JP2820893B2 - ビリルビンオキシダーゼの安定化 - Google Patents
ビリルビンオキシダーゼの安定化Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ビリルビンオキシダー
ゼを液状で保存する場合において、ビリルビンオキシダ
ーゼの酵素活性を長時間安定に保持することのできる安
定化方法および該方法を適用したビリルビンオキシダー
ゼ試薬に関する。さらに詳しくは、ビリルビンオキシダ
ーゼ含有水性液に、特定の緩衝剤と特定のカルボン酸と
の組合せからなる安定化剤を配合することを特徴とする
ビリルビンオキシダーゼの安定化方法および安定なビリ
ルビンオキシダーゼ試薬に関する。
ゼを液状で保存する場合において、ビリルビンオキシダ
ーゼの酵素活性を長時間安定に保持することのできる安
定化方法および該方法を適用したビリルビンオキシダー
ゼ試薬に関する。さらに詳しくは、ビリルビンオキシダ
ーゼ含有水性液に、特定の緩衝剤と特定のカルボン酸と
の組合せからなる安定化剤を配合することを特徴とする
ビリルビンオキシダーゼの安定化方法および安定なビリ
ルビンオキシダーゼ試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】ビリルビンオキシダーゼは、ビリルビン
をビリベルジンに酸化させる反応を触媒する酵素であ
り、臨床検査において、生体内のビリルビンを測定する
際に用いられる。ビリルビンオキシダーゼを用いてビリ
ルビンを測定する試薬(本明細書においては、ビリルビ
ンオキシダーゼ試薬と称する)としては総ビリルビン測
定用試薬および直接ビリルビン測定用試薬とが挙げら
れ、ビリルビンオキシダーゼは一般にその凍結乾燥品の
ごとき粉末を緩衝液に溶解ないしは分散し、水性液状に
して使用される。総ビリルビン測定用試薬には、通常、
pＨ６．０〜９．０の範囲の緩衝液、例えば、Ｎ−(２−
アセトアミド)−２−アミノエタンスルホン酸(ＡＣＥ
Ｓ)緩衝液などのグッド緩衝液、またはリン酸緩衝液が
用いられ、所望により、反応促進のために、コール酸ナ
トリウム、ラウリル硫酸ナトリウム(ＳＤＳ)などの直接
化剤を添加している。また直接ビリルビン測定用試薬に
は、pＨ３．０〜４．５の範囲の緩衝液、例えば、乳酸
−乳酸ナトリウム緩衝液、クエン酸緩衝液などが用いら
れる。
をビリベルジンに酸化させる反応を触媒する酵素であ
り、臨床検査において、生体内のビリルビンを測定する
際に用いられる。ビリルビンオキシダーゼを用いてビリ
ルビンを測定する試薬(本明細書においては、ビリルビ
ンオキシダーゼ試薬と称する)としては総ビリルビン測
定用試薬および直接ビリルビン測定用試薬とが挙げら
れ、ビリルビンオキシダーゼは一般にその凍結乾燥品の
ごとき粉末を緩衝液に溶解ないしは分散し、水性液状に
して使用される。総ビリルビン測定用試薬には、通常、
pＨ６．０〜９．０の範囲の緩衝液、例えば、Ｎ−(２−
アセトアミド)−２−アミノエタンスルホン酸(ＡＣＥ
Ｓ)緩衝液などのグッド緩衝液、またはリン酸緩衝液が
用いられ、所望により、反応促進のために、コール酸ナ
トリウム、ラウリル硫酸ナトリウム(ＳＤＳ)などの直接
化剤を添加している。また直接ビリルビン測定用試薬に
は、pＨ３．０〜４．５の範囲の緩衝液、例えば、乳酸
−乳酸ナトリウム緩衝液、クエン酸緩衝液などが用いら
れる。
【０００３】ところが、ビリルビンオキシダーゼは、液
状で非常に不安定で、低温においてもpＨ９．２〜９．
７の０．１Ｍリン酸緩衝液中で９６時間安定であるに過
ぎず[アグリカルチュラル・アンド・バイオロジカル・
ケミストリー(Ａgric．Ｂiol．Ｃhem．)、第４６巻、第
８号、２０３１〜２０３４頁、１９８２年]、また、常
温(２５℃)において、本酵素の安定pＨ１０．０に保存
しても、１４日間保存した場合、ほとんど失活し、１
０．５％の残存活性しか示さない。したがって、一般
に、ビリルビンオキシダーゼは用時、必要量を液状調製
して用いられており、一旦調製すると短期間のうちに使
用しなければならない。したがって、検査毎に試薬の調
製を行う必要があり、操作が煩雑となる難点がある。
状で非常に不安定で、低温においてもpＨ９．２〜９．
７の０．１Ｍリン酸緩衝液中で９６時間安定であるに過
ぎず[アグリカルチュラル・アンド・バイオロジカル・
ケミストリー(Ａgric．Ｂiol．Ｃhem．)、第４６巻、第
８号、２０３１〜２０３４頁、１９８２年]、また、常
温(２５℃)において、本酵素の安定pＨ１０．０に保存
しても、１４日間保存した場合、ほとんど失活し、１
０．５％の残存活性しか示さない。したがって、一般
に、ビリルビンオキシダーゼは用時、必要量を液状調製
して用いられており、一旦調製すると短期間のうちに使
用しなければならない。したがって、検査毎に試薬の調
製を行う必要があり、操作が煩雑となる難点がある。
【０００４】このような問題を避けるために不安定なビ
リルビンオキシダーゼを安定化することが考えられてい
る。その方法としては、例えば、pＨ８以上、好ましく
はpＨ８〜１０のアルカリ性緩衝液、例えばジエチルバ
ルビツール酸ナトリウム−塩酸緩衝液、トリスヒドロキ
シアミノメタン−塩酸緩衝液などを使用し、これに乳糖
アラニン、グリシン、牛アルブミン、シクロデキストリ
ン等の安定化剤、窒化ソーダ等を適宜添加配合する方法
(特開昭６０−１５１５６１)、pＨ７〜９付近のリン酸
緩衝液、トリス−塩酸塩緩衝液、ジメチルグルタル酸−
ＮaＯＨ緩衝液で保存する方法(特開昭６１−２０９５８
７)、pＨ５〜１０．５の０．１Ｍリン酸緩衝液で保存す
る方法(特公昭６２−３３８８０)等が知られている。し
かし、これらの方法によっても、なお、ビリルビンオキ
シダーゼの活性を長期間保持することは困難である。最
近、ある種の酵素類の安定化にカルボン酸類を用いる方
法が提案されており、例えば、乳酸デヒドロゲナーゼの
安定化剤としてアスパラギン酸塩、酒石酸塩等を１〜２
５０倍量用いる方法(特開昭５７−１１８７９１)、β−
ガラクトシダーゼの保護物質として、クエン酸塩、酒石
酸塩等のα−オキシカルボン酸類を０．１〜０．２重量
部添加する方法(特開平０１−２０２２８５)、フェニル
アラニン脱水素酵素に安定化剤として酒石酸カリウムナ
トリウム０．０１〜０．１Ｗ／Ｖ％を添加する方法(特
開平０３−２３６７７５)が報告されているが、酸化酵
素に適用されたという報告は無く、また、カルボン酸と
グッド緩衝剤とを組合わせたという報告もない。
