JP2002369681A - リパーゼの安定化方法 - Google Patents
リパーゼの安定化方法Info
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- JP2002369681A JP2002369681A JP2001180549A JP2001180549A JP2002369681A JP 2002369681 A JP2002369681 A JP 2002369681A JP 2001180549 A JP2001180549 A JP 2001180549A JP 2001180549 A JP2001180549 A JP 2001180549A JP 2002369681 A JP2002369681 A JP 2002369681A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明はリパーゼの安定化方法およびその組
成物に関する。特に臨床診断に用いられる生体成分中の
中性脂肪測定試薬に用いられるリパーゼの安定化方法お
よびその組成物に関する。 【解決手段】 中性脂肪測定試薬において、リパーゼに
ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテルを共存させる
ことを特徴とする、リパーゼの安定化方法。
成物に関する。特に臨床診断に用いられる生体成分中の
中性脂肪測定試薬に用いられるリパーゼの安定化方法お
よびその組成物に関する。 【解決手段】 中性脂肪測定試薬において、リパーゼに
ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテルを共存させる
ことを特徴とする、リパーゼの安定化方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はリパーゼの安定化方
法およびその組成物に関する。特に臨床診断に用いられ
る生体成分中の中性脂肪（以下トリグリセライドとも称
する）測定試薬に用いられるリパーゼの安定化方法およ
びその組成物に関する。
法およびその組成物に関する。特に臨床診断に用いられ
る生体成分中の中性脂肪（以下トリグリセライドとも称
する）測定試薬に用いられるリパーゼの安定化方法およ
びその組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、リパーゼは中性脂肪測定試薬の主
反応酵素として診断用試薬に使用され重要視されてい
る。リパーゼを用いる中性脂肪測定法は種々報告されて
いるが、リパーゼの作用により生成したグリセロールを
更にグリセロールキナーゼ、グリセロリン酸オキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼを用いて測定する方法、グリセロ
ールをグリセロールデヒドロゲナーゼを用いて測定する
方法、グリセロールキナーゼ、グリセロリン酸デヒドロ
ゲナーゼを用いて測定する方法、グリセロールキナー
ゼ、ＡＤＰ依存性ヘキソキナーゼ、グルコース６リン酸
デヒドロゲナーゼを用いて測定する方法がある。これら
リパーゼを用いる試薬の正確性はこれら酵素の反応性、
安定性が寄与しており、益々反応性、安定性に対する要
求が高まっている。
反応酵素として診断用試薬に使用され重要視されてい
る。リパーゼを用いる中性脂肪測定法は種々報告されて
いるが、リパーゼの作用により生成したグリセロールを
更にグリセロールキナーゼ、グリセロリン酸オキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼを用いて測定する方法、グリセロ
ールをグリセロールデヒドロゲナーゼを用いて測定する
方法、グリセロールキナーゼ、グリセロリン酸デヒドロ
ゲナーゼを用いて測定する方法、グリセロールキナー
ゼ、ＡＤＰ依存性ヘキソキナーゼ、グルコース６リン酸
デヒドロゲナーゼを用いて測定する方法がある。これら
リパーゼを用いる試薬の正確性はこれら酵素の反応性、
安定性が寄与しており、益々反応性、安定性に対する要
求が高まっている。
【０００３】リパーゼの安定性を維持するために、安定
化剤としてグリセロール、グリシン（Methods Enzymo
l．129,691(1986)）、メルカプトエタノール(J.Biol.Ch
em.,247,6212(1972))、トリトンＸ−１００(Enzyme Ha
ndbook,3,Springer-Verlag(1991))、トリトンＮ−１０
１、デオキシコール酸(Methods Enzymol.129,716(198
6))、Ｍｇ2+、ＢＳＡ（東洋紡績（株）酵素カタロ
グ）、塩類（特開昭６４−６０３８１）等の添加が知ら
れているが、試薬溶液中で求められる安定性を維持する
には不十分であった。
化剤としてグリセロール、グリシン（Methods Enzymo
l．129,691(1986)）、メルカプトエタノール(J.Biol.Ch
em.,247,6212(1972))、トリトンＸ−１００(Enzyme Ha
ndbook,3,Springer-Verlag(1991))、トリトンＮ−１０
１、デオキシコール酸(Methods Enzymol.129,716(198
6))、Ｍｇ2+、ＢＳＡ（東洋紡績（株）酵素カタロ
グ）、塩類（特開昭６４−６０３８１）等の添加が知ら
れているが、試薬溶液中で求められる安定性を維持する
には不十分であった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】近年、臨床検査におい
ては益々精度管理の重要性が高まっている。その中で中
性脂肪測定試薬においては、測定試薬によりトリオレイ
ン水溶液、患者検体、管理血清等各試料に対するリパー
ゼの反応性が異なることから測定値が変動する点が問題
視されている。また、診断用試薬では液状試薬が主流に
なっているが、中性脂肪測定試薬ではこのようなリパー
ゼの反応性を液状状態で長期間維持する必要性から益々
液状安定性に対する要求が強くなっている。このことか
ら、本発明が解決しようとする課題は長期間安定な液状
試薬として耐えうる安定性を有し、かつ各種試料に対し
良好な反応性を維持したリパーゼを提供することにあ
る。
ては益々精度管理の重要性が高まっている。その中で中
性脂肪測定試薬においては、測定試薬によりトリオレイ
ン水溶液、患者検体、管理血清等各試料に対するリパー
ゼの反応性が異なることから測定値が変動する点が問題
視されている。また、診断用試薬では液状試薬が主流に
なっているが、中性脂肪測定試薬ではこのようなリパー
