JPS5985290A - 安定なクレアチンアミジノヒドロラーゼ製剤 - Google Patents

安定なクレアチンアミジノヒドロラーゼ製剤

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JPS5985290A
JPS5985290A JP57194917A JP19491782A JPS5985290A JP S5985290 A JPS5985290 A JP S5985290A JP 57194917 A JP57194917 A JP 57194917A JP 19491782 A JP19491782 A JP 19491782A JP S5985290 A JPS5985290 A JP S5985290A
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Japan
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amidinohydrolase
cleatine
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stable
stabilizer
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JP57194917A
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Sachiko Yamaguchi
山口 佐知子
Yasuo Iwaki
岩城 康雄
Yuzo Hayashi
林 勇藏
Noboru Mitsuhida
光飛田 登
Minoru Ando
實 安藤
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Toyobo Co Ltd
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Toyobo Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、クレアチンアミジノヒドロラーゼ(以ドCA
Hと略記)を安定な状態で含有するC^■製剤に関する
ものである。
クレアチンは飢餓、熱疾思、腎疾患、筋肉疾患、甲状腺
機能丸進症等の発病に際して、又は妊娠等に際して尿中
に出現するアミノ醜であり、又りL・アチニンは尿のi
lE ’M成分であるが、正常人の1[しkりの排出殖
はほぼ一定とされている。従ってクレアチンやクレアチ
ニンの体液濃度を測定することは、臨床検査において重
要な指標を与えるものと考えられており、これらの”)
i’ li分析に供されるC A II製剤は重要な診
断用n+f素剤之しての位置を占めている・ 従来CA Hは、他の酵素との共役、あるいはfヒ学的
測定法との組合わせによって分析に供されてきたが、例
えばピクリン酸を用いる化学的11111定J):より
も、特異性の高い酵素法との組合わけによる測定法が注
目される様になってきている。即ち後・・・(1) クレアチン+1120−−−−テヅルコシン+尿素・・
・(2) の反応によって、クレアチニンをり1/アヂンとし、更
にクレアチンをザルコシンと尿素に分解し、生成したザ
ルコシンと尿素を、更に他の酵素と組合わせるか、ある
いは化学的なノJ訪どM1合わせて測定し、目的とする
りし・アチニン及びクレアチンを定量するものであって
、C、A IIはこの方法において重要な役割を果して
いる。
しかしなからCA Hを溶液状態で保存しておくと、保
存中に著しい変性が進んで濁りを発生することもあり、
711+1定精度に重大な悪影響を及ぼすという問題が
あった。
本発明名副はこの様な事情を憂慮し、CA Hを含有す
る酵素製剤の安定化について種々検器した結里、以ト述
べる様な組成からなる酵素製剤とすれば、CAIIを溶
液状で保存しても前述の様な変性つ用りが生じないこと
を見出し、本発明を完成するに奎った。即ち本発明のC
A H製剤とは、CA Hを必須成分として含有する他
、HLB 14以1−o)Jlイオン性界面活性剤、キ
し・−1・止剤及び防腐剤より成る群から選択される1
種以1−(以ドこれらを総称して安定化剤と述べる)を
含(jさけた点に要旨が合孔するものである。
未明細rI:にいうCA H・とは、その起■(を問わ
ず全て安定fヒの対象となるが、特に繁用されるのは、
シュードモナス属やフラボバクテリウド屈等に属する微
生物起源のCAHである。そして本発明におけるC A
 H製剤とは、1−述の如きCA Hを中独で含有する
ものに限定されず、他の物質、例えばクレアチニンやり
し・アチンの定甲に必要な酵素並ひに補酵素、更には〕
^質、〕4これらの安定化に必要な安定剤成分等を含有
するものを総称する。尚CAH製剤は溶液状及び乾燥粉
末状等任意の状態で提供されるものを含むものとする。
ところで未発1す1で用いられる前記安定化剤のうちも
っとも代表的なものは、HLB 14以りの非イオン性
界面活性剤(以FAA剤という)である。該AA剤とし
ては、HLI3が14以−にであるごと、獲りに非イオ
ン性であることの2+件を満足するものである限り、構
造式その他については全く制限がなく色々のものを使用
することができるが、代表的なAA剤を例示すると、ポ
リオキシエチレンアルギルフェニルエーテル、ポリオキ
シニブ−し・ンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシ
ニブ1.・ンアシルエステル等が挙げられ、これらにお
けるアルキルとしては、炭素数7以−1,のアルキル、
例えばオクチル1.ノニル、ラウリル零が例示される。
又キレ−1・止剤としては、−煎・的な金属ヤレート止
剤が使用され、金属イオンを捕捉して不活性化できるも
のである限りその種類を問わないが代表的なものとして
