BG99383A

BG99383A - Съединения, фармацевтични състави и методи за инхибиране на нiv обратна транскриптаза и за лечениена нiv инфекции, спин или аrс и методи за получаване на съединенията

Info

Publication number: BG99383A
Application number: BG99383A
Authority: BG
Inventors: Steven Young; Susan Britcher; Linda Payne; Lekhanh Tran; Jun. William Lumma
Original assignee: Merck & Co. Inc.
Priority date: 1992-08-07
Filing date: 1995-01-30
Publication date: 1995-09-29
Also published as: WO1994003440A1; NZ255216A; CN1221608A; MX9304775A; LU90709I2; SK16195A3; DE10199013I1; AU4449693A; CN1318031C; NL300032I2; NO2000004I1; GR3034754T3; DE69329608T2; SG52698A1; SK282276B6; SI9300419A; CN1250652A; NO950424D0; ES2151897T3; YU53093A

Abstract

Изобретението се отнася до бензоксазинони с формула в която заместителите имат значенията, посочени в описанието. Съединенията или фармацевтично приемливите им соли като фармацевтични състави със съответните добавки, намират приложение за инхибиране на HIV обратна транскриптаза (включително и на резистентните й видове), за предпазване от инфекция с HIV и лечение на СПИН. Те могат да се прилагат самостоятелно или в комбинация с други противовирусни средства, имуномодулатори, антибиотици или ваксини. Изобретението се отнася и до методи за лечение на СПИН и за предпазванеи лечение на инфекции предизвикани от HIV.

Description

ОБЛАСТ НА ТЕХНИКАТА

Зайката е ©вързана със ваят «а Нерк е номера 18429« I8429IA х 18727. Настоявате заявка е частично продълхеиие на заявката ва Мерк № 18795, регистрирана ва 7 август 1992 г. ♦ U.S.S.M. 07/926,607.

Ретровиругът, означен човеики имунодефицитен вирук (HIV), е етиологичното средство иа комплексното заболяване, което включва прогресивно разграхдахе «а имунната система (придоби* т имунно недостатъчен синдром; СПИН) и деградиране иа централната и периферна нервна система. По-раио този вирус беве известен като ьау, HTLV-iii ик* art. Обца особеност иа ретровнрусиата ренликацня е обратна транскрипция иа РНК генсма чрез вирусно енкоднрана обратна транскринтаза за да се получа ДО вопжя жа HIV последователностите, задължителен етап във вирусното ренлжцжраие. Известно е, че някой съединения са обратни транскржптазии инхибитори и са ефективни средства ври лечението на

WI и подобни заболяваш, например азидотимждин или

AZT.

При проследяване последователността иа HIV се установява присъствието на £21 геи в една отворена четяща рамка/Ratner, L· et. al., nature, 313. 277 ¢1985)/.

Хомологията на аминокиселинната последователност доказва че £21 последователността енкодира обратна транскриптаза, една ендонуклеаза и една HIT протеаза/Toh, н. et а1.,кмво j.4,1267 ¢1985)jPower,Μ.D.et 81.,80101100.231.1567 ¢1986),Pearl,L.H.et al., Заявителите показват, че съединенюгаа тение са инхибитори на НИ обратна транскриптаза. Особено предимство на тези съединения е показаното от тях инхибиране на резистентна HIV обратна транскриптаза.

КРАТКО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО

Описани са съединения с формула I с описаните по-долу значения на заместителите. Тези съединения намират приложение при инхибиране на HIV обратна транкриптаза (и нейните резидентни варианти), при предпазване от зараза е HIV, при лечение на зарази от HIV и за лечение на СПИН и/или arc, . било като съединения или ако е подходящо като тяхнж фармацевтично приемливи соли, под формата на фармацевтични състави, с или без комбинация с други противжвжрусни, антй-инфекциозни, имуномодулжращи средства, антибиотици или ваксини. Дадени са също така методи за лечение на СПИН, методи за предпазване от инфекция с НИ и методи за лечение зарази от HIV.

• е

ПОДРОБЖ) ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО И ПРЕДПОЧИТАНИ

ИЯПМНЕНИЯ

Изобретението се отнася до съединения с формула I, комбинация от тях или тяхни фармацевтично приемливи соли, за инхибиране на HIV обратна транскринтаза и нейните резистентни варианти, при предпазване т лечение на зараза от HIV, както н за лечение на получавания ое придобит имунно дефицитен сидром (СПИН). Съединенията е формула I са следните:

в която1 X означава халоген,

X¹ означава трихалогенметил или пеитахалогенетил;

означава кислород:

I означава (a) С^алкил, незаместен нлк заместен с А н А предаввлява халоген, С^цикло алкил, CN, хидроксилна, С^алкокси, С₂^алкинил-С_1-4алкокс1, арилокси, С^алкилкарбонил, нитро, ди(С_м алкил) амино, С-^алкиламино-С^алкил, хетероциклена или арилтио група;

(b) Сздалкеннл, незаместен или заместен с (I) А или (II) арил, незаместен или заместен с А;

(е) С^алкинил, незаместен яли заместен с (I) А или (II) арил, незаместен нли заместен е А или ·* * (d) циклоалкил, незаместен ш заместен с (I) А или (XI) арил, незаместен или заместен с А, или тяхни фармацевтично приемливи соля.

Изобретението се отнася също така и до фармацевтични състави, намирани приложение за инхмбиране на Ш обратна транскрипция, съдържащи ефективно количество от съединение с формула IX,

II и фармацевтично приемлив носител, в която X означава халоген;

»1

X означава трихалогеиметил; паитахалогенетил; Скалния; C^axKirai С^циклоалкил или арил; 2 означава кислород или сяра;

X означава (a) Сладкия, незаместен или заместен с А, и А представлява халоген, С^циклоалкил, циано, хидрокси, Сладко кси, С^алкинил-С-^алкокси, арнлохси, С^алкилкарбонжл, иитро, ди(С_1<в2алкил)амино, С^алкилаишо-С^алкил, хетеро-» циклиха или аржлтио група;

(b) С^^алкеиил, незаместен иди заместен с (I) А или (II) арил, незаместен или заместен с А;

(c) С_2-5алкинил, незаместен или заместен с • ·

- 5 (I) А Ш (XI) арил, незаместен или заместен © А или (d) С^циклоалкил, незаместен или заместен с (X) А или (XX) арил, незаместен или заместен © А, или тяхии фармацевтично приемливи соли.

Предпочитани са съединенията 37.2, 4, 2, 5 и 24 от таблнца I по-долу, като предпочитанията намаляват по низходяц ред.

Тези съединения имат следната структура:

Съединение 37.2:

(-) 6-хлоро-4-циклопропилетинил-4-трифлуорометил-1 ,4-дихидро-2Н-3,1-бензокоазмн-2-он, което е най-предпочитано: Съединение 4:

• · • · « * S> · · β : >' • .* *- · ·' <S * · »1- :: · J' • » * · « * ’ « · » · · · · · · · * * »’ * • 6 (-) 6-хлоро-4-фенжлетин1д-4-трифлуорометжл-1,4-даждро-2Н~

3,1-бен8Окса8«-2-ов{

Съединение 2:

(+/-) 6-хяоро-4-(2-цианофенил)етинил-4-( I »1 ,1-трифлуорометил)-

1,4-дихидро-2й-3,1-бензоксазин-2-он;

Съединение 5:

(+/-) 4-( I-xxopo-I »1-дифлуорометил)-4-(2-фенил-етинил)-6-хлороIЛ-дахидро-2й-3,1-бензоксазин-2-он?

Съединение 24:

(*/-)

/СН₃ • U ·

- 7 (+/-) 4-(2-/диметиламинометил/ет18ил)-4-трифлуромвтил-6-хлоро1,4-дихидро-2Н-3 ,1-бенаоксаз1К-2-он иля тяхне фармацевтично иряемлива сол.

ТШВД I

X¹	т.т. °C	^1С50 ^1С50 тег. ότη	«<&
5	4	5	6	7
5 -®3	186- 187.5	58 вм	4100 ВМ
мг₅	245- 246	25	480	&Ш
-CF,	178- 179 2900	37000	>200
-»з	η	8.6	69	12
-®2^И	154- 155	12нМ	350 вМ
-®з	225 226	1,700	15КХЮ

• ·

#56 7

“^3	160- 161	91	3*60
-ср₅	183- 184	163	8£70
—CP3	168- 171	83hM	2I0nM

-cr₃	159- 160	18	590
-S-J	185- 186	16	270

-CF3	137 I#7	12	280
-cr₃	157	390ni	I0⁵nM
—CF3	17# 176	130	65Д00

IB- _c

-CT, 29 >10* * 166 • · «

3*56 7

230- _{I900 I900 7g000}®3 2*0

132-®_{5 I5J} 2300 >10®

148-CF, I5aM 2,650нМ 50нМ ^J 149

136-
-CF₃	137	24	25,000
-(3*₃	162- 164	145	IO⁵
-»3	145- X46	860	125,000

15055 3650

151 • · ^N\

IQ

OH /“

-CT₅

131*

133

I300hM>

зороонм

-^3

-cr₃

*

146.5

147.5

122124

224225

203204

118120

166168

10043

220

0.24

550

ЗОТйМ φοο

410

1950 100 >I0⁵ >I0⁵ >I0⁵

II4250ali ISOOiiM >105

3000

101,5

II -

4 5 6 7

140.5

X4I.5

410

4250

'нО	172· 173	5400
	277· 278	3000

16,500 >500,0000

126 ^I8#~ 650 >300,000

185

Ι5Ι·

152

18652 >300,000

5,300

187 • ·

I	2	3	4	5	6 7
37.2(-)	---=^	♦ — ®з		2аМ 85*жМ
⁺измерекмето пМ означава наномода в лмтьр
доиш за съединеннето 58 са посочени	χρι жршюрт·
	/ ТАБЛИЦА II
	Υϊ	jJUs 1
Сьедане ние	I	1 И X¹	т.т. °C	«50 тег.	«50 4«V ^С1095
I	2	3	4	5	6 ?

* —<1	177- 179	136пМ >300,000пМ
	135- 136	510	>300»000пМ
	125- 126	48	29»000

* · ·

5 6 7

I400nM >300_t000nM

206Ι5πΜ >3O0_t000nM 100иМ

207

147560 >300_t000nM

148

186187 ♦! >500,000«M • · ·

- 14 Съединенията οι настоящето изобретение могат да притежават асиметрични центрове и могат да бъдат, освен ако не е специално отбелязано, като рацемати, рацемични смеем или като отделни диастереомери или енантиомери, като воичеи кзомернн форми ее включват в настоящото изобретение. Означението (+/-) включва (+) оптични изомери или (-) оптични изомери или смеси от тях.

Когато някой изменящ се заместител (например I) се появи повече от веднаж в дадена съставна част или във формула I, то неговото значение всеки път е независимо едно от друго и е в съответствие с посочените. Допустими са също така и комбинации от заместителите с тяхните вариращи значения» само ако тези комбинации водят до стабилни съединения.

