JPS61289900A - クレアチンキナ−ゼ定量用試薬 - Google Patents
クレアチンキナ−ゼ定量用試薬Info
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- JPS61289900A JPS61289900A JP13256985A JP13256985A JPS61289900A JP S61289900 A JPS61289900 A JP S61289900A JP 13256985 A JP13256985 A JP 13256985A JP 13256985 A JP13256985 A JP 13256985A JP S61289900 A JPS61289900 A JP S61289900A
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- nac
- creatine kinase
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、生体液中のタレアチンキナーゼ（以下ＣＫと
略記する。）の定量用試薬に関するものである。
略記する。）の定量用試薬に関するものである。
（従来の技術）
ＣＫは、全身の筋組織及び脳に存在し、臨床検査の領域
においてＣＫ活性の測定は、筋疾患、神経性疾患、中框
神経系疾患、精神病、心疾患などの診断に日常的に測定
されている重要な項目の一つである。
においてＣＫ活性の測定は、筋疾患、神経性疾患、中框
神経系疾患、精神病、心疾患などの診断に日常的に測定
されている重要な項目の一つである。
ＣＫは、（１）式の左右両方向の反応を触媒する酵素で
ある。
ある。
ＣＫ
ＣＰ＋へ叶 Ｃ−１−ＡＴＰ （１１
（略号は、Ｃｌ）：クレアチンリン酸、Ｃ：クレアチン
、＾ＤＰ：アデノシンニリン酸、八ＴＰへアデノシンニ
リン酸である。） 従来から９種々のＣＫ測定法が提案されてきた。
（略号は、Ｃｌ）：クレアチンリン酸、Ｃ：クレアチン
、＾ＤＰ：アデノシンニリン酸、八ＴＰへアデノシンニ
リン酸である。） 従来から９種々のＣＫ測定法が提案されてきた。
その−・つば、左方向の活性を測定するという方法で、
これらの中には■ＣＰの加水分解で生ずる無放リン酸を
測定する方法、■＾ｎｒ’をピルビン酸キナーゼ（以下
ＰＫと略記する。）と乳酸脱水素酵素（以下Ｌ Ｄ Ｉ
＋と略記する。）の作用で還元型β−ニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド（以下Ｎ Ａ Ｄ Ｈと略記する
。）に導き、吸収減少として測定する方法、■ＡｎＰを
ＰＫでピルビン酸に導き９次いで２．４−ジニ］・ロフ
ェニルヒドラジンとの反応で生成したヒ］′ラゾンを測
定する方法などがある。しかしながら、これらの方法は
いずれも感度が低いため、あるいは発色が不安定なため
に５近年はとんど使用されていない。また、右方向の活
性を測定する方法には、■生成したＣを色素と反応さ一
ロて比色する。あるいは螢光を測定する方法、■ルシフ
ェラーゼを用いる方法（特開昭５１．−４１５９７号公
報、特開昭５５−１２０７９６号公報１特開昭５６．−
２６２００号公報、特開昭５７−１０５１９９号公報参
照。）、■ホスホグリセリン酸キナーゼ（以下ＰＧＫと
略記する。）とグリセルアルデヒド−３−リン酸デヒド
ロゲナーゼ（以下ＧＡＰｒｌ１１と略記する。）を用い
る方法（特公昭５９−３４１１９号公報、特開昭５６−
１５５０００号公報参照。）■ヘキソキナーゼ（以下１
１にと略記する。）とグルコース−６−リン酸脱水素酵
素（以下Ｇ ６ Ｐ ｌ′１ ＋１と略記する。）を用
いる方法などがある。
