FI115457B - Menetelmä farmaseuttisesti hyväksyttävien 6-kloori-4-trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-onijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

115457

Menetelmä farmaseuttisesti hyväksyttävien 6-kloori-4-trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-onijohdannaisten valmistamiseksi 5 Tekniikani taso

Esillä oleva hakemus liittyy Merckin hakemuksiin 18 429, 18 4291A-ja 18 727. Esillä oleva hakemus on CIP-hakemus Merckin hakemuksesta 18 793, joka on jätetty 7. elokuuta 1992, US-hakemuksena nro 07/926 607.

10 Ihmisen immuunikatovirukseksi (HIV) nimitetty ret rovirus on etiologinen vaikuttaja komplisoidussa sairaudessa, jossa immuunijärjestelmä tuhoutuu progressiivisesti (hankittu immuunikatosyndrooma, acquired immune deficiency syndrome; AIDS) ja keskus- sekä perifeerinen hermojärjes-15 telmä degeneroituu. Tämä virus tunnettiin aikaisemmin LAV:na, HTL-III:na tai ARV:na. Retroviruksen replikaatioon kuuluu tyypillisesti RNA-genomin käänteistranskriptio, joka tapahtuu viraalisesti koodatun käänteistranskriptaasin toimesta HIV-sekvenssien DNA-kopioiden muodostamiseksi ja 20 joka on välttämätön vaihe virusreplikaatiossa. Tiedetään, että eräät aineet ovat käänteistranskriptaasin estäjiä ol-Ien tehokkaita aineita AIDS:in ja vastaavien tautien hoi- • * dossa, ja näistä aineista mainittakoon esimerkkinä atsido- • * » : tymidiini tai AZT.

* * · 25 HIV:n nukleotidisekvensointi osoittaa pol-geenin t · läsnäolon yhdessä avoimessa lukuraamissa (an open reading frame) [Ratner, L. et ai., Nature, 313, 277 (1985)]. Ami- i i · • ’ nohapposekvenssihomologia antaa todisteen siitä, että pol- sekvenssi koodaan käänteistranskriptaasia, endonukleaasia 30 ja HIV-proteaasia [Toh, H, et ai. , EMBO J. 4, 1267 (1985); Power, M.D. et ai. , Science, 231, 1567 (1986); Pearl, L.H. et ai., Nature 329, 351 (1987)].

Hakijat osoittavat, että esillä olevan keksinnön . mukaisesti saatavat yhdisteet ovat HIV- ’...· 35 käänteistranskriptaasin estäjiä. Keksinnön mukaisesti saa- t I » t · / 2 115457 tavien yhdisteiden erityisenä etuna on, että ne osoitetusta estävät resistenttiä HIV-käänteistranskriptaasia.

Keksinnön lyhyt yhteenveto

Keksintö tuo esiin menetelmän hakemuksessa määri-5 teltyjen kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi. Nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia HIV- käänteistranskriptaasin (ja sen resistenttien muunnelmien) estossa, HIV:n aiheuttaman infektion ehkäisyssä, HIV-infektion hoidossa sekä AIDS:in ja/tai ARC:n hoidossa, jo-10 ko yhdisteinä, farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina (kun on tarkoituksenmukaista) tai farmaseuttisen koostumuksen aineosina, joko yhdistettynä tai ei-yhdistettynä muiden anti-viraalisten aineiden, anti-infektioaineiden, immunomodulaattoreiden, antibioottien tai rokotteiden 15 kanssa.

Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus ja edulliset sovellutukset

Esillä oleva keksintö tuo esiin menetelmän kaavan I mukaisten yhdisteiden, tai niiden farmaseuttisesti hy-20 väksyttävien suolojen valmistamiseksi, jotka on tarkoitettu HIV-käänteistranskriptaasin ja sen resistenttien muun- » (ί nelmien estoon, HIV-infektion ehkäisyyn tai hoitoon sekä lopulta seuraavan hankitun immuunikatosyndrooman (AIDS) hoitoon. Kaavan I mukaiset yhdisteet määritellään seuraa- ; 25 vasti: • · *' F«C. R 1 - 1 > · , * jossa R on 35 (a) Ci-8-alkyyli, joka on substituoimaton tai substituoitu A:lla, jolloin A on halogeeni, C3-6-sykloalkyyli, CN, hydroksi, Ci-4-alkoksi, nitro, di(Ci_2- 3 115457 alkyyli)amino, pyrrolidinyyli, oksatsolidinyyli tai fe-nyylitio; (b) C2-4-alkenyyli, joka on substituoimaton tai substituoitu (i) A: 11a, tai (ii) fenyylillä, joka 5 on substituoimaton tai substituoitu A:11a; (c) C2-5-alkynyyli, joka on substituoimaton tai substituoitu (i) A:11a, tai (ii) fenyylillä, joka on substituoimaton tai substituoitu A: 11a; tai (d) fenyyli tai fenyylietyyli, 10 tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Keksinnön mukainen menetelmä on määritelty patenttivaatimuksissa.

Edullisiin yhdisteisiin kuuluu alla Taulukossa I esitetyt Yhdisteet 37.2, 4, 2 ja 24, lueteltuna edulli- 15 suusjärjestyksessä. Näillä yhdisteillä on seuraava rakenne :

Yhdiste 37.2: cixJsSc YY o > w La a

: H

* ‘ (-)-6-kloori-4-syklopropyylietynyyli-4-trifluorimetyyli- .* 20 l,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni, joka on edullisin;

Yhdiste 4: f p

- AX

<-> UsA,

H

4 115457 (-)-6-kloori-4-fenyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni;

Yhdiste 2: fi F3C. A CN ck YY o m LA Λ

N O

s H

(+/-)-6-kloori-4-(2-syaanifenyyli)etynyyli-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni; 10 Yhdiste 24s 70Η3

y-N

f3c / XcH3 (+/·)

H

·. (+/-)-4-(2- [dimetyyliaminometyyli] etynyyli) -4- trifluorimetyyli-6-kloori-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-oni; 15 tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä on : esitetty spesifisesti alla olevassa Taulukossa I: • · * 20 5 115457

Taulukko I

χ’ R

Cl—

H

5 / 6 115457 in o 6 ! 8 2 5 ω Λ - 1 _ - ο „ § E ° 3 r-· g Q Τ3 Tf Μ* · CO 10

2 O

O r; O CD

« "C cd m σ> m Λ O > S CM CM . “ 'a “ .3 ·

4J

cd ~ o , « . .

w ° cd r- tn cd co en _ • CO CD M- M· Γ"— O a y- T- CM CM 1-·*- 3 51 · 2 a £

'a CO CO , CO | |CT i"J

S | LL U. LL O cl H o 9 9 9 ^ A I i » · ö)

CO

•H

<U

X o X o o . g ° g 9 9 8 Y II II II Jl 1 1 · « - * * 3

4J

+J

Oi u * t «rl • * + « θ ,., m -X .

^ cj co + • Ό ^ ’* · M -

JH

> « / 7 115457 tn ro *

O

O

o o o

o O CD

,1° E o

O -O t- CO

O - T- _ o O O) tn — f'·'.

b ^

/-N

3

4J

5, o w o m to Λ _

CM CM 2 TZ

M · CM CM f° A. T~ *»-»

O CO

a § H m co , U_ U_ x| 9 9 g 0:1 ÖLo^:

·::: Il II

? , \ * * 0) . S ω ^ ;* ό

JS

/ 115457 a ιο *5 *m c 9 o £ o <o

o C

Ul c o o o o 0-5-5 £ £5 .. $ o i IX? m c

*5 CO CO CO CM

O ^ 00 T- T- -r- 3 ±J ^^ 45, o ~ 2Γ cn o u^to N- r·» m <or^- into So m co ττ

a -1- -1--1- 1-T- -1- το «I

3 3 r-i 3 cd H m _ 1 IL· LL· Lif0 U? x| 9 9 9 9 ! 0 “ (") Or0^ Cj)

; h) Il II I II

* * *t * , * * * * • # · * ·

‘ * * .J

.. «I +

..... +J

• ffl Ο 1- CM

..,,: 5 en *- *- ·*- • · J2 . ►* *«»

' I I

* » » · * · > * t I .

! / 9 115457

O

o S o a> » ri 00 O Γ-

O

O

O ui o «« o O O o ° 5 I S Λ ?' Λ «^5 § w § s w P. 4to into 00 ¾¾ ta r-r- toto co tt £?

n ·1 1- t" t" τ' CvJCM

• >-' P< to

M

3 3 u? uT li? ><| fe 9 O 9 * i := δ> Il /s ' n IM)

* 1 I

<a * w N» ..,,:· . . " · « CO τι · Ό ^ 1 T— JS ' ....: ►< * t «tl · I · / » » 1 · 10 115457 m «5 σι «£ b o o 1X5 S o c o o »-j ° S o g o _ in o in tn E <0 io o s 5

o -a CM CM ^ £ CD

-e 5) ^ 12 ,9 w o 1 - ^ ^ /“1s 3 J§ « o . · · ! n 030) (DN 12 iS .9 ^ 'χ' -a·^ en co cd cd •M-’M- mm • IL _ t— -r- T- T— T- -I— T-T- M Ph T- T— t- ta o ϋ

Ai 3

iH

3 1 . uT LL5 t x| 9 9 9 9 i ^ r° :¾ c| lii ^ ö ö 0 : : 1 1 I ui y ♦ I . / —. ω | " ® 8 S Si js

►H

f · il 1 1 5457 m

O

O <=> — T“

O

2 c o O ' o in w S E °- S o wo ° + o en \ z_ t“ ϋ Ό " CO Ί- Λ y\ Λ Λ

S

C

.s 1 1 n ' § a s O > T- ^ w 0~ in

/-N

3 3

Ai

4-1 · ,-. I

cd q to m w y— CO tcTfO CM Tf- "M· tO CO ·1?

CO CO ^ ^ CM CM CM CM OO

M CU t— -r- f- 1— T- -i— CM CM CM CM

m O Ai Ai 3 t-4 3 cd

H

, uT H? £ uT

•xl 9 9 9 9 ' \ / -r ::·· /z § L1 11 II 1 n 1

.1 II II

;1: 1 1 I 1 I . | •; · ®

. . , , 4J

... en : rj co ^ to cp r^

··· 12 CM CM CM CM CM

£ «lift »tl // · · 12 115457 in o « g o S £ ϋ Ο ·° ib — CO o O > ^ «

— CO

CO

CO

^ s MP 3 i — % £ · § l-l ® O _ *£ 3

S W

a w Λ _ <u

Qt C

H ^ I O 1 :;;: x| ! §

* · 1 1 CO

l l en /1! Oi

* '. « rH

: _ 3 o y i

* 1 1H

: · : -o ,,. · J3 •ν': 0:1 II ί - ·1"> r o

r 4J

* - Oi

.,;;· S

2 S 2 ... to .Tl s a • ' £ CO + 2 2 13 115457

Esillä olevan keksinnön mukaisesti saatavilla yhdisteillä voi olla asymmetriakeskuksia ja, ellei toisin mainita, ne voivat esiintyä rasemaatteina, raseemisina seoksina tai yksittäisinä diasteromeereina tai enantiomee-5 reina kaikkien isomeerimuotojen kuuluessa esillä olevan keksinnön piiriin. (+/-)-termin on tarkoitettu käsittävän (+)-optiset isomeerit tai (-)-optiset isomeerit tai näiden seokset.

Kun jokin muuttuja (esim. R) esiintyy useammin 10 kuin kerran missä tahansa rakenneosassa tai kaavassa I, sen määrittely kussakin tapauksessa on riippumaton sen kunkin muun tapauksen määrittelystä. Edelleen, substi-tuenttien ja/tai muuttujien yhdistelmät ovat sallittuja, vain mikäli tällaiset yhdistelmät tuottavat stabiileja yh-15 disteitä.

Tässä yhteydessä käytettynä, ellei toisin mainita, "alkyyli" tarkoittaa sekä haaroittuneita että suoraketjui-sia tyydyttyneitä alifaattisia hiilivetyryhmiä, joilla on spesifioitu hiiliatomien lukumäärä; "alkenyyli"-termi on 20 tarkoitettu kattamaan sekä haaroittuneet että suoraketjui-set aikyyliryhmät, joissa on vähintään yksi hiili-hiili-: kaksoissidos; "alkynyyli"-termi on tarkoitettu kattamaan sekä haaroittuneet että suoraketjuiset alkyyliryhmät, joissa on vähintään yksi hiili-hiili-kolmoissidos. "Halo-25 geeni" tai "halo" tarkoittaa tässä yhteydessä fluoria, • t klooria, bromia ja jodia.

