JPS61227799A - クレアチニンアミドヒドロラ−ゼ製剤 - Google Patents

クレアチニンアミドヒドロラ−ゼ製剤

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JPS61227799A
JPS61227799A JP6975285A JP6975285A JPS61227799A JP S61227799 A JPS61227799 A JP S61227799A JP 6975285 A JP6975285 A JP 6975285A JP 6975285 A JP6975285 A JP 6975285A JP S61227799 A JPS61227799 A JP S61227799A
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crn
hlb
creatinine
amide hydrolase
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藤村 勝行
Kenji Asano
健治 浅野
Yoshio Inoue
義雄 井上
Akishiro Nakamura
中村 昭四郎
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Kobayashi Pharmaceutical Co Ltd
Kobayashi Seiyaku KK
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Kobayashi Pharmaceutical Co Ltd
Kobayashi Seiyaku KK
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明はクレアチニンアミドヒドロラーゼ(以下CR
Nという)を安定な状態で含有するCRN製剤に関する
ものである。
〔従来の技術〕
クレアチニンは血液や尿中に存在し、正常人の1日当た
りの尿への排出量はほぼ一定であるため、これを測定す
ることによって腎障害、尿路閉塞等の疾患を診断するこ
とができる。そして、このクレアチニンの定量分析に供
されるCRN製剤は、近年注目されるようになったクレ
アチニンを酵素的に分解する測定法に使用される診断用
の酵素製剤である。
その測定方法は、 2げ寸ネンアミfcFo5−ビ クレアチニン十HユOクレアチン の反応によってクレアチニンをクレアチンに分解し、生
成したクレアチンを更に他の酵素あるいは他の化学的方
法と組み合わせて測定し、クレアチニンの定量をするも
のである。
〔発明が解決しようとする問題点〕
しかし、CRNは酵素製剤の製造中や保存中に著しく酵
素活性が低下したり、他の酵素や色原体、補酵素等とと
もに溶液状態で保存中に著しい変性が生じて濁りを発生
することがあり、組成物に由来する過酸化物等により色
原体との反応時における自己発色があり測定精度に悪影
蓼を与える原因となっていた。
そのため、CRNを含有する#素層剤の安定化が重要な
課題となっていた。
そこで、本発明はCRNを含む酵素製剤の安定化を図る
ことを目的として以下に述べる手段を講じた。
[問題点を解決するための手段〕 本発明はCRNを含有する酵素製剤を安定化させるため
鋭意研究を行った結果、CRN製剤に2価のマンガンイ
オンを含有させると、酵素活性を著しく向上させること
を見出した。更に、非イオン性界面活性剤や防腐剤を添
加すると一層酵素を活性化できることを発見し、本発明
をするに至ったものである。
すなわち、本発明はクレアチニンアミドヒドロラーゼを
含有する酵素製剤に2価のマンガンイオンを含有させた
もの、2価のマンガンイオン及び非イオン性界面活性剤
を含有させたもの、更には2価のマンガンイオン、非イ
オン性界面活性剤及び防腐剤(以下活性化剤と総称する
)を含有させたものである。
以下、各構成について説明する。
クレアチニンアミドヒドロラーゼについて本発明のクレ
アチニンアミドヒドロラーゼはその起源を問わず全て活
性化の対象となるが特に繁用されるのはアルカリ土類金
属やシュードモナス属等に屈する微生物起源のCRNで
ある。
タレナチニン・アミドヒドロラーゼ製剤について本発明
のクレアチニンアミドヒドロラーゼ製剤はクレアチニン
アミドヒドロラーゼを単独で含有するものに限定されず
他の物質たとえばクレアチニンの定量に必要な酵素並び
に色原体更には補酵素またはこれらの安定化に必要な安
定他剤成分等を含有するものを、総称する。
また、CRN製剤は溶液状とは限らず、凍結乾燥や噴霧
乾燥等による乾燥粉末状等の状態であってもよい。
2価のマンガンイオンについて 本発明に用いられる活性化剤のうち最も代表的なもので
あり、水溶液中で2価のマンガンイオンに解離するもの
であればその種類は問わないが、代表的なものは塩化マ
ンガン、硫酸マンガン、酢酸マンガン、硝酸マンガン等
である。
2価のマンガンイオンの使用量はCRNの酵素活性を活
性化する範囲であればいかなる量でもよいが、もっとも
効果的な範囲は液状のCRN製剤の場合使用濃度が0.
1 mM〜1mMの範囲である非イオン性界面活性剤に
ついて 代表的なものとしてポリオキシエチレンアルキルエーテ
ル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルが挙
げられ、アルキルとしては炭素数7以上のアルキル、例
えばオクチル、ノニル、ラウリル等が挙げられる。これ
らの非イオン性界面活性剤はHLBが10以上のものが
望ましい。また、非イオン性界面活性剤は高感度な発色
系に影響を及ぼす過酸化物等の含有の少ない種類のもの
が望ましい。
防腐剤について 防腐剤としては酵素製剤中に混入される微生物によるC
RN等の変質を防止する機能があればよく、微生物に対
して静菌作用あるいは殺菌作用を有するもの又は微生物
の活性を不活化するものである限りどのようなものを用
いてもよい。代表的なものとしてはアジ化物、抗生物質
、サルファ剤、はう酸、有機酸等が挙げられる。
非イオン性界面活性剤及び防腐剤の配合割合この割合は
活性化作用の強弱あるいは活性化剤の化学的安定性、更
には各活性剤の併用等を考慮して定めればよいが、一般
にCRN製剤製剤1当l当0.0001〜10mgの範
囲から選択すれば確実な効果が得られる。
CRN製剤の調整方法 CRN濃度を1〜500u/Illとなるように、PH
6,0〜9.0程度の緩衝液、例えば50mMグリシル
グリシン緩衝液CP117.8 )を用いて溶解し次に
活性化剤を添加する。この際、上記CRN製剤に活性他
剤粉末を直接配合するか、その粉末を一旦水あるいは所
定の緩衝液に溶解してから添加し常法に従って撹拌する
。最後に、この混合液を乾燥させたい時は凍結乾燥や噴
霧乾燥等を行えばよい。
〔発明の効果〕
本発明に係るCRN製剤は活性化剤を添加して酵素活性
を著しく活性化したので、製剤中のCRN含量を減らす
ことができる。このため、保存中に濁りを生じることも
なく安定なCRN製剤を提供することができる。
しかも、高価なCRNの使用量が減少するので経済的で
ある。
〔実施例〕 ゛ 次に、本発明の詳細な説明する。実施例における酵素活
性の測定は下記に従った。
(A)試薬組成 (1)基質溶液 0.1Mタレアチニン溶液〔タレアチ
ニンを50mMグリシルグリシン緩衝液(P)1B、0
 ’)に熔解〕(212IIM BgCI水溶液 (3)Q色fil  2%α−ナフトールエチルアルコ
ール溶液 (4)発色液21.2%NaOH/3.2%Na2CO
j水溶液(5)発色液3 0.05% ジアセチル水溶
液(B)測定方法 基質溶液0.9s+1に酵素溶液0.1mlを加え、3
7℃で10分間反応させた。次に、2m?I HgCl
2水溶液2mlを添加して反応を停止させ、その0.1
mlを蒸留水0.9+++1 、発色液10.5s+L
発色液20゜5ml及び発色液30.5+alと充分混
合して25℃で1時間放置して発色させた。2.5a+
1の蒸留水を添加して希釈した後、この発色を525n
mにおける吸光度で測定し酵素力価を求めた。尚・酵素
力価の表示は、上記条件の下で1分間に1マイクロモル
のクレアチンを生成する酵素量を1単位とした。
実施例1 アルカリゲネス屈に冗する微生物から得られたCRNを
用い、50m lグリシルグリシン緩衝液(PH8,0
)に熔解した。そしてこの溶液に第1表の各化合物を加
えた。
上記の酵素活性の測定法によりCRNの酵素活性を測定
した。
第1表から明らかなように2価のマンガンイオン、非イ
オン性界面活性剤及び防腐剤を添加したものは著しい酵
素活性を示した。
実施例2 下記組成からなる酵素製剤を調製し、この酵素製剤を5
0mMグリシルグリシン緩衝液(PH7,8)に熔解し
全量を10m1にした。
CRN (アルカリ土類金属起源)140単位クレアチ
ン・アミジノヒドロラ ーゼ(バチルス属起源)180単位 ザルコシンオキシダーゼ (バチルス属起源)120単位 ペルオキシダーゼ (西洋ワサビ起源)100単位 4−アミノアンチピリン      5 tagポリオ
キシエチレンノニルフェ ニルエーテル(HLB 19.0)      10 
mgアジ化ナナトリウム        2 mgMn
Cl、  ・4L0           1 mg一
方、この製剤からポリオキシエチレンノニルフェニルエ
ーテル(HLB 19.0) 、アジ化ナトリウム、M
nCl2  ・4H20を除いた比較製剤を調整し、同
様に50mMグリシルグリシン緩衝液(PI+7.8 
)に溶解し、全量を10m1にした。
これらについて、37℃、4時間及び25℃で5日間の
2方法で保存した後、それぞれ3mlを採取し濁りの発
生を600nmにおける吸光度で測定し、第2表の結果
を得た。
第2表から明らかなように、2価のマンガンイオン、非
イオン性界面活性剤及びアジ化ナトリウムを添加したも
のは大した濁りは発生しないのに対して、無添加のもの
は著しい濁りが発生した。
これにより、活性化剤の添加による効果が確認された。
第2表