ゼの反応性を液状状態で長期間維持する必要性から益々
液状安定性に対する要求が強くなっている。このことか
ら、本発明が解決しようとする課題は長期間安定な液状
試薬として耐えうる安定性を有し、かつ各種試料に対し
良好な反応性を維持したリパーゼを提供することにあ
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するために種々検討した結果、リパーゼにポリオ
キシエチレン直鎖アルキルエーテルを共存させることに
より、リパーゼを液状状態で長期間安定に保ち、かつ各
種試料に対し良好な反応性を維持することを見出し、本
発明を完成した。すなわち、本発明は以下のような構成
からなる。 （１）リパーゼにポリオキシエチレン直鎖アルキルエー
テルを共存させることを特徴とする、リパーゼの安定化
方法。 （２）さらに、十分な反応性が維持されている、（１）
記載のリパーゼの安定化方法。 （３）ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテルの濃度
が０．０１〜０．５％である（２）記載のリパーゼの安
定化方法。 （４）ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテルのＨＬ
Ｂが１５以下である（２）記載のリパーゼの安定化方
法。 （５）リパーゼがさらにエステラーゼ活性を有する
（１）〜（４）記載のリパーゼの安定化方法。 （６）リパーゼにポリオキシエチレン直鎖アルキルエー
テルを共存させることを特徴とするリパーゼの安定化組
成物。 （７）ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテルの濃度
が０．０１〜０．５％である（６）記載のリパーゼの安
定化組成物。 （８）更にリパーゼ活性化剤と組み合わせて用いられる
（６）、（７）記載のリパーゼの安定化組成物。 （９）リパーゼ活性化剤がポリオキシエチレン２級アル
キルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエ
ーテル、ポリオキシエチレンスチリルフェニルエーテル
から選ばれた少なくとも１種の界面活性剤である（８）
記載のリパーゼの安定化組成物。 （１０）ＨＬＢが１５以下のポリオキシエチレン直鎖ア
ルキルエーテルと、リパーゼ活性化剤の総ＨＬＢが１２
〜１４である（８）、（９）記載のリパーゼの安定化組
成物。
を達成するために種々検討した結果、リパーゼにポリオ
キシエチレン直鎖アルキルエーテルを共存させることに
より、リパーゼを液状状態で長期間安定に保ち、かつ各
種試料に対し良好な反応性を維持することを見出し、本
発明を完成した。すなわち、本発明は以下のような構成
からなる。 （１）リパーゼにポリオキシエチレン直鎖アルキルエー
テルを共存させることを特徴とする、リパーゼの安定化
方法。 （２）さらに、十分な反応性が維持されている、（１）
記載のリパーゼの安定化方法。 （３）ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテルの濃度
が０．０１〜０．５％である（２）記載のリパーゼの安
定化方法。 （４）ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテルのＨＬ
Ｂが１５以下である（２）記載のリパーゼの安定化方
法。 （５）リパーゼがさらにエステラーゼ活性を有する
（１）〜（４）記載のリパーゼの安定化方法。 （６）リパーゼにポリオキシエチレン直鎖アルキルエー
テルを共存させることを特徴とするリパーゼの安定化組
成物。 （７）ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテルの濃度
が０．０１〜０．５％である（６）記載のリパーゼの安
定化組成物。 （８）更にリパーゼ活性化剤と組み合わせて用いられる
（６）、（７）記載のリパーゼの安定化組成物。 （９）リパーゼ活性化剤がポリオキシエチレン２級アル
キルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエ
ーテル、ポリオキシエチレンスチリルフェニルエーテル
から選ばれた少なくとも１種の界面活性剤である（８）
記載のリパーゼの安定化組成物。 （１０）ＨＬＢが１５以下のポリオキシエチレン直鎖ア
ルキルエーテルと、リパーゼ活性化剤の総ＨＬＢが１２
〜１４である（８）、（９）記載のリパーゼの安定化組
成物。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明において「安定」とは、加
温処理に対しても酵素活性が維持されていることを意味
し、具体的には、ポリオキシエチレン直鎖アルキルエー
テルを、５0mMHEPES (pH7.5)緩衝液中に、２Ｕ／ｍＬ
のリパーゼと共存させたとき、３５℃１４日間保存後の
残存酵素活性が加温処理していないものと比較して、６
０％以上（好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９
０％以上）維持されていることをいう。
温処理に対しても酵素活性が維持されていることを意味
し、具体的には、ポリオキシエチレン直鎖アルキルエー
テルを、５0mMHEPES (pH7.5)緩衝液中に、２Ｕ／ｍＬ
のリパーゼと共存させたとき、３５℃１４日間保存後の
残存酵素活性が加温処理していないものと比較して、６
０％以上（好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９
０％以上）維持されていることをいう。
【０００７】本発明において「十分な反応性」とは、中
性脂肪をリパーゼによりグリセロール、および脂肪酸に
分解し、生成したグリセロールの量を追随反応を介して
求めることにより中性脂肪を測定する際に、精製水およ
び２００ｍｇ／ｄＬトリオレイン溶液の測定吸光度を対
照とし算出した中性脂肪濃度が、３０００ｍｇ／ｄＬ以
下の範囲において理論値を回収することを意味し、具体
的には測定値が理論値の９５％を下回らないことを意味
する。
性脂肪をリパーゼによりグリセロール、および脂肪酸に
分解し、生成したグリセロールの量を追随反応を介して
求めることにより中性脂肪を測定する際に、精製水およ
び２００ｍｇ／ｄＬトリオレイン溶液の測定吸光度を対
照とし算出した中性脂肪濃度が、３０００ｍｇ／ｄＬ以
下の範囲において理論値を回収することを意味し、具体
的には測定値が理論値の９５％を下回らないことを意味
する。
【０００８】本発明の一実施態様として、第一試薬とし
てグリセロールキナーゼ、グリセロリン酸オキシダー
