍｅｒＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉ
ｎｇ，第２版，ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ編，Ｖｏｌ．１１，ｐ．
４８９；ＭａｈｌｅｒとＣｏｒｄｅｓ，ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ，ＨａｒｐｅｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＥｄｉｔｉｏｎ，ｐ．１
２４）。

【００１８】疎水性スペーサーは核酸の保護と膜通過を可能にするために十分な疎水性を付
与するものであれば、非常に多様な構造をとることができる。この十分な疎水性
は通常の探索法を適用することにより当業者が容易に決定することができる。本
発明の好適態様によると、疎水性スペーサーは２又は３個の炭化水素直鎖脂肪鎖
から構成される（即ち鎖当たり炭素原子数１０〜２０、好ましくは鎖当たり炭素
原子数１２、１４、１５、１６、１７又は１８であり、各鎖は異なる鎖長でもよ
い）。別の態様によると、疎水性スペーサーは炭素原子数２０〜５０、好ましく
は４０〜５０、より好ましくは４４〜５０の非常に長い炭化水素直鎖脂肪鎖から
構成される。

【００１９】利用可能な親水性置換基は例えばヒドロキシ、アミノ、ポリオール、糖類又は
親水性ペプチドから選択される。ポリオールとは、少なくとも２個のヒドロキシ
官能基を含む直鎖、分枝鎖又は環状の任意炭化水素分子を意味する。例えば、グ
リセロール、エチレングリコール、プロピレングリコール、テトリトール、ペン
チトール、環状ペンチトール（クエルシトール）、ヘキシトール（例えばマンニ
トール、ソルビトール）、ズルシトール、環状ヘキシトール又はイノシトール等
が挙げられる（Ｓｔａｎｅｋら，ＴｈｅＭｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓＡ
ｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ｐｐ．６２１−６５５及びｐｐ．７７８−８５５
）。

【００２０】有利な態様によると、本発明の導入剤は糖である少なくとも１個の親水性置換
基を含む。本発明の意味で「糖」なる用語は１個以上のサッカリドから構成され
る任意分子を意味する。ピラノース及びフラノース等の糖類の例としては、例え
ばグルコース、マンノース、ラムノース、ガラクトース、フルクトース、マルト
ース、ラクトース、サッカロース、スクロース、フコース、セロビオース、アロ
ース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、ソホロース、メリビオース等を挙
げることができる。糖はグルコース、マンノース、ラムノース、ガラクトース、
フルクトース、ラクトース、サッカロース及びセロビオースから選択することが
好ましい。更に、所謂「複合体」即ち相互に共有結合した数個の糖でもよく、各
糖は上記リストから選択することが好ましい。利用可能な多糖類としては、デキ
ストラン、α−アミロース、アミノペクチン、フルクタン、マンナン、キシラン
及びアラビナンを挙げることができる。例えば所定種のレクチンのように、好適
糖類には細胞レセプターとも相互作用できるものもある。

【００２１】より詳細には、本発明の導入剤は一般式（Ｉ）：

【００２２】

【化８】［式中、Ｒはポリカチオンを表し、Ｚは水素原子又はフッ素原子を表し、各Ｚは
相互に独立しており、ｘ及びｙは相互に独立して１０〜２２の整数を表し、Ｘ及
びＹは相互に独立して水素原子、−ＯＡｌｋ基（式中、Ａｌｋは炭素原子数１〜
４の直鎖又は分枝鎖アルキルを表す）、ヒドロキシ基、アミノ基、ポリオール、
糖、親水性もしくは非親水性ペプチド、又はオリゴヌクレオチドを表し、但し、
Ｘ及びＹ基の少なくとも一方はヒドロキシ、アミノ、ポリオール、糖類又は親水
性ペプチドから選択される親水基を表し、あるいは、ｘは０又は１であり、ｙは
２０〜５０の整数であり、Ｘは水素原子又は−ＯＡｌｋ基（式中、Ａｌｋは炭素
原子数１〜４の直鎖又は分枝鎖アルキルを表す）であり、Ｙはヒドロキシ、アミ
ノ、ポリオール、糖類又は親水性ペプチドから選択される親水基である］により
表すことができる。

【００２３】本発明の意味では、一般式（Ｉ）のポリカチオン、ポリオール及び糖類は上記
に定義した通りである。

【００２４】ｘ及びｙ項は一般式（Ｉ）において１０〜２２、場合により２０〜５０の任意
値をとるように定義される。ｘ及びｙは相互に独立して１２〜１８であることが
好ましい。ｘ及びｙは相互に独立して１４、１５、１６、１７又は１８であるこ
とがより好ましい。ｘが０又は１であるとき、ｙは３０〜５０又は４０〜５０が
好ましい。ｙは４４〜５０がより好ましい。

【００２５】本発明の意味では、「オリゴヌクレオチド」とはアデニン、グアニン、シトシ
ン、チミジン又はウラシルから選択され得る塩基の存在により相互に区別される
モノマー単位である１個以上のヌクレオチド、デオキシヌクレオチド、リボヌク
レオチド及び／又はデオキシリボヌクレオチドを含む鎖を意味する［Ｌｅｈｎｉ
ｎｇｅｒＢｉｏｃｈｉｍｉｅ，ＦｌａｍｍａｒｉｏｎＭｅｄｅｃｉｎｅＳ
ｃｉｅｎｃｅｓ，第２版，ｐ．３０５−３２９参照］。オリゴヌクレオチドは塩
基対を形成することができるため、例えばリンカー（結合分子）又はプローブと
して分子生物学で広く使用されている。また、オリゴヌクレオチドは結合形態で
使用してもよく、即ち異なる性質をもつ１個以上の他の分子に結合してもよい。
例えば、化学反応基、蛍光もしくは化学発光基、又は細胞に導入できるように分
子間相互作用を助長することが可能な基とオリゴヌクレオチドの結合を挙げるこ
ができる。このような結合体はＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ
［ＪｏｈｎＧｏｏｄｃｈｉｌｄ，ＣｏｎｊｕｇａｔｅｓｏｆＯｌｉｇｏｎ
ｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＭｏｄｉｆｉｅｄＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔ
ｉｄｅｓ：ａＲｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｉｒＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎ
ｄｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｖｏｌ．１，Ｎｏ．３，１９９０，ｐｐ．１６５−
１８７］に記載されており、例えば複合体の細胞導入を改善し、ヌクレアーゼに
よる分解率を低下させ、該当複合体の安定性を増し、生物におけるオリゴヌクレ
オチドの経路を追跡することができるなど、多数の用途と利点をもつ。例えば、
オリゴヌクレオチドを本発明の導入剤にグラフトすると、前記導入剤に付加的性
質（例えばターゲティング、標識等の性質）を付与することができる。

【００２６】オリゴヌクレオチドは当業者に公知の慣用方法により得ることができ、Ｂｉｏ
ｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＪｏｈｎＧｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｃ
ｏｎｊｕｇａｔｅｓｏｆＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＭｏ
ｄｉｆｉｅｄＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ａＲｅｖｉｅｗｏｆ
ｔｈｅｉｒＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｖｏｌ．
１，Ｎｏ．３，１９９０，ｐｐ．１６５−１８７又はＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，
Ｂｅａｕｃａｇｅら，ＴｈｅＳｙｎｔｅｈｓｉｓｏｆＭｏｄｉｆｉｅｄ
ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｂｙｔｈｅＰｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄ
ｉｔｅｂＡｐｐｒｏａｃｈａｎｄＴｈｅｉｒＡｐｐｌｉｃａｉｏｎ，Ｖ
ｏｌ．４９，Ｎｏ．２８，ｐｐ．６１２３−６１９４，１９９３に記載の方法に
従って修飾オリゴヌクレオチドを合成することもできる。

【００２７】本発明の意味では、「ペプチド」とはペプチド性結合により相互に結合した１
個以上のアミノ酸を含む鎖を意味する［ＬｅｈｎｉｎｇｅｒＢｉｏｃｈｉｍｉ
ｅ，ＦｌａｍｍａｒｉｏｎＭｅｄｅｃｉｎｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，第２版］。
タンパク質の組成に一般に含まれる２０種の「古典的」アミノ酸（アラニン、バ
リン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン
、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン
、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グル
タミン酸）を挙げることができ、又は所謂「稀」アミノ酸（例えば４−ヒドロキ
シプロリン、デスモシン、５−ヒドロキシリジン、Ｎ−メチルリジン、３−メチ
ルヒスチジン、イソデスモシン等）でもよい。更には、種々の細胞又は種々の組
織中に遊離又は結合形態で出現し、一般にα−アミノ酸から誘導されるアミノ酸
（例えばβ−アラニン、γ−アミノ酪酸、ホモシステイン、オルニチン、カナバ
ニン、ジェンコール酸、β−シアノアラニン等）でもよい。このようなペプチド
は例えば所定細胞型のターゲティングが可能である。この点では、例えばＲＧＤ
又はＮＬＳペプチドを挙げることができる。標識性をもつペプチド配列、即ち例
えば分析技術（例えば蛍光分光法、赤外分光法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）等）によ
り認識できるペプチドでもよい。この例としては、例えばインテグリン型接着タ
ンパク質の一次及び／又は二次レセプターの認識エピトープＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）を含む直鎖又は環状ペプチド又
はプソイドペプチド配列を挙げることができる。本発明のペプチドは更に１個以
上の官能基のレベル、例えばαカルボキシル、αアミン基及び／又はアミノ酸の
各々の側鎖の官能基のレベルを置換されていてもよい。例えば炭素原子数１〜２
４の飽和又は不飽和の直鎖、分枝鎖又は環状脂肪族基（例えばコレステリル、ア
ラキドニル又はレチノイル基）、あるいはモノ又はポリ芳香族基（例えば置換さ
れていてもいなくてもよいベンジルオキシカルボニル、ベンジルエステル又はロ
ーダミニル誘導体）による置換を挙げることができる。このような置換は例えば
標識の目的で前記ペプチドの化学的及び場合により生化学的性質を改変する場合
に有利である。

【００２８】上記ペプチドを親水性置換基として使用する場合には、親水性ペプチド即ち親
水性アミノ酸のみから構成されるペプチド又は一部が親水性アミノ酸から構成さ
れ、組成が総体的に親水性であるペプチドから選択する。

【００２９】本発明の好適態様によると、Ｚ基は全て水素原子を表す。

【００３０】本発明の特に有利な側面によると、導入剤は一般式（ＩＩＩ）：

【００３１】

【化９】（式中、Ｒはポリカチオンを表し、ｘ及びｙは相互に独立して１０〜２２の整数
を表し、Ｘ及びＹは相互に独立して水素原子又は糖を表し、但し、Ｘ及びＹ基の
少なくとも一方は糖を表し、あるいは、ｘは０又は１であり、ｙは２０〜５０の
整数であり、Ｘは水素原子であり、Ｙは糖である）により表される。

【００３２】本発明の意味では、一般式（ＩＩＩ）におけるポリカチオン、糖類並びにｘ及
びｙは一般式（Ｉ）について上記に定義した通りである。

【００３３】特に好ましい導入剤は一般式（ＩＩＩ）中、ｘ及びｙが相互に独立して１０〜
２２の整数を表し、Ｘ及びＹの一方が水素原子を表し、他方が糖を表す。別の有
利な態様によると、本発明の導入剤は一般式（ＩＩＩ）中、ｘが０であり、ｙが
４０〜５０の整数であり、Ｘが水素原子を表し、Ｙが糖である。

【００３４】当然のことながら、本発明は存在する場合には一般式（Ｉ）の生成物の異性体
とその混合物又はその塩にも関する。

【００３５】特に、本発明の化合物は医薬的に許容可能な非毒性塩の形態をとることができ
る。これらの非毒性塩は鉱酸（塩酸、硫酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸）、有機
酸（酢酸、プロピオン酸、コハク酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息
香酸、フマル酸、メタンスルホン酸又は蓚酸）、無機塩基（水酸化ナトリウム、
水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム）又は有機塩基（トリエチ
ルアミン等の第３級アミン、ピペリジン、ベンジルアミン）と共に形成される塩
を含む。

【００３６】本発明によると、一般式（Ｉ）の生成物は下記段階を実施することにより製造
される。

【００３７】１）まず、対応するラクトンの開環によりヒドロキシ官能基とエステル官能基
を含む炭素原子数ｘ（ｘは上記と同義である）のアルキル鎖を製造する。反応は
一般にアルコール中、塩基性ｐＨで−１０℃〜周囲温度の温度で実施される。例
えば、アルコールはメタノール又はエタノールとすることができる。

【００３８】２）次に、上記段階で得られた２官能性アルキル鎖にＸ基を固定する。Ｘが糖
を表す場合には、塩素系溶媒（例えばジクロロメタン又はクロロホルム）中でル
イス酸の存在下に−５℃〜１０℃の温度で縮合を実施する。ルイス酸は例えば塩
化錫、塩化鉄、ｐ−トルエンスルホン酸（ｔｓＯＨ）、トリメチルシリルトリフ
ルオロメタンスルホン酸（ＴＭＳｔｆ）、三フッ化ホウ素エーテラート等から選
択することができる［ＫａｚｕｎｏｂｕＴｏｓｈｉｍａら，ＲｅｃｅｎｔＰ
ｒｏｇｒｅｓｓｉｎＯ−ｇｌｃｏｓｉｌａｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓａｎ
ｄｉｔｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔ
ｓＳｙｎｔｅｈｓｉｓ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９３，Ｖｏｌ．９３，ｐｐ．
１５０３−１５３１］。

【００３９】Ｘが親水性又は非親水性ペプチド基を表す場合には、慣用方法（Ｂｏｄａｎｓ
ｋｉＭ．，ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｓｏｆＰｅ
ｐｔｉｄｅｓＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅ−Ｖｅｒｌａｇ編）に従う
か、又は当業者に公知の任意類似方法によりペプチド結合を実施する。特に、反
応は一般に非求核性塩基の存在下に適当な非プロトン溶媒中で０〜１００℃の温
度でｐＨを９〜１１に調節して実施される。例えば、クロロホルム、ジメチルホ
ルムアミド、メチルピロリドン、アセトニトリル、ジクロロメタン、トルエン又
はベンゼンを溶媒として使用することができる。使用する非求核性塩基は第３級
アミン、炭酸カルシウム又は重炭酸ナトリウムが好ましい。使用する塩基は例え
ばトリエチルアミン（ＴＥＡ）やＮ−エチルジイソプロピルアミン等の第３級ア
ミンがより好ましい。ペプチド結合は０〜５０℃、好ましくは１０〜３０℃で実
施すると有利である。

【００４０】Ｘがヒドロキシ基を表すことが所望される場合には、この段階は実施しない。

【００４１】Ｘがアミノ基を表す場合には、反応はアルコールからアミンを得るための当業
者に公知の慣用方法に従って求核置換により実施される。

【００４２】Ｘが−ＯＡｌｋ基を表す場合には、当業者に公知の慣用方法又は類似方法に従
ってアルコール官能基のアルキル化により実施される。例えば、一般式Ａｌｋ−
Ｎ_２のジアゾ化合物を場合によりＨＢＦ_４等の触媒又はシリカゲルの存在下に反
応させればよい。ウィルアムソン反応条件下で操作し、塩基性媒体中でアルコー
ル官能基をもつ鎖に一般式Ａｌｋ−Ｈａｌ（式中、Ｈａｌは塩素、臭素又はヨウ
素等のハロゲン原子を表す）の化合物を反応させてもよい。

