JPS6188899A - クレアチンキナ−ゼ定量用試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、生体液中のタレアチンキナーゼ（以下ＣＫと
略記する。）の定量用試薬に関するものである。

（従来の技術） ＣＫは、全身の筋組織及び脳に存在し、臨床検査の領域
においてＣＫ活性の測定は、筋疾患、神経性疾患、中枢
神経系疾患、精神病、心疾患などの診断に日常的に測定
されている重要な項目の−っである。

ＣＫは、（１）式の左右両方向の反応を触媒するｎ素で
ある。

Ｃに ＣＫ＋ＡＤＰ　　；士　Ｃ＋　ＡＴＰ　　　　　　（１
１（略号は、ＣＰ：クレアチンリン酸、Ｃ：クレアチン
、＾叶　：アデノシンニリン酸、＾ＴＰ：アデノシン三
リン酸である。） 従来から１種々のＣＫ測定法が提案されてきた。

その一つは、左方向の活性を測定するという方法で、こ
れらの中には■ｃｐの加水分解で生ずる無機リン酸を測
定する方法１■ＡＤＰをピルビン酸キナーゼ（以下ＰＫ
と略記する。）と乳酸脱水素酵素（以下ＬＤＨと略記す
る。）の作用で還元型β−ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド（以下ＮＡＤＨと略記する。）に導き、吸収
減少として測定する方法、■ＡＤＰをＰＫでピルビン酸
に導き２次いで２，４−ジニトロフェニルヒドラジンと
の反応で生成したヒドラゾンを測定する方法などがある
。しかしながら、これらの方法はいずれも感度が低いた
め。

あるいは発色の不安定のために、近年はとんど使用され
ていない。また、右方向の活性を測定する方法には、■
生成したＣを色素と反応させて比色する。あるいは螢光
を測定する方法、■ルシフェラーゼを用いる方法（特開
昭５１−４１５９７号公報、特開昭５５−１２０７９６
号公報、特開昭５６−２６２００号公報。

特開昭５７−１０５１９９号公報参照。）、■ホスホグ
リセリン酸キナーゼ（以下ＰＧＫと略記する。）とグリ
セルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（以下Ｇ
ＡＰＤＨと略記する。）を用いる方法（特公昭５９−３
４１１９号公報、特開昭５６−１５５０００号公報参照
。）。

■ヘキソキナーゼ（以下ＨＫと略記する。）とクリコー
ス−６−リン酸脱水素酵素（以下Ｇ６ＰＤＩ＋と略記す
る。）を用いる方法などがある。これらのうち、■の比
色法あるいは螢光法は測定値の信頼性が劣ること、■の
ルシフェラーゼ法は高価なルシフェラーゼを使用しなけ
ればならなく、また測定装置が特殊なものとなること、
■のＰＧに／ＧＡＰＤ）Ｉ法はＰＫ／ＬＤＨ法と同じく
吸収減少系であり、　ＰＫ／ＬＤＩＩ法と同様の欠点を
有し、しかもＰＫ、　１０１１よりも高価なＰＧＫ、　
ＧＡＰＤＩ＋を使用しなければならないこと、などから
いずれも実用に供するには十分とはいえない。ところが
、■のＨＫ／Ｇ６Ｐ叶法は原理的に最も優れ、感度、再
現性も良いこと、及び多数検体処理も可能なことから最
も多用されている。その測定原理は。

Ｋ ＣＰ　＋　ＡＤＰ□→Ｃ＋　ＡＴＰ　　　　　　　　ｆ
ｉｌＫ ＡＴＰ＋グリコース−→ＡＤＰ＋Ｇ−６−Ｐ　　　（２
）（上記略号のうち、　Ｇ−６−Ｐはグルコース−６−
リン酸、　ＮＡＤ（Ｐ）はβ−ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチド（リン酸）　、　ＮＡＤ（Ｐ）Ｉ（は還
元型β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（リン
酸）。

