FI89713C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktivt 2-(2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9h(purin-9-yl)metoxi)etyl-l-valinat eller l-isoleucinat eller deras salt - Google Patents

Description

£ 9 7 ! :

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H( purin-9-yyli )metoksi )etyyli-L-valinaatin tai -L-isoleusinaatin tai niiden suolan valmistamiseksi 5 Keksintö koskee menetelmää uuden, terapeuttisesti käyttökelpoisen 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H(purin-9-yyli)metoksi)etyyli-L-valinaatin tai -L-isoleusinaatin valmistamiseksi, jolla on kaava (I)

10 0H

il/ u)

H

^ I

CH2OCH2CH2OCOCH(R1)NH2 15 jossa Rx on kaavan -CH(CH3)2 tai -CH( CH3 )CH2CH3 mukainen ryhmä, tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi. Mainituilla uusilla yhdisteillä on arvokkaita viruslääkeominaisuuksia.

20 9-(2-hydroksietoksimetyyli)guaniini, joka tunne taan asikloviirinimisenä, vaikuttaa tehokkaasti viruksia, erityisesti herpesviruksia vastaan [Schaeffer, H.J. et ai., Nature 272 (1978) 583 - 585, GB-patenttijulkaisu 1 523 865 ja US-patenttijulkaisu nro 4 199 574]. Asiklo-. ·.. 25 viiri liukenee kuitenkin huonosti veteen, mikä rajoittaa lääkkeen formulointia vesipitoisissa farmaseuttisissa valmisteissa, joissa lääkeaineen on oltava liukoinen.

Lisäksi asikloviiri absorboituu vain heikosti ruoansulatuskanavasta suun kautta annettaessa (15 %:n . 30 saanto virtsaan testattaessa rotilla ja 20 %:n saanto ihmisillä ). Tämän alhaisen hyödynnettävyyden takia lääkettä on annettava suuria annoksia tehoavien viruslääkepitoi-suuksien saamiseksi ja ylläpitämiseksi plasmassa.

EP-patenttijulkaisussa 99 493 kuvataan asiklovii-' 35 rin aminohappoestereitä, erityisesti glysiini- ja alanii- 2 /·· —* ι-ϊ r ·*»

v .· « >J

niesterit, joiden liukoisuus veteen on parempi kuin asi-kloviirin.

Nyt on keksitty, että asikloviirin väliini- ja isoleusiiniestereillä, joilla on ominaista a-hiiliatomin 5 vierestä haaroittuva sivuketju ja joita ei esitetty EP-patenttijulkaisussa 99 493, on yllättäen parempi hyödynnettävyys suun kautta annettaessa verrattuna kyseisessä patenttijulkaisussa mainittuihin alaniini- ja glysiini-estereihin.

10 Kaavan (I) mukaisissa yhdisteissä väliini- ja iso- leusiiniryhmät voivat olla D-, L- tai raseemisessa DL-konfiguraatiossa, mutta edullisesti ne ovat L-muodossa.

Rotilla testattaessa, jolloin mitataan saantoa virtsaan asikloviirinä (% annetusta annoksesta) suun kaut-15 ta annon jälkeen, kaavan (I) mukaiset yhdisteet absorboituvat paljon paremmin suolesta verrattuna muihin esterei-hin ja asikloviiriin. Näin lääkettä voidaan antaa vähemmän ja kuitenkin saadaan yhtä suuria lääkkeen plasmapitoisuuksia suun kautta annettaessa. Valinaattiyhdiste on 20 erityisen edullinen, sillä se absorboituu erittäin hyvin suolesta.

Suhteellisen suuren hyödynnettävyytensä lisäksi tämän keksinnön mukaisesti saatavien yhdisteiden viruslää-kevaikutus on oleellisesti sama kuin asikloviirin in vit-25 ro. Yhdisteen hyödynnettävyyden edullinen lisääntyminen ei siis tapahdu viruslääkevaikutuksen kustannuksella. Niinpä tietyissä kliinisissä sovellutuksissa, esim. hoidettaessa stromaalista sarveiskalvon tulehdusta, on havaittu, että tiettyjen aminohappoestereiden hoitovaikutus on huomatta-30 vasti parempi kuin asikloviirin (EP 99 493).

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ovat edullisesti sopivasta haposta, esim. kloorivety-, rikki-, fosfori-, maleiini-, fumaa-ri-, sitruuna-, viini-, maito-, etikka- tai p-tolueenisul-35 fonihaposta, saatuja happoadditiosuoloja. Erityisen edul- 3 . »·, r* + "7 ,► ··' / ' y V.

lisiä ovat kaavan (I) mukaisten yhdisteiden hydrokloridi-suolat.

Eläinkokeissa havaittiin, että kaavan (I) mukaisia yhdisteitä suun kautta annettaessa saatiin mitattavia asi-5 kloviiripitoisuuksia plasmaan. Niinpä asikloviiriä voidaan muodostaa in vivo antamalla yllä olevan kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa imettäväiselle.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa ta-10 vanomaisella tavalla esim. alla kuvattua menetelmää käyttäen.

Niinpä keksinnön mukaiselle menetelmälle yllä olevan kaavan (I) mukaisten yhdisteiden sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi on 15 tunnusomaista, että a) annetaan kaavan (II) mukaisen yhdisteen x 20 Jk. X / (II) Y N / ch2och2ch2oh jossa X on valinnaisesti suojattu hydroksiryhmä ja Y on valinnaisesti suojattu aminoryhmä, reagoida valinnaisesti 25 suojatun L-valiinin tai L-isoleusiinin tai niiden funktio- * naalisen ekvivalentin kanssa; tai b) muutetaan kaavan (III) mukainen yhdiste

1 M

/ N .

30 f) \ (iii> CH2OCH2CH2OCOCH(R )NH2 35 (jossa Idillä on yllä määritelty merkityksensä ja M on hydroksiryhmä ja G on atomi tai ryhmä, joka voidaan kor- r* s > 4 vata aminoryhmällä tai muuttaa siksi tai G on aminoryhmä ja M on atomi tai ryhmä, joka voidaan korvata hydroksiryh-mällä tai muuttaa siksi) kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi tai 5 c) annetaan kaavan (IV) mukaisen yhdisteen

* / N

\ I J / (IV) 10 Y n N / r

Q

(jossa X:llä ja Y:llä on yllä määritellyt merkityksensä ja Q on toistuva atomi tai ryhmä) reagoida kaavan (V) mukai-15 sen yhdisteen kanssa

•V

ACH2OCH2CH2OCOCH ( Rx) R2 ( V) (jossa R1:llä on yllä määritelty merkityksensä, A on pois-20 tuva ryhmä tai atomi ja R2 on valinnaisesti suojattu aminoryhmä) sekä valinnaisesti suoritetaan jokin tai useampi seuraavista muunnoksista missä tahansa halutussa järjestyksessä: i) poistetaan mahdolliset suojaryhmät 25 ii) silloin kun saatu tuote on kaavan (I) mukainen yhdiste, muutetaan mainittu yhdiste farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen; ja iii) silloin kun saatu tuote on kaavan (I) mukaisen yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, muu-30 tetaan mainittu suola kantayhdisteeksi.

Menetelmässä a) esteröintireaktio voidaan suorittaa tavanomaisella tavalla esimerkiksi liuottimessa, kuten pyridiinissä tai dimetyyliformamidissa, kytkentäaineen, kuten N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidin, läsnä ollessa ja 35 valinnaisesti katalyyttisen emäksen, kuten 4-dimetyyliami- ' r » /* -* 5 nopyridiinin, läsnä ollessa. Reaktion aikana muodostunut vesi voidaan haluttaessa poistaa tavanomaisella tavalla, esimerkiksi tislaamalla tai lisäämällä vettä sitovaa ainetta. Tämän jälkeen reaktiotuotteena saatu esteri voidaan 5 eristää tavanomaisella tavalla.