【００４３】Ｘがポリオールを表すことが所望される場合にも、同一のウィルアムソン型反
応を実施すればよい。

【００４４】更に、Ｘがオリゴヌクレオチドを表す場合には、公知慣用方法に従って２官能
鎖に結合してオリゴヌクレオチドを共有グラフトする。例えば、適当なリンカー
（結合分子）を介して前記オリゴヌクレオチドをグラフトすることができる。

【００４５】３）第３段階として、２官能鎖に存在するエステル官能基を公知方法により酸
に応じて加水分解する。例えば、塩基性媒体で高沸点アルコール中、５０℃〜反
応混合物の還流温度の温度で操作すればよい。

【００４６】４）次に、前段階で得られた化合物に一般式（ＩＶ）：Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｙ（ＩＶ）（式中、ｙ及びＹは上記と同義である）の置換又は非置換アルキルアミン鎖を慣
用ペプチド結合方法（ＢｏｄａｎｓｋｉＭ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄ
ＰｒａｃｔｉｃｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅｓＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒ
ｉｎｇｅ−Ｖｅｒｌａｇ編）又は当業者に公知の任意類似方法により結合する。

【００４７】特に、反応は一般に適当な非プロトン性溶媒中、非求核性塩基の存在下に０〜
１００℃の温度でｐＨを９〜１１に調節して実施される。例えば、クロロホルム
、ジメチルホルムアミド、メチルピロリドン、アセトニトリル、ジクロロメタン
、トルエン又はベンゼンを溶媒として使用することができる。使用する非求核性
塩基は第３級アミン、炭酸カルシウム又は重炭酸ナトリウムが好ましい。使用す
る塩基は例えばトリエチルアミン（ＴＥＡ）やＮ−エチルジイソプロピルアミン
等の第３級アミンがより好ましい。ペプチド結合は０〜５０℃、好ましくは１０
〜３０℃で実施すると有利である。

【００４８】一般式（ＩＶ）の基は市販品でもよいし、上記２）と同様の方法により対応す
る非置換アルキルアミン上でＹを縮合することによっても得られる。

【００４９】５）前段階で得られたアミドを次にアミンに還元する。このためには、当業者
に公知の慣用方法に従って操作する。例えば、無水テトラヒドロフラン等の無水
有機溶媒中で水素化アルミニウムリチウム（ＬｉＡｌＨ_４）の作用により操作す
る。例えばボラン、ジメチルスルフィド中ボラン（ＢＨ_３−ＳＭｅ_２）、ホウ水
素化ナトリウム／四塩化チタン（ＮａＢＨ_４，ＴｉＣｌ_４）、亜鉛担持塩化酸化
リン（ＰＯＣｌ_３／Ｚｎ）、ラネーニッケル担持五硫化リン（Ｐ_４Ｓ_１０）等の
他の還元剤も利用できる［ＲｉｃｈａｒｄＣ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈ
ｅｎｓｉｖｅＯｒｇａｎｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨＰ
ｕｂｌｉｓｈｅｒｓＩｎｃ．，１９８９］。触媒水素化により操作してもよい
。無水テトラヒドロフラン中、混合物の還流温度で水素化アルミニウムリチウム
ＬｉＡｌＨ_４の作用により還元を実施すると有利である。

【００５０】こうして一般式（Ｖ）：

【００５１】

【化１０】（式中、Ｘ、Ｙ、ｘ及びｙは上記と同義である）の化合物が得られる。

【００５２】６）最後に、最終段階で上記に定義したポリカチオンＲに対応する酸誘導体を
慣用ペプチド結合方法（ＢｏｄａｎｓｋｉＭ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎ
ｄＰｒａｃｔｉｃｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅｓＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐ
ｒｉｎｇｅ−Ｖｅｒｌａｇ編）に従うか、又は当業者に公知の任意類似方法によ
り、前段階で得られた一般式（ＩＶ）の化合物に結合する。

【００５３】特に、反応は一般に非求核性塩基の存在下に適当な非プロトン溶媒中で０〜１
００℃の温度でｐＨを９〜１１に調節して実施される。例えば、クロロホルム、
ジメチルホルムアミド、メチルピロリドン、アセトニトリル、ジクロロメタン、
トルエン又はベンゼンを溶媒として使用することができる。使用する非求核性塩
基は第３級アミン、炭酸カルシウム又は重炭酸ナトリウムが好ましい。使用する
塩基は例えばトリエチルアミン（ＴＥＡ）やＮ−エチルジイソプロピルアミン等
の第３級アミンがより好ましい。ペプチド結合は０〜５０℃、好ましくは１０〜
３０℃で実施すると有利である。

【００５４】ポリカチオンに対応する酸誘導体は市販されている。

【００５５】別の態様によると、本発明のトランスフェクタント剤は次のように操作して製
造することができる。

【００５６】１）まず、対応するラクトンの開環によりヒドロキシ官能基とエステル官能基
を含む炭素原子数ｘ（ｘは上記と同義である）のアルキル鎖を製造する。反応は
一般にアルコール中、塩基性ｐＨで−１０℃〜周囲温度の温度で実施される。例
えば、アルコールはメタノール又はエタノールとすることができる。

【００５７】２）次に、この２官能アルキル鎖に一般式（ＩＶ）：Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｙ（ＩＶ）（式中、ｙ及びＹは一般式（Ｉ）について上記に定義した通りである）の置換又
は非置換アルキルアミン鎖を結合する。反応は減圧下又は非減圧下に各生成物の
融点よりも高い温度で実施される。アルコール溶媒の存在下に還流温度で反応を
実施してもよい。例えば、溶媒はメタノール又はエタノールとすることができる
。例えば４５℃〜６０℃の温度で操作する。

【００５８】溶媒としてメタノール等のアルコールの存在下に混合物の還流温度で反応を実
施してもよい。別法として、一般式（ＩＶ）の化合物をラクトンと直接結合して
もよい（この場合には第１段階のラクトン開環は不要である）。

【００５９】一般式（ＩＶ）の基は市販品でもよいし、上記と同様の方法により対応する非
置換アルキルアミン上でＹを縮合することによっても得られる。

【００６０】３）得られた２官能性２鎖アミドを次にアミンに還元する。このためには、慣
用方法に従って操作する。例えば、無水テトラヒドロフラン等の無水有機溶媒中
で水素化アルミニウムリチウム（ＬｉＡｌＨ_４）の作用により操作する。例えば
ボラン、ジメチルスルフィド−水素化ホウ素（ＢＨ_３−ＳＭｅ_２）、ホウ水素化
ナトリウム／四塩化チタン（ＮａＢＨ_４，ＴｉＣｌ_４）、亜鉛担持塩化酸化リン
（ＰＯＣｌ_３／Ｚｎ）、ラネーニッケル担持五硫化リン（Ｐ_４Ｓ_１０）等の他の
還元剤も利用できる［ＲｉｃｈａｒｄＣ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎ
ｓｉｖｅＯｒｇａｎｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨＰｕｂ
ｌｉｓｈｅｒｓＩｎｃ．，１９８９］。触媒水素化により操作してもよい。無
水テトラヒドロフラン中、混合物の還流温度で水素化アルミニウムリチウムＬｉ
ＡｌＨ_４の作用により還元を実施すると有利である。

【００６１】こうして一般式（ＶＩ）：

【００６２】

【化１１】（式中、Ｙ、ｘ及びｙは上記と同義である）の化合物が得られる。

【００６３】４）次に、前段階で得られた一般式（ＶＩ）のアミンにＸ基を縮合する。縮合
は第１合成経路について上述したと同様の方法により実施される。

【００６４】５）最後に、最終段階で上記に定義したポリカチオンＲに対応する酸誘導体を
慣用ペプチド結合方法（ＢｏｄａｎｓｋｉＭ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎ
ｄＰｒａｃｔｉｃｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅｓＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐ
ｒｉｎｇｅ−Ｖｅｒｌａｇ編）に従うか、又は当業者に公知の任意類似方法によ
り、前段階で得られた一般式（ＶＩ）の化合物に結合する。

【００６５】特に、反応は一般に非求核性塩基の存在下に適当な非プロトン溶媒中で０〜１
００℃の温度でｐＨを９〜１１に調節して実施される。例えば、クロロホルム、
ジメチルホルムアミド、メチルピロリドン、アセトニトリル、ジクロロメタン、
トルエン又はベンゼンを溶媒として使用することができる。使用する非求核性塩
基は第３級アミン、炭酸カルシウム又は重炭酸ナトリウムが好ましい。使用する
塩基は例えばトリエチルアミン（ＴＥＡ）やＮ−エチルジイソプロピルアミン等
の第３級アミンがより好ましい。ペプチド結合は０〜５０℃、好ましくは１０〜
３０℃で実施すると有利である。

【００６６】ポリカチオンに対応する酸誘導体は市販されている。

【００６７】当然のことながら、Ｘ、Ｙ及び／又はポリカチオンの置換基が反応を妨げる恐
れがある場合には、分子の残余を変化させずに付加及び脱離することが可能な適
合可能な基で予め保護することが好ましい。このためには、当業者に公知の慣用
方法、特に、Ｔ．Ｗ．ＧＲＥＥＮＥ，ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉ
ｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓ
ｃｉｅｎｃｅ、ＭｃＯＭＩＥ，ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯ
ｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ（１９７３）、
又はＰｈｉｌｉｐＪＫｏｃｉｅｎｓｋｉ，ＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇＧｒｏｕ
ｐｓＴｈｉｅｍｅに記載されている方法に従って操作する。

【００６８】更に、場合によっては製造方法の各段階後に得られた化合物の分離精製段階を
当業者に公知の方法に従って実施してもよい。

【００６９】本発明の有利な核酸導入剤の例としては、下記化合物を挙げることができる。

【００７０】

【化１２】

【００７１】本発明の別の目的は上記核酸導入剤と、核酸を含む組成物に関する。各成分の
夫々の量は使用する導入剤、核酸及び所期用途（特にトランスフェクトする細胞
型）に応じて当業者が容易に調節することができる。

【００７２】本発明の意味では「核酸」とはデオキシリボ核酸とリボ核酸を意味する。核酸
は天然配列でも人工配列でもよく、特にゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、相補的ＤＮ
Ａ（ｃＤＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（
ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、ハイブリッド配列、合成又は半合
成配列、修飾又は非修飾オリゴヌクレオチドが挙げられる。これらの核酸はヒト
、動物、植物、細菌、ウイルス等の起源とすることができる。これらの核酸は当
業者に公知の任意方法により得られ、特にバンクスクリーニング、化学合成、又
はバンクスクリーニングにより得られた配列の化学もしくは酵素修飾を含む混合
法により得られる。核酸は化学的に修飾することができる。

【００７３】特にデオキシリボ核酸については、１本鎖でも２本鎖でもよいし、短いオリゴ
ヌクレオチドでも長い配列でもよい。特に、核酸はプラスミド、ベクター、エピ
ソーム、発現カセット等から構成すると有利である。これらのデオキシリボ核酸
は標的細胞で機能的又は非機能的な複製起点と、１個以上のマーカー遺伝子と、
転写又は複製の調節配列と、着目治療遺伝子と、修飾又は非修飾アンチセンス配
列と、他の細胞成分との結合領域等を含むことができる。

【００７４】核酸は調節配列（例えば標的細胞で活性な１種以上のプロモーターと転写ター
ミネーター）の制御下におかれた１種以上の着目治療遺伝子を含むことが好まし
い。

【００７５】本発明の意味では、着目治療遺伝子とは特に治療効果をもつタンパク性物質を
コードする任意遺伝子を意味する。このようにコードされるタンパク性物質は特
にタンパク質又はペプチドであり得る。このタンパク性物質は標的細胞に対して
同種の外来又は内因物質、即ち標的細胞が疾病をもたないときに標的細胞で正常
に発現される物質とすることができる。この場合には、タンパク質が発現される
と、例えば細胞で不十分な発現や修飾により不活性になったり、活性が低下して
いるタンパク質の発現を補ったり、このようなタンパク質を過剰に発現すること
ができる。着目治療遺伝子は安定性の増加、活性の変化等を示す細胞タンパク質
の突然変異体をコードするものでもよい。タンパク性物質は標的細胞に対して異
種でもよい。この場合には、発現されるタンパク質は例えば細胞に欠失している
活性を補充又は付加し、疾病に対抗できるようにしたり、免疫応答を刺激したり
することができる。

【００７６】本発明の意味での治療物質としては、酵素、血液誘導体、ホルモン、リンホカ
イン（インターロイキン、インターフェロン、ＴＮＦ等（ＦＲ９２／０３１２０
））、増殖因子、神経伝達物質又はその前駆物質もしくは合成酵素、栄養因子（
ＢＤＮＦ、ＣＮＴＦ、ＮＧＦ、ＩＧＦ、ＧＭＦ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＮＴ３、
ＮＴ５、ＨＡＲＰ／プレイオトロフィン等）、アポリポタンパク質（ＡｐｏＡＩ
、ＡｐｏＡＩＶ、ＡｐｏＥ等、ＦＲ９３／０５１２５）、ジストロフィン又はミ
ニジストロフィン（ＦＲ９１／１１９４７））、膵臓線維症に関連するタンパク
質ＣＦＴＲ、腫瘍抑制遺伝子（ｐ５３、Ｒｂ、Ｒａｐ１Ａ、ＤＣＣ、ｋ−ｒｅｖ
等、ＦＲ９３／０４７４５）、凝血に関与する因子（ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ因
子）をコードする遺伝子、ＤＮＡの修復に関与する遺伝子、自殺遺伝子（チミジ
ンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ）、ヘモグロビン又は他のタンパク質輸送体
の遺伝子、代謝酵素、同化酵素等を特に挙げることができる。

【００７７】着目治療核酸は更に、標的細胞で発現されると遺伝子発現又は細胞ｍＲＮＡ転
写を調節することが可能なアンチセンス遺伝子又は配列でもよい。このような配
列は、例えば特許ＥＰ１４０３０８に記載の技術に従って、標的細胞で細胞ｍＲ
ＮＡの相補的ＲＮＡに転写され、こうしてそのタンパク質翻訳を阻止することが
できる。治療遺伝子は更に、標的ＲＮＡを選択的に破壊することが可能なリボソ
ームをコードする配列も含む（ＥＰ３２１２０１）。

【００７８】上述のように、核酸は更に、ヒト又は動物で免疫応答を発生することが可能な
抗原ペプチドをコードする１個以上の遺伝子を含んでいてもよい。従って、この
特定態様によると、本発明はヒト又は動物で特に微生物、ウイルス又は癌に対す
るワクチン又は免疫治療を実現することができる。特に、エプスタイン・バール
ウイルス、ＨＩＶウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＥＰ１８５５７３）、偽狂犬病
ウイルス、シンシチウム形成ウイルス、他のウイルスの特異的抗原ペプチド又は
腫瘍特異的抗原ペプチド（ＥＰ２５９２１２）を挙げることができる。