６−ＰＧＡは６−ホスホグルコン酸である。）で示され
る。この）ＩＫ／ＧＢＰＯｔｌ法においては、　ＨＫが
生体液中に存在するグルコース以外の糖、たとえばフラ
クトース、マンノースなどにも作用することから測定値
に正の誤差をもたらすことがある。しかも。

アルブミンなどの安定他剤添加にもかかわらず。

この方法では溶剤状態での室温保存安定性が乏しく、液
状化してからの試薬の室温（１８〜３５°Ｃ）での寿命
は非常に短く、シかもｐｌ＋　６．５〜７．０のｐ）！
領域で試薬を２つの容器に分ける。謂る２試薬系にして
もそれほど安定性は向上せず、臨床検査の分野での長期
使用に耐えるものではなかった。このようなＩＩＫ／Ｇ
６ＰＤＨ法の欠点を改良すべく、ＨＫの代わりにグルコ
ースに極めて特異性の高い耐熱性のグルコキナーゼ（以
下Ｇｌｃｋと略記する。）を使用する１試薬系Ｇｌｃｋ
／Ｇ６ＰＤＨ法が提案され、　ＣＫ定量用試薬の試薬溶
解後の室温保存安定性も改善されている。（特開昭５６
−１６９５９８号公報参照。）（発明が解決しようとす
る問題点） ところが、このＧｌｃｋ／Ｇ６ＰＤＨ法は、一応上記１
１に／Ｇ　６　Ｐ　Ｄ　ＩＩ法の欠点を克服したかに思
われたが、その安定性はいまだ十分とはいえず、しかも
長期間安定に保つためには比較的多量の酵素が必要であ
った。しかも、近年、臨床検査の分野において（よ。

心筋梗塞など緊急に測定しなければならない病態の増加
とともに、生体液中のＣＫ活性をより正確。

かつ迅速に測定できる試薬の開発が強く要望されるよう
になった。すなわち、測定誤差を（Ｉカルなくするため
に測定の際、試薬の調整作業を必要としない、かつ緊急
時いっても測定できるような溶液状態での長期安定性に
冨む試薬が望まれている。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、このような要求を満足すべく鋭意研究を
重ねた結果、　Ｇｌｃｋ、　Ｇ６ＰＤＨ，ＮＡＤ（Ｐ）
　、　ＡＤＰ。

グルコースを主成分とする第一試薬と、　ｃｐを主成分
とする第二試薬とに分け、しかも第二試薬のｐＨを特定
の範囲に管理することにより１両試薬の調製後の安定性
が飛躍的に向上することを見い出し本発明を完成した。

さらに、引続き鋭意研究した結果、上記第一試薬中のＧ
ｌｃｋ及びグルコースを上記第二試薬に含めると、さら
に安定性が向上することを見い出し１本発明を完成した
。

すなわち１本発明はＧｌｃｋ、　Ｇ６ＰＤＨ，ＮＡＤ（
Ｐ）、八〇Ｐ。

グルコースを主成分とする第一試薬と、　ｃｐを主成分
とする第二試薬とからなり、第二試薬のｐＨが７．５〜
１０であることを特徴とするＣＫ定■用試薬及びＧ６Ｐ
ｆｌｌｌ、　ＮＡＤ（Ｐ）　、ＡＤＰを主成分とする第
一試薬と。

Ｇｌｃｋ、　ＣＰ、グルコースを主成分とする第二試薬
とからなり、第二試薬のｐＨが７．５〜１０であること
を特徴とするＣＫ定量用試薬である。

本発明に用いられるＧｌｃｋとしては、その給源が限定
されるものではなく、エーロバクター　エーロゲネスな
どの微生物由来のもの、動物由来のものなどの各種のも
のを使用することができるが。

なかでも最適生育温度が５０℃ないし８５°Ｃである微
生物の産生ずるものが好ましい。そのような微生物とし
ては５例えばバチルス　ステアロサーモフィルス、バチ
ルス　サーモプロテオリティカス１バチルス　アシドカ
ルダリウスなどのバチルス庇。