Vaihtoehtoisesti L-valiinin tai L-isoleusiinin käytölle sellaisenaan voidaan käyttää hapon funktionaalista ekvivalenttia, esim. happohalogenidia, kuten happokloridia tai happoanhydridiä. Tällaisissa tapauksissa ei-toivottu-10 jen sivureaktioiden välttämiseksi on edullista käyttää johdannaisia, joissa aminoryhmä on suojattu. Esimerkkejä edullisista aminoryhmän suojaryhmistä ovat asyyli, esim.

C1.4-alkanoyyli, kuten asetyyli ja aryylioksikarbonyyli, esim. bentsyylioksikarbonyyli. Sopiva johdannainen, jossa 15 aminoryhmä on suojattu, on esimerkiksi johdannainen, jossa aminoryhmä on korvattu atsidoryhmällä.

Kaavan (III) mukaisen yhdisteen muuttaminen kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi menetelmää b) käyttäen voidaan tehdä eri tavoin. Esimerkiksi G voi olla atsidoryhmä, jo-20 ka voidaan pelkistää aminoryhmäksi katalyyttisellä hyd-rogenaatiolla käyttäen sopivaa katalyyttiä, kuten palla-dium-hiili-katalyyttiä. Vaihtoehtoisesti G voi olla ha-logeeniatomi tai alkyylitio- tai alkyylisulfonyyliryhmä, joka voidaan muuttaa atsidoryhmäksi, joka puolestaan voi-: 25 daan muuttaa aminoryhmäksi katalyyttisellä hydrogenaatiol- la käyttäen esimerkiksi vetyä palladium-hiilikatalyytin läsnä ollessa. Kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi kaavan (III) mukainen yhdiste, jossa M on aminoryhmä, voidaan muuttaa vastaavaksi yhdisteeksi, jossa M on 30 hydroksiryhmä esimerkiksi käsittelemällä aminoryhmän poistavalla entsyymillä, kuten adenosiinideaminaasilla.

Nämä menetelmät samoin kuin muita tavanomaisia menetelmiä on kuvattu kirjassa Fused Pyrimidines, osa II, Purines, Brown, D.J., toim. (1971), Wiley-Interscience. 35 Menetelmässä c) ryhmä Q kaavassa (IV) voi olla esi merkiksi vetyatomi, asyyliryhmä, esim. C1.4-alkanoyyliryh- r- S f 6 mä, kuten asyyliryhmä tai aroyyliryhmä, kuten bentsoyy-liryhmä tai tri-C^-alkyylisilyyliryhmä, kuten trimetyy-lisilyyliryhmä. Ryhmä A kaavassa (V) voi olla esimerkiksi halogeeniatomi (esim. kloori) tai asyylioksiryhmä, jossa 5 asyyliryhmä voi olla esimerkiksi C1.4-alkanoyyliryhmä, kuten asetyyli tai aroyyliryhmä, kuten bentsyyli. Ryhmä R2 voi olla aminoryhmän suojaryhmä, kuten esimerkiksi C1.4-alkano-yyli (esim. asetyyli) tai aryylioksikarbonyyli (esim. bentsyylioksikarbonyyli) ja se voi olla myös atsidoryhmä. 10 Reaktio voidaan helposti suorittaa vahvassa poolisessa liuottimessa, kuten dimetyyliformamidissa tai heksametyy-lifosforamidissa, edullisesti emäksen, kuten trietyyli-amiinin tai kaliumkarbonaatin läsnä ollessa. Vaihtoehtoisesti voidaan suorittaa lämpökondensointi kuumentamalla 15 kaavojen (IV) ja (V) mukaisia yhdisteitä katalyyttisen määrän vahvaa happoa, esim. rikkihappoa, läsnä ollessa.

Kaavojen (II) - (V) mukaiset yhdisteet, joita käytetään välituotteina kaavan (I) mukaisen yhdisteen synteesissä, voidaan valmistaa tavanomaisella tavalla, esim. 20 GB-patenttijulkaisussa nro 1 523 865 kuvattuja menetelmiä käyttäen. Nämä menetelmät perustuvat välituotteisiin, jotka on valmistettu yksinkertaisesti substituoiduista purii-neista, joita voi olla kaupallisesti saatavissa tai joita voidaan valmistaa sinänsä tunnettujen menetelmien mukai-25 sesti ja joita on kuvattu kirjallisuudessa, kuten yllä mainitussa tekstikirjassa. Niinpä esimerkiksi kaavan (III) mukaiset yhdisteet voidaan yleisesti valmistaa käyttäen menetelmän c) kanssa analogista menetelmää, tämä tarkoittaa antamalla sopivan puriinin reagoida kaavan (V) mukai-30 sen yhdisteen kanssa.

Valinnaiset muunnokset i), ii) ja iii) suoritetaan tavanomaisella tavalla. Niinpä esimerkiksi suojaryhmien poisto muunnoksessa i) voidaan suorittaa käyttäen hydro-lyysiä, solvolyysiä tai hydrogenolyysiä, miten vain on 35 sopivaa. Suojaryhmien poistamiseksi aminohappo-asyylira- 7 dikaaleista, esim. aryylioksikarbonyylisuojaryhmien hydro-genolyysi ja atsidoryhmän muuttaminen esim. katalyyttisellä hydrogenaatiolla esim. palladiumkatalyyttiä käyttäen, ovat edullisia. Suojattaessa ryhmiä puriiniytimen 2-5 ja/tai 6-asemassa nämä voivat olla esim. aryylimetyyli-ryhmiä, esim. bentsyyli tai tri-C1.4-alkyylisilyyliryhmiä, esim. trimetyylisilyyli. Aryylimetyylisuojaryhmät voidaan poistaa esimerkiksi hydrogenolyysillä, esim. hydrogenaatiolla Raney-nikkelin tai palladiumkatalyytin läsnä olles-10 sa. Trialkyylisilyylisuojaryhmät voidaan poistaa esimerkiksi solvolyysillä, esim. alkoholyysillä.

Kaavan (I) mukaisen yhdisteen muuttaminen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi voidaan suorittaa tavanomaisella tavalla, esim. käsittelemällä yhdistettä 15 sopivalla hapolla, jolloin muodostuu happoadditiosuola, esimerkiksi kylmäkuivaamalla kantaesterin metanolipitoinen liuos happoliuoksen kanssa.

Samalla tavalla suolan muuttaminen kaavan (I) mukaiseksi kantayhdisteeksi voidaan suorittaa tavanomaisel-20 la tavalla.

Tämä keksintö antaa siten käyttöön kaavan (I) mukaiset yhdisteet sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat (joista tästä lähtien käytetään nimitystä "aktiiviset yhdisteet") käytettäviksi lääketieteellisessä 25 hoidossa esim. eläimen, esim. imettäväisen, kuten ihmisen, virustaudin hoidossa tai ennalta ehkäisyssä. Yhdisteitä voidaan erityisesti käyttää erilaisten DNA-virusten aiheuttamien tautien, kuten herpesinfektioiden, esim. her-pex simplex-, varicella- eli zoster- ja sytomegalovirusin-30 fektioiden hoidossa ja ennalta ehkäisyssä samoin kuin hepatiitti B- tai Epstein-Barr-viruksen tai ihmisen herpesvirus 6:n (HHV-6) aiheuttamien tautien hoidossa ja ennalta ehkäisyssä. Aktiivisia yhdisteitä voidaan käyttää myös hoidettaessa tai ennalta ehkäistäessä retrovirusinfektioi-35 ta, kuten HIV-infektiota ja papillooma- tai wart-virusin- ' r ? /* «r 8 fektioita. Ihmisen lääketieteellisessä hoidossa käytön lisäksi kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan antaa muille eläimille, esim, muille imettäväisille, virustautien hoitamiseksi tai ennalta ehkäisemiseksi. Aktiivisia yhdis-5 teitä voidaan esimerkiksi käyttää erityisen hyvin hevosen rinopneumotiitin hoitoon.

