FI111727B - Menetelmä antiparasiittisten yhdisteiden valmistamiseksi - Google Patents

Description

111727

Menetelmä antiparasiittisten yhdisteiden valmistamiseksi Tämä keksintö koskee uusien antiparasiittisten yhdisteiden valmistusta, joilla on kaava (I) 5 OCH3 R1 HO^X k/*3 ^ | f*3 H 22X\ y—°\ Xr2

io h3c o p~~o u K

h L J M

H3C^ll

L

I ohJ/H (i) 15 ur»

N

OR4 20 jossa asemassa 22 - 23 oleva katkoviiva edustaa vaihtoeh- V.· toista (kaksois)sidosta, jolloin molekyylissä joko on tämä * · sidos eikä siinä ole R1:tä, tai molekyylissä ei ole tätä Y·; sidosta ja R1 on H tai OH, 25 R2 on Ci_8-alkyyli- tai C3-8-sykloalkyyliryhmä, <j. R4 on H tai ryhmä, joka kykenee hydrolysoitumaan in • · · * vivo -olosuhteissa ja tuottamaan yhdisteen, jossa R4 on H.

• · ·

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet muistuttavat milbe- .. . mysiinejä ja avermektiinejä .

* · » Ύ 30 Avermektiinit ovat laajakirjöisten antiparasiit- # , tisten yhdisteiden ryhmä, josta on aiemmnin käytetty ‘1’ nimitystä C-07 6-yhdisteet. Niitä valmistetaan fermentoi- maila Streptomyces avermitilis -mikro-organismikantaa aerobisissa olosuhteissa vesipitoisessa ravintomediumissa, •# ·* 35 joka sisältää epäorgaanisia suoloja ja assimiloitavissa '· olevia hiilen ja typen lähteitä. C-076-kompleksin 111727 2 muodostavien kahdeksan yksittäisen komponentin eristys ja kemiallinen rakenne on kuvattu yksityiskohdittain patenttijulkaisussa GB-1 573 955.

C-076-kompleksi käsittää kahdeksan erillistä mutta 5 toisiaan läheisesti muistuttavaa yhdistettä, joiden kuvaamiseen on käytetty nimityksiä C-076 Ala, Alb, A2a, A2b, Bla, Blb, B2a ja B2b. Yhdisteiden "a"-sarja tarkoittaa luonnollisia avermektiinejä, joissa asemassa 25 oleva substituentti on (S)-sek.-butyyli ja "b"-sarja 10 avermektiinejä, joissa asemassa 25 oleva substituentti on isopropyyii. Merkinnät "A" ja "B" tarkoittavat avermektiinejä, joissa asemassa 5 oleva substituentti on ensimmäisessä tapauksessa metoksi ja toisessa tapauksessa hydroksi ja numeromerkintä "1" tarkoittaa avermektiinejä, 15 joissa asemassa 22-23 esiintyy kaksoissidos, ja numeromerkintä "2" avermektiinejä, joista puuttuu asemassa 22-23 oleva kaksoissidos ja joissa asemassa 22 on vety ja asemassa 23 on hydroksi.

EP-patenttihakemusjulkaisuissa 0 214 731, 20 0 284 176, 0 317 148, 0 308 145, 0 340 832, 0 335 541 ja 0 350 187 on kuvattu sellaisten yhdisteiden valmistus, • » · jotka muistuttavat avermektiinejä, mutta joilla on ’ * asemassa 25 jokin muu ryhmä kuin isopropyyii- tai (S)- * · sek.-butyyliryhmä, jotka ryhmät esiintyvät patentti- * · · !ittJ 25 julkaisussa GB-1 573 955 kuvatuissa alkuperäisissä aver- ··· mektiiniyhdisteissä. Näitä yhdisteitä voidaan valmistaa fermentoimalla tiettyjä Streptomyces avermitilis -kantoja orgaanisten happojen tai niiden johdannaisten läsnä-ollessa. Näiden avermektiinien valmistus on kuvattu 30 julkaisussa Journal of Antibiotics 44 (3) (1991) 357 - ‘r* 365.

Milbemysiinit muodostavat toisen edellisiä yhdis-I : teitä muistuttavien makrolidien ryhmän, joka eroaa avermektiineistä siinä, että yhdisteissä ei ole C-13-\ 35 asemaan liittynyttä sokeriryhmää. Esimerkkejä tällaisista

t I I

* · yhdisteistä on kuvattu UK-patenttijulkaisussa 1 390 336 ja 111727 3 EP-patenttijulkaisuissa 170 006, 254 583, 334 484 ja 410 615. Näiden fermentaatiotuotteiden lisäksi on hyvin monissa julkaisuissa kuvattu näistä fermentaatiotuotteista puolisynteettisesti johdettuja yhdisteitä, joista monilla 5 on käyttökelpoisia antiparasiittisia aktiivisuuksia. Katsaus osaan tästä kemiasta on esitetty teoksessa Macrolide Antibiotics, Omura S., toim., Academic press, New York (1984) ja julkaisuissa Davies, H.G. ja Green, R.H., Natural Product Reports 3 (1986) 87 - 121 ja Chem.

10 Soc. Rev. 20 (1991) 271 - 339.

On havaittu, että tietyillä yhdisteillä, jotka ovat johdettavissa synteettisesti tunnetuista avermek-tiineistä ja avermektiinijohdannaisista, on odottamattomia hyödyllisiä biologisia ominaisuuksia.

15 Kaavan (I) mukaisen yhdisteryhmän määrittelyssä termin "alkyyli" on tarkoitus merkitä 1 - 8-hiiliatomista alkyyliryhmää, kuten metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, pentyyli- tai heksyyliryhmää tai jotakin muuta vastaavaa joko suoraketjuista tai 20 haaroittunutta ryhmää.

Edellä oleva rakennekaava (I) on esitetty ilman • · · *·’·* selvästi rajattua stereokemiaa. Näiden yhdisteiden vai- • * mistukseen käytettävien synteesimenetelmien aikana voivat näistä valmistusvaiheista saadut tuotteet olla kuitenkin : : 25 stereoisomeerien seos. Varsinkin 4"-, 4'-, 5, 13- ja 23- ··' asemissa olevien stereoisomeerien orientaatio voi olla joko a- tai β-muotoinen, jolloin ryhmät ovat vastaavasti molekyylin muodostaman tason ala- tai yläpuolella.

:v. Kussakin näistä tapauksista ovat sekä a- että β- 30 koni iguraatiot tarkoitetut kuulumaan tämän keksinnön piiriin. Termiä "epi" on tietyissä tapauksissa käytetty erottamaan se stereoisomeeri, joka yhden spesifisen :i(: epäsymmetrisen hiiliatomin kohdalla on päinvastaisessa ;·[· konfiguraatiossa luonnolliseen yhdisteeseen verrattuna.

35 Ryhmät, jotka kykenevät hydrolysoitumaan in vivo ' 1 -olosuhteissa ja tuottamaan vastaavia yhdisteitä, joissa 111727 4 tämän ryhmän tilalle tulee H, ovat tunnettuja farmaseuttisten tuotteiden valmistuksen alalla yleensä ja hyvin monet näistä erilaisista ryhmistä soveltuvat käytettäviksi tämän keksinnön mukaisissa yhdisteissä.

5 Esimerkkejä näistä ryhmistä ovat C2-8_alkanoyyli-, aroyy-li-, karbamoyyli- ja Ci-8-alkoksikarbonyyliryhmät sekä dikarboksyylihappo- ja aminohapporyhmät. Tiettyjä nimenomaisia ryhmiä on esitetty tuonnempana olevissa esimerkeissä. Edulliset ryhmät ovat ryhmiä, joissa R2 on suora- 10 tai haaraket juinen Ci_8-alkyyli- tai sykloalkyyliryhmä, kuten sykloheksyyli, isopropyyli tai sek.-butyyli, ja yhdiste sisältää vaihtoehtoisen asemassa 22-23 olevan sidoksen tai tämä vaihtoehtoinen sidos puuttuu ja R1 on H tai OH.

15 Oksiimimonosakkaridit, joissa R4 on H, ovat erityisen edullisia. Edullisin yhdiste on 5-oksimino-22, 23-dihydro-25-sykloheksyyliavermektiini Bl -monosakkaridi.

Keksinnön piiriin kuuluvia erillisiä yhdisteitä on kuvattu jäljempänä esitetyissä esimerkeissä.

20 Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa siten, että * » · ’'·* (i) hapetetaan yhdiste, jolla on kaava (II): « · • · • « · och3 r1 25 I \t3 /CH3 CH /f/ •«· · 4' |_j 22 / / \ /KR2

H3c 0 H 0 H

30 I

1 °%r/°

| oh /H

* \ 35

(ii) H

OH

111727 5 jossa katkoviiva, R1 ja R2 ovat edellä esitetyn kuvauksen mukaiset, yhdisteeksi, jolla on kaava (III): 5 OCH3 r1 k-/* ^ | ?Ha h 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11<V' \ Η3(Τ^Ο^

10 h3ctN

L °^° l ohj/h (III) \ | o ja (ii) annetaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen 2 reagoida sellaisen kaavan R4-0-NH2 mukaisen yhdisteen kans- 3 V.' sa, jossa R4 on edellä esitetyn kuvauksen mukainen, hydro- 4 ♦ 5 lysoidaan aikaansaatu yhdiste kaavan (I) mukaiseksi yhdis-·’/..* teeksi, 6 ja (iii) tarvittaessa korvataan ryhmä R4, silloin 7 f· kun viimeksi mainittu on H, mainitulla ryhmällä, joka ky- 8

M 4 I

9 kenee hydrolysoitumaan in vivo -olosuhteissa ja tuottamaan yhdisteen, jossa R4 on H, jolloin 10 . menetelmä käsittää tarvittaessa lisäksi vaiheen, 11 joka on ennen vaiheita (i) , (ii) ja (iii) tai tulevat näiden jälkeen, jossa vaiheessa (iv) vedytetään yhdiste asemassa 22-23 olevan kak-soissidoksen pelkistämiseksi yksinkertaiseksi sidokseksi.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistusta tar-\ ·* 35 kastellaan tuonnempana sitä kuvaavien esimerkkien avulla.

β 111727 6

Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa käyttäen lähtöaineina sellaisia kaavan (II) mukaisia yhdisteitä, jotka puolestaan voidaan valmistaa edellä mainituissa patenttijulkaisuissa kuvatulla tavalla.

5 Η°ΤΊ och, CBf^O <K~f] Rl

Jt3 j ''OuR1

CBT\ lyj H

0^.0 15 Xsif

OH

20 Yhdiste II, sisältää kaksoissidoksen, R1 puuttuu.

Yhdiste Hb, kaksoissidos puuttuu, R1 = H.

: Yhdiste Ile, kaksoissidos puuttuu, R1 = OH.

25

Kaavan I esittämien yhdisteiden aikaansaamiseksi vaadittavissa puolisynteettisissä modifikaatioissa voidaan tarvita asemissa -4', 4", 4a, 13, 22, 23, 25 ja 5 30 suoritettavia peräkkäisiä reaktioita ja näiden transfor- • · · maatioiden tarkka suoritusjärjestys voi vaihdella.

.. , Tuonnempana kuvattavien hapetusreaktioiden ja tiettyjen substituutioreaktioiden aikana on lisäksi tarpeellista suojata 5-asemassa oleva hydroksiryhmä tässä asemassa ··· 35 tapahtuvan substituoitumisen tai hapettumisen välttämi- seksi. Kun tämä asema on suojattu, voidaan reaktiot 4"- ' tai 4'-asemissa suorittaa niin, ettei tällä ole vaikutusta ♦ » » • ·’ molekyylin muihin osiin. Kaikkien edellä kuvattujen ·. '! reaktioiden jälkeen voidaan suojaava ryhmä poistaa ja 40 eristää tuote, joka ei enää sisällä suojaavia ryhmiä.

111727 7

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden ollessa kyseessä muunnetaan 5-asemassa oleva hydroksiryhmä ketoniksi tai ketoksiimiksi edullisesti sen jälkeen, kun 4'-, 23- ja 4a-asemiin tulevat substituentit on lisätty molekyyliin.

