ES2877568T3 - Agentes de unión de Clec9A - Google Patents

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Nikolai Kley
Jan Tavernier
Anje Cauwels
Sarah Gerlo
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Universiteit Gent
Vlaams Instituut voor Biotechnologie VIB
Orionis Biosciences NV
Original Assignee
Universiteit Gent
Vlaams Instituut voor Biotechnologie VIB
Orionis Biosciences NV
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Abstract

Una proteína quimérica que comprende: (a) una fracción de direccionamiento que comprende un dominio de reconocimiento que reconoce y se une al miembro A de la familia 9 del dominio de lectina de tipo C (Clec9A), en el que el dominio de reconocimiento comprende un anticuerpo de cadena pesada (VHH), un VHH humanizado o un VHH camelizado; y b) un agente de señalización modificado, en el que el agente de señalización modificado es un interferón alfa 2 humano (IFNα2) que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos alrededor del 98% de identidad con una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 86 u 87 y que tienen una o más mutaciones en las posiciones R149, L153 y M148 con respecto a SEQ ID NO: 86 u 87; en el que el IFNα2 humano mutado tiene una afinidad o actividad reducida en comparación con el IFNα2 humano de tipo salvaje, y en el que la afinidad o actividad reducida del IFNα2 humano mutado es restaurable mediante la unión a la fracción de direccionamiento.

Description

DESCRIPCIÓN
A g e n te s de un ión de C le c9 A
Campo
La p re se n te inve nc ión se re fie re , en parte , a a g e n te s de un ión que se unen a C le c9 A y su uso com o a ge n tes te ra p é u tico s y de d ia g nó stico .
Antecedentes
Las cé lu las d e n d rítica s (D C ) son cé lu las p re se n ta d o ra s de a n tíg e n o s (A P C ) d o tad as de la cap ac id ad de in d u c ir re sp u e s ta s in m u n ita ria s p rim a ria s y d e se m p e ñ a n un pape l im p o rta n te en d ive rso s a sp e c to s de la inm un ida d . Las cé lu la s d e n d rítica s a c tiva d a s son ca p a ce s de re c lu ta r cé lu la s in m u n ita ria s a d ic ion a le s , com o m a cró fa go s, e o s in ó filo s , cé lu la s a se s in a s n a tu ra le s y cé lu las T, com o las cé lu la s T a se s in a s na tu ra le s . Las cé lu la s d e n d rítica s ta m b ié n cap tu ra n a n tíg e n o s y los p rese n ta n en su su p e rfic ie para a c tiv a r las cé lu las T (p o r e jem p lo , las cé lu la s T c ito tó x ica s (C TL).
A p e sa r de los g ra n d e s a va n ce s en el tra ta m ie n to del cán cer, éste s igue s ien do una de las p rin c ip a le s ca u sas de m u erte en el m u nd o . Los o b s tá cu lo s para d is e ñ a r te ra p ia s e fica ce s inc lu ye n la e va s ió n in m u n o ló g ica del cáncer, en la que las cé lu la s ca n ce ro sa s e sca pa n a la inm un ida d d es truc tiva , a s í com o la to x ic id a d de m u ch os tra ta m ie n to s c o n ve n c io n a le s con tra el cán ce r, com o la ra d io te ra p ia y la q u im io te ra p ia , que a fe c ta s ig n ifica tiva m e n te a la ca p a c id a d de l p ac ie n te para to le ra r la te ra p ia y /o a fe c ta a la e fica c ia de l tra ta m ie n to .
U no de los m e ca n ism o s p o r los q ue los cá n ce re s e va d e n la d e te cc ió n y d e s tru cc ió n in m u n ita ria es la p a ra liza c ió n de la fu n c io n a lid a d de las cé lu las d e n d rítica s m e d ia n te la p reve nc ión del re c lu ta m ie n to y la a c tivac ión de las cé lu las d e n d rítica s (D C ). P o r lo tan to , s igue s ien do n ece sa rio e n co n tra r te ra p ia s con tra el c á n c e r que puedan d e s b a ra ta r e fica zm e n te la e va s ió n de l tu m o r y m e jo ra r la inm un ida d a n titu m o ra l m e d iada , p o r e je m p lo , p o r las cé lu las d en d ríticas .
La e sc le ro s is m ú ltip le (E M ) es una e n fe rm e d a d a u to in m u n e del s is te m a n e rv io so cen tra l con ca ra c te rís tica s ta n to a u to in m u n e s com o n e u ro d e g e n e ra tiva s . La fo rm a m ás fre cu e n te de EM es la e sc le ro s is m ú ltip le re cu rre n te -re m ite n te (E M R R ), q ue se ca ra c te r iza c lín ic a m e n te p o r e p is o d io s re cu rre n te s de s ín to m a s n e u ro ló g ico s . M ás de 2 ,3 m illo n e s de p e rso n a s en to d o el m u nd o pad ecen e sc le ro s is m ú ltip le , y só lo en E s ta d os U n id os hay 400.000 p e rso n a s q ue p ad ecen la e n fe rm ed ad .
Los tra ta m ie n to s fa rm a c o ló g ico s a c tu a le s para la EM, inc lu ida s las te ra p ia s m o d ifica d o ra s de la e n fe rm e d a d (D M T), m o d ifica n o su p rim e n el s is te m a inm un ita rio de l o rg a n ism o . M u ch o s de los a g e n te s fa rm a c o ló g ico s a c tu a le s para la EM están lim itad os p or una e fica c ia inco m p le ta , e fe c to s se cu n d a rio s y rie sgo s m é d icos . Se ha d e m o stra d o que e s to s tra ta m ie n to s re du cen m o d e s ta m e n te las re ca íd a s n e u ro ló g ica s de la e n fe rm e d a d y, en a lg u n o s casos, fre na n de fo rm a inco m p le ta la p rog re s ión de la d is ca p a c id a d n eu ro ló g ica . En co n se cu e n c ia , ta m b ié n s igu e e x is tie n d o una n eces id ad a cu c ia n te de m e jo ra r los tra ta m ie n to s de la EM.
L ah ou d e t al. (J. Im m u no l. 2011, 187 (2 ):842 -850 ) y P icco e t al. (Eur. J. Im m u no l. 2014 , 44 (7 ):1947 -1955 ) d ivu lg a n el d ire c c io n a m ie n to de los a n tíg e n o s a las DC m e d ia n te a n ticu e rp o s a n ti-C lec9 A .
US 2015 /313965 A1 y US 2013 /230517 A1 d ivu lg a n a g e n te s de se ñ a liza c ió n de in te rfe rón a m o d ificad os .
Sumario
En v a r io s a sp ec tos , la p re se n te inve nc ión se re fie re a a g e n te s de un ión a C le c 9 A q ue tie n e n al m e n o s a lre d e d o r d e la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q u e se une e sp e c ífica m e n te a C lec9A . En v a r ia s re a liza c io n e s , e stos a g e n te s de un ión a C le c 9 A se unen, p e ro no m o du lan fu n c io n a lm e n te (p o r e je m p lo , n e u tra liza n p arc ia l o to ta lm e n te ) a C lec9A . P o r lo tan to , en v a r ia s re a liza c io n e s , los p rese n te s a g e n te s de un ión a C le c9 A tie n e n uso en, p o r e je m p lo , re c lu ta r d ire c ta o in d ire c ta m e n te una cé lu la que e xp re sa C le c9 A a un s itio de in te rés m ie n tra s que to d a v ía p e rm ite q ue la cé lu la q ue e xp re sa C le c 9 A señ a le a tra v é s de C le c9 A (e s dec ir, la un ión de l a g e n te de u n ión a C le c 9 A no re du ce o e lim in a la se ñ a liza c ió n de C le c 9 A en el s itio de in te rés). La fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to es un a n ticu e rp o de d om in io ú n ico (V H H ). El a g e n te de un ión a C le c 9 A co m p re n d e a d e m á s un a g e n te de se ñ a liza c ió n , q ue es un in te rfe ró n a lfa 2 h u m a n o q ue co m p re n d e una s e cu e n c ia de a m in o á c id o s q u e tie n e al m e no s a lre d e d o r de l 98 % de id e n tid a d con una s e cu e n c ia se le cc io n a d a de S E Q ID N O :86 y 87 y que tie n e una o m á s m u ta c io n e s en las p o s ic io n e s R 149, L153 y M 148 con re spe cto a S E Q ID N O :86 u 87. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el p re se n te a ge n te de un ión a C le c9 A puede re c lu ta r d irec ta o in d ire c ta m e n te una cé lu la inm un ita ria (p o r e jem p lo , una cé lu la d e n d rítica ) a un s itio de acc ión (co m o, a m o do de e je m p lo no lim ita tivo , e l m ic ro a m b ie n te tu m o ra l). En a lg u n a s re a liza c io n e s , el p re se n te a g e n te de un ión a C le c 9 A fa c ilita la p re se n ta c ió n de a n tíg e n o s fp o r e je m p lo , a n tíg e n o s tu m o ra le s ) p o r las cé lu la s den d ríticas .
Los p rese n te s a g e n te s de un ión a C le c9 A p ueden e n c o n tra r uso en el tra ta m ie n to de v a r ia s e n fe rm e d a d e s o tra s to rn o s com o el cán cer, las in fe cc io ne s , los tra s to rn o s in m u n ita rio s y o tra s e n fe rm e d a d e s y tra s to rn o s .
Breve descripción de los dibujos
Los p an e le s A -F de la Figura 1 p ro p o rc io n a n h is to g ra m a s q ue m u e s tra n la un ión de se is V H H e sp e c ífico s para C le c 9 A de ra tón a cé lu las C H O tra n s fe c ta d a s con C lec9A .
El p an e l A de la Figura 2 m u e s tra q ue la a d m in is tra c ió n de una fus ió n de un V H H e sp e c ífico para C le c 9 A de ra tón con un in te rfe rón h um a no m o d ifica d o (m u ta n te Q 124R , "C le c9 A -d ir ig id o A c T a fe ro n ") co n d u jo a re d u cc io n e s de l ta m a ñ o del tu m o r ( lín e a s de a rrib a a a ba jo en el ú ltim o pun to te m p o ra l: PBS, "A cT a fe ro n no d ir ig id o "(e s dec ir, in te rfe rón h u m a n o m o d ifica d o (m u ta n te Q 124 R ) fu s io n a d o a una fra cc ió n d ir ig id a a una d iana irre le va n te - hC D 20, " C le c9 A -d ir ig id o A cT a fe ro n " - fus ió n de un V H H e sp e c ífico para C le c9 A de ra tón con un in te rfe ró n h um a no m o d ifica d o (m u ta n te Q 124R ), y "W T m IF N "(e s dec ir, in te rfe rón m u rino no m o d ifica d o ). Los p a n e le s B y C m u e s tra n que la a d m in is tra c ió n de la fus ió n de un V H H e sp e c ífico para C le c 9 A de ra tón con un in te rfe ró n h um a no m o d ifica d o (m u ta n te Q 124 R ) no p rod u jo p é rd ida de peso ni to x ic id a d hem a to ló g ica , re s p e c tiv a m e n te (en el pane l B, las líne as de a rrib a a a ba jo en el ú ltim o pun to te m p o ra l: a cT a fe ron no d irig id o , P BS , C le c9 A -d ir ig id o A cT a fe ro n y m IFN W T , en el pane l C to d o s los g rá ficos , los h is to g ra m a s de izq u ie rd a a d e re ch a son: ra to n e s ingenuos , PBS, m lFN W T , A c T a fe ro n no d ir ig id o y C le c9 A -d ir ig id o A cT a fe ro n .
La Figura 3 re p re se n ta la se cu e n c ia de n u c le ó tid o s de 27 V H H s d ife re n te s e sp e c ífico s para C le c9 A hum ano. S e in tro d u je ro n h u e co s para a lin e a r las se cu e n c ia s . A las s e cu e n c ia s de la fig u ra 3 se les as ignan id e n tif ica d o re s de se cu e n c ia com o se m u es tra en el e je m p lo 2.
La Figura 4 m u e s tra las s e cu e n c ia s de a m in o á c id o s de 27 V H H s d ife re n te s e sp e c ífico s para el C le c 9 A hum ano . Las re g io ne s d e te rm in a n te s de la co m p le m e n ta rie d a d (C D R 1, C D R 2 y C D R 3 ) ind icad as se d e fine n según K aba t. Se in trod u je ro n h uecos para a lin e a r las se cu e n c ia s . Los 27 V H H m e n c io n a d o s p e rte ne cen a 11 g rupos d ife re n te s (vé a se la fig u ra 5).
Los V H H s que p e rte ne cen al m ism o g rupo son m uy s im ila re s y sus se cu e n c ia s de a m in o á c id o s sug ie ren que p rov ie ne n de cé lu las B re la c io n a d a s c lo n a lm e n te y re su lta n te s de una h ip e rm u ta c ió n so m á tica o de la m ism a cé lu la B p ero d ive rs if ica d a d eb ido a un e rro r de r T y /o PC R d u ra n te la co n s tru cc ió n de la b ib lio te ca . Los V H H p e rte n e c ie n te s al m ism o g rup o re con oce n el m ism o e p íto p o pero
sus o tras c a ra c te rís tica s (p o r e je m p lo , a fin ida d , p o ten c ia , e s ta b ilid a d , re n d im ie n to de e xp re s ió n , e tc .) p ue de n se r d ife re n te s . A las s e cu e n c ia s de la figura 4 se les as ig na n id e n tifica d o re s de se cu e n c ia com o se m u es tra en el e je m p lo 2.
En la figura 5 se m u es tra una ta b la que m u e s tra que los 27 V H H d ife re n te s p erte ne cen a 11 g rup o s d is tin to s . Los m ie m b ro s de los g ru p o s 5 y 7 se unen a C le c 9 A ta n to de ra tón com o de hum ano .
La figura 6 m u e s tra el p o te n c ia l a n titu m o ra l de una p ro te ín a q u im é rica q ue co m p re n d e un V H H e sp e c ífico para C le c 9 A de ra tón fu s io n a d o con un in te rfe rón a lfa 2 h um a no m o d ifica d o (m u ta n te Q 124R , "A c ta -C le c 9 A ") en co m b in a c ió n con el fa c to r de n e c ro s is tu m o ra l (T N F). El pan e l A d e m u e s tra q ue el tra ta m ie n to co m b in a d o con la p ro te ín a q u im é rica y el T N F m o stró una po ten te a c tiv ida d a n titu m o ra l, sin re a p a ric ió n de l tu m o r en el d ía 38 (o 23 d ías d e sp u é s de la dos is). El pane l B m u e s tra que el tra ta m ie n to c o m b in a d o fue b ien to le ra d o , sin to x ic id a d h e m a to ló g ica s ig n ifica tiva , com o la tro m b o c ito p e n ia , en co m p a ra c ió n con el tra ta m ie n to con IFN de tip o s a lva je o con IFN de tip o sa lva je c o m b in a d o con TN F.
La figura 7 m u e s tra el e fe c to co m b in a d o de la q u im e ra de un V H H e sp e c ífico para C le c9 A de ra tón fu s io n a d o con un in te rfe ró n a lfa 2 h u m a n o m o d ific a d o (m u ta n te Q 124 R ) y un a n tic u e rp o a n ti-P D -L 1 ("C le c 9 A -A cT a fe ro n a n ti-P D -L 1 ") en co m p a ra c ió n con PBS (co n tro l n ega tivo ), q u im e ra de un V H H e sp e c ífico para C le c9 A de ratón fu s io n a d o a un in te rfe rón a lfa 2 h um a no m o d ifica d o so lo (m u ta n te Q 124R , "C le c9 A -A cT a fe ro n "), y a n ticu e rp o a n ti-P D -L 1 so lo ("an ti-P D -L 1").
La figura 8 m u e s tra el e fe c to c o m b in a d o de una q u im e ra de un V H H e sp e c ífico para C le c 9 A de ra tón fu s io n a d o a un in te rfe rón a lfa 2 h um a no m o d ifica d o (Q 124 R ) y ta m b ié n fu s io n a d o a un V H H an ti-P D -L1 y d o xo rru b ic in a ("C le c9 A -Q 124 R -P D -L 1 doxo"), en c o m p a ra c ió n con una q u im e ra de un V H H e sp e c ífico p ara C le c 9 A de ra tón fu s io n a d o con un in te rfe rón a lfa 2 h u m a n o m o d ifica d o ("Q 124 R ") y fu s io n a d o con un V H H an ti-P D -L1 ("C le c9 A -Q 124 R -P D -L 1 "), d o xo rru b ic in a ("d o xo ") y P B S (co n tro l nega tivo ).
La figura 9 m u estra una ind u cc ión su s ta n c ia l de la p ro life ra c ió n de cé lu las T en ra ton es en re spu es ta a la a d m in is tra c ió n de un V H H e sp e c ífico para C le c9 A de ra tón fu s io n a d o con un in te rfe rón a lfa 2 hum a no m o d ifica d o (m u ta n te Q 124R , "A c ta k in e ").
La Figura 10, pane l A, m u e s tra las p u n tu a c io n e s c lín icas m e d ia s d e sc rita s en el E jem p lo 7 para va r io s tra ta m ie n to s (in c lu y e n d o v a r ia s fu s io n e s ) ta m b ié n d e sc rita s en el E je m p lo 7. La Figura 10, pane l B, m u e s tra el peso co rp o ra l m edio , ta l com o se d e sc rib e en el E je m p lo 7, para v a r io s tra ta m ie n to s ( in c lu ye n d o v a r ia s fu s io n e s ) ta m b ié n d e sc rito s en el E je m p lo 7.
La figura 11 m u e s tra la p un tu ac ió n c lín ica a cu m u la d a para v a r io s tra ta m ie n to s ; los h is to g ra m a s son (de izq u ie rd a a d e re cha : PBS (co n tro l neg a tivo ), fu s ió n de a n ti-C D 20 e IFN h u m a n o con una m u ta c ió n Q 124 R ("Q -c D20"), fus ió n de a n ti-C D 8 e IFN h um a no con una m u ta c ión Q 124 R ("Q -C D 8 "), fus ión de a n ti-C le c 9 A e IFN h u m a n o con una m u ta c ió n Q 124 R ("Q -C le c9 A "), fu s ió n de a n ti-B c ll10 e IFN h um a no con una m u ta c ió n Q 124R ("Q -B c ll10 ", es dec ir, el co n tro l no d ir ig id o ) y el IFN de tip o s a lva je en d o s d o s is se g ú n se ind ica . Q 124 R es una m u ta c ió n de l IFN h um a no q u e se p uede u tiliz a r en el ra tón (es dec ir, es un IFN m u ta n te h u m a n o q ue fu n c io n a en el ra tón). V é a se Nat. C om m . 2014 ;5 :3016. doi: 10.1038 /n co m m s4016.
La Figura 12 m u estra va r io s e fe c to s se cu n d a rio s en los tra ta m ie n to s d e sc rito s en la Figura 11 a n te r io r (m ism o o rde n de h is to g ra m a de izq u ie rd a a d e re ch a p ara los p a n e le s B-F).
La Figura 13 m u e s tra un e nsayo de se ñ a liza c ió n de pSTAT1 en cé lu la s d e n d rítica s hum a na s . Las q u im e ra s e s tu d ia d a s fu e ro n V H H a n ti-C le c 9 A h u m a n o /IF N R 149 A h u m a n o y V H H a n ti-C le c 9 A h u m a n o /IF N R 33 A /E 120 R hum a no . Se e stu d ia ro n dos dos is de los a ge n tes : 100 ng/m l y 500 ng/m l. PBS fue el con tro l y los da tos se e xp re sa n co m o un cam b io de p liegue de l p o rce n ta je de cé lu las d e n d rítica s p S T A T 1 (lo s da tos son una m e d ia de un co n ju n to de d a tos p o r trip lica d o ).
La figura 14 m u e s tra los e fe c to s a n titu m o ra le s de la q u im e ra b ie sp e c ífica V H H a n ti-C le c9 a h u m a n o /V H H a n ti-PD-L1 h u m a n o /IF N -R 149 A h um a no en un tu m o r h um a no (R L ) cu ltiva d o en ra ton es h um a n iza d o s . Con re fe re n c ia al d ía 18 en el e je X , las c o n s tru c c io n e s e s tu d ia d a s fu e ro n , de a rrib a a a ba jo : P B S (co n tro l); q u im e ra b ie sp e c ífica V H H a n ti-C le c9 a h u m a n o /V H H a n ti- PD-L1 h u m a n o /IF N -R 149 A hum ano ; y q u im e ra b ie spe c ífica V H H a n ti-C le c9 a h u m a n o /V H H a n ti- PD-L1 h u m a n o /IF N -R 149 A h um a no m ás liga n do de tiro s in a q u in a sa 3 s im ila r al F M S (F LT 3 L).
Descripción detallada
La p re se n te in ve n c ió n se basa, en parte , en el d e s c u b rim ie n to de a g e n te s (co m o los V H H ) q ue re co n o ce n y se unen a C lec9A . Los p rese n te s a g e n te s de un ión a C le c9 A fo rm an parte de una p ro te ín a q u im é rica o de fus ió n con una o m á s fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to y /o uno o m ás a g e n te s de se ñ a liza c ió n . En a lg u n a s re a liza c io n e s , estos a g e n te s de un ión a C le c 9 A se unen, pero no m o du lan fu n c io n a lm e n te a C lec9A .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , e s to s a g e n te s de un ión a C le c 9 A p ue de n u n irse y re c lu ta r d ire c ta o in d ire c ta m e n te cé lu las in m u n ita ria s a s itio s que n eces itan una acc ión te ra p é u tic a (p o r e je m p lo , un tu m o r o un m ic ro a m b ie n te tu m o ra l). En a lg u n a s re a liza c io n e s , los a g e n te s de unión a C le c9 A m e jo ran la p re se n ta c ió n de l a n tíg e n o tu m o ra l para p ro vo ca r una re sp u e s ta in m u n ita ria a n titu m o ra l e ficaz.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , los a g e n te s de un ión a C le c9 A m o du lan la p re se n ta c ió n de an tíge no s. En a lg u na s re a liza c io n e s , los a g e n te s de un ión a C le c9 A a te m pe ra n la re sp u e s ta inm u n ita ria para e v ita r o re d u c ir la a u to in m u n id a d . En a lg u n a s re a liza c io n e s , los a g e n te s de un ión a C le c 9 A p ro p o rc io n a n in m u n o su p re s ió n . En a lg u na s re a liza c io n e s , los a g e n te s de un ión a C le c 9 A p rovo ca n un a u m e n to de la p rop o rc ión de T re g s con re sp e c to a las cé lu la s T C D 8+ y/o las cé lu las T C D 4+ en un p ac ien te . Los m é to d o s a q u í d ivu lg a d o s se re fie ren a la re du cc ió n de las cé lu la s T a u to rre a c tiva s en un pac ien te .
La p rese n te inve nc ión p ro p o rc io n a co m p o s ic io n e s fa rm a cé u tica s que co m p re n d e n los a g e n te s de un ión a C lec9A . Se d ivu lga su uso en el tra ta m ie n to de v a r ia s e n fe rm e d a d e s , in c lu ye n d o el cán cer, las e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s y /o n e u ro d e g e n e ra tiva s .
Agentes de unión de Clec9A
En v a r ia s re a liza c io n e s , el p re se n te a ge n te de un ión a C le c9 A es un a g e n te b asad o en p ro te ína s cap az de un irse e sp e c ífica m e n te a C lec9A . En va r ia s re a liza c io n e s , el p rese n te a ge n te de un ión a C le c9 A es un a ge n te b asado en una p ro te ín a ca p a z de u n irse e sp e c ífica m e n te a C le c 9 A sin m o d u la c ió n fu n c io n a l(p o r e je m p lo , n e u tra liza c ió n p arc ia l o to ta l) de C lec9A . C le c9 A es un re ce p to r tip o lec tina de tip o C del g rupo V (C T L R ) que se e xp re sa en la s u p e rfic ie de un su b co n ju n to de cé lu las d e n d rític a s (es decir, cé lu las d e n d rítica s B D C A 3 ) e sp e c ia liza d a s en la cap tac ión y el p ro ce sa m ie n to de m a te ria le s p ro ce d e n te s de cé lu las m u erta s . C le c 9 A re co n o ce un co m p o n e n te co n se rva d o den tro de las cé lu la s n uc lea da s y no n uc lea da s , e xp u e s to cu a n d o las m e m b ra n a s c e lu la re s están d añ ad as . C le c 9 A se e xp re sa en la su p e rfic ie c e lu la r com o un d ím e ro g lico s ila d o y p uede m e d ia r en la e n d o c ito s is , pero no en la fa g o c ito s is . C le c9 A p osee un m o tivo s im ila r a la a c tiva c ió n del in m u n o rre ce p to r c ito p la sm á tico b asado en la tiro s in a q ue p uede re c lu ta r a la q u in a sa S yk e in d u c ir la p rod u cc ión de c ito q u in a s p ro in fla m a to r ia s (vé a se H uysam e n e t al. (2008 ), JB C , 283 :16693 -701 ).
En v a r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c 9 A de la in ve n c ió n co m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to q ue tie n e un d om in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o que re co n o ce un e p ítop o p rese n te en C lec9A . En una re a liza c ió n , el d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o re co n o ce uno o m ás e p íto p o s line a le s p rese n te s en C lec9A . T a l y com o se u tiliza aqu í, un e p ítop o linea l se re fie re a c u a lq u ie r se cu e n c ia co n tin u a de a m in o á c id o s p rese n te en C lec9A . En o tra re a liza c ió n , el d om in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o re con oce uno o m ás e p ítop os c o n fo rm a c io n a le s p re se n te s en C lec9A . T a l co m o se u tiliza aquí, un e p íto p o de co n fo rm a c ió n se re fie re a una o m ás s e cc io n e s de a m in o á c id o s (que pueden se r d is co n tin u a s ) que fo rm a n una su p e rfic ie tr id im e n s io n a l con ca ra c te rís tic a s y /o fo rm a s y /o e s tru c tu ra s te rc ia ria s cap ace s de s e r re co n o c id a s p o r un d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíge no s.
En va ria s re a liza c io n e s , el age n te de un ión a C le c9 A de la p re se n te in ve nc ión puede u n irse a la lon g itu d co m p le ta y /o fo rm a s m a d u ra s y /o iso fo rm a s y /o v a r ia n te s de e m p a lm e y /o fra g m e n to s y /o c u a lq u ie r o tro a ná log o , va r ia n te o m u ta n te na tu ra l o s in té tico de C le c9 A h um a no . En d ive rsa s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 A de la in ve n c ió n pue de un irse a c u a lq u ie r fo rm a de C le c 9 A h um a no , inc lu ye nd o fo rm a s m o n o m é rica s , d im é rica s , h e te ro d im é rica s , m u ltim é rica s y a so c ia d a s . En una re a liza c ió n , el a ge n te de un ión de C le c9 A se une a la fo rm a m o n o m é rica de C lec9A . En o tra re a liza c ió n , el a ge n te de un ión a C le c 9 A se une a una fo rm a d im é rica de C lec9A . En o tra re a liza c ió n , el a g e n te de un ión de C le c9 A se une a la fo rm a g lico s ila d a de C lec9A , q ue p ue de ser m o n o m é rica o d im érica .
En una re a liza c ió n , el p re se n te a g e n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to con un d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o que re co n o ce uno o m ás e p íto p o s p re se n te s en C le c 9 A h um ano . En una re a liza c ió n , e l C le c 9 A h u m a n o co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
MHEEEIYTSLQWDSPAPDTYQKCLSSNKCSGACCLVMVISCVFCMGLLTA
SIFLGVKLLQVSTIAMQQQEKLIQQERALLNFTEWKRSCALQMKYCQAFMQ
NSLSSAHNSSPCPNNWIQNRESCYYVSEIWSIWHTSQENCLKEGSTLLQIE
SKEEMDFITGSLRKIKGSYDYWVGLSQDGHSGRWLWQDGSSPSPGLLPA
ERSQSANQVCGYVKSNSLLSSNCSTWKYFICEKYALRSSV
(SEQ ID NO:1).
El a ge n te de un ión de C le c 9 A c o m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to que es un a n ticu e rp o de d o m in io ún ico , com o un V H H . El V H H p ue de d e riva rse , p o r e je m p lo , de un o rg a n ism o q ue p ro d u zca a n tic u e rp o s V H H com o un ca m é lid o , un tib u ró n , o el V H H pue de s e r un V h H d ise ñ a d o . Los V H H son p ro te ín a s te ra p é u tica s d e riva d a s de a n ticu e rp o s que co n tie n e n las p ro p ie d a d e s e s tru c tu ra le s y fu n c io n a le s ú n ica s de los a n tic u e rp o s de ca d e n a p e sad a n a tu ra le s . La te cn o lo g ía V H H se basa en a n ticu e rp o s to ta lm e n te fu n c io n a le s de ca m é lid o s que ca re ce n de ca d e n a s lige ras . Estos a n ticu e rp o s de ca d e n a p e sa d a co n tie n e n un ún ico d om in io va r ia b le (V H H ) y dos d o m in io s co n s ta n te s (C H 2 y C H 3 ). Los V H H se co m e rc ia liza n ba jo la m a rca N A N O B O D IE S .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , e l a g e n te de u n ión a C le c 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue es un V H H q ue co m p re n d e una so la ca d en a de a m in o á c id o s q ue tie n e cua tro "re g io n e s m a rco " o FR s y tre s "re g io n e s d e te rm in a n te s co m p le m e n ta ria s " o C D R s. Ta l y com o se u tiliza en el p re se n te d o cu m e n to , la "re g ió n m a rco " o "F R " se re fie re a una reg ión de l d o m in io va ria b le que se e n cu e n tra en tre las C D R . Ta l y com o se u tiliza aqu í, la "reg ión d e te rm in a n te c o m p le m e n ta r ia " o "C D R " se re fie re a las re g io n e s v a r ia b le s en los V H H q ue c o n tie n e n las s e cu e n c ia s de a m in o á c id o s ca p a ce s de u n irse e sp e c ífica m e n te a las d ia n a s a n tig é n ica s .
En va r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A c o m p re n d e un V H H que tien e un d o m in io va r ia b le que co m p re n d e al m e n o s a lre d e d o r de la se cu e n c ia C D R 1, C D R 2 y /o C D R 3. En d ive rsa s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e un V H H que tien e una reg ión va r ia b le que co m p re n d e al m e n o s a lre d e d o r de la se cu e n c ia FR 1, FR 2, F r 3 y FR4.
En re a liza c io n e s e je m p la re s , la se cu e n c ia C DR 1 se s e le cc io n a entre :
G S IS S IN V M G (S E Q ID N O :2);
G S F S S IN V M G (S E Q ID N O :3);
G S IS S IN IM G (S E Q ID N O :4);
G S IS S IN IM G (S E Q ID N O :5);
V S IF S IN A M G (S E Q ID N O :6);
G S IF S L N A M G (S E Q ID N O :7);
G R T IS N Y D M A (S E Q ID N O :8);
G R T F T T S L M Q (S E Q ID N O :9);
E R N L R IY D M A (S E Q ID N O :10);
E R N L R S Y D M A (S E Q ID N O :11);
G L T F S N Y H M G (S E Q ID N O :12);
G L T F S S Y H M G (S E Q ID N O :13);
G L T F S R Y H M G (S E Q ID N O :14);
G L T L S S Y Y IA (S E Q ID N O :15);
G L T F S S Y Y T G (S E Q ID N O :16);
G L T L S S Y H M G (S E Q ID N O :17);
G R T S S P Y V T G (S E Q ID N O :18);
G F T F S G Y V M S (S E Q ID N O :19);
G F T F S G Y V M T (S E Q ID N O :20 ); o
G F T F S G Y L M S (S E Q ID N O :21).
En re a liza c io n e s e je m p la res , la s e cu e n c ia C D R 2 se se le cc io n a entre :
R IT N L G L P N Y A D W L K D (S E Q ID N O :22);
R IT N L G L P N Y A D S V T G (S E Q ID N O :23);
R IT N IG L P N Y A D S V K G (S E Q ID N O :24);
R IT N L G L P N Y A D S V E G (S E Q ID N O :25);
A IT S G G R W Y S D S V K G (S E Q ID N O :26);
A IT S G G R T A Y A D S V K G (S E Q ID N O :27);
H IT S D G R IV Y A D P V K G (S E Q ID N O :28);
R IS G S G D R T D Y A D S V K G (S E Q ID N O :29);
S IT W S T G N T H Y A D S V K G (S E Q ID N O :30);
V IS S S G D S T H Y S D F V K G (S E Q ID N O :31);
V IT S S G D S T H Y S D F V K G (S E Q ID N O :32);
Q IT W S D A S IY Y A G S V K G (S E Q ID N O :33);
Q IT W S D T S IY Y A G S V K G (S E Q ID N O :34);
Q IT W S D G T T Y Y P G S V K G (S E Q ID N O :35);
Q IR W S D D S T Y Y P G S V K G (S E Q ID N O :36);
Q IS W S D D S T Y Y A D S V K G (S E Q ID N O :37);
T V S W G G V T Y Y A D S V K G (S E Q ID N O :38);
S IG S G G G Y P S Y T D S V E G (S E Q ID N O :39);
S IG S G G G Y P S Y T G S V E G (S E Q ID N O :40);
H IG S G G G Y P S Y T D S V Q G (S E Q ID N O :41);
H IG S G G H A T Y T D S V E G (S E Q ID N O :42); o
T IG S G G G IT S Y A D S V K G (S E Q ID N O :43).
En re a liza c io n e s e je m p la res , la s e cu e n c ia C D R 3 se se le cc io n a entre :
V A L S A E Y (S E Q ID N O :44);
V A L K A E Y (S E Q ID N O :45);
V G L K A E Y (S E Q ID N O :46);
K T K S A V L F G G M D Y (S E Q ID N O :47);
Y IR G E D Y (S E Q ID N O :48);
K H Y A S N Y (S E Q ID N O :49);
Q D F G S P S F (S E Q ID N O :50);
Q D F R S P D F (S E Q ID N O :51);
Q IF G S P N F (S E Q ID N O :52);
L A IH G D Y (S E Q ID N O :53);
N Q IR Q W P (S E Q ID N O :54);
N S IR Q W P (S E Q ID N O :55);
N A IR Q W P (S E Q ID N O :56);
R K V G G P D Y (S E Q ID N O :57);
N T F G N V Y (S E Q ID N O :58);
LG R ; o
V IK .
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :2, S E Q ID N O :22 y S E Q ID N O :44.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :3, S E Q ID N O :23 y S E Q ID N O :45.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :4, S E Q ID N O :24 y S E Q ID N O :45.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :2, S E Q ID N O :25 , y S E Q ID N O :46.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :5, S E Q ID N O :26 y S E Q ID N O :47.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :6, S E Q ID N O :27 y S E Q ID N O :48.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :7, S E Q ID N O :28 y S E Q ID N O :49.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :8, S E Q ID N O :29 y S E Q ID N O :50.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :8, S E Q ID N O :29 , y S E Q ID N 0:51.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :8, S E Q ID N O :29 y S E Q ID N O :52.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :9, S E Q ID N O :30 y S E Q ID N O :53.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :10 , S E Q ID N0:31 y S E Q ID N O :54.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e S E Q ID N O :10 , S E Q ID N0:31 y S E Q ID N O :55.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :11 , S E Q ID N O :32 y S E Q ID N O :56.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :12 , S E Q ID N O :33 y S E Q ID N O :57.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :13 , S E Q ID N O :34 y S E Q ID N O :57.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :14 , S E Q ID N O :35 y S E Q ID N O :57.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :15 , S E Q ID N O :36 y S E Q ID N O :57.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :16 , S E Q ID N O :37 y S E Q ID N O :57.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :17 , S E Q ID N O :37 y S E Q ID N O :57.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :18 , S E Q ID N O :38 y S E Q ID N O :58.
En una re a liza c ió n e je m p la r, e l a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :19 , S E Q ID N O :39 y LG R. En una re a liza c ió n e je m p la r, e l a g e n te de un ión de C le c 9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :19 , S E Q ID N O :40 y LGR. En una re a liza c ió n e je m p la r, e l a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :19 , S E Q ID NO:41 y LG R. En una re a liza c ió n e je m p la r, e l a g e n te de un ión de C le c9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :20 , S E Q ID N O :42 y LG R. En una re a liza c ió n e je m p la r, el a g e n te de un ión de C le c 9 A c o m p re n d e S E Q ID N O :21 , S E Q ID N O :43 y V IK .
En v a r ia s re a liza c io n e s e je m p la re s , el a ge n te de un ión a C le c9 A c o m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s se le cc io n a d a e n tre las s ig u ie n te s se cu e n c ia s :
R 2C H C L 8
QVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGSISSINVMGWYRQAPGKERELVAR
ITNLGLPNYADWLKDRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCYLVALS
AEYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:59);
R1 C H C L 50
QVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGSFSSINVMGWYRQAPGKERELVA
RITNLGLPNYADSVTGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCYLVALK
AEYWGQGTQVTVSS (SEQ ID N0:6Q);
R1 C H C L21
QVQLVESGGGLVHRGGSLRLSCAASGSISSINIMGWYRQAPGKERELVARI
TNIGLPNYADSVKGRFTISRDNAKSTVYLQMNSLNAEDTAVYYCYLVALKA
EYWGQGTQVTVSS (SEQ ID N0:61);
R 2C H C L 87
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSISSINVMGWYRQAPGKERELVA
RITNLGLPNYADSVEGRFTISRDKDENTVYLEMNTLKPEDTAVYYCYLVGLK
AEYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:62);
R2CHCL24
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSSDSINAMGWYRQAPGKERELVA
AITSGGRWYSDSVKGRGTISRDNAKNTVYLQIASLKPEDTAVYYCNVKTK
SAVLFGGMDYWGKGTQVTVSS (SEQ ID NO:63);
R 2C H C L 38
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASVSIFSINAMGWYRQAPGKERELVAA
ITSGGRTAYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMDSLKPEDTDVYYCKAYIRG
EDYWGKGTQVTVSS (SEQ ID NO:64);
R1 C H C L 16
DVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSLNAMGWYRQAPGKERELVA
HITSDGRIVYADPVKGRFTISRVDGKNMVTLQMNSLKPEDTAVYYCNAKHY
ASNYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:65);
R 2C H C L 10
QVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGRTISNYDMAWSRQAPGKEREFVA
RISGSGDRTDYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAIYYCQIQD
FGSPSFSGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:66);
R1 C H C L 34
DVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGRTISNYDMAWSRQAPGKEREFVA
RISGSGDRTDYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAIYYCQIQD
FRSPDFWSQGTQVTVSS (SEQ ID NO:67);
R1 C H C L 82
QVQLVESGGESVQAGGSLRLSCAASGRTISNYDMAWSRQAPGKEREFVA
RISGSGDRTDYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAIYNCQTQI
FGSPNFSGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:68);
R 2C H C L 3
QVQLVESGGGLVQAGDSLRLSCAASGRTFTTSLMQWHRQAPGKEREFVA
SITWSTGNTHYADSVKGRFTISRDNARNTVYLQMNSLKPEDTAIYTCRVLAI
HGDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:69);
R 2C H C L 69
DVQLVESGGGLVQAGDSLRLSCAASERNLRIYDMAWYRQAPGKEREYVA
VISSSGDSTHYSDFVKGRFTISRDNAKNTVSLQMDSLKPEDTAFYYCNVNQ
IRQWPWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:70);
R1 C H C L 56
QVQLVESGGGLVQAGDSLRLSCAASERNLRIYDMAWYRQAPGKEREYVA
VISSSGDSTHYSDFVKGRFTISRDNAKNTVSLQMDSLKPEDTAFYYCNVNS
IRQWPWGQGTQVTVSS (SEQ ID N0:71);
R2CHCL32
QVQLVESGGGLVQAGDSLRLSCTASERNLRSYDMAWWRQAPGKEREYV
AVITSSGDSTHYSDFVKGRFTISRDNAKNTVSLQMDSLKPEDTASYYCNVN
AIRQWPWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:72);
R 2C H C L 49
DVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAISGLTFSNYHMGWYRQAPGREREFVA
QITWSDASIYYAGSVKGRFTISRDNVKNIVYLQIDNLKPEDTAIYYCDARKVG
GPDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:73);
R 2C H C L 53
QVQLVESGGGLVQAGGSLTLSCAISGLTFSSYHMGWYRQAPGREREFVA
QITWSDTSIYYAGSVKGRFTISRDNVKNIVYLQIDNLKPEDTAIYYCDARKVG
GPDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:74);
R 2 C H C L22
DVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAISGLTFSRYHMGWYRQAPGREREFVA
QITWSDGTTYYPGSVKGRFTISRDNARNTVYLQIDNLKPEDTAIYYCDARKV
GGPDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:75);
R 2C H C L 25
QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCATSGLTLSSYYIAWYRQAPGREREFVAQ
IRWSDDSTYYPGSVKGRFTISRDNARNTVYLRMDNLKPEDTARYYCDARK
VGGPDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:76);
R 2C H C L 18
DVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCATSGLTFSSYYTGWYRQAPGREREFVA
QISWSDDSTYYADSVKGRFTISRDNARNTVYLQMNNLKPGDTAIYYCDARK
VGGPDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:77);
R1 C H C L 23
DVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCATSGLTLSSYHMGWYRQAPGREREFVA
QISWSDDSTYYADSVKGRFTISRDNARNTVYLQMNNLKPEDTAIYYCDARK
VGGPDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:78);
R1 C H C L 27
DVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTSSPYVTGWYRQTPGKEREPVA
TVSWGGVTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNALKPEDTAIYYCNVNTF
GNVYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:79);
R 2C H C L 13
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYVMSWVRQAPGKGLEWV
ASIGSGGGYPSYTDSVEGRFTISRDNAKNTLYLLMDNLKPDDTAVYYCEML
GRRGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:80);
R2CHCL14
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYVMSWVRQAPGKGLEWV
ASIGSGGGYPSYTDSVEGRFTISRDNAKNTLYLQMNNLKPDDTAVYYCEM
LGRRGQGTQVTVSS (SEQ ID N0:81);
R 2 C H C L42
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYVMSWVRQAPGKGLEWV
ASIGSGGGYPSYTGSVEGRFTISRDNAKNTLYLLMNNLKPDDTAVYYCEML
GRRGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:82);
R 2C H C L41
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYVMSWVRQAPGKGLEWV
AHIGSGGGYPSYTDSVQGRFTISRDNAKNTLYLQMNNLKPEDTAVYYCEM
LGRRGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:83);
R 2C H C L 94
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYVMTWVRQAPGKGLEWV
AHIGSGGGHATYTDSVEGRFTISRDNAKNTLYLQMNNLKAEDTAVYYCEFL
GRRGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:84); or
R 2C H C L 27
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYLMSWVRQAPGKGLEWV
ATIGSGGGITSYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNNLKHEDTAVYYCETVI
KRGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:85).
En va r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to que co m p re n d e una s e cu e n c ia que es al m e n o s a lre d e d o r de l 60 % idé n tica a c u a lq u ie ra de las s e cu e n c ia s d ivu lg a d a s en el p re se n te d o cu m e n to . P o r e je m p lo , el a ge n te de un ión a C le c 9 A p uede c o m p re n d e r una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to que c o m p re n d e una s e cu e n c ia que es al m e n o s a lre d e d o r de l 60% , al m e n o s a lre d e d o r de l 61% , a l m e n o s a lre d e d o r del 62% , a l m e n o s a lre d e d o r de l 63% , al m e n o s a lre d e d o r de l 64% , al m e n o s a lre d e d o r de l 65% , al m e n o s a lre d e d o r del 66% , al m e n o s a lre d e d o r de l 67% , al m e n o s a lre d e d o r de l 68% , al m e n o s a lre d e d o r de l 69% , al m e n o s a lre d e d o r del 70% , al m e n o s a lre d e d o r de l 71% , al m e n o s a lre d e d o r de l 72% , al m e n o s a lre d e d o r de l 73% , al m e n o s a lre d e d o r del 74% , al m e n o s a lre d e d o r de l 75% , al m e n o s a lre d e d o r de l 76% , al m e n o s a lre d e d o r de l 77% , al m e n o s a lre d e d o r del 78% , al m e n o s a lre d e d o r de l 79% , al m e n o s a lre d e d o r de l 80% , al m e n o s a lre d e d o r de l 81% , al m e n o s a lre d e d o r del 82% , al m e n o s a lre d e d o r de l 83% , al m e n o s a lre d e d o r de l 84% , al m e n o s a lre d e d o r de l 85% , al m e n o s a lre d e d o r del 86% , al m e n o s a lre d e d o r de l 87% , al m e n o s a lre d e d o r de l 88% , al m e n o s a lre d e d o r de l 89% , al m e n o s a lre d e d o r del 90% , al m e n o s a lre d e d o r de l 91% , al m e n o s a lre d e d o r de l 92% , al m e n o s a lre d e d o r de l 93% , al m e n o s a lre d e d o r del 94% , al m e n o s a lre d e d o r de l 95% , al m e n o s a lre d e d o r de l 96% , al m e n o s a lre d e d o r de l 97% , al m e n o s a lre d e d o r del 98% , al m e n o s a lre d e d o r de l 99% , o en un 100% id é n tica s a c u a lq u ie ra de las se c u e n c ia s d iv u lg a d a s en el p re se n te d o c u m e n to (p o r e je m p le , a lre d e d o r del 60% , o a lre d e d o r del 61% , o a lre d e d o r de l 62% , o a lre d e d o r del 63% , o a lre d e d o r de l 64% , o a lre d e d o r de l 65% , o a lre d e d o r de l 66% , o a lre d e d o r de l 67% , o a lre d e d o r del 68% , o a lre d e d o r de l 69 % , o a lre d e d o r de l 70% , o a lre d e d o r de l 71% , o a lre d e d o r de l 72% , o a lre d e d o r de l 73% , o a lre d e d o r de l 74% , o a lre d e d o r de l 75% , o a lre d e d o r de l 76% , o a lre d e d o r del 77% , o a lre d e d o r del 78% , o a lre d e d o r de l 79% , o a lre d e d o r de l 80% , o a lre d e d o r de l 81% , o a lre d e d o r de l 82% , o a lre d e d o r de l 83% , o a lre d e d o r de l 84% , o a lre d e d o r de l 85% , o a lre d e d o r de l 86% , o a lre d e d o r de l 87% , o a lre d e d o r de l 88% , o a lre d e d o r de l 89% , o a lre d e d o r de l 90% , o a lre d e d o r de l 91% , o a lre d e d o r de l 92% , o a lre d e d o r del 93% , o a lre d e d o r del 94% , o a lre d e d o r de l 95% , o a lre d e d o r de l 96% , o a lre d e d o r de l 97% , o a lre d e d o r de l 98% , el 99% o a lre d e d o r del 100% de la ide n tid ad de s e cu e n c ia con cu a lq u ie ra de las s e cu e n c ia s que se d e sc rib e n en e s te d o cu m e n to )
En va r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to que co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s que tien e una o m ás m u ta c io n e s de a m in o á c id o s con re sp e c to a cu a lq u ie ra de las s e cu e n c ia s d ivu lg a d a s en el p re se n te d o cu m e n to . En va r ia s re a liza c io n e s , e l a g e n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to q u e tie n e una s e cu e n c ia de a m in o á c id o s que tien e una, o dos, o tres, o cu a tro , o c inco , o se is , o s ie te , u ocho, o nueve , o d iez, o q u in ce , o ve in te m u ta c io n e s de a m in o á c id o s con re sp e c to a cu a lq u ie ra de las se cu e n c ia s d ivu lg a d a s en el p re se n te d o cu m e n to . En a lg u n a s re a liza c io n e s , las una o m ás m u ta c io n e s de a m in o á c id o s pue de n s e le cc io n a rse in d e p e n d ie n te m e n te en tre su s titu c io n e s , inse rc ion es , d e le c io n e s y tru n ca m ie n to s .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , las m u ta c io n e s de a m in o á c id o s son su s titu c io n e s de a m in o á c id o s , y p ueden in c lu ir s u s titu c io n e s c o n se rva tiva s y /o no con se rva tiva s .
Las "su s titu c io n e s c o n se rva tiva s " p ueden re a liza rse , p o r e je m p lo , sob re la base de la s im ilitu d de la p o la rida d , la ca rga , el ta m a ñ o , la so lu b ilid a d , la h id ro fo b ic id a d , la h id ro filia y /o la n a tu ra le za a n fip á tica de los re s id u o s de a m in o á c id o s im p lica do s . Los 20 a m in o á c id o s n a tu ra le s p ue de n a g ru p a rse en los s ig u ie n te s se is g ru p o s de a m in o á c id o s e s tá n d a r: (1 ) h id ro fób ico : M et, A la , Val, Leu, He; (2 ) h id ró filo neu tro : Cys, Ser, Thr; A sn , G in ; (3 ) ácido: A sp , G lu ; (4 ) bás ico : H is, Lys, A rg ; (5 ) re s id u o s q ue in flu ye n en la o rie n ta c ió n de la cad en a : G ly, Pro; y (6 ) a rom á tico : T rp, Tyr, Phe.
T a l y com o se u tiliza en este d ocum e n to , las "su s titu c io n e s c o n se rva tiva s " se d e fine n com o in te rca m b io s de un a m in o á c id o por o tro a m in o á c id o e n u m e ra d o den tro del m ism o g rupo de los se is g rup o s de a m in o á c id o s e s tá n d a r m o s tra d o s a n te rio rm e n te . P o r e je m p lo , el in te rca m b io de A sp p o r G lu re tiene una carga neg a tiva en el p o lip ép tid o a s í m o d ificad o . A d e m á s, la g lic in a y la p ro lina p ueden su s titu irse e n tre s í en fun c ión de su ca p a c id a d para in te rru m p ir las a -hé lices .
T a l y com o se u tiliza aquí, las "s u s titu c io n e s no c o n se rva tiva s " se d e finen com o in te rca m b io s de un a m in o á c id o p o r o tro a m in o á c id o inc lu ido en un g rup o d ife re n te de los se is g ru p o s de a m in o á c id o s e s tá n d a r (1 ) a (6 ) m o stra d o s a n te rio rm e n te .
En v a r ia s re a liza c io n e s , las su s titu c io n e s ta m b ié n p ueden in c lu ir a m in o á c id o s no c lás icos . Los a m in o á c id o s no c lá s ico s e je m p la re s inc lu ye n , e n tre o tros, se le n o c is te ín a , p irro lis in a , N -fo rm ilm e tio n in a p -a la n in a , G A B A y á c ido 8-a m in o vu lín ico , á c ido 4 -a m in o b e n z o ic o (P A B A ), D -isó m e ro s de los a m in o á c id o s co m u n e s , á c ido 2 ,4 -d ia m in o b u tírico , á c id o a -a m in o isob u tírico , á c ido 4 -a m in o b u tír ico , A bu , á c ido 2 -a m in o bu tírico , Y-Abu, £-Ahx, á c id o 6 -a m in o h exan o ico , A ib , á c ido 2 -a m in o isob u tírico , á c ido 3 -a m in o p rop ión ico , o rn itin a , n o rle uc in a , n o rva lina , h id ro x ip ro lin a , sa rco sm o , c itru lin a , h om o c itru lin a , á c ido c is te ico , t-b u tilg lic in a , t-b u tila la n in a , fe n ilg lic in a , c ic lo h e x ila la n in a , p -a la n in a , flu o ro a m in o á c id o s , a m in o á c id o s de d ise ño com o los p -m e tila m in o á c id o s , los C a -m e tila m in o á c id o s , los N am e tila m in o á c id o s y los a n á lo g o s de los a m in o á c id o s en genera l.
En v a r ia s re a liza c io n e s , la m u ta c ió n de a m in o á c id o s p ue de e s ta r en las C D R de la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to (p o r e je m p lo , las re g io n e s C D R 1, C D R 2 o C D R 3). En o tra re a liza c ió n , la a lte ra c ió n de a m in o á c id o s p ue de e s ta r en las re g io n e s m arco (F R s) de la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to (p o r e je m p lo , las re g io n e s FR1, FR2, FR 3 o FR 4). La m o d ifica c ió n de las se cu e n c ia s de a m in o á c id o s p uede log ra rse u tiliza n d o cu a lq u ie r té c n ica co n o c id a en la técn ica , p o r e je m p lo , la m u ta g é n e s is d ir ig id a al s itio o la m u ta g é n e s is basad a en la PC R. E stas té cn ica s se d escribe n , por e je m p lo , en S a m b ro o k e t al., M o le c u la r C lon ing : A L a b o ra to ry M a nu a l, C o ld S pring H a rb o r P ress, P la in v iew , N .Y., 1989 y A u su b e l e t al., C u rre n t P ro to co ls in M o le c u la r B io logy , John W ile y & S ons, N e w Y ork, N .Y ., 1989.
En v a r ia s re a liza c io n e s , las m u ta c io n e s no re du cen su s ta n c ia lm e n te la ca p a c id a d del p re se n te a ge n te de un ión a C le c 9 A p ara u n irse e sp e c ífica m e n te a C lec9A . En d ive rsa s re a liza c io n e s , las m u ta c io n e s no reducen su s ta n c ia lm e n te la ca p a c id a d del p re se n te a ge n te de un ión a C le c9 A para u n irse e sp e c ífica m e n te a C le c9 A y sin m o d u la r fu n c io n a lm e n te (p o r e je m p lo , n e u tra liza n d o p arc ia l o to ta lm e n te ) C lec9A .
En v a r ia s re a liza c io n e s , la a fin ida d de un ión de l a ge n te de un ión de C le c 9 A de la inve nc ión para las fo rm a s de lon g itu d co m p le ta y /o m a d u ra s y /o iso fo rm a s y /o v a r ia n te s de e m p a lm e y/o fra g m e n to s y /o fo rm a s m o n o m é rica s y/o d im é rica s y /o cu a lq u ie r o tro a ná log o , v a r ia n te o m u ta n te n a tu ra l o s in té tico ( in c lu ye n d o fo rm a s m o n o m é rica s y /o d im é rica s ) de C le c9 A h um a no puede d e sc rib irse p or la co n s ta n te de d iso c ia c ió n de e q u ilib rio (K D ). En d ive rsas re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to que se une a la long itud co m p le ta y /o fo rm a s m a d u ra s y /o iso fo rm a s y/o v a r ia n te s de e m p a lm e y/o fra g m e n to s y /o c u a lq u ie r o tro a ná log o , va r ia n te o m u ta n te natu ra l o s in té tico ( in c lu ye n d o fo rm a s m o n o m é rica s y /o d im é rica s ) de C le c9 A h um a no con una KD de m e no s de a p ro x im a d a m e n te 1 uM , ce rca de 900 nM, ce rca de 80o nM , ce rca de 700 nM , ce rca de 600 nM, ce rca de 500 nM , ce rca de 400 nM , ce rca de 300 nM , ce rca de 200 nM , ce rca de 100 nM, ce rca de 90 nM , ce rca de 80 nM , ce rca de 70 nM , ce rca de 60 nM, ce rca de 50 nM , ce rca de 40 nM , ce rca de 30 nM, ce rca de 20 nM, ce rca de 10 nM, o ce rca de 5 nM, o ce rca de 1 nM.
En va r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to que se une pero no m o d u la fu n c io n a lm e n te (p o r e je m p lo , n e u tra liza p arc ia l o to ta lm e n te ) el a n tíg e n o de in te ré s , es dec ir, C lec9A . P o r e je m p lo , en va r ia s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to del a ge n te de un ión a C le c9 A s im p le m e n te se d ir ige al a n tíg e n o pero no m o du la fu n c io n a lm e n te de fo rm a su s ta n c ia l (p o r e je m p lo , inh ibe p arc ia l o to ta lm e n te , re du ce o n e u tra liza ) un e fe c to b io ló g ico que tie n e el an tíge no . En va ria s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to de l a g e n te de un ión a C le c 9 A se une a un e p íto p o q ue e stá fís ic a m e n te se p a ra d o de un s itio de a n tíg e n o que es im p o rta n te para su a c tiv id a d b io ló g ica (p o r e je m p lo , el s itio a c tivo de un a n tíge no ).
D ich a un ión sin m o d u la c ió n s ig n ifica tiva de la fun c ión e n cu e n tra uso en v a r ia s re a liza c io n e s de la p rese n te inve n c ió n , in c lu ye n d o m é to d o s en los que el p re se n te a g e n te de un ión de C le c 9 A se u tiliza p ara re c lu ta r d ire c ta o in d ire c ta m e n te cé lu la s inm un es a c tiva s a un s itio de n eces id ad a tra vé s de un a n tíg e n o e fe c to r. P o r e je m p lo , en v a r ia s re a liza c io n e s , el p re se n te a ge n te de un ión a C le c9 A p ue de u tiliza rse para re c lu ta r d ire c ta o in d ire c ta m e n te cé lu la s d e n d rítica s a tra vé s de C le c9 A a una cé lu la tu m o ra l en un m é to do de re d u cc ió n o e lim in a c ió n de un tu m o r (p o r e je m p lo , el a ge n te de un ión a C le c9 A p uede c o m p re n d e r una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue te n g a un d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o anti C le c9 A y una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to que te n g a un d om in io de re co n o c im ie n to (p o r e je m p lo , d om in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o ) d ir ig id o con tra un a n tíg e n o o re ce p to r tu m o ra l). En ta le s re a liza c io n e s , es d e s e a b le re c lu ta r d ire c ta o in d ire c ta m e n te c é lu la s d e n d rític a s p ero no m o d u la r o n e u tra liz a r fu n c io n a lm e n te la a c tiv id a d de C lec9A . En e stas re a liza c io n e s , la se ñ a liza c ió n de C le c9 A es una p ieza im p o rta n te de l e fe c to re d u c to r o e lim in a d o r de l tum o r.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión de C le c 9 A m e jo ra la p re se n ta c ió n de a n tíg e n o s p o r parte de las cé lu las d e n d rítica s . P o r e je m p lo , en v a r ia s re a liza c io n e s , el p re se n te a g e n te de un ión a C le c 9 A re c lu ta d irec ta o in d ire c ta m e n te cé lu las d e n d rítica s a tra vé s de C le c9 A a una cé lu la tu m o ra l, d onde los a n tíg e n o s tu m o ra le s son p o s te rio rm e n te e n d o c ita d o s y p re se n ta d o s en la cé lu la d e n d rítica para la ind u cc ión de p o ten tes re sp u e s ta s de cé lu la s T h u m o ra le s y c ito tóx icas .
En o tras re a liza c io n e s (p o r e je m p lo , re la c io n a d a s con el tra ta m ie n to de e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s o n e u ro d e g e n e ra tiva s ), el a ge n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to que se une y n e u tra liza el a n tíg e n o de in te rés, es dec ir, C lec9A . P o r e je m p lo , en va r ia s re a liza c io n e s , los p rese n te s m é to do s p ue de n in h ib ir o re d u c ir la se ñ a liza c ió n o e xp re s ió n de C lec9A , p o r e je m p lo , para c a u s a r una re du cc ió n en una re sp u e s ta inm un ita ria .
Agentes terapéuticos que comprenden los actuales agentes de unión a Clec9A
Quimeras y fusiones con agentes señalizadores
El a g e n te de un ión de C le c9 A de la inve nc ión fo rm a parte de una q u im e ra o fus ió n con uno o m ás a g e n te s de se ñ a liza c ió n . En co n se cu e n c ia , la p re se n te inve n c ió n p ro p o rc io n a p ro te ín a s q u im é rica s o de fu s ió n q ue inc lu ye n , p o r e je m p lo , una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to con tra C le c 9 A y uno o m ás a g e n te s de señ a lizac ió n .
El a g e n te de s e ñ a liza c ió n se m o d ifica p ara te n e r una a fin id a d o a c tiv id a d re d u c id a p o r uno o m ás de sus re cep to re s , lo q ue p e rm ite a te n u a r la a c tiv id a d (in c lu id o el a g o n ism o o el a n ta g o n is m o ) y /o e v ita r la se ñ a liza c ió n in e sp e c ífica o el se cu e s tro in d e se a b le de la p ro te ín a q u im é rica o de fus ió n . En va r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de se ñ a liza c ió n es a n ta g o n is ta en su fo rm a de tip o sa lva je y lleva una o m ás m u ta c io n e s que a te nú an su a c tiv id a d a n ta g o n is ta . En v a r ia s re a liza c io ne s , el a ge n te de se ñ a liza c ió n es a n ta g o n is ta d eb ido a una o m ás m u ta c ion es , p o r e je m p lo , un a g e n te de se ñ a liza c ió n a g o n is ta se co n v ie rte en un a g e n te de se ñ a liza c ió n a n ta g o n is ta y, d ich o a ge n te de se ñ a liza c ió n con ve rtid o , o p c io n a lm e n te , ta m b ié n lleva una o m ás m u ta c io n e s que a te nú an su ac tiv ida d a n ta g o n is ta (p o r e je m p lo , com o se d e sc rib e en W O 2015 /007520 ).
El a g e n te s e ñ a liz a d o r es una fo rm a m o d ific a d a (p o r e je m p lo , m u ta n te ) de l a ge n te s e ñ a liz a d o r que tie n e una o m ás m u ta c io n e s . En va r ia s re a liza c io n e s , las m o d ific a c io n e s (p o r e jem p lo , m u ta c io n e s ) p e rm ite n que el a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o te n g a una o m ás a c tiv id a d e s a te nu ad as , com o una o m ás a fin id a d e s de un ión re du c ida s, una a c tiv id a d e n d ó g e n a re d u c id a y una b io a c tiv id a d e sp e c ífica re d u c id a en re lac ió n con la fo rm a no m o d ifica d a o no m u tada , es dec ir, la fo rm a de tip o s a lva je de l a g e n te de se ñ a liz a c ió n (p o r e je m p lo , c o m p a ra n d o el m ism o a g e n te de se ñ a liza c ió n en una fo rm a de tip o sa lva je fre n te a una fo rm a m o d ifica d a o m u ta n te ). En a lg u n a s re a liza c io n e s , las m u ta c io n e s q ue a te nú an o re du cen la un ión o la a fin ida d inc lu ye n a q u e lla s m u ta c io n e s que re du cen o anu lan su s ta n c ia lm e n te la un ión o la ac tiv ida d . En a lg u na s re a liza c io n e s , las m u ta c io n e s que a te nú an o re du cen la un ión o la a fin id a d son d ife re n te s de las m u ta c io n e s q ue re du cen o a nu lan su s ta n c ia lm e n te la un ión o la a c tiv id a d . En co n se cu e n c ia , en v a r ia s re a liza c io n e s , las m u ta c io n e s p e rm ite n que el a ge n te de se ñ a liza c ió n te n g a una seg u rida d m e jo rad a , p o r e je m p lo , una to x ic id a d s is té m ica re du c ida , unos e fe c to s se cu n d a rio s re du c ido s y unos e fe c to s fu e ra de o b je tivo re d u c id o s en re lac ió n con el a ge n te de se ñ a liza c ió n no m u ta do , es dec ir, de tip o sa lva je (p o r e jem p lo , c o m p a ra n d o el m ism o a g e n te de se ñ a liza c ió n en una fo rm a de tip o sa lva je fre n te a una fo rm a m o d ific a d a (p o r e je m p lo , m utan te )).
C o m o se d e sc rib e en el p re se n te d o cu m e n to , el a g e n te puede te n e r una se g u rid a d m e jo ra d a d eb ido a una o m ás m o d ifica c io n e s , p o r e je m p lo , m u ta c io n e s . En va ria s re a liza c io ne s , la seg u rida d m e jo rad a s ig n ifica que la p rese n te p ro te ín a q u im é rica p ro p o rc io n a una m e n o r to x ic id a d (p o r e je m p lo , to x ic id a d s is té m ica y /o to x ic id a d e s a so c ia d a s a te jid o s u ó rga n os); y /o e fe c to s se cu n d a rio s d ism in u id o s o su s ta n c ia lm e n te e lim ina do s; y /o m a yo r to le ra b ilid a d , e ve n to s a d ve rso s d ism in u id o s o su s ta n c ia lm e n te e lim in a d o s ; y /o e fe c to s fu e ra de la d iana re du c ido s o su s ta n c ia lm e n te e lim ina do s; y /o una m a yo r v e n ta n a te ra p é u tica .
En va ria s re a liza c io n e s , el a ge n te de se ñ a liza c ió n se m o d ifica para te n e r una o m ás m u ta c io n e s que re du cen su a fin id a d de un ión o a c tiv id a d para uno o m ás de sus re ce p to re s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de se ñ a liza c ió n se m o d ifica para te n e r una o m ás m u ta c io n e s que re du cen su s ta n c ia lm e n te o a nu lan la a fin ida d de un ión o la a c tiv id a d para los re cep to re s . En a lg u na s re a liza c io ne s , la a c tiv id a d p ro p o rc io n a d a p o r el a g e n te de se ñ a liza c ió n de tip o sa lva je es el a go n ism o en el re ce p to r (p o r e je m p lo , la a c tiva c ió n de un e fe c to c e lu la r en un s itio de la te ra p ia ). P o r e je m p lo , el a ge n te de se ñ a liza c ió n de tip o sa lva je p uede a c tiv a r su re cep to r. En ta le s re a liza c io n e s , las m u ta c io n e s dan lu g a r a q ue el a g e n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o te n g a una a c tiv id a d a c tiva d o ra re d u c id a o a n u la d a en el recep to r. P o r e je m p lo , las m u ta c io n e s pueden d a r lu g a r a que el a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o e n tre gu e una señ a l de a c tiva c ió n re du c ida a una cé lu la o b je tivo o la seña l de a c tiva c ió n pod ría se r a nu lad a . En a lg u na s re a liza c io n e s , la ac tiv ida d p ro p o rc io n a d a p o r el a g e n te de se ñ a liza c ió n de tip o sa lva je es el a n ta g o n ism o en el re c e p to r (p o r e je m p lo , el b lo q ue o o la a m o rtig u a c ió n de un e fe c to c e lu la r en un s itio de la te ra p ia ). P o r e je m p lo , el a g e n te de se ñ a liza c ió n de tip o sa lva je p uede a n ta g o n iz a r o in h ib ir el re cep to r. En e s ta s re a liza c io n e s , las m u ta c io n e s hacen q ue el a g e n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o te n g a una a c tiv id a d a n ta g o n is ta re du c ida o a n u la d a en el re cep to r. P o r e je m p lo , las m u ta c io n e s p ue de n d a r lu g a r a q ue el a g e n te de se ñ a liz a c ió n m o d ific a d o e n tre g u e una señ a l inh ib ito ria re du c ida a una cé lu la o b je tivo o la señ a l inh ib ito ria p od ría s e r a nu lad a . En va r ia s re a liza c io ne s , el a g e n te de se ñ a liza c ió n es a n ta g o n is ta d eb ido a una o m ás m u ta c ion es , p o r e je m p lo , un a ge n te de se ñ a liza c ió n a g o n is ta se co n v ie rte en un a ge n te de se ñ a liza c ió n a n ta g o n is ta (p o r e je m p lo , com o se d e sc rib e en W O 2015 /007520 ) y, d ich o a g e n te de se ñ a liza c ió n co n ve rtid o , o p c io n a lm e n te , ta m b ié n lleva una o m á s m u ta c io n e s que re d u ce n su a fin id a d o a c tiv id a d de un ión para uno o m ás de sus re ce p to re s o q ue re d u ce n o a nu lan su s ta n c ia lm e n te la a fin id a d o a c tiv id a d de un ión para uno o m ás de sus recep to re s .
