KR20170052569A

KR20170052569A - 전립선암 치료용 pd-1 길항제 및 리스테리아 기반 백신의 병용

Info

Publication number: KR20170052569A
Application number: KR1020177004528A
Authority: KR
Inventors: 로버트 페티트; 데이비드 제이. 마우로; 로돌포 에프. 페리니
Original assignee: 어드박시스, 인크.; 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션
Priority date: 2014-07-18
Filing date: 2015-07-17
Publication date: 2017-05-12
Also published as: MX2017000857A; US20180185483A1; CN114984228A; AU2015289533A1; CA2955612A1; EP3193921A1; IL250187B; IL250187A0; CA2955612C; EP3193921A4; SG11201701149SA; WO2016011357A1; US9907849B2; CN106999561A; US20160022814A1; MA40344A; AU2015289533B2; SG10201913696YA

Abstract

본 개시는 예정된 사멸 1 수용체(PD-1)의 길항제 및 전립선-조직 특이 항원(PSA)를 발현하는 리스 테리아 기반 균주를 포함하는 병용 치료제, 및 전립선암 치료용 병용 치료제를 기술한다.

Description

전립선암 치료용 PD-1 길항제 및 리스테리아 기반 백신의 병용{COMBINATION OF A PD-1 ANTAGONIST AND A LISTERIA-BASED VACCINE FOR TREATING PROSTATE CANCER}

본 발명은 암 치료에 유용한 병용 치료에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 종양 연관 항원에 융합된 PEST-서열 포함 폴리펩티드 또는 PEST-서열 포함 펩티드의 융합 단백질을 포함하는 생약독화 재조합 리스테리아 균주와 병용하여 사용하는 전립선암의 치료에 관한 것이다.

PD-1은 면역 조절 및 말초 내성의 유지에서 중요한 인자로 인식된다. PD-1은 미접촉 T, B 및 NKT 세포 상에서 적절하게 발현되고, 림프구, 단핵 백혈구 및 골수세포에 신호를 보내는 T/B 세포 수용체에 의해 상향 조절된다(1).

PD-1, PD-L1(B7-H1) 및 PD-L2(B7-DC)를 위한 두 개의 공지된 리간드는 다양한 조직에서 발생하는 인간 암에서 발현된다. 예를 들어, 난소, 신장, 결장, 췌장, 간암 및 흑색종의 큰 샘플 세트에서, PD-L1 발현은 후속 치료와 상관없이 불량한 예후와 상관이 있었고 총 생존을 감소시켰다는 것을 알 수 있었다(2~13). 유사하게, 종양 침투 림프구 상에서 PD-1 발현은 유방암 및 흑색종에서 기능장애 T 세포들을 표시하고(14-15) 신장암에서 불량한 예후와 상관이 있는 것으로 밝혀졌다(16). 이처럼, PD-L1 발현 종양 세포들은 PD-1 발현 T 세포들과 상호작용하여 T 세포 활성화 및 면역감시의 회피를 약화시켜, 종양에 대한 면역 장애 반응에 기여한다고 제시되었다.

PD-1 및 그의 리간드인 PD-L1 및 PD-L2 중 하나 또는 양자 사이의 상호작용을 억제하는 몇몇 단클론 항체들은 암의 치료를 위하여 임상 개발 중이다. 다른 승인 되거나 실험적인 암 치료들, 예를 들어 방사선, 외과술, 화학요법제, 표적 치료, 종양에서 조절 곤란한 기타 신호 경로들을 억제하는 제제, 및 기타 면역 증진제와 병용 투여될 때 이러한 항체들의 효능은 향상될 수 있었다고 제시되었다.

리스테리아 모노사이토젠 ( Listeria monocytogenes )(Lm)은 리스테리아증(listeriolysis)을 야기하는 그람 양성 조건 세포 내 병원체이다. 일단 세포 숙주에 침입하면, Lm은 세포질에 들어갈 수 있도록, 혈관 세포막을 용해 시키기 위해 기공 형성 단백질 리스테리오리신 O(Listeriolysin O, LLO)의 생산을 통해 파고리소좀에서 탈출할 수 있으며, 여기서 그것은 복제하고 액틴 중합화 단백질(ActA)의 이동성에 기초하여 인접 세포들에 퍼진다. 세포질 내에서, Lm-분비 단백질은 프로테아좀에 의해 분해되고 소포체 내 MHC 클래스 I 분자와 연관되는 펩타이드로 가공된다.

일 실시 예에서, 본 발명은 인간 개체의 전립선암을 치료하기 위한 방법을 제공하고, 이 방법은 PD-1 길항제 및 전립샘특이항원(Prostate Specific Antigen: PSA) 발현 세포들에 대한 세포 면역 반응을 유도할 수 있는 항원제시세포들(Antigen Presenting Cells: APCs)을 자극하기 위해 사용되는 생약독화 박테리아 균주를 포함하는 병용 치료제를 상기 개체에게 투여하는 것을 포함한다.

다른 실시 예에서, 본 발명은 인간 개체의 전립선암을 치료하기 위한 방법을 제공하고, 이 방법은 PD-1 길항제 및 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 포함하는 병용 치료제를 상기 개체에게 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 인간 개체의 전립선암을 치료하기 위한 방법을 제공하고, 이 방법은 PD-1 길항제 및 LmddA -142(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주를 포함하는 병용 치료제를 상기 개체에게 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 인간의 전립선암을 치료하기 위한 방법을 제공하고, 이 방법은 PD-1 길항제 및 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3를 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하는 병용 치료제를 상기 인간에게 투여하는 것을 포함한다.

다른 실시 예에서, 본 발명은 전립샘 특이항원(PSA) 발현 세포들에 대한 세포 면역 반응을 유도할 수 있는 항원제시세포(Antigen Presenting Cell: APC)들을 자극하기 위해 사용되는 생약독화 박테리아 균주와 병용하여 사용하기 위한 PD-1 길항제를 포함하는, 환자의 전립선암 치료용 약제를 제공한다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와 병용하여 사용하기 위한 PD-1 길항제를 포함하는, 환자의 전립선암 치료용 약제를 제공한다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 LmddA -142(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주와 병용하여 사용하기 위한 PD-1 길항제를 포함하는, 환자의 전립선암 치료용 약제를 제공한다. 또 다른 실시 예에서, 본 발명은 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3 를 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주와 병용하여 사용하기 위한 PD-1 길항제를 포함하는, 환자의 전립선암 치료용 약제를 제공한다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 전립샘특이항원(PSA) 발현 세포들에 대한 세포 면역 반응을 유도할 수 있는 항원제시세포들(APCs)을 자극하기 위해 사용되고, PD-1 길항제와 병용하여 사용하기 위한 약독화 박테리아 균주를 포함하는, 환자의 전립선암 치료용 약제를 제공한다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환 함으로써 유전자 조작된, PD-1 길항제와 병용하여 사용하기 위한 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 포함하는, 환자의 전립선암 치료용 약제를 제공한다.

다른 실시 예에서, 본 발명은 PD-1 길항제와 병용하여 사용하기 위한 LmddA -142(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주를 포함하는, 환자의 전립선암 치료용 약제를 제공한다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 PD-1 길항제와 병용하여 사용하기 위한 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3 를 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하는, 환자의 전립선암 치료용 약제를 제공한다.

다른 실시예는 PSA 발현 세포들에 대한 세포내 면역반응을 견인할 수 있는 항원제시세포(APCs)를 자극하기 위해 사용되는 생약독화 박테리아 균주와 병용 투여시 인간의 전립선암 치료용 약제의 제조에서 PD-1 길항제의 용도 및 PD-1과 병용 투여시 환자의 전립선암 치료용 약제의 제조에서 PSA 발현 세포들에 대한 세포내 면역반응을 견인할 수 있는 항원제시세포(APCs)를 자극하기 위해 사용되는 생약독화 박테리아 균주의 용도를 제공한다.

다른 실시예는 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 형질전환 함으로써 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와 병용 투여시 인간의 전립선암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 PD-1 길항제의 용도 및 PD-1 길항제와 병용 투여시 환자의 전립선암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO) 에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현세포로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환 함으로써 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주의 용도를 제공한다.

다른 실시예는 LmddA -142(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주와 병용투여시 인간의 전립선암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 PD-1 길항제의 용도 및 PD-1 길항제와 병용투여시 환자의 전립선암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 LmddA-142(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주의 용도를 제공한다.

다른 실시예는 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 갖는10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주와 병용투여시 인간의 전립선암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 PD-1 길항제의 용도 및 PD-1 길항제와 병용투여시 환자의 전립선암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주의 용도를 제공한다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 PD-1 길항제 및 환자의 전립선암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 전립샘특이항원(PSA) 발현 세포들에 대한 세포 면역 반응을 유도할 수 있는 항원제시세포들(APCs)을 자극하기 위해 사용되는 생약독화 박테리아 균주의 용도를 제공한다. 일부 실시 예에서, 상기 약제는 키트를 포함하고, 상기 키트는 PD-1 길항제를 환자의 전립선암을 치료하기 위한 PSA 발현 세포들에 대한 세포 면역 반응을 견인할 수 있는 항원제시세포들(APCs)을 자극하기 위해 사용되는 생약독화 박테리아 균주와 병용하여 사용하기 위한 지도들을 포함하는 패키지 인서트도 포함한다.

