JP2000189195A - クレアチンキナ―ゼ検出用の液状試薬 - Google Patents
クレアチンキナ―ゼ検出用の液状試薬Info
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Abstract
期間安定であり、簡単な作業で各検出を実施できる、ク
レアチンキナーゼ活性検出用の液状試薬を提供する。 【解決手段】 試薬を2つの試薬成分に分割し、混合し
て検出に供するようにしたクレアチンキナーゼ活性検出
用液状試薬において、G6PDHを1つの成分中に含
み、チオグリセロールを少なくとも1つの他の物質と共
に他の成分に含ませて構成する。
Description
念に属する液状試薬に関する。
ホスホクレアチン(クレアチンリン酸)へのクレアチン
のATP依存のリン酸化を触媒する(順逆反応)。クレ
アチンキナーゼは、身体中に、特に、脳、心筋及び骨格
筋系中に存在する。心筋の高いクレアチンキナーゼ値
は、心筋梗塞時に現れ、骨格筋系の高いクレアチンキナ
ーゼ値は、筋疾患(例えば、筋萎縮症)を示唆する。腎
不全は、血清中のクレアチンキナーゼ活性の増加を伴
う。
重要な臨床検査パラメータであり、ルーチンに測定され
る。
は、下記反応式に基づき作用する:
340nm における吸収測定によってNAD(P)H含量を
介して間接的に求める。
ナーゼを検出するための従来の液状試薬は、必要な基
質、共基質及び酵素を含み、場合によっては更に、例え
ば、安定化又は殺菌を行う物質、などを含む。多くの場
合、貯蔵中に不測な酵素分解反応が進行することのない
ように、検出反応に必要な試薬は、2つの別個の試薬成
分に分割する。検出のため、反応成分を相互に混合して
液状試薬(テスト試薬)を形成し、次いで始めて、被検
試料のクレアチンキナーゼ活性に依存して検出反応が始
まる。
のクレアチンキナーゼ活性テストの基礎である。
ば、血清中では、比較的急速に不活性となるという問題
がある。したがって、上述の種類の液状試薬は、クレア
チンキナーゼの活性化剤を含む。活性化剤としては、S
H基を含む成分、標準的には、N−アセチルシステイン
(以下、NACと略す)を使用する。なぜならば、NA
Cは、凍結乾燥に適するからである。
で使用される活性化剤として評価されているに過ぎない
(Morin,CLINICAL CHEMISTRY, Vol.23,No.9,
1997年9月,p1569−1575)。特に、活性化剤としての
NACの効果は、長期間の貯蔵後、阻害剤の形成によっ
て減少することが判明しており、したがって、NACを
含む公知の多くの検出系には、NAC安定化のための特
殊な物質を添加する。
比して明らかに高い活性化能及び貯蔵安定性が認められ
る他の活性化剤、特に、チオグリセロールが推奨されて
いる。
アチンキナーゼ検出のための液状試薬におけるチオグリ
セロールの使用にも、特に、安定性に関して、問題がな
いわけではないということが判った。
液状試薬に、主として別個に使用される。即ち、例え
ば、ドイツ特許DE3138602号には、2つの試薬
成分を含み、その1つの試薬成分が、本質的に、チオグ
リセロール・緩衝剤である液状試薬が開示されている。
この成分中に、チオグリセロールは、活性化剤として添
加されている訳ではない。チオグリセロールを含む試薬
成分は、白濁排除のため、本来の分析前に試料に添加す
る。次いで、透明化試料を、本来の検出試薬を含む第2
試薬成分と混合する。
主成分としてチオグリセロールを含み、活性化溶液とし
て役立つ液状試薬が記載されている。検出に必要な残余
の物質は、他の試薬成分に含まれている。上述の液状試
薬の場合、チオグリセロールの安定性を改善できる。も
ちろん、添加成分によって(一般に、公知の液状試薬
は、合計3つの別個の成分からなる)、取扱いが困難と
なる。
課題は、活性化剤としてチオグリセロールを含み、長期
間安定であり、簡単な作業で各検出を実施できる、冒頭
に述べた種類の液状試薬を創成することにある。
特徴記載部分に開示の特徴を有する試薬によって解決さ
れる。
ナーゼ活性の検出のための液状試薬が得られる:グルコ
ース−6−リン酸デヒドロゲナーゼ(以下、G6PDH
と略す)、ヘキソキナーゼ、ホスホクレアチン、グルコ
ース、ADP、NAD(P)及びチオグリセロール。こ
の場合、チオグリセロール及び少なくとも1つの他の物
質が1つの成分に含まれ、G6PDH及び場合による残
余の物質が他の試薬成分に含まれるように、本発明に基
づき、物質を2つの別個の試薬成分に分割する。
の物質、例えば、NAD(P)、グルコース、ヘキソキ
ナーゼ、ADP、AMP又はMGと、G6PDHとを本
発明に基づき分離することによって、双方の試薬成分、
即ち、液状試薬の貯蔵安定性を総合して有意に向上でき
るということが判った。
した。
干の物質の安定性がpH値に依存するということを考慮
して、本発明の他の実施の形態に基づき、試薬成分は、
異なるpH値を有する。物質を各成分に対応して分割し
た場合、かくして、貯蔵安定性が最適化される。
0.0の範囲の弱塩基性pH値(20℃において測定)に調
整し、一方、他の試薬成分は、5.5 から7.0 の範囲の弱
酸性pH値を有する。本発明の他の実施の形態に基づ
き、G6PDH及び/又はADPを弱塩基性試薬成分に
添加するのが有利である。なぜならば、上記物質は、よ
り高いpH値においてより安定であるからである。
(テスト試薬)のpH値が約6.0 −7.0 、特に、6.5 に
なるよう、試薬成分のpH値及び混合量比を選択するの
が好ましい。
つのpK値が8.0 から10.0の範囲のpH値にあり、他の
pK値が約5.5 から7.0 の範囲のpH値にある両イオン
性緩衝剤(zwitterionischer Puffer )を添加すれば、
特に有利である。貯蔵中、上記緩衝剤は、試薬成分を塩