La a fin id a d o a c tiv id a d re d u c id a en el re c e p to r se p ue de re s ta u ra r m e d ia n te la un ión con una o m ás de las fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to d e s c rita s en el p re se n te d o c u m e n to (p o r e je m p lo , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co n tra C le c 9 A o c u a lq u ie r o tra fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to d e sc rita en el p re se n te d ocum e n to ).
En va r ia s re a liza c io n e s , las p ro te ína s q u im é rica s de la p re se n te inve nc ión re du cen los e fe c to s fu e ra de l o b je tivo p o rq u e sus a g e n te s de s e ñ a liza c ió n tie n e n m u ta c io n e s q ue d e b ilita n o a nu lan la a fin ida d de u n ión o la a c tiv id a d en un re cep to r. En v a r ia s re a liza c io n e s , e sta re d u cc ió n de los e fe c to s se cu n d a rio s se o b se rva en re lac ió n con, p o r e je m p lo , los a g e n te s de se ñ a liz a c ió n de tip o sa lva je . En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de se ñ a liz a c ió n es a c tivo en las cé lu la s d ia n a p orque la (s ) fra cc ió n (e s ) de fo ca liza c ió n co m p e n s a (n ) la fa lta /in s u fic ie n c ia de un ión (p o r e jem p lo , sin lim itac ió n y /o a v id e z ) re q u e rid a para una a c tiva c ió n su s ta n c ia l. En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o es su s ta n c ia lm e n te ina c tivo en el cam in o hac ia el s itio de la a c tiv id a d te ra p é u tica y tie n e su e fec to su s ta n c ia lm e n te en los t ip o s de cé lu la s e sp e c ífica m e n te d ir ig id a s , lo que re du ce en g ran m e d id a los e fe c to s s e cu n d a rio s no desea do s .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de s e ñ a liza c ió n p ue de in c lu ir una o m ás m u ta c io n e s q ue a te n ú e n o re d u zca n la un ión o a fin ida d p o r un re ce p to r (es dec ir, un re c e p to r te ra p é u tico ) y una o m ás m u ta c io n e s que re du zca n su s ta n c ia lm e n te o a nu len la un ión o a c tiv id a d en un se g u n d o re cep to r. En ta le s re a liza c io n e s , e stas m u ta c io n e s p ueden e s ta r en la m ism a o en d ife re n te s p o s ic io n e s (es dec ir, la m ism a m u ta c ión o m ú ltip les m u ta c ion es ). En a lg u n a s re a liza c io n e s , la (s ) m u ta c ió n (e s ) que re d u ce (n ) la un ión y /o la a c tiv id a d en un re ce p to r es d ife re n te de la(s) m u ta c ió n (e s ) q ue re d u ce (n ) o a n u la (n ) su s ta n c ia lm e n te en o tro re cep to r. En a lg u n a s re a liza c io n e s , la (s) m u ta c ió n (e s ) que re d u ce (n ) la un ión y /o la a c tiv id a d en un re ce p to r es la m ism a que la (s) m u ta c ió n (e s ) que re d u ce (n ) o a n u la (n ) s u s ta n c ia lm e n te en o tro re cep to r. En a lg u n a s re a liza c io n e s , las p re se n te s p ro te ín a s q u im é rica s tie n e n un a g e n te de se ñ a liz a c ió n m o d ific a d o q ue tie n e ta n to m u ta c io n e s q ue a te n ú a n la u n ión y /o la a c tiv id a d en un re c e p to r te ra p é u tico y, p o r lo tan to , pe rm ite n un e fe c to te ra p é u tico m ás co n tro la d o y d ir ig id o (p o r e je m p lo , en re lac ió n con el a gen te de se ñ a liza c ió n de tip o sa lv a je ) com o m u ta c io n e s que re du cen su s ta n c ia lm e n te o e lim ina n la un ión y /o la a c tiv id a d en o tro re ce p to r y, p o r lo tan to , re du cen los e fe c to s se cu n d a rio s (p o r e je m p lo , en re lac ión con el a g e n te de se ñ a liza c ió n de tip o sa lva je ).
En a lg u n a s re a liza c io n e s , la re d u cc ió n o a nu lac ión sus ta n c ia l de la u n ión o la a c tiv ida d se p ue de re s ta u ra r con una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to . En va ria s re a liza c io n e s , la re du cc ió n su s ta n c ia l o la a n u la c ió n de la un ión o la a c tiv id a d de un se g u n d o re ce p to r ta m b ié n p uede p re v e n ir los e fe c to s n o c ivo s m e d ia d o s p o r el o tro recep to r. A lte rn a tiv a m e n te , o a de m ás, la re d u cc ió n s u s ta n c ia l o la a nu la c ió n de la un ión o la a c tiv id a d en el o tro re c e p to r hace q ue el e fe c to te ra p é u tico m e jo re , ya que hay un se cu e s tro re d u c id o o e lim in a d o de las p ro te ín a s q u im é rica s te ra p é u tica s le jos de l s itio de a cc ión te ra p é u tica . P o r e je m p lo , en a lg u n a s re a liza c io n e s , e sto o bv ia la n e ce s id a d de a ltas dos is de las p re se n te s p ro te ína s q u im é rica s que co m p e n sa n la p érd ida en el o tro re cep to r. Esta cap ac id ad de re d u c ir la d os is p ro p o rc io n a una m e n o r p ro b a b ilid a d de e fe c to s se cu nd a rio s .
El a g e n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o co m p re n d e una o m ás m u ta c io n e s que hacen que el a ge n te de se ñ a liza c ió n te n g a una a fin ida d re duc ida , su s ta n c ia lm e n te re d u c id a o a nu lad a , p o r e je m p lo , de un ión (p o r e je m p lo , K D ) y /o de a c tiva c ió n (p o r e je m p lo , cua nd o el a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o es un a go n is ta de su re cep to r, m e d ib le com o, p o r e je m p lo , K A y/o E C 50 ) y /o de inh ib ic ión (p o r e je m p lo , cua nd o el a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o es un a n ta g o n is ta de su recep to r, m e d ib le com o, p o r e je m p lo , Ki y /o IC50), para uno o m ás de sus re cep to re s . En va r ia s re a liza c io n e s , la a fin id a d re d u c id a en el re ce p to r de l a g e n te in m u n o m o d u la d o r p e rm ite la a te n u a c ió n de la a ctiv ida d (in c lu id o el a g o n ism o o el a n ta g o n ism o ). En ta le s re a liza c io n e s , el a g e n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o tie n e a p ro x im a d a m e n te un 1%, o a p ro x im a d a m e n te un 3% , a p ro x im a d a m e n te un 5% , a p ro x im a d a m e n te un 10% , a p ro x im a d a m e n te un 15% , a p ro x im a d a m e n te un 20% , a p ro x im a d a m e n te un 25% , a p ro x im a d a m e n te un 30% , a p ro x im a d a m e n te un 35% , a p ro x im a d a m e n te un 40% , a p ro x im a d a m e n te un 45% , a p ro x im a d a m e n te un 50% , a p ro x im a d a m e n te un 60% , a p ro x im a d a m e n te un 65% , a p ro x im a d a m e n te un 70% , a p ro x im a d a m e n te un 75% , a p ro x im a d a m e n te un 80% , a p ro x im a d a m e n te un 85% , a p ro x im a d a m e n te un 90% , a p ro x im a d a m e n te un 95% , o a p ro x im a d a m e n te un 10% -20% , a p ro x im a d a m e n te un 20% -40 % , a p ro x im a d a m e n te un 50% , a p ro x im a d a m e n te un 40 % -60 % , a p ro x im a d a m e n te un 60 % -80 % , a p ro x im a d a m e n te un 80 % -100 % de la a fin ida d p o r el re c e p to r en re lac ió n con el a ge n te de se ñ a liza c ió n de t ip o sa lva je . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la a fin ida d de un ión es al m e no s a lre d e d o r de 2 v e c e s m enor, a lre d e d o r de 3 v e c e s m enor, a lre d e d o r de 4 v e c e s m enor, a lre d e d o r de 5 v e c e s m enor, a lre d e d o r de 6 v e c e s m enor, a lre d e d o r de 7 v e ce s m e no r, a lre d e d o r de 8 v e c e s m enor, a lre d e d o r de 9 v e c e s m enor, a lre d e d o r de 10 v e ce s m enor, a lre d e d o r de 15 v e ce s m enor, a lre d e d o r de 20 v e ce s m enor, a lre d e d o r de 25 ve ce s m enor, a lre d e d o r de 30 v e c e s m e no r, a lre d e d o r de 35 v e ce s m enos, a lre d e d o r de 40 v e ce s m enos, a lre d e d o r de45 v e ce s m e no s, a lre d e d o r de 50 ve ce s m enos, a lre d e d o r d e100 ve ce s m enos, a lre d e d o r de 150 ve ce s m enos, o a lre d e d o r de 10-50 v e c e s m e no s, a lre d e d o r de 50 -100 v e c e s m e no s, a lre d e d o r de 100 -150 v e c e s m e no s, a lre d e d o r de 150 -200 v e c e s m e no s, o m ás de 200 ve ce s m enos en re lac ió n con el a ge n te s e ñ a liz a d o r de tip o sa lva je . En las re a liza c io n e s en las que la p ro te ína q u im é rica tie n e m u ta c io n e s que re du cen la un ión a un re ce p to r y re du cen o a nu lan su s ta n c ia lm e n te la un ión a un se g u n d o re cep to r, la a te n u a c ió n o re du cc ió n de la a fin ida d de un ión de un a g e n te de se ñ a liz a c ió n m o d ifica d o p ara un re c e p to r es m e n o r q ue la re d u cc ió n o a n u la c ió n s u s ta n c ia l de la a fin id a d para el o tro re cep to r. En a lg u n a s re a liza c io n e s , la a te n u a c ió n o re du cc ió n de la a fin ida d de un ión de un a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o para un re c e p to r es m e n o r q ue la re du cc ió n o a n u la c ió n su s ta n c ia l de la a fin id a d para el o tro re c e p to r en a lre d e d o r del 1%, o a lre d e d o r de l 3% , a lre d e d o r de l 5% , a lre d e d o r de l 10% , a lre d e d o r de l 15% , a lre d e d o r de l 20% , a lre d e d o r de l 25% , a lre d e d o r de l 30% , a lre d e d o r de l 35% , a lre d e d o r de l 40% , a lre d e d o r de l 45% , a lre d e d o r de l 50% , a lre d e d o r de l 60% , a lre d e d o r de l 65% , a lre d e d o r de l 70% , a lre d e d o r de l 75% , a lre d e d o r de l 80% , a lre d e d o r de l 85% , a lre d e d o r de l 90 % o a lre d e d o r de l 95% . En d ive rsa s re a liza c io n e s , la re d u cc ió n o a nu la c ió n su s ta n c ia l se re fie re a una m a yo r re du cc ió n de la a fin idad de un ión y /o de la a c tiv id a d que la a te n u a c ió n o la re du cc ió n .
En va r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o co m p re n d e una o m ás m u ta c io n e s que re du cen la a c tiv id a d e n d ó g e n a del a ge n te de se ñ a liza c ió n a a lre d e d o r de l 75% , o a lre d e d o r de l 70% , o a lre d e d o r del 60% , o a lre d e d o r del 50% , o a lre d e d o r de l 40% , o a lre d e d o r de l 30% , o a lre d e d o r de l 25% , o a lre d e d o r de l 20% , o a lre d e d o r de l 10% , o a lre d e d o r de l 5% , o a lre d e d o r de l 3% , o a lre d e d o r del 1%, p o r e je m p lo , en re lac ión con el a ge n te de se ñ a liza c ió n de tip o sa lva je .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o co m p re n d e una o m ás m u ta c io n e s q ue h acen q ue el a g e n te de se ñ a liza c ió n te n g a una a fin ida d re d u c id a p o r su re c e p to r que es in fe rio r a la a fin ida d de un ión de la (s) fra cc ió n (e s ) de d ire c c io n a m ie n to p o r su (s ) re ce p to r(e s ). En a lg u n a s re a liza c io n e s , este d ife re n c ia l de a fin ida d de un ión es e n tre el a ge n te de s e ñ a liz a c ió n /re c e p to r y la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to /re ce p to r en la m ism a cé lu la . En a lg u n a s re a liza c io n e s , este d ife re n c ia l de a fin ida d de un ión p e rm ite que el a g e n te de se ñ a liza c ió n , p o r e je m p lo , el a g e n te de se ñ a liza c ió n m u tado , te n g a e fe c to s loca liza do s , en el o b je tivo , y m in im ice los e fe c to s fue ra del o b je tivo q ue su b ya ce n a los e fe c to s se cu n d a rio s que se o bse rva n con el a ge n te de se ñ a liza c ió n de tip o sa lva je . En a lg u na s re a liza c io n e s , e sta a fin id a d de u n ión es al m e n o s 2 ve ce s , o al m e n o s 5 ve ce s , o al m e n o s 10 v e ce s , o al m e n o s 15 v e ce s m enor, o al m e no s 25 vece s, o al m e no s 50 v e ce s m enor, o al m e no s 100 vece s, o al m e no s 150 vece s.
La a c tiv id a d de un ión al re c e p to r p ue de m e d irse m e d ia n te m é to d o s c o n o c id o s en la té cn ica . P o r e je m p lo , la a fin ida d y /o la a c tiv id a d de un ión p ueden e va lu a rse m e d ia n te el a ná lis is de la tra m a de S ca tch a rd y el a ju s te p o r o rd e n a d o r de los d a to s de un ión (p o r e je m p lo , S ca tcha rd , 1949) o m e d ia n te e sp e c tro sco p ia de in te rfe re n c ia re fle c to m é trica en c o n d ic io n e s de flu jo , com o d esc ribe n B re ch t e t al. (1993 ).
El a g e n te de se ñ a liza c ió n es una ve rs ió n m o d ifica d a del in te rfe ró n a lfa 2 hum ano .
Las s e cu e n c ia s de a m in o á c id o s de los a g e n te s de se ñ a liza c ió n de tip o s a lva je d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to son b ien co n o c id a s en la té cn ica . En co n se cu e n c ia , en va ria s re a liza c io n e s el a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s que tie n e al m e no s el 98% , o al m e no s a lre d e d o r de l 99 % de iden tidad de se cu e n c ia con S E Q ID N O :86 u 87 (p o r e je m p lo 98% , o a lre d e d o r del 99 % de ide n tid ad de secu en c ia ).
El a g e n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s q ue tie n e una o m ás m u ta c io n e s de a m in o á c id o s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , las una o m ás m u ta c io n e s de a m in o á c id o s p ueden se le cc io n a rse in d e p e n d ie n te m e n te e n tre su s titu c io n e s , inse rc ion es , d e le c io n e s y tru n c a m ie n to s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , las m u ta c io n e s de a m in o á c id o s son su s titu c io n e s de a m in o á c id o s , y p ueden in c lu ir su s titu c io n e s co n se rva tiva s y /o no co n se rva tiva s , com o se d e sc rib e en o tra parte de l p re se n te d ocum e n to .
En v a r ia s re a liza c io n e s , las su s titu c io n e s ta m b ié n p ueden in c lu ir a m in o á c id o s no c lá s ico s com o se d e sc rib e en o tra p arte de l p re se n te d ocum e n to .
C om o se d e sc rib e en el p re se n te d ocum e n to , los a ge n tes de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o s llevan m u ta c io n e s que a fe c ta n la a fin id a d y /o la a c tiv id a d en uno o m ás re cep to re s . Los re ce p to re s de c u a lq u ie r a ge n te de señ a lizac ió n , com o se d e sc rib e en el p re se n te d o cu m e n to , son co n o c id o s en la técn ica .
Las m u ta c io n e s ilu s tra tiva s que p ro p o rc io n a n una a fin ida d y /o ac tiv ida d re d u c id a (p o r e je m p lo , a g o n ís tica ) en un re ce p to r se e n cu e n tra n en W O 2013 /107791 (p o r e je m p lo , con re sp e c to a los in te rfe ron es).
El a g e n te de IF N -a m o d ifica d o tie n e una a fin id a d y /o a c tiv id a d re d u c id a p o r el re c e p to r de IF N -a /p (IF N A R ), es dec ir, las c a d e n a s IFN AR1 y /o IFN A R 2. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de IF N -a m o d ifica d o tie n e una a fin ida d y /o a c tiv id a d su s ta n c ia lm e n te re d u c id a o a n u la d a p o r el re ce p to r de IFN - a /p (IF N A R ), es d e c i r , las ca d e n a s IFN AR1 y/o IFN A R 2.
Las fo rm a s m u ta n te s de in te rfe rón a son c o n o c id a s p o r el e xp e rto en la m a te ria . En una re a liza c ió n ilus tra tiva , el a g e n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o es la fo rm a a lé lica IF N -a2 a que tien e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de: IF N -a2 a :
CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLH
EMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKED
SILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE (SEQ ID
NO:86).
En una re a liza c ió n ilus tra tiva , el a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o es la fo rm a a lé lica IF N -a 2 b que tie n e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de (que d ifie re del IF N -a 2 a en la p os ic ió n de a m in o á c id o 23): IF N -a2 b :
CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRRISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLH
EMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKED
SILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEWRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE (SEQ ID
NO:87).
D icho m u ta n te de IF N -a2 (IF N -a 2 a o IF N -a 2 b ) e stá m u ta d o en uno o m ás a m in o á c id o s en las p o s ic io n e s 148, 149 y /o 153. En a lg u na s re a liza c io n e s , el m u ta n te de IF N -a2 co m p re n d e una o m ás m u ta c io n e s s e le cc io n a d a s entre L153A , R 149 A y M 148A . T a le s m u ta n te s se d e sc rib e n , p o r e je m p lo , en W O 2013 /107791 y en P ie h le r e t al., (2000 ) J. B iol. C he m , 275 :40425 -33.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , los m u ta n te s de IF N -a2 tien en a fin ida d y /o a c tiv id a d re d u c id a p o r IF N A R 1. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el m u ta n te de IF N -a2 c o m p re n d e una o m á s m u ta c io n e s se le cc io n a d a s en tre F64A , N 65A , T 69A , L80A , Y 85 A e Y 89 A , co m o se d e sc rib e en W O 2010 /030671.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el m u ta n te de IF N -a2 co m p re n d e una o m ás m u ta c io n e s se le cc io n a d a s de K 133A , R 144A , R 149 A y L 153 A co m o se d e sc rib e en W O 2008 /124086.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el m u ta n te de IF N -a2 co m p re n d e una o m ás m u ta c io n e s s e le cc io n a d a s en tre R 120E y R 120E /K 121 E, com o se d e sc rib e en W O 2015 /007520 y W O 2010 /030671. En ta le s re a liza c io n e s , d ich o m u ta n te de IF N -a2 a n ta g o n iza la a c tiv id a d de IF N -a2 de tip o sa lva je . En ta le s re a liza c io n e s , d icho IF N -a2 m u ta n te tie n e una a fin id a d y /o a c tiv id a d re d u c id a p o r el IF N A R 1, m ie n tra s q ue se m a n tie n e la a fin id a d y /o a c tiv id a d de l IFN R 2.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el m u ta n te de IF N -a2 h um a no co m p re n d e (1) una o m ás m u ta c io n e s se le cc io n a d a s de e n tre R 120E y R 120 E /K 121 E , que, sin q u e re r e s ta r lim itad o p o r la teo ría , c re an un e fe c to a n ta g o n is ta y (2) una o m ás m u ta c io n e s se le cc io n a d a s de e n tre K 133A , R 144A , R 149 A y L 153A , que , sin q u e re r e s ta r lim ita d o p o r la teo ría , p e rm ite n un e fe c to a te n u a d o en, p o r e je m p lo , IF N A R 2. En una re a liza c ió n , e l m u ta n te de IF N -a2 h um a no co m p re n d e R 120E y L153A .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el m u ta n te de IF N -a2 h u m a n o co m p re n d e una o m á s m u ta c io n e s se le cc io n a d a s de, L15A , A 19 W , R 22A , R 23A , L26A , F27A , L30A , L30V , K31A , D 32A , R 33K , R 33A , R 33Q , H 34A , D 35A , Q 40 A , D 114R , L117A , R 120A , R 125A , K 134A , R 144A , A 145 G , A 145 M , M 148A , R 149A , S 152A , L153A , y N 156A com o se d ivu lga en W O 2013 /059885. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el m u ta n te de IF N -a2 h um a no co m p re n d e las m u ta c io n e s H57Y, E 58N , Q 61 S , y /o L30 A co m o se d ivu lga en W O 2013 /059885. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el m u ta n te de IF N -a2 h u m a n o co m p re n d e las m u ta c io n e s H 57Y , E58N , Q 61 S , y /o R 33 A co m o se d ivu lg a en W O 2013 /059885. En a lg u n a s re a liza c io n e s , e l m u ta n te de IF N -a2 h u m a n o co m p re n d e las m u ta c io n e s H 57Y , E58N , Q 61 S , y /o M 148 A co m o se d ivu lga en W O 2013 /059885. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el m u ta n te de IF N -a2 h um a no co m p re n d e las m u ta c io n e s H 57Y , E58N , Q 61 S , y /o L 153A com o se d ivu lga en W O 2013 /059885. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el m u ta n te de IF N -a2 h um a no co m p re n d e las m u ta c io n e s N 65A , L80A , Y 85 A , y /o Y 89 A co m o se d ivu lg a en W O 2013 /059885. En a lg u n a s re a liza c io n e s , e l m u ta n te de IF N -a2 h u m a n o c o m p re n d e las m u ta c io n e s N 65A , L80A , Y 85 A , Y 89 A , y /o D 114 A co m o se d ivu lg a en W O 2013 /059885.
En una re a liza c ió n , la p re se n te p ro te ín a q u im é rica tie n e (i) una fra cc ió n d ir ig id a co n tra C le c 9 A y (ii) una fra cc ió n d ir ig id a co n tra una cé lu la tu m o ra l, ju n to con cu a lq u ie ra de los a g e n te s de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o s o m u ta n te s d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to . En una re a liza c ió n , la p re se n te p ro te ína q u im é rica tien e una fra cc ió n d irig id a co n tra C le c9 A en las cé lu la s d e n d rítica s y una se g u n d a fra cc ió n d ir ig id a con tra PD-L1 o PD -L2 en las cé lu las tu m o ra le s .
En una re a liza c ió n , la p re se n te p ro te ín a q u im é rica tie n e (i) una fra cc ió n d ir ig id a co n tra C le c 9 A y (ii) una fra cc ió n d ir ig id a con tra un m a rc a d o r in h ib id o r del pun to de con tro l, ju n to con cu a lq u ie ra de los in te rfe ro n e s m o d ifica d o s o m u ta n te s d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to . En una re a liza c ió n , la p re se n te p ro te ín a q u im é rica tie n e una fra cc ió n d ir ig id a co n tra C le c 9 A en las cé lu la s d e n d rítica s y una se g u n d a fra cc ió n d ir ig id a co n tra PD-1.
Quimeras y fusiones multiespecíficas con agentes señalizadores
En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de u n ión a C le c 9 A de la in ve n c ió n fo rm a p a rte de una q u im e ra o fu s ió n con uno o m ás a g e n te s de se ñ a liza c ió n com o se d e sc rib e en el p rese n te d o cu m e n to y una o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to a d ic ion a le s . En co n se cu e n c ia , la p re se n te in ve n c ió n p ro p o rc io n a p ro te ína s q u im é rica s o de fus ión q ue inc luyen uno o m ás a g e n te s de se ñ a liza c ió n y una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to con tra C le c 9 A y una o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to a d ic io n a le s . En co n se cu e n c ia , en v a r ia s re a liza c io n e s , el té rm in o "a g e n te de un ión a C le c9 A " a b a rca ta le s q u im e ra s o p ro te ín a s de fu s ió n con uno o m á s a g e n te s de se ñ a liza c ió n y una o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to ad ic ion a le s .
En v a r ia s re a liza c io n e s , las p ro te ín a s q u im é rica s de la p re se n te in ve n c ió n tie n e n fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to que se d ir ige n a dos cé lu la s d ife re n te s (p o r e je m p lo , para h a c e r una s in a p s is ) o a la m ism a cé lu la (p o r e je m p lo , para o b te n e r un e fe c to de a g e n te de se ñ a liza c ió n m ás con ce n tra d o ).
En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de u n ión a C le c 9 A de la in ve n c ió n es m u ltie sp e c ífico , es dec ir, el a g e n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e dos o m ás fra cc io n e s de d ire cc io n a m ie n to que tie n e n d o m in io s de re co n o c im ie n to (p o r e je m p lo , d o m in io s de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o ) q ue re co n o ce n y se unen a dos o m á s o b je tiv o s (p o r e jem p lo , a n tíg e n o s , o re cep to re s , o e p ítop os ). En ta le s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A de la inve n c ió n puede c o m p re n d e r dos fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to m ás que tie n e n d o m in io s de re co n o c im ie n to que re con oce n y se unen a dos o m ás e p íto p o s en el m ism o a n tíg e n o o en d ife re n te s a n tíg e n o s o en d ife re n te s re cep to re s . En va r ia s re a liza c io n e s , d ich os a ge n tes de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico s p rese n ta n p ro p ie d a d e s ve n ta jo sa s com o una m a yo r a v id e z y /o una m e jo r se le c tiv id a d . En una re a liza c ió n , el a g e n te de un ión a C le c 9 A de la inve nc ión co m p re n d e d os fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to y es b ie spe c ífico , es dec ir, se une y re co n o ce dos e p íto p o s en el m ism o a n tíg e n o o en d ife re n te s a n tíg e n o s o d ife re n te s re cep to re s . P o r co n s ig u ie n te , en v a r ia s re a liza c io n e s , el té rm in o "a g e n te de u n ión a C lec9A " a b a rca d ich os a g e n te s de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico s que co m p re n d e n d os o m ás fra cc io n e s de d ire cc io n a m ie n to .
En va r ia s re a liza c io ne s , el a ge n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e dos o m ás fra cc io n e s de d ire cc io n a m ie n to , s ie n d o cad a fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to un a n ticu e rp o o un d e riva d o de a n ticu e rp o com o se d e sc rib e en el p rese n te d o cu m e n to . En una re a liza c ió n , el a g e n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico de la in ve n c ió n c o m p re n d e al m e n o s un V H H q ue c o m p re n d e un d o m in io de re c o n o c im ie n to de a n tíg e n o co n tra C le c 9 A y un a n ticu e rp o o d e riva d o de a n ticu e rp o que co m p re n d e un d o m in io de re co n o c im ie n to con tra un a n tíg e n o tu m o ra l y /o un m a rc a d o r de cé lu la s inm un ita ria s .
En v a r ia s re a liza c io n e s , los p rese n te s a g e n te s de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico s tie n e n dos o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to q ue se d ir ige n a d ife re n te s a n tíg e n o s o re ce p to re s , y una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to p ue de e s ta r a te n u a d a p ara su a n tíg e n o o re cep to r, p o r e je m p lo la fra cc ió n d ir ig id a se une a su a n tíg e n o o re c e p to r con una baja a fin id a d o a v id e z ( in c lu ye n d o , p o r e je m p lo , una a fin id a d o a v id ez que es m e n o r que la a fin id a d o a v id ez q u e la o tra fra cc ió n d ir ig id a tie n e p or su a n tíg e n o o recep to r, p o r e je m p lo la d ife re n c ia e n tre las a fin id a d e s de un ión puede se r de a p ro x im a d a m e n te 10 ve ce s , o 25 vece s, o 50 ve ce s , o 100 ve ce s , o 300 vece s, o 500 ve ce s , o 1000 vece s, o 5000 ve ce s ; p o r e je m p lo , la fra cc ió n de m e n o r a fin id a d o a v id e z p uede u n irse a su a n tíg e n o o re ce p to r con un K D en el ra ng o de m e d ia a a lta -n M o de b a ja a m e d ia -p M , m ie n tra s q ue la fra cc ió n de m a yo r a fin ida d o a v id e z p ue de un irse a su a n tíg e n o o re c e p to r con un KD en el ra ng o de m e d ia a a lta -p M o de ba ja a m e d ia -n M ). P o r e je m p lo , en a lg u n a s re a liza c io n e s , el p rese n te a ge n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico co m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to a te n u a d a que se d irige con tra un a n tíg e n o o re ce p to r p rom iscu o , lo que p uede m e jo ra r el d ire cc io n a m ie n to a una cé lu la de in te ré s (p o r e je m p lo , a tra vé s de la o tra fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to ) y e v ita r los e fe c to s en m ú ltip le s tip o s de cé lu las , inc lu ida s las que no se d irigen a la te ra p ia (p o r e je m p lo , m e d ia n te la un ión del a n tíg e n o o re ce p to r p ro m iscu o a una a fin ida d m a yo r que la p ro p o rc io n a d a en e s ta s re a liza c io ne s ).
El a g e n te de un ión de C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión p uede c o n s tru irse u tiliza n d o m é to do s c o n o c id o s en la té cn ica , v é a se p o r e je m p lo U .S. P a te n t n° 9.067.991, U .S. P a te n t n° 20110262348 y W O 2004 /041862. En una re a liza c ió n ilus tra tiva , el a ge n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve n c ió n que co m p re n d e d os o m ás fra cc io n e s de d ire cc io n a m ie n to p uede co n s tru irse m e d ia n te re ticu la c ió n q u ím ica , p o r e je m p lo , h ac ien do re a cc io n a r re s id u o s de a m in o á c id o s con un a g e n te d e riv a d o r o rg á n ico com o se d e sc rib e en B la ttle r e t al, B io ch e m is try 24 ,1517 ­ 1524 y E P 294703. En o tra re a liza c ió n ilus tra tiva , el a ge n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico que co m p re n d e dos o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to se co n s tru ye m e d ia n te fus ió n g ené tica , es decir, co n s tru ye n d o un ún ico p o lip é p tid o que inc lu ye los p o lip é p tid o s de las fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to ind iv idu a le s . P o r e je m p lo , puede fo rm a rse una ún ica co n s tru cc ió n p o lip e p tíd ica que cod ifiq u e un p rim e r V H H con un d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o con tra C le c9 A y un se g u n d o a n ticu e rp o o d e riva d o de a n ticu e rp o con un d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o con tra , p o r e je m p lo , un a n tíg e n o tu m o ra l o un in h ib id o r de l p un to de con tro l. En la so lic itu d de p a te n te P C T W O 96 /34103 , se d e sc rib e un m é to do para p ro d u c ir co n s tru cc io n e s de p o lip é p tid o s V H H b iva len tes o m u ltiva le n te s . En o tra re a liza c ió n ilus tra tiva , el a ge n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión p uede co n s tru irse u tiliza n d o e n la za d o re s . P o r e je m p lo , el ca rb o x i- te rm in a l de un p rim e r V H H con un d om in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o con tra C le c9 A puede un irse al a m in o -te rm in a l de un se g u n d o a n ticu e rp o o d e riva d o de a n ticu e rp o con un d o m in io de re c o n o c im ie n to de a n tíg e n o con tra , p o r e je m p lo , un a n tíg e n o tu m o ra l o un in h ib id o r de p u n to de con tro l (o v ice ve rsa ). En el p rese n te d o cu m e n to se d esc rib e n e n la za d o re s ilu s tra tivo s que p ueden u tiliza rse . En a lg u na s re a liza c io n e s , los c o m p o n e n te s de l a g e n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión están d ire c ta m e n te u n id os e n tre s í s in el uso de e n la za d o re s .
En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de u n ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la in ve n c ió n re co n o ce y se une a C le c 9 A y a uno o m ás a n tíg e n o s q ue se e n cu e n tra n en una o m ás cé lu las in m u n ita ria s , q ue p ueden inc lu ir, sin lim itac ión , m e g a ca rio c ito s , tro m b o c ito s , e ritro c ito s , m a sto c ito s , b asó filo s , neu tró filo s , e os inó filo s , m o no c ito s , m a cró fa go s, cé lu la s a se s in a s n a tu ra les , lin fo c ito s T (p o r e je m p lo , lin fo c ito s T c ito tóx icos , cé lu la s T a ux ilia res , cé lu la s T a se s in a s n a tu ra le s ), lin fo c ito s B, c é lu la s p la sm á tica s , c é lu la s d e n d rític a s o s u b c o n ju n to s de e llas. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión de C L E C 9 A se une e sp e c ífica m e n te a un a n tíg e n o de in te rés y re c lu ta e fica zm e n te , de fo rm a d ire c ta o ind irec ta , una o m ás cé lu la s inm un ita ria s .
En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de u n ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la in ve n c ió n re co n o ce y se une a C le c 9 A y a uno o m ás a n tíg e n o s e n co n tra d o s en las cé lu las tu m o ra le s . En e stas re a liza c io n e s , los p rese n te s a g e n te s de unión a C le c 9 A p ueden re c lu ta r d ire c ta o in d ire c ta m e n te una cé lu la in m u n ita ria a una cé lu la tu m o ra l o al m ic ro a m b ie n te tu m o ra l. En a lg u n a s re a liza c io n e s , los p re se n te s a g e n te s de un ión a C le c9 A p ueden re c lu ta r d irec ta o in d ire c ta m e n te una cé lu la inm un ita ria , p o r e je m p lo , una cé lu la den d rítica , a un s itio de acc ión (com o, a m o do de e je m p lo no lim ita tivo , el m ic ro a m b ie n te tu m o ra l). En a lg u n a s re a liza c io n e s , el p rese n te a ge n te de un ión a C le c9 A m e jo ra la p re se n ta c ió n de a n tíg e n o s (p o r e je m p lo , la p re se n ta c ió n de a n tíg e n o s tu m o ra le s ) p o r parte de las cé lu la s d e n d rític a s p ara la in d u cc ió n de una p o te n te re sp u e s ta h u m o ra l y de c é lu la s T c ito tó x ica s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , los p re se n te s a g e n te s de un ión a C le c9 A son ca p a ce s de, o e n cu e n tra n uso en m é to d o s q ue im p lican , c a m b ia r el e q u ilib r io de las cé lu la s in m u n ita ria s a fa v o r d e l a ta q u e in m u n ita rio de un tu m o r. P o r e je m p lo , los p re se n te s a g e n te s de u n ión a C le c 9 A p ue de n c a m b ia r la p ro p o rc ió n de c é lu la s in m u n ita ria s en un s itio de im p o rta n c ia c lín ica a fa v o r de las cé lu las que pueden m a ta r y /o s u p rim ir un tu m o r (p o r e je m p lo , cé lu las T, lin fo c ito s T c ito tóx icos , cé lu la s T a ux ilia res , cé lu las a se s in a s n a tu ra le s (N K ), cé lu la s T a se s in a s n a tu ra le s (N K T), m a cró fa g o s a n titu m o ra le s (p o r e je m p lo m a c ró fa g o s M 1), c é lu la s B y c é lu la s d e n d rític a s y en o p o s ic ió n a las c é lu la s q ue p ro te g e n a los tu m o re s (p o r e je m p lo , las cé lu la s s u p re so ra s d e riva d a s de los m ie lo id e s (M D S C ), las cé lu las T re g u la d o ra s (T reg ); los neu tró filo s a so c ia d o s a los tu m o re s (T A N s), los m a cró fa g o s M 2, los m a c ró fa g o s a so c ia d o s a los tu m o re s (T A M s), o su b c o n ju n to s de los m ism os). En a lg u n a s re a liza c io n e s , el p re se n te a ge n te de un ión a C le c 9 A es cap az de a u m e n ta r una p ro p o rc ió n de cé lu la s T e fe c to ra s con re sp e c to a las cé lu la s T re gu lad o ras .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to que tie n e un d o m in io de re co n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a una d ia n a (p o r e jem p lo , a n tíg e n o o re ce p to r) a so c ia d a a las cé lu las tu m o ra le s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re c lu ta d ire c ta o in d ire c ta m e n te a las cé lu la s tu m o ra le s . P o r e je m p lo , en a lg u n a s re a liza c io n e s , el re c lu ta m ie n to de la cé lu la tu m o ra l es a una o m ás cé lu las e fe c to ra s (p o r e je m p lo , una cé lu la inm un e com o se d e sc rib e en el p rese n te d o cu m e n to ) q ue p uede m a ta r y /o s u p rim ir la cé lu la tum o ra l.
Las c é lu la s tu m o ra le s , o cé lu la s ca n ce ro sa s , se re fie ren a un c re c im ie n to in co n tro la d o de cé lu las o te jid o s y /o a un a u m e n to a n o rm a l de la s u p e rv ive n c ia c e lu la r y /o a la inh ib ic ión de la a p o p to s is que in te rfie re con el fu n c io n a m ie n to n o rm a l de los ó rg a n o s y s is te m a s co rpo ra les . P o r e je m p lo , las cé lu la s tu m o ra le s inc lu ye n cá n ce re s b e n ig n o s y m a lign os , pó lipos, h ip e rp la s ia , a s í com o tu m o re s la te n te s o m ic ro m e tá s ta s is . Las cé lu la s tu m o ra le s ilus tra tiva s inc lu ye n , p e ro no se lim itan a las c é lu la s de: ca rc in o m a de c é lu la s b asa le s , c á n c e r de l tra c to b ilia r; c á n c e r de ve jig a ; c á n c e r de hueso ; c á n c e r de ce re b ro y de l s is te m a n e rv io so cen tra l; c á n c e r de m am a; c á n c e r de p e rito ne o ; c á n c e r de cue llo u te rino ; co r io ca rc in o m a ; c á n c e r de co lon y recto ; c á n ce r de te jid o con ec tivo ; c á n c e r de l s is te m a d ig e stivo ; c á n c e r de e n d o m e trio ; c á n c e r de e só fag o ; c á n c e r de ojo; c á n c e r de ca b e za y cue llo ; c á n c e r g á s trico (in c lu id o el c á n c e r g a s tro in te s tin a l); g lio b la s to m a ; ca rc in o m a h ep á tico ; h ep a tom a ; n eo p la s ia in tra e p ite lia l; c á n c e r de riñón o de riñón ; c á n c e r de la ringe ; leu cem ia ; c á n c e r de h íg ad o ; c á n c e r de p u lm ón (p o r e jem p lo , c á n c e r de p u lm ó n de cé lu las p eq u e ñ a s, c á n c e r de p u lm ón de cé lu las no p eq ue ña s, a d e n o ca rc in o m a de p u lm ón y ca rc in o m a e sca m o so de p u lm ó n); m e lan om a ; m ie lom a ; n e u ro b la s to m a ; c á n c e r de la cav ida d o ra l (lab io , lengua , boca y fa rin g e ); c á n c e r de o va rio ; c á n ce r de p áncreas ; c á n c e r de p rós ta ta ; re tin o b la s to m a ; ra b d o m io sa rco m a ; c á n c e r de recto; c á n c e r del s is te m a re sp ira to rio ; ca rc in o m a de las g lá n d u la s sa liva les ; sa rcom a; c á n c e r de piel; c á n c e r de cé lu las e sca m osas ; c á n c e r de e s tó m a g o ; c á n c e r de te s tícu lo ; c á n c e r de tiro ide s ; c á n c e r de ú tero o de e nd om e trio ; c á n c e r del a p a ra to u rina rio ; c á n c e r de vu lva ; lin fo m a , in c lu id o el lin fo m a de H od gk in y el lin fo m a no h o d g k in ia n o , a s í co m o el lin fo m a de cé lu la s B ( in c lu id o el lin fo m a no h o d g k in ia n o (L N H ) de b a jo g ra d o /fo licu la r; lin fom a lin fo c ítico p e q u e ñ o (LS ); lin fo m a no h o d g k in ia n o de g rado in te rm e d io /fo licu la r; lin fo m a no h o d g k in ia n o d ifu so de g rad o in te rm e d io ; lin fo m a no h o d g k in ia n o in m u n o b lá s tico de g rad o a lto; lin fo m a no h o d g k in ia n o de cé lu las p eq ue ña s de g rado a lto; lin fo m a no h o d g k in ia n o de e n fe rm e d a d vo lu m in o sa ; lin fo m a de cé lu las del m anto ; lin fo m a re la c io n a d o con el S ID A ; y m a c ro g lo b u lin e m ia de W a ld e n s tro m ; la le u ce m ia lin fo c ítica c ró n ica (LLC ); la le u ce m ia lin fo b lá s tica a gu da (LLA ); la le u ce m ia de c é lu la s p ilo sas ; la le u ce m ia m ie lo b lá s tica c ró n ica ; a s í co m o o tro s c a rc in o m a s y sa rco m a s; y el tra s to rn o lin fo p ro life ra tivo p o s t-tra sp la n te (P T LD ), a s í com o la p ro life ra c ió n v a s c u la r a no rm a l a so c ia d a a las fa co m a to s is , el e d e m a fp o r e je m p lo , el a so c ia d o a los tu m o re s c e re b ra le s ) y el s ín d ro m e de M e igs . Las cé lu las tu m o ra le s , o cé lu la s ca n ce ro sa s ta m b ié n inc luyen , pero no se lim itan a, ca rc in om as , p o r e je m p lo v a r io s sub tipo s , inc lu ye nd o , p o r e je m p lo , a d e n o ca rc in o m a , ca rc in o m a de cé lu la s basa les , ca rc in o m a de cé lu la s e sca m o sa s y ca rc in o m a de cé lu las tra n s ic io n a le s ), sa rco m a s (in c lu ye n d o , p o r e je m p lo , hue so y te jid o b lando ), leu cem ia s (in c lu ye n d o , p o r e jem p lo , m ie lo id e aguda , lin fo b lá s tica a gu da m ie lo id e c ró n ica , lin focítica c ró n ica y de cé lu las p ilosas), lin fo m as y m ie lo m a s (in c lu id os , p o r e je m p lo , los lin fo m as H od gk in y no H odgk in , de ca d e n a ligera , no sec re to res , M G U S y p la s m o c ito m a s ) y cá n ce re s del s is te m a n e rv io so cen tra l (in c lu id os , p o r e je m p lo , los ce re b ra le s (P o r e je m p lo liornas (p o r e je m p lo , a s tro c ito m a , o lig o d e n d ro g lio m a y e p e n d im o m a ), m e n in g io m a , a d e n o m a h ip o fisa rio y n eu ro m as, y tu m o re s de la m é du la e sp in a l (p o r e je m p lo , m e n in g io m a s y n e u ro fib ro m a).
Los a n tíg e n o s tu m o ra le s ilu s tra tivo s inc lu ye n , p e ro no se lim itan a, M A R T -1 /M e la n -A , g p100 , D ip e p tid y l p e p tid a se IV (D P P IV ), p ro te ín a de un ión a la a d e n o s in a d e a m in a sa (A D A b p ), c ic lo filin a b, a n tíg e n o a so c ia d o al co lo rre c ta l (C R C )-0017 -1 A /G A 733 , A n tíg e n o ca rc in o e m b rio n a rio (C E A ) y sus e p íto p o s in m u n o g é n ico s CAP-1 y C A P -2 , e tv6 , am l1, a n tíg e n o e sp e c ífico de la p rós ta ta (P S A ) y sus e p íto p o s in m u n o g é n ico s P S A -1, P S A -2 y P SA-3, a n tíg e n o de m e m b ra n a e sp e c ífico de la p rós ta ta (P S M A ), re ce p to r de cé lu la s T /ca d e n a C D 3 -ze ta , a n tíg e n o s tu m o ra le s de la fa m ilia M A G E (p o r e je m p lo ., M A G E -A 1, M A G E -A 2 , M A G E -A 3 , M A G E -A 4 , M A G E -A 5 , M A G E -A 6 , M A G E -A 7 , M A G E -A 8, M A G E -A 9 , M A G E -A 10 , M A G E -A 11, M A G E -A 12 , M A G E -X p 2 (M A G E -B 2 ), M A G E -X p 3 (M A G E -B 3 ), M A G E -X p 4 (M A G E -B 4 ), M A G E -C 1, M A G E -C 2 , M A G E -C 3 , M A G E -C 4 , M A G E -C 5 ), a n tíg e n o s tu m o ra le s de la fa m ilia G A G E (p o r e je m p lo ., G A G E -1, G A G E -2 , G A G E -3 , G A G E -4 , G A G E -5 , G A G E -6 , G A G E -7 , G A G E -8 , G A G E -9 ), B A G E , R AG E, L A G E -1, N AG , G n T -V , M U M -1, C D K 4 , tiro s in a sa , p53, fa m ilia M U C , H E R 2 /n e u , p21 ras, R C A S 1, a -fe to p ro te ín a , E-ca d h e rin a , a -ca te n in a , p -c a te n in a y Y -ca ten ina , p l20 c tn , g p 100 P m e l117 , P R A M E , N Y -E S O -1, cdc27 , p ro te ín a de la p o lip o s is a d e n o m a to sa co li (A P C ), fo d rin a , a n e x in a 37, Ig -id io typ e , p15, gp75, G a n g lió s id o s G M 2 y G D 2, p rod u cto s v ira le s com o las p ro te ín a s de l v iru s de l p ap ilo m a hum ano , a n tíg e n o s tu m o ra le s de la fa m ilia S m ad, Im p-1, NA, a n tíg e n o n u c le a r co d ifica d o p o r el V E B (E B N A )-1, g lu có g e n o fo s fo r ila sa ce reb ra l, S S X -1, S S X -2 (H O M -M e L-40), S S X -1, S S X -4 , S S X -5 , SCP-1 C T-7 , c -e rb B -2 , C D 19, C D 20, C D 22, C D 30, C D 33, C D 37, C D 56, C D 70, C D 74, C D 138 , A G S 16 , M U C 1, G P N M B , E p -C A M , P D -L1, P D - L2, P M S A y B C M A (T N F R S F 17 ). En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue se une a uno o m ás de estos a n tíg e n o s tu m o ra le s .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el p re se n te a ge n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico re co n o ce y se une a C le c9 A a sí com o a un a n tíg e n o en u na cé lu la tu m o ra l. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión de C le c9 A m u ltie sp e c ífico re c lu ta d ire c ta o in d ire c ta m e n te cé lu la s d e n d rítica s a la cé lu la tu m o ra l o al m ic ro a m b ie n te tum o ra l.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re co n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a una d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o un re ce p to r) a so c ia d o a las cé lu las T. En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re c lu ta d ire c ta o in d ire c ta m e n te a las cé lu las T. En una re a liza c ió n , los d o m in io s de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o se unen e sp e c ífica m e n te a las cé lu las T e fe c to ra s . En a lg u na s re a liza c io ne s , el d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o re c lu ta d irec ta o in d ire c ta m e n te a las cé lu las T e fe c to ra s , por e je m p lo , en a lg u n a s re a liza c io n e s , a un s itio te ra p é u tico (p o r e je m p lo , un locus con una o m ás cé lu las de la e n fe rm e d a d o cé lu la a s e r m o d u la d a para un e fe c to te ra p é u tico ). Las cé lu las T e fe c to ra s ilu s tra tiva s inc lu ye n cé lu las T c ito tó x ica s (p o r e je m p lo , a p TC R , C D 3+, C D 8+, C D 45 R O ); cé lu las T e fe c to ra s C D 4+ (p o r e je m p lo , a p TC R , C D 3+, C D 4+, C C R 7+ , C D 62L h i, IL -7R /C D 127+ ); cé lu la s T e fe c to ra s C D 8 (p o r e je m p lo , a p T C R , C D 3+, C D 8 , C C R 7+ , IL7 R /C D 127 ); cé lu la s T e fe c to ra s de m e m o ria (p o r e je m p lo , a p t C r , C D 3+, C d 8+, C C R 7+ , IL 7 R /C D 127 ).p o r e je m p lo , a p TC R , C D 3+, C D 8+, C C R 7+ , C D 62 L h i, IL 7 R /C D 127 ); cé lu las T e fe c to ra s de m e m o ria (p o r e je m p lo , C D 62 L lo w , C D 44+ , T C R , C D3+, IL7 R /C D 127 , IL -15R , C C R 7 lo w ); cé lu las T ce n tra le s de m e m o ria (p o r e je m p lo C C R 7+ , C D 62L , C D 27+ ; o C C R 7h i, C D 44+ , C D 62L h i, TC R , C D 3+, IL -7R /C D 127+ , IL -15R ); cé lu las T e fe c to ra s C D 62L ; cé lu las T e fe c to ra s de m e m o ria (T E M ) C D 8+, in c lu id a s las cé lu la s T e fe c to ra s te m p ra n a s (C D 27 C D 62 L -) y las cé lu las T e fe c to ra s ta rd ía s (C D 27 - C D 62 L -) (T em E y Tem L, re sp e c tiva m e n te ); C é lu las T e fe c to ra s C D 127 (+ ) C D 25 (lo w /-); cé lu las T e fe c to ra s C D 127 (')C D 25 ('); cé lu las e fe c to ra s de m e m o ria de cé lu las m a dre C D 8+ (T S C M ) (p o r e je m p lo C D 44 (b a ja )C D 62 L (a lta )C D 122 (a lta )sc a (+)); cé lu las T e fe c to ra s T H 1 (p o r e je m p lo C X C R 3 , C X C R 6+ y C C R 5+ ; o a p T c R, C D 3+, C D 4+, IL -12R , IFN yR , C X C R 3+ ), cé lu las T e fe c to ra s T H 2 (p o r e je m p lo , C C R 3+ , C C R 4+ y C C R 8+ ; o a p TC R , C D 3+, C D 4+, IL-4R , IL -33R , C C R 4+ , IL -17R B , C R T H 2 ); cé lu las T e fe c to ra s T H 9 (p o r e je m p lo , a p T c R, C D 3+, C D 4+); cé lu las T e fe c to ra s T H 17 (p o r e je m p lo , a p T C R , C D 3+, C D 4+, IL -23R , C c R6+, lL -1R ); cé lu la s T e fe c to ra s C D 4 C D 45 R O C C R 7+ , c é lu la s T e fe c to ra s |C o S+; c é lu la s T e fe c to ra s C D 4 C D 45 R O C C R 7 ('); y c é lu la s T e fe c to ra s s e c re to ra s de IL-2, IL-4 y /o IFN -y .
Los a n tíg e n o s de cé lu la s T ilu s tra tivo s de in te ré s inc luyen , p o r e je m p lo (e in c lu ye n d o los d o m in io s e x tra ce lu la re s , cu a n d o sea a p lica b le ) C D 8, C D 3, S LA M F 4, IL -2R a, 4-1 B B /T N F R S F 9 , IL -2R p, A L C A M , B7-1, IL-4R , B7-H 3, B L A M E /S L A M F S , C E A C A M 1, IL-6R , C C R 3, IL-7R a, C C R 4, C X C R I/IL -S RA, C C R 5, C C R 6, IL -10R a , C C R 7, IL-I 0 R p, C C R S , IL-12 R p 1, C C R 9, IL-12 R p 2, C D2, IL-13 R a l , IL-13, C D3, C D 4, ILT 2 /C D S 5 j, ILT 3 /C D S 5k, ILT 4 /C D S 5d , ILT 5 /C D S 5a , In te g rin a a 4 /C D 49 d , C D S , In te g rin a a E /C D 103 , C D 6, In te g rin a a M /C D 11 b, CDS, In te g rin a a X /C D 11 c, In te g rin a p 2 /C D IS , K IR /C D 15S , C D 27 /T N F R S F 7 , K IR 2D L1, C D 2S , K IR 2D L3 , C D 30 /T N F R S F S , K IR 2 D L 4 /C D 15 S d , C D 31 /P E C A M -1, K IR 2 D S 4 , L ig a nd o C D 40 /T N F S F 5 , LAG -3 , C D 43, LA IR 1, C D 45, LA IR 2, C D S 3, L e u co trie n o B 4-R 1, C D S 4 /S L A M F 5 , N C A M -L1, C D 94, N K G 2A , C D 97, N K G 2C , C D 229 /S L A M F 3 , N K G 2D , C D 2 F -10 /S L A M F 9 , NT-4, C D 69, N T B -A /S L A M F 6 , C a d e n a y co m ú n /IL -2 R y , O s te o p o n tin a , C R A C C /S L A M F 7 , PD -1, C R T A M , P S G L-1, C T LA -4 , R A N K /T N F R S F 11 A , C X 3C R 1, C X 3C L1, L-S e le c tin a , C X C R 3, S IR P p 1, C X C R 4, S LA M , C X C R 6, T C C R /W S X -1, D N A M -1, T im o p o ye tin a , E M M P R IN /C D 147 , T IM -1, E phB 6, T IM -2 , F a s /T N F R S F 6 , T IM -3 , L ig a nd o F a s /T N F S F 6 , T IM -4 , Fey R III/C D 16 , T IM -6 , T N F R 1 /T N F R S F 1 A , G ra n u lys in , T N F R III/T N F R S F 1 B, T R A IL R I/T N F R S F IO A , IC A M -1 /C D 54 , T R A IL R 2 /T N F R S F 10 B , IC A M -2 /C D 102 , T R A IL R 3 /T N F R S F 10 C ,IF N -Y R 1, T R A IL R 4 /T N F R S F 10 D , IF N -y R2, T S L P , IL-1 R1 y T S L P R. En d ive rsa s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to q ue se une a uno o m ás de e s to s a n tíg e n o s de cé lu la s T ilus tra tivo s .
A m o do de e je m p lo no lim itan te , en va r ia s re a liza c io ne s , la p re se n te p ro te ína q u im é rica tie n e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to d ir ig id a con tra un m a rc a d o r de pun to de con tro l e xp re sa d o en una cé lu la T, p o r e je m p lo , uno o m ás de P D -1, C D 28, C T LA 4 , ICO S, B TLA , KIR, L A G 3, C D 137 , O X 40 , C D 27, C D 40L , T IM 3 y A 2aR .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re c o n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a u na d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o un re ce p to r) a so c ia d o a las cé lu las B. En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re c lu ta d ire c ta o in d ire c ta m e n te a las cé lu la s B, p o r e je m p lo , en a lg u n a s re a liza c io n e s , a un s itio te ra p é u tico (p o r e jem p lo , un locus con una o m ás cé lu las de la e n fe rm e d a d o cé lu las que deben se r m o d u la d a s para un e fe c to te ra p é u tico ). Los a n tíg e n o s de cé lu las B ilu s tra tivo s de in te rés inc lu ye n , p o r e je m p lo , C D 10, C D 19, C D 20, C D 21, C D 22, C D23, C D 24, C D 37, C D 38, C D 39, C D 40, C D 72, C D 73, C D 74, C D w 75 , C D w 76 , C D 77, C D 78, C D 79a /b , C D 80, C D 81, C D 82, C D 83, C D 84, C D 85, C D 86, C D 89, C D 98, C D 126 , C D 127 , C D w 130 , C D 138 ,C D w 150 , y a n tíg e n o de m a d u ra c ió n de cé lu las B (B C M A ). En v a r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue se une a uno o m á s de e s to s a n tíg e n o s de cé lu la s B ilus tra tivo s .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re c o n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a u na d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o re ce p to r) a so c ia d a a las cé lu la s a se s in a s na tu ra le s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re c lu ta d irec ta o in d ire c ta m e n te a las cé lu la s a se s in a s n a tu ra les , p o r e je m p lo , en a lg u na s re a liza c io n e s , a un s itio te ra p é u tico (p o r e je m p lo , un locus con una o m ás cé lu la s de la e n fe rm e d a d o cé lu la s que d eb en se r m o d u la d a s para un e fe c to te ra p é u tico ). Los a n tíg e n o s de in te ré s de las cé lu la s a se s in a s n a tu ra le s inc lu ye n , p o r e je m p lo , T IG IT , 2 B 4 /S L A M F 4 , K IR 2 D S 4 , C D 155 /P V R , K IR 3 D L 1, C D 94, L M IR 1 /C D 300 A , C D69, L M IR 2 /C D 300 c , C R A C C /S L A M F 7 , L M IR 3 /C D 300 L F , K irla lph a , D N A M -1, L M IR 5 /C D 300 L B , F c -e ps ilo n RII, L M IR 6 /C D 300 L E , F c -Y R I/C D 64, M IC A , F c-y R IIB /C D 32b , M IC B , Fc-y R IIC /C D 32 c , M U LT -1, F c-y R IIA /C D 32a , N e c tin -2 /C D 112 , F c-y R III/C D 16 , N K G 2A , F cR H 1 /IR T A 5 , N K G 2C , F cR H 2 /IR T A 4 , N K G 2D , F cR H 4 /IR T A 1, N K p30, F cR H 5 /IR T A 2 , N K p44, F c -R e ce p to r-like 3 /C D 16 -2 , N K p 46 /N C R 1, N K p80 /K L R F 1, N T B -A /S L A M F 6 , R ae-1, Rae-1 a, Rae-1 p, Rae-1 de lta , H60, Rae-1 e ps ilon , ILT 2 /C D 85 j, Rae-1 y , ILT 3 /C D 85 k , T R E M -1, ILT 4 /C D 85 d , T R E M -2 , ILT 5 /C D 85 a , T R E M -3 , K IR /C D 158 , T R E M L 1 /T L T -1, K IR 2D L1, U LB P -1, K IR 2 D L 3 , U LB P -2 , K IR 2 D L 4 /C D 158 d y U LB P -3. En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue se une a uno o m ás de e s to s a n tíg e n o s ilu s tra tivo s de cé lu la s NK.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re c o n o c im ie n to q ue se u ne e sp e c ífica m e n te a una d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o re ce p to r) a so c ia d a a los m a c ró fa g o s /m o n o c ito s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re c lu ta d irec ta o in d ire c ta m e n te a los m a c ró fa g o s /m o n o c ito s , p o r e je m p lo , en a lg u na s re a liza c io n e s , a un s itio te ra p é u tico (p o r e je m p lo , un locus con una o m ás cé lu la s de la e n fe rm e d a d o cé lu la a se r m o d u la d a para un e fe c to te ra p é u tico ). Los a n tíg e n o s ilu s tra tivo s de m a c ró fa g o s /m o n o c ito s de in te rés inc lu ye n , por e je m p lo , S IR P Ia , B 7-1 /C D 80 , ILT 4 /C D 85 d , B 7-H 1, ILT 5 /C D 85 a , C a d e n a p com ú n, In te g rin a a 4 /C D 49 d , B LA M E /S L A M F 8 , In te g rin a a X /C D llc , C C L 6 /C 10 , In te g rin a p 2 /C D 18 , C D 155 /P V R , In te g rin a p 3 /C D 61, C D 31 /P E C A M -1, La tex ina , C D 36 /S R -B 3 , L e u co trie n o B4 R1, C D 40 /T N F R S F 5 , L IM P IIIS R -B 2 , C D 43, L M IR 1 /C D 300 A , C D 45, L M IR 2 /C D 300 c , C D 68, L M IR 3 /C D 300 L F , C D 84 /S L A M F 5 , L M IR 5 /C D 300 L B , C D 97, L M IR 6 /C D 300 L E , C D 163 , LR P -1, C D 2 F -10 /S L A M F 9 , M A R C O , C R A C C /S L A M F 7 , M D -1, E C F-L , M D -2, E M M P R IN /C D 147 , M G L2, E n d o g lin a /C D 105 , O s te o a c tiv in a /G P N M B , F c-y R I/C D 64 , O s te o p o n tin a , F c-y R IIB /C D 32b , P D -L2 , Fc-y R IIC /C D 32 c , S ig le c -3 /C D 33 , F c-y R IIA /C D 32a , S IG N R 1 /C D 209 , F c-y R III/C D 16 , S LA M , G M -C S F R a, T C C R /W S X -1, IC A M -2 /C D 102 , T LR 3 , IF N -y RI, T LR 4 , IF N -g a n n n a R2, T R E M -I, IL-I RII, T R E M -2 , ILT 2 /C D 85 j, T R E M -3 , ILT 3 /C D 85 k , T R E M L 1 /T L T -1, 2 B 4 /S L A M F 4, IL-10 R a, A L C A M , IL -10 R p, A m in o p e p tid a s a N /A N P E P , ILT 2 /C D 85 j, C ad en a p com ún, ILT 3 /C D 85 k , C lq R 1 /C D 93, ILT 4 /C D 85 d , C C R 1, ILT 5 /C D 85 a , C C R 2, C D 206 , In te g rin a a 4 /C D 49 d , C C R 5, In te g rin a a M /C D II b, C C R 8, In te g rin a a X /C D llc , C D 155 /P V R , In te g rin a p 2 /C D 18 , C D 14, In te g rin a p 3 /C D 61, C D 36 /S R -B 3 , LA IR 1, C D 43, LA IR 2, C D 45, L e u co trie n o B 4-R 1, C D 68, L IM P IIIS R -B 2 , C D 84 /S L A M F 5 , L M IR 1 /C D 300 A , C D 97, L M IR 2 /C D 300 c , C D 163 , L M IR 3 /C D 300 L F , fa c to r de co a g u la c ió n III/fa c to r tisu la r, L M IR 5 /C D 300 L B , C X 3C R 1, C X 3C L1, L M IR 6 /C D 300 L E , C X C R 4, LR P -1, C X C R 6, M -C S F R, D E P -1 /C D 148 , M D -1, D N A M -1, M D -2 , E M M P R IN /C D 147 , M M R , E n d o g lin /C D 105 , N C A M -L1, Fc-y R I/C D 64, P S G L -1, Fc-y R IIIIC D 16, R P 105, G -C S F R, L -S e le c tin a , G M -C S F R a, S ig le c -3 /C D 33 , H V E M /T N F R S F 14 , S LA M , IC A M -1 /C D 54 , T C C R /W S X -1, IC A M -2 /C D 102 , T R E M -I, IL-6 R, T R E M -2 , C X C R I/IL -8 RA, T R E M -3 y T R E M L I/T L T -1. En va r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to que se une a u no o m ás de e s to s a n tíg e n o s ilu s tra tivo s de m a c ró fa g o s /m o n o c ito s .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re co n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a una d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o un re ce p to r) a so c ia d o a las c é lu la s d e n d rítica s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re c lu ta d irec ta o in d ire c ta m e n te a las cé lu la s d en d ríticas , p o r e je m p lo , en a lg u n a s re a liza c io n e s , a un s itio te ra p é u tico (p o r e je m p lo , un locus con una o m ás cé lu las de la e n fe rm e d a d o cé lu la a s e r m o d u la d a para un e fe c to te ra p é u tico ). Los a n tíg e n o s de cé lu la s d e n d rítica s ilu s tra tivo s de in te rés inc lu ye n , p o r e je m p lo , C LE C 9A , X C R 1, R A N K , C D 36 /S R B 3 , L 0X -1 /S R -E 1, C D 68, M A R C O , C D 163 , S R -A 1 /M S R , C D 5 L, S R E C -1, C L -P I/C 0 L E C 12 , S R E C -II, L IM P IIIS R B 2 , R P 105, T LR 4, T L R 1, T LR 5 , T L R 2 , T LR 6 , TLR 3 , T LR 9 , L ig a nd o 4 -IB B /T N F S F 9 , IL -12 /IL -23 p40, 4-A m in o -1,8 -n a fta lim id a , ILT 2 /C D 85 j, C C L 21 /6 C k in e , ILT 3 /C D 85 k , 8 -oxo -d G , ILT 4 /C D 85 d , 8 D 6A , ILT 5 /C D 85 a , A 2B 5 , lu te g rin a a 4 /C D 49 d , A ag , In te g rin a p 2 /C D 18 , A M IC A , L an g e rin a , B 7 -2 /C D 86 , L e u co trie n o B4 RI, B7-H 3, L M IR 1 /C D 300 A , B L A M E /S L A M F 8 , L M IR 2 /C D 300 c , C lq R 1 /C D 93 , L M IR 3 /C D 300 L F , C C R 6, L M IR 5 /C D 300 L B C C R 7, L M IR 6 /C D 300 L E , C D 40 /T N F R S F 5 , M A G /S ig le c -4 -a , C D 43, M C A M , C D 45, M D -1, C D 68, M D -2 , C D 83, M D L -1 /C LE C 5 A , C D 84 /S L A M F 5 , M M R , C D 97, N C A M LI, C D 2 F -10 /S L A M F 9 , O s te o a c tiv in a G P N M B , C hern 23, PD -L2, C LE C -1, R P 105, C LE C -2 , C LE C -8 , S ig le c -2 /C D 22 , C R A C C /S L A M F 7 , S ig le c -3 /C D 33 , D C -S IG N , D C E 205 , S ig le c -5 , D C -S IG N R /C D 299 , S ig le c -6 , D C A R , S ig le c -7 , D C IR /C L E C 4 A , S ig le c -9 , D E C -205 , S ig le c -10 , D e c tin a -1 /C L E C 7 A , S ig le c -F , D e c tin a -2 /C L E C 6 A , S IG N R 1 /C D 209 , D E P -1 /C D 148 , S IG N R 4 , D LEC , S LA M , E M M P R IN /C D 147 , T C C R /W S X -1, Fc-y R 1 /C D 64, TLR 3 , F c-y R IIB /C D 32b , T R E M -1, F c-y R IIC /C D 32 c , T R E M -2 , F c -Y R IIA /C D 32a , T R E M -3 , F c-y R III/C D 16 , T R E M L 1 /T L T -1, IC A M -2 /C D 102 y V a n illo id R1. En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to que se une a uno o m ás de e stos a n tíg e n o s ilus tra tivo s de DC.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re c o n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a u na d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o un re ce p to r) a so c ia d a con cé lu la s in m u n ita ria s se le cc io n a d a s de, pero no lim itad as a, m e g a ca rio c ito s , tro m b o c ito s , e ritro c ito s , m a sto c ito s , b asó filo s , neu tró filo s , e o s in ó filo s o s u b co n ju n to s de los m ism os . En a lg u na s re a liza c io n e s , los d o m in io s de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o re c lu tan d irec ta o in d ire c ta m e n te m e g a ca rio c ito s , tro m b o c ito s , e ritro c ito s , m a s to c ito s , b asó filo s , neu tró filo s , e o s in ó filo s , o su b co n ju n to s de los m ism os , p o r e je m p lo , en a lg u n a s re a liza c io n e s , a un s itio te ra p é u tico (p o r e je m p lo , un locu s con una o m ás c é lu la s de la e n fe rm e d a d o cé lu la a m o d u la r p a ra un e fe c to te ra p é u tico ).