다른 실시 예에서, 본 발명은 PD-1 길항제 및 환자의 전립선암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환 함으로써 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주의 용도를 제공한다. 일부 실시 예에서, 상기 약제는 키트를 포함하고, 상기 키트는 PD-1 길항제를 환자의 전립선암을 치료하기 위해 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현 세포로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환 함으로써 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와 병용하여 사용하기 위한 지도를 포함하는 패키지 인서트도 포함한다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 환자의 전립선암 치료용 약제의 제조에서 PD-1 길항제 및 LmddA -142(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주의 용도를 제공한다. 일부 실시 예에서, 상기 약제는 키트를 포함하고, 상기 키트는 환자의 전립선암을 치료하기 위해 PD-1 길항제를 LmddA -142(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주와 병용하여 사용하기 위한 지도를 포함하는 패키지 인서트도 포함한다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 환자의 전립선암 치료용 약제의 제조에서 PD-1 길항제 및 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주의 용도를 제공한다. 일부 실시 예에서, 상기 약제는 키트를 포함하고, 상기 키트는 환자의 전립선암을 치료하기 위해 PD-1 길항제를 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주와 병용하여 사용하기 위한 지도를 포함하는 패키지 인서트도 포함한다.

상기한 치료방법, 약제 및 용도 모두에서, PD-1 길항제는 PD-L1이 PD-1에 결합하는 것을 억제하고, 바람직하게는 PD-L2가 PD-1에 결합하는 것도 억제한다. 상기 치료방법, 약제 및 용도의 일부 실시 예에서, PD-1 길항제는 구체적으로 PD-1 또는 PD-L1에 결합하고 PD-L1 PD-1에 결합하는 것을 차단하는 단클론 항체 또는 그의 항원결합단편이다. 일 실시 예에서, PD-1 길항제는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이고, 상기 중쇄 및 경쇄는 도 6에 도시된 아미노산 서열(서열번호 21 및 서열번호 22)을 포함한다.

치료방법, 약제 및 용도의 상기한 실시예들 모두에서, 상기 생약독화 박테리아 균주는 약독화 영양요구 균주인 재조합 리스테리아를 포함한다. 일 실시 예에서, 상기 약독화 균주는 Lm dal(-)dat(-)(Lmdd)이다. 다른 실시 예에서, 상기 약독화 균주는 Lm dal(-)dat(-)ΔactA(LmddA)이다. LmddA는, 독성 유전자 actA 의 결실로 인해 약독화되고 원하는 이종 항원을 위한 플라스미드 또는 dal 유전자의 보완에 의한 생체 내 및 시험관 내 PSA 항원 폴리펩티드에 융합된 말단이 절단된 LLO(tLLO)의 발현을 위한 플라스미드를 보유하는 리스테리아 균주 벡터에 기반한다. 일부 실시 예에서, klk3 유전자는 tLLO-PSA 융합 폴리펩티드의 발현을 위한 염색체의 hly 유전자에 융합된다. 치료방법, 약제 및 용도의 상기 실시예들중 일부에서, 리스테리아 균주는 리스테리아 모노사이토젠이다. 치료방법, 약제 및 용도의 상기 실시예들중 일부에서, PSA 항원은 절단 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된다. 일 실시 예에서, tLLO는 N-말단 LLO 단백질 단편이다. 일 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편 및 PSA 항원은 서로에게 직접 융합된다. 다른 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편 및 PSA 항원은 링커 펩타이드를 통해 작동가능하게 부착된다. 다른 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편 및 PSA 항원은 이종 펩타이드를 통해 부착된다. 다른 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편은 PSA 항원에 대한 N-말단이다. 다른 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편은 융합 단백질의 N-말단-최대부분이다. 다른 실시 예에서, 말단이 절단된 LLO는 C-말단에서 절단되어서 N-말단 LLO에 도달한다. 치료방법, 약제 및 용도의 상기한 실시예들 모두에서, PSA는 전립선 상피세포가 분비하는 칼리크레인 세린 단백분해효소(kallikrein serine protease: KLK3)로서, 이는 일 실시 예에서, 전립선암용 표지로서 널리 사용된다. 일부 실시 예에서, PSA는 전장 폴리펩타이드이다. 다른 실시 예에서, PSA는 전장 폴리펩타이드의 단편이다. 일 실시 예에서, PSA 항원은 klk3 유전자에 의해 암호화된다.

상기한 치료방법, 약제 및 용도의 일부 실시 예에서, 생약독화 박테리아 균주는 tLLO-PSA 융합단백질을 에피솜적으로 발현하는 dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) 리스테리아 모노사이토젠 균주 이다. 일 실시 예에서, tLLO는 LLO 단백질의 약 처음 441 AA로 구성된다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 LLO 단백질의 비용혈 형태이다. 일 실시 예에서, PSA는 전장 단백질로 구성된다. 다른 실시 예에서, PSA는 전장보다 짧은 단백질로 구성된다.

본 발명의 상기한 치료방법, 약제 및 용도의 일부 실시 예에서, 전립선암은 전이성이다.

본 발명의 상기한 치료방법, 약제 및 용도의 일부 실시 예에서, 전립선암은 거세저항성 전립선암(mCRPC)이다.

본 발명의 상기한 치료방법, 약제 및 용도의 일부 실시 예에서, 환자는 최소 하나의 직전치료제로 치료후 전이성 거세저항성 전립선암(mCRPC)으로 진단받았다.

또한, 상기한 치료방법, 약제 및 용도 중 어느 하나의 일부 실시 예에서, 전립선암은 PD-L1 및 PD-L2 중 하나 또는 모두의 발현에 대해 양성인 것을 검사한다. 일부 실시 예에서, 전립선암은 PD-L1 발현을 높였다.

도 1은 본 발명에 유용한 예시적인 항-PD-1 단클론 항체에 대한 경쇄 및 중쇄 CDR들의 아미노산 서열(서열번호 1-6)을 도시한다.
도 2는 본 발명에 유용한 예시적인 항-PD-1 단클론 항체에 대한 경쇄 및 중쇄 CDR들의 아미노산 서열(서열번호 7-12)을 도시한다.
도 3은 본 발명에 유용한 예시적인 항-PD-1 단클론 항체에 대한 중쇄 가변 영역 및 전장 중쇄의 아미노산 서열(서열번호 13 및 서열번호: 14)을 도시한다.
도 4는 본 발명에 유용한 예시적인 항-PD-1 단클론 항체에 대한 교번적인 경쇄 가변 영역들의 아미노산 서열(서열번호 15-17)을 도시한다.
도 5a 및 5b는 본 발명에 유용한 예시적인 항-PD-1 단클론 항체에 대한 교번적인 경쇄들의 아미노산 서열(서열번호 18-20)을 도시한다. 도 5a는 K09A-L-11 경쇄(서열번호 18) 및 K09A-L-16 경쇄(서열번호 19)의 전장서열을 도시한다. 도 5b는 K09A-L-17 경쇄(서열번호 20)의 전장 서열을 도시한다.
도 6은 MK-3475에 대한 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열(각각 서열번호 21과 22)을 도시한다.
도 7은 니볼루맙(nivolumab)에 대한 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열(각각 서열번호 23과 24)을 도시한다.
도 8은 klk3 통합 및 actA 결실 후 Lmdd-143 및 LmddA-143의 염색체 영역의 모식도를 도시한다;
도 9a-9c. 도 9a는 pADV134 플라스미드의 유전자 지도를 도시한다. 도 9b 및 9c는 PSA 전달, pADV142 플라스미드에 대한 항생제-비의존 에피솜 발현벡터의 유전자 지도를 도시하고, 여기서 항원 발현 카세트는 hly 촉진자 및 LLO-PSA 융합 단백질 그리고 pADV142 플라스미드의 뉴클레오티드 서열로 구성되고(도 9b), 밑줄친 부분은 호모 사피엔스 칼리크레인 3,(전립선 특이 항원)을 암호화한다(도 9c).
도 10은 mCRPC를 가진 대상들에 대한 단일요법 및 펨브롤리주맙(pembrolizumab)(MK-3475)과의 병용에서 ADXS31-142(리스테리아 모노사이토젠 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ))의 안전성 및 내성을 평가하도록 설계된 임상 제1-2 시험의 두 부분의 도식을 도시한다.

약어 상세한 설명 및 본 발명의 실시예들 내내 다음의 약어들이 사용될 것이다.

APC 항원 제시 세포

BID 일일 2회씩 1회 투여량

CBD 콜레스테롤 결합 도메인

CDR 상보성 결정 영역

CFU 집락형성 단위

CHO 중국 햄스터 난소

DFS 무병생존

DTR 투여량 제한 독성

FFPE 포르말린 고정, 파라핀 포매

FR 기본틀 영역

IgG 면역글로불린 G

IHC 면역조직화학 또는 면역조직화학의

KLK3 칼리크레인 관련 펩티다아제 3; APS; PSA; hK3; KLK2A1로도 알려짐

LLO 리스테리오리신 O 폴리펩타이드

tLLO 말단이 절단된 리스테리오리신 O 폴리펩타이드

Lm 리스테리아 모노사이토젠

LmddA-142 리스테리아 모노사이토젠(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ); ADXS31-142로도 알려짐

LmddA-143 리스테리아 모노사이토젠(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3를 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) )

MTD 최대 내약 투여량

NCBI 미국 국립생명공학정보센터

NCI 미국 국립암연구소

OR 전반적인 반응

ORF 개방형 해독틀

OS 전체 생존

PCR 중합효소연쇄반응

PD 진행성 질환

PSA 전립선 특이 항원

PFS 무진행생존

PR 부분관해

Q2W 2주당 1회 용량

Q3W 3주당 1회 용량

Q4W 4주당 1회 용량

QD 일일 1회 용량

RECIST 고형 종양에서 반응평가기준

SD 안정병변

SDS-PAGE 소듐 도데실 설페이트- 폴리아크릴아미드 겔 전기영동

TILs 종양 침윤성 림프구

VH 면역글로불린 중쇄 가변 영역

VK 면역글로불린 카파 경쇄 가변 영역

정의

본 발명이 더 쉽게 이해될 수 있도록, 기술적 및 과학적 용어들이 아래에 구체적으로 정의된다. 본 문서의 다른 곳에서 구체적으로 달리 정의되지 않으면, 본원에서 사용된 다른 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술의 통상인이 일반적으로 이해하는 의미를 가진다.