Terapeuttiset koetulokset a) Viruslääkevaikutus

Herpes simplex -virus (HSV 1) määritettiin Vero-10 soluja käyttäen mikrotiitterilevyillä. Yhdisteiden aktiivisuus määritettiin plakin vähennys -määritysmenetelmää käyttäen, jossa solujen muodostama kerros infektoitiin HSV 1 -suspensiolla ja vietiin sitten geelinä olevan ra-vintoagaroosin päälle, jotta varmistettaisiin se, ettei 15 virus ollut levinnyt koko viljelmään. Molaarisuudeltaan tunnetut pitoisuudet yhdistettä lisättiin ravintoagaroo-sille. Jokaisessa pitoisuudessa plakkien lukumäärät ilmoitettiin prosentteina kontrollista ja annos-vastekäyrä piirrettiin. Tältä käyrältä arvioitiin pitoisuus, jossa 20 saatiin 50 %:n inhibitio (IC50).

Yhdiste IC50 pmol/l

Esimerkki IB 0,84

Esimerkki 2 3,8

Asikloviiri 0,08 - 0,1 25 b) Määritys hyödynnettävyydestä suun kautta an nettaessa

Long Evans -rotille annettiin testattavaa yhdistettä suuletkun kautta 25 mg/kg:n asikloviiriannosta vastaava annos. Virtsa kerättiin 24 ja 48 tunnin kuluttua annoksen 30 antamisesta, ultrasuodatettiin ja analysoitiin käänteis-faasi-korkeapainenestekromatografisesti. Yhdisteen hyödynnettävyys suun kautta annettuna ilmaistiin prosenttina annoksesta, joka erittyi virtsaan, asikloviirina.

/ · " . r? v* * 9

Yhdiste Virtsan saanto (% annokses ta asikloviirina

Esimerkki IB 63

Esimerkki 2 50 5 Asikloviiri (ACV) 15 ACV:n glysyyliesteri 30 ACV:n L-alanyyliesteri 34 c) Tulokset myrkylllsyysmäärityksestä Infektoimattomien imettäväissolujen kasvun inhi- 10 boinnin määritys__

Ehdokasyhdisteiden kyky inhiboida D98-solujen (ihmisen)ja L-solujen (hiiren) kasvua mitattiin määrittämällä solujen lukumäärä vakiosolumäärän kolmen altistus-päivän jälkeen yhdisteen eri laimennoksille (Rideout, 15 J.L., Krenitsky, T.A., Koszalka, G.W., Cohn, N.K., Chao, E.Y., Elion, G.B., Latter, V.S. ja Willians, R.B., J. Med. Chem. 25 (1982) 1040 - 1044). Sitten solujen lukumäärää verrattiin ilman yhdistettä saatuun lukumäärään. Solujen laskeminen suoritettiin joko suoralla partikkelilaskulla 20 kerroksen trypsiinikäsittelyn jälkeen tai spektrofotomet-risesti määrittämällä solujen ottaman vitaalivärin määrä. Molemmilla menetelmillä saatiin keskenään verrannolliset tulokset.

Tulosten analysointi 25 Yhdisteen pitoisuus, jolla saatiin 50 % kontrolli- arvoista (IC50), määritettiin joko suoraan interpoloimal-la kuvaajilta, jotka oli saatu esittämällä graafisesti yhdisteen pitoisuuden logaritmi prosenttia kontrolliar-vosta vastaan tai tietokoneohjelmalla, joka analysoi tu-30 lokset saman ratkaisumenetelmän mukaan. Näissä laskuissa käytettiin tuloksia, jotka olivat 20 - 80 % kontrollista. Esimerkki Solumyrkyllisyys (% kontrollista pitoisuudella 100 pmol/l) D98-solut L-solut 35 Asikloviiri 99 72 IB 91 85 2 80 83 10 T~l f ^

Kun tämän keksinnön mukaisesti saatavia yhdisteitä käytetään virustaudin hoitamiseksi tai ennalta ehkäisemiseksi eläimissä, esim. imettäväisissä, kuten ihmisessä, eläimelle annetaan viruslääkkeenä tehoava määrä kaavan (I) 5 mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa.

Kaavan (I) mukaista yhdistettä voidaan käyttää virusinfektion hoitoon tai ennalta ehkäisyyn tarkoitetun lääkkeen valmistuksessa.

10 Aktiiviset yhdisteet voidaan antaa mitä tahansa hoidettavalle tilalle sopivaa antoreittiä käyttäen, kuten suun, peräsuolen tai nenän kautta, paikallisesti (mukaan lukien poskionteloon ja kielen alle), emättimeen tai ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta (mukaan lukien ihon al-15 le, lihakseen, suoneen, ihoon, niveleen ja epiduraaliti-laan). Tulee ymmärtää, että edullinen antoreitti saattaa vaihdella esimerkiksi saajan tilan mukaan.

Jokaisessa yllä mainitussa käyttösovellutuksessa ja indikaatiossa tarvittava (yllä määritellyn) aktiivisen 20 aineosan määrä riippuu monista tekijöistä, mukaan lukien hoidettavan tilan vaikeusaste ja saaja ja on lopulta hoitavan lääkärin tai eläinlääkärin harkinnassa. Yleisesti kuitenkin jokaisessa näistä käyttösovellutuksista ja indikaatioista sopiva tehoava annos on 0,1 - 250 mg saajan 25 ruumiinpainokiloa kohti päivässä, edullisesti 1 - 100 mg ruumiinpainokiloa päivässä ja edullisimmin 5 - 20 mg ruumiinpainokiloa kohti päivässä optimiannoksen ollessa noin 10 mg ruumiinpainokiloa kohti päivässä. (Ellei toisin ole mainittu, kaikki aktiivisen aineosan määrät on laskettu 30 kaavan (I) mukaisena kantayhdisteenä: sen suoloille luvut kasvaisivat suhteellisesti.) Haluttu annos annetaan edullisesti kahtena, kolmena, neljänä tai useampana annoksena annettuna sopivin välein päivän kuluessa. Nämä annokset voidaan antaa yksikköannosmuodoissa, joka sisältää esi-35 merkiksi 10-1 000 mg, edullisesti 20 - 50 mg ja edulli- r * * 11 simmin 100 - 400 mg aktiivista aineosaa yksikköannosmuotoa kohti.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan antaa yksin tai yhdessä muiden terapeuttisten aineiden, esimerkiksi 9-5 (2-hydroksietoksimetyyli)guaniinin (asikloviirin) kanssa, jota käytetään herpesvirus-, erityisesti HSV (I) -infektioiden hoidossa sekä zidovudiinin kanssa, jota käytetään retrovirus-, erityisesti HIV-infektioiden hoidossa.

Vaikka on mahdollista antaa aktiiviset aineosat 10 yksin, on edullista antaa ne farmaseuttisina formulaatioi-na. Kaavan (I) mukaisista yhdisteistä saatavat sekä eläinlääke- että ihmiskäyttöön tarkoitetut formulaatiot sisältävät vähintään yhden yllä määritellyn aktiivisen aineosan yhdessä yhden tai useamman hyväksyttävän kantajan kanssa 15 sekä valinnaisesti muiden terapeuttisten aineosien kanssa. Kantajan (kantajien) tulee olla "hyväksyttäviä" siinä mielessä, että ne sopivat formulaation muiden aineosien kanssa eivätkä ole vahingollisia saajalle.

