KR100272387B1

KR100272387B1 - 벤족사지논 화합물 및 이를 포함하는 사람 면역결핍 바이러스 역전사 효소 억제용 약제학적 조성물

Info

Publication number: KR100272387B1
Application number: KR1019950700472A
Authority: KR
Inventors: 디. 영 스티븐; 에프. 브릿쳐 수잔; 에스. 페인 린다; 오. 트란 레칸; 씨. 룸마 2세 윌리암
Original assignee: 폴락 돈나 엘.; 머크 앤드 컴퍼니 인코포레이티드
Priority date: 1992-08-07
Filing date: 1993-08-06
Publication date: 2000-11-15
Also published as: DZ1707A1; GR3034754T3; JPH06184124A; YU49439B; PL175615B1; PL307348A1; UA42699C2; NL300032I1; ES2151897T3; NO950424D0; FI950508A0; FI950508A; EP0582455B1; TW382014B; DE122008000034I1; PL176679B1; AU670300B2; LU91446I2; YU53093A; CN1107505C

Abstract

본 발명은, 기타 항바이러스제, 면역조절제, 항생제 또는 백신과의 배합물이거나 또는 아니든지 간에, 화합물, 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적 조성물 성분중 어느 하나로서, HIV 역전사효소(이의 내성 변이체를 포함한)의 억제, HIV에 의한 감염의 예방 또는 치료 및 AIDS의 치료에 유용한 일반식(I)의 특정 벤족사지논에 관한 것이다.

상기 식에서, X는 할로이고, X¹은 트리할로메틸이거나 펜타할로에틸이고, Z는 O이다.

본 발명은 또한 AIDS 치료 방법 및 HIV에 의한 감염의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.

Description

[발명의 명칭]

벤족사지논 화합물 및 이를 포함하는 사람 면역결핍 바이러스 역전사 효소

억제용 약제학적 조성물

[발명의 상세한 설명]

[발명의 배경]

본 출원은 머크 케이스 18429, 18429IA 및 18727와 관련된 것이다. 본 출원은 1992년 8월 7일에 출원된 미합중국 특허원 제07/926,607호의 머크 케이스 18793의 부분연속출원이다.

레트로바이러스로 불리는 사람 면역결핍 바이러스(HIV)는 면역체계의 점진적 파괴(후천성면역결핍증: AIDS) 및 중추신경 및 말초신경계의 퇴화를 포함하는 복합질환의 원인제이다. 이 바이러스는 이미 LAV, HTLV-III 또는 ARV로도 알려져 있다. 레트로바이러스 복제의 일반적 특징은, 바이러스 복제에서 필요한 단계인, HIV 서열의 DNA 카피물을 생성하기 위해 RNA 게놈을 바이러스가 암호화한 역전사효소로 역전사시키는 것이다. 예를 들어, 아지도티미딘 또는 AZT(지도부딘)와 같은 몇가지 화합물이 역전사 억제제이며 AIDS 및 유사 질환의 치료에 효과적인 제제인 것으로 알려져 있다.

HIV의 뉴클레오타이드 서열화는 하나의 개방 판독 프레임 중에 pol 유전자가 존재함을 보였다[참조 : Ratner, L. et al . Nature, 313, 277, 1985]. 아미노산 서열 유사성은 pol 서열이 역전사효소, 엔도뉴클레아제 및 HIV 프로테아제를 암호화한다는 증거를 제공한다[참조: Toh H. et al., EMBO J. 4, 1267 (1985); Power, M. D. et al., Science, 231, 1567 (1986); Pearl, L. H. et al., Nature 329, 351 (1987)].

본 출원인들은, 본 발명의 화합물이 HIV 역전사효소의 억제제임을 입증하였다. 본 발명의 특정한 장점은 이들의 입증된 내성 HIV 역전사효소를 억제한다는 것이다.

[발명의 간단한 설명]

본원의 일반식(I)의 화합물을 기재한다. 이들 화합물은 화합물, 약제학적으로 허용되는 염(필요에 따라), 약제학적 조성물 성분으로서 또는 다른 항바이러스제, 감염치료제, 면역조절제, 항생제 또는 백신과의 배합물로서 HIV 역전사효소(및 이의 내성 변이체) 억제, HIV에 의한 감염의 예방, HIV에 의한 감염의 치료 및 A1DS 및/또는, ARC의 치료에 유용하다. AIDS 치료 방법, HIV에 의한 감염의 예방 및 HIV의 감염 치료방법도 기술되고 있다.

[발명의 상세한 설명 및 바람직한 양태]

본 발명은, HIV 역전사효소 및 이의 내성 변이체의 억제, HIV에 의한 감염의 예방 또는 치료 및 발생된 후천성면역결핍증(AIDS)의 치료에서 일반식(I)의 화합물, 이의 배합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염에 관한 것이다. 일반식(I)의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염은 다음과 같이 정의된다.

상기 식에서, X는 할로이고, X¹은 트리할로메틸 또는 펜타할로에틸이며, Z는 O이고, R은 (a) 비치환되거나 A에 의해 치환된 C_1-8알킬[여기에서, A는 할로, C_3-6사이클로알킬, CN, 하이드록시 C_1-4알콕시, C_2-4알키닐-C_1-4알콕시, 아릴옥시, C_1-4알킬카보닐, 니트로, 디(C_1-2알킬)아미노, C_1-4알킬아미노-C_1-2알킬, 헤테로사이클로 또는 아릴티오이다]이거나, (b) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_2-4알케닐이거나, (c) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_2-5알키닐이거나, (d) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_3-4사이클로알킬이다.

본 발명은 또한, 유효량의 일반식(II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, HIV 역전사를 억제하는데 유용한 약제학적 조성물을 포함한다.

상기 식에서, X는 할로이고, X¹은 트리할로메틸; 펜타할로에틸; C_2-5알킬; C_2-5알키닐, C_3-5사이클로알킬 또는 아릴이며, Z는 O 또는 S이고, R은 (a) 비치환되거나 A에 의해 치환된 C_1-8알킬[여기에서, A는 할로, C_3-6사이클로알킬, CN, 하이드록시, C_1-4알콕시, C_2-4알키닐-C_1-4알콕시, 아릴옥시, C_1-4알킬카보닐, 니트로, 디(C_1-2알킬)아미노, C_1-4알킬아미노-C_1-2알킬, 헤테로사이클로 또는 아릴티오이다]이거나, (b) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_2-4알케닐이거나, (c) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_2-5알키닐이거나, (d) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_3-4사이클로알킬이다.

바람직한 화합물은, 선호도 감소 순서로 나타낸, 하기 표 1의 화합물 37.2, 4, 2, 5 및 24 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염이다. 이들 화합물은 다음 구조식의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염이다.

화합물 37.2

(-) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(가장 바람직함);

화합물 4:

(-) 6-클로로-4-페닐에티닐-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온;

화합물 2:

(+/-) 6-클로로-4-(2-시아노페닐)에티닐-4-(1,1,1-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3.1-벤족사진-2-온;

화합물 5:

(+/-) 4-(1-클로로-1,1-디플루오로메틸 )-4-(2-페닐에티닐 )-6-클로로-1,4-디하이로-2H-3,1-벤족사진-2-온;

화합물 24:

(+/-) 4-(2-[디메틸아미노메틸]에티닐)-4-트리플루오로메틸-6-클로로-1,4-디하이드로-2H-3.1-벤족사진-2-온.

본 발명의 화합물은 하기 표 1 및 2에 특정적으로 나타내었다:

[표 1]

[표 1a]

[표 1b]

[표 1c]

[표 1d]

[표 1e]

[표 1f]

[표 1g]

[표 1h]

[표 1i]

[표 1j]

[표 2]

[표 2a]

[표 2b]

본 발명의 화합물은 비대칭 중심을 지닐수 있으며, 특별히 나타낸 경우를 제외하고는, 모두가 본 발명에 포함되는 이성체 형태를 갖는 라세미체, 라세믹 혼합물로서 또는 개개의 디아스테레오머 또는 에난티오머로서 나타날 수 있다. (+/-)로 나타낸 표시는 (+) 광학 이성체 또는 (-) 광학 이성체 또는 이의 혼합물을 포함한다.