サーモアクチノマイセス属、サーマス属、サーモミクロ
ビウム属、カルデリア属などの微生物があげられる。こ
れらの中でも特に好ましい微生物としては、バチルス　
ステアロサーモフィルスがあげられ、その具体例として
はＡＴＣＣ７９３３，７９５４゜１０１９４、１２９８
０．　ＮＣＡｌ３Ｏ３，ｔｌＫ５６３株（徽工研菌寄第
７２７５号、　ＦＢＩ？Ｍ　Ｐ−７２７５，昭和５８年
９月２９日寄託）などがある。

Ｇ６ＰＤＨについても、　Ｇｌｃｋと同様に、その給源
が限定されるものではないが、好ましくは補酵素として
ＮＡＤＰだけでなく、ＭＡＤにも作用するＧ６Ｐ［ｌＩ
（（例えばロイコノストックメセンテロイデス、シュー
ドモナス　フルオレッセンス由来など）、さらに好まし
くはＮＡＤ、　ＮＡＤＰ共に作用でき、かつ安定性、保
存性に冨む好熱性細菌由来のＧ６ＰＤＨが望ましい。

また、これらＧｌｃｋを製造する場合は、抽出、精製法
などについて、公知技術を適宜組み合わせればよい。

本発明のＣＫ定量用試薬は、　ＧＫに酵素反応を行わせ
１Ｕｖ吸収を測定するのに必要なＮＡＤ　（Ｐ）　Ｈの
生成に導くこ￥素反応に係る試薬を第一試薬と第二試薬
に分けることが必要である。

まず１本発明の第一の態様について説明すると。

第一試薬はＧｌｃｋ、　Ｇ６ＰＤｔｌ、　ＮＡＤ（Ｐ）
　、　ＡＤＰ、グルコースなどが主成分であり、その他
に通常、促進剤。

賦活剤などの添加剤なるものを含ませることができる。

添加剤としては、酢酸マグネシウム、硫酸マグネシウム
などのマグネシウム塩類、Ｎ−アセチルシスティン、グ
ルタチオン、２−アミノエチルイソチオウロニウム臭化
物、チオグリコール酸。

システィン、メルカプトエタノール、ジオスレイトール
、ジチオエリスリトールなどのチオール化合物、又は防
腐剤としてのアジ化ナトリウムなど公知のものを支障な
く使用することができる。さらに、安定化剤として可溶
性澱粉、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロー
スなとの多１７ｇ　３Ｈ，Ｑとその誘導体、アルブミン
、Ｔ−グロブリンなどの蛋白質、ポリビニルアルコール
、ポリエチレングリコールなどの水溶性高分子化合物を
適宜使用することもできる。

また、第二試薬はｃｐを主成分とするものであり。

この他に防腐剤としてアジ化ナトリウムなど公知の物質
を支障なく使用することができる。

次に２本発明の第二の態様について説明すると。

第一試薬はＧ６ＰＤＨ，ＮＡＤ（Ｐ）、　ＡＤＰなどが
主成分てあり、その他に通常促進剤、賦活剤などの添加
剤なるものを含ませることができる。添加剤としては。

前記した化合物がすべて利用できる。さらに１安定剤も
前記した化合物がすべて利用できる。

また、第二試薬はＧｌｃｋ、　ＣＰ、グルコ一スなどを
主成分とするものであり、その他に通常促進剤。

賦活剤などの添加剤なるものを含ませることができる。

添加剤としては、酢酸マグネシウム、硫酸マグネシウム
などのマグネシウム塩類、Ｎ−アセチルシスティン、グ
ルタチオン、２−アミノエチルイソチオウロニウム臭化
物、チオグリコール酸。

システィン、メルカプトエタノール、ジチオスレイトー
ル、ジチオエリスリトールなどのチオール化合物５　ま
た防腐剤としてのアジ化ナトリウムなどの公知のものを
支障なく使用することができる。

さらに、安定化剤として可溶性社粉、メチルセルロース
、カルボキシメチルセルロースなどの多糖ノ頁とその誘
導体、アルブミン、γ−グロブリンなどの蛋白質、ポリ
ビニルアルコール、ポリエチレングリコールなどの水溶
性高分子化合物を適宜使用することもできる。