基性pH値に調整し、他の試薬成分との混合後、6.0−
7.0 、特に、6.5 の所望のpH値に調整する。上述のp
H値の範囲にあるpK値を有する両イオン性緩衝剤、例
えば、ビス−トリスプロパン緩衝剤を使用すれば、従来
の緩衝剤を使用した場合に比して緩衝剤量を減少でき
る。
ス及びNAD(P)の存在下で、不測の応答を示すとい
うことが判明した。したがって、本発明の有利な実施の
形態に基づき、3つの上記物質は、1つの試薬成分に同
時には導入しない。
関する。チオグリセロールの場合、酵素及びSH結合の
安定化に従来使用されているタンパク質、例えば、BS
A又はゼラチンは、寧ろ、安定性の低下を招く。したが
って、タンパク質の代わりに、補助酵素(ヘキソキナー
ゼ及びG6PDH)の安定性を保持し、チオグリセロー
ルを分解する成分を含んでいない糖誘導体、例えば、マ
ンニトール又はポリエチレングリコール6000又は登録商
品名Synperonic として得られる長鎖アルキル化合物を
添加するのが好ましい。
ナーゼが安定化されるということが判明した。したがっ
て、1つの試薬成分中に上記双方の物質を導入するのが
好ましい。
酸化防止剤としてのEDTA,NaN3 及び殺菌添加剤
としてのゲンタマイシン・硫酸塩を含むことができる。
更に、アデニル酸キナーゼの競合阻害剤として、偽の肯
定的な信号の危険性を減少するのに役立つAMP及びA
P5 Aを添加できる。更に、ADPと共に前駆錯体を形
成し、かくして、クレアチンキナーゼの活性を増大する
酢酸マグネシウムを添加できる。
に、G6PDHの安定化のためのタンパク質、例えば、
ゼラチン又はBSAを添加できる。
使用に限定されるものではない。更に、他の活性化剤、
例えば、冒頭に述べたNACを添加することもできる。
えば、下記組成を有することができる。
成分1+1部の試薬成分2)で、相互に混合して、テス
ト試薬を形成する。
い実施の形態に関する。もちろん、本発明は、より少数
の物質又は他の物質、例えば、他の緩衝剤又は安定化剤
などを含む他の組成にも及ぶものである。
Claims (7)
- 【請求項1】 少なくとも下記物質;即ち、G6PD
H、ヘキソキナーゼ、ホスホクレアチン、グルコース、
ADP、NAD(P)及びチオグリセロールを含む、ク
レアチンキナーゼ活性検出用の液状試薬であって、物質
が、2つの別個の試薬成分に分割されており、検出のた
めに試薬成分を相互に混合する形式のものにおいて、G
6PDHが、1つの成分中に含まれており、チオグリセ
ロールが、少なくとも1つの他の物質とともに他の成分
に含まれていることを特徴とする試薬。 - 【請求項2】 1つの試薬成分が、5.5 から7.0 の範囲
の弱酸性のpH値に調整されており、他の成分が、8.0
から10.0の範囲の弱塩基性のpH値に調整されているこ
とを特徴とする請求項1に係る試薬。 - 【請求項3】 成分混合後に、テスト試薬中に6.0 から
7.0 の範囲、特に、約6.5 のpH値が生ずるように、試
薬成分の混合量比及びpH値が選択されていることを特
徴とする請求項2に係る試薬。 - 【請求項4】 塩基性試薬成分中には、1つのpK値が
8.0 から10.0の範囲のpH値にあり、他のpK値が5.5
から7.0 の範囲のpH値にある両イオン性緩衝剤が含ま
れていることを特徴とする請求項2又は3に係る試薬。 - 【請求項5】 G6PDH及びADPが、塩基性pH値
を有する成分中に含まれていることを特徴とする請求項
2〜4のいずれか1項に係る試薬。 - 【請求項6】 NAD(P)、グルコース及びG6PD
Hが、1つの成分中に同時には含まれていないことを特
徴とする請求項1〜5のいずれか1項に係る試薬。 - 【請求項7】 グルコース及びヘキソキナーゼが、1つ
の試薬成分中に含まれていることを特徴とする請求項1
〜6のいずれか1項に係る試薬。
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH10215895A (ja) * | 1997-02-11 | 1998-08-18 | Internatl Reagents Corp | クレアチンホスホキナーゼ活性の測定方法及び試薬 |
JPH10327895A (ja) * | 1997-06-04 | 1998-12-15 | Nippon Shoji Kk | 安定なクレアチンキナーゼ活性測定用液状試薬 |
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---|---|---|---|---|
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH10215895A (ja) * | 1997-02-11 | 1998-08-18 | Internatl Reagents Corp | クレアチンホスホキナーゼ活性の測定方法及び試薬 |
JPH10327895A (ja) * | 1997-06-04 | 1998-12-15 | Nippon Shoji Kk | 安定なクレアチンキナーゼ活性測定用液状試薬 |
JP2000032980A (ja) * | 1998-07-17 | 2000-02-02 | Toyobo Co Ltd | グルコース−6−リン酸デヒドロゲナーゼの安定化方法およびグルコース−6−リン酸デヒドロゲナーゼ含有組成物 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011126036A1 (ja) * | 2010-03-31 | 2011-10-13 | 株式会社シノテスト | クレアチンキナーゼ活性の測定試薬 |
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