Използваният тук термин алкил*, освен ако е посочено друго, означава както правовернхни, така и с разклонена верига алифатни въглеводородни групи, притежаващи определен брой въглеродни атоми; алкенил” означава правоверижни или с разклонена верига алкилови групи садържащи поне една въглерод-въглерод двойна връзка; алкинил” означава правоверижни или с разклонена верига алкилови групи притежаващи поне една въглерод-въглерод тройна връзка. Бод халоген” използван тук, се включва флуор, хлор, бром и йод.

Под термина арил, освен ако е отбелязано друго, използван тук, се включва фенил» вафтил, тетрахидронафтил, бифенил, фенантрил, антрил или аценафтил.

Използваният тук термин хетероцикъл или хетероциклен, освен ако е посочено друго, означава стабилен 5- до 7- членен моно циклен или стабилен 8- до Н-членен бицикличен хетероциклен пръстен, който може да е наситен, частично ненаситен кки нена » 15 - .....* *“ ’* **’ ситен ж който еессъстом от въглеродни атоми ж от един до четири хетероатоми подбрани между азот, кислород и сяра. При това азотните и оярижте хетероатоми могат евентуално да оа окжолекж· В горния термин ее включват н бицжклени групи при конто всяка от по-горе дефинираните хетероциклени пръстени е кондензиран към бензеиово ядро. Хетероцнкленият пръстен може да бъде свързан чрез всякж от хетероатомите мля вжлеродните атома, така че да се получи стабилна структура· Примери на такива хетероцикдични елементи са пиперидинил, пиперазинил, 2-оксопиперазинжл, 2-оксопиперидннил, 2-оксопиролидиннл, 2-оксоазепннил, азепиш, пиролил, 4-пипермдояил, ниролидннил, пиразолил, лиразолндинил, имидазолил, имидазолинил, имидазолидинил, пиридил, пираяинил, пиримидинил, пирндазнинл, оксазолил, оксазолидиннл, жзокоазолил, изоксазолидинил, морфоликил, тиазолил, тиазолидинил, азотна золил, хинуклидинил, изотиазолидинил, индолжл, хинолинял, изохинолинид, бензимидвзолил, тжадназолил, бензопиранил, бензотназолил, бензоксазолил, фурил, тетрахидрофурил, бензофуранил, тетрахндропиранил, тиенил, бензотаенил, тиаморфолннил, тиаморфолинил сулфоксид, тнаморфолинил сулфон ж оксадиазолил.

Съединенията от изобретението могат да се синтезират по следните методи:

СХШ I
CI		CI
о	пивалоил хлорид ..........	u
мн_г	метиленхлорид воден HigCOj	«А
1			ч *

• · • »

- 16 I. 2 eq. n-2ubi/THF/0°C

2· CIjCOOBV o°c

3· ЗН нсу температура ма кипене

R-MgBr

-------------------->

тт/ 0° C до температура кипене

I,1*-карбонилдиимидазад

ТНУ/50° с

При еявтезата на бензоксазинитв от изобретението, общият метод обикновено предвижда като краен етап циклизиране на беизеновото ядро. Виж схема 1« Първоначално, аминогрупата иа парахлоранилнна се защитава например с пивалоилхлорид, за да се получи 2. Други, по-малко предпочитай защитни за аминогрупата средства се терц.-бутоксикарбонилва, ацетатна или изовалероил<► *

- 17 ни груии. Около 2 еквивалента алкиллитий след това взаимодейотвуват о 2 като се предпочита нерм.-бутмллитий. Други органометални съединения не са подходящи при този етап на металиране. След това се взаимодействува е CFjCOCCgH^ и ее изсолва за де се поду«!♦

Синтезата на третичиия карбинол 4 ее осъществява като се прибавя Грижярдов реактив към кетона 5. Гринярдовият реактив трябва да бъде сол на двувалентен катион, например или $*** Намерено бе, че моновалентни катиони като И⁺ или Ма*, не са подходящи. Подходящ разтворителя еа тетрахидрофуран или етер, без да се ограничават до тях. Могат да ее използват различни температурни условия между около 0° С и ©тайна температура.

Свързването ма пръстена за да се получат съединенията от изобретението 5 се осъществява с помощта на кондензиращи средства като 1,1*-карбонилдиимидазол, фосген, диметилкарбонат, дифенилкарбонат или дм-(паранитрофенкл)карбонат. Циклизирането може да се иввърши с всяко от тези съединения, както и с много други.

Специфичен етап от схема I е даден на схема IA. На схемата е илюстрирано получрважето на L-74I,211, което е рацемат на съединението 57,2 и е описано в пример 6,

• · ·

1. f n-BuLl/THF

-78° C - СГС/I naa---->

2. EtOOCCPj/O⁰ C

3. 3i hci нри (60© «

№ • « • ·

1,1·*ΟΒΙ/ΪΗ* (99 ©

(1-741,211)

f

Схема II показва метод за получаване на ацетиленови замеотители в 4-та нозиция иа беизоксазиновото ядро· Илюстрирано е метализнрането на съединението £ елед което се прибавя цинкова сол. В реакцията ва Хек ое взползва катализатора тетракие (трифенжлфоофин)паладий (0) комплексиран с Cui, при което се получава £·

СХЕМА Ш

Схема ΙΧΧ илюстрира заместването иа 4-ацетиленовата група @ М-съдържад хетероцикъл. Маниховата реакция вшива кондензи ра не на формалдехид о хетероцикъл, например пиролидин. Замест ването иа крайния въглерод става в присъствието на CuI като катализатор.

• *

- 20 СХШ Π

Et₃N/4-IKAP/CH₂Cl₂

I. Хроматографиране върху силикагел

2· KgCOj/HgO/a-nposaHOM

Схема IV илюстрира разделянето на оптични изомери на съединенията о формула I или с формула II· В този пример, (-) камфанова киселина е разделяното средство. Подходящи са и много други разделяад средства, включително киселинния хлорид на 0-метил бадемената киселина или реактива на Монор· За социалистите в областа е ясно как да разделят такива изомери.

<* » » ·

- 21 Схема IVA илюстрира отделянето ва ]>741,2П при изолирането на Ь-743,726. Век схема Ш н пример 6.

(-)-Камфаиил хлорид

------------------------->

4-ШАР/Вй₃В/СЙС1₃ изкристализиране от хвкеан ------------------------>

(90 %-ен добкв) • ·

L-743,726 еъеджиемие 37.2

СХЕМА V

Ο___Х° ^ГО15 ,

CI

t-BuOK

ШБО

(42 © . Циклопропмл ацетилен ое получава по схема V съгласно пуб ликувам методи като каиримвр С.Е.Нмйвоп et al.» J. Am.Chem.

Soo·. 94, 1158 ¢1972), W.Schoberth et al·» Synthesis, 703 (1972).

Съединенията от изобретението намират приложение при изготвян»· и провеждането на ожити за екраниране на нротивовируони съединения. Така например, съединенията от изобретението се използват аа изолиране на ензимни мутанти, конто са отлични «родства за селекционирано на по-мощни антивируеи съединения. Вещо повече, съединенията от изобретението се нрилагат за установява» не най определяне на местоположението на свързване на други нротивовируеиж венества към HIV обратната транскрижтаза, нанржмвр чрез конкурирано жахибжране. Така, съединенията от изобретението са търговски продукти, които могат да се продават за тези це» ли.

Съединенията от настоящето изобретение са приложими при инхибиране на HIV обратна транскринтаза, за предпазване т лече» ние из инфекция от човешки имунодефицитеи вирус (HIV) н за лече» ние на получаващи се в резултат на него патологични състояния като СПИН. Лечението на СПИН или предпазване от или лечение на инфекции предизвикани от НП ое включват в изобретението, без да го ограничават, тъй като съединенията могат да намерят приложение при много други състояния предизвикани от НП инфекция: СПИН, А1С (еродеи на СПИН комплекс), както симптоматично, така и аеимжтоматично, и актуално или потенциално излагане на НГ7. Така нае пример, съединенията от изобретението могат да се използват при лечение на инфекции от HIV при съмнения от такава зараза например при преливане на кръв, при обмяна на телени течности, при охапвания, при инциденти убождания е игла пш при хирургическа

ί >« * *

- 24 резистентна нам други противовирувни средства като >*@7,661, което представлява 3-(/(4,7-дихлоро-1,3-беизоква8Ол-2-ил)метнл/амжио)-5-етжл-6-метнлниридин-2(1Н)-он или >*@6^29, което е 3-/2-(I,3-бвнзокеавол-2-ил)етил/-5-етил-6-метил-пиридин-2(IH)он или к%.

За теза цш съединенията от изобретението могат да с© прилагат през устата, парентерално (включително като инжекции подкожно, интравеновно, в мускулите и нр. или чрез иифузжонна техника), като спрейове за инхалиране или ректално, като отделни дозировъчии единици във формулировки, съдържащи освен това и нетоксични, фармацевтично приемливи носители, побавъчни свързва щи вещества.

Така, съгласно изобретението, разработен е метод аа лечат и фармачевтичжи състави аа лечат на KIV инфекции

иието предвижда прилагането кам пациент нуждаещ се от такова лечение иа фармацевтичен препарат съдържащ фармацевтичен носител и терапевтично ефективно количество от съединение съгласно настоящето изобретение.

Фармацевтичният състав те да бъде под формата иа суспензии или таблетки аа прилагане през устата, спрейове за пръскане през та, стерилни инжекционни препарати, например, стерилни водни кп маслени суспензии или под формата на супозиториж.

Когато се прилагат през уотата като суспензия, съставите ое приготовляват чрез техника добре позната на специалистите работещи в областта на фармацевтичните формулировки и могат да съдържат микрокристална целулоза за прибавяне на маса, алгинова киселина или натриев алгинат като суспендиращо средство, метилцелулоаа аа увеличаване иа вискозитета к подсладители и/или оцветители, добре познати в областта. В таблетки при конто актив-

- 25 ното вещество се освобождава ведвата, могат да ее съдържат също микрокристална целулоза, двукалциев фосфат, навеете, магнезиев етеарат в лактоза и/или друга пълнители, свързващи вещества, дезинтегратори, разредители и смазващи вещества, известни за тези цели,

Когато се прилагат като аерозол през аоса или чрез инхалиране, съставите ее приготовляват но познат начнв и могат да бъдат като разтвори в солен разтвор, при което се използва бензинов алкохол или друг подходящ консервант, също вещества ускоряващи въгле биоабсорбцията, флуорйбодородн и/или други средства подпомагащи разтварянето или диспергирането.