5 Ihanteellinen 5-asemassa käytettävä suojaava ryhmä on sellainen ryhmä, joka voidaan syntetisoida vaivatta, johon 4"- ja 4'-asemissa suoritettavat reaktiot eivät vaikuta ja joka voidaan poistaa mihinkään molekyylin muihin funktionaalisiin ryhmiin vaikuttamatta. Avermektiinityyp- 10 pisen molekyylin yksi edullinen suojaavan ryhmän tyyppi on trisubstituoitu silyyliryhmä, edullisesti tri(alempi alkyyli)silyyliryhmä. Yksi erityisen edullinen esimerkki on tert.-butyylidimetyylisilyyliryhmä. Suojatun yhdisteen valmistamiseksi tehtävä reaktio suoritetaan saattamalla 15 hydroksiyhdiste reagoimaan asianmukaisella tavalla substi- tuoidun silyylihalogenidin, edullisesti silyylikloridin, kanssa aproottisessa liuottimessa, kuten metyleeniklo- ridissa, bentseenissä, tolueenissa, etyyliasetaatissa, tetrahydrofuraanissa, dimetyyliformamidissa tai jossakin 20 muussa vastaavassa liuottimessa. Reaktioseokseen lisätään sivureaktioiden minimoimiseksi emästä, jotta tämä reagoisi : ·* : reaktion edistyessä muodostuvan hapon kanssa. Edullisia ·;·*: emäksiä ovat amiinit, kuten imidatsoli, pyridiini tai : trietyyliamiini. Emästä tarvitaan vapautuneen vetyhaloge- .···. 25 nidin moolimäärää vastaava määrä, tavallisesti käytetään kuitenkin useita ekvivalentteja amiinia. Reaktioseosta ‘II! sekoitetaan lämpötilassa, joka on 0 °C:sta reaktioseoksen • · * * palautusjäähdytyslämpötilaan ja se menee loppuun 1/2 - 16 tunnin aikana. Silyyliryhmä poistetaan käsittelemällä i \* 30 silyyliyhdistettä vedettömän pyridiinin ja vetyfluoridin :.t>· seoksella tetrahydrofuraanissa. Reaktio menee loppuun 3 - 24 tunnin kuluessa 0-25 °C:ssa. Silyyliryhmä voidaan ’!!! vaihtoehtoisesti poistaa sekoittamalla silyloitua yhdis- " tettä metanolissa käyttäen katalyyttinä happoa, edul- • V 35 lisesti sulfonihappomonohydraattia, kuten p-tolueeni- : ·,! sulf onihappomonohydraattia. Reaktio menee loppuun noin 1 - 12 tunnin kuluessa 0-50 °C:ssa. Yhdisteet, joissa on 111727 8 asemassa 23 oleva hydroksyyliryhmä (tai suojattu johdannainen), voidaan muuntaa joko vastaavaksi 22,23-di-hydroyhdisteeksi tai vaihtoehtoisesti vastaavaksi yhdisteeksi, jossa on 22-23-asemassa oleva kaksoissidos, 5 käyttäen US-patenttijulkaisussa 4 328 335 kuvattuja menetelmiä. Viimeksi mainitut yhdisteet voidaan myös vedyttää 22,23-dihydroyhdisteiksi käyttäen Wilkinsonin katalyyttiä olosuhteissa, jotka on kuvattu US-patenttijulkaisussa 4 199 569.

10 Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa muuntamalla edellä mainitut disakkaridit Ha, -b ja -c ensin vastaaviksi monosakkarideikseen hydrolyysin avulla. Monosakkaridien vaihtoehtoinen valmistusmenetelmä käsittää suoran fermentaatiomenetelmän, jossa lähtöaineena käyte-15 tään vastaavaa aglykonia EP-patenttihakemusjulkaisussa 463 677 kuvatulla tavalla. Tämän jälkeen suojataan 5-hyd-roksiasema tähän asemaan tapahtuvan substituution välttämiseksi, jotta reaktio 4'- tai 23-asemissa voidaan suorittaa. 4'-asemassa oleva hydroksi on reagoivampi kuin 20 23-asemassa oleva hydroksi, minkä johdosta asemaan C-4 ' tehtävällä sopivalla ylimääräisellä suojauksella saadaan V,· reaktio tapahtumaan valikoivasti C-23:ssa.

Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan vaihtoeh- toisesti valmistaa suorittamalla edellä olevat synteet- .*··. 25 tiset toimenpiteet Ha-, -b- tai -c-disakkarideille ja hydrolysoimalla ne lopuksi halutuiksi monosakkarideiksi.

'!!! Hydroksiryhmät voidaan haluttaessa asyloida * * · * estereiksi käyttäen reagensseja, kuten happoanhydridejä tai happoklorideja ja amiiniemäksiä, alan ammattikoke-: .· 30 mukseen kuuluvien yleisten menetelmien mukaisesti.

Hydroksiryhmät voidaan muuntaa oksoryhmiksi hapettamalla ne mangaanidioksidilla tai tetrapropyyliammoniumperrute-naatilla. Oksoyhdiste voidaan käsitellä hydroksyyliamii-nilla tai tämän 0:11a substituoidulla analogilla vastaavan • 35 oksiimin aikaansaamiseksi.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita useiden erilaisten sisäloisten aiheuttamien sairaustilojen 9 111727 hoitamiseen, mukaan lukien erityisesti helmintiaasi, jonka aiheuttajana on useimmin ryhmä nematodeiksi kutsuttuja loismatoja, joka voi aiheuttaa vakavia taloudellisia tappioita sioilla, lampailla, hevosilla ja nautakarjalla 5 ja joista aiheutuu haittaa myös kotieläimille ja siipikarjalle. Yhdisteet ovat myös tehokkaita muita nematodeja vastaan, joita on useilla erilaisilla eläinlajeilla ja joihin kuuluvat esimerkiksi koirilla esiintyvä Dirofilaria ja useat erilaiset loiset, joita voi tulla 10 karjaan, seuraeläimiin, kuten kissoihin ja koiriin, sekä ihmisiin, mukaan lukien suolistoloiset, kuten Ancylostoma, Necator, Ascaris, Strongyloides, Trichinella, Capillaria, Toxocara, Toxascarus, Trichuris ja Enterobius ja veressä tai muissa kudoksissa ja elimissä esiintyvät loiset, kuten 15 rihmamadot ja Strongyloideksen, Toxocaran ja Trichinellan ekstraintestinaalivaiheet.

Nämä yhdisteet ovat myös erityisen arvokkaita hoidettaessa ulkoloisinfektioita, jollaisiin loisiin kuuluvat ihmisten, eläinten ja lintujen tietyt nimeno-20 maiset niveljalkaisulkoloiset, kuten puutiaiset, punkit, täit, kirput, lihakärpäset, purevat hyönteiset ja vael-tavat kärpästoukat, joita voi olla nautakarjalla ja •: · *; hevosilla.

j On havaittu, että kaavan (I) mukaiset yhdisteet • · .···, 25 ovat sekä turvallisia että vaikuttavat systeemisesti • · odottamattoman voimakkaasti kirppuja ja koirien ja kisso-W’,' jen muita merkittäviä niveljalkaisloisia vastaan.

I » I

• Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan antaa sellaisena formulaationa, jota on asianmukaista käyttää : ,* 30 tiettyyn aiottuun käyttötarkoitukseensa ja tietylle ·,,,·’ nimenomaiselle hoidettavalle isäntäeläinlaj ille sekä » kysymyksessä olevalle loiselle tai hyönteiselle. Yhdis-... teitä voidaan antaa joko ihonalaisina tai lihaksen- sisäisinä ruiskeina ja niitä voidaan vaihtoehtoisesti • 35 antaa kapselin, bolin, tabletin, pureskelutabletin tai nestemäisen kastoliuoksen muodossa oraalisesti tai niitä voidaan antaa paikallisformulaationa tai kudokseen 10 111727 asetettavana siirteenä. Paikallisannosteluun voidaan käyttää kastamista, sumuttamista, antamista jauheena, pölytteenä, valeluliuoksena (pour on) , pieniin kohteisiin käytettävänä aineena (spot on), suihkutusnesteenä, 5 sampoona, kaulapantana, korvakiinnikkeenä tai haarniskana. Nämä formulaatiot valmistetaan tavanomaiseen tapaan eläinlääkkeiden normaalin valmistustavan mukaisesti. Kapseleita, boleja tai tabletteja voidaan siten valmistaa sekoittamalla aktiivinen ainesosa sopivaan hienojakoiseen 10 laimentimeen tai kantaja-aineeseen, joka sisältää lisäksi hajoamista edistävää ainetta ja/tai sideainetta, kuten tärkkelystä, laktoosia, talkkia tai magnesiumstearaattia. Kastoliuosformulaatio voidaan valmistaa dispergoimalla aktiivinen ainesosa vesipitoiseen liuokseen yhdessä 15 dispergointi- tai kostutusaineiden kanssa ja injektoitavat formulaatiot voidaan valmistaa steriilin liuoksen tai emulsion muotoon. Valeluformulaatiot tai pieniin kohteisiin käytettävät formulaatiot voidaan valmistaa liuottamalla aktiivinen ainesosa hyväksyttävään nestemäi-20 seen kantaja—aineeseen, kuten butyylidigoliin, nestemäiseen parafiiniin tai haihtumattomaan esteriin, johon on lisätty haihtuvaa komponenttia, kuten isopropanolia, jonka *: ’ *: mukanaolo ei ole välttämätöntä. Valeluformulaatiot, pienten kohteiden käsittelyyn käytettävät formulaatiot tai .*'·. 25 sumuteformulaatiot voidaan vaihtoehtoisesti valmistaa kapseloimalla vapauttamaan pieniä määriä aktiivista ainetta eläimen ulkopintaan. Nämä formulaatiot vaihtelevat ti* ' aktiivisen yhdisteen painon mukaan sen perusteella, mitä lajia hoidettava isäntäeläin on, miten vakava ja minkä • · · ·' 30 tyyppinen infektio on ja mikä on isännän ruumiinpaino.

* t i ·,,,· Yhdisteitä voidaan antaa tunnetuilla menetelmillä jatkuvasti varsinkin sairauksien ennakolta ehkäisemiseksi.

t

I t I I

,*·, Oraalisen, parenteraalisen ja valeluannostelun ollessa kyseessä on annos tyydyttävän tuloksen saavuttamiseksi ί 35 tavallisesti noin 0,001 - 10 mg eläimen ruumiinpainokiloa kohti annettuna yhtenä annoksena tai 1-5 päivän aikana annoksiin jaettuna, mutta luonnollisesti voi olla tapauk- n 111727 siä, joissa hoito vaatii suurempien tai pienempien annostelualueiden käyttöä ja myös nämä kuuluvat tämän keksinnön suojapiiriin.

Vaihtoehtoisesti voidaan yhdisteitä antaa eläinten 5 rehuun yhdistettynä ja tätä tarkoitusta varten voidaan valmistaa tavalliseen eläinrehuun sekoitettavaksi tarkoitettu konsentroitu rehun lisäaine tai esiseos.

Yhdisteitä levitetään hyönteisten torjuntaan ja maatalouden tuholaisten käsittelyyn sumutteina, pölyt-10 teinä, valeluformulaatioina, emulsioina ja muina näitä vastaavina annostelumuotoina tavanomaisen maataloudessa vallitsevan käytännön mukaisesti. Käytettäessä yhdisteitä ihmisille niitä annetaan farmaseuttisesti hyväksyttävänä formulaationa tavanomaisen lääketieteellisen käytännön 15 mukaisesti.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistusta kuvataan seuraavien esimerkkien avulla.

Esimerkki 1 22,23-dihydroavermektiini Bla -monosakkaridi 20 22,23-dihydroavermektiini Bla:ta (50 g) liuotet tiin isopropanolin (100 ml) ja rikkihapon (1 ml) seokseen ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä typpiatmosfäärissä •; · ·; 48 tuntia. Reaktioseos yhdistettiin jäämurskaan ja se ;\j uutettiin dikloorimetaanilla (2 x 200 ml). Yhdistetyt 25 uutteet pestiin vesipitoisella kylläisellä natriumvetykar- bonaattiliuoksella (100 ml), kuivattiin vedettömän ’h! magnesiumsulfaatin päällä ja konsentroitiin vakuumissa, • · · ’ mistä saatiin valkeita kiteitä (14 g), jotka erotettiin suodattamalla. Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhden- • « » ί .* 30 mukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

t t t

Blb-analogi saatiin aikaan samanlaisella menetel-mällä käyttäen lähtöaineena 22,23-dihydroavermektiini · Blb:tä.

» .

* ? I

i2 111727

Esimerkki 2 5-okso-22,23-dihydroavermektiini Bla -monosakkaridi 22,23-dihydroavermektiini Bla -monosakkaridia (14 g) liuotettiin dietyylieetteriin (200 ml) ja seokseen 5 lisättiin aktivoitua mangaanidioksidia (14 g). Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 4 tuntia, se suodatettiin ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista tuotetta (11,4 g), jonka NMR-spektri oli täysin yhdenmukainen yhdisteen ehdotetun rakenteen suhteen.

10 Blb-analogi saatiin aikaan identtisellä menetelmäl lä käyttäen lähtöaineena 22,23-dihydroavermektiini Blb -monosakkaridia.