수치적으로 정의된 파라미터(예를 들어, PD-1 길항제 또는 PSA 발현 세포들에 대한 세포내 면역반응을 견인할 수 있는 항원 제시 세포들(APCs)을 자극하기 위해 사용되는 생약독화 박테리아 균주 또는 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환 함으로써 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주 또는 LmddA -142(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주 또는 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3를 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주의 용량 , 또는 본원에 기재된 병용요법을 가진 치료시간의 길이)를 수정하기 위한 사용시, "약"은 이 파라미터가 그 파라미터에 대해 언급된 수치의 10%만큼 작거나 크게 변할 수 있다는 것을 가리킨다. 예를 들어, PD-1 길항제, 즉, MK-3475 약 200 mg의 용량은 180mg과 220 mg 사이에서 변할 수 있다.

첨부된 청구항을 포함하여 본원에서 사용되는 바와 같이, “한”, “하나”, 및 “그” 와 같은 단어들의 단수 형태는, 달리 명백하게 언급하지 않는 한, 이들의 대응하는 복수 참조 형태를 포함한다.

동물, 인간, 실험 대상, 세포, 조직, 기관, 또는 생물학적 유체에 적용시 "투여" 및 "치료"는 외인성 약제학, 요법, 진단제, 또는 조성물의 동물, 인간, 대상, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체에 대한 접촉을 가리킨다. 세포의 치료는 세포와 접촉하고 있는 유체에 시약을 접촉하는 것뿐만 아니라 세포에 시약을 접촉하는 것을 포함한다. "투여" 및 "치료"는, 예를 들어 시약, 진단, 결합 화합물, 또는 또 다른 세포에 의한 세포의 생체내 및 생체외 치료들도 포함한다. "대상"이라는 용어는 임의의 유기체, 바람직하게는 동물, 보다 바람직하게는 포유동물(예를 들어, 쥐, 마우스, 개, 고양이, 토끼), 그리고 가장 바람직하게는 인간을 포함한다.

"약제학적으로 타당한 운반자"라는 용어는 PD-1 길항제 또는 PSA 발현 세포들에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 항원 제시 세포(APC)들을 자극하기 위해 사용되는 생약독화 박테리아 균주 또는 말단이 절단된 리스테리오신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현 벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환 함으로써 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주 또는 LmddA-143 (염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3를 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 인간에게 투여하기 위한 제형에서 사용하기에 적합한 임의의 불활성 물질을 가리킨다.

본원에서 사용된 바와 같이, "항체"라는 용어는 원하는 생물학적 또는 결합 활성을 나타내는 면역글로불린 분자의 임의 형태를 가리킨다. 이처럼, 항체는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로는 단클론 항체(전장 단클론 항체 포함), 다클론 항체, 다중특이적(예를 들어, 이중특이적 항체), 인간화, 인간 항체, 키메라 항체 및 낙타화 단일 도메인 항체를 포괄하지만, 이에 제한되지는 않는다. "모항체들(parental antibodies)"는 인간 치료제로서의 사용을 위한 항체의 인간화와 같은 의도적인 사용을 위한 항체의 개질에 앞서 면역 시스템을 항원에 노출함으로써 얻어진 항체이다. 본원에서 사용된 바와 같이, "항체"라는 용어는 무손상 다클론 또는 단클론 항체들뿐만아니라 달리 특정되지 않으면, 항원 결합부를 포함하는 특정 결합, 융합 단백질들을 위한 무손상 항체와 경쟁하는 그의 어떤 결합부분, 및 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 다른 개질된 구성을 포함한다. 항체 결합부들은, 예를 들어, Fab, Fab’, F(ab’)₂, Fd, Fv, 도메인 항체들(dAbs, 예를 들어, 상어 및 낙타과 항체들), 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 단편들, 단쇄 가변단편 항체들(scFv), 맥시바디(maxibodies), 미니바디(minibodies), 인트라바디(intrabodies), 디아바디(diabodies), 트리아바디(triabodies), 테트라바디(tetrabodies), v-NAR 및 bis-scFv, 및 폴리펩타이드에 결합하는 특정 항원을 제공하기에 충분한 면역글로불린의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다. 항체는 IgG, IgA, 또는 IgM와 같은 임의 클래스(또는 그의 서브클래스)의 항체를 포함하고, 이 항체는 어떤 특별한 클래스일 필요는 없다. 그의 중쇄들의 일정 영역의 항체 아미노산 서열에 따라서, 면역글로불린들은 다른 클래스들에게 할당될 수 있다. 다섯 개의 주요한 면역글로불린 클래스가 있다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 그리고 이들중 몇몇은 서브클래스들(동형들), 예를 들어, IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA₁ 및 IgA₂로 더 나누어질 수 있다. 다른 클래스의 면역글로불린들에 해당하는 중쇄 일정 영역은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마, 및 뮤로 불리운다. 다른 클래스의 면역글로불린들의 서브유닛 구조들 및 3차원 구성들은 잘 알려져 있다.

본원에서 사용된 바와 같이 “가변 영역” 또는 “V 영역”은 다른 항체들 사이의 서열이 가변적인 IgG 쇄들의 분절을 가리킨다. 그것은 경쇄에서는 Kabat 잔기 109까지 중쇄에서는 113까지 연장된다. 항체의 "가변 영역"은 단독 또는 조합으로서 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 가리킨다. 전형적으로, 경쇄 및 중쇄 양자의 가변 영역들은 고변위 부위를 포함하고, 이들 영역들은 상대적으로 보존된 틀 영역들(FR) 내에 위치되는 상보적 결정 영역(CDR)으로도 불린다. CDR은 보통 특정 에피토프에 결합을 가능하게 하는 틀 영역에 의해 정렬된다. 일반적으로, N-말단부터 C-말단까지, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인들 모두 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각 도메인에 대한 아미노산들의 할당은 일반적으로 Kabat 등의 Sequences of Proteins of Immunological Interest의 정의에 따른다; National Institutes of Health, Bethesda, Md. ; 5^th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat, 등, (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia, 등, (1987) J Mol . Biol . 196:901-917 또는 Chothia, 등, (1989) Nature 342:878-883.

본원에서 사용된 바와 같이, "고변위 영역"이라는 용어는 항원 결합을 책임지는 항체의 아미노산 잔기들을 가리킨다. 고변위 영역은 "상보적 결정 영역" 또는 "CDR"(예를 들어. 경쇄 가변 도메인에서 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 그리고 중쇄 가변 도메인에서 CDRH1, CDRH2 and CDRH3)부터 아미노산 잔기들을 포함한다. Kabat 등을 참조. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (서열로 항체의 CDR 영역들을 정의함); Chothia and Lesk (1987) 참고 J. Mol . Biol. 196: 901-917 (구조로 항체의 CDR 영역들을 정의함). 본원에서 사용된 바와 같이, "틀(framework)" 또는 "FR" 잔기라는 용어는 CDR 잔기처럼 본원에서 정의된 고변위전위 이외의 가변 도메인 잔기들을 가리킨다.

본원에서 사용된 바와 같이, 달리 명시하지 않으면, "항체 단편" 또는 "항체 결합 단편"은 항체들의 항체 결합 단편들, 즉 전장 항체에 의해 결합된 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체 단편들, 예를 들어, 하나 이상의 CDR 영역들을 보유한 단편들을 가리킨다. 항체 결합 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')₂, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 단편; 단쇄 항체 분자, 예를 들어 sc-Fv; 나노바디 및 항체 단편들로부터 형성된 다중특이 항체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

특정 표적 단백질에 "특이적으로 결합되는" 항체는 다른 단백질들에 비해 그 표적에 우선적인 결합을 나타내는 항체이지만, 이는 구체적으로 절대적인 결합 특이성을 요구하지 않는다. 항체는 그의 결합이, 예를 들어, 거짓양성과 같은 원치않는 결과들을 낳지 않고서, 시료에서 표적 단백질의 존재에 결정적이기만 하면, 그의 의도한 표적에 대해 "특이적"인 것으로 간주된다. 본 발명에 유용한 항체들, 또는 그의 결합 단편들은 비표적 단백질들에 대한 친화성보다 적어도 2배 더 큰, 바람직하게는 적어도 10배 더 큰, 더욱 바람직하게는 적어도 20배 더 큰, 가장 바람직하게는 적어도 100배 더 큰 친화성을 갖고서 표적 단백질에 결합할 것이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 항체가 주어진 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드들에 결합하지만 그 서열이 부족한 단백질들에게 결합하지 않으면, 그 아미노산 서열, 예를 들어, 성인 PD-1 또는 인간 PD-L1 분자의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드에 특이적으로 결합한다고 가리킨다.

"키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특별한 종(예: 인간)으로부터 유래되거나 특별한 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내 해당 서열들과 동일하거나 상동하는 항체를 가리키고, 반면에 상기 사슬(들)의 나머지는 다른 종(예: 마우스)으로부터 유래되거나 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내 해당 서열들과 동일하거나 상동하고, 이러한 항체들의 단편들도 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 마찬가지다.

"인간 항체"는 인간 면역글로불린 서열들만을 포함하는 항체를 가리킨다. 마우스, 마우스 세포, 또는 마우스 세포로부터 유래된 하이브리도마에서 생산되면, 인간 항체는 쥐과의 탄수화물 사슬들을 포함할 수 있다. 유사하게, "마우스 항체" 또는 "쥐 항체"는 각각 마우스 또는 쥐 면역글로불린 서열들만을 포함하는 항체를 가리킨다.