어떠한 조성 또는 일반식(I)에서 한번 이상 어떠한 변이(예: R)가 나타날 때, 각각의 출현에 대한 이의 정의는 모든 다른 출현에서의 이의 정의와 별개이다. 또한, 치완체 및/또는 가변체 배합은 이같은 배합이 안정한 화합물을 나타내기만 하면 허용할만하다.

제시될 경우를 제외하고, 본원에서 사용된 바와 같은 “알킬”이란 일정한 수의 탄소원자를 갖는 측쇄 및 직쇄 포화 지방족 탄화수소 둘 다를 포함하며; “알케닐”은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 측쇄 및 직쇄 알킬 그룹 둘다를 나타내며, “알키닐”은 하나 이상의 탄소-탄소 3중 결합을 갖는 측쇄 및 직쇄 알킬 그룹 둘다를 커버한다. “할로겐” 또는 “할로”는 본원에서 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도를 나타낸다.

본원에서 사용된 바와 같이, 제시될 경우를 제외하고, “아릴”은 페닐, 나프틸, 테트라하이드로나프틸, 비페닐, 펜안트릴, 안트릴 또는 아세나프틸을 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 제시될 경우를 제외하고, 헤테로사이클 또는 헤테로사이클릭은 안정한 5 내지 7원 모노사이클릭 또는 안정한 8 내지 11원 바이사이클릭 헤테로사이클릭 환을 나타내며, 이는 포화되거나, 부분적으로 불포화되거나 또는 불포화되며, 탄소원자와 N, O 및 S로 구성된 그룹으로부터 선택되는 1 내지 4의 헤테로 원자로 구성되고, 여기에서 질소와 황 헤테로 원자는 임의로 산화될 수도 있으며, 여기에는, 상기 정의한 어떠한 헤테로사이클릭 환이라도 벤젠환에 융합된 모든 바이사이클릭 그룹이 포함된다. 이 헤테로사이클릭 환은 안정한 구조를 발생시키는 어떠한 헤테로 원자 또는 탄소원자와도 결합할 수 있다. 이와 같은 헤테로사이클릭에는 피페리디닐, 피페라지닐, 2-옥소피페라지닐, 2-옥소피레리디닐, 2-옥소피롤리디닐, 2-옥소아제피닐, 아제피닐, 피롤릴, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 피라졸릴, 피라졸리디닐, 이미다졸릴, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피리딜, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 옥사졸릴, 옥사졸리디닐, 이속사졸릴, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐 티아졸릴, 티아졸리디닐, 이소티아졸릴 퀴누클리디닐, 이소티아졸리디닐. 인돌릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤즈이미다졸릴, 티아디아조일, 벤조피라닐, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 푸릴, 테트라하이드로푸릴, 벤조푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 티에닐, 벤조티에닐, 티아모르폴리닐, 티아모르폴리닐 설폭사이드, 티아모르폴리닐설폰 및 옥사디아졸릴이 있다.

본 발명의 화합물은 다음 방법으로 합성할 수 있다.

[반응도식 1]

본 발명의 벤족사진의 합성에서, 일반적인 방법은 전형적으로 최종 단계로서 벤젠핵상에서의 폐환반응을 포함한다(반응도식 1 참조). 파라클로로아닐린의 아미노 그룹을 먼저, 예를 들어, 피발로일 클로라이드로 보호시켜 화합물(2)을 생성시킨다. 다른 덜 바람직한 아미노 보호 그룹은 t-부톡시카보닐, 아세테이트 또는 이소발레로일 그룹을 포함한다. 이어서, 약 2당량의 알킬리튬을 화합물(2), 바람직하게는 n-부틸리튬과 반응시킨다. 이 메탈화 단계에서는 어떠한 다른 유기 금속성 화합물도 적절치 않다. 후속적으로 CF₃COOE_t와 반응시킨 후 급냉시켜 화합물(3)을 수득한다.

3차 카비놀(4)의 합성뒤에 케톤(3)에 그리냐르 시약을 가한다. 이 그리냐르 시약은 2가 양이온, 예를 들어, Mg²⁺또는 Zn²⁺의 염이어야 한다. Li⁺또는 Na⁺와 같은 1가 양이온은 부적합한 것으로 나타났다. 적절한 용매에는, 이로써 제한되는 것은 아니지만 THF 또는 에테르가 포함된다. 약 0℃ 내지 약 실온의 온도범위내에서 광범위한 온도조건이 가능하다.

본 발명의 화합물(5)을 수득하기 위한 환 폐쇄는 축합체, 예를 들어, 1,1′-카보닐디이미다졸, 포스겐, 디메틸카보네이트, 디페닐카보네이트 또는 디-(파라니트로페닐)카보네이트를 써서 실시한다. 폐환은 이들 뿐만아니라 여러가지 다른 것을 써서라도 실시할 수 있다.

반응도식 1의 특정 보기를 반응도식 1a에 나타낸다. 이는, 실시예 6에서 더 상세히 나타내는 바와 같이. 화합물(37.2)의 라세미체인 L-741,211의 합성을 나타낸다.

[반응도식 1a]

[반응도식 2]

반응도식 2는 벤족사진 핵의 4 위치에서 아세틸렌 치환으로 유도체화하기 위한 한가지 방법을 나타낸다. 설명한 바와 같이, 화합물(6)을 메탈화시킨후 아연염을 가한다. 헤크(Heck) 반웅에서, CuI와 착화시킨 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐(0)을 촉매로 사용하여 화합물(7)을 수득한다.

[반응도식 3]

반응도식 3은 4-아세틸렌 그룹을 N-함유 헤테로사이클로 치환시키는 것을 설명하고 있다. 이 만니히(Mannich) 반응은 포름알데하이드와 헤테로사이를, 예를 들어 피롤리딘과의 축합 반응을 포함한다. 말단 탄소의 치환은 촉매로서 CuI의 존재하에 실시한다.

[반응도식 4]

반응도식 4는 일반식(I) 또는 (II) 화합물의 광학적 이성체의 분리를 나타내고 있다. 여기에서, (-) 캄판산은 분할제이다. O-메틸 만델산 클로라이드 또는 모셔(Mosher) 시약을 포함한 여러가지 다른 분할제가 적절하다. 당해 분야의 숙련가에게서 이들 이성체를 어떻게 분리시키는가 하는 것은 자명할 것이다.

반응도식 4a는 L-743,726의 분리에서 L-741,211의 분할을 위해 특정적으로 채택된 것이다. 반응도식 4a와 실시예 6을 참조한다.

[반응도식 4a]

[반응도식 5]

사이클로프로필 아세틸렌은 문헌[참조: C.E. Hudson et al., J. Am. Chem. Soc. 94. 1158(1972) 및 W. Schoberth et al., Synthesis 703 (1972)]에 따른 공개된 방법으로 반응도식 5와 같이 제조한다.

본 발명의 화합물은 항바이러스성 화합물에 대한 스크리닝 분석의 제조 및 실행에 유용하다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은, 보다 강력한 항마이러스성 화합물에 대한 탁월한 스크리닝 수단인 효소 돌연변이체를 분리시키는데 유용하다. 게다가 본 발명의 화합물은, 예를 들어, 경쟁적 억제에 의해, HIV 역전사효소에 대한 다른 항바이러스제의 결합부위를 결정 또는 확립하는데 유용하다. 따라서, 본 발명의 화합물은 이러한 목적으로 판매될 수 있는 상업적 제품이다.

본 발명의 화합물은 HIV 역전사효소의 억제, 사람면역결핍 바이러스(HIV)에 의한 감염의 예방 또는 치료 및 이에 따른 AIDS와 같은 병리학적 상태의 치료에 유용하다. AIDS 치료 또는 HIV에 의한 감염의 예방과 치료는, 이로써 제한되는 것은 아니지만 광범위만 HIV 감염상태인, AIDS, ARC(AIDS 관련 합병증), 증상적 및 무증상적인 HIV에 대한 실제적 또는 잠재적 노출 등을 처리하는 것을 포함하는 것으로 정의된다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은, 예를 들어, 혈액 수혈, 체액 교환, 강처(bite), 우연한 바늘에 찔림 또는 외과술 동안에 환자 혈액에 노출과 같은 과거에 HIV에 노출된 것으로 미심쩍은 경우의 HIV 감염의 치료에 유용하다.