Formulaatioita ovat suun, peräsuolen ja nenän kaut-20 ta, paikallisesti (mukaan lukien poskionteloon ja kielen alle), emättimeen tai ruoansulatuskanavan ulkopuolelle (mukaan lukien ihon alle, lihakseen, suoneen, ihoon, niveleen ja epiduraalitilaan) antoon sopivat formulaatiot. Formulaatiot voidaan helposti antaa yksikköannosmuodossa 25 ja ne voidaan valmistaa millä tahansa farmasian alalla hyvin tunnetulla menetelmällä. Näissä menetelmissä on vaihe, jossa aktiivinen aine saatetaan kosketukseen kantajan kanssa, joka muodostuu yhdestä tai useammasta lisäaine-osasta. Yleensä formulaatiot valmistetaan saattamalla ak-30 tiivinen aine kosketukseen nestemäisten kantajien tai hie-... . noksi jauhettujen kiinteiden kantajien tai molempien kans sa tasaisesti ja täydellisesti, jonka jälkeen tarvittaessa muotoillaan tuote.

Suun kautta antoon sopivia formulaatioita voidaan 35 antaa yksittäisinä annoksina, kuten kapseleina, pieninä 12 .· . ^ > r * % ' / , ' tabletteina tai tabletteina, joista jokainen sisältää ennalta määritellyn määrän aktiivista ainetta, jauheena tai rakeina, liuoksena tai suspensiona vesipitoisessa tai vedettömässä nesteessä tai nestemäisenä öljy vedessä -emul-5 siona tai vesi öljyssä -emulsiona. Aktiivinen aine voidaan antaa myös isona pillerinä, lääkepuurona tai tahnana.

Tabletit voidaan valmistaa puristamalla tai valamalla, valinnaisesti yhden tai useamman lisäaineen kanssa. Puristetut tabletit voidaan valmistaa puristamalla 10 sopivassa koneessa aktiivinen aine vapaasti juoksevaan muotoon, kuten jauheeksi tai rakeiksi, valinnaisesti sitovan aineen, voiteluaineen, inertin liuottimen, säilöntäaineen, pinta-aktiivisen aineen tai dispergoivan aineen kanssa sekoitettuna. Valetut tabletit voidaan valmistaa 15 valamalla sopivassa koneessa jauhemainen yhdisteen seos inertin nestemäisen liuottimen kanssa. Tabletit voidaan valinnaisesti päällystää tai jakaa ja ne voidaan formuloida siten, että aktiivinen aine vapautuu niistä hitaasti tai kontrolloidusti.

20 Silmän tai muiden ulkoisten kudosten, esim. suun tai ihon infektioiden hoidossa formulaatioita edullisesti annetaan paikallisena voiteena tai ihovoiteena, joka sisältää aktiivista ainetta esimerkiksi määrän 0,075 - 20 % (w/w), edullisesti 0,2 - 15 % (w/w) ja edullisimmin 0,5 -25 10 % (w/w). Formuloituina voiteeksi aktiivisia aineita voidaan käyttää joko parafiinipitoisten tai veteen sekoittuvien voidepohjien kanssa. Vaihtoehtoisesti aktiiviset aineet voidaan formuloida ihovoiteeksi öljy vedessä -iho-voidepohjaan. Lisäksi paikalliset sovellutukset voidaan 30 tehdä ihon läpi käyttäen iontoforeettista välinettä.

Haluttaessa ihovoidepohjan vesipitoinen faasi voi sisältää esimerkiksi vähintään 30 % (w/w) polyhydristä alkoholia, tämä tarkoittaa, alkoholia, jossa on kaksi tai useampia hydroksiryhmiä, kuten propyleeniglykolia, butaa-35 ni-1,3-diolia, mannitolia, sorbitolia, glyserolia ja po- f· n »-T ' 13 7 ~ lyetyleeniglykolia sekä niiden seoksia. Paikalliset for-mulaatiot voivat edullisesti sisältää yhdisteen, joka edistää aktiivisen aineen adsorptiota tai läpäisevyyttä ihon tai muiden vahingoittuneiden alueiden läpi. Esimerk-5 kejä näistä ihon läpäisemistä edistävistä aineista ovat dimetyylisulfoksidi ja vastaavat analogit.

Paikalliseen silmään antoon sopivat formulaatiot käsittävät myös silmätipat, joissa aktiivinen aine on liuotettu tai suspendoitu sopivaan kantajaan, erityisesti 10 aktiivisen aineen vesipitoiseen liuottimeen. Aktiivista ainetta on näissä formulaatioissa edullisesti pitoisuus 0,5 - 20 %, edullisesti 0,5 - 10 % ja erityisesti noin 1,5% (w/w).

Paikallisesti suuhun antoon sopivat formulaatiot 15 sisältävät imettävät tabletit, jotka sisältävät aktiivisen aineen maustetussa pohjassa, tavallisesti sakkaroosissa ja akasiassa tai tragacantissa; pastillit, jotka sisältävät aktiivisen aineen inertissä pohjassa, kuten gelatiinissa ja glyseriinissä tai sakkaroosissa ja aka-20 siassa sekä suuvedet, jotka sisältävät aktiivisen aineen sopivassa nestemäisessä kantajassa.

Peräsuoleen antoon sopivat formulaatiot voidaan antaa peräpuikkoina, jolloin sopiva pohja on esimerkiksi kaakaovoi tai salisylaatti.

25 Nenän kautta antoon sopivia formulaatioita, joissa kantaja on kiinteä aine, ovat karkea jauhe, jonka partikkelikoko on esimerkiksi noin 20 - 500 pm ja jotka nuuhkaistaan, tämä tarkoittaa, hengitetään nopeasti nenäaukon kautta jauheastiasta, jota pidetään lähellä nenää. Sopi-30 via formulaatioita, joissa kantaja on nestemäinen, esimerkiksi nenäsuihkeen tai nenätippojen antoon ovat aktiivisen aineen vesipitoiset tai öljyliuokset.

Emättimen kautta antoon sopivia formulaatioita voidaan käyttää pessaarien, tamponien, voiteiden, geelien, 35 tahnojen, vaahtojen tai suihkeiden muodossa formulaatioi- 14 r r-\ r*r /1 τ ':· / : ..

na, jotka sisältävät aktiivisen aineen lisäksi alalla sopiviksi tiedettyjä kantajia.

Ruoansulatuskanavan ulkopuoliseen antoon sopivia formulaatioita ovat vesipitoiset ja vedettömät steriilit 5 injektioliuokset, jotka voivat sisältää hapettumista estäviä aineita, puskureita, bakteerien kasvua estäviä aineita sekä liuenneita aineita, jotka tekevät formulaatios-ta isotonisen aiotun saajan veren kanssa sekä vesipitoiset ja vedettömät steriilit suspensiot, jotka voivat sisältää 10 suspendoivia aineita ja paksuntimia. Formulaatiot voidaan antaa yksikköannos- tai moniannosastioissa, esimerkiksi suljetuissa ampulleissa ja pulloissa ja voidaan säilyttää kylmäkuivatussa (lyofilisoidussa) tilassa, jolloin vain steriiliä nestemäistä kantajaa, esim. injektioon sopivaa 15 vettä, on lisättävä välittömästi ennen käyttöä. Ennalta valmistelemattomia injektioliuoksia ja -suspensioita voidaan valmistaa edellä kuvatuista steriileistä jauheista, rakeista ja tableteista. Lihakseen antoon sopivat formulaatiot ovat erityisen edullisia.