"인간화 항체"는 인간 항체들뿐만아니라 비인간(예를 들어, 쥐과 동물) 항체들로부 유래된 서열들을 포함하는 항체들의 형태들을 가리킨다. 이러한 항체들은 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 포함한다. 일반적으로, 인간화 항체는, 고변이 루프들의 모두 또는 실질적으로 모두가 비인간 면역글로불린에 대응하고 FR 영역들의 모두 또는 실질적으로 모두가 인간 면역글로불린 서열의 FR 영역들인 적어도 하나의 가변 도메인, 통상적으로는 두 개의 가변 도메인의 모두를 실질적으로 포함한다. 인간화 항체는 또한 면역글로불린 일정 부위(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로는 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함한다. 접두어 "hum", "hu" 또는 "h"는 필요시 인간화 항체들을 설치류 모항체들과 구별하기 위한 항체 클론 명칭들에 부가된다. 설치류 항체들의 인간화 형태들은 일반적으로 설치류 부항체들의 동일한 CDR 서열들을 포함하지만, 어떤 아미노산 치환들은 친화성을 증가시키거나, 인간화 항체의 안정성을 증가시키거나 다른 이유때문에 포함될 수 있다.

"암", "암성의", 또는 "악성의"란 용어들은 전형적으로 미조절 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물들의 생리적 조건을 말하거나 설명한다.

"생물학적 치료제"는 종양 유지 및/또는 성장을 지원하거나 항종양 면역반응을 억제하는 어떤 생물학적 경로로 신호를 보내는 리간드/수용체를 차단하는 생물학적 분자, 가령 항체 또는 융합 단백질을 가리킨다.

본원에서 사용된 바와 같이 "CDR" 또는 "CDRs"는 달리 명시되지 않으면, 면역 가변 영역 내 상보성 결정 영역(들)을 의미하고, 이는 Kabat 넘버링 시스템을 이용하여 정의된다.

"화학요법제"는 암 세포들의 사멸을 야기하거나 암 세포들의 성장, 분할, 복구, 및/또는 기능을 방해하는 화학물 또는 생물학적 물질을 가리킨다. 화학요법제들의 클래스들은 알킬화제, 항 대사제, 키나제 억제제, 방추형 독성 식물 알칼로이드, 세포 독성/항 종양 항생제, 토포아이소머라제 억제제, 광 증감제, 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERMs), 항-프로게스테론 , 에스트로겐 수용체 하향 조절제(ERDs), 에스트로겐 수용체 길항제, 루틴화 호르몬 방출 호르몬 작용제, 항 안드로겐, 아로마타제 억제제, EGFR 억제제, VEGF 억제제, 비정상적인 세포 증식 또는 종양과 관련된 유전자의 발현을 억제하는 안티센스 올리고 뉴클레오티드를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 치료 방법들에서 유용한 화학적요법제들은 세포 증식 억제제 및/또는 세포 독성 제제를 포함한다.

본 발명이 제공하는 항체들 및 조성물들은 임의의 적합한 장 투여 경로 또는 비경구 투여 경로를 통하여 투여될 수 있다 투여의 "장관 경로(enteral route)"란 용어는 위장관의 어느 부분을 통한 투여를 가리킨다. 장관 경로의 예는 경구, 점막, 협측 및 직장 경로 또는 위 내 경로를 포함한다. 투여의 "비경구적 경로"는 장내 경로 이외의 투여 경로를 가리킨다. 비경구 투여 경로의 예는 정맥 내, 근육 내, 진피 내, 복강 내, 종양 내, 방광 내, 동맥 내, 수막강 내, 캡슐 내, 안와 내, 심장 내, 경기관 내, 경막 내, 피막 하, 지주막 하, 척수강 내, 경막 외 및 흉골 내, 피하 또는 국소 투여를 포함한다. 본 개시의 항체들 및 조성물들은 구강 섭취, 비위관, 위장관, 주사, 주입, 이식형 주입 펌프 및 삼투압 펌프에 의한 것과 같은 어떤 적당한 방법을 사용하여 투여될 수 있다. 적합한 투여 경로 및 방법은 사용되는 특정 항체, 원하는 흡수율, 사용되는 특정 제형 또는 투여 형태, 치료되는 장애의 유형 또는 중증도, 특정 작용 부위, 및 환자의 상태에 따라 변할 수 있고, 본 분야의 숙련자에 의해 용이하게 선택 될 수 있다.

약제들의 투여와 관련하여 본원에서 사용되는 바와 같이 "동시 투여"라는 용어는 개개의 약제들이 동시에 대상 내에 존재하도록 약제를 투여하는 것을 가리킨다. 약제들의 병용 투여(동일 또는 대안 경로를 통한) 이외에, 동시 투여는 상이한 시간에(동일 경로 또는 대안 경로를 통한) 약제의 투여를 포함 할 수있다.

효과 A 및 B를 가진 두 개의 단일 화합물에 대한 Bliss 독립 조합 반응 C 는 C = A + B - A*B이고, 여기서 각 효과는 0과 1 사이의 분할 억제(fractional inhibition)로서 표현된다. (참조: Bliss (1939) Annals of Applied Biology) 실험 반응 및 계산된 Bliss 독립값 사이의 차이인 것으로 정의되는 Bliss 값은 조합된 두 가지 화합물들이 첨가적인지 아니면 상호작용을 하는 지를 나타낸다.

Bliss 값이 0이면, 첨가적인 것으로 간주한다. "첨가적(additive)"이란 용어는 두 가지 표적제들의 조합의 결과가 개별적인 각 제제의 합이라는 것을 가리킨다.

본원에서 사용된 바와 같이 ”Chothia”는 Al-Lazikani 등, JMB 273:927-948 (1997)에서 설명된 항체 넘버링 시스템을 가리킨다.

"보존적으로 개질된 변이체" 또는 "보존적인 치환"은 단백질의 생물학적 활성 또는 다른 원하는 특성, 예를 들어 항원 친화성 및/또는 특이성을 변화시키지 않으면서 종종 변경이 이루어질 수 있도록 유사한 특성(예: 전하, 측쇄 크기, 소수성/친수성, 골격 구조 및 강성 등)을 갖는 다른 아미노산으로 단백질 내의 아미노산을 치환하는 것을 가리킨다. 이 분야의 숙련자는 일반적으로 폴리펩타이드의 비필수 영역들 내 단일 아미노산 치환들은 생물학적 활성을 실질적으로 변경하지 않는다고 인식한다(예를 들어, Watson 등 (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Ed.)을 참조). 아울러, 구조적 또는 기능적으로 유사한 아미노 산들의 치환은 생물학적 활성에 덜 지장을 줄 것 같다. 예시적인 보존적 치환들이 하기 표 1에 기재되어 있다.

예시적인 보존적 아미노산 치환

최초 잔기	보존적 치환
Ala (A)	Gly; Ser
Arg (R)	Lys; His
Asn (N)	Gln; His
Asp (D)	Glu; Asn
Cys (C)	Ser; Ala
Gln (Q)	Asn
Glu (E)	Asp; Gln
Gly (G)	Ala
His (H)	Asn; Gln
Ile (I)	Leu; Val
Leu (L)	Ile; Val
Lys (K)	Arg; His
Met (M)	Leu; Ile; Tyr
Phe (F)	Tyr; Met; Leu
Pro (P)	Ala
Ser (S)	Thr
Thr (T)	Ser
Trp (W)	Tyr; Phe
Tyr (Y)	Trp; Phe
Val (V)	Ile; Leu

본 명세서와 청구항 내내 사용된 바와 같이 "필수적으로 구성되는(Consists essentially of)" 및 "필수적으로 구성되는(consist essentially of) 또는 "필수적으로 구성되는(consisting essentially of)"과 같은 변형은 어떤 인용된 요소들 또는 요소 군의 포함 및 인용된 요소와 유사하거나 상이한 성질의 다른 요소들의 선택적인 포함을 나타내며, 특정 투약 방법, 방법 또는 조성물의 기본 또는 신규한 특성을 실질적으로 변화시키지 않음을 나타낸다 . 비제한적인 예로서, 기재된 아미노산 서열로 필수적으로 구성되는 항체는 이 항체의 성질에 실질적으로 영향을 미치지 않는 하나 이상의 아미노산의 첨가 및/또는 치환을 포함할 수도 있다.

"진단용 항-PD-L 단클론 항체"는 특정 포유류 세포들의 표면에 발현되는 지정된 PD-L(PD-L1 또는 PDL2)의 성숙한 형태에 특이적으로 결합하는 mAb를 가리킨다. 성숙한 PD-L은 선구자 펩티드라고도하는 선구어 리더 서열이 결핍되어있다. "PD-L"및 "성숙한 PD-L"이라는 용어는 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용되며, 다르게 표시되거나 쉽게 언급되지 않는 한 동일한 분자를 의미하는 것으로 이해 될 것이다 문맥에서 명백하다.

본원에서 사용된 바와 같이, 진단용 항-인간 PD-L1 mAb 또는 항 -hPD-L1 mAb는 성숙한 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 모노클론 항체를 가리킨다 포르말린-고정, 파라핀-임베디드(FFPE) 종양 조직 절편에서 PD-L1 발현의 면역조직화학(IHC) 검출을 위한 진단 mAb로서 유용한 진단 항-인간 PD-L1 mAb의 특정 예는 항체 20C3 및 항체 22C3이며, 이들은 제WO2014/100079 호에 기재되어있다. FFPE 조직 절편에서 PD-L1 발현의 IHC 검출을 위해 유용한 것으로 보고되었던 또 다른 항-인간 PD-L1 mAb(Chen, B.J. 등, Clin Cancer Res 19: 3462-3473 (2013))는 Sino Biological사에서 공개적으로 이용가능한 토끼 항-인간 PD-L1 mA(Beijing, P.R. China; Catalog number 10084-R015)이다.

본원에서 사용된 바와 같이 "틀 영역(Framework region)" 또는 "FR"은 CDR 영역들을 제외한 면역글로불린 가변 영역들이다.