Esillä olevan keksinnön mukaisesti yhdis-teiteet voidaan syntetisoida seuraavien menetelmien mukaisesti.

< · » 1 » / · 14 1 1 5457

Kaavio I

C! Ci ® pivaloyylikloridi

|l raetyleenikloridi II

Na„CO -vesiliuos NH2 HN o 10 _i

o JL

1- 2 ekv. n-BuLi/THF/O °C

- 1JL 3 2. CF3COOEt/0°C NH2 3. 3N HCI/ref luksi lämpö tila 3 20 -

i Vr R-MgBr FaC\/R

-:-- cVYXoh

. ! THF/0°C - huoneen- [I -J

:.: : lämpötila 25 2 i , 1 ’-rkarhonyylidi-

’ imidatsoli F3C R

30 THF/50-C

V K o

It* I · I * · 3 15 115457

Esillä olevan keksinnön mukaisten bentsoksatsii-nien synteesin yleisessä menetelmässä suoritetaan tavallisesti viimeisenä vaiheena syklisointi bentseenikeskukseen. Ks. Kaavio I. Parakloorianiliinin aminoryhmä suojataan en-5 sin, esim. pivaloyylikloridilla, yhdisteen 2_ saamiseksi. Muihin, ei yhtä edullisiin aminon suojaryhmiin kuuluu t-butoksikarbonyyli-, asetaatti- tai isovaleroyyliryhmät. Noin 2 ekvivalenttisen määrän alkyylilitiumia, edullisesti n-butyylilitiumia, annetaan sitten reagoida yhdisteen 2 10 kanssa. Muut organometalliyhdisteet eivät ole sopivia tähän metallointivaiheeseen. Tätä -seuraava reaktio CF3COOEt:n kanssa ja sitten reaktion pysäytys tuottaa yhdisteen 3_.

Tertiäärinen karbinoli 4 syntetisoidaan suoritta-15 maila Grignard-additio ketoniin 3^. Grignard-reagenssin täytyy olla kaksiarvoisen kationin, esim. Mg++:n tai Zn++:n, suola. Yksiarvoisten kationien, esim. Li+:n tai Na+:n, on todettu olevan sopimattomia. Sopiviin liuottimiin kuuluu, näihin rajoittumatta, THF tai eetteri. Lämpö-20 tila voi vaihdella laajalla alueella n. 0 °C:een ja huoneenlämpötilan välillä.

Renkaan sulkeminen esillä olevan keksinnön mukais-

* I

ten yhdisteiden 5 tuottamiseksi suoritetaan kondensoivilla «51 : aineilla, kuten 1,11-karbonyylidi-imidatsolilla, fos- I » · ,··, 25 geenillä, dimetyylikarbonaatilla, difenyylikarbonaatilla ;"‘.t tai di-(paranitrofenyyli) karbonaatilla. Syklisointi voi- » > · daan suorittaa millä tahansa mainituista yhdisteistä, kuin * > t • ’ myös monilla muilla yhdisteillä.

Eräs spesifinen esimerkki Kaaviosta I on esitetty ..w 30 Kaaviossa IA. Siinä kuvataan synteesikaavio yhdisteelle L- 741 211, joka on Yhdisteen 37.2 rasemaatti ja jota käsi- !;.,j tellään vielä Esimerkissä 6.

» * : I * ' » » 16 1 1 5457

Kaavio IA

1 cl 5 *-Βυ0°01 A

XX Na0H/H20 XX

I CHCU T

..... NH2 O. NH

(100%) ^ 10

1.2 n-BuLi/THF O

-78°C->0°C/1h

-- XX

2. EtOOCCF3/0°c ^^NH2 ^ 3. 3N HCI -refluksilämpotila (60%) — 20 FC #

. 1. EtMgBr/THF CL X3 X

[>—= 50°C/1 h j *. 2. A/1 ?5h/huoneen- NH2 , 25 lämpötila ;* ;* (73-74%) * ·

* * r I

I < » » ·

:!!' 30 f3c X

: : Cl. _ 3 \/ ι,τ-cdi/thf V^r o ·:··: -- I I ΐ ·:··: (99%) •It » » • · jv. (L-741,211) 17 115457

Kaavio II

F3C ft

Ck X 1. n-BuLi, sitten ZnCI_

Yli -- 5 ιχ^ν-Λ 2. (Ph3P)4Pd/Cul/ J-J ^ 2_jodisyanobentseeni 10 f3c. $ cn

CL χ3 X

XXX

>< N o

H

15 7.

' / 18 115457

Kaavio II esittää erästä menetelmää asety-leenisubstituutioiden tuottamiseksi bentsoksatsiinikeskuk-sen 4-paikassa. Esimerkiksi, yhdiste 6 metalloidaan, jonka jälkeen lisätään sinkkisuolaa. Heck-reaktiossa käytetään 5 tetrakis(trifenyylifosfiini)palladium-(0)-katalyyttia kompleksoituna Cul:n kanssa yhdisteen 7 saamiseksi.

Kaavio III

Pyrrolidiini _^ "\ paraformaldehydi / L· Cul -__ C1 p3cv/^

TO

H 0 10 *

Kaavio III havainnollistaa 4-asetyleeniryhmän sub-. stituutiota N-sisältävällä heterosyklillä. Mannich-reaktio käsittää formaldehydin kondensaatioreaktion heterosyklin, *·· ’ 15 esim. pyrrolidiinin, kanssa. Substituutio tapahtuu pääte- • t » : hiileen Cul:n ollessa läsnä katalyyttina.

/ • » 19

Kaavio IV

115457 TXX _ H ° Et3N/4-DMAP/CH2CI2 (+/-) c [I I T 1. Kromatografia silika- geelillä__ 2. K2C03/H20/2-propanoli 0^\ λ.

i »

Kaavio IVA

20 115457 5 P*

Ql P. (-)- kamfanyylikloridi I Ύ 9- 4-DMAP/Et3N/CHCI3 H u 10 (L-741,211) 15 Τιϊ S. sAs. Kiteytys heksaanista _ N xo - * (90% saanto) 20 b> °κΛ°>r

*.*, V'^r'O

n-BuOH/1 N HCI/60°C

25

'· 30 axJf>C

”: .

H

L-743,726 ’· Yhdiste 37,2 ./ 35 t ;/

Kaavio V

21 115457 p>_PCls LXI t-BuOK/DMSO ^ _ (42%) 5 Syklopropyyliasetyleeni valmistetaan Kaavion V mu kaisesti käyttäen julkaistuja menetelmiä, esim. julkaisuissa, C. E. Hudson et ai., J. Am. Chem. Soc. R4, 1 158 (1972) ja W. Schoberth et ai., Synthesis, 703 (1972), kuvattuja menetelmiä.

10 Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettavat yhdisteet ovat käyttökelpoisia antiviraalisille yhdisteille tarkoitettujen seulontamääritysten valmistuksessa ja toteutuksessa. Esimerkiksi, esillä olevia yhdisteitä voidaan käyttää eristämään entsyymimutantteja, jotka ovat 15 erinomaisia seulontavälineitä tehokkaammille antiviraali sille yhdisteille. Edelleen, keksinnön mukaisesti valmistettavat yhdisteet ovat käyttökelpoisia osoittamaan tai määrittämään muiden antiviraalisten aineiden sitoutumis-. . kohdan HIV-käänteistranskriptaasille, esim. kompetitiivi- 2 0 sen eston avulla. Siten esillä olevat yhdisteet ovat kau- : ]*t pallisia tuotteita ja tarkoitettu myytäväksi tällaisiin käyttötarkoituksiin.

Esillä olevat yhdisteet ovat käyttökelpoisia HIV-: käänteistranskriptaasin estossa, ihmisen immuun ikä tovi ruk- ’·’ ‘ 25 sen (HIV) aiheuttaman infektion ehkäisyssä tai hoidossa sekä lopulta seuraavien patologisten tilojen, kuten I;’ AIDS:n, hoidossa. AIDSrn hoitoon tai HIV-infektion hoitoon : tai ehkäisyyn määritellään kuuluvaksi laajasti vaihtele- viin HIV-infektiotiloihin: AIDS, ARC (AIDS related comp-30 lex, AIDSriin liittyvä kompleksi), sekä oireellinen että oireeton, ja todellinen tai mahdollinen altistuminen I · / 22 115457 HIV:lie, kohdistuva hoito, näihin kuitenkaan rajoittumatta. Esillä olevat yhdisteet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa HIV:n aiheuttamaa infektiota epäiltäessä, että on tapahtunut altistuminen HIV:lie esim. verensiirron, kehon-5 nesteiden vaihtumisen, puremien, satunnaisen neulan piston yhteydessä tai leikkauksen aikana potilaan veren kanssa kosketuksiin joutumisen yhteydessä.

Esillä olevien yhdisteiden erityisenä etuna on, että niillä on potentiaalia estää sellaista HIV-10 käänteistranskriptaasia, joka on tullut resistentiksi muille antiviraalisille aineille, kuten L-697 661:lie, joka on 3-([(4,7-dikloori-l,3-bentsoksatsol-2-yyli)metyyli]-amino)-5-etyyli-6-metyylipyridin-2-(1H)-oni; tai L-696 229:lle, joka on 3-[2-(1,3-bentsoksatsol-2-yyli)etyyli]-5-15 etyyli-6-metyyli-pyridin-2-(1H)-oni; tai AZT:lle.

Näihin käyttötarkoituksiin esillä olevia yhdisteitä voidaan antaa oraalisesti, parenteraalisesti (mukaan lukien subkutaaniset injektiot, intravenoosinen, intramus-kulaarinen ja intrasternaalinen injektio tai infuusiomene-20 telmät), inhalaatiosuihkeella tai rektaalisesti yksikkö annosmuodoissa, jotka sisältävät konventionaalisia, ei-toksisia farmaseuttisesti hyväksyttäviä apuaineita, adju-vantteja ja kantaja-aineita.

.·. Esillä oleva keksintö mahdollistaa siten, hoitome- , 25 netelmän sekä farmaseuttisen koostumuksen valmistamisen ’!t HIV-infektion ja AIDS:n hoitamiseksi. Hoitoon kuuluu anto !.* farmaseuttista koostumusta, joka sisältää farmaseuttista kantajaa ja terapeuttisesti tehokkaan määrän esillä olevaa yhdistettä, tällaista hoitoa tarvitsevalle potilaalle.

-- 30 Tällaiset farmaseuttiset koostumukset voivat olla oraalisesti annettavien suspensioiden tai tablettien, ne-näsuihkeiden, steriilien injektoitavien valmisteiden, 35 / 23 115457 esim. steriilien injektoitavien vesi- tai öljysuspensioi-den, tai peräpuikkojen muodossa.

Annettaessa oraalisesti suspensiona koostumukset valmistetaan menetelmillä, jotka tunnetaan hyvin far-5 maseuttisten valmisteiden alalla, ja koostumukset voivat sisältää alalla tunnetun mukaisesti mikrokiteistä selluloosaa täyteaineena, algiinihappoa tai natriumalginaattia suspensoivana aineena, metyyliselluloosaa viskositeettia lisäävänä aineena sekä makeutusaineita/makuaineita. Välit-10 tömästi vapauttavina tabletteina koostumukset voivat sisältää alalla tunnetun mukaisesti mikrokiteistä selluloosaa, dikalsiumfosfaattia, tärkkelystä, magnesiumstearaat-tia ja laktoosia ja/tai muita apuaineita, sideaineita, täyteaineita, hajotusaineita, laimennusainetia ja liukuai-15 neita.

Annettaessa nasaalisena aerosolina tai inhalaatio-na koostumukset valmistetaan menetelmillä, jotka tunnetaan hyvin farmaseuttisten valmisteiden alalla, ja ne voidaan valmistaa liuoksiksi keittosuolaliuokseen käyttäen alalla 20 tunnetun mukaisesti bentsyylialkoholia tai muita sopivia säilöntäaineita, absorptiota lisääviä aineita hyötyosuuden : : : lisäämiseksi, fluorihiiliyhdisteitä ja/tai muita solubi- lisoivia tai dispergoivia aineita.

