JPS5934119B2 - クレアチンキナ−ゼ測定用組成物 - Google Patents
クレアチンキナ−ゼ測定用組成物Info
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- JPS5934119B2 JPS5934119B2 JP53153311A JP15331178A JPS5934119B2 JP S5934119 B2 JPS5934119 B2 JP S5934119B2 JP 53153311 A JP53153311 A JP 53153311A JP 15331178 A JP15331178 A JP 15331178A JP S5934119 B2 JPS5934119 B2 JP S5934119B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
- C12Q1/50—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase involving creatine phosphokinase
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は保存安定性の良好なクレアチンキナーゼ（以下
ＣＫと記載する）活性測定用組成物に関する。
ＣＫと記載する）活性測定用組成物に関する。
更に詳しくは、本発明は下記反応１を触媒する酵素であ
るＣＫの活性を測定する際のカップリング酵素、すなわ
ち反応２を触媒するホスホグリセリン酸キナーゼ（以下
ＰＧＫと記載する）および反応３を触媒するグリセルア
ルデヒドー３−リン酸デヒドロゲナーゼ（以下ＧＡＰＤ
Ｈと記載する）を主成分として用いるＣＫ活性測定用組
成物に関する。
るＣＫの活性を測定する際のカップリング酵素、すなわ
ち反応２を触媒するホスホグリセリン酸キナーゼ（以下
ＰＧＫと記載する）および反応３を触媒するグリセルア
ルデヒドー３−リン酸デヒドロゲナーゼ（以下ＧＡＰＤ
Ｈと記載する）を主成分として用いるＣＫ活性測定用組
成物に関する。
反応１、クレアチンリン酸＋アデノシンー ５’− リ
ン酸 （以下ＡＤＰと記載する）クレアチン ＋アデノ
シンー ５’−三リン酸 （以下ＡＴＰと記載する）反
応２、ＡＴＰ＋３−ホスホグリセリン酸：６三ＡＤＰ＋
１、３−ジホスホグリセリン酸反応３．１、３−ジホス
ホグリセリン酸十還元型β−ニコチナミドアデニンジヌ
クレオチド（以下ＮＡＤＨと記載する） グリセルアルデヒドー３−リン酸十酸化 型β−ニコチナミドアデニンジヌクレオ チド（以下ＮＡＤと記載する）十無機リ ン酸 ＣＫの活性は心筋梗塞や筋ジストロフイー等医療診断項
目のひとつであるが、従来のＣＫ活性の測定法としては
ＣＫのカップリング酵素としてヘキソキナーゼおよびグ
ルコースー６−リン酸デヒドロゲナーゼを主成分とする
試薬を用いる方法（以下ＨＫ法と記載する）が正確で優
れた方法として一般に汎用されている。
ン酸 （以下ＡＤＰと記載する）クレアチン ＋アデノ
シンー ５’−三リン酸 （以下ＡＴＰと記載する）反
応２、ＡＴＰ＋３−ホスホグリセリン酸：６三ＡＤＰ＋
１、３−ジホスホグリセリン酸反応３．１、３−ジホス
ホグリセリン酸十還元型β−ニコチナミドアデニンジヌ
クレオチド（以下ＮＡＤＨと記載する） グリセルアルデヒドー３−リン酸十酸化 型β−ニコチナミドアデニンジヌクレオ チド（以下ＮＡＤと記載する）十無機リ ン酸 ＣＫの活性は心筋梗塞や筋ジストロフイー等医療診断項
目のひとつであるが、従来のＣＫ活性の測定法としては
ＣＫのカップリング酵素としてヘキソキナーゼおよびグ
ルコースー６−リン酸デヒドロゲナーゼを主成分とする
試薬を用いる方法（以下ＨＫ法と記載する）が正確で優
れた方法として一般に汎用されている。
ＨＫ法はヘキソキナーゼやグルコースー６−リン酸デヒ
ドロゲナーゼの保存安定性が悪いのでＣＫ活性の測定試