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C L E C 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re c o n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a una d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o re ce p to r) a so c ia d a a los m e g a ca rio c ito s y /o tro m b o c ito s . Los a n tíg e n o s m e g a ca rio c ítico s y /o tro m b o c ita rio s ilu s tra tivo s de in te rés inc lu ye n , p o r e je m p lo , G P IIb /IIIa , G P Ib , vW F , PF4 y TS P . En va rias re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to que se une a u no o m ás de e s to s a n tíg e n o s ilu s tra tivo s de m e g a ca rio c ito s y /o tro m b o c ito s .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re c o n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a u na d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o re ce p to r) a so c ia d a a los e ritro c ito s . Los a n tíg e n o s e ritro c ita rio s ilu s tra tivo s de in te ré s inc lu ye n , p o r e je m p lo , el C D 34, el C D 36, el C D 38, el C D 41a (g lico p ro te ín a p la q u e ta ria IIb /IIIa ), el CD41 b (G P IIb ), el c D 71 (re c e p to r de tra n s fe rr in a ), el C D 105 , la g lico fo rin a A, la g lico fo rin a C, el c-k it, e1H LA -D R , e1H2 (M H C -II) y los a n tíg e n o s R hesus. En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue se une a uno o m ás de e s to s a n tíg e n o s e ritro c ita rio s ilus tra tivo s .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re c o n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a u na d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o re ce p to r) a so c ia d a a los m a sto c ito s . Los a n tíg e n o s de m a s to c ito s ilu s tra tivo s de in te rés inc luyen , p o r e je m p lo , S C F R /C D 117 , FceR I, C D2, C D 25, C D 35, C D 88, C D 203 c , C 5R 1, C M A I, F C E R IA , F C E R 2, T P S A B I. En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de u n ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue se une a uno o m ás de e stos a n tíg e n o s de m a sto c ito s .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re c o n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a u na d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o re ce p to r) a so c ia d a a los b asó filo s. Los a n tíg e n o s ilu s tra tivo s de in te rés de los basó filo s inc lu ye n , p o r e je m p lo , FceR I, C d 2 o3 c , C D 123 , C D 13, C D 107 a, C D 107 b y C D 164. En v a r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue se une a uno o m ás de e stos a n tíg e n o s de basó filos.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re c o n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a u na d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o re ce p to r) a so c ia d a a los n eu tró filo s. Los a n tíg e n o s ilus tra tivo s de in te rés de los n e u tró filo s inc luyen , p o r e je m p lo , 7D5, C D 10 /C A L L A , C D 13, C D 16 (F cR III), p ro te ín a s C D 18 (LF A -1, C R 3 y p150, 95), C D 45, C D 67 y C D 177. En va ria s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to que se une a uno o m ás de e s to s a n tíg e n o s de n eu tró filo s.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re c o n o c im ie n to q ue se une e sp e c ífica m e n te a u na d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o re ce p to r) a so c ia d a a los e os inó filo s . Los a n tíg e n o s de in te rés de los e o s in ó filo s inc luyen , p o r e jem p lo , C D 35, C D 44 y C D 69. En v a r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue se une a uno o m ás de e s to s a n tíg e n o s de eos inó filo s .
En v a r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve n c ió n co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue tie n e un d o m in io de re co n o c im ie n to que se une e sp e c ífica m e n te a un a n tíg e n o a p ro p ia d o o a un m a rc a d o r de su p e rfic ie c e lu la r co n o c id o p o r el a rte sa n o e xp e rto . En a lg u na s re a liza c io n e s , el a n tíg e n o o m a rc a d o r de su p e rfic ie c e lu la r es un m a rc a d o r e sp e c ífico de te jid o . Los m a rca d o re s e sp e c ífico s de te jid o ilu s tra tivo s inc lu ye n , en tre o tros, m a rca d o re s de su p e rfic ie de cé lu la s e n d o te lia le s com o A C E , C D 14, C D 34, C D H 5, ENG , IC A M 2 , M C A M , N 0S 3, P E C A M I, P R O C R , S E LE , S E LP , T E K , T H B D , V C A M I, V W F ; m a rca d o re s de su p e rfic ie de cé lu la s m u scu la re s lisas com o A C T A 2 , M Y H IO , M Y H I 1, M Y H 9, M Y O C D ; m a rca d o re s de su p e rfic ie de cé lu la s de fib ro b la s to s (e s tro m a ) com o A L C A M , C D 34, c O l IAI, c 0 l 1A2, C 0L 3A 1 , Fa P, PH -4; m a rca d o re s de su p e rfic ie de cé lu la s e p ite lia le s com o C D ID , K 6 IR S 2, K R T IO , K R T13, K R T 17 , K R T18, K R T19, K R T4, KR T5, K R T8, M U C I, T A C S T D I; m a rca d o re s de n e o va scu la tu ra com o C D 13, T F N A , A lfa -v b e ta -3 (a vp3 ), E -se lec tina ; y m a rca d o re s de s u p e rfic ie de a d ip o c ito s com o A D IP O Q , F A B P 4 y R E TN . En va rias re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C L E C 9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to que se une a uno o m ás de e stos a n tíg e n o s . En va rias re a liza c io ne s , una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to de la p ro te ín a q u im é rica se une a una o m ás de las cé lu la s que tie n e n e stos a n tíg e n o s .
En va ria s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico de la inve n c ió n tie n e una o m á s fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to d ir ig id a s con tra un m a rc a d o r de pun to de con tro l, p o r e je m p lo uno o m ás de P D -1 /P D -L1 o PD -L2, C D 28 /C D 80 o C D 86 , C T L A 4 / C D 80 o C D 86 , IC O S /IC O S L o B 7R P 1 , B T L A /H V E M , KIR, LAG 3, C D 137 /C D 137 L , O X 40 /O X 40 L , C D 27 , C D 40L , T IM 3 /G a l9 , y A 2 a R . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico de la in ve n c ió n pue de c o m p re n d e r un a n ticu e rp o o fo rm a to de a n ticu e rp o , p o r e je m p lo V H H , con tra un m a rc a d o r in h ib id o r de pun to de con tro l s e le cc io n a d o e n tre uno de C T L A -4 , P D -L1 , P D -L2 y p D-1.
A m o do de e je m p lo no lim itan te , en d ive rsa s re a liza c io n e s , el p rese n te a g e n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico tie n e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to d ir ig id a co n tra (i) un m a rc a d o r de pun to de con tro l e xp re sa d o en una cé lu la T, p o r e je m p lo uno o m ás de PD -1, C D 28 , C T LA 4 , IC O S , B TLA , K IR , LAG 3, C D 137 , O X 40 , C d27 , C D 40L , T IM 3 y A 2 a R y (ii) una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to d ir ig id a co n tra una cé lu la tu m o ra l, ju n to con cu a lq u ie ra de los a g e n te s de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o s (p o r e je m p lo , m u ta n te s ) d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to .
En va ria s re a liza c io n e s , el p re se n te a g e n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico tie n e una o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to d ir ig id a s con tra PD-1. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 A tie n e una o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to que se unen se le c tiva m e n te a un p o lip é p tid o PD-1. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e uno o m ás a n ticu e rp o s , d e riva d o s o fo rm a to s de a n ticu e rp o s , p é p tid o s o p o lip é p tid o s , o p ro te ín a s de fu s ió n que se unen se le c tiva m e n te a un p o lip é p tid o PD-1.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o anti-P D -1 p e m b ro lizu m a b (ta m b ié n co n o c id o com o M K -3475 , K E Y T R U D A ), o fra g m e n to s del m ism o. El P e m b ro lizu m a b y o tros a n ticu e rp o s h u m a n iza d o s an ti-P D -1 se d ivu lga n en H am id , e t al. (2013 ) N e w E ng la nd Jo u rn a l o f M e d ic ine 369 (2): 134-44, US 8.354.509 y W O 2009 /114335. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el P e m b ro lizu m a b o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p re se n te d o cu m e n to c o m p re n d e una ca d e n a p esad a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNF
NEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSS
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSV
FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTY
RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEG
NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:98) ;
y /o una ca d e n a lige ra que co m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLES
GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF
IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:99) .
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o a n ti-P D -1 , n ivo lu m a b (ta m b ié n co n o c id o co m o B M S -936558 , M DX-1 106, O N O -4538 , O P D IV O ), o fra g m e n to s del m ism o . El n ivo lu m a b (c lon 5C 4) y o tros a n tic u e rp o s m o n o c lo n a le s h u m a n o s que se unen e sp e c ífica m e n te a PD-1 se d ivu lga n en US 8.008.449 y W O 2006 /121 168. En re a liz a c io n e s ilu s tra tiva s , el n iv o lu m a b o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o co m p re n d e una ca d e n a p esad a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL DCKASGITFS NSGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDGSKRYY
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLF LQMNSLRAED TAVYYCATND DYWGQGTLVT VSSASTKGPS
VFPLAPCSRS TSESTAALGC LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS
VVTVPSSSLG TKTYTCNVDH KPSNTKVDKR VESKYGPPCP PCPAPEFLGG PSVFLFPPKP
KDTLMISRTP EVTCVWDVS QEDPEVQFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQFN STYRVVSVLT
VLHQDWLNGK EYKCKVSNKG LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSQEE MTKNQVSLTC
LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SRLTVDKSRW QEGNVFSCSV
MHEALHNHYT QKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 100);
y /o una ca d e n a lige ra que co m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ SSNWPRTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP
SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT
LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC (SEQ ID NO: 101).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -1 p id ilizu m a b (ta m b ié n co n o c id o co m o CT-01 1, h B A T o h B A T -1 ), o fra g m e n to s de l m ism o . El p id ilizu m a b y o tros a n tic u e rp o s m o n o c lo n a le s h u m a n iza d o s an ti-P D -I se d ivu lg a n en US 2008 /0025980 y W O 2009 /101611. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el a n tic u e rp o anti-P D -1 o un fra g m e n to de un ió n a a n tíg e n o de l m ism o p a ra su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p rese n te d o cu m e n to c o m p re n d e una reg ión v a ria b le de ca d e n a lige ra que co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a de S E Q ID N O S: 15-18 de US 2008 /0025980 :
SEQ ID NO: 15 of US 2008/0025980 (SEQ ID NO: 102):
EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCSARSSVSYMHWYQQKPGKAPKLLIYRTSNLASGVPSR
FSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYYCQQRSSFPLTFGGGTKLEIK;
SEQ ID NO: 16 of US 2008/0025980 (SEQ ID NO: 103):
EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCSARSSVSYMHWFQQKPGKAPKLWIYRTSNLASGVPSR
FSGSGSGTDYTLTINSLQPEDFATYYCQQRSSFPLTFGGGTKLEIK;
SEQ ID NO: 17 of US 2008/0025980 (SEQ ID NO: 104):
EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCSARSSVSYMHWFQQKPGKAPKLWIYRTSNLASGVPSR
FSGSGSGTDYCLTINSLQPEDFATYYCQQRSSFPLTFGGGTKLEIK;
SEQ ID NO: 18 of US 2008/0025980 (SEQ ID NO: 105):
EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCSARSSVSYMHWFQQKPGKAPKLWIYRTSNLASGVPSR
FSGSGSGTSYCLTINSLQPEDFATYYCQQRSSFPLTFGGGTKLEIK;
y /o una ca d e n a p e sa d a que co m p re n d e una se c u e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a de S E Q ID N O S : 20 -24 de US 2008 /0025980
SEQ ID NO: 20 of US 2008/0025980 (SEQ ID NO:106):
QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYSFSNYGMNWVRQAPGQGLQWMGWINTDSGESTY
AEEFKGRFVFSLDTSVSTAYLQITSLTAEDTGMYFCAKVGYDALDYWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 21 of US 2008/0025980 (SEQ ID NO:107):
QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLQWMGWINTDSGESTY
AEEFKGRFVFSLDTSVSTAYLQITSLTAEDTGMYFCAKVGYDALDYWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 22 of US 2008/0025980 (SEQ ID NO:108):
QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLQWMGWINTDSGESTY
AEEFKGRFVFSLDTSVNTAYLQITSLTAEDTGMYFCVRVGYDALDYWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 23 of US 2008/0025980 (SEQ ID NQ:109):
QIQLVQSGSELKKpGASVKISC^ SGYTFTNYGMNWVRQApGQGLQWMGWINTDSGEgTY
AEEFKGRFVFSLDTSVNTAYLQITSLTAEDTGMYFCVRVGYDALDYWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 24 of US 2008/0025980 (SEQ ID NON 10):
QIQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQGLKWMGWINTDSGESTY
AEEFKGRFAFSLDTSVNTAYLQITSLNAEDTGMYFCVRVGYDALDYWGQGTLVTVSS.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e una cad e n a lige ra que co m p re n d e S E Q ID N O :18 de US 2008 /0025980 y una cad e n a p esad a que c o m p re n d e S E Q ID N O :22 de US 2008 /0025980.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e A M P -514 (ta m b ié n co n o c id o com o M E D I-0680 ). En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e la p ro te ína de fu s ió n P D -L 2 -F c A M P -224 , que se d ivu lg a en W O 2010 /027827 y W O 2011 /066342. En d ich a re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to p ue de in c lu ir un d o m in io de d ire cc io n a m ie n to que c o m p re n d e la S E Q ID N O :4 de W O 2010 /027827 (S E Q ID N O :111):
LFTVTVPKELYIIEHGSNVTLECNFDTGSHVNLGAITASLQKVENDTSPHRERATLLEEQ
LPLGKASFHIPQVQVRDEGQYQCIIIYGVAWDYKYLTLKVKASYRKINTHILKVPETDEV
ELTCQATGYPLAEVSWPNVSVPANTSHSRTPEGLYQVTSVLRLKPPPGRNFSCVFWNTHV
RELTLASIDLQSQMEPRTHPTWLLHIFIPFCIIAFIFIATVIALRKQLCQKLYSSKDTTK
RPVTTTKREVNSAI
y /o la p ro te ín a de fus ió n B 7 -D C que c o m p re n d e el S E Q ID N O :83 de W O 2010 /027827 (S E Q ID N O :112)
MIFLLLMLSLELQLHQIAALFTVTVPKELYIIEHGSNVTLECNFDTGSHVNLGAITASLQ
KVENDTSPHRERATLLEEQLPLGKASFHIPQVQVRDEGQYQCIIIYGVAWDYKYLTLKVK
ASYRKINTHILKVPETDEVELTCQATGYPLAEVSWPNVSVPANTSHSRTPEGLYQVTSVL
RLKPPPGRNFSCVFWNTHVRELTLASIDLQSQMEPRTHPTWEPKSCDKTHTCPPCPAPEL
LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE
QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS
RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e el p ép tid o A U N P 12 o cu a lq u ie ra de los o tros p é p tid o s d ivu lg a d o s en US 2011 /0318373 o 8 ,907 ,053. P o r e je m p lo , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to puede c o m p re n d e r A U N P 12 (es dec ir, e l c o m p u e s to 8 o S E Q ID N O :49 de u S 2011 /0318373 ) que tie n e la se cu e n c ia de S E Q ID N O :113: S N T S E S F K (S N T S E S F )F R V T Q L A P K A Q IK E -N H 2
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o anti-P D -1 1 E3, o fra g m e n to s del m ism o , co m o se d ivu lg a en US 2014 /0044738. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , 1 E3 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una re g ió n v a r ia b le de cad e n a p esad a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVQLQQSGPV LVKPGASVKM SCKASGYTFTDYYMNWVKQSHGKSLEWIGN
INPYNGGTTY NQKFKGKATL TVDKSSRTAYMEINSLTSEDSAVYYCARGR
IYDGSLDYWG QGTALTVSS (SEQ ID NO:114);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de
DIQMTQFPSS LCASQGGKVT VTCKASQDINNYMAWYQHKPGKGPRLLIHY
TSTLLSGIPS RFSGSGSGRD YSFSISNLEPEDIATYYCLQYDNLWTFGGG
tkleik (SEQ ID NO:115).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o anti-P D -1 1 E8, o fra g m e n to s del m ism o , co m o se d ivu lg a en US 2014 /0044738. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , 1 E8 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una re g ió n v a r ia b le de cad e n a p esad a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLQQSGAE LAKPGASVRL SCKASGYTFT NYWMHWVKQR PGQGLEWIGH
INPSSGFTTY NQNFKDKATL TADKSSNTAY MQLSSLTYED SAVYFCARED
YD'VDYWGQGT TLTVSS (SEQ ID NO: 116);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de
DIVMTQSQKF MSTSVGDRVS VTCKASQSVD TNVAWYQQKP GQSPKALIFS
ASYRYSGVPD RFTGSGSGTD FTLTINSVQS EDLAEYFCQQ YNSYPYTFGS
g t k l e i k (SEQ ID NO: 117).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o anti-P D -1 1 H3, o fra g m e n to s del m ism o , co m o se d ivu lg a en US 2014 /0044738. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , 1 H3 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una re g ió n v a r ia b le de cad e n a p e sa d a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
evqlvesggg lvkpggslkl scaasgftfs dygmhwvrqa pekglewvay
ISSGSYTIYY TDTVKGRFTI SRDNAKNTLF LQMTSLRSED TAMYYCARRG
YGSFYEYYFD YWGQGTTLTV SS (SEQ ID NO: 118);
y /o la reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de
QIVLTQSPAL MSASPGEKVT MTCSASSSVS YMYWYQQKPR SSPKPWIYLT
SNLASGVPAR FSGSGSGTSY SLTISSMEAE DAATYYCQQW SSNPFTFGSG
tkleik (SEQ ID NO: 119).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e un V H H d ir ig id o co n tra PD-1 co m o se d ivu lga , p o r e je m p lo , en US 8 ,907 ,065 y W O 2008 /071447. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , los V H H s co n tra PD-1 co m p re n d e n S E Q ID N O S : 347-351 de US 8.907.065
SEQ ID NO: 347 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:120):
EVQLVESGGGLVQAGKSLRLSCAASGSIFSIHAMGWFRQAPGKEREFVAA
ITWSGGITYYEDSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAIYYCAADR
AESSWYDYWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 348 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:121):
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSIAS1HAMGWFRQAPGKEREFVAV
ITWSGGITYYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAIYYCAGDK
HQSSWYDYWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 349 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:122):
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSISSIHAMGWFRQAPGKEREFVAA
ITWSGGITYYADSLKGRFTISRDNAKNTGYLQMNSLKPEDTAIYYCAADR
AQSSWYDYWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 350 of US 8,907,065 (SEQ ID NO: 123):
EVQLVESGGGLVQAGGSLGLSCAASGSIFSINAMAWFRQAPGKEREFVAL
ISWSGGSTYYEDSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAIYYCAADR
VDSNWYDYWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 351 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:124:
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRAFSSGTMGWFRRAPGKEREFVA
SIPWSGGRIYYADSVKGRFTISRDNAQNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAVK
ERSTGWDFASWGQCTQVTVSS.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e uno de los a n ticu e rp o s a n ti-P D -1, o fra g m e n to s de los m ism os , según se d ivu lga en U S 2011 /0271358 y W O 2010 /036959. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el a n ticu e rp o o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p re se n te d o cu m e n to co m p re n d e una cad e n a p esada que co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a de S E Q ID N O S: 25 ­ 29 de U S 2011 /0271358 :
SEQ ID NO: 25 of US2011/0271358 (SEQ ID NO:125):
QVQLVQSGAELKQPGASVKMSCKASGYSFTSSWIHWVKQAPGQGLEWIGYIYPSTGFTEY
NQKFKDRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDSAVYYCARWRDSSGYHAMDYWGQGTSVTVS
S;
SEQ ID NO: 26 of US2011/0271358 (SEQ ID NO:126):
QVQLVQSGAEVKQPGASVKMSCKASGYSFTSSWIHWVKQAPGQGLEWIGYIYPSTGFTEY
NQKFKDRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYY3/diOCARWRDSSGYHAMDYWGQGTSVTVS S;
SEQ ID NO: 27 of US2011/0271358 (SEQ ID NO:127):
QVQLVQSGHEVKQPGASVKMSCKASGYSFTSSWIHWVKQAPGQGLEWIGYIYPSTGFTEY
NQKFKDRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWRDSSGYHAMDYWGQGTLVTVS
SEQ ID NO: 28 of US2011/0271358 (SEQ ID NO: 128):
QVQLVQSGHEVKQPGASVKMSCKASGYSFTSSWIHWVRQAPGQGLEWIGYIYPSTGFTEY
NQKFKDRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWRDSSGYHAMDYWGQGTLVTVS
S;
SEQ ID NO: 29 of US2011/0271358 (SEQ ID NO:129):
QVQLVQSGHEVKQPGASVKVSCKASGYSFTSSWIHWVRQAPGQGLEWIGYIYPSTGFTEY
NQKFKDRATITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWRDSSGYHAMDYWGQGTLVTVS
S ;
y /o una cad en a lige ra que co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a de S E Q ID N O S: 30-33d e U S 2011 /0271358
SEQ ID NO: 30 of US2011/0271358 (SEQ ID NO: 130):
DIVLTQSPASLTLSPGQRLTISCRASQSVSTSGYSYMHWYQQKPDQSPKLLIKFGSNLES
GIPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEEEDFATYYCQHSWEI PYTFGQGTKLEIK;
SEQ ID NO: 31 of US2011/0271358 (SEQ ID NO:131):
DIVLTQSPATLSLSPGQRLTISCRASQSVSTSGYSYMHWYQQKPDQSPKLLIKFGSNLES
GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQHSWEIPYTFGQGTKLEIK;
SEQ ID NO: 32 of US2011/0271358 (SEQ ID NO: 132):
EIVLTQSPATLSLSPGQRLTISCRASQSVSTSGYSYMHWYQQKPDQSPKLLIKFGSNLES
GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQHSWEIPYTFGQGTKLEIK;
SEQ ID NO: 33 of US2011/0271358 (SEQ ID NO: 133):
DIVLTQSPATLSLSPGQRLTISCRASQSVSTSGYSYMHWYQQKPDQSPKLLIKFGSNLES
GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSWEIPYTFGQGTKLEIK.
En va r ia s re a liza c io n e s , e l p re se n te a g e n te de un ión m u ltie sp e c ífico de C le c9 A c o m p re n d e uno o m á s a n ticu e rp o s d ir ig id o s con tra PD -1, o fra g m e n to s de a n ticu e rp o s de los m ism os , s e le cc io n a d o s de T S R -042 (T esaro , Inc.), R E G N 2810 (R e g e n e ro n P h a rm a ce u tica ls , Inc.), PD R001 (N o va rtis P h a rm a ce u tica ls ), y B G B -A 317 (B e iG e n e L td.) En una re a liza c ió n e je m p la r, el p rese n te a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico co m p re n d e una fra cc ió n d irig id a co n tra PD -1, co m o S E Q ID N o :134:
EVQLVESGGGLVQAGKSLRLSCAASGSIFSIHAMGWFRQAPGKEREFVAAITWSGGITYYEDSVKGRFTISRDNA
KNTVYLQMNSLKPEDTAIYYCAADRAESSWYDYWGQGTQVTVSS.
En va ria s re a liza c io n e s , el p re se n te a g e n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico tie n e una o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to d ir ig id a s co n tra P D -L1. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 A tie n e una o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to que se unen s e le c tiva m e n te a un p o lip é p tid o P D -L1. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e uno o m ás a n ticu e rp o s , d e riva d o s o fo rm a to s de a n ticu e rp o s , p é p tid o s o p o lip é p tid o s , o p ro te ín a s de fus ió n que se unen se le c tiv a m e n te a un p o lip é p tid o P D -L1.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o anti-P D -L1 M E D I4736 (ta m b ié n co n o c id o co m o d u rva lu m a b ), o fra g m e n to s de l m ism o . M E D I4736 es se le c tivo para PD-L1 y b lo q u e a la un ión de PD -L1 a los re ce p to re s PD-1 y C D 80. El M E D I4736 y los fra g m e n to s de un ió n a a n tíg e n o de l m ism o p ara su uso en los m é to d o s a qu í p rev is tos co m p re n d e n una cad e n a pesad a y una ca d e n a ligera o una reg ión v a ria b le de la cad e n a p esad a y una reg ión v a ria b le de la cad e n a lige ra . La se cu e n c ia de M E D I4736 se d ivu lga en W O /2016 /06272. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , M E D I4736 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p rese n te d o cu m e n to c o m p re n d e una cad en a pesad a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYWMSWVRQA PGKGLEWVAN
IKQDGSEKYY VDSVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAREG
GWFGELAFDY WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV
KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQ
TYICNVNHKP SNTKVDKRVE PKSCDKTHTC PPCPAPEFEG GPSVFLFPPK
PKDTLMISRT PEVTCWVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY
NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPASIEKTI SKAKGQPREP
QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP
VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
K (SEQ ID NO: 135);
y /o una ca d e n a lige ra que co m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de
EIVLTQSPGT LSLSPGERAT LSCRASQRVS SSYLAWYQQK PGQAPRLLIY
DASSRATGIP DRFSGSGSGT DFTLTISRLE PEDFAVYYCQ QYGSLPWTFG
QGTKVEIKRT VAAPSVFIFP PSDEQLKSGT ASVVCLLNNF YPREAKVQWK
VDNALQSGNS QESVTEQDSK DSTYSLSSTL TLSKADYEKH KVYACEVTHQ
GLSSPVTKSF NRGEC (SEQ ID NO: 136).
En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el M E D I4736 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p re se n te d o cu m e n to co m p re n d e una reg ión va r ia b le de cad e n a p esada que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de S E Q ID N 0:4 de W O /2016 /06272 (S E Q ID NO : 137):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYY
VDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVS
S;
y /o una reg ión v a ria b le de la cad en a lige ra que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de S E Q ID N0:3 de W O /2016 /06272 (S E Q ID NO : 138)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIP
DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIK
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o a n ti-P D -L1 a te z o liz u m a b (ta m b ié n co n o c id o co m o M P D L 3280 A , R G 7446), o fra g m e n to s de l m ism o . En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , e l a te zo lizu m a b o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p re se n te d o cu m e n to co m p re n d e una ca d e n a p esa d a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSW1HWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRF
TISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST
SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN
HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDP
EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA
KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY
skltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(SEQ ID NO: 139);
y /o una ca d e n a lige ra que co m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASFLY SGVPSRFSGSGSG
TDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL
NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP
vtksfnrgec (SEQ ID NO:140).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o a n ti-P D -L1 a ve lu m a b (ta m b ié n co n o c id o co m o M S B 0010718 C ), o fra g m e n to s del m ism o. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el a ve lu m a b o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p rese n te d o cu m e n to co m p re n d e una ca d e n a p esad a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYIMMWVRQA PGKGLEWVSS
IYPSGGITFY ADTVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARIK
LGTVTTVDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK
DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT
YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP
KDTLMISRTP EVTCVWDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN
STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ
VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
(SEQ ID NO: 141);
y /o una ca d e n a lige ra que co m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de
QSALTQPASV SGSPGQSITI SCTGTSSDVG GYNYVSWYQQ
HPGKAPKLMI YDVSNRPSGV SNRFSGSKSG NTASLTISGL
QAEDEADYYC SSYTSSSTRV FGTGTKVTVL GQPKANPTVT
LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADGSPVK
AGVETTKPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT
HEGSTVEKTV APTECS (SEQ ID NO: 142) .
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 B M S -936559 (a lias 12A4, M D X -1105 ), o fra g m e n to s de l m ism o , com o se d ivu lg a en US 2013 /0309250 y W O 2007 /005874. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , B M S -936559 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p re se n te d o cu m e n to co m p re n d e una re g ió n v a ria b le de ca d e n a p esad a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKTSGDTFSTYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGKAHY
AQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARKFHFVSGSPFGMDVWGQGTTVT
v s s (SEQ ID NO: 143);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPA
RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 144).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o a n ti-P D -L 1 3 G 10, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en US 2013 /0309250 y W O 2007 /005874. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 3 G 10 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a qu í p ro p o rc io n a d o s c o m p re n d e una reg ión v a r ia b le de ca d e n a p esad a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYGFSVWRQAPGQGLEWMGWITAYNGNTNY
AQKLQGRVTMTTDTSTSTVYMELRSLRSDDTAVYYCARDYFYGMDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID
NO: 145);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLVWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPA
RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:146).
[0148] En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o anti-P D -L1 10A5, o fra g m e n to s de l m ism o , com o se d ivu lg a en US 2013 /0309250 y W O 2007 /005874. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 10A5 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a qu í p ro p o rc io n a d o s c o m p re n d e una reg ión v a ria b le de ca d e n a p esad a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDVHWVRQAPGQRLEWMGWLHADTGITKF
SQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARERIQLWFDYWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 147);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 148).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 5F8, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lg a en US 2013 /0309250 y W O 2007 /005874. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 5F8 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a qu í p ro p o rc io n a d o s c o m p re n d e una reg ión v a r ia b le de cad e n a p esad a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKVSGGIFSTYAINWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANH
AQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGIAAALFDYWGQGTLVTVSS
(SEQ IDNO: 149);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIP
DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:150).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 10H 10, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lg a en US 2013 /0309250 y W O 2007 /005874. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , la 10H 10 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de la m ism a p a ra su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una reg ión v a r ia b le de ca d e n a p esad a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAVSGFTFDDYVVHWVRQAPGKGLEWVSGISGNSGNIGY
ADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAVPFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 151);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 152) .
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 1 B12, o fra g m e n to s del m ism o , co m o se d ivu lg a en US 2013 /0309250 y W O 2007 /005874. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , la 1 B12 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de la m ism a p a ra su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una reg ión v a ria b le de ca d e n a p esad a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKTSGDTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGRAHY
AQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARKFHFVSGSPFGMDVWGQGTTVT
v s s (SEQ ID NO: 153);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPA
RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 154).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o a n ti-P D -L1 7H 1, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en US 2013 /0309250 y W O 2007 /005874. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 7H1 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a qu í p ro p o rc io n a d o s c o m p re n d e una reg ión v a ria b le de ca d e n a p esad a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKTSGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGKAHY
AQKFQGRVTITADESTTTAYMELSSLRSEDTAVYYCARKYDYVSGSPFGMDVWGQGTTVT
v s s (SEQ ID NO: 155);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPA
RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:156).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o a n ti-P D -L I 11 E6, o fra g m e n to s del m ism o , co m o se d ivu lg a en US 2013 /0309250 y W O 2007 /005874. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 11 E6 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a qu í p ro p o rc io n a d o s c o m p re n d e una reg ión v a r ia b le de ca d e n a p esad a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAINWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGSANY
AQKFQDRVTITADESTSAAYMELSSLRSEDTAVYYCARDSSGWSRYYMDVWGQGTTVTVS
s (SEQ ID NO: 157);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIP
DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:158).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 12B7, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lg a en US 2013 /0309250 y W O 2007 /005874. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 12B7 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a qu í p ro p o rc io n a d o s c o m p re n d e una reg ión v a r ia b le de ca d e n a p e sa d a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QVQLVQSGAEVKEPGSSVKVSCKASGGTFNSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPLFGIAHY
AQKFQGRVTITADESTNTAYMDLSSLRSEDTAVYYCARKYSYVSGSPFGMDVWGQGTTVT
v s s (SEQ ID NO: 159);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPA
RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPTFGQGTRLEIK (SEQ ID NO:160).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o a n ti-P D -L 1 13G 4, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en US 2013 /0309250 y W O 2007 /005874. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 13G 4 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a qu í p ro p o rc io n a d o s c o m p re n d e una reg ión v a ria b le de ca d e n a p esad a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGITFDDYGMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNRGRIEY
ADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKGRFRYFDWFLDYWGQGTLVTVS
s (SEQ ID NO:161);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPFTFGPGTKVDIK (SEQ ID N0162).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 1E12, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lg a en US 2014 /0044738. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , el 1E12 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una re g ió n v a r ia b le de cad e n a p esad a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVKLQESGPS LVKPSQTLSLTCSVTGYSIT SDYWNWIRKF PGNKLEYVGY
ISYTGSTYYN PSLKSRISITRDTSKNQYYL QLNSVTSEDT ATYYCARYGG
WLSPFDYWGQ GTTLTVSS (SEQ ID NO: 163);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
DIVMTQSHKL MSTSVGDRVSITCKASQDVG TAVAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFTGSGSGTDFTLTISNVQS EDLADYFCQQ DSSYPLTFGA
gtkvelk (SEQ ID NO: 164).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o a n ti-P D -L I 1 F4, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en US 2014 /0044738. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 1 F4 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una re g ió n v a r ia b le de cad e n a p esad a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVQLQESGPG LVAPSQSLSI TCTVSGFSLT TYSINWIRQP PGKGLEWLGV
MWAGGGTNSN SVLKSRLIIS KDNSKSQVFL KMNSLQTDDT ARYYCARYYG
NSPYYAIDYW GQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 165);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
DIVTTQSHKL MSTSVGDRVS ITCKASQDVG TAVAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFTGSGSGTD FTLTISNVQS EDLADYFCQQ DSSYPLTFGA
g t k v e l k (SEQ ID NO:166).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o a n ti-P D -L 1 2 G 11 , o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en US 2014 /0044738. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 2G 11 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una re g ió n v a r ia b le de cad e n a p esad a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVKLQESGPS LVKPSQTLSL TCSVTGYSII SDYWNWIRKF PGNKLEYLGY
ISYTGSTYYN PSLKSRISIT RDTSKNQYYL QLNSVTTEDT ATYYCARRGG
WLLPFDYWGQ GTTLTVSS (SEQ ID NO: 167);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
DIVMTQSPSS LAVSVGEKVS MGCKSSQSLL YSSNQKNSLA WYQQKPGQSP
KLLIDWASTR ESGVPDRFTG SGSGTDFTLT ISSVKAEDLA VYYCQQYYGY
PLTFGAGTKL ELK (SEQ ID NO: 168),
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 3B6, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en U S 2014 /0044738. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 3B 6 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una re g ió n v a r ia b le de cad e n a p esad a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVKLQESGPS LVKPGASVKL SCKASGYTFT SYDINWVKQR PGQGLEWIGW
IFPRDNNTKY NENFKGKATL TVDTSSTTAY MELHSLTSED SAVYFCTKEN
WVGDFDYWGQ GTTLTLSS (SEQ ID NO: 169);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
DIVMTQSPAI MSASPGEKVT MTCSASSSIR YMHWYQQKPG TSPKRWISDT
SKLTSGVPAR FSGSGSGTSY ALTISSMEAE DAATYYCHQR SSYPWTFGGG
tkleik (SEQ ID NO:170).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 3D 10, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lg a en US 2014 /0044738 y W O 2012 /145493. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , la 3 D 10 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de la m ism a p a ra su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una reg ión v a ria b le de ca d e n a p esad a que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
EVQLQQSGPD LVTPGASVRI SCQASGYTFP DYYMNWVKQS HGKSLEWIGD
IDPNYGGTTY NQKFKGKAIL TVDRSSSTAY MELRSLTSED SAVYYCARGA
LTDWGQGTSL TVSS (SEQ ID NO: 171);
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
QIVLSQSPAI LSASPGEKVT MTCRASSSVS YIYWFQQKPG SSPKPWIYAT
FNLASGVPAR FSGSGSGTSY SLTISRVETE DAATYYCQQW SNNPLTFGAG
tklelk (SEQ ID NO:172).
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to c o m p re n d e uno de los a n ticu e rp o s a n ti-P D -L I d ivu lg a d o s en U S 2011 /0271358 y W O 2010 /036959. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , el a n ticu e rp o o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p re se n te d o cu m e n to co m p re n d e una cad e n a p e sa d a que c o m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a de S E Q ID N os: 34 -38 de U S 2011 /0271358 :
SEQ ID NO: 34 oí US2011/0271358 (SEQ ID NO: 173):
EVQLVQSGPELKKPGASVKMSCKASGYTFTSYVMHWVKQAPGQRLEWIGYVNPFNDGTKY
NEMFKGRATLTSDKSTSTAYMELSSLRSEDSAVYYCARQAWGYPWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 35 oí US2011/0271358 (SEQ ID NO: 174):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKMSCKASGYTFTSYVMHWVKQAPGQRLEWIGYVNPFNDGTKY
NEMFKGRATLTSDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQAWGYPWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 36 oí US2011/0271358 (SEQ ID NO: 175):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKMSCKASGYTFTSYVMHWVRQAPGQRLEWIGYVNPFNDGTKY
NEMFKGRATLTSDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQAWGYPWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 37 oí US2011/0271358 (SEQ ID NO:176):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYVMHWVRQAPGQRLEWIGYVNPFNDGTKY
NEMFKGRATLTSDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQAWGYPWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 38 oí US2011/0271358 (SEQ ID NO:177):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYVMHWVRQAPGQRLEWIGYVNPFNDGTKY
NEMFKGRATITSDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQAWGYPWGQGTLVTVSS;
y /o una ca d e n a lige ra q ue co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a e n tre los n ú m e ro s S E Q ID: 39 ­ 42 de U S 2011 /0271358 :
SEQ ID NO: 39 oí US2011/0271358 (SEQ ID NO: 178):
DIVLTQSPASLALSPGERATLSCRATESVEYYGTSLVQWYQQKPGQPPKLLIYAASSVDS
GVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEEEDAAMYFCQQSRRVPYTFGQGTKLEIK;
SEQ ID NO: 40 oí US2011/0271358 (SEQ ID NO: 179):
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRATESVEYYGSLVQWYQQKPGQPPKLLIYAASSVDS
GVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAAMYFCQQSRRVPYTFGQGTKLEIK;
SEQ ID NO: 41 oí US2011/0271358 (SEQ ID NO:180):
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRATESVEYYGTSLVQWYQQKPGQPPKLLIYAASSVDS
GVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAAMYFCQQSRRVPYTFGQGTKLEIK;
SEQ ID NO: 42 oí US2011/0271358 (SEQ ID NO:181):
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRATESVEYYGTSLVQWYQQKPGQPPKLLIYAASSVDS
GVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYFCQQSRRVPYTFGQGTKLEIK.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 2.7A 4, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en W O 2011 /066389 , U S 8.779.108 y U S 2014 /0356353. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 2.7 A 4 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o p a ra su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s c o m p re n d e una reg ión v a r ia b le de ca d e n a p esa d a q ue c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
SEQ ID NO: 2 of WO 2011/066389 (SEQ ID NO: 182):
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSTYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSGDYIYY
ADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLKAEDTAVYYCARDLVTSMVAFDYWGQGTLVTVSS;
y /o una re g ió n v a ria b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de: S E Q ID NO: 7 de W O 2011 /066389 (S E Q ID N O :183):
SYELTQPPSVSVSPGQAARITCSGDALPQKYVFWYQQKSGQAPVLVIYEDSKRPSGIPER
FSGSSSGTMATLTISGAQVEDEADYYCYSTDRSGNHRVFGGGTRLTVL.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 2.9 D 10 , o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en W O 2011 /066389 , U S 8.779.108 y U S 2014 /0356353. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 2.9 D 10 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o para su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una reg ión v a r ia b le de ca d e n a p esa d a q ue c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
SEQ ID NO: 12 of WO 2011/066389 (SEQ ID NO: 184):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGGEQYY
VDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDWNYGYYDMDVWGQGTTVTVSS;
y /o u na re g ió n va r ia b le de la ca d e n a lige ra que c o m p re n d e la se c u e n c ia de a m in o á c id o s de: S E Q ID N O : 17 de W O 2011 /066389 (S E Q ID N O :185):
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWFQQKPGQAPRLLIFGTSSRATGIP
DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSIFTFGPGTKVDIK.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 2.14H 9 , o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en W O 2011 /066389 , U S 8.779.108 y U S 2014 /0356353. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 2.14 H 9 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o p ara su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s c o m p re n d e una re g ió n v a r ia b le de ca d e n a p e sa d a q ue c o m p re n d e la se c u e n c ia de a m in o á c id o s de: S E Q ID N O : 22 de W O 201 1 /066389 (S E Q ID N O :186)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYY
VDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVS
S;
y /o una reg ión v a ria b le de ca d e n a lige ra que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de: S E Q ID NO : 27 de W O 201 1 /066389 (S E Q ID N O :187):
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIP
DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTEVEIK.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 2.20A 8 , o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en W O 201 1 /066389 , U S 8.779.108 y U S 2014 /0356353. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 2.20 A 8 o un fra g m e n to de un ió n a a n tíg e n o de l m ism o p ara su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s c o m p re n d e una reg ión v a r ia b le de ca d e n a p esa d a q ue c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
SEQ ID NO: 32 of WO 201 1/066389 (SEQ ID NO:188):
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIRGSGGSTYY
ADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDLHYDSSGYLDYWGQGTLVTVS
S;
y /o u na re g ió n va r ia b le de la ca d e n a lige ra que co m p re n d e la se c u e n c ia de a m in o á c id o s de: S E Q ID NO : 37 de W O 201 1 /066389 (S E Q ID N O :189):
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIRSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAISRLQSGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPLTFGGGTKVEIK.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to c o m p re n d e el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 3.15G 8, o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lga en W O 201 1 /066389 , U S 8.779.108 y U S 2014 /0356353. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el 3.15 G 8 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o para su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una reg ión v a r ia b le de ca d e n a p esa d a q ue c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
SEQ ID NO: 42 oí WO 201 1/066389 (SEQ ID NO:190):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGGEKYY
VDSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARVQLYSDYFDYWGQGTLVTVSS;
y /o u na re g ió n va r ia b le de la ca d e n a lige ra que co m p re n d e la se c u e n c ia de a m in o á c id o s de: S E Q ID NO : 47 de W O 201 1 /066389 (S E Q ID N O :191):
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKSGKAPKLLIYAASGLQSGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDLATYYCQQSHSLPPTFGQGTKVEIK.
0167] En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o anti-P D -L1 3.18 G 1 , o fra g m e n to s de l m ism o , co m o se d ivu lga en W O 2011 /066389 , U S 8 ,779 ,108 y U S 2014 /0356353. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , el 3.18G 1 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o p ara su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una reg ión v a r ia b le de ca d e n a p esa d a q ue c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
SEQ ID NO: 52 oí WO 201 1/066389 (SEQ ID NO:192):
EVQLLESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFNSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGFTFS
ADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDSAVYSCAKVLVGFNNGCWDYWGQGTLVTVS
S;
y /o u na re g ió n va r ia b le de la ca d e n a lig e ra q u e co m p re n d e la se c u e n c ia de a m in o á c id o s de: S E Q ID N O : 57 de W O 201 1 /066389 (S E Q ID N O :193):
SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPER
FSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSNDHWFGGGTKLTVL.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e el a n tic u e rp o an ti-P D -L1 2.7 A 40 P T , o fra g m e n to s del m ism o , com o se d ivu lg a en W O 201 1 /066389 , U S 8.779.108 y U S 2014 /0356353 y U S 2014 /0356353. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , el 2.7 A 40 P T o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p re se n te d o cu m e n to c o m p re n d e una re g ió n v a ria b le de ca d e n a p esa d a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
S E Q ID NO : 62 de W O 201 1 /066389 (S E Q ID N O :194):
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSTYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSGDYIYY
ADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLVTSMVAFDYWGQGTLVTVSS;
y /o u na re g ió n va r ia b le de la ca d e n a lige ra que co m p re n d e la se c u e n c ia de a m in o á c id o s de: S E Q ID NO : 67 de W O 201 1 /066389 (S E Q ID N O :195):
SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPQKYVFWYQQKSGQAPVLVIYEDSKRPSGIPER
FSGSSSGTMATL ISGAQVEDEADYYCYSTDRSGNHRVFGGGTKLTVL.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e el a n ticu e rp o a n ti-P D -L1 2.14 H 90 P T , o fra g m e n to s de l m ism o , co m o se d ivu lg a en W O 201 1 /066389 , U S 8.779.108 y U S 2014 /0356353. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , el 2.14 H 90 P T o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s a qu í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una reg ión v a ria b le de ca d e n a p esa d a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
SEQ ID NO: 72 oí WO 201 1/066389 (SEQ ID NO:196):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYY
VDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVS
S;
y /o una reg ión v a ria b le de la ca d e n a lige ra q ue c o m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de: S E Q ID NO : 77 de W O 2011 /066389 (S E Q ID N O :197):
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIP
DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIK.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e cu a lq u ie ra de los a n tic u e rp o s a n ti-P D -L I d ivu lg a d o s en W O 2016 /061142. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el a n ticu e rp o o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p rese n te d o cu m e n to co m p re n d e una ca d e n a p esad a que co m p re n d e una s e cu e n c ia de a m in o á c id o s se le cc io n a d a de S E Q ID Nos: 18, 30, 38, 46, 50, 54, 62, 70 y 78 de W O 2016 /061142 :
SEQ ID NO: 18 of W02016/061142 (SEQ ID NO: 198):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMYWVRQATGQGLEWMGRIDPNSGSTKY
NEKFKNRFTISRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCARDYRKGLYAMDYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 30 of W02016/061142 (SEQ ID NO:199):
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTSYWMYWVRQATGQGLEWMGRIDPNSGSTKY
NEKFKNRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDYRKGLYAMDYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 38 of W02016/061142 (SEQ ID N0:200):
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTSYWMYWVRQAPGQGLEWMGRIDPNSGSTKY
NEKFKNRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDYRKGLYAMDYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 46 of W02016/061142 (SEQ ID NO:201):
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTSYWMYWIRQSPSRGLEWLGRIDPNSGSTKY
NEKFKNRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARDYRKGLYAMDYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 50 of W02016/061142 (SEQ ID NQ:202):
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTSYWMYWIRQPPGKGLEWIGRIDPNSGSTKY
NEKFKNRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDYRKGLYAMDYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 54 of WO2016/061142 (SEQ ID NO:203):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMYWIRQSPSRGLEWLGRIDPNSGSTKY
NEKFKNRFTISRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCARDYRKGLYAMDYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 62 of W02016/061142 (SEQ ID NO:204):
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTSYWMYWVRQARGQRLEWIGRIDPNSGSTKY
NEKFKNRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARDYRKGLYAMDYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 70 of W02016/061142 (SEQ ID NO:205):
QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGYTFTSYWMYWVRQAPGKGLEWVSRIDPNSGSTKY
NEKFKNRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDYRKGLYAMDYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 78 of WQ2016/061142 (SEQ ID NO:206):
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTSYWMYWVRQARGQRLEWIGRIDPNSGSTKY
NEKFKNRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDYRKGLYAMDYWGQGTTVTVSS;
y /o una ca d e n a lige ra que co m p re n d e una s e cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a e n tre los n ú m e ro s S E Q ID: 22, 26 , 34, 42, 58, 66, 74, 82 y 86 del W O 2016 /061142 :
SEQ ID NO: 22 of WO2016/061142 (SEQ ID NO:207):
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCKASQDVGTAVAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRHTGIPA
RFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNSYPLTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 26 of WO2016/061142 (SEQ ID NO:208):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRHTGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 34 of W02016/061142 (SEQ ID NO:209):
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCKASQDVGTAVAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRHTGVPD
RFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQYNSYPLTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 42 of WO2016/061142 (SEQ ID NO:210):
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCKASQDVGTAVAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRHTGVPS
RFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYNSYPLTFGQGTKVEIK.
SEQ ID NO: 58 of WO2016/061142 (SEQ ID NO:211):
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKASQDVGTAVAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRHTGIPP
RFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQQYNSYPLTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 66 of WO2016/061142 (SEQ ID NO:212):
DWMTQSPLSLPVTLGQPASISCKASQDVGTAVAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRHTGVPS
RFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPLTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 74 of WO2016/061142 (SEQ ID NO:213):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRHTGVPS
RFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYNSYPLTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 82 of WO2016/061142 (SEQ ID NO:214):
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRHTGVPS
RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQQYNSYPLTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 86 of WO2016/061142 (SEQ ID NO:215):
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRHTGVPS
RFSGSGSGTEFTLTI SSLQPDDFATYYCQQYNSYPLTFGQGTKVEIK.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e cu a lq u ie ra de los a n tic u e rp o s a n ti-P D -L I d ivu lg a d o s en W O 2016 /022630. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el a n ticu e rp o o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p rese n te d o cu m e n to co m p re n d e una ca d e n a p esad a que co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a de S E Q ID Nos: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 y 46 de W O 2016 /022630 :
SEQ ID NO: 2 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:216):
EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFIFRSYGMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGSTYYP
DSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYDCARGYDSGFAYWGQGTLVTVSE;
SEQ ID NO: 6 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:217):
EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFRSYGMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGTTYYP
DSVKGRFIISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCAKGYDSGFAYWGQGTLVIVSA;
SEQ ID NO: 10 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:218):
QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTTYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWRGVTTDYN
AAFMSRLTITKDNSKSQVFFKMNSLQANDTAIYYCARLGFYAMDYWGQGTSVTVSS;
SEQ ID NO: 14 ofWO2016/022630 (SEQ ID NO:219):
QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGVTDYN
AAFISRLSISKDNSKSQVFFKMNSLQANDTAIYYCARLGFYAMDYWGQGTSVTVSS;
SEQ ID NO: 18 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:220):
EVKLFESGGGLVQPGGSLKLSCVASGFDFSTYWMHWVRQAPGQGLEWIGQINPDSTTINY
APSLKDRFIISRDNAKNTLFLQMSKVRSEDTALYYCAKPGDYGYDFDCWGQGTTLTVSS;
SEQ ID NO: 22 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:221):
EVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCSVTGDSITSGYWNWIRKFPGNKLEYMGYISYSGSTYYN
PSLKSRISITRDTSKNQYYLQLNSVTTEDTATYYCARSLLWFSTGFAYWGQGTLVTVSA;
SEQ ID NO: 26 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:222):
QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGITDYN
AAFKSRLSI SKDNSKSQVFFKMNSLQANDTAIYFCARLGFYAMDYWGQGTSVTVSS;
SEQ ID NO: 30 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:223):
EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFRSYGMSWARQIPEKRLEWVASISSGGTTYYL
GSVQGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARGYDAGFAYWGQGTLVSVSE;
SEQ ID NO: 34 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:224):
EVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCSVTGDSITSGYWTWIRKFPGNKLEYMGYISYTGSTYYNPSLKSRI SISRDTSKSQYYLQLNSVTTEDTATYYCARQRDWLGFAYWGQGTLVTVSA;
SEQ ID NO: 38 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:225):
EEKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFSFSSYGMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGSIYYP
DSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARGYDAGFAFWGQGTLVTASA;
SEQ ID NO: 42 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:226):
QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTVSGFSLSTYGVHWIRQPPGKALEWLGVIWRGVTTDYN
AAFMSRLTITKDNSKNQWLTMNNMDPVDTATYYCARLGFYAMDYWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 46 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:227):
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFIFRSYGMSWVRQAPGKGLEWVASISSGGSTYYP
DSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYDCARGYDSGFAYWGQGTLVTVSS; y /o una ca d e n a lige ra q ue co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s se le cc io n a d a e n tre los n ú m e ro s S E Q ID: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44 y 48 de W O 2016 /022630 :
SEQ ID NO: 4 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:228):
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASQSVSTSSSSFMHWYQQKPGQPPKLLIKYASNLES
GVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSWEIPYTFGGGTKLEIKR;
SEQ ID NO: 8 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:229):
divltqsppslavslgqratiscrasqsvstssssymhwyqqkpgqppkllikyasnl.es
GVPARFSGSGSGTDFTLN1HPVEEEDTATYYCQHSWEIPYTFGGGTKLEIK;
SEQ ID NO: 12 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:230):
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYAANRYTGVPD
RFTGSGYGTDFTFTISIVQAEDLAVYFCQQDYTSPYTFGGGTKLEIK;
SEQ ID NO: 16 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:231):
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVGWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYSGVPD
RFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYTSPYTFGGGTKLEIK;
SEQ ID NO: 20 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:232):
DVLMTQTPLYLPVSLGDQASISCRSSQIIVHSNANTYLEWFLQKPGQSPKLLIYKVSNRF
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK;
SEQ ID NO: 24 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:233):
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWNQQKPGSSPKVWIYNTSNLASGVP
ARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWRSYPPTLGAGTKLELK;
SEQ ID NO: 28 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:234):
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSANSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAR
FSGSGSGTSYSLTISSMGAEDAATYYCQQWSSNPWTFGGGTKLEIK;
SEQ ID NO: 32 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:235):
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASQSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYASNLES
GVPARFSGSGSGTDFTLN1HPVEEEDTATYYCQNSWEIPYTFGGGTKLEIK;
SEQ ID NO: 36 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:236):
DIVMTQTPSSLAVSLGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNSLAWYQQKPGQSPKLLIYWASNR
ESGVPDRFTGSSSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYSYPLTFGAGTKLELK;
SEQ ID NO: 40 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:237):
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASQSVSTSSYSYVHWYQQKPGQPPKLLIKYASNLES
GVPARFSGSGSGTDFTLN1HPVEEEDTATYYCQHSWEIPYTFGGGTKLEIK;
SEQ ID NO: 44 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:238):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGKAPKLLIYYAANRYTGVPD
RFSGSGYGTDFTFTISSLQPEDIATYFCQQDYTSPYTFGQGTKLEIK;
SEQ ID NO: 48 of WO2016/022630 (SEQ ID NO:239):
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASQSVSTSSSSFMHWYQQKPGQPPKLLIKYASNLES
GVPARFSGSGSGTDFTLTIPVEANDTANYYCQHSWEIPYTFGQGTKLEIK.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to c o m p re n d e uno de los a n ticu e rp o s a n ti-P D -L I d ivu lg a d o s en W O 2015 /112900. En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , el a n ticu e rp o o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p rese n te d o cu m e n to co m p re n d e una ca d e n a p esad a que co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a de S E Q ID Nos: 38, 50, 82 y 86 de W O 2015 /112900 :
SEQ ID NO: 38 of WO2015/112900 (SEQ ID NO:240):
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQATGQGLEWMGNIYPGTGGSNF
DEKFKNRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 50 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:241):
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWIRQSPSRGLEWLGNIYPGTGGSNF
DEKFKNRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 82 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:242):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYWMHWIRQSPSRGLEWLGNIYPGTGGSNF
DEKFKNRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSS;
SEQ ID NO: 86 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:243):
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGNIYPGTGGSNF
DEKFKNRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSS;
y /o una cad e n a lige ra que co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a e n tre los n ú m e ro s S E Q ID: 42, 46 , 54, 58, 62, 66, 70, 74 y 78 del W O 2015 /112900 :
SEQ ID NO: 42 of WO2015/112900 (SEQ ID NO:244):
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTR
ESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 46 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:245):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTR
ESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 54 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:246):
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTR
ESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 58 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:247):
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTR
ESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 62 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:248):
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTR
ESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 66 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:249):
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTR
ESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 70 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:250):
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTR
ESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 74 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:251):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTR
ESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK;
SEQ ID NO: 78 of WO 2015/112900 (SEQ ID NO:252):
DWMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTR
ESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to c o m p re n d e uno de los a n ticu e rp o s a n ti-P D -L I d e sc rito s en W O 2010 /077634 y US 8 ,217 ,149. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , el a n ticu e rp o a n ti-P D -L 1 o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o p ara su uso en los m é to d o s a q u í p ro p o rc io n a d o s co m p re n d e una re g ió n de ca d e n a p e sa d a que co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de:
SEQ ID NO: 20 of WO 2010/077634 (SEQ ID NO:253):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYY
ADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA;
y /o u na re g ió n va r ia b le de la ca d e n a lige ra que co m p re n d e la se c u e n c ia de a m in o á c id o s de: S E Q ID NO : 21 de W O 2010 /077634 (S E Q ID N O :254):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to c o m p re n d e cu a lq u ie ra de los a n ticu e rp o s an ti-P D -L1 que se p ue de n o b te n e r del h ib rid om a a cce s ib le ba jo los n ú m e ro s de d e p ó s ito C N C M 1-4122 , C N C M I-4080 y C N C M 1­ 4081, com o se d ivu lg a en US 20120039906.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e un V H H d ir ig id o con tra PD-L1 com o se d ivu lga , p o r e je m p lo , en US 8 ,907 ,065 y W O 2008 /071447. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , los V H H s con tra PD-L1 co m p re n d e n S E Q ID N O S : 394 -399 de US 8.907.065 :
SEQ ID NO: 394 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:255):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLDYYAIGWFRQAPGKEREWASS
ISSSDGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVFLQMNSLKPEDTAVYSCAASQ
APITIATMMKPFYDYWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 395 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:256):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLDYYAKCWFRQAPGKEREWVSC
ISSSDGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYFCAARH
GGPLTVEYFFDYWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 396 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:257):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFDYYAIGWFRQAPGKAREGVSC
ISGGDNSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCATGG
WKYCSGYDPEYIYWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 397 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:258):
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSTFSQYDVGWYRQAPGKQRELVA
FSSSGGRTIYPDSVKGRFTFSRDNTKNTVYLQMTSLKPEDTAVYYCKIDW
YLNSYWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 398 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:259):
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGVDASNSAMGWYRQAPGKQREWVAR
ITGGGLIAYTDSVKGRFTISRDNAKSTVYLQMNSLEPEDTAVYYCNTINS
RDGWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 399 of US 8,907,065 (SEQ ID NQ:260):
EVQLVESGGGLVQAGGSLTISCAASGITFSDSIVSWYRRARGKQREWVAG
ISNGGTTKYAESVLGRFTISRDNAKNNVYLQMNGLNPEDTAVYLCKVRQY
WGQGTQVTVSS.
En una re a liza c ió n e je m p la r, el p rese n te a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico co m p re n d e una fra cc ió n d irig id a co n tra P D L-1, co m o S E Q ID N O :261:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLDYYAKCWFRQAPGKEREWVSCISSSDGSTYYADSVKGRF
TIS RDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYFCAARHGGPLTVEYFFDYWGQGTQVTVSS
En va ria s re a liza c io n e s , el p re se n te a g e n te de un ión a C le c9 A m u ltie sp e c ífico tie n e una o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to d ir ig id a s co n tra P D -L2. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 A tie n e una o m ás fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to que se unen s e le c tiva m e n te a un p o lip é p tid o P D -L2. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e uno o m ás a n ticu e rp o s , d e riva d o s o fo rm a to s de a n ticu e rp o s , p é p tid o s o p o lip é p tid o s , o p ro te ín a s de fu s ió n que se unen se le c tiva m e n te a un p o lip é p tid o P D -L2.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to co m p re n d e un V H H d ir ig id o con tra P D -L2 com o se d ivu lga , p o r e je m p lo , en US 8 ,907 ,065 y W O 2008 /071447. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , los V H H s co n tra PD-1 co m p re n d e n S e Q ID N os: 449 -455 de US 8.907.065 :
SEQ ID NO: 449 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:262):
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASESTVLINAMGWYRQAPGKQRELVAS
ISSGGSTNYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCNADVY
PQDYGLGYVEGKVYYGHDYWGTGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 450 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:263):
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSTFSNYVSNYAMGWGRQAPGTQ
RELVASISNGDTTNYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYY
CFEHQVAGLTWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 451 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:264):
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCVASGXALKIXVMGWYRQAPGKQRELV
AAITSGGRTNYSDSVKGRFTISGDNAXNTVYLQMNSLKSEDTAVYYCRE
WNSGYPPVDYWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 452 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:265):
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSSGTMGWFRRAPGKEREFV
ASIPWSGGRTYYADSVKDRFTISRDNAQNTVFLQMNSLKPEDTAVYYCAF
KERSTGWDFASWGQGIQVTVSS;
SEQ ID NO: 453 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:266):
EVQLVESGGGLVQTGGSLRLSCAASGFTLDYYGIGWFRQAPGKEREGVS
FISGSDGSTYYAESVKGRFTISRDKAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAAD
PWGPPSIATMTSYEYKHWGQGTQVTVSS;
SEQ ID NO: 454 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:267):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFT FSTYTMIWLRRAPGKGFEWV
STIDKDGNTNYVDSVKGRFAVSRDNTKNTLYLQMNSLKPEDTAMYYCTK
HGSSARGQGTRVTVSS;
SEQ ID NO: 455 of US 8,907,065 (SEQ ID NO:268):
EVQLVESGGGLVEPGGSLRLSCVASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLE
WVSTINSGGGITYRGSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYY
CENGGSSYRRGQGTQVTVSS.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to c o m p re n d e uno de los a n ticu e rp o s a n ti-P D -L 2 d ivu lg a d o s en U S 2011 /0271358 y W O 2010 /036959. En re a liza c io n e s ilu s tra tiva s , el a n ticu e rp o o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de l m ism o para su uso en los m é to d o s p ro p o rc io n a d o s en el p re se n te d o cu m e n to co m p re n d e una cad e n a p esad a que c o m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a de S E Q ID N os: 43 -47 de U S 2011 /0271358 :
SEQ ID NO: 43 of US2011/0271358 (SEQ ID NO:269):
QVQLVQSGAELKKPGASVKMSCKASGYTFTGYTMHWVKQAPGQGLEWIGYINPRSGYTEY
NQKFKDRTTLTADKSTSTAYMELSSLRSEDSAVYYCARPWFAYWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 44 of US2011/0271358 (SEQ ID NO:270):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKMSCKASGYTFTGYTMHWVKQAPGQGLEWIGYINPRSGYTEY
NQKFKDRTTLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPWFAYWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 45 of US201 1/0271358 (SEQ ID NO:271):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKMSCKASGYTFTGYTMHWVRQAPGQGLEWIGYINPRSGYTEY
NQKFKDRTTLTADKSTSTAYMELSSERSEDTAVYYCARPWFAYWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 46 of US2011/0271358 (SEQ ID NO:272):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYTMHWVRQAPGQGLEWIGYINPRSGYTEY
NQKFKDRTTLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPWFAYWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO: 47 of US2011/0271358 (SEQ ID NO:273):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYTMHWVRQAPGQGLEWIGYINPRSGYTEY
NQKFKDRTTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPWFAYWGQGTLVTVSS;
y /o una ca d e n a lige ra que co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s se le cc io n a d a en tre los n ú m e ro s S E Q ID: 48 ­ 51 de US201 1 /0271358 : S E Q ID NO: 48 de U S 2011 /0271358 (S E Q ID N O :274):
DIVMTQSPASLTVTPGEKVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTR
ESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPLTFGQGTKLEIK;
SEQ ID NO: 49 of US201 1/0271358 (SEQ ID NO:275):
DIVMTQSPASLSVTPGEKVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTR
ESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPLTFGQGTKLEIK;
SEQ ID NO: 50 of US2011/0271358 (SEQ ID NO:276):
DIVMTQSPAFLSVTPGEKVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTR
ESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPLTFGQGTKLEIK;
SEQ ID NO: 51 of US2011/0271358 (SEQ ID NQ:277):
DIVMTQSPAFLSVTPGEKVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTR
ESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPLTFGQGTKLEIK.
En d ive rsa s re a liza c io n e s , las fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to de la inve nc ión pue de n c o m p re n d e r una secu e n c ia que se d ir ige a PD -1, PD-L1 y /o P D -L2, o c u a lq u ie r o tra d iana d e sc rita en el p re se n te d o cu m e n to , que es al m e no s a lre d e d o r de l 60% , al m e n o s a lre d e d o r de l 61% , al m e n o s a lre d e d o r de l 62% , al m e n o s a lre d e d o r de l 63% , al m e no s a lre d e d o r de l 64% , al m e n o s a lre d e d o r de l 65% , al m e n o s a lre d e d o r de l 66% , al m e n o s a lre d e d o r de l 67% , a l m e no s a lre d e d o r de l 68% , al m e n o s a lre d e d o r de l 69% , al m e n o s a lre d e d o r de l 70% , al m e n o s a lre d e d o r de l 71% , a l m e no s a lre d e d o r de l 72% , a l m e no s a lre d e d o r del 73% , a l m e n o s a lre d e d o r de l 74% , al m e n o s a lre d e d o r de l 75% , al m e no s a lre d e d o r de l 76% , al m e n o s a lre d e d o r de l 77% , al m e no s a lre d e d o r de l 78% , al m e no s a lre d e d o r de l 79% , al m e no s a lre d e d o r de l 80% , al m e n o s a lre d e d o r de l 81% , al m e n o s a lre d e d o r de l 82% , al m e no s a lre d e d o r de l 83% , al m e no s a lre d e d o r de l 84% , al m e n o s a lre d e d o r de l 85% , al m e no s a lre d e d o r de l 86% , al m e no s a lre d e d o r de l 87% , al m e no s a lre d e d o r de l 88% , al m e n o s a lre d e d o r de l 89% , al m e n o s a lre d e d o r de l 90% , al m e no s a lre d e d o r de l 91% , al m e no s a lre d e d o r de l 92% , al m e n o s a lre d e d o r de l 93% , al m e n o s a lre d e d o r de l 94% , al m e n o s a lre d e d o r de l 95% , a l m e no s a lre d e d o r del 96% , al m e n o s a lre d e d o r del 97% , al m e no s a lre d e d o r del 98% , al m e n o s a lre d e d o r del 99% , o el 100% id é n tica s a cu a lq u ie ra de las s e cu e n c ia s a q u í d iv u lg a d a s (p o r e je m p lo a lre d e d o r del 60% , o a lre d e d o r de l 61% , o a lre d e d o r de l 62% , o a lre d e d o r de l 63% , o a lre d e d o r del 64% , o a lre d e d o r del 65% , o a lre d e d o r de l 66%, o a lre d e d o r de l 67% , o a lre d e d o r del 68% , o a lre d e d o r de l 69% , o a lre d e d o r de l 70% , o a lre d e d o r de l 71% , o a lre d e d o r de l 72% , o a lre d e d o r de l 73% , o a lre d e d o r de l 74% , o a lre d e d o r de l 75% , o a lre d e d o r de l 76% , o a lre d e d o r de l 77% , o a lre d e d o r de l 78% , o a lre d e d o r de l 79% , o a lre d e d o r del 80% , o a lre d e d o r del 81% , o a lre d e d o r de l 82% , o a lre d e d o r de l 83% , o a lre d e d o r de l 84% , o a lre d e d o r de l 85% , o a lre d e d o r de l 86%, o a lre d e d o r de l 87% , o a lre d e d o r de l 88%, o a lre d e d o r de l 89% , o a lre d e d o r de l 90% , o a lre d e d o r de l 91% , o a lre d e d o r de l 92% , o a lre d e d o r de l 93% , o a lre d e d o r de l 94% , o a lre d e d o r de l 95% , o a lre d e d o r de l 96% , o a lre d e d o r de l 97% , o a lre d e d o r de l 98% , el 99% o a lre d e d o r del 100% de la ide n tid a d de se cu e n c ia con cu a lq u ie ra de las se cu e n c ia s d e sc rita s en el p rese n te d o cu m e n to ).
En v a r ia s re a liza c io n e s , las fra cc io n e s de d ire cc io n a m ie n to de la in ve n c ió n pue de n c o m p re n d e r c u a lq u ie r c o m b in a c ió n de ca d e n a p e sa d a , ca d e n a lige ra , reg ión va r ia b le de ca d e n a p e sa d a , re g ió n va r ia b le de ca d e n a lige ra , reg ión d e te rm in a n te de la co m p le m e n ta rie d a d (C D R ) y s e cu e n c ia s de reg ión m a rco que se d irigen a PD -1, PD-L1 y /o P D -L2 co m o se d ivu lg a en el p re se n te d o cu m e n to .