【００７９】好ましくは、核酸は更に所望細胞又は臓器において着目治療遺伝子及び／又は
抗原ペプチドをコードする遺伝子の発現を可能にする配列も含む。このような配
列としては、これらの配列が感染細胞で機能できるときに該当遺伝子の発現に天
然に関与する配列が挙げられる。異なる起源の配列でもよい（他のタンパク質の
発現に関与する配列でもよいし、あるいは合成配列でもよい）。特に、真核又は
ウイルス遺伝子のプロモーター配列が挙げられる。例えば、感染させたい細胞の
ゲノムに由来するプロモーター配列が挙げられる。また、ウイルスのゲノムに由
来するプロモーター配列でもよい。この点では、例えばＥ１Ａ、ＭＬＰ、ＣＭＶ
、ＲＳＶ等の遺伝子のプロモーターを挙げることができる。更に、活性化配列や
調節配列等を付加してこれらの発現配列を修飾してもよい。誘導又は抑制プロモ
ーターでもよい。

【００８０】更に、核酸は特に着目治療遺伝子の上流に合成治療物質を標的細胞の分泌経路
に導くシグナル配列も含むことができる。このシグナル配列は着目治療物質の天
然シグナル配列でもよいし、他の任意の機能的シグナル配列又は人工シグナル配
列でもよい。核酸は更に合成治療物質を特定細胞区画に導くシグナル配列も含む
ことができる。

【００８１】本発明の組成物は更に、導入剤／核酸複合体に結合してトランスフェクト能を
改善することが可能な１種以上のアジュバントを含むことができる。従って、別
の態様において本発明は核酸と、上記核酸導入剤と、導入剤／核酸複合体に結合
してトランスフェクト能を改善することが可能な少なくとも１種のアジュバント
を含む組成物に関する。この種のアジュバント（例えば脂質、ペプチド又はタン
パク質）が存在すると、導入能を増加できるという利点がある。この点で、本発
明の組成物はアジュバントとして１種以上の中性脂質を含むことができる。

【００８２】より好ましくは、本発明の範囲内で使用する中性脂質は２個の脂肪鎖をもつ脂
質である。生理的条件下で両性イオン性又はイオン電荷をもたない天然又は合成
脂質を使用すると特に有利である。脂質は特にジオレオイルホスファチジルエタ
ノールアミン（ＤＯＰＥ）、オレオイルパルミトイルホスファチジルエタノール
アミン（ＰＯＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジパル
ミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタ
ノールアミン及びその１〜３倍Ｎ−メチル化誘導体、ホスファチジルグリセロー
ル、ジアシルグリセロール、グリコシルジアシルグリセロール、セレブロシド（
例えば特にガラクトセレブロシド）、スフィンゴ脂質（例えば特にスフィンゴミ
エリン）又はアシアロガングリオシド（例えば特にアシアロＧＭ１及びＧＭ２）
から選択することができる。

【００８３】これらの種々の脂質は当業者に周知の慣用技術により合成するか又は臓器（例
えば脳）もしく胎児から抽出することにより得られる。特に、天然脂質の抽出は
有機溶剤を用いて実施することができる（Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ参照）。

【００８４】ごく最近になって本発明者らは特許出願ＷＯ９６／２５５０８に記載したよう
に、前記核酸の圧縮レベルに直接又は間接的に作用する化合物をアジュバントと
して使用すると特に有利であることも立証した。本発明の組成物中にこのような
化合物が存在すると、トランスフェクタント化合物の量を低減でき、トランスフ
ェクタント活性を損なわずに毒物学的面で有益な効果が得られる。核酸の圧縮レ
ベルに作用する化合物とは、核酸を直接又は間接的に圧縮する化合物として定義
される。より詳細には、この化合物はトランスフェクトしようとする核酸のレベ
ルに直接作用するか、又はこの核酸の圧縮に直接関与する付加化合物のレベルに
作用することができる。核酸のレベルに直接作用するものが好ましい。特に、予
備圧縮剤は任意ポリカチオン、例えばポリリジンとすることができる。好適態様
によると、核酸の圧縮レベルに作用するこの物質は全体又は一部がプロタミン、
ヒストン又はヌクレオリン及び／又はそれらの誘導体の１種から誘導される。こ
のような物質は全体又は一部をペプチドモチーフ（ＫＴＰＫＫＡＫＫＰ）及び／
又は（ＡＴＰＡＫＫＡＡ）から構成してもよく、モチーフ数は２〜１０とするこ
とができる。本発明による化合物の構造において、これらのモチーフは連続又は
不連続的に反復し得る。従って、これらのモチーフは生化学的結合（例えば１個
以上のアミノ酸により）又は化学的結合により分離することができる。

【００８５】好ましくは、本発明の組成物は核酸１当量当たりアジュバント０．０１〜２０
、より好ましくは０．５〜５モル／モル当量を含む。

【００８６】特に有利な実施態様では、本発明の組成物は更に核酸の導入を誘導することが
可能なターゲティングエレメントを含む。このターゲティングエレメントは所望
の所定細胞型又は所定組織（腫瘍細胞、肝細胞、造血細胞等）へのＤＮＡの導入
を誘導することが可能な細胞外ターゲティングエレメントとすることができる。
所定の優先細胞区画（ミトコンドリア、核等）への核酸の導入を誘導することが
可能な細胞内ターゲティングエレメントでもよい。ターゲティングエレメントは
上述のように本発明の核酸導入剤又は核酸に結合することができる。ターゲティ
ングエレメントを式（Ｉ）の核酸導入剤に結合する場合には、置換基Ｘ又はＹの
一方を構成することが好ましい。

【００８７】本発明の範囲で利用可能なターゲティングエレメントとしては、糖、ペプチド
、タンパク質、オリゴヌクレオチド、脂質、神経伝達物質、ホルモン、ビタミン
又はその誘導体が挙げられる。糖、ペプチド又はタンパク質（例えば抗体又は抗
体フラグメント、細胞レセプター又はそのフラグメントのリガンド、レセプター
又はレセプターフラグメント等）が好ましい。特に、増殖因子レセプター、サイ
トカインレセプター、細胞レクチン型レセプター又は接着タンパク質レセプター
（例えばインテグリン）に対して親和性をもつＲＧＤ配列をもつリガンドが挙げ
られる。トランスフェリン、ＨＤＬ及びＬＤＬのレセプター又は葉酸の輸送体も
挙げることができる。ターゲティングエレメントはアシアログリコプロテイン又
はシアリド（例えばシアリルルイスＸ）に対するレセプター等のレクチンをター
ゲティングすることが可能な糖や、Ｆａｂ抗体フラグメント又は１本鎖抗体（Ｓ
ｃＦｖ）でもよい。

【００８８】ターゲティングエレメントと核脂質複合体の結合は、当業者に公知の任意方法
により実施することができ、例えば疎水性部分又は本発明の導入剤の核酸と相互
作用する部分又は本発明の導入剤もしくは核酸と相互作用する基と結合すること
により実施することができる。該当相互作用は好適態様によるとイオン性又は共
有性である。

【００８９】本発明は更にポリヌクレオチド（より一般にはポリアニオン）を細胞にｉｎ
ｖｉｔｒｏ、ｉｎｖｉｖｏ又はｅｘｖｉｖｏ導入するための上記化合物の使
用にも関する。より詳細には、本発明は特にタンパク性又は核物質の欠失に起因
する疾病の治療用医薬の製造のための上記化合物の使用に関する。前記医薬に含
まれるポリヌクレオチドは前記タンパク性もしくは核物質をコードするか、又は
前記核物質を構成し、前記疾病をｉｎｖｉｖｏまたはｅｘｖｉｖｏ治療す
ることができる。

【００９０】例えば遺伝子調節研究、疾病動物モデルの作製又は治療にｉｎｖｉｖｏ使用
するには、本発明の組成物を局所、皮膚、経口、直腸、膣、非経口、鼻腔内、静
脈内、筋肉内、皮下、眼内、経皮、気管内、腹腔内等の経路で投与するように処
方することができる。本発明の組成物は特に所望臓器のレベルに直接注射するた
めの注射用製剤又は局所投与（皮膚及び／又は粘膜）用として医薬的に許容可能
なキャリヤーを含有することが好ましい。このようなキャリヤーとしては、特に
等張滅菌溶液又は場合に応じて滅菌水もしくは生理的血清を加えると注射可能な
溶質を構成することが可能な乾燥組成物、特に凍結乾燥組成物が挙げられる。注
射に使用する核酸の用量及び投与回数は種々のパラメーター、特に使用する投与
方法、該当疾病、発現させようとする遺伝子、又は所望治療期間に応じて選択で
きる。特に投与方法については、組織（例えば腫瘍レベル）又は循環経路への直
接注射や、培養細胞処理後の注射又は移植によるｉｎｖｉｖｏ再移植が挙げら
れる。本発明の範囲に該当する組織は例えば筋肉、皮膚、脳、肺、肝臓、脾臓、
骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、膀胱、胃、腸、精巣
、卵巣、直腸、神経系、眼、腺、結合組織等である。

【００９１】本発明の別の目的は、（１）核酸を上記導入剤と接触させて複合体を形成する段階と、（２）（１）で形成された複合体とヒト又は動物の細胞を接触させる段階を含む
ヒト又は動物の治療方法に関する。

【００９２】本発明は更に、（１）核酸を上記導入剤と接触させて複合体を形成する段階と、（２）（１）で形成された複合体と細胞を接触させる段階を含む核酸の細胞導入
方法にも関する。

【００９３】細胞と複合体の接触は、細胞をこの複合体と共にインキュベートする（ｉｎ
ｖｉｔｒｏ又はｅｘｖｉｖｏ使用）か、複合体を生物に注入する（ｉｎｖｉ
ｖｏ使用）ことにより実施することができる。インキュベーションは例えば細胞
１０^６個当たり核酸０．０１〜１０００μｇの存在下に実施すると好ましい。ｉ
ｎｖｉｖｏ投与では、例えば０．０１〜１０ｍｇの核酸用量を使用することが
できる。

【００９４】本発明の組成物が更に上述のような１種以上のアジュバントを含む場合には、
アジュバントを本発明の導入剤及び／又は核酸に予め混合しておく。

【００９５】従って、本発明はｉｎｖｉｖｏ核酸導入、特に疾病治療に特に有利な方法を
提供するものであり、タンパク質をコードする核酸又は前記疾病を治療すること
が可能な核酸に転写可能な核酸を上記条件下で一般式（Ｉ）の化合物に結合して
ｉｎｖｉｖｏ又はｉｎｖｉｔｒｏ投与することからなる。

【００９６】本発明の核酸導入剤は初代細胞又は樹立系に核酸を導入するのに特に有用であ
る。このような細胞としては、分化又は多能性（前駆物質）形態の繊維芽細胞、
筋細胞、神経細胞（ニューロン、星状細胞、グリア細胞）、肝細胞、造血系細胞
（リンパ球、ＣＤ３４、樹状細胞等）、上皮細胞等が挙げられる。

【００９７】上記構成に加え、本発明は以下の実施例及び図面に示す他の特徴及び利点も含
むが、以下の実施例及び図面は例示に過ぎず、発明の範囲を制限するものではな
い。特に、本発明者らは一般式（Ｉ）の導入剤を製造するために使用可能な種々
の操作プロトコールと反応中間体を非限定的に提案する。当然のことながら、当
業者はこれらのプロトコール又は中間生成物に基づいてこれらの同一化合物を得
るための類似方法に想到しよう。また、当業者は上記各特許出願（ＷＯ９６／１
７８２３、ＷＯ９７／１８１８５、ＷＯ９７／３１９３５等）に記載されている
合成方法から一般式（Ｉ）に含まれるポリカチオンＲの合成方法に想到しよう。

【００９８】図面図１：ＤＮＡの細胞導入実験で使用したプラスミドｐＸＬ２７７４の模式図。

【００９９】図２：補助脂質の不在下又は補助脂質としてコレステロールの存在下及びＤＯ
ＰＥの存在下に本発明の化合物２から形成した複合体のＨｅＬａ細胞へのｉｎ
ｖｉｔｒｏ遺伝子導入活性。縦軸はルシフェラーゼの発現（ｐｇ／ウェル）を示
す。横軸はトランスフェクタント剤／ＤＮＡ比（ｎｍｏｌ／μｇＤＮＡ）を示す
。

【０１００】図３：ＤＯＰＥ（１：１）の存在下に本発明の化合物２から形成した複合体を
マウス前脛骨筋に直接注入後のｉｎｖｉｖｏ遺伝子導入活性。縦軸はルシフェ
ラーゼの発現（ｐｇ／筋肉）を示す。横軸は化合物２／ＤＮＡ比（ｎｍｏｌ／μ
ｇＤＮＡ）を示す。

【０１０１】実施例Ａ＼材料と方法ａ）材料・スペルミジン、スペルミン、トリス（２−アミノエチル）アミン、フェニレ
ンジアミン、ジアミノアルカン等の出発ポリアミンは市販品でもよいし、（例え
ば市販アミンをシアノエチル化して分枝鎖ポリアミンを得ることにより）慣用方
法により合成してもよい。

【０１０２】・例えばトリエチルアミン、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジ
メチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、クロロギ
酸ベンジル、１１−ブロモウンデカノール等の多数の化合物は市販品である。

【０１０３】・アンバーライトＩＲ１２０は市販イオン交換樹脂である（ＢＤＨカタログ）
。

【０１０４】・ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は水酸化カリウムで予め処理し、水素化
カルシウムで蒸留した後、４Åモレキュラーシーブで保存した。

【０１０５】・ジクロロメタンは五酸化リンで蒸留した後、４Åモレキュラーシーブで保存
した。

【０１０６】・テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）はベンゾフェノンの存在下にナトリウムで蒸
留した。

【０１０７】・無水条件を必要とする反応では、全ガラス器具を窒素流下に火炎乾燥した。

【０１０８】ｂ）方法 −分光分析核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルはスペクトロメーターＢｒｕｃｋｅｒＭＳ
Ｌ３０でプロトン３００ＭＨｚ、炭素７５ＭＨｚの波長で記録した。全化学シフ
トはテトラメチルシラン（ＴＭＳ）の周波数又は溶媒に対するｐｐｍとして報告
する。スペクトルはＴＭＳ又は内部標準として溶媒の残留シグナルを使用するこ
とにより記録した。シグナルの多重度は以下の略号で表す。ｓ（一重項）、ｄ（
二重項）、ｔ（三重項）、ｑ（四重項）及びｍ（多重項）。

【０１０９】 −クロマトグラフィー法・反応速度は蛍光インジケーターを含むシリカゲル（ＭｅｒｃｋＳｉｌｉｃ
ａｇｅｌ６０Ｆ２５４）を支持体として用いて薄層クロマトグラフィー（Ｔ
ＬＣ）により追跡した。クロマトグラムはアニスアルデヒドのアルコール溶液噴
霧により展開した。

【０１１０】・全カラムクロマトグラフィーは固定相としてシリカゲル６０（０．０５〜０
．０２ｍｍ）を使用して圧縮空気加圧下に実施した。使用した移動相は合成の型
により異なる（中圧クロマトグラフィー）。

