CN105002264B

CN105002264B - 一种总胆汁酸测定试剂盒

Info

Publication number: CN105002264B
Application number: CN201510451151.3A
Authority: CN
Inventors: 岳彩琴
Original assignee: Zhongsheng Beikong Biological Science & Technology Co Ltd
Current assignee: Zhongsheng Beikong Biological Science & Technology Co Ltd
Priority date: 2015-07-28
Filing date: 2015-07-28
Publication date: 2017-12-15
Anticipated expiration: 2035-07-28
Also published as: CN105002264A

Abstract

本发明提供了一种总胆汁酸测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂A和试剂B，其中，试剂A的组成成分包括：Thio‑NAD、缓冲液A、表面活性剂和稳定剂A；试剂B的组成成分包括：3α‑HSD、还原型辅酶Ⅰ、表面活性剂、缓冲液B和稳定剂B；通过上述技术方案，本发明所提供的总胆汁酸测定试剂盒2‑8℃开盖使用状态，稳定时间可以达到20‑30天，在2‑8℃密闭避光存储过程中的稳定时间可以达到10‑15个月。

Description

一种总胆汁酸测定试剂盒

技术领域

本发明涉及生化检测领域，具体的，涉及一种总胆汁酸测定试剂盒。

背景技术

1974年挪威科明公司采用提纯的3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)成功地生产出第一代胆汁酸酶法试剂，使胆汁酸的测定真正进入临床领域。此后，挪威科明和日本第一化学将第一代试剂改进试剂组分，采用启动试剂，发展了第二代胆汁酸测定试剂，之后，日本第一化学从假单胞菌属中提纯出的3-氧-5β-类甾醇-^△4脱氢酶(^△4DH)与3α-HSD偶联开发出第三代胆汁酸测定试剂盒。

中国专利CN1281983申请公开了一种血清总胆汁酸测定试剂，该试剂是由含有硝基四氮唑蓝、氧化型辅酶Ⅰ、黄递酶、丙酮酸钠、磷酸盐的缓冲液构成的试剂Ⅰ；和由含有3α-HSD、人血清白蛋白、EDTA、磷酸盐缓冲液的溶液构成的试剂Ⅱ组成。其测试原理是利用3α-HSD，黄递酶将胆汁酸分子脱下的氢传递到硝基四氮唑蓝，后者还原后生成蓝色的化合物，供比色检测分析。该专利中提供的试剂，采用黄递酶和硝基四氮唑蓝组合，易污染比色杯及堵塞生化分析仪管道，其测定灵敏度也偏低，受血液中还原性物质及酶类的干扰严重；且试剂为冻干粉制剂，试剂复溶后的稳定时间短，临床使用不方便。

中国专利申请CN1378077A公开了一种总胆汁酸测定方法和测定试剂，提供了一种总胆汁酸测定的方法即酶循环法，其反应原理是利用3α-HSD和硫代氧化型辅酶(Thio-NAD)特异性氧化胆汁酸，生成3-酮类固醇和还原性硫代氧化型辅酶(Thio-NADH)；在3α-HSD存在的条件下，3-酮类固醇和还原型辅酶Ⅰ(NADH)又生成胆汁酸和氧化型辅酶(NAD)每一次循环比原来的反应提高一倍的灵敏度，如此往复循环，从而放大微量的胆汁酸，产生大量的水溶性非染料的硫代还原型辅酶Ⅰ(Thio-NADH)，最后测定生成的Thio-NADH的吸光度变化，测得胆汁酸的含量。

该发明使用方便、消除干扰明显、灵敏度高，对生化仪器管道无污染，使其在胆汁酸的准确、快速测定中有重要的意义。该发明中提供的试剂，在2-8℃开盖使用状态下，试剂稳定的时间较短；在2-8℃度密闭避光存储的过程中，试剂稳定性不理想，随着放置时间的延长，反应度会下降，试剂颜色由无色或淡黄色逐渐变成红色。

因此有必要开发一种新的具有良好稳定性和检测准确性的总胆汁酸测定试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于克服现有的总胆汁酸测定试剂存在的稳定性差的缺陷，提供一种在2-8℃开盖使用状态下和在2-8℃度密闭避光存储条件下持续稳定的总胆汁酸测定试剂盒。