は、エチレンジアミン4酢酎並ひにその塩が例示される
。又防腐剤としては、酵素製剤中に混入される微生物に
よるC A II等の変質を防止する機能があればよく
、微生物に対する静閑的−°戊は殺菌曽作用を有するも
の・ あるいは微生物の活性を不活化するものである限
りどの様なものを用いても良いが、特に代表的なものを
挙げると:アジ化物、抗生物質、サルファ剤、はう酪、
有@酸等を例示することができる。
riij述の様な安定化剤の配合割合は、安定化作用の
強弱、或は安定止剤自体の化学的安定性、更には1.記
各安定1ヒ剤の併用等を考慮して定めれば良いが、−・
般的な目安を述べると、CAH100中位゛1ウリ0.
01〜1000mgの範囲から選択すれば確実な効果が
得られる。
1、叫安定止剤を含有するC A H酵素製剤を得るに
当っては、CA H,1独もしくはCAHに他の酵素、
補酵素、基質等の併用剤を配合して溶液を調製するJ工
程、該溶液に上記安定化剤を添加混合する1:程、並び
に必要であれば該溶液を乾燥する1程を組み合わせるが
、最初に述べたC A II溶液の調製に際しては、適
切な緩Wli液を選択し、CA H濃度を1〜500m
M、pl+を6.5〜9.0程度に設定することが望ま
れる。次に安定化剤の諾加混合に71うっては、L記C
A II溶液に安’ii’ 4ヒ剤粉末を直接配合する
か、該粉末をいったん木あるいは緩衝液に分散乃至溶解
してから添加し、常法に従って1¥1拌する。最後に、
この11以合液を乾燥させたいときは、凍結乾燥や噴霜
乾燥等の當用丁段を利用すれば良い。
本発明のCAH製剤は1記の様に構成されているので、
粉末状あるいは溶液状の如何を問わ□ず、CA Hの活
性を長期に耳って保持することかでさ、クレアチンやク
レアチニンの用足精度に対する信頼性を高度にMt持で
きる様になり、極めて!■川な診断用酵素製剤が提供さ
れることとなった。
次に本発明の詳細な説明するが、実施例におりる酵素活
性の測定はド記に従った。
(A)試薬組成 (1)ノ、(質溶液・ 0.1Mクレアチン溶IC′f
[クレアチンを0.05rV1t/i酸緩梗1液(pH
7,5)に溶#] (2) NaOH溶液:lN水酸化すトリウム水溶液(
3)発色液:1%ピクリン酸溶液 CB)測定方法 基質溶液0.9 mlに酵素溶液0.1 mlを加え3
7°Cで10分間反応させた。反応液0.1m1を採取
して冷水0.9 mlに加え、反応を停、11さけた。
次にNa01l溶液1ml及び発色液Im1を加え、室
温で20分間放置し7、酵素反応て生じたり1.・アチ
ンを発色さUた。この発色を、520 nmにおける吸
光度で測定し、酵素力価を求めた。尚酵素力価の表示は
、1−記榮什のドで1分間に1μモルのりし・アデニン
を生成する醇素埴を1単(1’7とした。
害」1胆 シュードモナス属に属する微生物がら111られたC 
A I(を用い、0.05M燐酸緩衝液(pl+ 7.
5)ニ、2゜rri位/mlとなる様に溶解した。この
溶液に、第1表の各化合物を加え、必要があればpH7
,5に(す調ヤした。得られた1lIy素製剤溶液を第
1表に示す条f1で保存し、渇りの発41=を6EIO
nmにお(jろ吸光度で測定したところ、i1表に併記
する結果が得られた。
第1表から明白な様に、HLB 14以1のAA剤、t
レート止剤及び防腐剤を添加したものは、7蜀りの発生
が少なかったが、それ以夕1のものは著しいハ:1りが
発生した。
丈」1性名 ド記組成からなる酵木製剤を調製した。
CAH(シュードモナス属起源) 20Ocrt位ザル
コンンオキシダーゼ(コリネ へクテリウム属起源)30中位 すルムアルデヒドテヒドロゲナー セ゛(ンユードモナスIバ起源) 3中(?2NAD 
            7.2  Bポリオキシエチ
レンオレイルニー チル(IILB IEi、2)       10  
m、gアジ化チトリウム        to  BE
DTA・2Na         to  mgl、記
製剤を、0.05M燐酸緩衝液(pH7,5)に溶角1
1′シ、全;配を10m1にした。
・力1.記製剤から、ポリオキシエチレンオレイルエー
テル、アジ化テトリウム及びEDTA−2Naを除いた
比較製剤を調製し、同様に0.05M燐酸緩衝液(pl
(7,5)に溶解し、全早を10m1にしt−0 これらに−)いて、調製直後、及び25°Cで511間
保存後に、夫々1mlを採取し、定損試験を行な−った
。即ち酵素製剤1mlに、クレアチンを含む検体50用
立を添加し、37°Cで10分間反応させた。そして検
体中のクレアチン早に1もして変化したN A D 量
を、340 nmの吸光度(NADH)変化によって測
定し、検体中のクレアチン早を求めた。
一方−ノー記酵素製剤からCA Hを除いたものを対照
用製剤として同様に操作し、検体のブランク値を求め1
記A11l定値との差から真の々レアギーン7いを求め
た(第2表)。
第2表に見られる如く、安定化剤の添加された実施例で
は調製直後も保存後もほぼ同様の結果をIjえたが、安
定化剤の添加されていない比較例では、1y存後のAl
l+定が実質−1,不可能であり、安定化剤を添加する
ことの効果(保存安定性)が確認された。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. クレアヂンアミジノヒドロラーを含有し、更に′III
    、B 14以1.の非イオン性界面活性剤、ギレート化
    剤及び防腐剤より成る群から選択される1種以上を含有
    させてなることを特徴とする安定なりレアチンアミジノ
    ヒドロラーゼl 剤。
JP57194917A 1982-11-06 1982-11-06 安定なクレアチンアミジノヒドロラーゼ製剤 Granted JPS5985290A (ja)

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