薬を調製後数時間程度の保存性があるに過ぎず、より保
存安定性の優れたカップリング酵素の出現が強く望まれ
ていた。また、ＨＫ法ではＣＫの安定剤として還元型グ
ルタチオン（以下ＧＳＨと記載する）が良く用いられる
が、検体中にグルタチオン還元酵素（以下ＧＲと記載す
る）が混在する場合には何らかの反応で酸化されたＧＳ
Ｈを還元し、同時に主反応で生じた還元型β−ニコチナ
ミドアデニンジヌクレオチドリン酸（以下ＮＡＤＰＨと
記載する）が再酸化されてニコチナミドアデニンジヌク
レオチドリン酸（以下ＮＡＤＰと記載する）に逆戻りす
る為、検体中のＣＫ活性値を見掛け上低く見誤まる危険
性が大きい。
ドロゲナーゼの保存安定性が悪いのでＣＫ活性の測定試
薬を調製後数時間程度の保存性があるに過ぎず、より保
存安定性の優れたカップリング酵素の出現が強く望まれ
ていた。また、ＨＫ法ではＣＫの安定剤として還元型グ
ルタチオン（以下ＧＳＨと記載する）が良く用いられる
が、検体中にグルタチオン還元酵素（以下ＧＲと記載す
る）が混在する場合には何らかの反応で酸化されたＧＳ
Ｈを還元し、同時に主反応で生じた還元型β−ニコチナ
ミドアデニンジヌクレオチドリン酸（以下ＮＡＤＰＨと
記載する）が再酸化されてニコチナミドアデニンジヌク
レオチドリン酸（以下ＮＡＤＰと記載する）に逆戻りす
る為、検体中のＣＫ活性値を見掛け上低く見誤まる危険
性が大きい。
本発明者らは従来の測定法が持つ上記の如き重大な欠点
を改良すべく鋭意研究を重ねた結果、ＣＫ活性測定のカ
ツプリング酵素としてＰＧＫおよびＧＡＰＤＨを主成分
とする組成物を用いれば、保存安定性に優れ、且つ検体
中のＧＲの影響を受ける事が少なく、正確な測定が可能
となることを見い出し本発明を完成するに至つた。
を改良すべく鋭意研究を重ねた結果、ＣＫ活性測定のカ
ツプリング酵素としてＰＧＫおよびＧＡＰＤＨを主成分
とする組成物を用いれば、保存安定性に優れ、且つ検体
中のＧＲの影響を受ける事が少なく、正確な測定が可能
となることを見い出し本発明を完成するに至つた。
即ち、本発明はＰＧＫ（５ＧＡＰＤＨを主成分とするＣ
Ｋ活性測定用組成物である。
Ｋ活性測定用組成物である。
本発明の組成物を用いるＣＫ活性測定法は次の反応式（
１）〜（３）で表わされる原理に基づくものである。
１）〜（３）で表わされる原理に基づくものである。
上記式（１）〜式０）により示される一連の反応を進行
せしめ、（３武中のＮＡＤＨに基づく３３４ｍｍ１３４
０關あるいは３６６ｍ７１Ｌに於ける吸光度の単位時間
当りの減少により、もしくはＮＡＤＨと発色試薬とを反
応させ単位時間当りの可視光吸光度の減少により式（１
）０反応を律する検体中のＣＫ活性を測定する。
せしめ、（３武中のＮＡＤＨに基づく３３４ｍｍ１３４
０關あるいは３６６ｍ７１Ｌに於ける吸光度の単位時間
当りの減少により、もしくはＮＡＤＨと発色試薬とを反
応させ単位時間当りの可視光吸光度の減少により式（１
）０反応を律する検体中のＣＫ活性を測定する。
式（２）の反応の触媒酵素がＰＧＫ、式（３）１７）そ
れはＧＡＰＤＨである。
れはＧＡＰＤＨである。
なお、従来法であるＨＫ法は次の反応式（１），（４）
（５）で表わされる原理に基づき、式（４），（５？反
応触媒酵素は夫々ヘキソキナーゼおよびグルコース６−
リン酸デヒドロゲナーゼである。
（５）で表わされる原理に基づき、式（４），（５？反
応触媒酵素は夫々ヘキソキナーゼおよびグルコース６−
リン酸デヒドロゲナーゼである。
本発明の組成物を用いるＣＫ活性の測定法では、本発明
の組成物（以下第１試薬と記載する場合もある）の他に
以下に詳述する第２〜４試薬の３種類の試薬を用いる。
の組成物（以下第１試薬と記載する場合もある）の他に
以下に詳述する第２〜４試薬の３種類の試薬を用いる。
本発明組成物である第１試薬は、ＰＧＫおよびＧＡＰＤ
Ｈを主成分とする緩衝液あるいはその凍結乾燥物から構