20 Edulliset yksikköannosmuodot sisältävät päivittäi sen annoksen tai päivittäisen annoksen osayksikön, kuten tässä yllä on mainittu tai sen sopivan osan aktiivista ainetta.

Tulisi ymmärtää, että edellä kuvatut formulaatiot 25 voivat yllä erityisesti mainittujen aineosien lisäksi sisältää muita alalla tavanomaisia aineita kyseisen formu-laatiotyypin mukaisesti, esimerkiksi suun kautta antoon sopivat formulaatiot voivat sisältää makuaineita.

Kaavan (I) mukaisista yhdisteistä voidaan myös val-30 mistaa eläinlääkekoostumukset, jotka sisältävät vähintään yhden yllä määritellyn aktiivisen aineosan yhdessä eläinlääketieteellisen kantajan kanssa.

Eläinlääketieteelliset kantajat ovat aineita, joita voidaan käyttää koostumuksen annostelemiseksi ja voi-35 vat olla kiinteitä, nestemäisiä tai kaasumaisia aineita, r~» v» — 15 jotka muuten ovat inerttejä tai hyväksyttäviä eläinlääketieteessä ja sopivat yhteen aktiivisen aineosan kanssa. Nämä eläinlääkekoostumukset voidaan antaa suun kautta, ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta tai mitä tahansa ha-5 luttua antoreittiä käyttäen.

Suun kautta annettaessa koostumukset voivat olla tablettien, raelääkejuoman, tahnan, pienen kapselin, kapselin tai lisäravinnon muodossa. Rakeet voidaan valmistaa hyvin tunnettuja märkärakeistusmenetelmiä, esipuristusta 10 tai iskemistä käyttäen. Ne voidaan antaa eläimille iner-tissä nestemäisessä vehikkelissä, jolloin muodostuu lää-kejuoma tai suspensiona vesi- tai öljypohjassa. Edullisesti koostumus sisältää muita lisäaineita, kuten disper-goivaa ainetta. Nämä formulaatiot sisältävät edullisesti 15 15 - 85 % aktiivista ainetta.

Seuraavat valmiste-esimerkit valaisevat em. formu-laatioita.

Valmiste-esimerkki 1

Tablettiformulaatiot 20 Seuraavat formulaatiot A, B ja C valmistetaan mär- kärakeistamalla aineosat Povidone-liuoksessa, sen jälkeen lisäämällä magnesiumstearaatti ja puristamalla.

Formulaatio A

mg/tabletti mg/tabletti 25 Aktiivinen aineosa 250 250

Laktoosi B.P. 210 26

Povidon B.P. 15 9

Natriumtärkkelysglykolaatti 20 12

Magnesiumstearaatti 5 3 30 500 300 f ^. ri y — 16

Formulaatio B

mg/tabletti mg/tabletti

Aktiivinen aineosa 250 250

Laktoosi 150 5 Avicel PH 101 60 26

Povidon B.P. 15 9

Natriumtärkkelysglykolaatti 20 12

Magnesiumstearaatti 5 3 500 300

10 Formulaatio C

mg/tabletti

Aktiivinen aineosa 100

Laktoosi 200 Tärkkelys 50 15 Povidon B.P. 5

Magnesiumstearaatti 4 359

Seuraavat formulaatiot D ja E valmistetaan puristamalla sekoitetut aineosat suoraan. Laktoosi formulaa-20 tiossa E on puristustyyppiä.

Formulaatio D

mg/kapseli

Aktiivinen aineosa 250

Avicel 150 25 Magnesiumstaraatti 4 404

Formulaatio E

mg/kapseli

Aktiivinen aineosa 250 30 Laktoosi 150

Avicel 100

Magnesiumstearaatti 5 505 .- ' r-f * » 17

Formulaatio F (kontrolloidusti vapauttava formu-laatio)

Formulaatio valmistetaan märkärakeistamalla alla olevat aineosat Povidone-liuoksessa, lisäämällä tämän jäl-5 keen magnesiumstearaatti ja puristamalla.

mg/tabletti

Aktiivinen aine 500

Hydroksipropyylimetyyliselluloosa 112 (Methocel K4M Premium) 10 Laktoosi B.P. 53

Povidone B.P. 28

Magnesiumstearaatti 7 700

Valmiste-esimerkki 2 15 Kapseliformulaatiot

Formulaatio A

Kapseliformulaatio valmistetaan sekoittamalla yllä olevan esimerkin 3 formulaatio D:n aineosat ja täyttämällä kaksiosainen, kova gelatiinikapseli seoksella. Formulaa-20 tio B (jäljempänä) valmistetaan samalla tavalla. Formulaatio B

mg/kapseli

Aktiivinen aineosa 250

Laktoosi B.P. 143 25 Natriumtärkkelysglykolaatti 25

Magnesiumstearaatti 2 420

Formulaatio C

mg/kapseli 30 Aktiivinen aineosa 250 .. . Macrogol 4000 B.P. 350 600

Kapselit valmistetaan sulattamalla Macrogol 4000 B.P. dispergoimalla aktiivinen aine sulatteeseen ja täyt-35 tämällä kaksiosainen, kova gelatiinikapseli sulatteella.

,- - t-' y· · 18

Formulaatio D

mg/kapseli

Aktiivinen aineosa 250

Lesitiini 100 5 Arakkiöljy 100 450

Kapselit valmistetaan dispergoimalla aktiivinen aineosa lesitiiniin ja arakkiöljyyn ja täyttämällä pehmeät, elastiset gelatiinikapselit dispersiolla.

10 Formulaatio E (kontrolloidusti vapauttava kapseli)

Seuraava kontrolloidusti vapauttava kapseliformulaatio valmistetaan puristamalla suulakkeen läpi aineosat a, b ja c käyttäen puristinta ja tämän jälkeen sferoni-soimalla puriste ja kuivaamalla. Kuivatut napit päällys-15 tetään sitten vapautumista kontrolloivalla kalvolla (d) ja täytetään kaksiosaisiin koviin gelatiinikapseleihin.

mg/kapseli

Aktiivinen aineosa 250

Mikrokiteinen selluloosa 125 20 Laktoosi B.P. 125

Etyyliselluloosa 13 513

Valmiste-esimerkki 3 Silmäliuos 25 Aktiivinen aineosa 0,5

Propyleeniglykoli 0,2 g

Tiomersaali 0,001 g

Puhdistettu vesi, jonka pH on säädetty 7,5:ksi 100 ml 30 Valmiste-esimerkki 4

Injektoitava formulaatio

Aktiivinen aineosa 0,200 g

Steriili, pyrogeenivapaa sitraat-tipuskuri (pH 7,0) ad 10 ml 35 Aktiivinen aineosa liuotetaan suurempaan osaan sitraat-tipuskuria (35 - 40 °C), jonka jälkeen tilavuus säädetään *. rt /· ·· v / ; , w 19 ja liuos suodatetaan steriilin mikrohuokossuodattimen läpi steriiliin 10 ml:n kullanruskeaan lasipulloon (tyyppi 1) ja suljetaan steriileillä korkeilla ja vaipoilla. Valmiste-esimerkki 5 5 Lihakseen antoon sopiva injektio

Aktiivinen aine 0,20 g

Bentsyylialkoholi 0,10 g

Glycofurol 75 1,45 g

Injektioon sopiva vesi ad 3,00 ml 10 Aktiivinen aineosa liuotetaan glykofuroliin. Tämän jälkeen bentsyylialkoholi lisätään ja liuotetaan ja vettä lisätään tilavuuteen 3 ml. Sitten seos suodatetaan steriilin mikrohuokossuodattimen läpi ja suljetaan steriilei-hin 3 ml:n kullanruskeisiin lasipulloihin (tyyppi 1).