Инжекционните разтвори или суспензии се формулират по познати начини като се използват нетоксични, приемливи парентерално разредители или разтворители като например маннтол, 1,3-бутанднол, вода, разтвор на Рингер или изотокичен разтвор на натриев хлорид или подходящи диспергиращи и суспендиращи средства, като стерилни недразнещи масла, включително синтетични моно- или даглицериди и мастни киселини, включително олеинова киселина.

Когато се прилагат ректално под формата на супозитории, съставите се приготвят чрез смесвано на лекарственото съединение о подходящ недразнещ пълнител, като какаово масло, синтетични глицеридни естери или полиетилен гликоли, който са твърди при обикновена температура, но ое втечняват и/или разтварят в ректалната кухина и освобождават съединението.

Съединенията от изобретението могат да се прилагат през устата при хора в доза от порядъка ма I до 100 мг/кг телесно тегло в разделни дози. Предпочитана доза е 0.1 до 10 мг/кг телесно тегло през устата разделени на няколко пъти. Др^га предпочитана доза е от порядъка на 0.1 до 20 мг/кг телесно тегло през устата

на няколко пъти разделека. За комбинирано лечение с цуклеозиднн аналози, предпочитаната доза е от порядъка на 0.1 да 20 мг/кг телесно тегло от съединението на изобретението приложена през устата разделена на няколко пъти и 50 мг до 5 г/кг телесно тегло за нуклеозждните аналози, приложени през устата на няколко пъти. Трябва да ое подразбира обаче, че специфичната доза и честотата на приема може да варира при отделните пациенти и ще зависи от различни фактори като например активността на използваното специфично съединение, неговата метаболитна стабилност и продължителността му на действие, от вьзразтта на пациента, телесното МУ тегло, общото му здравословно състояние, пола му, режима му на хранене и начина и времето на приложение, скоростта МУ на изхвърляне, комбинацията от лекарствени средства, сериозността на конкретния случай % лечението на което се подлага болния.

Изобретението се отнася също така и до комбинации от HIV обратна транскриптазн инхибиращи съединения с едно или повече средства прилагани прн лечението на СПИН. Така например, съединенията от изобретението могат ефективно да се прилагат, било в периоди на преди-излагане и/или след излагане, в комбинация с ефективни количества от СПИН антивирусни средства, имуномодулатори, противоиифекциозни средства или ваксини, като тези посочени в таблицата по-долу:

ТАБЛИЦА

ПРОТИВОВИРУСНй СРЕДСТВА

Име на лекарството Производител Индикация

АЬ - 721 Recombinant Human

Ethigen (Los Angeles, СА)

Triton Bioscienoes

ARC, PGL

HIV позитивни,СПИН

СПИН, Kaposi*a

Interferon Beta (Almeda, CA) sarcoma, ARC

Carrington Labs

ARC » * « » * · ‘ * « · е · - ч • · * « t « * * ·· · · · ··· ·· ··*

Име на лекарството	Производител	Индикация
Л	(Irving, TX)	(bx.cw имуномодулатори)
Cytovene	Syntax	лечение на зрението
		CMV
Ganciclovir	(Palo Alto, CA)	периферен СМВ
		ретинит
d4T	Bristol-Myers	СПИН, arc
Didehydrodeoxythymidine	(Hew York, MY)
ddl	Bristol-Myers	СПИН, ARC
Dideoxyinosine	(Mew York, MY)
EL 10	Elan Corp. PLC	HIV инфекция (вх.съ-
	(Gainesville, GA)	що имуномодулатори)
Trieodium	Astra Pharm.	CMV ретинит, HIV ин-
Phosphonoformat e	Produets, Inc.	фекция, други CMV
	(Westborough, MA)	инфекции
Dideoxycytidine;	Hoffman-La Roche	СПШ» ARC
ddC	(Eutley, MJ)
Nevapren	Movaferon Labe,Inc.	HIV инхибктор
	(Akron, OH)
	Diapren, Inc.
	(Roseville, MM,
	marketer)
Peptide T	Peninsula Labs	СШШ
Octapeptide	(Belmont, CA)
Sequence
Zidovudine) AZ®	Burroughs Wellcome	^C™»adv, ARC
	(Rach. Triangle Park	детски СПИН,
	HC)	Kapo.i® мгоии

* * · ·

Име ма лекарството ·· ·· ·· ··· ·· ···

- 28 - Показания

Производител (Индикация)

Ansanycin LK 427

Dextran Sulfate

Virasolo

Ribavirin

Alpha Interferon

Acyclovir

Антитело, което неутрализира pH лаалфа биленЧотклоняващ co ннтерферон в имуноадсорбционна колона

L-697,661

Adria Laboratories (Dublin, OH) Erbamont (Stanford, CT)

Ueno Fine Chen·

Ind· Ltd.

(Osaka, Japan)

Viratek/ICK (Costa Mesa, GA)

Burroughs Wellcone (Rsch« Triangle

Park, IC)

Burroughs Wellcome

Advanced Biotherapy Concepts

Rockville, MB)

Merck (Rahway, SJ) асимптоматичне HIV инфекция, по-малко тежко HIV заболяване, неврологични прояви, в комбинация с лечение ARC

СПИН, 4RC, HIV мзитивен асимптоматичен асимптоматичен HIV позитивен, ^LAS» Kaposi*s sarcoma, HIT в комбинация с

Retrovir

СПИН, ^АЙС» асимптоматичен HIV позитивен,

С АМ В ВДЙГ

СШШ, arc

СПИН, ^ARG· аонмптоматичен HIV позитивен, @w в комбина-

Име на лекарството	- 29 - Производител	Показания
L-696,229	Merck	ция © Ш. СПИН, arc, асимн-
	(Rahway, NJ)	тематичен HIV пози-
Ь-735,524	Merck	тивен, съио в комбинация с AZT. СПИН, arc, асимн-
	(Railway, NJ)	тематичен HIV пози-
AS-1O1	WHO - МОДУЛАТОРИ Wyeth-Ayerst Labs.	тивен, също в комбинация С AZT. СПИН
Bropirimine	(Philadelphia, PA) Upjohn	напреднал СПИН
Acemannan	(Kalamazoo, MI) Carrington Labs.Inc.	СПИН, arc, (вж· ·*-
	(Irving, ΤΣ)	що противовирузни
01246,738	American Cyanamid	средства) СПИН, Kaposi*s
	(Pearl River, NY)	sarcoma
В1Л0	Lederle Labs. (Wayne, NJ) Elan Corp, PLC	НИ инфекция (ви.
	(Gainesville, GA)	също противовирусни)
Gaauaa Interferon	Genentech	ARC, В комбина-
	(S.San Francisco,	ЦИЯ Ο TNJP (тумор
	CA)	некрозисен фактор)
Granulocyte	Genetics Institute	СПИН
Macrophage Colony	(Cambridge, MA)
Stimulating Factor	Sandoz

• · · ·

Име ма лекарството	_w ~ ·· ·· .........* Проиаводител Показания
Granulocyte	(East Hanover, NJ) Hoechst-Roussel СПИН

(Somerville, KJ) Immunex (Seattle, WA)

Granulocyte	Schering-Plough	СПИН
Macrophage Colony	(Madison, KJ)
Stimulating factor		СПИН, в комбинация c ш
HIV Cere Particle	Rorer	серопозитивен HIV
Immunostimulant	(Pt* Washington,PA)
IL-2	Hoffisan-La Rocha	СПИН, arc,НП, в
Interleukin-2	(Nutley, NJ)	комбинация e azt
Immune Globulin	Cutter Biological	детски СПИН, в ком-
Intravenous (human)	(Berkeley, CA)	бинация С AZT
IMREG-1	bareg	СПИН, Kaposi*s
	Mew Orleans, LA)	sarcoma, ARC, PGL
DiREG-2	Imreg	СПИН, Kaposi·s
	(Kew Orleans, LA)	sarcoma, ARC, PGL
Tmuthiol Diethyl	Marie ux Institute	СПИН, ARC
Dithio Carbamate	(Miami, PL)
Alpha-2	Schering Plough	Kaposi⁹a sarooma
Interferon	(Madison, NJ)	c AZTt СПИН
Methionine-	TNI Pharmaceutical	СПИН, ARC
Enkephalin	(Chicago, IL)
MTP-PE	Ciba-Geigy Corp.	Kaposi*a sarcoma
Muramy l-Tripept ide	(Summit, MJ)
Granulocyte	Amgen	СПИН, в комбинация
Colony Stimulating factor	(Thousand Oaks,CA)	⁶ AZT

• · · · • · · ·

Име н& лекарството	Производител	Показания
rem	Genentech	СПИН, arc
Recombinant	(3. San Francisco, CA)
Soluble Human CD4
Recombinant	Biogen	СВИЙ» ARC
Soluble Human GD4	(Cambridge, HA)
Interferon	Hoffman-La Roche	Kaposi’s sarcoma
Alfa 2a	(Nutley, BJ)	СШШ, ARC, в КОИ-
		бинация Q Д2Т
SK&PI06528	Smith,Kline & French	HIV инфекция
Soluble '1'4	Laboratories
	(Philadelphia, PA)
Thymopentin	Immunobiology	HIV инфекция
	Research Institute
	(Annandale, NJ)
Tumor Necroeis	Genentsch	ARC, ^{3 комбяна}“
factor? TL?	(S.San Francisco,CA)	ция c гама интер-

ферон

ПРОТИЮЙНФЕКЦИОЗНЙ СРЕДСТВА

Clindamycin e	Upjohn	PCP
Primaquine	(Kalamasoo, MI)
Fluconazolec	Pfizer	cryptococcal
	(New fork, NX)	meningitis,candidiasis
Pastille	Squibb Corp.	предпазване от
Bystatin Pastille	(Princeton, Nd)	орална candidiasis
Ornidyl	Merrell Dow	PCP
hxlorxu. thine	(Cincinnati, OH)
Pentamidine	LyphoHed	PCP лечение

Isethionate (IM & IV) (Rosemont, IL) Pirltrexim Burroughs Wellcome

PGP лечение • ·

Име на лекарството	Производител	Показания
	(Rsch. Triangle
	Park, HC)
Pentamidine	Pisons Corporation	PCP профилактика
isethionate за	(Bedford, MA)
инхшране
Spiramycin	Rhone-Poulenc	Cryptosporidia1
	Pharmaceutica Is	diarrhea
	(Paine·ton, KJ)
Intraconazole-	Janssen Pharm.	hietoplasmosisj
В51211	(Piscataway, KJ)	cryptococcal ...
		meningitis
Trimetrexate	Warner-Lambert	PCP
	ДРУГИ
Recambinant Human	Ortho Pharm. Corp.	тежка анемия свърз.
Erythropoietin	(Raritan, KJ)	e AZT лечение
Megestrol Acetate	Bristol-Myers	лечение на анорексия
	(law York, BY)	свъз* с СПИН
Total Enteral	Borwich Baton	diarrhea g
nutrition	pharmaceuticals	лоша абсорбцня свър-
	(Borwich, BY)	зано със СПИН

Трябва да се подразбира, че възможните комбинации на съединенията от изобретението с противовирусни, имуномодулиращи, противоинфекцнозни средства иди ваксини срещу СПИН не се ограничава до изброените в горната таблица. Принципно се включват всякакви комбинации с фармацевтични състави използвани при лечението на СПИН. Така например, съединение е формула I или е формула II може подходящо да се прилага в комбинация с нуклеозиден аналог,

- 33 притежаващ известна биологическа активност срещу Ш обратна транскринтаза. Подходящи нуклеозидаи аналози са обикновено вещани терминатори и включват _А2т, _{ddc> ddI> w>}ж 3*-флуоро-2*,3’-дидеокситимидин.