Esimerkki 3 5-oksimino-22,23-dihydroavermektiini Bla -mono-15 sakkaridi 5-okso-22,23-dihydroavermektiini Bla -monosakkaridia (1 g) liuotettiin kuivaan pyridiiniin (25 ml) ja seokseen lisättiin hydroksyyliamiinihydrokloridia (1 g). Reak-tioseosta kuumennettiin 4 tunnin ajan palautusjäähdyttäen 20 seosta samalla sekoittaen ja kun se oli jäähtynyt, se yhdistettiin jäämurskaan ja uutettiin dikloorimetaanilla (2 x 50 ml). Yhdistetyt uutteet kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin päällä ja haihdutettiin vakuumissa, . mistä saatiin raakatuotteeksi kumimaista materiaalia 25 (1,1 g). Tämä materiaali puhdistettiin korkeapaineneste- *··;’ kromatografiällä Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (41,4 x 250 mm, 8 pm, ODS-silika, Rainin) eluoimalla virtausnopeu-*.* ’ della 42 ml minuutissa metanolin ja veden seoksella, joka oli valmistettu suhteessa 83 : 17. Asiaankuuluvat fraktiot \ ‘ : 30 yhdistettiin ja haihdutettiin kuivaksi, mistä saatiin ot- ; sikon mukaista tuotetta valkeana kiinteänä aineena, jonka sulamispiste oli 180 - 190 °C. Massa- ja NMR-spektrit oli-"" vat täysin yhdenmukaiset yhdisteen ehdotetun rakenteen ; suhteen.

i3 111727 5-oksimino-22,23-dihydroavermektiini Bib valmistettiin samanlaisella menetelmällä käyttäen lähtöaineena 5-okso-22,23-dihydroavermektiini Blb -monosakkaridia.

Esimerkki 4 5 22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermektiini Bl -mo- nosakkaridi 25-sykloheksyyliavermektiini Bl:tä (9,9 g) liuotettiin tolueeniin (1 litra) ja seokseen lisättiin Wilkin-sonin katalyyttiä [tris(trifenyylifosfiini)rodium(I)klo-10 ridia] (9,25 g). Liuos vedytettiin suuressa Parr (tavaramerkki) -ravistelijassa huoneenlämmössä 345 kPa:n paineessa vetyä. Reaktioastia tehtiin paineettomaksi 3 tunnin kuluttua ja sen annettiin olla paikoillaan 12 tuntia, minkä jälkeen siihen lisättiin vielä yksi erä katalyyttiä 15 (5 g) ja seosta vedytettiin edellä kuvatulla tavalla vielä 2 tuntia, minkä jälkeen seoksessa ei enää ollut jäljellä lähtömateriaalia. Liuos suodatettiin, haihdutettiin kuivaksi vakuumissa ja jäännökselle suoritettiin kromatogra-fia silikassa käyttäen eluointiin dikloorimetaania ja myö-20 hemmässä vaiheessa suhteessa 9 : 1 valmistettua dikloori-metaanin ja metanolin seosta. Raakatuotteelle suoritet-tiin uudelleen kromatografia silikassa (200 g) käyttäen eluointiin suhteessa 19 : 1 valmistettua dikloorimetaanin .·. ; ja metanolin seosta, mistä saatiin vakuumissa suoritetun 25 liuottimen haihdutuksen jälkeen epäpuhdasta 22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermektiini Bl:tä ruskeana vaahtona ·;;; (10 g). Tämä materiaali liuotettiin isopropanolin (200 ml) ’·’ ‘ ja rikkihapon (2 ml) seokseen ja ruskeaa liuosta sekoitet tiin huoneenlämmössä 15 tuntia, jonka jälkeen se yhdistet-• 30 tiin jää-vesi-seokseen (500 ml) ja uutettiin dikloorime- : : taanilla (3 x 200 ml). Orgaaninen kerros pestiin kylläi sellä vesipitoisella kaliumvetykarbonaattiliuoksella (100 ml) ja vedellä (2 x 50 ml), kuivattiin vedettömän ’;· magnesiumsulfaatin päällä ja haihdutettiin vakuumissa, | ' 35 mistä saatiin raakatuotteeksi kumimaista materiaalia, joi- 14 111727 le suoritettiin kromatografia silikassa (100 g) käyttäen eluointiin dikloorimetaania ja myöhemmässä vaiheessa suhteessa 2 : 1 valmistettua dikloorimetaanin ja etyyliasetaatin seosta, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä 5 (8,2 g). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukai set ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 5 5-oksimino-22,23-dihydro-25-sykloheksyyliaver-mektiini Bl -monosakkaridi 10 22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermektiini Bl -monosakkaridia (8,2 g) hapetettiin 5-oksojohdannaiseksi mangaanidioksidilla vedettömässä dietyylieetterissä esimerkin 2 mukaisia suoritusvaiheita noudattaen. Raakatuote puhdistettiin kromatografisesti silikassa (50 g), mistä 15 saatiin 5-oksoyhdistettä (3,22 g) keltaisena vaahtona. Tämä liuotettiin vedettömään pyridiiniin (60 ml) ja seokseen lisättiin hydroksyyliamiinihydrokloridia (3,22 g). Kun seosta oli sekoitettu 15 tuntia huoneenlämmössä, siihen lisättiin uusi erä hydroksyyliamiinihydrokloridia 20 (3,22 g) ja liuosta kuumennettiin 50 °C:ssa, kunnes seos ei sisältänyt enää lähtömateriaalia. Liuos yhdistettiin ·.·. veteen (50 ml) ja uutettiin dietyylieetterillä (3 x I t 50 ml). Orgaaninen kerros pestiin vedellä, kylläisellä . . natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömän natrium- 25 sulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa.

• ·

Raakatuotteelle suoritettiin kromatografia silikassa ··· (25 g) käyttäen eluointiin dikloorimetaanin ja etyyli- • » * '·’ * asetaatin suhteessa 4 : 1 valmistettua seosta ja puhdis tettiin lopuksi korkeapainenestekromatografisesti Dynamax • V 30 (tavaramerkki) -pylväässä (41,4 x 250 mm, 8 pm ODS-silika, : : Rainin) eluoiden metanolista ja vedestä suhteessa 9 : 1 valmistetulla seoksella virtausnopeudella 65 ml minuutis-sa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä * · » » » 15 111727 (1,53 g). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 6 25-sykloheksyyliavermektiini B2 -monosakkaridi 5 25-sykloheksyyliavermektiini B2:ta (10 g) suspen- doitiin isopropanoliin (100 ml) ja seokseen lisättiin liuos, jossa oli rikkihappoa (2 ml) isopropanolissa (100 ml). Kun seosta oli sekoitettu huoneenlämmössä 24 tuntia, kirkas liuos yhdistettiin jäihin (600 g) ja 10 seos uutettiin dikloorimetaanilla (2 x 100 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi. Jäännös liuotettiin tetrakloori-metaaniin ja liuos varastoitiin 4 °C:ssa. Kiteet, jotka erottuivat hitaasti, poistettiin ajoittain suodattamalla 15 ja niiden havaittiin olevan puhdasta otsikon mukaista yhdistettä. Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 7 5-oksimino-25-sykloheksyyliavermektiini B2 -mono-20 sakkaridi 25-sykloheksyyliavermektiini B2 -monosakkaridi muunnettiin otsikon mukaiseksi yhdisteeksi käytän esi-merkkien 2 ja 3 mukaisia suoritusvaiheita. Massa- ja NMR-. spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen 25 suhteen.

• ·

Esimerkki 8 I < i 25-sykloheksyyliavermektiini B1 -monosakkaridi *·' * 25-sykloheksyyliavermektiini Bl:tä (20 g) liuotet tiin tetrahydrofuraaniin (250 ml) ja seokseen lisättiin • ' * 30 seos, joka sisälsi tetrahydrofuraania (250 ml), vettä : : (10 ml) ja rikkihappoa (10 ml). Seosta sekoitettiin ’· huoneenlämmössä 15 tuntia ja se kaadettiin sitten jäästä '!!! (500 g) ja vedestä (1 1) valmistettuun seokseen ja seos ·; uutettiin dikloorimetaanilla (2 x 500 ml). Orgaaninen ker- • \i 35 ros pestiin kylläisellä vesipitoisella natriumkloridi- • t | ie 111727 liuoksella, kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin vaahtoa. Tuotteelle suoritettiin kromatografia silikassa (150 g) käyttäen eluointiin etyyliasetaatin ja dikloorimetaanin seos-5 ta, jonka seossuhde oli 1:1, mistä saatiin raakatuotetta (13,3 g). Tuote puhdistettiin lopuksi käänteisfaasi-hplc:llä Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (41,4 x 250 mm, 8 pm ODS-silika, Rainin) ja eluoimalla virtausnopeudella 70 ml minuutissa suhteessa 4 : 1 valmistetulla metanolin 10 ja veden seoksella, mistä saatiin puhdasta otsikon mukaista yhdistettä. Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 9 5-oksimino-25-sykloheksyyliavermektiini Bl -mono-15 sakkaridi 25-sykloheksyyliavermektiini Bl -monosakkaridi muunnettiin otsikon mukaiseksi yhdisteeksi käyttäen esimerkkien 2 ja 3 mukaisia suoritusvaiheita. Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen 20 suhteen.

Esimerkki 10 V. 5-0-t-butyylidimetyylisilyyli-25-sykloheksyyli- 22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi .·,; 22,23-dihydro-25-sykloheksyyli-avermektiini Bl ‘..* 25 -monosakkaridia (esimerkki 4) (12,1 g) ja imidatsolia (7,2 g) liuotettiin kuivaan dimetyyliformamidiin (10 ml), j Tähän huoneenlämmössä pidettyyn liuokseen lisättiin t-bu- tyylidimetyylisilyylikloridia (7,9 g). 18 tunnin kuluttua seos yhdistettiin jää-vesi-seokseen (200 ml), tehtiin hap-30 pameksi pH-arvoon 2 käyttäen 2 N HCl:ää ja seos uutettiin dietyylieetterillä (2 x 80 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin kylläisellä vesipitoisella kaliumvetykarbonaattiliuoksella (50 ml) ja vedellä (50 ml), kuivattiin vedettömän natrium-sulfaatin päällä ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saa-35 tiin raakatuotetta (14,9 g). Tämä materiaali puhdistettiin 17 111727 edelleen kromatografisesti silikassa (Kieselgel 60, 230 -240 mesh, Merck) (300 g) eluoimalla suhteessa 9 : 1 valmistetulla dikloorimetaanin ja etyyliasetaatin seoksella. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kui-5 vaksi, mistä saatiin otsikon mukaista tuotetta (8,35 g). NMR-spektri oli täysin yhdenmukainen ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 11 5-okso-avermektiini Bla 10 Avermektiini Bla:ta (2,4 g) liuotettiin dietyyli- eetteriin (50 ml) ja seokseen lisättiin aktivoitua mangaanidioksidia (2,0 g). Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 tuntia, se suodatettiin ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista tuotet-15 ta, jonka NMR-spektri oli täysin yhdenmukainen ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 12 5-oksimino-avermektiini Bla 5-okso-avermektiini Bla:ta (800 mg) (esimerkki 11) 20 liuotettiin pyridiiniin (10 ml) ja seokseen lisättiin hydroksyyliamiinihydrokloridia (800 mg). Kun seosta oli : sekoitettu huoneenlämmössä 1 tunti, se yhdistettiin jäästä (50 g) ja vedestä (50 ml) valmistettuun seokseen, tehtiin .·. ; happameksi pH-arvoon 4 väkevällä kloorivetyhapolla ja 25 uutettiin dikloorimetaanilla (3 x 30 ml). Yhdistetyt uut- • · teet pestiin vedellä (20 ml), kuivattiin vedettömän nat-·;;· riumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi alipainees- *·' ‘ sa, mistä saatiin raakamateriaalia (1 g). Tälle materiaa lille suoritettiin kromatografia silikassa (Kieselgel 60, : * : 30 230 - 400 mesh, Merck) (100 g) eluoiden suhteessa 2:1 ·' valmistetulla dikloorimetaanin ja etyyliasetaatin seoksel la ja tuote puhdistettiin lopuksi korkeapainenestekromato-grafiällä Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (41,4 x 250 mm, 8 pm ODS-silika, Rainin) eluoiden suhteessa 85 : • 35 15 valmistetulla metanolin ja veden seoksella virtausno- 18 111727 peudella 70 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä (290 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

5 Esimerkki 13 5-oksimino-avermektiini Bla -monosakkaridi 5-oksimino-avermektiini Bla:ta (50 mg) (esimerkki 12) liuotettiin isopropanolin (1 ml) ja rikkihapon (10 ml) seokseen ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä typpi-10 atmosfäärissä 48 tuntia. Seokseen lisättiin sitten kylläistä vesipitoista natriumvetykarbonaattiliuosta (1 ml) ja tuote uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 5 ml). Yhdistetyt uutteet kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin päällä ja väkevöitiin vakuumissa. Tulokseksi saatu raakatuote 15 (25 mg) puhdistettiin korkeapainenestekromatografiällä