これらの中には■ＣＰの加水分解で生ずる無放リン酸を
測定する方法、■＾ｎｒ’をピルビン酸キナーゼ（以下
ＰＫと略記する。）と乳酸脱水素酵素（以下Ｌ Ｄ Ｉ
＋と略記する。）の作用で還元型β−ニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド（以下Ｎ Ａ Ｄ Ｈと略記する
。）に導き、吸収減少として測定する方法、■ＡｎＰを
ＰＫでピルビン酸に導き９次いで２．４−ジニ］・ロフ
ェニルヒドラジンとの反応で生成したヒ］′ラゾンを測
定する方法などがある。しかしながら、これらの方法は
いずれも感度が低いため、あるいは発色が不安定なため
に５近年はとんど使用されていない。また、右方向の活
性を測定する方法には、■生成したＣを色素と反応さ一
ロて比色する。あるいは螢光を測定する方法、■ルシフ
ェラーゼを用いる方法（特開昭５１．−４１５９７号公
報、特開昭５５−１２０７９６号公報１特開昭５６．−
２６２００号公報、特開昭５７−１０５１９９号公報参
照。）、■ホスホグリセリン酸キナーゼ（以下ＰＧＫと
略記する。）とグリセルアルデヒド−３−リン酸デヒド
ロゲナーゼ（以下ＧＡＰｒｌ１１と略記する。）を用い
る方法（特公昭５９−３４１１９号公報、特開昭５６−
１５５０００号公報参照。）■ヘキソキナーゼ（以下１
１にと略記する。）とグルコース−６−リン酸脱水素酵
素（以下Ｇ ６ Ｐ ｌ′１ ＋１と略記する。）を用
いる方法などがある。
これらのうち、■の比色法あるいは螢光法は測定値の信
頼性が劣ること、■のルシフェラーゼ法は高価なルシフ
ェラーゼを使用しなければならなく。
頼性が劣ること、■のルシフェラーゼ法は高価なルシフ
ェラーゼを使用しなければならなく。
また測定装置が特殊なものとなること、■のＩ）Ｇに／
ＧＡＰｒｌｌｌ法はＰＫ／ｆｒｉｌｌ法と同しく吸収減
少系であり。
ＧＡＰｒｌｌｌ法はＰＫ／ｆｒｉｌｌ法と同しく吸収減
少系であり。
ＰＫ／Ｉ、ｌ１ｌｌ法と同様の欠点を有し、しかもＰＫ
、 ＩＩＩＩ＋よりも高価なＩ’ＧＫ、 ＧＡＰＩＩＩ
＋を使用しなければならないこと、などからいずれも実
用に供するには１゛分とはいえない。ところが、■のＩ
Ｉ Ｋ ／ Ｇ ６ ＋１ Ｄ ＩＩ法は原理的に最も
優れ３感度、再現性も良いこと、及び多数検体処理も可
能なことから最も多用されている。
、 ＩＩＩＩ＋よりも高価なＩ’ＧＫ、 ＧＡＰＩＩＩ
＋を使用しなければならないこと、などからいずれも実
用に供するには１゛分とはいえない。ところが、■のＩ
Ｉ Ｋ ／ Ｇ ６ ＋１ Ｄ ＩＩ法は原理的に最も
優れ３感度、再現性も良いこと、及び多数検体処理も可
能なことから最も多用されている。
その測定原理は。
ＣＫ
ＣＰ 十ＡｎＰ −−−Ｃ十ＡＴＰ
ｆｌ）１１に ＾ＴＰ ＋グルコースー→Ａｒ１Ｐ −＋−Ｇ−６−Ｐ
ｆ２１Ｇ６Ｐ１１１１ ｒ；−６−ｐ ＋ＮＡ１１（Ｐ） −−一−→ ６
−ＰＧＡ＋ＮＡｒ１（Ｐ）Ｉｔ ｆ３ｔ（上記略号の
うち、 Ｇ−６−Ｐはグルコース−６一リンＭ、 ＮＡ
Ｄ（Ｐ）はβ〜ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
（リン酸） 、 ＮＡＩＩ（Ｐ）１１は還元型β−ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチド（リン酸）。
ｆｌ）１１に ＾ＴＰ ＋グルコースー→Ａｒ１Ｐ −＋−Ｇ−６−Ｐ
ｆ２１Ｇ６Ｐ１１１１ ｒ；−６−ｐ ＋ＮＡ１１（Ｐ） −−一−→ ６
−ＰＧＡ＋ＮＡｒ１（Ｐ）Ｉｔ ｆ３ｔ（上記略号の
うち、 Ｇ−６−Ｐはグルコース−６一リンＭ、 ＮＡ
Ｄ（Ｐ）はβ〜ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