成される。
Ｈを主成分とする緩衝液あるいはその凍結乾燥物から構
成される。
緩衝液としてはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン、イミダゾール、トリエタノールアミンの如きＰＨ６
．Ｏ〜９．０に保ち得る化合物はいずれも使用すること
ができる。また安定剤としてＧＳＨないしその塩、メル
カプトエタノール、システインないしその塩、Ｎアセチ
ルシステインないしその塩、ジチオスレイトール、ジチ
オエリスリトール、チオグリコール酸ないしその塩の如
きスルフヒドリル基を有する化合物およびグリセロール
の如きポリヒドロキシ化合物を加えることができ、キレ
ート剤としてエチレンジアミン四酢酸（以下ＥＤＴＡと
略す）ないしその塩またはグリコールエーテルジアミン
四酢酸（以下ＧＥＤＴＡと略す）ないしその塩を加える
ことができる。
ン、イミダゾール、トリエタノールアミンの如きＰＨ６
．Ｏ〜９．０に保ち得る化合物はいずれも使用すること
ができる。また安定剤としてＧＳＨないしその塩、メル
カプトエタノール、システインないしその塩、Ｎアセチ
ルシステインないしその塩、ジチオスレイトール、ジチ
オエリスリトール、チオグリコール酸ないしその塩の如
きスルフヒドリル基を有する化合物およびグリセロール
の如きポリヒドロキシ化合物を加えることができ、キレ
ート剤としてエチレンジアミン四酢酸（以下ＥＤＴＡと
略す）ないしその塩またはグリコールエーテルジアミン
四酢酸（以下ＧＥＤＴＡと略す）ないしその塩を加える
ことができる。
更に、殺菌剤としてアジ化ナトリウム、クロロヘキシジ
ンないしその塩の如き化合物も添加することができる。
ンないしその塩の如き化合物も添加することができる。
此の他検体によつては高濃度で含有することもあるピル
ビン酸の影響を避ける為、ラクテートデヒドロゲナーゼ
（以下ＬＤＨと記載する）を加えることもできる。
ビン酸の影響を避ける為、ラクテートデヒドロゲナーゼ
（以下ＬＤＨと記載する）を加えることもできる。
ＰＧＫ，ＧＡＰＤＨおよびＬＤＨは動植物組織ないしそ
の体液、微生物等あらゆる当該酵素含有の生物体から常
法により抽出し、塩析、イオン交換クロマトグラフイ一
、吸着クロマトグラフイ一分子ふるいクロマトグラフイ
一、アフイニテイクロマトグラフイ一、電気泳動等の手
段により精製して用いることができる。
の体液、微生物等あらゆる当該酵素含有の生物体から常
法により抽出し、塩析、イオン交換クロマトグラフイ一
、吸着クロマトグラフイ一分子ふるいクロマトグラフイ
一、アフイニテイクロマトグラフイ一、電気泳動等の手
段により精製して用いることができる。
ＰＧＫとＧＡＰＤＨの配合比は１：０．１〜２、好まし
くは１：０．３〜１（活性比）の範囲である。
くは１：０．３〜１（活性比）の範囲である。
またＰＧＫとＧＡＰＤＨとの合計量の緩衝液への配合量
は０．１〜３０Ｔ１９／ｍｌ（緩衝液）が適当である。
更に、上記した如き加えることの出来る種々成分の適当
する配合量は次のとおりである。
は０．１〜３０Ｔ１９／ｍｌ（緩衝液）が適当である。
更に、上記した如き加えることの出来る種々成分の適当
する配合量は次のとおりである。
ただしＭはモル濃度を表わす。第２試薬は以下の成分か
ら構成される。
ら構成される。
即ち、ＡＤＰないしその塩、マグネシウムを含む塩、３
−ホスホグリセリン酸ないしその塩および安定剤として
ＧＳＨないしその塩、メルカプトエタノール、システイ
ンないしその塩、Ｎ−アセチルシステインないしその塩
、ジチオスレイトール、ジチオエリスリトール、チオグ
リコール酸ないしその塩の如きスルフヒドリル基を有す
る化合物の成分である。此の他検体によつては含有する
こともあるアデニレートキナーゼ（ミオキナーゼ）の反
応を阻害する為にアデノシン−リン酸（以下ＡＭＰと記
載する）ないしその塩、ジアデノシン−五リン酸ないし
その塩またはＧＥＤＴＡないしその塩の如き化合物を加