为达到以上目的，本发明提供了一种总胆汁酸测定试剂盒，所述试剂盒包括剂A和试剂B，其中，试剂A的组成成分包括：Thio-NAD、缓冲液A、表面活性剂和稳定剂A；试剂B的组成成分包括：3α-HSD、还原型辅酶Ⅰ、表面活性剂、缓冲液B和稳定剂B；

其中，所述缓冲液A选自由磷酸盐缓冲液、焦磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸盐缓冲液、醋酸缓冲液、2-N-吗啡乙磺酸缓冲液、咪唑缓冲液所组成的组中的一种；

所述缓冲液B选自由2-(环己胺)乙磺酸缓冲液、3-(环己胺)-1-丙磺酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸缓冲液、N-三(羟甲基)-3-氨基丙烷磺酸缓冲液、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸缓冲液和三乙醇胺缓冲液所组成的组中的一种。

可选的，所述表面活性剂选自由聚氧乙烯十二烷基醚、聚乙二醇对异辛基苯基醚、聚乙二醇单月桂酸酯、4-壬基苯基-聚乙二醇、烷基聚烯烃基乙二醇醚和烷基聚乙烯乙二醇醚所组成的组中的一种或两种；所述稳定剂A选自由NaCl、KCl、MgCl₂、EDTA.2Na和EDTA.2K所组成的组中的一种或多种。

可选的，所述稳定剂B选自半胱氨酸、L-还原型谷胱甘肽、L-氧化型谷胱甘肽、L-氧化型谷胱甘肽二钠盐、巯基乙醇、腺苷酸、鸟苷酸、胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺苷5'-二磷酸钠盐、腺苷5'-二磷酸钾盐、腺苷-3',5'-环单磷酸钠盐、鸟苷-3',5'-环单磷酸钠盐、鸟嘌呤核苷-5'-二磷酸二钠、胞嘧啶核苷酸二钠、尿苷二磷酸二钠和牛血清白蛋白所组成的组中的一种或多种。

可选的，在所述试剂A中，Thio-NAD的浓度为0.01-10mmol/L，优选为0.5-5mmol/L；缓冲液A的终浓度为5-500mmol/L，优选为10-100mmol/L；表面活性剂的浓度按质量体积百分含量计为0.05-20％，优选为2-10％；稳定剂A的浓度为0.1-20g/L，优选为1-10g/L。

可选的，在所述试剂B中，3α-HSD的浓度为0.5-100KU/L，优选为5-20KU/L；还原型辅酶Ⅰ的浓度为0.01-10g/L，优选为0.5-6g/L；缓冲液B的终浓度为5-500mmol/L，优选为10-100mmol/L；表面活性剂的浓度以质量体积百分含量计为0.05-20％，优选为1-15％；稳定剂B的浓度为1-20g/L，优选为3-15g/L。

可选的，所述试剂A的pH为3.0-5.5，试剂B的pH为8.5-10.0。

可选的，缓冲液A为甘氨酸缓冲液和2-N-吗啡乙磺酸中的至少一种；表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚和聚乙二醇对异辛基苯基醚中的至少一种；稳定剂A为MgCl₂和EDTA.2Na中的至少一种；

可选的，所述缓冲液B为N-三(羟甲基)-3-氨基丙烷磺酸或3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸，所述稳定剂B为腺苷-3’,5’-环单磷酸钠盐、鸟苷-3’,5’-环单磷酸钠盐和半胱氨酸中的至少一种。

可选的，所述试剂盒还包括校准品，所述校准品的组成成分包括基质、纯品及稳定剂C；其中，所述基质为缓冲液A、缓冲液B、人血清、牛血清、牛血清白蛋白中的一种或多种；所述纯品为胆酸钠、脱氧胆酸钠、鹅脱氧胆酸钠、甘氨胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钠、甘氨鹅脱氧胆酸钠、牛黄胆酸钠、牛黄脱氧胆酸钠和牛黄鹅脱氧胆酸钠中的一种或多种；所述稳定剂C为MgCl₂、NaCl、KCl、CaCl₂、螯合剂EDTA类、聚乙二醇类、二糖类和多元醇中的一种或多种。

可选的，在所述校准品中，纯品的浓度为40-60μmol/L；稳定剂C的浓度为1-100mmol/L；当所述基质中含有缓冲液时，缓冲液的浓度为5-500mmol/L；当所述基质中含有人血清时，人血清的浓度按质量体积百分含量计为0.5-90％；当所述基质中含有牛血清时，牛血清的浓度按质量体积百分含量计为0.5-90％；当所述基质中含有牛血清白蛋白时，牛血清白蛋白的浓度按质量体积百分含量计为0.5-60％。