• Injektoitavat liuokset tai suspensiot voidaan val- 25 mistaa alalla tunnetun mukaisesti käyttäen sopivia ei-: toksisia, parenteraalisesti hyväksyttäviä laimennusaineita tai liuottimia, kuten mannitolia, 1,3-butaanidiolia, vet-’ tä, Ringerin liuosta tai isotonista natriumkloridiliuosta tai sopivia dispergoivia tai kostuttavia ja suspensoivia » * · 30 aineita, kuten steriilejä, seostettuja, määriteltyjä (fixed) öljyjä, joihin kuuluu synteettiset mono- tai diglyse-'· ridit sekä rasvahapot öljyhappo mukaan lukien.

Annettaessa rektaalisesti peräpuikkojen muodossa koostumukset voidaan valmistaa sekoittamalla lääkeaine so-35 pivan ei-ärsyttävän apuaineen, kuten kaakaorasvan, / 24 115457 synteettisten glyseridiestereiden tai polyetyleeniglykoli-en, kanssa jotka ovat kiinteitä tavanomaisissa lämpötiloissa, mutta jotka nesteytyvät ja/tai liukenevat peräsuolessa lääkeaineen vapauttamiseksi.

5 Esillä olevia yhdisteitä voidaan antaa ihmisille oraalisesti annosväliltä 1 - 100 mg/kg kehon paino, jaettuina annoksina. Eräs edullinen annosväli on 0,1 - 10 mg/kg kehonpaino, annettuna oraalisesti jaettuina annoksina. Eräs toinen edullinen annosväli on 0,1 - 20 mg/kg ke-10 honpaino, annettuna oraalisesti jaettuina annoksina. Nuk-leosidianalogien kanssa yhdistelmähoitoa varten eräs edullinen annosväli yhdisteille on 0,1 - 20 mg/kg kehonpaino, annettuna oraalisesti jaettuina annoksina, ja nuk-leosidianalogeille 50 mg - 5 g/kg kehonpaino annettuna 15 oraalisesti jaettuina annoksina. On ymmärrettävä kuitenkin, että kulloinkin kyseeseen tulevan potilaan tapauksessa spesifinen annostaso ja annostiheys vaihtelee johtuen monista tekijöistä, kuten käytetyn spesifisen yhdisteen aktiivisuudesta, kyseisen yhdisteen metabolisesta stabii-20 lisuudesta ja vaikutusajasta, iästä, kehonpainosta, yleisestä terveydentilasta, sukupuolesta, ruokavaliosta, anto-: atavasta ja -ajasta, eritysnopeudesta, lääkeyhdistelmästä, : kyseeseen tulevan tilan vakavuudesta ja hoitoa saavasta vastaanottajasta.

·. 25 Esillä oleva keksintö mahdollistaa edelleen HIV- käänteistranskriptaasin estäjäyhdisteiden yhdistelmät yh-den tai useamman AIDS:n hoidossa käyttökelpoisen aineen kanssa. Esimerkiksi, esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettavat yhdisteet voidaan antaa tehokkaasti joko ·’ 30 altistusta edeltävinä ja/tai altistuksen jälkeisinä aikoi- na yhdessä AIDS-antiviraalisten aineiden, immunomodulaat-toreiden, anti-infektioaineiden tai rokotteiden, kuten seuraavassa taulukossa esitettyjen aineiden, tehokkaiden määrien kanssa.

/ 25 115457

Taulukko

Taulukko

Antiviraalisia aineita Lääkkeen nimi ' Valmistaja Indikaatio

AL-721 Ethigen ARC, PGL

(Los Angeles, CA) HIV -positiivinen. AIDS

Yhdistelmä-ihmisen Triton BlOSciences AIDS, kaposin sar-

interferoni begta (Almeda, CA) kooma, ARC

Acemannan Carrington Labs ARC (ks. myös immuno- (Irving, TX) modulaattorit)

Cytovene Syntex näköä uhkaava CMV

Ganciclovir (Palo Aito, CA) periferaalinen CMV

verkkokalvontulehdus

d4T Bristol-Myers AIDS, ARC

[ Didehydrodeoksi- (New York, NY) * tymidiini

: ddl Bristol-Myers AIDS, ARC

. Dideoksi-inosiini (New York, NY) ELIO Elan Corp, PLC HIV-infektio (Gainesville, GA) (ks. myös immunomodu- laattorit) * / 26 115457 Lääkkeen nimi Valmistaja Indikaatio CMV-verkkokalvon-

Trinatriumfosfono- Astra Pharm. tulehdus, HIV- formaatti Products, Inc. infektio, muut CMV- (Westborough, MA) infektiot

Dideoksisytidiini; Hoffman-La Roche AIDS, ARC

ddC (Nutley, NJ)

Novapren Novaferon Labs, Inc. HIV-estäjä (Akron, OH)

Diapren, Inc.

(Roseville, MN, marketer)

Peptidi τ Peninsula Labs AIDS

oktapeptidi- (Belmont, CA) sekvenssi

Zidovudine; AZT Burroughs Wellcome aids, edennyt, arc (Rsch. Triangle Park, lasten AIDS, kaposin NC) sarkooma, oireeton : ; HIV-infektio', vakavuu- ! deltaan vähäisempi HIV-tauti, neurologinen sidonneisuus, ' yhdistettynä muiden hoitojen kanssa.

i · tr1 I · i » 1 27 115457 Lääkkeen nimi Valmistaja Indikaatio

Ansamycin LM 427 Adria Laboratories ARC

(Dublin, OH)

Erbamont (Stamford, CT)

Dekstraanisulfaatti Ueno Fine Chem. AIDS, ARC, HIV-

Ind. Ltd. .positiivinen, (Osaka, Japan) oireeton

Virazole Viratek/ICN oireeton HIV-posi-

Ribavirin (Costa Mesa, CA) tiivinen , las, arc

Alfa-interferoni Burroughs Wellcome Kaposin sarkooma, (Rsch. Triangle Hiv yhdistettynä

Park, NC) w/Retrovir'in kanssa

Acyclovir Burroughs Wellcome AIDS, ARC, .* oireeton HIV-posi- tiivinen, yhdistet- * tynä AZT:n kanssa.

Vasta-aine, joka Advanced Biotherapy AIDS, ARC

| neutraloi pH-labii- Concepts ; lia alfa-poikkeavaa Rockville, MD) interferonia immuno-adsorptiopylväässä t · » • » t * » * · t t i t · ' t > · / 28 115457 Lääkkeen nimi Valmistaja Indikaatio L-697,661 Merck (Rahway, NJ) AIDS, ARC, oireeton HIV-posi-tiivinen, myös yhdistettynä AZT:n kanssa.

L-696,229 Merck AIDS, ARC, (Rahway, NJ) , oireeton HIV-posi- tiivinen, myös yhdistettynä AZT:n kanssa L-735,524 Merck (Rahway, NJ) AIDS, ARC, oireeton HIV-positii-vinen, myös yhdistettynä AZT:n kanssa.

. 1 Immunomodulaattorit . 1 Lääkkeen nimi Valmistaja Indikaatio

: AS-101 Wyeth-Ayerst Labs. AIDS

(Philadelphia, PA)

Bropiriraine Upjohn edennyt aids * 1 (Kalamazoo, MI)

• Acemannan Carrington Labs, Inc. AIDS, ARC

(Irving, TX) (ks. myös antivi- ’ raaliset aineet) > / I · M < » 29 115457 Lääkkeen nimi Valmistaja Indikaatio CL246,738 American Cyanamid AIDS, kaposin (Pearl River, NY) sarkooma

Lederle Labs (Wayne, NJ) ELIO Elan Corp, PLC HIV -infektio (Gainesville, G A) (ks. myös antivi- raaliset aineet)

Gamma-interferoni Genentech ARC, yhdistettynä (S. San Francisco, CA) w/TNF:n kanssa (tuu- morinekroositekij ä)

Granulosyytti-makro- Genetics Instimte AIDS

fagi-pesäkettä stimu- (Cambridge, MA) loiva tekijä Sandoz (East Hanover, NJ)

Granulosyytti-makro- HoeSChst-RoUSSel AIDS

fagi-pesäkettä stimu- (Somerville, NJ) loiva tekijä Immunex (Seattle, WA)

Granulosyytti-makro- Schering-Plough AIDS

. fagi-pesäkettä stimu- (Madison, NJ) loiva tekijä AIDS, yhdistettynä w/AZT:n kanssa HIV-ydin partikkeli- Rorer seropositiivinen

; immunostimulantti (Ft. Washington, PA) HIV

« . · » / 30 115457 Lääkkeen nimi Valmistaja Indikaatio IL-2 Hoffman-La Roche AIDS, ARC, HIV,

Interleukiini-2 (Nutley, NJ) yhdistettynä w/AZT:n

Immunex kanssa

Immunoglobuliini Cutter Biological lasten AIDS, yhdistet-

Intravenoosinen (Berkeley, CA) tynä w/AZT:n kanssa (ihmisen) IMREG-1 Imreg AIDS, kaposin sar-

New Orleans, LA) kooma, ARC, PCL

IMREG-2 Imreg AIDS, kaposin sar-

(Nevv Orleans, LA) kooma, ARC, PGL

imutioidietyyli- Merieux Institute AIDS, ARC

ditiokarbamaatti (Miami, FL)

Alfa-2-interferoni Schering Plough Kaposin sarkooma

(Madison, NJ) w/AZT: AIDS

Metioniini- TNI Pharmaceutical AIDS, ARC

; enkefaliini (Chicago, IL) : MTP-PE Ciba-Geigy Corp. Kaposin sarkooma ·, · Muramyyli-tripeptidi (Summit, NJ) , Granulosyytti- Amgen AIDS, yhdistettynä pesäkettä stimuloiva (Thousand Oaks, CA) w/AZT:n kanssa ’ tekijä f » * » / » 31 115457 Lääkkeen nimi Valmistaja Indikaatio

rCD4 Genentech AIDS, ARC

Yhdistelmäliukoinen (S. San FranClSCO, CA) ihmisen CD4

Yhdistelmäliukoinen Biogen AIDS, ARC

ihmisen cd4 (Cambridge, MA)

Interferoni Hoffinan-La Roche Kaposin sarkooma alfa 2a (Nutley, NJ) AIDS, ARC, yhdistettynä w/AZT:n kanssa SK&F106528 Smith, Kline & French HIV-infektio

Liukoinen T4 Laboratories (Philadelphia, PA)

Tymopentiini Immunobiology HIV-infektio

Research Institute (Annandale, NJ)

Tuumorinekroosi- Genentech · ARC, yhdistettynä tekijä; tnf (S. San Francisco, CA) w/gamma-interfero- ‘ | nin kanssa

Anti-infektioaineet ... Lääkkeen nimi Valmistaja Indikaatio

·· .' Klindamysiini sekä Upjohn PCP

.: : Primaquine (Kalamazoo, MI) ; ; ; Fluconazolec Pfizer kryptokokkisienen ai- (New York, NY) heuttama aivokalvon tulehdus, kandidia-sienitartunta / 32 115457

Pastille Squibb Corp suun kandidia-

Nystatin Pastille (Princeton, NJ) sienitartunnan ehkäisy

Ornidyylieflorni- MeiTell DOW PCP

tiini (Cincinnati, OH)

Pentamidiini- LyphoMed PCP -hoito isetionaatti (IM & IV) (Rosemont, IL)

Piritrexim Burroughs Wellcome PCP -hoito (Rsch. Triangle Park, NC)

Pentamidiini- FlSOnS Corporation PCP-ennalta ehkäisy isetionaatti inha- (Bedford, MA) laatiota varten

Spiramysiini Rhone-PoulenC kryptosporidiaalinen

Pharmaceuticals ripuli (Princeton, NJ) ! Intraconazole- Janssen Pharm. histopiasmoosi; ’ R51211 (Piscataway, NJ) kryptokolokaalinen ',,,· aivokalvontulehdus

! ! Trimetrexaatti Warner-Lambert PCP

• I

Muita Lääkkeen nimi Valmistaja Indikaatio r » i t>: Yhdistelmä- Ortho Pharm. Corp. AZT-hoitoon liittyvä ihmisen erytiopoie- (Raritan, NJ) vaikea anemia tiini » i I 1 » / » 33 115457 Lääkkeen nimi Valmistaja Indikaatio

Megestroli- Bristol-Myers anoreksiaan liittyvän asetaatti (New York, NY) w/AIDS:n hoito

Kokonaan enteraa- Norwich Eaton AIDS:iin liittyvä linen ravinto PllHJTllSCCUticäls ripuli ja imeytymis- (Nonvich, NY) häiriö

On ymmärrettävä, että esillä olevien yhdisteiden 5 yhdistelmät AIDS-antiviraalisten aineiden, immunomodulaat-torien, anti-infektioaineiden tai rokotteiden kanssa eivät rajoitu edellä esitettyyn taulukon luetteloon, vaan yhdistelmien piiriin kuuluu periaatteessa mikä tahansa yhdistelmä minkä tahansa AIDS:n hoidossa käyttökelpoisen far-10 maseuttisen koostumuksen kanssa. Esimerkiksi, kaavan I mukaista yhdistettä voidaan antaa sopivasti yhdessä sellaisen nukleosidianalogin kanssa, jolla on tunnettu biologinen aktiivisuus HIV-käänteistranskriptaasia vastaan. Sopivia nukleosidianalogeja ovat yleensä ketjunpäättäjät ja 15 niihin kuuluu AZT, ddC, ddl, D4T, HEPT ja 3'-fluori-2',3'- * ’/· dideoksitymidiini.