"상동성(homology) "은 두 폴리펩타이드 서열들이 최적으로 정렬 될 때 이들 서열들 사이의 서열 유사성을 가리킨다. 두 개의 비교된 서열들 모두의 위치가 동일한 아미노산 단량체 서브유닛에 의해 점유 될 때, 예를 들어 두 개의 상이한 Ab의 경쇄 CDR 내 위치가 알라닌에 의해 점유되면, 이 두 개의 Ab는 그 위치에서 상동이다. 상동성의 백분율은 두 개의 서열에 의해 공유된 상동성 위치들의 수를 비교된 총 위치 수 × 100으로 나눈 값이다. 예를 들어, 두 서열의 10 개 중 8 개의 위치가 이 서열이 최적으로 정렬되었을 때 일치하거나 상동성이면, 두 서열은 80 % 상동성이다. 일반적으로, 두 서열이 최대 백분율 상동성을 제공하도록 정렬되면, 비교가 이루어진다. 예를 들어, 비교는 BLAST 알고리즘에 의해 수행 될 수 있으며, 알고리즘의 파라미터는 각각의 기준 서열의 전체 길이에 걸쳐 각각의 서열들 간 가장 큰 일치를 제공하도록 선택된다.

다음 참조문헌은 서열 분석에 자주 사용되는 BLAST 알고리즘에 관한 것이다. BLAST 알고리즘 Altschul, S.F., 등, (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; Gish, W., 등., (1993) Nature Genet. 3:266-272; Madden, T.L., 등, (1996) Meth. Enzymol. 266:131-141; Altschul, S.F., 등, (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Zhang, J., 등, (1997) Genome Res. 7:649-656; Wootton, J.C., 등, (1993) Comput. Chem. 17:149-163; Hancock, J.M. 등, (1994) Comput. Appl. Biosci. 10:67-70; ALIGNMENT SCORING SYSTEMS: Dayhoff, M.O., 등, "A model of evolutionary change in proteins." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Schwartz, R.M., 등., "Matrices for detecting distant relationships." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3." M.O. Dayhoff (ed.), pp. 353-358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219:555-565; States, D.J., 등, (1991) Methods 3:66-70; Henikoff, S., 등, (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-10919; Altschul, S.F., 등, (1993) J. Mol. Evol. 36:290-300; ALIGNMENT STATISTICS: Karlin, S., 등, (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268; Karlin, S., 등, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877; Dembo, A., 등, (1994) Ann. Prob. 22:2022-2039; and Altschul, S.F. "Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments." in Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), (1997) pp. 1-14, Plenum, New York.

"단리된 항체" 및 "단리된 항체 단편"은 정제 상태를 나타내며, 이러한 문맥에서 명명된 분자가 핵산, 단백질, 지질, 탄수화물과 같은 다른 생물학적 분자 또는 세포 파편 및 성장 배지와 같은 다른 물질이 실질적으로 존재하지 않는다는 것을 가리킨다. 본원에 기재된 바와 같이, 일반적으로, "단리된(isolated)"이란 용어는, 결합 화합물의 실험적 또는 치료적 사용을 실질적으로 방해하는 양으로 존재하지 않는 한, 이러한 물질의 완전한 부재 또는 물, 완충액 또는 염의 부재를 말하려는 의도는 아니다.

본원에 사용된 바와 같이 "Kabat"은 엘빈 A. 카바트(Elvin A. Kabat)에 의해 개척된 면역글로불린 정렬 및 넘버링 시스템을 가리킨다 ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.).

본원에서 사용된 바와 같이, "단클론 항체" 또는 "mAb" 또는 "Mab"는 실질적으로 균일한 항체들의 집단을 말하고, 즉, 집단을 포함하는 항체 분자는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열이 동일하다. 대조적으로, 통상적인(다클론) 항체 제제들은 전형적으로 그들의 가변 도메인들, 특히 상이한 에피토프에 대해 특이적인 그들의 CDR들에서 상이한 아미노산 서열을 갖는 다수의 상이한 항체들을 포함한다. "단클론의(monoclonal)"란 수식어는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득 된 것으로서의 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체 생산을 요구하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 단클론 항체는 콜러(Kohler) 등에 의해 처음 기술된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있다 (1975) Nature 256: 495, 또는 재조합 DNA 방법들로 제조될 수 있다 (예를 들어, 미국특허 제4,816,567호 참조). 단클론 항체는 또한 Clackson 등에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다 (1991) Nature 352: 624-628 and Marks 등 (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597, 예를 들어. Presta (2005) J. Allergy Clin . Immunol. 116:731 또한 참조.

"환자"또는 "대상"은 치료가 요구되거나 임상 시험, 역학 연구에 참여하거나 대조군으로 사용되는 단일 인간 대상을 가리킨다.

"PD-1 길항제"는 면역 세포(T 세포, B 세포 또는 NKT 세포) 상에 발현된 인간 PD-1에게 암 세포 상에 발현 된 인간 PD-L1이 결합하는 것을 차단하고, 또한 바람직하게는 면역 세포에 발현된 PD-1에게 암세포 상에 발현된 인간 PD-L2가 결합하는 것을 차단하는 임의의 화합물 또는 생물학적 분자를 가리킨다. PD-1 및 그의 리간드에 대한 대안적 이름 또는 유사어는: PDCD1, PD1, CD279 and SLEB2 for PD-1; PDCD1L1, PDL1, B7H1, B7-4, CD274 and B7-H for PD-L1; and PDCD1L2, PDL2, B7-DC, Btdc 및 CD273 for PD-L2를 포함한다. 예시적인 인간 PD-1 아미노산 서열들을 NCBI Locus No.:에서 찾을 수 있다 NP_005009. 예시적인 인간 PD-1 및 PD-L2 아미노산 서열들을 NCBI Locus No.:에서 찾을 수 있다 NP_054862 and NP_079515, 각각.

본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도에서 유용한 PD-1 길항제는 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 단클론 항체(mAb) 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다 단클론 mAb는 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체 일 수 있으며, 인간 불변 영역을 포함 할 수 있다. 일부 실시 예에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 일부 실시 예에서, 인간 불변 영역은 IgG1 또는 IgG4 불변 영역이다. 일부 실시 예에서, 항원 결합 단편은 Fab, Fab'-SH, F(ab')₂, scFv 및 Fv 단편들로 이루어진 군으로부터 선택된다.

인간 PD-1에 결합하고 본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도에 유용한 mAb의 예는 US7488802, US7521051, US8008449, US8354509, US8168757, WO2004 / 004771, WO2004 / 072286, WO2004 / 056875, 및 US2011 / 0271358에 기재되어 있다. 본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도에서 PD-1 길항제로서 유용한 특정한 항-인간 PD-1 mAb는 다음을 포함한다 : MK-3475, WHO Drug Information, Vol. 27, No. 2, 페이지 161-162 (2013)에 기재된 구조를 갖고 도 6에 도시된 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열들을 포함하는 인간화 IgG4 mAb , 니볼루맙(nivolumab)(BMS-936558), WHO Drug Information, Vol. 27, No. 1, pages 68-69 (2013)에 기재된 구조를 갖고 도 7에 도시된 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 인간 IgG4 mAb; WO2008/156712에 기재되어있는 인간화 항체 h409A11, h409A16 및 h409A17, 그리고 MedImmune이 개발 중인 AMP-514.

인간 PD-L1에 결합하고 본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도에 유용한 mAb의 예는 WO2013/019906, W02010/077634 A1 및 US8383796에 기재되어 있다. 본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도에서 PD-1 길항제로서 유용한 특정한 항-인간 PD-L1 mAb는 MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C 및 WO2013/019906의 각각 SEQ ID NO:24 및 SEQ ID NO:21의 서열 번호의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다

본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도에서 유용한 다른 PD-1 길항제는 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 특이 적으로 결합하는 면역 부착소(immunoadhesin), 예를 들어, 면역 글로불린 분자의 Fc 영역과 같은 불변 영역에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포 외 또는 PD-1 결합부를 포함하는 융합 단백질을 포함한다. PD-1에 특이적으로 결합하는 면역부착소 분자들의 예는 WO2010/027827 and WO2011/066342에 기재되어 있다. 본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도에서 PD-1 길항제로서 유용한 특이 융합 단백질은, PD-L2-FC 융합 단백질이고 인간 PD-1에 결합하는 AMP-224(B7-DCIg로도 알려진)를 포함한다.

본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도의 일부 실시 예에서, PD-1 길항제는 (a) 서열번호 1, 2 및 3의 경쇄 CDR 및 서열번호 4, 5 및 6의 중쇄 CDR; 또는 (b) 서열번호 7, 8 및 9의 경쇄 CDR 및 서열번호 10, 11 및 12의 중쇄 CDR을 포함하는 단클론 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다.

본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도의 다른 실시 예에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 (a) 서열 번호 13 또는 그의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열 번호 15 또는 그의 변이체, 서열번호 16 또는 그의 변이체, 및 서열번호 17 또는 그의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단클론 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 중쇄 가변 영역 서열의 변이체는 틀 영역(즉, CDR의 외부)에서 17개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는 것을 제외하고는 기준 서열과 동일하며, 바람직하게는 틀 영역에서 10보다 작은 9, 8, 7, 6 또는 5개의 보존적 아미노산 치환을 가진다. 경쇄 가변 영역 서열의 변이체는 틀 영역(즉, CDR의 외부)에서 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는 것을 제외하고는 기준 서열과 동일하며, 바람직하게는 틀 영역에서 4보다 작은 3 또는 2개의 보존적 아미노산 치환을 가진다.

본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도의 또 다른 실시 예에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 (a) 서열번호 14를 포함하는 중쇄 및 (b) 서열번호 18, 서열번호 19 또는 서열번호 20을 포함하는 경쇄를 포함하는 단클론 항체이다.