AZT бв синтезира по методи на j. р. Horwita et al., j. Org. Chea. 22, 2076 (1964)$ R. P. Glineki et al., J. Org. Chea. 28» 4299 (1973)| C. K. Chu ·1 al., Tetrahedron batter· 29· 5349 (1968). Приложението xa aztksto лекарствено средство кри терапията на СПИ е описано в САЦ патент 4 724 232.

Съединението ddc©e синтезира по методите xa J.P.

Horwita et al.» J. Org. Chen. 2£> 817 (1967)j R. Marmot® » Chea. Phara. Ball. 22, 128 (1974) И T. S. Lin et al., J. Med. Chem. 2£, 440 (1987).

04T се синтезира io методите описани o«erdewijn, p. et al., J. Med. Chea. 2£· 1270 (1987).

HEPT 06 синтезира so методите xa Miyaeaka, T. et al·» J. Med. Chea., ^2, 2507 (1989) и A. Roaowaky, J. Med. Chea·, 2£, 1177 (1981). Сннтезата xa <*dc, ddi и дзтеъщо е описаха в ЕРО 484071.

Съединението 3»-флуоро-2·,3*-дидеокситимхдия се синтезира

ПО методите иа Herdewijn, Р. et al·, J. Med. Chem.|0,l270 (1987). Съединението 1/ - 735,524 представлява М-(2(2)-хидрокси-1(5)нндапул) -2(А)-фенилметнл-4-(5 )-хидрокси-5-( 1-( 4-( 3-пирндалметнл)2(S )-N»-(трет-бутилкарбоксамидо)-пиперазинил))-пентанамид или негова фармацевтично приемлива сол. L- 697,661 или 4661” представлява 3-(/4,7-дихлоро-1,3-бензоксазол-2-нл)метил/-амино)-5етил-етил-6-метилпиридин-2(1Н)-он; I- 696,229 е 3-/2-( 1,3-бензоксазол-2-нл)-етил/-5-етил-6-метил-пиридин-2(1Н)-он. Сннтезата на 1/-697,661 и Ь-696,229 е описана в ЕРО 484071 и ЕРО 462800.

- 54 Предпочитани комбинации са едновременно· периодично или алтернативно прилагане на 1,-743,726 с или без инхибитор на HIV протеаза. Евентуален трети комжонент в комбинацията е нуклеозиден инхибитор на HIV обратна транскриптаза, като А2Т, ббС или ddl. Предпочитан инхибитор на HIV протеазата е Ь-735,524. Друг предпочитан инхибитор на HIV обратна транскриптаза е Ь-697,661. Тези комбинации могат да имат синергнтичен ефект при ограничаване разпространението на НП; Предпочитани комбинации са следните: (I) Х-743,726 с 1^735:524 и евентуално някой от Ь-697,661, AzT, ddl ои ddC; (2) Ь-743,726 и някой от 1-697,661, AZT, ddl ои ddC.

Влвчени са също така н фармацевтично приемливи соли на тези комбинации.

ПРИМЕР I (+/-) 4-( X,1,1-трифлуоромето) -4-( 1-бутен-4-ил) -6-хлоро-

1,4-дихядро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он (съединение 15)

Етан А:

М-(4-хлорофеиил)-2,2-диметилпропанамид

5 литрова тригърлеиа облодънна колба, снабдена с бъркалка, се прибавя 4-хлороанилнн (127.57 г, X моя), 1200 мл хлороформ 1200 мл наситен воден разтвор на Na^CO^. Към колбата се свързва делителна фуния е в нея се поставя 2,2-диметилпропаноил хлорид (Х29 мл, 1.05 мола). Киселинният хлорид се прибавя на кши към енергично бърканата смес в продължение на X час. Получената смес се бърка при температура на околната среда допълнително още 23 часа. Част от продукта ое отделя от сместа като бяли кристали. Тези кристали се отделят чрез филтруване. Филтратът се прехвърля в делителна фуния и слоевете се разделят. Хлороформеният слой се промива с вода и с наситен воден разтвор на сол. След

- 35 сушене върху магнезиев сулфат, филтруване и отстраняване на разтворителя йод вакуум, се получава допълнително количество от продукта. Двете порции продукт се събират и се прекристализират от кипящ етилдцетат-хексан за да се получат 185.6 г Н-(4~хлорофенвл)-2^-диметилпропанамжд като бялн кристали.

Етап В:

1-(2-амино-5-хлорофенил)-2,2,2-трифлуороетанон

В изсушена в пещ трилнтрова, тригърлена колба с обло дъно, снабдена с бъркалка, вход за аргон и изсушена в пещ 500 милнлитрова делнтелна Фунии, се прибавя М-(4-хлорофенкл)-2^-диметнлпропанамид (100 г, 472 ммола) и сух тетрахидрофуран (I л). Този разтвор се охлажда в ледена баня до 0° С и във фунията се поставя норм-бутнллитнй (387 мл от 2.5 М разтвор в хексан, 968 ммола). Разтворът на норм-бутнллитнй се прибавя бавно на капки към амидния разтвор в продължение на I час като температурата се поддържа под +5° С. Полученият разтвор се оставя да престои при 0° С I час при което се образува оранжева утайка. Към тази смес се прибавя етил Ι,Ι,Ι-трифлуороацетат (115 мл, 968 ммола) на капки в продължение на I час. Полученият бистър разтвор се оставя да престои допълнително още 30 минути. Към реакционната смес се прибавя 5 %-ен воден разтвор на HCI. Сместа се разрежда с X л етилацетат и слоевете се разделят. Органичната фаза се промива еъс солна луга, суши се над магнезиев сулфат, филтрува се и се концентрира под вакуум за да се получат Х60 г жълто масло· То се суспендира в I л 3 N водна HCI и разтворът се нагрява при кипене 24 чаеа. Охладеният разтвор се разрежда с X л етилацетат и сместа се алкализира с концентриран НН^ОН. Слоевете се разделят и органичната фаза се промива със солна луга, суши се над магнезиев сулфат, филтрува се и се концентрира под вакуум. Хро* ·

- 56 матографира се върху 1.5 кг силикагел като за елуент се използва 15 %-ен етилацетат в хексан. Хроматографиракият продукт се прекристализира от кипящ хексан за да се получат 57 г (54 %) чист 1-(2-амино-5-хлорофенил)-2,2^-трифлуороетанон като ярко жълти кристали с т.т. 91 - 92° С. ¹н шн (cdci^i S 6.46 (br β, 2Η), 6.69 (d, 1H, J « 9.2 Η»), 7.32 (dd, 1H, У-2.4, 9.2 Η»), 7.70 (d, J-2.4 Ив).

Етап C:

(+/-) 2-(2-Амино-5-хлорофенил)-1,1,1-трифлуоро-5-хексен-

2-ол

500 милнлитрова тригърлена облодьана колба, изсушена в сушялвя пещ и снабЬна с бъркалка, вход за аргон, делителна фуния н обратен хладник се прибавя магнезий (стружка, 5.05 г, 125 виола) и сух тетрахидрофуран (75 мл). При добро бъркане към тази омес се прибавя 4-бромо-1-бутен (12.0 мл, II8.2I ммола) с такава скорост, че да се поддържа спокойно кипене. След приключване на прибавянето, сместа се оставя да престои 30 минути и след това се охлажда до 0° С на ледена баня. Към този разтвор при добро бъркане ое накапва в продължение на 50 минути разтвор на I(2-амнно-5-хлорофенил)-2,2,2-трифлуороетанон (5.00 г, 22.56 ммола) в тетрахидрофуран (55 мл). Охладителната баня се оставя да се затопли и сместа се бърка 20 часа при температура на околната среда. Към сместа се прибавя,след разреждане с етилацетат, 10 %ен воден разтвор на лимонена киселина. Бърка се 4 часа. Слоевете се разделят и органичната фаза се промива с воден разтвор на натриев бикарбонат и със солна луга. Суши co над магнезиев сулфат, филтрува се и разтворителя се отстранява под вакуум, Хроматографира се върху 300 г силикагел като за елуент се използва 15 % етилацетат в хексан при което се получават 4.80 г (+/-) 2-(2-τι амино-5-хлорофеиил)-1,1,1-трифлуоро-5-хексен-2-ол като жълта твърда маса.

Етап Д (♦/-) 4-(I »Х ,1-трифлуоро ме тил )-4-( 1-бутен-4-ил)-6-хлороI ,4-дмхидро-2Н-3,1-б8Изоксаздн-2-он

В 200 ц^илилитрова облодънна колба снабдена с бъркалка, вход за аргон и обратен хладник ое прибавя (+/-) 2-(2-амино-5хлорофенил)-1,1,1-трифлуоро-5-хексен-2-ол (4.80 г, 17.16 ммола), I,1’-карбонилдиимидазол (13.91 г, 85.81 ммола) и сух тетрахадрофуран (75 мл). Тази смес се нагриза 18 часа при 60° С. Охладената реакционна смес се разрежда с етилацетат и се промива с вода (3 х 200 мл) и оьс солна луга (250 мл). Суши се над магнезиев сулфат, филтрува се и под вакуум се отстранява разтворителя. Прекристализира се от кипящ етилацетат-хексан при което се получават 3.22 г (+/-) 4-(1,1,1-тр1ф1уорометил)-4-(1-бутен-4-ил)6-хлоро-1,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он като бяла кристална маса с т.т. 165 - 166° С.

¹Н MMR (ст₃)| ^1.99 (ж, 1Ж), 2.09 - 2.40 (ж, ЗН), 5.00 (d, 1Ж, J.1.4 Не), 5.03 (dd, 1Н, У.1.4, 7.9), 5.78 (ж, 1Н), 6.85 (d, 1Н, J-8.5 Hz), 7.21 (hr в, 1Н), 7.35 (dd, TH, J-2.2, 8.6 Нв)

9.63 (br 8, 1Н).