えることができる。
−ホスホグリセリン酸ないしその塩および安定剤として
ＧＳＨないしその塩、メルカプトエタノール、システイ
ンないしその塩、Ｎ−アセチルシステインないしその塩
、ジチオスレイトール、ジチオエリスリトール、チオグ
リコール酸ないしその塩の如きスルフヒドリル基を有す
る化合物の成分である。此の他検体によつては含有する
こともあるアデニレートキナーゼ（ミオキナーゼ）の反
応を阻害する為にアデノシン−リン酸（以下ＡＭＰと記
載する）ないしその塩、ジアデノシン−五リン酸ないし
その塩またはＧＥＤＴＡないしその塩の如き化合物を加
えることができる。
更に、殺菌剤としてアジ化ナトリウム、クロロヘキシジ
ンないしその塩の如き化合物、またキレート剤としてＥ
ＤＴＡないしその塩の如き化合物も加えることができる
。
ンないしその塩の如き化合物、またキレート剤としてＥ
ＤＴＡないしその塩の如き化合物も加えることができる
。
第３試薬はイミダゾールあるいはトリエタノールアミン
の如きＰＨを６．０〜７．５に保ち得る緩衝液から構成
される。
の如きＰＨを６．０〜７．５に保ち得る緩衝液から構成
される。
第４試薬はＮＡＤＨないしその塩、クレアチンリン酸な
いしその塩および炭酸または重炭酸のアルカリ塩から構
成される。
いしその塩および炭酸または重炭酸のアルカリ塩から構
成される。
第１試薬として凍結乾燥物を用いる場合には第１、第２
試薬を合してもよい。
試薬を合してもよい。
本発明組成物を用いて検体中のＣＫ活性を測定する方法
は、上記の各試薬の混合順序や希釈剤の種類等により異
なり一概に規定できないが、例えば、第１試薬と第２試
薬を合し、脱イオン水にて希釈した第３試薬により溶解
し、測定する直前に脱イオン水に溶解した第４試薬を加
え、次に検体を加えて適当な温度（通常２０〜４『Ｃ）
に保ち、ＮＡＤＨの減少を観測する方法に依る。
は、上記の各試薬の混合順序や希釈剤の種類等により異
なり一概に規定できないが、例えば、第１試薬と第２試
薬を合し、脱イオン水にて希釈した第３試薬により溶解
し、測定する直前に脱イオン水に溶解した第４試薬を加
え、次に検体を加えて適当な温度（通常２０〜４『Ｃ）
に保ち、ＮＡＤＨの減少を観測する方法に依る。
この時の混合試薬成分および検体濃度は概ね次の範囲に
ある。
ある。
検体液量（ＭＯ総試薬液量（ロ）×０．０１〜０．５な
お、ＰＧＫ．ＧＡＰＤＨおよびＬＤＨの活性値は３０℃
にてＮＡＤＨの減少速度から測る。
お、ＰＧＫ．ＧＡＰＤＨおよびＬＤＨの活性値は３０℃
にてＮＡＤＨの減少速度から測る。
また、本発明の方法はクレアチンリン酸、ＡＤＰあるい
はＡＴＰの測定にも応用することができる。本発明で用
いるＰＧＫおよびＧＡＰＤＨは保存安定性に優れ、わけ
ても好熱性微生物から採取される耐熱性酵素は保存安定
性が極めて良好である為、上記第１〜４試薬の夫々は低
温（低温程安定）から室温の範囲で安定であり、数ケ月
〜数年の保存に耐えることができる。また、上記第１〜
３試薬の混合液にした場合も保存安定性が良好で特に第
１試薬としてサーマス属（Ｔｈｃｒｍｕｓｓｐ．）、バ
チルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．）等に属する好熱性
微生物から採取したＰＧＫ，．ＧＡＰＤＨおよびＬＤＨ
を用いる場合、上記第１〜３試薬の混合液は室温にても
数日〜数週間安定であり、第４試薬の脱イオン水に溶解
したものを冷蔵保存あるいは適宜取り換えれば数日〜数
週間連続してＣＫ活性を測定することができる。また、
本発明のＣＫ活性測定用組成物を用いるＣＫ活性測定法
では検体中のＧＲによる前述の如き悪影響を殆んど受け
ず、正確なＣＫ活性測定ができる。以下に本発明を具体
的に実施例で説明するが、本発明の範囲はこれら実施例
に限定されるものではない。
はＡＴＰの測定にも応用することができる。本発明で用