ゼ、リパーゼ活性化剤等を含有し、第二試薬としてリパ
ーゼ、ペルオキシダーゼ等を含有する２試薬系からなる
中性脂肪測定試薬において、リパーゼを含む試薬にポリ
オキシエチレン直鎖アルキルエーテルを共存させること
を特徴とするリパーゼの安定化方法がある。
てグリセロールキナーゼ、グリセロリン酸オキシダー
ゼ、リパーゼ活性化剤等を含有し、第二試薬としてリパ
ーゼ、ペルオキシダーゼ等を含有する２試薬系からなる
中性脂肪測定試薬において、リパーゼを含む試薬にポリ
オキシエチレン直鎖アルキルエーテルを共存させること
を特徴とするリパーゼの安定化方法がある。
【０００９】本発明で用いるポリオキシエチレン直鎖ア
ルキルエーテルとしては、例えばポリオキシエチレンラ
ウリルエーテル類としてエマルゲン１０４Ｐ（ＨＬＢ
９．６）、エマルゲン１０５（ＨＬＢ９．７）、エマル
ゲン１０６（ＨＬＢ１０．５）、エマルゲン１０８（Ｈ
ＬＢ１２．１）、エマルゲン１０９Ｐ（ＨＬＢ１３．
６）、エマルゲン１２０（ＨＬＢ１５．３）、エマルゲ
ン１２３Ｐ（ＨＬＢ１６．９）、エマルゲン１４７（Ｈ
ＬＢ１６．３）、エマルゲン１３０Ｋ（ＨＬＢ１８．
１）、ノニオンＫ−２０４（ＨＬＢ９．２）、ノニオン
Ｋ−２１５（ＨＬＢ１５．２）、ノニオンＫ−２２０
（ＨＬＢ１６．２）、ノニオンＫ−２３０（ＨＬＢ１
７．３）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＬ−２（ＨＬＢ９．５）、
ＮＩＫＫＯＬ ＢＬ−４．２（ＨＬＢ１１．５）、ＮＩ
ＫＫＯＬ ＢＬ−９ＥＸ（ＨＬＢ１４．５）、ＮＩＫＫ
ＯＬ ＢＬ−２１（ＨＬＢ１９）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＬ
−２５（ＨＬＢ１９．５）、ポリオキシエチレンセチル
エーテル類として、エマルゲン２１０（ＨＬＢ１０．
７）、エマルゲン２２０（ＨＬＢ１４．２）、ＮＩＫＫ
ＯＬ ＢＣ−２（ＨＬＢ８．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ
−５．５（ＨＬＢ１０．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−７
（ＨＬＢ１１．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−１０ＴＸ
（ＨＬＢ１３．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−１５ＴＸ
（ＨＬＢ１５．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−２０ＴＸ
（ＨＬＢ１７）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−２３（ＨＬＢ１
８）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−２５ＴＸ（ＨＬＢ１８．
５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−３０ＴＸ（ＨＬＢ１９．
５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−４０ＴＸ（ＨＬＢ２０）、
ノニオンＰ−２０８（ＨＬＢ１１．９）、ノニオンＰ−
２１０（ＨＬＢ１２．９）、ノニオンＰ−２１３（ＨＬ
Ｂ１４．１）、ポリオキシエチレンステアリルエーテル
類として、エマルゲン３０６Ｐ（ＨＬＢ９．４）、エマ
ルゲン３２０Ｐ（ＨＬＢ１３．９）、ＮＩＫＫＯＬ Ｂ
Ｓ−２（ＨＬＢ８．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＳ−４（Ｈ
ＬＢ９．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＳ−２０（ＨＬＢ１
８）、ノニオンＳ−２０６（ＨＬＢ１０．１）、ノニオ
ンＳ−２０７（ＨＬＢ１０．７）、ノニオンＳ−２１５
（ＨＬＢ１４．２）、ノニオンＳ−２２０（ＨＬＢ１
５．３）、ポリオキシエチレンオレイルエーテル類とし
ては、エマルゲン４０４（ＨＬＢ８．８）、エマルゲン
４０８（ＨＬＢ１０．０）、エマルゲン４０９Ｐ（ＨＬ
Ｂ１２．０）、エマルゲン４２０（ＨＬＢ１３．６）、
エマルゲン４３０（ＨＬＢ１６．２）、ＮＩＫＫＯＬ
ＢＯ−２（ＨＬＢ７．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＯ−７
（ＨＬＢ１０．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＯ−１０ＴＸ
（ＨＬＢ１４．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＯ−２０（ＨＬ
Ｂ１７．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＯ−５０（ＨＬＢ１
８．０）、ノニオンＥ−２０６（ＨＬＢ９．５）、ノニ
オンＥ−２１５（ＨＬＢ１４．２）、ノニオンＥ−２３
０（ＨＬＢ１６．６）、ポリオキシエチレンベヘニルエ
ーテル類としては、ＮＩＫＫＯＬ ＢＢ−５（ＨＬＢ
７．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＢ−１０（ＨＬＢ１０．
０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＢ−２０（ＨＬＢ１６．５）Ｎ
ＩＫＫＯＬ ＢＢ−３０（ＨＬＢ１８）等が挙げられ
る。
ルキルエーテルとしては、例えばポリオキシエチレンラ
ウリルエーテル類としてエマルゲン１０４Ｐ（ＨＬＢ
９．６）、エマルゲン１０５（ＨＬＢ９．７）、エマル
ゲン１０６（ＨＬＢ１０．５）、エマルゲン１０８（Ｈ
ＬＢ１２．１）、エマルゲン１０９Ｐ（ＨＬＢ１３．
６）、エマルゲン１２０（ＨＬＢ１５．３）、エマルゲ
ン１２３Ｐ（ＨＬＢ１６．９）、エマルゲン１４７（Ｈ
ＬＢ１６．３）、エマルゲン１３０Ｋ（ＨＬＢ１８．
１）、ノニオンＫ−２０４（ＨＬＢ９．２）、ノニオン
Ｋ−２１５（ＨＬＢ１５．２）、ノニオンＫ−２２０
（ＨＬＢ１６．２）、ノニオンＫ−２３０（ＨＬＢ１
７．３）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＬ−２（ＨＬＢ９．５）、
ＮＩＫＫＯＬ ＢＬ−４．２（ＨＬＢ１１．５）、ＮＩ
ＫＫＯＬ ＢＬ−９ＥＸ（ＨＬＢ１４．５）、ＮＩＫＫ
ＯＬ ＢＬ−２１（ＨＬＢ１９）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＬ
−２５（ＨＬＢ１９．５）、ポリオキシエチレンセチル
エーテル類として、エマルゲン２１０（ＨＬＢ１０．
７）、エマルゲン２２０（ＨＬＢ１４．２）、ＮＩＫＫ
ＯＬ ＢＣ−２（ＨＬＢ８．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ
−５．５（ＨＬＢ１０．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−７
（ＨＬＢ１１．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−１０ＴＸ
（ＨＬＢ１３．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−１５ＴＸ
（ＨＬＢ１５．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−２０ＴＸ
（ＨＬＢ１７）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−２３（ＨＬＢ１
８）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−２５ＴＸ（ＨＬＢ１８．
５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−３０ＴＸ（ＨＬＢ１９．
５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＣ−４０ＴＸ（ＨＬＢ２０）、
ノニオンＰ−２０８（ＨＬＢ１１．９）、ノニオンＰ−
２１０（ＨＬＢ１２．９）、ノニオンＰ−２１３（ＨＬ
Ｂ１４．１）、ポリオキシエチレンステアリルエーテル
類として、エマルゲン３０６Ｐ（ＨＬＢ９．４）、エマ
ルゲン３２０Ｐ（ＨＬＢ１３．９）、ＮＩＫＫＯＬ Ｂ
Ｓ−２（ＨＬＢ８．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＳ−４（Ｈ
ＬＢ９．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＳ−２０（ＨＬＢ１
８）、ノニオンＳ−２０６（ＨＬＢ１０．１）、ノニオ
ンＳ−２０７（ＨＬＢ１０．７）、ノニオンＳ−２１５
（ＨＬＢ１４．２）、ノニオンＳ−２２０（ＨＬＢ１
５．３）、ポリオキシエチレンオレイルエーテル類とし
ては、エマルゲン４０４（ＨＬＢ８．８）、エマルゲン
４０８（ＨＬＢ１０．０）、エマルゲン４０９Ｐ（ＨＬ
Ｂ１２．０）、エマルゲン４２０（ＨＬＢ１３．６）、
エマルゲン４３０（ＨＬＢ１６．２）、ＮＩＫＫＯＬ
ＢＯ−２（ＨＬＢ７．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＯ−７
（ＨＬＢ１０．５）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＯ−１０ＴＸ
（ＨＬＢ１４．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＯ−２０（ＨＬ
Ｂ１７．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＯ−５０（ＨＬＢ１
８．０）、ノニオンＥ−２０６（ＨＬＢ９．５）、ノニ
オンＥ−２１５（ＨＬＢ１４．２）、ノニオンＥ−２３
０（ＨＬＢ１６．６）、ポリオキシエチレンベヘニルエ
ーテル類としては、ＮＩＫＫＯＬ ＢＢ−５（ＨＬＢ
７．０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＢ−１０（ＨＬＢ１０．
０）、ＮＩＫＫＯＬ ＢＢ−２０（ＨＬＢ１６．５）Ｎ
ＩＫＫＯＬ ＢＢ−３０（ＨＬＢ１８）等が挙げられ
る。
【００１０】これらの界面活性剤は単独または２種以上
または他の界面活性剤と組み合わせて用いることができ
る。また、各界面活性剤のＨＬＢは特に限定されず、リ
パーゼの反応性を考慮し選択されるべきであるが、好ま
しくは単独でのＨＬＢが１５以下、さらには１４以下が
リパーゼの反応性への影響が少ない点で好ましい。中で
も１２〜１３が好ましい。また、ポリオキシエチレン部
分の重合度は好ましくは３０以下であり、さらには２０
以下がリパーゼの反応性への影響が少ない点で好まし
い。中でも７〜１０が好ましい。また、リパーゼを含む
溶液中の濃度としては特に限定するものではないが、好
ましくは０．０１％〜０．５％の範囲であり、さらには
０．０２％〜０．２％がリパーゼの反応性への影響が少
ない点で好ましい。中でも０．０５％〜０．１５％が好
ましい。
または他の界面活性剤と組み合わせて用いることができ
る。また、各界面活性剤のＨＬＢは特に限定されず、リ
パーゼの反応性を考慮し選択されるべきであるが、好ま
しくは単独でのＨＬＢが１５以下、さらには１４以下が
リパーゼの反応性への影響が少ない点で好ましい。中で
も１２〜１３が好ましい。また、ポリオキシエチレン部
分の重合度は好ましくは３０以下であり、さらには２０
以下がリパーゼの反応性への影響が少ない点で好まし
い。中でも７〜１０が好ましい。また、リパーゼを含む
溶液中の濃度としては特に限定するものではないが、好
ましくは０．０１％〜０．５％の範囲であり、さらには
０．０２％〜０．２％がリパーゼの反応性への影響が少
ない点で好ましい。中でも０．０５％〜０．１５％が好
ましい。
【００１１】本発明は、更にリパーゼ活性化剤と組み合
わせて用いることが出来る。本発明に用いるリパーゼ活
性化剤としては、リパーゼの反応性を向上させる物質で
あればよく、特に限定されない。好ましくはポリオキシ
エチレン直鎖アルキルエーテルとリパーゼが共存する反
応混液において、該物質の添加によりリパーゼの反応性
が向上するものである。このような活性化剤として例え
ばポリオキシエチレン２級アルキルエーテル、ポリオキ
シエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチ
レンスチリルフェニルエーテル、脂肪酸が挙げられる。
ポリオキシエチレン２級アルキルエーテルとしては、Ｎ
ＩＫＫＯＬ ＢＴ−５、ＮＩＫＫＯＬ ＢＴ−７、ＮＩ
ＫＫＯＬ ＢＴ−９、アデカトールＳＯ−８０、アデカ
トールＳＯ−１０５、アデカトールＳＯ−１２０、アデ
カトールＳＯ−１３５、アデカトールＳＯ−１４５、ア
デカトールＳＯ−１６０、エマルゲン７０５、エマルゲ
ン７０７、エマルゲン７０９等が挙げられる。ポリオキ
シエチレンアルキルフェニルエーテルとしては、トリト
ンＸ−１００、トリトンＸ−１１４が挙げられる。ポリ