15 Valmiste-esimerkki 6

Siirappisuspensio

Aktiivinen aine 0,25 g

Sorbitoliliuos 1,50 g

Glyseroli 2,00 g 20 Natriumbentsoaatti 0,005 g

Makuaine 0,0125 ml

Puhdistettu vesi ad 5,00 ml

Natriumbentsoaatti liuotetaan osaan puhdistettua vettä ja sorbitoliliuos lisätään. Aktiivinen aineosa lisätään ja 25 liuotetaan. Glyseroli ja makuaineet lisätään ja sekoitetaan. Vettä lisätään lopputilavuudeksi 5 ml. Valmiste-esimerkki 7 Peräpuikko mg/peräpuikko - 30 Aktiivinen aine (63 pm)* 250

Kova rasva, BP (Witepsol Hl5 -Dynamit NoBel) 1 700 1 950 *Aktiivista ainetta käytetään jauheena, jossa vähintään 35 90 % partikkeleista on halkaisijaltaan 63 pm tai vähem- män.

ί~» ^ τ 20

Yksi viidesosa Witepsol H15 -rasvasta sulatetaan höyryvaipalla varustetussa pannussa 45 °C:n maksimilämpötilassa. Aktiivinen aineosa siivilöidään 200 pm:n siivilän läpi ja lisätään sulatettuun pohjaan sekoittaen käyt-5 täen katkaisukärjellä varustettua sekoitinta, kunnes saadaan tasainen dispersio. Pitäen seosta 45 °C:sena loppuosa Witepsol H15 -rasvasta lisätään ja seos sekoitetaan tasaiseksi. Koko suspensio painetaan 250 pm:n ruostumatonta terästä olevan siivilän läpi ja koko ajan sekoit-10 taen sen annetaan jäähtyä 40 °C:seksi. Lämpötilassa 38 -40 °C 2,02 g seosta kaadetaan sopiviin muovisiin valuas-tioihin. Peräpuikkojen annetaan jäähtyä huoneenlämpötilaan.

Valmiste-esimerkki 8 15 Pessaarit mg/pessaari

Aktiivinen aineosa 250

Vedetön dekstroosi 543 Tärkkelys 200 20 Magnesiumstearaatti 7 1 000

Yllä olevat aineosat sekoitetaan ja pessaarit valmistetaan suoraan puristamalla saatu seos.

Seuraavat esimerkit valaisevat tätä keksintöä.

25 Esimerkki IA

2-(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H(purin-9-yyli)-metoksi)etyyli-L-valinaatti a) 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy-li)metoksi]etyyli-N-[(bentsyylioksi)karbonyyli]-L-vali- 30 naatti___

Suspensio, joka sisälsi asikloviiria (2,000 g; Burroughs Wellcome Co.) vedettömässä dimetyyliformamidis-sa (DMF) (150 ml) lämmitettiin 60 °C:seen, jolloin saatiin väritön liuos. CBZ-L-valiinia (3,012 g; Sigma Chemicals, 35 St. Louis, MO ja J. Am. Chem. Soc. 79 (1957) 5697), ry /* 7 ' t * w 21 4-dimetyyliaminopyridiiniä (154 mg; DMAP, Chem. Ber. 89 (1965) 2921 - 33) ja disykloheksyylikarbodi-imidiä (2,998 g; DCC, US-patenttijulkaisu 2 656 383) lisättiin lämpimään liuokseen. Kellertävän liuoksen annettiin jääh-5 tyä huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin yli yön. Valkoinen sakka havaittiin 30 minuutin kuluttua. Reaktioseok-seen lisättiin uudelleen yllä mainitut määrät CBZ-L-va-liinia, DMAP:tä ja DCC:tä ja sameaa suspensiota sekoitettiin huoneenlämpötilassa kahden päivän ajan. Suspensio 10 suodatettiin, jolloin 1,418 g valkoista kiinteää ainetta poistettiin. Väritön suodos konsentroitiin, jolloin saatiin vaaleankeltainen öljy. Öljy puhdistettiin flash-kro-matografisesti silikageeliä käyttäen eluoiden metanolilla dikloorimetaanigradientissa (0 - 15 %), jolloin saatiin 15 3,751 g otsikkoyhdistettä (92,1 %) valkoisena kiinteänä aineena.

b) 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy- li)metoksi]etyyli-L-valinaatti_

Seosta, joka sisälsi 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-ok-20 so-9H-purin-9-yyli )metoksi]etyyli-N- [ (bentsyylioksi )karbo- nyyli]-L-valinaattia (5,0 g, 5 % palladium-hiilikatalyytti - 50 % vesi -seosta (2 g) ja dimetyyliformamidia (50 ml), ravisteltiin Parr-laitteessa 279 kPa:n H2-paineessa kolmen tunnin ajan. Reaktioseos suodatettiin Celite-patsaan läpi 25 ja haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin öljy. Kiinteä aine kiteytettiin vesi/etanoliseoksesta (1:3, v/v) ja uudelleen kiteytettiin, jolloin saatiin 1,5 g otsikkoyhdistettä.

Analyysi: 30 Laskettu: C 48,14 H 6,22 N 25,91

Saatu: C 47,84 H 6,26 N 25,75 C ' · 22

Esimerkki IB

2-(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H(purin-9-yyli)me -toksl)etyyli-L-vaiinaattihydrokloridin monohyd-raatti 5 a) 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9- yyli)metoksi]etyyli-N-[(bentsyylioksi )karbonyyli]-L-va- linaatti__

Suspensio, joka sisälsi asikloviiria (2,00 g, Burroughs Wellcome Co.) vedettömässä dimetyyliformami-10 dissa (DMF) (150 ml), lämmitettiin 60 °C:seen, jolloin saatiin väritön liuos. CBZ-L-valiinia (3,012 g, Sigma Chemicals, St. Louis, MO ja J. Am. Chem. Soc. 79 (1957) 5697), 4-dimetyyliaminopyridiiniä (154 mg; DMAP, Chem. Ber. 89 (1956) 2921 - 33) ja disykloheksyylikarbodi-imidiä 15 (2,998 g; DCC, US-patenttijulkaisu 2 656 383) lisättiin lämpimään liuokseen. Kellertävän liuoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpötilaan ja sekoitettiin yli yön. Valkoinen sakka havaittiin 30 minuutin kuluttua. Reaktioseokseen lisättiin uudelleen yllä mainitut määrät CBZ-L-valiinia, 20 DMAP:tä ja DCC:tä ja sameaa suspensiota sekoitettiin huo neenlämpötilassa kahden päivän ajan. Suspensio suodatettiin, jolloin 1,418 g valkoista kiinteää ainetta poistettiin. Väritön suodos konsentroitiin, jolloin saatiin vaaleankeltainen öljy. Öljy puhdistettiin flash-kromatogra-25 fisesti silikageeliä käyttäen eluoiden metanolilla dikloo-rimetaanigradientissa (0 - 15 %), jolloin saatiin 3,751 g (92,1 %) otsikkoyhdistettä valkoisena kiinteänä aineena.

b) 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy-li)metoksi]etyyli-L-valinaattihydrokloridln monohydraattl 30 Seosta, joka sisälsi 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-ok- so-9H-purin-9-yyli )metoksi]etyyli-N- [ (bentsyylioksi )kar-bonyyli]-L-valinaattia (3,730 g), 5 % palladium-hiilikata-lyyttiä (377 mg), metanolia (100 ml), tetrahydrofuraania (THF) (100 ml) ja 0,5 mol/1 vesipitoista HCl-liuosta 35 (18 ml) ravisteltiin Parr-laitteessa 349 kParn H2-paineessa 23 ·' : - yhden päivän ajan. Reaktioseos suodatettiin Celite-patsaan läpi, jonka jälkeen se konsentroitiin, jolloin saatiin valkoinen kiinteä aine. Tämä kiinteä aine kiteytettiin vesi/etanoliseoksesta, jolloin saatiin 1,762 g (60 %) ot-5 sikkoyhdistettä valkoisena jauheena; sp. 150 °C (kiinteä aine kutistuu), muuttuu asteittain öljyksi ja hajoaa vaah-doten 195 °C:ssa.