ПРИМЕР 2 (+/-) 6-Хлоро-4-етинил-4-( 1,1,1-трифлуорометил)-1,4-дихжд· РО-2Н-3,1-бензоксазин-2-он (съединение 26_______________

Етан А:

2-(2-амино-5-хлорофеиил)-1,1,1-трафлуоро-3-бутин-2-ол

В тригърлена облодънна колба с вместимост 500 мл, снабдена с фуния, вход за аргон и бъркалка, както и дигитален термометър, се поставя етинил магнезиев бромид (0.5 М в хексан; 268 мл, 134 • · · · • · » №

ΜΆΟΖ&) и се охлажда до -78° С. Накапва се разтвор иа 1-(2-амиио-

5-хлорофенил)-2,2 »2-трифлуороетан (6.0 г, 26.8 ммола) в 50 мл тетрахидрофуран в продължение на 15 минути като пра това температурата се поддържа « 55°С. Реакционната смео && бърка 16 часа след като бавно се затопли до стайна температура. Към тъмночервения разтвор се прибавя при -5° С на капки наситен воден разтвор на амониев хлорид (60 мл). Екстрахира се е етилацетат, екстрактите се промиват с 10 %-на лимонена киселина, е наситен разтвор иа натриев бикарбонат, с вода и със солна луга при което се получават 8.5 г суров продукт,след като се суши над натриев сулфат, фнлтрува се и разтворителя се изпарява. Пречиства се чрез мигновение хроматографня като се използва 15 - 20 % етилацетат: хексак. Получава се чист 2-(2-амиио-5-хлорофенил)-1,1,1-трифлуоро-З-бутин-2-ол (5 г светлокафяво масло, 75 % добив).

Етап В:

(+/-) 6-Хлоро-4-етинил-4-( 1,1,Ι-трифлуорометил) -I »4-джхидро-2И-3 Д-бензоксазм-2-он

Разтвор на 2-( 2-а мино-5-хлорофенил )-1,1,1-тряфлуоро-З-бутин

2-ол (5.0 г, 20.0 ммола в тетрахидрофуран (225 мл) взаимодействува с 1,1*-карбонилдяимидазол (13.0 г, 80.0 ммола) и се нагрява на маслена баня при 60° С 17 часа. Тетрахидрофуранът се изпарява под вакуум, остатъкът се разтваря в етилацетат и се прониза с 10 %-на лимонена киселина, с натриев бикарбонат, с вода и със солна луга след което се суши над натриев сулфат. Филтру ва ое и се изпарява под вакуум като се получават 3.6 г суров продукт. Прекристализира се от етилацетат : хексан. Съединението (+/-) 6-хлоро-4-етинжл-4-( 1,1,1-трифлуорометил)-1,4-дихидро

2Н-3,1-бензоксазин-2-он се изолира като бяли кристали (3.22 г,

58.4 %-ен добив) с т.т. 226 - 227° С.

• ♦

¹Н-ИЖ (CDClj * dmso)i J' 3.16 (a, 1H), 6.98 (d, J-3.3 Ha, 1H), 7.35 C®. 1H), 7*51 (e, 1H), 10.66 (β* 1H).

ПРИМКР 3 *- - . - Л (+/-) 6-Хлоро-4-( I ,1, I-трифлуорометил )-4-/( 3-( I-аиролидинил) )-1-пропинил/-1,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он (съединение 7)

Разтвор на (♦/-) 6-хлоро-4-етинил’-4-(1_|1,1-трифлуорометил)-

1,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он (150 мг, 0,544 ммола), пиролидин (52.2 мкл, 0.626 ммола), параформалдехид (20.5 мг, 0.681 ммола), оцетна киселина (31.I мкл, 0.544 ммола) и меден (I) хлорид (20.5 мг, 0.207 ммола) в диоксан(3.5 мл) се нагрява при 50° 0 на маслена баня в продължение на приблизително два часа. Към реакционната смес се прибавя 2 N НС1 и се екстрахира с етилацетат. Водният слой се неутрализира с твърд калиев карбонат и се екстрахира с етилацетат (3 х). Събраните екстракти се промиват с вода и със солев разтвор и след това се сушат над натриев сулфат за да се получат 140 мг суров продукт. Пречиства се хроматографски и се прекристализира от етилацетат : хексан при което се получава кристален (+/-) б-хлоро-4-(1,1,I-трифлуорометил)4-/( 3-(1-пиролидинил))—I—пропизил/—I,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он (89 мг, 46 %-ен добив) с т.т. 160 - 161° С (с разлагаие). ЯМЙ (CDCLjh S 1*85 - 1.89 (a, 4Н), 2.68 2.71 (и, 4Ю, 3.67 (в, 1Н>, 6.88 (d, J-8.55 На, 1Н), 7.40 (dd, J.2.19, 8.54

На, 1Н), 7.55 (s, 1Н). 9.45 (а, 1Н).

(+/-) 6-Хлоро-4-(2-цианофенил)етинил-4-(I,1,1-трифлуорометил)-1,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он (съединение 2)

Разтвор на б-хлоро-4-етинил-4-(1,1,1-трифлуорометил)-1,4 ди:вдро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он (138 мг, 0.5 ммола) в 3 мл сух тетрахидрофуран се бърка при -78° С. Към този разтвор се при- 40 fam 0.4 мл (1.0 ммола) нарм-бутиллитнй, 2.5 М в хексан. Анйонът се оставя да престоя ХО минути при -78° С и след това се прибавя I мл разтвор на цинков двухлорид (ХМ в етер). Реакционната смес се бърка при -78° С 15 минути, ледената баня се отстранява и сместа се оставя бавно в продължение на 50 минути да се затопли до 0° С. Към сместа се прибавя разтвор на 2-йодобензонитрнл (149 мг, 0.65 ммола) в 2 мл тетрахи;

уран и след това тетракжс(трифенилфосфжи)паладий (0) (56 мг, 0.05 ммола). Реакционната смес се затаили да стайна температура и бъркането се продължава още 15 часа. Към реакционната смес се прибавят ХО мл 2 N НС1, екстрахира се 2 х 200 мл етилацетат и събраните екстракти се промиват с вода, със солна луга и се сушат над магнезиев сулфат. Разтворителят се отстранява за да се получат 195 мг масло което се подлага на мигновения хроматография върху силикагел (20 % етилацетат в хексан) за да даде 60 мг от нереагиралия изходен продукт и 55 мг от купелувания продукт. Последният се стрива с етер за да даде 25 мг (+/-) 6-хлоро-4-(2-цнанофенил)етинил-4(1,1,1-трифлуорометжл)-1,4-дихидро-2Н-5,1-бензоксазжн-2-он с т. Т. 245 - 246° С. уд».М8 * 1 377 а/·.

¹Н HMS. (CDCljh S 6.82 - 6.85 (d, J * 8.5 Ня, 1Н), 7.40 7.44 (dd, J«2.1, 8.5 Ня, 1Н), 7.56 . 7.79 (в, 5Н), 8.00 (я, 1Н). ПРИМЕР 4 (+/-) 4-( I-Хлоро-Х ,Ι-дифлуорметил) -4-( 2-фенилетенил) -6хлоро-1,4-дкхидао-2Н-3,1-беизоксазкн-2-он (съединение 5) Етап А!

1-(2-амино-5-хлорофеиил)-2-хлоро-2,2-дифлуоровтанон

В 500 мжлнлитрова облодъиаа колба изсушена в сушилня с три гърла, снабдена с магнитна бъркалка, вход за аргон и 100 ммлилитрова изсушена в сушилня делжтедна фуния, се прибавя II41 (4-хлорофенил)-2,2-диметил пропанамид (Юг, 47.2 ммола) и сух тетрахидрофуран (100 мл). Разтворът се охлажда в ледена баня до 0° С 8 в делителната фуния се поставя нори-бутиллитий (38.7 мл от 2.5 М разтвор в хексан, 96.8 ммола). Бутиллитяевият разтвор се накапва към амидния разтвор бавно в продължение на I час като температурата се поддържа под +5° С. Полученият разтвор се оставя да престои при 0° С един час през което време се образува оранжева утайка. Към тази смес се прибавя на капки в продължение на 15 минути етил Х-хлоро-1,Ι-дифлуороацетат (Х0.2 мл, 96.8 ммола)· Полуденият бистър разтвор престоява още 30 минути· Към реакционната смес се прибавя 5 %-ен воден разтвор на HCI. Сместа се разрежда с I л етилацетат и слоевете се разделят. Органичната фаза се промива със солна луга, суши се над магнезиев сулфат, филтрува се и се концентрира под вакуум за да се получат 160 г жълто масло. Продуктът се суспендира в 200 мл 3 N водна HCI и разтвора се кипи в продължение на 24 часа. Охладеният разтвор се разрежда с 500 мл етилацетат и сместа се алкализира с концентриран NH^OH. Слоевете се разделят и органичната фаза се промива със солна луга, суши се над магнезиев сулфат, филтрува се и се концентрира под вакуум. Хроматографира се върху 350 г силикагел като за елуент се използва 15 % етилацетат в хексан. Хроматографираният продукт се прекристализира от врящ хексан при което се получават 5.5 г чист 1-(2-амино-5-хлорофенил)-2-хлоро-2,2-дифлуороетанон като яркожълти кристали с т.т. 55 - 56° 0.¹н шк (CDCipi §6.43 (br в, 2Н). 6.69 (d. 1Н, J-9.0 Н1), 7.31 (dd. 1Н, «1’2.4, 9.0 Не), 7.80 (d, 1Н, J-2.4 Не).

Етап В:

(+/-) 2-(2-Амино-5-хлорофенил)-4-фенил-1-хлоро-Х,1-дмфлуоро-З-бутин-2-ол

В 100 милилитрова тригърдена облодънна колба снабдена с бъркалка, вход за аргон, обратен хладини и преграда се поставя етинил бензсн (2.13 г, 20.83 ммола), сух тетрахидрофуран (50 мл) и етилмагнезиевбромвд (6.94 мл от 3.0 М разтвор в етер). Тази смес се оставя да престои 2 часа при стайна температура след което със спринцовка се прибавя разтвор на 1-(2-амино-5-хлорофеннл)-2-хлоро-2,2-дифлуороетанан (1.00 г, 4.17 ммола) в тетрахждрофуран(6 мл). Полученият оранжев разтвор се бърка при стайна температура 21.5 часа. Към реакционната смес се прибавя I N HCI и се разрежда с етилацетат. Разтворът се алкализнра с концентриран амоняк и слоевете се разделят. Органичната фаза се промива с вода н със солна луга. Суши се над магнезиев сулфат, филтрува се, разтворителят се отстранява под вакуум и се хроматографира върху силикагел като се използва 20 %-он етилацетат в хексан като елуент. Получават се 1.02 г (+/-) 2-(2-амино-5-хжорофенил)

4-ф8нил-1-хлоро-1,1-дифлуоро-5~бутнн-2-ол като белезникава твър да маса. ¹н шн (CDClj)i S' 4.42 (br з, 2Н), 5.Ю (br S, 1Н), 6.65 (d, 1Н, J«8.5 Hz), 7.15 (dd, 1H, J«2.4, 8.5 He), 7.38 (·, ЗН),

7.55 (m, 2H), 7.70 (d, J»2.4 Ha).