オキシエチレンスチリルフェニルエーテルとしてはエマ
ルゲンＡ６０、エマルゲンＡ９０、が挙げられる。脂肪
酸としてはコール酸が挙げられる。
わせて用いることが出来る。本発明に用いるリパーゼ活
性化剤としては、リパーゼの反応性を向上させる物質で
あればよく、特に限定されない。好ましくはポリオキシ
エチレン直鎖アルキルエーテルとリパーゼが共存する反
応混液において、該物質の添加によりリパーゼの反応性
が向上するものである。このような活性化剤として例え
ばポリオキシエチレン２級アルキルエーテル、ポリオキ
シエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチ
レンスチリルフェニルエーテル、脂肪酸が挙げられる。
ポリオキシエチレン２級アルキルエーテルとしては、Ｎ
ＩＫＫＯＬ ＢＴ−５、ＮＩＫＫＯＬ ＢＴ−７、ＮＩ
ＫＫＯＬ ＢＴ−９、アデカトールＳＯ−８０、アデカ
トールＳＯ−１０５、アデカトールＳＯ−１２０、アデ
カトールＳＯ−１３５、アデカトールＳＯ−１４５、ア
デカトールＳＯ−１６０、エマルゲン７０５、エマルゲ
ン７０７、エマルゲン７０９等が挙げられる。ポリオキ
シエチレンアルキルフェニルエーテルとしては、トリト
ンＸ−１００、トリトンＸ−１１４が挙げられる。ポリ
オキシエチレンスチリルフェニルエーテルとしてはエマ
ルゲンＡ６０、エマルゲンＡ９０、が挙げられる。脂肪
酸としてはコール酸が挙げられる。
【００１２】これらリパーゼ活性化剤は単独または２種
以上の活性化剤を組み合わせて用いられる。本発明のポ
リオキシエチレン直鎖アルキルエーテルを含むリパーゼ
安定化組成物に対する混合方法は特に限定されず、リパ
ーゼ反応の直前に混合してもよいし、あらかじめ混合し
保存して使用できる。また、該活性化剤のリパーゼ溶液
中の濃度は特に限定するものではないが、本発明のポリ
オキシエチレン直鎖アルキルエーテルを含むリパーゼ安
定化組成物にあらかじめ混合して保存する場合は、ポリ
オキシエチレン直鎖アルキルエーテルに対する活性化剤
の相対濃度を好ましくは約５０倍以下（さらに好ましく
は２０倍以下、中でも好ましくは１０倍以下）にし安定
化効果を考慮して用いることができる。該活性化剤が非
イオン性界面活性剤の場合は各界面活性剤の（ＨＬＢ）
×（添加量）を界面活性剤の添加量の総和で割った総Ｈ
ＬＢが１２〜１４であるのが好ましい。さらには１２．
５〜１３．５が好ましい。中でも約１３が好ましい。
以上の活性化剤を組み合わせて用いられる。本発明のポ
リオキシエチレン直鎖アルキルエーテルを含むリパーゼ
安定化組成物に対する混合方法は特に限定されず、リパ
ーゼ反応の直前に混合してもよいし、あらかじめ混合し
保存して使用できる。また、該活性化剤のリパーゼ溶液
中の濃度は特に限定するものではないが、本発明のポリ
オキシエチレン直鎖アルキルエーテルを含むリパーゼ安
定化組成物にあらかじめ混合して保存する場合は、ポリ
オキシエチレン直鎖アルキルエーテルに対する活性化剤
の相対濃度を好ましくは約５０倍以下（さらに好ましく
は２０倍以下、中でも好ましくは１０倍以下）にし安定
化効果を考慮して用いることができる。該活性化剤が非
イオン性界面活性剤の場合は各界面活性剤の（ＨＬＢ）
×（添加量）を界面活性剤の添加量の総和で割った総Ｈ
ＬＢが１２〜１４であるのが好ましい。さらには１２．
５〜１３．５が好ましい。中でも約１３が好ましい。
【００１３】また、従来から用いられている緩衝液とし
ては、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ＧＯＯＤ緩衝液な
どが挙げられる。なかでも、トリス緩衝液、リン酸緩衝
液は濃度、温度によってｐＨが変動しやすいが、安価で
あるという利点がある。一方、ＧＯＯＤ緩衝液にはＭＥ
Ｓ、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＡＣＥＳ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、
ＰＩＰＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、Ｂ
ｉｃｉｎｅ、ＰＯＰＳＯ、ＴＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＣＡＰ
Ｓなどが例示される。該緩衝液のｐＨは５〜９の範囲で
調整される。さらには６〜８が好ましい。中でも６．５
〜７．５が好ましい。
ては、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ＧＯＯＤ緩衝液な
どが挙げられる。なかでも、トリス緩衝液、リン酸緩衝
液は濃度、温度によってｐＨが変動しやすいが、安価で
あるという利点がある。一方、ＧＯＯＤ緩衝液にはＭＥ
Ｓ、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＡＣＥＳ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、
ＰＩＰＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、Ｂ
ｉｃｉｎｅ、ＰＯＰＳＯ、ＴＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＣＡＰ
Ｓなどが例示される。該緩衝液のｐＨは５〜９の範囲で
調整される。さらには６〜８が好ましい。中でも６．５
〜７．５が好ましい。
【００１４】本発明のリパーゼとはＥＣ３．１．１．３
４に分類される以下の反応を触媒する酵素も含まれる。
トリグリセライド＋Ｏ2→モノグリセリド（またはジグ
リセリド）＋脂肪酸上記酵素はシュードモナス属、リゾ
プス属などの微生物から採取されるもの、またはこれら
の遺伝子を他の微生物に組み込まれた遺伝子組換え微生
物より製造されたものなどがあり、また、遺伝子的に性
質を改変したものを含有する。また、これら酵素の特異
性、安定性を向上させる目的または反応セルに吸着する
性質を改変する目的でポリエチレングリコールを主成分
とする基、単糖、水溶性のオリゴ糖残基、スルホプロピ
ル基などで上記酵素を化学的に修飾したものも用いられ
る。
４に分類される以下の反応を触媒する酵素も含まれる。
トリグリセライド＋Ｏ2→モノグリセリド（またはジグ
リセリド）＋脂肪酸上記酵素はシュードモナス属、リゾ
プス属などの微生物から採取されるもの、またはこれら
の遺伝子を他の微生物に組み込まれた遺伝子組換え微生
物より製造されたものなどがあり、また、遺伝子的に性
質を改変したものを含有する。また、これら酵素の特異