いるＰＧＫおよびＧＡＰＤＨは保存安定性に優れ、わけ
ても好熱性微生物から採取される耐熱性酵素は保存安定
性が極めて良好である為、上記第１〜４試薬の夫々は低
温（低温程安定）から室温の範囲で安定であり、数ケ月
〜数年の保存に耐えることができる。また、上記第１〜
３試薬の混合液にした場合も保存安定性が良好で特に第
１試薬としてサーマス属（Ｔｈｃｒｍｕｓｓｐ．）、バ
チルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．）等に属する好熱性
微生物から採取したＰＧＫ，．ＧＡＰＤＨおよびＬＤＨ
を用いる場合、上記第１〜３試薬の混合液は室温にても
数日〜数週間安定であり、第４試薬の脱イオン水に溶解
したものを冷蔵保存あるいは適宜取り換えれば数日〜数
週間連続してＣＫ活性を測定することができる。また、
本発明のＣＫ活性測定用組成物を用いるＣＫ活性測定法
では検体中のＧＲによる前述の如き悪影響を殆んど受け
ず、正確なＣＫ活性測定ができる。以下に本発明を具体
的に実施例で説明するが、本発明の範囲はこれら実施例
に限定されるものではない。
実施例 １
サーマスサーモフイラス（Ｔｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒ−Ｍ
Ｏｐｈｉｌｕｓ）（ＡＴＣＣ２７６３４、微工研菌寄２
９８８）の菌体から常法により抽出精製したＰＧＫｌ２
５ＯｕおよびＧＡＰＤＨ６２５ｕを１０ｍＭのＧＳＨｌ
Ｏ．２ｍＭＯＥＤＴＡおよび３ｍＭのアジ化ナトリウム
を含む１０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン緩衝液（ＰＨ７．５）５ｍ１に溶解する事により本
発明組成物を調製した。
Ｏｐｈｉｌｕｓ）（ＡＴＣＣ２７６３４、微工研菌寄２
９８８）の菌体から常法により抽出精製したＰＧＫｌ２
５ＯｕおよびＧＡＰＤＨ６２５ｕを１０ｍＭのＧＳＨｌ
Ｏ．２ｍＭＯＥＤＴＡおよび３ｍＭのアジ化ナトリウム
を含む１０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン緩衝液（ＰＨ７．５）５ｍ１に溶解する事により本
発明組成物を調製した。
参考例 １
実施例１で得られた組成物を第１試薬とし、第２乃至第
４試薬を次のとおり調製した。
４試薬を次のとおり調製した。
第２試薬：ＡＤＰニナトリウム１２５μＭＯｌｅ、酢酸
マグネシウム１２５０μＭＯｌｅｌ３−ホスホグリセリ
ン酸三ナトリウム１２５０ｍ０１ｃ，．ＧＳＨ１２５０
Ｉｔｍ０１ｅ．．ＡＭＰニナトリウム１２５０μＭＯｌ
ｅ、およびアジ化ナトリウム３８０μＭＯｌｅを分取混
合する事により調製した。
マグネシウム１２５０μＭＯｌｅｌ３−ホスホグリセリ
ン酸三ナトリウム１２５０ｍ０１ｃ，．ＧＳＨ１２５０
Ｉｔｍ０１ｅ．．ＡＭＰニナトリウム１２５０μＭＯｌ
ｅ、およびアジ化ナトリウム３８０μＭＯｌｅを分取混
合する事により調製した。
第３試薬：ＩＭイミダゾール酢酸緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）
を１２．５ｍ１調製した。
を１２．５ｍ１調製した。
第４試薬：ＮＡＤＨニナトリウム２５μＭＯｌｅクレア
チンリン酸二ナトリウム４３８０μＭＯＩｅおよび重炭
酸ナトリウム２４０μＭＯｌｅを分取混合する事により
調製した。
チンリン酸二ナトリウム４３８０μＭＯＩｅおよび重炭
酸ナトリウム２４０μＭＯｌｅを分取混合する事により
調製した。
次に第３試薬を脱イオン水にて９．４倍に希釈し、これ
に第１および第２試薬を混合溶解した。
に第１および第２試薬を混合溶解した。
続いて脱イオン水２ｍ１に溶解した第４試薬２０μｌを
上記混合液１．２３ｍ１に加え、ＣＫを含む検体５０？
を加えて一定温度（２５〜３７えＣ）にて３〜１０分間
保温し３４０ｍ７！Ｌの吸光度減少速度およびＮＡＤＨ
の３４０ｍｍ１こおける分子吸光係数よりＣＫの含有量