O tro s a n ticu e rp o s , d e riva d o s o fo rm a to s de a n ticu e rp o s , p é p tid o s o p o lip é p tid o s , o p ro te ín a s de fus ió n que se unen o se d ir ige n se le c tiva m e n te a PD -1, PD-L1 y /o p D -L2 se d ivu lg a n en W O 2011 /066389 , US 2008 /0025980 , US 2013 /0034559 , US 8 ,779 ,108 , US 2014 /0356353 , US 8.609.089 , US 2010 /028330 , US 2012 /0114649 , W O 2010 /027827 , W O 2011./066342 , US 8 ,907 ,065 , W O 2016 /062722 , W O 2009 /101611, W O 2010 /027827 , W O 2011 /066342 , W O 2007 /005874 , W O 2001 /014556 , U S 2011 /0271358 , W O 2010 /036959 , W O 2010 /077634 , US 8.217.149 , US 2012 /0039906 , W O 2012 /145493 , US 2011 /0318373 , U .S . P a te n t n° 8.779.108 , US 20140044738 , W O 2009 /089149 , W O 2007 /00587 , W O 2016061142 , W O 2016 ,02263 , W O 2010 /077634 y W O 2015 /112900.
En v a r ia s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A m u ltie s p e c ífic o de la inve nc ión tie n e una o m á s fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to d ir ig id a s con tra X C R 1, p o r e je m p lo , en las cé lu las d en d ríticas . P o r e je m p lo , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to , en a lg u n a s re a liza c io n e s , co m p re n d e to d o o p arte de X C L1 o un a g e n te an ti-X C R 1 q ue no m o du la fu n c io n a lm e n te (p o r e je m p lo , un X C R 1 no n eu tra lizan te ).
En d ive rsa s re a liza c io n e s , los a g e n te s de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico s tie n e n fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to que tie n e n d o m in io s de re co n o c im ie n to q ue se unen e sp e c ífica m e n te a un o b je tivo (p o r e je m p lo , a n tíg e n o , re ce p to r) que es p arte de una e s tru c tu ra no ce lu la r. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a n tíg e n o o re c e p to r no es un co m p o n e n te in te g ra l de una cé lu la o e s tru c tu ra c e lu la r in tac ta . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a n tíg e n o o re c e p to r es un a n tíg e n o o re ce p to r e x tra ce lu la r. En a lg u na s re a liza c io n e s , la d iana es un m a rc a d o r no p ro te ico , no ce lu la r, inc lu ye nd o , sin lim itac ión , á c id o s n uc le icos , in c lu ye n d o A D N o A R N , com o, p o r e je m p lo , A D N libe ra do de cé lu la s tu m o ra le s n ecró tica s o d e p ó s ito s e x tra ce lu la re s co m o el co leste ro l.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , la d ia n a (p o r e je m p lo , a n tígeno , re ce p to r) de in te ré s fo rm a parte de l co m p o n e n te no c e lu la r de l e s tro m a o de la m a triz e x tra c e lu la r (E C M ) o de los m a rca d o re s a so c ia d o s a e lla . T a l y com o se u tiliza aqu í, el e s tro m a se re fie re al m arco co n e c tivo y de a poyo de un te jid o u ó rga n o . El e s tro m a p uede in c lu ir una co m p ila c ió n de cé lu las com o fib ro b la s to s /m io fib ro b la s to s , cé lu las g lia les , ep ite lia les , g rasa s, inm un ita ria s , v a s c u la re s , de m ú scu lo liso e in m u n ita ria s , ju n to con la m a triz e x tra c e lu la r (M E C ) y las m o lé cu la s e x tra ce lu la re s . En v a r ia s re a liza c io n e s , la d ia n a (p o r e je m p lo , a n tíg e n o , re ce p to r) de in te ré s fo rm a p a rte de l c o m p o n e n te no c e lu la r de l e s tro m a , com o la m a triz e x tra c e lu la r y las m o lé cu la s e x tra ce lu la re s . Ta l y com o se u tiliza aquí, la M E C se re fie re a los c o m p o n e n te s no c e lu la re s p rese n te s en to d o s los te jid o s y ó rga n os . La M E C e stá co m p u e s ta p o r una gran co le cc ió n de c o m p o n e n te s b io q u ím ica m e n te d is tin to s que inc lu ye n , sin lim itac ió n , p ro te ína s, g lico p ro te ín a s , p ro te o g lica n o s y p o lisa cá rid o s . E s tos c o m p o n e n te s de la M E C sue len s e r p ro d u c id o s p o r las cé lu la s a d ya ce n te s y s e c re ta d o s en la M E C a tra v é s de la e xo c ito s is . U na ve z se c re ta d o s , los c o m p o n e n te s de la M E C su e le n a g re g a rs e para fo rm a r una com p le ja red de m a c ro m o lé cu la s . En va ria s re a liza c io n e s , la p ro te ína q u im é rica de la inve nc ión co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue re co n o ce una d ia n a (p o r e je m p lo , un a n tíg e n o o un re c e p to r o una m o lé cu la no p ro te ica ) s itu a d a en c u a lq u ie r co m p o n e n te de la M EC . Los co m p o n e n te s ilu s tra tivo s de la M E C inc lu ye n , sin lim itac ió n , los p ro te o g lica n o s , los p o lisa cá r id o s no p ro te o g lica n o s , las fib ra s y o tra s p ro te ín a s de la M E C o no p ro te ína s de la M EC , p or e je m p lo , p o lisa cá r id o s y /o líp idos , o m o lé cu la s a so c ia d a s a la M E C ( p o r e je m p lo , p ro te ín a s o no p ro te ína s, p o r e je m p lo , p o lisa cá rid o s , á c id o s n u c le ico s y /o líp idos).
En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce una d ia n a (p o r e je m p lo , an tíge no , re ce p to r) en los p ro te o g lica n o s de la M EC . Los p ro te o g lica n o s son p ro te ína s g lico s ila d a s . La un idad b ás ica de l p ro te o g lica n o inc lu ye una p ro te ína cen tra l con una o m ás ca d e n a s de g lic o sa m in o g lica n o s (G A G ) u n id as co va le n te m e n te . Los p ro te o g lica n o s tie n e n una ca rga neta n eg a tiva q ue a trae a los iones de sod io (N a ) con ca rga pos itiva , lo q ue a tra e a las m o lé cu la s de a gua p or ó sm o s is , m a n te n ie n d o la M E C y las cé lu las re s ide n te s h id ra tad as . Los p ro te o g lica n o s ta m b ié n pueden a yu d a r a a tra p a r y a lm a c e n a r fa c to re s de c re c im ie n to d en tro de la M EC . Los p ro te o g lica n o s ilu s tra tivo s a los que pueden d ir ig irse las p ro te ína s q u im é rica s de la inve nc ión inc luyen , en tre o tros, el heparán su lfa to , el con d ro itín s u lfa to y el q u e ra tá n su lfa to . En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re co n o ce una d ia n a ( p o r e je m p lo , a n tíg e n o , re ce p to r) en p o lisa cá r id o s no p ro te o g lica n o s , com o el á c id o h ia lu rón ico .
En a lg u na s re a liza c io ne s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce una d ia n a (p o r e je m p lo , an tíge no , re ce p to r) en las fib ra s E C M . Las fib ra s E C M inc lu ye n fib ra s de c o lá g e n o y fib ra s de e la s tin a . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce uno o m ás e p íto p o s en co lá g e n o s o fib ra s de co lá g e n o . Los co lá g e n o s son las p ro te ín a s m ás a b u n d a n te s de la M E C . Los co lá g e n o s e stán p re se n te s en la M E C en fo rm a de p ro te ína s fib r ila re s y p ro p o rc io n a n so p o rte e s tru c tu ra l a las cé lu las re s ide n te s . En una o m ás re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce y se une a va rio s tip o s de co lá g e n o s p rese n te s en la M E C , inc lu ye nd o , sin lim itac ión , c o lá g e n o s fib r ila re s (tip os I, II, III, V, X I), c o lá g e n o s fa c ia le s (tip os IX, X II, X IV ), c o lá g e n o s de ca d e n a corta (tip os V III, X ), c o lá g e n o s de la m e m b ra n a b asa l (tip o IV), y /o c o lá g e n o de tip o V I, V II, o X III. Las fib ra s de e la s tin a p ro p o rc io n a n e la s tic id a d a los te jid o s , p e rm itié n d o le s e s tira rse cu a n d o lo n ece s ita n y v o lv e r a su e s ta do o rig in a l. En a lg u na s re a liza c io n e s , la m o lé cu la d ia n a re co n o ce uno o m ás e p íto p o s en las e la s tin a s o fib ra s de e las tina .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce una o m ás p ro te ín a s de la M EC , inc lu ye nd o , pero sin lim ita rse a, una te n a sc in a , una fib ro n e c tin a , una fib rina , una la m in in a o un n id ó g e n o /e n ta c tin a .
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce y se une a la te n a sc in a . La fa m ilia de g lico p ro te ín a s te n a s c in a (T N ) inc lu ye al m e no s cua tro m ie m bros , la te n a sc in a -C , la te n a sc in a -R , la te n a s c in a -X y la te n a s c in a W . Las e s tru c tu ra s p rim a ria s de las p ro te ín a s te n a s c in a inc lu ye n v a r io s m o tivo s co m u n e s o rd e n a d o s en la m ism a se cu e n c ia co n se cu tiva : re p e tic io n e s a m in o te rm in a le s de la hep ta da , re p e tic io n e s s im ila re s al fa c to r de c re c im ie n to e p id é rm ico (E G F ), re p e tic io n e s del d om in io de fib ro n e c tin a tip o III y un d o m in io g lo b u la r s im ila r al ca rb o x ilo -te rm in a l de l f ib r in ó g e n o . C ad a m ie m b ro de la p ro te ín a se a so c ia con v a r ia c io n e s típ ic a s en el n ú m e ro y la n a tu ra le za de las re p e tic io n e s de tip o E G F y f ib ro n e c tin a t ip o III. T a m b ié n e x is te n v a r ia n te s de iso fo rm a s , en p a rtic u la r con re sp e c to a la te n a sc in a -C . Se con oce n m ás de 27 v a r ia n te s de e m p a lm e y/o iso fo rm a s de la te n a sc in a -C . En una re a liza c ió n p a rticu la r, la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re co n o ce y se une a la te n a sc in a -C A 1. D el m ism o m odo, la te n a s c in a -R ta m b ié n p rese n ta d ive rsa s va r ia n te s de e m p a lm e e iso te rm a s. La te n a s c in a -R sue le e x is tir en fo rm a de d ím e ro s o trím e ro s . La te n a s c in a -X es el m ie m b ro m ás g ra n d e de la fa m ilia de la te n a s c in a y se sa b e que e x is te en fo rm a de trím e ro s . La te n a s c in a -W e x is te en fo rm a de trím e ro . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re co n o ce uno o m ás e p íto p o s en una p ro te ín a te n a sc in a . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n d ir ig id a re co n o ce las fo rm a s m o n o m é rica y /o d im é rica y /o tr im é ric a y /o h e xa m é rica de una p ro te ín a ten asc ina .
En una re a liza c ió n , las fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to re con oce n y se unen a la fib ro n e c tin a . Las fib ro n e c tin a s son g lico p ro te ín a s que con e c ta n las cé lu las con las fib ra s de c o lá g e n o en la M E C , p e rm itie n d o que las cé lu la s se m u evan a tra vé s de la M E C . A l u n irse a las in te grina s , las fib ro n e c tin a s se d e sp lie g a n para fo rm a r d ím e ro s fu n c io n a le s . En a lg u na s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce las fo rm a s m o n o m é rica s y/o d im é rica s de la fib ro n e c tin a . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce uno o m ás e p íto p o s de la fib ro n e c tin a . En re a liza c io n e s ilus tra tiva s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce el d o m in io e x tra c e lu la r A (E D A ) de la fib ro n e c tin a o el d o m in io e x tra c e lu la r B (E D B ) de la fib ro n e c tin a . Los n ive les e le va d o s de E D A se a so c ia n a d ive rsa s e n fe rm e d a d e s y tra s to rn o s , com o la pso rias is , la a rtritis re um ato id e , la d ia b e te s y el cáncer. En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re con oce la fib ro n e c tin a que co n tie n e la iso fo rm a E D A y p ue de u tiliza rse para d ir ig ir la p ro te ína q u im é rica a las cé lu las en fe rm as , inc lu ida s las cé lu la s ca n ce ro sa s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce la fib ro n e c tin a que con tie n e la iso fo rm a ED B. En v a r ia s re a liza c io n e s , d ich a s fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to p ue de n u tiliza rse para d ir ig ir la p ro te ína q u im é rica a las cé lu la s tu m o ra le s , inc lu ida la n e o va scu la tu ra del tum o r.
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce y se une a la fib r ina . La fib r in a es o tra su s ta n c ia p ro te ica que se e n cu e n tra a m e n u d o en la red de la m a triz de la M EC . La f ib r in a se fo rm a p o r la a cc ión de la p ro te a sa tro m b in a sob re el f ib r in ó g e n o , que hace que la fib r in a se po lim e rice . En a lg u na s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re co n o ce uno o m ás e p íto p o s de la fib rina . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce las fo rm a s m o n o m é rica s y p o lim e riza d a s de la fib rina .
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re co n o ce y se une a la lam in ina . La lam in ina es un co m p o n e n te p rin c ip a l de la lám ina basal, que es una red de p ro te ína s que s irve de base a las cé lu la s y los ó rga n os . Las la m in in a s son p ro te ína s h e te ro tr im é rica s que con tien en una ca d e n a a, una ca d e n a p y una cad en a y . En a lg u na s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re co n o ce uno o m ás e p íto p o s de la lam in ina . En a lg u na s re a liza c io n e s , la fra cc ió n d ir ig id a re co n o ce las fo rm a s m o n o m é rica s , d im é rica s y tr im é rica s de la lam in ina .
En una re a liza c ió n , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce y se une a un n id ó g e n o o e n tac tina . Los n id ó g e n o s /e n ta c tin a s son una fa m ilia de g lico p ro te ín a s su lfa ta d a s m u y co n se rva d a s . C o n s titu ye n el p rinc ip a l c o m p o n e n te e s tru c tu ra l de las m e m b ra n a s b a sa le s y tie n e n la fu n c ió n de u n ir las re de s de la m in in a y c o lá g e n o IV en las m e m b ra n a s b asa les . Los m ie m b ro s de e s ta fa m ilia son el n id ó ge no -1 y el n id ó ge no -2. En v a r ia s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce un e p íto p o en el n idógeno -1 y /o el n id ó ge no -2.
En va ria s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e un d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o que re co n o ce un e p íto p o p rese n te en cu a lq u ie ra de las d ia n a s (p o r e je m p lo , p ro te ína s E C M ) d e sc rita s en el p rese n te d o cu m e n to . En una re a liza c ió n , el d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o re co n o ce uno o m ás e p íto p o s line a le s p re se n te s en la p ro te ína . T a l y com o se u tiliza aquí, un e p íto p o linea l se re fie re a c u a lq u ie r se cu e n c ia con tin u a de a m in o á c id o s p re se n te en la p ro te ína . En o tra re a liza c ió n , el d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o re co n o ce uno o m á s e p íto p o s c o n fo rm a c io n a le s p rese n te s en la p ro te ína . Ta l com o se u tiliza aqu í, un e p íto p o de co n fo rm a c ió n se re fie re a una o m á s se cc io n e s de a m in o á c id o s (que p ueden s e r d is c o n tin u a s ) que fo rm a n una sup e rfic ie tr id im e n s io n a l con c a ra c te rís tica s y /o fo rm a s y /o e s tru c tu ra s te rc ia ria s c a p a ce s de s e r re co n o c id a s p or un d o m in io de re co n o c im ie n to de an tíge no s.
En v a r ia s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to p ue de u n irse a la lo n g itu d co m p le ta y /o fo rm a s m a d u ra s y /o iso fo rm a s y /o v a r ia n te s de e m p a lm e y /o fra g m e n to s y /o c u a lq u ie r o tro a ná log o , v a r ia n te o m u ta n te n a tu ra l o s in té tico de cu a lq u ie ra de las d ia n a s (p o r e je m p lo , p ro te ín a s E C M ) d e sc rita s en el p rese n te d ocum e n to . En va r ia s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to p uede un irse a c u a lq u ie r fo rm a de las p ro te ína s d esc rita s en el p re se n te d ocum e n to , inc lu ida s las fo rm a s m o no m é rica s , d im érica s , tr im é rica s , te tra m é rica s , h e te ro d im é rica s , m u ltim é rica s y a so c ia d as . En va r ia s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to p uede u n irse a c u a lq u ie r fo rm a m o d ifica d a p o s tra s la c io n a lm e n te de las p ro te ín a s d e s c rita s en el p rese n te d o cu m e n to , com o las fo rm a s g lico s ila d a s y /o fo s fo rila d a s .
En va ria s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e un d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o que re co n o ce m o lécu la s e x tra ce lu la re s com o el A D N . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e un d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o que re co n o ce el A D N . En una re a liza c ió n , el A D N se d e sp re n d e hac ia el e sp ac io e x tra c e lu la r d esde las cé lu las tu m o ra le s n ec ró tica s o a p o p tó tica s u o tras cé lu las en fe rm as .
En va ria s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e un d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o que re co n o ce una o m ás e s tru c tu ra s no ce lu la re s a so c ia d a s con las p la cas a te ro sc le ró tica s . S e co n o ce n dos tip o s de p la cas a te ro sc le ró tica s . La p laca f ib ro lip íd ica (fib ro g ra sa ) se ca ra c te r iza p o r una a cu m u la c ió n de c é lu la s ca rg a d a s de líp id os ba jo la ín tim a de las a rte rias . D eb a jo del e nd o te lio hay una cap a fib ro sa que cub re el núc leo a te ro m a to so de la p laca. El n úc leo inc lu ye cé lu la s ca rg a d a s de líp id os (m a c ró fa g o s y cé lu la s m u scu la re s lisas ) con un e le vad o co n te n id o de co le s te ro l t is u la r y é s te re s de co le s te ro l, fib r ina , p ro te o g lica n o s , co lá g e n o , e la s tin a y res tos ce lu la res . En las p la cas a va n za d a s , el n úc leo cen tra l de la p laca sue le c o n te n e r d e p ó s ito s de co le s te ro l e x tra c e lu la r ( lib e ra d o p o r las cé lu la s m u erta s ), q ue fo rm a n z o n a s de c ris ta le s de co le s te ro l con h e n d id u ra s v a c ía s en fo rm a de agu ja . En la p e rife ria de la p la ca hay cé lu las e sp u m o s a s m ás jó v e n e s y cap ila res . T a m b ié n se loca liza una p laca fib ro sa bajo la ín tim a , d e n tro de la pare d de la a rte ria , lo q ue da lu g a r a un e n g ra sa m ie n to y e xp a n s ió n de la pare d y, a ve ce s , a un e s tre ch a m ie n to loca liza d o de la luz con c ie rta a tro fia de la cap a m u scu la r. La p laca fib ro sa co n tie n e fib ra s de co lá g e n o (e o s in ó fila s ), p re c ip ita d o s de ca lc io (h e m a to x ilin ó filo s ) y cé lu las ca rg a d a s de líp idos. En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re con oce y se une a uno o m ás de los co m p o n e n te s no ce lu la re s de e s ta s p lacas, com o la fib r ina , los p ro te o g lica n o s , el co lá ge no , la e las tina , los re s to s ce lu la re s y el ca lc io u o tros d e p ó s ito s o p re c ip ita d o s m in e ra le s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el re s idu o c e lu la r es un á c ido n uc le ico , p o r e je m p lo , A D N o A R N , lib e ra d o de las cé lu la s m uertas .
En va ria s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to co m p re n d e un d o m in io de re co n o c im ie n to de a n tíg e n o que re co n o ce una o m ás e s tru c tu ra s no c e lu la re s que se e n cu e n tra n en las p la cas ce re b ra le s a so c ia d a s con las e n fe rm e d a d e s n e u ro d e g e n e ra tiva s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce y se une a una o m ás e s tru c tu ra s no ce lu la re s lo ca liza d a s en las p la cas a m ilo id e s que se e n cu e n tra n en el ce re b ro de los p a c ie n te s con la e n fe rm e d a d de A lzh e im e r. P o r e je m p lo , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to p ue de re c o n o c e r y u n irse al p é p tid o b e ta a m ilo id e , q ue es un co m p o n e n te p rin c ip a l de las p la cas a m ilo id e s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to re con oce y se une a una o m ás e s tru c tu ra s no ce lu la re s loca liza da s en las p lacas ce re b ra le s e n c o n tra d a s en p a c ie n te s con la e n fe rm e d a d de H un tin g to n . En v a r ia s re a liza c io n e s , la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to re co n o ce y se une a una o m ás e s tru c tu ra s no ce lu la re s que se e n cu e n tra n en las p la cas a so c ia d a s a o tras e n fe rm e d a d e s n e u ro d e g e n e ra tiv a s o m u scu lo e sq u e lé tica s , com o la d e m e n c ia con cu e rp o s de L ew y y la m io s itis con cu e rp o s de inc lus ión .
Enlazadores y grupos funcionales
En v a r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión de C le c 9 A puede in c lu ir uno o m ás g rup o s fu n c io n a le s , re s id u o s o fra cc io n e s . En va ria s re a liza c io n e s , los uno o m ás g rup o s fu n c io n a le s , re s idu os o e le m e n to s están un idos o fu s io n a d o s g e n é tica m e n te a cu a lq u ie ra de los a g e n te s de se ñ a liza c ió n o e le m e n to s de fo ca liza c ió n d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to . En a lg u n a s re a liza c io n e s , d ich o s g rup o s fu n c io n a le s , re s id u o s o fra cc io n e s con fie re n una o m ás p ro p ie d a d e s o fu n c io n a lid a d e s d e se a d a s al a ge n te de un ión a C le c9 A de la inve nc ión . Los e je m p lo s de ta le s g ru p o s fu n c io n a le s y de las té c n ica s para in tro d u c irlo s en el a g e n te de u n ión de C le c 9 A son c o n o c id o s en la té cn ica , p o r e je m p lo , v é a s e R e m in g to n 's P h a rm a ce u tica l S c ien ce s , 16a e d ic ión , M a ck P ub lish in g C o., E aston , Pa. (1980).
En v a r ia s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c 9 A puede s e r co n ju g a d o y /o fu s io n a d o con o tro a ge n te para e x te n d e r la v id a m e d ia o m e jo ra r las p ro p ie d a d e s fa rm a c o d in á m ic a s y fa rm a co c in é tica s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C D 8 p ue de e s ta r fu s io n a d o o co n ju g a d o con uno o m á s de PEG , X T E N (p o r e je m p lo , com o rP E G ), á c id o p o lis ia lico (P O L Y X E N ), a lb ú m in a (p o r e je m p lo , a lb ú m in a de sue ro h u m a n o o H A S ), p ro te ín a s im ila r a la e la s tin a (E LP ), PAS, HAP, G LK , C TP , tra n s fe rr in a y s im ila res . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C D 8 p uede e s ta r fu s io n a d o o co n ju g a d o con un a n ticu e rp o o un fra g m e n to de a n ticue rp o , com o un fra g m e n to Fc. P o r e je m p lo , la p ro te ína q u im é rica p uede fu s io n a rse con el e x tre m o N o el e x tre m o C del d o m in io Fc de la in m u n o g lo b u lin a (Ig ) G hum a na . En d ive rsa s re a liza c io n e s , ca d a una de las p ro te ína s q u im é rica s in d iv id u a le s se fu s io n a con uno o m ás de los a g e n te s d e sc rito s en B io D ru g s (2015 ) 29 :215 -239.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , los g ru p o s fu n c io n a le s , los re s id u o s o las fra cc io n e s co m p re n d e n un p o lím e ro a de cu ad o fa rm a c o ló g ica m e n te a ce p ta b le , com o el p o li(e tile n g lico l) (P E G ) o sus d e riva d o s (co m o el m e to x ip o li(e tile n g lico l) o m P E G ). En a lg u n a s re a liza c io n e s , la un ión de la fra cc ió n de P E G a u m e n ta la v id a m e d ia y /o reduce la in m u n o g e n ic id a d de la p ro te ína de un ión a C lec9A . En g en e ra l, p ue de u tiliza rse c u a lq u ie r fo rm a a d e cu a d a de p eg ila c ió n , co m o la p e g ila c ió n u tiliza d a en la té c n ica para a n ticu e rp o s y fra g m e n to s de a n ticu e rp o s ( in c lu ye n d o , pero sin lim ita rse a, a n ticu e rp o s de d o m in io ún ico com o los V H H ); vé a se , p o r e jem p lo , C ha p m a n , Nat. B io te ch n o l. 54, 531 -545 (2002 ); p o r V e ro n e se y H arris , A dv. E n tre g a de m e d ica m e n to s R ev. 54, 453 -456 (2003 ), p o r H arris y C hess, Nat. Rev. D rug. D iscov., 2, (2003 ) y en W O 04060965. T a m b ié n están d isp o n ib le s c o m e rc ia lm e n te va rio s re ac tivos para la p e g ila c ió n de p ro te ína s, p o r e je m p lo , de N e k ta r T h e ra p e u tic s , E s ta d os U n idos. En a lg u n a s re a liza c io n e s , se u tiliza la p e g ila c ió n d ir ig id a al s itio , en p a rtic u la r a tra v é s de un re s id u o de c is te ín a (vé ase , p o r e je m p lo , Y ang e t al., P ro te in E n g in e e rin g , 16, 10, 761 -770 (2003 )). P o r e je m p lo , para e ste p rop ó s ito , el P E G p ue de u n irse a un re s idu o de c is te ín a q ue se e n cu e n tra n a tu ra lm e n te en el a gen te de un ión de C le c9 A de la inve nc ión . En a lg u na s re a liza c io ne s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A de la inve nc ión se m o d ifica para in tro d u c ir a d e cu a d a m e n te uno o m ás re s id u o s de c is te ín a para la un ión de PEG , o una se cu e n c ia de a m in o á c id o s que co m p re n d e uno o m ás re s id u o s de c is te ín a p ara la un ión de P E G p uede fu s io n a rse al a m ino y /o c a rb o x i- te rm in a l de l a ge n te de un ión a C lec9A , u tiliza n d o té c n ica s co n o c id a s en la técn ica .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , los g rup o s fu n c io n a le s , los re s id u o s o las fra cc io n e s co m p re n d e n una g lico s ila c ió n ligada a N o a O. En a lg u n a s re a liza c io n e s , la g lico s ila c ió n ligada al N o al O se in trod uce com o p arte de una m o d ifica c ió n co -tra n s la c io n a l y /o p o s tra n s la c io n a l.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , los g rup o s fu n c io n a le s , los re s id u o s o las fra cc io n e s co m p re n d e n una o m ás e tiq u e ta s d e te c ta b le s u o tros g rup o s o fra cc io n e s g e n e ra d o re s de seña les . Las e tiq u e ta s a d e cu a d a s y las té cn ica s para fija r las , u tiliza rla s y d e te c ta r la s son co n o c id a s en la té c n ica e inc lu ye n , pero no se lim itan a, e tiq u e ta s flu o re sce n te s (co m o la flu o re sce ín a , el iso tioc ia na to , la ro da m in a , la fico e ritr in a , la f ico c ia n in a , la a lo fico c ia n in a , el o -fta la ld e h íd o y flu o re sca m in a y m e ta les flu o re sce n te s com o el Eu u o tros m e ta les de la serie de los lan tán ido s), e tiq u e ta s fo s fo re sce n te s , e tiq u e ta s q u im io lu m in isce n te s o e tiq u e ta s b io lu m in isce n te s (co m o el lum ina l, el iso lu m ino l, el é s te r te ro m á tico de acrid in io , el im id azo l, las sa le s de acrid in io , el é s te r de o xa la to , el d io xe ta n o o la G F P y sus a ná lo g o s ), ra d io isó to p o s , m e ta le s q u e la to s de m e ta le s o c a tio n e s m e tá lico s u o tro s m e ta le s o ca tio n e s m e tá lico s e sp e c ia lm e n te a d e cu a d o s p ara su uso en el d ia g n ó s tico y la o b te n c ió n de im á g e n e s in v ivo , in v itro o in situ , a s í com o c ro m ó fo ro s y e n z im a s (co m o la m a la to d e sh id ro g e n a sa , la n uc le a sa e s ta filo có c ica , la d e lta -V -e s te ro id e iso m e ra sa , la a lco ho l d e sh id ro g e n a s a de le va d u ra la a lfa -g lice ro fo s fa to d e sh id ro g e n a sa , la tr io sa fo s fa to isom e ra sa , la b io tin a v id in a p e ro x ida sa , la p e ro x id a sa de rá bano p icante , la fo s fa ta sa a lca lina , la a sp a ra g in a sa , la g lu cosa o x id asa , la be tag a la c to s id a sa , la rib o n u c le a sa , la u reasa , la ca ta lasa , la g lu co sa -V I-fo s fa to d e sh id ro g e n a sa , la g lu co a m ila sa y la a ce tilco lin e s te ra sa ). O tras e tiq u e ta s a d e cu a d a s son los e le m e n to s q ue p ue de n d e te c ta rse m e d ia n te e sp e c tro sco p ia de R M N o E SR . D ich os V H H s y p o lip é p tid o s m a rca d o s de la in ve n c ió n p ue de n , p o r e je m p lo , u tiliza rse p ara e n sa yo s in v itro , in v ivo o in s itu ( in c lu id o s los in m u n o e n sa yo s co n o c id o s p or s í m ism os , com o E LIS A , R IA, E IA y o tros "e n sa y o s en sá n d w ich ", etc.), a s í co m o p ara fin e s de d ia g n ó s tic o e im a ge n in v ivo , d e p e n d ie n d o de la e le cc ió n de la e tiq u e ta esp ec ífica .
En a lg u na s re a liza c io n e s , los g rup o s fu n c io n a le s , los re s idu os o las fra cc io n e s co m p re n d e n una e tiq u e ta que está u n ida o fu s io n a d a g e n é tica m e n te al a g e n te de un ión a C lec9A . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c 9 A p uede in c lu ir una so la e tiq u e ta o m ú ltip le s e tiq ue tas . La e tiq ue ta , p o r e je m p lo , es un pép tido , un a zú c a r o una m o lé cu la de A D N que no inh ibe ni im p ide la unión del a ge n te de un ión a C le c9 A o a c u a lq u ie r o tro a n tíg e n o de in te ré s , co m o los a n tíg e n o s tu m o ra le s . En v a r ia s re a liza c io n e s , la e tiq u e ta tie n e a l m e n o s una lo n g itu d de e n tre tre s y c in co a m in o á c id o s , de e n tre c in co y o ch o a m in o á c id o s , de e n tre o ch o y d oce a m in o á c id o s , de e n tre d oce y q u in ce a m in o á c id o s , o de e n tre q u in ce y v e in te a m in o á c id o s . Las e tiq u e ta s ilu s tra tiva s se d e sc rib e n , p o r e je m p lo , en la U .S. P a te n t P ub lica tion No U S 2013 /0058962. En a lg u na s re a liza c io n e s , la e tiq u e ta es una e tiq u e ta de a fin ida d com o la g lu ta tió n -S -tra n s fe ra s a (G S T ) y la e tiq u e ta de h is tid in a (H is). En una re a liza c ió n , el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e una e tiq u e ta H is. En a lg u n a s re a liza c io n e s , los g rup o s fu n c io n a le s , los re s id u o s o las fra cc io n e s co m p re n d e n un g rup o q ue la n te , p o r e je m p lo , para q u e la r uno de los m e ta le s o ca tio n e s m e tá licos . Los g rupos q u e la n te s a d e cu a d o s , p o r e je m p lo , inc lu ye n , s in lim itac ió n , el á c id o d ie til-e n e tr ia m in o p e n ta a c é tic o (D T P A ) o el á c ido e tile n d ia m in o te tra a c é tic o (E D T A ).
En a lg u n a s re a liza c io n e s , los g ru p o s fu n c io n a le s , los re s idu os o las fra cc io n e s co m p re n d e n un g ru p o fu n c io n a l que es una parte de un p a r de un ión esp ec ífico , com o el p a r de unión b io tin a -(s tre p t)a v id in a . D icho g rup o fu n c io n a l p uede u tiliza rse para u n ir el a ge n te de un ión de C le c9 A de la inve nc ión a o tra p ro te ína , p o lip é p tid o o co m p u e s to q u ím ico que esté un ido a la o tra m itad de l p a r de un ión, es dec ir, m e d ia n te la fo rm a c ió n de l p a r de un ión. P o r e je m p lo , un a g e n te de un ión de C le c9 A de la inve nc ión p uede e s ta r co n ju g a d o con b io tina , y un ido a o tra p ro te ína , p o lip ép tid o , co m p u e s to o p o rta d o r co n ju g a d o con a v id ina o e s tre p ta v id in a . P o r e je m p lo , d ich o a g e n te de un ión de C le c 9 A co n ju g a d o p ue de u tiliza rse co m o re po rte ro , p o r e je m p lo , en un s is te m a de d ia g n ó s tico en el q ue un a gen te p ro d u c to r de se ñ a le s d e te c ta b le s se co n ju g a con a v id in a o e s tre p ta v id in a . D ich os pare s de un ión pueden , p o r e je m p lo , u tiliza rse ta m b ié n para u n ir el a ge n te de un ión de C le c 9 A a un portado r, inc lu ye nd o p o rta d o re s a d e cu a d o s para fine s fa rm a cé u tico s . Un e je m p lo no lim ita tivo son las fo rm u la c io n e s lip o so m a le s d e sc rita s p o r C ao y S uresh , J o u rn a l o f D rug T a rg e tin g , 8, 4, 257 (2000 ). D ich os pares de un ión ta m b ié n pueden u tiliza rse para u n ir un a ge n te te ra p é u tica m e n te a c tivo al a g e n te de un ión a C le c 9 A de la inve nc ión .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el p re se n te a g e n te de u n ión a C le c 9 A c o m p re n d e o p c io n a lm e n te uno o m ás e n la za d o re s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 A inc lu ye un e n la za d o r que co n e c ta cad a reg ión de un ión y /o las fra cc io n e s de d ire cc io n a m ie n to . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de un ión a C le c 9 A in c lu ye un e n la z a d o r que co n e c ta cada a ge n te de se ñ a liza c ió n y fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to (o, si hay m ás de una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to , un a g e n te de se ñ a liza c ió n a una de las fra cc io n e s de d ire cc io n a m ie n to ). En a lg u n a s re a liza c io n e s , el e n la za d o r p ue de s e r u tiliza d o p ara e n la za r v a r io s g ru p o s fu n c io n a le s , re s idu os , o m o tivo s com o los d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to al a g e n te de un ión de C lec9A . En a lg u na s re a liza c io n e s , el e n la za d o r es un so lo a m in o á c id o o una p lu ra lid a d de a m in o á c id o s q ue no a fe c ta o re du ce la e s ta b ilid a d , la o rie n ta c ió n , la un ión, la n e u tra liza c ió n y /o las c a ra c te rís tica s de e lim in a c ió n de las re g io n e s de un ión y de la p ro te ína de un ión. En v a r ia s re a liza c io n e s , el e n la za d o r se s e le cc io n a e n tre un pép tido , una p ro te ína , un a zú c a r o un á c id o nuc le ico .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el p re se n te a g e n te de u n ión a C le c 9 A co m p re n d e un e n la za d o r que co n e c ta la fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to y el a ge n te de se ñ a liza c ió n . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la p rese n te p ro te ína q u im é rica co m p re n d e un e n la za d o r d en tro del a ge n te de se ñ a liza c ió n (p o r e je m p lo , en el caso del T N F de ca d e n a s im p le , que puede c o m p re n d e r d os e n la za d o re s p ara p ro d u c ir un trím e ro ).
La inve n c ió n co n te m p la el uso de una va rie d a d de se cu e n c ia s de e n la ce . En d ive rsa s re a liza c io n e s , el e n la za d o r p ue de d e riva rse de p ro te ína s m u ltid o m in io de o rigen natu ra l o son e n la za d o re s e m p írico s com o se d escribe , p o r e je m p lo , en C h ich ili e t al., (2013 ), P ro te in Sci. 22 (2 ):153 -167 , C he n e t al., (2013 ), A d v D ru g D e liv R ev. 65 (10 ): 1357 ­ 1369. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el e n la za d o r p ue de d ise ñ a rse u tiliza n d o b ases de d a to s de d ise ñ o de e n la za d o re s y p ro g ra m a s in fo rm á tico s co m o los d e sc rito s en C hen e t al., (2013 ), A d v D rug D e liv R ev. 65 (10 ):1357 -1369 y C ra s to et al., (2000 ), P ro te in Eng. 13 (5 ):309 -312. En v a r ia s re a liza c io n e s , el e n la za d o r p uede s e r fu n c io n a l. P o r e je m p lo , sin lim ita c ió n , el e n la za d o r p ue de fu n c io n a r p ara m e jo ra r el p le g a m ie n to y /o la e s ta b ilid a d , m e jo ra r la e xp re s ió n , m e jo ra r la fa rm a co c in é tica , y /o m e jo ra r la b io a c tiv ida d del p rese n te a g e n te de un ión a C lec9A . En a lg u na s re a liza c io n e s , el e n la za d o r es un p o lip ép tid o . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el e n la za d o r tie n e una long itud in fe rio r a uno s 100 a m in o á c id o s . P o r e je m p lo , el e n la za d o r p uede te n e r una long itud in fe rio r a unos 100, unos 95, unos 90, unos 85, uno s 80, uno s 75, uno s 70, u nos 65, u no s 60, u nos 55, u nos 50, u nos 45, uno s 40, uno s 35, uno s 30, u nos 25, unos 20, unos 19, unos 18, unos 17, unos 16, unos 15, unos 14, unos 13, unos 12, unos 11, unos 10, unos 9, unos 8, uno s 7, unos 6, unos 5, unos 4, unos 3 o unos 2 a m in o á c id o s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el e n la za d o r es un p o lip ép tid o . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el e n la za d o r tie n e una lon g itu d s u p e r io r a unos 100 a m in o á c id o s . P o r e jem p lo , el e n la za d o r p ue de te n e r una lo n g itu d s u p e r io r a unos 100, u nos 95, unos 90, unos 85, uno s 80, unos 75, u nos 70, uno s 65, uno s 60, uno s 55, u nos 50, u nos 45, u nos 40, u nos 35, uno s 30, uno s 25, uno s 20, uno s 19, u nos 18, unos 17, u nos 16, u nos 15, u nos 14, uno s 13, uno s 12, uno s 11, u nos 10, u no s 9, u nos 8, u nos 7, uno s 6, uno s 5, uno s 4, uno s 3 o uno s 2 a m in o á c id o s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el e n la za d o r es flex ib le . En o tra re a liza c ió n , el e n la za d o r es ríg ido .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , la lon g itu d de l e n la za d o r p e rm ite la un ión e fic ie n te de una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to y el a g e n te de se ñ a liz a c ió n a su s re ce p to re s . P o r e je m p lo , en a lg u n a s re a liza c io n e s , la lo n g itu d de l e n la z a d o r p e rm ite la un ión e fic ie n te de una de las fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to y el a g e n te de se ñ a liza c ió n a los re ce p to re s de la m ism a cé lu la , a s í com o la un ión e fic ie n te de la o tra fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to a o tra cé lu la . En el p rese n te d o cu m e n to se p ro p o rc io n a n pare s de ce ld a s ilus tra tivo s .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , la long itud de l e n la z a d o r es al m e n o s igua l a la d is ta n c ia m ín im a e n tre los s itio s de unión de una de las fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to y el a ge n te de señ a liza c ió n a los re ce p to re s de la m ism a cé lu la . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la long itud del e n la za d o r es al m e no s dos, o tre s , o cua tro , o c inco, o d iez, o ve in te , o 25, o 50, o c ien ve ce s , o m ás la d is ta n c ia m ín im a e n tre los s itio s de u n ión de una de las fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to y el a g e n te de se ñ a liza c ió n a los re ce p to re s de la m ism a cé lu la .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , un e n la za d o r co n e c ta las dos fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to e n tre s í y este e n la za d o r tie n e una long itud corta y un e n la za d o r co n e c ta una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to y un a ge n te de se ñ a liza c ió n este e n la za d o r es m á s largo que el e n la za d o r que co n e c ta las dos fra cc io n e s de d ire cc io n a m ie n to . P o r e je m p lo , la d ife re n c ia de lon g itu d de a m in o á c id o s e n tre el e n la za d o r que co n e c ta las dos fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to y el e n la za d o r que co n e c ta una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to y un a g e n te de se ñ a liza c ió n p uede s e r de a lre d e d o r de 100, a lre d e d o r de 95, a lre d e d o r de 90, a lre d e d o r de 85, a lre d e d o r de 80, a lre d e d o r de 75, a lre d e d o r de 70, a lre d e d o r de 65, a lre d e d o r de 60, a lre d e d o r de 55, a lre d e d o r de 50, a lre d e d o r de 45, a lre d e d o r de 40, a lre d e d o r de 35, a lre d e d o r de 30, a lre d e d o r de 25, a lre d e d o r de 20, a lre d e d o r de 19, a lre d e d o r de 18, a lre d e d o r de 17, a lre d e d o r de 16, a lre d e d o r de 15, a lre d e d o r de 14, a lre d e d o r de 13, a lre d e d o r de 12, a lre d e d o r de 11, a lre d e d o r de 10, a lre d e d o r de 9, a lre d e d o r de 8, a lre d e d o r de 7, a lre d e d o r de 6, a lre d e d o r de 5, a lre d e d o r de 4, a lre d e d o r de 3, o a lre d e d o r de 2 a m in o á c id o s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el e n la za d o r es flex ib le . En o tra re a liza c ió n , el e n la za d o r es ríg ido .
En va r ia s re a liza c io n e s , el e n la za d o r se com p o n e su s ta n c ia lm e n te de re s id u o s de g lic in a y se rina (p o r e jem p lo , a lre d e d o r de l 30% , o a lre d e d o r de l 40% , o a lre d e d o r del 50% , o a lre d e d o r de l 60% , o a lre d e d o r de l 70% , o a lre d e d o r de l 80% , o a lre d e d o r de l 90% , o a lre d e d o r del 95% , o a lre d e d o r de l 97 % de g lic in a s y se rina s). P o r e je m p lo , en a lg u n a s re a liza c io n e s , el e n la za d o r es (G ly4 S e r)n , d on de n es de a p ro x im a d a m e n te 1 a a p ro x im a d a m e n te 8, p o r e je m p lo , 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8. En una re a liza c ió n , la se cu e n c ia e n la za d o ra es G G S G G S G G G G S G G G S (S E Q ID N O :278). O tros e n la za d o re s ilu s tra tivo s inc luyen , pero no se lim itan a, e n la za d o re s que tie n e n la se cu e n c ia LE, G G G G S (S E Q ID N O :279), (G G G G S )" (n = 1 -4 ) (S E Q ID N O :280), (G ly )8 (S E Q ID N O :281 ), (G ly )6 (S E Q ID N O :282), (E A A A K )" (n = 1 -3 ) (S E Q ID N O :283 ):, A (E A A A K ) "A (n = 2 -5 ) (S E Q ID N O :284), A E A A A K E A A A K A (S E Q ID N O :285), A (E A A A K )4 A L E A (E A A A K )4 A (S E Q ID N O :286), P A P A P (S E Q ID N O :287), K E S G S V S S E Q L A Q F R S L D (S E Q ID N O :288), E G K S S G S G S E S K S T (S E Q ID N O :289 ), G S A G S A A G S G E F (S E Q ID N O :290), y (X P )n , d on de X d e s ig n a c u a lq u ie r a m in o á c id o , p o r e je m p lo , A la , Lys o G lu . En va r ia s re a liza c io n e s , el e n la za d o r es G G S.
En a lg u na s re a liza c io ne s , el e n la za d o r es una reg ión b isagra de un a n ticu e rp o (p o r e jem p lo , de IgG, IgA, IgD e IgE, in c lu id a s las s u b c la se s (p o r e je m p lo , IgG 1, IgG 2, IgG 3 e IgG 4, e IgA1 e IgA 2)). En v a r ia s re a liza c io n e s , el e n la za d o r es una reg ión b isa g ra de un a n ticu e rp o (p o r e je m p lo , de IgG, IgA, IgD e IgE, in c lu id a s las su b c la se s (p o r e jem p lo , IgG 1, IgG 2, IgG 3 e IgG 4, e IgA1 e IgA 2)). La re g ión b isa gra , q ue se e n c u e n tra en los a n tic u e rp o s de c la se IgG, IgA, IgD e IgE, a c tú a co m o un e sp a c ia d o r flex ib le , p e rm itie n d o que la porc ió n Fab se m u eva lib re m e n te en el e sp ac io . En co n tra s te con las re g io n e s co n s ta n te s , los d o m in io s b isa g ra son e s tru c tu ra lm e n te d ive rsos , v a r ia n d o ta n to en se cu e n c ia com o en long itud e n tre las c la se s y su b c la se s de in m u n o g lo b u lin a s . P o r e je m p lo , la lon g itu d y fle x ib ilid a d de la re g ión de b isa g ra v a r ía e n tre las su b c la se s de IgG. La re g ión b isa g ra de la IgG1 a b a rca los a m in o á c id o s 216 ­ 231 y, al se r lib re m e n te flex ib le , los fra g m e n to s Fab p ueden g ira r sob re sus e jes de s im e tría y m o ve rse d en tro de una e sfe ra cen tra d a en el p rim e ro de los dos p ue n tes d isu lfu ro e n tre ca d e n a s p esad as . La IgG 2 tie n e una b isa gra m ás corta que la IgG 1, con 12 re s id u o s de a m in o á c id o s y cua tro p ue n tes d isu lfu ro . La reg ión b isa gra de la IgG 2 ca re ce de un re s id u o de g lic in a , es re la tiv a m e n te co rta y c o n tie n e una d ob le h é lice ríg ida de p o lip ro lin a , e s ta b iliza d a p o r p u e n te s d isu lfu ro a d ic io n a le s e n tre c a d e n a s p esad as . E s ta s p ro p ie d a d e s re s tr in g e n la fle x ib ilid a d de la m o lé cu la IgG 2. La IgG 3 se d ife re n c ia de las o tras s u b c la se s p o r su e xc lu s iv a re g ión de b isagra e x te n d id a (a p ro x im a d a m e n te cu a tro ve ce s m ás la rga que la b isa g ra de la IgG 1), que co n tie n e 62 a m in o á c id o s ( in c lu id a s 21 p ro lin as y 11 c is te ín a s), fo rm a n d o una d ob le hé lice de p o lip ro lin a in fle x ib le . En la IgG 3, los fra g m e n to s Fab están re la tiva m e n te a le ja d o s de l fra g m e n to Fc, lo q ue co n fie re a la m o lé cu la una m a yo r fle x ib ilid a d . La b isa g ra a la rg a d a de la IgG 3 ta m b ié n es re sp o n sa b le de su m a yo r peso m o le c u la r en co m p a ra c ió n con las o tras sub c la se s . La reg ión b isagra de la IgG 4 es m ás corta que la de la IgG1 y su fle x ib ilid a d es in te rm e d ia e n tre la de la IgG1 y la de la IgG 2. La fle x ib ilid a d de las re g io n e s b isa g ra d ism in u ye en el o rden IgG 3> IgG 1 > Ig G 4 > Ig G 2.
S eg ú n los e s tu d io s c ris ta lo g rá fico s , la re g ión de b isa g ra de la in m u n o g lo b u lin a p ue de su b d iv id irse fu n c io n a lm e n te en tre s re g iones : la re g ión de b isa g ra sup erio r, la reg ión de l n úc leo y la re g ión de b isa g ra in fe rio r. V é a se S h in e t al., 1992 Im m u n o lo g ica l R ev iew s 130 :87. La reg ión s u p e r io r de la b isa gra inc lu ye a m in o á c id o s d esde el e x tre m o ca rb o x ilo de C m h as ta el p rim e r re s idu o de la b isa g ra que re s tr in g e el m o v im ie n to , g e n e ra lm e n te el p rim e r re s idu o de c is te ín a que fo rm a un e n la ce d isu lfu ro e n tre las dos ca d e n a s p esadas . La lon g itu d de la re g ión s u p e r io r de la b isa g ra se co rre la c io n a con la fle x ib ilid a d se g m e n ta r ia de l a n ticue rp o . La reg ión de b isagra de l n úc leo co n tie n e los p u e n te s d isu lfu ro e n tre ca d e n a s p esad as , y la reg ión de b isa g ra in fe rio r se une al e x tre m o a m ino te rm in a l del d o m in io C H 2 e inc lu ye re s id u o s en C H 2. Id. La re g ión ce n tra l de la b isa g ra de la IgG1 h u m a n a de tip o sa lva je c o n tie n e la se cu e n c ia C ys -P ro -P ro -C ys que, cu a n d o se d im e riza m e d ia n te la fo rm a c ió n de e n la ce s d isu lfu ro , da lu g a r a un o c ta p é p tid o c íc lico que se cree que a ctúa com o p ivo te, co n fir ie n d o a sí f le x ib ilid a d . En d ive rsa s re a liza c io n e s , el p rese n te e n la za d o r co m p re n d e , uno, o dos, o tre s de la re g ión de b isa g ra sup erio r, la reg ión del n úc leo y la reg ión de b isagra in fe rio r de c u a lq u ie r a n ticu e rp o (p o r e je m p lo , de IgG, IgA, IgD e IgE, inc lu ida s las su b c la se s (p o r e je m p lo , IgG 1, IgG 2, IgG 3 e IgG 4, e IgA1 e IgA 2)). La reg ión de b isa g ra ta m b ié n p ue de c o n te n e r uno o m ás s itios de g lico s ila c ió n , que inc luyen v a r io s tip o s de s itio s e s tru c tu ra lm e n te d is tin to s para la fija c ió n de ca rb o h id ra to s . P o r e je m p lo , la IgA1 c o n tie n e c inco s itio s de g lico s ila c ió n d en tro de un se g m e n to de 17 a m in o á c id o s de la re g ión b isa gra , lo q ue co n fie re re s is te n c ia al p o lip é p tid o de la re g ión b isa g ra a las p ro te a sa s in te s tin a le s , lo que se co n s id e ra una p rop ied a d v e n ta jo sa para una in m u n o g lo b u lin a secre to ra . En v a r ia s re a liza c io n e s , el e n la za d o r de la p re se n te inve n c ió n co m p re n d e uno o m ás s itios de g lico s ila c ió n . En v a r ia s re a liza c io n e s , el e n la za d o r es un d o m in io b isa g ra -C H 2 -C H 3 de un a n ticu e rp o h u m a n o IgG4.
Si se d esea , el p re se n te a g e n te de u n ión a C le c 9 A p u e d e u n irse a una re g ión Fc de a n ticu e rp o , q ue co m p re n d e uno o a m bo s d o m in io s C H 2 y C H 3, y o p c io n a lm e n te una reg ión b isagra . P o r e je m p lo , los v e c to re s que cod ifica n los p re se n te s a g e n te s de un ión a C le c9 A u n id os com o una ún ica se cu e n c ia de n u c le ó tid o s a una reg ión Fc pueden u tiliza rse para p re p a ra r d ich o s po lip ép tid os .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el e n la za d o r es un e n la za d o r s in té tico com o el PEG .
En va ria s re a liza c io n e s , el e n la za d o r puede s e r fun c io n a l. P o r e je m p lo , sin lim itac ió n , el e n la za d o r puede fu n c io n a r p ara m e jo ra r el p le g a m ie n to y /o la e s ta b ilid a d , m e jo ra r la e xp re s ió n , m e jo ra r la fa rm a co c in é tica , y /o m e jo ra r la b io a c tiv id a d del p rese n te a gen te de un ión a C lec9A . En o tro e je m p lo , el e n la za d o r puede fu n c io n a r para d ir ig ir el a g e n te de un ión a C le c 9 A a un tip o de cé lu la o lo ca liza c ió n particu la r.
Modificaciones y producción de agentes de unión de Clec9A
El a g e n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to que es un V H H . En v a r ia s re a liza c io n e s , el V H H no e s tá lim ita d o a una fu e n te b io ló g ica e sp e c ífica o a un m é to d o e sp e c ífico de p re p a ra c ió n . P o r e je m p lo , el V H H se puede o b te n e r g e n e ra lm e n te : (1 ) p o r a is la m ie n to del d om in io V H H de un a n ticu e rp o de ca d e n a p esad a de o rige n na tu ra l; (2 ) p o r e xp re s ió n de una se cu e n c ia de n u c le ó tid o s q ue co d ifica un d o m in io V H H de o rige n natu ra l; (3 ) p o r "h u m a n iza c ió n " de un d o m in io V H H de o rigen n a tu ra l o p o r e xp re s ió n de un á c ido n uc le ico que cod ifica d icho d o m in io V H H h u m a n iza d o (4 ) p o r "c a m e liz a c ió n " de un d o m in io V H H n a tu ra l de c u a lq u ie r e sp ec ie an im a l, com o p o r e je m p lo de una e sp e c ie de m a m ífe ro , com o p o r e je m p lo de un s e r hum ano , o p o r e xp re s ió n de un á c ido n uc le ico q ue co d ifica d icho d o m in io V H c a m e liza d o (5 ) m e d ia n te la "c a m e liz a c ió n " de un "a n ticu e rp o de d o m in io " o "D a b" com o se d e sc rib e en la té cn ica , o m e d ia n te la e xp re s ió n de un á c ido n uc le ico que cod ifiq u e d icho d o m in io VH ca m e liza d o ; (6 ) m e d ia n te el uso de té c n ica s s in té tica s o s e m is in té tica s para p re p a ra r p ro te ína s, p o lip é p tid o s u o tras s e cu e n c ia s de a m in o á c id o s co n o c id a s en la té c n ica (7 ) p re p a ra n d o un á c ido n uc le ico q ue co d ifiq u e un VH H m e d ia n te té cn ica s de s ín te s is de á c id os n u c le ico s co n o c id a s en la té cn ica , se g u id o de la e xp re s ió n de l ácido n u c le ico a s í ob ten ido ; y /o (8 ) m e d ia n te cu a lq u ie r co m b in a c ió n de una o m ás de las an te rio res .
En una re a liza c ió n , el a ge n te de un ión a C le c9 A co m p re n d e un V H H q ue co rre sp o n d e a los d o m in io s V H H de los a n ticu e rp o s de ca d e n a p esad a de o rigen n a tu ra l d ir ig id o s con tra C le c9 A hum ano . En a lg u na s re a liza c io n e s , ta le s s e cu e n c ia s de V H H p ueden g e n e ra rse u o b ten e rse , en g en e ra l, in m u n iza n d o a d e cu a d a m e n te a una e sp e c ie de c a m é lid o con una m o lé cu la de C lec9A , (es dec ir, p a ra s u s c ita r una re sp u e s ta in m u n ita ria y /o a n tic u e rp o s de ca d e n a p e sad a d ir ig id o s con tra C lec9A ), o b te n ie n d o una m u es tra b io ló g ica a d e cu a d a del ca m é lid o (com o una m u e s tra de san g re , o c u a lq u ie r m u e s tra de cé lu la s B), y g e n e ra n d o se cu e n c ia s de V H H d ir ig id a s con tra C lec9A , a p a rtir de la m u es tra , u tiliza n d o c u a lq u ie r té c n ica a d e cu a d a con o c id a . En a lg u n a s re a liza c io n e s , los d o m in io s V H H n a tu ra le s con tra C le c 9 A p ueden o b te n e rse a p a rtir de b ib lio te ca s ing e nu as de se cu e n c ia s V H H de cam é lido s , p o r e je m p lo , m e d ia n te el c rib ad o de d icha b ib lio te ca u tiliza n d o C le c9 A o al m enos una parte , fra g m e n to , d e te rm in a n te a n tig é n ico o ep ítop o del m ism o u tiliza n d o una o m ás té cn ica s de c rib ad o co n o c id a s en la técn ica . T a les b ib lio te ca s y té cn ica s se d escribe n , p o r e je m p lo , en W O 9937681, W O 0190190 , W O 03025020 y W O 03035694. En a lg u n a s re a liza c io ne s , p ue de n u tiliza rse b ib lio te ca s s in té tica s o se m is in té tica s m e jo ra d a s d e riva d a s de b ib lio te ca s V H H ing e nu as , com o las b ib lio te ca s V H H o b te n id a s a p a rtir de b ib lio te ca s V H H in g e n u a s m e d ia n te té c n ica s com o la m u ta g é n e s is a le a to ria y /o el b a ra ja d o de C D R , co m o p o r e je m p lo , se d e sc rib e en W O 0043507. En a lg u n a s re a liza c io n e s , o tra té c n ica para o b te n e r se cu e n c ia s de V H H d ir ig id a s con tra un C le c9 A im p lica in m u n iza r a d e cu a d a m e n te a un m a m ífe ro tra n s g é n ico que es cap az de e xp re sa r a n ticu e rp o s de ca d e n a p e sad a (es dec ir, de m a n e ra que se g en e re una re sp u e s ta inm un ita ria y /o a n ticu e rp o s de ca d e n a p esad a d ir ig id os con tra C lec9A ), o b te n e r una m u e s tra b io ló g ica a d e cu a d a del m a m ífe ro tra n s g é n ico (co m o una m u es tra de sangre , o c u a lq u ie r m u es tra de cé lu las B), y luego g e n e ra r se cu e n c ia s de V H H d ir ig id a s con tra C le c9 A a p a rtir de la m u es tra , u tiliza n d o cu a lq u ie r té cn ica a d e cu a d a con oc id a . P o r e je m p lo , para e ste p rop ó s ito , los ra to n e s q ue e xp re sa n a n ticu e rp o s de ca d e n a pesad a y los m é to d o s y té c n ica s a d ic io n a le s d e sc rito s en W O 02085945 y en W O 04049794 p ueden u tilizarse .
En una re a liza c ió n , el a ge n te de un ión a C le c 9 A co m p re n d e un V H H que ha s ido "h u m a n iza d o ", es decir, m e d ia n te la su s titu c ió n de uno o m ás re s id u o s de a m in o á c id o s en la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de la se cu e n c ia de VH H n a tu ra l (y en p a rtic u la r en las se cu e n c ia s m a rco ) p o r uno o m ás de los re s id u o s de a m in o á c id o s q ue se p rod u ce n en la p o s ic ió n o p o s ic io n e s co rre sp o n d ie n te s en un d o m in io V H de un a n tic u e rp o c o n v e n c io n a l de 4 c a d e n a s de un se r h um a no . E sto p uede re a liza rse m e d ia n te té c n ica s de h u m a n iza c ió n co n o c id a s en la té cn ica . En a lg u na s re a liza c io n e s , las p os ib le s su s titu c io n e s h u m a n iza d o ra s o co m b in a c io n e s de su s titu c io n e s h u m a n iza d o ra s pueden d e te rm in a rs e m e d ia n te m é to d o s c o n o c id o s en la té cn ica , p o r e je m p lo , m e d ia n te una co m p a ra c ió n e n tre la se cu e n c ia de un V H H y la se cu e n c ia de un d o m in io VH hum a no natura l. En a lg u n a s re a liza c io n e s , las su s titu c io n e s h u m a n iza d o ra s se e ligen de fo rm a que los V H H s h u m a n iza d o s re su lta n te s s igan co n se rva n d o p ro p ie d a d e s fu n c io n a le s ve n ta jo sa s . En g en era l, com o re su lta d o de la h u m a n iza c ió n , los V H H de la inve n c ió n p ue de n v o lve rse m ás "p a re c id o s a los h um a no s", al t ie m p o que co n se rva n p ro p ie d a d e s fa vo ra b le s , com o una in m u n o g e n ic id a d re du c ida , en co m p a ra c ió n con los c o rre sp o n d ie n te s d o m in io s V H H n a tu ra les . En v a r ia s re a liza c io n e s , los V H H s h u m a n iza d o s de la inve nc ión p ueden o b te n e rse de c u a lq u ie r m a n e ra a d e cu a d a co n o c id a en la té c n ica y, p o r lo tan to , no e stán e s tr ic ta m e n te lim ita d o s a los p o lip é p tid o s q ue se han o b te n id o u tiliza n d o un p o lip é p tid o que co m p re n d e un d o m in io V H H de o rigen n a tu ra l com o m a te ria l de partida.
En una re a liza c ió n , el a ge n te de un ión de C le c9 A co m p re n d e un V H H que ha s ido "ca m e liza d o ", es dec ir, m e d ia n te la su s titu c ió n de u no o m ás re s idu os de a m in o á c id o s en la s e cu e n c ia de a m in o á c id o s de un d o m in io VH n a tu ra l de un a n ticu e rp o de 4 ca d e n a s c o n ve n c io n a l p o r uno o m ás de los re s id u o s de a m in o á c id o s que se p rod u ce n en la p o s ic ió n o p o s ic io n e s c o rre sp o n d ie n te s en un d o m in io V H H de un a n tic u e rp o de ca d e n a p e sa d a de un ca m é lid o . En a lg u n a s re a liza c io n e s , d ich a s su s titu c io n e s "c a m e liz a n te s " se inse rtan en p o s ic io n e s de a m in o á c id o s q ue fo rm a n y/o e stán p rese n te s en la in te rfaz V H -V L , y /o en los llam ad os re s id u o s d is tin tivo s de C a m e lid a e (vé ase , p o r e je m p lo , W O 9404678 ). En a lg u n a s re a liza c io n e s , la se cu e n c ia V H q ue se u tiliza com o m a te ria l de p a rtid a o p un to de p a rtid a para g e n e ra r o d is e ñ a r el V H H c a m e liza d o es una se cu e n c ia VH de un m a m ífe ro , p o r e je m p lo , la se cu e n c ia V H de un s e r hum a no , com o una se cu e n c ia V H 3. En v a r ia s re a liza c io n e s , los V H H ca m e liza d o s p ueden o b ten e rse de cu a lq u ie r m a ne ra a d e cu a d a co n o c id a en la té c n ica (es dec ir, com o se ind ica en los p un tos (1 )-(8 ) a n te r io re s ) y, p o r tan to , no se lim itan e s tr ic ta m e n te a los p o lip é p tid o s q ue se han o b te n id o u tiliza n d o un p o lip é p tid o que co m p re n d e un d o m in io V H de o rigen n a tu ra l co m o m a te ria l de partida .
En v a r ia s re a liza c io n e s , ta n to la "h u m a n iza c ió n " com o la "c a m e liz a c ió n " p ue de n lle va rse a cab o p ro p o rc io n a n d o una se cu e n c ia de n u c le ó tid o s que co d ifica un d om in io V H H o un d om in io V H que se p rod u ce de fo rm a natura l, re sp e c tiva m e n te , y lue g o ca m b ia n d o , de una m a n e ra co n o c id a en la té cn ica , uno o m ás c o d o n e s en la se cu e n c ia de n u c le ó tid o s de ta l m a ne ra que la nueva se cu e n c ia de n u c le ó tid o s co d ifica un V H H "h u m a n iza d o " o "ca m e liza d o ", re sp e c tiva m e n te . E ste á c ido n uc le ico p uede e n to n ce s e xp re sa rse de una m a n e ra co n o c id a en el a rte , para p ro p o rc io n a r el V H H d e se a d o de la inve nc ión . A lte rn a tiva m e n te , b a sá n d o se en la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de un d o m in io V H H o V H natura l, re sp e c tiva m e n te , la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de l V H H h u m a n iza d o o ca m e liza d o d e se a d o de la inve nc ión , re sp e c tiva m e n te , puede d ise ñ a rse y luego s in te tiza rse de novo u tilizan do té cn ica s de s ín te s is de p é p tid o s c o n o c id a s en la té cn ica . A d e m á s , b a sá n d o se en la se cu e n c ia de a m in o á c id o s o en la se cu e n c ia de n u c le ó tid o s de un d o m in io V H H o de un d o m in io V H natu ra l, re sp e c tiva m e n te , p ue de d ise ñ a rse una se cu e n c ia de n u c le ó tid o s q ue co d ifiq u e el V H H h u m a n iza d o o ca m e liza d o d ese a d o , re sp e c tiva m e n te , y lue g o s in te tiza rse de novo u tiliza n d o té c n ica s de s ín te s is de á c id o s n u c le ico s c o n o c id a s en la té cn ica , tra s lo cua l el á c id o n u c le ico a s í o b te n id o p uede e xp re sa rse de una m a ne ra con o c id a en la té cn ica , a fin de p ro p o rc io n a r el V H H d e se a d o de la invenc ión . O tros m é to d o s y té cn ica s a d e cu a d o s para o b te n e r los V H H de la inve nc ión y /o los á c id os n u c le ico s que los cod ifica n , pa rtie nd o de se cu e n c ia s VH o V H H n a tu ra les , son co n o c id o s en la té cn ica , y pueden, p o r e jem p lo , c o m p re n d e r la co m b in a c ió n de una o m ás partes de una o m ás se cu e n c ia s VH n a tu ra le s (co m o una o m ás s e c u e n c ia s FR y /o s e c u e n c ia s C D R ), una o m ás p arte s de una o m á s s e c u e n c ia s V H H de o rig e n n a tu ra l (co m o una o m á s s e cu e n c ia s FR o s e cu e n c ia s C D R ), y /o una o m á s s e cu e n c ia s s in té tica s o se m is in té tica s , de fo rm a a de cu ad a , para p ro p o rc io n a r un V H H de la in ve n c ió n o una se cu e n c ia de n u c le ó tid o s o á c id o n u c le ico q ue lo cod ifiq u e .
En el p re se n te d o cu m e n to se d e sc rib e n m é to d o s para p ro d u c ir los a g e n te s de un ión a C le c 9 A de la inve nc ión . P o r e je m p lo , las se cu e n c ia s de A D N que cod ifica n los a g e n te s de un ión a C le c9 A de la inve nc ión pueden s in te tiza rse q u ím ica m e n te u tiliza n d o m é to d o s co n o c id o s en la té cn ica . Las se cu e n c ia s de A D N s in té tico pueden liga rse a o tras s e cu e n c ia s de n u c le ó tid o s a p ro p ia d a s , inc lu ye nd o , p o r e je m p lo , se cu e n c ia s de con tro l de e xp re s ió n , para p ro d u c ir co n s tru c c io n e s de e xp re s ió n g e n é tica q ue co d ifiq u e n los a g e n te s de un ión a C le c 9 A d esea do s . En co n se cu e n c ia , en v a r ia s re a liza c io n e s , la p re se n te inve n c ió n p ro p o rc io n a á c id o s n u c le ico s a is la d o s q ue co m p re n d e n una se cu e n c ia de n u c le ó tid o s q ue co d ifica el a g e n te de un ión a C le c 9 A de la inve nc ión .