【０１１１】・ＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィー）分析はＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏ
ｓｙｓｔｅｍから市販されているＣ４型分析カラム（長さ３ｃｍ及び直径０．４
６ｃｍのステンレス鋼製“ＢｒｏｗｎｌｅｅＣｏｌｕｍｎｓ”）と２２０ｎｍ
検出器“Ｗａｔｅｒｓ４８６”を備えるＷａｔｅｒｓＬＣ４０００装置で実
施した。固定相は７ミクロンブチルアクアポアとし、移動相はトリフルオロ酢酸
（２．５ｃｍ^３）を加えた脱イオン水（２５００ｃｍ^３）又はアセトニトリル（
２５００ｃｍ^３）とした。流速は１ｍｌ／分とした。

【０１１２】Ｂ＼トランスフェクション剤の合成実施例１：（３−［４−（３−アミノプロピルアミノ）ブチルアミノ］メチレ
ンカルバモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オクタデシルα−Ｄ−マンノ
ピラノシド（化合物１）の合成ａ）３−［４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピル−ｔｅｒ
ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ
］酢酸（ＦＲＭ３７５）の合成スペルミン（５ｇ；２４．９６ｍｍｏｌ）のメタノール（１２５ｍｌ）溶液に
シアノホウ水素化ナトリウムＮａＢＨ_３ＣＮ（０．５４８ｇ；８．７４ｍｍｏｌ
）を加えた。次に、溶液を激しく撹拌した。等圧フラスコによりグリオキシル酸
（２．３４ｇ；２５．４６ｍｍｏｌ）のメタノール（８０ｍｌ）溶液を１００分
間加えた。一晩後、テトラヒドロフラン（５５ｍｌ）に可溶化したトリエチルア
ミン（３．８６ｍｌ；２７．７１ｍｍｏｌ）とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネ
ート（２７．６７ｇ；１２９．７９ｍｍｏｌ）を混合物に加えた。一晩後、ロー
タリーエバポレーターで濃縮した後、酢酸エチル（６３ｍｌ）にとり、硫酸水素
カリウムとブラインで洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した
。得られた生成物をクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ９：１）によ
り精製した。収率は３０％であった。

【０１１３】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．４２（ｓ，３６Ｈ，Ｃ（ＣＨ _３）_３），１．４５（ｍ，４Ｈ，ＣＨ_２），１．６０（ｍ，４Ｈ，ＣＨ_２），３
．０４−３．３３（ｍ，１２Ｈ，ＣＨ_２），３．９１（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ_２ＣＯ
Ｏ）。

【０１１４】ｂ）メチル１５−ヒドロキシペンタデカノエートの合成メタノール４１．６０ｃｍ^３中ペンタデカラクトン１０ｇ（４１．６０ｍｍｏ
ｌ）に２Ｎナトリウムメチラート６．６６ｃｍ^３（１３．３１ｍｍｏｌ）を０℃
で加えた。

【０１１５】９時間後に酢酸９．２４ｃｍ^３を加え、１５分間撹拌した。その後、溶液を減
圧蒸発乾涸し、次いでジクロロメタンにとり、重炭酸ナトリウムで洗浄した。得
られた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒をロータリーエバポレーターで
蒸発させた。ヘキサン／酢酸エチル６：４混合物で精製した。メチル１−オール
ペンタデカノエートが得られた（収率８０％）。

【０１１６】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２６（ｍ，１２Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．５−１．６（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２及びＨ−１３），２．３０（ｔ，
２Ｈ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，Ｈ−１４），３．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８４Ｈｚ
，Ｈ−１），３．６７（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１６）。

【０１１７】ｃ）メチルペンタデカノエート２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−
Ｄ−マンノピラノシドの合成０℃で塩化錫５．２６ｃｍ^３（４４，９４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５６ｃ
ｍ^３中ペンタアセチル化マンノース８．７２ｇ（２２．４７ｍｍｏｌ）に３０分
間加えた。次に、上記ａ）で得られたメチル１−オールペンタデカノエート７．
３４ｇ（２６．９６ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後に反応混合物をエチルエーテ
ルで希釈し、リン酸水素ナトリウム（ＮａＨＰＯ_４）溶液に注入した。水相をジ
エチルエーテルで抽出し、有機相を炭酸ナトリウム溶液、ブラインで順次洗浄し
た後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧蒸発乾涸後に得られた生成物をヘプタ
ン／酢酸エチル７：３混合物で中圧クロマトグラフィーにより精製した。収率は
５３％であった。

【０１１８】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２６（ｍ，２０Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．５９（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２及びＨ−１３），２．０１，２
．０５，２．１２及び２．１７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＯＣＨ_３），２．２９（ｔ，２
Ｈ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ，Ｈ−１４），３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝７．８９Ｈｚ，
ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６６（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝７．８９Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２）
，３．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＣＨ_３），４．０５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５
６Ｈｚ及び５．５７Ｈｚ，Ｈ−５），４．１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．５７Ｈｚ及
び１２．３２Ｈｚ，Ｈ−６ａ），４．２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．５７Ｈｚ及び
１２．３２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ），４．８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８５Ｈｚ，Ｈ−１）
，５．２３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８５Ｈｚ及び３．２３Ｈｚ，Ｈ−２），５．
２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．９７Ｈｚ及び９．５６Ｈｚ，Ｈ−４），５．３５（
ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．９７Ｈｚ及び３．２３Ｈｚ，Ｈ−３）。

【０１１９】ｄ）メチルペンタデカノエートα−Ｄ−マンノピラノシドの合成前段階で得られた生成物３．６３ｇ（６．０１ｍｍｏｌ）をメタノール１２ｃ
ｍ^３に溶かし、２Ｎナトリウムメチラート３ｃｍ^３（６．０１ｍｍｏｌ）で処理
した。反応が完了したらアンバーライトＩＲ１２０（１当量／容量）で中和し、
濾過し、減圧蒸発乾涸した。

【０１２０】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２８（ｍ，２０Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．５９（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２及びＨ−１３），２．３４（ｔ
，２Ｈ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ，Ｈ−１４），３．４１（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈ
ｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．７４（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ _２），３．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３ＯＣＯ），３．５−３．８２（ｍ，６Ｈ，Ｈ
−２，Ｈ−３，Ｈ−４，Ｈ−５及びＨ−６），４．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８
２Ｈｚ，Ｈ−１）。

【０１２１】ｅ）メチルペンタデカノエート２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−
Ｄ−マンノピラノシドの合成前段階ｄ）で得られた生成物２ｇ（４．５６ｍｍｏｌ）を無水ジメチルホルム
アミド（ＤＭＦ）２０ｃｍ^３に溶かし、ヨウ化カリウム４．５４ｇ（２７．３６
ｍｍｏｌ）、６０％水素化ナトリウム１．０９ｇ（２７．３６ｍｍｏｌ）及び臭
化ベンジル３．２５ｃｍ^３（２７．３６ｍｍｏｌ）を順次加えた。１２時間後に
飽和塩化アンモニウム溶液１８．２４ｃｍ^３を加え、１０分間撹拌した。次に水
洗し、有機相を酢酸エチルで抽出した。次に、これを水とブラインで洗浄し、最
後に硫酸マグネシウムで乾燥した。更に飽和チオ硫酸ナトリウム溶液で追加洗浄
し、ヨウ化物イオンを除去した。減圧蒸発し、得られた油状物をヘプタン／酢酸
エチル９：１混合物で精製した。生成物は収率６０％で得られた。

【０１２２】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２８（ｍ，２０Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．４９（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２），１．５９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−
１３），２．３１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ，Ｈ−１４），３．３４（ｍ，
１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６３（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７
１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３ＯＣＯ），３．７５（
ｍ，１Ｈ，Ｊ＝８．９７Ｈｚ及び６．２１Ｈｚ，Ｈ−５），３．７８（ｓ，２Ｈ
，ＣＨ_２Ｐｈｅ），３．９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ及びＪ＝１１．８２
Ｈｚ，Ｈ−６ａ），３．９７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２１Ｈｚ及びＪ＝１１．８
２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ），４．０７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．５２（ｄｄ，
Ｊ＝２．９１Ｈｚ及び７．８３Ｈｚ，Ｈ−３），４．５７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐ
ｈｅ），４．６３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２
．５２Ｈｚ及び２．９１Ｈｚ，Ｈ−２），４．７４（１Ｈ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ，
Ｈ−１），４．８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ及び８．９７Ｈｚ，Ｈ−４
），７．３５（ｍ，２０Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１２３】ｆ）ペンタデカン酸２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノ
ピラノシドの合成前段階ｅ）で得られた生成物０．５０ｇ（０．７３ｍｍｏｌ）をメタノール７
ｃｍ^３に溶かし、これに２５％水酸化ナトリウム溶液４．６８ｃｍ^３を加えた。
反応混合物を３０分間加熱還流した。次に、混合物を５％塩酸溶液で低温中和し
た。有機相を酢酸エチルで抽出し、減圧蒸発乾涸した。ヘプタン／酢酸エチル４
：６混合物で精製した。生成物は収率６２％で得られた。

【０１２４】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２８（ｍ，２０Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．４９（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２），１．５９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−
１３），２．３４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ，Ｈ−１４），３．３４（ｍ，
１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６３（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７
１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．７５（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝８．９７Ｈｚ及び６．２
１Ｈｚ，Ｈ−５），３．７８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），３．９０（ｄｄ，１
Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ及びＪ＝１１．８２Ｈｚ，Ｈ−６ａ），３．９７（ｄｄ，１
Ｈ，Ｊ＝６．２１Ｈｚ及びＪ＝１１．８２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ），４．０７（ｓ，２
Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．５２（ｄｄ，Ｊ＝２．９１Ｈｚ及び７．８３Ｈｚ，Ｈ
−３），４．５７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．６３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐ
ｈｅ），４．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ及び２．９１Ｈｚ，Ｈ−２）
，４．７４（１Ｈ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ，Ｈ−１），４．８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝
７．８３Ｈｚ及び８．９７Ｈｚ，Ｈ−４），７．３５（ｍ，２０Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１２５】ｇ）Ｎ−オクタデシル−１５−カルバモイルペンタデカニル２，３，４，６−
テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシドの合成前段階ｆ）で得られた生成物０．２９ｇ（０．３７ｍｍｏｌ）をクロロホルム
５ｃｍ^３に溶かした溶液にＢＯＰ０．２３ｇ（０．５２ｍｍｏｌ）、ジイソプロ
ピルエチルアミン０．２１ｃｍ^３（１．４８ｍｍｏｌ）及びオクタデシルアミン
０．１２ｇ（０．４４ｍｏｌ）を順次加えた。反応が完了したら、ジクロロメタ
ンで希釈し、水洗した。次に、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧蒸発乾涸した。
得られた生成物をヘプタン／酢酸エチル６：４混合物で中圧クロマトグラフィー
により精製した。生成物は収率９８％で得られた。

【０１２６】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２７（ｍ，５０Ｈ，（ＣＨ_２）_２５），１．４７（ｍ
，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２及びＨ−１７），１．５８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１３），２
．１３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，Ｈ−１４），３．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−
１６），３．３４（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６３
（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．７５（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝
８．９７Ｈｚ及び６．２１Ｈｚ，Ｈ−５），３．７８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ
），３．９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ及びＪ＝１１．８２Ｈｚ，Ｈ−６ａ
），３．９７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２１Ｈｚ及びＪ＝１１．８２Ｈｚ，Ｈ−６
ｂ），４．０７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．５２（ｄｄ，Ｊ＝２．９１Ｈ
ｚ及び７．８３Ｈｚ，Ｈ−３），４．５７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．６
３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ及び
２．９１Ｈｚ，Ｈ−２），４．７４（１Ｈ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ，Ｈ−１），４．
８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ及び８．９７Ｈｚ，Ｈ−４），５．３７（
バンド，１Ｈ，ＨＮＣＯ），７．３５（ｍ，２０Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１２７】ｈ）１５−オクタデシルアミノペンタデカニル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−
ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシドの合成前段階ｇ）で得られた生成物０．７７ｇ（０．７５ｍｍｏｌ）を無水テトラヒ
ドロフラン（ＴＨＦ）１５ｃｍ^３に溶かし、これに水素化リチウムアルミニウム
ＡｌＬｉＨ_４０．０５６ｇ（１．５０ｍｍｏｌ）を加えた。１０分間加熱還流し
た。次に、反応混合物を氷浴で冷却し、水５６μｌ、次いで１０分後に２Ｎ水酸
化ナトリウム１１２μｌを加え、更に１０分後に再び水５６μｌを加えた。濾過
し、減圧蒸発乾涸した。得られた生成物をジクロロメタン／メタノール／２８％
アンモニア９：２：０．５混合物で精製した。生成物は収率８６％で得られた。

【０１２８】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２７（ｍ，５０Ｈ，（ＣＨ_２）_２５），１．４−１．
６（ｍ，９Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−１７，Ｈ−１４，Ｈ−１７及びＮＨ），２
．５７（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，Ｈ−１５及びＨ−１６），３．３４（ｍ
，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６３（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．
７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．７５（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝８．９７Ｈｚ及び６．
２１Ｈｚ，Ｈ−５），３．７８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），３．９０（ｄｄ，
１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ及びＪ＝１１．８２Ｈｚ，Ｈ−６ａ），３．９７（ｄｄ，
１Ｈ，Ｊ＝６．２１Ｈｚ及びＪ＝１１．８２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ），４．０７（ｓ，
２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．５２（ｄｄ，Ｊ＝２．９１Ｈｚ及び７．８３Ｈｚ，
Ｈ−３），４．５７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．６３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ及び２．９１Ｈｚ，Ｈ−２
），４．７４（１Ｈ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ，Ｈ−１），４．８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ
＝７．８３Ｈｚ及び８．９７Ｈｚ，Ｈ−４），７．３５（ｍ，２０Ｈ，Ｐｈｅ）
。

【０１２９】ｉ）（３−［４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピル−ｔｅ
ｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミ
ノ］メチレンカルバモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オクタデシル２，
３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシドの合成前段階ｈ）で得られた生成物０．６３ｇ（０．６１ｍｍｏｌ）をクロロホルム
１０ｃｍ^３に溶かした溶液にＢＯＰ０．３８ｇ（０．８５ｍｍｏｌ）、ジイソプ
ロピルエチルアミン０．４２５ｃｍ^３（２．４４ｍｍｏｌ）及び段階ａ）で得ら
れた（３−［４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピル−ｔｅｒ
ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ
］酢酸（ＦＲＭ３７５）０．４８ｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を順次加えた。４時間
後にジクロロメタンで希釈し、水洗した。硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧蒸発
乾涸した。得られた生成物をヘプタン／酢酸エチル６：４混合物で中圧クロマト
グラフィーにより精製した。生成物は収率８０％で得られた。