を測定した。検体として市販標準血清を用いて３７℃に
て測定した所ＣＫ活性値は本発明による方法では１１３
ｕ／ｌ標準血清記載値、ＨＫ法では１１０ｕ／ｌであつ
た。
上記混合液１．２３ｍ１に加え、ＣＫを含む検体５０？
を加えて一定温度（２５〜３７えＣ）にて３〜１０分間
保温し３４０ｍ７！Ｌの吸光度減少速度およびＮＡＤＨ
の３４０ｍｍ１こおける分子吸光係数よりＣＫの含有量
を測定した。検体として市販標準血清を用いて３７℃に
て測定した所ＣＫ活性値は本発明による方法では１１３
ｕ／ｌ標準血清記載値、ＨＫ法では１１０ｕ／ｌであつ
た。
参考例 ２
参考例１と同様の方法により検体ＣＫ含有量の濃度を変
えてＣＫ濃度と３４０ｎｍにおける吸光度減少速度の相
関を取つた処、よい直線相関性が得られた。
えてＣＫ濃度と３４０ｎｍにおける吸光度減少速度の相
関を取つた処、よい直線相関性が得られた。
結果を第１図に示す。上記の方法で得られた吸光度減少
速度とＨＫ法による吸光度減少速度と比較した処第２図
に示す如く高い相関関係が得られた。
速度とＨＫ法による吸光度減少速度と比較した処第２図
に示す如く高い相関関係が得られた。
実施例 ２
バチルスステアローサーモフイラス（Ｂａｃｉ−１１ｕ
ｓｓｔｅａｒ０ｔｈｅｒｍ０ｐｈｉ１ｕｓ）（ＡＴＣＣ
７９５４）の菌体から常法により抽出精製したＰＧＫｌ
２５ＯｕおよびＧＡＰＤＨ６２５ｕを１０ｍＭ０ＧＳＨ
，．０．２ｍＭ０）ＥＤＴＡｌ３ｍＭのアジ化ナトリウ
ムおよび５０％グリセリンを含む１０ｍＭのトリス（ヒ
ドロキシメル）アミノメタン緩衝液（ＰＨ７．５）５ｄ
に溶解する事により本発明組成物を調製した。
ｓｓｔｅａｒ０ｔｈｅｒｍ０ｐｈｉ１ｕｓ）（ＡＴＣＣ
７９５４）の菌体から常法により抽出精製したＰＧＫｌ
２５ＯｕおよびＧＡＰＤＨ６２５ｕを１０ｍＭ０ＧＳＨ
，．０．２ｍＭ０）ＥＤＴＡｌ３ｍＭのアジ化ナトリウ
ムおよび５０％グリセリンを含む１０ｍＭのトリス（ヒ
ドロキシメル）アミノメタン緩衝液（ＰＨ７．５）５ｄ
に溶解する事により本発明組成物を調製した。
参考例 ３
参考例１において、実施例２で得られた組成物を第１試
薬とし、また第３試薬を脱イオン水にて９．８倍に希釈
した以外は参考例１と同様にして検体中のＣＫ濃度を測
定することができた。
薬とし、また第３試薬を脱イオン水にて９．８倍に希釈
した以外は参考例１と同様にして検体中のＣＫ濃度を測
定することができた。
参考例 ４
参考例１および３において脱イオン水を加えて混合調製
した第１乃至第３試薬と脱イオン水に溶解した第４試薬
を室温にて保存し、凍結保存したＣＫを含む実施例１と
同一の検体を測定した処、１週間を保存経過した後に測
定しても上記各参考例と同じＣＫ活性値を示した。
した第１乃至第３試薬と脱イオン水に溶解した第４試薬
を室温にて保存し、凍結保存したＣＫを含む実施例１と
同一の検体を測定した処、１週間を保存経過した後に測
定しても上記各参考例と同じＣＫ活性値を示した。
実施例 ３
バン酵母から常法により抽出精製したＰＧＫ２５ＯＯｕ
および兎筋肉から常法により抽出精製したＧＡＰＤＨｌ
２５Ｏｕを混合し凍結乾燥する事により本発明組成物を
調製した。
および兎筋肉から常法により抽出精製したＧＡＰＤＨｌ
２５Ｏｕを混合し凍結乾燥する事により本発明組成物を
調製した。
参考例 ５
参考例１において、実施例３で得られた組成物を第１試
薬とした以外は参考例１と同様にして検体中のＣＫ濃度
を測定することができた。
薬とした以外は参考例１と同様にして検体中のＣＫ濃度
を測定することができた。
参考例 ６
実施例１および３における第１試薬を室温にて保存しそ
のＰＧＫ，ＧＡＰＤＨの活性を測定した処、１ケ月保存
経過した後に測定してもその活性値は減少しなかつた。
のＰＧＫ，ＧＡＰＤＨの活性を測定した処、１ケ月保存
経過した後に測定してもその活性値は減少しなかつた。
Claims (1)