Ultrasphere (tavaramerkki) -pylväässä (24 x 250 mm, 5 pm, ODS-silika, Beckman) eluoimalla suhteessa 85 : 15 valmistetulla metanolin ja veden seoksella virtausnopeudella 20 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin 20 (otsikon mukaisen tuotteen aikaansaamiseksi). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 14 4 '-0-asetyyli-25-sykloheksyyli-22,23-dihydro-25 avermektiini Bl -monosakkaridi 5-0-t-butyylidimetyylisilyyli-25-sykloheksyyli-·;·; 22,23,-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi (esimerkki V ’ 10) (216 mg) liuotettiin dikloorimetaaniin (25 ml), joka sisälsi pyridiiniä (400 mg). Tähän liuokseen lisättiin 30 huoneenlämmössä hitaasti etikkahappoanhydridiä (255 mg) dikloorimetaanissa (5 ml) ja reaktioseoksen annettiin olla paikoillaan 72 h ajan. Liuos yhdistettiin veteen (20 ml), orgaaninen kerros pestiin vesipitoisella sitruunahappo-liuoksella (20 %, 2 x 10 ml), kylläisellä vesipitoisella 35 kaliumvetykarbonaattiliuoksella (2 x 10 ml), kuivattiin 19 111727 vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa. Tälle raakatuotteelle suoritettiin kro-matografia silikassa (25 g) käyttäen eluointiin dikloori-metaanin ja etyyliasetaatin seosta, jonka seossuhde oli 5 9:1. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutet tiin vakuumissa, mistä saatiin 4'-0-asetyyli-5-0-t-butyy-lidimetyylisilyyli-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermek-tiini B1 -monosakkaridia, joka liuotettiin p-tolueeni-sulfonihappoa (230 mg) sisältävään metanoliin (20 ml). Kun 10 seosta oli sekoitettu huoneenlämmössä 1 h, siihen lisättiin kylläistä vesipitoista kaliumvetykarbonaattiliuosta (5 ml) ja tuote uutettiin dietyylieetterillä (2 x 10 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, 15 mistä saatiin otsikon mukaista tuotetta valkeana jauheena (139 mg), jonka NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen. Tätä materiaalia käytettiin seuraavassa esimerkissä sitä pidemmälle puhdistamatta. Esimerkki 15 20 4'-0-asetyyli-5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23- dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi . 4 ' -0-asetyyli-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroaver- mektiini Bl -monosakkaridia (139 mg) (esimerkki 14) hape- . tettiin 5-oksojohdannaiseksi käyttäen aktivoitua mangaani- * » · !..* 25 dioksidia (140 mg) dietyylieetterissä (20 ml) esimerkissä • » 2 kuvatun menetelmän mukaisesti. Tämän 4'-0-asetyyli-5- *;;; okso-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -mono- V * sakkaridin liuokseen (20 ml) seoksessa, joka oli suhteessa 1 : 1 valmistetun metanolin ja dioksaanin seos, lisättiin • 30 hydroksyyliamiinihydrokloridia (176 mg) veteen (5 ml) vai-

I I I

: : mistettuna liuoksena. Tätä seosta sekoitettiin 40 °C:ssa 3 h, jonka jälkeen reaktio lopetettiin lisäämällä kiinteää kaliumvetykarbonaattia (200 mg) ja dietyylieetteriä ”* (50 ml). Orgaaninen uute pestiin kylläisellävesipitoisella • 35 natriumkloridiliuoksella (10 ml), kuivattiin vedettömän • * » 20 11 1727 natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuu-missa, mistä saatiin raakatuotetta. Tämä materiaali puhdistettiin sitten kromatografiällä silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (10 g) eluoimalla dikloorime-5 taanin ja etyyliasetaatin seoksella, jonka seossuhde oli 4:1. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin, mistä saatiin haluttu yhdiste, joka puhdistettiin vielä korkeapainenestekromatografiällä Ultrasphere (tavaramerkki) -pylväässä (10 x 250 mm, 5 pm, ODS-silika, Beck-10 man) ja eluoimalla suhteessa 71 : 14 : 15 valmistetulla asetonitriilin, metanolin ja veden seoksella virtausnopeudella 5 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuivaksi, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana kiinteänä aineena (46 mg). Mas-15 sa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 16 4' -okso-5-0-butyylidimetyylisilyyli-25-syklohek-syyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi 20 5-0-butyylidimetyylisilyyli-25-sykloheksyyli-22,23- dihydroavermektiini Bl -monosakkaridia (esimerkki 10) (1,4 g) liuotettiin huoneenlämmössä dikloorimetaaniin (300 ml) yhdessä N-metyylimorfoliini-N-oksidin (3,14 g) ja ,·, j tetra-n-propyyliammoniumperrutenaatin (233 mg) kanssa.

I..' 25 Seokseen lisättiin jauhemaista molekyyliseulaa 4A (187 mg) ’** ja sitä sekoitettiin. Seokseen lisättiin 1 tunnin kuluttua • * · ·;;; vesipitoista natriumsulfiittiliuosta (50 ml, 5 %) ja erot- *·’ ’ tunut orgaaninen faasi pestiin toisella erällä vesipitois ta natriumsulfiittia (50 ml, 5 %), vedellä (2 x 50 ml), 30 kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuoksella (2 x 50 ml) ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä. Kun liuotin oli haihdutettu vakuumissa ja tuotteelle suoritettu kromatografia silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) eluoimalla suhteessa 9 : 1 valmistetulla 35 dikloorimetaanin ja etyyliasetaatin seoksella ja kun 2i 111727 asianmukaiset fraktiot yhdistetty ja haihdutettu, saatiin otsikon mukaista tuotetta kiinteänä aineena (857 mg). NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

5 Esimerkki 17 4' -epi-5-0-t-butyylidimetyylisilyyli-25-syklohek- syyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi 4'-okso-5-0-t-butyylidimetyylisilyyli-25-syklo-heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridia 10 (200 mg) liuotettiin metanoliin (10 ml) 0 eC:ssa ja seok seen lisättiin annoksittain natriumboorihydridiä (20 mg) seosta samalla sekoittaen. Seos yhdistettiin 15 minuutin kuluttua veteen, uutettiin dietyylieetterillä (2 x 30 ml) ja yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin vedellä (20 ml), 15 kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuoksella (20 ml) ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä. Kun liuotin oli haihdutettu vakuumissa, saatiin otsikon mukaista tuotetta valkeana kiinteänä aineena, jota oli 141 mg. Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset 20 ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 18 4 1 -epi-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini

Bl -monosakkaridi ,· ; 4 ’-epi-5-0-t-butyylidimetyylisilyyli-22,23-dihydro- * ! t .1 25 avermektiini Bl -monosakkaridia, 141 mg, liuotettiin p-to- ; lueenisulfonihappoa (200 mg) sisältävään metanoliin * · ·;;; (20 ml). Reaktioseos tehtiin 18 tunnin kuluttua emäksi- • 1 · '·’ ‘ seksi lisäämällä siihen kylläistä vesipitoista kaliumvety- karbonaattiliuosta (20 ml) ja seos uutettiin dietyyli-; 30 eetterillä (2 x 50 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin vedellä !_ (20 ml), kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuok- ,:t sella (20 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin raaka- • « tuotetta. Tämän materiaalin silikassa (Kieselgel 60, 230 - 35 400 mesh, Merck) (2 g) suoritetusta kromatografiästä, jos- 22 1117 2 7 sa eluoitiin suhteessa 4 : 1 valmistetulla dikloorimetaa-nin ja etyyliasetaatin seoksella, ja asiaankuuluvien fraktioiden yhdistämisestä ja haihdutuksesta vakuumissa saatiin otsikon mukaista tuotetta (100 mg). Massa- ja NMR-5 spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 19 4' -epi-5-okso-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroaver-mektiini B1 -monosakkaridi 10 4' -epi-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini B1 -monosakkaridia (196 mg) hapetettiin aktivoidulla mangaanidioksidilla esimerkissä 2 kuvattujen suoritus-vaiheiden mukaisesti. Tuotteen (160 mg) NMR-spektri oli täysin yhdenmukainen ehdotetun rakenteen suhteen.

15 Esimerkki 20 4' -epi-5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi 4' -epi-5-okso-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridia (160 mg) käsiteltiin hydrok- 20 syyliamiinihydrokloridilla (150 mg) metanolin, dioksaanin ja veden seoksessa, joka oli valmistettu suhteessa 1:1: . * \ 0,5 (25 ml), ja tuote uutettiin esimerkissä 15 kuvattuja ,, suoritusvaiheita noudattaen. Tuote puhdistettiin korkea- ,· ; painenestekromatografiällä Ultrasphere (tavaramerkki) ! ,* 25 -pylväässä (10 x 250 mm, 5 pm, ODS-silika, Beckmann) elu- oimalla suhteissa 61 : 14 : 25 valmistetulla asetonitrii- > · ·; * Iin, metanolin ja veden seoksella virtausnopeudella 4 ml *·' * minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haih dutettiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista tuo-* 30 tetta kiinteänä aineena (25 mg). Massa- ja NMR-spektrit : ; olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

23 1 1 1727

Esimerkki 21 4a-hydroksi-25-sykloheksyyli-22,23-dihydro-avermektiini Bl -monosakkaridi

Liuokseen, joka sisälsi 25-sykloheksyyli-22,23-di-5 hydroavermektiini Bl -monosakkaridia (esimerkki 4) (5 g) dikloorimetaanissa (150 ml), lisättiin liuos, joka sisälsi seleenidioksidia (370 mg) ja t-butyylihydroperoksidia (70 %, 3,7 ml) dikloorimetaanissa (50 ml) ja tätä kokonaisuutta sekoitettiin huoneenlämmössä 48 tuntia. Seokseen 10 lisättiin vielä uusi erä liuosta, joka sisälsi seleenidioksidia (370 mg) ja t-butyylihydroperoksidia (70 %, 3,7 ml) dikloorimetaanissa (50 ml) ja sekoitusta jatkettiin 24 tuntia. Kun reaktioseokseen oli lisätty vettä (20 ml), se uutettiin dikloorimetaanilla (2 x 25 ml) ja 15 yhdistetyt uutteet pestiin 10-prosenttisella vesipitoisella natriumvetykarbonaattiliuoksella (20 ml) ja vedellä (20 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta, jota oli 4,5 g, keltaisena vaahtona. Tämä materiaali puh-20 distettiin vielä kromatografiällä silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (120 g) eluoimalla suhteessa 97 : 3 valmistetulla dikloorimetaanin ja metanolin seoksella ja ottaen 200 ml:n suuruisia fraktioita. Materiaali, joka ; eluoitui fraktioissa 21 - 24, yhdistettiin ja haihdutet- • 1 1 25 tiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä • 1 valkeana jauheena. Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin ·;;; yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

'·' ’ Esimerkki 22 4a-t-butyy1idimetyy1isilyy1ioksi-25-sykloheksyyli- * 30 22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi ; : 4a-hydroksi-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroaver mektiini Bl -monosakkaridia (1,26 g), trietyyliamiinia (0,2 ml) ja 4-dimetyyliaminopyridiiniä (26 mg) liuotettiin

* I

*;'1 kuivaan dikloorimetaaniin (120 ml) sekoittamalla seosta ja i 1 ' ί ‘: 35 siihen lisättiin annoksittain t-butyylidimetyylisilyyli-

I

24 111727 kloridia (0,32 g). Tätä kokonaisuutta sekoitettiin typpi-atmosfäärissä 18 tuntia, jonka jälkeen siihen lisättiin uudelleen trietyyliamiinia (0,4 ml), 4-dimetyyliamino-pyridiiniä (252 mg) ja t-butyylidimetyylisilyylikloridia 5 (0,64 g) ja sekoittamista jatkettiin 3 tuntia. Reaktio- seokseen lisättiin vesipitoista natriumvetykarbonaatti-liuosta (10 %, 100 ml) ja orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä (100 ml), kuivattiin vedettömän natrium-sulfaatin päällä ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saa-10 tiin raakatuotetta. Tämä materiaali puhdistettiin kromato-grafiällä silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (120 g) eluoimalla suhteessa 98 : 2 valmistetulla di-kloorimetäänin ja metanoiin seoksella ja ottaen talteen 130 ml:n suuruisia fraktioita. Fraktioissa 12 - 14 eluoi-15 tunut materiaali yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana kiinteänä aineena, (1,1 g). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 23 20 4a-t-butyylidimetyylisilyylioksi-5-okso-25-syklo- heksyyli-22,23-dihydroavennektiini B1 -monosakkari-. di » a ,, ,: 4a-t-butyylidimetyylisilyylioksi-25-sykloheksyyli- . 22,23-dihydroavermektiini B1 -monosakkaridia (1,1 g) hape- * > · ,* 25 tettiin aktivoidulla mangaanidioksidilla (1 g) eetterissä • · * ; (10 ml) esimerkissä 2 kuvatun menetelmän mukaisesti, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä (0,9 g), jonka V * NMR-spektri oli täysin yhdenmukainen ehdotetun rakenteen suhteen.