（リン酸） 、 ＮＡＩＩ（Ｐ）１１は還元型β−ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチド（リン酸）。
６−ＰＧＡは６−ホスホグルコン酸である。）で示され
る。
る。
一方、 ＣＫ活性の賦活効果を高めるため、活性賦活
剤としてＮ〜ルアセチルシスティン以後ＮＡＣと略記す
る。）、ジチオスレイトール、グルタチオン、メルカプ
トエタノールなどの、いわゆるＳＨ基含有化合物（以後
Ｓｌｌ試薬と略記する。）が用いられており、その中で
も特にＮＡＣが好ましいとされている（Ｊ、Ｃｌ１ｎ、
Ｃｈｅｍ、Ｃｌ１ｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｖｏｌ、１５゜
Ｐ２４９〜２５４．１９７７参照）。
剤としてＮ〜ルアセチルシスティン以後ＮＡＣと略記す
る。）、ジチオスレイトール、グルタチオン、メルカプ
トエタノールなどの、いわゆるＳＨ基含有化合物（以後
Ｓｌｌ試薬と略記する。）が用いられており、その中で
も特にＮＡＣが好ましいとされている（Ｊ、Ｃｌ１ｎ、
Ｃｈｅｍ、Ｃｌ１ｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｖｏｌ、１５゜
Ｐ２４９〜２５４．１９７７参照）。
（発明が解決しようとする問題点）
しかしながら、従来のＧＫ測定用試薬は溶液状態での室
温保存安定性が乏しく、液状化してからの試薬の室温（
１８〜３７℃）での寿命は非常に短く。
温保存安定性が乏しく、液状化してからの試薬の室温（
１８〜３７℃）での寿命は非常に短く。
短時間のうちに使用してくてはならず、比較的長時間に
わたる緊急性の高い少数検体を不定期に測５一 定する緊急用自動分析装置には不適当であった。
わたる緊急性の高い少数検体を不定期に測５一 定する緊急用自動分析装置には不適当であった。
特にＮＡＣを含有せしめると、 ＣＭ活性の賦活効果を
高めるが、 ＮＡＣは比較的不安定な試薬であるため５
溶液状態ではＳｌｌ基が徐々に酸化されてＣＫ活性賦活
剤としての効果が長時間持続できなくなる。
高めるが、 ＮＡＣは比較的不安定な試薬であるため５
溶液状態ではＳｌｌ基が徐々に酸化されてＣＫ活性賦活
剤としての効果が長時間持続できなくなる。
さらにＮＡＣの分解物は（Ｊ活性を阻害するという報告
もあり （Ｃ１，ＩＮ、Ｃｔｌ［！Ｍ、Ｖｏ＃２２．
ｔｍ５．Ｐ６５０〜６５６゜１９７６参照。）、活性賦
活効果の減少とあわせてＣＫ測定用試薬の溶液状態にお
ける不安定性の大きな原因となっている。
もあり （Ｃ１，ＩＮ、Ｃｔｌ［！Ｍ、Ｖｏ＃２２．
ｔｍ５．Ｐ６５０〜６５６゜１９７６参照。）、活性賦
活効果の減少とあわせてＣＫ測定用試薬の溶液状態にお
ける不安定性の大きな原因となっている。
（問題点を解決するための手段）
本発明者らは、このような問題点を解決すべく鋭意研究
を重ねた結果、 ＮＡＣと、 ＮＡＣ以外のＳｔ（試薬
とを共存させると、 ＮＡＣが安定になり、 ＣＫの活
性賦活効果を長期間持続させるとともにＣＫ活性を阻害
するＮＡＣの分解物の生成も抑制され。
を重ねた結果、 ＮＡＣと、 ＮＡＣ以外のＳｔ（試薬
とを共存させると、 ＮＡＣが安定になり、 ＣＫの活
性賦活効果を長期間持続させるとともにＣＫ活性を阻害
するＮＡＣの分解物の生成も抑制され。
ＧＫ測定用試薬が溶液状態で長期間使用することができ
ることを見出し１本発明を完成した。
ることを見出し１本発明を完成した。
すなわち９本発明はクレアチンリン酸、β−ニコチンア
ミドアデニンジヌクレオチド（リン酸）。
ミドアデニンジヌクレオチド（リン酸）。
アデノシンニリン酸からなるクレアチンキナーゼ定量用