Етап C:

(+/-) 4-(1-Хлоро-1,I-дифлуорометил)-4-(2-фенилетинил)-

6-хлоро-1,4-дихидро~2Н-3,1-бензоксазин-2-он

В 100 мнлнлнтрова облодънна колба снабдена с обратен хладния, вход за аргон и бъркалка се поставя (1/~) 2-(2~амино-5хлорофзнил)-4-фежил-1-хлоро-1,1-дифлуоро-3-бутин-2-ол (0.81 г, 2.37 ммола), сух тетрахидрофуран (25 мл) и 1,1 ’-карбонилдия®дазол (I.9I9 г, 11.84 ммола). Този разтвор се нагрява при 60° С 20 часа. Охладената реакционна смес се разрежда с етилацетат и се промива с 0.5 Н HCI, с вода и със солна луга. Суши се над • · · *

магнезиевсулфат, филтрува се в след отделяне на разтворителя под вакуум се получава 890 мг масло, маслото се хроматографира върху 80 г силикагел като за елуент се използва 20 % етилацетат в хексан. Хроматографираният продукт се прекристализира от кипящ етилацетат-хексан и дава 507 мг (58 © (+/-) 4-(1~хлоро-1,1-дифлу орометил)-4-(2-фенилетинил)-6-хлорс-1₁4-дихидро-2Н-3«1-бенвасасивин-2-он под формата на бяли игли с т.т. 154 - 155° С.

¹Н HMR (CDCl₃)s 5*6.89 (d, 1Н, J*8.4 Η»), 7.35 - 7.48 (а« 4Н),

7.56 (и, 2Н), 7.64 (br е, 1Н), 9.19 (br a, 1Н).

ПРИЮ 5 (-) 6-Хлоро-4-фенилетинил-4-т₽ифлуорометил-1,4-дихидро2Н-3 «Х-бензоксазин-И-он (съединение 4)

Етап А:

2-(2-Амжно~5-хлорофенил)-4~фенил-1 «X «Х-трифлуоро-3бутин-2-ол

Разтвор иа литиев фенилацетилид, получен от 4.83 мл фенчл ацетжлея (0.044 мола) и 17.2 мл 2.5 К разтвор иа норм-бут тий в хексан (0.043 мола) в 50 мл тетрахидрофуран при -78° С взаимодействува с II.4 г магнезиев бромид етерат (0.044 мола) в продължение иа 5 минути. Сместа се оставя да се затопли до -20° С и бъркането в атмосфера на аргон Ge продължава още 3Q минути. След това сместа се охлажда до -60° С и се прибавя разтвор съдържащ 2.5 г (0.0ΙΧ мола) 1-(2-амино-5“Хлоро)-2е2«2-трифлуорметилетанон, предварително комплексиран с един еквивалент (2.8 г, 0.011 мола) магнезиев брошд етерат в 25 мл тетрахидрофуран. Реакционната смес се бърка при 15° един чао преди да се охлади до 0° С. към нея се накапва смес от 30 мл наситен воден разтвор на амониев хлорид и 30 мл вода. Сместа се екстрахира 2 х 100 мл порции от етилов етер, събраните органични фази се промиват • S- · »· » fc· β ♦,»:

• * · » * * * >* » в в « * · ί· » в- № · · &♦ • * · № ί » * 'Λ№ • · · · ·· ··· ·· в··

- 44 със солна луга и се сушат над магнезиев сулфат. След отстраняване на сушилното средство в разтворителите се получават 6 г масло което се подлага на мигновекна хроматография върху' силикагел като се елуира с 20 % етилацетат в хексан. Получават се 2.5 г 2-(2-амино-5-хлорофенил)-А-фених~1,1,1-трифлуорс-3-бутин-2-ол.

¹Н ЖВ (CDCiptS' 4.63 (br з, 311), 6.69 (d, J.8.5 Hz, 1H), 7.15 (d, J«2 Hz, 1H), 7.17 Cd, J*2Hz, 1И), 7.35 - 7.44 (m, 3H), 7.53 - 7.56 (и, 211), 7.66 (d, J*2 Hz, 1H).

TAB MS M r K = 326 m/e.

Етап B:

(*) 6-Хлоро-4-фенилет1нил-4-трифлуорокетил-1,4ДИХИДРО-2И-3Д-бензоксазин-2-он (съединение 12) Разтвор на 2-(2-амино-5-хлорофснил)-4-фенил-1,1,1-трифлуоро-З-бутин-2-ол (2.0 г, 6.1 ммола) и II.0 (12.0 ммола) 1,Х*-карбонилдиямидазсл е 300 мл сух тетрахидрофуран се бърка под аргон при 55° С в продължение на 24 часа. Разтворителят се отстранява на ротационен изпарител и остатъкът се разделя между 200 мл етер и 400 мл вода. Слоевете се разделят и водният се екстрахира цще иедиаж с етер. Събраните етерни екстракти се промиват 2 пъти с по 200 мл 10 %-на лимонена киселина и след това със солна луга. Сушат се над магнезиев сулфат. Филтрува се и се отстранява разтворителя при което се получават 1,5 г (70 %) от съединението от заглавието в суров зид под формата на масло. При orjwване с етер-хексан се получават 875 мг (-) б-моро-4-фснилвтинил4-трифлуорометил-1,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазиа-2-он като бяла твърда маса която се стапя частично при 137° С и цялостно при 147° С. ¹ⁱH шн (CDCl₃)i i 6.92 (d, J«8 Hz, 1Н), 7.30 - 7.49 (ж, 4Я), 7.58 - 7.65 (ш, ЗН), 8.99 (s, 1Н).

• 45

Етап С:

6-Хлоро-1-( 16) -камфаноил-4~фенилетинил-4-трифлуорометил-I,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он

Към разтвор съдържащ (*) 6-хлоро~4-феяилетинил-^1-трифлуорометил-I,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он (2.24 г, 6.37 ммола),

4-диметиламинопириднн (0.10 г, 0.8 ммола) и (-) камфансв киселинен хлорид (2.07 г, 9.55 ммола) в 60 мл сух дихлорметан, при бъркане под аргон и на ледена баня, се прибавя триетиламин (2.22 мл, 15.9 ммола). Охладителната баня се отстранява и реакционната смес се оставя да се затопли до стайна температура. След приключване на реакцията, установява се чрез тънкослойна хроматография (силициев двуокис, 4% етилацетат в хлороформ), разтворът се разрежда с 200 мл хлороформ и се промива два пъти с 10 %-на лимонена киселина и след това със солна луга. След като се суши над магнезиев сулфат, разтворителя се отстранява на ротационен изпарител и пянообразният остатък се подлага на мигновенна хроматография като се елуира с хлороформ. Така се получават 575 мг дмастереомер I на 6-хлоро-(15)-камфаноил-4-фвнилетинил-4-трифлуорометил-1,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он като масло. ¹Н НИЛ (CDC1₃)» S' 0.85 (s, ЗН), 1.08 (в, ЗН), 1.22 (в, ЗН), 1.73 - 1.65 (ж, 1Н), 1.92 - 2.08 (ж, 1Н), 2.50 - 2.67 (ж, 2Н),

7.30 - 7.79 (ж, ад).

Следват 1.52 г смесени фракции (диастереомери I и И). При продължаване на елуирането се получават 680 мг от по-бавно предвижващия се диастереомер (II) от съединението от заглавието който, след стриване със смес от етер/хексан, дава бяли игли с т.т. 177 - 178.5° С. *Н HUR (ODC1₃)| 8* 0.83 (s, ЗН), 1.12 (е, ЗН), 1.23 (в, ЗН), 1.73 - 1.86 (», 1Н), 1.93 - 2.06 (и, 1й), 2.50 -

2.63 (ж, 2Н), 7.38 - 7.51 (ю, 4Н), 7.49 - 7.62 (m, 2Н), 7.72 (d, J«9 Ив, 1Н), 7.76 (d, J«2 Нв, 1Н).

·. 46 - ·* “ ’* **......

Изомерната слее (1.52 г), получена след мигновенната хроматография^се pastваря в 75 мл етер, разтворът се разрежда с 50 мл хексан и след това се поставят зародиши от кристали от изомер

II. След бавно изкристализирай се получават допълнително 385 мг от изомер II, който се прекристализира от етер/хексан за да се получи повече от 96 %-ен диастереометрично чист продукт чрез високоефективна течна хроматография.

Етап Д:

(-) 6-Хлоро-4-фенилетинил-4-трифлуорометил-1,4-дихидро2Н-3Д-бензоксазин-2-он

Кристалният диастереомер (II) на 6-хлоро-1-(15)-камфаножв-

4-фенилетиннл-4-трифлуорометил-1 ,2-дкхидро-4(Н)-3,1-бензоксазин2-он (53 мг, 0.10 ммола) се разтваря в 8 мл 2-пропанол ври 45° С в атмосфера на аргон. Към разтвора се прибавят 0.2? мл 10 %ен воден разтвор на калиев карбонат. Бъркането продължава още 10 минути през което време цялият изходен продукт е изконсумиран (тънкослойна хроматография, силициев двуокис, 4 % етилацетат във хлороформ), Разтворът се концентрира под вакуум и остатъка се разтворя в етер. След промиване с 0.1 N ПС1 и със солна луга, етерният разтвор се суши над магнезиев суафат, филтрува се и ое изпарява под вакуум за да се получи маслообразен твърд продукт, който се пречиства чрез хроматографиране върху силициев двуокис и елуира с 5 %-ен 2-пропанол в хексан. (-) б-Хлоро-4фенилетиннл-4-трифлуорометил-1,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксаз^тлН-2он се получава като били иглести кристали от етер/хексан с т.т. 178 - 179° С; /</_D ²⁰ « -92.5° (CHCIj, с « 0.0012 г мл“¹);

^гн КМВ (СВСХ₃)1 ί 6.87 (d, J.8.5 He, 1H), 7.3V - 7.50 (и, 4H),

7.56 - 7.63 (и, ЗН), 8.60 (β, 1Н).

Етан Е:

(+) 6-Хлоро-4-фенилетинил-4-трифлуорометил 1,4-дихидро• *

- 47 2й-3,1-беизоксази-2-он (съединение 3) (+) 6-Хлоро-4-фенилетиннл-4-трифлуорометил-1,4-дихмдро2Н-3,1-бензоксазин-2-он се получава от некристалиия продукт от етап С, диастереомер I, по иачпа на етап Д. Т.т. 178 - 179° С X//²⁰ = «в?.6° <CHCI₃, С х 0.0050 г ИД^_4 ¹Н ЯШ (CDCXj)t 5^.87 (d, J«8.5 Η», 1H), 7.37 - 7·50 (®» 4Н),

7.56 - 7.63 (» ЗН), 8.60 (в, 1Н).