본 발명 화합물의 특정한 장점은, 예를 들어, L-697,661인 3-([(4,7-디클로로-1,3-벤족사졸-2-일)메틸]-아미노)-5-에틸-6-메틸-피리딘-2(1H)-온 또는 L-696,229인 3-[2-(1,3-벤족사졸-2-일)에틸]-5-에틸-6-메틸-피리딘-2(1H)-온 또는 AZT 등의 다른 항바이러스제에 내성을 갖는 HIV 역전사효소에 대해 강력히 억제한다는 것이다.

이 목적을 위해 본 발명의 화합물은, 통상적인 비독성의 약제학적으로 허용되는 담체 보조제 및 비히클을 함유하는 투여 단위 제형으로, 경구, 비경구(피하주사 멸관내, 근육내, 흉골내 주사 또는 주입 기술을 포함), 흡입 분무 또는 직장 내로 투여할 수 있다.

따라서, 본 발명에 따라, 치료방법 및 HIV 감염 및 AIDS를 치료하기 위한 약제학적 조성물이 제공된다. 이 치료는, 치료를 필요로 하는 환자에게 약제학적 담체 및 치료적으로 유효한 양의 본 발명의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 투여함을 포함한다.

이들 약제학적 조성물은 경구적으로 투여가능한 현탁제 또는 정제; 비강 분무제, 무균성 주사제, 예를 들어, 무균성 수성 또는 유성 현탁액 또는 좌제의 형태일 수 있다.

현탁액으로서 경구투여할 경우, 이들 조성물은 약제학적 제형의 분야에 널리 공지된 기술에 따라서 제조할 수 있으며 용적을 부여하기 위한 미세결정성 셀룰로스, 현탁제로서 알긴산 또는 나트륨 알기네이트, 점도 증진제로서 메틸셀룰로스 및 당해 분야에 널리 공지된 감미제/풍미제를 함유할 수 있다. 속방성 정제로서 이들 조성물은 미세결정성 셀룰로스, 인산이칼슘, 전분, 마그네슘 스테아레이트 및 락토스 및/또는 당해 분야에 널리 공지된 부형제 결합제, 증량제, 붕해제 및 윤활제를 함유할 수도 있다.

비강 에어로졸 또는 흡입으로 투여할 경우, 이들 조성물은 약제학적 제형의 분야에 널리 공지된 기술에 따라 제조할 수 있으며, 벤질 알콜 또는 기타 적절한 방부제. 생체이용도를 증가시키기 위한 흡수 촉진제, 플루오로카본 및 또는 당해 분야에 공지된 다른 가용화제 또는 분산제를 사용하여 염용액으로서 제조할 수 있다.

주사용 액제 또는 현탁제는 공지된 기술에 따라, 적절한 비독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매, 예를 들어, 만니톨, 1,3-부탄디올, 물, 링거액 또는 등장성 염화나트륨 용액을 사용하거나 적절한 분산제, 습윤제 및 현탁제, 예를 들어, 무균성, 블랜드의 합성 모노-또는 디글리세라이드를 포함한 비휘발성 오일 및 올레산을 포함한 지방산을 사용하여 제형화할 수 있다.

좌제 형태로 직장으로 투여할 경우, 이들 조성물은 약물과, 일반적인 상온에서는 고형물이나 직장관내에서는 약물을 방출하도록 액화되고/되거나 용해되는 적절한 비자극성 부형제, 예를 들어, 코코아 버터, 합성 글리세라이드 에스테르 또는 폴리에틸렌 글리콜과 혼합시켜 제조할 수 있다.

본 발명의 화합물은 분할 투여량으로 사람에게 체중 kg당 1 내지 100mg의 투여량 범위로 경구 투여할 수 있다. 한가지 바람직한 투여량 범위는 분할 투여로 체중 kg당 0.1 내지 10mg을 경구투여한다. 다른 바람직한 투여량 범위는 분할 투여로 체중 kg당 0.1 내지 20mg이다. 뉴클레오사이드 동족체와의 혼합 치료를 위해서는 바람직한 투여량 범위는 분할 투여로 경구투여함에 있어 본 발명의 화합물은 0.1 내지 20mg/체중 kg이고 뉴클레오사이드 동족체는 50mg 내지 5g/체중 kg이다. 그러나, 어느 특정 환자에 대한 특정 투여수준 및 투여횟수는 사용된 특정 화합물의 활성, 특정 화합물의 대사적 안정성 및 작용시간, 연령, 체중, 일반적 건강, 성별, 식이습관 투여 방식 및 시간, 배변 횟수, 약물 배합, 중증도 및 주치의의 결정에 따라 결정될 수 있다.

본 발명은 또한 HIV 역전사효소 억제제 화합물과 AIDS 치료에 유효한 하나 이상의 제제와의 배합에 관한 것이다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 노출 전 및/또는 노출 후 시기를 불문하고 하기 표에 나타낸 것과 같은 유효량의 AIDS 항바이러스제, 면역조절제, 감염방지제 또는 백신과 함께 유효하게 투여할 수 있다.

[표]

본 발명의 화합물과, A1DS 항바이러스제, 면역조절제, 항감염제 또는 백신과의 혼합이 상기 표에 나열한 것에 한정되지 않으며, 원리상, AIDS 치료에 유용한 어떠한 약제학적 조성물과의 혼합도 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 일반식(I) 또는 일반식(II)의 화합물은 HIV 역전사효소에 대해 공지된 생물학적 활성을 갖는 뉴클레오사이드 동족체와 혼합하여 적절하게 투여할 수 있다. 적절한 뉴클레오사이드 동족체는 일반적으로 쇄 종결자이며 AZT, ddC, ddI, D4T, HEPT 및 3′-플루오로-2′,3′-디데옥시티미딘을 포함한다.

AZT는 문헌[참조 : J.P. Horwitz et al., J. Org. Chem. 29, 2076(1964); R.P. Glinski et al., Org. Chem. 38, 4299(1973); C.K. Chu et al., Tetrahedron Letters 29, 5349(1988)]에 따른 방법으로 합성한다. AIDS 치료의 치료제로서의 AZT의 적용은 미국 특허 제4,724,232호에 기술되어 있다.

화합물 ddC는 문헌[참조: J.P. Horwitz et al., J. Org. Chem. 32, 817(1967); R. Marumoto, Chem. Pharm. Bull. 22, 128(1974) 및 T. S. Lin et al., J. Med. Chem. 30. 440(1987)]에 따라 합성한다.

D4T는 문헌[참조: Herdewijn, P. et al., Med. Chem. 30, 1270(1987)]에 따라 다른 방법으로 제조한다.

HEPT는 문헌[참조: Miyasaka, T. et al., J. Med. Chem. 32, 2507(1989); 및 A. Rsowsky, J. Med. Chem. 24, 1177(1981)]에 따라 합성한다. ddC, ddI 및 AZT의 합성은 또한 EPO 484071에 기술되어 있다.

3′-플루오로-2′,3′-디데옥시티미딘은 문헌[참조: Herdewijn, P. et al ., J. Med. Chem. 30, 1270 (1987)]에 따라 합성한다. 화합물 L-735,524는 N-(2(R)-하이드록시-1-(S)-인다닐)-2(R)-페닐메틸-4(S)-하이드록시-5-(1-(4-(3-피리딘메틸)-2(S)-N′-(t-부틸카복스아미도)-피페라지닐))-펜탄아미드 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염이다. L-697,661 또는 ‘661’은 3-([4,7-디클로로-1,3-벤족사졸-2-일)메틸]아미노)-5-에틸-에틸-6-메틸-피리딘-2(1H)-온이고 ; L-696,229는 3-[2-(1,3-벤족사졸-2-일 )-에틸]-5-에틸-6-메틸-피리딘-2(1H)-온이다. L-679,661 및 L-696,229의 합성은, 본원에서 참고로 인용되고 있는 EPO 484071 및 EPO 462800에 기술되어 있다.