【０１３０】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２７（ｍ，５０Ｈ，（ＣＨ_２）_２５），１．４−１．
６（ｍ，１７Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−１７，Ｈ−１４，Ｈ−１７，Ｈ−３７，
Ｈ−４０，Ｈ−４１及びＨ−４４），１．４６（ｍ，３６Ｈ，Ｂｏｃ），２．８
−２．９（ｍ，６Ｈ，Ｈ−１５，Ｈ−１６及びＨ−３５），３．０９−３．３３
（ｍ，１２Ｈ，Ｈ−３６，Ｈ−３８，Ｈ−３９，Ｈ−４２，Ｈ−４３及びＨ−４
５），３．３４（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６３（
ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．７５（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝８
．９７Ｈｚ及び６．２１Ｈｚ，Ｈ−５），３．７８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ）
，３．９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ及びＪ＝１１．８２Ｈｚ，Ｈ−６ａ）
，３．９７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２１Ｈｚ及びＪ＝１１．８２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ
），４．０７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．５２（ｄｄ，Ｊ＝２．９１Ｈｚ
及び７．８３Ｈｚ，Ｈ−３），４．５７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．６３
（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ及び２
．９１Ｈｚ，Ｈ−２），４．７４（１Ｈ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ，Ｈ−１），４．８
５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ及び８．９７Ｈｚ，Ｈ−４），７．３５（ｍ
，１８Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１３１】ｊ）（３−［４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピル−ｔｅ
ｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミ
ノ］メチレンカルバモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オクタデシルα−
Ｄ−マンノピラノシドの合成前段階ｉ）で得られた生成物０．６３ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）をメタノール５
ｃｍ^３に溶かし、これに炭素担持１０％パラジウム（０．０２７ｇ）を加えた。
溶液を周囲温度で水素加圧下に撹拌した。６時間後に濾過後、減圧蒸発乾涸した
。反応は定量的であった。

【０１３２】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２７（ｍ，５０Ｈ，（ＣＨ_２）_２５），１．４−１．
６（ｍ，１７Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−１７，Ｈ−１４，Ｈ−１７，Ｈ−３７，
Ｈ−４０，Ｈ−４１及びＨ−４４），１．４６（ｍ，３６Ｈ，Ｂｏｃ），２．８
−２．９（ｍ，６Ｈ，Ｈ−１５，Ｈ−１６及びＨ−３５），３．０９−３．３３
（ｍ，１２Ｈ，Ｈ−３６，Ｈ−３８，Ｈ−３９，Ｈ−４２，Ｈ−４３及びＨ−４
５），３．３４（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．５−３
．８２（ｍ，６Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−３，Ｈ−４，Ｈ−５及びＨ−６），３．６３（
ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），４．７２（１Ｈ，Ｊ＝２．５
２Ｈｚ，Ｈ−１）。

【０１３３】ｋ）（３−［４−（３−アミノプロピルアミノ）ブチルアミノ］メチレンカル
バモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オクタデシルα−Ｄ−マンノピラノ
シド（化合物１）の合成前段階ｊ）で得られた生成物０．３７ｇ（０．２８ｍｍｏｌ）に希テトラヒド
ロフラン（ＴＦＡ）２１．５０ｃｍ^３を加えた。１時間後に反応混合物を低温濃
縮し、凍結乾燥した。「材料と方法」の部に記載したようにＨＰＬＣによりメタ
ノール溶液中の生成物の純度を確認した。

【０１３４】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２７（ｍ，１４Ｈ，（ＣＨ_２）_２５），１．４−１．
６（ｍ，１７Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−１７，Ｈ−１４，Ｈ−１７，Ｈ−３７，
Ｈ−４０，Ｈ−４１及びＨ−４４），２．８−２．９（ｍ，６Ｈ，Ｈ−１５，Ｈ
−１６及びＨ−３５），２．９２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４５），２．９２−３．１７
（ｍ，１２Ｈ，Ｈ−３６，Ｈ−３８，Ｈ−３９，Ｈ−４２，Ｈ−４３），３．３
４（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．５−３．８２（ｍ，
６Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−３，Ｈ−４，Ｈ−５及びＨ−６），３．６３（ｍ，１Ｈ，Ｊ
＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），４．７２（１Ｈ，Ｊ＝２．０２Ｈｚ，Ｈ−
１）。

【０１３５】実施例２：（３−［４−（３−アミノプロピルアミノ）ブチルアミノ］メチレ
ンカルバモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オクタデシル６−デオキシ−
α−Ｌ−マンノピラノシド（化合物２）の合成ａ）３−［４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピル−ｔｅｒ
ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ
］酢酸（ＦＲＭ３７５）の合成スペルミン（５ｇ；２４．９６ｍｍｏｌ）のメタノール（１２５ｍｌ）溶液に
シアノホウ水素化ナトリウムＮａＢＨ_３ＣＮ（０．５４８ｇ；８．７４ｍｍｏｌ
）を加えた。次に、溶液を激しく撹拌した。等圧フラスコによりグリオキシル酸
（２．３４ｇ；２５．４６ｍｍｏｌ）のメタノール（８０ｍｌ）溶液を１００分
間加えた。一晩後、テトラヒドロフラン（５５ｍｌ）に可溶化したトリエチルア
ミン（３．８６ｍｌ；２７．７１ｍｍｏｌ）とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネ
ート（２７．６７ｇ；１２９．７９ｍｍｏｌ）を混合物に加えた。一晩後、ロー
タリーエバポレーターで濃縮した後、酢酸エチル（６３ｍｌ）にとり、硫酸水素
カリウムとブラインで洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した
。得られた生成物をクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ９：１）によ
り精製した。収率は３０％であった。

【０１３６】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．４２（ｓ，３６Ｈ，Ｃ（ＣＨ _３）_３），１．４５（ｍ，４Ｈ，ＣＨ_２），１．６０（ｍ，４Ｈ，ＣＨ_２），３
．０４−３．３３（ｍ，１２Ｈ，ＣＨ_２），３．９１（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ_２ＣＯ
Ｏ）。

【０１３７】ｂ）メチル１５−ヒドロキシペンタデカノエートの合成メタノール４１．６０ｃｍ^３中ペンタデカラクトン１０ｇ（４１．６０ｍｍｏ
ｌ）に２Ｎナトリウムメチラート６．６６ｃｍ^３（１３．３１ｍｍｏｌ）を０℃
で加えた。９時間後に酢酸９．２４ｃｍ^３を加え、１５分間撹拌した。その後、
溶液を減圧蒸発乾涸し、次いでジクロロメタンにとり、重炭酸ナトリウムで洗浄
した。得られた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒をロータリーエバポレ
ーターで蒸発させた。ヘキサン／酢酸エチル６：４混合物で精製した。メチル１
−オールペンタデカノエートが得られた（収率８０％）。

【０１３８】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２６（ｍ，１２Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．５−１．６（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２及びＨ−１３），２．３０（ｔ，
２Ｈ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，Ｈ−１４），３．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８４Ｈｚ
，Ｈ−１），３．６７（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１６）。

【０１３９】ｃ）メチルペンタデカノエート２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−デオキ
シ−α−Ｌ−マンノピラノシドの合成０℃で塩化錫２．４９ｃｍ^３（２１．３０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２７ｃ
ｍ^３中テトラアセチル化ラムノース３．５５ｇ（１０．６５ｍｍｏｌ）に３０分
間加えた。次に、上記で得られたメチル１−オールペンタデカノエート３．４８
ｇ（１２．７８ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後に反応混合物をエチルエーテルで
希釈し、リン酸ナトリウム（Ｎａ_２ＰＯ_４）溶液に注入した。水相をジエチルエ
ーテルで抽出し、有機相を炭酸ナトリウム溶液、ブラインで順次洗浄した後、硫
酸マグネシウムで乾燥した。減圧蒸発乾涸後にヘプタン／酢酸エチル７：３混合
物で中圧クロマトグラフィーにより精製した。生成物は収率６０％で得られた。

【０１４０】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４
５Ｈｚ，Ｈ−６），１．２６（ｍ，２０Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．５９（ｍ，
４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２及びＨ−１３），１．９８，２．０４及び２．１６（ｓ，
３Ｈ，ＯＣＯＣＨ_３），２．２９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ，Ｈ−１４），
３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６６（ｍ，１
Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＣＨ_３），３．８８（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．４５及び９．９７Ｈｚ，Ｈ−５），４．７０
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７２Ｈｚ，Ｈ−１），５．０６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．９
７Ｈｚ及び９．９７Ｈｚ，Ｈ−４），５．２２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７２Ｈｚ
及び３．５２Ｈｚ，Ｈ−２），５．３０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５２Ｈｚ及び９
．９７Ｈｚ，Ｈ−３）。

【０１４１】ｄ）メチルペンタデカノエートα−デオキシ−Ｌ−６−マンノピラノシドエー
トの合成段階ｃ）で得られた生成物５．０８ｇ（９．３４ｍｍｏｌ）をメタノール２０
ｃｍ^３に溶かし、２Ｎナトリウムメチラート９．３４ｍｌ（１８．６８ｍｍｏｌ
）で処理した。反応が完了したら、反応混合物をアンバーライトＩＲ１２０で中
和し、濾過し、減圧蒸発乾涸した。

【０１４２】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４
５Ｈｚ，Ｈ−６），１．２６（ｍ，２０Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．５９（ｍ，
４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２及びＨ−１３），２．２９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ
，Ｈ−１４），３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３
．６６（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．６７（ｓ，３Ｈ
，ＣＨ_３ＯＣＯ），３．６−３．９（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−３，Ｈ−４及びＨ
−５），４．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７２Ｈｚ，Ｈ−１）。

【０１４３】ｅ）メチルペンタデカノエート２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−６―デオキ
シ―α−Ｌ−マンノピラノシドの合成前段階ｄ）で得られた生成物２．０９ｇ（５．００ｍｍｏｌ）を無水ジメチル
ホルムアミド（ＤＭＦ）３０ｃｍ^３に溶かし、ヨウ化カリウム３．３２ｇ（２０
．００ｍｍｏｌ）、６０％水素化ナトリウム０．８０ｇ（２０．００ｍｍｏｌ）
及び臭化ベンジル２．３８ｃｍ^３（２０．００ｍｍｏｌ）を順次加えた。１２時
間後に飽和塩化アンモニウム溶液２０ｃｍ^３を加え、１０分間撹拌した。次に水
で希釈し、有機相を酢酸エチルで抽出した。次に水とブラインで洗浄した後、硫
酸マグネシウムで乾燥した。

【０１４４】更に飽和チオ硫酸ナトリウム溶液で追加洗浄し、ヨウ化物イオンを除去した。
減圧蒸発乾涸し、得られた油状物をヘプタン／酢酸エチル９：１混合物で精製し
た。生成物は収率６０％で得られた。

【０１４５】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２８（ｍ，２０Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．３３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．２１Ｈｚ，Ｈ−６），１．５９（ｍ，
４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２及びＨ−１３），２．３１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ
，Ｈ−１４），３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３
．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９６Ｈｚ及び９．５Ｈｚ，Ｈ−４），３．６６（
ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３ＯＣＯ），３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ及び６．２１Ｈｚ，Ｈ−５），
３．７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ及び３．０２Ｈｚ，Ｈ−２），３．８
８（ｄｄ，Ｊ＝３．０２Ｈｚ及び８．９６Ｈｚ，Ｈ−３），４．６４（ｓ，６Ｈ
，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．７３（１Ｈ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ，Ｈ−１），７．３５（
ｍ，１５Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１４６】ｆ）ペンタデカン酸２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−６―デオキシ―α−Ｌ
−マンノピラノシドの合成前段階ｅ）で得られた生成物０．５０ｇ（０．７３ｍｍｏｌ）をメタノール７
ｃｍ^３に溶かし、２５％水酸化ナトリウム４．６８ｍｌを加えた。反応混合物を
３０分間加熱還流した。次に、混合物を５％塩酸溶液で低温中和した。有機相を
酢酸エチルで抽出し、減圧蒸発乾涸した。ヘプタン／酢酸エチル４：６混合物で
精製した。生成物は収率７２％で得られた。

【０１４７】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２８（ｍ，２０Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．３３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．２１Ｈｚ，Ｈ−６），１．５９（ｍ，
４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２及びＨ−１３），２．３４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ
，Ｈ−１４），３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３
．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９６Ｈｚ及び９．５Ｈｚ，Ｈ−４），３．６６（
ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝９
．５Ｈｚ及び６．２１Ｈｚ，Ｈ−５），３．７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０１Ｈ
ｚ及び３．０２Ｈｚ，Ｈ−２），３．８８（ｄｄ，Ｊ＝３．０２Ｈｚ及び８．９
６Ｈｚ，Ｈ−３），４．６４（ｓ，６Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．７３（１Ｈ，Ｊ
＝２．０１Ｈｚ，Ｈ−１），７．３５（ｍ，２０Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１４８】ｇ）Ｎ−オクタデシル−１５−カルバモイルペンタデカニル２，３，４−トリ
−Ｏ−ベンジル−６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシドの合成前段階ｆ）で得られた生成物０．７０ｇ（１．０４ｍｍｏｌ）をクロロホルム
１３ｃｍ^３に溶かした溶液にＢＯＰ０．６９ｇ（１．５６ｍｍｏｌ）、ジイソプ
ロピルエチルアミン０．７２ｃｍ^３（４．１６ｍｍｏｌ）及びオクタデシルアミ
ン０．３４ｇ（１．２５ｍｍｏｌ）を順次加えた。反応が完了したら、ジクロロ
メタンで希釈し、水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧蒸発乾涸した。得ら
れた生成物をヘプタン／酢酸エチル６：４混合物で中圧クロマトグラフィーによ
り精製した。生成物は収率８４％で得られた。

【０１４９】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２７（ｍ，５０Ｈ，（ＣＨ_２）_２５），１．３３（ｄ
，３Ｈ，Ｊ＝６．２１Ｈｚ，Ｈ−６），１．４７（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２及
びＨ−１７），１．５８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１３），２．１３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７
．９２Ｈｚ，Ｈ−１４），３．２３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１６），３．４０（ｍ，１
Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９
６Ｈｚ及び９．５Ｈｚ，Ｈ−４），３．６６（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ及び６．２１Ｈｚ，Ｈ−
５），３．７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ及び３．０２Ｈｚ，Ｈ−２），
３．８８（ｄｄ，Ｊ＝３．０２Ｈｚ及び８．９６Ｈｚ，Ｈ−３），４．６４（ｓ
，６Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．７３（１Ｈ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ，Ｈ−１），５．
３７（バンド，１Ｈ，ＨＮＣＯ），７．３５（ｍ，１５Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１５０】ｈ）１５−オクタデシルアミノペンタデカニル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジ
ル−６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシドの合成前段階ｇ）で得られた生成物０．８１ｇ（０．８６ｍｍｏｌ）を無水テトラヒ
ドロフラン（ＴＨＦ）１５ｃｍ^３に溶かし、水素化リチウムアルミニウムＡｌＬ
ｉＨ_４０．０６５ｇ（１．７２ｍｍｏｌ）を加え、１０分間加熱還流した。次に
、反応混合物を氷浴で冷却し、水６５μｌ、次いで１０分後に２Ｎ水酸化ナトリ
ウム１３０μｌを加え、更に１０分後に再び水６５μｌを加えた。濾過し、減圧
蒸発乾涸した。ジクロロメタン／メタノール／２８％アンモニア９：２：０．５
混合物で精製した。生成物は収率９３％で得られた。