ПРИМЕР 6 (-) 6-Хлоро-4-циклопропнлетиннл-4-трифлуорометил-1,4-дахидро-21-3,1-бензоксазин-2-он (Ь-743,726, Съединение 37.2) и (+) 6-хлоро-4-циклопропилетинил-4-трифлуорометил-1,4дихидро-гН-ЗД-бензоксазин^-он (>743,725)

Етап А:

2- (2-Амино-5-хлорофенил)-4-циклопропил-1,1,1-трифлуоро-

3- бутин~2-ол

Разтвор на броммагнезиев циклопропилацетжлид се получава от 23 г циклопропилацетялен (0.348 та) в 250 ш тетрахидрофуран чрез накапване на 116 мл 3.0 М разтвор на етилмагиезиев бромнд в етер (0.348 мола) в продължение на еднн час. Разтворът се държи при 0° С едни час н след това при 40° С още три часа. Охлажда се до 0° С н към него се прибавя като твърдо вещество I(2-амино-5-хлорофенил)-2,2,2-трифлуорометилетанон (0.0696 мола,

15.56 г), на порции в продължение на 5 минути. Реакционната смес се бърка 1.5 часа при 0° С. Към реакционната смес се накапватпри 0° С 700 мл наситен воден разтвор на амониев хлорид. Сместа се екстрахира 2 х 400 мл етилацетат, събраните органични фази се промиват със солна луга и се сушат над магнезиев сулфат. След отстраняване на магензиевия сулфат и на разтворителите се получава жълта твърда маса. Тя се прекристализира от кипящ хексан • · ·

- 48 (100 мл краен обем) за да се получат 14.67 г 2-(2-амино-5-хлорофеинл)-4-цнклонроши-Х,1,1-трифлуоро-3-бутжн-2-ол. Допълнително количество се получава при концентриране на матерните луги. Т.т. 153 - 154° С._ ¹Н ш (CDCljh $ 0.84 (и, 2Н), 0.90 (ж, 21), 1.38 (ж, 11), 4.50 (br а, 31), 6.69 (d, J.8.5 Ни, 11), 7.13 (dd, J« 2.8, 8.5 Ни, 11), 7.55 (d, J«2.5 Ни, 1H).

Етап В:

(*) б*Шро-4-циоопрошаетгал-4-трифдуоромет1л*Х,4-днхидро-2И-3,1-беизоксазин-2-он (L- 741,211)

Разтвор на 2-(2-амино-5-хлорофенил)-4-циклопропил-1,1,1трифлуоро-З-бутин-2-ол (15.00 г, 0.0518 мола) и 41.98 г (0.259 мола) 1,1»-карбонялдипп|дазол в 250 мл сух тетрахидрофуран ое бърка в атмосфера si аргон при 55° С в продължение на 24 часа. Разтворителят се отстранява на ротационен изпарител и остатъка се разделя между 500 мл етилацетат и 400 мл вода. Слоевете се разделят и водната фаза се екстрахира още веднаж с етилацетат. Събраните етилацетатии екстракти се промиват с 2 х 200 мл 2 % водна МСХ, а наситен воден разтвор на натриев бикарбонат и със солна луга. Суши се над магнезиев сулфат, филтрува се и след отстраняване на разтворителя под вакуум се получават 16.42 г от съединението от заглавието като твърд продукт. След прекристализиране от етилацетат се получават 12.97 г аналитично чист (*) 6-хлоро-4-циклопропилетинил-4-трифлуорометжл-1,4-дихидро-2Н-3,Хбеизоксазин-2-он като бяли кристали с т.т. Х78 « 180° С.

¹н ЯН (CDCl₃)t $0.85 (в, 21), 0.94 (ж, 21), 1.40 (ж, 11), 6.81 (d, J.8.5 Ни, 11), 7.37 (dd, J.2.5, 8.5 In, 1H), 7.49 (d, J.2.5 in, 11), 8.87 (br s, 1H).

Етан C:

6—Хлоро—I—(x )-камфаноил-4-циклопропилетииил-4-трифлуорометкл-Х,4-дихядро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он • · « ·

Към разтвор съдържащ (*) б-хлоро-А-циклоарошие* трифлуорометнл-1,4-дихждро-2Н-3,1-бекзокоа8ЖИ-2-ож (Х2»97 Г, ζ

0.041 мола), 4~диметжламиномриджн (I.Q2 г, 0.0083 мела) и (-) канфанов киселинен хлорид (14.22 г, 0.06556 мола) в 350 мл сух дихлорометан, при бъркаме под аргон ма ледена баня се прибавя триетиламин (22.84 мл, 0.164 мола). Охладителната баня се отстранява и реакцията се остава да допротече при стайна температура. След 75 минути чрез тънкослойна хроматография се установява приключването на реакцията (силициев двуокис, 4 % етилацетат в хлороформ). Разтворът се разрежда с 500 мл хлороформ и се промива е ΧΘ %-на лимонена киселина (2 х), с вода (I х) в със солна луга (X х). Суши с_е над магнезиев сулфат, филтрува се и разтворите ля се отстранява под вакуум при което се получава безцветна шуплеста маса. Тя се стрива с 200 мл кипящ хексан. След охлаждане до стайна температура, желания джастереомерен камфаиат жмжд се ута ява. Твърдата фаза се фжлтраве, промива се с малко студен хексан н се qjum вод вакуум за да се получат 7.79 г 6-хлоро-1-(1$)-кам фаиожл-4-Ц1клопропжлетжнжл-4-трифлуорометил-1,4-дихждро-2Н-3,1бензоксазжн-2-он като бялн кристали. Т.т. 164 - 1<5° С. Чистота установена чрез високоефективна течна хроматография (

99.2 %@ 254 ни. ¹Н MR (CDCljh S' 0.77 (в, ЗН), 0.86 - 0.96 (и, 4Н), 1.08 (·, ЗН), 1.19 (е, ЗН), 1.44 (в, 1Н), 1.76 (а, 1Н),

1.95 (в, 1Н), 2.51 (в, 2Н), 7.42 (dd, J-2.4, 9.0 Ни, 1Н), 7.63 (в, 2Н).

Етан Д:

(-) 6-ХЛОрО-4-ЦЖКЛОПрОПЖЛеТЖИЖЛ-4-ТрифлуОрОМеТНЛ-1,4джхждро-2Н-3,1-бензоксазжн-2-он (L- 743,726, съединеиие 37.2)_______________________________________________

6-Хлоро-Х-(1 )-камфажожл-4-цжклопропилетннил-4-трифжуорометал-1,2-дихждро-4(й)-3,1-бекзоксазии-2-он (7.50 г, 0.015X2 • ·

- 50 мола) се разтваря в 150 мл норм-бутанол при 60° С в атмосфера на аргон· Към този разтвор се прибавят 10 мл I N HCI. Разтворът се държи при 60° С 72 часа. Сместа се неутрализира с воден натриев бикарбонат и норм-бутанол се отстранява под вакуум. Остатъкът се разтваря в 150 мл тетрахидрсфуран и се взаимодейства с 50 мл 2 Μ ΙίΟΗ в продължение на 3 часа при стайна температура. Тази смес ее разрежда е етилацетат и се промива е две порции вода и е една солна луга. Суии се над магнезиев сулфат, филтрува ее и под вакуум ее отстранява разтворителя при което се получава бяла твърда маса. Тя ее прекристализира от горещ хексан за да даде 3.43 г (-) 6-хлоро-4-циклопросилетинил-4-трифлуорометил-

1,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазии-2-он като бяли кристали е т.т.

131 - 132° С; K/_D ²⁰ » - 84.7° (Ж1_р е = 0.005 г мл”¹);

¹Н HMR (CDCljh S' 0.85 (m, 2Н), 0.94 (в, 2Н), 1.40 (в, 1Н), 6.81 (d, J«8.5 Нв, 1H), 7.37 (dd, J-2.5, 8.5 Hz, 1H), 7.49 (d, У-2.5 Hz, 1H), 8.87 (br s, 1H).

Етап E:

(+) 6-Хлоро-4-циклопропилетинил-4-трифлуорометпл-1,4дихидро-2Н-3,1-беизоксазин-2-он (L- 743,725) Матерните луги от esans С по-горе се пречистват чрез колонна хроматография върху силикагел като за елуент се използва 10 %-ен етилацетат в хексан. Чистият, нежелан джастереомер (безцветна шуплеста маса) ее хидролизира но начина описан в етап Д. Енантиомернжят бензоксазинон, (+) 6-хлоро*-4-циклопропилетииил-4трифлуорометил-1,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазик-2-ок, се получава като 6ш кристали с т.т. 131 - 132° Cj /с£ /₀ ²⁰ « + 84.4° CHCIj, 0 « 0.005 Г мл¹) ^tH № (CDCX₃)i §*0.85 (*» 2Н), 0.94 (в, 2Н), 1.40 (в, 1Н>, 6.81 (d, J-8.5 Нв, 1Н), 7.37 (dd, J.2.5 Нв, 1К), 7.49 (d, J.2.5 Нв, 1Н), 8.87 (br в, 1H).

• ·

- 51 ОПИТ ЗА ОБРАТНА ТРАНСКРИПТАЗА

При изследването се измерва инкорпорирането на тритииран з деокопгуанозин монофосфат чрез рекомбинантна HIV обратна транскриптаза (НП ITg) ( или друга IT) в киселинно утаяваща се сДНК яри I_m стойности иа ^<δτρ и поли r(c).oU«© d(c>₁₂ _ _1g. Инхибиторите от настоящето изобретение инхибират това инкорпори ране.

Изпитанията се провеждат в 55 мМ трие (pH 8.2)-30 мй KCI30 мй MjC^-ImM дитиотреитол-20 мкг ^*^d^2-ie ⁸⁸ мл-8 /³Н/ ай? (И.» England Sunlaar) -O.QI % ТрИОН Χ-ΙΟΟ - 50 ММ етиленгликол-бис(уб-амино-етил етер)- Н,£1,П*,ТР-тетраоцетна киселина ( вота) - I мг говежди серумен албумин в мл. След 60 минути инкубиране при 37° С, ккселинно-утаявящият се продукт се събира върху стъклен фибърен филтър при използването на полуавтоматичен клетъчен събирач· Бактериалните клетъчни екстракти съдържащи IT се разреждат в линеарен порядък съгласно опита и активността се определя в присъствие и в отсъствие на инхнбитор. ПречжстенаНП-! IT хетеродимер, получена в в, coll също се използва за контрола· Резултатите са дадени като концентрация на инхибитора която дава 50 $-но инхибиране (IC^q тегловно), в наномола за литър·

При двойно мутантното изпитание ( d_B) в опита ее използва AI72T. AI7IT е резистентна към различни аминопиридони, както е описано ОТ Nunberg, J. Н. ci al., J. Virol· 6£, 4867 (1991).

Резултатите oe измерват като d_B в наномола за литър.

