JPH09224697A - 生体成分の測定方法および測定用組成物 - Google Patents
生体成分の測定方法および測定用組成物Info
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- JPH09224697A JPH09224697A JP3503096A JP3503096A JPH09224697A JP H09224697 A JPH09224697 A JP H09224697A JP 3503096 A JP3503096 A JP 3503096A JP 3503096 A JP3503096 A JP 3503096A JP H09224697 A JPH09224697 A JP H09224697A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】血清中の成分を酵素法により測定する臨床検査
測定において、血清中のビリルビンによる阻害作用を回
避して測定精度を高めること。 【解決手段】血清成分、例えば遊離コレステロール等を
酸化酵素−パーオキシダーゼ−発色剤系により測定する
測定方法において、反応系に、フェロシアン化化合物と
一般式Ｓ−Ｒ（式中、Ｓは２糖以上の多糖残基を表わ
し、Ｒは２〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐
鎖アルキル基、またはトリテルペン系もしくはステロイ
ド系のアグリコンを表す）で示される非イオン系界面活
性剤とを共存させることによって、検体中に存在するビ
リルビンによる阻害作用を回避し、測定精度を高める。
測定において、血清中のビリルビンによる阻害作用を回
避して測定精度を高めること。 【解決手段】血清成分、例えば遊離コレステロール等を
酸化酵素−パーオキシダーゼ−発色剤系により測定する
測定方法において、反応系に、フェロシアン化化合物と
一般式Ｓ−Ｒ（式中、Ｓは２糖以上の多糖残基を表わ
し、Ｒは２〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐
鎖アルキル基、またはトリテルペン系もしくはステロイ
ド系のアグリコンを表す）で示される非イオン系界面活
性剤とを共存させることによって、検体中に存在するビ
リルビンによる阻害作用を回避し、測定精度を高める。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、臨床診断におい
て、血清成分を酸化酵素−パーオキシダーゼ−発色剤系
により測定する測定方法およびそれに用いる測定用組成
物に関し、さらに詳しくは、血清中に共存するビリルビ
ン等の妨害物質の影響を回避することのできる上記方法
および組成物に関する。
て、血清成分を酸化酵素−パーオキシダーゼ−発色剤系
により測定する測定方法およびそれに用いる測定用組成
物に関し、さらに詳しくは、血清中に共存するビリルビ
ン等の妨害物質の影響を回避することのできる上記方法
および組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、臨床診断においては、酵素法によ
る血清成分の測定が行われており、特に酸化酵素−パー
オキシダーゼ−発色剤系による方法、すなわち検体中の
測定対象物質を酵素反応させて過酸化水素を発生させ、
これをパーオキシダーゼの存在下発色剤と反応させて比
色定量する方法が広く行われている。ところでこの方法
では、血清中に共存する生体内還元物質、例えばアスコ
ルビン酸、ビリルビンなどの影響を受けやすく、測定値
に負の誤差が生ずることが度々あった。このような還元
作用による影響は測定する成分が低濃度である場合に特
に大きな問題となる。
る血清成分の測定が行われており、特に酸化酵素−パー
オキシダーゼ−発色剤系による方法、すなわち検体中の
測定対象物質を酵素反応させて過酸化水素を発生させ、
これをパーオキシダーゼの存在下発色剤と反応させて比
色定量する方法が広く行われている。ところでこの方法
では、血清中に共存する生体内還元物質、例えばアスコ
ルビン酸、ビリルビンなどの影響を受けやすく、測定値
に負の誤差が生ずることが度々あった。このような還元
作用による影響は測定する成分が低濃度である場合に特
に大きな問題となる。