本発明の第一の態様、並びに第二の態様において、第一
試薬の主成分及び添加剤などはｐＨ５，５〜７．４の緩
衝液に熔解されるが、緩ｆＪｉ液の種類として５ま９例
えばイミダゾール−酢酸、トリス−酢酸。

トリエタノールアミン−酢酸、トリエタノールアミン′
−ＮａＯＩ！、　モルホリノプロパンスルホンモルホリ
ノエタンスルホン酸などの通常の使用範囲がｐＨ５．５
〜７．４のものであればよい。より好ましくは前４者の
ものが有利に使用される。

また、第二試薬の主成分及び添加剤などは，　ｐＨ７、
５〜１０の緩衝液に１容解させることか必要であるが，
緩衝液の種類としては．トリス−酢酸，トリエタノール
アミン−Ｎａｉｌ（、グリシン−ＫＯ）Ｉ　、ビシンな
どの通常の使用範囲がｐｌ＋　７．５〜１０のものであ
ればよい。より好ましくは前２者のものが有利に使用さ
れる。

このようにして調製した第一試薬と第二試薬は一定の比
率で混合した後に，目的測定物質であるＣＫの至適作用
ｐＨの６〜７．２となるように，第一試薬と第二試薬の
それぞれの緩ｊＩｉ液の濃度を設定すればよい。第一試
薬と第二試薬の混合液比としては，第一試薬：第二試薬
が２：１〜ＬＯ：１（容量比，以下同じ。）であり、よ
り好ましくは２：１〜８；１である。第一試薬と第二試
薬の緩ｆｆｉ液の濃度は，例えば第一試薬と第二試薬の
混合比率を４：１，第一試薬のｐ＋＋を６．７，第二試
薬のｐＨを８．５。

第一試薬と第二試薬を混合した後の最終反応液のｐＨを
６．７〜６．８という条件を設定すれば，Ｎ”Ｐ−を実
験によって求めることができる。例えば、第一試薬を１
５０　ｍＭイミダゾール−酢Ｍ　Ｘｉ　＆ｉ液（ｐｌ＋
６．７Ｌ第二試薬を２５ｍＭｔ〜リスー酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．５）とすることによって目的を達することができ
る。

本発明の第一の態様，並びに第二の態様の含有試薬成分
の具体例を示すと以下のごとくなる。

第一の態様 第一試薬　　　　　　　　　第二試薬 イミダゾール酢酸緩衝液　　トリス−酢酸緩衝液酢酸マ
グネシウム　　　　　ｃｐ エチレンジアミン四酢に　　アジ化ナトリウム（ＥＤＴ
＾） ＡＤＰ Ｎ　Ａ　Ｄ　（Ｐ） ＭＰ グルコース アデノシンペンクホスフェート（へｐ５八）Ｎ−アセチ
ルシスティン Ｇｌｃｋ ６ＰＤ１１ アジ化ナトリウム 第二の態様 第一試薬　　　　　　　　　第二試薬 イミダヅール酢酸緩衝液　　トリス−酢酸’ｆ’ｊ２　
？Ｊｉ　ｉ仮酢酸マグネシウム　　　　　酢酸マグネシ
ウムＥＤＴへ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　εＤＴ八ＡへＰ　　　　　　　　　　　　Ｃｒ
ＰＮ　Ａ　Ｄ　（Ｐ）　　　　　　　　　　グルコース
Ａ　Ｍ　Ｐ　　　　　　　　　　　Ｇｌｃｋ＾ｐ５Ａ　
　　　　　　　　　　　　アジ化ナトリウムＮ−アセチ
ルシスティン ６ＰＤＨ アジ化ナトリウム 本発明では，もちろん上記２つの具体例にのみ限定され
るのではない。