【０１５１】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２７（ｍ，５０Ｈ，（ＣＨ_２）_２５），１．３３（ｄ
，３Ｈ，Ｊ＝６．２１Ｈｚ，Ｈ−６），１．４−１．６（ｍ，９Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−１７，Ｈ−１４，Ｈ−１７及びＮＨ），２．５７（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝７
．９２Ｈｚ，Ｈ−１５及びＨ−１６），３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ
，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９６Ｈｚ及び９．５Ｈｚ
，Ｈ−４），３．６６（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．
６８（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ及び６．２１Ｈｚ，Ｈ−５），３．７５（ｄｄ
，１Ｈ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ及び３．０２Ｈｚ，Ｈ−２），３．８８（ｄｄ，Ｊ＝
３．０２Ｈｚ及び８．９６Ｈｚ，Ｈ−３），４．６４（ｓ，６Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ
），４．７３（１Ｈ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ，Ｈ−１），７．３５（ｍ，１５Ｈ，Ｐ
ｈｅ）。

【０１５２】ｉ）（３−［４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピル−ｔｅ
ｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミ
ノ］メチレンカルバモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オクタデシル２，
３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシドの合成前段階ｈ）で得られた生成物０．７８ｇ（０．８６ｍｍｏｌ）をクロロホルム
７ｃｍ^３に溶かした溶液にＢＯＰ０．５３ｇ（１．２０ｍｍｏｌ）、ジイソプロ
ピルエチルアミン０．３０ｃｍ^３（１．７２ｍｍｏｌ）及び段階ａ）で得られた
ＦＲＭ３７５０．６２ｇ（０．９５ｍｍｏｌ）を順次加えた。４時間後にジク
ロロメタンで希釈し、水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧蒸発乾涸した。
得られた生成物をヘプタン／酢酸エチル６：４混合物で「フラッシュ」クロマト
グラフィーにより精製した。生成物は収率７２％で得られた。

【０１５３】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２７（ｍ，５０Ｈ，（ＣＨ_２）_２５），１．３３（ｄ
，３Ｈ，Ｊ＝６．２１Ｈｚ，Ｈ−６），１．４−１．６（ｍ，１７Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−１７，Ｈ−１４，Ｈ−１７，Ｈ−３７，Ｈ−４０，Ｈ−４１及びＨ
−４４），１．４６（ｍ，３６Ｈ，Ｂｏｃ），２．８−２．９（ｍ，６Ｈ，Ｈ−
１５，Ｈ−１６及びＨ−３５），３．０９−３．３３（ｍ，１２Ｈ，Ｈ−３６，
Ｈ−３８，Ｈ−３９，Ｈ−４２，Ｈ−４３及びＨ−４５），３．４０（ｍ，１Ｈ
，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ）
，３．６６（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．６８（ｍ，
１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ及び６．２１Ｈｚ，Ｈ−５），３．９９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ _２Ｐｈｅ），４．０２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９６Ｈｚ及び９．５Ｈｚ，Ｈ−４
），４．３２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），４．５７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０
１Ｈｚ及び３．０２Ｈｚ，Ｈ−２），４．７３（１Ｈ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ，Ｈ−
１），４．８２（ｄｄ，Ｊ＝３．０２Ｈｚ及び８．９６Ｈｚ，Ｈ−３），７．３
５（ｍ，１８Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１５４】ｊ）（３−［４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピル−ｔｅ
ｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミ
ノ］メチレンカルバモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オクタデシル６−
デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシドの合成前段階ｉ）で得られた生成物０．７４ｇ（０．４８ｍｍｏｌ）をメタノール１
０ｃｍ^３に溶かし、炭素担持１０％パラジウム（０．０３４ｇ）を加えた。溶液
を周囲温度で水素加圧下に撹拌した。４時間後に濾過後、減圧蒸発乾涸した。反
応は定量的であった。

【０１５５】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４５Ｈｚ，Ｈ−６），１．
２７（ｍ，１４Ｈ，（ＣＨ_２）_２５），１．４−１．６（ｍ，１７Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−１７，Ｈ−１４，Ｈ−１７，Ｈ−３７，Ｈ−４０，Ｈ−４１及びＨ
−４４），１．４６（ｍ，３６Ｈ，Ｂｏｃ），２．８−２．９（ｍ，６Ｈ，Ｈ−
１５，Ｈ−１６及びＨ−３５），３．０９−３．３３（ｍ，１２Ｈ，Ｈ−３６，
Ｈ−３８，Ｈ−３９，Ｈ−４２，Ｈ−４３及びＨ−４５），３．４０（ｍ，１Ｈ
，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６６（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈ
ｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．６−３．９（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−３，Ｈ−４及
びＨ−５），４．７３（１Ｈ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ，Ｈ−１）。

【０１５６】ｋ）（３−［４−（３−アミノプロピルアミノ）ブチルアミノ］メチレンカル
バモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オクタデシル６−デオキシ−α−Ｌ
−マンノピラノシド（化合物２）の合成前段階ｊ）で得られた生成物０．４０ｇ（０．３１ｍｍｏｌ）に希テトラヒド
ロフラン（ＴＦＡ）２４ｃｍ^３を加えた。１時間後に反応混合物を凍結乾燥した
後、凍結乾燥した。メタノール溶液中の生成物の純度をＨＰＬＣにより確認した
。

【０１５７】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４５Ｈｚ，Ｈ−６‘），１
．２７（ｍ，１４Ｈ，（ＣＨ_２）_２５），１．４−１．６（ｍ，１７Ｈ，ＯＣＨ _２ＣＨ_２，Ｈ−１７，Ｈ−１４，Ｈ−１７，Ｈ−３７，Ｈ−４０，Ｈ−４１及び
Ｈ−４４），２．８−２．９（ｍ，６Ｈ，Ｈ−１５，Ｈ−１６及びＨ−３５），
２．９２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４５），２．９２−３．１７（ｍ，１２Ｈ，Ｈ−３６
，Ｈ−３８，Ｈ−３９，Ｈ−４２，Ｈ−４３），３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．
７１Ｈｚ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６６（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，ＯＣＨ _ｂＣＨ_２），３．６−３．９（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−３，Ｈ−４及びＨ−５）
，４．７３（１Ｈ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ，Ｈ−１）。

【０１５８】実施例３：１−［−（３−［４−（３−アミノプロピルアミノ）ブチルアミノ
プロピルアミノ］メチレンカルバモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オク
タデカニル６−デオキシ―β―Ｌ−ガラクトピラノシド（化合物３）の合成ａ）｛３−［４−（３−ベンジルオキシカルボニルアミノプロピルベンジルオ
キシカルボニルアミノ）ブチルベンジルオキシカルボニルアミノ］プロピルアミ
ノ｝酢酸の合成スペルミン（１０ｇ；４９．９１ｍｍｏｌ）のメタノール（２００ｍｌ）溶液
にシアノホウ水素化ナトリウムＮａＢＨ_３ＣＮ（１．１０ｇ；１７．４７ｍｍｏ
ｌ）を加えた。次に、溶液を激しく撹拌した。等圧フラスコによりグリオキシル
酸（４．５９ｇ；４９．９１ｍｍｏｌ）のメタノール（１２０ｍｌ）溶液を１０
０分間加えた。一晩後、反応混合物を氷浴に入れ、２Ｎ水酸化ナトリウム（３４
ｍｌ）及びクロロギ酸ベンジル（１４．２５ｍｌ；９９．８２ｍｍｏｌ）を１０
回に分けて順次加えた。浴を５℃〜１０℃に維持しながら激しく混合した。周囲
温度で２時間後に混合物をエーテルで抽出し、５Ｎ塩酸溶液で中和した。次に、
有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、ロータリーエバポレーターで濃縮した。得
られた生成物をクロマトグラフィー（１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２次いでＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ９：１）により精製した。収率は５２％であった。

【０１５９】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２８（ｓ，４Ｈ，ＣＨ_２），
１．６０（ｍ，４Ｈ，ＣＨ_２），３．０４−３．３３（ｍ，１２Ｈ，ＣＨ_２），
３．４９（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ_２ＣＯＯ），５．０７（ｓ，８Ｈ，ＣＨ_２），７．
２７（ｍ，２０Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１６０】ｂ）メチル１５−ヒドロキシペンタデカノエートの合成メタノール（４１．６ｍｌ）中ペンタデカラクトン（１０ｇ；４１．６ｍｍｏ
ｌ）を０℃で２Ｎナトリウムメチラート（６．６５６ｍｌ；１３．３１ｍｍｏｌ
）で処理した。９時間後に酢酸９．２４ｍｌを加え、１５分間撹拌した。その後
、溶液を濃縮し、得られた油状物をジクロロメタンに溶かし、重炭酸ナトリウム
で洗浄した。デカント後、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させた。ヘ
キサン／酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）６：４混合物で精製すると、メチル１５−ヒ
ドロキシペンタデカノエートが得られた（収率８０％）。

【０１６１】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１．２９（ｍ，２０Ｈ，（ＣＨ_２）_１０），１．５−１．６（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２及びＨ−１３），２．３０（ｔ，
２Ｈ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，Ｈ−１４），３．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８４Ｈｚ
，Ｈ−１），３．６７（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１６）。

【０１６２】ｃ）Ｎ−オクタデシル−１５−ヒドロキシペンタデカナミドの合成前段階ｂ）で得られたメチル１５−ヒドロキシペンタデカノエート１０ｇ（３
６．８５ｍｍｏｌ）とオクタデシルアミン１９．８６ｇ（７３．７０ｍｍｏｌ）
を１５０℃で減圧溶融させた。２４時間後に混合物を冷却し、ジクロロメタンで
希釈した。得られた沈殿をブフナー漏斗で濾過した。次に、得られた固体をメタ
ノールで再結晶させると、Ｎ−オクタデシル−１５−ヒドロキシペンタデカナミ
ドが得られた（収率１００％）。

【０１６３】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２６（ｍ，５４Ｈ，（ＣＨ_２）_２７），１．４−１．
６（ｍ，６Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−１３及びＨ−１７），２．３０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７
．６０Ｈｚ，Ｈ−１４），３．２５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１６），３．６４（ｔ，２
Ｈ，Ｊ＝５．８４Ｈｚ，Ｈ−１），５．３９（バンドＮＨＣＯ）。

【０１６４】 ^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１４．４８（Ｃ−３３），２５
．３及び２６．３（Ｃ−２及びＣ−１３），２９．７２（（ＣＨ_２）_２７）），
３６．７及び３４．８（Ｃ−１４及びＣ−１６），６３．６（Ｃ−１），１７４
．３１（ＣＯ）。

【０１６５】ｄ）１５−オクタデシルアミノペンタデカノールの合成前段階ｃ）で得られたＮ−オクタデシル−１５−ヒドロキシペンタデカナミド
２０ｇ（３９．２２ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（２５０ｍｌ）溶液に
水素化アルミニウムリチウムＬｉＡｌＨ_４２．９８ｇ（７８．４４ｍｍｏｌ）を
加えた。反応体を１０時間還流させた。反応混合物を冷却後、水（２．９８ｍｌ
）と２Ｎ水酸化ナトリウム（２．９８ｍｌ）を順次加えた。１０分後に水（２．
９８ｍｌ）を再び加えた。形成された沈殿をブフナー漏斗で濾過し、濾液をロー
タリーエバポレーターで濃縮すると、１５−オクタデシルアミドペンタデカノー
ルが得られた。

【０１６６】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２６（ｍ，５４Ｈ，（ＣＨ_２）_２７），１．４３−１
．５９（ｍ，７Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−１４，Ｈ−１７及びバンドＮＨ），１．５−１
．６（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２及びＨ−１３），２．６０（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．５０Ｈ
ｚ，Ｈ−１５及びＨ−１６），３．６４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．８４Ｈｚ，Ｈ−１
）。

【０１６７】 ^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１４．４８（Ｃ−３３），２５
．３及び２６．３（Ｃ−２及びＣ−１４），２９．７２（（ＣＨ_２）_２７）），
５１．７（Ｃ−１５及びＣ−１６），６３．６（Ｃ−１）。

【０１６８】ｅ）Ｎ−［ベンジルオキシカルボニル］−１５−オクタデシルアミノペンタデ
カノールの合成前段階ｄ）で得られた１５−オクタデシルアミノペンタデカノール（１３．７
１ｇ；２７．６３ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（７．７ｍｌ；５５．２６ｍｍ
ｏｌ）の無水ジクロロメタン（１５０ｍｌ）溶液を０℃に冷却し、クロロギ酸ベ
ンジル７．８９ｍｌ（５５．２６ｍｍｏｌ）を滴下した。１０分後に混合物のｐ
Ｈを確認した。次に、反応混合物を一晩かけて周囲温度にした。次に、溶液を水
洗し、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ_４）で乾燥し、濃縮した。反応混合物をクロ
マトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔ６：４）により精製した。Ｎ−［ベンジ
ルオキシカルボニル］−１５−オクタデシルアミノペンタデカノールが得られた
（収率７０％）。

【０１６９】 ^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９
６Ｈｚ，Ｈ−３３），１．２６（ｍ，５４Ｈ，（ＣＨ_２）_２７），１．４３−１
．５９（ｍ，６Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−１４，Ｈ−１７），３．２０−３．２２（ｍ，
４Ｈ，Ｈ−１５及びＨ−１６），３．６４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．８４Ｈｚ，Ｈ−
１），５．１２（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ_２Ｐｈｅ），７．３４（ｍ，５Ｈ，Ｐｈｅ）
。

【０１７０】 ^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１４．４８（Ｃ−３３），２５
．８，２６．９及び３１．９４（Ｃ−２，Ｃ−１４及びＣ−１７），２９．７２
（（ＣＨ_２）_２７）），４７．２６−４８．０４（Ｃ−１５及びＣ−１６），６
３．０８（Ｃ−１），６６．７９（ＯＣＨ_２），１２８．４０（Ｐｈｅ）。

【０１７１】ｆ）１５−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）オクタデシルアミノ］ペンタ
デカニル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−デオキシ−β−Ｌ−カラクトピ
ラノシドの合成テトラアセチル化フコース１．５ｇ（４．５２ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリ
ル（５０ｍｌ）中で四塩化錫０．６３４ｍｌ（５．４２ｍｍｏｌ）と３０分間反
応させた。次に、前段階ｅ）で得られたＮ−［ベンジルオキシカルボニル］−１
５−オクタデシルアミノペンタデカノール３．１３２ｇ（４．９７ｍｍｏｌ）を
加えた。５時間後に反応混合物を抽出し、得られた生成物をクロマトグラフィー
（ヘプタン／酢酸エチル６：４）により精製した。収率は６９％であった。