性、安定性を向上させる目的または反応セルに吸着する
性質を改変する目的でポリエチレングリコールを主成分
とする基、単糖、水溶性のオリゴ糖残基、スルホプロピ
ル基などで上記酵素を化学的に修飾したものも用いられ
る。
【００１５】リパーゼを含む溶液中のリパーゼの濃度
は、酵素の起源によっても異なるが、通常０．１〜２０
Ｕ／ｍＬの範囲で好適に用いられる。さらには１〜５Ｕ
／ｍＬが好ましい。中でも１〜３Ｕ／ｍＬが好ましい。
は、酵素の起源によっても異なるが、通常０．１〜２０
Ｕ／ｍＬの範囲で好適に用いられる。さらには１〜５Ｕ
／ｍＬが好ましい。中でも１〜３Ｕ／ｍＬが好ましい。
【００１６】本発明において、リパーゼ溶液には、さら
に防腐剤などをリパーゼの反応に特に悪い影響を及ぼさ
ない範囲で添加してもよい。防腐剤としては、アジ化
物、キレート剤、抗生物質、抗菌剤などが挙げられる。
に防腐剤などをリパーゼの反応に特に悪い影響を及ぼさ
ない範囲で添加してもよい。防腐剤としては、アジ化
物、キレート剤、抗生物質、抗菌剤などが挙げられる。
【００１７】また、該リパーゼ溶液中には診断用試薬と
して必要な他の試薬が含まれていてもよい。中性脂肪測
定試薬としては、一般にリパーゼの他、グリセロールキ
ナーゼ、グリセロリン酸オキシダーゼ、ＡＴＰ、マグネ
シウム、ペルオキシダーゼ、色源体が含有される。
して必要な他の試薬が含まれていてもよい。中性脂肪測
定試薬としては、一般にリパーゼの他、グリセロールキ
ナーゼ、グリセロリン酸オキシダーゼ、ＡＴＰ、マグネ
シウム、ペルオキシダーゼ、色源体が含有される。
【００１８】リパーゼの活性測定は以下の測定条件で行
うのが好ましい。 〈測定試薬〉 （１）基質液 オリーブ油エマルジョン液 （２）発色液 ５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液、ｐＨ６．５ ０．１％ トリトンＸ−１００溶液 ０．２ｍＬ／Ｌ Ｎ，Ｎ-ジエチル−ｍ−トルイジン ０．０２ｇ／Ｌ ４-アミノアンチピリン ０．１２１ｇ／Ｌ ＡＴＰ・２Ｎａ・３Ｈ2Ｏ ０．２０４ｇ／Ｌ 塩化マグネシウム・６水和物 １ＫＵ／Ｌ グリセロールキナーゼ ２．５ＫＵ／Ｌ グリセロリン酸オキシダーゼ １．５ＫＵ／Ｌ ペルオキシダーゼ 〈測定条件〉 （１）オリーブ油エマルジョン液２ｍＬを試験管にと
り、３７℃で約５分間予備加温する。 （２）酵素溶液０．２ｍＬを加え、反応を開始する。 （３）３７℃で正確に１５分間反応させた後、０．２Ｍ
トリクロロ酢酸溶液２．０ｍＬを加えて反応を停止す
る。 （４）生成する不要物を濾紙濾過で除く。 （５）濾液の０．０５ｍＬを試験管にとり、発色試液
３．０ｍＬを加えて混合した後、３７℃にて１５分間加
温し、５４５ｎｍにおける吸光度を測定する。 （６）盲検はオリーブ油エマルジョン液２．０ｍＬを３
７℃で１５分間放置後、トリクロロ酢酸溶液２．０ｍＬ
を加えて調製し、以下上記同様に操作して吸光度を測定
する。
うのが好ましい。 〈測定試薬〉 （１）基質液 オリーブ油エマルジョン液 （２）発色液 ５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液、ｐＨ６．５ ０．１％ トリトンＸ−１００溶液 ０．２ｍＬ／Ｌ Ｎ，Ｎ-ジエチル−ｍ−トルイジン ０．０２ｇ／Ｌ ４-アミノアンチピリン ０．１２１ｇ／Ｌ ＡＴＰ・２Ｎａ・３Ｈ2Ｏ ０．２０４ｇ／Ｌ 塩化マグネシウム・６水和物 １ＫＵ／Ｌ グリセロールキナーゼ ２．５ＫＵ／Ｌ グリセロリン酸オキシダーゼ １．５ＫＵ／Ｌ ペルオキシダーゼ 〈測定条件〉 （１）オリーブ油エマルジョン液２ｍＬを試験管にと
り、３７℃で約５分間予備加温する。 （２）酵素溶液０．２ｍＬを加え、反応を開始する。 （３）３７℃で正確に１５分間反応させた後、０．２Ｍ
トリクロロ酢酸溶液２．０ｍＬを加えて反応を停止す
る。 （４）生成する不要物を濾紙濾過で除く。 （５）濾液の０．０５ｍＬを試験管にとり、発色試液
３．０ｍＬを加えて混合した後、３７℃にて１５分間加
温し、５４５ｎｍにおける吸光度を測定する。 （６）盲検はオリーブ油エマルジョン液２．０ｍＬを３
７℃で１５分間放置後、トリクロロ酢酸溶液２．０ｍＬ
を加えて調製し、以下上記同様に操作して吸光度を測定
する。
【００１９】
【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
る。なお、本発明は実施例により特に限定されるもので
はない。 （実施例１）リパーゼ（東洋紡績製ＬＰＬ−３１４）２
Ｕ／ｍＬを各種界面活性剤を添加した下記の中性脂肪測
定試薬 第二試液に添加溶解し３５℃で１４日間保存
し、残存活性（溶解直後の活性値に対する保存後の活性
値の割合）を検討した。
る。なお、本発明は実施例により特に限定されるもので
はない。 （実施例１）リパーゼ（東洋紡績製ＬＰＬ−３１４）２
Ｕ／ｍＬを各種界面活性剤を添加した下記の中性脂肪測
定試薬 第二試液に添加溶解し３５℃で１４日間保存
し、残存活性（溶解直後の活性値に対する保存後の活性
値の割合）を検討した。
【００２０】（試薬の調製）下記組成からなる中性脂肪
測定試薬の第二試薬をそれぞれ調製した。 第一試薬 ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ ５０ｍＭ ｐＨ７．５ 塩化マグネシウム・６水和物 ０．２ｇ／Ｌ 塩化カルシウム ０．１ｇ／Ｌ ＡＤＰＳ ０．３ｇ／Ｌ ペルオキシダーゼ（東洋紡社製ＰＥＯ−３０１） ２．９Ｕ／ｍＬ リパーゼ（東洋紡社製ＬＰＬ−３１４） ２Ｕ／ｍＬ 各種界面活性剤 名称・ＨＬＢ・濃度は表に記載
測定試薬の第二試薬をそれぞれ調製した。 第一試薬 ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ ５０ｍＭ ｐＨ７．５ 塩化マグネシウム・６水和物 ０．２ｇ／Ｌ 塩化カルシウム ０．１ｇ／Ｌ ＡＤＰＳ ０．３ｇ／Ｌ ペルオキシダーゼ（東洋紡社製ＰＥＯ−３０１） ２．９Ｕ／ｍＬ リパーゼ（東洋紡社製ＬＰＬ−３１４） ２Ｕ／ｍＬ 各種界面活性剤 名称・ＨＬＢ・濃度は表に記載
【００２１】
【表１】
【００２２】結果 表１に示す。比較例では６０％未満
まで活性が低下するのに対し、実施例では保存後も良好
な安定性を示す。
まで活性が低下するのに対し、実施例では保存後も良好
な安定性を示す。
【００２３】（実施例２）リパーゼ（東洋紡績製ＬＰＬ
−３１４）２Ｕ／ｍＬを各種界面活性剤を添加した実施
例１の中性脂肪測定試薬 第二試液にエマルゲン４２０
を濃度を変えて添加溶解し３５℃で１４日間保存し、残
存活性（溶解直後の活性値に対する保存後の活性値の割