Analyysi:

Laskettu: C 41,22 H 6,12 N 22,19 Cl 9,36 10 Saatu: C 41,09 H 6,10 N 22,12 Cl 9,28

Esimerkki 1C

2-( 2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H( purin-9-yyli )me-toksi)etyyli-D-valinaattihydrokloridin monohyd-raatti 15 a) 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy- li)metoksi]etyyli-N-[(bentsyylioksi)karbonyyli]-D-vali-naatti

Suspensio, joka sisälsi asikloviiria (1,000 g, Burroughs Wellcome Co. ) vedettömässä dimetyyliformamidissa 20 (DMF) (80 ml), lämmitettiin 60 °C:seen, jolloin saatiin väritön liuos. CBZ-D-valiinia (1,70 g, US-patenttijulkaisu 4 411 925), 4-dimetyyliaminopyridiiniä (74 mg; DMAP, Chem. Ber. 89 (1956) 2921 - 33) ja disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,60 g, DCC, US-patentti julkaisu 2 656 383) lisättiin 25 lämpimään liuokseen. Kirkkaan liuoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpötilaan ja sekoitettiin typen alla kaksi päivää. Reaktioseokseen lisättiin uudelleen yllä olevat määrät CBZ-D-valiinia, DMAP:tä ja DCC:tä ja sameaa suspensiota sekoitettiin huoneenlämpötilassa kahden päivän ajan. 30 Suspensio suodatettiin valkoiseen kiinteän aineen poistamiseksi. Väritön suodos konsentroitiin ja jäännös suodok-sesta liuotettiin metanoli/dikloorimetaaniin ja kromato-grafoitiin silikageeliä käyttäen eluoiden 10-%:isella me-tanoli/dikloorimetaanilla, jolloin saatiin 1,10 g (52 %) 35 valkoista kiinteää ainetta, sp. 155 - 158 °C.

24 ·'"· ·· #“* -l

Analyysi:

Laskettu: C 52,05 H 6,01 N 17,34 Saatu: C 52,02 H 5,98 N 17,32 b) 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy-5 li)metoksl]etyyli-D-valinaattihydrokloridin monohydraatti

Seosta, joka sisälsi 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-ok-so-9H-purin-9-yyli )metoksi]etyyli-N-[ ( bentsyylioksi )karbo-nyyli]-D-valinaattia (0,94 g), 5 % palladium-hiilikata- lyyttiä (200 mg), metanolia (25 ml), tetrahydrofuraania 10 (25 ml) ja 0,5 mol/1 vesipitoista HCl-liuosta (4,5 ml), sekoitettiin Parr-laitteessa 349 kPa:n H2-paineessa neljä tuntia. Reaktioseos suodatettiin milliporekalvon läpi, jonka jälkeen suodos konsentroitiin ja kuivattiin, jolloin saatiin otsikkoyhdiste valkoisena jauheena; sp. 185 -15 188 °C.

Analyysi:

Laskettu: C 40,47 H 6,18 N 21,37 Cl 10,82 Saatu: C 40,62 H 5,98 N 21,20 Cl 10,91

Esimerkki ID

20 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H(purin-9-yyli)me - toksi)etyyli-DL-valinaattihydrokloridin monoh y d -raatti a) 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy- li )metoksi]etyyli-N- [ (bentsyylioksi )karbonyyli] -DL-vali- 25 naatti_

Suspensio, joka sisälsi asikloviiria (2,00 g, Burroughs Wellcome Co. ) vedettömässä dimetyyliformamidissa (DMF) (150 ml), lämmitettiin 60 °C:seen, jolloin saatiin väritön liuos. CBZ-DL-valiinia (3,012 g. Sigma Chemicals, 30 St. Louis, MO ja Chemical Abstracts, 101(5) 38799j), 4-dimetyyliaminopyridiiniä (154 mg, DMAP, Chem. Ber. 89 (1956) 2921 - 33) ja disykloheksyylikarbodi-imidiä (2,998 g, DCC, US-patenttijulkaisu 2 656 383) lisättiin lämpimään liuokseen. Liuoksen annettiin jäähtyä huoneen-35 lämpötilaan ja sekoitettiin yli yön.

25 - - ri y »· -·. /

Reaktioseokseen lisättiin uudelleen yllä mainitut määrät DL-valiinia, DMAPitä ja DCC:tä ja suspensiota sekoitettiin huoneenlämpötilassa kahden päivän ajan. Sitten suspensio suodatettiin valkoisen kiinteän aineen poistami-5 seksi. Suodos konsentroitiin ja puhdistettiin flash-kroma- tografisesti silikageeliä käyttäen eluoiden metanolilla dikloorimetaanigradientissa (15 %), jolloin saatiin otsik-koyhdiste.

b) 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy- 10 li)metoksi]etyyli-DL-valinaattihydrokloridin monohyd- raatti_

Seosta, joka sisälsi 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-ok-so-9H-purin-9-yyli )metoksi]etyyli-N- [ (bentsyylioksi )karbo-nyyli]-DL-valinaattia (3,730 g), 5 % palladium-hiilikata-15 lyyttiä (377 mg), metanolia (100 ml), tetrahydrofuraania (THF) (100 ml) ja 0,5 mol/1 vesipitoista HCl-liuosta (18 ml), sekoitettiin Parr-laitteessa 349 kPa:n paineessa H2:ta yhden päivän ajan. Reaktioseos suodatettiin Celite-patsaan läpi, jonka jälkeen se konsentroitiin, jolloin 20 saatiin kiinteä aine. Tämä kiinteä aine kiteytettiin ve-si/etanoliseoksesta, jolloin saatiin otsikkoyhdiste. Esimerkki 2 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H(purin-9-yyli)m e -toksi)etyyli-L-isoleusinaattihydrokloridi 25 a) 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy- li)metoksi]etyyli-N-[(bentsyylioksiJkarbonyyli]-L-isoleu- sinaatti_