j 30 Esimerkki 24 : 4a-hydroksi-5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23-di hydroavermektiini Bl -monosakkaridi 4a-t-butyylidimetyylisilyylioksi-5-okso-25-syklo-·;·’ heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridia \ 35 (0,9 g) liuotettiin metanolin ja dioksaanin seokseen (suh- 25 1117 2 7 teessä 1 : 1 valmistettu seos, 36 ml) ja seokseen lisättiin veteen (18 ml) liuotettua hydroksyyliamiinihydro-kloridia (0,9 g). Tätä reaktioseosta sekoitettiin ja sitä kuumennettiin 40 ®C:ssa 1 tunti, minkä jälkeen se konsent-5 roitiin noin 20 ml:ksi haihduttamalla vakuumissa ja tuote uutettiin dietyylieetterillä (2 x 50 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin vesipitoisella natriumvetykarbonaattiliuok-sella (10 %, 30 ml), vedellä (50 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin vakuumissa, 10 mistä saatiin raakatuotetta. Tälle materiaalille suoritettiin kromatografia silikassa (Kieselgel, 60, 230 - 400 mesh, Merck) (50 g) käyttäen eluointiin dikloorimetaanin ja metanolin gradienttia seossuhteesta 99 : 1 seossuh- teeseen 96 : 4 ja 1,5 tunnin kuluessa koottiin talteen 15 50 ml:n suuruisia fraktioita. Fraktiot 50 - 54 yhdistet tiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin materiaalia, joka puhdistettiin vielä korkeapainenestekromatogra-fiällä Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (24 x 250 mm, 5 pm, ODS-silika, Rainin) eluoimalla suhteessa 80 : 20 -20 valmistetulla metanolin ja veden seoksella virtausnopeudella 20 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistet-tiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon ____: mukaista yhdistettä valkeana jauheena. Massa- ja NMR- : spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen !,,* 25 suhteen.

Esimerkki 25 4'-metyyli-5-0-t-butyylidimetyylisilyyli-25-syklo-heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkari-di •30 4'-okso-5-0-t-butyylidimetyylisilyyli-25-syklo- : : heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridia (esimerkki 16) (174 mg) liuotettiin kuivaan eetteriin (15 ml) ja jäähdytettiin 0 °C:een typpiatmosfäärissä. Tä-hän liuokseen lisättiin pisaroittain liuos, joka sisälsi ; ' · 35 metyylimagnesiumbromidia (115 pl, 3-molaarinen liuos di- 26 11 1727 etyylieetterissä), ja sekoitusta jatkettiin vielä 1 tunti. Kun reaktio oli lopetettu lisäämällä vesipitoista ammo-niumkloridiliuosta, (10 ml, 10 %), orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä (2 x 10 ml), kuivattiin vedet-5 tömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta. Tälle materiaalille suoritettiin kromatografia silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (20 g) eluoimalla suhteessa 9 : 1 valmistetulla dikloorimetaanin ja etyyliasetaatin seoksella. Yh-10 distämällä asiaankuuluvat fraktiot ja haihduttamalla materiaali vakuumissa saatiin tuote, jota käytettiin pidemmälle puhdistamatta.

Esimerkki 26 4 * -metyyli-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroaver-15 mektiini Bl -monosakkaridi 4'-metyyli-5-0-t-butyylidimetyylisilyyli-25-syklo-heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridia (74 mg) (esimerkki 25) liuotettiin p-tolueenisulfonihappoa (36 mg) sisältävään metanoliin (20 ml) ja seosta sekoitet-20 tiin ympäristön lämpötilassa 2 tuntia. Tämä ajan kuluttua umpeen seokseen lisättiin kiinteää kaliumvetykarbonaattia (50 mg) ja se laimennettiin vedellä (20 ml) ja uutettiin » dietyylieetterillä (2 x 20 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin ; vedellä (20 ml), kylläisellä vesipitoisella natriumklori- ! 25 diliuoksella (10 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaa- • · tin päällä ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin raa-*; ; katuotetta. Tälle materiaalille suoritettiin kromatografia '* * silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (10 g) eluoimalla suhteessa 4 : 1 valmistetulla dikloorimetaanin • 30 ja etyyliasetaatin seoksella. Asiaankuuluvat fraktiot yh- : : distettiin ja haihdutettiin vakuumissa tuotteeksi, joka puhdistettiin edelleen preparatiivisella korkeapaineneste-kromatograf iällä Ultrasphere (tavaramerkki) -pylväässä (10 x 250 mm, 5 pm, ODS-silika, Beckmann) eluoimalla suh-ί V 35 teessä 85 : 15 valmistetulla metanolin ja veden seoksella 27 11 1727 virtausnopeudella 5 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena. Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun raken-5 teen suhteen.

Esimerkki 27 4' -metyyli-5-okso-25-sykloheksyyli-22,23-dihydro- avermektiini Bl -monosakkaridi 4' -metyyli-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermek-10 tiini Bl -monosakkaridia (255 mg) hapetettiin aktivoidulla mangaanidioksidilla (250 mg) dietyylieetterissä (50 ml) esimerkissä 2 kuvattujen suoritusvaiheiden mukaisesti otsikon mukaiseksi yhdisteeksi (208 mg), jonka NMR-spektri oli täysin yhdenmukainen ehdotetun rakenteen suhteen.

15 Esimerkki 28 41-metyyli-5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23-di- hydroavermektiini Bl -monosakkaridi

Liuokseen, joka sisälsi 4'-metyyli-5-okso-25-syklo-heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridia 20 (208 mg) suhteessa 1 : 1 valmistetussa metanolin ja di- oksaanin seoksessa (40 ml), lisättiin liuos, joka sisälsi veteen (10 ml) liuotettua hydroksyyliamiinihydrokloridia (416 mg). Tätä seosta sekoitettiin huoneenlämmössä ja sii-,·. : hen lisättiin 3 h kuluttua vielä uusi erä hydroksyyli- 25 amiinihydrokloridia (208 mg) ja sekoitusta jatkettiin 50 °C:ssa 5 h, jonka jälkeen reaktio lopetettiin lisäämäl-·*;; lä kylläistä vesipitoista kaliumvetykarbonaattiliuosta (20 ml) ja dietyylieetteriä (50 ml). Orgaaninen uute pestiin peräkkäin vedellä (20 ml) ja kylläisellä vesipitoi- • ',·* 30 sella natriumkloridiliuoksella (20 ml), kuivattiin vedet- tömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta. Tälle materiaali lille suoritettiin sitten kromatografia silikassa (Kiesel- gel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (10 g) eluoimalla suhteessa • V 35 4:1 valmistetulla dikloorimetaanin ja etyyliasetaatin 28 111727 seoksella. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin, inistä saatiin haluttua yhdistettä, joka puhdistettiin edelleen korkeapainenestekromatografialla Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (10 x 250 mm, 5 pm, Ultrasphere 5 (tavaramerkki) ODS-silika, Beckman) eluoimalla suhteissa 63 : 12 : 25 valmistetulla asetonitriilin, metanolin ja veden seoksella virtausnopeudella 5 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuivaksi, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana kiin-10 teänä aineena (63 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 29 5-0-t-butyylidimetyylisilyylioksimino-22,23-dihyd- ro-25-sykloheksyyliavermektiini B1 -monosakkaridi 15 Menetelmä 1 5-oksimino-22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermek-tiini B1 -monosakkaridia (5,93 g) (esimerkki 5), t-butyy-lidimetyylisilyylikloridia (2,11 g) ja imidatsolia (1,9 g) liuotettiin dikloorimetaaniin (20 ml) ja seosta sekoitet-20 tiin huoneenlämmössä 1 h. Reaktioseokseen lisättiin tämän jälkeen uudelleen t-butyylidimetyylisilyylikloridia (2,11 g) ja imidatsolia (1,9 g) ja sitä sekoitettiin 40 °C:ssa vielä 0,5 h. Seos pestiin vedellä (2 x 20 ml), . , kylläisellä vesipitoisella kaliumvetykarbonaattiliuoksella 25 (10 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja ’· ;* haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuo- ·· * tetta. Tuote puhdistettiin kromatografiällä silikassa V * (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (250 g) eluoimalla suhteessa 9 : 1 valmistetulla dikloorimetaanin ja etyyli-• ’ 30 asetaatin seoksella. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (4,0 g).

Menetelmä 2 ;·’ 22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermektiini B1 -mo- : ' : 35 nosakkaridia (esimerkki 4) hapetettiin 5-oksojohdannaisek- 29 11 1727 si mangaanidioksidilla vedettömässä dietyylieetterissä esimerkin 2 mukaisia suoritusvaiheita noudattaen. 5-okso-22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermektiini B1 -monosakka-ridia (5,0 g) liuotettiin dikloorimetaaniin (200 ml) ja 5 seokseen lisättiin 0- (t-butyylidimetyylisilyyli )hydroksyy-liamiinia (2,5 g) ja jääetikkaa (10 ml). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 h ja se pestiin sitten vedellä (50 ml), kylläisellä vesipitoisella kaliumvetykar-bonaattiliuoksella (50 ml), kuivattiin vedettömän natrium-10 sulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta. Tuote puhdistettiin lopuksi kromatografiällä silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (250 g) eluoiden heksaanin ja dietyylieetterin seoksesta tehdyllä gradientilla, jossa seossuhde 2 : 1 15 muuttui seossuhteeksi 1 : 1. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (3,9 g).

Näistä kahdesta menetelmästä peräisin olevien tuotteiden NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun 20 rakenteen suhteen.

Esimerkki 30 4' -asetyyliamino-4 ' -deoksi-5-oksimino-22,23-di- ____ hydro-25-sykloheksyyliavermektiini Bl -monosakka- : ridi • * » 25 Liuokseen, joka sisälsi 5-0-t-butyylidimetyyli- • * *’j silyylioksimino-22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermektiini 4 · · ·;;; Bl -monosakkaridia (620 mg) (esimerkki 29) dikloorimetaa- * · · ’·’ * nissa (40 ml), lisättiin tetrapropyyliammoniumperrutenaat- tia (100 mg) ja N-metyylimorfoliini-N-oksiimia (600 mg).

• V 30 Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti ja se johdettiin sitten yläkautta silikakromatografiapylvääseen (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (30 g). Kun pylväs il; oli eluoitu dikloorimetaanilla, asiaankuuluvat fraktiot • * ·;·’ yhdistettiin ja haihdutettiin, mistä saatiin 4'-oksojoh- :·: 35 dannaista, jota käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa 30 111727 liuottamalla se metanoliin (10 ml), lisäämällä ammonium-asetaattia (1,0 g) ja tämän jälkeen annoksittain natrium-syaaniboorihydridiä, kunnes materiaali oli TLC:n perusteella pelkistynyt täydellisesti. Tämän jälkeen liuotin 5 poistettiin haihduttamalla alipaineessa, jäännös otettiin talteen dikloorimetaaniin (10 ml) ja seokseen lisättiin trietyyliamiinia (500 1) ja etikkahappoanhydridiä (200 1). Reaktio oli TLC:n perusteella mennyt loppuun 1 h kuluttua. Seos haihdutettiin alipaineessa, jäännös otettiin talteen 10 metanoliin (10 ml) ja siihen lisättiin kiinteää p-toluee-nisulfonihappoa, kunnes liuoksen pH oli 3,0. Suojaavan ryhmän poisto oli TLC:n perusteella mennyt loppuun 1 h kuluttua ja reaktioseos yhdistettiin seokseen, joka sisälsi vesipitoista natriumvetykarbonaattiliuosta ja eetteriä 15 suhteessa 1 : 1 (20 ml). Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta. Tuote puhdistettiin korkeapainenestekromatografialla Dyna-max (tavaramerkki) -pylväässä (24 x 250 mm, 5 pm, ODS-si-20 lika, Rainin) eluoimalla suhteessa 85 : 15 valmistetulla metanolin ja veden seoksella virtausnopeudella 20 ml mi- .· \ nuutissa. Asiaan kuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haih- • · dutettiin vakuumissa, mistä saatiin tuote, joka puhdis-. . tettiin edelleen korkeapainenestekromatografiällä Dynamax

• < I

25 (tavaramerkki) -pylväässä (24 x 250 mm, 5 pm, ODS-silika, • · *· ;* Rainin) eluoimalla suhteessa 82 : 18 valmistetulla metano- • · ··: Iin ja veden seoksella virtausnopeudella 20 ml minuutissa.