試薬において、Ｎ−アセチルシステインと。
試薬において、Ｎ−アセチルシステインと。
Ｎ−アセチルシステイン以外の５１１．１含有化合物と
を含有することを特徴とするりし・アチン；トナーゼ定
量用試薬である。
を含有することを特徴とするりし・アチン；トナーゼ定
量用試薬である。
本発明の試薬は２例えば、 Ｃ１）、ＮＡＩＩ（ＩＩ）
、Ａ叶、ＩＩＫ。
、Ａ叶、ＩＩＫ。
Ｇ６ ＰＩＩＩ＋が」：成分であり、その他ｉｔｌ常の
賦活剤、防腐剤１安定化剤などが含まれており、この中
にＮＡＣと、 ＮＡＣ以夕（のＳｌ＋ｌｌとを共存させ
ることが必要である。このＮＡＣの濃度としては、０．
１〜１００ ｍＭが適当であり、 ０．５〜５０ｎ＋
Ｍ、特に１．０〜３０ＩＩＩＭが好ましい。また、
ＮＡＣ以外のＳＨ試薬としては１例えば、ジチオスレイ
］・−ル、ジチオエリスリト−ル、メルカプトエタノー
ル、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオグルコ
ース、システィンなどがあげられる。そのｆｍ度として
は。
賦活剤、防腐剤１安定化剤などが含まれており、この中
にＮＡＣと、 ＮＡＣ以夕（のＳｌ＋ｌｌとを共存させ
ることが必要である。このＮＡＣの濃度としては、０．
１〜１００ ｍＭが適当であり、 ０．５〜５０ｎ＋
Ｍ、特に１．０〜３０ＩＩＩＭが好ましい。また、
ＮＡＣ以外のＳＨ試薬としては１例えば、ジチオスレイ
］・−ル、ジチオエリスリト−ル、メルカプトエタノー
ル、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオグルコ
ース、システィンなどがあげられる。そのｆｍ度として
は。
０．１〜５０ｍＭ、特に０，２〜３０＋ｎＭが好ましい
。
。
本発明に用いられるＩＩＫとしては、その給源が限定さ
れるものではなく、ヘーカーズ イースト（Ｂａｋｅｒ
ｓ Ｙｅａｓｔ）由来のものなどを使用することができ
る。また、１１によりもグルコースに対して基質特異性
が高いグルコキナーゼ（以後ＧＩｃ、にと略記する。）
も使用することができる。Ｇｌｃｋとしても。
れるものではなく、ヘーカーズ イースト（Ｂａｋｅｒ
ｓ Ｙｅａｓｔ）由来のものなどを使用することができ
る。また、１１によりもグルコースに対して基質特異性
が高いグルコキナーゼ（以後ＧＩｃ、にと略記する。）
も使用することができる。Ｇｌｃｋとしても。
その給源が限定されるものではなく、ニー「Ｉ ／’Ｚ
クター エーロゲネスなどの黴η２物由来のもの、動物
由来のものなどの各種のものを使用することができるが
、なかでも最適生育温度が５０℃ないし８５℃である微
生物の産生ずるものが好ましい。そのような微生物とし
ては５例えばノ＼チルス ステア口ザーモフィルス、バ
チルス サーモプロテオリティカス、バチルス アシ１
′カルダリウスなどのバチルス属、ザーモアクチノマイ
セス属、サーマス属、ザーモミクロビウム属、カルデリ
ア属などの微生物があげられる。これらの中でも特に好
ましい微生物としては、バチルス ステアロサーモフィ
ルスがあげられ、その具体例としてはＡＴＣＣ７９３３
、７９５４，１０１９４，１２９８０，ＮＧＡ１５０３
．１ＩＫ５６３株（黴二［研菌寄第７２７５号、］ンＥ
ＲＭ ｌｌ−７２７５，昭和５８年９月２９日寄託）な
どがある。
クター エーロゲネスなどの黴η２物由来のもの、動物
由来のものなどの各種のものを使用することができるが
、なかでも最適生育温度が５０℃ないし８５℃である微
生物の産生ずるものが好ましい。そのような微生物とし
ては５例えばノ＼チルス ステア口ザーモフィルス、バ
チルス サーモプロテオリティカス、バチルス アシ１
′カルダリウスなどのバチルス属、ザーモアクチノマイ