AZT syntetisoidaan menetelmillä, jotka on esitetty julkaisuissa, J.P. Horwitz et ai., J. Org. Chem. 29, 2 076 (1964); R.P. Glinski et ai., J. Org. Chem. 3J3, 4 299 : ,·, 20 (1973); C.K. Chu et ai., Tetrahedron Letters 29^, 5 349 (1988). AZT:n käyttö terapeuttisena aineena AIDS:n hoidossa on esitetty US-patenttijulkaisussa nro 4 724 232.

, Yhdiste ddC syntetisoidaan menetelmillä, jotka on kuvattu julkaisuissa, J.P. Horwitz et ai., J. Org. Chem.

;·: 25 32, 817 (1967); R. Marumoto, Chem. Pharm. Bull. 22, 128 .··: (1974); ja T.-S. Lin et ai., J. Med. Chem. 30, 440 (1987).

• j D4T syntetisoidaan menetelmillä, jotka on kuvattu julkaisussa, P. Herdewijin et ai., J. Med. Chem. 22.1 1 270 (1987).

/ 34 115457 HEPT syntetisoidaan menetelmillä, jotka on kuvattu julkaisuissa, T. Miyasaka et ai., J. Med. Chem. 32_, 2 507 (1989) ; ja A. Rosowsky, J. Med. Chem. 24, 1 177 (1981) . ddC:n, ddl:n ja AZT:n synteesit on kuvattu myös EP-5 julkaisussa nro 484 071.

3'-fluori-2',31-dideoksitymidiiniyhdiste syntetisoidaan menetelmillä, jotka on kuvattu julkaisussa P. Her-dewijn et ai., J. Med. Chem. 30, 1 270 (1987). L-735 524-yhdiste on N-(2-(R)-hydroksi-1-(S)-indanyyli)-2-(R)-10 fenyylimetyyli-4-(S)-hydroksi-5-(1-(4-(3-pyridyyli-metyyli)-2-(S)-N'-(t-butyylikarboksamido)-piperatsi-nyyli))-pentaaniamidi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. L-697 661 tai '661' on 3 -([4,7-dikloori-l,3 - bentsoksatsol-2-yyli)metyyli]-amino)-5-etyyli-etyyli-6-15 metyylipyridin-2-(1H)-oni: L-696 229 on 3-[2-(1,3- bentsoksatsol-2-yyli)-etyyli]-5-etyyli-6-metyylipyridin-2-(lH)-oni. L-697 661:n ja L-696 229:n synteesit on kuvattu EP-julkaisussa nro 484 071 ja EP-julkaisussa nro 462 800, jotka molemmat liitetään viitteenä tähän hakemukseen.

20 Edullisia yhdistelmiä ovat samanaikaiset, jaksot taiset tai vuorottelevat L-743 726-käsittelyt yhdessä tai ilman HIV-proteaasin estäjää. Yhdistelmän mahdollinen kol-'. mas komponentti on HIV-käänteistranskriptaasin nuk- leosidiestäjä, kuten AZT, ddC tai ddl. Eräs edullinen HIV-25 proteaasin estäjä on L-735 524. Muihin edullisiiin HIV- ! käänteistranskriptaasin estäjiin kuuluu L-697 661. Näillä yhdistelmillä voi olla synergistisiä vaikutuksia HIV:n le-'·' viämisen rajoittamisessa. Edullisiin yhdistelmiin kuuluu seuraavat: (1) L-743 726 ja L-735 524 sekä mahdollisesti J.!i‘ 30 jokin seuraavista: L-697 661, AZT, ddl tai ddC; (2) L-743 > i » ,,,·’ 726 ja jokin seuraavista: L-697 661, AZT, ddl tai ddC.

.Myös näiden yhdistelmien farmaseuttisesti hyväksyttävät )iti; suolat kuuluvat määrittelyyn.

♦ · » · · » * » I · / 35 115457

Esimerkki 1 (+/-)-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-4-(l-buten-4- yyli)-6-kloori-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2- oni; (Yhdiste 15)

5 Vaihe A

N-(4-kloorifenyyli)-2,2-dimetyylipropanamidi 5 l:n 3-kaulaiseen pyöröpohja-astiaan, joka oli varustettu yläpuolelta asennettavalla sekoittajalla, lisättiin 4-klooriani'liinia (127,57 g, 1 mol), 1 200 ml 10 CHCl3:a ja 1 200 ml kyllästettyä Na2C03-vesiliuosta. Astiaan liitettiin syöttösuppilo, johon saatettiin 2,2-dimetyylipropanoyylikloridia (129 ml, 1,05 mol). Happoklo-ridi lisättiin tipoittain voimakkaasti sekoitettuun seokseen 1 tunnin kuluessa. Saatua seosta sekoitettiin vallit-15 sevassa lämpötilassa vielä 23 tunnin ajan. Osa tuotteesta erottui seoksesta valkoisina kiteinä. Nämä kiteet kerättiin suodattamalla. Suodos siirrettiin erotussuppiloon ja kerrokset erotettiin. Kloroformikerrosta pestiin vedellä ja suolavedellä. Kuivaus (MgS04) , suodatus ja liuottimen 20 poisto in vacuo tuotti lisää tuotetta. Saadut kaksi tuote-erää yhdistettiin ja uudelleenkiteytettiin kiehuvasta EtO-Ac-heksaaneista, jolloin saatiin 185,6 g N-(4-kloorifenyyli)-2,2-dimetyylimpropanamidia valkoisena kiteisenä kiintoaineena.

25 Vaihe B

1-(2-amino-5-kloorifenyyli)-2,2,2-trifluorietanoni

Uunikuivattuun, 3 l:n 3-kaulaiseen pyöröpohja-‘ astiaan, joka oli varustettu yläpuolelta asennettavalla sekoittimella, argonsyötöllä ja 500 ml:n uunikuivatulla 30 syöttösuppilolla, lisättiin N-(4-kloorifenyyli)-2,2- I I i dimetyylipropanamidia (100 g, 472 mmol) ja kuivaa THF:ää (1 1). Tämä liuos jäähdytettiin jäähauteessa 0 °C:seen ja ii>(; syöttösuppiloon saatettiin n-butyylilitiumia (387 ml, 2,5 . M liuosta heksaanissa, 968 mmol). n-butyylilitiumliuos li- • I » 35 sättiin hitaasti tipoittain, 1 tunnin kuluessa amidiliuok- • seen pitäen lämpötila alle +5 °C:ssa. Saadun liuoksen an- / 36 115457 nettiin olla 0 °C:ssa 1 tunnin ajan, jona aikana muodostui oranssia sakkaa. Tähän seokseen lisättiin etyyli-1,1,1-trifluoriasetaattia (115 ml, 968 mmol) tipoittain, 1 tunnin kuluessa. Saatua kirkasta liuosta pidettiin vielä 30 5 minuutin ajan. Reaktio sammutettiin 5-%:isella HC1-vesiliuoksella. Seos laimennettiin 1 1:11a EtOAcrtä ja kerrokset erotettiin. Orgaanista kerrosta pestiin suolavedellä, se kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja konsentroitiin in vacuo, jolloin saatiin 160 g keltaista öljyä. Tämä 10 materiaali suspensoitiin 1 l:aan 3 N HCl-vesiliuosta ja liuos kuumennettiin refluksoitumaan 24 tunnin ajaksi. Jäähdytetty liuos laimennettiin 1 1:11a EtOAc:tä ja seos tehtiin emäksiseksi konsentroidulla NH4OH:lla. Kerrokset erotettiin ja orgaanista kerrosta pestiin suolavedellä, se 15 kuivattiin (MgS04) , suodatettiin, konsentroitiin in vacuo ja kromatografoitiin 1,5 kg:lla silikageeliä käyttäen 15-%:ista EtOAc:n heksaaniliuosta eluenttina. Kromatografoitu materiaali uudelleenkiteytettiin kiehuvasta heksaanista, jolloin saatiin 57 g (54 %) puhdasta 1-(2-amino-5- 20 kloorifenyyli)-2,2,2-trifluorietanonia kirkkaan keltaisina kiteinä, sp: 91 - 92 °C. 1H-NMR (CDC13) : δ 6,46 (leveä s, Γ; 2H) , 6,69 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 7,32 (dd, 1H, J = 2,4, 9,2 '. Hz), 7,70 (d, 1H, J = 2,4 Hz).

/. Vaihe C

25 (+/-)-2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-1,1,1-trifluori- 5-heksen-2-oli 300 ml:n uunikuivattuun, 3-kaulaiseen pyöröpohja-astiaan, joka oli varustettu yläpuolelta asennettavalla sekoitussauvalla, argonsyötöllä, syöttösuppilolla ja pys-30 tyjäähdyttäjällä, lisättiin magnesiumia (lastuja, 3,03 g, 125 mmol) ja kuivaa THF:ää (75 ml) . Tähän hyvin sekoitet-tuun seokseen lisättiin 4-bromi-l-buteenia (12,0 ml, 118,21 mmol) sellaisella nopeudella, joka ylläpiti lievää . refluksoitumista. Lisäyksen jälkeen seoksen annettiin olla 35 vielä 3 0 minuutin ajan, jonka jälkeen se jäähdytettiin '.· 0 °C:seen jäähauteessa. Tähän hyvin sekoitettuun liuokseen 37 115457 lisättiin tipoittain 30 minuutin aikana liuosta, jossa oli 1-(2-amino-5-kloorifenyyli)-2,2,2 -trifluorietanonia (5,00 g, 22,36 mmol) THFrssä (35 ml). Jäähdytyshauteen annettiin lämmetä ja seosta sekoitettiin 20 tunnin ajan val-5 litsevassa lämpötilassa. Reaktioseos laimennettiin EtO-Ac:llä ja 10-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella. Tätä seosta sekoitettiin 4 tunnin ajan. Kerrokset erotettiin ja orgaanista kerrosta pestiin NaHC03:n vesiliuoksella ja suolavedellä. Kuivaus (MgS04) , suodatus, liuottimen poisto 10 in vacuo ja kromatografointi 300 g:11a silikageeliä käyttäen 15-%:ista EtOAcm heksaaniliuosta eluenttina tuotti 4,80 g (+/-)-2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-1,1,1-trifluori-5-heksen-2-olia keltaisena kiintoaineena.