바람직한 배합은 HIV 프로테아제의 존재 또는 부재하에 L-743,726의 동시, 간헐 또는 교대치료이다. 배합물 중의 임의의 제3성분은 AZT, ddC 또는 ddI와 같은 HIV 역전사효소의 뉴클레오사이드 억제제이다. HIV 프로테아제의 바람직만 억제제는 L-735,524이다. 다른 바람직한 HIV 역전사효소 억제제로는 L-697,661이 있다. 이들 배합물은 HIV 전염을 제한하는데 상승작용적 효과를 가질수도 있다. 바람직한 배합물로는 (1) L-743,726과 L-735,524 및 임의로 L-697,661, AZT, ddI 또는 ddC 중 어느 하나와의 배합물과 (2) L-743,726과 L-697,661, AZT, ddI 또는 ddC 중 어느 하나와의 배합물이 있다. 또한 이들 배합물의 약제학적으로 허용되는 염도 포함된다.

[실시예 1]

(+/-) 4-(1,1,1-트리플루오로메틸)-4-(1-부텐-4-일)-6-클로로-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(화합물 15)

단계 A : N-(4-클로로페닐)-2,2-디메틸프로판아미드

상부에 교반기가 장착된 5ℓ들이 3구 환저 플라스크에 4-클로로아닐린(127.57g, 1mol), CHC1₃1200ml 및 포화 Na₂CO₃수용액 1200ml를 가한다. 부가 깔때기를 이 플라스크에 부착시킨 다음, 이에 2,2-디메틸프로파노일 클로라이드(129ml, 1.05mol)를 채운다. 격렬하게 교반시킨 혼합물에 산 클로라이드를 1시간에 걸쳐 적가한다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 23시간 더 교반시킨다. 생성물중 일부가 혼합물로부터 백색 결정으로서 분리된다. 이들 결정을 여과시켜 수집한다. 여액을 별도의 깔때기에 옮기고 층을 분리시킨다. 클로로포름 층을 물과 염수로 세척한다. MgSO₄로 건조시키고, 여과시킨 다음, 진공하에 용매를 제거하여 부가의 생성물을 수득한다. 생성물 두 분획을 합한 다음, 비등하는 EtOAc-헥산으로부터 재결정화하여 N-(4-클로로페닐)-2.2-디메틸프로판아미드 185.6g을 백색 결정성 고체로서 수득한다.

단계 B : 1-(2-아미노-5-클로로페닐)-2,2,2-트리플루오로에탄온

상부 교반기, 아르곤 유입기 및 500ml 들이 오븐 건조된 부가 깔때기가 장착된, 오븐 건조시킨 3ℓ들이 3구 환저 플라스크에 N-(4-클로로페닐)-2,2-디메틸프로판아미드(100g, 472mmol) 및 무수 THF(1ℓ)를 가한다. 이 용액을 빙욕 속에서 7℃로 냉각시키고, 부가 깔때기는 n-부틸리튬(헥산 중의 2.5M 용액 387ml, 968mmol)으로 채운다. 온도를 +5℃ 이하로 유지시키면서 n-부틸리튬 용액을 아미드 용액에 1시간에 걸쳐 서서히 적가한다. 생성된 용액을 0℃에서 1시간 동안 시효 경화시키면, 이때 오렌지색 침전물이 형성된다. 이 혼합물에 에틸 1,1,1-트리플루오로아세테이트(115ml, 968mmo1)를 1시간에 걸쳐 적가한다. 생성된 청정 용액을 30분 더 시효 경화시킨다. 5% 수성 HCl을 사용하여 반응을 급냉시킨다. 혼합물을 EtOAc 1ℓ로 희석시킨 다음, 층을 분리시킨다. 유기 상을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시킨 다음, 진공하에 농축시켜 황색 오일을 160g 수득한다. 이 물질을 3N 수성 HCl 1ℓ에 현탁시킨 다음, 용액을 24시간 동안 환류하에 가열한다. 냉각시킨 용액을 EtOAC 1ℓ로 희석시키고, 혼합물을 진한 NH₄OH를 사용하여 염기성이 되도록 한다. 층을 분리하고, 유기상을 염수로 세척하며, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키며, 진공하에 농축시킨 다음, 용출제로서 헥산 중의 15% EtOAc를 사용하여 실리카 겔 1.5kg 상에서 크로마토그래피한다. 크로마토그래피시킨 물질을 비등 헥산으로부터 재결정화하여 순수한 1-(2-아미노-5-클로로페닐)-2,2,2-트리플루오로에탄올 57g(54%)을 담황색 결정으로서 수득한다. 융점 : 91-92℃

단계 C : (+/-) 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-1,1,1-트리플루오로-5-헥센-2-올

교반봉, 아르곤 유입기, 부가 깔때기 및 환류 콘덴서가 장착된, 오븐 건조시킨 300ml 들이 3구 환저 플라스크에 마그네슘(터닝, 3.03g, 125mmol) 및 무수 THF(75ml)를 가한다. 이와 같이 잘 교반된 혼합물에 4-브로모-1-부텐(12.0ml, 118.21mmol)을 온화하게 환류되도록 하는 속도로 가한다. 첨가를 완료하면, 혼합물을 30분간 숙성시킨 다음, 빙욕 속에서 0℃로 냉각시킨다. 이와 같이 잘 교반된 용액에 THF(35ml) 중의 1-(2-아미노-5-클로로페닐)-2,2,2-트리플루오로에탄온(5.00g, 22.36mmol) 용액을 30분에 걸쳐 적가한다. 냉각욕 작동을 끝낸 후, 혼합물을 주위 온도에서 20시간 동안 교반시킨다. 반응물을 EtOAc 및 10% 수성 시트르산으로 희석시킨다. 이 혼합물을 4시간 동안 교반시킨다. 층을 분리시키고 유기산을 수성 NaHCO₃및 염수로 세척한다. MgSO₄로 건조시키고, 여과하며, 용매를 진공하에 제거한 다음, 용출제로서 헥산 중의 15% EtOAc를 사용하여 실리카겔 300g상에서 크로마토그래피하여 (+/-) 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-1,1,1-트리플루오로-5-헥센-2-올 4.80g을 황색 고체로서 수득한다.

단계 D : (+/-) 4-(1,1,1-트리플루오로메틸)-4-(1-부텐-4-일)-6-클로로-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온

교반봉, 아르곤 유입기 및 환류 콘덴서가 장착된 200ml들이 환저 플라스크에 (+/-) 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-1,1,1-트리플루오로-5-헥센-2-올(4.80g, 17.16mmol) 1,1′-카보닐디이미다졸(13.91g, 85.81mmol) 및 무수 THF(75ml)를 가한다. 이 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 가열한다. 냉각시킨 혼합물을 EtOAc로 희석시킨 다음, H₂O(3×200ml) 및 염수(250ml)로 세척한다. MgSO₄로 건조시키고, 여과시키며, 용매를 진공하에 제거한 다음, 비등하는 EtOAc-헥산으로부터 재결정화하여 (+/-) 4-(1,1,1-트리플루오로메틸)-4-(1-부텐-4-일)-6-클로로-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온 3.22g을 백색 결정성 고체로서 수득한다. 융점 : 165-166℃.

[실시예 2]

(+/-) 6-클로로-4-에티닐-4-(1,1,1-트리플루오로메틸)-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(화합물 26)

단계 A : 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-1,1,1-트리플루오로-3-부틴-2-올

부가 깔때기, 아르곤 유입기, 교반봉 및 디지탈 온도계가 장착된 500ml들이 3구 환저 플라스크에 에티닐 마그네슘 브로마이드(헥산 중 0.5M; 268ml, 134mmol)를 채운 다음, -78℃로 냉각시킨다. 온도를 -55℃ 이하로 15분 동안 유지시킨 후 THF 50ml 중의 1-(2-아미노-5-클로로페닐)-2,2,2-트리플루오로에탄올(6.0g, 26.8mmol) 용액의 적가를 완료한다. 반응 혼합물을 실온으로 서서히 가온시킨 후 16시간 동안 교반시킨다. 포화 염화암모늄 수용액(60ml)을 적가함으로써 암적색용액을 -5℃에서 급냉시킨다. 에틸 아세테이트로 추출한 다음, 10% 시트르산, 포화 중탄산나트륨, 물 및 염수로 세척한 다음, 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 용매를 증발시킨 후, 조 생성물 8.5g을 수득한다. 15 내지 20%의 에틸 아세테이트; 헥산을 사용하여 섬광 크로마토그래피함으로써 정제하여 순수한 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-1,1,1-트리플루오로-3-부틴-3-올(담갈색 오일 5g, 수율 75%)을 수득한다.