본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도의 또 다른 실시 예에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 (a) 서열번호 14를 포함하는 중쇄 및 (b) 서열번호 18을 포함하는 경쇄를 포함하는 단클론 항체이다.

하기 표 2는 본 발명의 치료 방법, 약제 및 용도에 사용하기 위한 예시적인 항-PD-1 mAb의 아미노산 서열의 목록을 제공하며, 서열은 도 1 내지 5에 나타내었다.

예시적인 항-인간 PD-1 단클론 항체
A. WO2008 / 156712에서 hPD -1.08A의 경쇄 및 중쇄 CDR을 포함
CDRL1	서열번호 1
CDRL2	서열번호 2
CDRL3	서열번호 3
CDRH1	서열번호 4
CDRH2	서열번호 5
CDRH3	서열번호 6
B. WO2008/156712에서 hPD -1.09A의 경쇄 및 중쇄 CDR을 포함
CDRL1	서열번호 7
CDRL2	서열번호 8
CDRL3	서열번호 9
CDRH1	서열번호 10
CDRH2	서열번호 11
CDRH3	서열번호 12
C. WO2008 / 156712에서 성숙한 h109A 중쇄 가변 영역 및 의 성숙한 K09A 경쇄 가변 영역들 중 하나를 포함
중쇄 VR	서열번호 13
경쇄 VR	서열번호 15 또는 서열번호 16 또는 서열번호 17
D. WO2008 / 156712의 성숙한 409 중쇄 및 성숙한 K09A 경쇄들 중 하나를 포함.
중쇄	서열번호 14
경쇄	서열번호 18 또는 서열번호 19 또는 서열번호 20

본원에서 사용된 바와 같이 "PD-L1"발현 또는 "PD-L2"발현은 세포 표면 위에 지정된 PD-L 단백질 발현의 또는 세포 또는 조직 내 지정된 PD-L mRNA의 어떤 검출 가능한 수준을 가리킨다. PD-L 단백질 발현은 종양 조직 절편의 IHC 분석에서 또는 유동 세포 계측법에 의해 진단 PD-L 항체로 검출 될 수있다. 대안적으로, 종양 세포에 의한 PD-L 단백질 발현은 원하는 PD-L 표적, 예를 들어 PD-L1 또는 PD-L2에 특이적으로 결합하는 결합제(예를 들어, 항체 단편, 유사체 등)를 사용하여 PET 이미징에 의해 검출될 수 있다. PD-L mRNA 발현을 검출하고 측정하기 위한 기술은 RT-PCR 및 실시간 정량적 RT-PCR을 포함한다.

종양 조직 절편의 IHC 분석에서 PD-L1 단백질 발현을 정량화하기 위한 몇 가지 접근법이 기술되어 있다. 예를 들어, Thompson, R. H., 등 PNAS 101 (49); 17174-17179 (2004); Thompson, R. H. 등, Cancer Res. 66:3381-3385 (2006); Gadiot, J., 등, Cancer 117:2192-2201 (2011); Taube, J. M. 등, Sci Transl Med 4, 127ra37 (2012); 및 Toplian, S. L. 등, New Eng.를 참조 J Med. 366 (26): 2443-2454 (2012).

한 접근법은 세포 표면 막 염색의 조직 학적 증거를 나타내는 종양 세포의 백분율로 정의된 양성 결과를 사용하여 PD-L1 발현에 대해 양성 또는 음성의 단순한 이원 종점을 채용한다. IHC 염색이 전체 종양 세포의 적어도 1 %, 바람직하게는 5 %에서 관찰되는 경우, 종양 조직 절편을 PD-L1 발현에 대해 양성으로 계수한다. 일 실시 예에서, WO2014/100079에 기재된 항체 22C3을 사용한 IHC 분석에 의한 결정시, 전립선 종양 샘플은, 이 샘플 내 전체 종양 세포의 1 % 내지 49%가 막 염색을 나타내면 약한 PD-L1 발현을 갖는 것으로 지정되고, 이 샘플 내 전체 종양 세포의 적어도 50%가 막 염색을 나타내면 강한 PD-L1 발현을 갖는 것으로 지정된다.

또 다른 접근법에서, 종양 조직 절편에서의 PD-L1 발현은 종양 세포뿐만 아니라 주로 임파구를 구성하는 침윤성 면역 세포에서 정량화된다. 막 염색을 나타내는 종양 세포 및 침윤 면역 세포의 백분율은 5% 미만, 5~9%로 분리하여 정량화되고, 이후 10%씩 증가하여 100%까지 증가한다. 종양 세포의 경우, PD-L1 발현은 점수가 5% 미만이면 음성으로 계수되고 점수가 5% 이상이면 양성으로 계수된다. 면역 침윤물에서의 PD-L1 발현은 막 염색 세포의 퍼센트에 침윤물의 강도를 곱하여 결정되는 조정된 염증 점수(AIS)로 지칭되는 반 정량 측정으로 보고되며, 증상없음(0), 경증(1점, 희귀 림프구), 중간(2 점, 임파 조직 집괴에 의한 종양의 국소적 침윤) 또는 중증(3 점, 광범위 침윤)으로 등급이 매겨진다. 종양 조직 절편은 AIS가 5 이상이면 면역 침윤에 의해 PD-L1 발현 양성으로 계수된다.

PD-L mRNA의 수준은 유비퀴틴 C와 같이 양론적 RT-PCR에서 자주 사용되는 하나 이상의 기준 유전자의 mRNA 발현 수준과 비교될 수 있다.

일부 실시 예에서, 악성 세포에 의한 및/또는 종양 내에서의 침윤 면역 세포에 의한 PD-L1 발현 수준(단백질 및/또는 mRNA)은 적절한 대조군에 의한 PD-L1 발현 수준(단백질 및/또는 mRNA)과 비교를 근거로 "과발현"또는 "상승"인 것으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 대조군 PD-L1 단백질 또는 mRNA 발현 수준은 동일한 유형의 비 악성 세포 또는 일치된 정상 조직으로부터 얻은 절편에서 정량화 된 수준일 수 있다. 일부 실시 예에서, 종양 샘플에서 PD-L1 발현은 이 샘플에서 PD-L1 단백질(및/또는 PD-L1 mRNA)이 대조군보다 적어도 10 %, 20 % 또는 30 % 더 많으면 높아지도록 결정된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "전립선암 워킹 그룹 2(PCWG2)" 기준은 전체가 본원에 포함된 Scher 등, (2008) “Design and End Points of Clinical Trials for Patients With Progressive Prostate Cancer and Castrate Levels of Testosterone: Recommendations of the Prostate Cancer Clinical Trials Working Group” J. Clin. Oncol. 26(7):1148-159에 제시된 의미를 가진다.

본원에서 사용된 바와 같이 "RECIST 1.1 반응 기준"은 반응이 측정 중인 환경을 근거로 적절하면, 표적 병변 또는 비표적 병변에 대하여 J Cancer 45:228-247 (2009)Eisenhauer 등, E.A. 등, Eur . J Cancer 45:228-247 (2009)에 기재된 정의를 의미한다.

"지속 반응"은 치료제 또는 본원에 기재된 병용 치료제로 치료를 중단한 후에도 지속적인 치료 효과를 가리킨다. 일부 실시 예에서, 지속 반응은 치료 기간과 적어도 동일하거나, 또는 치료 기간보다 적어도 1.5, 2.0, 2.5 또는 3배 더 긴 지속 시간을 갖는다.

"시너지(synergy)"또는 "시너지 있는(synergistic)"라는 용어는 두 제제의 조합의 반응이 각 제제의 개별 반응의 합보다 많다는 의미로 사용됩니다. 보다 구체적으로, 시험 관내 환경에서 시너지의 한 측정은 "블리스 시너지(Bliss synergy)"로 알려져 있다. 블리스 시너지는 위에 정의된 블리스 값에 의해 결정된 "블리스 독립보다 초과"를 가리킨다. 블리스 값이 영(0)보다 크면, 또는 바람직하게는 0.2보다 크면, 시너지를 나타내는 것으로 간주된다. 물론, 본원에서 "시너지"의 사용은 추가적 및/또는 대안적 방법에 의해 측정된 시험관 내 시너지를 포함한다. 본원에서 조합의 개별적인 성분들의 합 이상인 항암 효과를 포함하지만 이에 한정되지 않는 조합의 시험관 내 생물학적 효과에 대한 기준은 블리스 값과 상관될 수 있다. 또한, 성분들의 조합이 개별적인 성분들의 합 이상인 활성을 나타내는 지 여부를 포함하여, 본원에서 "시너지"의 사용은 추가적 및/또는 대안적 방법에 의해 측정 될 수 있고, 이 기술의 숙련자에게 공지되어 있거나 명백할 것이다. 일 실시 예에서, 본원에 기재된 리스테리아 기반 면역 요법과 본원에 기재된 항 -PD-1 항체의 조합은 시너지 있는 항암 활성을 제공한다.

"조직 절편"은 조직 샘플의 단일 부분 또는 조각, 예를 들어 정상 조직 또는 종양의 샘플로부터 잘라낸 조직의 얇은 조각을 가리킨다.