Vaihe D

15 (+/-)-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-4-(l-buten-4- yyli)-6-kloori-l,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni 200 ml:n pyöröpohja-astiaan, joka oli varustettu sekoitussauvalla, argonsyötöllä ja pystyjäähdyttäjällä, lisättiin (+/-)-2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-1,1,1- 20 trifluori-5-heksen-2-olia (4,80 g, 17,16 mmol), 1,1'-karbonyylidi-imidatsolia (13,91 g, 85,81 mmol) ja kuivaa THF:ää (75 ml). Tätä seosta kuumennettiin 60 °C:ssa 18 tunnin ajan. Jäähdytetty reaktioseos laimennettiin EtO-*. Ac:llä ja sitä pestiin H20:lla (3 x 200 ml) ja suolavedel- ·, 25 lä (250 ml) . Kuivaus (MgS04) , suodatus, liuottimen poisto in vacuo ja tämän jälkeinen uudelleenkiteytys kiehuvasta EtOAc-heksaanista tuotti 3,22 g (+/-)-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-4-(l-buten-4-yyli)-6-kloori-l,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-onia valkoisena kiteisenä kiintoai-•ii’ 30 neena, sp. : 165 - 166 °C. ^-NMR (CDC13) : δ 1,99 (m, 1H) , ...: 2,09 - 2,40 (m, 3H) , 5,00 (d, 1H, J = 1,4 Hz), 5,03 (dd, 1H, J = 1,4, 7,9), 5,78 (m, 1H) , 6,85 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,21 (leveä s, 1H) , 7,35 (dd, 1H, J = 2,2, 8,6 Hz), 9,63 (leveä s, 1H).

i 38 115457

Esimerkki 2 (+/-)-6-kloori-4-etynyyli-4-(1#1,1-trifluorimetyyli)-l,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-oni (Yhdiste 26)

5 Vaihe A

2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-1,1,l-trifluori-3-butyn-2-oli 500 ml:h 3-kaulaiseen pyöröpohja-astiaan, joka oli varustettu syöttösuppilolla, argonsyötöllä, sekoitussau-10 valla sekä digitaalisella lämpömittarilla, saatettiin ety-nyylimagnesiumbromidia (0,5 M, heksaanissa; 268 ml, 134 mmol) ja sitten astia jäähdytettiin -78 °C:seen. Liuoksen, joka sisälsi 1-(2-amino-5-kloorifenyyli)-2,2,2- trifluorietanonia (6,0 g, 26,8 mmol) 50 mltssa THFrää, ti-15 poittainen lisäys suoritettiin 15 minuutin kuluessa pitäen lämpötila < -55 °C:ssa. Reaktioseosta sekoitettiin 16 tunnin ajan sen jälkeen, kun se oli jäähdytetty hitaasti huoneenlämpötilaan. Tummanpunainen reaktioliuos pysäytettiin -5 °C:ssa lisäämällä tipoittain kyllästettyä ammoniumklo-20 ridin vesiliuosta (60 ml). Etyyliasetaattiuutto, jota seurasi pesut 10-%:isella sitruunahapolla, kyllästetyllä nat-: riumkarbonaattiliuoksella, vedellä ja suolavedellä, tuotti 8,5 g raakatuotetta kuivauksen natriumsulfaatilla, suoda-tuksen ja liuottimen haihdutuksen jälkeen.. Flash-25 kromatografinen puhdistus käyttäen 15 - 20-%:ista etyyli-^ asetaatti:heksaania tuotti puhdasta 2-(2-amino-5- kloori f enyyli)-1,1,1-trif luori-3-butyn-2-olia (5 g vaaleanruskeaa öljyä, saanto 75 %).

Vaihe B

30 (+/-)-6-kloori-4-etynyyli-4-(1,1,1-trifluori- .* metyyli)-l,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni • 2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-1,1,1-trifluori-3- butyn-2-olin (5,0 g, 20,0 mmol, 225 ml THF: ssä) THF-liuosta käsiteltiin 1,1'-karbonyylidi-imidatsolilla (13,0 ·* 35 g, 80,0 mmol) ja kuumennettiin öljyhauteessa, 60 °C:ssa, .* 17 tunnin ajan. THF poistettiin in vacuo, jäännös liuotet- / 39 115457 tiin etyyliasetaattiin ja sitten pestiin 10-%:isella sitruunahapolla, natriumbikarbonaatilla, vedellä ja suolavedellä ennen kuivaamista natriumsulfaatilla. Suodatuksen ja haihdutuksen in vacuo jälkeen raakatuote eristettiin (3,6 5 g) ja uudelleenkiteytettiin etyyliasetaatti:heksaanista. (+/-)-6-kloori-4-etynyyli-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-onituote eristettiin valkoisena kiteisenä kiintoaineena (3,22 g, saanto 58,4 %) : sp. 226 - 227 °C. ^-NMR (CDC13 + hieman DMSO) : δ 3,16 (s, 10 1H), 6,98 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 7,35 (m, 1H), 7,51 (s, 1H), 10,66 (s, 1H).

Esimerkki 3 (+/-)-6-kloori-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-4- [ (3- (1-pyrrolidinyyli))-1-propynyyli]-1,4-dihydro-2H-15 3,l-bentsoksatsin-2-oni (Yhdiste 7)

Dioksaaniliuos, joka sisälsi (+/-)-6-kloori-4-etynyyli-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-onia (150 mg, 0,544 mmol), pyrrolidiinia (52,2 μΐ, 0,626 mmol), paraformaldehydiä (20,5 mg, 0,681 20 mmol), etikkahappoa (31,1 μΐ, 0,544 mmol) ja kupari (I) kloridia (20,5 mg, 0,207 mmol, 3,5 ml:ssa dioksaa-nia), kuumennettiin 50 °C:seen öljyhauteessa noin 2 tunnin ajan. Reaktioseos pysäytettiin saattamalla 2 N HCl- liuokseen ja suoritettiin uutto etyyliasetaatilla. Vesipi-25 toinen kerros neutraloitiin kiinteällä kaliumkarbonaatilla ·, ja sitä uutettiin etyyliasetaatilla (3 x) . Yhdistettyjä ,1 uutoksia pestiin vedellä ja suolavedellä ennen kuivaamista natriumsulfaatilla, jonka jälkeen saatiin 140 mg raaka-tuotetta. Kromatografinen puhdistus silikageelillä ja uu- · 30 delleenkiteytys etyyliasetaatti:heksaanista tuotti kiteis-tä (+/-)-6-kloori-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-4-[ (3-(1- | pyrrolidinyyli))-1-propynyyli]-1,4-dihydro-2H-3,1- bentsoksatsin-2-onia (89 mg, saanto 46 %) : sp. 160 161 °C (haj.). 1H-NMR (CDC13) : δ 1,85 - 1,89 (m, 4H) , 2,68 • : 35 - 2,71 (m, 4H) , 3,67 (s, 1H) , 6,88 (d, J = 8,55 Hz, 1H) , • · > » / 40 115457 7,40 (dd, J = 2,19, 8,54 Hz, 1H) , 7,55 (s, 1H) , 9,45 (s, 1H) .

(+/-) -6-kloori-4-(2-syaanifenyyli)etynyyli-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-5 2-oni (Yhdiste 2)

Liuosta, joka sisälsi 6-kloori-4-etynyyli-4- (1,1,1-trifluorimetyyli)-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-onia (138 mg, 0,5 mmol) 3 ml:ssa kuivaa THFrää, sekoitettiin (-78) °C:ssa. Tähän liuokseen lisättiin 0,4 ml 10 (1,0 mmol) n-butyylilitiumia, 2,5 M, heksaanissa. Anionin annettiin olla 10 minuutin ajan -78 °C:ssa, jonka jälkeen joukkoon lisättiin 1 ml ZnCl2-liuosta (1 M, eetterissä) . Reaktioseosta sekoitettiin -78 °C:ssa 15 minuutin ajan, jonka jälkeen poistettiin jäähaude ja seoksen annettiin 15 lämmetä hitaasti 0 °C:seen 30 minuutin kuluessa. Reak-tioseokseen lisättiin liuosta, joka sisälsi 2- jodibentsonitriiliä (149 mg, 0,65 mmol) 2 ml:ssa THFrää, ja sitten tetrakis(trifenyylifosfiini)palladium(O):aa (56 mg, 0,05 mmol). Reaktion annettiin lämmetä huoneeniämpöti-20 laan ja sekoitusta jatkettiin 15 tunnin ajan. Reaktioseos pysäytettiin 10 ml:11a 2 N HC1-liuosta, sitä uutettiin 2 x 2 00 ml :11a EtOAcrtä ja yhdistettyjä uutoksia pestiin H20:11a, suolavedellä ja kuivattiin MgS04:llä. Liuotin *. poistettiin saaden 195 mg öljyä, joka flash- ·. 25 kromatografoitiin silikageelillä (20-%:inen EtOAc, heksaa- ^ nissa), jolloin saatiin 60 mg reagoimatonta lähtöainetta ja 35 mg kytkeytynyttä tuotetta. Jälkimmäistä trituroitiin v ’ eetterin kanssa, jolloin saatiin 25 mg (+/-)-6-kloori-4- (2-syaanifenyyli)etynyyli-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-1,4- <> 30 dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-onia. Sp.: 245 - 246 °C.

FAB. MS M+l = 377 m/e. ^-NMR (CDC13) : δ 6,82 - 6,85 (d, J = 8,5 Hz, 1H) ; 7,40 - 7,44 (dd, J = 2,1, 8,5 Hz, 1H) ; 7,56 - 7,79 (m, 5H) ; 8,00 (s, 1H) .

* · 1 i » 41 115457

Esimerkki 4 (ei keksinnön mukainen) (+/-)-4-(1-kloori-l,1-difluorimetyyli)-4-(2 -fenyylietynyyli)-6-kloori-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-oni (Yhdiste 5)

5 Vaihe A

1-(2-amino-5-kloorifenyyli)-2-kloori-2,2-difluorietanoni

Uunikuivattuun, 300 ml:n 3-kaulaiseen pyöröpohja-astiaan, joka oli varustettu magneettisella sekoitussau-10 valla, argonsyötöllä sekä 100 ml:n uunikuivatulla syöt-tösuppilolla, lisättiin N-(4-kloorifenyyli)-2,2- dimetyylipropanamidia (10 g, 47,2 mmol) ja kuivaa THFrää (100 ml) . Tämä liuos jäähdytettiin jäähauteessa 0 °C:seen ja syöttösuppiloon saatettiin n-butyylilitiumia (38,7 ml, 15 2,5 M liuos heksaanissa, 96,8 mmol). n- butyylilitiumliuosta lisättiin tipoittain amidiliuokseen hitaasti 1 tunnin aikana, ylläpitäen lämpötilaa +5 °C:n alapuolella. Saadun liuoksen annettiin olla 0 °C:ssa 1 tunnin ajan, jona aikana muodostui oranssia sakkaa. Tähän 20 seokseen lisättiin etyyli-1-kloori-l,1-difluoriasetaattia (10,2 ml, 96,8 mmol), tipoittain 15 minuutin aikana. Saa-dun kirkkaan liuoksen annettiin olla vielä 30 minuutin ‘j ajan. Reaktio pysäytettiin 5-%:isella HC1-vesiliuoksella.

. «

Seos laimennettiin 1 1:11a EtOAc:tä ja kerrokset erotet-·, 25 tiin. Orgaanista kerrosta pestiin suolavedellä, se kuivat- ^ tiin (MgS04) , suodatettiin ja konsentroitiin in vacuo, jolloin saatiin 160 g keltaista öljyä. Materiaali suspen-' * soitiin 200 ml:aan 3 N HCl-vesiliuosta ja liuos kuumennet tiin refluksoitumaan 24 tunnin ajaksi. Jäähdytetty liuos a 30 laimennettiin 500 ml :11a EtOAc:tä ja seos tehtiin emäksiseksi konsentroidulla NH4OH:lla. Kerrokset erotettiin ja orgaanista kerrosta pestiin suolavedellä, se kuivattiin (MgS04) , suodatettiin, konsentroitiin vakuumissa ja kroma-• tografoitiin 350 g :11a silikageeliä käyttäen 15-%:ista 35 EtOAc:n heksaaniliuosta. Kromatografoitu materiaali uudel-, '.· leen kiteytettiin kiehuvasta heksaanista, jolloin saatiin 42 115457 5,5 g puhdasta 1-(2-amino-5-kloorifenyyli)-2-kloori-2,2-difluorietanonia kirkkaan keltaisina kiteinä, sp. : 55 - 56 °C. 1H-NMR (CDC13) : δ 6,43 (leveä s, 2H), 6,69 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 7,31 (dd, 1H, J = 2,4, 9,0 Hz), 7,80 (d, 1H, J 5 = 2,4 Hz).