本発明のＣＫ定量用試薬の各成分の濃度は，公知技術を
適用すればよいが．一般には次のようなＣ，８度が好ま
しい。例えば＋　Ｇｌｃｋを０．１〜４０ユニット／ｍ
ｌ，　６６ＰＤＨを０．１〜４０ユニット／ｍｌ，ＣＰ
を２〜７０ｍＭ，　ＡＤＰを０．１〜２０ｍＭ，　ＮＡ
Ｄ（Ｐ）を０．０５−２０ｍＭ。

グルコースを１〜２００　ｍＭ、マグネシウム塩類を０
．５〜３０ｍＭ、チオール化合物を０．５〜５０ｍＭ、
　ＡＭＰを０．２〜２０ｍＭ、　　八ｐ５Ａを　１　〜
１００　　μｉ、　　ＥＤＴＡ　　を　０．１〜２０ｍ
Ｍ。

アジ化ナトリウムを０．５〜５０ｍ旧史用すればよい。

より好ましくは、　Ｇｌｃｋ　Ｏ，２〜２０ユニット／
ｍｌ。

Ｇ６ＰＤＨ０，２〜２０ユニット／ｍｌ、　ｃｐ　５〜
４０ｍＭ、八〇Ｐ０、へ　〜１０ｍＦＩ、　ＮＡＤ（Ｐ
）　０．１〜１０ｍＭ、　グルコース２〜１００　ｍＭ
、マグネシウム塩類２〜１５ｍＭ、チオール化合物２〜
３０ｍＭ、八ＭＰ　　へ、５〜１５ｍＭ、へｐ５八　２
〜５０　μｍ。

ＥＤＴＡを０．２〜１０ｍＭ、アジ化ナトリウム１〜３
０ｍＭを使用すればよい。

（実施例） 次に１本発明を実施例により具体的に説明する。

実施例１．比較例１ 生化学工業株式会社市販のバチルス　ステアロサーモフ
ィルス由来のＧｊｃｋ　１．４ユニツト／ｍ１．ロイコ
ノストンク　メセンテロイデス由来のＧ６ＰＣ１１（オ
リエンタル酵母工業株式会社より購入）１．２ニー’−
ノド／ｍｌ、　　ＡＤＰ・ニナトリウム塩１．２５ｎ＋
Ｍ、　ＮＡＤＰ・プートリウ１、塩０．７５ｍＭ、　　
グルコース２５ｍＭ、八ＭＰ６．２５ｍＭ＋　Ａｐ５八
１へ、５　μＭ、　Ｎ−アセチルシスティン１２．５ｍ
Ｍ、酢酸マグネシウム１２．５＋ｎＭ、アシ化ナトリウ
ム１０ｍＭ、　ＥＤＴＡ　２．５ｍＭ、イミダソ′−ル
−酢ＪｆＡ街イ゛夜（ｐＨ６，７）　１５０ｍＭよりな
る第一試薬を調製し１次いてＣＰｌｏｏ　ｎ＋）ｊ、　
アジ化ナトリウム１０ｍ膓トリスー酢酸緩衝液（ｐＨ８
，５）　２５ｍＭよりなる第二試薬を調製した（実施例
１）。

両試薬を３０°Ｃの恒温槽に放置し、使用時に第一試薬
と第二試薬とを４＝１に混合して血清中のＣＫ活性を測
定した。

別に比較のために市販のＧｌｃｋ　３ユニツト／ｍｌ。

市販のロイコノストックメセンテロイデス由来のＧ６Ｐ
Ｄ　３ユニツト／ｍｌ、　　ＭＤＩ”ニナトリウム塩１
．０ｍＭ、　ＮＡＤＰ　・ナトリウム塩１．６ｍＭ、　
グルコース２０ｍＭ。

八ＭＰ　５ｍＭ、八ｐ５＾１０　μＭ、　Ｎ−アセチル
システィン１０ｍＭ、酢酸マグネシウム１０ｍＭ、　ア
ジ化ナトリウム１０ｍＭ、　ＥＤＴＡ２ｍＭ、　ＣＰ　
２０　ｍＭ、イミダソ′−ル−０１．該緩衝液（ｐＨ６
，７）　１２０ｍＭよりなるＣＫ定量用試薬を調製し、
３０℃の恒温槽に放置し、使用時に必要量を採って血清
中のＣＫ活性を測定したく比較例１）。