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1、クレアチニンアミドヒドロラーゼを含有し更に2価
    のマンガンイオンを含有させてなることを特徴とするク
    レアチニンアミドヒドロラーゼ製剤。 2、クレアチニンアミドヒドロラーゼを含有し更に2価
    のマンガンイオン及び非イオン性界面活性剤を含有させ
    てなることを特徴とするクレアチニンアミドヒドロラー
    ゼ製剤。 3、非イオン性界面活性剤がHLB10以上のポリオキ
    シエチレンアルキルエーテル及びHLB10以上のポリ
    オキシエチレンアルキルフェニルエーテルのうちから少
    なくとも一種以上を選択する特許請求の範囲第2項記載
    のクレアチニンアミドヒドロラーゼ製剤。 4、クレアチニンアミドヒドロラーゼを含有し更に2価
    のマンガンイオン、非イオン性界面活性剤及び防腐剤を
    含有させてなることを特徴とするクレアチニンアミドヒ
    ドロラーゼ製剤。 5、非イオン性界面活性剤がHLB10以上のポリオキ
    シエチレンアルキルエーテル及びHLB10以上のポリ
    オキシエチレンアルキルフェニルエーテルのうちから少
    なくとも一種以上を選択する特許請求の範囲第4項記載
    のクレアチニンアミドヒドロラーゼ製剤。
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