リルビンオキシダーゼを安定化することが考えられてい
る。その方法としては、例えば、pＨ８以上、好ましく
はpＨ８〜１０のアルカリ性緩衝液、例えばジエチルバ
ルビツール酸ナトリウム−塩酸緩衝液、トリスヒドロキ
シアミノメタン−塩酸緩衝液などを使用し、これに乳糖
アラニン、グリシン、牛アルブミン、シクロデキストリ
ン等の安定化剤、窒化ソーダ等を適宜添加配合する方法
(特開昭６０−１５１５６１)、pＨ７〜９付近のリン酸
緩衝液、トリス−塩酸塩緩衝液、ジメチルグルタル酸−
ＮaＯＨ緩衝液で保存する方法(特開昭６１−２０９５８
７)、pＨ５〜１０．５の０．１Ｍリン酸緩衝液で保存す
る方法(特公昭６２−３３８８０)等が知られている。し
かし、これらの方法によっても、なお、ビリルビンオキ
シダーゼの活性を長期間保持することは困難である。最
近、ある種の酵素類の安定化にカルボン酸類を用いる方
法が提案されており、例えば、乳酸デヒドロゲナーゼの
安定化剤としてアスパラギン酸塩、酒石酸塩等を１〜２
５０倍量用いる方法(特開昭５７−１１８７９１)、β−
ガラクトシダーゼの保護物質として、クエン酸塩、酒石
酸塩等のα−オキシカルボン酸類を０．１〜０．２重量
部添加する方法(特開平０１−２０２２８５)、フェニル
アラニン脱水素酵素に安定化剤として酒石酸カリウムナ
トリウム０．０１〜０．１Ｗ／Ｖ％を添加する方法(特
開平０３−２３６７７５)が報告されているが、酸化酵
素に適用されたという報告は無く、また、カルボン酸と
グッド緩衝剤とを組合わせたという報告もない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、不安定なビ
リルビンオキシダーゼを水性液状で長期間安定に保存す
る方法、及び、該方法を適用した安定なビリルビンオキ
シダーゼ試薬を提供することを目的とする。
リルビンオキシダーゼを水性液状で長期間安定に保存す
る方法、及び、該方法を適用した安定なビリルビンオキ
シダーゼ試薬を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
を重ねた結果、液状のビリルビンオキシダーゼ試薬に特
定の緩衝剤と特定のカルボン酸との組合せを安定化剤と
して添加することにより、ビリルビンオキシダーゼの安
定性が飛躍的に向上することを見いだし、本発明を完成
するに至った。即ち、本発明は、ビリルビンオキシダー
ゼ含有水性液に、Ｎ−(２−アセトアミド)イミノジ酢
酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチル)−２−アミノ
エタンスルホン酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチ
ル)グリシン、ビス(２−ヒドロキシエチル)イミノトリ
ス(ヒドロキシメチル)メタン、Ｎ−シクロヘキシル−２
−アミノエタンスルホン酸、１,３−ビス[トリス(ヒド
ロキシメチル)メチルアミノ]プロパン、Ｎ−[トリス(ヒ
ドロキシメチル)メチル]グリシン、グリシンアミド、ト
リス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、Ｎ−トリス(ヒ
ドロキシメチル)メチル−３−アミノプロパンスルホン
酸、およびトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンマレ
イン酸塩から選ばれる緩衝剤の１種または２種以上と、
ヒドロキシポリカルボン酸、ジカルボン酸、モノカルボ
ン酸、またはそれらのアルカリ金属塩から選ばれるカル
ボン酸の１種または２種以上との組合せからなる安定化
剤を配合することを特徴とするビリルビンオキシダーゼ
の安定化方法、およびそのようにして調製される安定な
ビリルビンオキシダーゼ試薬を提供するものである。
を重ねた結果、液状のビリルビンオキシダーゼ試薬に特
定の緩衝剤と特定のカルボン酸との組合せを安定化剤と
して添加することにより、ビリルビンオキシダーゼの安
定性が飛躍的に向上することを見いだし、本発明を完成
するに至った。即ち、本発明は、ビリルビンオキシダー
ゼ含有水性液に、Ｎ−(２−アセトアミド)イミノジ酢
酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチル)−２−アミノ
エタンスルホン酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチ
ル)グリシン、ビス(２−ヒドロキシエチル)イミノトリ
ス(ヒドロキシメチル)メタン、Ｎ−シクロヘキシル−２
−アミノエタンスルホン酸、１,３−ビス[トリス(ヒド
ロキシメチル)メチルアミノ]プロパン、Ｎ−[トリス(ヒ
ドロキシメチル)メチル]グリシン、グリシンアミド、ト
リス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、Ｎ−トリス(ヒ
ドロキシメチル)メチル−３−アミノプロパンスルホン
酸、およびトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンマレ
イン酸塩から選ばれる緩衝剤の１種または２種以上と、
ヒドロキシポリカルボン酸、ジカルボン酸、モノカルボ
ン酸、またはそれらのアルカリ金属塩から選ばれるカル
ボン酸の１種または２種以上との組合せからなる安定化
剤を配合することを特徴とするビリルビンオキシダーゼ
の安定化方法、およびそのようにして調製される安定な
ビリルビンオキシダーゼ試薬を提供するものである。
【０００７】本発明で用いられる上記の緩衝剤は、ビリ
ルビンオキシダーゼの安定なpＨ域(pＨ８．０〜１１．
０)において緩衝能を有するものに限られない。またそ
れらは単独で、または２種以上を組合せて用いることが
できる。好ましい緩衝剤は、Ｎ−(２−アセトアミド)イ
ミノジ酢酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチル)−２
−アミノエタンスルホン酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキ
シエチル)グリシン、１,３−ビス[トリス(ヒドロキシメ
チル)メチルアミノ]プロパン、およびＮ−トリス(ヒド
ロキシメチル)メチル−３−アミノプロパンスルホン酸
であり、とくに好ましくは、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキ
シエチル)グリシンである。本発明で用いられる前記緩