セス属、サーマス属、ザーモミクロビウム属、カルデリ
ア属などの微生物があげられる。これらの中でも特に好
ましい微生物としては、バチルス ステアロサーモフィ
ルスがあげられ、その具体例としてはＡＴＣＣ７９３３
、７９５４，１０１９４，１２９８０，ＮＧＡ１５０３
．１ＩＫ５６３株（黴二［研菌寄第７２７５号、］ンＥ
ＲＭ ｌｌ−７２７５，昭和５８年９月２９日寄託）な
どがある。
Ｇ６Ｐｒ１ｌ＋についても、 Ｇｌｃｋと同様に、その
給源が限定されるものではないが、好ましくは補酵素と
してＮＡＤＰだけでなく、ＮＡｒ１にも作用するＧ６Ｐ
ｒｌ＋（例えばロイコノストックメセンテロイデス、シ
ュードモナス フルオレッセンス由来など）、さらに好
ましくはＮＡＤ、 ＮＡＤＰ共に作用でき、かつ安定性
、保存性に冨む好熱性細菌由来のＧ ６ Ｐ ｎ ＩＩ
が望ましい。
給源が限定されるものではないが、好ましくは補酵素と
してＮＡＤＰだけでなく、ＮＡｒ１にも作用するＧ６Ｐ
ｒｌ＋（例えばロイコノストックメセンテロイデス、シ
ュードモナス フルオレッセンス由来など）、さらに好
ましくはＮＡＤ、 ＮＡＤＰ共に作用でき、かつ安定性
、保存性に冨む好熱性細菌由来のＧ ６ Ｐ ｎ ＩＩ
が望ましい。
また、賦活剤としては１例えば酢酸マグネシウム、硫酸
マグネシウムなどのマグネシウム塩類を。
マグネシウムなどのマグネシウム塩類を。
防腐剤としては１例えば、アジ化ナトリウムなどの公知
のものを使用することができる。安定化剤としては２例
えば、可溶性デンプン、メチルセルロース、カルボキシ
メチルセルロースなどの多糖類とその誘導体、アルブミ
ン、γ−グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルアル
コール、ポリエチレングリコールなどの水溶液高分子化
合物を適宜使用することができる。
のものを使用することができる。安定化剤としては２例
えば、可溶性デンプン、メチルセルロース、カルボキシ
メチルセルロースなどの多糖類とその誘導体、アルブミ
ン、γ−グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルアル
コール、ポリエチレングリコールなどの水溶液高分子化
合物を適宜使用することができる。
本発明のＣＫ定量用試薬の各成分の濃度は、公知技術を
適用すればよいが、一般には次の濃度が好ましい。例え
ば、 ＩＩＫ、またはＧｌｃｋを０．１〜４０ユニット
／ｍ １！ 、 Ｇ６ｐＨ１１を０．１〜４０ユニット
／ｍｎ、ＣＰを２〜７０ｍＭ、八〇Ｐを０へ１〜２０ｍ
Ｍ、ＮＡＩＩ（Ｐ）を０．０５〜２０ｍＭ、グルコース
を１〜２００ｍＭ、マグネシウム塩類を０．５〜３０ｍ
Ｍ、アデノシン−リン酸（以後ＡＭＰと略記する）を０
．２〜２０ｍＭ、 ジアデノシンペンタホスフェ−１−
（以後Ａｐ５Ａと略記する）を１〜１００μ門。
適用すればよいが、一般には次の濃度が好ましい。例え
ば、 ＩＩＫ、またはＧｌｃｋを０．１〜４０ユニット
／ｍ １！ 、 Ｇ６ｐＨ１１を０．１〜４０ユニット
／ｍｎ、ＣＰを２〜７０ｍＭ、八〇Ｐを０へ１〜２０ｍ
Ｍ、ＮＡＩＩ（Ｐ）を０．０５〜２０ｍＭ、グルコース
を１〜２００ｍＭ、マグネシウム塩類を０．５〜３０ｍ
Ｍ、アデノシン−リン酸（以後ＡＭＰと略記する）を０
．２〜２０ｍＭ、 ジアデノシンペンタホスフェ−１−
（以後Ａｐ５Ａと略記する）を１〜１００μ門。
エチレンジアミン四酢酸（以後［！ｒｌＴＡと略記する
。）を０．１〜２０ｍＭ、アジ化ナトリウムを０．５〜
５０ ｍＭ使用すればよい。より好ましくは、 ＩＩＫ
またはＧｌｃｋＯ，２〜２０−Ｌ −Ｚ ソト／ｍ ７
！、Ｇ６ＰＤＩｌ ０．２〜２０ユニット７ｍｌ、 Ｃ