【０００３】妨害物質のうち、アスコルビン酸に関して
は、アスコルビン酸酸化酵素を用いる方法（特公昭５６
−３９１９８号公報）、よう素酸もしくはその塩または
過よう素酸もしくはその塩を用いる方法（特開昭５６−
１０９５９５号公報、特開昭５６−１５１３５８号公
報、特開昭５６−１０７１６１号公報）、および銅イオ
ンを用いる方法（特開昭６０−２６２５９９号公報）な
どが開示されており、反応が温和な条件で行えるアスコ
ルビン酸酸化酵素による方法は最も広く普及している。
は、アスコルビン酸酸化酵素を用いる方法（特公昭５６
−３９１９８号公報）、よう素酸もしくはその塩または
過よう素酸もしくはその塩を用いる方法（特開昭５６−
１０９５９５号公報、特開昭５６−１５１３５８号公
報、特開昭５６−１０７１６１号公報）、および銅イオ
ンを用いる方法（特開昭６０−２６２５９９号公報）な
どが開示されており、反応が温和な条件で行えるアスコ
ルビン酸酸化酵素による方法は最も広く普及している。
【０００４】一方、ビリルビンの影響回避法としては、
フェロシアン化物を用いる方法（特公昭５５−２５８４
０号公報、クリニカルケミストリー（Clinical Chemist
ry）、２６巻、２２７〜２３１頁（１９８１年））、ウ
リカーゼーパーオキシダーゼー発色試薬系により尿酸を
定量する方法において、フェロシアン化イオンを用いる
方法（特開昭５５−１３８６５６号公報）、ＥＤＴＡ−
鉄錯体を添加する方法（特開昭５５−１３８６５６号公
報）、銅イオンを用いる方法（特開昭６０−２６２５９
９号公報）、ピクリン酸との反応で尿酸を定量する方法
（特開昭５５−２９７１８号公報）、およびビリルビン
特異性菌性酵素またはビリルビン酸化酵素を反応系に添
加してビリルビンを消去する方法（特開昭５７−７１３
９８号公報）、主反応の前に多量の過酸化水素を発生さ
せ、パーオキシターゼの酸化反応を利用し、ビリルビン
を消去する方法（特開平２−４９６００、特開平６−３
３９３９７号公報）等が開示されているが、測定試薬の
保存安定性、測定系への阻害などに問題があり、いずれ
も満足できる方法ではなかった。
フェロシアン化物を用いる方法（特公昭５５−２５８４
０号公報、クリニカルケミストリー（Clinical Chemist
ry）、２６巻、２２７〜２３１頁（１９８１年））、ウ
リカーゼーパーオキシダーゼー発色試薬系により尿酸を
定量する方法において、フェロシアン化イオンを用いる
方法（特開昭５５−１３８６５６号公報）、ＥＤＴＡ−
鉄錯体を添加する方法（特開昭５５−１３８６５６号公
報）、銅イオンを用いる方法（特開昭６０−２６２５９
９号公報）、ピクリン酸との反応で尿酸を定量する方法
（特開昭５５−２９７１８号公報）、およびビリルビン
特異性菌性酵素またはビリルビン酸化酵素を反応系に添
加してビリルビンを消去する方法（特開昭５７−７１３
９８号公報）、主反応の前に多量の過酸化水素を発生さ
せ、パーオキシターゼの酸化反応を利用し、ビリルビン
を消去する方法（特開平２−４９６００、特開平６−３
３９３９７号公報）等が開示されているが、測定試薬の
保存安定性、測定系への阻害などに問題があり、いずれ
も満足できる方法ではなかった。
【０００５】また、測定系に影響を与えずにビリルビン
の影響を軽減できる方法として、界面活性剤を用いるも
のが提案された。例えば、陽イオン系または両性イオン
系界面活性剤を使用したビリルビンおよびヘモグロビン
の影響回避法（特開平３−１０６９６号公報）、リパー
ゼ活性測定での非イオン系界面活性剤と鉄錯体を組み合
わせることによるビリルビンの影響回避法（特開平３−
２２８６９９号公報）、アルキル置換されたアリール糖
類、これらの糖類を含む界面活性剤を使用した妨害物質
の影響回避法（特公平７−１１５１９号公報）、両性イ
オン系界面活性剤を使用したビリルビンの影響回避法
（特開平７−３９３９４号公報）などがある。ただ、こ
れらの提案のビリルビン影響回避法では臨床上の要求に
たいして十分ではなかった。
の影響を軽減できる方法として、界面活性剤を用いるも
のが提案された。例えば、陽イオン系または両性イオン
系界面活性剤を使用したビリルビンおよびヘモグロビン
の影響回避法（特開平３−１０６９６号公報）、リパー
ゼ活性測定での非イオン系界面活性剤と鉄錯体を組み合