본원에서 사용된 바와 같이 암을 "치료"또는 "치료하는"은 PD-1 길항제 및 PSA 발현 세포에 대한 세포의 면역 반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현 벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환 함으로써 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주 또는 LmddA -143 (염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3를 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주의 병용 치료제를 전립선암을 가진 환자 또는 전립선암이 있는 것으로 진단받은 환자에게 투여하여 적어도 하나의 긍정적인 치료 효과, 예를 들어 암세포 수의 감소, 종양 크기의 감소, 말초 기관으로의 암세포 침윤율의 감소 또는 종양 전이 또는 종양 성장율의 감소를 달성하는 것을 가리킨다. 암의 긍정적인 치료 효과는 여러가지 방식으로 측정될 수 있다(W. A. Weber, J. Nucl . Med . 50:1S-10S (2009)를 참조). 예를 들어, 종양 성장 억제에 대하여, NCI 표준에 따르면, T/C 42%는 항종양 활성의 최소 수준이다. T/C < 10%는 높은 항종양 활성 수준으로 간주되고, T/C (%)=치료받은 환자의 중간 종양 체적/대조군의 중간 종양 체적× 100이다. 일부 실시 예에서, 본 발명의 조합에 의해 달성되는 치료는 PR, CR, OR, PFS, DFS 및 OS 중 하나이다. "종양 진행까지의 시간"이라고도 불리는 PFS는 치료 동안 및 치료 후 암이 자라지 않는 시간의 길이를 나타내며 환자가 CR이나 PR을 경험 한 시간량뿐만 아니라 환자가 SD를 경험한 시간량을 포함한다. DFS는 치료 동안 및 치료 후 환자가 질병이 없는 시간의 길이을 나타냅니다. OS는 미접촉 또는 치료받지 않은 개인이나 환자와 비교했을 때 기대 여명이 연장되는 것을 가리킨다. 일부 실시 예에서, 본 발명의 조합에 대한 반응은 RECIST 1.1 반응 기준을 사용하여 평가되는 PR, CR, PFS, DFS, OR 또는 OS 중 하나이다. 암 환자를 치료하는데 효과적인 본 발명의 조합에 대한 치료 요법은 환자의 질병 상태, 연령 및 체중과 같은 인자 및 대상의 항암 반응을 유도하는 요법의 능력에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 양태 중 임의의 양태의 실시예는 모든 대상에서 긍정적인 치료 효과를 달성하는데 효과적이지 않을 수 있지만, 이 기술에 공지된 임의의 통계 테스트, 예를 들어 학생의 t-검사, chi² 검사, Mann 및 Whitney에 따른 U-검사, Kruskal-Wallis 검사(H-검사), Jonckheere-Terpstra-검사 및 Wilcoxon 검사에 의해 결정된 통계적으로 유의한 수의 대상에서 그러해야만 한다.

"치료 요법", "투여 프로토콜"이란 용어 및 투여 요법은 본 발명의 조합에서 각 치료제의 투여량 및 투여시점을 가리키기 위해 상호 교환적으로 사용된다.

암으로 진단 받았거나 의심되는 대상에게 적용시 "종양"은 악성 또는 잠재적으로 악성인 임의 크기의 종양 또는 조직 덩어리를 가리키며 1 차 종양 및 2 차 종양을 포함한다. 고형 종양은 보통 낭종이나 액체 영역을 포함하지 않는 비정상적인 성장 또는 조직 덩어리이다. 고형 종양의 다른 유형은 그 종양을 형성하는 세포의 유형에 따라 명명됩니다. 고형 종양의 예로는 육종, 암종, 림프종이 있다. 백혈병(혈액암)은 일반적으로 고형 종양을 형성하지 않는다(미국 국립 암 연구소, 암 용어 사전).

"종양 부하(tumor load)"라고도 불리는 "종양 부담(tumor burden)"은 신체 전체에 분포된 종양 물질의 총량을 가리킨다. 종양 부담은 암 세포의 총 수 또는 림프절과 뼈의 협착을 포함하여 신체 전반에 걸친 종양의 전체 크기를 가리킨다. 종양 부담은 이 기술에 공지된 다양한 방법, 예를 들어 대상으로부터 종양 제거시 종양(들)의 치수를 예를 들어 캘리퍼스를 사용하여 측정하거나 체내에서 영상 기법, 예를 들어 초음파, 뼈 스캔, 컴퓨터 단층 촬영(CT) 또는 자기 공명 영상(MRI) 스캔을 사용하는 동안 결정될 수 있다.

"종양 크기"라는 용어는 종양의 길이와 폭으로 측정될 수 있는 종양의 전체 크기를 가리킨다. 종양 크기는 이 기술에 공지 된 다양한 방법, 예를 들어 대상으로부터 종양 제거시 종양(들)의 치수를 예를 들어 캘리퍼스를 사용하여 측정함으로써 또는 체내에서 영상 기법, 예를 들어 뼈 스캔, 초음파, CT 또는 MRI 스캔을 사용하는 동안 결정될 수 있다.

일부 실시 예에서, 본 발명은 생약독화 박테리아 균주, 예를 들어 핵산 분자를 포함하는 리스테리아 백신 균주를 포함하는 면역원성 조성물을 제공하며, 상기 핵산 분자는 융합 폴리펩타이드를 암호화하는 제1 개방형 해독틀을 포함하며, 상기 융합 폴리펩타이드는 PEST 서열-포함 폴리펩타이드 또는 PSA 항원 또는 그의 단편에 융합된 PEST 서열-포함 펩타이드를 포함한다. 일 실시 예에서, 면역원성 조성물은 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역 반응을 유도할 수있 는 APC를 자극하기 위해 사용되는 생약독화 박테리아 균주를 포함한다. 다른 실시 예에서, 면역원성 조성물은 생약독화 모노사이토젠 균주를 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현 벡터로 형질전환 함으로써 유전자 조작된 리스테리아 모노사이토젠 균주를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 면역원성 조성물은 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 면역원성 조성물은 LmddA -143 (염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3를 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함한다. 일부 실시 예에서, 본 발명은 종양 또는 암에 대한 치료, 예를 들어, 본원에서 제공된 면역원성 조성물을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 전립선암 치료, 보호, 및 면역 반응 유도 방법을 제공한다.

일부 실시 예에서, 생약독화 박테리아 균주, 예를 들어 리스테리아 백신 균주를 포함하는 면역원성 조성물은 핵산 분자를 포함하며, 상기 핵산 분자는 융합 폴리펩타이드를 인코딩하는 제1 개방형 해독틀을 포함하며, 상기 융합 폴리펩타이드는 PEST 서열-포함 폴리펩타이드를 포함하며, PSA 항원에 융합된 PEST 서열-포함 펩타이드 또는 그의 단편은 상기 대상에게 본원에서 제공된 면역원성 조성물 균주를 투여하는 단계를 포함하는, 인간 대상의 종양 또는 암, 예를 들어 전립선암을 예방하거나 치료하는 방법에 사용될 수 있고, 상기 재조합 리스테리아 균주는 LLO 단백질의 N- 말단 단편 및 종양-연관 항원을 포함하는 재조합 폴리펩타이드를 포함하며, 이에 의해 상기 재조합 리스테리아 균주는 종양-연관 항원에 대한 면역 반응을 유도함으로써, 인간 대상의 종양 또는 암을 치료한다. 다른 실시 예에서, 상기 면역 반응은 T-세포 반응이다. 다른 실시 예에서, 상기 T-세포 반응은 CD4+FoxP3- T 세포 반응이다. 다른 실시 예에서, 상기 T-세포 반응은 CD8+ T 세포 반응이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 T-세포 반응은 CD4+FoxP3- 및 CD8+ T 세포 반응이다.

일부 실시 예에서, 상기 생약독화 리스테리아 균주는 핵산 분자를 포함하며, 상기 핵산 분자는 융합 폴리펩타이드를 암호화하는 제1 개방형 해독틀(open reading frame)을 포함하며, 상기 융합 폴리펩타이드는 PEST 서열-포함 폴리펩타이드 또는 PSA 항원 또는 그의 단편에 융합된 PEST 서열-포함 펩타이드를 포함한다. 일부 실시 예에서, 상기 핵산 분자는 에피솜 발현 벡터로 포함된다. 다른 실시 예에서, 상기 핵산 분자는 염색체의 DNA에 통합된다.

일 실시 예에서, 융합 단백질을 암호화하는 제1 개방형 해독틀을 포함하는 상기 핵산 분자는 리스테리아 게놈에 통합된다. 다른 실시 예에서, 상기 핵산은 상기 약독화 리스테리아 백신 균주 내의 플라스미드 내에 있다. 다른 실시 예에서, 상기 핵산 분자는 상기 약독화 리스테리아 백신 균주 내의 세균 인공염색체 내에 있다.

“면역원성 조성물”이 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 및 보조제를 포함할 수 있다는 점을 충분히 인식할 것이다. 다른 구현예에서, 면역원성 조성물은 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아를 포함한다. 다른 실시 예에서, 면역원성 조성물은, 본 기술분야에 알려져 있거나 본원에서 제공되는 바와 같은 보조제를 포함한다. 또한, 이러한 조성물들은, 본원에서 추가로 제공되는 바와 같이, 면역 반응을 향상시키거나 T 효과기 세포 대 조절 T 세포의 비를 증가시키거나 항-종양성 면역 반응을 이끌어낸다는 점을 이해하도록 한다. 본원 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, “면역원성 조성물” 및 "조성물”이란 용어는, 모두 동일한 의미와 품질을 갖는 것으로서 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다.