Los á c id os n uc le icos que cod ifica n el a ge n te de unión a C le c9 A de la inve nc ión p ueden in co rp o ra rse ( lig a rse ) en v e c to re s de e xp re s ió n , que pueden in tro d u c irse en cé lu las hué sp ed m e d ia n te té cn ica s de tra n s fe cc ió n , tra n s fo rm a c ió n o tra n sd u cc ió n . P o r e je m p lo , los á c id os n uc le ico s que co d ifica n el a g e n te de un ión a C le c9 A de la inve nc ión p ueden in tro d u c irse en las cé lu las hué sp ed m e d ia n te tra n s d u c c ió n re tro v ira l. Las cé lu la s hué sp ed ilu s tra tiva s son las cé lu las E .co li, las cé lu las de o va rio de h á m s te r ch ino (C H O ), las cé lu la s de riñón e m b rio n a rio h u m a n o 293 (H E K 293), las c é lu la s H eLa, las c é lu la s de riñón de h á m s te r b ebé (B H K ), las c é lu la s de riñón de m ono (C O S ), las c é lu la s de ca rc in o m a h e p a to c e lu la r h u m a n o (p o r e je m p lo , H ep G 2 ) y las c é lu la s de m ie lo m a . Las cé lu la s h u é sp e d tra n s fo rm a d a s p ueden cu ltiva rse en co n d ic io n e s que p e rm ita n a las cé lu las h u é sp ed e xp re sa r los g en es q ue cod ifica n el a g e n te de un ión a C le c9 A de la inve nc ión . En co n se cu e n c ia , en v a r ia s re a liza c io n e s , la p rese n te in ve n c ió n p ro p o rc io n a v e c to re s de e xp re s ió n q ue co m p re n d e n á c id os n u c le ico s que cod ifica n el a ge n te de un ión a C le c 9 A de la invenc ión . En va ria s re a liza c io ne s , la p rese n te inve nc ión p ro p o rc io n a a d ic io n a lm e n te cé lu las hué sp ed q ue co m p re n d e n d ich o s v e c to re s de e xp re s ió n .
Las co n d ic io n e s e sp e c ífica s de e xp re s ió n y p u rifica c ió n v a r ia rá n en fu n c ió n de l s is te m a de e xp re s ió n e m p le a d o . P o r e je m p lo , si un gen se va a e xp re sa r en E. coli, p rim e ro se c lon a en un v e c to r de e xp re s ió n co lo ca n d o el gen d ise ñ a d o a co n tin u a c ió n de un p ro m o to r b ac te ria n o a de cu a d o , p o r e je m p lo , T rp o Tac, y una se cu e n c ia seña l p roca rio ta . En o tro e je m p lo , si el gen d ise ñ a d o se va a e xp re sa r en c é lu la s h u é sp e d e u ca rio ta s , p o r e je m p lo , cé lu las C H O , se inse rta p rim e ro en un v e c to r de e xp re s ió n que con ten ga , p o r e je m p lo , un p ro m o to r e u ca rió tico a de cu ad o , una señ a l de sec re c ión , p o te n c ia d o re s y va rio s in tron es . La co n s tru cc ió n g e n é tica p uede in tro d u c irse en las cé lu las h u é sp ed m e d ia n te té c n ica s de tra n s fe cc ió n , tra n s fo rm a c ió n o tra n sd u cc ió n .
El a g e n te de un ión a C le c 9 A de la inve nc ión p uede p ro d u c irse cu ltiva n d o una cé lu la hué sp ed tra n s fe c ta d a con un v e c to r de e xp re s ió n q ue co d ifiq u e el a ge n te de un ión a C le c9 A en co n d ic io n e s que p e rm ita n la e xp re s ió n de la p ro te ína . T ra s la e xp re s ió n , la p ro te ína p uede co se ch a rse y p u rifica rse u tiliza n d o té c n ica s b ien co n o c id a s en la té cn ica , p o r e je m p lo , e tiq u e ta s de a fin ida d com o la g lu ta tió n -S -tra n s fe ra sa (G S T ) y e tiq u e ta s de h is tid in a (H is ) o p o r c ro m a to g ra fía . En una re a liza c ió n , el a g e n te de un ión de C le c 9 A co m p re n d e una e tiq u e ta H is. En una re a liza c ió n , el a g e n te de u n ión de C le c 9 A c o m p re n d e una e tiq u e ta H is y un s itio p ro te o lít ico p ara p e rm itir la e sc is ió n de la e tiq u e ta His.
En co n se cu e n c ia , en v a r ia s re a liza c io n e s , la p re se n te inve nc ión p ro p o rc io n a un á c ido n uc le ico que co d ifica un a g e n te de un ión a C le c 9 A de la p re se n te inve nc ión . En v a r ia s re a liza c io n e s , la p re se n te inve nc ión p ro p o rc io n a una cé lu la h ué sp ed que co m p re n d e un á c id o n uc le ico que co d ifica un a ge n te de un ión a C le c 9 A de la p rese n te inve nc ión .
En v a r ia s re a liza c io n e s , los m é to d o s de m o d ifica c ió n y p ro d u cc ió n de los a g e n te s de un ión a C le c 9 A d e s c rito s en el p re se n te d o cu m e n to p ueden a d a p ta rse fá c ilm e n te para la m o d ifica c ió n y p ro d u cc ió n de c u a lq u ie r a ge n te de un ión m u ltie sp e c ífico o q u im e ra s que co m p re n d a n dos o m ás e le m e n to s y /o a ge n tes de señ a liza c ió n . P o r e je m p lo , los m é to d o s pueden a d a p ta rse para la p rod u cc ión de un a ge n te de un ión a C le c 9 A m u ltie sp e c ífico que co m p re n d a una fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to con tra un a n tíg e n o in h ib id o r de p un to s de con tro l.
Sales y excipientes farmacéuticamente aceptables
Los a g e n te s de un ión a C le c9 A (y /o c u a lq u ie r o tro a ge n te te ra p é u tico ) d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to pueden p o s e e r un g rup o fu n c io n a l su fic ie n te m e n te bás ico , q ue puede re a c c io n a r con un á c ido in o rg á n ico u o rgá n ico , o un g rup o ca rbo x ilo , que p ue de re a c c io n a r con una b ase ino rg án ica u o rgá n ica , para fo rm a r una sal fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le . U na sa l de a d ic ión de á c ido fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le se fo rm a a p a rtir de un ácido fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le , com o es b ien con o c id o en la té cn ica . T a le s sa le s inc lu ye n las sa les fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le s e n u m e ra d a s en, p o r e jem p lo , J o u rn a l o f P h a rm a ce u tica l S c ien ce , 66, 2 -19 (1977 ) y T h e H a n d b o o k o f P h a rm a ce u tica l S a lts ; P ro p e rtie s , S e le c tio n , and Use. P. H. S ta h l y C. G. W e rm u th (eds.), V erlag , Z u rich (S u iza ) 2002.
Las sa le s fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le s inc luyen , a m o do de e je m p lo no lim ita tivo , su lfa to , c itra to , ace ta to , oxa la to , c lo ru ro , b rom uro , yod uro , n itra to , b isu lfa to , fos fa to , fo s fa to ácido, ison ico tina to , lacta to , sa lic ila to , c itra to ácido, ta rtra to , o lea to , ta n a to , p an to ten a to , b ita rtra to , a sco rb a to succ ina to , m a lea to , g e n tis in a to , fu m a ra to , g lu con a to , g lu ca ro n a to , saca ra to , fo rm ia to , b en zoa to , g lu ta m a to , m e ta n o su lfo n a to , e ta n o su lfo n a to , b e n ce n o su lfo n a to , pto lu e n o s u lfo n a to , c a n fo re su lfo n a to , p am oato , fe n ila ce ta to , tr if lu o ro a ce ta to , acrila to , c lo ro b e n zo a to , d in itro b e n zo a to , h id ro x ib e n zo a to , m e to x ib e n zo a to , m e tilb e n zo a to , o -a ce to x ib e n zo a to , n a fta le n o -2 -b e n zo a to , isob u tira to , fe n ilb u tira to , a -h id ro x ib u tira to , b u tile n o -1,4 -d ica rb o x ila to , h e x in a -1,4 -d ica rb o x ila to , cap ra to , cap rila to , c ina m ato , g lico la to , h ep ta no a to , h ip p ura to , m a la to , h id ro x im a le a to , m a lon a to , m a nd e la to , m e sila to , n ico tin a to , fta la to , te ra fta la to , p rop io la to , p rop ion a to , fe n ilp ro p io n a to , seb aca to , sub e ra to , p -b ro m o b e n ce n o su lfo n a to , c lo ro b e n ce n o su lfo n a to , e tilsu lfo n a to , 2 -h id ro x ie tilsu lfo n a to , m e tilsu lfo n a to , n a fta le n o -1 -su lfo n a to , n a fta le n o -2 -su lfo n a to , n a fta le n o -1,5 -su lfo na to , x ile n o s u lfo n a to y sa le s de ta rta ra to .
El té rm in o "sa l fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le " ta m b ié n se re fie re a una sa l de las c o m p o s ic io n e s de la p rese n te in ve n c ió n que tie n e un g rup o fu n c io n a l ác ido , com o un g rup o fu n c io n a l á c ido ca rb o x ílico , y una base. Las bases a d e cu a d a s inc luyen , pero no se lim itan a, h id ró x ido s de m e ta les a lca lin o s com o el sod io, el p o tas io y el litio; h id ró x id o s de m e ta les a lca lin o té rre o s com o el ca lc io y el m a g n e s io ; h id ró x ido s de o tros m e ta les , com o el a lu m in io y el z inc ; a m on ía co , y a m in a s o rgá n ica s , com o m ono-, di-, o tr i-a lq u ila m in a s no su s titu id a s o h id ro x i-su s titu id a s , d ic id o h e x ila m in a ; tr ib u to am ina ; p irid ina ; N -m e til, N -e tila m in a d ie tila m in a ; tr ie tila m in a ; m ono-, bis-, o tr is -(2 -O H -a lq u ila m in a s in fe rio re s), com o m ono-; bis-, o tr is -(2 -h id ro x ie til) a m ina , 2 -h id ro x i-te rt-b u tila m in a , o tr is -(h id ro x im e til) m e tila m ina , N ,N -d i-a lq u il-N -(h id ro x il-a lq u il)-a m in a s , com o N ,N -d im e til-N -(2 -h id ro x ie til) a m ina o tr i- (2 -h id ro x ie til) a m ina ; N -m e til-D -g lu ca m in a ; y a m in o á c id o s co m o a rg in ina , lis ina, y s im ila res .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , las c o m p o s ic io n e s a q u í d e sc rita s e stán en fo rm a de una sal fa rm a c é u tic a m e n te ace p ta b le .
Composiciones y formulaciones farmacéuticas
En va r ia s re a liza c io n e s , la p rese n te inve nc ión se re fie re a co m p o s ic io n e s fa rm a cé u tica s que co m p re n d e n los a g e n te s de u n ión a C le c 9 A (y /o c u a lq u ie r o tro a g e n te te ra p é u tic o ) d e sc rito s en el p re se n te d o c u m e n to y un p o rta d o r o e xc ip ie n te fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le . En a lg u n a s re a liza c io ne s , la p rese n te inve nc ión se re fie re a co m p o s ic io n e s fa rm a c é u tic a s que co m p re n d e n los p rese n te s a g e n te s de un ión a C lec9A . En o tra re a liza c ió n , la p re se n te inve nc ión se re fie re a c o m p o s ic io n e s fa rm a cé u tica s que co m p re n d e n c u a lq u ie r o tro a ge n te te ra p é u tico d e sc rito en el p re se n te d ocum e n to . En o tra re a liza c ió n , la p rese n te inve nc ión se re fie re a c o m p o s ic io n e s fa rm a c é u tic a s que co m p re n d e n una co m b in a c ió n de los p rese n te s a g e n te s de un ión a C le c9 A y c u a lq u ie r o tro a g e n te te ra p é u tico d escrito en el p rese n te d ocum e n to . C u a lq u ie ra de las co m p o s ic io n e s fa rm a cé u tica s d e sc rita s en el p re se n te d o cu m e n to p uede a d m in is tra rse a un s u je to co m o co m p o n e n te de una c o m p o s ic ió n q ue co m p re n d e un p o rta d o r o v e h ícu lo fa rm a c é u tic a m e n te ace p ta b le . D ich as co m p o s ic io n e s p ueden c o m p re n d e r o p c io n a lm e n te una ca n tid a d a d e cu a d a de un e xc ip ie n te fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le p ara p ro p o rc io n a r la fo rm a de a d m in is tra c ió n a de cu ad a .
En va ria s re a liza c io n e s , los e xc ip ie n te s fa rm a c é u tic o s p ueden se r líqu idos, com o a gua y ace ites , inc lu id o s los de o rigen p e tro le ro , an im a l, ve g e ta l o s in té tico , com o el a ce ite de caca h u e te , el a ce ite de soja , el a ce ite m in era l, el a ce ite de sé sa m o y s im ila re s . Los e xc ip ie n te s fa rm a c é u tic o s p ue de n ser, p o r e je m p lo , so lu c ió n sa lin a , g om a acac ia , g e la tin a , p as ta de a lm idó n , ta lco , q ue ra tin a , s ílice co lo ida l, u rea y s im ila res . A d e m á s, pueden u tiliza rse a ge n tes a ux ilia res , e s ta b iliza d o re s , e sp esa n tes , lu b rica n te s y co lo ra n te s . En una re a liza c ió n , los e xc ip ie n te s fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le s son e s té rile s cu a n d o se a d m in is tra n a un su je to . El a gu a es un e xc ip ie n te útil cu a nd o c u a lq u ie r a g e n te d e sc rito a q u í se a d m in is tra p o r v ía in tra ve n o sa . Las so lu c io n e s sa lin a s y las s o lu c io n e s a cu o sa s de d e x tro sa y g lice ro l ta m b ié n pueden e m p le a rse com o e xc ip ie n te s líqu idos, e sp e c ífica m e n te para so lu c io n e s inye cta b le s . E n tre los e xc ip ie n te s fa rm a c é u tic o s a d e cu a d o s se e n cu e n tra n ta m b ié n el a lm idó n , la g lucosa , la lactosa , la saca ro sa , la g e la tin a , la m a lta , el a rroz , la ha rina , la tiza , e l ge l de s ílice , el e s te a ra to de sod io , el m o n o e s te a ra to de g lice ro l, el ta lco , el c lo ru ro de sod io, la leche d e sn a ta d a en po lvo, el g lice ro l, el p rop ilen o , el g lico l, el agua, el e ta n o l y o tros s im ila res . C u a lq u ie r a g e n te d e sc rito en el p re se n te d o cu m e n to , si se desea , p ue de c o m p re n d e r ta m b ié n p e q u e ñ a s c a n tid a d e s de a g e n te s h u m e cta n te s o e m u ls io n a n te s , o a g e n te s a m o rtig u a d o re s de l pH. O tros e je m p lo s de e xc ip ie n te s fa rm a cé u tico s a d e cu a d o s se d e sc rib e n en R e m in g to n 's P h a rm a ce u tica l S c ie n ce s 1447 ­ 1676 (A lfo n so R. G e n n a ro eds., 19a ed. 1995).
La p re se n te inve nc ión inc lu ye las c o m p o s ic io n e s fa rm a c é u tic a s d e sc rita s (y /o a g e n te s te ra p é u tico s a d ic io n a le s ) en v a r ia s fo rm u la c io n e s . C u a lq u ie r co m p o s ic ió n fa rm a cé u tica inve n tiva (y /o a g e n te s te ra p é u tico s a d ic io n a le s ) d escrita en el p rese n te d o cu m e n to p uede a d o p ta r la fo rm a de so lu c io ne s , su sp e n s io n e s , e m u ls ion es , gotas, co m p rim id o s , p íld o ras , g rán u lo s , cáp su la s , cá p su la s que con tien en líqu idos, cáp su la s de g e la tin a , po lvos, fo rm u la c io n e s de lib e ra c ió n sos ten ida , su p o s ito rio s , e m u ls io n e s , a e ro so le s , sp rays , su sp e n s io n e s , po lvo lio filizad o , susp en s ió n co n g e la d a , po lvo d eseca do , o cu a lq u ie r o tra fo rm a a d e cu a d a para su uso. En una re a liza c ió n , la co m p o s ic ió n se p re se n ta en fo rm a de cápsu la . En o tra re a liza c ió n , la co m p o s ic ió n se p re se n ta en fo rm a de co m p rim id o . En o tra re a liza c ió n , la co m p o s ic ió n fa rm a cé u tica se fo rm u la en fo rm a de cá p su la de g e la tin a b landa . En o tra re a liza c ió n , la co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a se fo rm u la en fo rm a de cá p su la de g e la tin a . En o tra re a liza c ió n , la co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a se fo rm u la co m o un líqu ido .
C u a n d o sea n ecesa rio , las co m p o s ic io n e s fa rm a c é u tic a s in ve n tiva s (y /o a g e n te s a d ic io n a le s ) p ue de n in c lu ir ta m b ié n un a ge n te so lu b iliza n te . A d e m á s, los a g e n te s pueden se r e n tre g a d o s con un ve h ícu lo a d e cu a d o o un d isp o s itivo de e n tre g a com o se con oce en el arte. Las te ra p ia s co m b in a d a s d esc rita s en este d o cu m e n to pueden a d m in is tra rse co n ju n ta m e n te en un ú n ico ve h ícu lo o d isp o s itivo de a d m in is tra c ió n .
Las fo rm u la c io n e s q ue co m p re n d e n las c o m p o s ic io n e s fa rm a cé u tica s inve n tivas (y /o a g e n te s a d ic io n a le s ) de la p re se n te inve nc ión p ueden p re se n ta rse c o n v e n ie n te m e n te en fo rm a s de d o s ifica c ió n u n ita ria s y p ueden p rep a ra rse p o r cu a lq u ie ra de los m é to d o s b ien c o n o c id o s en la té c n ica de la fa rm a c ia . T a le s m é to d o s in c lu ye n g e n e ra lm e n te el paso de p o n e r los a g e n te s te ra p é u tico s en a so c ia c ió n con un p orta do r, que co n s titu ye uno o m á s in g re d ie n te s a cce so rio s . T íp ica m e n te , las fo rm u la c io n e s se p rep a ran a so c ia n d o de m a n e ra un ifo rm e e ín tim a el a gen te te ra p é u tico con un p o rta d o r líqu ido , un p o rta d o r só lido fin a m e n te d iv id ido , o am bo s, y luego, si es n ecesa rio , d ando fo rm a al p rod u cto en fo rm a s de d o s ifica c ió n de la fo rm u la c ió n d e se a d a (p o r e je m p lo , g ra n u la c ió n húm e da o seca, m e zc la s de po lvos , e tc., s e g u id a s p o r el ta b le te a d o u tiliza n d o m é to d o s co n v e n c io n a le s co n o c id o s en la técn ica ).
En v a r ia s re a liza c io n e s , c u a lq u ie r co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a (y /o a g e n te s a d ic io n a le s ) d e sc rito s en el p rese n te d o c u m e n to se fo rm u la de a cu e rd o con p ro ce d im ie n to s ru tina rio s com o una co m p o s ic ió n a d a p ta d a para un m odo de a d m in is tra c ió n d e sc rito en el p re se n te d ocum e n to .
Las v ía s de a d m in is tra c ió n inc luyen , p o r e je m p lo : oral, in tra d é rm ica , in tra m u scu la r, in tra p e rito n e a l, in traven o sa , su b cu tá n e a , in tran asa l, e p id ura l, sub ling ua l, in tran asa l, in trace reb ra l, in travag ina l, tra n sd é rm ica , recta l, p o r inh a la c ió n o tó p ica . La a d m in is tra c ió n p uede s e r loca l o s is té m ica . En a lg u na s re a liza c io n e s , la a d m in is tra c ió n se e fe c tú a p o r v ía oral. En o tra re a liza c ió n , la a d m in is tra c ió n es p o r inye cc ió n p a re n te ra l. El m o do de a d m in is tra c ió n p ue de d e ja rse a la d isc re c ió n de l p ro fe s io n a l, y d e p e n d e en p arte de l lu g a r d o n d e se e n cu e n tre la e n fe rm e d a d . En la m a yo ría de los casos, la a d m in is tra c ió n da lu g a r a la lib e ra c ió n de c u a lq u ie r a ge n te d e sc rito en el p rese n te d o cu m e n to en el to rre n te san gu íne o .
En una re a liza c ió n , el a ge n te de un ión de C le c9 A d e sc rito en el p re se n te d o cu m e n to se fo rm u la de a cu e rd o con p ro ce d im ie n to s ru tin a rio s com o una co m p o s ic ió n a d a p ta d a p ara la a d m in is tra c ió n oral. Las c o m p o s ic io n e s para la a d m in is tra c ió n o ra l pueden p re se n ta rse en fo rm a de co m p rim id o s , p as tilla s , s u sp e n s io n e s a cu o sa s u o leosas, g rá n u lo s , po lvos, e m u ls io n e s , cáp su la s , ja ra b e s o e lix ires , p o r e je m p lo . Las c o m p o s ic io n e s a d m in is tra d a s p o r v ía o ra l p ue de n c o m p re n d e r uno o m ás a g e n te s , p o r e je m p lo , a g e n te s e d u lco ra n te s co m o la fru c to sa , el a sp a rta m o o la saca rin a ; a g e n te s a ro m a tiza n te s co m o la m enta , el a ce ite de g a u lte ria o la ce reza ; a g e n te s co lo ra n te s ; y a ge n tes c o n se rva n te s , para p ro p o rc io n a r una p re p a rac ió n fa rm a c é u tic a m e n te p a la ta b le . A d e m á s, cu a n d o se p rese n ta n en fo rm a de co m p rim id o s o p íld o ras , las c o m p o s ic io n e s pueden e s ta r re cu b ie rta s para re tra sa r la d e s in te g ra c ió n y la a b so rc ió n en el tra c to g a s tro in te s tin a l, p ro p o rc io n a n d o a s í una acc ión so s te n id a d u ra n te un p e río do de tie m p o p ro lo ng a do . Las m e m b ra n a s s e le c tiva m e n te p e rm e a b le s q ue rodean una co n d u cc ió n o sm ó tica m e n te a c tiva de cu a lq u ie ra de los a g e n te s de un ión a C le c9 A d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to ta m b ié n son a d e cu a d a s para las co m p o s ic io n e s a d m in is tra d a s p o r v ía oral. En e s ta s ú ltim a s p la ta fo rm a s , el flu id o del e n to rn o que rodea la cáp su la es a b so rb id o p o r el co m p u e s to im pu lso r, que se h incha para d e s p la z a r el a ge n te o la co m p o s ic ió n del a ge n te a tra vé s de una a be rtu ra . E s tas p la ta fo rm a s de su m in is tro pueden p ro p o rc io n a r un perfil de su m in is tro e se n c ia lm e n te de o rde n cero , en c o n tra p o s ic ió n a los p e rfile s de p ico de las fo rm u la c io n e s de lib e ra c ió n inm e d ia ta . T a m b ié n p uede s e r útil un m a te ria l de re ta rdo com o el m o n o e s te a ra to de g lice ro l o el e s te a ra to de g lice ro l. Las co m p o s ic io n e s o ra le s p ue de n in c lu ir e xc ip ie n te s e s tá n d a r com o m a n ito l, lac tosa , a lm idó n , e s te a ra to de m a gn es io , sa ca rin a de sod io, ce lu lo sa y ca rb o n a to de m a gn es io . En una re a liza c ió n , los e xc ip ie n te s son de g rad o fa rm a cé u tico . Las su sp e n s io n e s , a d e m á s de los com p u e s to s a ctivos , pueden c o n te n e r a g e n te s de su sp e n s ió n com o, p o r e jem p lo , a lco h o le s iso s te a rílico s e to x ila d os , so rb ito l p o lio x ila d o y é s te res de so rb itán , ce lu lo sa m ic ro c ris ta lin a , m e ta h id ró x id o de a lu m in io , b en ton ita , a ga r-a g a r, tra g a ca n to , etc., y sus m ezc las.
Las fo rm a s de d o s ifica c ió n a d e cu a d a s para la a d m in is tra c ió n p are n te ra l (p o r e je m p lo , inye cc ió n e in fus ión in tra ve n o sa , in tra m u scu la r, in tra p e rito n e a l, su b cu tá n e a e in tra a rticu la r) inc lu ye n , p o r e je m p lo , so lu c io ne s , su sp e n s io n e s , d isp e rs io n e s , e m u ls io n e s y s im ila re s . T a m b ié n p ue de n fa b ric a rs e en fo rm a de c o m p o s ic io n e s só lid a s e s té rile s (p o r e je m p lo , co m p o s ic ió n lio filizad a), que p ue de n d iso lve rse o su sp e n d e rse en un m e d io inye cta b le e s té ril in m e d ia ta m e n te a n tes de su uso. P u e d e n con te n e r, p o r e je m p lo , a g e n te s de su sp e n s ió n o d isp e rs ió n co n o c id o s en la té cn ica . Los co m p o n e n te s de la fo rm u la c ió n a d e cu a d o s para la a d m in is tra c ió n p a re n te ra l inc luyen un d ilu ye n te e sté ril com o a gua para inye cc ió n , so lu c ió n sa lina , a ce ites fijos , p o lie tile n g lico le s , g lice rin a , p ro p ile n g lico l u o tros d iso lve n te s s in té tico s ; a g e n te s a n tib a c te ria n o s com o el a lco ho l b en c ílico o el m e tilp a ra b e n o ; a n tio x id a n te s com o el á c id o a scó rb ico o el b isu lfito sód ico ; a g e n te s q u e la n te s com o el E D TA ; ta m p o n e s co m o los a ce ta tos , c itra to s o fos fa to s ; y a g e n te s para el a ju s te de la to n ic id a d com o el c lo ru ro sód ico o la d ex trosa .
P ara la a d m in is tra c ió n in traven o sa , los p orta do re s a d e cu a d o s inc luyen so lu c ió n sa lina fis io ló g ica , agua b a c te rio s tá tica , C re m o p h o r E LT M (B A S F , P a rs ipp an y, N J) o so lu c ió n sa lin a ta m p o n a d a con fo s fa to (P B S ). El so p o rte debe s e r e s ta b le en las co n d ic io n e s de fa b rica c ió n y a lm a ce n a m ie n to , y debe p re se rva rse con tra los m ic ro o rg a n ism o s . El p o rta d o r puede s e r un d iso lve n te o m e d io de d isp e rs ió n que con ten ga , p o r e je m p lo , agua, e tano l, p o lio l (p o r e je m p lo , g lice ro l, p ro p ile n g lic o l y p o lie tile n g lico l líqu ido ), y m e zc la s a d e cu a d a s de los m ism os . Las co m p o s ic io n e s a q u í p ro p o rc io n a d a s , so las o en co m b in a c ió n con o tros c o m p o n e n te s a de cu ad os , p ueden h acerse en fo rm u la c io n e s de a e ro so l (es dec ir, "n e b u liza d a s ") para s e r a d m in is tra d a s p o r inh a lac ión . Las fo rm u la c io n e s en a e ro so l pueden co lo ca rse en p ro p u lso re s p re su riza d o s a ce p ta b le s , com o d ic lo ro d iflu o ro m e ta n o , p ropano , n itróg en o y s im ila res .
C u a lq u ie r co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a inve n tiva (y /o a g e n te s a d ic io n a le s ) d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to pueden s e r a d m in is tra d o s p or m e d io s de libe ra c ión co n tro la d a o so s te n id a o p o r d isp o s itivo s de e n tre g a que son bien co n o c id o s p o r a q u e llo s de h ab ilidad o rd in a ria en el arte. Los e je m p lo s inc luyen , en tre o tros, los d e sc rito s en U.S. P a te n t n° 3.845.770 3 ,916 ,899 3 ,536 ,809 3 ,598 ,123 4 ,008 ,719 5 ,674 ,533 5 ,059 ,595 5 ,591 ,767 5 ,120 ,548 5 ,073 ,543 5 ,639 ,476 5 ,354 ,556 y 5 ,733 ,556. T a le s fo rm a s de d o s ifica c ió n p ue de n s e r ú tile s p ara p ro p o rc io n a r una lib e ra c ió n c o n tro la d a o so s te n id a de uno o m ás in g re d ie n te s a c tivo s u tilizan do , p o r e je m p lo , h id ro p ro p ilce lu lo sa , h id ro p ro p ilm e tilce lu lo sa , p o liv in ilp irro lid o n a , o tras m a trices p o lim é ricas , ge les, m e m b ra n a s p e rm ea b le s , s is te m a s osm ó tico s , re cu b rim ie n to s m u ltica pa , m ic ro p a rtícu la s , lipo som a s, m ic ro e s fe ra s o una co m b in a c ió n de los m ism o s para p ro p o rc io n a r el p e rfil de lib e ra c ió n d e se a d o en p ro p o rc io n e s va ria b le s . Las fo rm u la c io n e s a d e cu a d a s de libe ra c ión co n tro la d a o sos te n id a co n o c id a s p o r los e xp e rto s en la m a te ria , inc lu id a s las d e sc rita s en el p rese n te d ocum e n to , p ueden se le cc io n a rse fá c ilm e n te p ara su uso con los in g re d ie n te s a c tivo s de los a g e n te s d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to . La inve nc ión p ro p o rc io n a , p o r tan to , fo rm a s de d o s ifica c ió n un ita rias a d e cu a d a s para la a d m in is tra c ió n o ra l com o , p o r e jem p lo , co m p rim id o s , cáp su la s , c á p su la s de ge l y cá p su la s a d a p ta d a s para la libe ra c ión co n tro la d a o sos ten ida .
La libe ra c ión co n tro la d a o so s te n id a de un in g re d ie n te a c tivo puede se r e s tim u la d a p o r va r ia s con d ic ion e s, in c lu ye n d o p ero no lim itad o a, ca m b io s en el pH, ca m b io s en la te m p e ra tu ra , e s tim u la c ió n p o r una long itud de onda a p ro p ia d a de luz, co n ce n tra c ió n o d isp o n ib ilid a d de e nz im as , co n ce n tra c ió n o d isp o n ib ilid a d de agua, u o tras co n d ic io n e s fis io ló g ica s o co m p u e s to s .
En o tra re a liza c ió n , un s is te m a de libe ra c ión co n tro la d a p uede co lo ca rse en la p ro x im id a d de la zo n a o b je tivo a tra ta r, re q u ir ie n d o a s í só lo una fra cc ió n de la d o s is s is té m ica (vé ase , p o r e je m p lo , G o o dson , en M e d ica l A p p lic a tio n s o f C on tro lle d R e lease , supra , vo l. 2, pp. 115 -138 (1984 )). O tros s is te m a s de libe ra c ión co n tro la d a d iscu tid o s en la re v is ió n de Lange r, 1990, S c ie n ce 249 :1527 -1533 ) p ue de n se r u tilizados.
Las fo rm u la c io n e s fa rm a cé u tica s son p re fe re n te m e n te e s té riles . La e s te riliza c ió n puede lleva rse a cabo, p o r e je m p lo , m e d ia n te la filtra c ió n a tra vé s de m e m b ra n a s de filtra c ió n e s té riles . C ua nd o la co m p o s ic ió n se lio filiza , la e s te riliza c ió n de l filtro p ue de re a liza rse a n te s o d e sp u é s de la lio filizac ió n y la re co n s titu c ió n .
Administración y dosificación
Se a p re c ia rá q ue la d o s is rea l de l a g e n te de u n ión a C le c 9 A y /o c u a lq u ie r a g e n te te ra p é u tico d e sc rito en el p re se n te d o cu m e n to que se a d m in is tre v a r ia rá según la fo rm a de d o s ifica c ió n p a rticu la r, y el m o do de a d m in is tra c ió n . Los e xp e rto s en la m a te ria p ue de n te n e r en cu e n ta m u ch o s fa c to re s q ue p ue de n m o d ific a r la a cc ió n de l a g e n te de un ión a C le c 9 A (p o r e jem p lo , el peso co rpo ra l, el sexo, la d ie ta , el t ie m p o de a d m in is tra c ió n , la v ía de a d m in is tra c ió n , la ta sa de e xc re c ión , el e s ta d o del su je to , las co m b in a c io n e s de fá rm a co s , la d isp o s ic ió n g en é tica y las se n s ib ilid a d e s a las re a cc io n e s ). La a d m in is tra c ió n p ue de re a liza rse de fo rm a c o n tin u a o en una o v a r ia s d o s is d is c re ta s d e n tro de la d o s is m á x im a to le ra d a . Los e xp e rto s en la m a te ria p ue de n d e te rm in a r las ta sa s de a d m in is tra c ió n ó p tim a s p ara una serie de co n d ic io n e s d a d a s u tiliza n d o p ru e b a s c o n ve n c io n a le s de a d m in is tra c ió n de dos is.
En a lg u na s re a liza c io ne s , una d os is a d e cu a d a del a ge n te de unión a C le c9 A y/o cu a lq u ie r a ge n te te ra p é u tico d e sc rito en el p re se n te d o cu m e n to e stá en un ra ng o de a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g /kg a a p ro x im a d a m e n te 10 g/kg de peso co rp o ra l de l su je to , a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g /kg a a p ro x im a d a m e n te 1 g /kg de peso co rp o ra l de l su je to , a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g/kg a a p ro x im a d a m e n te 100 m g/kg de peso co rp o ra l del su je to , a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g /kg a a p ro x im a d a m e n te 10 m g /kg de peso co rp o ra l del su je to , p o r e je m p lo , a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 0 ,02 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 0 ,03 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 0 ,04 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 0 ,05 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 0 ,06 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 0 ,07 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 0 ,08 m g/kg, a p ro x im a d a m e n te 0 ,09 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g/kg , a lre d e d o r de 0,2 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 0,3 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 0 ,4 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 0,5 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 0,6 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 0,7 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 0 ,8 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 0 ,9 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 1 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 1,1 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 1,2 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 1,3 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 1,4 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 1.5 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 1,6 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 1,7 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 1,8 m g/kg , 1.9 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 2 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 3 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 4 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 5 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 6 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 7 m g /kg , a p ro x im a d a m e n te 8 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 9 m g/kg , a p ro x im a d a m e n te 10 m g /kg de peso co rpo ra l, a p ro x im a d a m e n te 100 m g/kg de peso co rpo ra l, a p ro x im a d a m e n te 1 g /kg de p eso co rpo ra l, a p ro x im a d a m e n te 10 g /kg de peso co rpo ra l, in c lu id o s to d o s los va lo re s y ra ng o s e n tre e llos.
Las d os is in d iv id u a le s del a g e n te de un ión a C le c 9 A y /o c u a lq u ie r a g e n te te ra p é u tico d e sc rito en el p rese n te d o cu m e n to p ueden a d m in is tra rse en fo rm a s de d o s ifica c ió n u n ita ria s q ue co n te n g a n , p o r e je m p lo , d esde a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg hasta a p ro x im a d a m e n te 100 g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg hasta a p ro x im a d a m e n te 75 g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg h as ta a p ro x im a d a m e n te 50 g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg h asta a p ro x im a d a m e n te 25 g, a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg a unos 10 g, a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg a unos 7.5 g, a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g a unos 5 g, a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg a uno s 2 ,5 g, a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg a uno s 1 g, a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg h asta a p ro x im a d a m e n te 100 m g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g hasta a p ro x im a d a m e n te 100 mg, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg hasta a p ro x im a d a m e n te 90 m g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g hasta a p ro x im a d a m e n te 80 m g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g h as ta a p ro x im a d a m e n te 70 m g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg hasta a p ro x im a d a m e n te 60 m g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g hasta a p ro x im a d a m e n te 50 mg, d e sd e a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg h asta a p ro x im a d a m e n te 40 mg de p rin c ip io a ctivo , d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g hasta a p ro x im a d a m e n te 30 m g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g h as ta a p ro x im a d a m e n te 20 m g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg hasta a p ro x im a d a m e n te 10 m g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g hasta a p ro x im a d a m e n te 5 m g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg hasta a p ro x im a d a m e n te 3 m g, d esde a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg hasta a p ro x im a d a m e n te 1 mg p o r un idad de d o s ifica c ió n , o d esde a p ro x im a d a m e n te 5 mg hasta a p ro x im a d a m e n te 80 m g p o r un idad de d o s ifica c ió n . P o r e je m p lo , una fo rm a de d o s ifica c ió n un ita ria p uede s e r de a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,02 mg, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,03 m g, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,04 m g, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,05 m g, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,06 m g, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,07 m g, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,08 mg, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,09 m g, de a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg, de a p ro x im a d a m e n te 0,2 m g, de a p ro x im a d a m e n te 0,3 mg, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,4 mg, de a p ro x im a d a m e n te 0,5 mg, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,6 mg, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,7 mg, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,8 mg, de a p ro x im a d a m e n te 0 ,9 m g, de a p ro x im a d a m e n te 1 m g, de a p ro x im a d a m e n te 2 m g, de a p ro x im a d a m e n te 3 m g, de a p ro x im a d a m e n te 4 mg, de a p ro x im a d a m e n te 5 m g, de a p ro x im a d a m e n te 6 m g, de a p ro x im a d a m e n te 7 m g, de a p ro x im a d a m e n te 8 mg, de a p ro x im a d a m e n te 9 m g, de a p ro x im a d a m e n te 10 m g, de a p ro x im a d a m e n te 15 m g, de a p ro x im a d a m e n te 20 m g, de a p ro x im a d a m e n te 25 mg, de a p ro x im a d a m e n te 30 mg, de a p ro x im a d a m e n te 35 m g, de a p ro x im a d a m e n te 40 mg, de a p ro x im a d a m e n te 45 mg, de a p ro x im a d a m e n te 50 mg, de a p ro x im a d a m e n te 55 m g, de a p ro x im a d a m e n te 60 mg, de a p ro x im a d a m e n te 65 mg, de a p ro x im a d a m e n te 70 mg, de a p ro x im a d a m e n te 75 m g, de a p ro x im a d a m e n te 80 mg, de a p ro x im a d a m e n te 85 mg, de a p ro x im a d a m e n te 90 m g, de a p ro x im a d a m e n te 95 mg, de a p ro x im a d a m e n te 100 mg, de a p ro x im a d a m e n te 200 mg, de a p ro x im a d a m e n te 500 mg, de a p ro x im a d a m e n te 1 g, de a p ro x im a d a m e n te 2.5 g, de a p ro x im a d a m e n te 5 g, de a p ro x im a d a m e n te 10 g, de a p ro x im a d a m e n te 25 g, de a p ro x im a d a m e n te 50 g, de a p ro x im a d a m e n te 75 g, de a p ro x im a d a m e n te 100 g, inc lu id o s to d o s los v a lo re s y ra ng o s e n tre e llos.
En una re a liza c ió n , el a ge n te de un ión de C le c9 A y /o c u a lq u ie r a ge n te te ra p é u tico d e sc rito en el p rese n te d o cu m e n to p uede a d m in is tra rse en una can tida d de a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg a a p ro x im a d a m e n te 100 g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg a a p ro x im a d a m e n te 75 g d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g a a p ro x im a d a m e n te 50 g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg a a p ro x im a d a m e n te 25 g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg a a p ro x im a d a m e n te 10 g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg a a p ro x im a d a m e n te 7,5 g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg a a p ro x im a d a m e n te 5 g d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g a a p ro x im a d a m e n te 2 ,5 g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g a a p ro x im a d a m e n te 1 g d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g a a p ro x im a d a m e n te 100 mg d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg a a p ro x im a d a m e n te 100 mg d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg a a p ro x im a d a m e n te 95 mg d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 90 m g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 85 mg d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 80 m g d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 75 m g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg a a p ro x im a d a m e n te 70 mg d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 65 m g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 60 mg d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 55 m g d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 50 m g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg a a p ro x im a d a m e n te 45 mg d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 40 m g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 35 mg d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 30 m g d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 25 m g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg a a p ro x im a d a m e n te 20 mg d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 15 m g d ia rios , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 10 mg d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 5 m g d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g a a p ro x im a d a m e n te 3 m g d ia rio s , de a p ro x im a d a m e n te 0,1 mg a a p ro x im a d a m e n te 1 mg d ia rio s , o de a p ro x im a d a m e n te 5 mg a a p ro x im a d a m e n te 80 mg d ia rio s . En d ive rsa s re a liza c io n e s , el a ge n te de u n ión a C le c9 A se a d m in is tra a una d os is d ia ria de a p ro x im a d a m e n te 0,01 mg, a p ro x im a d a m e n te 0 ,02 m g, a p ro x im a d a m e n te 0 ,03 m g, a p ro x im a d a m e n te 0 ,04 m g, a p ro x im a d a m e n te 0 ,05 mg, a p ro x im a d a m e n te 0 ,06 mg, a p ro x im a d a m e n te 0 ,07 m g, a p ro x im a d a m e n te 0 ,08 m g, a p ro x im a d a m e n te 0 ,09 mg, a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g, a p ro x im a d a m e n te 0 ,2 mg, a p ro x im a d a m e n te 0 ,3 m g, a p ro x im a d a m e n te 0 ,4 mg, a p ro x im a d a m e n te 0 ,5 m g, a p ro x im a d a m e n te 0 ,6 mg, a p ro x im a d a m e n te 0 ,7 m g, a p ro x im a d a m e n te 0 ,8 mg, a p ro x im a d a m e n te 0 ,9 m g, a p ro x im a d a m e n te 1 m g, a p ro x im a d a m e n te 2 m g, a p ro x im a d a m e n te 3 mg, a p ro x im a d a m e n te 4 m g, a p ro x im a d a m e n te 5 m g, a p ro x im a d a m e n te 6 m g, a p ro x im a d a m e n te 7 mg, a p ro x im a d a m e n te 8 m g, a p ro x im a d a m e n te 9 m g, a p ro x im a d a m e n te 10 mg, a p ro x im a d a m e n te 15 mg, a p ro x im a d a m e n te 20 m g, a p ro x im a d a m e n te 25 mg, a p ro x im a d a m e n te 30 m g, a p ro x im a d a m e n te 35 mg, a p ro x im a d a m e n te 40 m g, a p ro x im a d a m e n te 45 mg, a p ro x im a d a m e n te 50 m g, a p ro x im a d a m e n te 55 mg, a p ro x im a d a m e n te 60 m g, a p ro x im a d a m e n te 65 mg, a p ro x im a d a m e n te 70 m g, a p ro x im a d a m e n te 75 mg, a p ro x im a d a m e n te 80 m g, a p ro x im a d a m e n te 85 mg, a p ro x im a d a m e n te 90 m g, a p ro x im a d a m e n te 95 mg, a p ro x im a d a m e n te 100 m g, a p ro x im a d a m e n te 200 mg, a p ro x im a d a m e n te 500 m g, a p ro x im a d a m e n te 1 g, a p ro x im a d a m e n te 2.5 g, a p ro x im a d a m e n te 5 g, a p ro x im a d a m e n te 7,5 g, a p ro x im a d a m e n te 10 g, a p ro x im a d a m e n te 25 g, a p ro x im a d a m e n te 50 g, a p ro x im a d a m e n te 75 g, a p ro x im a d a m e n te 100 g, in c lu id o s to d o s los va lo re s y rangos e n tre e llos.
La co m p o s ic ió n fa rm a cé u tica q ue co m p re n d e el a ge n te de un ión a C le c9 A y/o cu a lq u ie r a g e n te te ra p é u tico d escrito en el p re se n te d o c u m e n to p ue de a d m in is tra rse , p o r e je m p lo , m ás de una ve z al d ía (p o r e je m p lo , a lre d e d o r de dos ve ce s , a lre d e d o r de tre s vece s, a lre d e d o r de cua tro vece s, a lre d e d o r de c inco vece s, a lre d e d o r de se is vece s, a lre d e d o r de s ie te vece s, a lre d e d o r de och o vece s, a lre d e d o r de n ueve v e ce s o a lre d e d o r de d ie z v e ce s al día), a lre d e d o r de una ve z al día, a lre d e d o r de cada dos d ías, a lre d e d o r de cad a tre s d ías, a lre d e d o r de una ve z a la sem a na , a lre d e d o r de una ve z cad a d os sem a n a s , a lre d e d o r de una ve z ca d a m es, a lre d e d o r de una ve z cad a tre s m eses, a lre d e d o r de una ve z cad a se is m e se s o a lre d e d o r de una ve z al año.
Terapia combinada y agentes terapéuticos adicionales
La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a de la p rese n te inve nc ión puede se r co a d m in is tra d a ju n to con a g e n te (s ) te ra p é u tico (s ) a d ic io n a l(e s ). La c o a d m in is tra c ió n p ue de s e r s im u ltá n e a o secu en c ia l.
El a g e n te te ra p é u tico a d ic io n a l y el a ge n te de un ión a C le c9 A de la p rese n te inve nc ión p ueden a d m in is tra rse a un su je to s im u ltá n e a m e n te . El té rm in o "s im u ltá n e a m e n te ", ta l com o se u tiliza en el p re se n te d o cu m e n to , s ig n ifica q ue el a g e n te te ra p é u tico a d ic io n a l y el a g e n te de u n ión a C le c 9 A se a d m in is tra n con u na s e p a ra c ió n de t ie m p o de no m ás de u nos 60 m in u tos , com o p o r e je m p lo no m ás de u nos 30 m in u tos , no m ás de uno s 20 m in u tos , no m ás de uno s 10 m in u tos , no m ás de u no s 5 m in u to s o no m á s de un m inu to . La a d m in is tra c ió n de l a g e n te te ra p é u tico a d ic io n a l y del a g e n te de un ión a C le c9 A p uede re a liza rse m e d ia n te la a d m in is tra c ió n s im u ltá n e a de una ú n ica fo rm u la c ió n ( p o r e je m p lo , una fo rm u la c ió n que co m p re n d e el a ge n te te ra p é u tico a d ic io n a l y el a ge n te de un ión a C le c9 A ) o de fo rm u la c io n e s s e p a ra d a s ( p o r e je m p lo , una p rim e ra fo rm u la c ió n que inc lu ye el a ge n te te ra p é u tico a d ic io n a l y una se g u n d a fo rm u la c ió n q ue inc lu ye el a g e n te de un ión a C lec9A ).
La co a d m in is tra c ió n no re q u ie re q u e los a g e n te s te ra p é u tic o s se a d m in is tre n s im u ltá n e a m e n te , si el m o m e n to de su a d m in is tra c ió n es ta l que las a c tiv id a d e s fa rm a c o ló g ica s del a ge n te te ra p é u tico a d ic io n a l y del a ge n te de un ión a C le c 9 A se su p e rp o n e n en el t ie m p o , e je rc ie n d o a s í un e fe c to te ra p é u tico co m b in a d o . P o r e je m p lo , el a gen te te ra p é u tico a d ic io n a l y el a ge n te de unión a C le c9 A pueden a d m in is tra rse s e cu e n c ia lm e n te . El té rm in o "s e cu e n c ia lm e n te ", ta l com o se u tiliza aquí, s ig n ifica que el a ge n te te ra p é u tico a d ic io n a l y el a ge n te de un ión a C le c 9 A se a d m in is tra n con una se p a ra c ió n te m p o ra l de m ás de unos 60 m in u tos . P o r e je m p lo , el tie m p o e n tre la a d m in is tra c ió n s e cu e n c ia l de l a g e n te te ra p é u tico a d ic io n a l y el a g e n te de un ión a C le c 9 A p ue de s e r de m ás de unos 60 m in u tos , m ás de una s 2 horas , m ás de u nas 5 horas, m ás de u nas 10 horas, m ás de un día, m ás de u nos 2 d ías, m ás de unos 3 d ías, m ás de una se m a n a , o m ás de u nas 2 se m a n a s , o m ás de un m es de d ife re n c ia . Los tie m p o s ó p tim o s de a d m in is tra c ió n d ep e n d e rá n de las ta s a s de m e ta b o lism o , e xc re c ió n y /o de la a c tiv id a d fa rm a c o d in á m ic a de l a g e n te te ra p é u tic o a d ic io n a l y de l a g e n te de u n ión a C le c 9 A q u e se a d m in is tre . S e p u e d e a d m in is tra r p rim e ro el a g e n te te ra p é u tico a d ic io n a l o la cé lu la de un ión a C lec9A .
La c o a d m in is tra c ió n ta m p o c o re qu ie re que los a g e n te s te ra p é u tico s se a d m in is tre n al su je to p o r la m ism a v ía de a d m in is tra c ió n . M ás bien, cad a a g e n te te ra p é u tico p ue de s e r a d m in is tra d o p o r c u a lq u ie r v ía a p ro p ia d a , p o r e je m p lo , p o r v ía p a re n te ra l o no p a ren te ra l.
El a g e n te de u n ión a C le c 9 A a q u í d e sc rito p ue de a c tu a r de fo rm a s in é rg ica cu a n d o se c o a d m in is tra con o tro a g e n te te ra p é u tico . El a g e n te de un ión a C le c 9 A y el a g e n te te ra p é u tico a d ic io n a l p u e d e n a d m in is tra rs e a d o s is in fe rio re s a las e m p le a d a s cu a n d o los a g e n te s se u tilizan en el co n te x to de la m o no te ra p ia .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , la p re se n te inve nc ión se re fie re a a g e n te s q u im io te ra p é u tico s com o a g e n te s te ra p é u tico s a d ic io n a le s . P o r e je m p lo , sin lim itac ió n , d ich a co m b in a c ió n de los p re se n te s a g e n te s de un ión a C le c9 A y el a g e n te q u im io te ra p é u tic o e n cu e n tra n uso en el tra ta m ie n to de cán ce re s , com o se d e sc rib e en o tra parte de l p rese n te d o cu m e n to . Los e je m p lo s de a g e n te s q u im io te ra p é u tic o s inc lu ye n , e n tre o tros , a g e n te s a lq u ila n te s com o la tio te p a y la c ic lo s fo s fa m id a C Y T O X A N ; a lq u ilsu lfo n a to s co m o el b usu lfá n , el im p ro su lfá n y el p ip o su lfán ; a z ir id in a s com o la b e n zo d o p a , la ca rb o q u o n a , la m e tu re d o p a y la u redopa ; e tile n im in a s y m e tila m e la m in a s com o la a ltre tam ina , la tr ie tile n e m e la m in a , la tr ie tile n o fo s fo ra m id a , la tr ie tile n o tio fo s fo ra m id a y la tr im e tilo lo m e la m in a ; a c e to g e n in a s fp o r e je m p lo , b u lla ta c in a y b u lla ta c in o n a ); una ca m p to te c in a (in c lu id o el a n á lo g o s in té tico to p o te ca n ); b rioe s ta tina ; ca lly e s ta tin a ; C C -1065 ( in c lu id o s sus a n á lo g o s s in té tico s a d o ze le s in a , c a rze le s in a y b ize les ina ); c r ip to fe c in a s f p. ej, c r ip to fic in a 1 y c r ip to fic in a 8); d o la s ta tin a ; d u o ca rm ic in a ( in c lu id o s los a n á lo g o s s in té ticos , K W -2189 y C B 1-TM 1); e le u te rin a ; p an cra tis ta tin a ; a sa rco d ic tiin a ; e sp o n g is ta tin a ; m o s ta za s n itro g e n a d a s com o el c lo ram b uc il, la c lo ra fa n in a , la co lo fo fo s fa m id a , la e s tra m u s tin a , la ifos fam id a , la m e c lo re ta m in a , el c lo rh id ra to de m e c lo re ta m in a , el m e lfa lán , la n ove m b ich in a , la fe n e s te rin a , la p red n im u s tin a , la tro fo s fa m id a y la m o s ta za u rac ilo n itro su re a s com o la ca rm u s tin a , la c lo ro zo to c in a , la fo te m u s tin a , la lom us tina , la n im u s tin a y la ra n im n u s tin a ; a n tib ió tico s com o los a n tib ió tico s de e n e d ic ió n fp o r e je m p lo , ca lich e a m ic in a , e sp e c ia lm e n te c a lich e a m ic in a g a m m a ll y ca lich e a m ic in a o m e g a ll (vé ase , p o r e je m p lo , A g n e w , C hem . Ed. Intl. Ing lés, 33: 183 -186 (1994 )); d in e m ic in a , inc lu ida la d in e m ic in a A; b ifo s fo n a to s , com o el c lod ro na to ; una e sp e ra m ic in a a s í co m o el c ro m ó fo ro n e o ca rz in o s ta tin a y los c ro m ó fo ro s a n tib ió tico s re la c io n a d o s e ne d iyne ), a c la c in o m is in a s , a c tin o m ic in a , a u tra m ic ina , a za se rin a , b le o m ic in as , c a c tin o m ic in a ca rab ic in a , ca m in o m ic in a , ca rz in o filin a , c ro m o m ic in a , d a c tin o m ic in a , d a u n o ru b ic in a , d e to ru b ic in a , 6 -d ia zo -5 -o xo -L -n o rle u c in a , A D R IA M IC IN A d o xo ru b ic in a ( in c lu ye n d o m o rfo lin o -d o xo ru b ic in a , c ia n o m o rfo lin o -d o xo rru b ic in a , 2 -p irro lin o -d o x o rru b ic in a y d eo xi d o xo rru b ic in a ), e p irrub ic ina , e so rru b ic in a , ida rrub ic ina , m a rce lo m ic in a , m ito m ic in a s com o la m ito m ic in a C, á c ido m ico fe n ó lico , n og a la m ic in a , o livo m ic in a s , p ep lom ic ina , p o tfiro m ic in a , p u ro m ic ina , q u e la m ic in a , ro d o ru b ic in a , e s tre p to n ig rin a , e s tre p to zo c in a , tu b e rc id in a , uben im ex, z in o s ta tin a , zo ru b ic in a ; a n tim e ta b o lito s com o el m e to tre xa to y el 5 -flu o ro u ra c ilo (5 -F U ); a ná lo g o s del á c ido fó lico com o la d e n o p te rin a , el m e to tre xa to , la p te ro p te rin a , el tr im e tre x a to a n á lo g o s de las p u rin as com o la flu d a ra b in a , la 6 -m e rca p to p u rin a , la t ia m ip rin a , la tio g u a n in a ; a n á lo g o s de las p ir im id in a s com o la a nc itab ina , la a za c itid ina , la 6 -a za u rid in a , el ca rm ofu r, la c ita ra b in a , la d id e o x iu rid in a , la d o x iflu rid in a , la e no c ita b in a , la f lo xu rid in a a n d ró g e n o s com o la ca lu s te ro n a , el p ro p io n a to de d ro m o s ta n o lo n a , el e p itio s ta n o l, el m e p itio s ta n o , la te s to la c to n a ; a n tia d re n a le s com o la m in o g lu te tim id a , el m ito tano , el tr ilo s ta n o ; re p o n e d o re s de á c ido fó lico com o el á c id o fro lín ico ; ace g la ton a ; g lu có s id o de a ld o fo s fa m id a ; á c ido a m in o le vu lín ico ; e n ilu rac ilo ; a m sa crin a ; bes trab u c il; b isa n tre n o ; e da traxa to ; d e m e co lc in a ; d ia z iq u o n a ; e lfo rm itin a ; a ce ta to de e lip tin io ; una e po tilo na ; e to g lú c id o ; n itra to de ga lio ; h id ro x iu rea ; len tina n ; lon id a in in a ; m a y ta n s in o id e s com o la m a y ta n s in a y las a n sa m ito c in a s ; m ito g u a zo n a ; m ito xa n tro n a ; m o p id a n m o l; n itrae rin a ; p e n to s ta tina ; fe n a m e t; p ira rub ic ina ; loso xa n tron a ; á c ido p od o filín ico ; 2 -e tilh id ra z id a ; p ro ca rb a z in a ; c o m p le jo de p o lisa cá r id o s P S K (JH S N a tu ra l P ro du c ts , E ugene , O reg .); razoxano ; rizox ina ; s izo fu ran ; e sp iro g e rm a n io ; ácido te n u a zó n ico ; tr ia z iq u o n a ; 2 ,2 ',2 "- tr ic lo ro tr it ila m in a ; tr ico te ce n o s (p o r e je m p lo , T o x in a T-2, v e rra cu rin a A, ro rid ina A y a ng u id ina ); u re tano ; v in d e s in a ; d aca rb a z in a ; m a n n o m u s tin a ; m itob ro n ito l; m ito la c to l; p ip o b ro m á n ; g ac itos ina ; a ra b in ó s id o ("A ra -C "); c ic lo fo s fa m id a ; tio te p a ; ta xo id e s , p . ej, T A X O L p a c lita xe l (B r is to l-M yers S qu ib b O n co lo gy , P rin ce ton , N .J.), A B R A X A N E fo rm u la c ió n de n a n o p a rtícu la s de p a c lita xe l sin a lb ú m in a (A m e rica n P h a rm a ce u tica l P artne rs , S ch a u m b e rg , 111.), y T A X O T E R E d o xe ta xe l (R h o n e -P o u le n c R orer, A n to ny , F ran c ia ); c lo ra n b u c il; G E M Z A R g e m c ita b in a ; 6 -tio g u a n in a ; m e rca p to p u rin a ; m e to tre xa to ; a n á lo g o s del p la tino com o c isp la tin o , o xa lip la tin o y ca rb o p la tin o ; v in b la s tin a ; p la tino ; e to p ó s id o (V P - 16); ifos fam id a ; m ito xa n tro n a ; v in c ris tin a ; N A V E L B IN E v in o re lb in a ; novan tro na ; te n ip ó s id o ; e da trexa to ; d a u n o m ic in a ; a m in o p te rin a ; xe lo d a ; iba n dro n a to ; irin o te cá n (C a m p to sa r, C P T -11 ) (in c lu id o el ré g im en de tra ta m ie n to de irin o te cá n con 5-FU y leu covo rina ); in h ib id o r de la to p o is o m e ra s a R FS 2000; d if lu o ro m e tilo rn it in a (D M F O ); re tin o id e s com o el á c ido re tino ico ; cap e c ita b in a ; co m b re ta s ta tin a ; le u co vo rin a (LV ); o xa lip la tin o , inc lu ido el ré g im en de tra ta m ie n to con o xa lip la tin o (F O L F O X ); la p a tin ib (T yke rb ); in h ib id o re s de P K C -a , Raf, H -R as, E G F R (p o r e je m p lo , e rlo tin ib (T a rc e va )) y V E G F -A q ue reducen la p ro life ra c ió n c e lu la r y sa les, á c id os o d e riva d o s fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le s de cu a lq u ie ra de los an te rio res . A d e m á s, los m é to d o s de tra ta m ie n to p ue de n in c lu ir el uso de ra d iac ión . A d e m á s, los m é to d o s de tra ta m ie n to p ueden in c lu ir el uso de la te ra p ia fo to d in á m ica . En co n se cu e n c ia , se d ivu lg a n te ra p ia s co m b in a d a s q ue u tilizan el a g e n te de un ión a C le c 9 A y un a g e n te q u im io te ra p é u tico . S e da a c o n o c e r la a d m in is tra c ió n de l a g e n te de u n ión a C le c 9 A a un p a c ie n te so m e tid o a tra ta m ie n to con un a g e n te q u im io te ra p é u tic o . El a g e n te q u im io te ra p é u tic o p ue de s e r un a ge n te q ue in te rca la el A D N , com o, sin lim itac ió n , la d o xo rru b ic in a , el c isp la tin o , la d a u n o rru b ic in a y la e p irru b ic in a . El a g e n te in te rc a la d o r del A D N p uede se r la d oxo rru b ic in a .
El a g e n te de un ión a C le c9 A p uede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica cu a n d o se co a d m in is tra con d o xo rru b ic in a . El a gen te de un ión a C le c9 A p uede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica cu a n d o se co a d m in is tra con d o xo rru b ic in a para su uso en el tra ta m ie n to de tu m o re s o cán ce r. P o r e je m p lo , la co a d m in is tra c ió n de l a g e n te de un ión a C le c9 A y la d o xo rru b ic in a p ue de a c tu a r de fo rm a s in é rg ica para re d u c ir o e lim in a r el tu m o r o el cán cer, o ra le n tiza r el c re c im ie n to y /o la p rog re s ió n y /o la m e tá s ta s is del tu m o r o el cáncer. La co m b in a c ió n de l a g e n te de un ión a C le c 9 A y la d o xo rru b ic in a p ue de p re s e n ta r m e jo re s p e rfile s de se g u rid a d en co m p a ra c ió n con los a g e n te s u tiliz a d o s so lo s en e l co n te x to de la m o n o te ra p ia . El a ge n te de un ión a C le c9 A y la d o xo rru b ic in a pueden a d m in is tra rse a dos is in fe rio re s a las e m p le a d a s cu a n d o los a g e n te s se u tilizan en el co n te x to de la m o no te ra p ia .
Se d ivu lga una te ra p ia de co m b in a c ió n con uno o m ás a g e n te s in m u n o m o d u la d o re s , p o r e je m p lo , sin lim itac ión , a g e n te s q ue m o d u la n el pun to de co n tro l in m u n o ló g ico . El a g e n te in m u n o m o d u la d o r p ue de d ir ig irse a uno o m ás de los P D -1, PD-L1 y P D -L 2. El a g e n te in m u n o m o d u la d o r p ue de s e r un in h ib id o r de P D -1. El a g e n te in m u n o m o d u la d o r p ue de s e r un a n ticu e rp o e sp e c ífico para uno o m ás de PD -1, PD-L1 y P D -L2. P o r e je m p lo , en a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te in m u n o m o d u la d o r es un a n ticu e rp o com o, a títu lo no lim ita tivo , n ivo lum a b , (O N O -4538 /B M S - 936558 , M D X 1106 , O P D IV O , B R IS T O L M Y E R S S Q U IB B ), p e m b ro lizu m a b (K E Y T R U D A , M E R C K ), p id ilizu m a b (C T -011, C U R E T E C H ), M K -3475 (M E R C K ), B M S 936559 (B R IS T O L M Y E R S S Q U IB B ), M P D L 3280 A (R O C H E ). El a ge n te in m u n o m o d u la d o r p uede d ir ig irse a uno o m ás de los C D 137 o C D 137 L . El a ge n te in m u n o m o d u la d o r p uede s e r un a n tic u e rp o e sp e c ífico p ara uno o m á s de los C D 137 o C D 137 L . P o r e je m p lo , el a g e n te in m u n o m o d u la d o r p u e d e se r un a n ticu e rp o com o, a títu lo no lim ita tivo , u re lu m a b (ta m b ié n co n o c id o com o B M S -663513 y a n ticu e rp o a n ti-4 -1 B B ). La p rese n te p ro te ína q u im é rica puede co m b in a rse con u re lu m a b (o p c io n a lm e n te con uno o m ás de n ivo lum a b , lir ilu m a b y u re lu m a b ) para el tra ta m ie n to de tu m o re s só lid o s y /o lin fo m a no H od gk in de cé lu la s B y /o c á n c e r de ca b e za y cue llo y /o m ie lo m a m ú ltip le . El a g e n te in m u n o m o d u la d o r p uede s e r un a g e n te d ir ig id o a uno o m ás de C T LA -4 , A P 2 M 1, C D 80 , C D 86, S H P -2 y P P P 2 R 5 A . El a g e n te in m u n o m o d u la d o r p ue de s e r un a n tic u e rp o e sp e c ífico para uno o m ás de C T LA -4 , A P 2 M 1, C d 80, C D 86, S H P -2 y P P P 2R 5 A . P o r e je m p lo , el a ge n te in m u n o m o d u la d o r p ue de s e r un a n ticu e rp o com o, a títu lo no lim ita tivo , ip ilim u m a b (M D X -010 , M D X -101, Y e rvoy , B M S ) y /o tre m e lim u m a b (P fize r). La p re se n te p ro te ína q u im é rica p uede co m b in a rse con ip ilim u m a b (o p c io n a lm e n te con b a v itu x im a b ) para el tra ta m ie n to de uno o m ás de los m e lan om a s , el c á n c e r de p rós ta ta y el c á n c e r de pu lm ón. El a g e n te in m u n o m o d u la d o r p ue de d ir ig irse a C D 20. El a ge n te in m u n o m o d u la d o r p uede s e r un a n ticu e rp o e sp e c ífico de C D 20. P o r e je m p lo , el a ge n te in m u n o m o d u la d o r p uede se r un a n ticu e rp o com o, a títu lo no lim ita tivo , O fa tu m u m a b (G E N M A B ), o b in u tu zu m a b (G A Z Y V A ), A M E -133 v (A P P L IE D M O L E C U L A R E V O L U T IO N ), O c re lizu m a b (G E N E N T E C H ), T R U -015 (T R U B IO N /E M E R G E N T ), v e ltu zu m a b (IM M U -106 ).
Se d iv u lg a una te ra p ia c o m b in a d a q u e u tiliza el a g e n te de u n ión a C le c 9 A y un in h ib id o r de l p un to de con tro l. S e da a c o n o c e r la a d m in is tra c ió n del a ge n te de un ión a C le c 9 A a un p ac ien te som e tid o a tra ta m ie n to con un in h ib id o r de p un to s de con tro l. El in h ib id o r del pun to de con tro l p uede s e r un a g e n te d ir ig id o a uno o m ás de los PD -1, PD -L1, P D -L 2 y C T L A -4 (in c lu y e n d o c u a lq u ie ra de los a g e n te s a n ti-P D -1, a n ti-P D -L 1, a n ti-P D -L 2 y a n ti-C T L A -4 d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to ). El in h ib id o r del pun to de con tro l p uede se r uno o m ás de los s igu ien tes : n ivo lum a b, (O N O -4538 /B M S -936558 , M D X 1106 , O P D IV O , B R IS T O L M Y E R S S Q U IB B ), p e m b ro lizu m a b (K E Y T R U D A , M E R C K ), p id ilizu m a b (C T -011, C U R E T E C H ), M K -3475 (M E R C K ), B M S 936559 (B R IS T O L M Y E R S S Q U IB B ), M P D L 3280 A (R O C H E ), ip ilim u m a b (M D X -010 , M D X -101, Y ervoy , B M S ) y tre m e lim u m a b (P fize r). El in h ib id o r de l pun to de con tro l p ue de s e r un a n ticu e rp o co n tra P D - L1.
El a g e n te de un ión a C le c 9 A p u e d e a c tu a r s in é rg ica m e n te cu a n d o se c o a d m in is tra con el a n tic u e rp o a n ti-P D - L1. El a g e n te de un ión a C le c9 A puede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica cua nd o se co a d m in is tra con el a n ticu e rp o anti-P D -L1 p ara su uso en el tra ta m ie n to de l tu m o r o de l cán ce r. P o r e je m p lo , la co a d m in is tra c ió n de l a g e n te de u n ión a C le c 9 A y el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 puede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica p ara re d u c ir o e lim in a r el tu m o r o el cáncer, o ra le n tiza r el c re c im ie n to y /o la p rog re s ión y /o la m e tá s ta s is de l tu m o r o el cáncer. La co m b in a c ió n de l a ge n te de un ión a C le c 9 A y el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 p uede p re s e n ta r m e jo res p e rfile s de se g u rid a d en co m p a ra c ió n con los a ge n tes u tiliza d o s so lo s en el co n te x to de la m o n o te ra p ia . El a ge n te de unión a C le c9 A y el a n ticu e rp o anti-P D -L1 pueden a d m in is tra rse a d os is in fe rio re s a las e m p le a d a s cu a n d o los a g e n te s se u tilizan en el co n te x to de la m o no te ra p ia .