Ｐ ５〜４０ｍＭ、Ａ叶０．２〜１０ｍＭ、ＮＡＩ′＋
（Ｐ）０．１〜１０ｍＬ グルコース２〜１００ｎ＋Ｍ
、マグネシウム塩類２〜１５ｍＭ、ＡＲＰ ０．５〜
１５ｍＭ、Ａｐ５八２へ〜５０μＭ、ＢＩＩＴＡ ０
．２〜１０ｍＭ、 アジ化すトリウム１〜３０ｍＭを使
用すわばよい本発明の試薬は、いわゆる−試薬系でも使
用できるが、自動分析機などの都合に３１、っては公知
技術を適宜組み合わせて二試薬系に分けて使用すること
も可能である。
。）を０．１〜２０ｍＭ、アジ化ナトリウムを０．５〜
５０ ｍＭ使用すればよい。より好ましくは、 ＩＩＫ
またはＧｌｃｋＯ，２〜２０−Ｌ −Ｚ ソト／ｍ ７
！、Ｇ６ＰＤＩｌ ０．２〜２０ユニット７ｍｌ、 Ｃ
Ｐ ５〜４０ｍＭ、Ａ叶０．２〜１０ｍＭ、ＮＡＩ′＋
（Ｐ）０．１〜１０ｍＬ グルコース２〜１００ｎ＋Ｍ
、マグネシウム塩類２〜１５ｍＭ、ＡＲＰ ０．５〜
１５ｍＭ、Ａｐ５八２へ〜５０μＭ、ＢＩＩＴＡ ０
．２〜１０ｍＭ、 アジ化すトリウム１〜３０ｍＭを使
用すわばよい本発明の試薬は、いわゆる−試薬系でも使
用できるが、自動分析機などの都合に３１、っては公知
技術を適宜組み合わせて二試薬系に分けて使用すること
も可能である。
この場合、１（Ｋ又はＧｌｃｋ、 Ｇ６ＰＤＩＩ、 Ｎ
Ａ１１（Ｐ） 、 ＮＡＣ，ＮＡＣ以夕（の３１１試薬
、グルコース、 Ａｌｌｌ）などからなる第−試薬と、
ｃｐ、マグネシウム塩類などからなる第二試薬とに分
けることが好ましい。
Ａ１１（Ｐ） 、 ＮＡＣ，ＮＡＣ以夕（の３１１試薬
、グルコース、 Ａｌｌｌ）などからなる第−試薬と、
ｃｐ、マグネシウム塩類などからなる第二試薬とに分
けることが好ましい。
（実施例）
次に９本発明を実施例により具体的に説明する実施例１
．比較例１ バルチス ステアロザーモフ・＼ルス山来のＧｌｃｋ３
ユニット／ｍＩ！（生化学工業株式会社より購入）。
．比較例１ バルチス ステアロザーモフ・＼ルス山来のＧｌｃｋ３
ユニット／ｍＩ！（生化学工業株式会社より購入）。
ロイコノストックメセンテロイデス由来のＧ ６ Ｐ
Ｄ Ｉ＋（オリエンタル酵母工業株式会社より購入）■
ユニット／ｍｎ、ＡｎＰニカリウム塩１ｍＭ 、ＮＡ１
１ｒ’ ・ナトリウム塩０．５ｍＭ、グルコース２５ｍ
Ｍ、ＡＭＰ ＩｍＭ、Ａｐ５Ａ１０μＭ、ＮＡＣ１５ｍ
Ｍ、 ジチオスレイトール５ｍＭ 、酢酸マグネシウ
ムｌ０ｍＭ、 アジ化ナトリウム０．１％、 ＥＤＴＡ
２＋１１Ｍ、 ＣＰ２０ｍＭ、イミダゾール−酢酸緩衝
液（ｐＨ６，７）１５０ ｍＭより成るＣＫ測定用試薬
を調製し、３７℃の恒温槽に放置し、使用時に必要量を
採って血清中のＣＫ活性を測定した（実施例１）。
Ｄ Ｉ＋（オリエンタル酵母工業株式会社より購入）■
ユニット／ｍｎ、ＡｎＰニカリウム塩１ｍＭ 、ＮＡ１
１ｒ’ ・ナトリウム塩０．５ｍＭ、グルコース２５ｍ
Ｍ、ＡＭＰ ＩｍＭ、Ａｐ５Ａ１０μＭ、ＮＡＣ１５ｍ
Ｍ、 ジチオスレイトール５ｍＭ 、酢酸マグネシウ
ムｌ０ｍＭ、 アジ化ナトリウム０．１％、 ＥＤＴＡ
２＋１１Ｍ、 ＣＰ２０ｍＭ、イミダゾール−酢酸緩衝
液（ｐＨ６，７）１５０ ｍＭより成るＣＫ測定用試薬
を調製し、３７℃の恒温槽に放置し、使用時に必要量を
採って血清中のＣＫ活性を測定した（実施例１）。
比較のため、ジチオスレイトールを添加しなかった以外
は実施例１と同様にしてＣＫ測定用試薬を調製し、３７
℃の恒温槽に放置し、使用時に必要量を採って１ｎ嘗８
中のＣＫ活性値を測定した（比較例１）。
は実施例１と同様にしてＣＫ測定用試薬を調製し、３７
℃の恒温槽に放置し、使用時に必要量を採って１ｎ嘗８
中のＣＫ活性値を測定した（比較例１）。
ＣＭ活ｉ１１の測定は、１記名ｃＫ定尾川試薬を３７℃
に保温し、その３．０ｍ７！を光路長１ｃｌｎのセルに