·.' * Asiaan kuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä val-> ’ 30 keana jauheena (50 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täy- : sin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 31 5-oksimino-25-sykloheksyyliavermektiini B2 ;·" 25-sykloheksyyliavermektiini B2:ta (50 g) hapetet- ; : 35 tiin 5-oksojohdannaisekseen aktivoidulla mangaanidioksi- 31 111727 dilla (2 x 50 g) dietyylieetterissä (500 ml) esimerkissä 2 kuvattua menetelmää noudattaen. Jatkoreaktio, jossa käytettiin hydroksyyliamiinihydrokloridia (53 g) vesipitoisen metanolin, dioksaanin ja veden seoksessa (1 : 1 : 1) 5 (900 ml) suoritettiin esimerkissä 28 kuvattujen vaiheiden mukaisesti. Otsikon mukainen tuote eristettiin reaktio-seoksesta yhdistämällä se veteen (500 ml) ja uuttamalla dietyylieetterillä (3 x 500 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin päällä ja 10 haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin tuotetta (53 g), jota käytettiin suoraan seuraavassa esimerkissä sitä pidemmälle puhdistamatta.

Esimerkki 32 5-oksimino-23-okso-25-sykloheksyy1iavermektiini B2 15 -monosakkaridi

Seosta, joka sisälsi 5-oksimino-25-sykloheksyyli-avermektiini B2:ta (500 mg) ja pyridiniumdikromaattia (1,87 g) dimetyyliformamidissa (25 ml), sekoitettiin huoneenlämmössä typpiatmosfäärissä 18 h. Reaktioseos yh-20 distettiin sitten jään (25 g) ja (50 ml) seokseen ja uutettiin dietyylieetterillä (2 x 50 ml). Yhdistetyt eetteriuutteet pestiin 2 N kloorivetyhapolla (20 ml) ja vedellä (50 ml), kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin .·, ; päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saa- 25 tiin jäännös (350 mg), joka liuotettiin 1 % v/v rikkihap-poa sisältävään isopropanoliin (25 ml). Kun tätä seosta * » · ·;;; oli sekoitettu 18 h typpiatmosf äärissä, se yhdistettiin ’·’ ‘ jää-vesi-seokseen (50 ml) ja tuote uutettiin dikioorime- taanilla (2 x 30 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet kui- • V 30 vattiin vedettömän magnesiumsulfaatin päällä ja haihdutet- I l g : tiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta (300 mg), joka puhdistettiin korkeapainenestekromatogra- !!! f iällä Zorbax-pylväässä (21,2 x 250 mm, 8 pm, ODS-silika, ♦ »

Rainin) eluoimalla suhteessa 78 : 22 valmistetulla metano-j 35 Iin ja veden seoksella virtausnopeudella 9 ml minuutissa.

i , · 32 11 17 2 7

Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin va-kuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena. Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

5 Esimerkki 33 5-oksimino-23-metoksimino-25-sykloheksyyliavermek-tiini B2 -monosakkaridi

Liuokseen, jossa oli 5-oksimino-23-okso-25-sykloheksyyliavermektiini B2 -monosakkaridia (300 mg) 10 (esimerkki 32) dioksaanissa (150 ml) ja joka sisälsi natriumasetaattia (320 mg) ja metoksyyliamiinihydroklori-dia (370 mg), lisättiin jääetikkaa (10 ml). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 h, se yhdistettiin sitten veteen (200 ml) ja uutettiin dikloorimetaanilla (2 x 15 200 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin kylläisellä vesipitoi sella natriumvetykarbonaattiliuoksella (2 x 100 ml) ja vedellä (100 ml), kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta, jolle suoritettiin kromatografia silikassa 20 (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (10 g) eluoimalla heksaanin ja dietyylieetterin seoksesta tehdyllä gradien-tiliä seossuhteesta 1 : 1 seossuhteeksi 0:1. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin, mistä saa-: tiin tuotetta (98 mg), jolle suoritettiin jatkopuhdistus 25 korkeapainenestekromatografiällä Zorbax-pylväässä (21,2 x • · 250 mm, 8 pm, ODS-silika, Rainin) eluoimalla suhteessa i 82 : 18 valmistetulla metanolin ja veden seoksella vir- V 1 tausnopeudella 9 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin I t 1 • 30 otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (60 mg).

: : Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdote- ‘ tun rakenteen suhteen.

I I

33 1 1 1727

Esimerkki 34 4' -O-sukkinyyli-5-O-t-butyylidimetyylisilyylioks-imino-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiiniBl -monosakkaridi 5 Liuokseen, joka sisälsi 5-0-t-butyylidimetyyli- silyylioksimino-22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermektiini B1 -monosakkaridia (esimerkki 29) (530 mg), di-isopropyy-lietyyliamiinia (770 mg) ja 4-dimetyyliaminopyridiiniä (73 mg) dikloorimetaanissa (50 ml), lisättiin meripihka-10 happoanhydridiä (3,6 g). Tulokseksi saatua suspensiota käsiteltiin ultraäänellä 10 minuuttia ja sitä sekoitettiin huoneenlämmössä 18 h, jonka jälkeen se pestiin vedellä (2 x 10 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raaka-15 tuotetta, jolle suoritettiin kromatografia silikassa (Kie-selgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (20 g) eluoimalla di-kloorimetaanin ja etyyliasetaatin seoksesta tehdyllä gra-dientilla seossuhteesta 9 : 1 seossuhteeksi 4:1. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin, mistä 20 saatiin kiinteää ainetta, joka lietettiin dikloorimetaa-nilla (20 ml), suodatettiin ja suodos haihdutettiin kui-vaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta, jolle suo-,,j ritettiin jatkopuhdistus korkeapainenestekromatografiällä . , : Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (41,4 x 250 mm, 8 pm, ,··[ 25 ODS-silika, Rainin) eluoimalla metanolin ja veden seoksel- ! la, jonka sekoitussuhde oli 90 : 10 ja jonka seossuhde muutettiin 40 minuutin kuluttua seossuhteeksi 95 : 5, vir- » * » tausnopeudella 9 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin : 30 otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (407 mg).

Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

* * * t

- > I

* : I

34 1 1 17 2 7

Esimerkki 35 4'-O-sukkinyy1i-5-oksimino-25-sykloheksyy1i-22,23- dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi

Liuosta, joka sisälsi 4'-0-sukkinyyli-5-0-t-5 butyylidimetyylisilyylioksimino-22,23-dihydro-25-syklo-heksyyliavermektiini Bl -monosakkaridia (esimerkki 34) (50 mg) ja p-tolueenisulfonihappoa (50 mg) suhteessa 10 : 1 valmistetussa dioksaanin ja veden seoksessa (11 ml), sekoitettiin huoneenlämmössä 2 h. Reaktio tässä 10 reaktioseoksessa lopetettiin sitten lisäämällä siihen kylläistä vesipitoista kaliumvetykarbonaattiliuosta (5 ml) ja vettä (10 ml) ja tuote uutettiin dietyylieetterillä (3 x 20 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin vedellä (3 x 10 ml), kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuoksel-15 la (5 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raaka-tuotetta, jolle suoritettiin kromatografia silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (0,5 g) käyttäen eluointiin etyyliasetaattia. Asiaankuuluvat fraktiot yh-20 distettiin ja haihdutettiin, mistä saatiin kiinteää ainetta (46 mg), jolle suoritettiin jatkopuhdistus korkea-painenestekromatografiällä Utrasphere -pylväässä (10 x 250 mm, 5 pm, ODS-silika, Beckman) käyttäen eluointiin . metanolin ja veden seosta, jonka seossuhde oli 80 : 20 ja 25 jonka seossuhde muutettiin 20 minuutin kuluttua seossuh-teeksi 85 : 15 ja 40 minuutin kuluttua seossuhteeksi • « • : 90 : 10, virtausnopeudella 5 ml minuutissa. Asiaankuuluvat V · fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaisen yhdisteen kaliumsuolaa valkeana • ' 30 jauheena (32 mg). Tämä yhdiste liuotettiin dietyylieet- : : teriin (10 ml), pestiin vesipitoisella sitruunahappoliuok- * sella (20 paino/tilavuus-%, 5 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana 35 1 1 1727 jauheena (25 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 36 4' -0- (3-metoksikarbonyylipropanoyyli) -5-oksimino-5 25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini B1 -mo- nosakkaridi

Liuosta, joka sisälsi 4'-0-sukkinyyli-5-0-t-butyy-lidimetyylisilyylioksimino-22,23-dihydro-25-sykloheksyyli-avermektiini B1 -monosakkaridia (esimerkki 34) (50 mg) ja 10 p-tolueenisulfonihappoa (50 mg) metanolissa (10 ml), sekoitettiin huoneenlämmössä 1 h. Reaktio tässä reaktioseok-sessa lopetettiin sitten lisäämällä siihen kylläistä vesipitoista kaliumvetykarbonaattiliuosta (2 ml) ja vettä (10 ml) ja tuote uutettiin dietyylieetterillä (3 x 10 ml). 15 Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin vedellä (3 x 5 ml), kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuoksella (2 x 5 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuo-tetta, jolle suoritettiin kromatografia silikassa (Kiesel-20 gel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (1 g) eluoimalla suhteessa 9 : 1 valmistetulla dikloorimetaanin ja etyyliasetaatin seoksella. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdu-tettiin, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkea-. na jauheena. Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhden- 25 mukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

• *

Esimerkki 37 1 · · 4 ' -0-3-(4-metyylipiperatsin-l-yyli)karbonyyli-V ' propanoyyli)-5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23-di hydroavermektiini B1 -monosakkaridi 30 Liuokseen, joka sisälsi 4'-0-sukkinyyli-5-0-t- : butyylidimetyylisilyylioksimino-22,23-dihydro-25-syklo- heksyyliavermektiini B1 -monosakkaridia (esimerkki 34) (100 mg), 1-hydroksibentsotriatsolia (15 mg) ja l-(3-dimetyyliaminopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidiä (24 mg) | 35 kuivassa N,N-dimetyyliformamidissa (5 ml), lisättiin N-me- * : » 36 111727 tyylipiperatsiinia (11 mg) ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 h. Kun seos oli yhdistetty veteen (20 ml), tuote uutettiin dietyylieetterillä (3 x 10 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin vedellä (3 x 5 ml), kylläisellä vesipitoi-5 sella natriumkloridiliuoksella (2 x 5 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin materiaalia, jolle suoritettiin kromatografia silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh,

Merck) (10 g) eluoimalla suhteessa 95 : 5 valmistetulla 10 dikloorimetaanin ja metanolin seoksella. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin, mistä saatiin materiaalia (85 mg), joka liuotettiin p-tolueenisulfonihap-poa (85 mg) sisältävään metanoliin (10 ml), ja tätä kokonaisuutta sekoitettiin huoneenlämmössä 1 h. Reaktio tässä 15 reaktioseoksessa lopetettiin lisäämällä siihen kylläistä vesipitoista kaliumvetykarbonaattia (5 ml) ja vettä (20 ml) ja tuote uutettiin dietyylieetterillä (3 x 10 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin vedellä (3 x 5 ml), kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuoksella (2 x 20 5 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuo-;y. tetta, jolle suoritettiin kromatografia silikassa (Kie- selgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (10 g) eluoimalla suh- • · • ; teessä 95 : 5 valmistetulla dikloorimetaanin ja metanolin 25 seoksella. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä val-; keana jauheena (52 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täy sin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 38 30 4'-0-(3-(pyrid-4-yyliamino)karbonyylipropanoyyli)- 5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermek-tiini Bl -monosakkaridi

Liuokseen, joka sisälsi 4'-0-sukkinyyli-5-0-t- butyylidimetyylisilyylioksimino-22,23-dihydro-25-syklo- • y 35 heksyyliavermektiini Bl -monosakkaridia (esimerkki 34)

* » I

37 111727 (100 mg), 1-hydroksibentsotriatsolia (30 mg), l-(3-di-metyyllaminopropyyll)-3-etyyllkarbodi-imidiä (48 mg) ja di-isopropyylietyyliamiinia (39 mg) kuivassa N,N-di-metyylifor-mamidissa (5 ml), lisättiin 4-aminopyridiiniä 5 (21 mg) ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 h. Kun seos oli yhdistetty etyyliasetaattiin (20 ml), tulokseksi saatu liuos pestiin vedellä (3 x 10 ml), kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuoksella (2 x 5 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kui-10 vaksi vakuumissa, mistä saatiin materiaalia (90 mg), joka liuotettiin p-tolueenisulfonihappoa (20 mg) sisältävään metanoliin (10 ml), ja tätä kokonaisuutta sekoitettiin huoneenlämmössä 1 h. Reaktio tässä reaktioseoksessa lopetettiin lisäämällä siihen kylläistä vesipitoista kalium-15 vetykarbonaattia (5 ml) ja vettä (20 ml) ja tuote uutettiin dietyylieetterillä (3 x 10 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin vedellä (3 x 5 ml), kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuoksella (2 x 5 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi 20 vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta, jolle suoritettiin kromatografia silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 ,·, mesh, Merck) (5 g) käyttäen eluointiin etyyliasetaattia.

Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kui-, . vaksi vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdis- 25 tettä valkeana jauheena (29 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen. Esimerkki 39 4'-0-[N,N-bis-(9-fluorenyylimetoksikarbonyyli)-lysinyyli] -5-0-t-butyylidimetyylisilyylioksimino-30 25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -mo- nosakkaridi

Liuokseen, joka sisälsi N,N'-bis-(9-fluorenyyli-metoksikarbonyyli)lysiiniä (1,32 g) dikloorimetaanissa (250 ml), lisättiin disykloheksyylikarbodi-imidiä (230 mg) ‘ 35 ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 1 h. Tulokseksi 38 111727 saatua suspensiota käsiteltiin sitten ultraäänellä 0,5 h, jonka jälkeen se suodatettiin Hyflo (tavaramerkki) -kerroksen läpi ja suodos konsentroitiin alipaineessa noin 100 ml:n tilavuuteen, mistä saatiin halutun N,N'-bis-(9-5 fluorenyylimetoksikarbonyyli)lysiinianhydridin liuos. Tä hän liuokseen lisättiin 5-0-t-butyylidimetyylisilyylioks-imino-22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermektiini B1 -mo-nosakkaridia (esimerkki 29) (670 mg), di-isopropyyli- etyyliamiinia (294 mg) ja 4-dimetyyliaminopyridiiniä 10 (185 mg). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämmössä 90 h ja se väkevöitiin sitten kuivaksi alipaineessa, mistä saatiin jäännös, jolle suoritettiin kromatografia silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (200 g) käyttäen eluointiin dikloorimetaania, joka vaihdettiin sitten, kun 15 eluaattia oli koottu 1 1, seokseen, joka sisälsi seos-suhteessa 9 : 1 valmistettua dikloorimetaanin ja etyyliasetaatin seosta. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (850 mg). NMR-spekt-20 ri oli täysin yhdenmukainen ehdotetun rakenteen suhteen. Esimerkki 40 4'-O-[N,N'-bis-(9-fluorenyylimetoksikarbonyyli)-lysinyyli]-5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23-dihyd-roavermektiini Bl -monosakkaridi 25 4'-0-[N,N'-bis-(9-fluorenyylimetoksikarbonyyli)- lysinyyli]-5-0-t-butyylidimetyylisilyylioksimino-25-syklo-heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridia '· ' (850 mg) (esimerkki 39) liuotettiin p-tolueenisulfoni- happoa (20 mg) sisältävään metanoliin (20 ml), ja tätä • 30 kokonaisuutta sekoitettiin huoneenlämmössä 2 h. Reaktio ; ; tässä reaktioseoksessa lopetettiin lisäämällä siihen kyl läistä vesipitoista kaliumvetykarbonaattia (5 ml) ja vettä

Xl (20 ml) ja tuote uutettiin dietyylieetterillä (3 x 10 ml).

':’ Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin vedellä (3 x 5 ml), • 35 kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuoksella

t t I

39 1 1 1727 (2 x 5 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raaka-tuotetta, jolle suoritettiin kromatografia silikassa (Kie-selgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (25 g) käyttäen eluoin-5 tiin dikloorimetaanin ja etyyliasetaatin seosta, jonka seossuhde oli 9 : 1 ja joka suhde muutettiin suhteeksi 4:1, kun 200 ml eluaattia oli otettu talteen. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valio keana jauheena (274 mg). NMR-spektri oli täysin yhden mukainen ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 41 41 -0-lysinyyli-5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23- dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi 15 4'-0-[N,N'-bis-(9-fluorenyylimetoksikarbonyyli)- lysinyyli]-5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroaver-mektiini Bl -monosakkaridia (274 mg) (esimerkki 40) liuotettiin piperidiiniä (150 mg) sisältävään asetonitriiliin (30 ml) ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 8 h. Tämä 20 väkevöitiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raaka-tuotetta, jolle suoritettiin kromatografia silikassa \\ (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (25 g) eluoimalla liuoksella, joka sisälsi dikloorimetaania, metanolia ja . . 0,880-ammonikkiliuosta suhteessa 80 : 20 : 1. Asiaan- !..* 25 kuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuivaksi *·; vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä, joka kylmäkuivattiin t-butanolista, mistä saatiin valkeaa '·' ' jauhetta (157 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

30 Esimerkki 42 5-(trimetyyliasetyylioksimino)-25-sykloheksyyli- 22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi

Liuokseen, joka sisälsi 5-oksimino-25-syklo-heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridia • 35 (esimerkki 5) (50 mg) dikloorimetaanissa (2 ml) ja jota 40 1 1 1727 pidettiin huoneenlämmössä, lisättiin seosta samalla sekoittaen trietyyliamiinia (72 1), jonka jälkeen siihen lisättiin trimetyyliasetyylikloridia (80 1). Kun seoksen oli annettu olla paikoillaan 18 h ajan, siihen lisättiin 5 vesipitoista sitruunahappoliuosta (10 paino/tilavuus-%, 2 ml) ja orgaaninen kerros erotettiin, pestiin kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuoksella (2 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta, jolle suo-10 ritettiin kromatografia silikassa (Kieselgel 60, 230 -400 mesh, Merck) (5 g) käyttäen eluointiin dietyyli-eetteriä. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin materiaalia (53 mg), jolle suoritettiin jatkopuhdistus korkeapaine-15 nestekromatografiällä Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (21,2 x 250 mm, 5 pm, ODS-silika, Rainin) eluoiden suhteessa 95 : 5 valmistetulla metanolin ja veden seoksella virtausnopeudella 20 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saa-20 tiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (18 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhden-mukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

• · ·

Esimerkki 43 . 5-(bentsoyylioksimino)-25-sykloheksyyli-22,23-di- 25 hydroavermektiini B1 -monosakkaridi *···’ 5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermek- ft· ··' tiini B1 -monosakkaridi (esimerkki 5) (70 mg) dikloori- V · metaanissa (30 ml) saatettiin reagoimaan trietyyliamiinin (50 1) ja bentsoyylikloridin (100 1) kanssa ja haluttu f ' ·’ 30 tuote uutettiin samalla tavoin kuin mitä esimerkissä 42 on ; kuvattu. Tuote puhdistettiin korkeapainenestekromato- grafialla Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (41,4 x ;;; 250 mm, 8 pm, ODS-silika, Rainin), eluoiden suhteessa 90 : *;·' 10 valmistetulla metanolin ja veden seoksella virtaus- | ‘ : 35 nopeudella 45 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yh- * t * « 111727 distettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (28 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

5 Esimerkki 44 5-(N-metyylikarbamoyylioksimino)-25-sykloheksyyli- 22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi

Liuokseen, joka sisälsi 5-oksimino-25-syklo-heksyyli-22,23-dihydroaverraektiini Bl -monosakkaridia 10 (esimerkki 5) (106 mg) dikloorimetaanissa (10 ml), lisättiin seosta samalla sekoittaen metyyli-isosyanaattia (15 1) ja seosta sekoitettiin 1 h. Seokseen lisättiin sitten vielä uusi erä metyyli-isosyanaattia (30 1) ja reak-tioseosta sekoitettiin vielä 72 h, minkä jälkeen siihen 15 lisättiin kylläistä vesipitoista natriumkloridiliuosta (10 ml) ja eetteriä (30 ml). Orgaaninen uute kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin raakatuotetta (150 mg), joka puhdistettiin korkeapainenestekromatografiällä Dyna-20 max (tavaramerkki) -pylväässä (41,4 x 250 mm, 8 pm, ODS-silika, Rainin), eluoiden suhteessa 91 : 9 valmiste-.·. tulla metanolin ja veden seoksella virtausnopeudella 45 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haih-. , dutettiin vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yh- 25 distettä valkeana jauheena (80 mg). Massa- ja NMR-spektrit * · olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 45 5 - (N, N-dimetyy 1 ikarbamoyy 1 ioksimino) - 2 5 - Sykiohek- syyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi ; 30 Liuokseen, joka sisälsi 5-oksimino-25-sykloheksyy- li-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridia (esimerkki 5) (50 mg) dikloorimetaanissa (2 ml) ja jota pidettiin huoneenlämmössä, lisättiin seosta samalla sekoittaen tri-etyyliamiinia (721) ja 4-dimetyyliaminopyridiiniä (1 mg), 35 jonka jälkeen seokseen lisättiin N,N-dimetyylikarbamoyyli- 42 111727 kloridia (58 1). Reaktioseokseen lisättiin 3 h kuluttua uusi erä N,N-dimetyylikarbamoyylikloridia (58 1) ja sen annettiin olla paikoillaan 18 h ajan. Tämän jälkeen seokseen lisättiin vesipitoista sitruunahappoliuosta (10 pai-5 no/tilavuus-%, 2 ml) ja dietyylieetteriä (20 ml) ja orgaaninen kerros erotettiin, pestiin kylläisellä vesipitoisella natriumkloridiliuoksella (5 ml), kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuu-missa, mistä saatiin raakatuote, joka puhdistettiin kor-10 keapainenestekromatografiällä Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (21,2 x 250 mm, 5 pm, ODS-silika, Rainin) eluoiden suhteessa 90 : 10 valmistetulla metanolin ja veden seoksella virtausnopeudella 10 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä 15 saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (18 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 46 5 - ( 4-metyyl ipipera t s inyy 1 i -1 -karbonyyl ioksimino ) -20 25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavennektiini Bl -mo- nosakkaridi

Liuokseen, joka sisälsi N-metyylipiperatsiinia (0,65 ml) ja trietyyliamiinia (1,3 ml) tolueenissa (25 ml) ; ja jonka lämpötila oli 0 °C, lisättiin 15 minuutin aikana 25 pisaroittain sitä samalla sekoittaen liuos, joka sisälsi • » fosgeenia tolueenissa (20 %, 5,1 ml). Reaktioseoksen an- t · ·; ; nettiin lämmetä huoneenlämpöön, sitä sekoitettiin 3 h, se • * * ’·' ’ suodatettiin ja konsentroitiin noin 10 ml:ksi alipainees sa, mistä saatiin l-kloorikarbonyyli-4-metyylipiperatsii- • V 30 niliuos, joka saatettiin reagoimaan 5-oksimino-25-syklo- ·, ·' heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridin ,(esimerkki 5) (300 mg), trietyyliamiinin (110 1) ja 4-di-metyyliaminopyridiinin (5 mg) kanssa dikloorimetaanissa

• I

(10 ml) huoneenlämmössä esimerkissä 45 kuvattua menetelmää : 35 noudattaen. Haluttu materiaali puhdistettiin kromatogra-

• · I

• * I

43 111727 fiällä silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (35 g) eluoiden dikloorimetaanilla. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin materiaalia (53 mg), jolle suoritettiin jat-5 kopuhdistus korkeapainenestekromatografiällä Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (21,2 x 250 mm, 5 pm, ODS- silika, Rainin) eluoiden suhteessa 95 : 5 valmistetulla metanolin ja veden seoksella virtausnopeudella 20 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin va-10 kuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena. Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 47 5-(t-butyy1ioksikarbonyy1ioksimino)-2 5-syklohek-15 syyli-22,23-dihydroavermektiini B1 -monosakkaridi

Liuokseen, joka sisälsi 5-oksimino-25-sykloheksyy-li-22,23-dihydroavermektiini B1 -monosakkaridia (esimerkki 5) (60 mg) ja trietyyliamiinia (50 1) dikloorimetaanis-sa (5 ml) ja jota pidettiin huoneenlämmössä, lisättiin 20 seosta samalla sekoittaen t-butyylioksikarbonyylianhydri-diä (60 mg). Kun reaktioseoksen oli annettu olla paikoil-laan 48 h, se haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin jäännös, joka liuotettiin dikloor imet ääniin ja ; jolle suoritettiin kromatografia silikassa (Kieselgel 60, 25 230 - 400 mesh, Merck) (5 g) eluoiden dikloorimetaanilla.