- １ ホスホグリセリン酸キナーゼおよびグリセルアルデ
ヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼを主成分とすること
を特徴とするクレアチンキナーゼ活性測定用組成物。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53153311A JPS5934119B2 (ja) | 1978-12-12 | 1978-12-12 | クレアチンキナ−ゼ測定用組成物 |
| US06/302,868 US4352881A (en) | 1978-12-12 | 1981-09-16 | Method of measuring creatine kinase activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53153311A JPS5934119B2 (ja) | 1978-12-12 | 1978-12-12 | クレアチンキナ−ゼ測定用組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5581596A JPS5581596A (en) | 1980-06-19 |
| JPS5934119B2 true JPS5934119B2 (ja) | 1984-08-20 |
Family
ID=15559705
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP53153311A Expired JPS5934119B2 (ja) | 1978-12-12 | 1978-12-12 | クレアチンキナ−ゼ測定用組成物 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4352881A (ja) |
| JP (1) | JPS5934119B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013040800A (ja) * | 2011-08-11 | 2013-02-28 | Toyohashi Univ Of Technology | 細胞放出物質検出装置、細胞放出物質検出方法および細胞放出物質検出用固定化酵素基板 |
Families Citing this family (15)
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|---|---|---|---|---|
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| US4547461A (en) * | 1983-01-18 | 1985-10-15 | Eastman Kodak Company | Composition, analytical element and method for the quantification of creatine kinase |
| JPS6188899A (ja) * | 1984-10-05 | 1986-05-07 | Unitika Ltd | クレアチンキナ−ゼ定量用試薬 |
| US4897346A (en) * | 1986-07-15 | 1990-01-30 | Beckman Instruments, Inc. | Stabilized liquid enzyme composition for glucose determination |
| JPH0556789A (ja) * | 1990-10-29 | 1993-03-09 | Juzo Udaka | テルムス アクアテイカスのキシロースイソメラーゼ遺伝子、キシロースイソメラーゼ及びそれを用いたフラクトースの製造方法 |