단계 B : (+/-) 6-클로로-4-에티닐-4-(1,1,1-트리플루오로메틸)-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온

2-(2-아미노-5-클로로페닐)-1,1,1-트리플루오로-3-부틴-2-올(5.0g, THF 225ml 중의 20.0mmol)의 THF 용액을 1,1′-카보닐디이미다졸(13.0g, 80.0mol)로 처리하고. 60℃, 오일욕 속에서 17시간 동안 가열한다. THF를 진공하에 제거하고, 잔사를 에틸 아세테이트에 용해시킨 다음 10% 시트르산. 중탄산나트륨, 물 및 염수로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조시킨다. 여과시키고, 진공하에 증발시킨 다음, 조 생성물을 분리시키고(3.6g) 에틸 아세테이트:헥산으로부터 재결정화한다. 생성물 (+/-) 6-클로로-4-에티닐-4-(1,1,1-트리플루오로메틸)-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온을 백색 결정성 고체(3.22g, 수율 58.4%)로서 분리시킨다. 융점 : 226-727℃

[실시예 3]

(+/-) 6-클로로-4-(1,1,1-트리플루오로메틸)-4-[(3-(1-피롤리디닐))-1-프로피닐]-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(화합물 7)

(+/-) 6-클로롤-4-에티닐-4-(1,1,1-트리플루오로메틸)-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(150mg, 0.544mmol), 피롤리딘(52.2㎕, 0.626mmol), 파라포름알데히드(20.5mg, 0.681mmol), 아세트산(31.1㎕, 0.544mmol) 및 염화제1구리(20.5mg, 디옥산 3.5ml 중의 0.207mmol)의 디옥산 용액을 오일욕 속에서 대략 2시간 동안 50℃로 가열한다. 반응 혼합물을 2N HCl로 급냉시키고, 에틸 아세테이트로 추출한다. 수성층을 고체 탄산칼륨으로 중화시킨 다음, 에틸 아세테이트로 3회 주출한다. 합한 추출물을 물과 염수로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조시켜 조 생성물을 140mg 수득한다. 실리카 겔 상에서 크로마토그래피하여 정제하고 에틸 아세테이트 : 헥산으로부터 재결정화하여 결정성 (+/-) 6-클로로-4-(1,11-트리플루오로메틸)-4-[(3-(1-피롤리디닐))-1-프로피닐]-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(89mg, 수율 46%)을 수득한다. 융점 : 160-161℃(분해).

(+/-) 6-클로로-4-(2-시아노페닐)에티닐-4-(1,1,1-트리플루오로메틸)-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(화합물 2)

무수 THF 3ml 중의 6-클로로-4-에티닐-4-(1,1,1-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(138mg, 0.5mmol) 용액을 -78℃에서 교반시킨다. 이 용액에 헥산 중 2.5M의 n-부틸리튬 0.4ml(1.0mmol)을 가한다. 음이온을 -78℃에서 10분 동안 시효 경과시킨 후 ZnCl₂(에테르 중 IM) 용액 1ml를 가한다. 반응 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반시키고, 빙욕을 제거한 다음, 혼합물을 30분간에 걸쳐 0℃로 서서히 가온시킨다. 반응 혼합물에 THF 2ml 중의 2-요오도벤조니트릴(149mg, 0.65mmol) 용액을 가한 다음, 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐(O)(56mg, 0.05mmol)을 가한다. 반응물을 실온으로 가온시킨 다음, 15시간에 걸쳐 연속적으로 교반시킨다. 반응 혼합물을 2N HCl 10ml로 급냉시키고, EtOAc 200ml로 2회 추출하며, 합한 추출물을 H₂O 및 염수로 차례로 세척한 다음. MgSO₄로 건조시킨다. 용매를 제거하여 오일을 195mg 수득하고, 이를 실리카 겔(헥산 중 20% EtOAc)상에서 섬광 크로마토그래피하여 반응되지 않은 출발 물질 60mg과 커플링된 생성물 35mg을 수득한다. 후자를 에테르로 연마하여 (+/-) 6-클로로-4-(2-시아노페닐)에티닐-4-(1.1,1-트리플루오로메틸 )-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-온을 25mg 수득한다. 융점 : 245-246℃

[실시예 4]

(+/-) 4-(1-클로로-1,1-디플루오로메틸)-4-(2-페닐에티닐)-6-클로로-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(화합물 5)

단계 A : 1-(2-아미노-5-클로로페닐)-2-클로로-2,2-디플루오로에탄온

자기 교반봉, 아르곤 유입구 및 100ml들이 오븐 건조시킨 부가 깔때기가 장착된, 오븐 건조시킨 300ml들이 3구 환저 플라스크에 N-(4-클로로페닐)-2,2-디메틸프로판아미드(10g, 47.2mmol) 및 무수 THF(100ml)를 가한다. 이 용액을 빙욕 속에서 0℃로 냉각시키고 부가 깔때기를 n-부틸리튬(헥산 중 2.5M 용액 38.7ml, 96.8mmol)으로 채운다. 온도를 +5℃ 이하로 유지시키면서 n-부틸리튬 용액을 아미드 용액에 1시간에 걸쳐 서서히 적가한다. 생성된 용액을 0℃에서 1시간 동안 시효 경화시키면, 이때 오렌지색 침전물이 형성된다. 이 혼합물에 에틸 1-클로로-1,1-디플루오로아세테이트(10.2ml, 96.8mmol)를 15분 동안 적가한다. 생성된 청정 용액을 30분 더 시효경화시킨다. 반응물을 5% 수성 HCl로 급냉시킨다. 혼합물을 EtOAc 1ℓ로 희석시킨 다음, 층을 분리시킨다. 유기 상을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키며, 여과한 다음, 진공하에 농축시켜 황색 오일을 160g 수득한다. 이 물질을 3N 수성 HCl 200ml에 현탁시키고, 용액을 24시간 동안 환류하에 가열한다. 냉각시킨 용액을 EtOAc 500ml로 희석시키고, 진한 NH₄OH를 사용하여 혼합물이 염기성이 되도록 한다. 층을 분리시키고, 유기 상을 염수로 세척하며, MgSO₄로 건조시키고, 여과하며, 진공하에 농축시킨 다음, 용출제로서 헥산 중의 15% EtOAc를 사용하여 실리카 겔 350g 상에서 크로마토그래피한다. 크로마토그래피한 물질을 비등 헥산으로부터 재결정화하여 순수한 1-(2-아미노-5-클로로페닐)-2-클로로-2,2-디플루오로에탄온 5.5g을 밝은 황색 결정으로서 수득한다. 융점 : 55-56℃.

단계 B : (+/-) 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-4-페닐-1-클로로-1,1-디플루오로-3-부탄-2-온

교반봉, 아르곤 유입구, 환류 콘덴서 및 격벽(septum)이 장착된, 오븐 건조시킨 100ml들이 3구 환저 플라스크에 에티닐벤젠(2.13g, 20.83mmol), 무수 THF(50ml) 및 에틸 마그네슘 브로마이드(에테르 중 3.0M 용액 6.94ml)를 가한다. 이 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 시효 경화시킨 다음, THF(6ml) 중의 1-(2-아미노-5-클로로페닐)-2-클로로-2,2-디플루오로에탄온(1.00g, 4.17mmol) 용액을 주사기로 가한다. 생성된 오렌지-적색 용액을 주위 온도에서 21.5시간 동안 교반시킨다. 1N HCl(50ml)을 가하여 반응물을 급냉시킨 다음, EtOAc로 희석시킨다. 이어서. 진한 NH₄OH를 사용하여 용액을 염기성이 되도록 한 다음, 충을 분리시킨다. 유기상을 물 및 염수로 세척한다. MgSO₄로 건조시키고, 여과하며, 용매를 진공하에 제거한 다음, 용출제로서 헥산 중의 20% EtOAc를 사용하여 실리카 겔 상에서 크로마토그래피하여 (+/-) 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-4-페닐-1-클로로-1,1-디플루오로-3-부틴-2-올 1.02g을 회백색 고체로서 수득한다.