Seosta, joka sisälsi asikloviiria (1,0 g, 4,4 mmol; Burroughs Wellcome Co.), 4-dimetyyliaminopyridiiniä 30 (74 mg, 0,6 mmol; Aldrich Chemical Co. ja Chem. Ber. 89 (1956) 2921 - 33), 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,6 g, 8,0 mmol; Aldrich Chemical Co ja US-patenttijulkaisu 2 656 383), N-karbobentsoksi-L-isoleusiinia (1,8 g, 6,6 mmol; Sigma Chemical Co. ja Bull. Chem. Soc. Jap. 39 35 (1966) 947 tai Tetrahedron 40(24) (1984) 5207 - 11) ja 26 molekyylisiivilöitä (0,3 g, Davison tyyppi 3A; Fisher Scientific, Co) kuivassa N,N-dimetyyliformamidissa (80 ml), sekoitettiin huoneenlämpötilassa typen alla. Neljän päivän kuluttua lisättiin vielä lisää 1,3-disyklohek-5 syylikarbodi-imidiä (1,6 g, 8,0 mmol) ja N-karbobentsoksi-L-isoleusiinia (1,8 g, 6,6 mmol). Sekoitusta huoneenlämpötilassa jatkettiin seitsemän päivän ajan. Saatu seos suodatettiin ja kirkas suodos konsentroitiin vakuumissa puolikiinteäksi jäännökseksi. Jäännöksen eluointi sili-10 kageeli 60 -geelistä (EM, 230 - 400 mesh, 8,5 x 14 cm) liuoksella 2,5 - 5 % metanoli/metyleenikloridi tuotti 2-[ (2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli )metoksi]etyy-li-N-[(bentsyylioksi)karbonyyli]-L-isoleusinaattia (0,8 g, 45 %) valkoisena kiinteänä aineena, sp. 155 - 157 °C; 15 UV (MeOH); Λ max 255 nm (£17 700) Λ sh 279 (9 800), Λ min 230 (6 100); NMR (200 MHz, ME2SO-d6): 0,73 - 0,80 ppm (m, 6H), 1,13 - 1,33 (m, 2H), 1,66 - 1,70 (m, 1H), 3,64 (t, 2H), 3,92 (t, 1H), 4,16 (m, 2H), 5,00 (s, 2H), 5,32 (s, 2H), 6,47 (le-20 veä s, 2H), 7,33 (s, 5H), 7,65 (d, j-8 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 10,59 (leveä s, 1H); MS (C1/CH3; 70 °C): m/z 374 (1,0 %, M+l), 347 (23,2, 20 °r

M-125), 225 (100,0, M-247); [a]d -3,07° (c 0,488, 6N

HC1) .

25 TLC: yksi täplä silikageelillä ajoliuoksella 10 % metano-li/CH2Cl2, R, ~ 0,38.

HPLC: yksi piikki Supelco LCe -pylväällä ajoliuoksella 50 % Me0H/H20; 100 % K' = 7,02.

Analyysi yhdisteelle C22H2eN606.H20: 30 Laskettu: C 53,87 H 6,16 N 17,13

Saatu: C 53,94 H 6,20 N 17,04 b) 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy- li)metoksi]etyyli-L-isoleusinaattihydrokloridi_

Liuos, joka sisälti 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-ok-35 so-9H-purin-9-yyli )metoksi ] etyyli-N- [( bentsyylioksi )kar-

-, r~y A

27 bonyyli]-L-isoleusinaattia (1,11 g, 2,2 mmol) metanoli-tetrahydrofuraaniseoksessa (1:1, 50 ml), käsiteltiin 0,5 mol/1 kloorivetyhapolla (5 ml) ja 5 % palladium-hii-li-katalyytillä (0,30 g; MCB Reagents). Seos hydrogenoi-5 tiin Parr-hydrogenaattorissa 349 kPa:n paineessa 11 tunnin ajan, suodatettiin Celite-patsaan läpi ja suodos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metoksi]etyyli-L-isoleu-sinaattihydrokloridi (0,86 g, 92 %) vitivalkoisena kiin-10 teänä aineena; sp. 180 - 182 °C (kuplivaa pehmenemistä noin 150 °C:ssa); UV (MeOH): λ max 254 nm (£ 13 400), λ sh 272 (9 000), λ min 224 (3 600); NMR (200 MHz, Me2S0-d6): 0,77 - 0,84 ppm (m, 6H), 1,13 -15 1,37 (m, 2H), 1,82 (m, 1H9, 3,73 (t, 2H), 3,87 (leveä t, 1H), 4,14 - 4,40 (m, 2H), 5,36 (s, 2H), 6,70 (leveä s, 2H), 7,97 (s, 1H), 8,46 (leveä s, 3H), 10,87 (s, 1H); MS (C1/CH4; 150 °C): m/z 367 (6,9 %, M+29), 339 (100, M+l), 225 (92,9, M-113); [a]D20 °C + 11,15° (c 2,0, HOAc).

20 TLC: yksi täplä silikageelillä ajoliuoksella 10 % metano-li/CH2Cl2, Rf = 0,12; HPLC: yksi piikki Versapack C18-pylväällä ajoliuoksella 10 % metanoli/H20/0,1 % F3CC00H; 100 % K' = 3,74.

Analyysi yhdisteelle C14H22N604 · 1,25 HCl’1,10 MeOH*0,25 H20: 25 Laskettu: C 42,81 H 6,70 N 19,84 Cl 10,46

Saatu: C 42,82 H 6,50 N 19,64 Cl 10,46

Claims (6)

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen 2-(2-amino-1,6-dihydro-6-okso-9H( purin-9-yyli )metoksi )etyyli-5 L-valinaatin tai -L-isoleusinaatin valmistamiseksi, jolla on kaava (I) OH Λα ” ,,ΛΛ./ CH2OCH2CH2OCOCH(R1) nh2 jossa R, on kaavan -CH(CH3)2 tai -CH( CH3 )CH2CH, mukainen ryh-15 mä, tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) annetaan kaavan (II) mukaisen yhdisteen X 20 ill/ (id CH2OCH2CH2OH jossa X on valinnaisesti suojattu hydroksiryhmä ja Y on 25 valinnaisesti suojattu aminoryhmä, reagoida valinnaisesti suojatun L-valiinin tai L-isoleusiinin tai niiden funktionaalisen ekvivalentin kanssa, tai b) kaavan (111) mukainen yhdiste

30 M jöO CH2OCH2CH2OCOCH(R1)NH2 35 r·? S 29 '' v ; : - (jossa R2 merkitsee samaa kuin edellä ja M on hydroksiryhmä ja G on atomi tai ryhmä, joka voidaan korvata aminoryhmäl-lä tai muuttaa aminoryhmäksi; tai G on aminoryhmä ja M on atomi tai ryhmä, joka voidaan korvata hydroksiryhmällä tai 5 muuttaa hydroksiryhmäksi) muutetaan kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi; tai c) annetaan kaavan (IV) mukaisen yhdisteen 10 * rV\ / <IV> Q 15 (jossa X ja Y merkitsevät samaa kuin edellä ja Q on poistuva atomi tai ryhmä) reagoida kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa

20 ACH2OCH2CH2OCOCH(R1)R2 (V) (jossa Rx merkitsee samaa kuin edellä, A on poistuva ryhmä tai atomi ja R2 on valinnaisesti suojattu aminoryhmä); sekä valinnaisesti suoritetaan yksi tai useampia 25 seuraavista reaktioista missä tahansa halutussa järjestyksessä: i) poistetaan mahdolliset suojaryhmät; ii) silloin kun saatu tuote on kaavan (I) mukainen yhdiste, muutetaan mainittu yhdiste farmaseuttisesti hy- 30 väksyttäväksi suolakseen, sekä iii) silloin kun saatu tuote on kaavan (I) mukaisen yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, muutetaan mainittu suola kantayhdisteeksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 2-(2-35 amino-1,6-dihydro-6-okso-9H( purin-9-yyli Jmetoksi )etyyli- L-valinaatin valmistamiseksi. f i S “ 30 ' ' : '

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 2-(2-amino-1,6-dihydro-6-okso-9H( purin-9-yyli )metoksi )etyyli-L-isoleusinaatin valmistamiseksi.

4. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen 5 menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen suolan valmistami seksi, tunnettu siitä, että sekoitetaan kaavan (I) mukainen yhdiste happoon suolan muodostamiseksi.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu happo on kloorivety- 10 happo.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 2-(2-amino-1,6-dihydro-6-okso-9H( purin-9-yyli )metoksi )etyyli-L-valinaattihydrokloridi-monohydraatin valmistamiseksi. Γ *? *