Se d ivu lg a n te ra p ia s co m b in a d a s q ue u tilizan el a g e n te de un ión a C le c 9 A y un a ge n te in m u n o su p re so r. S e da a c o n o c e r la a d m in is tra c ió n del a ge n te de un ión a C le c9 A a un p ac ien te so m e tid o a tra ta m ie n to con un a gen te in m u n o su p re so r. El a g e n te in m u n o s u p re s o r p ue de se r el TN F.
El a ge n te de un ión a C le c9 A p uede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica cua nd o se co a d m in is tra con TN F. El a ge n te de unión a C le c9 A puede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica cu a nd o se co a d m in is tra con T N F para su uso en el tra ta m ie n to de tu m o re s o cáncer. P o r e je m p lo , la co a d m in is tra c ió n de l a gen te de un ión a C le c 9 A y el T N F p uede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica para re d u c ir o e lim in a r el tu m o r o el cáncer, o ra le n tiza r el c re c im ie n to y /o la p rog re s ión y /o la m e tá s ta s is de l tu m o r o el cá n ce r. La c o m b in a c ió n de l a g e n te de un ión a C le c 9 A y el T N F p ue de p re s e n ta r p e rfile s de se g u rid a d m e jo ra d o s en co m p a ra c ió n con los a g e n te s u tiliz a d o s so lo s en el con te x to de la m o n o te ra p ia . El a ge n te de un ión a C le c 9 A y el T N F p ueden a d m in is tra rse a dos is in fe rio re s a las e m p le a d a s cua nd o los a g e n te s se u tilizan en el co n te x to de la m o n o te ra p ia .
El a g e n te de un ión a C le c9 A p uede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica cua nd o se u tiliza en co m b in a c ió n con la te ra p ia de cé lu la s T con re ce p to re s de a n tíg e n o s q u im é rico s (C A R ). El a g e n te de un ión a C le c 9 A p uede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica cu a n d o se u tiliza en co m b in a c ió n con la te ra p ia de c é lu la s T C A R en el tra ta m ie n to de l tu m o r o de l cán cer. El a g e n te de un ión de C le c 9 A p uede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica cua nd o se u tiliza en co m b in a c ió n con la te ra p ia de cé lu la s T C A R en el tra ta m ie n to de tu m o re s de o rigen san gu íne o . El a ge n te de un ión de C le c9 A p uede a c tu a r de fo rm a s in é rg ica cua nd o se u tiliza en co m b in a c ió n con la te ra p ia de cé lu las T C A R en el tra ta m ie n to de tu m o re s só lid os . P o r e je m p lo , el uso de l a g e n te de un ión a C le c 9 A y las c é lu la s T C A R p u e d e a c tu a r de fo rm a s in é rg ica para re d u c ir o e lim in a r el tu m o r o el cáncer, o ra le n tiza r el c re c im ie n to y /o la p rog re s ió n y /o la m e tá s ta s is del tu m o r o el cán cer. E l a g e n te de un ión de C le c 9 A de la inve n c ió n p uede in d u c ir la d iv is ió n de cé lu la s T C A R . El a g e n te de un ión a C le c9 A de la inve nc ión puede in d u c ir la p ro life ra c ió n de cé lu las T C A R . El a ge n te de un ión de C le c9 A de la in ve n c ió n p uede p re ve n ir la a n e rg ia de las cé lu la s T C A R .
La te ra p ia con cé lu la s T C A R p ue de c o m p re n d e r cé lu las T C A R d ir ig id a s a a n tíg e n o s (p o r e je m p lo a n tíg e n o s tu m o ra le s ) ta le s com o, pero no lim ita d o s a, a n h id ra sa ca rb ó n ica IX (C A IX ), 5T4, C D 19, C D 20, C d 22, C D 30, C D 33, C D 38, C D 47, C S1, C D 138 , L ew is-Y , L 1 -C A M , M U C 16 , RO R-1 IL13R a2 , gp100 , a n tíg e n o de cé lu la s m a dre de la p rós ta ta (P S C A ), a n tíg e n o de m e m b ra n a e sp e c ífico de la p rós ta ta (P S M A ), a n tíg e n o de m a d u ra c ió n de cé lu las B (B C M A ), v iru s de l p ap ilo m a h um a no tip o 16 E6 (V P H -16 e 6), C D 171, re ce p to r de fo la to a lfa (F R -a), G D 2, re ce p to r d e l fa c to r de c re c im ie n to e p id é rm ico h u m a n o 2 (H E R 2), m e so te lin a , E G F R v lII, p ro te ín a de a c tiva c ió n de fib ro b la s to s (F A P ), a n tíg e n o c a rc in o e m b rio n a rio (C E A ) y re c e p to r del fa c to r de c re c im ie n to e nd o te lia l v a s c u la r 2 (V E G F -R 2 ), a sí co m o o tros a n tíg e n o s tu m o ra le s b ien co n o c id o s en la té cn ica . O tro s a n tíg e n o s tu m o ra le s ilu s tra tivo s son, en tre o tros , M A R T -1 /M e la n -A , gp100 , D ipe p tid il p ep tid asa IV (D P P IV ), p ro te ína de un ión a la a d e n o s in a d e a m in a sa (A D A bp ), c ic lo filin a b, a n tíg e n o co lo rre c ta l a so c ia d o (C R C )- 0017 -1 A /G A 733 , A n tíg e n o c a rc in o e m b rio n a rio (C E A ) y sus e p íto p o s in m u n o g é n ico s C AP-1 y C A P -2 , e tv6 , a m ll, a n tíg e n o e sp e c ífico de la p rós ta ta (P S A ) y sus e p ítop os in m u n o g é n ico s P S A -1, P S A -2 y P S A -3 , ca d e n a ze ta de l re c e p to r de cé lu las T /C D 3 , fa m ilia M A G E de a n tíg e n o s tu m o ra le s ^ p o r e je m p lo g ., M A G E -A 1, M A G E -A 2 , M A G E -A 3 , M A G E -A 4 , M A G E -A 5 , M A G E -A 6 , M A G E -A 7 , M A G E -A 8, M A G E -A 9 , M A G E -A 10 , M A G E -A 11, M A G E -A 12 , M A G E -X p 2 (M A G E -B 2 ), M A G E -X p 3 (M A G E -B 3 ), M A G E -X p 4 (M A G E -B 4 ), M A G E -C 1, M A G E -C 2 , M A G E -C 3 , M A G E -C 4 , M A G E -C 5), a n tíg e n o s tu m o ra le s de la fa m ilia G A G E f p o r e je m p lo g ., G A G E -1, G A G E -2 , G A G E -3 , G A G E -4 , G A G E -5 , G A G E -6 , G A G E -7 , G A G E -8 , G A G E -9 ), B A G E , R AG E, L A G E -1, N AG , G n T -V , M U M -1, C D K 4 , tiro s in a sa , p53, fa m ilia M U C , H E R 2 /n e u , p21 ras, R C A S 1, a -fe to p ro te ín a , E-ca d h e rin a , a -ca ten in a , p -ca te n in a y Y -ca ten ina , p 120c tn , g p 100 P rn eH 17, P R A M E , N Y -E S O -1, cdc27, p ro te ín a de la p o lip o s is a d e n o m a to sa co li (A P C ), fod rin a , a ne x in a 37, Ig- id io tipo , p15, gp75, g a n g lió s id o s G M 2 y g D 2, p rod u cto s v ira le s com o las p ro te ín a s de l v iru s de l p ap ilo m a hum ano , a n tíg e n o s tu m o ra le s de la fa m ilia S m ad, Im p-1, NA, a n tíg e n o n u c le a r co d ifica d o p o r el V E B (E B N A )-1, g lu có g e n o fo s fo r ila sa ce reb ra l, S S X -1, S S X -2 (H O M -M e L-40), S S X -1, S S X -4 , S S X -5 , SCP-1 C T-7 , c -e rb B -2 , C D 19, C D 37, C D 56, C D 70, C D 74 , C D 138 , A G S 16 , M U C 1, G P N M B , E p-C A M , PD-L1 y PD -L2.
Los e je m p lo s de te ra p ia con cé lu las T C A R inc luyen , e n tre o tros, JC A R 014 (Ju no T h e ra p e u tic s ), JC A R 015 (Ju no T h e ra p e u tic s ), JC A R 017 (Ju no T h e ra p e u tics ), JC A R 018 (Ju no T h e ra p e u tic s ), JC A R 020 (Ju no T h e ra p e u tics ), JC A R 023 (Ju no T h e ra p e u tic s ), JC A R 024 (Ju no T h e ra p e u tic s ), C T L 019 (N o va rtis ), K T E -C 19 (K ite P ha rm a), B p X -401 (B e llicu m P h a rm a ce u tica ls ), BP X -501 (B e llicu m P h a rm a ce u tica ls ), BP X -601 (B e llicu m P h a rm a ce u tica ls ), bb2121 (B lu e b ird B io), cé lu la s C D -19 S lee p in g B e a u ty (Z io p h a rm O n co lo g y ), U C A R T 19 (C e lle c tis ), U C A R T 123 (C e lle c tis ), U C A R T 38 (C e lle c tis ), U C A R T C S 1 (C e lle c tis ), O X B -302 (O x fo rd B io M e d ica , M B -101 (M u s ta n g B io) y cé lu las T C AR d e sa rro lla d a s p o r Inn ova tive C e llu la r T h e ra p e u tics .
El a ge n te de un ión a C le c9 A p uede u tiliza rse en un m é to do de tra ta m ie n to de la e sc le ro s is m ú ltip le (E M ) en co m b in a c ió n con uno o m ás tra ta m ie n to s para la EM, inc lu ye nd o , pero sin lim ita rse a, 3 -in te rfe ro n e s , a ce ta to de g la tira m e r, in te rfe rón T, IF N -U -2 (U. S. P a te n t P ub lica tio n No. 2002 /0025304 ), e sp iro g e rm a n io s (p o r e je m p lo N -(3 -d im e tila m in o p ro p il) -2 -a za -8 ,8 -d im e til-8 -g e rm a n s p iro [4 :5 ]d e c a n e , N -(3 -d im e tila m in o p ro p il)-2 -a z a -8 ,8 - d ie til-8 -g e rm a sp iro [4 :5 ] d ecan e , N -(3 -d im e tila m in o p ro p il)-2 -a z a -8 ,8 -d ip ro p il-8 -g e rm a sp iro [4 :5 ] decane , y N -(3 -d im e tila m in o p ro p il) -2 -a za -8 , 8 -d ib u til-8 -g e rm a sp iro [4 :5 ]d e c a n e ), a ná lo g o s de la v ita m in a D (p o r e je m p lo , 1,25 (O H ) 2D 3 , (vé ase , p o r e je m p lo , P a te n te de E E .U U . n° 5.716.946 )), p ro s ta g la n d in a s ( p o r e je m p lo , la ta no pros t, b rim o n id in a , P G E 1, P g E2 y P G E 3, véa se , p o r e je m p lo , U. S. P a te n t P u b lica tio n No. 2002 /0004525 ), te tra c ic lin a y d e riva d o s (p o r e je m p lo , m in o c ic lin a y d ox ic ic lin a , véa se , p o r e je m p lo , P ub licac ión de pa ten te e s ta d o u n id e n se n° 20020022608 ), un a n ticu e rp o de un ión a V L A -4 (vé ase , p o r e je m p lo ,P u b lica c ió n de p a ten te e s ta d o u n id e n se n° 2009 /0202527 ), h o rm on a a d re n o co rtico tró fica , co rtico s te ro id e , p red n iso na , m e tilp re d n iso n a , 2 -c lo ro d e o x ia d e n o s in a , m ito xa n tro n a , su lfa sa la z in a , m e to tre xa to , a za tiop rina , c ic lo fo s fa m id a , c ic lo sp o rin a , fum a ra to , a n ticu e rp o a n ti-C D 20 ( p o r e je m p lo , ritu x im a b ) y c lo rh id ra to de tiza n id ina .
El a ge n te de un ión a C le c9 A puede u tiliza rse en co m b in a c ió n con uno o m ás a g e n te s te ra p é u tico s que tra ta n uno o m á s s ín to m a s o e fe c to s se c u n d a rio s de la EM . T a le s a g e n te s inc lu ye n , pero no se lim itan a, a m a n ta d in a , bac lo fe no , p ap ave rina , m e c liz in a , h id ro x iz in a , su lfa m e to xa zo l, c ip ro flo xa c in a , d ocusa to , p em o lina , dan tro le no , d e sm o p re s in a , d e xa m e ta so n a , to lte ro d in a , fe n ilo ín a , o x ib u tin in a , b isa co d ilo , ve n la fa x in a , a m itr ip tilin a , m e te n a m in a , c lon aze pa m , ison ia z id a , va rd e n a filo , n itro fu ra n to ín a , m u c illo id e h id ro fílico de psilio , a lp ro s ta d il, g a b a p e n tin a , n o rtrip tilina , p a ro xe tin a , b rom uro de p rop a n te lin a , m o da fin il, f lu o xe tin a , fe n a zo p ir id in a , m e tilp re d n iso lo n a , ca rb a m a ze p in a , im ip ra m ina , d ia ze p a m , s ild e n a filo , b up ro p ió n y se rtra lin a .
El a ge n te de un ión a C le c9 A p ue de u tiliza rse en un m é to d o de tra ta m ie n to de la e sc le ro s is m ú ltip le en co m b in a c ió n con una o m ás de las te ra p ia s m o d ifica d o ra s de la e n fe rm e d a d (D M T ) d e sc rita s en el p re se n te d o cu m e n to (p o r e je m p lo , los a g e n te s de la T a b la A ). En a lg u n a s re a liza c io n e s , la p re se n te inve nc ión p ro p o rc io n a un e fe c to te ra p é u tic o m e jo ra d o en co m p a ra c ió n con el uso de uno o m ás de los D M T d e s c rito s en el p re se n te d o c u m e n to (p o r e je m p lo , los a g e n te s e n u m e ra d o s en la ta b la s ig u ie n te ) sin el uno o m ás a ge n te de un ión d ivu lga do . En una re a liza c ió n , la co m b in a c ió n de l a ge n te de un ión a C le c9 A y de uno o m á s D M T s p rod u ce e fe c to s te ra p é u tico s s iné rg ico s .
Terapias modificadoras de la enfermedad ilustrativas
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La p rog re s ión de la e n fe rm e d a d de la EM p uede se r m ás in tensa , y m ás dañ ina , en las p rim e ras e ta pa s de la p rog re s ió n de la e n fe rm e d a d . En co n se cu e n c ia , en con tra de m u ch a s p o lítica s de re e m b o lso y de la p rá c tica de los m é d ico s a la luz de, p o r e je m p lo , los cos tes y la m itiga c ión de los e fe c to s se cu n d a rio s , puede se r m ás b e n e fic io so p ara el e s ta d o de la e n fe rm e d a d a la rgo p la zo de un p a c ie n te c o m e n z a r el t ra ta m ie n to con los T M E m ás in te ns ivos , p o r e je m p lo , las lla m a d a s te ra p ia s de se g u n d a línea. En a lg u n a s re a liza c io n e s , un p ac ien te es tra ta d o con un ré g im en de l a g e n te de un ión a C le c9 A en co m b in a c ió n con una te ra p ia de se g u n d a línea. E s ta co m b in a c ió n se u tiliza para re d u c ir el perfil de e fe c to s se cu n d a rio s de una o m ás te ra p ia s de se g u n d a línea. En a lg u na s re a liza c io n e s , la co m b in a c ió n se u tiliza para re d u c ir la d os is o la fre cu e n c ia de a d m in is tra c ió n de una o m ás te ra p ia s de se g u n d a línea. P o r e je m p lo , las d os is de los a g e n te s e n u m e ra d o s en la ta b la a n te r io r p ueden re d u c irse en a p ro x im a d a m e n te un 50% , o en un 40% , o en un 30% , o en un 25 % en el con te x to de la co m b in a c ió n , y la fre cu e n c ia de d o s ifica c ió n p ue de re d u c irse a la m itad , o a un te rc io , o p u e d e re du c irse , p o r e je m p lo , de d ia ria a cad a dos d ías o sem a na l, de cad a dos d ías a se m a n a l o qu in ce na l, de se m a n a l a q u in ce n a l o m e nsua l, etc. P o r co n s ig u ie n te , en a lg u n a s re a liza c io n e s , el a g e n te de u n ión de C le c 9 A a u m e n ta la a d h e re n c ia de l p a c ie n te al p e rm itir re g ím e n e s de tra ta m ie n to m ás co n ve n ie n te s . A d e m á s, a lg u n o s D M T s tie n e n una lim itac ió n de dos is de p o r v ida sug e rid a , p o r e je m p lo , para la m ito xa n tro n a , la d os is a cu m u la d a de p o r v id a d ebe lim ita rse e s tr ic ta m e n te a 140 m g /m 2, o 2 a 3 año s de te ra p ia . En a lg u n a s re a liza c io n e s , la s u p le m e n ta c ió n con el a g e n te de un ión a C le c9 A p re se rva el a cce so del pac ien te a la m ito xa n tro n a al p e rm itir una d o s ifica c ió n m ás baja o m e n o s fre cu e n te con este DM T.
El p a c ie n te p ue de s e r un p ac ie n te ingenuo , q ue no ha re c ib id o tra ta m ie n to con uno o m ás D M Ts, y el a g e n te de un ión a C le c 9 A se u tiliza p ara a m o rtig u a r los e fe c to s s e cu n d a rio s de una te ra p ia de se g u n d a línea. En co n se cu e n c ia , el p ac ie n te in g e n u o p ue de b e n e fic ia rse de las v e n ta ja s a la rgo p lazo de una te ra p ia de s e g u n d a línea al p rinc ip io de la e n fe rm e d a d . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 A se u tiliza com o te ra p ia de e n tra d a que p rece de al uso de una te ra p ia de se g u n d a línea. P o r e je m p lo , el a g e n te de un ión a C le c 9 A puede a d m in is tra rse d u ra n te un p erio do de tra ta m ie n to in ic ia l de unos 3 m e se s para e s ta b iliz a r la e n fe rm e d a d y luego el p a c ie n te p ue de p a s a r a una te ra p ia de m a n te n im ie n to de un a g e n te de se g u n d a línea.
G e n e ra lm e n te se c re e q ue los p a c ie n te s in g e n u o s son m ás p ro p e n so s a re s p o n d e r a la te ra p ia en c o m p a ra c ió n con los p a c ie n te s q ue han re c ib id o , y ta l v e z fra ca sa d o uno o m ás DM T. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión a C le c9 a se u tiliza en p ac ien tes que han re c ib id o , y ta l ve z fra ca sa d o , uno o m ás DM T. P o r e je m p lo , el a ge n te de un ión a C le c 9 A p uede a u m e n ta r el e fe c to te ra p é u tico en los p ac ie n te s que han rec ib ido , y ta l ve z fra ca sa d o uno o m ás D M T y p uede p e rm itir q ue e s to s p a c ie n te s re sp o n d a n com o los p ac ie n te s ingenuos.
El p a c ie n te p uede h a b e r re c ib id o o puede e s ta r re c ib ie n d o tra ta m ie n to con uno o m ás D M T s y puede no e s ta r re sp o n d ie n d o bien. P o r e je m p lo , el p a c ie n te p u e d e s e r re fra c ta rio o re s p o n d e r m a l a uno o m á s D M Ts. En a lg u na s re a liza c io n e s , el p ac ien te es re fra c ta rio , o re spo nd e m a l a uno o m ás de te r iflu n o m id a (A U B A G IO (G E N Z Y M E )); in te rfe ró n b e ta -1a (A V O N E X (B IO G E N ID EC ); in te rfe rón beta-1 b (B E T A S E R O N (B A Y E R H E A L T H C A R E P H A R M A C E U T IC A L S , INC .); a ce ta to de g la tira m e r (C O P A X O N E (T E V A N E U R O S C IE N C E ); in te rfe rón b e ta -1b (E X T A V IA (N O V A R T IS P H A R M A C E U T IC A L S C O R P .); f in g o lim o d (G IL E N Y A (N O V A R T IS P H A R M A C E U T IC A L S C O R P .); a le m tu zu m a b (L E M T R A D A (G E N Z Y M E ); m ito xa n tro n a (N O V A N T R O N E (E M D S E R O N O ); in te rfe rón beta-1a p eg ila d o (P L E G R ID Y (B IO G E N ID E C ); in te rfe ró n b e ta -1 a (R E B IF (E M D S E R O N O , INC .); d im e tilfu m a ra to (B G -12 ) (T E C F ID E R A (B IO G E N ID E C ); y n a ta lizu m a b (T Y S A B R I (B IO G E N ID E C ). El uno o m ás a g e n te s de unión d iv u lg a d o s p ue de n d a r lu g a r a un b e n e fic io te ra p é u tico de uno o m ás D M T s en el p ac ien te y, p o r lo tan to , reduce o e lim in a la fa lta de re sp u e s ta al D M T. P o r e je m p lo , e s to p ue de a h o rra rle al p a c ie n te la te ra p ia con uno o m á s D M T s a una d os is o fre cu e n c ia m ás alta.
En los p ac ie n te s con una e n fe rm e d a d m ás a gre s iva , un e n fo q u e es un m o de lo de tra ta m ie n to de ind u cc ión , en el que se a d m in is tra ría p rim e ro una te ra p ia con fu e rte e fica c ia pero con fu e rte s p re o cu p a c io n e s de seg u rida d , seg u id a de una te ra p ia de m a n te n im ie n to . Un e je m p lo de e ste m o d e lo podría in c lu ir un tra ta m ie n to in ic ia l con a le m tu zu m a b , se g u id o de IFN -p, G A o B G -12. El uno o m ás a ge n tes a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s p ueden u tiliza rse para e v ita r la n eces id ad de c a m b ia r de te ra p ia para el m a n te n im ie n to . El uno o m á s a g e n te s de un ión d ivu lg a d o s p ue de n u tiliza rse com o te ra p ia de m a n te n im ie n to de uno o m ás D M Ts, in c lu ye n d o te ra p ia s de se g u n d a línea. El uno o m ás a ge n tes de u n ión d iv u lg a d o s p ue de n u tiliza rse com o p rim e ra te ra p ia en u na ind u cc ión , se g u id a de o tro D M T co m o te ra p ia de m a n te n im ie n to , com o , p o r e je m p lo , una te ra p ia de p rim e ra línea.
El uno o m ás a g e n te s a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s p ueden a d m in is tra rse d u ra n te un p e río do de tra ta m ie n to in ic ia l de a p ro x im a d a m e n te 3 m e se s para e s ta b iliz a r la e n fe rm e d a d y luego el pac ien te puede p a sa r a una te ra p ia de m a n te n im ie n to de un a g e n te de p rim e ra línea.
El uno o m ás a g e n te de u n ión d ivu lg a d o p uede s e r u tiliza d o para re d u c ir uno o m ás e fe c to s s e c u n d a rio s de un DM T, in c lu ye n d o sin lim itac ión cu a lq u ie r a ge n te d ivu lg a d o aquí. P o r e je m p lo , el uno o m ás a ge n tes a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s pueden usa rse en un ré g im en que p erm ite a h o rra r dos is de uno o m ás D M T s y, p o r lo tan to , resu lta en m e no s e fe c to s secu n d a rio s . P o r e je m p lo , el uno o m ás a ge n tes a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s pueden re d u c ir uno o m ás e fe c to s s e cu n d a rio s de A U B A G IO o a g e n te s re la c io n a d o s , q ue p ueden in c lu ir a d e lg a za m ie n to de l cabe llo , d ia rrea , g ripe , n áuseas , p rue b as h ep á tica s a n o rm a le s y e n tu m e c im ie n to u h o rm ig u e o inu sua l en las m a no s o los p ies (p a re s te s ia s ), n ive les de g ló b u lo s b lancos, que pueden a u m e n ta r el riesgo de in fe cc io ne s ; a u m e n to de la p res ión s a n g u ín e a ; y d a ñ o h e p á tico g rave . El uno o m ás a g e n te s a g lu tin a n te s d iv u lg a d o s p ue de n re d u c ir uno o m ás e fe c to s s e cu n d a rio s de A V O N E X o a g e n te s re la c io n a d o s q ue inc lu ye n s ín to m a s p a re c id o s a los de la g ripe tra s la inye cc ió n , d e p re s ió n , a n e m ia leve, a n o m a lía s hep á ticas , re a cc io n e s a lé rg ica s y p ro b le m a s ca rd ía co s . El uno o m ás a ge n tes a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s p ue de n re d u c ir uno o m ás e fe c to s s e cu n d a rio s de B E T A S E R O N o a g e n te s re la c io n a d o s que inc lu ye n s ín to m a s s im ila re s a los de la g ripe d e sp u é s de la inye cc ió n , re a cc io n e s en el s itio de la inyecc ión , re a cc io n e s a lé rg icas , d ep re s ió n , a n o rm a lid a d e s h ep á tica s y re cue n to s ba jos de g ló b u lo s b lancos. El uno o m ás a g e n te s a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s pueden re d u c ir uno o m ás e fe c to s se cu n d a rio s de la C O P A X O N A o a ge n tes re la c io n a d o s que inc luyen re a cc io n e s en el lu g a r de la inye cc ió n , va so d ila ta c ió n (d ila ta c ió n de los va so s sa n g u ín e o s ); d o lo r en el pecho ; una re a cc ió n in m e d ia ta m e n te d e sp u é s de la inye cc ió n , que inc lu ye a ns ied ad , d o lo r en el pecho , p a lp ita c io n e s , fa lta de a lie n to y rubor. El uno o m ás a g e n te s a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s p ue de n re d u c ir uno o m ás e fe c to s se cu n d a rio s de E X T A V IA o a g e n te s re la c io n a d o s que inc lu ye n s ín to m a s p a re c id o s a los de la g ripe tra s la inye cc ió n , re a cc io n e s en el lu g a r de la inye cc ió n , re a cc io n e s a lé rg icas , d ep re s ió n , a n o m a lía s h ep á tica s y re cu e n to s ba jos de g ló b u lo s b lancos. El uno o m ás a g e n te s a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s pueden re d u c ir uno o m ás e fe c to s s e cu n d a rio s de G IL E N Y A o a g e n te s re la c io n a d o s q ue inc lu ye n d o lo r de cabeza , g ripe , d ia rrea , d o lo r de e sp a ld a , e le v a c io n e s de las e n z im a s h ep á ticas , tos, d ism in u c ió n de l ritm o ca rd ía co tra s la p rim e ra dos is , in fe cc io n e s e h in cha zón del ojo. El uno o m ás a g e n te s a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s pueden re d u c ir uno o m ás e fe c to s se cu n d a rio s de L E M T R A D A o a g e n te s re la c io n a d o s q ue inc lu ye n e rup c ión cu tá ne a , d o lo r de cab eza , fieb re , co n g e s tió n nasal, n áu se as , in fe cc ió n del tra c to urina rio , fa tiga , inso m n io , in fe cc ió n de l tra c to re sp ira to rio sup erio r, u rtica ria , p rurito , tra s to rn o s de la g lá n d u la tiro id e s , in fe cc ió n p o r h on go s, d o lo r en las a rticu la c io n e s , e x tre m id a d e s y e sp a ld a , d ia rrea , v ó m ito s , e n ro je c im ie n to y re a cc io n e s a la in fus ión ( in c lu ye n d o n áuseas , u rtica ria , p icor, insom n io , e sca lo fríos , e n ro je c im ie n to , fa tig a , d ificu lta d para resp ira r, ca m b io s en el se n tid o del gus to , ind ig es tió n , m a re os , do lo r). El uno o m ás a g e n te s a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s p ueden re d u c ir uno o m ás e fe c to s se cu n d a rio s de N O V A N T R O N E o a ge n tes re la c io n a d o s que inc lu ye n o rina a zu l-ve rd e 24 horas d e sp u é s de la a d m in is tra c ió n ; in fe cc io ne s , sup re s ió n de la m é du la ó sea (fa tiga , h em a to m a s, re cue n to s ba jos de cé lu la s sa n g u ín e a s ), n áuseas , a d e lg a za m ie n to de l cabe llo , in fe c c io n e s de la ve jig a , llag a s en la boca y d a ñ o s g ra ve s al h íg a d o y a l co ra zó n . El uno o m ás a g e n te s a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s p ueden re d u c ir uno o m ás e fe c to s se cu n d a rio s de la p L e G R ID IA o a g e n te s re la c io n a d o s que inc luyen s ín to m a s p a re c id o s a los de la g rip e tra s la inye cc ió n , re a cc io n e s en el lu g a r de la inye cc ió n , d ep re s ió n , a n e m ia leve, a n o m a lía s h ep á ticas , re a cc io n e s a lé rg ica s y p ro b le m a s ca rd ía co s. El uno o m ás a g e n te s a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s p ue de n re d u c ir uno o m á s e fe c to s s e cu n d a rio s de l R E B IF o a g e n te s re la c io n a d o s q ue inc lu ye n s ín to m a s p a re c id o s a los de la g rip e tra s la inye cc ió n , re a cc io n e s en el lu g a r de la inye cc ió n , a n o m a lía s h e p á tica s , d e p re s ió n , re a cc io n e s a lé rg ica s y re cu e n to s b a jo s de g ló b u lo s ro jos o b lancos . En a lg u n a s re a liza c io n e s , uno o m ás a g e n te s a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s pueden re d u c ir uno o m ás e fe c to s se cu n d a rio s de T E C F ID E R A o a g e n te s re la c io n a d o s que inc luyen ru b o r (se n sa c ió n de c a lo r o p ico r y un ru b o r en la p ie l), p ro b le m a s g a s tro in te s tin a le s (n áu sea s , d ia rrea , d o lo r a b d o m in a l), e rup c ión cu tá ne a , p ro te ín a s en la o rina , e le vac ión de las e n z im a s hep á ticas ; y re du cc ió n de l re cue n to de lin fo c ito s (g ló b u lo s b la n co s) en sangre . El uno o m ás a ge n tes a g lu tin a n te s d ivu lg a d o s pueden re d u c ir uno o m ás e fe c to s se cu n d a rio s de l T Y S A B R I o de los a g e n te s re la c io n a d o s que inc lu ye n d o lo r de cabeza , fa tiga , in fe cc io ne s de l tra c to u rina rio , d ep re s ió n , in fe cc io n e s del tra c to re sp ira to rio , d o lo r a rticu la r, m a le s ta r e s to m a ca l, m o le s tia s a b d o m in a le s , d ia rrea , v a g in itis , d o lo r en los b razo s o las p ie rnas, sa rpu llido , re a cc io n e s a lé rg ica s o de h ip e rse n s ib ilid a d d en tro de las dos horas p o s te rio re s a la in fus ión (m are o s, fieb re , sa rpu llido , p icazón , náuseas, e n ro je c im ie n to , p res ió n a rte ria l baja , d ificu lta d para re sp ira r, d o lo r en el pecho).
Se d ivu lg a una te ra p ia de co m b in a c ió n con uno o m ás a g e n te s q u im é rico s d e sc rito s en W O 2013 /10779 , W O 2015 /007536 , W O 2015 /007520 , W O 2015 /007542 y W O 2015 /007903.
Se d ivu lg a n los a n tiin fe cc io so s com o a g e n te s te ra p é u tico s a d ic io n a le s . El a n tiin fe cc io so p uede s e r un a gen te a n tiv ira l, inc lu ye nd o , pero sin lim ita rse a, A b a ca v ir, A c ic lo v ir, A d e fo v ir, A m p re n a v ir , A ta za n a v ir, C ido fo v ir, D arunav ir, D e la v ird in a , D ida no s in a , D ocosa no l, E fav ire nz , E lv ite g rav ir, E m tric ita b in a , E n fu v irtida , E tra v irina , F a m c ic lo v ir y F o sca rn e t. El a n tiin fe cc io so puede se r un a ge n te a n tib a c te ria n o que inc luya , en tre o tros, a n tib ió tico s de ce fa lo s p o rin a (ce fa le x in a , ce fu ro x im a , ce fa d ro x il, ce fa zo lin a , ce fa lo tin a , ce fa c lo r, ce fa m a n d o le , ce fo x itina , ce fp ro z il y ce fto b ip ro le ); a n tib ió tico s de flu o ro q u in o lo n a (c ip ro , Levaqu in , flox in , teq u in , a ve lox y norflox); a n tib ió tico s de te tra c ic lin a (te tra c ic lin a , m in o c ic lin a , o x ite tra c ic lin a y d o x ic ic lin a ); a n tib ió tico s de p en ic ilin a (a m o x ic ilin a , am p ic ilina , p en ic ilin a V, d ic lo xa c ilin a , ca rb e n ic ilin a , va n c o m ic in a y m e tic ilin a ) a n tib ió tico s m o n o b a c tá m ico s (a z tre o n a m ); y a n tib ió tico s ca rb a p e n é m ico s (e rta p e n e m , d orip en e m , im ip e n e m /c ila s ta tin a y m e ro p e n e m ). Los a n tiin fe cc io so s p ueden in c lu ir a g e n te s a n tip a lú d ic o s (p o r e je m p lo , c lo roq u in a , q u in ina , m e flo qu ina , p rim a qu ina , dox ic ic lin a , a rte m é te r/lu m e fa n tr in a , a to va cu o n a /p ro g u a n il y su lfa d o x in a /p ir im e ta m in a ), m e tro n id a zo l, t in id a zo l, ive rm ec tina , p a m o a to de p iran te l y a lb e nd azo l.
El a g e n te te ra p é u tico a d ic io n a l p uede s e r un a g e n te inm u n o su p re so r. El a g e n te in m u n o s u p re s o r p uede se r un a g e n te a n tiin fla m a to rio , com o un a ge n te a n tiin fla m a to r io e s te ro id e o o un a ge n te a n tiin fla m a to r io no e s te ro id e o (A IN E ). Los e s te ro id e s , en p a rtic u la r los co rtico s te ro id e s su p ra rre n a le s y sus a n á lo g o s s in té ticos , son b ien co n o c id o s en la té cn ica . Los e je m p lo s de c o rtico s te ro id e s ú tiles inc luyen , sin lim itac ió n , h id ro x iltr ia m c in o lo n a , a lfa -m e til d e xa m e ta so n a , b e ta -m e til b e ta m e ta so n a , d ip ro p io n a to de b e c lo m e ta so n a , b en zo a to de b e ta m e ta so n a , d ip ro p io n a to de b e ta m e ta so n a , va le ra to de b e ta m e ta so n a , v a le ra to de c lob e ta so l, d e so n id a d e so xym e th a so n e , d e xa m e th a so n e , d if lo ra so n e d ia ce ta te , d if lu co rto lo n e va le ra te , flu a d re n o lo n e , f lu c lo ro lo n e ace ton ide , flu m e th a so n e p iva la te , f lu o s in o lo n e a ce ton ide , flu o c in o n id e , f lu co rtin e bu ty les te r, f lu o co rto lo n e , f lu p re d n id e n e (flu p re d n y lid e n e ) ace ta te , flu ra n d re n o lo n e , h a lc inó n id o , a ce ta to de h id ro co rtiso n a , b u tira to de h id ro co rtiso n a , m e tilp re d n iso lo n a , a ce tó n id o de tr ia m c in o lo n a , co rtiso na , co rto d o xo n a , f lu ce tó n id o , flu d ro co rtiso n a , d ia ce ta to de d iflu o ro so n a , a ce tó n id o de flu ra d re n o lo n a , m e driso na , am cin a fe l, a m c in a fid a , b e ta m e ta so n a y el res to de sus é s te res , c lo ro p re d n iso n a , c lo co rte lo n a , c le sc in o lo n a , d ic lo rison a , d iflu p re d n a to , f lu c lo ro n id a , f lu n iso lid a , f lu o ro m e ta lo n a , flu p e ro lo n a , f lu p re d n iso lo n a , h id ro co rtiso n a , m e p re d n iso n a , p a ra m e ta so n a , p re d n iso lo n a , p red n iso na , d ip ro p io n a to de b e c lo m e ta so n a . (A IN E ) q ue p ueden u tiliza rse inc lu ye n , e n tre o tros, el á c id o sa lic ílico , el á c ido a ce til sa lic ílico , el sa lic ila to de m e tilo , el s a lic ila to de g lico l, las sa lic ilm id a s , el á c id o b e n c ílico -2 ,5 -d ia ce to x ib e n zo ico , el ibu p ro fe no , el fu lin d a co , el nap ro xe no , el ke to p ro fen o , el e to fe n a m a to , la fe n ilb u ta zo n a y la ind o m eta c in a . El a gen te in m u n o s u p re s o r p uede s e r c ito s tá tico , com o a g e n te s a lq u ila n te s , a n tim e ta b o lito s (p o r e je m p lo , a za tiop rina , m e to tre xa to ), a n tib ió tico s c ito tóx icos , a n ticu e rp o s (p o r e je m p lo , b as ilix im a b , d a c lizu m a b y m u ro m on ab ), a n tiin m u n o filin a s (p. ej., c ic lo spo rin a , ta c ro lim u s , s iro lim us), in te rfe ron es , o p io ide s , p ro te ína s de un ión al TN F, m ico fe n o la to s y p e q u e ñ o s a g e n te s b io ló g ico s (p. ej., fin g o lim o d , m irio c ina ). O tros a g e n te s a n tiin fla m a to r io s se d esc rib e n , p o r e je m p lo , en U .S. P a te n t n° 4.537.776.
El a g e n te de un ión a C le c 9 A d e sc rito en el p rese n te d o cu m e n to p uede in c lu ir d e riva d o s m o d ifica d o s , es decir, m e d ia n te la un ión c o va le n te de cu a lq u ie r tip o de m o lé cu la a la co m p o s ic ió n , de m a ne ra que la un ión co va le n te no im p ida la a c tiv id a d de la co m p o s ic ió n . P o r e je m p lo , pero no a m o do de lim itac ió n , los d e riva d o s inc lu ye n la co m p o s ic ió n q ue ha s ido m o d ifica d a por, e n tre o tra s cosas, g lico s ila c ió n , lip id ac ió n , a ce tila c ió n , p eg ilac ión , fo s fo r ila c ió n , a m ida c ió n , d e riva c ió n p o r g ru p o s p ro te c to re s /b lo q u e a n te s con oc id os , e sc is ió n p ro te o lítica , un ión a un liga n do ce lu la r u o tra p ro te ína , e tc. C u a lq u ie ra de las n u m e ro sa s m o d ifica c io n e s q u ím ica s p uede lleva rse a cabo m e d ia n te té c n ica s co n o c id a s , in c lu ye n d o , p e ro s in lim ita rse a la e sc is ió n q u ím ica e sp e c ífica , a ce tila c ión , fo rm ila c ió n , s ín te s is m e ta b ó lica de tu n ic a m ic in a , etc. En o tra s re a liza c io n e s , el a g e n te de u n ión a C le c 9 A d e sc rito en el p re se n te d o cu m e n to co m p re n d e a d e m á s un a ge n te c ito tóx ico , que com p re nd e , en re a liza c io n e s ilus tra tiva s , una to x in a , un a g e n te q u im io te ra p é u tico , un ra d io isó to p o y un a g e n te que ca u sa a p o p to s is o m u erte ce lu la r. D ich os a ge n tes p ueden co n ju g a rse con una co m p o s ic ió n d e sc rita en el p re se n te d ocum e n to .
El a g e n te de un ión de C le c9 A d e sc rito en el p rese n te d o cu m e n to p uede m o d ifica rse p o s tra s la c io n a lm e n te para a ñ a d ir e le m e n to s e fe c to re s com o e n la za d o re s qu ím icos , e le m e n to s d e te c ta b le s com o, p o r e je m p lo , tin te s flu o re sce n te s , e nz im as , sus tra to s , m a te ria le s b io lu m in isce n te s , m a te ria le s ra d ia c tivo s y e le m e n to s q u im io lu m in isce n te s , o e le m e n to s fu n c io n a le s com o, p o r e je m p lo , e s tre p ta v id in a , a v id ina , b io tina , una c ito to x in a , un a g e n te c ito tó x ico y m a te ria le s ra d ia c tivo s .
Los a ge n tes c ito tó x ico s ilus tra tivo s inc luyen , pero no se lim itan a, m e to tre xa to , a m in o p te rin a , 6 -m e rca p to p u rin a , 6 -tio g u a n in a , c ita ra b in a , 5 -flu o ro u ra c ilo d e ca rb a z in a ; a g e n te s a lq u ila n te s com o la m e c lo re ta m in a , la tioe pa , el c lo ra m b u c il, el m e lfa lán , la ca rm u s tin a (B S N U ), la m ito m ic in a C, la lom us tina (C C N U ), la 1 -m e tiln itro so u re a , la c ic lo fo s fa m id a , la m e c lo re ta m in a , el busu lfán , el d ib ro m o m a n ito l, la e s tre p to zo to c in a , la m ito m ic in a C, el c isd ic lo ro d ia m in a p la tino (II) (D D P ), el c isp la tin o y el ca rb o p la tin o (p a ra p la tin o ); las a n tra c ic lin a s inc lu ye n la d a u n o ru b ic in a (a n te s d a u n o m ic in a ), la d o xo ru b ic in a (a d ria m ic in a ), la d e to ru b ic in a , la ca rm in o m ic in a , la ida ru b ic in a , la e p iru b ic in a , la m ito x a n tro n a y el b isa n tre n o los a n tib ió tico s in c lu ye n la d a c tin o m ic in a (a c tin o m ic in a D), la b le o m ic in a , la ca lich e a m ic in a , la m itra m ic in a y la a n tim ic in a (A M C ); y los a g e n te s a n tim itó tico s co m o los a lca lo id e s de la v inca , la v in c r is tin a y la v in b la s tin a . O tros a g e n te s c ito tó x ic o s son el p a c lita xe l (ta xo l), la ric ina, la e xo to x in a de p se u d o m o n a s , la g e m c ita b in a , la c ito ca la s in a B, la g ra m ic id in a D, el b rom uro de e tid io , la e m etina , el e to pó s ido , el te n o p ó s id o , la co lch ic in a , la d ih id ro x ia n tra c in a d iona, 1 -d e h id ro te s to s te ro n a , g lu co co rtico id e s , p roca ína , te tra ca ín a , lidoca ína , p ro p ra n o lo l, p u ro m ic ina , p ro ca rb a z in a , h id ro x iu rea , a sp a ra g in a sa , co rtico s te ro id e s , m ito ta n o (0 ,P '-(D D D )), in te rfe ro n e s y m e zc la s de e s to s a g e n te s c ito tóx icos .
O tros a g e n te s c ito tó x ico s inc luyen , pero no se lim itan a, a g e n te s q u im io te ra p é u tic o s ta le s com o ca rbo p la tin o , c isp la tin o , p ac lita xe l, g e m c ita b in a , c a lich e a m ic in a , d o xo rru b ic in a , 5 -flu o ro u ra c ilo , m ito m ic in a C, a c tin o m ic in a D c ic lo fo s fa m id a , v in c ris tin a , b le o m ic in a , a n ta g o n is ta s de l V E G F , a n ta g o n is ta s de l EG F R , p la tinas , ta xo le s , irin o te cá n , 5 -flu o ro u ra c ilo , g em c ita b in a , leu covo rina , es te ro id e s , c ic lo fo s fa m id a , m e lfa lán , a lca lo id e s de la v in ca (p o r e jem p lo , v in b la s tin a , v in c ris tin a , v in d e s in a y v in o re lb in a ), m u stin as , inh ib id o re s de la tiro s in a q u in asa , ra d io te rap ia , a n ta g o n is ta s de las h o rm o n a s sexu a le s , m o d u la d o re s se le c tivo s de los re ce p to re s de a n d ró g e n o s , m o d u la d o re s se le c tivo s de los re ce p to re s de e stró ge n os , a n ta g o n is ta s del P D G F, a n ta g o n is ta s del TN F , a n ta g o n is ta s de la IL-1, in te rle u c in a s ( p o r e je m p lo , IL -12 o IL-2), a n ta g o n is ta s de IL-12R , a n tic u e rp o s m o n o c lo n a le s c o n ju g a d o s con to x in a s , a n ticu e rp o s m o n o c lo n a le s e sp e c ífico s de a n tíg e n o s tu m o ra le s , E rb itux , A va s tin , P e rtu zu m a b , a n ticu e rp o s an ti-C D 20 , R itu xan , o cre lizum a b , o fa tum a b , D X L625 , H E R C E P T IN ® , o cu a lq u ie r co m b in a c ió n de los m ism os . Las e n z im a s tó x ic a s de p la n ta s y b ac te ria s , com o la ric ina, la to x in a de la d ifte ria y la to x in a de P se u d o m o n a s , p ue de n co n ju g a rse con los a g e n te s te ra p é u tico s (p o r e je m p lo , los a n ticu e rp o s ) para g e n e ra r re a c tivo s que m aten a un tip o de cé lu la e sp e c ífico (Y o u le , e t al., P roc. Nat'l A cad . Sci. U S A 77 :5483 (1980 ) G illila nd , e t al., P roc. N at'l A cad . Sci. U S A 77 :4539 (1980 ) K ro lick , e t al., P roc. N at'l A cad . Sci. U S A 77 :5419 (1980 )).
O tro s a g e n te s c ito tó x ico s inc lu ye n rib o n u c le a sa s c ito tó x ica s com o las d e sc rita s p o r G o ld e n b e rg en U .S. Pat. N° 6.653.104. Las re a liza c io n e s de la inve nc ión ta m b ié n se re fie ren a ra d io in m u n o co n ju g a d o s en los que un ra d io n ú c lid o que em ite p a rtícu la s a lfa o beta se a co p la de fo rm a e s ta b le al a g e n te de un ión de C lec9A , con o sin el uso de un a ge n te fo rm a d o r de com p le jo s . E s tos ra d io n ú c lid o s inc luyen e m iso re s beta com o el F ó sfo ro -32 , el E sca n d io -47 , el C ob re -67 , el G a lio -67 , el Itrio -88 , el Itrio -90 , la L o d ina -125 , la L o d in a -131 , el S a m a rio -153 , el L u te c io -177, el R e n io -186 o el R en io -188 , y e m iso re s a lfa co m o la A s ta tin a -211 , el P lom o-212 , el B ism u to -212 , el B ism u to -213 o el A c tin io -225.
Las fra cc io n e s d e te c ta b le s ilus tra tiva s inc luyen , pero no se lim itan a, p e ro x id a sa de rá ba n o p icante , a ce tilco lin e s te ra sa , fo s fa ta sa a lca lina , b e ta -g a la c to s id a sa y luc ife rasa . O tros m a te ria le s flu o re sce n te s ilu s tra tivo s son, e n tre o tros , la ro da m in a , la f lu o re sce ín a , el iso tio c ia n a to de flu o re sce ín a , la u m b e life ro n a , la d ic lo ro tr ia z in ila m in a , la fico e ritr in a y el c lo ru ro de d an silo . O tras fra cc io n e s q u im io lu m in isc e n te s ilu s tra tiva s inc luyen , e n tre o tras , el lum ino l. O tro s m a te ria le s b io lu m in isce n te s ilu s tra tivo s son, e n tre o tros , la lu c ife rin a y la a eq uo rin a . O tros m a te ria le s ra d ia c tivo s ilus tra tivo s son, e n tre o tros, la lod in a-125 , el ca rb o n o -14 , el a zu fre -35 , el tr itio y el fós fo ro -32.
Métodos de tratamiento
Los m é to d o s y las c o m p o s ic io n e s d e sc rita s en el p re se n te d o cu m e n to tie n e n a p lica c ió n para tra ta r d ive rsas e n fe rm e d a d e s y tra s to rn o s , inc lu ye nd o , p e ro no lim itá n d o se al cán ce r, las in fe cc io ne s , los tra s to rn o s in m u n o ló g ico s y las e n fe rm e d a d e s o co n d ic io n e s in fla m a to ria s .
A d e m á s, cu a lq u ie ra de los p rese n te s a g e n te s p uede s e r para uso en el tra ta m ie n to , o la fa b rica c ió n de un m e d ica m e n to para el tra ta m ie n to de v a r ia s e n fe rm e d a d e s y tra s to rn o s , inc lu ye nd o , pero no lim itad o a cáncer, in fe cc io ne s , tra s to rn o s in m u n o ló g ico s , e n fe rm e d a d e s o co n d ic io n e s in fla m a to ria s , y e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s .
Se d ivu lg a el tra ta m ie n to de, o un p a c ie n te que tie n e cán ce r. T a l y com o se u tiliza aqu í, el c á n c e r se re fie re a c u a lq u ie r c re c im ie n to in co n tro la d o de cé lu la s que p ueda in te rfe r ir con el fu n c io n a m ie n to n o rm a l de los ó rg a n o s y s is te m a s co rp o ra le s , e inc lu ye ta n to los tu m o re s p rim a rio s com o los m e ta s tá s ico s . Los tu m o re s o cá n ce re s p rim a rio s q ue m ig ra n de su u b icac ión o rig in a l y s ie m b ra n ó rg a n o s v ita le s p ueden a ca b a r p ro vo ca n d o la m u e rte del su je to p o r el d e te r io ro fu n c io n a l de los ó rg a n o s a fe c ta do s . U na m e tá s ta s is es una cé lu la ca n ce ro sa o un g rup o de cé lu las ca n ce ro sa s , d is tin ta de la loca liza c ión del tu m o r p rim ario , que resu lta de la d ise m in a c ió n de las cé lu las ca n ce ro sa s de l tu m o r p rim a rio a o tras p artes del cue rpo . Las m e tá s ta s is p ueden a ca b a r p ro vo ca n d o la m u erte de l su je to . P o r e je m p lo , los cán ce re s p ueden in c lu ir cá n ce re s b en ign os y m a lign os , pó lipos , h ip e rp la s ia , a sí com o tu m o re s la te n te s o m ic ro m e tá s ta s is .
Los cá n ce re s ilu s tra tivo s que p ueden tra ta rs e inc luyen , en tre o tros, el ca rc in o m a de cé lu las basa les , el c á n c e r del tra c to b ilia r; el c á n c e r de ve jig a ; el c á n c e r de hueso ; el c á n c e r de ce re b ro y de l s is te m a n e rv io so cen tra l; el c á n c e r de m am a; el c á n c e r de p e rito ne o ; el c á n c e r de cu e llo u te rino ; el co r io ca rc in o m a ; el c á n c e r de co lon y recto; el c á n c e r de te jid o co n e c tivo c á n c e r de l a p a ra to d ig e s tivo ; c á n c e r de e n d o m e trio ; c á n c e r de e só fag o ; c á n c e r de ojo; c á n c e r de ca b e za y cue llo ; c á n c e r g á s trico (in c lu id o el c á n c e r g a s tro in te s tin a l); g lio b la s to m a ; ca rc in o m a h ep á tico ; h ep a tom a; n e o p la s ia in trae p ite lia l; c á n c e r de riñón o de riñón; c á n c e r de la ringe ; leu cem ia ; c á n c e r de h ígado ; c á n c e r de p u lm ó n fp o r e je m p lo , c á n c e r de pu lm ó n de cé lu las p eq ue ña s, c á n c e r de pu lm ó n de cé lu la s no p eq ue ña s, a d e n o ca rc in o m a de p u lm ón y ca rc in o m a e sca m o so de p u lm ó n); m e lan om a ; m ie lom a ; n e u ro b la s to m a ; c á n c e r de la cav ida d o ra l (lab io , lengua , boca y fa ring e ); c á n c e r de ovario ; c á n c e r de p áncreas ; c á n c e r de prósta ta ; re tin o b la s to m a ; ra b d o m io sa rco m a ; c á n c e r de recto ; c á n ce r de l s is te m a re sp ira to rio ; ca rc in o m a de las g lá n d u la s sa liva le s ; sa rco m a ; c á n c e r de piel; c á n c e r de cé lu las e sca m osas ; c á n c e r de es tó m ag o ; c á n c e r de te s tícu lo ; c á n c e r de tiro id e s ; c á n c e r de ú te ro o de e n d o m e trio ; c á n c e r de l a p a ra to u rina rio ; c á n c e r de vu lva ; lin fom a, inc lu ido el lin fo m a de H od gk in y el lin fo m a no h od gk in ia no , a s í co m o e l lin fom a de c é lu la s B (in c lu id o el lin fo m a no h o d g k in ia n o (L N H ) de ba jo g ra d o /fo licu la r; lin fo m a lin fo c ítico p e q u e ñ o (LS ); lin fo m a no h o d g k in ia n o de g rad o in te rm e d io /fo licu la r; lin fo m a no h o d g k in ia n o d ifuso de g rad o in te rm e d io ; lin fo m a no h o d g k in ia n o in m u n o b lá s tico de g rad o a lto; lin fo m a no h o d g k in ia n o de cé lu la s p e q u e ñ a s de g rad o a lto ; lin fo m a de e n fe rm e d a d vo lu m in o sa ; lin fo m a de cé lu la s del m anto ; lin fo m a re la c io n a d o con el S ID A ; y m a c ro g lo b u lin e m ia de W a ld e n s tro m ; le u ce m ia lin fo c ítica c ró n ica (LLC ); la le u ce m ia lin fo b lá s tica a gu da (LLA ); la leu cem ia m ie lo id e a gu da (L M A ); la leu cem ia de cé lu las p ilosas; la leu cem ia m ie lo b lá s tica c ró n ica ; a s í co m o o tro s c a rc in o m a s y sa rco m a s; y el tra s to rn o lin fo p ro life ra tivo p o s tra sp la n te (T LP ), a sí com o la p ro life ra c ió n v a s c u la r a n o rm a l a so c ia d a a las fa co m a to s is , el e d e m a (p o r e je m p lo , el a so c ia d o a los tu m o re s c e re b ra le s ) y el s ín d ro m e de M eigs.
En va r ia s re a liza c io n e s , la p re se n te inve nc ión p ro p o rc io n a a g e n te s de un ión a C le c9 A que fo rm an parte de una q u im e ra que co m p re n d e a d e m á s a g e n te s de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o s para su uso en el tra ta m ie n to del cáncer. En a lg u n a s re a liza c io n e s , los a g e n te s de un ión a C le c9 A de la inve nc ión re du cen y/o e lim ina n s ig n ifica tiva m e n te los tu m o re s . En a lg u n a s re a liza c io n e s , los p re se n te s a g e n te s de un ión a C le c 9 A re du cen y /o e lim in a n s ig n ifica tiva m e n te los tu m o re s cua nd o se a d m in is tra n a un su je to en co m b in a c ió n con o tros a ge n tes a n tica n ce ríg e n o s , com o a ge n tes q u im io te ra p é u tico s , inh ib id o re s de p un tos de con tro l y a g e n te s in m u n o su p re so re s . En va r ia s re a liza c io n e s , la co m b in a c ió n de a g e n te s de un ión a C le c 9 A y o tros a g e n te s a n tic a n ce ríg e n o s re du jo s in é rg ica m e n te el ta m a ñ o del tu m o r y /o e lim in ó las cé lu la s tu m o ra le s .
Se d ivu lg a n te ra p ia s co m b in a d a s co n tra el c á n c e r con un a g e n te de un ión a C le c 9 A q ue fo rm a p arte de una q u im e ra q ue co m p re n d e una o m ás fra cc io n e s de d ire cc io n a m ie n to y uno o m ás a g e n te s de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o s . En co n se cu e n c ia , se p ro p o rc io n a n p ro te ína s q u im é rica s o de fus ió n q ue inc luyen , p o r e je m p lo , una fra cc ió n d ir ig id a con tra C le c 9 A y uno o m ás a g e n te s de se ñ a liza c ió n , y se u tilizan en co m b in a c ió n con a g e n te s a n tica n ce ríg e n o s .
P o r e je m p lo , se d ivu lga n te ra p ia s de co m b in a c ió n para el c á n c e r que im p lican q u im e ra s de un a ge n te de un ión a C le c 9 A d e sc rito en el p re se n te d o cu m e n to y un a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ificad o , inc lu ye nd o , sin lim itac ió n , un in te rfe rón h u m a n o m u tado , co m o el IFN a lfa , in c lu ye n d o el in te rfe rón h u m a n o a lfa 2.
El p re se n te a g e n te de un ión a C le c9 A p uede fo rm a r parte de una q u im e ra q ue co m p re n d a m ú ltip le s fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to y, p o r lo tan to , e s ta r p rese n te en fo rm a to s b ie sp e c ífico s o tr ie sp e c ífico s . P o r e je m p lo , se d ivu lgan te ra p ia s de co m b in a c ió n para el c á n c e r q ue im p lica n q u im e ra s de un a g e n te de un ión a C le c9 A y un a g e n te de un ión a in h ib id o re s de pun to s de con tro l (p o r e je m p lo , a n ti-P D -L 1 , an ti-P D -1 , a n ti-P D -L 2 o a n ti-C T L A ) d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to y un a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ificad o , inc lu ye nd o , sin lim itac ió n , un in te rfe rón hum a no m u ta do , com o el IFN a lfa , in c lu ye n d o el in te rfe rón h u m a n o a lfa 2.
El a g e n te de se ñ a liza c ió n p uede m o d ifica rse para te n e r una a fin ida d o ac tiv ida d re d u c id a p o r uno o m ás de sus re cep to re s , lo q ue p e rm ite a te n u a r la a c tiv id a d (in c lu id o el a g o n ism o o el a n ta g o n is m o ) y /o e v ita r la se ñ a liza c ió n in e sp e c ífica o el se cu e s tro in d e se a b le de la p ro te ína q u im é rica . La a fin ida d o ac tiv ida d re d u c id a en el re ce p to r p ue de re s ta u ra rs e m e d ia n te la un ión con una o m ás de las fra cc io n e s de d ire c c io n a m ie n to d e sc rita s en el p rese n te d o cu m e n to . S e d ivu lg a el t ra ta m ie n to de, o un p ac ie n te q ue t ie n e una in fe cc ió n m ic ro b ia n a y /o una in fe cc ió n c ró n ica . Las in fe cc io n e s ilu s tra tiva s inc luyen , e n tre o tras, el V IH /S ID A , la tu b e rcu lo s is , la o s te o m ie litis , la hep a titis B, la h e p a titis C, el v iru s de E p s te in -B a rr o el pa rvo v irus , el v iru s de la leu ce m ia de cé lu las T, el s ín d ro m e de so b re c re c im ie n to bac te ria n o , las in fe cc io n e s fú n g ica s o p a ra s ita ria s .
Las p rese n te s co m p o s ic io n e s p ueden u tiliza rse para tra ta r o p re v e n ir una o m ás e n fe rm e d a d e s o co n d ic io n e s in fla m a to ria s , ta le s com o in fla m ac ió n , in fla m a c ió n a guda , in fla m ac ió n c ró n ica , e n fe rm e d a d resp ira to ria , a te ro sc le ro s is , re es ten o s is , asm a, rin itis a lé rg ica , d e rm a titis a tó p ica s h o ck sép tico , a rtritis re u m a to id e , e n fe rm ed ad in fla m a to ria in te s tin a l, e n fe rm e d a d in fla m a to ria pé lv ica , do lo r, e n fe rm e d a d in fla m a to ria o cu la r, e n fe rm e d a d ce líaca , s ín d ro m e de Le igh, d e fic ie n c ia de g lice ro l q u in asa , e os in o filia fa m ilia r (EF ), a ta x ia e sp á s tica a u to só m ica reces iva , e n fe rm e d a d in fla m a to ria la ríng ea ; T u b e rcu lo s is , c o le c is titis c ró n ica , b ro n q u ie c ta s ia s , s ilico s is y o tras n eu m oco n io s is .
Se d ivu lg a el tra ta m ie n to de e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s y /o n e u ro d e g e n e ra tiva s .
Las p re se n te s c o m p o s ic io n e s p ue de n u tiliza rse p ara tra ta r o p re v e n ir una o m ás co n d ic io n e s c a ra c te r iza d a s p o r una a c tiv id a d C T L ind e se ab le , y /o una con d ic ió n ca ra c te r iza d a p o r a lto s n ive les de m u erte ce lu la r. P o r e je m p lo , las p re se n te s c o m p o s ic io n e s p ueden u tiliza rse para tra ta r o p re v e n ir u na o m ás a fe cc io n e s a so c ia d a s a una re spu es ta in m u n ita ria d e sco n tro la d a o h ip e rac tiva .
Las p rese n te s c o m p o s ic io n e s p ueden u tiliza rse para tra ta r o p re ve n ir una o m ás e n fe rm e d a d e s o a fe cc io n e s a u to in m u n e s y /o n e u ro d e g e n e ra tiva s , ta le s com o EM, d ia b e te s m e llitu s , lupus, e n fe rm e d a d ce lía ca , e n fe rm e d a d de C rohn , co litis u lce rosa , s ín d ro m e de G u illa in -B a rre e sc le ro d e rm ia s , s ín d rom e de G o o d p a s tu re , g ra n u lo m a to s is de W e g e n e r, e p ile p s ia a u to in m u n e , e n ce fa litis de R asm u sse n , e sc le ro s is b ilia r p rim aria , co la n g itis e sc le ro sa n te , h e p a titis a u to in m u ne , e n fe rm e d a d de A d d iso n , tiro id it is de H ash im o to , f ib ro m ia lg ia , s ín d ro m e de M en ie r; re ch a zo de tra sp la n te s ( p o r e je m p lo , p reve nc ión de l re ch a zo de a lo in je rto s ) a ne m ia p e rn ic iosa , a rtritis re um ato id e , lupus e rite m a to so s is té m ico , d e rm a to m io s itis , s ín d rom e de S jog re n , lupus e ritem a toso , m ia s te n ia g rav is , s ín d ro m e de R e ite r, e n fe rm e d a d de G ra ve y o tras e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s .
Se d ivu lg a el tra ta m ie n to o la p reve n c ió n de d ive rsa s e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s y /o n e u ro d e g e n e ra tiva s . Las e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s y /o n e u ro d e g e n e ra tiva s pueden s e le cc io n a rse e n tre la EM (in c lu ye n d o , sin lim itac ión , los su b tip o s d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to ), la e n fe rm e d a d de A lz h e im e r (in c lu ye n d o , sin lim itac ió n , la e n fe rm e d a d de A lz h e im e r de in ic io te m p ra n o , la e n fe rm e d a d de A lz h e im e r de in ic io ta rd ío y la e n fe rm e d a d de A lz h e im e r fa m ilia r (E A F ), la e n fe rm e d a d de P a rk in so n y el p a rk in so n is m o (in c lu ye n d o , sin lim itac ió n , E n fe rm e d a d de P a rk in so n id iopá tica , P a rk in so n ism o va scu la r, P a rk in so n ism o ind u c id o p o r fá rm a co s , D em e nc ia con cu e rp o s de Lew y, P a rk inson h e re d ita rio , P a rk inson ju ve n il) , E n fe rm e da d de H un tin g to n , E sc le ro s is la te ra l a m io tró fica (ELA , inc lu ye nd o , sin lim itac ión , E LA e sp o rád ica , E LA fam ilia r, E LA del P ac ífico o cc id e n ta l, E LA ju ve n il, E n fe rm e d a d de H iram aya).
Se d ivu lga el tra ta m ie n to o la p reve nc ión de la EM. Los a g e n te s de un ión a C lec9a d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to pueden u tiliza rse para e lim in a r y re d u c ir los m ú ltip le s s ín to m a s de la EM. Los s ín to m a s ilus tra tivo s a so c ia d o s a la e sc le ro s is m ú ltip le , q ue pueden p re ve n irse o tra ta rse con las co m p o s ic io n e s y m é to d o s a qu í d esc ritos , inc luyen : n eu ritis óp tica , d ip lo p ía , n is tagm o, d is im etría o cu la r, o fta lm o p le jía in te rn uc lea r, fo s fe n o s de m o v im ie n to y son ido , d e fec to p u p ila r a fe ren te , pa res ia , m o n o p a re s ia , p a ra p a re s ia , h em ip a res ia , cu a d ra p a re s ia , p le jía , p a ra p le jía , h em ip le jía , te tra p le jía , cu a d ra p le jía , e sp a s tic id a d , d isa rtria , a tro fia m u scu la r, e sp a sm o s, ca la m bres , h ip o to n ía , c lonus, m io c lo n ía , m io qu im ia , s ín d ro m e de las p ie rn as inq u ie tas , ca ída de l pie, re fle jo s d is fu n c io n a le s , p a re s te s ia , a ne ste s ia , neu ra lg ia , d o lo r n e u ro p á tico y n e u ro g é n ico , s ign o de I'h e rm itte , d is fu n c ió n p rop ioce p tiva , n eu ra lg ia del tr ig é m in o , a tax ia , te m b lo r de in te nc ió n , d ism e tría , a tax ia ve s tib u la r, vé rtig o , a ta x ia del hab la, d is ton ía , d isd ia d o co c in e s ia , m icc ión fre cu en te , e sp a s tic id a d ves ica l, v e jig a flác ida , d is in e rg ia d e tru so r-e s fín te r, d is fu nc ión e réc til, a n o rg a sm ia , frig ide z , e s tre ñ im ie n to , u rge n c ia feca l, in co n tin e n c ia feca l, d ep re s ió n , d is fu nc ión cog n itiva , d em e n c ia , ca m b io s de hum or, lab ilida d e m oc ion a l, eu fo ria , s ín d ro m e b ipo lar, a ns ied ad , a fas ia , d is fas ia , fa tiga , s ín to m a de U h tho ffs , re flu jo g a s tro e so fá g ico y tra s to rn o s del sueño . La m itiga c ión o m e jo ra de uno o m ás de estos s ín to m a s en un su je to p ue de lo g ra rse m e d ia n te uno o m ás a g e n te s com o los d e sc rito s en el p re se n te d ocum e n to .
Los a g e n te s de un ión a C le c9 A d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to p ueden u tiliza rse para tra ta r o p re ve n ir el s ín d ro m e c lín ic a m e n te a is la d o (S C A ). Un s ín d ro m e c lín ic a m e n te a is la d o (S C A ) es un ú n ico a ta q u e m o n o s in to m á tico co m p a tib le con la EM, com o la n eu ritis óptica, los s ín to m a s del tro n co ce reb ra l y la m ie litis parc ia l. En g en era l, se co n s id e ra que los p ac ien tes con S C A que e xp e rim e n ta n un se g u n d o a ta qu e c lín ico tie n e n e sc le ro s is m ú ltip le c lín ica m e n te d e fin id a (E M C D ). M ás d e l 80 p o r c ie n to de los p a c ie n te s con S C A y le s io n e s p o r re so n a n c ia m a g n é tica pasan a d e s a rro lla r EM, m ie n tra s que a p ro x im a d a m e n te el 20 p o r c ien to tie n e un p roce so auto lim itado. Los p a c ie n te s que e xp e rim e n ta n un ún ico a ta qu e c lín ico co m p a tib le con la EM pueden te n e r al m e no s una les ión c o m p a tib le con la e sc le ro s is m ú ltip le a n tes de d e s a rro lla r una e sc le ro s is m ú ltip le c lín ica m e n te d e fin id a . En va r ia s re a liza c io n e s , los a g e n te s de u n ión a C le c9 a d e sc rito s en la a c tu a lid a d se u tilizan p ara tra ta r el S C A para q ue no se co n v ie rta en EM, inc lu ye nd o , p o r e je m p lo , la E M R R .