단계 C : (+/-) 4-(1-클로로-1,1-디플루오로메틸)-4-(2-페닐-에티닐)-6-클로로-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온

교반봉, 환류 콘덴서 및 아르곤 유입구가 장착된 100ml들이 환저 플라스크에 (+/-) 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-4-페닐-1-클로로-1,1-디플루오로-3-부틴-2-올(0.81g, 2.37mmol), 무수 THF(25ml) 및 1,1′-카보닐디이미다졸(1.919g, 11.84mmol)을 가한다. 이 용액을 60℃에서 20시간 동안 가열한다. 냉각시킨 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시킨 다음, 0.5N HCI, H₂O 및 염수로 세척한다. MgSO₄로 건조시키고, 여과하며, 진공하에 용매를 제거하여 오일을 890mg을 수득한다. 이 물질을 용출제로서 헥산 중의 20% EtOAc를 사용하여 실리카 겔 80g 상에서 크로마토그래피한다. 크로마토그래피시킨 물질을 비등 EtOAc-헥산으로부터 재결정화하여 (+/-) 4-(1-클로로-1,1-디플루오로메틸)-4-(2-페닐에티닐)-6-클로로-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온 507mg(58%)을 백색 침상체로서 수득한다. 융점 : 154-155℃

[실시예 5]

(-) 6-클로로-4-페닐에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(화합물 4)

단계 A : 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-4-페닐-1,1,1-트리플루오로-3-부틴-2-올

-78℃에서 THF 50ml 및 헥산(0.043mol) 중의 n-부틸리튬의 2.5N 용액 17.2ml와 페닐아세틸렌(0.044mol) 4.83ml로부터 제조한 리티오 페닐아세틸라이드 용액을 5분에 걸쳐 마그네슘 브로마이드 에테레이트(0.044mol) 11.4g으로 처리한다. 혼합물을 -20℃로 가온시킨 다음. 아르곤하에서 30분 동안 연속적으로 교반시킨다. 이어서, 혼합물을 -60℃로 냉각시키고, THF 25ml 중의 등량의 마그네슘 브로마이드 에테레이트(2.8g. 0.011mol)와 미리 착화시킨 1-(2-아미노-5-클로로)-2,2,2-트리플루오로메틸에탄온 2.5g(0.011mol) 함유 용액을 가한다. 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반시킨 다음, 0℃로 냉각시키고, 포화 염화암모늄 수용액과 물 각각 30ml씩의 혼합물로 적가 처리한다. 혼합물을 에틸 에테르 100ml 분획으로 2회 추출하고, 합한 유기상을 염수로 세척한 다음, MgSO₄로 건조시킨다. 건조제와 용매를 제거하면 오일 6g이 잔류하는데, 이를 헥산 중의 20% EtOAc로 용출시키면서 실리카 겔 상에서 섬광 크로마토그래피하여 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-4-페닐-1,1,1-트리플루오로-3-부틴-2-올을 2.5g 수득한다.

단계 B : (±) 6-클로로-4-페닐에티닐-4-트리클로로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(화합물 12)

무수 THF 300ml 중의 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-4-페닐-1,1,1-트리플루오로-3-부틴-2-올(2.0g, 6.1mmol) 및 1,1′-카보닐디이미다졸 11.0g(12.0mmol)의 용액을 아르곤하 55℃에서 24시간 동안 교반시킨다. 용매를 회전 증발기상에서 제거하고 잔사를 에테르 200ml와 물 400ml 사이에 분별시킨다. 층을 분리시키고 수성층을 에테르로 1회 이상 추출한다. 합한 에테르 추출물을 10% 시트르산 200ml로 2회 세척한 다음, 염수로 세척한 후, MgSO₄로 건조시킨다. 건조제와 용매를 제거하여 조표제 화합물 1.5g(70%)을 오일로서 수득한다. 에테르-헥산으로 연마하여 137℃에서 부분 용융되고 147℃에서 청정한 (±) 6-클로로-4-페닐에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온 875mg을 백색 고체로서 수득한다.

단계 C : 6-클로로-1-(1S)-캄파노일-4-페닐에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온

빙욕 속에서 아르곤하에 교반시킨, 무수 디클로로메탄 600ml에 (±) 6-클로로-4-페닐에티닐-4-트리 플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(2.24g, 6.37mmol), 4-디메틸아미노피리딘(0.10g, 0.8mmol) 및 (-)캄판산 클로라이드(2.07g, 9.55mmol)를 함유하는 용액에 트리에틸아민(2.22ml, 15.9mmol)을 가한다. 냉각 욕을 제거하고 반응을 실온에서 진행시킨다. 박층 크로마토그래피(SiO₂, CHCl₃중의 4% EtOAC)하여 반응을 완료시키고, 용액을 CHC1₃200ml로 희석시키며, 10% 시트르산으로 2회 세척한 다음, 염수로 세척한다. MgSO₄로 건조시킬 때, 용매를 회전 증발기 상에서 제거한 다음, 발포성 잔사를 CHCl₃로 용출시켜 섬광 크로마토그래피한다. 오일로서의 6-클로로-(1S)-캄파노일-4-페닐에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온의 부분입체이성체(I)를 575mg 수득한다.

이어서 혼합 분획[부분입체이성체(I) 및 (II)] 1.52g을 수득한다. 연속적으로 용출시켜 보다 서서히 이동하는 부분입체이성체(II) 680mg을 수득하는데, 이를 에테르/헥산 혼합물로 연마하면 백색 침상체 덩어리가 형성된다. 융점 : 177-178.5℃

섬광 크로마토그래피로부터의 이성체 혼합물 1.52g을 에테르 75ml에 용해시키고 용액을 헥산 50ml으로 용출시킨 다음, 이성체(II) 결정으로 시딩(seeding)한다. 서서히 결정화하여 이성체(II)를 385mg 더 수득하는데, 이를 에테르/헥산으로부터 재결정화하여 HPLC에 의해 부분입체이성체적으로 순수한 물질을 수득(96% 이상)한다.

단계 D : (-) 6-클로로-4-페닐에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온

6-클로로-1-(1S)-캄파노일-4-페닐에티닐-4-트리플루오로메틸-1,2-디하이드로-4H-3,1-벤족사진-2-온(53mg, 0.10mmol)의 결정성 부분입체이성체(II)를 아르곤 대기하 45℃에서 2-프로판을 8ml에 용해시킨다. 이 용액에 K₂CO₃의 10% 수용액 0.27ml를 가한다. 10분 동안 연속적으로 교반시키면, 이때 모든 출발물질이 소모된다(TLC, SiO₂, CHC1₃중의 4% EtOAc). 용액을 진공하에 농축시킨 다음 잔사를 에테르에 흡수시킨다. 0.1N HCl와 염수로 세척한 후, 에테르 용액을 건조시키고(MgSO₄), 여과시키며 진공하에 증발시켜 오일상 고체를 수득하며, 이를 용출제로서 헥산 중의 5%, 2-프로판올을 사용하여 SiO₂크로마토그래피함으로써 정제한다. 에테르/헥산으로부터 (-) 6-클로로-4-페닐에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온을 백색 침상체로서 수득한다. 융점 : 178-179℃;

단계 E : (+) 6-클로로-4-페닐에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(화합물 3)

단계 D에 따르는 방법으로, 단계 C의 비결정성 생성물 부분입체이성체(I)로부터 (+) 6-클로로-4-페닐에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온을 제조한다. 융점 : 178-179℃;

[실시예 6]

(-) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온[(L-743,726, 화합물 37.2)] 및 (+) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(L-743,725)

단계 A : 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-4-사이클로프로필-1,1,1-트리플루오로-3-부틴-2-올

브로모마그네슘 사이클로프로필아세틸리드 용액을, THF 250ml 중의 사이클로프로필아세틸렌 23g(0.348mol)으로부터 1시간 이상에 걸쳐 에테르(0.348mol) 중의 에틸마그네슘 브로마이드 3.0M 용액 116ml를 적가하여 제조한다. 이 용액을 0℃에서 1시간 유지시킨후 47℃에서 3시간 유지시킨다. 0℃까지 재냉각시킨 이 용액에, 5분에 걸쳐 소분량씩 고형물로서 15.56g의 1-(2-아미노-5-클로로페닐)-2,2,2-트리플루오로메틸에탄(0.0696mol)을 가한다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 1.5시간 동안 교반시킨다. 포화 수성 염화암모늄 용액 700ml를 적가하여 반응을 0℃에서 급냉시킨다. 혼합물을 에틸 아세테이트 400ml로 각각 2회 추출한 다음, 혼합된 유기상을 염수로 세척하고 MgSO₄로 건조시킨다. 건조제와 용매를 제거하면 황색 고형물이 수득된다. 이 물질을 비등 헥산(최종 용적 100ml)으로분터 재결정화하여 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-4-사이클로프로필-1,1,1-트리플루오로-3-부틸-2-올을 14.67g 수득한다. 모액을 농축시켜 제2의 생성물(2.1g)을 수득한다. 융점 : 153-154℃.