衝剤はいずれもグッド(Ｇood)緩衝剤として知られてい
るが、グッド緩衝剤がすべて本発明で有効に用いられる
わけではなく、例えば、２−モルホリノエタンスルホン
酸一水和物、ピペラジン−Ｎ,Ｎ'−ビス(２−エタンス
ルホン酸)、Ｎ−(２−アセトアミド)−２−アミノエタ
ンスルホン酸、２−ヒドロキシ−３−モルホリノプロパ
ンスルホン酸、３−モルホリノプロパンスルホン酸、Ｎ
−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−２−アミノエタン
スルホン酸、２−[４−(２−ヒドロキシエチル)−１−
ピペラジン]エタンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ,Ｎ'−
ビス(２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸)、２−
ヒドロキシ−３−[４−(２−ヒドロキシエチル)−１−
ピペラジン]プロパンスルホン酸一水和物、Ｎ−(２−ヒ
ドロキシエチル)ピペラジン−Ｎ'−３−プロパンスルホ
ン酸などは本発明の目的とするビリルビンオキシダーゼ
安定化効果はほとんど得られない。また一般に汎用され
る他の緩衝剤、例えばリン酸緩衝剤、イミダゾール緩衝
剤等を用いた場合も安定化効果は得られない。緩衝剤の
添加量は、十分に安定化効果が得られる量であれば特に
限定するものではなく、一般に用時のビリルビンオキシ
ダーゼ水性液中の最終濃度が１mＭ以上であれば所望の
安定化効果が得られ、通常、最終濃度として１mＭ〜１
Ｍ、好ましくは、１mＭ〜１００mＭ、さらに好ましくは
５mＭ〜２５mＭである。
ルビンオキシダーゼの安定なpＨ域(pＨ８．０〜１１．
０)において緩衝能を有するものに限られない。またそ
れらは単独で、または２種以上を組合せて用いることが
できる。好ましい緩衝剤は、Ｎ−(２−アセトアミド)イ
ミノジ酢酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチル)−２
−アミノエタンスルホン酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキ
シエチル)グリシン、１,３−ビス[トリス(ヒドロキシメ
チル)メチルアミノ]プロパン、およびＮ−トリス(ヒド
ロキシメチル)メチル−３−アミノプロパンスルホン酸
であり、とくに好ましくは、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキ
シエチル)グリシンである。本発明で用いられる前記緩
衝剤はいずれもグッド(Ｇood)緩衝剤として知られてい
るが、グッド緩衝剤がすべて本発明で有効に用いられる
わけではなく、例えば、２−モルホリノエタンスルホン
酸一水和物、ピペラジン−Ｎ,Ｎ'−ビス(２−エタンス
ルホン酸)、Ｎ−(２−アセトアミド)−２−アミノエタ
ンスルホン酸、２−ヒドロキシ−３−モルホリノプロパ
ンスルホン酸、３−モルホリノプロパンスルホン酸、Ｎ
−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−２−アミノエタン
スルホン酸、２−[４−(２−ヒドロキシエチル)−１−
ピペラジン]エタンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ,Ｎ'−
ビス(２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸)、２−
ヒドロキシ−３−[４−(２−ヒドロキシエチル)−１−
ピペラジン]プロパンスルホン酸一水和物、Ｎ−(２−ヒ
ドロキシエチル)ピペラジン−Ｎ'−３−プロパンスルホ
ン酸などは本発明の目的とするビリルビンオキシダーゼ
安定化効果はほとんど得られない。また一般に汎用され
る他の緩衝剤、例えばリン酸緩衝剤、イミダゾール緩衝
剤等を用いた場合も安定化効果は得られない。緩衝剤の
添加量は、十分に安定化効果が得られる量であれば特に
限定するものではなく、一般に用時のビリルビンオキシ
ダーゼ水性液中の最終濃度が１mＭ以上であれば所望の
安定化効果が得られ、通常、最終濃度として１mＭ〜１
Ｍ、好ましくは、１mＭ〜１００mＭ、さらに好ましくは
５mＭ〜２５mＭである。
【０００８】上記緩衝剤と組合せて用いられるカルボン
酸としては、Ｌ−酒石酸、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウ
ム、Ｌ−酒石酸水素カリウム、Ｌ−酒石酸カリウム、Ｌ
−酒石酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等のヒドロキ
シポリカルボン酸類またはそのアルカリ金属塩、コハク
酸ナトリウム、３,３−ジメチルグルタル酸、アジピン
酸、α−ケトグルタル酸等のジカルボン酸類またはその
アルカリ金属塩、また、ピルビン酸、プロピオン酸等の
モノカルボン酸類またはそのアルカリ金属塩などが挙げ
られ、それらは単独で、あるいは２種類以上を組合わせ
て使用出来る。これらのうち、好ましいカルボン酸は、
Ｌ−酒石酸、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウム、Ｌ−酒石
酸水素カリウム、Ｌ−酒石酸カリウム、Ｌ−酒石酸ナト
リウム、クエン酸ナトリウム等のヒドロキシポリカルボ
ン酸類またはそのアルカリ金属塩であり、さらに好まし
くは、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウムおよびＬ−酒石酸
水素カリウムである。カルボン酸の添加量は、十分に安
定化効果が得られる量であれば特に限定するものではな
く、一般に用時のビリルビンオキシダーゼ水性液中の最
終濃度が０．１重量％以上であれば、所望の安定化効果
が得られ、通常、最終濃度として０．１〜５０．０重量
％、好ましくは０．５〜２０．０重量％、さらに好まし
くは２．５〜１０．０重量％である。
酸としては、Ｌ−酒石酸、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウ
ム、Ｌ−酒石酸水素カリウム、Ｌ−酒石酸カリウム、Ｌ
−酒石酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等のヒドロキ
シポリカルボン酸類またはそのアルカリ金属塩、コハク
酸ナトリウム、３,３−ジメチルグルタル酸、アジピン
酸、α−ケトグルタル酸等のジカルボン酸類またはその