ИЗПИТАНИЯ ЗА РАЗПРОСТРАТ

В ПЕТКА

Инхибиране разпространението на HIV в клетъчна култура ©е измерва съгласно Ktmberg, J. Н. at al.,J. Virol. б£, 4887 (1991). При това изпитание, МТ-4 Т-лимфоидни клетки се инфектират о

- 52 HIV-Ι (див тип, освен ако е казако друго) чрез използване на предопределен инокулум и културите се инкубират в продължение на 24 часа» След това време £ I % от клетките са позитивни при индиректна имунофлуоресценция, След това клетките се промиват интензивно и се разпределят в културални панмчки с 96 кладенчета. Код кладенчетата се прибавят сериини двукратни разреждания на

вьртня ден след инфектирането, 100 % от клетките в контролните култури се инфектират. Кумулирането на HXV-I р24 е в директна корелация с разпространението на вируса. Инхибирамата концен трация на клетърната култура се определя като тази инхибираща концентрация в наномола за литър, която намалява разпространението не инфекцията най-малко с 95 или С1С^.

РЕЗУЛТАТИ ЗА СЪЕДИНЕНИЕ 57.2

А» Изпитания за обратна траискриптаза н разпространение в клетка

WT KI0JN* У181С DM ГГ-2

ICjj/hkM) 0.002 0.030 0.008 0.085

ИС^икМ) <0.006(Ν·ώ) 0.100 0.025 0.400

В. Фармакологични данни

80.8

NJ>

~т

Резуз: Хмг кг i.v. гЮмин

МГ КГ*¹ ₽·ο. (hope 4«uUg24 $ ^С241Г¹·**^

Ο.В.-Ο.55 (а.о.с.)

Протеиново свързване: 98.0 % нормална човешка плазма (ВЕХТ метод) w Мутантите ΚΙ05Ν н У181С са резистентни по отношение на лекарства HIV-Ι обратни траискриитази. τΑί е двойния мутант, как• *

- 53 както в обсъден в изпитанията за обратна транскриптаза. STK- 2 е обратната гранскридтаза на HIV-2.

синжтачни вжтй

A. Получаване на суспензия от HIV-инфектиранн МТ-4 клетки

МТ клетки ое инфектират в деня 0 в концентрация 250 000 за мл с 1:1000 разреждане на HIV-Ι щам ШЬ серия (крайно 125 р^ р 24/ил; достатъчно за да даде 6 I % заразени клетки в ден първи и 25 - 100 $ в ден четвърти). Клетките се заразяват и отглеждан в следната среда: IPMI Шо (wittaker Bioprod.), 10 % ииактивиран зародииен говежди серум, 4 мМ глутамин (Gibeo Lab®) и 1:100 пеницилин - стрептомицин ( Gibeo Labe).

Сместа се инкубира една нощ при 37° С в атмосфера на 5 % О)₂.

B. Въздействие е инхибитори двойни

Подготвя се матрица от наномоларни концентрации от нафтови комбинации (виж таблица 5)· В първия ден ое прибавят аликвотии части от 125 мкл от инхибитормте към равни обеми от иафеяжрани с HIV МТ-4 клетки (50 000 за кладекче) в 96 - кладенчова микротитълна клетъчна плочка. Инкубирането продължава 3 дни при 37° С в 5 %-на С0₂ атмосфера.

C. Измерване разпространението на вируса

Като се използва многоканален пипетор, утаените клетки се суспендират отново и 125 мкл се събират в отделна микротитърна рлочка. Горната течност се изпитва за HIV р24 антиген.

Концентрацията на HIV р24 се измерва чрез ензимно имуноизпитване както следва: Аликвотии части от р24 антиген който ще се измерва ее поставят в микрокладвнчета покрити с моноклонално антитело специфично за HIV сърцевинен антиген. Микрокладеичетата се промиват в тази точка и в други подходящи етапи които • ·

следват. След това се прибавя биотинилирано HIV-спецяфнчно ентитело последвано от кошогирана стрепавидин - хрян пероксидаза. Появява се цветна реакция в резултат на прибавения водороден прекис и тетраметилбеизида субстрат. Интензитета на оцветяването е пропорционален на концентрацията на HIV р24 антигена.

Изчисляване степента на сннергизъм

Намерено бе, че двойните комбинации ая инхибитори (виж таблица 5) проявяват значително ускорена инхибиция на разпространението на вируса в сравнение с отделните инхибитори приложени самостоятелно или в сравнение с чисто сумарното инхибиране на всеки от тях. Така например, двойната комбинация от 726 и AZT бе намерено че проявява значително ускорено инхибиране на разпространението на вирука в сравнение с 726 самостоятелно или AZT самостоятелно яли в сравнение на сумата от инхибирането на 726 и AZTТези данни се получават по следния начин:

Фракционните инхибиращи концентрации (FIC) се изчисляват съгласно Elion, et el., J. Biol. Chen., 2Q8. 477 (1954). Минималната сума от figs, която представлява максималния синергизам, се определя за различни двойни комбинации. Алтернативно, изчислява се и средната сума от fics, което представлява сродния оинергизъм. Вия таблица s. Тези резултати показват съществен синергизъм при инхибиране разпространението на вируса. Колкото е по-малко числото, толкова е по-голям синергизва.

ТАБЛИЦА S

Двойни комбинации

726 t ddi

726 + AZT

726 + 524

726 f 524 f AZT

Среден оинергизъм

0.81

0.62

0.65 »» *

- 55 524 e L- 735,524. Другите съединения са описани в таблица С по-горе.

Горното описани© дева представа за принципите на настоящето изобретение, като примерите имат за цел да го илюстрират. Трябва да се подразбира, че в него се включват всички обичайни вариации, адаптации или модификации, които попадат в обхвата на следваните претенции.

Claims

Патентни претенции

I. Съединение с формула:

в която: X означава халоген,

X¹ означава трихалогенметил или пентахалогенетил;
2 означава 0;

1 означава:

(а) С^алкил, незаместен или заместен е А и А представлява халоген, С^циклоалкил, CN, хидрокси, С^алкокси, С₂_^алкиижл-С^алкокси, арилокси, С^алкилкарбонжл, нитро, ди(С_1в2алкил) амино, Сj^axкиламино-С-^алкжл, хетероцикъл или арилтиогрупа (b) С^алкеиил, не заместена или заместена с (I) А или (II) арил, незаместен или заместен е А (c) С^алкинил, незаместен или заместен с (I) А или (II) арил, незаместен или заместен с А илж (б) С^дЦиклоалкил. незаместен или Заместен е (I) А или (II) арил, незаместен или заместен с А, или тяхна фармацевтично приемлива сол.

2. Фармацевтичен състав приложим за инхибиране HIV обратна транскрипция, съдържащ ефективно количество от съединение • · · ·

е формула II * · » · » ♦' » * ♦ ♦ « » . V «. « ft * * * · « * »' · » * - Λ ·♦*.»*; й ·· · · · · ·»· · · · * tt - 2 - Y А , X , ¹¹ 11 ^z ⁽н В която и фармакавтмчно ириемлмв носител

W·

X означава халоген означава трихалогенметил, пентахвлогенетта, (^^алкнл, ^алкинта, С^циклоалкта таи арил;

Z означава 0 там S

1 означава (a) С^алкнл, незаместен там заместен с А и А е халоген» циклоалкнл» CN, хидрокси» С-^алкокси» С^алкюта-Сздтакотак, артаотаи, С^алкнлкарбокта» нитро, диСС^алкюОамино, С^алкиламняо-С·^ алкил, хетероцнкъл тан арялтиогрупа (b) С₂^алкенил» незаместен тан заместен с (I) А тан (II) арил» незаместен таи заместен с А;

(е) С^алнинта, незаместен таи заместен е (I) А таи (II) арил, незаместен таи заметен о А нлн (d) С^цмклоалкил, незаместен нлн заместен е (I) А тан (II) арил, незаместен тан заместен е А, таи тяхна фармацевтично приемлива сол· • *

-
3 3. Съединение, което представлява (-) 6-хлоро-4-циклопропилетиюи-4-трифлуоромея1л-1,4-дмхидро-2П-3 ,1-бвизоксазин-2-ои , (-) б-хлоро-4-фенилетию-4-трнфлуорометил-1,4-дихидро2Н-3,1-бензоксазин-2-он, (+/-) 6-хлоро-4-(2-оданофенил)етинил-4-(I,1,1-тржфлуорометил)-1,4-джхндро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он, (+/-) 4-( 1-хлоро-1,Ι-дифлуорометжл) -4-(2-фенилетинжл)-6хлоро-I,4-дихждро-2Н-3,1-бензоксазжн-2-он или (+/·) 4-(2-/даметиламднометил7етинил)-4-трифлуорометил-6хлоро-I,4-дихидро-2Н-3 ,1-бензоксазин-2-он или тяхна фармацевтично приемлива сол·
4· Метод за инхибиране HIV обратна транскриптаза,сьстояд се в прилагаме към бозайник ефективно количество от съединение с формула I или II съгласно претенция 3·
5. Метод за предпазване от инфекция с HIV или за лечение на инфекция от HIV или за лечение на СПИН или АК, състоящ се в прилагане към бозайник на ефективно количество от съединение с формула I нли II съгласно претенция 3·
6· Фармацевтичен състав приложим за инхибиране на HIV обратна транскриптаза, състоящ се от ефективно количество от съединение съгласно всяка от претенциите 1,2 или 3 и фармацевтично приемлив носител·
7. Фармацевтичен състав приложим за предпазване или лечение на инфекция от HIV или за лечение на СЕЛИ или АЕС, съдържащ ефективно количество от съединение с формула I или с формула II или съгласно претенция 3 и фармацевтично приемлив носител.
8. Комбинация иа съединение с формула I или II с нуклео- • · · * заден аналог притежаващ биологическа активност срещу НП обрат на траискриптаза.
9. Синергитична комбинация от противовируснн съединения срещу СПИН каквито са Ь-743,726 и 1>735^>24 и евентуално един или повече НП инхибитори подбрани от групата състояща се от L-697,661, AZT, ббХ или оюС.
10. Синергитична комбинация между противовирусиа съединения срещу СПИН, каквото е L-743,726 и един или повече НП инхибитора подбрани от групата състояща се от Ir697,66I, АхТ, <М1 или (МС.

(а)

IX. Метод за синтезиране на (-) 6-хлоро-4-циклопропилетинил-4-арифлуорометил-1,4-дихидро-2Н-3,1-бензоксазин-2-он ( 743,726), състоящ се в осигуряване на количество от (♦/-) 6-хлоро-4-щклопронадетинил-4-трифлуорометил-1,4-дихидро-2Н-3,1-бенз(1^741^11);

на съединенията от етап (а) с разтварящо оксазин-2-он «0 кондензиране средство;

(е) (0) разделяне на отстраняване получените диастереомери;

на модификацията от разтварящото средство

12.

средство за да се получи желаното съединение.

Метод съгласно претенция XI, при който разтварящото е (-) камфанил хлорид.