入れ２次に市販の標ｒｉｍ血清２０ｐｌを添加し、セル
室を同じ＜３７℃の恒温に保った分光光度ｄ１にて３４
０ｎｍの吸光度変化により求めた。各試薬調整日を０日
［１とＵ７．その時の（Ｊ活性測定値を１００％として
、３７°Ｃ保存における各試薬による測定値の相対値を
追跡した。
に保温し、その３．０ｍ７！を光路長１ｃｌｎのセルに
入れ２次に市販の標ｒｉｍ血清２０ｐｌを添加し、セル
室を同じ＜３７℃の恒温に保った分光光度ｄ１にて３４
０ｎｍの吸光度変化により求めた。各試薬調整日を０日
［１とＵ７．その時の（Ｊ活性測定値を１００％として
、３７°Ｃ保存における各試薬による測定値の相対値を
追跡した。
その結果、実施例１においてｔＪ、試薬調整日から１４
日間にわたって＋Ｊ活性が１００％検出できたが、比較
例１においては、試薬調整日から７１１間しか検出でき
なかった。
日間にわたって＋Ｊ活性が１００％検出できたが、比較
例１においては、試薬調整日から７１１間しか検出でき
なかった。
このように、実施例１では、 ＮＡＣの安定化のために
、ジチオスレイトールを添加したことにより。
、ジチオスレイトールを添加したことにより。
ＮＡＣのＣＫ活性に対する賦活効果の持続が著しく向上
し、しかもＣＭ活性を阻害するＮＡＣの分解物の生成も
抑制されていた。
し、しかもＣＭ活性を阻害するＮＡＣの分解物の生成も
抑制されていた。
実施例２．比較例２
Ｇｌｃｋ をＨＫ（オリエンタル酵母工業株式会社よ
り購入）に代えた以外は、すべて実施例１と同様にして
ＣＫ測定用試薬を調製し、３７℃の恒温槽に放置し、実
施例１と同様にして標準血清中のＣＫ活性を測定した（
実施例２）。
り購入）に代えた以外は、すべて実施例１と同様にして
ＣＫ測定用試薬を調製し、３７℃の恒温槽に放置し、実
施例１と同様にして標準血清中のＣＫ活性を測定した（
実施例２）。
比較のため、 Ｇｌｃｋを上記のＨＫと同じものに代え
た以外はすべて比較例１と同様にしてＣＫ測定用試薬を
調製し、３７℃の恒温槽に放置し、−ｈ記と同様にして
標準血清中のＣＫ活性を測定した（比較例２）。
た以外はすべて比較例１と同様にしてＣＫ測定用試薬を
調製し、３７℃の恒温槽に放置し、−ｈ記と同様にして
標準血清中のＣＫ活性を測定した（比較例２）。
その結果、実施例２では、試薬調整日がら５０間にわた
りＣＫが１００％検出できたが、比較例２では試薬を調
製した当日しか検出できなかった。
りＣＫが１００％検出できたが、比較例２では試薬を調
製した当日しか検出できなかった。
実施例３．４
ジチオスレイトールをチオグリセロールに代えた以外は
、すべｌ実施例１と同様にして測定用試薬を調製した（
実施例３）。また、ジチオスレイトールをメルカプトエ
タノールに代えた以外は。
、すべｌ実施例１と同様にして測定用試薬を調製した（
実施例３）。また、ジチオスレイトールをメルカプトエ
タノールに代えた以外は。
すべて実施例１と同様にしてＣＫ測定用試薬を調製した
（実施例４）。両試薬を実施例１全く同様にしてＣＫ活
性測定値の経口変化を追跡した。
（実施例４）。両試薬を実施例１全く同様にしてＣＫ活
性測定値の経口変化を追跡した。
その結果、実施例３では１２日にわたり、実施例４では
１３日にわたりＣＭが１００％検出できた。
１３日にわたりＣＭが１００％検出できた。
（発明の効果）
本発明のＣＫ定量用試薬は、 ＮＡＣとＮＡＣ以外の
Ｓ１１試薬を共存することによって、 ＧＫの活性賦
活剤であるＮＡＣの安定化を可能にし、賦活効果を長時
間持続させることと共に、 ＣＫ活性を阻害するＮＡ
Ｃの分解物の生成を抑制することができる。そのため９
本発明のＣに測定用試薬は溶液状態でも長期間使用する
ことが可能となり、一度に大量の試薬を調整しておくこ