アルカリ金属塩、また、ピルビン酸、プロピオン酸等の
モノカルボン酸類またはそのアルカリ金属塩などが挙げ
られ、それらは単独で、あるいは２種類以上を組合わせ
て使用出来る。これらのうち、好ましいカルボン酸は、
Ｌ−酒石酸、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウム、Ｌ−酒石
酸水素カリウム、Ｌ−酒石酸カリウム、Ｌ−酒石酸ナト
リウム、クエン酸ナトリウム等のヒドロキシポリカルボ
ン酸類またはそのアルカリ金属塩であり、さらに好まし
くは、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウムおよびＬ−酒石酸
水素カリウムである。カルボン酸の添加量は、十分に安
定化効果が得られる量であれば特に限定するものではな
く、一般に用時のビリルビンオキシダーゼ水性液中の最
終濃度が０．１重量％以上であれば、所望の安定化効果
が得られ、通常、最終濃度として０．１〜５０．０重量
％、好ましくは０．５〜２０．０重量％、さらに好まし
くは２．５〜１０．０重量％である。
【０００９】これらの緩衝剤とカルボン酸は、緩衝剤だ
けを用いた場合でも、カルボン酸類だけを用いた場合で
も、ある程度ビリルビンオキシダーゼの安定化効果を示
すが、緩衝剤とカルボン酸とを各々１種あるいは２種以
上組合わせて用いた場合において著しく安定性が向上す
る。これら緩衝剤とポリカルボン酸の好ましい組合せ
は、Ｎ−(２−アセトアミド)イミノジ酢酸、Ｎ,Ｎ−ビ
ス(２−ヒドロキシエチル)−２−アミノエタンスルホン
酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチル)グリシン、１,
３−ビス[トリス(ヒドロキシメチル)メチルアミノ]プロ
パン、およびＮ−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−３
−アミノプロパンスルホン酸から選ばれる緩衝剤の１種
または２種以上と、Ｌ−酒石酸、Ｌ−酒石酸ナトリウム
カリウム、Ｌ−酒石酸水素カリウム、Ｌ−酒石酸カリウ
ム、Ｌ−酒石酸ナトリウム、およびクエン酸ナトリウム
から選ばれるカルボン酸の１種または２種以上との組合
せであり、さらに好ましくは、緩衝剤がＮ,Ｎ−ビス(２
−ヒドロキシエチル)グリシンで、カルボン酸類がＬ−
酒石酸、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウム、Ｌ−酒石酸水
素カリウム、Ｌ−酒石酸カリウム、Ｌ−酒石酸ナトリウ
ム、およびクエン酸ナトリウムから選ばれる１種または
２種以上である組合せ、最も好ましくは、Ｎ,Ｎ−ビス
(２−ヒドロキシエチル)グリシンとＬ−酒石酸ナトリウ
ムカリウムまたはＬ−酒石酸水素カリウムとの組合わせ
である。
けを用いた場合でも、カルボン酸類だけを用いた場合で
も、ある程度ビリルビンオキシダーゼの安定化効果を示
すが、緩衝剤とカルボン酸とを各々１種あるいは２種以
上組合わせて用いた場合において著しく安定性が向上す
る。これら緩衝剤とポリカルボン酸の好ましい組合せ
は、Ｎ−(２−アセトアミド)イミノジ酢酸、Ｎ,Ｎ−ビ
ス(２−ヒドロキシエチル)−２−アミノエタンスルホン
酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチル)グリシン、１,
３−ビス[トリス(ヒドロキシメチル)メチルアミノ]プロ
パン、およびＮ−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−３
−アミノプロパンスルホン酸から選ばれる緩衝剤の１種
または２種以上と、Ｌ−酒石酸、Ｌ−酒石酸ナトリウム
カリウム、Ｌ−酒石酸水素カリウム、Ｌ−酒石酸カリウ
ム、Ｌ−酒石酸ナトリウム、およびクエン酸ナトリウム
から選ばれるカルボン酸の１種または２種以上との組合
せであり、さらに好ましくは、緩衝剤がＮ,Ｎ−ビス(２
−ヒドロキシエチル)グリシンで、カルボン酸類がＬ−
酒石酸、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウム、Ｌ−酒石酸水
素カリウム、Ｌ−酒石酸カリウム、Ｌ−酒石酸ナトリウ
ム、およびクエン酸ナトリウムから選ばれる１種または
２種以上である組合せ、最も好ましくは、Ｎ,Ｎ−ビス
(２−ヒドロキシエチル)グリシンとＬ−酒石酸ナトリウ
ムカリウムまたはＬ−酒石酸水素カリウムとの組合わせ
である。
【００１０】ビリルビンオキシダーゼとしては公知の酵
素がいずれも用いられ、例えば、ミロセシウム(Ｍyroth
ecium)属微生物(例えば、ミロセシウム・ベルカリア
（Ｍyrothecium verrucaria)ＭＴ−１)由来ビリルビン
オキシダーゼ、エビタケ(Ｔrachyder matsumodae)の産
生するビリルビンオキシダーゼ、ペニシリウム・ジャン
シネラム由来ビリルビンオキシダーゼ、バチルス・リフ
ェニフォルミス由来ビリルビンオキシダーゼ、アガリカ
スビスポラス菌茸由来ビリルビンオキシダーゼ等が挙げ
られる。ビリルビンオキシダーゼの使用量は所望の酵素
活性を示す範囲で適宜用いられるが、通常、反応液中に
０．０４〜１０単位／ml、好ましくは、総ビリルビン測
定用には０．０８〜４単位／ml、直接ビリルビン測定用
には、０．４〜８単位／mlの範囲で用いられる。
素がいずれも用いられ、例えば、ミロセシウム(Ｍyroth
ecium)属微生物(例えば、ミロセシウム・ベルカリア
（Ｍyrothecium verrucaria)ＭＴ−１)由来ビリルビン
オキシダーゼ、エビタケ(Ｔrachyder matsumodae)の産
生するビリルビンオキシダーゼ、ペニシリウム・ジャン
シネラム由来ビリルビンオキシダーゼ、バチルス・リフ
ェニフォルミス由来ビリルビンオキシダーゼ、アガリカ
スビスポラス菌茸由来ビリルビンオキシダーゼ等が挙げ
られる。ビリルビンオキシダーゼの使用量は所望の酵素
活性を示す範囲で適宜用いられるが、通常、反応液中に
０．０４〜１０単位／ml、好ましくは、総ビリルビン測
定用には０．０８〜４単位／ml、直接ビリルビン測定用
には、０．４〜８単位／mlの範囲で用いられる。
【００１１】本発明により、ビリルビンオキシダーゼを
安定化するには、ビリルビンオキシダーゼ含有水性液
に、前記緩衝剤の１種または２種以上とカルボン酸の１
種または２種以上とを組合せて添加することにより達成
されるが、実際上は、緩衝剤を常法にしたがって通常の