| US6268146B1 (en) | 1998-03-13 | 2001-07-31 | Promega Corporation | Analytical methods and materials for nucleic acid detection |
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| US6703211B1 (en) | 1998-03-13 | 2004-03-09 | Promega Corporation | Cellular detection by providing high energy phosphate donor other than ADP to produce ATP |
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| US7090975B2 (en) | 1998-03-13 | 2006-08-15 | Promega Corporation | Pyrophosphorolysis and incorporation of nucleotide method for nucleic acid detection |
| US6270973B1 (en) | 1998-03-13 | 2001-08-07 | Promega Corporation | Multiplex method for nucleic acid detection |
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| US6270974B1 (en) | 1998-03-13 | 2001-08-07 | Promega Corporation | Exogenous nucleic acid detection |
| CN110779887B (zh) * | 2019-09-30 | 2021-05-14 | 浙江大学 | 一种测定磷酸甘油酸激酶活性的方法 |
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|---|---|---|---|---|
| US3929580A (en) * | 1974-08-29 | 1975-12-30 | American Cyanamid Co | Creatine phosphokinase test indicator |
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| US4012286A (en) * | 1976-04-09 | 1977-03-15 | The Dow Chemical Company | Determination of creatine phosphokinase in body fluids |
-
1978
- 1978-12-12 JP JP53153311A patent/JPS5934119B2/ja not_active Expired
-
1981
- 1981-09-16 US US06/302,868 patent/US4352881A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013040800A (ja) * | 2011-08-11 | 2013-02-28 | Toyohashi Univ Of Technology | 細胞放出物質検出装置、細胞放出物質検出方法および細胞放出物質検出用固定化酵素基板 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5581596A (en) | 1980-06-19 |
| US4352881A (en) | 1982-10-05 |
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