とができる。このことにより。
Ｓ１１試薬を共存することによって、 ＧＫの活性賦
活剤であるＮＡＣの安定化を可能にし、賦活効果を長時
間持続させることと共に、 ＣＫ活性を阻害するＮＡ
Ｃの分解物の生成を抑制することができる。そのため９
本発明のＣに測定用試薬は溶液状態でも長期間使用する
ことが可能となり、一度に大量の試薬を調整しておくこ
とができる。このことにより。
緊急検査にも迅速に対応することができると共に。
作業効率の改善、余剰試薬廃棄の頻度の減少などが可能
となる。
となる。
特許出願人 ユニチカ株式会社
株式会社ヤトロン
Claims (1)
- （１）クレアチンリン酸、β−ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチド（リン酸）、アデノシン二リン酸からな
るクレアチンキナーゼ定量用試薬において、Ｎ−アセチ
ルシステインと、Ｎ−アセチルシステイン以外のＳＨ基
含有化合物とを含有することを特徴とするクレアチンキ
ナーゼ定量用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13256985A JPS61289900A (ja) | 1985-06-18 | 1985-06-18 | クレアチンキナ−ゼ定量用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13256985A JPS61289900A (ja) | 1985-06-18 | 1985-06-18 | クレアチンキナ−ゼ定量用試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61289900A true JPS61289900A (ja) | 1986-12-19 |
Family
ID=15084373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13256985A Expired - Lifetime JPS61289900A (ja) | 1985-06-18 | 1985-06-18 | クレアチンキナ−ゼ定量用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61289900A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999029895A1 (de) * | 1997-12-11 | 1999-06-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Stabilisiertes reagenz und verfahren zur bestimmung von creatin-kinase |
-
1985
- 1985-06-18 JP JP13256985A patent/JPS61289900A/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999029895A1 (de) * | 1997-12-11 | 1999-06-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Stabilisiertes reagenz und verfahren zur bestimmung von creatin-kinase |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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