わせることによるビリルビンの影響回避法（特開平３−
２２８６９９号公報）、アルキル置換されたアリール糖
類、これらの糖類を含む界面活性剤を使用した妨害物質
の影響回避法（特公平７−１１５１９号公報）、両性イ
オン系界面活性剤を使用したビリルビンの影響回避法
（特開平７−３９３９４号公報）などがある。ただ、こ
れらの提案のビリルビン影響回避法では臨床上の要求に
たいして十分ではなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】上記したように、臨床
診断における血清成分の測定において、ビリルビンの影
響を回避する方法は多数提案されており、それらの方法
によりある程度ビリルビンの影響を回避することはでき
たが、測定対象が検体中に低濃度で存在する場合、また
は検体中のビリルビン濃度が高い場合には、これらの方
法ではいずれも十分満足できるものではなく、ビリルビ
ンの影響は臨床上無視できなかった。
診断における血清成分の測定において、ビリルビンの影
響を回避する方法は多数提案されており、それらの方法
によりある程度ビリルビンの影響を回避することはでき
たが、測定対象が検体中に低濃度で存在する場合、また
は検体中のビリルビン濃度が高い場合には、これらの方
法ではいずれも十分満足できるものではなく、ビリルビ
ンの影響は臨床上無視できなかった。
【０００７】本発明は上記状況に鑑みてなされたもの
で、血清成分を酸化酵素−パーオキシダーゼ−発色剤系
により測定する測定方法において、血清中のビリルビン
による阻害作用を回避して測定精度を高めることを目的
とし、特に血清中の測定対象物質が低濃度の場合にビリ
ルビンの影響を有効に回避して精度よく測定する方法を
提供することを目的とし、またそれに使用する測定組成
物を提供することを目的とする。
で、血清成分を酸化酵素−パーオキシダーゼ−発色剤系
により測定する測定方法において、血清中のビリルビン
による阻害作用を回避して測定精度を高めることを目的
とし、特に血清中の測定対象物質が低濃度の場合にビリ
ルビンの影響を有効に回避して精度よく測定する方法を
提供することを目的とし、またそれに使用する測定組成
物を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記した
ビリルビンの影響を回避する種々の方法のうち、特にフ
ェロシアン化イオンを用いる方法に着目してそれをさら
に改良すべく研究を行ってきたが、さらにある種の非イ
オン系界面活性剤を加えることによって、測定対象が検
体中に低濃度で存在する場合、または検体中のビリルビ
ン濃度が高い場合にも測定精度を高めることができるこ
とを見出だし本発明に至った。
ビリルビンの影響を回避する種々の方法のうち、特にフ
ェロシアン化イオンを用いる方法に着目してそれをさら
に改良すべく研究を行ってきたが、さらにある種の非イ
オン系界面活性剤を加えることによって、測定対象が検
体中に低濃度で存在する場合、または検体中のビリルビ
ン濃度が高い場合にも測定精度を高めることができるこ
とを見出だし本発明に至った。
【０００９】すなわち本発明は、検体中の測定対象物質
を、酵素反応を利用して過酸化水素に導き、これをパー
オキシダーゼの存在下発色剤と反応させて比色定量する
ことにより測定する生体成分の測定方法において、反応
系にフェロシアン化化合物と共に、一般式Ｓ−Ｒ（式
中、Ｓは２糖以上の多糖残基を表わし、Ｒは２〜２０個
の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキル基、また
はトリテルペン系もしくはステロイド系のアグリコンを
表す）で示される非イオン系界面活性剤を存在させるこ
とを特徴とする。
を、酵素反応を利用して過酸化水素に導き、これをパー
オキシダーゼの存在下発色剤と反応させて比色定量する
ことにより測定する生体成分の測定方法において、反応
系にフェロシアン化化合物と共に、一般式Ｓ−Ｒ（式
中、Ｓは２糖以上の多糖残基を表わし、Ｒは２〜２０個
の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキル基、また
はトリテルペン系もしくはステロイド系のアグリコンを
表す）で示される非イオン系界面活性剤を存在させるこ
とを特徴とする。