단계 B : (±) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(L-741,211)

아르곤하 55℃에서 무수 THF 250ml 중의 2-(2-아미노-5-클로로페닐)-4-사이클로프로필-1,1,1-트리플루오로-3-부틴-2-올(15.00g, 0.0518mol) 및 1,1′-카보닐디이미다졸 41.98g(0.259mol)의 용액을 24시간 교반시킨다. 용매를 회전 증발기 상에서 제거하고, 잔사를 에틸 아세테이트 500ml와 물 400ml 사이에 분별화시킨다. 층을 분리시키고 수성상을 에틸 아세테이트로 한번 더 추출한다. 혼합된 에틸 아세테이트 추출물을 2% 수성 HCl, 포화 수성 NaHCO₃및 염수 200ml로 각각 2회 세척한다. MgSO₄로 건조시키고, 여과하며, 진공중에서 용매를 제거하여 표제 화합물 16.42g을 고형물로서 수득한다. 에틸 아세테이트-헥산으로부터 재결정하여 분석적으로 순수한 (±) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온 12.97g을 백색 결정으로서 수득한다. 융점 : 178-180℃

단계 C : 6-클로로-1-(1S)-캄파노일-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온

빙욕중 아르곤하 교반시킨, 무수 DCM 350ml 중의 (±) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(12.97g, 0.041mol), 4-디메틸아미노피리딘(1.02g, 0.0083mol) 및 (-) 캄판산 클로라이드(14.22g, 0.06556mol)를 함유하는 용액에 트리에틸아민(22.84ml, 0.164mol)을 가한다. 냉각욕을 제거하고 실온에서 반응이 진행되도록 한다. 75분후, 박층 크로마토그래피(CHCl₃중 4% EtOAc, SiO₂)로 반응 완료를 판정하고 용액을 CHCl₃500ml로 희석시킨 후 10% 시트르산(2회), 물(1회) 및 염수(1회)로 세척한다. 건조(MgSO₄)시키고, 여과하며 진공중에서 용매를 제거하여 무색 발포체를 잔류시킨다. 이 물질을 비등 헥산 200ml로 연마한다. 실온까지 냉각시키면 목적하는 부분입체이성체성캄파네이트 이미드가 침전된다. 프릿(frit)상에 고형물을 수집하고 소량의 헥산으로 세척하며 진공중에서 건조시켜 6-클로로-1-(1S)-캄파노일-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온 7.79g을 백색 결정으로서 수득한다. 융점 : 164-165℃.

단계 D : (-) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온[L-743,726; 화합물(37.2)]

6-클로로-1-(1S)-캄파노일-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,2-디하이드로-4(H)-3,1-벤족사진-2-온(7.50g, 0.01512mol)을 n-부탄을 150ml에 질소 대기하 60℃에서 용해시킨다. 이 용액에 1N HCl 10ml를 가한다. 이 용액을 60℃에 72시간 유지시킨다. 혼합물을 수성 NaHCO₃로 중화시키고 진공중에서 n-부탄올을 제거한다. 잔사를 THF 150ml에 용해시키고 실온에서 3시간 동안 2N LiOH 50ml로 처리한다. 이 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고 2분량의 물과 1분량의 염수로 세척한다. 건조(MgSO₄)시키고, 여과하며, 진공중에서 용매를 제거하여 백색 고형물을 수득한다. 이 물질을 뜨거운 헥산으로부터 재결정화하여 (-) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온 3.43g을 백색 결정으로서 수득한다. 융점 : 131-132℃;

단계 E : (+) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(L=743,725)

상기의 단계 C로부터의 모액을, 용출제로서 헥산 중의 10% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제한다. 단계 D에 따라, 순수한 목적하지 않는 부분입체이성체(무색 발포체)를 가수분해시킨다. 에난티오머성 벤족사지논인 (+) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온을 백색 결정으로서 수득한다. 융점 : 131-132℃;

[역전사효소 분석]

이 분석은, 재조합 HIV 역 전사효소(HIV RT_R)(또는 기타 RT)에 의한 삼중 수소 처리한 데옥시구아노신 모노포스페이트의, dGTP 및 폴리 r(C)·올리고 d(G)_12-18의 Km값에서 산-침전성 cDNA내로의 혼입을 측정한다. 본 발명의 억제제는 이러한 혼입을 억제한다.

이 분석은, ml당 55mM 트리스(pH 8.2),30mM KCl,30mM MgCl₂, 1mM 디티오트레이톨, 2㎍의 rC:dG_17-18(파마시아 제조), ml당 8mM[³H]dGTP(뉴 잉글랜드 뉴클리어), 0.01% 트리톤 X-100, 50mM 에틸렌 글리콜-비스(β-아미노-에틸 에테르)-N,N,N′,N′-테트라아세트산(EGTA), 1mg의 소혈청 알부민 중에서 수행한다. 37℃에서 60분 배양한 후 산-침전성 물질을 반자동 세포 수거기를 사용하여 유리 섬유 필터상에 수집한다. RT를 함유하는 박테리아 세포 추출물을 분석의 선형 범위 이내로 희석시키고 억제제의 존재 및 부재하에 활성을 측정한다. 이 콜라이내에서 생성된, 정제한 HIV-1 RT 헤테로이량체 또한 대조용으로서 사용된다. 결과는 50%의 억제(IC₅₀wt)를 나타내는 억제제이◎ 농도로서 nmol/l 단위로 나타낸다.

이중 돌연변이 분석(dm : double mutant)을 위해 분석에 A17 RT를 사용한다. A17 RT는 문헌[참조 : Nunberg, J. H. et al., J. Virol 65, 4887(1991)]에 기술된 바와 같이 여러 가지 아미노피리돈에 대해 내성이다. 결과는 nmol/l 단위로 IC₅₀dm으로 측정하였다.

[세포 확산 분석]

세포 배양에서 HIV의 확산 억제는 문헌[참조 : Nunberg, J. H. et al., J. Virol. 65, 4887(1991)]에 따라 측정한다. 이 분석에서, MT-4 T-임파성 세포를 선정한 접종물을 사용하여 HIV-1(달리 나타내지 않는한 야생형)로 감염시키고, 배양물을 24시간 배양한다. 이 시간에 1% 이하의 세포가 간접 면역형광에 의해 양성이 된다. 그후 세포를 철저하게 세척하고 96-웰 배양 접시에 배분시킨다. 연속 2배 희석한 억제제를 각각의 웰에 가하고 추가로 3일간 배양을 지속한다. 후간염 4일째에, 대조용 배양물 중의 100% 세포가 감염되었다. HIV-1 p24 축적은 직접적으로 바이러스 확산과 관련되어 있다. 세포 배양 억제 농도는 감염의 확산을 95% 이상 감소시키는 억제제의 농도 즉, CIC₉₅로서 정의한다.

화합물(37.2)에 대한 결과의 요약

A. 역전사효소 분석 및 세포 확산 분석

B. 약리학적 데이터 :

단백질 결합:98.0% 정상 사람 혈장(HPLC 방법)

* 돌연변이체 K103N 및 Y181C는 약제 내성 HIV-1 역전사효소이다. DM은 이중 돌연변이체로 역전사효소 분석에서 논의한 바와 같다. RT-2는 HIY-2의 역전사효소이다.

[상승효과]

A. HIV-감염된 MT-4 세포 현탁액의 제조

MT 세포를 0일째에 1:1000 희석율의 HIV-1 균주 IIIb 스톡으로 250,000/ml의 농도로 감염시킨다(최종 : 125pg P24/ml; 1일째에 1% 이하의 감염된 세포 및 4일째에 25 내지 100%의 감염된 세포를 수득하기에 충분함). 세포를 감염시키고 다음 배지 중에 배양시킨다: RPM1 1640(위태커 바이오프로덕츠 제조), 10% 불활성 태아 송아지 혈청, 4mM 글루타민(지브코 랩스) 및 1:100 페니실린, 스트렙토마이신(지브코랩스).