測定は、上記各ＣＫ定量用試薬を３０℃に保温し。

その０．５ｍｌを光路長１ｃｍのセルに入れ９次に市販
標準血清２０μ２を添加し、セル室を同じ＜３０℃の恒
温に保った分光光度計にて３４０ｎｍの吸光度変化より
検体中のＣＫ活性を求める方法で実施した。各試薬調製
日を０日目とし、その時のＣＫ活性測定値を１００％と
して、３０’ｃ保存における各試薬による測定値の相対
値を追跡した。

その結果、実施例１においては、試薬調製日から１８日
間にわたってＣＫ活性が１００％検出できることが判明
したが、比較例１においては、試薬調製日からＩＯ日日
間かＣＫ活性が１００％検出できないことが判明した。

このように、実施例１のごとく第一試薬と第二試薬とに
分け、第二試薬のｐｕを管理することにより、溶液状態
での試薬の安定性が著しく向上し。

かつＧＩＣｋ、　Ｇ６ＰＤＨＮＡＤＰなどの高価な試薬
の消滅が計れることが明らかである。

比較例２ 実施例１と同様にして、第一試薬を調製し９次いでＣＰ
　１００ｍＭ、　アジ化ナトリウム１０ｍＭ、　　トリ
ス−酢酸緩衝液（ｐＨ７，０）　２５ｍＭよりなる第二
試薬を調製した。

両試薬を３０°Ｃの恒温槽に放置し、使用時に第一試薬
と第二試薬とを４：１に混合して、血清中のＣＫ活性を
実施例１と同様にして測定した。

その結果、試薬調製日から１２日間しか０Ｍ活性か１０
伊％、検出できないことが判明した。

実施例２ 市販のロイコノストック　メセンテロイデス由来のＧ６
ＰＤＨ１，２ユニツト／　ｍ　Ｉ　＋　　へｏｐ−ニナ
トリウム塩１．２５ｍＭ、　ＮＡＤＰ　・ナトリウム塩
０．７５ｍＭ、　ＡＭＰ６．２５ｍＭ、　Ａｐ５Ａ　１
２．５　μＭ！　Ｎ−アセチルシスティン１２．５ｍＭ
＋　酢酸マグネシウム１０ｍＭ、　アジ化ナトリウム１
０ｍＭ、　ＥＤＴＡ　２　ｍＭ、イミダゾール−酢ｉａ
　’４７１街液（ｐＨ６，７）１５０ｍＭよりなる第一
試薬を調製し１次いでＣＰ　１００ｍＭ、　アジ化ナト
リウム１０ｍＭ、酢酸マグネシウム１０ｍＭ、　ＥＤＴ
Ａ　２　ｍＭ、グルコース１００ｍＭ、市販のＧｊｃｋ
５．６ユー’−ソト／ｍｌ、　　トリス−酢ｂＵ　緩衝
液（ｐＨ８，５）　２５ｍ’、１よりなる第二試薬を調
製した。

両試薬を３０°Ｃの恒温槽に放置し、実施例１と同様に
して、血′清中のＣＫ活性を測定した。

その結果、試薬調製臼から２０日間にわたってＣＫ活性
が１００％検出てきることが判明した。

実施例３．４ 実施例１と同様の試薬を４℃に保存しく実施例３）、ま
た実施例２と同様の試薬も４℃に保存（実施例４）して
、　ＣＫ活性測定値の経口変化を追跡した。

その結果、実施例３では約６０日にわたり、また実施例
４では約７０日にわたりＣＫが１００％検出できること
が判明した。

実施例５ 実施例２の第二試薬中のｃｐを１５０ｍＭとした以外は
実施例２と同様の実験をした。

その結果、試薬調製臼から２４日間にわたってＣＫ活性
が１００％検出できることが判明した。

（発明の効果） 本発明のＣＭ定量試薬は、　Ｇｌｃｋ、　Ｇ６ＰＤＨ，
ＮＡＤ（Ｐ）。

ＡＤＰ、　　グルコース、ＣＰを含む試薬成分を２試薬
に分け、しかも第二試薬のｐＦｌを特定域に管理したこ
とにより、溶液状態での安定性を著しく高めることがで
きる。そのため、一度に大量の試薬を調製しておくこと
ができ、緊急検査にも迅速に対応できる。また、大量調
製が可能になったため１作業効率が改善される他、余剰
の試薬を廃棄する頻度も減少させることが可能となる。