可选的，所述校准品的pH为6.0-10.0，优选为6.5-8.5。

可选的，所述试剂A和试剂B中还包括去干扰剂、抗氧化剂和防腐剂中的至少一种。

本发明还提供了所述的试剂盒在总胆汁酸的测定中的应用，包括，将待测样本、试剂A、试剂B按照3μL：210μL：70μL的体积比(可根据试剂中主要成分的浓度和检测仪器的不同，按比例进行用量的调整)混匀后静置60-120秒，在测试温度37℃、主波长405nm、副波长660nm下，使用纯化水和校准品进行线性校准，测量待测样本中总胆汁酸的浓度。

通过上述技术方案，本发明所提供的总胆汁酸测定试剂在2-8℃开盖使用状态下的稳定时间可以达到20-30天。在2-8℃密闭避光存储过程中的稳定时间可以达到10-15个月。

具体实施方式

下面将通过具体实施方式对本发明进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

本发明提供了一种总胆汁酸测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂A和试剂B，其中，试剂A的组成成分包括：Thio-NAD、缓冲液A、表面活性剂和稳定剂A；试剂B的组成成分包括：3α-HSD、还原型辅酶Ⅰ、表面活性剂、缓冲液B和稳定剂B；

在本发明的一种优选的实施方式中，所述试剂盒还包括校准品，所述校准品的组成成分包括基质、纯品及稳定剂C；其中，所述基质为缓冲液A、缓冲液B、人血清、牛血清、牛血清白蛋白中的一种或多种；所述纯品为胆酸钠、脱氧胆酸钠、鹅脱氧胆酸钠、甘氨胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钠、甘氨鹅脱氧胆酸钠、牛黄胆酸钠、牛黄脱氧胆酸钠和牛黄鹅脱氧胆酸钠中的一种或多种；所述稳定剂C为MgCl₂、NaCl、KCl、CaCl₂、螯合剂EDTA类、聚乙二醇类、二糖类(例如：山梨醇、甘露醇、蔗糖、海藻糖)、多元醇(例如：乙二醇、丙三醇、丙二醇)中的一种或多种。

可选的，在所述校准品中，纯品的浓度为40-60μmol/L，优选为45-55μmol/L；稳定剂C的浓度为1-100mmol/L，优选为10-50mmol/L；当所述基质中含有缓冲液时，缓冲液的浓度为5-500mmol/L；当所述基质中含有人血清时，人血清的浓度按质量体积百分含量计为0.5-90％，优选为10-85％；当所述基质中含有牛血清时，牛血清的浓度按质量体积百分含量计为0.5-90％，优选为10-85％；当所述基质中含有牛血清白蛋白时，牛血清白蛋白的浓度按质量体积百分含量计为0.5-60％，优选为10-50％。

可选的，所述校准品的pH为6.0-10.0，优选pH为6.5-8.5。

其中，所述胆汁酸校准品可根据基质的不同，制成稳定均一的液体或冻干粉。

在本发明中，所述缓冲液的终浓度表示将各组分混合分别配制所述试剂A和试剂B后，试剂中起缓冲作用的有效成分的终浓度，例如，当所述缓冲液为2-N-吗啡乙磺酸时，缓冲液的终浓度表示配制获得的试剂中2-N-吗啡乙磺酸的浓度。当缓冲液由两种或两种以上有效成分组成时，缓冲液的终浓度指代几种有效成分的总浓度。

其中，所述表面活性剂选自由聚氧乙烯十二烷基醚、聚乙二醇对异辛基苯基醚、聚乙二醇单月桂酸酯、4-壬基苯基-聚乙二醇、烷基聚烯烃基乙二醇醚和烷基聚乙烯乙二醇醚所组成的组中的一种或两种；所述稳定剂A选自由NaCl、KCl、MgCl₂、EDTA.2Na或EDTA.2K所组成的组中的一种或多种。

优选的，为了获得更好的稳定效果，所述表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基和聚乙二醇对异辛基苯基醚中的至少一种。

根据本发明的试剂，所述稳定剂A选自由NaCl、KCl、MgCl₂和EDTA.2Na或EDTA.2K所组成的组中的一种或多种，优选的为了获得最佳的稳定效果，所述稳定剂选自MgCl₂和EDTA.2Na中的至少一种。