Vaihe B

(+/-)-2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-4-fenyyli-l-kloori-1,l-difluori-3-butyn-2-oli 100 ml:n 3-kaulaiseen, uunikuivattuun pyöröpohja-10 astiaan, joka oli varustettu sekoitussauvalla, argon-syötöllä, pystyjäähdyttäjällä sekä septumilla, lisättiin etynyylibentseeniä (2,13 g, 20,83 mmol), kuivaa THFrää (50 ml) ja etyylimagnesiumbromidia (6,49 ml, 3,0 M liuos eetterissä). Tämän seoksen annettiin olla 2 tunnin ajan 15 vallitsevassa lämpötilassa, jonka jälkeen joukkoon lisättiin ruiskulla liuosta, joka sisälsi 1-(2-amino-5-kloorifenyyli)-2-kloori-2,2-difluorietanonia (1,00 g, 4,17 mmol) THF:ssä (6 ml). Saatua oranssinkeltaista liuosta sekoitettiin vallitsevassa lämpötilassa 21,5 tunnin ajan.

20 Reaktio pysäytettiin lisäämällä 1 N HCl-liuosta (50 ml) , jonka jälkeen suoritettiin laimennus EtOAc-.llä. Liuos teh-tiin sitten emäksiseksi konsentroidulla NH40H:lla ja ker-rokset erotettiin. Orgaanista kerrosta pestiin vedellä ja suolavedellä. Kuivaus (MgS04) , suodatus, liuottimen poisto » 25 in vacuo ja kromatografointi silikageelillä käyttäen !t 20-%:ista EtOAc:n heksaaniliuosta tuotti 1,02 g ( + /-)-2-

;(2-amino-5-kloorifenyyli)-4-fenyyli-l-kloori-l,1-difluori-' ' 3-butyn-2-olia taitetun valkoisena kiintoaineena. ^-NMR

(CDCI3) : δ 4,42 (leveä s, 2H) , 5,10 (leveä s, 1H) , 6,65 i’ 30 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,15 (dd, 1H, J = 2,4, 8,5 Hz), 7,38 (m, 3H), 7,55 (m, 2H), 7,70 (d, J = 2,4 Hz).

1 » » · t 1 1 t 9 * t i / · 43 115457

Vaihe C

(+/-)-4-(1-kloori-1,1-difluorimetyyli)-4-(2 -fenyyli-etynyyli)-6-kloori-l,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-oni 5 100 ml:n pyöröpohja-astiaan, joka oli varustettu sekoitussauvalla, pystyjäähdyttäjällä ja argonsyötöllä, lisättiin (+/-)~2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-4-fenyyli-l-kloori-1,l-difluori-3-butyn-2-olia (0,81 g, 2,37 mmol), kuivaa THF:ää (25 ml) ja 1,11-karbonyylidi-imidatsolia 10 (1,919 g, 11,84 mmol). Tätä liuosta kuumennettiin 60 °C:ssa 20 tunnin ajan. Jäähdytetty reaktioseos laimennettiin EtOAcrllä ja sitä pestiin 0,5 N HCl-liuoksella, H20:lla ja suolavedellä. Kuivaus (MgS04) , suodatus ja liuottimen poisto in vacuo tuotti 890 mg öljyä. Tämä materi-15 aali kromatografoitiin 80 g:11a silikageeliä käyttäen 20-%:ista EtOAcm heksaaniliuosta eluenttina. Kromatogra-foitu materiaali uudelleenkiteytettiin kiehuvasta EtOAc-heksaaneista, jolloin saatiin 507 mg (58 %) (+/-)-4-(1- kloori-l,1-difluorimetyyli)-4-(2-fenyylietynyyli)-6-20 kloori-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-onia valkoisina neulasina, sp. : 154 - 155 °C. 1H-NMR (CDC13) : δ 6,89 (d, [: 1H, J = 8,4 Hz), 7,35 - 7,48 (m, 4H) , 7,56 (m, 2H) , 7,64 (leveä s, 1H), 9,19 (leveä s, 1H).

Esimerkki 5 , ·, 25 (-)-6-kloori-4-fenyylietynyyli-4-trifluorimetyyli- .f l,4-dihydro-2H-3, l-bentsoksatsin-2-oni (Yhdiste 4)

',, ’ Vaihe A

* 2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-4-fenyyli-1,1,1- trifluori-3-butyn-2-oli ··> 30 Liuosta, joka sisälsi litiumfenyyliasetylidiä, jo- ·...· ka oli valmistettu 4,83 ml:sta fenyyliasetyleeniä (0,044 ; mol) ja 17,2 ml:sta 2,5 N n-butyylilitiumin heksaani liuos- ... : ta (0,043 mol) 50 ml.-ssa THF:ää, -78 °C:ssa, käsiteltiin ; 11,4 g:lla magnesiumbromidieteraattia (0,044 mol) 5 minuu- 35 tin aikana. Seoksen annettiin lämmetä -20 °C:seen ja se-. .· koitusta argonin alla jatkettiin 30 minuutin ajan. Tämän 44 115457 jälkeen seos jäähdytettiin -60 °C:seen ja lisättiin liuosta, joka sisälsi 2,5 g (0,011 mol) 1-(2-amino-5-kloori)-2,2,2-trifluorimetyylietanonia, joka oli etukäteen komp-leksoitu ekvivalentin määrän (2,8 g, 0,011 mol) kanssa 5 magnesiumbromidieteraattia 25 ml:ssa THF:ää. Reaktioseok-sen annettiin olla sekoituksessa, 15 °:ssa, yhden tunnin ajan ennen jäähdyttämistä 0 °C:seen ja käsittelyä tipoit-tain seoksella, joka sisälsi ammoniumkloridin kyllästettyä vesiliuosta ja vettä, kumpaakin 30 ml. Seosta uutettiin 2 10 x 100 ml: n erällä etyylieetteriä, yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin suolavedellä ja niitä kuivattiin MgS04:llä. Kuivausaineen ja liuottimien poiston jälkeen jäljelle jäi 6 g öljyä, joka flash-kromatografoitiin sili-kageelillä, eluoitiin 20-%:isella EtOAc:n heksaaniliuok-15 sella, jolloin saatiin 2,5 g 2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-4-fenyyli-l,1,l-trifluori-3-butyn-2-olia. 1H-NMR (CDC13) : δ 4,63 (leveä s, 3H), 6,69 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,35 - 7,44 (m, 3H), 7,53 - 7,56 (m, 2H) , 7,66 (d, J = 2 Hz, 1H) . FAB MS M+H= 20 326 m/e.

Vaihe B

(±)-6-kloori-4-fenyylietynyyli-4-trifluorimetyyli- l,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni (Yhdiste 12)

Liuosta, joka sisälsi 2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-25 4-fenyyli-l,1,1-trifluori-3-butyn-2-olia (2,0 g, 6,1 mmol) ja 11,0 g (12,0 mmol) 1,11-karbonyylidi-imidatsolia 300 ‘ ml:ssa kuivaa THF:ää, sekoitettiin argonin alla 55 °C:ssa I ► »

» t I

24 tunnin ajan. Liuotin poistettiin pyöröhaihduttimella ja jäännös jaettiin 200 ml:n eetteriä ja 400 ml:n vettä kes-30 ken. Kerrokset erotettiin ja vesipitoista kerrosta uutet-

• ♦ I

tiin vielä kerran eetterillä. Yhdistettyjä eetteriuutoksia ; pestiin 2 x 200 ml:lla 10-%:ista sitruunahappoa ja sitten suolavedellä ennen kuivaamista MgS04:llä. Kuivausaineen ja liuottimen poisto tuotti 1,5 g (70 %) raakaa otsikon mu- » 35 kaista yhdistettä öljynä. Triturointi eetteri-heksaanin *,· kanssa tuotti 875 mg (+) -6-kloori-4-fenyylietynyyli-4- 45 115457 trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-onia valkoisena kiintoaineena, joka oli osittain sulana 137 0:ssa, kirkas 147 °:ssa. 1H-NMR (CDC13) : δ 6,92 (d, J = 8

Hz, 1H) , 7,30 - 7,49 (m, 4H) , 7,58 - 7,65 (m, 3H) , 8,99 5 (s, 1H) .

Vaihe C: 6-kloori-l-(IS)-kamfanoyyli-4-fenyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-oni

Liuokseen, joka sisälsi (+)-6-kloori-4- 10 fenyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-l,4-dihydro-2H-3,1- bentsoksatsin-2-onia (2,24 g, 6,37 mmol), 4- dimetyyliaminopyridiiniä (0,10 g, 0,8 mmol) ja (-)-kamfaanihappokloridia (2,07 g, 9,55 mmol) 60 mlrssa kuivaa dikloorimetaania ja jota sekoitettiin argonin alla jäähau-15 teessä, lisättiin trietyyliamiinia (2,22 ml, 15,9 mmol). Jäähdytyshaude poistettiin ja reaktion annettiin edetä huoneenlämpötilassa. Kun reaktio oli mennyt loppuun ohut-kerroskromatografiän (Si02, 4-%:inen EtOAc, CHCl3:ssa) perusteella, liuos laimennettiin 200 ml :11a CHCl3:a ja sitä 20 pestiin kahdesti 10-%:isella sitruunahapolla ja sitten suolavedellä. Kuivauksen (MgS04) jälkeen liuotin poistet-tiin pyöröhaihdutt imellä ja vaahtomaiselle jäännökselle suoritettiin flash-kromatografointi eluoiden CHCl3:lla.

: ,·. Saatiin 575 mg 6-kloori-(IS) -kamfanoyyli-4- 25 f enyylietynyyli-4-trif luorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,1- bentsoksatsin-2-onin diasteromeeria I öljynä. ^-NMR : (CDC13) : δ 0,85 (s, 3H) , 1,08 (s, 3H) , 1,22 (s, 3H) , 1,73 -1,85 (m, 1H) , 1,92 - 2,08 (m, 1H) , 2,50 - 2,67 (m, 2H) , 7,30 - 7,79 (m, 8H) . Tätä seurasi 1,52 g fraktioiden seos 30 (diasteromeerit I ja II). Jatkettu eluointi tuotti 680 mg , hitaammin liikkuvaa otsikon mukaista diasteromeeria (II), j joka eetteri/heksaaniseoksen kanssa trituroinnin jälkeen tuotti valkoisia neulaskasaumia, sp. 177 - 178,5 °C; ^-NMR (CDC13) : δ 0,83 (s, 3H) , 1,12 (s, 3H) , 1,23 (s, 35 3H), 1,73 -1,86 (m, 1H), 1,93 - 2,06 (m, 1H), 2,50 - 2,63 46 115457 (m, 2H) , 7,38 - 7,51 (m, 4H) , 7,49 - 7,62 (m, 2H) , 7,72 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 2 Hz, 1H).

Flash-kromatografiästä saatu 1,52 g:n isomeeriseos liuotettiin 75 ml:aan eetteriä, liuos laimennettiin 5 50 ml:11a heksaania ja siihen ympättiin isomeerin II kide.

Hidas kiteytyminen tuotti vielä 385 mg isomeeriä II, joka uudelleenkiteytettiin eetteri/heksaanista, jolloin saatiin > 96 % diasteromeerisesti puhdasta materiaalia HPLC:llä. Vaihe D

10 (-)-6-kloori-4-fenyylietyn.yyli-4-trifluorimetyyli- 1.4- dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-oni 6-kloori-l-(IS)-kamfanoyyli-4-fenyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-1,2-dihydro-4(H)-3,l-bentsoksatsin-2-onin kiteinen diasteromeeri (II) (53 mg, 0,10 mmol), liuotet-15 tiin 8 ml:aan 2-propanolia, 45 °C:ssa, argonatmosfäärissä. Liuokseen lisättiin 0,27 ml 10-%:ista K2C03-vesiliuosta. Sekoitusta jatkettiin 10 minuutin ajan, jona aikana kaikki lähtöaine oli käytetty (TLC, Si02, 4-%:inen EtOAc, CHCl3:ssa). Liuos konsentroitiin in vacuo ja jäännös otet-20 tiin eetteriin. 0,1 N HCl-liuoksella ja suolavedellä pesun jälkeen eetteriliuos kuivattiin (MgS04) . suodatettiin ja haihdutettiin in vacuo, jolloin saatiin öljyistä kiinto-ainetta, joka puhdistettiin Si02-kromatografiällä 5-%:isen : 2-propanolin heksaaniliuoksen ollessa eluenttina. (-)-6- ,·, 25 kloori-4-fenyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-l,4-dihydro- 2H-3’, l-bentsoksatsin-2-onia saatiin valkoisina neulasina eetteri/heksaanista, sp. 178 - 179 °C; [a]o° = -92,5° * » · (CHC13, c = 0,0012 g ml-1); ^-NMR (CDC13) : δ 6,87 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,37 - 7,50 (m, 4H) , 7,56 - 7,63 (m, 3H) , 30 8,60 (s, 1H) .