【００１０】また本発明は、上記測定方法に使用する測
定用組成物に関するものであって、測定対象物質に作用
して過酸化水素を発生させる酵素、パーオキシダーゼお
よび発色剤を含有する生体成分測定用組成物において、
さらにフェロシアン化化合物および一般式Ｓ−Ｒ（式
中、Ｓは２糖以上の多糖残基を表わし、Ｒは２〜２０個
の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキル基、また
はトリテルペン系もしくはステロイド系のアグリコンを
表す）で示される非イオン系界面活性剤が含有されてい
ることを特徴とする。
定用組成物に関するものであって、測定対象物質に作用
して過酸化水素を発生させる酵素、パーオキシダーゼお
よび発色剤を含有する生体成分測定用組成物において、
さらにフェロシアン化化合物および一般式Ｓ−Ｒ（式
中、Ｓは２糖以上の多糖残基を表わし、Ｒは２〜２０個
の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキル基、また
はトリテルペン系もしくはステロイド系のアグリコンを
表す）で示される非イオン系界面活性剤が含有されてい
ることを特徴とする。
【００１１】上記において、２糖以上の多糖としては、
マルトース、スクロース、ジギトキソースが挙げられ、
多糖の構成単位は、グルコース、ラムノース、ガラクト
ース、キシロース、ペントース等からなるホモまたはオ
リゴ糖である。
マルトース、スクロース、ジギトキソースが挙げられ、
多糖の構成単位は、グルコース、ラムノース、ガラクト
ース、キシロース、ペントース等からなるホモまたはオ
リゴ糖である。
【００１２】アルキル基としては、直鎖または分岐状の
炭素数２〜２０のアルキル基で、例えばエチル、プロピ
ル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチル、ノニル、
デシル等が挙げられる。
炭素数２〜２０のアルキル基で、例えばエチル、プロピ
ル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチル、ノニル、
デシル等が挙げられる。
【００１３】アグリコンとしては、ジオスゲニン、チゴ
ゲニン、サルササポゲニン、ヨノゲニン、ギトゲニン、
ジギトゲニン、トコロゲニン、ヌアスゲニン、コンバラ
マロゲニン、コンバラマロシド、サルサパリロシド、パ
リリン、ジュルビン等が挙げられる。
ゲニン、サルササポゲニン、ヨノゲニン、ギトゲニン、
ジギトゲニン、トコロゲニン、ヌアスゲニン、コンバラ
マロゲニン、コンバラマロシド、サルサパリロシド、パ
リリン、ジュルビン等が挙げられる。
【００１４】非イオン界面活性剤終濃度は１〜１００ｍ
の範囲が好ましく、フェロシアン化物終濃度は５〜２０
０μＭが好ましい。非イオン界面活性剤は複数のものを
組み合わせて使用してもよい。
の範囲が好ましく、フェロシアン化物終濃度は５〜２０
０μＭが好ましい。非イオン界面活性剤は複数のものを
組み合わせて使用してもよい。
【００１５】
【００１６】試薬２：下記物質を含有するｐＨ６．０の
溶液 N-2-ヒドロキシエチルピペラジン− ２−エタンスルホン酸 ３８．１ｇ／ｌ ４−アミノアンチピリン ０．３ｇ／ｌ アジ化ナトリウム ０．３ｇ／ｌ フェロシアン化カリウム ０．０３ｇ／ｌ コレステロールオキシダーゼ ３４４ｕ／ｍｌ パーオキシダーゼ ３０ｋｕ／ｍｌ
溶液 N-2-ヒドロキシエチルピペラジン− ２−エタンスルホン酸 ３８．１ｇ／ｌ ４−アミノアンチピリン ０．３ｇ／ｌ アジ化ナトリウム ０．３ｇ／ｌ フェロシアン化カリウム ０．０３ｇ／ｌ コレステロールオキシダーゼ ３４４ｕ／ｍｌ パーオキシダーゼ ３０ｋｕ／ｍｌ
【００１７】試料液：プール血清にジタウロビリルビン
を０，１０，２０，３０，４０，５０ｍｇ／ｄｌになる
ように添加したものを試料液とした。 測定方法：各試料液５μｌに試薬１を３００μｌ加え、
３７℃で５分間加温後、更に試薬２を１００μｌ加えて
同温度で５分間加温した後、吸光度を測定して５４６ｎ
ｍの吸光度から７００ｎｍの吸光度を差し引いた吸光度
差ＥS を求めた。一方、精製水および、コレステロール
標準液（コレステロール１００ｍｇ／ｄｌ含有）を用い
て同様の操作を行い、盲検値ＥBLおよび標準液吸光度Ｅ