pＨ調整剤、例えば塩酸、硫酸、乳酸、酢酸などの無機
酸または有機酸、あるいは水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム、水酸化アンモニウムなどの無機または有機塩基
を用いて適当なpＨ領域を有する緩衝液を調製し、これ
にビリルビンオキシダーゼを分散または溶解させ、その
前後にカルボン酸を添加する方法により行なわれる。本
発明の方法においては、ビリルビンオキシダーゼ含有液
を調製するに際し、カルボン酸はどの時点で添加しても
よく、例えば、緩衝液に分散ないし溶解する前に、粉末
状の酵素と粉末状のカルボン酸とを混合してもよく、ま
た、あらかじめ緩衝液に酵素を分散ないし溶解した液
に、カルボン酸の粉末を添加してもよく、また、カルボ
ン酸を溶解した緩衝液にビリルビンオキシダーゼを溶解
してもよく、さらに緩衝液に酵素を分散ないし溶解さ
せ、別途カルボン酸を緩衝液に溶解し、ついで両液を混
合してもよい。
安定化するには、ビリルビンオキシダーゼ含有水性液
に、前記緩衝剤の１種または２種以上とカルボン酸の１
種または２種以上とを組合せて添加することにより達成
されるが、実際上は、緩衝剤を常法にしたがって通常の
pＨ調整剤、例えば塩酸、硫酸、乳酸、酢酸などの無機
酸または有機酸、あるいは水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム、水酸化アンモニウムなどの無機または有機塩基
を用いて適当なpＨ領域を有する緩衝液を調製し、これ
にビリルビンオキシダーゼを分散または溶解させ、その
前後にカルボン酸を添加する方法により行なわれる。本
発明の方法においては、ビリルビンオキシダーゼ含有液
を調製するに際し、カルボン酸はどの時点で添加しても
よく、例えば、緩衝液に分散ないし溶解する前に、粉末
状の酵素と粉末状のカルボン酸とを混合してもよく、ま
た、あらかじめ緩衝液に酵素を分散ないし溶解した液
に、カルボン酸の粉末を添加してもよく、また、カルボ
ン酸を溶解した緩衝液にビリルビンオキシダーゼを溶解
してもよく、さらに緩衝液に酵素を分散ないし溶解さ
せ、別途カルボン酸を緩衝液に溶解し、ついで両液を混
合してもよい。
【００１２】本発明によるビリルビンオキシダーゼの安
定化には、上記のように調製される緩衝剤およびカルボ
ン酸を配合したビリルビンオキシダーゼ含有水性液のp
Ｈ値を、通常、pＨ８．０〜１１．０、好ましくはpＨ
９．０〜１０．５、さらに好ましくはpＨ９．５〜１
０．０とする。
定化には、上記のように調製される緩衝剤およびカルボ
ン酸を配合したビリルビンオキシダーゼ含有水性液のp
Ｈ値を、通常、pＨ８．０〜１１．０、好ましくはpＨ
９．０〜１０．５、さらに好ましくはpＨ９．５〜１
０．０とする。
【００１３】本発明の他の態様であるビリルビンオキシ
ダーゼ試薬は、液状でも、また粉末等の固形状であって
もよい。液状の試薬の調製は、上述したように、ビリル
ビンオキシダーゼ含有水性液に１mＭ以上の緩衝剤の１
種または２種以上と０．１重量％以上のカルボン酸の１
種または２種以上を配合することにより行われる。固形
状の試薬の調製は、上記の緩衝剤およびカルボン酸を配
合したビリルビンオキシダーゼ含有水性液を凍結乾燥し
てもよく、また、粉末状のビリルビンオキシダーゼに、
前記緩衝剤の１種または２種とカルボン酸の１種または
２種以上とを、それぞれ、液状にした際の濃度が１mＭ
以上および０．１重量％以上、好ましくは０．５重量％
以上となる量にて配合して混合することにより行われ
る。この目的には、一般に、粉末状ビリルビンオキシダ
ーゼ１重量部に対し、緩衝剤０．１２重量部以上、好ま
しくは０．１２〜１２重量部、さらに好ましくは０．６
〜３．０重量部、カルボン酸３．５重量部以上、好まし
くは７．０〜１４０．０重量部、さらに好ましくは１
７．５〜７０．０重量部配合する。上記ビリルビンオキ
シダーゼ試薬には、必要により、通常の緩衝剤や防腐剤
等の他の成分を添加してもよい。
ダーゼ試薬は、液状でも、また粉末等の固形状であって
もよい。液状の試薬の調製は、上述したように、ビリル
ビンオキシダーゼ含有水性液に１mＭ以上の緩衝剤の１
種または２種以上と０．１重量％以上のカルボン酸の１
種または２種以上を配合することにより行われる。固形
状の試薬の調製は、上記の緩衝剤およびカルボン酸を配
合したビリルビンオキシダーゼ含有水性液を凍結乾燥し
てもよく、また、粉末状のビリルビンオキシダーゼに、
前記緩衝剤の１種または２種とカルボン酸の１種または
２種以上とを、それぞれ、液状にした際の濃度が１mＭ
以上および０．１重量％以上、好ましくは０．５重量％
以上となる量にて配合して混合することにより行われ
る。この目的には、一般に、粉末状ビリルビンオキシダ
ーゼ１重量部に対し、緩衝剤０．１２重量部以上、好ま
しくは０．１２〜１２重量部、さらに好ましくは０．６
〜３．０重量部、カルボン酸３．５重量部以上、好まし
くは７．０〜１４０．０重量部、さらに好ましくは１
７．５〜７０．０重量部配合する。上記ビリルビンオキ
シダーゼ試薬には、必要により、通常の緩衝剤や防腐剤
等の他の成分を添加してもよい。
【００１４】本発明のビリルビンオキシダーゼ試薬はキ
ットの形態にすることもでき、例えば、ビリルビンオキ
シダーゼ含有緩衝液とカルボン酸含有緩衝液との組合
せ、あるいは粉末状ビリルビンオキシダーゼと緩衝剤と
の固形状混合物とカルボン酸粉末との組合せなどがあ
り、それらは用時混合して用いられる。
ットの形態にすることもでき、例えば、ビリルビンオキ
シダーゼ含有緩衝液とカルボン酸含有緩衝液との組合
せ、あるいは粉末状ビリルビンオキシダーゼと緩衝剤と
の固形状混合物とカルボン酸粉末との組合せなどがあ
り、それらは用時混合して用いられる。
【００１５】
【実施例】以下、実施例によって本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるも
のではない。なお、実施例におけるビリルビンオキシダ
ーゼの残存活性は、つぎのようにして測定した。 ［活性測定法］活性測定用試薬 試料 :ビリルビンオキシダーゼ(ミロセシウム・ベル
カリアＭＴ−１由来、天野製薬社製) 第１試液:１％コール酸ナトリウム含有５０mＭリン酸緩
衝液pＨ７．０ 第２試液:ビリルビンの管理血清(ビリルビン含量:５mg
／dl)活性測定法 ０．０４単位／ml以下となるように調整したビリルビン
オキシダーゼ溶液２μlに第１試液３００μlを添加し、