1 1 >

,,,· Vaihe E

( + ) -6-kloori-4-fenyylietynyyli-4-trifluorimetyyli- 1.4- dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni (Yhdiste 3) (+)-6-kloori-4-fenyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-35 l,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni valmistettiin vai-.· heen C, diasteromeerin I, ei-kiteisestä tuotteesta vaiheen 47 115457 D mukaisesti: sp. 178 - 179 °C; [α]ο° = +87,6° (CHC13/ c = 0,0050 g ml -1; ^-NMR (CDC13) : δ 6,87 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,37 - 7,50 (m, 4H), 7,56 - 7,63 (m, 3H), 8,60 (s, 1H). Esimerkki 6 5 (-)-6-kloori-4-syklopropyylietynyyli-4- trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin- 2-oni (L-743 726, Yhdiste 37.2) ja (+)-6-kloori-4-syklopropyylietynyyli-4-trifluorime tyyli-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni (L-743 725) 10 Vaihe Ά: 2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-4-syklopropyyli-l,1,1-trifluori-3-butyn-2-oli

Liuokseen, joka sisälsi bromimagnesiumsyklopropyy-liasetylidiä, joka oli valmistettu 23 g-.sta syklopropyy-15 liasetyleeniä (0,348 mol) 250 mlrssa THF:ää lisäämällä ti-poittain 1 tunnin aikana 116 ml 3,0 M etyylimagnesiumbro-midin eetteriliuosta (0,348 mol). Tämän liuoksen annettiin olla 0 °C:ssa 1 tunnin ajan, sitten 40 °C:ssa 3 tunnin ajan. Tähän liuokseen, joka oli jäähdytetty uudelleen 20 0 °C:seen, lisättiin kiintoaine-erinä, 5 minuutin aikana 15,56 g 1-(2-amino-5-kloorifenyyli)-2,2,2 trifluori-metyylietanonia (0,0696 mol). Reaktioseoksen annettiin sekoittua 0 °C:ssa 1,5 tunnin ajan. Reaktio pysäytttiin 0 °C:ssa lisäämällä tipoittain 700 ml kyllästettyä ammoni-·. 25 umkloridin vesiliuosta. Seosta uutettiin 2 x 400 ml:n : ’·, erillä etyyliasetaattia, yhdistettyjä orgaanisia kerroksia ,1/ pestiin suolavedellä ja suoritettiin kuivaus MgS04:llä.

# > » * Kuivausaineen ja liuottimien poiston jälkeen jäljelle jäi keltaista kiintoainetta. Tämä materiaali uudelleenkitey- <··' 30 tettiin kiehuvasta heksaaneista (100 ml lopullinen tila- : vuus) , jolloin saatiin 14,67 g 2-(2-amino-5- • ; kloorifenyyli)-4-syklopropyyli-l,1,l-trifluori-3-butyn-2- ,olia. Toinen erä (2,1 g) saatiin emäliuosten konsentroin-

• I

nista. Sp.: 153 - 154 °C. 1HNMR (CDC13) : δ 0,84 (m, 2H) ,

: 35 0,90 (m, 2H), 1,38 (m, 1H), 4,50 (leveä s, 3H), 6,69 (d, J

/ 48 115457 = 8,5 Hz, 1H), 7,13 (dd, J = 2,5, 8,5 Hz, 1H), 7,55 (d, J =2,5 Hz, 1H).

Vaihe B

(±)-6-kloori-4-syklopropyylietynyyli-4-5 trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-oni (L-741 211)

Liuokseen, joka sisälsi 2-(2-amino-5- kloorifenyyli)-4-syklopropyyli-l,1,l-trifluori-3-butyn-2-olia (15,00 g, 0,0518 mol) ja 41,98 g (0,259 mol) 1,1'-10 karbonyylidi-imidatsolia 250 ml:ssa kuivaa THF:ää, sekoitettiin argonin alla 55 °C:ssa 24 tunnin ajan. Liuotin poistettiin pyöröhaihduttimellä ja jäännös jaettiin 500 ml:n etyyliasetaattia ja 400 ml:n vettä kesken. Kerrokset erotettiin ja vesipitoista kerrosta uutettiin vielä kerran 15 etyyliasetaatilla. Yhdistettyjä etyyliasetaattiuutteita pestiin 2 x 200 ml :11a 2-%:ista HCl-vesiliuosta, kyllästetyllä NaHC03-vesiliuoksella ja suolavedellä. Kuivaus MgS04:llä, suodatus ja liuottimen poisto in vacuo tuotti 16,42 g otsikon mukaista yhdistettä kiintoaineena. Uudel-20 leenkiteytys etyyliasetaatti-heksaanista tuotti 12,97 g analyyttisesti puhdasta ( + )-6-kloori-4-syklo- propyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-l,4-dihydro-2H-3,1-: bentsoksatsin-2-onia valkoisina kiteinä. Sp. : 178 ; 180 °C. ^-NMR (CDC13) : 0,85 (m, 2H) , 0,94 (m, 2H) , 1,40 \ 25 (m, 1H), 6,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 2,5, 8,5

Hz, 1H), 7,49 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,87 (leveä s, 1H).

Vaihe C

6-kloori-l-(IS)-kamfanoyy1i-4-syklopropyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H- t 30 3,l-bentsoksatsin-2-oni

Liuokseen, joka sisälsi (±)-6-kloori-4 syklopro-• pyyli-etynyyli-4-trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,1- : bentsoksatsin-2-onia (12,97 g, 0,041 mol), 4- dimetyyliaminopyridiiniä (1,02 g, 0,0083 mol) ja (-)- t 35 kamfaanihappokloridia (14,22 g, 0,06556 mol) 350 mlrssa ,* kuivaa dikloorimetaania ja jota sekoitettiin argonin alla / 49 115457 jäähauteessa, lisättiin trietyyliamiinia (22,84 ml, 0,164 mol) . Jäähdytyshaude poistettiin ja reaktion annettiin edetä huoneenlämpötilassa. 75 minuutin kuluttua reaktion katsottiin menneen loppuun ohutlevykromatografiän (S1O2, 5 4-%:inen EtOAc, CHCl3:ssa) perusteella ja liuos laimennettiin 500 ml :11a CHCl3:a, jonka jälkeen sitä pestiin 10-%:isella sitruunahapolla (2x), vedellä (lx) ja suolavedellä (lx) . Kuivauksen (MgS04) , suodatuksen ja liuottimen poiston in vacuo jälkeen jäljelle jäi väritöntä vaahtoa.

10 Materiaalia trituroitiin 200 ml:n kiehuvaa heksaania kanssa. Huoneenlämpötilaan jäähdytyksen aikana haluttu diaste-romeerinen kamfanaatti-imidi saostui. Kiintoaine kerättiin fritille, sitä pestiin pienellä määrällä kylmää heksaaneja ja kuivattiin in vacuo, jolloin saatiin 7,79 g 6-kloori-l-15 (IS)-kamfanoyyli-4-syklopropyylietynyyli-4- trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-onia valkoisina kiteinä. Sp. : 164 - 165 °C. HLPC-puhtaus: 99,2 | @ 254 nm. XH-NMR (CDC13) : δ 0,77 (s, 3H) , 0,86 - 0,96 (m, 4H) , 1,08 (s, 3H) , 1,19 (s, 3H) , 1,44 (m, 1H) , 1,76 20 (m, 1H) , 1,95 (m, 1H) , 2,51 (m, 2H) , 7,42 (dd, J = 2,4, 9,0 Hz, 1H), 7,63 (m, 2H).

Vaihe D

: (-)-6-kloori-4-syklopropyylietynyyli-4- trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni 25 (L-743 726, Yhdiste 37.2) 6-kloori-l-(IS)-kamfanoyyli-4-syklopropyyli-etynyyli-4-trif luorimetyyli-1,2-dihydro-4 (H) -3,1-bentsoksatsin-2-onia (7,50 g, 0,01512 mol) liuotettiin 150 ml:aan n-butanolia 60 °C:ssa, argonatmosfäärissä. Tähän "* 30 liuokseen lisättiin 10 ml 1 N HCl-liuosta. Saatua liuosta * » i pidettiin 60 °C:ssa 72 tunnin ajan. Seos neutraloitiin ;*·· NaHC03-vesiliuoksella ja n-butanoli poistettiin in vacuo.

! Jäännös liuotettiin 150 ml:aan THF:ää ja sitä käsiteltiin 50 ml :11a 2 N LiOH-liuosta 3 tunnin ajan huoneeniämpöti- » 35 lassa. Tämä seos laimennettiin etyyliasetaatilla ja sitä pestiin kahdella vesierällä ja yhdellä suolavesierällä.

/ 50 115457

Kuivaus (MgS04) , suodatus ja liuottimen poisto in vacuo tuotti valkoista kiintoainetta. Tämä materiaali uudelleen kiteytettiin kuumasta heksaanista, jolloin saatiin 3,43 g (-)-6-kloori-4-syklopropyylietynyyli-4-trifluori— metyyli-5 1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-onia valkoisina kiteinä, sp. 131 - 132 °C; [a]|° = -84,7 0 (CHC13, c = 0,005 g ml _1) ; 1H-NMR (CDCI3) : δ 0,85 (m, 2H) , 0,94 (m, 2H) , 1,40 (m, 1H) , 6,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 2,5, 8,5 Hz, 1H), 7,49 (d, J'= 2,5 Hz, 1H), 8,87 (leveä s, 1H).

10 Vaihe E

(+)-6-kloori-4-syklopropyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni (L-743 725)

Edellä esitetystä vaiheesta C saadut emäliuokset 15 puhdistettiin pylväskromatografiällä silikageeliä käyttäen 10-%:isen etyyliasetaatin heksaaniliuoksen ollessa eluent-tina. Puhdas ei-toivottu diasteromeeri (väritön vaahto) hydrolysoitiin vaiheen D mukaisesti. Enantiomeerinen bent-soksatsinoni, (+)-6-kloori-4-syklopropyylietynyyli-4- 20 trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni, saatiin valkoisina kiteinä. Sp. 131 - 132 °C; [o£]d° = +84,4° (CHCI3, c = 0,005 g ml'1); ^-NMR (CDC13) : δ 0,85 (m, ; 2H) , 0,94 (m, 2H) , 1,40 (m, 1H) , 6,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , : 7,37 (dd, J = 2,5, 8,5 Hz, 1H) , 7,49 (d, J = 2,5 Hz, 1H) , !· 25 8,87 (leveä s, 1H) .

Käänteistranskriptaasimääritys Määritys mittaa tritioidun deoksiguanosiinimono-* fosfaatin liittymistä yhdistelmä-HIV-käänteis- transkriptaasin (HIV RTr:n) (tai muun RT:n) toimesta hap-···: 30 po-saostuvaan cDNArhan dGTP:n ja poly-r(C) oligo-d(G) 12.

» » t ·...· 18:n Km-arvoissa. Esillä olevan keksinnön mukaiset estäjät estävät tätä liittymistä.

Määritykset suoritettiin käyttäen 55 mM Tris (pH

> · 8,2)-30 mM KC1-30 mM MgCl2-l mM ditiotreitoli-20 pg 35 rC:dGi2i8 (Pharmacia) per ml-8 mM [3H] dGTP (New England Nu-clear)-0,01 %:inen Ν,Ν,Ν' ,N'-tetraetikkahappo (EGTA)-l mg / 1Ί5457 51 naudan seerumialbumiinia per ml. 37 °C:ssa 60 minuutin in-kuboinnin jälkeen happo-saostuva materiaali kerättiin la-sikuitusuodattimille käyttäen puoliautomaattista soluke-rääjää. Bakteerisolu-uutokset, jotka sisälsivät RT:tä, 5 laimennettiin määrityksen pitoisuusvälille ja aktiivisuus määritettiin estäjän läsnä ollessa ja puuttuessa. E.coli:ssa tuotettu, puhdistettu HIV-1 RT-heterodimeeri toimi myös kontrollina. Tulokset on määritetty estäjän pitoisuutena, joka aikaansaa 50 % eston (IC50 wt) , nanomoo-10 leissa/litra.