【０１７２】 ^１ＨＮＭＲ：δ（ｐｐｍ）０．８７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，Ｈ−３
３），１．２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５１Ｈｚ，Ｈ−６），１．２５（ｍ，５４Ｈ
，（ＣＨ_２）_２７），１．５２（ｍ，６Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−１４及びＨ−
１７），１．９５，２．０５及び２．１５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＯＣＨ_３），３．１
４−３．２５（ｍ，４Ｈ，Ｈ−１５及びＨ−１６），３．４４（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６３（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．７９（ｍ，１Ｈ，
Ｈ−５），４．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９８Ｈｚ，Ｈ−１），４．９９（ｄｄ
，１Ｈ，Ｊ＝３．５２Ｈｚ及び１０．４６Ｈｚ，Ｈ−３），５．０９（ｓ，２Ｈ
，ＯＣＨ_２Ｐｈｅ），５．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９８Ｈｚ及び１０．４６
Ｈｚ，Ｈ−２），５．２３（ｄｄ，Ｊ＝３．５２Ｈｚ及び３．３１Ｈｚ，Ｈ−４
），７．３２（ｍ，５Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１７３】 ^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１４．６８（Ｃ−３３），１７
．３１（Ｃ−２），２０．７５（ＣＨ_３ＣＯＯ），２７．２９（Ｃ−６），２９
．７２（（ＣＨ_２）_２７）），２５．８９−３１．９８（ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｃ−
１４，Ｃ−１７），４７．２５−４８．０４（Ｃ−１５及びＣ−１６），６６．
９１（ＣＨ_２Ｐｈｅ），６９．６３（ＯＣＨ_２ＣＨ_２），６９．４５（Ｃ−２）
，７０．５７（Ｃ−５），７０．８５（Ｃ−４），７１．４４（Ｃ−３），９６
．２５（Ｃ−１），１２８．４３（Ｐｈｅ），１５６．２１及び１７１．３０（
ＣＯ）。

【０１７４】ｇ）１５−オクタデシルアミノペンタデカニル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチ
ル−６−デオキシ−β−Ｌ−カラクトピラノシドの合成前段階ｆ）で得られた１５−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）オクタデシ
ルアミノ］ペンタデカニル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−デオキシ−β
−Ｌ−カラクトピラノシド（２．７２ｇ；４．２３ｍｍｏｌ）のメタノール（１
００ｍｌ）溶液に水素加圧下に活性炭担持１０％パラジウム（０．５ｇ）を加え
た。反応は定量的であった。

【０１７５】 ^１ＨＮＭＲ：δ（ｐｐｍ）０．８７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，Ｈ−３
３），１．２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５１Ｈｚ，Ｈ−６），１．２５（ｍ，５４Ｈ
，（ＣＨ_２）_２７），１．５２（ｍ，６Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−１４及びＨ−
１７），１．８８−１．９３（バンドＮＨ），１．９５，２．０５及び２．１５
（ｓ，３Ｈ，ＯＣＯＣＨ_３），２．６４（ｍ，４Ｈ，Ｈ−１５及びＨ−１６），
３．４６（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２３），３．６３（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_ｂＣＨ _２），３．７９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５），４．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９８Ｈｚ
，Ｈ−１），４．９９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５２Ｈｚ及び１０．４６Ｈｚ，Ｈ
−３），５．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９８Ｈｚ及び１０．４６Ｈｚ，Ｈ−２
），５．２３（ｄｄ，Ｊ＝３．５２Ｈｚ及び３．３１Ｈｚ，Ｈ−４）。

【０１７６】 ^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１４．６８（Ｃ−３３），１７
．３１（Ｃ−２），２０．７５（ＣＨ_３ＣＯＯ），２７．２９（Ｃ−６），２９
．７２（（ＣＨ_２）_２７）），２５．８９−３１．９８（ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｃ−
１４，Ｃ−１７），４７．７５−４８．０４（Ｃ−１５及びＣ−１６），６９．
６３（ＯＣＨ_２ＣＨ_２），６９．４５（Ｃ−２），７０．５７（Ｃ−５），７０
．８５（Ｃ−４），７１．４４（Ｃ−３），９６．２５（Ｃ−１），１７１．３
０（ＣＯ）。

【０１７７】ｈ）（３−［４−（３−アミノプロピルアミノ）ブチルアミノプロピルベンジ
ルオキシカルボニルアミノ］メチレンカルバモイル）−１５−ペンタデカニル−
１６−オクタデカニル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−デオキシ−β−Ｌ
−カラクトピラノシドの合成前段階ｇ）で得られた化合物０．６０ｇ（０．９４ｍｍｏｌ）のクロロホルム
（１５ｍｌ）溶液にジイソプロピルアミン（０．４９１ｍｌ；２．８２ｍｍｏｌ
）、ＢＯＰ（０．４５７ｇ；１．０３ｍｍｏｌ）及び段階ａ）で得られた｛３−
［４−（３−ベンジルオキシカルボニルアミノプロピルベンジルオキシカルボニ
ルアミノ）ブチルベンジルオキシカルボニルアミノ］プロピルアミノ｝酢酸（０
．７４８ｇ；０．９４ｍｍｏｌ）を順次加えた。得られた油状物をクロマトグラ
フィー（ヘプタン／酢酸エチル４：６）により精製した。（３−［４−（３−ア
ミノプロピルアミノ）ブチルアミノプロピルベンジルオキシカルボニルアミノ］
メチレンカルバモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オクタデカニル２，３
，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−デオキシ−β−Ｌ−カラクトピラノシドが得ら
れた（収率４５％）。

【０１７８】 ^１ＨＮＭＲ：δ（ｐｐｍ）０．８７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，Ｈ−３
３），１．２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５１Ｈｚ，Ｈ−６），１．２４（ｍ，５４Ｈ
，（ＣＨ_２）_２７），１．３９−１．６７（ｍ，１５Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−
１４，Ｈ−１７，ＮＨ，ＣＨ_２），１．９５，２．０５及び２．１５（ｓ，３Ｈ
，ＯＣＯＣＨ_３），３．０５−３．３５（ｍ，１８Ｈ，Ｈ−１５，Ｈ−１６及びＣＨ_２Ｎ），３．４３（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_ａＣＨ_２），３．６７（ｍ，１Ｈ，Ｊ
＝６．７４Ｈｚ，ＯＣＨ_ｂＣＨ_２），３．７９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５），４．４１
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９８Ｈｚ，Ｈ−１），４．９９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５
２Ｈｚ及び１０．４６Ｈｚ，Ｈ−３），５．０５（ｓ，８Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），
５．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９８Ｈｚ及び１０．４６Ｈｚ，Ｈ−２），５．
２３（ｄｄ，Ｊ＝３．５２Ｈｚ及び３．３１Ｈｚ，Ｈ−４），５．４７（バンド
ＣＯＮＨ，１Ｈ），７．３２（ｍ，２０Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１７９】 ^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１４．６８（Ｃ−３３），２０
．７５（ＣＨ_３ＣＯＯ），２７．２９（Ｃ−６‘），２９．７２（（ＣＨ_２）_２ _７）），２５．８９−３１．９８（ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｃ−１４，Ｃ−１７及びＣ
Ｈ_２），３７．８７−４６．８７（Ｃ−１５，Ｃ−１６及びＣ−Ｎ），６６．８
４（ＣＨ_２Ｐｈｅ），６８．６３（ＯＣＨ_２ＣＨ_２），６９．４５（Ｃ−２），
７０．５７（Ｃ−５），７０．８５（Ｃ−４），７１．４４（Ｃ−３），９６．
２５（Ｃ−１），１２８．３１（Ｐｈｅ），１５７．０１及び１７１．３０（Ｃ
Ｏ）。

【０１８０】ｉ）１−［−（３−［４−（３−アミノプロピルアミノ）ブチルアミノプロピ
ルベンジルオキシカルボニルアミノ］メチレンカルバモイル）−１５−ペンタデ
カニル−１６−オクタデカニル６−デオキシ−β−Ｌ−カラクトピラノシドの合
成前段階ｈ）で得られた生成物（０．６０ｇ；０．９４ｍｍｏｌ）を含有するメ
タノール溶液（３ｍｌ）に飽和アンモニアメタノール溶液（１ｍｌ）を加えた。
１時間後に濃縮した。

【０１８１】 ^１ＨＮＭＲ：δ（ｐｐｍ）０．８７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，Ｈ−３
３），１．２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．５１Ｈｚ，Ｈ−６），１．２４（ｍ，５４Ｈ
，（ＣＨ_２）_２７），１．３９−１．６７（ｍ，１５Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−
１４，Ｈ−１７，ＮＨ，ＣＨ_２），３．０５−３．３５（ｍ，１８Ｈ，Ｈ−１５
，Ｈ−１６及びＣＨ_２Ｎ），３．４−３．７（ｍ，６Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−
３，Ｈ−４，Ｈ−５，Ｈ−２），４．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９８Ｈｚ，Ｈ−
１），５．０５（ｓ，８Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈｅ），５．４７（バンドＣＯＮＨ，１Ｈ
），７．３２（ｍ，２０Ｈ，Ｐｈｅ）。

【０１８２】ｊ）１−［−（３−［４−（３−アミノプロピルアミノ）ブチルアミノプロピ
ルアミノ］メチレンカルバモイル）−１５−ペンタデカニル−１６−オクタデカ
ニル６−デオキシ―β―Ｌ−ガラクトピラノシド（化合物３）の合成前段階ｉ）で得られた生成物（０．０７２ｇ；０．０５ｍｍｏｌ）の溶液にメ
タノール中炭素担持１０％パラジウム（０．０３２ｇ）を加えた。一晩後にガラ
ス繊維紙で濾過し、ロータリーエバポレーターで濃縮した。その後、生成物をＣ
−４型分取カラムでＨＰＬＣにより精製した。

【０１８３】 ^１ＨＮＭＲ：δ（ｐｐｍ）０．８７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，Ｈ−３
３），１．２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５１Ｈｚ，Ｈ−６），１．２４（ｍ，５４Ｈ
，（ＣＨ_２）_２７），１．３９−１．６７（ｍ，１５Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−
１４，Ｈ−１７，ＣＨ_２），２．９２−３．１９（ｍ，１８Ｈ，Ｈ−１５，Ｈ−
１６及びＣＨ_２Ｎ），３．４−３．７（ｍ，６Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２，Ｈ−３，Ｈ
−４，Ｈ−５，Ｈ−２），４．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９８Ｈｚ，Ｈ−１）。

【０１８４】Ｃ＼本発明の導入剤の使用実施例４：化合物２を用いた導入剤／核酸複合体の製造及びその寸法測定本実施例では本発明の導入剤と核酸の複合体を製造し、その後、その寸法を測
定した。

【０１８５】本実施例及び以下の実施例で使用した糖脂質は化合物２であり、クロロホルム
に濃度１０ｍｇ／ｍｌで溶かした。場合により、予め中性補助脂質（コレステロ
ール又はＤＯＰＥ）を化合物２に混合した。

【０１８６】脂質溶液は次のように調製した。所望量の試料を採取し、溶媒をアルゴン流下
に蒸発させ、１時間乾燥させる。次に、５％デキストロースと１０ｍＭ塩化ナト
リウムを含有する溶液で脂質を４℃で丸一晩再水和する。翌日、脂質溶液を５分
間６０℃に加温した後、１分間超音波にかける。脂質粒度が安定するまで操作を
繰り返す。

【０１８７】使用したＤＮＡはプラスミドｐＸＬ３０３１（図１）であり、５％デキストロ
ースと１０ｍＭ塩化ナトリウムの混合物に濃度０．５ｍｇ／ｍｌ又は１．０ｍｇ
／ｍｌで溶かした。このプラスミドはサイトメガロウイルスのＰ／ＥＣＭＶプ
ロモーターの制御下にルシフェラーゼをコードするｌｕｃ遺伝子を含む。その寸
法は３６７１ｂｐである。このプラスミドのスキームを図１に示す。プラスミド
ｐＸＬ３０３１は特許出願ＷＯ９７／３５００２に記載されている方法に従って
精製した。

【０１８８】（所望電荷比に応じて）適当な容量のプラスミドＤＮＡ溶液と化合物２を周囲
温度で迅速に混合することにより化合物２／ＤＮＡ複合体を調製した。トランス
フェクタント剤の量は０．２５ｎｍｏｌ／μｇＤＮＡ〜１２ｎｍｏｌ／μｇＤＮ
Ａとした。

【０１８９】ＣｏｕｌｔｅｒＮ４Ｐｌｕｓ装置を使用して動的レーザー光散乱により流体
力学的直径を測定することにより複合体の寸法を分析した。試料は５％デキスト
ロースと２０ｍＭ塩化ナトリウムを含有する溶液で２０倍に希釈し、多重拡散を
避けるようにした。

【０１９０】３ｎｍｏｌ脂質／μｇＤＮＡ比で以下の結果が得られた。

【０１９１】

【表１】

【０１９２】「ミセル」なる用語は中性補助脂質を加えずに化合物２を単独で使用したため
にミセル溶液を形成しているものを意味する。

【０１９３】上記表から明らかなように、得られた複合体は約１３０ｎｍ〜１５０ｎｍの寸
法であり、医薬用途、特に注射に適合可能である。

【０１９４】実施例５：種々の電荷比で化合物２から形成した複合体の挙動本実施例は電荷比を変えた場合の本発明の導入剤／核酸複合体の挙動を示す。
補助脂質（コレステロール又はＤＯＰＥ）添加の効果も示す。

【０１９５】一般に、導入剤／ＤＮＡ比を増すと、３種の物理化学相が区別される（Ｂ．Ｐ
ｉｔａｒｄら，Ｖｉｒｕｓ−ｓｉｚｅｄｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｉｎｇｌ
ａｍｅｌｌａｒｃｏｍｐｌｅｘｅｓｂｅｔｗｅｅｎｐｌａｓｍｉｄＤＮ
Ａａｎｄｃａｔｉｏｎｉｃｍｉｃｅｌｌｅｓｐｒｏｍｏｔｅｇｅｎｅ
ｔｒａｎｓｆｅｒ，ＰＮＡＳ，Ｖｏｌ．９４，ｐｐ．１４４１２−１４４１７
，１９９７）。これらの３相は導入剤の治療能を決定する。

【０１９６】電荷比が小さいと、ＤＮＡは導入剤により飽和されない。複合体化しないＤＮ
Ａが残り、複合体は総体的に負に帯電しており、小寸法である。この相は安定し
ており、「Ａ相」と呼ばれる。

【０１９７】ＤＮＡが導入剤により完全に飽和されないという事実は、ＤＮＡが完全に保護
されないことを意味する。従って、ＤＮＡはヌクレアーゼ分解を受ける可能性が
ある。また、複合体は総体的に負であるので、細胞膜通過は困難である。これら
の理由から、Ａ相の核脂質複合体は比較的不活性である。

【０１９８】中間の電荷比では、ＤＮＡは導入剤により完全に飽和され、複合体は総体的に
中性又は僅かに正である。この相はイオン反発が最小であり、凝集現象が生じる
可能性があるので不安定である。粒子寸法は動的レーザー光散乱による検出限界
を優に上回る（３μｍよりも著しく大きい）。この不安定な相は「Ｂ相」と呼ば
れる。複合体のこのような寸法は注射用に適していないが、これは複合体がＢ相
で不活性であるという意味ではなく、単に医薬目的では注射に適さない製剤形態
であるという意味である。

【０１９９】電荷比が高いと、ＤＮＡは導入剤により過飽和され、複合体は総体的に正とな
る。正電荷間の反発力が強いため、この相は安定している。この相は「Ｃ相」と
呼ばれる。Ａ相と異なり、得られる複合体はＤＮＡがヌクレアーゼに対して十分
に保護される形態であり、これらの複合体は総体的に正電荷であるため、アニオ
ン性細胞膜に固定してこの膜を通過し易い。従って、Ｃ相の複合体は核酸の細胞
導入用に特に適している。