STD を測定した。
を０，１０，２０，３０，４０，５０ｍｇ／ｄｌになる
ように添加したものを試料液とした。 測定方法：各試料液５μｌに試薬１を３００μｌ加え、
３７℃で５分間加温後、更に試薬２を１００μｌ加えて
同温度で５分間加温した後、吸光度を測定して５４６ｎ
ｍの吸光度から７００ｎｍの吸光度を差し引いた吸光度
差ＥS を求めた。一方、精製水および、コレステロール
標準液（コレステロール１００ｍｇ／ｄｌ含有）を用い
て同様の操作を行い、盲検値ＥBLおよび標準液吸光度Ｅ
STD を測定した。
【００１８】次式（１）に従いプール血清中のコレステ
ロール濃度を算出した。
ロール濃度を算出した。
【数１】
【００１９】（比較例１）実施例１において、試薬１か
らｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトシドを除いた以外は実
施例１と同じ試料液について実施例と全く同様の測定方
法により測定を行い、実施例１と全く同様にして血清中
のコレステロール濃度を算出した。
らｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトシドを除いた以外は実
施例１と同じ試料液について実施例と全く同様の測定方
法により測定を行い、実施例１と全く同様にして血清中
のコレステロール濃度を算出した。
【００２０】（参考例）なお、参考のために、比較例１
からフェロシアン化カリウムを除いたもの、つまりフェ
ロシアン化合物も上記非イオン界面活性剤も添加してい
ない測定試薬によっても、同様に測定して、血清中のコ
レステロール濃度を算出した。
からフェロシアン化カリウムを除いたもの、つまりフェ
ロシアン化合物も上記非イオン界面活性剤も添加してい
ない測定試薬によっても、同様に測定して、血清中のコ
レステロール濃度を算出した。
【００２１】実施例１および比較例１の測定結果を表１
に示す。表中の数値はジタウロビリルビン無添加の場合
と比較した測定値誤差の割合（％）を示すもので、絶対
値の大きいものほど測定誤差が大きい。この表から分か
るように、非イオン界面活性剤の添加されていない比較
例１に比べて本実施例は測定誤差がかなり減少し、ビリ
ルビンの影響が顕著に軽減されていることがわかる。
に示す。表中の数値はジタウロビリルビン無添加の場合
と比較した測定値誤差の割合（％）を示すもので、絶対
値の大きいものほど測定誤差が大きい。この表から分か
るように、非イオン界面活性剤の添加されていない比較
例１に比べて本実施例は測定誤差がかなり減少し、ビリ
ルビンの影響が顕著に軽減されていることがわかる。
【００２２】
【表１】
【００２３】
【００２４】試薬２：下記物質を含有するｐＨ６．０の
溶液 N-2-ヒドロキシエチルピペラジン− ２−エタンスルホン酸 ３８．１ｇ／ｌ ４−アミノアンチピリン ０．３ｇ／ｌ アジ化ナトリウム ０．３ｇ／ｌ フェロシアン化カリウム ０．０３ｇ／ｌ コレステロールオキシダーゼ ３４４ｕ／ｍｌ パーオキシダーゼ ３０ｋｕ／ｍｌ
溶液 N-2-ヒドロキシエチルピペラジン− ２−エタンスルホン酸 ３８．１ｇ／ｌ ４−アミノアンチピリン ０．３ｇ／ｌ アジ化ナトリウム ０．３ｇ／ｌ フェロシアン化カリウム ０．０３ｇ／ｌ コレステロールオキシダーゼ ３４４ｕ／ｍｌ パーオキシダーゼ ３０ｋｕ／ｍｌ
【００２５】試料液：プール血清にジタウロビリルビン
を０，１０，２０，３０，４０，５０ｍｇ／ｄｌになる
ように添加したものを試料液とした。 測定方法：試料液５μｌに試薬１を３００μｌ加え、３
７℃で５分間加温後、更に試薬２を１００μｌ加えて同
温度で５分間加温した後、吸光度を測定して５４６ｎｍ
の吸光度から７００ｎｍの吸光度を差し引いた吸光度差
ＥS を求めた。一方、精製水および、コレステロール標
準液（コレステロール１００ｍｇ／ｄｌ含有）を用いて
同様の操作を行い、盲検値ＥBLおよび標準液吸光度ＥST
D を測定した。 前記式（１）に従いプール血清中のコレステロール濃度
を算出した。
を０，１０，２０，３０，４０，５０ｍｇ／ｄｌになる
ように添加したものを試料液とした。 測定方法：試料液５μｌに試薬１を３００μｌ加え、３
７℃で５分間加温後、更に試薬２を１００μｌ加えて同
温度で５分間加温した後、吸光度を測定して５４６ｎｍ