３７℃で５分間インキュベートした後、第２試液７５μ
lを加えて３分後から５分後までの４５０nmにおける吸
光度変化を測定し、１分間あたりの吸光度変化の量で活
性を示した。酵素１単位(Ｕ)は、本条件下、１分間に１
μmoleのアルブミン結合ビリルビンを酸化するのに必要
な酵素量と定義される。
に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるも
のではない。なお、実施例におけるビリルビンオキシダ
ーゼの残存活性は、つぎのようにして測定した。 ［活性測定法］活性測定用試薬 試料 :ビリルビンオキシダーゼ(ミロセシウム・ベル
カリアＭＴ−１由来、天野製薬社製) 第１試液:１％コール酸ナトリウム含有５０mＭリン酸緩
衝液pＨ７．０ 第２試液:ビリルビンの管理血清(ビリルビン含量:５mg
／dl)活性測定法 ０．０４単位／ml以下となるように調整したビリルビン
オキシダーゼ溶液２μlに第１試液３００μlを添加し、
３７℃で５分間インキュベートした後、第２試液７５μ
lを加えて３分後から５分後までの４５０nmにおける吸
光度変化を測定し、１分間あたりの吸光度変化の量で活
性を示した。酵素１単位(Ｕ)は、本条件下、１分間に１
μmoleのアルブミン結合ビリルビンを酸化するのに必要
な酵素量と定義される。
【００１６】実施例１ カルボン酸類によるビリルビンオキシダーゼの安定化効
果 ビリルビンオキシダーゼ４Ｕ／mlおよび下記表１に示す
カルボン酸類５重量％を含有するように１０mＭ Ｎ,Ｎ
−ビス(２−ヒドロキシエチル)グリシン−ＮaＯＨ緩衝
液(pＨ１０．０)(以下、ビシン緩衝液という)に溶解さ
せて調製した酵素液を２５℃で保存し、２週間後の残存
活性を上記測定方法により測定し比較した。その結果を
表１に示す。
果 ビリルビンオキシダーゼ４Ｕ／mlおよび下記表１に示す
カルボン酸類５重量％を含有するように１０mＭ Ｎ,Ｎ
−ビス(２−ヒドロキシエチル)グリシン−ＮaＯＨ緩衝
液(pＨ１０．０)(以下、ビシン緩衝液という)に溶解さ
せて調製した酵素液を２５℃で保存し、２週間後の残存
活性を上記測定方法により測定し比較した。その結果を
表１に示す。
【００１７】
【表１】
【００１８】表１に示すごとく、用いられたいずれのカ
ルボン酸でも安定化の効果があることが認められた。特
に酒石酸ナトリウムカリウムの効果が顕著であった。ま
た、ビリルビンオキシダーゼ４Ｕ／mlを含有するように
調製した酵素溶液(pＨ１０．０, １０mＭビシン緩衝液
使用)(カルボン酸無添加)と、ビリルビンオキシダーゼ
４Ｕ／ml,Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウム１０重量％を
含有するように調製した酵素溶液(pＨ１０．０, １０m
Ｍビシン緩衝液使用)とで安定性を比較した結果を図１
に示す。図１から明らかなように、２５℃で１４日間保
存後の残存活性については、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリ
ウム無添加のものが、わずか３１．８％であるのに対
し、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウム１０重量％を添加し
たものは５４．５％と非常に高かった。
ルボン酸でも安定化の効果があることが認められた。特
に酒石酸ナトリウムカリウムの効果が顕著であった。ま
た、ビリルビンオキシダーゼ４Ｕ／mlを含有するように
調製した酵素溶液(pＨ１０．０, １０mＭビシン緩衝液
使用)(カルボン酸無添加)と、ビリルビンオキシダーゼ
４Ｕ／ml,Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウム１０重量％を
含有するように調製した酵素溶液(pＨ１０．０, １０m
Ｍビシン緩衝液使用)とで安定性を比較した結果を図１
に示す。図１から明らかなように、２５℃で１４日間保
存後の残存活性については、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリ
ウム無添加のものが、わずか３１．８％であるのに対
し、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウム１０重量％を添加し
たものは５４．５％と非常に高かった。
【００１９】実施例２ ビリルビンオキシダーゼを安定化するために必要なＬ−
酒石酸ナトリウムカリウムの量の測定 ビリルビンオキシダーゼ４Ｕ／mlを含有する溶液(pＨ１
０．０, １０mＭビシン緩衝液使用)に、種々の濃度の
Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウムを添加し、２５℃にて１
４日間保存し、その残存活性を測定した。その結果を表
２に示す。表２から明らかなごとく、Ｌ−酒石酸ナトリ
ウムカリウム０．５重量％(１７．７mＭ)以上の濃度で
安定化の効果が認められ、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウ
ムの濃度に応じた安定化効果が得られた。
酒石酸ナトリウムカリウムの量の測定 ビリルビンオキシダーゼ４Ｕ／mlを含有する溶液(pＨ１
０．０, １０mＭビシン緩衝液使用)に、種々の濃度の
Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウムを添加し、２５℃にて１
４日間保存し、その残存活性を測定した。その結果を表
２に示す。表２から明らかなごとく、Ｌ−酒石酸ナトリ
ウムカリウム０．５重量％(１７．７mＭ)以上の濃度で
安定化の効果が認められ、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウ
ムの濃度に応じた安定化効果が得られた。
【００２０】
【表２】
【００２１】実施例３ ビリルビンオキシダーゼ４Ｕ／mlを含有する溶液(pＨ１
０．０, １０mＭビシン緩衝液)に表３に示す濃度のＬ
−酒石酸ナトリウムカリウムを加え、７℃で保存した場
合でのビリルビンオキシダーゼの安定性に対するＬ−酒
石酸ナトリウムカリウムの安定化効果を、アレニウスプ
ロットの式を用いて予測した。その結果を表３および図
２に示す。それらの結果から明らかなように、Ｌ−酒石
酸ナトリウムカリウム無添加で７℃、１年間保存した場
合、１０．０％まで残存活性が下がってしまうのに対し
て、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウム１０重量％添加した