可选的，在所述试剂A中，Thio-NAD的浓度为0.01-10mmol/L、缓冲液A的终浓度为5-500mmol/L、表面活性剂的浓度为0.05-20％(w/v)、稳定剂A的浓度为0.1-20g/L。

优选的，在所述试剂A中，Thio-NAD的浓度为0.5-5mmol/L、缓冲液A的终浓度为10-100mmol/L、表面活性剂的浓度为2-10％(w/v)、稳定剂的浓度为1-10g/L。

可选的，所述试剂A的pH为3.0-5.5，优选的pH为3.5-4.5。

在本发明的一种优选的实施方式中，所述表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚(EMULGEN109P)和聚乙二醇对异辛基苯基醚(曲拉通TX-100)中的至少一种，所述稳定剂A为MgCl₂和EDTA.2Na中的至少一种。

可选的，所述试剂A还可以包括去干扰剂和防腐剂等，其中，所述去干扰剂可以为丙酮酸钠、草酸、草酸盐类或草氨酸，干扰剂的浓度为1-5mmol/L。

所述稳定剂B选自半胱氨酸、L-还原型谷胱甘肽、L-氧化型谷胱甘肽、L-氧化型谷胱甘肽二钠盐、巯基乙醇、核苷酸和核苷酸衍生物和牛血清白蛋白所组成的组中的一种。

其中，所述核苷酸和所述核苷酸衍生物可以为腺苷酸、鸟苷酸、胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺苷5'-二磷酸钠盐、腺苷5'-二磷酸钾盐、腺苷-3’,5’-环单磷酸钠盐、鸟苷-3’,5’-环单磷酸钠盐、鸟嘌呤核苷-5'-二磷酸二钠、胞嘧啶核苷酸二钠或尿苷二磷酸二钠。

在本发明的一种实施方式中，所述缓冲液B的缓冲容量为0.05-1mol/L。为了获得更好的稳定效果，缓冲液B优选为N-三(羟甲基)-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)缓冲液或3-(环己胺)-1-丙磺酸(CAPS)缓冲液。

可选的，所述试剂B的pH为8.0-9.5，优选的，为了获得更好的试剂稳定效果，所述试剂B的pH为9.0-9.5。

在本发明中，所述表面活性剂选自由聚氧乙烯十二烷基醚、聚乙二醇对异辛基苯基醚、聚乙二醇单月桂酸酯、4-壬基苯基-聚乙二醇、烷基聚烯烃基乙二醇醚系列和烷基聚乙烯乙二醇醚所组成的组中的一种或两种。优选的，所述表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚(EMULGEN109P)和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚(曲拉通TX-100)。

其中，在本发明的一种实施方式中，所述烷基聚烯烃基乙二醇醚系列指代脂肪醇环氧乙烷-环氧丙烷的加成物，如PROPETAL100。

优选的，为了获得最佳的稳定效果，所述稳定剂B选自腺苷-3’,5’-环单磷酸钠盐、鸟苷-3’,5’-环单磷酸钠盐、半胱氨酸中的至少一种。

在本发明的一种优选的实施方式中，所述缓冲液B为N-三(羟甲基)-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)缓冲液，所述稳定剂B为腺苷-3’,5’-环单磷酸钠盐、鸟苷-3’,5’-环单磷酸钠盐、半胱氨酸中的至少一种，表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚(EMULGEN109P)和聚乙二醇对异辛基苯基醚(曲拉通TX-100)中的至少一种。

可选的，所述试剂B还包括防腐剂NaN₃和Proclin300，所述防腐剂的浓度可以为0.1-2g/L；所述防腐剂可以为NaN₃，当所述防腐剂为NaN₃时，其浓度为0.1-2g/L。

本发明还提供了所述总胆汁酸测定试剂的制备方法：

其中，本发明对于试剂A的制备过程中各成分的混合顺序没有特别要求，可以直接将所述原料混合物中的各组分进行同时、分批或分步混合，只要能得到均匀的稳定相即可，优选通过搅拌使混合更加均匀。

其中，试剂B的配制是按照缓冲液、表面活性剂、稳定剂、还原型辅酶I、3α-HSD的顺序，依次混合，得到均匀的稳定相。优选通过搅拌使混合更加均匀。所述制备过程可以在室温的条件下进行。

其中，本发明所提供的总胆汁酸测定试剂在制备后在2-8℃开盖使用状态，稳定时间可以达到20-30天，在2-8℃度密闭避光存储条件下，稳定时间可以达到10-15个月。