の吸光度から７００ｎｍの吸光度を差し引いた吸光度差
ＥS を求めた。一方、精製水および、コレステロール標
準液（コレステロール１００ｍｇ／ｄｌ含有）を用いて
同様の操作を行い、盲検値ＥBLおよび標準液吸光度ＥST
D を測定した。 前記式（１）に従いプール血清中のコレステロール濃度
を算出した。
【００２６】（比較例２）実施例２において、試薬１か
らシュクロースモノラウレートを除いた以外は実施例２
と同じ試料液について実施例と全く同様の測定方法によ
り測定を行い、実施例２と全く同様にして血清中のコレ
ステロール濃度を算出した。
らシュクロースモノラウレートを除いた以外は実施例２
と同じ試料液について実施例と全く同様の測定方法によ
り測定を行い、実施例２と全く同様にして血清中のコレ
ステロール濃度を算出した。
【００２７】実施例２および比較例２の測定結果を表２
に示す。表中の数値はジタウロビリルビン無添加の場合
と比較した測定値誤差の割合（％）を示すもので、絶対
値の大きいものほど測定誤差が大きい。この表から分か
るように、非イオン界面活性剤の添加されていない比較
例２に比べて本実施例は測定誤差がかなり減少し、ビリ
ルビンの影響が顕著に軽減されていることがわかる。
に示す。表中の数値はジタウロビリルビン無添加の場合
と比較した測定値誤差の割合（％）を示すもので、絶対
値の大きいものほど測定誤差が大きい。この表から分か
るように、非イオン界面活性剤の添加されていない比較
例２に比べて本実施例は測定誤差がかなり減少し、ビリ
ルビンの影響が顕著に軽減されていることがわかる。
【００２８】
【表２】
【００２９】（実施例３） 遊離コレステロールの測
定 試薬１：下記物質を含有するｐＨ７．２の溶液 ２−ヒドロキシ−３−モルフォ リノプロパンスルフォン酸 １１．３ｇ／ｌ N-メチル-N-(ヒドロキシ-3−ス ルホプロピル)-ｍ−アニシジン ０．３ｇ／ｌ アスコルビン酸オキシダーゼ １２ｋｕ／ｌ ポリオキシエチレン ラウリルエーテル ２０ｇ／ｌ ジギトニン １２．３ｇ／ｌ
定 試薬１：下記物質を含有するｐＨ７．２の溶液 ２−ヒドロキシ−３−モルフォ リノプロパンスルフォン酸 １１．３ｇ／ｌ N-メチル-N-(ヒドロキシ-3−ス ルホプロピル)-ｍ−アニシジン ０．３ｇ／ｌ アスコルビン酸オキシダーゼ １２ｋｕ／ｌ ポリオキシエチレン ラウリルエーテル ２０ｇ／ｌ ジギトニン １２．３ｇ／ｌ
【００３０】試薬２：下記物質を含有するｐＨ６．０の
溶液 N-2-ヒドロキシエチルピペラジン− ２−エタンスルホン酸 ３８．１ｇ／ｌ ４−アミノアンチピリン ０．３ｇ／ｌ アジ化ナトリウム ０．３ｇ／ｌ フェロシアン化カリウム ０．０３ｇ／ｌ コレステロールオキシダーゼ ３４４ｕ／ｍｌ パーオキシダーゼ ３０ｋｕ／ｍｌ
溶液 N-2-ヒドロキシエチルピペラジン− ２−エタンスルホン酸 ３８．１ｇ／ｌ ４−アミノアンチピリン ０．３ｇ／ｌ アジ化ナトリウム ０．３ｇ／ｌ フェロシアン化カリウム ０．０３ｇ／ｌ コレステロールオキシダーゼ ３４４ｕ／ｍｌ パーオキシダーゼ ３０ｋｕ／ｍｌ
【００３１】試料液：プール血清にジタウロビリルビン
を０，１０，２０，３０，４０，５０ｍｇ／ｄｌになる
ように添加したものを試料液とした。 測定方法：試料液５μｌに試薬１を３００μｌ加え、３
７℃で５分間加温後、更に試薬２を１００μｌ加えて同
温度で５分間加温した後、吸光度を測定して５４６ｎｍ
の吸光度から７００ｎｍの吸光度を差し引いた吸光度差
ＥS を求めた。一方、精製水および、コレステロール標
準液（コレステロール１００ｍｇ／ｄｌ含有）を用いて
同様の操作を行い、盲検値ＥBLおよび標準液吸光度ＥST
D を測定した。 前記式（１）に従いプール血清中のコレステロール濃度
を算出した。
を０，１０，２０，３０，４０，５０ｍｇ／ｄｌになる
ように添加したものを試料液とした。 測定方法：試料液５μｌに試薬１を３００μｌ加え、３
７℃で５分間加温後、更に試薬２を１００μｌ加えて同
温度で５分間加温した後、吸光度を測定して５４６ｎｍ
の吸光度から７００ｎｍの吸光度を差し引いた吸光度差
ＥS を求めた。一方、精製水および、コレステロール標
準液（コレステロール１００ｍｇ／ｄｌ含有）を用いて
同様の操作を行い、盲検値ＥBLおよび標準液吸光度ＥST