Kaksoismutanttikokeen (dm) tapauksessa määrityksessä käytettiin A17 RT:tä. A17 RT on resistentti erilaisille aminopyridoneille, kuten on kuvattu julkaisussa, J.H. Nunberg et ai., J. Virol. 65, 4887 (1991). Tulokset 15 määritetään IC50 dm:nä, nanomooleissa/litra.

So lul e viimei syysmäär i ty s HIV:n leviämisen esto soluviljelmässä määritettiin julkaisussa, J.H. Nunberg et ai., J. Virol. 65, 4887 (1991), esitetyn mukaisesti. Tässä määrityksessä MT-4T-20 lymfoidisolut infektoitiin HIV-1:llä (villityyppi, ellei toisin mainita) käyttäen ennalta määrättyä siirrosta, ja viljelmiä inkuboitiin 24 tunnin ajan. Tänä aikana <1 % soluista oli positiivisia epäsuoralla immunofuoresenssilla määritettynä. Sitten soluja pestiin perusteellisesti ja ne '·. 25 jaettiin 96-kuopan kasvatusmaljoihin. Kuoppiin lisättiin • > » sarja estäjän kaksinkertaisia laimennoksia ja kasvatusta • · jatkettiin vielä 3 päivän ajan. Neljä päivää infektion jälkeen kontrolliviljelmien soluista 100 % oli infektoitunut. HIV-1 p24-akkumulaatio oli suoraan verrannollinen vi- 3 0 ruksen leviämiseen. Soluviljelmän estopitoisuus määritet-'··' tiin estäjän pitoisuutena, nanomooleissa/litra, joka vä- *:<·* hensi infektion levinneisyyttä vähintään 95 %:ia, tai > · t! CIC95 : nä.

• · • 1 1 t » « / 115457 52

Yhdisteen 37.2 tulosten yhteenveto A. käänteistranskriptaasimääritys ja solule- vinne i syysmääri tys WT_K103N* Y181C DM RT-2 Ιθ50(μΜ) 0,002 0,030 0,008 0,085 80,8 αθ95(μΜ) <0,006(N=2) 0,100 <0,025 0,400 N.D.

5 B. Farmakologiset tulokset *

Rhesus: 1 mg kg'1 i.v.rt1y2=210 min.

10 mg kg '1 p.o. (methocel): Cmax=4,4pM @ 2h ” y"c )55 10 Proteiinisitoutuminen: 98,0 %, normaali ihmisen plasma (HLPC-menetelmä) * Mutantit K103N ja Y181C ovat lääkeresistenttejä HIV-käänteistranskriptaaseja. DM on kaksoismutantti, kuten on esitetty käänteistranskriptaasimäärityksen yhteydessä. RT-: 15 2 on HIV-2:n käänteistranskriptaasi.

: Synergistiset vaikutukset ' A. HIV-infektoidun MT-4-solususpension valmistus MT-solut infektoitiin päivänä 0, pitoisuudessa 250 000 millilitraa kohti, HIV-l-kannan Illb-kantaliuoksen 20 1:1 000 laimennuksella (lopullinen, 125 pg p24/ml; riittää aikaansaamaan < 1 % infektoituneita soluja päivänä 1 ja ' · 25 - 100 % päivänä 4). Solut infektoitiin ja niitä kasvatettiin seuraavassa väliaineessa: RPMI 1640 (Whittaker i BioProducts), 10 %:ia inaktivoitua vasikansikiöseerumia, 4 l 25 mM glutamiinia (Gibco Labs) ja 1:100 Pensilliini-

Streptomysiiniä (Gibco Labs) .

;* Seosta inkuboitiin yön yli 37 °C:ssa, 5-%:isessa C02 -atmosfäärissä.

/ 53 115457 B. Käsittely estäjillä

Valmistettiin yhdistelmäparien (ks. Taulukko S) nanomolaarinen pitoisuussarja. Päivänä 1 lisättiin 125 μΐ estäjäliuosta yhtä suureen tilavuuteen HIV-infektoituja 5 MT-4-soluja (50 000 kuoppaa kohti) 96-kuopan mikrotiitte-rikasvatuslevyihin. Inkubointia jatkettiin 3 päivän ajan, 37 °C:ssa, 5-%:isessa C02-atmosfäärissä.

C. Viruslevinneisyyden mittaus Käyttämällä monikanvapipettiä laskeutuneet solut 10 uudelleensuspensoitiin ja 125 pl:aa kerättiin erilliselle mikrotiitterilevylle. Supernatantista määritettiin HIV-p2 4-ant igeeni.

HIV-p24-antigeenin pitoisuus mitattiin entsyymi-immunomäärityksellä, joka kuvataan seuraavassa. Mitattavan 15 p24-antigeenin liuosta lisättiin mikrokuoppiin, jotka oli päällystetty HIV-ydinantigeenille spesifisellä monoklonaa-lisella vasta-aineella. Mikrokuoppia pestiin tässä vaiheessa ja muissa seuraavissa asianmukaisissa vaiheissa. Sitten lisättiin biotinyloitua HIV-spesifistä vasta-20 ainetta ja tämän jälkeen konjugoitua strepavidiini-piparjuuriperoksidaasia. Lisätyn vetyperoksidin ja tetra-metyylibentsidiinisubstraatin välille muodostuu värireak-tio. Värin voimakkuus on verrannollinen HIV-p24-antigeenin voimakkuuteen.

’. 25 Synergia-asteen laskeminen : \ Estäjien yhdistelmillä (ks. Taulukko 5) havaittiin * · merkittävästi lisääntynyttä viruksen leviämisen estoa ver- • * · rattuna kuhunkin yksittäiseen estäjään tai verrattuna pelkästään kunkin estäjän eston summaan. Siten esimerkiksi ·;;; 30 726:n ja AZT:n yhdistelmällä havaittiin merkittävästi li- ’···’ sääntynyttä viruksen leviämisen estoa verrattuna pelkkään ·;··: 726:een tai pelkkään AZT:hen tai verrattuna 726:n eston ja *->.* AZT:n eston summaan.

» · Nämä tulokset käsiteltiin seuraavasti: fraktionaa-35 liset estopitoisuussuhteet (FIC) (fractional inhibitory 1 ·’ concentration ratios) laskettiin kuten on esitetty julkai- 115457 54 sussa, Elion et ai., J. Biol. Chem., 208 477 (1954).

FICS:ien minimisumma, joka vastaa maksimisynergiaa, määritettiin erilaisilla yhdistelmillä. Vaihtoehtoisesti, lasketaan FICS:ien keskimääräinen summa, joka vastaa keski-5 määräistä synergiaa. Ks. Taulukko S. Nämä tulokset osoittavat merkittävää synergiaa viruksen leviämisen estossa. Mitä pienempi luku sitä suurempi synergia.

Taulukko S

10

Yhdistelmät1 Keskimääräinen synergia 726 + ddI 0,81 726 + A2T 0,62 726 + 524 0,65

726 + 524 + AZT

524 on L-735 524. Muut yhdisteet on myös määritelty edellä olevassa Taulukossa C.

15 Vaikka selitysosassa on esitetty esillä olevan keksinnön pääperiaatteet ja keksintöä on havainnollistettu esimerkein, on ymmärrettävä, että keksinnön toteutus kä-*: sittää kaikki tavanmukaiset muunnelmat, mukailut tai modi fikaatiot, jotka kuuluvat seuraavien patenttivaatimusten ·. 20 piiriin, sekä vastaavuudet.

• > · * · / i · * ·

Claims (6)

55 115457

1. Menetelmä farmaseuttisesti hyväksyttävien 6-kloori-4-trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-5 onijohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava I on F3C H

10 H jossa R on (a) Ci-8-alkyyli, joka on substituoimaton tai substituoitu A: 11a, jolloin A on halogeeni, C3-6-sykloalkyyli, CN, hydroksi, Ci-4-alkoksi, nitro, di(Ci_2- 15 alkyyli)amino, pyrrolidinyyli, oksatsoiidinyyli tai fenyylitio; (b) C2-4-alkenyyli, joka on substituoimaton tai substituoitu (i) A:lla, tai (ii) fenyylillä, joka on substituoimaton tai substituoitu A:11a; 20 (c) C2.5-alkynyyli, joka on substituoimaton tai substituoitu (i) A:11a, tai (ii) fenyylillä, joka on substituoimaton tai substituoitu A:11a; tai (d) fenyyli tai fenyylietyyli, : tunnettu siitä, että 25 * · ,·. a. yhdiste jonka kaava on * · * · ·* F3C R i}

30 I „ jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan * » » renkaansulkureaktiolle alttiiksi käyttämällä kondensoivaa ainetta, tai 35 b. 6-kloori-4-syklopropyylietynyyli-4- • · . trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2- * · '...· onin valmistamiseksi, » · » » I / 56 115457 - syklopropyyliasetylidi saatetaan reagoimaan 1-(2-amino-5-kloorifenyyli)-2,2,2-trifluorimetyylietanonin kanssa 2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-4-syklopropyyli- 1.1.1- trifluoro-3-butyn-2-olin valmistamiseksi, ja 5. saatu 2-(2-amino-5-kloorifenyyli)-4-syklopropyyli- 1.1.1- trifluoro-3-butyn-2-oli käsitellään kondensoivalla aineella 6-kloori-4-syklopropyyli-etynyyli-4-trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-onin valmistamiseksi, tai 10 c. 6-kloori-4-(2-syanofenyyli)etynyyli-4-(1,1,1- trifluorimetyyli)-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-onin valmistamiseksi, 6-kloori-4-etynyyli-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-l,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-oni metalloidaan, lisätään sinkkisuola, ja saatetaan 15 reagoimaan 2-jodisyanobentseenin kanssa käyttämällä tetrakis(trifenyylifosfiini)palladium-(o)-katalyyttiä kompleksoituna CuJ:n kanssa, tai d. 6-kloori-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-4- [ (3-(1- pyrrolidinyyli))-1-propynyyli]-1,4-dihydro-2H-3,1-20 bentsoksatsin-2-onin valmistamiseksi, 6-kloori-4- etynyyli-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-1,4-dihydro-2H- 3.1- bentsoksatsin-2-oni saatetaan reagoimaan pyrrolidiinin ja paraformaldehydin kanssa käyttämällä kuparikloridia tai -jodidia katalysaattorina, tai 25 e. (-)-6-kloori-4-syklopropyylietynyyli-4-trifluori- ·. metyyli-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin-2-onin ·. valmistamiseksi, ’t (1) tuotetaan määrä (+/-)-6-kloori-4-syklopropyyli- • ,* etynyyli-4-trifluorimetyyli-1,4-dihydro-2H-3,1- 30 bentsoksatsin-2-onia; (2) kondensoidaan vaiheen (1) mukaiset yhdisteet : erotusaineen kanssa; (3) otetaan erilleen saadut diasteromeerit; . : (4) puretaan erotusainemodifikaatio halutun yhdisteen 35 saamiseksi, ja haluttaessa muutetaan saatu yhdiste sen farmaseuttisesti , ’.· hyväksyttäväksi suolaksi. / 57 1 1 5 4 5 7

2. Patenttivaatimuksen 1 b. mukainen menetelmä, jossa syklopropyyliasetylidi saadaan käsittelemällä syklopropyyliasetyleenia Grignard-reagenssilla. 5

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, jossa syklopropyyliasetylidi on bromi- magnesiumsyklo-propyyliasetylidi, joka on saatu käsittelemällä syklopropyyliasetyleenia etyylimagnesiumbromidilla. 10

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, jossa kondensoiva aine on 1,1'-karbonyylidi-imidatsoli.

5. Patenttivaatimuksen 1 e. mukainen menetelmä, tunnettu 15 siitä, että erotusaine on (-)-kamfanyylikloridi.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (-)-6-kloori-4 -syklopropyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-20 1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni, (-)-6-kloori-4-fenyylietynyyli-4-trifluorimetyyli-l,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni, (+/-)-6-kloori-4-(2-syaanifenyyli)etynyyli-4-(1,1,1-trifluorimetyyli)-1,4-dihydro-2H-3,l-bentsoksatsin-2-oni, 25 (+/-)-4-(2-[dimetyyliaminometyyli] etynyyli)-4- trifluorimetyyli-6-kloori-1,4-dihydro-2H-3,1-bentsoksatsin- * 2-oni, tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. i ' · > · I» i · k i s l i » > k » k / 58 1 1 5457