【０２００】導入剤として本発明の化合物２を使用してこれらの３ゾーンＡ、Ｂ及びＣを調
べた。

【０２０１】

【表２】

【０２０２】上記表から明らかなように、不安定ゾーンであるＢゾーンは特に小さく、非常
に小さい電荷比に位置する。Ｃゾーンは化合物２を補助脂質（コレステロール又
はＤＯＰＥ）と併用する場合には脂質２ｎｍｏｌ／μｇＤＮＡから開始し、化合
物を単独使用する場合には脂質３ｎｍｏｌ／μｇＤＮＡから開始する。上述のよ
うに、医薬用途にはこのゾーンが特に有利である。

【０２０３】比較として、特許出願ＷＯ９７／１８１８５に開示されているカチオン脂質を
用いると、Ｃゾーンは溶液の塩化ナトリウム濃度に応じて少なくとも２以上の電
荷比で形成され始めることが示されている（Ｂ．Ｐｉｔａｒｄら，ＰＮＡＳＵ
ＳＡ，９４，ｐｐ．１４４１２−１４４１７，１９９７の図３Ａ参照）。

【０２０４】このように、化合物２は小さい電荷比で安定しているので特に有利な導入剤で
あり、少量の糖脂質と安定した複合体を形成することができ、毒性面で有益な効
果がある。

【０２０５】実施例６：ＤＮＡのｉｎｖｉｔｒｏ導入のための化合物２の使用本実施例は本発明の導入剤が中性補助脂質（コレステロール又はＤＯＰＥ）の
不在下及び存在下に種々の電荷比でＤＮＡを細胞にｉｎｖｉｔｒｏ導入できる
ことを示す。

【０２０６】２４ウェルマイクロプレートにＨｅＬａ細胞６００００個／ウェルを播種し、
一晩増殖させた。一晩後即ちトランスフェクション時の細胞数は１０００００個
／ウェルであった。化合物２から形成し、無血清ＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）０．５ｍｌ中
にプラスミドＤＮＡ１μｇを含む複合体と各ウェルを接触させた。細胞を３７℃
で５時間インキュベートした。その後、複合体を含む培地を捨て、１０％ウシ胎
児血清を加えたＤＭＥＭ培地に交換した。その後、細胞を再び２４時間培養した
。最後に、細胞を溶解し、ルシフェラーゼテストキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）とＤ
ｙｎｅｘＭＬＸルミノメーターを使用して試験した。

【０２０７】得られた結果を図２のヒストグラムに示す。導入効率はルシフェラーゼの発現
（ｐｇ／ウェル）により表す。最大トランスフェクションは約５００ｐｇ／ウェ
ルであることが認められる。

【０２０８】従って、ＤＮＡを細胞にｉｎｖｉｔｒｏ導入することが可能な複合体を形成
するために本発明の化合物２を使用できることが本実施例から明らかである。

【０２０９】実施例７：ＤＮＡのｉｎｖｉｖｏ導入のための化合物２の使用本実施例は本発明の導入剤がＤＮＡを細胞にｉｎｖｉｖｏ導入できることを
示す。

【０２１０】Ｂａｌｂ／Ｃマウスに気管内、静脈内及び筋肉内投与によりｉｎｖｉｖｏ遺
伝子導入した。

【０２１１】筋肉内注射の場合には、各マウスの前脛骨筋にプラスミドＤＮＡ１５μｇを含
有する製剤３０μｌを投与した。注射から７日後に組織を回収し、冷凍し、−８
０℃で保存し、ルシフェラーゼ活性試験まで待機した。

【０２１２】静脈内注射の場合には、各マウスにプラスミドＤＮＡ５０μｇを含有する製剤
２００μｌを投与した。注射から２４時間後に組織を回収した後、上記と同様に
冷凍保存した。

【０２１３】図３は化合物２から形成した複合体の筋肉内ｉｎｖｉｖｏ遺伝子導入活性を
示す。これらの結果は、本発明の化合物２とＤＮＡから複合体を形成すると前記
ＤＮＡを細胞にｉｎｖｉｖｏ導入できることを明示している。

【０２１４】同様に、任意型の組織の細胞にＤＮＡを導入するための本発明に記載する任意
導入剤を使用することができる。

【０２１５】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＤＮＡの細胞導入実験で使用したプラスミドｐＸＬ２７７４の模式図である。

【図２】補助脂質の不在下又は補助脂質としてコレステロールの存在下及びＤＯＰＥの存
在下に本発明の化合物２から形成した複合体のＨｅＬａ細胞へのｉｎｖｉｔｒ
ｏ遺伝子導入活性。縦軸はルシフェラーゼの発現（ｐｇ／ウェル）を示す。横軸
はトランスフェクタント剤／ＤＮＡ比（ｎｍｏｌ／μｇＤＮＡ）を示す。

【図３】ＤＯＰＥ（１：１）の存在下に本発明の化合物２から形成した複合体をマウス
前脛骨筋に直接注入後のｉｎｖｉｖｏ遺伝子導入活性。縦軸はルシフェラーゼ
の発現（ｐｇ／筋肉）を示す。横軸は化合物２／ＤＮＡ比（ｎｍｏｌ／μｇＤＮ
Ａ）を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＭ，ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＭＡ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者ジアコパン，クリストフフランス国、エフ−91700・サント・ジユヌビエブ・デ・ボワ、リユ・ドユ・ボア・デ・ロシユ、11 (72)発明者シエルマン，ダニエルフランス国、エフ−75012・パリ、リユ・エラール、10 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA08 AA20 CA01 EA10 GA11 4C084 AA03 AA13 BA44 DC23 MA56 MA63 MA66 NA10 ZC192 4C086 AA01 AA02 EA16 MA02 MA03 MA05 MA56 MA63 MA66 NA10 ZC19

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ポリカチオンと少なくとも１個の親水性置換基に化学的に結
合した疎水性スペーサーを含むことを特徴とする核酸導入剤。
【請求項２】前記疎水性スペーサーが各々異なる鎖長でもよい鎖当たり炭
素原子数１０〜２０の２もしくは３個の炭化水素直鎖脂肪鎖から構成されるか、
又は前記疎水性スペーサーが炭素原子数２０〜５０の非常に長い炭化水素直鎖脂
肪鎖から構成されることを特徴とする請求項１に記載の核酸導入剤。
【請求項３】親水性置換基がヒドロキシ基、アミノ基、ポリオール、糖又
は親水性ペプチドから選択されることを特徴とする請求項１に記載の核酸導入剤
。
【請求項４】親水性置換基の少なくとも１個が糖であることを特徴とする
請求項１又は３に記載の核酸導入剤。
【請求項５】存在する場合にはその異性体形態、混合物又は塩でもよい一
般式（Ｉ）：【化１】［式中、Ｒはポリカチオンを表し、Ｚは水素原子又はフッ素原子を表し、各Ｚは
相互に独立しており、ｘ及びｙは相互に独立して１０〜２２の整数を表し、Ｘ及
びＹは相互に独立して水素原子、−ＯＡｌｋ基（式中、Ａｌｋは炭素原子数１〜
４の直鎖又は分枝鎖アルキルを表す）、ヒドロキシ基、アミノ基、ポリオール、
糖、親水性もしくは非親水性ペプチド、又はオリゴヌクレオチドを表し、但し、
Ｘ及びＹ置換基の少なくとも一方はヒドロキシ、アミノ、ポリオール、糖又は親
水性ペプチドから選択される親水基を表し、あるいは、ｘは０又は１であり、ｙ
は２０〜５０の整数であり、Ｘは水素原子又は−ＯＡｌｋ基（式中、Ａｌｋは炭
素原子数１〜４の直鎖又は分枝鎖アルキルを表す）であり、Ｙはヒドロキシ、ア
ミノ、ポリオール、糖又は親水性ペプチドから選択される親水基である］の請求
項１に記載の核酸導入剤。
【請求項６】存在する場合にはその異性体形態、混合物又は塩でもよい一
般式（ＩＩＩ）：【化２】（式中、Ｒはポリカチオンを表し、ｘ及びｙは相互に独立して１０〜２２の整数
を表し、Ｘ及びＹは相互に独立して水素原子又は糖を表し、但し、Ｘ及びＹ置換
基の少なくとも一方は糖を表し、あるいは、ｘは０又は１であり、ｙは２０〜５
０の整数であり、Ｘは水素原子であり、Ｙは糖である）の請求項１又は５に記載
の核酸導入剤。
【請求項７】ｘ及びｙが相互に独立して１０〜２２の整数を表し、Ｘ及び
Ｙの一方が水素原子を表し、他方が糖を表すことを特徴とする請求項６に記載の
核酸導入剤。
【請求項８】前記ポリカチオンが直鎖又は分枝鎖ポリアミンであり、各ア
ミノ基が１個以上のメチレン基により分離されていることを特徴とする請求項１
及び５から７のいずれか一項に記載の核酸導入剤。
【請求項９】前記ポリカチオンが一般式（ＩＩ）：【化３】［式中、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は相互に独立して水素原子又は（ＣＨ_２）_ｑＮＲ’
Ｒ”基を表し、ｑはＲ_１、Ｒ_２及びＲ_３基の間で独立して１〜６の整数であり、
但し、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３の少なくとも１個は水素原子以外のものであり、Ｒ’
及びＲ”は相互に独立して水素原子又は（ＣＨ_２）_ｑＮＨ_２を表し、ｑは上記と
同義であり、ｍは１〜６の整数を表し、ｎ及びｐは相互に独立して０〜６の整数
を表し、但し、ｎが２以上であるとき、ｍは種々の値をとることができ、Ｒ_３は
一般式（ＩＩ）中で種々の意味をもち、ｎが０であるとき、Ｒ_１及びＲ_２置換基
の少なくとも一方は水素原子以外のものである］により表されることを特徴とす
る請求項８に記載の核酸導入剤。
【請求項１０】前記ポリカチオンがスペルミン、スペルミジン、カダベリ
ン、プトレシン、ヘキサメチレンテトラミン（ヘキサミン）、メタクリルアミド
プロピルトリメチルアンモニウムクロリド（ＡＭＢＴＡＣ）、３−アクリルアミ
ド−３−メチルブチルトリメチルアンモニウムクロリド（ＡＭＢＴＡＣ）、ポリ
ビニルアミン、ポリエチレンイミン又はイオネンから選択されることを特徴とす
る請求項１及び５から７のいずれか一項に記載の核酸導入剤。
【請求項１１】糖が単糖、オリゴ糖又は多糖であることを特徴とする請求
項３から７のいずれか一項に記載の核酸導入剤。
【請求項１２】前記糖がグルコース、マンノース、ラムノース、ガラクト
ース、フルクトース、マルトース、ラクトース、サッカロース、スクロース、フ
コース、セロビオース、アロース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、ソホ
ロース、メリビオース、デキストラン、α−アミロース、アミノペクチン、フル
クタン、マンナン、キシラン及びアラビナンから選択されることを特徴とする請
求項１１に記載の核酸導入剤。
【請求項１３】前記オリゴヌクレオチドが場合により異なる性質をもつ１
個以上の分子に結合した１個以上のヌクレオチド、デオキシヌクレオチド、リボ
ヌクレオチド及び／又はデオキシリボヌクレオチドを含む鎖であることを特徴と
する請求項５に記載の核酸導入剤。
【請求項１４】前記ペプチドがペプチド性結合により相互に結合した１個
以上のアミノ酸を含み、場合により飽和又は不飽和で直鎖、分枝鎖又は環式のい
ずれでもよい１個以上の脂肪族基で置換された鎖であることを特徴とする請求項
５に記載の核酸導入剤。
【請求項１５】式：【化４】の請求項１に記載の核酸導入剤。
【請求項１６】式：【化５】の請求項１に記載の核酸導入剤。
【請求項１７】式：【化６】の請求項１に記載の核酸導入剤。
【請求項１８】請求項１から１７のいずれか一項に記載の核酸導入剤と核
酸を含むことを特徴とする組成物。
【請求項１９】前記核酸がデオキシリボ核酸又はリボ核酸であることを特
徴とする請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】前記核酸が調節配列の制御下にある１個以上の治療遺伝子
を含むことを特徴とする請求項１８又は１９に記載の組成物。
【請求項２１】前記核酸がアンチセンス遺伝子又は配列であることを特徴
とする請求項１８から２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】１種以上のアジュバントを更に含むことを特徴とする請求
項１８に記載の組成物。
【請求項２３】アジュバントが１種以上の中性脂質であることを特徴とす
る請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】中性脂質が２個の脂肪鎖をもつ脂質であることを特徴とす
る請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】中性脂質が生理的条件下で両性イオン性であるか又はイオ
ン電荷をもたない天然又は合成脂質であり、例えばジオレオイルホスファチジル
エタノールアミン（ＤＯＰＥ）、オレイルパルミトイルホスファチジルエタノー
ルアミン（ＰＯＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジパ
ルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエ
タノールアミン及びその１〜３倍Ｎ−メチル化された誘導体、ホスファチジルグ
リセロール、ジアシルグリセロール、グリコシルジアシルグリセロール、セレブ
ロシド（例えば特にガラクトセレブロシド）、スフィンゴ脂質（例えば特にスフ
ィンゴミエリン）又はアシアロガンガリオシド（例えば特にアシアロＧＭ１及び
ＧＭ２）から選択されることを特徴とする請求項２３又は２４に記載の組成物。
【請求項２６】前記アジュバントが核酸の縮合に直接又は間接的に関与す
る化合物であることを特徴とする請求項２２に記載の組成物。
【請求項２７】前記アジュバントが、全部又は一部がプロタミン、ヒスト
ン又はヌクレオリン及び／又はその誘導体から誘導されるか、あるいは全部又は
一部が単位数２〜１０で連続又は不連続に反復するペプチド単位（ＫＴＰＫＫＡ
ＫＫＰ）及び／又は（ＡＴＰＡＫＫＡＡ）から構成されることを特徴とする請求
項２６に記載の組成物。
【請求項２８】注射用製剤として医薬的に許容可能なキャリヤーを含むこ
とを特徴とする請求項１８から２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】皮膚及び／又は粘膜投与に医薬的に許容可能なキャリヤー
を含むことを特徴とする請求項１８から２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】疾病治療用医薬を製造するための請求項１から１７のいず
れか一項に記載の核酸導入剤の使用。
【請求項３１】（１）請求項１から１７のいずれか一項に記載の核酸導入
剤と核酸を接触させて、複合体を形成する段階と、（２）段階（１）で形成された複合体とヒト又は動物の細胞を接触させる段階を
含むヒト又は動物の治療方法。
【請求項３２】（１）前記核酸導入剤と核酸を接触させて、複合体を形成
する段階と、（２）段階（１）で形成された複合体と細胞を接触させる段階を含むことを特徴
とする核酸の細胞導入方法。
【請求項３３】前記核酸導入剤及び／又は前記核酸を請求項２２から２７
のいずれか一項に記載の１種以上のアジュバントと予め混合することを特徴とす
る請求項３１又は３２に記載の核酸の細胞導入方法。