D を測定した。 前記式（１）に従いプール血清中のコレステロール濃度
を算出した。
【００３２】（比較例３）実施例３において、試薬３か
らポリオキシエチレンラウリルエーテルとジギトニンを
除いた以外は実施例３と同じ試料液について実施例と全
く同様の測定方法により測定を行い、実施例３と全く同
様にして血清中のコレステロール濃度を算出した。
らポリオキシエチレンラウリルエーテルとジギトニンを
除いた以外は実施例３と同じ試料液について実施例と全
く同様の測定方法により測定を行い、実施例３と全く同
様にして血清中のコレステロール濃度を算出した。
【００３３】実施例３および比較例３の測定結果を表３
に示す。表中の数値はジタウロビリルビン無添加の場合
と比較した測定値誤差の割合（％）を示すもので、絶対
値の大きいものほど測定誤差が大きい。この表から分か
るように、非イオン界面活性剤の添加されていない比較
例３に比べて本実施例は測定誤差がかなり減少し、ビリ
ルビンの影響が顕著に軽減されていることがわかる。
に示す。表中の数値はジタウロビリルビン無添加の場合
と比較した測定値誤差の割合（％）を示すもので、絶対
値の大きいものほど測定誤差が大きい。この表から分か
るように、非イオン界面活性剤の添加されていない比較
例３に比べて本実施例は測定誤差がかなり減少し、ビリ
ルビンの影響が顕著に軽減されていることがわかる。
【００３４】
【表３】
【００３５】なお、上記各実施例では、遊離コレステロ
ールの測定を行ったが、本発明は他にＨＬＤコレステロ
ール、中性脂肪、リン脂質、遊離脂肪酸、シアル酸、尿
素窒素、クレアチニン、クレアチン、尿酸等、種々の測
定に利用することができる。
ールの測定を行ったが、本発明は他にＨＬＤコレステロ
ール、中性脂肪、リン脂質、遊離脂肪酸、シアル酸、尿
素窒素、クレアチニン、クレアチン、尿酸等、種々の測
定に利用することができる。
【００３６】
【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
血清成分を酸化酵素−パーオキシダーゼ−発色剤系によ
り測定する測定方法において、血清中のビリルビンによ
る阻害作用を回避して測定精度を高めることができる。
特に、測定対象物質が低濃度の場合または検体中にビリ
ルビンが高濃度に含まれている場合には、従来の方法で
は上記回避効果が十分ではなかったが、本発明によれば
かかる場合にも効果が優れており、精度の高い測定がで
きる。
血清成分を酸化酵素−パーオキシダーゼ−発色剤系によ
り測定する測定方法において、血清中のビリルビンによ
る阻害作用を回避して測定精度を高めることができる。
特に、測定対象物質が低濃度の場合または検体中にビリ
ルビンが高濃度に含まれている場合には、従来の方法で
は上記回避効果が十分ではなかったが、本発明によれば
かかる場合にも効果が優れており、精度の高い測定がで
きる。
フロントページの続き (72)発明者 松本 克美 茨城県笠間市稲田字弥六内３−５ 株式会 社カイノス笠間研究所内
Claims (4)
- 【請求項１】 検体中の測定対象物質を、酵素反応を利
用して過酸化水素に導き、これをパーオキシダーゼの存
在下発色剤と反応させて比色定量することにより測定す
る生体成分の測定方法において、反応系にフェロシアン
化化合物と一般式Ｓ−Ｒ（式中、Ｓは２糖以上の多糖残
基を表わし、Ｒは２〜２０個の炭素原子を有する直鎖ま
たは分岐鎖アルキル基、またはトリテルペン系もしくは
ステロイド系のアグリコンを表す）で示される非イオン
系界面活性剤とを共存させることを特徴とする生体成分
の測定方法。 - 【請求項２】 非イオン系界面活性剤がｎ−ドデシル−
β−Ｄ−マルトシド、シュークロースモノラウレートま
たはジギトニンである請求項１記載の生体成分の測定方
法。 - 【請求項３】 検体中の測定対象物質に作用して過酸化
水素を発生させる酵素、パーオキシダーゼおよび発色剤
を含有する生体成分測定用組成物において、さらにフェ
ロシアン化化合物および一般式Ｓ−Ｒ（式中、Ｓは２糖
以上の多糖残基を表わし、Ｒは２〜２０個の炭素原子を
有する直鎖または分岐鎖アルキル基、またはトリテルペ
ン系もしくはステロイド系のアグリコンを表す）で示さ
れる非イオン系界面活性剤が含有されていることを特徴
とする生体成分測定用組成物。 - 【請求項４】 非イオン系界面活性剤がｎ−ドデシル−