場合では４９．３％の残存活性を示すことがわかった。
０．０, １０mＭビシン緩衝液)に表３に示す濃度のＬ
−酒石酸ナトリウムカリウムを加え、７℃で保存した場
合でのビリルビンオキシダーゼの安定性に対するＬ−酒
石酸ナトリウムカリウムの安定化効果を、アレニウスプ
ロットの式を用いて予測した。その結果を表３および図
２に示す。それらの結果から明らかなように、Ｌ−酒石
酸ナトリウムカリウム無添加で７℃、１年間保存した場
合、１０．０％まで残存活性が下がってしまうのに対し
て、Ｌ−酒石酸ナトリウムカリウム１０重量％添加した
場合では４９．３％の残存活性を示すことがわかった。
【００２２】
【表３】
【００２３】実施例４ ビリルビンオキシダーゼ４Ｕ／mlを含有する溶液にＬ−
酒石酸ナトリウムカリウム５重量％を添加した場合(pＨ
１０．０)において、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチ
ル)グリシンを加えない場合とＮ,Ｎ−ビス(２−ヒドロ
キシエチル)グリシン１０mＭを加えた場合で、２５℃に
て３週間保存し、その残存活性を測定した。その結果を
表４に示す。その結果から明らかなように、Ｎ,Ｎ−ビ
ス(２−ヒドロキシエチル)グリシンを加えない場合、残
存活性は２５．０％まで低下するのに対して、Ｎ,Ｎ−
ビス(２−ヒドロキシエチル)グリシンを加えた場合には
３８．５％の残存活性を示すことが判った。
酒石酸ナトリウムカリウム５重量％を添加した場合(pＨ
１０．０)において、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチ
ル)グリシンを加えない場合とＮ,Ｎ−ビス(２−ヒドロ
キシエチル)グリシン１０mＭを加えた場合で、２５℃に
て３週間保存し、その残存活性を測定した。その結果を
表４に示す。その結果から明らかなように、Ｎ,Ｎ−ビ
ス(２−ヒドロキシエチル)グリシンを加えない場合、残
存活性は２５．０％まで低下するのに対して、Ｎ,Ｎ−
ビス(２−ヒドロキシエチル)グリシンを加えた場合には
３８．５％の残存活性を示すことが判った。
【００２４】
【表４】
【００２５】
【発明の効果】本発明によれば、緩衝剤とカルボン酸を
添加するという非常に簡単で、経済的な方法により、ビ
リルビンオキシダーゼを液状で長期間安定化させること
ができ、ビリルビンオキシダーゼ試薬を使用する測定を
非常に簡便に行うことができるようになる。
添加するという非常に簡単で、経済的な方法により、ビ
リルビンオキシダーゼを液状で長期間安定化させること
ができ、ビリルビンオキシダーゼ試薬を使用する測定を
非常に簡便に行うことができるようになる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ビリルビンオキシダーゼ含有ビシン緩衝液に
おける酒石酸ナトリウムカリウムの添加の有無による残
存活性の経時的変化を示すグラフ。
おける酒石酸ナトリウムカリウムの添加の有無による残
存活性の経時的変化を示すグラフ。
【図２】 ビリルビンオキシダーゼ含有ビシン緩衝液に
おける酒石酸ナトリウムカリウムの添加の有無による長
期保存時の残存活性の変化を示すグラフ。
おける酒石酸ナトリウムカリウムの添加の有無による長
期保存時の残存活性の変化を示すグラフ。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平３−236775（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−202285（ＪＰ，Ａ) 特開 昭57−118791（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−187400（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−308968（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−86083（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12Q 1/26
Claims (15)
- 【請求項１】 ビリルビンオキシダーゼ含有液に、 Ｎ−(２−アセトアミド)イミノジ酢酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２
−ヒドロキシエチル)−２−アミノエタンスルホン酸、
Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチル)グリシン、ビス(２
−ヒドロキシエチル)イミノトリス(ヒドロキシメチル)
メタン、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホ
ン酸、１,３−ビス[トリス(ヒドロキシメチル)メチルア
ミノ]プロパン、Ｎ−[トリス(ヒドロキシメチル)メチ
ル]グリシン、グリシンアミド、トリス(ヒドロキシメチ
ル)アミノメタン、Ｎ−トリス(ヒドロキシメチル)メチ
ル−３−アミノプロパンスルホン酸、およびトリス(ヒ
ドロキシメチル)アミノメタンマレイン酸塩から選ばれ
る緩衝剤の１種または２種以上と、 ヒドロキシポリカルボン酸、ジカルボン酸、モノカルボ
ン酸またはそれらのアルカリ金属塩から選ばれるカルボ
ン酸の１種または２種以上との組合せからなる安定化剤
を配合することを特徴とするビリルビンオキシダーゼの
安定化方法。 - 【請求項２】 カルボン酸がＬ−酒石酸、Ｌ−酒石酸ナ
トリウムカリウム、Ｌ−酒石酸水素カリウム、Ｌ−酒石
酸カリウム、Ｌ−酒石酸ナトリウム、クエン酸ナトリウ
ム、コハク酸ナトリウム、３,３−ジメチルグルタル
酸、アジピン酸、α−ケトグルタル酸、ピルビン酸、お
よびプロピオン酸なる群から選ばれる１種または２種以
上である請求項１記載のビリルビンオキシダーゼの安定
化方法。 - 【請求項３】 緩衝剤が、Ｎ−(２−アセトアミド)イミ
ノジ酢酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチル)−２−
アミノエタンスルホン酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシ
エチル)グリシン、１,３−ビス[トリス(ヒドロキシメチ
ル)メチルアミノ]プロパン、およびＮ−トリス(ヒドロ