Los a g e n te s de un ión de C le c 9 A d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to p ueden u tiliza rse para tra ta r o p re ve n ir el s ín d ro m e de a is la m ie n to ra d io ló g ico (R IS ). En la R IS, los h a lla zg o s in c id e n ta le s de im á ge ne s sug ie ren d e sm ie lin iza c ió n in fla m a to ria en a u se n c ia de s ign os o s ín to m a s c lín icos . El a ge n te de un ión de C le c 9 A puede u tiliza rse para tra ta r la E IR de m a ne ra que no se co n v ie rta en EM , inc lu ye nd o , p o r e je m p lo , la E M R R .
Los a g e n te s de unión a C le c9 A d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to pueden u tiliza rse para tra ta r una o m ás de las s ig u ie n te s e n fe rm e d a d e s : e sc le ro s is m ú ltip le ben igna ; e sc le ro s is m ú ltip le re m ite n te -re cu rre n te (E M R R ); e sc le ro s is m ú ltip le se cu n d a ria p ro g re s iva (E M S P ); e sc le ro s is m ú ltip le p ro g re s iva re c id iva n te (E M P R ); y e sc le ro s is m ú ltip le p rim a ria p ro g re s iva (E M P P ).
La e sc le ro s is m ú ltip le b e n ig n a es un d ia g n ó s tico re tro sp e c tivo que se ca ra c te r iza p o r 1-2 e xa ce rb a c io n e s con re cu p e ra c ió n com p le ta , sin d is ca p a c id a d d u ra d e ra y sin p ro g re s ió n de la e n fe rm e d a d d u ra n te 10-15 a ños d e spu és de l in ic io . S in e m ba rg o , la e sc le ro s is m ú ltip le b en ign a p uede e vo lu c io n a r hac ia o tras fo rm a s de e sc le ro s is m ú ltip le . El a g e n te de u n ión de C le c9 a p u e d e u tiliza rse p ara tra ta r la e sc le ro s is m ú ltip le b e n ig n a p ara q ue no se co n v ie rta en EM.
Los p ac ie n te s que su fren de E M R R e xp e rim e n ta n e xa ce rb a c io n e s o re ca ída s e sp o rá d ica s , a sí com o p e río do s de re m is ión . Las les iones y los ind ic ios de p é rd ida a xo na l p ueden s e r v is ib le s o no en la R M N de los p ac ien tes con E M R R . Los a ge n tes de un ión a C lec9a d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to pueden u tiliza rse para tra ta r la EM R R . La E M R R p ue de in c lu ir a p a c ie n te s con E M R R ; p a c ie n te s con E M S P y re ca íd a s su p e rp u e s ta s ; y p a c ie n te s con S C A q ue m u e s tre n d is e m in a c ió n de la les ión en las re so n a n c ia s m a g n é tic a s p o s te rio re s seg ún los c rite r io s de M cD o n a ld . U na re ca íd a c lín ica , q ue ta m b ié n p ue de u tiliza rse a q u í co m o "re ca íd a ", " re c a íd a co n firm a d a " o "re ca íd a c lín ica m e n te d e fin id a ", es la a pa ric ió n de una o m ás a n o m a lía s n e u ro ló g ica s n u e va s o la re a p a ric ió n de una o m á s a no m a lía s n e u ro ló g ica s o b se rva d a s p rev ia m en te . E s te ca m b io en el e s ta d o c lín ico d ebe d u ra r al m enos 48 horas y e s ta r p re ce d id o in m e d ia ta m e n te p o r un e s ta d o n e u ro ló g ico re la tiva m e n te e s ta b le o q ue m e jo re d u ra n te al m enos 30 días. En a lg u na s re a liza c io n e s , un e ve n to se cu e n ta com o una re ca ída cua nd o los s ín to m a s del su je to se a co m p a ñ a n de ca m b io s n e u ro ló g ico s o b je tivo s o b se rva d o s , co n s is te n te s con un a u m e n to de al m e no s 1 ,00 en la p u n tu a c ió n de la E sca la E xpa n d id a del E s tado de D isca p a c id a d (E D S S ) o un g rad o en la p u n tu a c ió n de dos o m ás de los s ie te FS o d os g ra d o s en la p u n tu a c ió n de uno de los FS en co m p a ra c ió n con la e va lu a c ió n ante rio r.
La E M S P p uede e vo lu c io n a r a p a rtir de la E M R R . Los p ac ie n te s a fe c ta d o s p o r la E M S P tie n e n re ca ída s , un g rad o de re cu p e ra c ió n d e c re c ie n te d u ra n te las re m is ion es , re m is io n e s m enos fre cu e n te s y d é fic its n eu ro ló g ico s m ás p ro n u n c ia d o s que los p a c ie n te s con E M R R . Los v e n trícu lo s a g ra n d a d o s , que son m a rca d o re s de a tro fia de l cu e rp o ca llo so , de l ce n tro de la líne a m e d ia y de la m é d u la e sp in a l, son v is ib le s en la IRM de los p a c ie n te s con E M S P . Los a g e n te s de un ión a C lec9a d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to p ue de n u tiliza rse para tra ta r la E M R R de m o do que no se co n v ie rta en E M S P .
La E M P P se ca ra c te r iza p o r una p ro g re s ió n co n s ta n te de d é fic its n e u ro ló g ico s c re c ie n te s , sin a ta q u e s ni re m is io n e s d ife re n c ia d o s . Las les io ne s ce re b ra le s , el d año d ifu so de la m é du la e sp ina l y la e v id e n c ia de p é rd ida a xo na l son e v id e n te s en la IRM de los p a c ie n te s con E M P P . La E M P P tie n e p e rio d o s de e xa c e rb a c io n e s a g u d a s m ie n tra s s igue un cu rso de d é fic its n e u ro ló g ico s c re c ie n te s sin re m is io n e s . Las les io ne s son e v id e n te s en la re so n a n c ia m a g n é tica de los p ac ien tes que p ad ecen E M R P . El a ge n te de un ión de C le c9 A com o se d e sc rib e en el p rese n te d o cu m e n to p ue de u tiliza rse para tra ta r la E M R R y /o la E M S P para q ue no se co n v ie rta en E M S P .
Los a g e n te s de un ión a C le c9 A d e sc rito s en el p re se n te d o c u m e n to p ue de n u tiliza rse en un m é to d o de tra ta m ie n to de las fo rm a s re c id iv a n te s de la EM. El a ge n te de un ión a C le c9 A p uede u tiliza rse en un m é to do de tra ta m ie n to de las fo rm a s re c id iva n te s de la EM p ara ra le n tiza r la a cu m u la c ió n de la d is c a p a c id a d fís ica y /o re d u c ir la fre cu e n c ia de las e xa ce rb a c io n e s c lín icas , y, o p c io n a lm e n te , p a ra los p ac ien tes que han e xp e rim e n ta d o un p rim e r e p iso d io c lín ico y tie n e n ca ra c te rís tica s de iR m co n s is te n te s con la e M. Los a g e n te s de un ión a C lec9a d e sc rito s en el p rese n te d o c u m e n to p ue de n u tiliza rse en un m é to d o de tra ta m ie n to del e m p e o ra m ie n to de la EM re m ite n te -re cu rre n te , la EM p ro g re s iva -re cu rre n te o la EM se cu n d a ria -p ro g re s iv a para re d u c ir la d isca p a c id a d n e u ro ló g ica y /o la fre cu e n c ia de las e xa ce rb a c io n e s c lín icas . Los a g e n te s de un ión a C le c9 A p ueden re d u c ir la fre cu e n c ia y /o la g ra ve d a d de las reca ídas.
Los a g e n te s de un ión a C le c9 A p ue de n u tiliza rse en un m é to do de tra ta m ie n to de las fo rm a s re c id iva n te s de la EM en p a c ie n te s q ue han te n id o u na re s p u e s ta in a d e c u a d a a (o son re fra c ta rio s a) una, o dos, o tre s , o cua tro , o c inco, o se is , o s ie te , u ocho, o nueve , o d ie z o m ás te ra p ia s m o d ifica d o ra s de la e n fe rm e d a d (D M T).
Los s ín to m a s de l su je to p ue de n s e r e va lu a d o s cu a n tita tiva m e n te , co m o p o r E D S S , o la d ism in u c ió n de la fre cu e n c ia de las re ca ída s , o el a u m e n to de l tie m p o h as ta la p rog re s ión sos ten ida , o la m e jo ra en el co m p o rta m ie n to de la re so n a n c ia m a g n é tica (IR M ) en e s tu d io s fre cu e n te s y s e ria d o s de IRM y c o m p a ra r la m e d ic ión de l e s ta d o del p a c ie n te a n tes y d e sp u é s de l tra ta m ie n to . En un tra ta m ie n to e x itoso , el e s ta do de l p ac ien te h ab rá m e jo ra d o (p o r e je m p lo , el n úm e ro de m e d ic io n e s de la E D S S o la fre cu e n c ia de las re ca ída s hab rán d ism in u id o , o el t ie m p o hasta la p ro g re s ió n so s te n id a h ab rá a u m e n ta d o , o las e xp lo ra c io n e s de R M N m o stra rá n m e no s p a to lo g ía ).
El pac ien te p uede s e r e va lua do , p o r e je m p lo , antes, d u ra n te o d e sp u é s de re c ib ir los a g e n te s de un ión a C lec9a , p o r e je m p lo , para d e te c ta r ind ic ios de re spu es ta . D ive rsos ind ic ios c lín ico s o de o tro tip o sob re la e fica c ia del tra ta m ie n to , p o r e je m p lo P un tua c ión de la E D S S ; re so n a n c ia m a gn é tica ; n úm ero , ta sa o g ra ve d a d de las reca ídas; c o m p u e s to fu n c io n a l de la e sc le ro s is m ú ltip le (M S F C ); inve n ta rio de la ca lid ad de v id a de la e sc le ro s is m ú ltip le (M S Q L I); p rueba de a d ic ión se ria d a con ritm o (P A S A T ); p rueba de m o d a lid a d e s de d íg itos de s ím b o lo s (S D M T ); p rue b a de m a rcha de 25 pies; p rueba de la c lav ija de 9 a gu je ro s ; a g u d e za v isu a l de ba jo con tras te ; e sca la de im p a c to de la fa tig a m o d ificad a ; p u n tu a c ió n a m p lia d a de l e s ta d o de d is ca p a c id a d (E D S S ); c o m p u e s to fu n c io n a l de la e sc le ro s is m ú ltip le (M S F C ); inve n ta rio de d ep re s ió n de Beck; y p rueba de re cu e rd o e sp ac ia l 7 /24. En va r ia s re a liza c io n e s , los a g e n te s de un ión de C le c9 A cau san una m e jo ra en una o m ás de e stas m e d id as . A d e m á s, el p a c ie n te puede se r m o n ito riza d o en v a r io s m o m e n to s d u ra n te un ré g im en . Los a g e n te s de un ión de C lec9a pueden c a u s a r una m e jo ra de la e n fe rm e d a d seg ún la e va lu a c ió n de la d ifu s ió n de M a cD o n a ld en el e sp a c io y el t ie m p o . P o r e je m p lo , para la d ise m in a c ió n en el e sp ac io , se pueden u tiliz a r im á ge ne s de les iones, com o, a m o do de ilus trac ión , los c rite r ios de im á ge ne s de IRM de B a rkh o f-T in to re , que inc luyen al m e no s una les ión con re a lce de g ad o lin io o 9 le s io n e s h ip e rin te n sa s en T2; al m e no s una les ión in fra te n to ria l; al m e no s una les ión yu x ta co rtica l; al m e no s unas tre s le s io n e s p e rive n tr icu la re s ; y una les ión m e du la r. P ara la d is e m in a c ió n en el t ie m p o , ta m b ié n se p ue de u tiliz a r la RM ; p o r e je m p lo , si una re so n a n c ia m a g n é tica de l c e re b ro re a liza d a a>3 m e se s d e sp u é s de un e ve n to c lín ico in ic ia l d e m u e s tra una n ue va les ión que re a lza con gad o lin io , esto p uede in d ica r un n uevo e ve n to in fla m a to rio de l SN C, p o rq u e la d u ra c ió n de l rea lce con g a d o lin io en la EM sue le s e r in fe rio r a 6 sem a na s . Si no h ay le s io n e s con re a lce de g a d o lin io pero s í una nueva les ión en T 2 (su p o n ie n d o una R M N en el m o m e n to del e ve n to in ic ia l), puede se r n e ce sa rio re p e tir la R M N al cabo de o tros 3 m e se s con d e m o stra c ió n de una nueva les ión en T 2 o con rea lce de g ad o lin io .
Los e fe c to s de la e n fe rm e d a d p ueden e va lu a rse u tiliza n d o cu a lq u ie ra de las m e d id a s d e sc rita s en Lavery, e t al. E sc le ro s is m ú ltip le in te rn a c io n a l, V o l 2014 (2014 ), A rtícu lo ID 262350.
El a g e n te de un ión de C le c9 A p uede d a r lu g a r a uno o m ás de: (a ) p reve n c ió n del e m p e o ra m ie n to de la d is ca p a c id a d d e fin id a com o un d e te rio ro de 1.(a) p reve n c ió n de un e m p e o ra m ie n to de la d isca p a c id a d , d e fin id o co m o un d e te r io ro de 1,0 p u n to s en la E D S S , (b ) a u m e n to de l t ie m p o h as ta la re ca ída , (c) re d u cc ió n o e s ta b iliza c ió n de l n ú m e ro y /o el vo lu m e n de las les io ne s que re a lza n con gad o lin io , (d ) d ism in u c ió n de la ta sa de re ca ída s a n u a liza d a , (e ) a u m e n to de la d u ra c ió n y la g ra ve d a d de las re ca íd a s según la p u n tu a c ió n N R S , (f) d ism in u c ió n de la a c tiv id a d de la e n fe rm e d a d m e d id a p o r la IRM (ta sa a nu a l de les io ne s nue va s o que a um e n ta n de ta m a ñ o ), (g) m e n o r n ú m e ro m e d io de re ca íd a s al año o a los 2 años, (h ) p rog re s ión so s te n id a de la e n fe rm e d a d m e d id a p o r la E D S S a los 3 m e se s , (i) p reve n c ió n de la con ve rs ió n a E M C D , (j) a use n c ia o e sca se z de les io ne s T 2 nue va s o que a u m e n ta n de ta m a ñ o , (k ) ca m b io m ín im o en el vo lu m e n de la les ión T 2 h ip e rin te n sa , (I) a u m e n to de l t ie m p o h asta la EM d e fin id a p o r M cD o n a ld , (m ) p re ve n c ió n de la p rog re s ión de la d is ca p a c id a d m e d id a p o r el e m p e o ra m ie n to so s te n id o de la E D S S a las 12 sem a na s , (n ) re du cc ió n de l t ie m p o h asta la re ca ída a las 96 sem a n a s , y (o ) re du cc ió n o e s ta b iliza c ió n de la a tro fia ce re b ra l^ p o r e je m p lo , cam b io p o rce n tu a l re sp e c to al v a lo r in ic ia l). g . p o rce n ta je de ca m b io re sp e c to a la línea de base). Los a g e n te s de u n ió n a C le c 9 A p ueden a d m in is tra rs e y son e fica ce s para d a r lu g a r a una d ism in u c ió n de la ta sa de re ca íd a (p o r e je m p lo , al m e no s un 10% , 20% , 30% , 40% , 50% , 60% , 70% , 80 % o una m a yo r re d u cc ió n de la ta sa de re ca íd a ) en co m p a ra c ió n con la ta s a de re ca íd a a n tes de la a d m in is tra c ió n ( p o r e je m p lo , en co m p a ra c ió n con la ta sa de re ca ída d e sp u é s de la a d m in is tra c ió n d u ra n te 12 m e se s o d u ra n te m e no s de 12 m eses, p o r e je m p lo , a lre d e d o r de 10, o a lre d e d o r de 8, o a lre d e d o r de 4, o a lre d e d o r de 2 o m e no s m e se s ) de l tra ta m ie n to , o a n te s de l in ic io de l tra ta m ie n to , cu a n d o se m ide e n tre 3 y 24 m e se s (p o r e je m p lo , e n tre 6 y 18 m eses, p o r e je m p lo , 12 m e se s ) d e sp u é s de una re ca íd a anterio r.
Los a g e n te s de unión a C le c9 A pueden se r a d m in is tra d o s y pueden se r e fica ce s para d a r lu g a r a la p reve n c ió n de un a u m e n to en la p un tu ac ió n E D S S d esde un e s ta do p rev io al tra ta m ie n to . La E sca la de E s tado de D isca p a c id a d E xp a n d id a de K u rtzke (E D S S ) es un m é to d o p ara c u a n tif ica r la d is ca p a c id a d en la e sc le ro s is m ú ltip le . La E D S S su s titu yó a las a n te rio re s E sca las de E s tado de D isca pa c id ad , que so lían a g ru p a r a las p e rso n a s con EM en los tra m o s in fe rio re s . La E D S S cu a n tif ica la d is c a p a c id a d en o ch o s is te m a s fu n c io n a le s (F S ) y p e rm ite a los n e u ró lo g o s a s ig n a r una p u n tu a c ió n de l s is te m a fu n c io n a l (F S S ) en cada uno de e llos. Los s is te m a s fu n c io n a le s son: p iram ida l, ce re b e lo so , tro n c o ce reb ra l, sen so ria l, in te s tin a l y ves ica l, v isu a l y cereb ra l.
Los a g e n te s de un ión a C le c9 A pueden a d m in is tra rse y p ue de n se r e fica ce s para d a r lu g a r a una d ism in u c ió n de la p u n tu a c ió n de la E D S S ( p o r e je m p lo , una d ism in u c ió n de 1, 1,5, 2, 2 ,5 , 3 pun to s o m ás, p o r e je m p lo , d u ra n te al m e n o s tre s m e se s , se is m e ses, un a ño o m á s) en c o m p a ra c ió n con la p u n tu a c ió n de la E D S S tra s la a d m in is tra c ió n de los a g e n te s de un ión a C le c9 a ( p o r e je m p lo , d u ra n te 12 m e se s o d u ra n te m e n o s de 12 m eses, p o r e je m p lo , m e no s de 10, 8, 4 o m e no s m eses, o a n tes de l in ic io de l tra ta m ie n to ).
Los a g e n te s de un ión a C le c9 A pueden a d m in is tra rse y pueden se r e fica ce s para d a r lu g a r a una d ism in u c ió n del n ú m e ro de les io ne s n ue va s en g e n e ra l o de c u a lq u ie r tip o (p o r e je m p lo , al m e no s un 10% , 20% , 30% , 40 % de d ism in u c ió n ), en co m p a ra c ió n con el n úm e ro de les io ne s n uevas tra s la a d m in is tra c ió n de los a g e n te s de un ión a C le c 9 A d u ra n te 12 m e se s o d u ra n te m e no s de 12 m eses, p o r e jem p lo , m e n o s de 10, 8, 4 o m e n o s m e ses, o an tes de l in ic io de l tra ta m ie n to ;
Los a g e n te s de u n ión a C le c 9 A p ueden a d m in is tra rs e y s e r e fica ce s p ara d a r lu g a r a una d ism in u c ió n de l n ú m e ro de le s io n e s en g e n e ra l o de c u a lq u ie r tip o (p o r e je m p lo , al m e no s un 10% , 20% , 30% , 40 % de d ism in u c ió n ), en c o m p a ra c ió n con el n ú m e ro de le s io n e s tra s la a d m in is tra c ió n de los a g e n te s de un ión a C le c9 a d u ra n te 12 m e se s o d u ra n te m e no s de 12 m eses, p o r e je m p lo , m e no s de 10, 8, 4 o m e no s m eses, o a n te s de l in ic io de l tra ta m ie n to ;
Los a g e n te s de u n ión a C le c 9 A p ueden a d m in is tra rs e y p ueden s e r e fica ce s p ara d a r lu g a r a una ta s a re d u c id a de a p a ric ió n de n u e va s le s io n e s en g e n e ra l o de c u a lq u ie r t ip o (p o r e je m p lo , una ta s a re d u c id a de al m e no s el 10% , el 20% , el 30% , el 40% ), en c o m p a ra c ió n con la ta sa de a p a ric ió n de n u e va s le s io n e s tra s la a d m in is tra c ió n d u ra n te 12 m e se s o d u ra n te m e no s de 12 m eses, p o r e je m p lo , m e no s de 10, 8, 4 o m enos m eses, o an tes de l in ic io del tra ta m ie n to ;
Los a g e n te s de u n ión a C le c 9 A p ueden a d m in is tra rse y p ueden s e r e fica ce s p ara d a r lu g a r a un a u m e n to re d u c id o de l á rea de la les ión en g e n e ra l o de c u a lq u ie r tip o (p o r e je m p lo , al m e no s un 10% , 20% , 30% , 40 % de a um e n to re du c ido ), en co m p a ra c ió n con un a u m e n to de l á rea de la les ión d e sp u é s de la a d m in is tra c ió n d u ra n te 12 m e se s o m e no s de 12 m eses, p o r e je m p lo , m e no s de 10, 8, 4 o m e no s m eses, o a n te s de l in ic io de l tra ta m ie n to .
Los a ge n tes de un ión a C le c 9 A p ueden se r a d m in is tra d o s y p ueden s e r e fica ce s para d a r lu g a r a una inc id en c ia o s ín to m a re d u c id o de n e u ritis ó p tica (p o r e je m p lo , la m e jo ra de la v is ió n ), en c o m p a ra c ió n con la in c id e n c ia o s ín to m a de n eu ritis ó p tica d e sp u é s de la a d m in is tra c ió n d u ra n te 12 m e se s o d u ra n te m e no s de 12 m eses, p o r e je m p lo , m e no s de 10, 8, 4 o m e no s m eses, o a n tes de l in ic io de l tra ta m ie n to .
Los p re se n te s m é to d o s p ueden s e r ú tile s en el tra ta m ie n to de un su je to hum ano . El h um a no p uede se r un h u m a n o p ed iá trico . El h um a no puede se r un h um a no adu lto . El h um a no puede se r un h um a no g e riá trico . El s e r hum a no p ue de d e n o m in a rse p ac ien te . El h u m a n o p uede s e r una m u jer. El h u m a n o p ue de s e r un hom bre .
El s e r h um a no p uede te n e r una edad en un ra ng o de entre 1 y 18 m e se s , e n tre 18 y 36 m eses, e n tre 1 y 5 años, e n tre 5 y 10 años, e n tre 10 y 15 años, e n tre 15 y 20 años, e n tre 25 y 30 años, e n tre 30 y 35 años, e n tre 35 y 40 años, e n tre 40 a unos 45 años, e n tre 45 y 50 años, e n tre 50 y 55 años, e n tre 55 y 60 años, e n tre 60 y 65 años, en tre 65 y 70 años, e n tre 70 y 75 años, e n tre 75 y 80 años, e n tre 80 y 85 años, e n tre 85 y 90 años, e n tre 90 y 95 a ños o e n tre 95 y 100 años. El h um a no p uede te n e r una edad de m ás de 30 años.
Modulación inmunitaria
Las p re se n te s c o m p o s ic io n e s p ueden s e r cap a ce s de, o e n c o n tra r uso en m é to d o s de, m o d u la c ió n inm un o ló g ica . P o r e je m p lo , los m é to d o s de tra ta m ie n to d ivu lg a d o s pueden in c lu ir la m o d u la c ió n in m u n o ló g ica d escrita en el p re se n te d ocum e n to . La m o du lac ión in m u n ita ria puede im p lica r la se ñ a liza c ió n del IFN, inc lu ida la se ñ a liza c ió n m o d ifica d a de l IFN, en el co n te x to de una cé lu la d e n d rítica (D C ).
Se p ro p o rc io n a un a g e n te de un ión de C le c9 a m u ltie sp e c ífico . D ich o a g e n te de un ión a C le c9 a m u ltie s p e c ífic o de la in ve n c ió n re co n o ce y se une a C le c 9 A y a uno o m ás a n tíg e n o s que se e n cu e n tra n en una o m ás cé lu las in m u n ita ria s , q ue p ueden inc lu ir, sin lim itac ió n , m e g a ca rio c ito s , tro m b o c ito s , e ritro c ito s , m a sto c ito s , basó filos, n eu tró filo s , e os inó filo s , m o n o c ito s , m a cró fa g o s , cé lu las a se s in a s n a tu ra le s , lin fo c ito s T (p o r e je m p lo , lin fo c ito s T c ito tó x ico s , cé lu la s T a u x ilia re s , c é lu la s T a se s in a s n a tu ra le s ), lin fo c ito s B, c é lu la s p la sm á tica s , c é lu la s d e n d rític a s o su b c o n ju n to s de e llas. En a lg u n a s re a liza c io n e s , el a ge n te de un ión de C le c9 A se une e sp e c ífica m e n te a un a n tíg e n o de in te rés y re c lu ta e fica zm e n te , de fo rm a d ire c ta o ind irec ta , una o m ás cé lu la s inm un ita ria s .
El a g e n te de un ión a C le c9 a p uede u n irse e sp e c ífica m e n te a un a n tíg e n o de in te ré s y e fe c tiva m e n te re c lu ta d ire c ta o in d ire c ta m e n te una o m ás cé lu las in m u n ita ria s para c a u s a r un e fe c to in m u n o su p re so r, p o r e je m p lo , el a ge n te de un ión a C lec9a rec lu ta d ire c ta o in d ire c ta m e n te una cé lu la in m u n ita ria in m u n o su p re so ra . La cé lu la inm une in m u n o su p re so ra p ue de s e r una cé lu la T re g u la d o ra (o "T re g s " que, com o se usa aquí, se re fie re a una su b p o b la c ió n de cé lu las T que m o du lan el s is te m a inm une, a b ro g an la e n fe rm e d a d a u to in m u n e , m a n tien e n la to le ra n c ia a los a u to a n tíg e n o s y fru s tra n las re sp u e s ta s inm un es a n titu m o ra le s ). O tras cé lu las inm un es in m u n o su p re so ra s inc luyen las cé lu la s su p re so ra s m ie lo id e s (o "M S C ", que, com o se u tiliza aquí, se re fie re a una p ob la c ió n h e te ro g é n e a de cé lu las , d e fin id a p or su o rigen m ie lo id e , e s ta do inm ad uro y cap ac id ad de su p rim ir p o te n te m e n te las re sp u e s ta s de las cé lu la s T); n e u tró filo s a so c ia d o s a tu m o re s (o "T A N s", que, com o se u tiliza aquí, se re fie re a un su b co n ju n to de n eu tró filo s que son ca p a ce s de s u p rim ir las re sp u e s ta s inm un es); m a cró fa g o s a so c ia d o s a tu m o re s (o "T A M s" que, co m o se u tiliza en e s te d o cu m e n to , se re fie re a un s u b c o n ju n to de m a c ró fa g o s q ue pueden re d u c ir una re sp u e s ta inm une), m a cró fa g o s M 2, y /o m a s to c ito s in d u c to re s de tu m o re s (q ue com o se u tiliza en e ste d o cu m e n to , se re fie re a un su b co n ju n to de p ob la c ió n c e lu la r h e te ro g é n e a d e riva d a de la m é d u la ósea, de la rga v ida ). A d e m á s, las cé lu las in m u n ita ria s in m u n o su p re so ra s inc lu ye n las cé lu las T h2 y las cé lu las Th17. A d e m á s, las cé lu las in m u n ita ria s in m u n o su p re so ra s inc luyen cé lu las inm un ita ria s , p o r e je m p lo , cé lu las T C D 4+ y/o C D 8 , que e xp re sa n uno o m á s re ce p to re s in h ib id o re s de p u n to s de co n tro l (p o r e je m p lo , re cep to re s , inc lu ido s C T LA -4 , B 7-H 3, B 7-H 4, T IM -3 , e xp re sa d o s en cé lu la s in m u n ita ria s que im p iden o inh iben las re sp u e s ta s in m u n ita ria s inco n tro la d a s). V é a se S tagg , J. ef. a/., E n fo qu e in m u n o te ra p é u tico en el c á n c e r de m am a trip le n eg a tivo . T h e r A d v M ed O nco l. (2013 ) 5 (3 ):169 -181 ).
El a ge n te de un ión a C lec9a puede e s tim u la r la p ro life ra c ió n de cé lu las T re g u la d o ra s (T reg ). Las cé lu las T reg se ca ra c te riza n p o r la e xp re s ió n de l fa c to r de tra n sc rip c ió n F oxp3 (F o rkh e a d box p3). La m a yo ría de las cé lu las T reg son C D 4+ y C D 25+ , y pueden co n s id e ra rse un su b c o n ju n to de cé lu las T aux ilia res , a u n q u e una p eq ue ña p ob lac ión p uede s e r C D 8+. A sí, la re spu es ta inm u n ita ria que se q u ie re m o d u la r p uede c o m p re n d e r la ind u cc ión de la p ro life ra c ió n de cé lu las T reg , o p c io n a lm e n te en re spu es ta a un an tíge no . A sí, el m é to do p uede c o m p re n d e r la a d m in is tra c ió n al su je to de una co m p o s ic ió n q ue co m p re n d e el a n tíg e n o , en la q ue el a n tíg e n o e stá a so c ia d o con un a g e n te de u n ión q u e tie n e a fin id a d p o r C le c9 A . El a n tíg e n o p ue de a d m in is tra rs e con un a d y u v a n te q u e p ro m u e va la p ro life ra c ió n de cé lu la s T reg.
En la m e d id a en que este m é to do im p lica la e s tim u la c ió n de la p ro life ra c ió n y d ife re n c ia c ió n de las cé lu las T reg en re sp u e s ta a un a n tíg e n o e sp e c ífico , p ue de c o n s id e ra rs e un m é to d o de e s tim u la c ió n de la re sp u e s ta in m u n ita ria . S in e m b a rg o , dado que las cé lu las T reg pueden se r ca p a ce s de m o d u la r la re spu es ta de o tras cé lu la s de l s is te m a in m u n ita rio con tra un a n tíg e n o de o tras m a ne ra s , p o r e je m p lo , in h ib ie n d o o s u p rim ie n d o su ac tiv ida d , el e fe c to so b re el s is te m a in m u n ita rio en su con ju n to p uede s e r el de m o d u la r (p o r e je m p lo , s u p rim ir o in h ib ir) la re spu es ta co n tra ese a n tíg e n o . P o r lo ta n to , los m é to d o s ta m b ié n p ue de n d e n o m in a rse m é to d o s de m o d u la c ió n (p o r e je m p lo , inh ib ic ió n o su p re s ió n ) de una re sp u e s ta in m u n ita ria con tra un a n tígeno .
Los m é to d o s p ueden in h ib ir o s u p rim ir te ra p é u tica o p ro filá c tica m e n te una re sp u e s ta in m u n ita ria in d e se a b le con tra un a n tíg e n o p a rticu la r, in c lu so en un su je to con in m u n id a d p re e x is te n te o u na re sp u e s ta in m u n ita ria en cu rso con tra e se an tíge no . E sto p ue de s e r e sp e c ia lm e n te útil, p o r e je m p lo , en el tra ta m ie n to de e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s .
B a jo c ie rta s co n d ic io n e s , ta m b ié n puede se r p os ib le to le ra r a un su je to con tra un a n tíg e n o p a rticu la r d ir ig ie n d o el a n tíg e n o a una cé lu la p re se n ta d o ra de a n tíg e n o q ue e xp re se C lec9A . Se d ivu lga a s í un m é to d o para in d u c ir to le ra n c ia en un su je to hac ia un an tíge no , que co m p re n d e a d m in is tra r al su je to una co m p o s ic ió n que co m p re n d e el a n tíge no , en la q ue el a n tíg e n o e stá a so c ia d o con un a g e n te de u n ión q ue t ie n e a fin ida d p o r C le c 9 A y en la q u e el a n tíg e n o se a d m in is tra en a u se n c ia de un a dyuva n te . En e ste con tex to , la to le ra n c ia sue le im p lica r el a go ta m ie n to de las cé lu las in m u n ita ria s que, de o tro m odo, serían ca p a ce s de re s p o n d e r a ese a n tígeno , o la ind u cc ión de una re d u cc ió n d u ra d e ra de la ca p a c id a d de re sp u e s ta a un a n tíg e n o en d ich a s cé lu la s inm un ita ria s .
P ue d e se r p a rticu la rm e n te d e se a b le e le v a r una re sp u e s ta T reg co n tra un a n tíg e n o al q ue el su je to p resen ta , o está en rie sgo de d e sa rro lla r, una re sp u e s ta inm un e ind e se ab le . P o r e je m p lo , p uede s e r un a u to a n tíg e n o con tra el q ue se p ro d u ce una re spu es ta in m u n ita ria en una e n fe rm e d a d a u to in m u n e . A lg u n o s e je m p lo s de e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s en las q ue se han id e n tifica d o a n tíg e n o s e sp e c ífico s co m o p o te n c ia lm e n te s ig n ific a tiv o s d e sd e el pun to de v is ta p a to ló g ico son la e sc le ro s is m ú ltip le (p ro te ín a b ás ica de la m ie lina ), la d ia b e te s m e llitu s in su lin o d e p e n d ie n te (á c id o g lu tá m ico d e sca rb o x ila sa ), la d ia b e te s m e llitu s re s is te n te a la insu lina (re c e p to r de insu lina ), la e n fe rm ed ad ce lía ca (g lia d in a ) p e n fig o id e b u llo so (co lá g e n o tip o X V II), a ne m ia h em o lítica a u to in m u n e (p ro te ín a Rh), tro m b o c ito p e n ia a u to in m u n e (G p llb /llla ), m ia s te n ia g ra v is (re c e p to r de a ce tilco lin a ), E n fe rm e d a d de G ra ve s (re c e p to r de la h o rm on a e s tim u la n te de l t iro id e s), g lo m e ru lo n e fritis , com o la e n fe rm e d a d de G o o d p a s tu re (co lá g e n o a lfa 3 (IV )N C 1 ), y a n e m ia p ern ic iosa ( fa c to r in trín seco ). A lte rn a tiva m e n te , el a n tíg e n o d ia n a puede s e r un a n tíg e n o e xó g e n o que es tim u le una re spu es ta que ta m b ié n cause d añ o a los te jid o s del h ué sped . P o r e je m p lo , la fieb re re u m á tica a gu da está ca u sa d a p o r una re sp u e s ta de a n ticu e rp o s a un a n tíg e n o e s tre p to có c ico q ue re a cc io n a de fo rm a c ru za d a con un a n tíg e n o de cé lu las m u scu la re s ca rd ía ca s. A sí, e stos a n tíg e n o s, o fra g m e n to s o e p ítop os p a rticu la re s de los m ism os, p ue de n se r a n tíg e n o s a de cu ad os .
Los p re se n te s a ge n tes , o los m é to d o s q ue u tilizan e s to s a ge n tes , p ueden in te rru m p ir la se ñ a liza c ió n de C le c 9 A ( p o r e je m p lo , m e d ia n te la n e u tra liza c ió n de C lec9A ), p o r e je m p lo , re d u c ie n d o o inh ib ie n do la un ión de C le c9 A a su ligando . A lg u n a s e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s se ca ra c te riza n p o r n ive les in u su a lm e n te a ltos de m u erte ce lu la r y se c ree que las re sp u e s ta s in m u n ita ria s con tra los a n tíg e n o s p rop ios a so c ia d o s a e stas cé lu las p ueden c o n tr ib u ir a la p a to g é n e s is de e stas co n d ic io n e s . P o r lo tan to , los a n ta g o n is ta s de C le c 9 A p ueden u tiliza rse para im p e d ir que C le c 9 A se una al liga n do e xp u e s to en las cé lu las m u erta s y m o rib u n d a s ( p o r e je m p lo , las que su fren una m u erte c e lu la r in m u n o g é n ica ) y, p o r lo tan to , pueden in h ib ir o im p e d ir la e s tim u la c ió n de las re sp u e s ta s in m u n ita ria s con tra e s to s an tíge no s.
Los p rese n te s a ge n tes , o los m é to d o s que u tilizan e stos a ge n tes , p ueden re d u c ir o s u p rim ir las cé lu las T a u to re a c tiva s . El a ge n te de un ión de C lec9a m u ltie sp e c ífico , o p c io n a lm e n te a tra vé s de una se ñ a liza c ió n de in te rfe rón en el co n te x to de una qu im e ra , puede c a u s a r e sta in m u n o su p re s ió n . El a ge n te de un ión de C lec9a m u ltie s p e c ífic o p ue de e s tim u la r la se ñ a liza c ió n y /o e xp re s ió n de PD-L1 o P D -L2, lo q ue p ue de s u p rim ir las cé lu la s T a u to re a c tiva s . El a ge n te de un ión de C lec9A , o p c io n a lm e n te a tra vé s de una se ñ a liza c ió n de in te rfe rón en el co n te x to de una q u im e ra , p uede c a u s a r esta in m u n o su p re s ió n . El a g e n te de un ión a C le c9 A p uede e s tim u la r la se ñ a liza c ió n y /o e xp re s ió n de PD-L1 o P D -L2 , lo q ue p uede su p rim ir las cé lu la s T a u to re a c tiva s .
Los p re se n te s m é to d o s p ue de n c o m p re n d e r la m o d u la c ió n de la p ro p o rc ió n de cé lu la s T re g u la d o ra s con re sp e c to a las cé lu las T e fe c to ra s a fa v o r de la in m u n o su p re s ió n , p o r e je m p lo , para tra ta r e n fe rm e d a d e s a u to in m u n e s . P o r e je m p lo , los p re se n te s m é to d o s p ueden re d u c ir y /o s u p rim ir una o m ás de las cé lu la s T c ito tó x ica s ; cé lu la s T e fe c to ra s de m e m oria ; cé lu la s T de m e m o ria cen tra l; cé lu las e fe c to ra s de m e m o ria de cé lu la s m a d re C D 8+; cé lu las T e fe c to ra s TH 1; cé lu la s T e fe c to ra s TH 2; cé lu las T e fe c to ra s TH 9; cé lu las T e fe c to ra s T H 17. P o r e je m p lo , los p re se n te s m é to d o s p ue de n a u m e n ta r y /o e s tim u la r una o m ás de las cé lu la s T re g u la d o ra s C D 4 C D 25+ FO X P 3+ , cé lu la s T re g u la d o ra s C D 4 C D 25+ , cé lu la s T re g u la d o ra s C D 4 C D 25-, cé lu las T re g u la d o ra s C D 4 C D 25h igh , c é lu la s T re g u la d o ra s T IM -3 P D -1+, c é lu la s T re g u la d o ra s de l gen de a c tiva c ió n de lin fo c ito s -3 (LAG-3> , c é lu la s T re g u la d o ra s C T L A -4 /C D 152 , cé lu las T re g u la d o ra s n eu rop ilina -1 (N rp -1 > , cé lu las T re g u la d o ra s C C R 4+ C C R 8+ , cé lu la s T re g u la d o ra s C D 62 L (L -s e le c tin a )+ , cé lu la s T re g u la d o ra s C D 45 R B lo w C é lu la s T re g u la d o ra s C D 127 IO W , cé lu la s T re g u la d o ra s L R R C 32 /G A R P , cé lu las T re g u la d o ra s C D 39+ , cé lu las T re g u la d o ra s G IT R , cé lu la s T re g u la d o ra s LAP , cé lu la s T re g u la d o ra s 1B11+, cé lu las T re g u la d o ra s B TLA , cé lu la s T re g u la d o ra s de tip o 1 (cé lu la s T r1 ),C é lu la s T h e lp e r tip o 3 (Th3), cé lu las re g u la d o ra s de fe n o tip o de cé lu las T a se s in a s n a tu ra le s (N K T re g s), cé lu la s T re g u la d o ra s C D 8+, cé lu las T re g u la d o ra s C D 8+ C D 28 - y /o c é lu la s T re g u la d o ra s que secre tan IL-10, IL-35, T G F -p , T N F -a , G a le c tin a -1, IF N -y y /o M C P1.
Los p re se n te s m é to d o s p ueden fa v o re c e r las se ñ a le s in m u n e s in h ib id o ra s so b re las se ñ a le s in m u n e s e s tim u la d o ra s . Los p rese n te s m é to d o s p ueden p e rm itir re ve rtir o s u p rim ir las se ñ a le s a c tiva d o ra s o co e s tim u la d o ra s del s is te m a inm un ita rio . Los p re se n te s m é to d o s pueden p e rm itir p ro p o rc io n a r señ a le s de inh ib ic ión inm un ita ria . P o r e je m p lo , los p re se n te s a g e n te s y m é to d o s p ue de n re d u c ir los e fe c to s de una señ a l in m u n o e s tim u la n te , que, sin lim itac ió n , es una o m á s de 4-1 BB, O X -40 , H V E M , G IT R , C D 27, C D 28 , C D 30 , C D 40, lig a n d o IC O S ; L ig a n d o O X -40 , L IG H T (C D 258), liga n do G IT R , C D 70, B7-1, B7-2, liga n do C D 30, liga n do C D 40 , ICO S, liga n do ICO S, liga n do C D 137 y T L lA . A d e m á s, los p re se n te s a g e n te s y m é to d o s p ue de n a u m e n ta r los e fe c to s de una señ a l in h ib id o ra inm un ita ria , que, sin lim itac ió n , es una o m ás de C T LA -4 , P D -L1, P D -L2, PD -1, B TLA , H V E M , T IM 3, G A L 9 , LAG 3, V IS T A , KIR, 2B4, C D 160 (ta m b ié n d e n o m in a d a B Y 55), C G E N -15049 , q u in a sa s C H K 1 y C H K 2 , A 2a R , C E A C A M (p o r e je m p lo , C E A C A M -1, C E A C A M -3 y /o C E A C A M -5 ), y v a r io s lig a n d o s de la fa m ilia B -7 (in c lu ye n d o , p e ro s in lim ita rse a, B7-1, B7-2, B 7-D C , B 7-H 1, B 7-H 2, B 7-H 3, B 7-H 4, B 7-H 5, B 7 -H 6 y B7-H 7.
Kits
Se d ivu lga n ta m b ié n k its para la a d m in is tra c ió n de cu a lq u ie r a ge n te de un ión a C le c9 A d e sc rito en el p rese n te d o cu m e n to (p o r e je m p lo , con o sin a g e n te s te ra p é u tico s a d ic io n a le s ). El k it es un co n ju n to de m a te ria le s o co m p o n e n te s , que inc lu ye al m e no s una de las co m p o s ic io n e s fa rm a c é u tic a s inve n tiva s d e sc rita s en el p rese n te d o cu m e n to . A sí, el k it p uede c o n te n e r al m e no s una de las c o m p o s ic io n e s fa rm a c é u tic a s d e sc rita s en el p rese n te d ocum e n to .
La n a tu ra le za e xa c ta de los co m p o n e n te s co n fig u ra d o s en el k it d e p e n d e de su fin a lid a d . El k it p uede co n fig u ra rse con el fin de tra ta r a su je to s hum a no s .
Las in s tru cc io n e s de uso p ueden e s ta r inc lu id a s en el kit. Las in s tru cc io n e s de uso sue len in c lu ir una e xp re s ió n ta n g ib le que d e sc rib e la té c n ica q ue d eb e e m p le a rse al u tiliz a r los c o m p o n e n te s del k it para o b te n e r un re su ltad o te ra p é u tico d esea do , com o el tra ta m ie n to del cán cer. O p c io n a lm e n te , el k it ta m b ié n co n tie n e o tros co m p o n e n te s ú tiles, ta le s co m o d ilu ye n te s , ta m p o n e s , p o rta d o re s fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le s , je r in g a s , ca té te re s , a p licad o res , h e rra m ie n ta s de p ip e te o o m e d ic ión , m a te ria le s de ve n d a je u o tra p a ra fe rn a lia útil q ue se rá fá c ilm e n te re co n o c id a p o r los e xp e rto s en la m ate ria .
Los m a te ria le s y c o m p o n e n te s e n sa m b la d o s en el k it p ueden se r p ro p o rc io n a d o s al p ra c tica n te a lm a ce n a d o s de c u a lq u ie r m a ne ra co n ve n ie n te y a d e cu a d a que p rese rve su o p e ra tiv id a d y u tilidad . P o r e je m p lo , los co m p o n e n te s p ue de n s u m in is tra rse a te m p e ra tu ra a m b ie n te , re frig e ra d a o co n g e la d a . Los c o m p o n e n te s sue len e s ta r co n te n id o s en m a te ria le s de e m b a la je a d e cu a d o s . En v a r ia s re a liza c io n e s , el m a te ria l de e n va sa d o se co n s tru ye m e d ia n te m é to d o s con oc id os , p re fe re n te m e n te para p ro p o rc io n a r un e n to rn o e sté ril y libre de co n ta m in a n te s . El m a te ria l de e m b a la je p uede te n e r una e tiq u e ta e x te rn a q ue ind iq ue el co n te n id o y /o la fin a lid a d de l k it y /o sus com p o n e n te s .
Definiciones
T a l y com o se u tiliza aquí, "un ", "u n a " o "e l" puede s ig n ific a r uno o m ás de uno. A d e m á s, el té rm in o "a p ro x im a d a m e n te ", cu a n d o se u tiliza en re lac ión con una ind icac ión n um é rica de re fe ren c ia , s ig n ifica la ind icac ión n u m é rica de re fe re n c ia m ás o m e no s hasta el 10% de esa ind icac ión n um é rica de re fe ren c ia . P o r e je m p lo , la e xp re s ió n "a lre d e d o r de los 50" a b a rca la fra n ja de 45 a 55 años.
U na "ca n tid a d e ficaz", cua nd o se u tiliza en re lac ión con los usos m é d icos , es una ca n tid a d que es e ficaz para p ro p o rc io n a r un tra ta m ie n to m e d ib le , la p reve nc ión o la re d u cc ió n de la ta sa de p a to g é n e s is de una e n fe rm e d a d de in te rés.
T a l com o se u tiliza en el p re se n te d o cu m e n to , a lg o e stá "d is m in u id o " si una lec tu ra de a c tiv id a d y /o e fe c to se reduce en una can tida d s ig n ifica tiva , com o p o r e je m p lo en al m e no s a lre d e d o r de l 10% , al m e no s a lre d e d o r de l 20% , al m e no s a lre d e d o r de l 30% , al m e no s a lre d e d o r de l 40% , al m e no s a lre d e d o r de l 50% , al m e n o s a lre d e d o r del 60% , al m e no s a lre d e d o r de l 70% , al m e no s a lre d e d o r de l 80% , al m e n o s a lre d e d o r de l 90% , al m e no s a lre d e d o r de l 95% , al m e n o s a lre d e d o r de l 97% , al m e n o s a lre d e d o r de l 98% , o m ás, h as ta e in c lu ye n d o al m e no s a lre d e d o r de l 100% , en p re se n c ia de un a g e n te o e s tím u lo en re la c ió n con la a u se n c ia de d ich a m o d u la c ió n . C om o c o m p re n d e rá un e xp e rto en la m a te ria , en a lg u n a s re a liza c io n e s , la a c tiv id a d d ism in u ye y a lg u n a s le c tu ra s p o s te rio re s d ism in u irá n , p e ro o tras p ueden a um e nta r.
A la inve rsa , la a c tiv id a d e stá "a u m e n ta d a " si una lec tu ra de a c tiv id a d y /o e fe c to se in c re m e n ta en una can tidad s ig n ifica tiva , p o r e je m p lo en al m e n o s a lre d e d o r de l 10% , a l m e n o s a lre d e d o r de l 20% , al m e n o s a lre d e d o r de l 30% , al m e no s a lre d e d o r de l 40% , al m e no s a lre d e d o r de l 50% , al m e no s a lre d e d o r de l 60% , al m e n o s a lre d e d o r de l 70% , al m e no s a lre d e d o r de l 80% , al m e n o s a lre d e d o r de l 90% , al m e n o s a lre d e d o r de l 95% , al m e no s a lre d e d o r de l 97% , al m e n o s a lre d e d o r de l 98% , o m ás, h as ta e in c lu ye n d o al m e n o s a lre d e d o r de l 100 % o m ás, al m e n o s a lre d e d o r de 2 vece s, al m e n o s a lre d e d o r de 3 vece s, al m e n o s a lre d e d o r de 4 vece s, al m e n o s a lre d e d o r de 5 vece s, al m e no s a lre d e d o r de 6 vece s, al m e no s a lre d e d o r de 7 ve ce s , al m e no s a lre d e d o r de 8 vece s, al m e no s a lre d e d o r de 9 ve ce s , al m e no s a lre d e d o r de 10 vece s, al m e no s a lre d e d o r de 50 ve ce s , al m e no s a lre d e d o r de 100 ve ce s , en p re se n c ia de un a g e n te o e stím u lo , en re lac ió n con la a u se n c ia de d ich o a g e n te o e stím u lo .
T a l com o se m e nc ion a aquí, to d o s los p o rce n ta je s de co m p o s ic ió n son en peso de la co m p o s ic ió n to ta l, a m e no s q ue se e sp e c ifiq u e lo con tra rio . T a l y com o se u tiliza en el p rese n te d ocum e n to , la p a la b ra "in c lu ir", y sus va r ia n te s , p re te n d e se r no lim itan te , de m a ne ra que la re c ita c ión de e le m e n to s en una lista no e xc luye o tros e le m e n to s s im ila re s que ta m b ié n p ueden se r ú tiles en las co m p o s ic io n e s y m é to d o s de esta te cn o lo g ía . Del m ism o m odo, los té rm in o s "p u e d e " y "p u e d e n " y sus v a r ia n te s p re te nd en s e r no lim itan tes , de m a ne ra que la re c ita c ión de que una re a liza c ió n p uede o p ueden c o m p re n d e r c ie rto s e le m e n to s o ca ra c te rís tica s no e xc lu ye o tras re a liza c io n e s de la p re se n te te c n o lo g ía q ue no co n te n g a n eso s e le m e n to s o ca ra c te rís tica s .
A u n q u e el té rm in o a b ie rto "q u e co m p re n d e ", com o s in ó n im o de té rm in o s ta le s com o inc lu ye nd o , co n te n ie n d o o te n ie n d o , se u tiliza a qu í para d e s c rib ir y re iv in d ica r la inve nc ión , la p rese n te inve nc ión , o las re a liza c io n e s de la m ism a, p ueden d e sc rib irse a lte rn a tiva m e n te u tiliza n d o té rm in o s a lte rn a tivo s ta le s com o "q u e co n s is te en" o "q u e co n s is te e se n c ia lm e n te en"
T a l y co m o se u tiliza en e s te d o cu m e n to , las p a la b ra s "p re fe r id o " y "p re fe re n te m e n te " se re fie ren a las re a liza c io n e s de la te c n o lo g ía q ue o fre ce n c ie rto s b en e fic ios , b a jo c ie rta s c ircu n s ta n c ia s . S in e m b a rg o , ta m b ié n se p ue de n p re fe rir o tras fo rm a s de re a liza c ió n , en las m ism a s u o tra s c ircu n s ta n c ia s . A d e m á s , la re c ita c ió n de una o m ás re a liza c io n e s p re fe rid a s no im p lica q ue o tras re a liz a c io n e s no sean ú tiles, y no se p re te n d e e x c lu ir o tra s re a liz a c io n e s de l a lca n ce de la te cn o lo g ía . La can tid a d de las c o m p o s ic io n e s d e sc rita s en el p re se n te d o cu m e n to n e ce sa ria para lo g ra r un e fe c to te ra p é u tico p uede d e te rm in a rse e m p írica m e n te de a cu e rd o con los p ro ce d im ie n to s c o n ve n c io n a le s para el p ro p ó s ito p a rticu la r. G e n e ra lm e n te , para la a d m in is tra c ió n de a g e n te s te ra p é u tico s con fine s te ra p é u tico s , los a g e n te s te ra p é u tico s se a d m in is tra n a una dos is fa rm a c o ló g ica m e n te e ficaz. U na "ca n tid a d fa rm a c o ló g ica m e n te e fica z", "d o s is fa rm a c o ló g ica m e n te e ficaz", "ca n tid a d te ra p é u tica e fica z" o "ca n tid a d e fe c tiva " se re fie re a una can tid a d su fic ie n te para p ro d u c ir el e fe c to fis io ló g ic o d e se a d o o una can tida d cap az de lo g ra r el re su lta d o d eseado , en p a rtic u la r para tra ta r el tra s to rn o o la e n fe rm e d a d . U na can tida d e ficaz, ta l com o se u tiliza en el p rese n te d o cu m e n to , inc lu iría una can tid a d su fic ie n te para, p o r e je m p lo , re tra sa r el d e sa rro llo de un s ín to m a del tra s to rn o o e n fe rm e d a d , a lte ra r el cu rso de un s ín to m a del tra s to rn o o e n fe rm e d a d (p o r e je m p lo , ra le n tiza r la p rog re s ió n de un s ín to m a de la e n fe rm e d a d ), re d u c ir o e lim in a r uno o m ás s ín to m a s o m a n ife s ta c io n e s de l tra s to rn o o e n fe rm e d a d , y re ve rtir un s ín to m a de un tra s to rn o o e n fe rm e d a d . El b en e fic io te ra p é u tico ta m b ié n inc lu ye la d e te n c ió n o ra le n tiza c ió n de la p rog re s ió n de la e n fe rm e d a d o tra s to rn o sub yacen te , in d e p e n d ie n te m e n te de que se p rod u zca una m ejora.
Las ca n tid a d e s e fica ce s, la to x ic id a d y la e fica c ia te ra p é u tica p ueden d e te rm in a rse m e d ia n te p ro ce d im ie n to s fa rm a c é u tic o s e s tá n d a r en cu ltivo s ce lu la re s o a n im a le s de e xp e rim e n ta c ió n , p o r e je m p lo , para d e te rm in a r la LD 50 (la dos is leta l para a p ro x im a d a m e n te el 50% de la p o b la c ió n ) y la E D 50 (la dos is te ra p é u tica m e n te e fica z en a p ro x im a d a m e n te el 50% de la p ob lac ión ). La dos is puede v a r ia r según la fo rm a fa rm a cé u tica e m p le a d a y la v ía de a d m in is tra c ió n u tilizada . La re lac ió n de d os is e n tre los e fe c to s tó x ic o s y los te ra p é u tico s es el índ ice te ra p é u tico y p ue de e xp re sa rse com o la re lac ió n L D 50 /E D 50. En a lg u n a s re a liza c io n e s , se p re fie re n las c o m p o s ic io n e s y los m é to d o s que p rese n ta n g ran d es índ ices te ra p é u tico s . U na dos is te ra p é u tica e ficaz puede e s tim a rse in ic ia lm e n te a p a rtir de e n sa yo s in v itro , inc lu ye nd o , p o r e je m p lo , e n sa yo s de cu ltivo ce lu la r. A s im ism o , se puede fo rm u la r una d os is en m o de los a n im a le s para log ra r un rango de co n ce n tra c ió n p la sm á tica c ircu la n te que inc luya el IC50 d e te rm in a d o en el cu ltivo ce lu la r, o en un m o d e lo a n im a l a p ro p ia d o . Los n ive les de las co m p o s ic io n e s d e sc rita s en el p la sm a pueden m e d irse , p o r e je m p lo , m e d ia n te c ro m a to g ra fía líqu ida de a lto re nd im ie n to . Los e fe c to s de cu a lq u ie r d os is p a rtic u la r pueden se r m o n ito re a d o s p o r un b io e nsayo a de cu ad o . La d os is p uede s e r d e te rm in a d a p o r un m é d ico y a ju s tad a , seg ún sea n ecesa rio , para a d a p ta rse a los e fe c to s o b se rva d o s de l tra ta m ie n to .
En c ie rta s re a liza c io ne s , el e fe c to re su lta rá en un cam b io c u a n tifica b le de al m e no s a lre d e d o r de l 10% , al m e no s a lre d e d o r de l 20% , al m e no s a lre d e d o r de l 30% , al m e no s a lre d e d o r del 50% , al m e no s a lre d e d o r del 70% , o al m e no s a lre d e d o r del 90% . En a lg u n a s re a liza c io n e s , el e fe c to se tra d u c irá en un ca m b io c u a n tifica b le de a lre d e d o r de l 10% , a lre d e d o r del 20% , a lre d e d o r del 30% , a lre d e d o r del 50% , a lre d e d o r del 70% , o inc lu so a lre d e d o r de l 90% o m ás. El b en e fic io te ra p é u tico ta m b ié n inc lu ye la d e ten c ión o ra le n tiza c ió n de la p rog re s ión de la e n fe rm e d a d o tra s to rn o su b ya ce n te , in d e p e n d ie n te m e n te de q ue se p ro d u zca una m e jora .
T a l y com o se u tiliza en el p re se n te d o cu m e n to , los "m é to d o s de tra ta m ie n to " son ig u a lm e n te a p lica b le s al uso de una co m p o s ic ió n para tra ta r las e n fe rm e d a d e s o tra s to rn o s d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to y /o a las c o m p o s ic io n e s p ara e l uso y /o usos en la fa b rica c ió n de un m e d ica m e n to p ara tra ta r las e n fe rm e d a d e s o tra s to rn o s d e sc rito s en el p re se n te d ocum e n to .
Ejemplos
El té rm in o "A c T a fe ro n " se u tiliza o ca s io n a lm e n te en e ste d o cu m e n to para re fe rirse a una q u im e ra b asad a en el in te rfe rón .
En los s ig u ie n te s e je m p los , a m e n o s que se ind ique , las m u ta c io n e s a IFN son re la tiv a s a IF N -a2 hum a no : S E Q ID NO : 86. El m u ta n te Q 124 R es re p re se n ta tivo de un m u ta n te h u m a n o a te n u a d o de IFN a lfa 2 que p uede se r e n sa ya d o in v ivo en un m o d e lo m urino . E sp e c ífica m e n te , Q 124 R es una m u ta c ió n del IFN h um a no que se puede u tiliz a r en el ra tón (es dec ir, es un IFN m u ta n te h u m a n o que fu n c io n a en el ra tón ). V é a se Nat. C om . 2014 ;5 :3016. doi: 10.1038 /n co m m s4016.
El m u ta n te R 33 A /E 120 R es re p re se n ta tivo del m u ta n te h um a no IFN a lfa 2 que no es fu n c io n a l (y se u tiliza com o co n tro l)
El V H H a n ti-P D -L I h u m a n o u tilizad o en e s to s E je m p lo s es el S E Q ID NO : 256.
El a n ti-B cM O V H H se u tiliza en e s to s E je m p lo s co m o co n tro l (d irig id o a un a n tíg e n o irre le van te , es dec ir, "no d irig id o").
Ejemplo 1. Construcción y evaluación de VHHs específicos para Clec9A de ratón
Aislamiento de VHHs específicos de antígeno
U na b ib lio te ca V H H fu e som e tid a a 3 ro nd a s c o n se cu tiva s de p aneo (en so lu c ió n ), re a liza d a s en cé lu la s C H O -K 1 tra n s fe c ta d a s de fo rm a e s ta b le que e xp re sa n C le c 9 A de ra tón . El e n riq u e c im ie n to de fa g o s e sp e c ífico s de a n tíg e n o se e va luó d e sp u é s de cada ronda de p aneo co m p a ra n d o el n ú m e ro de p a rtícu la s de fa g é m id o s e lu id a s de las c é lu la s tra n s fe c ta d a s d e sp u é s d e l p an eo (s a lid a ) con el n ú m e ro de p a rtícu la s de fa g é m id o s u tiliz a d a s p ara el p aneo (e n trad a ). La p rod u cc ió n de fa g o s se m u ltip licó p or 50 y 30 en la 2 a y 3ta rondas, re sp e c tiva m e n te , en com p a ra c ió n con la p ro d u cc ió n de la 1a ronda . El fa g o de e n tra d a e ra s ie m p re de u no s 1011 y la sa lid a de la p rim e ra ro nd a e ra de una s 109 p a rtícu la s de fag o , lo q ue su g ie re que ya h ab ía un e n riq u e c im ie n to para los fa g o s e sp e c ífico s del o b je tivo en la p rim e ra ronda . Se se le cc io n a ro n a le a to ria m e n te 285 co lo n ia s (95 y 190 de la 1a y 2 a rondas, re sp e c tiv a m e n te ) y se a na liza ro n sus e x tra c to s p e rip lá sm ico s c ru do s ( in c lu id o s los v H h so lu b le s ) m e d ia n te E L IS A c e lu la r para c o m p ro b a r la un ión e sp e c ífica a las cé lu las C H O -K 1 tra n s fe c ta d a s , en co m p a ra c ió n con las cé lu las C H O -K 1 p are n ta les . N inguna de e stas co lo n ia s d io p o s itivo en el E L IS A ce lu la r, lo que sug ie re que, o b ien el E L IS A no es lo su fic ie n te m e n te se n s ib le en este caso, o b ien el a n tíg e n o se ve a fe c ta d o p o r la fijac ión de las cé lu las en el ELISA . P o r lo tan to , ca m b ia m o s a F A C S para la id e n tifica c ió n de V H H s e sp e c ífico s de an tíge no . En este caso, se cu e n c ia m o s 190 co lo n ia s se le cc io n a d a s al a za r de la 1a y 2 a rondas de e xp lo ra c ió n (95 de cad a ro nd a ) y luego a g ru p a m o s los V H H en fu n c ió n de las se cu e n c ia s C D R 3. E s to s e xp e rim e n to s d ie ro n com o re su lta d o la id e n tifica c ió n de 28 V H H d ife re n te s p e rte n e c ie n te s a 7 g ru p o s d is tin to s . En la T a b la 1 se d e sc rib e n los 28 c lo n e s q ue re p re se n ta n los 28 g e n e s d ife re n te s de C le c 9 A V H H de ratón. Se g e n e ró un E. co li TG1 que a lb e rg a b a el fa g é m id o re co m b in a n te p H E N 4 que co n te n ía se cu e n c ia s V H H a n ti-C le c9 A de ra tón y se a lm a ce n ó a -80°C . El v e c to r pH E N 4 co d ifica la re s is te n c ia a la am p ic ilina .
T a b la 1
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U tiliza n d o e x tra c to s p e rip lá sm ico s c ru do s que inc lu ían V H H s, re p re se n ta n te (s ) de cada g rup o fu e a n a liz a d o (s ) p o r F A C S p ara la e sp e c ific id a d a C le c 9 A de ra tón u tiliza n d o cé lu las C H O -K 1 tra n s fe c ta d a s con C le c9 A de ra tón . Las cé lu la s C H O -K 1 p a re n ta le s no tra n s fe c ta d a s s irv ie ro n com o cé lu la s de con tro l n eg a tivo . Los V H H s re p re se n ta tivo s p ro b a d o s p o r su e sp e c ific id a d h ac ia C le c 9 A de ra tón fue ro n los s ig u ie n te s : R1 M C L3 , R1 M C L7 , R1 M C L9 , R1 M C L12, R1 M C L13, R1 M C L33, R1 M C L71, R1 M C L95, R 2M C L15 , R 2M C L18 , R 2M C L20 , R 2M C L28 , R 2M C L36, R 2M C L 41, R 2M C L43, R 2M C L47 , R 2M C L57 , R 2M C L74 , R 2M C L86 , R 2M C L93. T o d o s los re p re se n ta n te s p rob a do s fu e ro n p o s itivo s p ara las c é lu la s C H O -K 1 tra n s fe c ta d a s con C le c 9 A de ra tón , lo q ue d e m u e s tra q ue los 28 V H H s se unen e sp e c ífica m e n te a C le c9 A de ra tón . A con tin u a c ió n , se a na lizó un re p re se n ta n te de cad a g rup o m e d ia n te F A C S para c o m p ro b a r la e sp e c ific id a d de C le c9 A de ra tón y h um a no u tiliza n d o cé lu las C H O -K 1 tra n s fe c ta d a s con C le c 9 A de ra tón o C le c9 A hum ano . A q u í ta m b ié n , las cé lu la s C H O -K 1 p a re n ta le s no tra n s fe c ta d a s s irv ie ron com o cé lu la s de con tro l nega tivo . Los V H H s re p re se n ta tivo s p rob a do s para la re ac tiv ida d entre e sp e c ie s fue ro n los s igu ien tes : R1 M C L3 , R1 M C L7, R1 M C L9, R1 M C L12, R1 M C L33, R 2M C L18 , R 2M C L43. N inguno de e stos V H H s m o stró una unión e sp e c ífica a C le c9 A hum ano , lo que sug ie re que e stos V H H s re con oce n e p íto p o s ún icos de C le c 9 A de ratón.
Expresión y purificación de VHHs
Los g e n e s V H H fue ro n re c lo n a d o s de los v e c to re s p H E N 4 a p H E N 6c. En con c re to , el gen V H H se a m p lificó p o r P C R u tiliza n d o el p H E N 4 re co m b in a n te que a lb e rga el gen V H H com o p la n tilla y los ce b a d o re s A 6 E y 38. Los ce b a d o re s A 6 E y 38 e ran ce b a d o re s de l m a rco 1 y del m a rco 4, re sp e c tiva m e n te . Las se cu e n c ia s de los ce b a d o re s fu e ro n las s igu ien tes :
• C e b a d o r A 6 E (5 ' G A T G T G C A G C T G C A G G A G T C T G G R *G G A G G 3 ') (S E Q ID N O :291).
• C e b a d o r 38 (5 ' G G A C T A G T G C G G C C G C T G G A G A C G G T G A C C T G G G T 3 ') (S E Q ID N O :292).
• C e b a d o r u n ive rsa l inve rso (5 ' T C A C A C A G G A A A C A G C T A T G A C 3 ') (S E Q ID N O :293).
• C e b a d o r u n ive rsa l h ac ia a d e la n te (5 ' C G C C A G G G T T T T C C C A G T C A C G A C 3 ') (S E Q ID N O :294).
*R s ig n ifica A o G.
El p ro to co lo de a m p lif ic a c ió n in c lu yó u nos 30 c ic lo s de P C R , cad a c ic lo in c lu yó 30 s e g u n d o s a 94°C , 30 s e g u n d o s a 55°C y 45 se g u n d o s a 72°C, se g u id o de 10 m in u tos de e x te n s ió n a 72°C al fin a l de la PCR. Se a m p lificó un fra g m e n to de unos 400 pb. T o d o s los V H H s re su lta n te s p ro d u c id o s u tiliza n d o el p ro to co lo d escrito a q u í com ie nza n con la s ig u ie n te secu en c ia : Q V Q L Q E S G G G (S E Q ID N O :295).