혼합물을 37℃, 5% CO₂대기하에서 밤새 배양한다.

B. 억제제로 처리

나노몰 범위 농도의 짝을 이룬 배합물 매트릭스(표 S 참조)를 제조한다. 1일째에, 125㎕의 억제제 분취량을 96-웰 미세역가 세포 배양 플레이트중에 HIV-감엽된 MT-4 세포(웰당 50,000세포)와 동일한 용적으로 가한다. 37℃에서 5% CO₂대기차에 3일간 배양을 지속시킨다.

C. 바이러스 확산의 측정

다채널 피펫기를 사용하여 고정된 세포를 재현탁시키고 125㎕를 별도의 미세역가 플레이트내에 수거한다. 상등액을 HIV p24 항원에 대해 분석한다.

HIV p24 항원의 농도는 하기 기술하는 바와 같이 효소 면역분석으로 측정한다. 측정된 p24 항원의 분취량을 HIV 코어 항원에 대해 특이적인 모노클론성 항체로 피복시킨 미세웰에 가한다. 미세웰을 이 시기에 세척하고 다른 적절한 후속 단계에서 세척한다. 이어서, 바이오티닐화한 HIV 특이적 항체를 가하고, 이어서 접합시킨 스트렙트아비딘-서양고추냉이 퍼옥시다제를 가한다. 첨가된 과산화수소와 테트라메틸벤지딘 기질로부터 발색 반응이 나타난다. 발색도는 HIV p24 항원의 농도에 비례한다.

[상승 작용 정도의 계산]

억제제의 짝을 이룬 배합(표 S 참조)은, 각각의 억제제 단독과 비교하여 또는 각 억제제의 단순한 부가적 억제와 비교하여 바이러스 확산을 현저하게 억제시키는 것으로 나타났다. 따라서. 예를 들어, 726과 AZT가 짝을 이룬 배합은 726 단독 또는, AZT 단독과 비교하여 또는 725 억제와 AZT 억제의 합계와 비교하여 현저하게 증가된 바이러스 확산 억제를 나타내는 것으로 나타났다.

이들 데이터는 다음과 같이 처리되었다.

분획성 억제 농도 비율(FIC : fractional inhibitory concentration)은 문헌[참조 : Elion, et al. J. Biol. Chem. 208 477(1954)]에 따라 계산하였다. 최대의 상승 작용인 FICS의 최소합계를 여러가지 짝을 이룬 조합에 대해 측정하였다. 달리는 평균 FICS의 합계를 계산하였으며, 이것은 평균 상승 작용이다.[표 S 참조], 이같은 결과는 바이러스 확산 억제의 실질적인 상승을 나타낸다. 숫자가 작을수록 상승 작용은 크다.

[표 S]

524는 L-735,524이다. 다른 화합물은 상기 표 C에 정의하였다.

전술한 명세서는 설명을 위해 예로든 실시예로서 본 발명의 원리를 나타내고 있으나, 다음의 청구범위 및 이의 등가물의 범주내에 포함되는 바와 같이, 발명은 일반적인 모든 변형, 적용 또는 개질을 포괄하여 실시할 수 있을 것이다.

Claims

일반식(I)의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염.

상기 식에서, X는 할로이고, X¹은 트리할로메틸 또는 펜타할로에틸이며, Z는 O이고, R은 (a) 비치환되거나 A에 의해 치환된 C_1-8알킬[여기에서, A는 할로, C_3-6사이클로알킬. CN, 하이드록시 C_1-4알콕시, C_2-4알키닐-C_1-4알콕시, 아릴옥시, C_1-4알킬카보닐, 니트로, 디(C_1-2알킬)아미노, C_1-4알킬아미노-C_1-2알킬, 헤테로사이클 또는 아릴티오이다]이거나, (b) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_2-4알케닐이거나, (c) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_2-5알키닐이거나, (d) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_3-4사이클로알킬이다.
유효량의 일반식(II)의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 포함하는, HIV 역전사를 억제하는데 유용한 약제학적 조성물.

상기 식에서, X는 할로이고, X¹은 트리할로메틸; 펜타할로에틸; C_2-5알킬; C_2-5알키닐; C_3-5사이클로알킬 또는 아릴이며, Z는 O 또는 S이고, R은 (a) 비치환되거나 A에 의해 치환된 C_1-8알킬[여기에서, A는 할로, C_3-6사이클로알킬, CN, 하이드록시, C_1-4알콕시, C_2-4알키닐-C_1-4알콕시, 아릴옥시, C_1-4알킬카보닐, 니트로, 디(C_1-2알킬)아미노, C_1-4알킬아미노-C_1-2알킬, 헤테로사이클 또는 아릴티오이다]이거나, (b) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_2-4알케닐이거나, (c) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_2-5알키닐이거나, (d) 비치환되거나 (i) A 또는 (ii) 비치환되거나 A에 의해 치환된 아릴에 의해 치환된 C_3-4사이클로알킬이다.
제1항에 있어서, (-) 6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온, (-) 6-클로로-4-페닐에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온, (+/-) 6-클로로-4-(2-시아노페닐)에티닐-4-(1,1,1-트리플루오로메틸)-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온, (+/-) 4-(1-클로로-1,1-디플루오로메틸)-4-(2-페닐에티닐)-6-클로로-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온 또는 (+/-) 4-(2-[디메틸아미노메틸]에티닐)-4-트리플루오로메틸-6-클로로-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온인 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염.
유효량의 제1항 또는 제3항에 따른 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, HIV 역전사효소를 억제시키는데 유용한 약제학적 조성물.
유효량의 제2항에 따른 일반식(II)의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, HIV 감염의 예방 또는 치료, 또는 AIDS 또는 ARC의 치료에 유용한 약제학적 조성물.
HIV 역전사효소에 대해 생물학적 활성을 갖는 뉴클레오사이드 동족체와 제1항에 따른 일반식(I)의 화합물 또는 제2항에 따른 일반식(II)의 화합물의 배합물.
L-743,726 및 L-735,524[N-(2R)-하이드록시-1(S)-인다닐-2(R)-페닐메틸-4-(S)-하이드록시-5-(1-(4-(3-피리딜메틸)-2(S)-N′-(t-부틸카복스아미도)-피페라지닐))-펜탄아미드 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염]인 AIDS 항바이러스 화합물과 임의로, L-697,661[3-([4,7-디클로로-1,3-벤족사졸-2-일)-메틸]아미노)-5-에틸-6-메틸-피리딘-2(1H)-온], AZT 및 ddI 및 ddC로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 HIV 억제제로 구성된 상승작용성 배합물.
L-743,726인 AIDS 항바이러스 화합물과 L-697,661, AZT, ddI 및 ddC로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 HIV 억제제로 구성된 상승작용성 배합물.
(a) 일정량의 (+/-)-6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(L-741,211)을 제공하는 단계; (b) 단계(a)의 화합물을 분해제와 축합시키는 단계; (c) 생성된 부분입체이성체를 분리시키는 단계; 및 (d) 분해제 개질물을 제거하여 목적하는 화합물을 수득하는 단계들을 포함하여, (-)-6-클로로-4-사이클로프로필에티닐-4-트리플루오로메틸-1,4-디하이드로-2H-3,1-벤족사진-2-온(L-743,726)을 합성하는 방법.
제9항에 있어서, 분해제가 (-)-캄파닐 클로라이드인 방법.
유효량의 제1항에 따른 일반식(I)의 화합물 또는 제3항에 따른 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, HIV 감염의 예방 또는 치료, 또는 AIDS 또는 ARC의 치료에 유용한 약제학적 조성물.
구조식의 화합물 L-735,524 및, 임의로, 3TC(라미부딘), AZT, ddI 및 ddC로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 HIV 역전사효소 억제제와 배합된 유효량의 구조식 (-)의 화합물 L-743,726 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 포함하는, HIV 역전사효소 억제에 유용한 약제학적 조성물.
구조식의 화합물 L-735,524 및, 임의로, 3TC, AZT, ddI 및 ddC로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 HIV 역전사효소 억제제와 배합된 유효량의 구조식 (-)의 화합물, L-743,726 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 포함하는, HIV 감염의 예방 또는 치료, 또는 AIDS 또는 ARC의 치료에 유용한 약제학적 조성물.