合）を検討した。
−３１４）２Ｕ／ｍＬを各種界面活性剤を添加した実施
例１の中性脂肪測定試薬 第二試液にエマルゲン４２０
を濃度を変えて添加溶解し３５℃で１４日間保存し、残
存活性（溶解直後の活性値に対する保存後の活性値の割
合）を検討した。
【００２４】
【表２】
【００２５】結果 表２に示す。少なくとも０．０１％
で良好な安定性を示す。
で良好な安定性を示す。
【００２６】（実施例３）リパーゼ（東洋紡績製ＬＰＬ
−３１４）２Ｕ／ｍＬを各種界面活性剤を添加した実施
例１の中性脂肪測定試薬 第二試液にエマルゲン４２０
およびエマルゲンＡ６０の各濃度を組み合わせて添加溶
解し３５℃で１４日間保存し、残存活性（溶解直後の活
性値に対する保存後の活性値の割合）を検討した。
−３１４）２Ｕ／ｍＬを各種界面活性剤を添加した実施
例１の中性脂肪測定試薬 第二試液にエマルゲン４２０
およびエマルゲンＡ６０の各濃度を組み合わせて添加溶
解し３５℃で１４日間保存し、残存活性（溶解直後の活
性値に対する保存後の活性値の割合）を検討した。
【００２７】
【表３】
【００２８】結果 表３に示す。エマルゲン４２０と、
リパーゼの安定化効果を示さない界面活性剤エマルゲン
Ａ６０との組み合わせにおいても良好な安定性が確認さ
れた。
リパーゼの安定化効果を示さない界面活性剤エマルゲン
Ａ６０との組み合わせにおいても良好な安定性が確認さ
れた。
【００２９】（実施例４）リパーゼ（東洋紡績製ＬＰＬ
−３１４）２Ｕ／ｍＬを各種界面活性剤を添加した実施
例１の中性脂肪測定試薬にエマルゲン１０８、またはエ
マルゲン４３０を濃度を変えて添加した第二試液に対
し、第一試薬として下記試薬を組み合わせて下記測定法
にて濃度既知の血清を測定し中性脂肪濃度を求めた。
−３１４）２Ｕ／ｍＬを各種界面活性剤を添加した実施
例１の中性脂肪測定試薬にエマルゲン１０８、またはエ
マルゲン４３０を濃度を変えて添加した第二試液に対
し、第一試薬として下記試薬を組み合わせて下記測定法
にて濃度既知の血清を測定し中性脂肪濃度を求めた。
【００３０】（試薬の調製）下記組成からなる中性脂肪
測定試薬の第一試薬をそれぞれ調製した。 第一試薬 ＰＩＰＥＳ ５０ｍＭ ｐＨ７．０ ＭｇＣｌ２ ０．２ｇ／Ｌ アデノシン３リン酸２Ｎａ塩 １．２ｇ／Ｌ エマルゲンＡ６０ ４ｇ／Ｌ トリトンＸ−１００（ＨＬＢ１３．５） ２ｇ／Ｌ ４−アミノアンチピリン ０．１ｇ／Ｌ フラビンアデニンジヌクレオチド２Ｎａ塩 ８μｍｏｌ／Ｌ グリセロールキナーゼ（東洋紡社製ＧＹＫ−３１１） ３Ｕ／ｍＬ グリセロリン酸オキシダーゼ（東洋紡社製Ｇ３Ｏ−３１１） ５Ｕ／ｍＬ アスコルビン酸オキシダーゼ（東洋紡社製ＡＳＯ−３１１） ３Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（東洋紡社製） ２００Ｕ／ｍＬ
測定試薬の第一試薬をそれぞれ調製した。 第一試薬 ＰＩＰＥＳ ５０ｍＭ ｐＨ７．０ ＭｇＣｌ２ ０．２ｇ／Ｌ アデノシン３リン酸２Ｎａ塩 １．２ｇ／Ｌ エマルゲンＡ６０ ４ｇ／Ｌ トリトンＸ−１００（ＨＬＢ１３．５） ２ｇ／Ｌ ４−アミノアンチピリン ０．１ｇ／Ｌ フラビンアデニンジヌクレオチド２Ｎａ塩 ８μｍｏｌ／Ｌ グリセロールキナーゼ（東洋紡社製ＧＹＫ−３１１） ３Ｕ／ｍＬ グリセロリン酸オキシダーゼ（東洋紡社製Ｇ３Ｏ−３１１） ５Ｕ／ｍＬ アスコルビン酸オキシダーゼ（東洋紡社製ＡＳＯ−３１１） ３Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（東洋紡社製） ２００Ｕ／ｍＬ
【００３１】（測定法）日立７１７０形自動分析機を用
いた。試料２．１μＬに第一試薬 １８０μＬ添加し３
７℃にて５分間インキュベーションし第一反応とした。
その後第二試薬を９０μＬ添加し５分間インキュベーシ
ョンし第二反応とした。第一反応および第二反応の吸光
度を液量補正した各吸光度の差をとる２ポイントエンド
法で６００ｎｍにおける吸光度を測定した。結果は、精
製水および２００ｍｇ／ｄＬトリオレイン水溶液の測定
吸光度より算出し中性脂肪濃度として求めた。
いた。試料２．１μＬに第一試薬 １８０μＬ添加し３
７℃にて５分間インキュベーションし第一反応とした。
その後第二試薬を９０μＬ添加し５分間インキュベーシ
ョンし第二反応とした。第一反応および第二反応の吸光
度を液量補正した各吸光度の差をとる２ポイントエンド
法で６００ｎｍにおける吸光度を測定した。結果は、精
製水および２００ｍｇ／ｄＬトリオレイン水溶液の測定
吸光度より算出し中性脂肪濃度として求めた。
【００３２】
【表４】
【００３３】結果 表４に示す。実施例ではいずれも
界面活性剤無添加の測定値をほぼ回収する。
界面活性剤無添加の測定値をほぼ回収する。
【００３４】
【発明の効果】本発明においては、リパーゼを含有する
組成物中にポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテルを
共存させることで、長期間安定な液状試薬として耐えう
る安定性を有し、かつ各種試料に対し良好な反応性を維
持したリパーゼを提供できる。
組成物中にポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテルを
共存させることで、長期間安定な液状試薬として耐えう
る安定性を有し、かつ各種試料に対し良好な反応性を維
持したリパーゼを提供できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B050 CC07 HH04 KK17 LL03 4B063 QA01 QA19 QQ03 QQ70 QR02 QR03 QR07 QR12 QR53 QR65 QR66 QR67 QS28 QS36 QX01
Claims (10)
- 【請求項１】リパーゼにポリオキシエチレン直鎖アルキ
ルエーテルを共存させることを特徴とする、リパーゼの
安定化方法。 - 【請求項２】さらに、十分な反応性が維持されている、
請求項１記載のリパーゼの安定化方法。 - 【請求項３】ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテル
の濃度が０．０１〜０．５％である請求項２記載のリパ
ーゼの安定化方法。 - 【請求項４】ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテル
のＨＬＢが１５以下である請求項２記載のリパーゼの安
定化方法。 - 【請求項５】リパーゼがさらにエステラーゼ活性を有す
る請求項１〜４記載のリパーゼの安定化方法。 - 【請求項６】リパーゼにポリオキシエチレン直鎖アルキ