本发明还提供了所述总胆汁酸测定试剂的检测方法，包括，将待测样本、试剂A、试剂B按照3μL：210μL：70μL的体积比(可根据试剂中主要成分的浓度和检测仪器的不同，按比例进行用量的调整)混匀后静置60-120秒，在测试温度37℃、主波长405nm、副波长660nm下，使用纯化水和校准品进行线性校准，测量样本中总胆汁酸的浓度。

其中，所述待测样本为血清、血浆、其他体液或组织液、质控品及其他含有胆汁酸的溶液。优选的，按照待测样本、试剂A、试剂B的用量为3μL、210μL、70μL的方式混合获得混合物。

优选的，将混合物静置60秒，然后置于检测仪器中测量2-3分钟吸光度值(A)；计算每分钟吸光度变化率(△A/min)，在本发明的一种优选的实时方式中，所述检测仪器为具有双试剂功能的生化分析仪，测量所使用的光径优选为1cm。

其中，试剂使用纯化水和校准品进行线性校准。按公式：总胆汁酸的浓度(μmol/L)＝C标准*(△A/min_样本-△A/min_空白)/(△A/min_标准-△A/min_空白)计算样本中总胆汁酸的浓度。

下面通过实施例对本发明进行进一步说明。

实施例1

按照表1列出的组分含量分别制备试剂A，将各组分混合，得到均匀的稳定相，分别得到试剂A1-21。

表1

试剂A1-21中，各组分的具体选择如下：

试剂A1-17和21中，表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚(EMULGEN109P)，缓冲液A为2-N-吗啡乙磺酸缓冲液，稳定剂A为MgCl₂和EDTA.2Na按照质量比1:1混合制成。

试剂A18中，表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚(曲拉通TX-100)，缓冲液A为2-N-吗啡乙磺酸缓冲液，稳定剂A为MgCl₂和EDTA.2Na按照质量比1:1混合制成。

试剂A19中，表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚(曲拉通TX-100)，缓冲液A为甘氨酸缓冲液，稳定剂A为MgCl₂和EDTA.2Na按照质量比1:1混合制成。

试剂A20中，表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚(曲拉通TX-100)，缓冲液A为2-N-吗啡乙磺酸，稳定剂A为EDTA.2K。

试剂A1-20中，去干扰剂为草氨酸钠。

对比例1

按照与试剂A1相同的方法制备试剂A，不同的是，将表面活性剂替换为TWEEN20，得到试剂A22。

对比例2

按照与试剂A1相同的方法制备试剂A，不同的是，将稳定剂A替换为聚乙二醇，得到试剂A23。

实施例2

按照表2列出的组分含量制备试剂B，分别得到试剂B1-21。

制备方法为：按照缓冲液、表面活性剂B、稳定剂B、还原型辅酶Ⅰ、3α-HSD的顺序，依次混合，得到均匀的稳定相。

表2

试剂B 1-24中，各组分的具体选择如下：

试剂B 1-21中，缓冲液B为pH8.5的N-三(羟甲基)-3-氨基丙烷磺酸缓冲液，稳定剂B为腺苷-3’,5’-环单磷酸钠盐；表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚(EMULGEN109P)。

试剂B 22中，缓冲液B为3-(环己胺)-1-丙磺酸(CAPS)，稳定剂B为腺苷-3’,5’-环单磷酸钠盐；表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚(EMULGEN109P)。

试剂B 23中，缓冲液BpH8.5的N-三(羟甲基)-3-氨基丙烷磺酸，稳定剂B为鸟苷-3’,5’-环单磷酸钠盐，表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚(EMULGEN109P)。

试剂B 24中，缓冲液B为pH8.5的N-三(羟甲基)-3-氨基丙烷磺酸缓冲液，稳定剂B为腺苷-3’,5’-环单磷酸钠盐；表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚(曲拉通TX-100)。

对比例3

按照与试剂B 1相同的方法制备试剂B，不同的是，将缓冲液B替换为三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)，得到试剂B 25。