* » "! Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kui- vaksi vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdis-"·’ tettä valkeana jauheena (45 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen. 30 Esimerkki 48 » i « 5- [N- (4-formyylifenyyli) -karbamoyylioksimino] -25- sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini B1 -mono- •. - sakkaridi » 4-formyylifenyyli-isosyanaattia valmistettiin mene-i ’,· 35 telmällä, joka on kuvattu julkaisussa J. Med. Chem. 32(10) 44 111727 (1989) 2354, ja se saatettiin reagoimaan 5-oksimino-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini B1 -monosakkaridin (esimerkki 5) (500 mg) kanssa kuivassa dikloorimetaanissa (50 ml) huoneenlämmössä 1 h ajan noudattaen esimerkissä 43 5 kuvattua menetelmää. Haluttu materiaali puhdistettiin kromatografiällä silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (125 g) eluoimalla heksaanin ja eetterin gradien-tilla seossuhteesta 1 : 1 seossuhteeksi 20 : 80. Asiaankuuluvat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuivaksi 10 vakuumissa, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (300 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 49 5-{N-[4-(dietyyliaminometyyli)fenyyli]karbamoyyli-15 oksimino}-25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektii- ni Bl -monosakkaridi 4-dietyy1iaminometyy1ibentsoyy1ikloridiavalmistet-tiin yhdysvaltalaisen patenttijulkaisun US-4 623 486 mukaisesti ja se saatettiin reagoimaan 5-oksimino-25-syklo-20 heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridin (esimerkki 5) (100 mg) kanssa kuivassa dikloorimetaanissa (50 ml), joka sisälsi trietyyliamiinia (450 1) ja 4-di-metyyliaminopyridiiniä (126 mg) huoneenlämmössä 1 h ajan . noudattaen esimerkissä 45 kuvattua menetelmää. Haluttu * 25 materiaali puhdistettiin kromatografiällä silikassa (Kieselgel 60, 230 - 400 mesh, Merck) (5 g) eluoimalla metanolin ja dikloorimetaanin gradientilla seossuhteesta V · 0 : 100 seossuhteksi 10 : 90. Asiaankuuluvat fraktiot yh distettiin ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä ; 30 saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena » , (11 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhden- ' mukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

« < *

1 fr I

* fr fr fr » i » « 111727

Esimerkki 50 5-{N-[4-(4-metyyli-1-piperatsinyylimetyyli)-f enyy 1 i ] karbamoyy 1 ioks imino } - 2 5 - sykloheksyy 1 i - 22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi 5 4-( 4-metyylipiperatsin-l-yylimetyyli)bentsoyyli- kloridia valmistettiin patenttijulkaisun US-4 623 486 mukaisesti ja se saatettiin reagoimaan 5-oksimino-25-syklo-heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridin (esimerkki 5) kanssa samalla tavoin kuin mitä on kuvattu 10 esimerkissä 48. Otsikon mukaista yhdistettä saatiin valkeana jauheena (18 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 51 5- [N- (3-pyridyylikarbonyyli)karbamoyylioksimino] -15 25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -mo nosakkaridi

Liuokseen, joka sisälsi nikotiiniamidia (4,88 g) kuivassa 1,2-dikloorietaanissa (500 ml), lisättiin pisa-roittain seosta samalla sekoittaen oksalyylikloridia 20 (5,24 ml). Seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 4,5 h, jonka jälkeen se jäähdytettiin, suodatettiin ja tulokseksi saatu liuos, joka sisälsi nikotinoyyli-isosyanaattia (50 ml), saatettiin reagoimaan 5-oksimino-25-syklohek- ·,: syyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridin > * / 25 (esimerkki 5) (500 mg) kanssa dikloorimetaanissa (10 ml) huoneenlämmössä. Kun reaktioseoksen oli annettu olla paikoillaan 18 h ajan, siihen lisättiin vielä uusi erä ni-• ' kotinoyyli-isosyanaattiliuosta (25 ml) ja seoksen annet tiin olla huoneenlämmössä vielä 18 h ajan, jonka jälkeen 30 se haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin jään-: nös, joka puhdistettiin korkeapainenestekromatografiällä

Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (41,4 x 250 mm, 8 pm, ODS-silika, Rainin) eluoiden suhteissa 20 : 65 : 15 valmistetulla metanolin, asetonitriilin ja veden seoksella : ,· 35 virtausnopeudella 45 ml minuutissa. Asiaankuuluvat frak- I tiot yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saa- 46 1 1 1727 tiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena. Massa-ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 52 5 5- [N- (3-pyridyyli) -karbamoyylioksimino] -25-syklo- heksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkari-di

Nikotiinihappohydratsididihydrokloridin (2 g) liuokseen vedessä (10 ml) lisättiin natriumnitriitin 10 (1,6 g) liuos vedessä (10 ml) pitäen seoksen lämpötila alle 20 °C:ssa. Seokseen lisättiin sitten dietyylieetteriä (50 ml) ja se tehtiin emäksiseksi lisäämällä siihen varovasti kiinteää natriumvetykarbonaattia. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä (20 ml), kuivattiin vedettömän 15 magnesiumsulfaatin päällä ja haihdutettiin kuivaksi vakuu-missa, mistä saatiin nikotinyyliatsidia (1,1 g), jonka sulamispiste oli 54 °C. Tämä atsidi (1,1 g) sekoitettiin kuivaan tolueeniin (10 ml) ja seosta kuumennettiin 100 °C:ssa typpiatmosfäärissä 8 h, mistä saatiin 3-pyri-20 dyyli-isosyanaattia sisältävä liuos. Osa tästä liuoksesta (1 ml) saatettiin reagoimaan 5-oksimino-25-sykloheksyyli- 22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridin (esimerkki 5) (100 mg) kanssa tolueenissa (10 ml) huoneenlämmössä 1 h : ajan, jonka jälkeen seos yhdistettiin dietyylieetterin ja 25 veden seokseen (seossuhde 1 : 1, 30 ml). Orgaaninen kerros * erotettiin, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin pääl- » · ; lä ja haihdutettiin kuivaksi vakuumissa, mistä saatiin ’· ' jäännös, (130 mg), joka puhdistettiin korkeapaineneste- kromatografiällä Dynamax (tavaramerkki) -pylväässä (41,4 x ; * 30 250 mm, 8 pm, ODS-silika, Rainin) eluoiden metanolin ja ;veden seoksella, jonka seossuhde oli 85 : 15 ja joka suhde muutettiin 15 minuutin kuluttua suhteeksi 87 : 13, virtausnopeudella 45 ml minuutissa. Asiaankuuluvat fraktiot » a yhdistettiin ja haihdutettiin vakuumissa, mistä saatiin 35 otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (52 mg).

• * t 47 1 1 1727

Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

Esimerkki 53 5- (-allyylikarbamoyylioksimino) -25-sykloheksyyli-5 22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi 5 -oksimino- 2 5 - sykloheksyy 1 i -22,23 - dihydroavermek -tiini Bl -monosakkaridi (esimerkki 5) (500 mg) saatettiin reagoimaan allyyli-isosyanaatin (108 mg) kanssa dikloori-metaanissa (50 ml) esimerkissä 43 kuvatun menetelmän mu-10 kaisesti, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkeana jauheena (352 mg). Massa- ja NMR-spektrit olivat täysin yhdenmukaiset ehdotetun rakenteen suhteen.

t * i · * * * · I * 1 > t f > * * »

t I

Claims (7)

48 111727

1. Menetelmä uusien antiparasiittisten yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava (I) 5 OCH3 H0^ X k/CHa h L J H h3C^, j| il ohT/h ^ Ti"’ N 20 °R4 :: jossa asemassa 22 - 23 oleva katkoviiva edustaa vaihtoeh- » · toista (kaksois)sidosta, jolloin molekyylissä joko on tämä . : sidos eikä siinä ole R1:tä, tai molekyylissä ei ole tätä 25 sidosta ja R1 on H tai OH, ’•4 R2 on Ci-g-alkyyli- tai C3-8-sykloalkyyliryhmä, ‘(I R4 on H tai ryhmä, joka kykenee hydrolysoitumaan in • ’ vivo -olosuhteissa ja tuottamaan yhdisteen, jossa R4 on H, tunnettu siitä, että I · I .2 v 30 (i) hapetetaan yhdiste, jolla on kaava (II): > > I f t 2

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu ryhmä, joka kykenee hydrolysoitumaan in vivo -olosuhteissa, on asetyyli-, t-bu-tyylikarbonyyli-, t-butyylioksikarbonyyli, bentsoyyli-, me-tyylipiperatsiinikarbonyyli-, N-metyylikarbamoyyli-, N,N-20 dimetyylikarbamoyyli-, N-4-(formyylifenyyli)karbamoyyli-, N-(4-dietyyliaminofenyyli)karbamoyyli-, N-(4-metyyli-l- 1 piperatsinyylimetyylifenyyli) karbonyyli-, N-(3-pyridyyli- karbonyyli)karbamoyyli-, N-(3-pyridyyli)karbamoyyli- tai N-: allyylikarbamoyyliryhmä. ;25

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R2 on sykloheksyyli.

2 I 49 1 1 1727 OCH3 R1 H0\ \23/CH3 5 Γ' ] ?H3 H 22<ν \ h L J H L °%^°

10 OH /H di) H I 15 0H jossa katkoviiva, R1 ja R2 ovat edellä esitetyn kuvauksen mukaiset, yhdisteeksi, jolla on kaava (III): 20 OCH3 R1 \ 73 /CH3 : H0./k /7~~Y |4’ I CHs H 12(/' \ •i ηζοΓΌ^ S^-07!. r2 ‘ 25 H ··...: 25 A X/ H3C > ] L °^° ^|ohJ/ 30 (III) \ V; °Tf CHs o » * * 35 50 111727 ja (ii) annetaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen reagoida sellaisen kaavan R4-0-NH2 mukaisen yhdisteen kanssa, jossa R4 on edellä esitetyn kuvauksen mukainen, hydrolysoidaan aikaansaatu yhdiste kaavan (I) mukaiseksi yhdis-5 teeksi, ja (iii) tarvittaessa korvataan ryhmä R4, silloin kun viimeksi mainittu on H, mainitulla ryhmällä, joka kykenee hydrolysoitumaan in vivo -olosuhteissa ja tuottamaan yhdisteen, jossa R4 on H, jolloin 10 menetelmä käsittää tarvittaessa lisäksi vaiheen, joka on ennen vaiheita (i) , (ii) ja (iii) tai tulevat näiden jälkeen, jossa vaiheessa (iv) vedytetään yhdiste asemassa 22-23 olevan kak-soissidoksen pelkistämiseksi yksinkertaiseksi sidokseksi.

4. Minkä tahansa edellisistä patenttivaatimuksista • I ( mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että molekyy-, Iissä ei ole asemassa 22-23 olevaa vaihtoehtoista sidosta \ 30 ja R1 on H.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, • tunnettu siitä, että valmistetaan 5-oksimino-22,23-dihydroavermektiini Bla -monosak- karidi, : *‘ 35 5-oksimino-22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermek- tiini B1 -monosakkaridi, 51 111727 5-oksimino-25-sykloheksyyliavermektiini B2 -mono-sakkaridi, 5-oksimino-25-sykloheksyyliavermektiini B1 -raono-sakkaridi tai 5 5-oksimino-avermektiini Bla.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 5-oksimino-22,23-dihydro-25-sykloheksyyliavermek-tiini B1 -monosakkaridi.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, jossa R4 on ryhmä, joka kykenee hydrolysoitumaan in vivo -olosuhteissa, tunnettu siitä, että valmistetaan 5-(trimetyyliasetyylioksimino)-25-sykloheksyyli- 22.23- dihydroavermektiini B1 -monosakkaridi, 15 5-(bentsoyylioksimino)-25-sykloheksyyli-22,23-di hydroavermektiini B1 -monosakkaridi, 5-(N-metyylikarbamoyylioksimino)-25-sykloheksyyli- 22.23- dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi, 5-(N,N-dimetyylikarbamoyylioksimino)-25-syklohek-20 syyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi, 5-(4-metyylipiperatsinyyli-l-karbonyylioksimino)-: 25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakka- ·· ridi, : 5-(t-butyylioksikarbonyylioksimino)-25-sykloheksyy- 25 li-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi, _ i 5-[N-(4-formyylifenyyli)karbamoyylioksimino]-25- sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi, * i t *’ 5-{N-[4-(dietyyliaminometyyli) fenyyli] karbamoyy lioksimino}-2 5-sykloheksyyli-22, 23-dihydroavermektiini Bl i 30 -monosakkaridi, 5-{N- [4- (4-metyyli-l-piperatsinyylimetyyli) fenyy-li]karbamoyylioksimino}-25-sykloheksyyli-22,23-dihydro-avermektiini Bl -monosakkaridi, 5-[N- (3-pyridyylikarbonyyli)karbamoyylioksimino]-: 1.· 35 25-sykloheksyyli-22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakka- ridi, 52 111727 5-[N-(3-pyridyyli)karbamoyylioksimino]-25-syklohek-syyli-22,23-dihydroavermektiini B1 -monosakkaridi, tai 5-(N-allyylikarbamoyylioksimino)-25-sykloheksyyli- 22,23-dihydroavermektiini Bl -monosakkaridi. 5 1 » · 53 111727