β−Ｄ−マルトシド、シュークロースモノラウレートま
たはジギトニンである請求項３記載の生体成分測定用組
成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3503096A JPH09224697A (ja) | 1996-02-22 | 1996-02-22 | 生体成分の測定方法および測定用組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3503096A JPH09224697A (ja) | 1996-02-22 | 1996-02-22 | 生体成分の測定方法および測定用組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09224697A true JPH09224697A (ja) | 1997-09-02 |
Family
ID=12430673
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3503096A Pending JPH09224697A (ja) | 1996-02-22 | 1996-02-22 | 生体成分の測定方法および測定用組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09224697A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006081471A (ja) * | 2004-09-16 | 2006-03-30 | Toyobo Co Ltd | 生体成分測定用試薬及び測定方法 |
| WO2013161677A1 (ja) * | 2012-04-27 | 2013-10-31 | 協和メデックス株式会社 | 検体中の測定対象成分の測定方法 |
| KR20140142716A (ko) * | 2012-03-30 | 2014-12-12 | 세키스이 메디칼 가부시키가이샤 | 혈액시료 내의 물질 측정 방법 |
| WO2023085323A1 (ja) * | 2021-11-12 | 2023-05-19 | 東洋紡株式会社 | 溶血ヘモグロビンによる測定誤差を低減する方法 |
-
1996
- 1996-02-22 JP JP3503096A patent/JPH09224697A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006081471A (ja) * | 2004-09-16 | 2006-03-30 | Toyobo Co Ltd | 生体成分測定用試薬及び測定方法 |
| JP4609012B2 (ja) * | 2004-09-16 | 2011-01-12 | 東洋紡績株式会社 | 生体成分測定用試薬及び測定方法 |
| KR20140142716A (ko) * | 2012-03-30 | 2014-12-12 | 세키스이 메디칼 가부시키가이샤 | 혈액시료 내의 물질 측정 방법 |
| WO2013161677A1 (ja) * | 2012-04-27 | 2013-10-31 | 協和メデックス株式会社 | 検体中の測定対象成分の測定方法 |
| JPWO2013161677A1 (ja) * | 2012-04-27 | 2015-12-24 | 協和メデックス株式会社 | 検体中の測定対象成分の測定方法 |
| US9663816B2 (en) | 2012-04-27 | 2017-05-30 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for measuring a component of a biological fluid and reducing the effect of interfering substances |
| WO2023085323A1 (ja) * | 2021-11-12 | 2023-05-19 | 東洋紡株式会社 | 溶血ヘモグロビンによる測定誤差を低減する方法 |
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