对比例4

按照与试剂B 1相同的方法制备试剂B，不同的是，将表面活性剂替换为TWEEN80，得到试剂B 26。

对比例5

按照与试剂B 1相同的方法制备试剂B，不同的是，将稳定剂B替换为EDTA.2Na，得到试剂B 27。

实施例3

实施例3用于说明校准品的制备，将纯品甘氨胆酸钠和稳定剂甘露醇溶于基质2-N-吗啡乙磺酸缓冲液和牛血清白蛋白中，混合均匀获得校准品，其中，甘氨胆酸钠的浓度为50μmol/L，甘露醇的浓度为20g/L，牛血清白蛋白的浓度按质量体积百分含量计为10％，2-N-吗啡乙磺酸缓冲液的浓度为100mmol/L。

测试例1-10

测试例用于说明本发明制备的总胆汁酸测定试剂盒的稳定性。选取实施例1、2和对比例1-5中制备获得的试剂A、试剂B和实施例3中制备的校准品组装成试剂盒1-10。

稳定性评价方法：试剂8℃开盖使用状态下，30天之内，每天测定质控品；计算每天测定结果与第一天测定结果的相对偏差，相对偏差小于±15％判定为稳定。试剂8℃度密闭避光存储过程中，在15个月的保存期内，每月测定；计算每月测定结果与第一个月测定结果的相对偏差，相对偏差小于±15％判定为稳定。

检测方法：采用具有双试剂功能的自动生化分析仪(光径1cm、测试温度37℃、主波长405nm、副波长660nm)，按照样本：试剂A：试剂B＝3μL：210μL：70μL的方式加样，加入试剂B60秒后，读取2-4分钟的吸光度值；使用纯化水和校准品进行线性校准；按公式：总胆汁酸的浓度(μmol/L)＝C标准*(△A/min_样本-△A/min_空白)/(△A/min_标准-△A/min_空白)，计算样本中总胆汁酸的浓度。每个试剂盒中试剂A和试剂B分组及测定结果列于表3。

表3

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种总胆汁酸测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂A和试剂B，其中，试剂A的组成成分包括：Thio-NAD、缓冲液A、表面活性剂、稳定剂A和去干扰剂；试剂B的组成成分包括：3α-HSD、还原型辅酶Ⅰ、表面活性剂、缓冲液B和稳定剂B；

其中，所述缓冲液A为2-N-吗啡乙磺酸缓冲液；所述表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚；所述稳定剂A为MgCl₂和EDTA.2Na按照质量比1:1混合制成；所述去干扰剂为草氨酸钠；所述缓冲液B为pH8.5的N-三(羟甲基)-3-氨基丙烷磺酸缓冲液；所述稳定剂B为腺苷-3’,5’-环单磷酸钠盐；

在所述试剂A中，Thio-NAD的浓度为1-5mmol/L；缓冲液A的终浓度为50mmol/L；表面活性剂的浓度按质量体积百分含量计为5％；稳定剂A的浓度为5g/L；去干扰剂的浓度为2mmol/L；

在所述试剂B中，3α-HSD的浓度为5-20KU/L；还原型辅酶Ⅰ的浓度为5g/L；缓冲液B的终浓度为50mmol/L；表面活性剂的浓度以质量体积百分含量计为10％；稳定剂B的浓度为5g/L。

2.根据权利要求1所述的总胆汁酸测定试剂盒，其特征在于，还包括校准品，所述校准品的组成成分包括基质、纯品及稳定剂C；其中，所述基质为缓冲液A、缓冲液B、人血清、牛血清、牛血清白蛋白中的一种或多种；所述纯品为胆酸钠、脱氧胆酸钠、鹅脱氧胆酸钠、甘氨胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钠、甘氨鹅脱氧胆酸钠、牛黄胆酸钠、牛黄脱氧胆酸钠和牛黄鹅脱氧胆酸钠中的一种或多种；所述稳定剂C为MgCl₂、NaCl、KCl、CaCl₂、螯合剂EDTA类、聚乙二醇类、二糖类和多元醇中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的总胆汁酸测定试剂盒，其特征在于，在所述校准品中纯品的浓度为40-60μmol/L；稳定剂C的浓度为1-100mmol/L；当所述基质中含有缓冲液时，缓冲液的浓度为5-500mmol/L；当所述基质中含有人血清时，人血清的浓度按质量体积百分含量计为0.5-90％；当所述基质中含有牛血清时，牛血清的浓度按质量体积百分含量计为0.5-90％；当所述基质中含有牛血清白蛋白时，牛血清白蛋白的浓度按质量体积百分含量计为0.5-60％。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的总胆汁酸测定试剂盒，其特征在于，所述试剂A的pH为3.0-5.5。