キシメチル)メチル−３−アミノプロパンスルホン酸な
る群から選ばれる１種または２種以上である請求項１記
載のビリルビンオキシダーゼの安定化方法。 - 【請求項４】 緩衝剤がＮ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエ
チル)グリシンである請求項１記載のビリルビンオキシ
ダーゼの安定化方法。 - 【請求項５】 緩衝剤がＮ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエ
チル)グリシンで、カルボン酸がＬ−酒石酸ナトリウム
カリウムまたはＬ−酒石酸水素カリウムである請求項１
記載のビリルビンオキシダーゼの安定化方法。 - 【請求項６】 緩衝剤をビリルビンオキシダーゼ液中に
最終濃度として、１mＭ以上添加する請求項１記載のビ
リルビンオキシダーゼの安定化方法。 - 【請求項７】 カルボン酸をビリルビンオキシダーゼ液
中に最終濃度として、０．１重量％以上添加する請求項
１記載のビリルビンオキシダーゼの安定化方法。 - 【請求項８】 ビリルビンオキシダーゼに、 Ｎ−(２−アセトアミド)イミノジ酢酸、Ｎ,Ｎ−ビス(２
−ヒドロキシエチル)−２−アミノエタンスルホン酸、
Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシエチル)グリシン、ビス(２
−ヒドロキシエチル)イミノトリス(ヒドロキシメチル)
メタン、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホ
ン酸、１,３−ビス[トリス(ヒドロキシメチル)メチルア
ミノ]プロパン、Ｎ−[トリス(ヒドロキシメチル)メチ
ル]グリシン、グリシンアミド、トリス(ヒドロキシメチ
ル)アミノメタン、Ｎ−トリス(ヒドロキシメチル)メチ
ル−３−アミノプロパンスルホン酸、およびトリス(ヒ
ドロキシメチル)アミノメタンマレイン酸塩から選ばれ
る緩衝剤の１種または２種以上と、 ヒドロキシポリカルボン酸、ジカルボン酸、モノカルボ
ン酸またはそれらのアルカリ金属塩から選ばれるカルボ
ン酸の１種または２種以上との組合せからなる安定化剤
を配合することを特徴とする安定なビリルビンオキシダ
ーゼ試薬。 - 【請求項９】 カルボン酸が、Ｌ−酒石酸、Ｌ−酒石酸
ナトリウムカリウム、Ｌ−酒石酸水素カリウム、Ｌ−酒
石酸カリウム、Ｌ−酒石酸ナトリウム、クエン酸ナトリ
ウム、コハク酸ナトリウム、３,３−ジメチルグルタル
酸、アジピン酸、α−ケトグルタル酸、ピルビン酸、お
よびプロピオン酸から選ばれる１種または２種以上であ
る請求項８記載の安定なビリルビンオキシダーゼ試薬。 - 【請求項１０】 緩衝剤が、Ｎ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキ
シエチル)グリシンである請求項８記載の安定なビリル
ビンオキシダーゼ試薬。 - 【請求項１１】 緩衝剤がＮ,Ｎ−ビス(２−ヒドロキシ
エチル)グリシンで、カルボン酸がＬ−酒石酸ナトリウ
ムカリウムまたはＬ−酒石酸水素カリウムである請求項
８記載の安定なビリルビンオキシダーゼ試薬。 - 【請求項１２】 緩衝剤をビリルビンオキシダーゼ含有
液中に最終濃度として、１mＭ以上添加する請求項８記
載の安定なビリルビンオキシダーゼ試薬。 - 【請求項１３】 ビリルビンオキシダーゼ含有液中にカ
ルボン酸の最終濃度が、０．１重量％以上になるように
含有させた液状の請求項８記載の安定なビリルビンオキ
シダーゼ試薬。 - 【請求項１４】 ビリルビンオキシダーゼ粉末に緩衝剤
とカルボン酸とを混合した粉末状の請求項８記載の安定
なビリルビンオキシダーゼ試薬。 - 【請求項１５】 各々、個別の剤型のビリルビンオキシ
ダーゼと、緩衝剤およびカルボン酸とを組み合わせたキ
ット形態の請求項８記載の安定なビリルビンオキシダー
ゼ試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20649994A JP2820893B2 (ja) | 1994-08-31 | 1994-08-31 | ビリルビンオキシダーゼの安定化 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20649994A JP2820893B2 (ja) | 1994-08-31 | 1994-08-31 | ビリルビンオキシダーゼの安定化 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0866196A JPH0866196A (ja) | 1996-03-12 |
| JP2820893B2 true JP2820893B2 (ja) | 1998-11-05 |
Family
ID=16524387
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20649994A Expired - Fee Related JP2820893B2 (ja) | 1994-08-31 | 1994-08-31 | ビリルビンオキシダーゼの安定化 |
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|---|---|
| JP (1) | JP2820893B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4798600B2 (ja) * | 2005-05-30 | 2011-10-19 | キッコーマン株式会社 | フルクトシルペプチドオキシダ−ゼの安定化方法 |
| TW200718785A (en) | 2005-11-10 | 2007-05-16 | Toyo Boseki | A process for improving the thermal stability of a composition containing a soluble coenzyme conjugated glucose dehydrogenase (GDH) |
-
1994
- 1994-08-31 JP JP20649994A patent/JP2820893B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0866196A (ja) | 1996-03-12 |
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