　このように。

本発明によりＣＫ定■用試薬の臨床検査分野への寄与は
はかりしれないものがある。また、別の観点から見れば
、測定用試薬に用いるＢＭ素量や他の高価な試薬の量も
軽減することも可能になるなど。

省資源の点からも本発明の効果は大である。

特許出願人　　ユニチカ株式会社 手続ネｒｌ？正書 昭和６０年７月２５日 ■、事件の表示 特願昭５９−２１０２３８号 ２、発明の名称 クレアチンキナーゼ定量用試薬 ３、補正をする。汗 事件との関係　特許出願人 住　所　兵庫県尼崎市東本町１丁目５０番地〒５４１ 住　所　大阪市東区北久太部町４丁目６８番地名称ユニ
チカ社式会社特許部 電話０６−２８１−５２５８　（タイヤルイン）４　、
　＃＋ｌｒ正の対象 ｎｎ　ｔｍ−Ｆｌｉ１＋１１　／Ｔ’１　＊’ｌ　’Ａ
ＩＲｆ？　３３叩／７’ｌ　ｌｒａ’ｌ　　　　’　ｋ
５、補正の内容 （１）明細書第３頁第１１行の「発色の不安定の」を「
発色が不安定な」と訂正する。

（２）同第４頁第２〜３行の「グリコース−６−リン酸
脱水素酵素」を「グルコース−６−リン酸脱水素酵素」
と訂正する。

（３）同第４真下第２行の「グリコース」を「グルコー
ス」と訂正する。

（４）同第５頁第６行のｒＧ６ＰＯＨＪをｒＧ６ＰＤＨ
−１と訂正する。

（５）同第５頁第１１行の「溶剤状態」を「溶液状態」
と訂正する。

（６）同第６頁第２行ノ「ル。（ｖＦ開昭５６−１６９
５９８　号公報参照。）」を［る（特開昭５６−１６９
５９８号公十Ｕ及　゛び特開昭５９−１５１８９９号公
報参照、）。Ｊと訂正する。

（７１同第８頁第８行のｒ　７９５４　Ｊの後にｒ　８
００５　Ｊを挿入する。

（８）同第９頁第１５〜１６行の「ジオスレイトールＪ
をｉ−ジチオスレイトール」と訂正する。

（９）同第１４頁第６行のｒｃｒＰＪをｒｃＰＪと訂正
する。

００）同第１６頁第１３行のｒＧ６ＰＤｊをｒＧ６ＰＩ
）Ｉｔ　ｊと訂正する。

（１１）同第１７真第１７行の「消滅」を「削減」と訂
正する。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）グルコキナーゼ、グルコース−６−リン酸脱水素
   酵素、β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（リ
   ン酸）、アデノシン二リン酸、グルコースを主成分とす
   る第一試薬と、クレアチンリン酸を主成分とする第二試
   薬とからなり、かつ第二試薬のｐＨが７．５〜１０であ
   ることを特徴とするクレアチンキナーゼ定量用試薬。
2. （２）グルコース−６−リン酸脱水素酵素、β−ニコチ
   ンアミドアデニンジヌクレオチド（リン酸）、アデノシ
   ン二リン酸を主成分とする第一試薬と、グルコキナーゼ
   、クレアチンリン酸、グルコースを主成分とする第二試
   薬とからなり、かつ第二試薬のｐＨが７．５〜１０であ
   ることを特徴とするクレアチンキナーゼ定量用試薬。