ルエーテルを共存させることを特徴とするリパーゼの安
定化組成物。 - 【請求項７】ポリオキシエチレン直鎖アルキルエーテル
の濃度が０．０１〜０．５％である請求項６記載のリパ
ーゼの安定化組成物。 - 【請求項８】更にリパーゼ活性化剤と組み合わせて用い
られる請求項６、７記載のリパーゼの安定化組成物。 - 【請求項９】リパーゼ活性化剤がポリオキシエチレン２
級アルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェ
ニルエーテル、ポリオキシエチレンスチリルフェニルエ
ーテルから選ばれた少なくとも１種の界面活性剤である
請求項８記載のリパーゼの安定化組成物。 - 【請求項１０】ＨＬＢが１５以下のポリオキシエチレン
直鎖アルキルエーテルと、リパーゼ活性化剤の総ＨＬＢ
が１２〜１４である請求項８、９記載のリパーゼの安定
化組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001180549A JP4013108B2 (ja) | 2001-06-14 | 2001-06-14 | リパーゼの安定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001180549A JP4013108B2 (ja) | 2001-06-14 | 2001-06-14 | リパーゼの安定化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002369681A true JP2002369681A (ja) | 2002-12-24 |
| JP4013108B2 JP4013108B2 (ja) | 2007-11-28 |
Family
ID=19020953
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001180549A Expired - Lifetime JP4013108B2 (ja) | 2001-06-14 | 2001-06-14 | リパーゼの安定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4013108B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011126067A1 (ja) * | 2010-04-09 | 2011-10-13 | 東洋紡績株式会社 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
| JP2012233186A (ja) * | 2011-04-29 | 2012-11-29 | Toyota Motor Engineering & Manufacturing North America Inc | 有機汚染を安定に自己洗浄するためのポリマー改質酵素を含むコーティング |
| JP2017106039A (ja) * | 2011-09-09 | 2017-06-15 | トヨタ モーター エンジニアリング アンド マニュファクチャリング ノース アメリカ，インコーポレイティド | 有機汚染を安定に自己洗浄するためのポリマー改質酵素を含むコーティング |
| EP3181689A4 (en) * | 2014-08-12 | 2017-12-20 | Shino-Test Corporation | Method for producing substrate solution for lipase activity assay, and method for simplifying production |
| CN110650726A (zh) * | 2017-03-03 | 2020-01-03 | 诺尔玛克药物有限责任及股份两合公司 | 包含钙离子的伯鲁酶水溶液 |
-
2001
- 2001-06-14 JP JP2001180549A patent/JP4013108B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JP2018150559A (ja) * | 2011-09-09 | 2018-09-27 | トヨタ モーター エンジニアリング アンド マニュファクチャリング ノース アメリカ，インコーポレイティド | 有機汚染を安定に自己洗浄するためのポリマー改質酵素を含むコーティング |
| JP2020012114A (ja) * | 2011-09-09 | 2020-01-23 | トヨタ モーター エンジニアリング アンド マニュファクチャリング ノース アメリカ，インコーポレイティド | 有機汚染を安定に自己洗浄するためのポリマー改質酵素を含むコーティング |
| EP3181689A4 (en) * | 2014-08-12 | 2017-12-20 | Shino-Test Corporation | Method for producing substrate solution for lipase activity assay, and method for simplifying production |
| US10494659B2 (en) | 2014-08-12 | 2019-12-03 | Shino-Test Corporation | Process for producing substrate solution for measuring lipase activity, and method for simplifying production |
| CN110650726A (zh) * | 2017-03-03 | 2020-01-03 | 诺尔玛克药物有限责任及股份两合公司 | 包含钙离子的伯鲁酶水溶液 |
| CN110650726B (zh) * | 2017-03-03 | 2021-10-08 | 诺尔玛克制药有限公司 | 包含钙离子的伯鲁酶水溶液 |
| US11439691B2 (en) | 2017-03-03 | 2022-09-13 | Nordmark Pharma Gmbh | Aqueous solution of burlulipase comprising calciumions |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4013108B2 (ja) | 2007-11-28 |
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