El p ro d u c to de la P C R se p u rificó (p o r e je m p lo , con el k it de p u rifica c ió n de P C R Q ia q u ic k de Q ia g e n ) y se d ig irió d u ra n te la n oche con Pstl. E l p ro d u c to de la P C R p u rif ica d o se d ig ir ió con B s tE II d u ra n te la n o ch e (o con Eco91 I de F e rm e n ta s ). La te m p e ra tu ra u tilizad a para la d ig e s tió n va rió . P o r e je m p lo , la d ig e s tió n con B stE II se h izo a 50°C o 60°C , d e p e n d ie n d o de l p ro ve e d o r de la enz im a.
P ara la ligac ión , se p urificó el p rod u cto de la PC R. El v e c to r p H E N 6 c se d ig irió con Pstl d u ra n te 3 horas, se purificó com o se ha d e sc rito a n te r io rm e n te y, a con tin u a c ió n , se d ig irió con B stE II d u ra n te 2 o 3 horas. A lte rn a tiva m e n te , la d ig e s tió n se llevó a cab o u tiliza n d o Eco91 I de F e rm e n ta s . El v e c to r d ig e rid o se co rrió en un ge l de a g a ro sa al 1%, y la b a n d a de l v e c to r se e x tra jo d e l ge l y se p u rificó (p o r e je m p lo , con el k it de e x tra c c ió n de g e l Q ia q u ic k de Q ia g e n ). El fra g m e n to de la P C R se ligó p o s te rio rm e n te al vec to r.
Se tra n s fo rm a ro n cé lu las W K 6 e le c tro co m p e te n te s con la re acc ión de ligac ión , y se se le cc io n a ro n los tra n s fo rm a n te s u tiliza n d o p la cas L B /a g a r/a m p ic ilin a (100 |jg /m l) /g lu co s a (1% ). Los c lo n e s p o s itivo s se a n a liza ro n p o r P C R u tiliza n d o ce b a d o re s u n ive rsa le s in ve rsos y d irec tos . Se a m p lificó un fra g m e n to de unos 550 pb, si el inse rto e s ta b a p resen te . P ara v e r if ic a r la ide n tid ad de los c lon es , se se cu e n c ia ro n al m e no s 2 c lon es p o r cada VH H u tiliza n d o ce b a d o re s in ve rsos un ive rsa les . La cap ac id ad de un ión de l a n tíg e n o se vo lv ió a c o m p ro b a r m e d ia n te E L IS A o c u a lq u ie r o tro e n sa yo a p ro p ia d o .
S ig u ie n d o el p ro to co lo an te rio r, se g e n e ró el gen V H H c lo n a d o en el v e c to r p H E N 6 c q ue c o n te n ía la s e cu e n c ia señ a l de P e lB en el N -te rm in a l y la co la de His6 en el C -te rm in a l. La se cu e n c ia líd e r P e lB d ir ig ió el V H H al e sp ac io p e rip lá sm ico de la E .co li, y la e tiq u e ta H is se u tilizó p ara la p u rif ica c ió n y d e te cc ió n de l V H H (p o r e je m p lo , en E L IS A , W e s te rn B lot, etc.).
Se rea lizó la e xp re s ió n y p u rifica c ió n de los V H H s. En con cre to , el d ía 1, se ino cu la ro n 10-20 ml de LB a m p ic ilin a (100 g /m l) g lu co sa (1 % ) con una co lo n ia de W K 6 re c ién tra n s fo rm a d a . E s te p re cu ltivo se in cu b ó a 37°C d u ra n te la n oche con ag itac ió n a 200 -250 rpm . El d ía 2, se u tilizó un m e d io de TB para e xp re sa r los V H H . El m e d io de TB inc lu ido , p o r litro: 2 ,3 g de K H 2P 04, 16,4 g de K 2 H P 04.3 H 20 , 12 g de trip to n a (D u ch e fa B ioch em ie ), 24 g de le va d u ra (D u ch e fa B io ch e m ie ) y 4 ml de g lice ro l 100% (D u ch e fa B ioch em ie ).
Se llenó un m a traz a g ita d o r de 1 litro con 330 m l de T B y se e s te rilizó en a u toc la ve . K H 2 P 04 y K 2 H P 04.3 H 20 no fu e ro n e s te riliz a d o s en a u to c la ve . En su lugar, se p re p a ra ro n K H 2 P 04 y K 2 H P 04.3 H 20 , se e s te riliza ro n m e d ia n te un filtro y se a ñ a d ie ro n al re s to de l m e d io ya e s te riliza d o en au toc la ve . A p ro x im a d a m e n te 1 ml del p re cu ltivo se a ña d ió a 330 m l de T B su p le m e n ta d a con 100 g /m l de A m p ic ilin a , 2 m M de M g C l2 y 0 ,1 % de g lu cosa , y p o s te rio rm e n te se cu ltivó a 37°C con a g ita c ió n (200 -250 rp m ) h asta a lc a n z a r una D O de 0 ,6 -0 ,9. S e a ña d ió IP T G (co n ce n tra c ió n fina l de 1 m M ) para in d u c ir la e xp re s ió n de V H H . El cu ltivo se incubó a 28°C con ag itac ió n d u ra n te tod a la n oche (u na s 16-18 horas). La D O 600 tra s la ind u cc ió n n o c tu rn a so lía e s ta r e n tre 25 y 30. Se p re p a ró al m e no s 1 litro de cu ltivo (3 b o te lla s ) p o r c lon con un re n d im ie n to m e d io de e n tre 1 y 15 m g/l.
La e x tra cc ió n de los V H H s de l p e rip la s m a de E. co li se re a lizó el d ía 3. Las so lu c io n e s u tiliz a d a s fu e ro n : T E S : 0 ,2 M T ris pH 8,0, 0 ,5 m M E D TA , 0 ,5 M de sa ca ro sa y T E S /4 : T E S d ilu ido 4 v e ce s en agua.
Los cu ltivos ind u c id o s d u ra n te la n oche fue ro n ce n trifu g a d o s d u ra n te 8 m in u to s a 8000 rpm . Los p e lle ts de cé lu las de un litro de cu ltivo se re su sp e n d ie ro n en 12 m l de T E S p ip e te a n d o a rriba y a ba jo y se a g ita ro n d u ra n te 1 h ora en h ie lo . P o r cad a 12 m l de T E S u tilizad os , se a ñ a d ie ro n uno s 18 m l de T E S /4 y se incu ba ro n en h ie lo d u ra n te una hora m ás con a g ita c ió n , se g u id a de una c e n trifu g a c ió n d u ra n te 30 m in u to s a 8000 rpm a 4°C. El so b re n a d a n te que co n te n ía p ro te ín a s e x tra íd a s de l e sp a c io p e rip lá sm ico se tra n s fir ió a tu b o s fa lco n fre sco s.
Los V H H s fue ro n p o s te rio rm e n te p u rifica d o s p or IM A C q ue u tilizó la s ig u ie n te so lu c ió n : H IS -se le c t (S IG M A ), PBS, y 50 m M de N a A ce ta to pH 4,6.
H is -se le c t se e q u ilib ró con PBS. En concre to , p o r cad a e x tra c to p e rip lá sm ico d e riva d o de un cu ltivo de 1 litro, se a ñ a d ió 1 ml de re s ina (u n o s 2 m l de so lu c ió n H is -se le c t) a un tu b o fa lco n de 50 ml. T a m b ié n se a ñ a d ió P B S h as ta un v o lu m e n fin a l de 50 m l y se m e zc ló . S e c e n tr ifu g ó a 2.000 rp m d u ra n te 2 m in u to s y se d e sca rtó el s o b re n a d a n te . La re s ina se lavó con P B S d os v e c e s co m o se ha d e sc rito a n te r io rm e n te . El e x tra c to p e rip lá sm ico se a ñ a d ió a la re s ina y se incu bó e n tre 30 m in u to s y 1 hora a te m p e ra tu ra a m b ie n te con a g ita c ió n suave . Las m u e s tra s se ca rg a ro n en c o lu m n a s P D -10 con un filtro en el fo n d o (G E h ea lth ca re , cat. N° 17 -0435 -01 ) y se lavó con 50 a 100 m l de P B S (50 ­ 100 ml de P B S p o r 1 m l de re s ina u tilizad a ). La e lu c ió n se llevó a cab o 3 ve ce s , cad a ve z con 1 m l de P B S /0 ,5 M de im id a zo l p o r 1 ml de res ina u tiliza d a (p a ra una e lu c ión e ficaz, re s u s p e n d e r las perlas y d e ja rlas to d a la n oche a 4°C con el fo n d o de la co lu m n a ce rra do ). S e rea lizó una d iá lis is d u ra n te la n oche a 4°C con tra P B S (co rte de 3500 D a lto n s ) para e lim in a r el im idazo l. P ara una d iá lis is e ficaz, el ta m p ó n de d iá lis is (P B S ) se ca m b ió 2 -3 vece s. A lte rn a tiv a m e n te , en lu g a r de la e lu c ió n con im id azo l, los V H H s u n id o s p o d ría n s e r e lu id o s con 10 ml de N a -a ce ta to 50 m M pH 4,6. Si se u tilizab a N a-ace ta to 50 m M pH 4 ,6 para e lu ir los V H H s, los V H H s e lu id os se n eu tra liza b a n in m e d ia ta m e n te con T ris 1 M pH 8,0, y no se re q u e ría d iá lis is .
La can tida d de p ro te ína se e s tim ó m e d ia n te la m e d ic ió n de O D 280 de la m u e s tra e lu ida . El co e fic ie n te de e xtin c ió n de cada c lon se d e te rm in ó m e d ia n te la h e rra m ie n ta p ro tP a ra m en el a n á lis is de la e s tru c tu ra p rim a ria en el s e rv id o r de p ro te ó m ica E xpasy. La p urificac ió n p o s te rio r de los V H H s p od ría lo g ra rse p o r d ife re n te s m é to do s . P o r e jem p lo , las m u e s tra s p od rían co n c e n tra rse (co rte de V iva sp in 5000 m W , V iv a s c ie n ce ) c e n tr ifu g a n d o a 2000 rpm a 4°C hasta o b te n e r un v o lu m e n a d e cu a d o p ara la ca rga en un S u p e rd e x 75 16/60 (m áx. 4 m l). La m u e s tra c o n ce n tra d a se ca rgó en una co lu m n a S u p e rd e x 75 16/60 e q u ilib ra d a con PBS. Las fra cc io n e s de los p icos se a g ru p a ro n y se re a liza ro n m e d ic io n e s de O D 280 p ara su cu a n tifica c ió n . En g en e ra l, los V H H s e lu ye ron d e sp u é s de 85 -95 m in u to s cu a n d o se e je cu tó a 1 m l/m in . Las a lícu o ta s de las m u e s tra s de V H H co n ce n tra d a s se a lm a ce n a ro n a -20°C a una c o n ce n tra c ió n de a p ro x im a d a m e n te 1 m g/m l.
Análisis funcional de los VHHs
Se p rob ó la un ión de los V H H s a C lec9A . La Figura 1 m u e s tra la un ión de los d is tin to s V H H s a las c é lu la s C H O que e xp re sa n de fo rm a e s ta b le C lec9A . En to d o s los e xp e rim e n to s , los V H H fue ro n e tiq u e ta d o s de la s ig u ie n te m anera :
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Se re a liza ro n e xp e rim e n to s para c a ra c te r iza r la ac tiv ida d de los V H H s en el tra ta m ie n to de tu m o re s . En los e xp e rim e n to s de la Figura 2, se inye cta ro n ra ton es C 57 B L /6 J h e m b ra s.c. con 6 x105 cé lu las B 16 B l6 -m C D 20 en 50 |jl de PBS. S ie te d ías d espu és , se in ic ia ro n los tra ta m ie n to s p e rile s io n a le s (= s.c. en el b o rde de l tum o r). Se inyectó m lF N W T en u na dos is de 8 x106 UI, m ie n tra s que se inye cta ro n 5500 UI de la p ro te ína q u im é rica . Los tra ta m ie n to s se a d m in is tra ro n en los d ías 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16 y 17 d e sp u é s de la in o cu la c ió n de las cé lu la s tu m o ra le s . Los ra ton es de con tro l fue ro n inye cta do s con 100 |jl de PBS. El c re c im ie n to de l tu m o r se con tro ló con un ca lib ra d o r d ig ita l. Se re p re se n ta n las m e d ia s ± S E M (n = 5 ) de los ta m a ñ o s de los tu m o re s (Figura 2 pane l A ) y los ca m b io s en el peso co rp o ra l (Figura 2 pan e l B). Un d ía d e sp u é s del ú ltim o tra ta m ie n to (d ía 18), se re co g ió sa n g re con E D T A de la ve n a de la co la para a n a liza r los p a rá m e tro s h e m a to ló g ico s (Figura 2 pane l C ) u tiliz a n d o un a n a liza d o r H e m a ve t 950 F S (D re w S c ien tific ).
C o m o se m u e s tra en la Figura 2, p an e l A, la a d m in is tra c ió n de V H H s con tra C le c 9 A re du jo e fe c tiv a m e n te el ta m a ñ o del tum o r. La Figura 2, p an e le s B y C, d e m u e s tra n que el tra ta m ie n to con los V H H s no p ro d u jo p é rd ida de peso ni to x ic id a d h em a to ló g ica , re sp e c tiva m e n te . Es im p o rta n te d e s ta ca r que los p an e le s B y C m u e s tra n la m e jo ra de los p a rá m e tro s de seg u rida d (p eso co rpo ra l, p a rá m e tro s de re cu e n to s a n g u ín e o ) de las q u im e ra s en re lac ió n con el in te rfe ró n de tip o sa lva je .
Ejemplo 2. Construcción y evaluación de VHHs específicos para Clec9A humano
Aislamiento de VHHs específicos de antígeno
U na b ib lio te ca V H H fu e som e tid a a 2 ro nd a s c o n se cu tiva s de p aneo (en so lu c ió n ), re a liza d a s en cé lu la s C H O -K 1 tra n s fe c ta d a s de fo rm a e s ta b le que e xp re sa n C le c 9 A h um a no . El e n riq u e c im ie n to de fa g o s e sp e c ífico s de a n tíg e n o se e va luó d e sp u é s de cada ronda de p aneo co m p a ra n d o el n ú m e ro de p a rtícu la s de fa g é m id o s e lu id a s de las c é lu la s tra n s fe c ta d a s d e sp u é s d e l p an eo (s a lid a ) con el n ú m e ro de p a rtícu la s de fa g é m id o s u tiliz a d a s p ara el p aneo (e n trad a ). La p rod u cc ió n de fa g o s se m u ltip licó p o r 1 C P en la 2 a ronda , en co m p a ra c ió n con la p ro d u cc ió n de la 1a ronda . El fa g o de e n tra d a fue de a p ro x im a d a m e n te 1011 y la sa lid a de la p rim e ra ro nd a fue de a p ro x im a d a m e n te 2 x 108 p a rtícu la s de fago. Se se le cc io n a ro n al a za r 95 co lo n ia s de la ro nd a y se a na liza ro n sus e x tra c to s p e rip lá sm ico s c ru do s ( in c lu ye n d o V H H s so lu b le s ) m e d ia n te E L IS A c e lu la r para la un ión e sp e c ífica a C HO -K1 tra n s fe c ta d a s , en co m p a ra c ió n con las cé lu las C H O -K 1 p a re n ta les . N in g u n a de e stas co lo n ia s d io p os itivo en el E L IS A ce lu la r, lo q ue su g ie re que, o b ien el E L IS A no era lo su fic ie n te m e n te se n s ib le en e ste caso , o b ien el a n tíg e n o se ve ía a fe c ta d o p o r la f ija c ió n de las cé lu las en el E L IS A . P o r lo tan to , se u tilizó el a n á lis is F A C S p ara la id e n tifica c ió n de V H H s e sp e c ífico s de an tíge no . En este caso, se se cu e n c ia ro n 190 co lo n ia s se le cc io n a d a s al a za r de la 1a y 2 a ro nd a s de e xp lo ra c ió n (95 de cada ro nd a ) y luego se a gru p a ro n los V H H en fun c ión de las s e cu e n c ia s C D R 3. E stos e xp e rim e n to s d ie ron com o re su lta d o la id e n tifica c ió n de 27 V H H s d ife re n te s p e rte n e c ie n te s a 11 g ru p o s d is tin to s (Figura 5). Las se cu e n c ia s de n u c le ó tid o s y a m in o á c id o s de los 27 V H H s a n ti-C le c 9 A h um a n o s se m u e s tra n en las Figuras 3 y 4, re sp e c tiva m e n te . En la T a b la 2 se d e sc rib e n 27 c lo n e s q ue re p re se n ta n los 27 g en es d ife re n te s de V H H a n ti-C le c 9 A h um anos . S e g en e ró E. co li TG1 que a lb e rga el fa g é m id o re co m b in a n te p H E N 4 que c o n tie n e se cu e n c ia s V H H a n ti-C le c 9 A h u m a n a s y se a lm a ce n ó a -80°C . El v e c to r p H E N 4 co d ifica la re s is te n c ia a la am p ic ilina .
T a b la 2.
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U tiliza n d o e x tra c to s p e rip lá sm ico s c ru do s que inc lu ían V H H s, re p re se n ta n te (s ) de cada g rup o fu e a n a liz a d o (s ) p o r F A C S para la e sp e c ific id a d a C le c9 A h um a no y de ra tón u tiliza n d o cé lu las C H O -K 1 tra n s fe c ta d a s con C le c9 A de ra tón o C le c 9 A hum a no . Las cé lu la s C H O -K 1 p a re n ta le s no tra n s fe c ta d a s s irv ie ro n com o cé lu la s de con tro l nega tivo . Los V H H s re p re se n ta tivo s p ro b a d o s fue ro n los s igu ien tes : R1 C H C L 16 , R1 C H C L 27 , R1 C H C L34 , R1 C H C L50, R 2C H C L 3 , R 2C H C L10 , R 2C H C L13 , R 2C H C L24 , R 2C H C L25 , R 2C H C L27 , R 2C H C L32 , R 2C H C L38 , R 2C H C L49 , R 2 C H C L 69 y R 2C H C L87. T o d o s los re p re se n ta n te s p rob a do s fu e ro n p o s itivo s para las cé lu la s C H O -K 1 tra n s fe c ta d a s con C le c 9 A hum a no , lo que d e m u e s tra que los 27 V H H s se u n ie ron e sp e c ífica m e n te a C le c9 A h um a no . A d e m á s, V H H R 2 C H C L 10 de l g ru p o 5 ta m b ié n re a cc io n ó fu e rte m e n te con C le c 9 A de ra tón en FA C S . V H H R1 C H C L34 , ta m b ié n del g rup o 5, re a cc io n ó con C le c 9 A de ra tón , pero m uy d é b ilm e n te . El V H H R1 C H C L 82 del g ru p o 5 no fue p ro b a d o en FA C S . A d e m á s , V H H R 2 C H C L 32 del g ru p o 7 re a cc io n ó d é b ilm e n te con C le c 9 A de ra tón en FA C S . Los o tros 2 m ie m b ro s de l g rup o 7 (V H H s R1 C H C L 56 y R 2 C H C L 69 ) no fue ro n p ro b a d o s en FACS.
Expresión y purificación de VHH
Los g e n e s V H H fue ro n re c lo n a d o s de los v e c to re s p H E N 4 a p H E N 6c. En con c re to , el gen V H H se a m p lificó p o r P C R u tiliza n d o el p H E N 4 re co m b in a n te que a lb e rga el gen V H H com o p la n tilla y los ce b a d o re s A 6 E y 38. Los ce b a d o re s A 6 E y 38 e ran ce b a d o re s m arco1 y m arco4 , re sp e c tiva m e n te . Las se cu e n c ia s de los ce b a d o re s fue ro n las s igu ien tes :
• C e b a d o r A 6 E (5 ' G A T G T G C A G C T G C A G G A G T C T G G R * G G A G G 3 ') (S E Q ID N O :291).
• C e b a d o r 38 (5 ' G G A C T A G T G C G G C C G C T G G A G A C G G T G A C C T G G G T 3 ') (S E Q ID N O :292).
• C e b a d o r u n ive rsa l inve rso (5 ' T C A C A C A G G A A A C A G C T A T G A C 3 ') (S E Q ID N O :293).
• C e b a d o r u n ive rsa l h ac ia a d e la n te (5 ' C G C C A G G G T T T T C C C A G T C A C G A C 3 ') (S E Q ID N O :294). *R s ig n ifica A o G.
El p ro to co lo de a m p lif ic a c ió n in c lu yó u no s 30 c ic lo s de P C R , ca d a c ic lo in c lu yó 30 s e g u n d o s a 94°C , 30 s e g u n d o s a 55°C y 45 se g u n d o s a 72°C, se g u id o de 10 m in u tos de e x te n s ió n a 72°C al fin a l de la PCR. Se a m p lificó un fra g m e n to de uno s 400 pb.
El p ro d u c to de la P C R se p u rificó (p o r e je m p lo , con el k it de p u rifica c ió n de P C R Q ia q u ic k de Q ia g e n ) y se d ig irió d u ra n te la n oche con P stl. El p ro d u c to de la P C R p u rif ica d o se d ig irió con B s tE II d u ra n te la n o ch e (o con Eco91 I de F e rm e n ta s ). La te m p e ra tu ra u tilizad a para la d ig e s tió n va rió . P o r e je m p lo , la d ig e s tió n con B stE II se h izo a 50°C o 60°C , d e p e n d ie n d o de l p ro ve e d o r de la enz im a.
P ara la ligac ión , se p urificó el p rod u cto de la PC R. El v e c to r p H E N 6 c se d ig irió con Pstl d u ra n te 3 horas, se purificó com o se ha d e sc rito a n te r io rm e n te y, a con tin u a c ió n , se d ig irió con B stE II d u ra n te 2 o 3 horas. A lte rn a tiva m e n te , la d ig e s tió n se llevó a ca b o u tiliza n d o Eco91 I de F e rm e n ta s . El v e c to r d ig e rid o se co rrió en un ge l de a g a ro sa al 1%, y la b a n d a de l v e c to r se e x tra jo d e l ge l y se p u rificó (p o r e je m p lo , con e l k it de e x tra cc ió n de ge l Q ia q u ic k de Q ia g en ). El fra g m e n to de la P C R se ligó p o s te rio rm e n te al vec to r.
Se tra n s fo rm a ro n cé lu las W K 6 e le c tro co m p e te n te s con la re acc ión de ligac ión , y se se le cc io n a ro n los tra n s fo rm a n te s u tiliza n d o p la cas L B /a g a r/a m p ic ilin a (100 |jg /m l) /g lu co s a (1% ). Los c lo n e s p o s itivo s se a n a liza ro n p o r P C R u tiliza n d o ce b a d o re s u n ive rsa le s in ve rsos y d irec tos . Se a m p lificó un fra g m e n to de unos 550 pb, si el inse rto e s ta b a p resen te . P ara v e r if ic a r la ide n tid ad de los c lon es , se se cu e n c ia ro n al m e no s 2 c lon es p o r cada VH H u tiliza n d o ce b a d o re s in ve rsos u n ive rsa les . La cap ac id ad de un ión de l a n tíg e n o se vo lv ió a c o m p ro b a r m e d ia n te E L IS A o c u a lq u ie r o tro e n sa yo a p ro p ia d o .
S ig u ie n d o el p ro to co lo an te rio r, se g e n e ró el gen V H H c lo n a d o en el v e c to r p H E N 6 c q ue co n te n ía la s e cu e n c ia señ a l de P e lB en el N -te rm in a l y la co la de His6 en el C -te rm in a l. La se cu e n c ia líd e r P e lB d ir ig ió el V H H al e sp ac io p e rip lá sm ico de la E .co li, y la e tiq u e ta H is se u tilizó p ara la p u rifica c ió n y d e te cc ió n de l V H H (p o r e je m p lo , en E LIS A , W e s te rn B lot, etc.).
Se rea lizó la e xp re s ió n y p urificac ió n de los V H H s. En con cre to , el d ía 1, se ino cu la ro n 10-20 ml de LB a m p ic ilin a (100 g /m l) g lu co sa (1 % ) con una co lo n ia de W K 6 re c ién tra n s fo rm a d a . E s te p re cu ltivo se in cu b ó a 37°C d u ra n te la n oche con ag itac ió n a 200 -250 rpm . El d ía 2, se u tilizó un m e d io de TB para e xp re sa r los V H H . El m e d io de TB inc lu ido , p o r litro: 2 ,3 g de K H 2P 04, 16,4 g de K 2 H P 04.3 H 20 , 12 g de trip to n a (D u ch e fa B ioch em ie ), 24 g de le va d u ra (D u ch e fa B io ch e m ie ) y 4 ml de g lice ro l 100 % (D u ch e fa B io ch e m ie )
Se llenó un m a traz a g ita d o r de 1 litro con 330 ml de TB y se e s te rilizó en au toc la ve . K H 2 P 04 y K 2 H P 04.3 H 20 no fu e ro n e s te riliz a d o s en a u to c la ve . En su lugar, se p re p a ra ro n K H 2 P 04 y K 2 H P 04.3 H 20 , se e s te riliza ro n m e d ia n te un filtro y se a ñ a d ie ro n al re s to de l m e d io ya e s te riliza d o en au toc la ve . A p ro x im a d a m e n te 1 ml del p re cu ltivo se a ña d ió a 330 m l de T B su p le m e n ta d a con 100 g /m l de A m p ic ilin a , 2 m M de M g C l2 y 0 ,1 % de g lu cosa , y p o s te rio rm e n te se cu ltivó a 37°C con a g ita c ió n (200 -250 rp m ) h asta a lc a n z a r una D O de 0 ,6 -0 ,9. S e a ña d ió IP T G (co n ce n tra c ió n fina l de 1 m M ) para in d u c ir la e xp re s ió n de V H H . El cu ltivo se incubó a 28°C con ag itac ió n d u ra n te tod a la n oche (u na s 16-18 horas). La O D w o tra s la ind u cc ió n n o c tu rn a so lía e s ta r e n tre 25 y 30. S e p re p a ró al m e n o s 1 litro de c u ltivo (3 b o te lla s ) p o r c lon con un re n d im ie n to m e d io de e n tre 1 y 15 m g/l.
La e x tra cc ió n de los V H H s de l p e rip la s m a de E. co li se re a lizó el d ía 3. Las so lu c io n e s u tiliz a d a s fu e ro n : T E S : 0 ,2 M T ris pH 8,0, 0 ,5 m M E D TA , 0 ,5 M de sa ca ro sa y T E S /4 : T E S d ilu ido 4 v e ce s en agua.
Los cu ltivos ind u c id o s d u ra n te la n oche fue ro n ce n trifu g a d o s d u ra n te 8 m in u to s a 8000 rpm . Los p e lle ts de cé lu las de un litro de cu ltivo se re su sp e n d ie ro n en 12 m l de T E S p ip e te a n d o a rriba y a ba jo y se a g ita ro n d u ra n te 1 h ora en h ie lo . P o r cad a 12 m l de T E S u tilizad os , se a ñ a d ie ro n u nos 18 m l de T E S /4 y se incu ba ro n en h ie lo d u ra n te una hora m ás con a g ita c ió n , se g u id a de una c e n trifu g a c ió n d u ra n te 30 m in u to s a 8000 rpm a 4°C. El so b re n a d a n te que co n te n ía p ro te ín a s e x tra íd a s de l e sp a c io p e rip lá sm ico se tra n s fir ió a tu b o s fa lco n fre sco s.
Los V H H s fue ro n p o s te rio rm e n te p u rifica d o s p or IM A C q ue u tilizó la s ig u ie n te so lu c ió n : H IS -se le c t (S IG M A ), PBS, y 50 m M de N a A ce ta to pH 4,6.
H is -se le c t se e q u ilib ró con PBS. En concre to , p o r cad a e x tra c to p e rip lá sm ico d e riva d o de un cu ltivo de 1 litro, se a ñ a d ió 1 ml de re s ina (u n o s 2 m l de so lu c ió n H is -se le c t) a un tu b o fa lco n de 50 ml. T a m b ié n se a ñ a d ió P B S h as ta un v o lu m e n f in a l de 50 m l y se m e zc ló . Se c e n tr ifu g ó a 2.000 rp m d u ra n te 2 m in u to s y se d e s c a rtó e l so b re n a d a n te . La re s ina se lavó con P B S d os v e c e s co m o se ha d e sc rito a n te r io rm e n te . El e x tra c to p e rip lá sm ico se a ñ a d ió a la re s ina y se incu bó e n tre 30 m in u to s y 1 hora a te m p e ra tu ra a m b ie n te con a g ita c ió n suave . Las m u e s tra s se ca rg a ro n en c o lu m n a s P D -10 con un filtro en el fo n d o (G E h ea lth ca re , cat. N° 17 -0435 -01 ) y se lavó con 50 a 100 m l de P B S (50 ­ 100 ml de P B S p o r 1 m l de re s ina u tilizad a ). La e lu c ió n se llevó a cab o 3 ve ce s , cad a ve z con 1 m l de P B S /0 ,5 M de im id a zo l p o r 1 ml de res ina u tiliza d a (p a ra una e lu c ión e ficaz, re s u s p e n d e r las perlas y d e ja rlas to d a la n oche a 4°C con el fo n d o de la co lu m n a ce rra do ). S e rea lizó una d iá lis is d u ra n te la n oche a 4°C con tra P B S (co rte de 3500 d a lto n s ) para e lim in a r el im id azo l. P ara una d iá lis is e fica z, el ta m p ó n de d iá lis is (P B S ) se ca m b ió 2 -3 vece s.
A lte rn a tiv a m e n te , en lu g a r de la e lu c ió n con im id azo l, los V H H s u n id o s p o d ría n s e r e lu id o s con 10 ml de N a -a ce ta to 50 m M pH 4,6. Si se u tilizab a N a-ace ta to 50 m M pH 4 ,6 para e lu ir los V H H s, los V H H s e lu id os se n eu tra liza b a n in m e d ia ta m e n te con T ris 1 M pH 8,0, y no se re q u e ría d iá lis is .
La can tida d de p ro te ín a se e s tim ó m e d ia n te la m e d ic ió n de O D 280 de las m u e s tra s e lu id as . El c o e fic ie n te de e x tin c ió n de cad a c lon se d e te rm in ó m e d ia n te la h e rra m ie n ta p ro tP a ra m en el a n á lis is de la e s tru c tu ra p rim a ria en el s e rv id o r de p ro te ó m ica E xpasy. La p urificac ió n p o s te rio r de los V H H s p od ría lo g ra rse p o r d ife re n te s m é todos . P o r e je m p lo , las m u e s tra s p od rían co n c e n tra rse (co rte de V ivasp in 5000 M W , V iv a s c ie n ce ) c e n tr ifu g a n d o a 2000 rpm a 4°C h as ta o b te n e r un v o lu m e n a d e cu a d o para la ca rga en un S u p e rd e x 75 16/60 (m áx. 4 m l). La m u es tra co n ce n tra d a se ca rgó en una co lu m n a S u p e rd e x 75 16/60 e q u ilib ra d a con PBS. Las fra cc io n e s de los p icos se a g ru p a ro n y se re a liza ro n m e d ic io n e s de O D 280 p ara su cua n tifica c ió n . En g en e ra l, los V H H s e lu ye ron d e sp u é s de 85 -95 m in u to s cu a n d o se e je cu tó a 1 m l/m in . Las a lícu o ta s de las m u e s tra s de V H H c o n ce n tra d a s se a lm a ce n a ro n a -20°C a una c o n ce n tra c ió n de a p ro x im a d a m e n te 1 m g/m l.
A las se cu e n c ia s de la Figura 3 y la Figura 4 se les a s ig na n id e n tif ica d o re s de se cu e n c ia com o se m u e s tra en la ta b la s ig u ie n te . A d e m á s , las c a ra c te r ís tic a s de u n ión de los V H H s a n ti-C le c 9 A h um a no s , d e sp u é s de la p u rifica c ió n , se e n sayó m e d ia n te la un ión a las cé lu la s H E K -293 T tra n s fe c ta d a s con C le c9 A se m u es tra en la ta b la s igu ien te . B re ve m e n te , las cé lu la s H e k293 T fu e ro n tra n s fe c ta d a s con un p lá sm id o de e xp re s ió n de C le c9 A h um a no u tiliza n d o un p ro ce d im ie n to e s tá n d a r de fo s fa to de ca lc io . D os d ías d e sp u é s de la tra n s fe c c ió n , las cé lu las se re su sp e n d ie ro n en ta m p ó n F A C S (P B S s u p le m e n ta d o con 2 % de F B S y 0 ,5 m M de E D T A ) y se in cu b a ro n con una d ilu c ió n en se rie de V H H (1000 ng/m l; 1 sob re 3) d u ra n te dos horas a 4°C. Los V H H no u n id os se lava ron con ta m p ó n FA C S . Las m u e s tra s se tiñ e ro n a d e m á s con un A b a n ti-H is a co p la d o con F ITC d u ra n te 45 m in u to s a 4°C y se a n a liza ro n con un F A C S C a lib u r (B D B io sc ie n ce s ) y el so ftw a re C e llQ u e s t P ro V e rs ió n 4.0.2 (B D B iosc ien ces).
Figure imgf000083_0001
Figure imgf000084_0001
Ejemplo 3. Terapia combinada con quimeras Clec9A y factor de necrosis tumoral
Se p ro b a ro n los e fe c to s a n titu m o ra le s de una te ra p ia c o m b in a d a u tiliza n d o V H H s e sp e c ífico s p ara C le c 9 A de ra tón y el F a c to r de N e c ro s is T u m o ra l (T N F). S e ino cu la ro n ra ton es p o r v ía su b cu tá n e a con B16 (u na línea c e lu la r de m e la n o m a de ra tón ) para in d u c ir tu m o re s . P o s te rio rm e n te , los ra ton es re c ib ie ro n tra ta m ie n to s p e rile s io n a le s (= s.c. en el borde de l tu m o r) con un V H H C le c9 A q u im é rico e sp e c ífico para C le c9 A de ra tón fu s io n a d o con un in te rfe rón a lfa 2 h u m a n o m o d ifica d o (m u ta n te Q 124R , "A cT a C le c9 A ") con o sin TN F . Los ra ton es de co n tro l fu e ro n tra ta d o s con P B S o con el V H H q u im é rico C le c 9 A so lo o con T N F so lo . El c re c im ie n to de l tu m o r se co n tro ló con un c a lib ra d o r d ig ita l. T a m b ié n se re cog ió san g re con E D T A de la v e n a de la co la para a n a liza r los p a rá m e tro s h e m a to ló g ico s con un a n a liza d o r H e m a v e t 950 F S (D re w S c ien tific ).
C om o se m u es tra en la Figura 6, pane l A, el tra ta m ie n to co m b in a d o u tilizan do el C le c9 A V H H q u im é rico y el TN F p ro vo có p o te n te s e fe c to s a n titu m o ra le s sin re a p a ric ió n de l tu m o r en el d ía 38, en co m p a ra c ió n con el tra ta m ie n to con cu a lq u ie ra de los a ge n tes p o r sep a rad o . La Figura 6, pane l B, m u e s tra que el tra ta m ie n to co m b in a d o fue bien to le ra d o y no indu jo to x ic id a d h e m a to ló g ica en co m p a ra c ió n con el tra ta m ie n to con IFN de tip o sa lva je so lo o con IFN de tip o sa lva je con TN F. En con jun to , e stos d a tos sug ie ren un e fec to s in é rg ico para la te ra p ia co m b in a d a u tiliza n d o V H H s C le c 9 A q u im é rico s y TN F . El m u ta n te Q 124 R es re p re se n ta tivo de un m u ta n te h u m a n o a te n u a d o de IFN a lfa 2 que puede se r e n sa ya d o in v ivo en un m o d e lo m u rin o . E sp e c ífica m e n te , Q 124R es una m u ta c ión del IFN h u m a n o q ue se p ue de u tiliz a r en el ra tón (es dec ir, es un IFN m u ta n te h u m a n o q ue fu n c io n a en el ra tón). V é a se Nat. C om . 2014 ;5 :3016. doi: 10.1038 /n co m m s4016.
Ejemplo 4. Terapia combinada con quimeras Clec9A y anticuerpos anti-PD-L1
La Figura 7 m u estra el e fec to co m b in a d o de una q u im e ra de un V H H e sp e c ífico para C le c9 A de ra tón fu s io n a d o a un IFN a lfa 2 h um a no m o d ifica d o (m u ta n te Q 124 R ) y un a n ticu e rp o an ti-P D -L1 ("C le c9 A -A cT a fe ro n a n ti-P D -L 1 ") en c o m p a ra c ió n con P B S (co n tro l neg a tivo ), q u im e ra de un V H H e sp e c ífico p ara C le c 9 A de ra tón fu s io n a d o a un IFN h u m a n o m o d ifica d o (m u ta n te Q 124R , "C le c9 A -A c T a fe ro n ") so lo , y a n ticu e rp o an ti-P D -L1 ("a n ti-P D -L 1 ") solo .
C o m o se d e m u e s tra en el e xp e rim e n to in v ivo de la Figura 7, la co m b in a c ió n de una q u im e ra de C le c 9 A fu s io n a d a con un IFN h um a no m o d ifica d o y un a n ticu e rp o anti-P D -L1 p ro p o rc io n a s in e rg ia con re sp e c to a la p rog re s ió n del tu m o r. En con c re to , el tra ta m ie n to co m b in a d o p ro p o rc io n ó no só lo e s ta s is , s ino ta m b ié n la re d u cc ió n de l tum o r. E s to es p a rticu la rm e n te n o tab le en co m p a ra c ió n con, p o r e je m p lo , el a n ticu e rp o an ti-P D -L1 so lo , ya q ue los ra ton es tra ta d o s con e llos m o s tra b a n tu m o re s en c re c im ie n to al fina l de l e xp e rim e n to .
El m u ta n te Q 124 R es re p re se n ta tivo de un m u ta n te de IFN a lfa 2 h u m a n o a te n u a d o q ue p ue de e n sa ya rse in v ivo en un m o d e lo m urino . E sp e c ífica m e n te , Q 124 R es una m u ta c ión de l IFN h u m a n o que se p uede u tiliz a r en el ra tón (es dec ir, es un IFN m u ta n te h um a no que fu n c io n a en el ra tón). V é a se Nat. C om . 2014 ;5 :3016. doi: 10.1038 /n co m m s4016.
Ejemplo 5. Terapia combinada con quimeras Clec9A y quimioterapia
La figura 8 m u e s tra el e fe c to co m b in a d o de una q u im e ra de un V H H e sp e c ífico p ara C le c 9 A de ra tón fu s io n a d o a un IFN h um a no m o d ifica d o (Q 124 R ) y fu s io n a d o a un V H H a n t i-P D -L I, y d o xo rru b ic in a ("C le c9 A -Q 124 R -P D -L 1 doxo"), en co m p a ra c ió n con una q u im e ra de un V H H e sp e c ífico para C le c9 A de ra tón fu s io n a d o a un IFN hum a no m o d ifica d o ("Q 124 R ") y fu s io n a d o a un V H H an ti-P D -L1 ("C le c 9 A -Q 124 R -P D -L 1 "), d o xo rru b ic in a ("d o xo ") y PBS (co n tro l n eg a tivo ).
C o m o se d e m u e s tra en el e x p e r im e n to in v ivo de la Figura 8, la co m b in a c ió n de una q u im e ra de un V H H e sp e c ífico para C le c 9 A de ra tón fu s io n a d o a un in te rfe rón h um a no m o d ifica d o (Q 124 R ) y fu s io n a d o a un V H H an ti-P D -L1 y d o xo rru b ic in a p ro p o rc io n a s in e rg ia con re sp e c to a la p rog re s ión de l tu m o r. Es im p o rta n te d e s ta c a r que 5 de los 6 ra ton es de l g rup o de te ra p ia c o m b in a d a m o stra ro n una re g res ió n tu m o ra l com p le ta .
El m u ta n te Q 124 R es re p re se n ta tivo de un m u ta n te de IFN a lfa 2 h u m a n o a te n u a d o q ue p ue de e n sa ya rse in v ivo en un m o de lo m u rin o . E sp e c ífica m e n te , Q 124 R es una m u ta c ión de l IFN h u m a n o que se p uede u tiliz a r en el ra tón (es dec ir, es un IFN m u ta n te h um a no que fu n c io n a en el ra tón). V é a se Nat. C om . 2014 ;5 :3016. doi: 10.1038 /n co m m s4016.
Ejemplo 6. Estimulación de la proliferación de células T mediante quimeras Clec9A de ratón
La te ra p ia con cé lu la s T re ce p to ra s de a n tíg e n o s q u im é rico s (C A R ) a m e n u d o se ve co m p ro m e tid a p o r el m ic ro a m b ie n te tu m o ra l só lido e x tre m a d a m e n te inh ó sp ito que im pone un e fe c to in m u n o su p re so r sob re las cé lu la s T C A R . P o r e je m p lo , en el m ic ro a m b ie n te de l tu m o r hay v a r ia s c ito q u in a s in m u n o su p re so ra s , m o d u la d o re s re g u la d o re s y re ce p to re s c o - in h ib id o re s que p ueden in d u c ir la a n e rg ia de las cé lu las T C A R . U na de las té cn ica s p ara m e jo ra r la e fic a c ia de la te ra p ia con c é lu la s T C A R c o n s is te en in d u c ir a las c é lu la s T a d iv id irse y p ro life ra r en el m ic ro a m b ie n te de l tum o r.
Se re a liza ro n e xp e rim e n to s para e va lu a r si un V H H e sp e c ífico para C le c9 A de ra tón fu s io n a d o a un IFN hum a no m o d ifica d o (Q 124 R ) pod ía in d u c ir la p ro life ra c ió n de cé lu las T C A R in v ivo . En con cre to , se tra n s fir ie ro n de fo rm a a d o p tiva a ra ton es p o rta d o re s de tu m o re s de m e la n o m a B16 cé lu la s T tra n s g é n ica s de re ce p to re s de cé lu las T C D 8 (p m e l-1 ) que re con oce n el a n tíg e n o de d ife re n c ia c ió n de m e la n o c ito s g p100 p re se n te en las cé lu las tu m o ra le s . P o s te rio rm e n te , los ra ton es fue ro n tra ta d o s con P B S (co n tro l) o con un V H H e sp e c ífico para C le c9 A de ra tón fu s io n a d o a un IFN h um a no m o d ifica d o (Q 124R ). La p ro life ra c ió n de cé lu la s T se e va lu ó m e d ia n te la va lo ra c ió n de la ca n tid a d de c é lu la s T m a rca d a s con C F S E p re se n te s en los g a n g lio s lin fá tico s q ue d ren a n el tum o r, u tiliza n d o el a n á lis is FA C S .
C o m o se m u e s tra en la Figura 9, el tra ta m ie n to de los ra ton es con el V H H indu jo su s ta n c ia lm e n te la d iv is ión y p ro life ra c ió n de cé lu la s T en co m p a ra c ió n con el tra ta m ie n to con PBS. S in q u e re r ceñ irse a la teo ría , se c ree que la d iv is ión y la p ro life ra c ió n de las cé lu las T e s ta ba m e d ia d a p o r la a c tiva c ió n de las cé lu las d en d ríticas . En con jun to , e s to s re su lta d o s su g ie re n que el uso de V H H s e sp e c ífico s para C le c9 A fu s io n a d o s con IFN m e jo ra s in é rg ica m e n te la te ra p ia de cé lu la s T C A R .
Ejemplo 7. Los VHHs específicos para Clec9A humano son eficaces en un modelo de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE)
E ste E jem p lo m u es tra los e fe c to s te ra p é u tico s de V H H s e sp e c ífico s para C le c9 A de ra tón en un m o de lo de ra tón E A E que im ita la e sc le ro s is m ú ltip le (E m ) hum ana . En re sum e n, 4 de cad a 5 ra ton es tra ta d o s con una fus ió n de C le c 9 A -IF N Q 124 R n unca d e sa rro lla ro n s ín to m a s de EM. Un so lo ra tón tra ta d o e n fe rm ó, pero se re cup e ró rá p id a m e n te . T re s de los 5 a n im a le s tra ta d o s con una d os is a lta de IFN de tip o sa lva je , q ue su p rim ió el d e sa rro llo de la e n fe rm e d a d , m u rie ro n . Los ra to n e s tra ta d o s con d os is b a jas de IFN w t m o s tra ro n p é rd id a de peso. Esto co n tra s ta con los a n im a le s tra ta d o s con C le c9 A -IF N Q 124 R A cT a fe ro n (es dec ir, con la p ro te ína de fus ió n ), que re a lm e n te g a n a ro n peso.
P ara las figuras 10-12: se u tiliza ron va r io s A cT a fe ro n e s . En este con tex to , se re fie ren al in te rfe rón a te nu ad o , es dec ir, el h IFN Q 124 R ("Q "), q ue e s ta b a v in c u la d o a v a r io s d o m in io s de d ire cc io n a m ie n to q ue inc lu ía n V H H con tra B e ll 10, m C D 20 , C D 8 o C le c 9 A a 5000 UI. P ara la co m p a ra c ió n , se u tilizó el in te rfe ró n de tip o s a lva je ("W T m IF N " a 5000 UI o 1.000.000 UI, seg ún se ind ique . El ta m p ó n p B s es un co n tro l s im u la d o (es dec ir, nega tivo ).
El p ro g ra m a de tra ta m ie n to para e ste e s tu d io fue el s igu ien te :
• d0 = sc inye cc ió n M O G C F A /m tb , ip PT
• d2 = ip PT
• d7 = in ic io de los tra ta m ie n to s d ia rio s ip, y
la p u n tu a c ió n c lín ica fue la s igu ien te :
0-1 g ra d o s v a r ia b le s de co la m e no s h o rizo n ta l si el ra tón se su je ta p o r el cue llo
1.5 co la f lá c id a (to ta lm e n te v e r tic a l) p e ro con un p oco de te n s ió n 2 co la to ta lm e n te flác ida
2.5 p a tas tra se ra s ce rra d a s (los d e d o s ya no se a bre n )
3 p aseo b a la n ce á n d o se (p e ro aun u sa nd o las dos pa tas tra se ra s )
3.5 una pata tra se ra ya no se u tiliza al c a m in a r
4 a m b a s p a ta s tra se ra s ...
4.5 ya no p uede g ira r si se p one de e sp a ld a s
5 m o rib u n d o
6 m uerto .
En la F igura 10, P ane l A, ra ton es C 57 B I/6 J m a ch o (8 se m a n a s de e d a d ) fu e ro n in m u n iza d o s s.c. con 2 x100 pl de una e m u ls ió n de p é p tid o e sp e c ífico de m ie lina (G lico p ro te ín a de o lig o d e n d ro c ito s de ra tón a m in o á c id o s 35-55 M E V G W Y R S P F S R W H L Y R N G K , (S E Q ID N O :296), 1 m g /m l) y A d y u va n te de F reu nd co m p le to (5 m g /m l) en el d ía 0, se g u id o de una inye cc ió n i.p. de 50 ng de to x in a p ertu ss is . En el d ía 2, se ino cu ló una se g u n d a dos is de to x in a p e rtu ss is i.p. A p a rtir de l d ía 7, los ra ton es fue ro n tra ta d o s d ia ria m e n te (i.p .) con 5000 UI de A cT a fe ro n ligado a un V H H que se unía a Bell 10 ( es dec ir, un o b je tivo irre le van te , p o r lo ta n to el con tro l no d irig id o ), m C D 8, m C D 20 o m C le c9 A (n=5, e xce p to para el A cT a fe ro n d ir ig id o a m C D 8, d o n d e n=4). C om o co n tro le s p os itivo s , se inye ctó m lF N de tip o sa lva je no d ir ig id o (u n id o al V H H B c lM O ) a 5.000 UI o a 1.000.000 de UI. Los ra ton es de co n tro l re c ib ie ro n tra ta m ie n to s con PBS. Los ra ton es fue ro n ca lifica d o s d ia ria m e n te p o r la p a re s ia p ro g re s iva y la p ará lis is . Se o to rg a ro n p u n tu a c io n e s e n tre 0 y 2 para d ive rso s g rad o s de d ism in u c ió n del to n o de la co la , p u n tu a c ió n 2 para una co la co m p le ta m e n te p a ra lizad a ; p un tu ac ió n 3 para la d eb ilid a d de las e x tre m id a d e s tra se ra s y la p a ra p le jia inic ia l; p u n tu a c ió n 4 para la p ara p le jia com p le ta ; p un tu ac ió n 5 para la te tra p le jia (en cuya fa se los ra ton es d eben se r e u ta n a s ia d o s ) y p un tu ac ió n 6 si el ra tón m uere . C abe d e s ta c a r que si los ra to n e s m o rían re p e n tin a m e n te con una p u n tu a c ió n in fe rio r a 1, su m u erte se a tr ib u ía a la to x ic id a d de l tra ta m ie n to . E s to s ra ton es no se inc lu ye ro n para el cá lcu lo de la p u n tu a c ió n c lín ica m e d ia (e s to só lo o cu rr ió con los ra ton es tra ta d o s con a lta s d os is de IFN de tip o sa lva je ). La figura 10, p an e l B, m u e s tra el ca m b io de p eso co rp o ra l. T a m b ié n se m id ió d ia ria m e n te el peso co rpo ra l. El peso m e d io se ca lcu ló in c lu ye n d o el de los ra to n e s q ue m urie ron .
La figura 11 m u e s tra las p u n tu a c io n e s c lín ica s a cu m u la d a s m e d ia s (± S .E .M .) de los d ías 10 a 28 d e sp u é s del tra ta m ie n to . Los p rim e ros s ign os de p a rá lis is fue ro n v is ib le s a p a rtir del d ía 13 (n=5, n=4 para A cT a fe ro n d ir ig id o a m C D 8). La figura 12 m u e s tra una e va lu a c ió n de los e fe c to s se cu n d a rio s tó x ic o s de los tra ta m ie n to s d ia rio s con los d is tin to s A cT a fe ro n e s . S e m u e s tra la m o rta lid a d d u ra n te el tra n s c u rso de l e xp e rim e n to (p an e l A ) y los re cu e n to s de le u co c ito s en el d ía 25. En con cre to , se re cog ió sa n g re tra ta d a con E D T A de la v e n a de la co la de los ra to n e s 3 hora s d e sp u é s de l ú ltim o tra ta m ie n to , y se con ta ro n los lin fo c ito s (p ane l B), los m o n o c ito s (p an e l C), los n eu tró filo s (p a n e l D), las p la q ue ta s (p an e l E) y los g ló b u lo s ro jos (p an e l F) u tiliza n d o un a n a liza d o r h em a to ló g ico H E M A V E T 950 F S (D re w S c ien tific ). Los g rá ficos m u es tra n las m e d ia s ± E .S .M . (n=5, n=4 para A cT a fe ro n d ir ig id o a m C D 8, n=2 para m IFN de tip o sa lva je 1.000.000 UI).
Ejemplo 8. Señalización de células dendríticas inducida por quimeras VHH anti-Clec9A humanas
Se rea lizó un e n sa yo de se ñ a liza c ió n p S T A T de cé lu las d en d ríticas . Las q u im e ra s e s tu d ia d a s fue ro n V H H a n ti-C le c9 a h u m a n o //IF N R 149 A h u m a n o y V H H a n ti-C le c9 a h u m a n o /IF N R 33 A /E 120 R hum ano . Se e s tu d ia ro n d os d os is de los a ge n tes : 100 ng/m l y 500 ng/m l.
El V H H a n ti-C le c 9 A h u m a n o u tilizad o en este E jem p lo fu e R 2 C H C L 24 (S E Q ID N O :63).
B re ve m e n te , se a is la ron P B M C h um a na s de san g re o b te n id a de d o n a n te s sanos. Se re cog ie ron a p ro x im a d a m e n te 120 m l de san g re de cada d o n a n te u tiliza n d o tu b o s re cu b ie rto s de h ep a rin a (12 tub os). La sa n g re se m a n tu vo a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se p roce só in m e d ia ta m e n te . B re vem e n te , la san g re se d iluyó 1 :1 con D P B S y 25 m l se co lo ca ro n su a ve m e n te en cap as sob re 15 m l de L ym p h o ly te H. D e sp u é s de la ce n trifu g a c ió n , se re co g ie ro n los a n illos de cé lu la s m o n o n u c le a re s y las cé lu la s se lava ron tre s v e ce s con D P B S (P B S D u lb e cco 's P h o sp h a te B u ffe red S a lin e , W ise n t, ca tá lo g o # 311 -425 -L L ) y se con ta ro n . Las cé lu las d e n d rítica s se e n riq u e c ie ro n a p a rtir de la p ob la c ió n de P B M C u tilizan do un "k it de e n riq u e c im ie n to de D C" que co n te n ía una co m b in a c ió n de a n ticu e rp o s m o n o c lo n a le s e sp e c ífico s del lina je en PBS y una su sp e n s ió n de pa rtícu la s m a g n é tica s (n ú m e ro de ca tá lo g o 19251 de S T E M C E L L T e ch n o lo g ie s ), según las in s tru cc io n e s de l fab rica n te .
Se e s tim u la ro n las c é lu la s d e n d rítica s (D C ) d u ra n te 15 m in u to s en p re se n c ia o a u se n c ia de los e le m e n to s de p rueba y los co n tro le s (P B S ) y se d e te rm in ó el n ive l de S TAT1 fo s fo r ila d o (p S T A T I , e sp e c ífica m e n te p Y 701 -S T A T 1 ) en las p o b la c io n e s de cé lu la s DC a is la d a s (L in -(C D 14 /C D 16 /C D 20 /C D 56 /C D 3 )/H L A -D R ) m e d ia n te c ito m e tría de flu jo . D e sp u é s de la e s tim u la c ió n , las c é lu la s se fija ron (ta m p ó n de f ija c ió n B D C yto fix , BD B iosc ien ce , ca tá lo g o # 554655 ), y luego se p e rm e a b iliza ro n con ta m p ó n P erm II (B D P h o sF lo w P erm B uffe r, BD B iosc ien ce , ca tá lo g o # 558052 ). A c o n tin u a c ió n , se tiñ e ro n las c é lu la s p ara d e te c ta r el fo s fo S T A T I y los m a rc a d o re s de s u p e rfic ie de las D C (L in -/H L A -D R ) (vé a se la ta b la s ig u ie n te ). La tin c ió n in tra c e lu la r y la de su p e rfic ie se re a liza ro n al m ism o tie m p o . La c ito m e tría de flu jo y la a d q u is ic ió n de d a tos se re a liza ro n tra s el lava do de las cé lu la s con D P B S .
T a b la con la lis ta de a n tic u e rp o s para la t in c ió n p o r c ito m e tría de flu jo
Figure imgf000087_0001
La Figura 13 m u estra los da tos , e xp re sa d o s com o un cam b io de p liegue de l p o rce n ta je de cé lu la s d e n d rítica s p S T A T . Este e s tu d io m u e s tra c la ra m e n te q ue un co n s tru c to d ir ig id o al a n tíg e n o C L E C 9 A h um a no q ue co m p re n d e un a ge n te de se ñ a liza c ió n de IFN cuya ac tiv ida d es re cu p e ra b le tra s el d ire cc io n a m ie n to c e lu la r (IFN R 149A ) p ro m u e ve la se ñ a liza c ió n de IFN en las cé lu la s d e n d rítica s h um a n a s (se gú n se d e te rm in a p o r la ind u cc ión de pS T A T 1). En cam b io , no se o bse rva n in g un a a c tiva c ió n de la se ñ a liza c ió n de IFN con una co n s tru cc ió n d ir ig id a a C L E C 9 A que inco rp o ra un a ge n te de se ñ a liza c ió n de IFN cuya ac tiv ida d no es re cu p e ra b le (IFN R 33 A /E 120 R ). P o r lo tan to , com o se ha o b se rva d o en c o n s tru cc io n e s de fus ió n de IFN co m p a ra b le s d ir ig id a s a C L E C 9 A de ra tón , la o rie n ta c ió n de IFN a las c é lu la s d e n d rítica s h u m a n a s u tiliza n d o una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to d ir ig id a al a n tíg e n o C L E C 9 A h u m a n o da lu g a r a la a c tivac ión de una tra n sd u cc ió n de se ñ a le s de IFN p ron u nc iad a .
Ejemplo 9. Efectos antitumorales en humanos modelados
El V H H a n ti-C le c 9 A h u m a n o u tilizad o en e ste E jem p lo fue R 2 C H C L 24 (S E Q ID N O :63).
Selección de la sangre del cordón umbilical humano
Las cé lu la s m a dre te n ía n un tip o de H LA q ue co in c id ía con la e xp re s ió n de H L A -A 2 de las cé lu la s tu m o ra le s u tiliza d a s d u ra n te los e xp e rim e n to s . P ara ello, só lo se s e le cc io n ó la sa n g re de co rdó n u m b ilica 1H L A -A 2 p o s itiva para p ro c e d e r a la p u rifica c ió n de cé lu la s m a dre C D 34. Las cé lu la s se tiñ e ro n con H L A -A 2 -F IT C (B D P h a rm in g e n ) o H LA -A B C -P E (B D P h a rm ing en ), este ú ltim o com o con tro l pos itivo . Las m u e s tra s se a dq u irie ro n en un c itó m e tro de e n fo q u e a cú s tico A ttu n e N xt (L ife T e ch n o lo g ie s ).
Purificación de CD34+ de la sangre del cordón umbilical humano
Las cé lu las m o n o n u c le a re s v ia b le s de la sangre del co rdón u m b ilica l hum a no fue ro n a is la d a s u tilizan do la se p a ra c ió n en g ra d ie n te F yco ll (L ym p h o p re p , S te m ce ll te c h n o lo g ie s ) a n tes del a is la m ie n to de C D 34+ M A C S u tiliza n d o un k it de a is la m ie n to d irec to de cé lu la s p ro g e n ito ra s C D 34+ (M ilte ny i). P ara e va lu a r la p u re za de las cé lu la s m a dre a is la d a s se u tilizó la tin c ió n de c ito m e tría de flu jo con C D 3 -P E h um a no (B D P h a m rin g e n )/C D 34 -A P C h u m a n o (B D P ha rm ing en ). Las m u e s tra s se a d q u irie ro n en un c itó m e tro de e n fo q u e a cú s tico A ttu n e N xt (L ife T e ch n o lo g ie s ). La p ureza de las cé lu la s in ye c ta d a s a lca n zó el 95 -98% .
Generación de ratones humanizados
R a to n e s N S G rec ién n ac idos (1 -2 d ías de e da d ) fue ro n irrad iad os s u b le ta lm e n te con 100 cG y an tes de la e n tre ga in tra h e p á tica de 105 cé lu las m a dre h um a n a s C D 34+ . A las 6 se m a n a s de la tra n s fe re n c ia ce lu la r, se a n a lizó la sa n g re p e rifé rica para d e te c ta r la p re se n c ia de cé lu la s C D 45 h u m a n a s y de ra tón (a m b a s B D ) para a n a liza r el e fe c to de l in je rto . Las m u e s tra s se a d q u irie ro n en un c itó m e tro de flu jo LSR (B D ) y se a n a liza ro n con el so ftw a re FA C S D iva (BD ).
El p o te n c ia l a n titu m o ra l de las q u im e ra s se e va lu ó en m o d e lo s de ra to n e s h u m a n iza d o s p o rta d o re s de tu m o re s . Los ra to n e s N S G rec ién n ac ido s (1 -2 d ías de e da d ) fue ro n irra d ia d o s s u b le ta lm e n te con 100 cG y a n tes de la a d m in is tra c ió n in tra h e p á tica de 105 cé lu la s m a dre h um a n a s C D 34+ (p ro ce d e n te s de sa n g re de co rdó n u m b ilica l H L A -A 2 p o s itiva ). En la s e m a n a 13 d e s p u é s de la tra n s fe re n c ia de c é lu la s m a dre , los ra to n e s fu e ro n in o cu la d o s p or v ía s.c. con 2 ,5 x 106 c é lu la s de lin fo m a fo lic u la r R L h um a no . Los ra to n e s fu e ro n tra ta d o s i.p. d ia ria m e n te a p a rtir del d ía 6 d e sp u é s de la ino cu la c ió n de l tu m o r con 30 pl de p ro te ín a F lt3L. La a d m in is tra c ió n d ia ria de q u im e ra s p e rile s io n a le s (30 g) se in ic ió el d ía 10 d e sp u é s de la in o cu la c ió n de l tum o r, cu a n d o se a lca n zó un tu m o r p a lp ab le . El tra ta m ie n to con la q u im e ra b i-e sp e c ífica v H h a n ti-C le c9 a h u m a n o /V H H a n ti- PD-L1 h u m a n o /IF N -R 149 A h u m a n o dio lu g a r a la e s ta b iliza c ió n del c re c im ie n to del tum o r, que fue aún m ás p ro n u n c ia d a cu a n d o se co m b in ó con in ye cc io n e s de F lt3L en con tra s te con la inyecc ión de PBS. El g rá fico m u e s tra el c re c im ie n to del tu m o r com o m e d ia ± SEM . En co n se cu e n c ia , la q u im e ra b i-e sp e c ífica V H H a n ti-C le c9 a h u m a n o /V H H a n ti- PD-L1 h u m a n o /IF N -R 149 A h u m a n a m o stró c la ros e fe c to s a n titu m o ra le s en un tu m o r h um a no (R L ) cu ltiva d o en ra ton es h u m a n iza d o s (ra to n e s con un s is te m a inm un e h u m a n o re co n s titu id o ). V é a se la figura 14.
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F lynn BJ, K a s te n m u lle r K, W ille -R e e c e U, T o m a ra s G D , A la m M, L in d sa y RW , S a la z a r A M , P e rd ig u e ro B, G o m e z c E, W a g n e r R, E s teban M, P a rk CG , T ru m p fh e lle r C, K e le r T, P an ta le o G, S te in m a n RM y S e d e r R (2011 ) Im m u n iza tio n w ith H IV G ag ta rg e te d to d e n d ritic ce lls fo llo w e d by re co m b in a n t N ew Y o rk va cc in ia v iru s ind u ce s ro b u s t T -ce ll im m u n ity in n o n h u m a n p rim a te s . A c ta s de la A c a d e m ia N a c io n a l de C ie n c ia s de los E s ta d o s U n id os de A m é ric a 108: 7131 -7136
Ido yag a J, Lubkin A, F io re se C, Lahoud MH, C a m in sch i I, H uang Y, R od ríg u e z A, C lausen BE, P a rk CG, T ru m p fh e lle r C y S te in m a n RM (2011 ) Inm un idad co m p a ra b le de cé lu las T h e lp e r 1 (T h 1 ) y C D 8 m e d ia n te la fo ca liza c ió n de la gag p24 de l V IH en las cé lu las d e n d rítica s C D 8 d en tro de los a n ticu e rp o s con tra L an ge rin a , D E C 205 y C lec9A . A c ta s de la A c a d e m ia N ac ion a l de C ie n c ia s de los E s ta d o s U n id os de A m é ric a 108: 2384 -2389
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Claims (9)

R E IV IN D IC A C IO N E S
1. U na p ro te ín a q u im é rica q ue com p re nd e :
(a ) una fra cc ió n de d ire c c io n a m ie n to q ue co m p re n d e un d o m in io de re co n o c im ie n to q ue re con oce y se une al m ie m b ro A de la fa m ilia 9 de l d o m in io de lec tina de tip o C (C le c9 A ), en el q ue el d o m in io de re co n o c im ie n to co m p re n d e un a n ticu e rp o de cad en a p esada (V H H ), un V H H h u m a n iza d o o un V H H ca m e liza d o ; y
b) un a ge n te de señ a liza c ió n m o d ificad o , en el que el a ge n te de se ñ a liza c ió n m o d ifica d o es un in te rfe rón a lfa 2 h um a no (IF N a 2 ) que co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s que tie n e al m e no s a lre d e d o r del 98 % de ide n tid ad con una se cu e n c ia s e le cc io n a d a de S E Q ID NO: 86 u 87 y q ue tie n e n una o m ás m u ta c io n e s en las p o s ic io n e s R 149, L 153 y M 148 con re sp e c to a S E Q ID NO: 86 u 87;
en el que el IF N a2 hum a no m u ta do tie n e una a fin ida d o a c tiv id a d re du c ida en co m p a ra c ió n con el IFN a2 h u m a n o de tip o sa lva je , y en el q ue la a fin ida d o a c tiv id a d re d u c id a del IF N a2 h u m a n o m u ta do es re s ta u rab le m e d ia n te la un ión a la fra cc ió n de d ire cc io n a m ie n to .
2. La p ro te ín a q u im é rica de la re iv in d ica c ió n 1, q ue co m p re n d e a d e m á s u na o m ás fra cc io n e s de d ire cc io n a m ie n to a d ic ion a le s .
3. La p ro te ína q u im é rica de una cu a lq u ie ra de las re iv in d ica c io n e s a n te rio re s , en la q u e la una o m ás m u ta c io n e s son L153A , R 149 A y M 148 A con re sp e c to a S E Q ID NO: 86 u 87.
4. La p ro te ín a q u im é rica de una cu a lq u ie ra de las re iv in d ica c io n e s a n te rio re s , en la que el d o m in io de re co n o c im ie n to co m p re n d e tre s re g io n e s d e te rm in a n te s de la co m p le m e n ta rie d a d (C D R 1 , C D R 2 y C D R 3), en las que:
a) La CDR1 co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a e n tre una cu a lq u ie ra de las S E Q ID NO : 2-21;
b) la C D R 2 co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a e n tre una cu a lq u ie ra de las S E Q ID NO : 22-43 ; y
c) la C D R 3 co m p re n d e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s s e le cc io n a d a e n tre una cu a lq u ie ra de las S E Q ID NO : 44-58 , LG R y V IK .
5. La p ro te ína q u im é rica de una cu a lq u ie ra de las re iv in d ica c io n e s a n te rio re s para su uso en el tra ta m ie n to o la p re ve n c ió n de l cáncer.
6. La p ro te ín a q u im é rica de una cu a lq u ie ra de las re iv in d ica c io n e s 1-4 o para el uso seg ún la re iv in d ica c ió n 5, en la q ue la m u ta c ión es R 149 A con re sp e c to a S E Q ID NO: 86 u 87.
7. La p ro te ín a q u im é rica de una cu a lq u ie ra de las re iv in d ica c io n e s 1-4 o para el uso seg ún la re iv in d ica c ió n 5, en la q ue la m u ta c ió n es L 153 A con re sp e c to a S E Q ID NO: 86 u 87.
8. La p ro te ín a q u im é rica de una cu a lq u ie ra de las re iv in d ica c io n e s 1-4 o para el uso seg ún la re iv in d ica c ió n 5, en la q ue la m u ta c ió n es M 148 A con re sp e c to a S E Q ID NO: 86 u 87.
9. U na co m p o s ic ió n fa rm a cé u tica , que co m p re n d e la p ro te ína q u im é rica según una cu a lq u ie ra de las re iv in d ica c io n e s an te rio res , y un e xc ip ie n te a de cu ad o .
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