본원에서 제공되는 면역원성 조성물의 투여 후에, 본원에서 제공되는 방법들은, 말초 림프 장기에서의 T 효과기 세포들의 팽창을 유도하여 종양 부위에서의 T 효과기 세포들의 존재를 향상시킨다. 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 방법들은, 말초 림프 장기에서의 T 효과기 세포들의 팽창을 유도하여 그 말초 부분에서의 T 효과기 세포들의 존재를 향상시킨다. 이러한 T 효과기 세포들의 팽창에 따라, Treg의 개수에 영향을 끼치지 않고 말초 부분과 종양 부위에서의 T 효과기 세포 대 조절 T 세포의 비가 증가한다. 숙련자라면, 말초 림프 장기가, 비장, 페이어스 패치, 림프절, 아데노이드 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않음을 이해할 것이다. 일 실시 예에서, T 효과기 세포 대 조절 T 세포의 증가된 비는, Treg의 개수에 영향을 끼치지 않고 말초 부분에서 발생한다. 또 다른 실시 예에서, T 효과기 세포 대 조절 T 세포의 증가된 비는, 말초 부분, 림프 장기, 및 종양 부위에서 이러한 부위들에서의 Treg의 개수에 영향을 끼치지 않고 발생한다. 또 다른 실시 예에서, T 효과기 세포의 증가된 비는 Treg의 빈도를 감소시키지만, 이러한 부위들에서의 Treg의 총 개수는 감소시키지 않는다. 본원에서 사용된 바와 같이, "약독화(attenuation)"란 용어는 박테리아가 동물에서 질병을 일으키는 능력의 감소를 가리킨다. 다시 말하면, 약독화된 리스테리아 균주의 병리적 특징은, 야생형 리스테리아에 비해 감소되었지만, 약독화된 리스테리아는 배양액에서 성장 및 유지될 수 있다. 약독화된 리스테리아에 의한 Balb/c 마우스의 정맥 접종을 일례로 사용하여, 접종된 동물들의 50%( LD₅₀)가 생존하는 치사용량이 바람직하게 적어도 약 10배만큼, 더욱 바람직하게 적어도 약 100배만큼, 더욱 바람직하게 적어도 약 1,000배만큼, 더욱 바람직하게 적어도 약 10,000배 만큼, 가장 바람직하게 적어도 약 100,000배만큼 야생형 리스테리아의 LD₅₀을 초과하여 증가한다. 따라서, 리스테리아의 약독화된 균주는, 투여되는 동물을 사멸하지 않는 것, 또는 투여되는 세균의 개수가 동일한 동물을 사멸하는 데 요구되는 야생형 비약독화 세균의 개수보다 매우 많을 때에만 동물을 사멸하는 것이다. 약독화된 세균은, 또한, 그 세균의 성장에 요구되는 영양분이 내부에 존재하지 않기 때문에, 일반적인 환경에서 복제될 수 없는 것을 의미하도록 해석되어야 한다. 따라서, 세균은, 필요 영양소가 제공되는 피제어 환경에서의 복제로 한정된다. 따라서, 본 발명의 약독화된 균주는, 그 균주가 제어되지 않은 복제가 가능하지 않는 식으로 환경적으로 안전하다.

일 실시 예에서, 본원에서 제공된 상기 약독화 리스테리아 균주는 항생제 내성 유전자가 결여되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공된 상기 약독화 리스테리아 균주는 항생제 내성 유전자를 암호화하는 핵산을 포함하는 플라스미드를 포함한다. 다른 실시 예에서, 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산이 LLO 유전자를 가진 개방형 해독틀 내 리스테리아 게놈에 작동 가능하게 통합되는 PSA 폴리펩타이드를 발현하는 약독화 리스테리아 균주.

일 실시 예에서, 본원에서 제공된 상기 약독화 리스테리아는 파고리소좀(phagolysosome)을 탈출할 수 있다.

일 실시 예에서 상기리스테리아 게놈은 일 실시 예에서 독성 인자인, 내인성 ActA 유전자의 결실을 포함한다. 일 실시 예에서, 이러한 결실은 더욱 약독화되고 그래서 인간 사용을 위해 더 안전한 리스테리아 균주를 제공한다. 본 실시예에 따르면, 상기 PSA 항원 또는 그의 단편은 리스테리아 염색체 내 LLO가 있는 틀에 통합된다. 또 다른 실시 예에서, 상기 통합된 핵산 분자는 ActA 유전자 자리 내로 통합된다.

일 실시 예에서, 발현 벡터는 PSA 항원 또는 그의 단편을 포함하는 재조합 폴리펩타이드를 포함하는 핵산 분자를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 상기 재조합 폴리펩타이드는 절단된 LLO 단백질, 절단된 ActA 단백질 또는 PSA 항원에 융합된 PEST 서열 펩타이드를 더 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 상기 절단된 LLO 단백질은 N-말단 LLO 또는 그의 단편이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 절단된 ActA 단백질은 N-말단 ActA 단백질 또는 그의 단편이다.

또 다른 실시 예에서 약독화 균주는 Lmdd이다 . 또 다른 실시 예에서, 상기 약독화 균주는 LmΔactA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 약독화 균주는 LmΔPrfA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 약독화 균주는 LmΔPlcB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 약독화 균주는 LmΔPlcA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 균주는 상기 균주들 중 어느 하나의 이중 돌연변이체 또는 삼중 돌연변이체이다. 또 다른 실시 예에서, 이 균주는 리스테리아 기반 균주의 고유한 속성인 강력한 보조제(adjuvant) 효과를 발휘한다. 또 다른 실시 예에서, 이 균주는 EGD 리스테리아 골격으로부터 구축된다. 또 다른 실시 예에서, 본 발명에 사용된 균주는 비용혈 LLO를 발현하는 리스테리아 균주이다.

또 다른 실시 예에서, 영양요구성 돌연변이체인 리스테리아 균주이다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 비타민 합성 유전자를 암호화하는 유전자가 결핍되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 판토텐산 합성 효소를 암호화하는 유전자가 결핍되어 있다.

일 실시 예에서, D-알라닌이 결핍된 리스테리아 의 AA 균주의 생성은, 예를 들면, 당해 기술 분야의 숙련자에게 주지된 다수의 방법으로 달성될 수도 있는데, 결실 돌연변이, 삽입 돌연변이 및 프레임 이동 돌연변이의 생성을 초래하는 돌연변이, 단백질의 조기 종결을 초래하는 돌연변이, 또는 유전자 발현에 영향을 미치는 조절 서열(들)의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 돌연변이는 재조합 DNA 기술을 이용하거나 돌연변이 화학 물질이나 방사선에 이어서 돌연변이체의 선택을 이용하여 기존의 돌연변이 기술을 사용하여 달성될 수 있다. 또 다른 실시 예에서, 결실 돌연변이체가 바람직한데, 영양 요구성 표현형의 낮은 복귀 가능성을 동반하기 때문이다. 또 다른 실시 예에서, 본 명세서에서 제시된 프로토콜에 따라 생성되는 D-알라닌의 돌연변이체는 간단한 실험실 배양 분석에서 D-알라닌의 부재시에 성장할 수 있는 능력에 대해 시험될 수 있다. 또 다른 실시 예에서, 이 화합물의 부재 시에 성장할 수 없는 돌연변이체들은 추가 연구를 위해 선택된다.

다른 실시 예에서, 상기 D-알라닌 연관 유전자에 더하여, 본원에서 제공된 바와 같은, 대사 효소의 합성에 관여하는 다른 유전자들이 리스테리아의 돌연변이 유발을 위한 표적으로 사용될 수도 있다.

또 다른 실시 예에서, 대사 효소는 재조합 박테리아 균주의 염색체의 나머지 부분이 결여된 내인성 대사 유전자를 보완한다. 일 실시 예에서, 내인성 대사 유전자는 염색체에서 돌연변이된다. 또 다른 실시 예에서, 내인성 대사 유전자는 염색체에서 결실된다. 또 다른 실시 예에서, 상기 대사 효소는 아미노산 대사 효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 대사 효소는 상기 재조합 리스테리아 균주 내에서 세포벽 합성에 사용되는 아미노산의 형성을 촉매한다. 또 다른 실시 예에서, 상기 대사 효소는 알라닌 라세미화효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 대사 효소는 D-아미노산 전이효소이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일 실시 예에서, 상기 영양 요구성 리스테리아 균주는 상기 영양 요구성 리스테리아 균주의 영양 요구성을 보완하는 대사 효소를 포함하는 에피솜 발현 벡터를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 구성체는 에피솜 방식으로 리스테리아 균주에 포함되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 외부 항원은 재조합 리스테리아 균주에 의해 보호된 벡터로부터 발현된다. 또 다른 실시 예에서, 상기 에피솜 발현 벡터는 항생제 내성 마커가 결여되어 있다. 일 실시 예에서, 본원에서 제공되는 바와 같은 방법 및 조성물의 항원은 PEST 서열을 포함하는 폴리펩타이드에 융합된다. 또 다른 실시 예에서, PEST 서열을 포함하는 폴리펩타이드는 절단된 LLO이다. 또 다른 실시 예에서, PEST 서열을 포함하는 폴리펩타이드는 ActA이다.

또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 AA 대사 효소가 결핍되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 D-글루탐산 합성효소 유전자가 결핍되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 dat 유전자가 결핍되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 dal 유전자가 결핍되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 dga 유전자가 결핍되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 디아미노피멜산(diaminopimelic acid)의 합성에 관여하는 유전자가 결핍되어 있다. CysK. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 비타민 B12 독립적 메티오닌 합성효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 trpA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 trpB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 trpE이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 asnB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 gltD이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 gltB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 leuA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 argG이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 thrC이다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 상술한 유전자들 중 하나 이상이 결핍되어 있다.

또 다른 실시 예에서의 리스테리아 균주는 합성효소 유전자가 결핍되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 AA 합성 유전자이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 folP이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 디하이드로우리딘 합성효소 과 단백질이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 ispD이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 ispF이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 포스포에놀피루베이트 합성효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 hisF이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 hisH이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 fliI이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 리보솜 큰 소단위 슈도우리딘 합성효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 ispD이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 2작용 GMP 합성효소/글루타민 아미도전이효소 단백질이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 cobS이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 cobB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 cbiD이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 유로포르피린-III C-메틸전이효소/ 유로포르피리노겐-III 합성효소 이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 cobQ이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 uppS이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 truB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 dxs이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 mvaS이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 dapA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 ispG이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 folC이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 시트르산염 합성효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 argJ이다. 또 다른 실시 예에서 상기 유전자는 3-데옥시-7-포스포헵투론산 합성효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 인돌-3-글리세롤-인산 합성효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 안트라닐산염 합성효소/글루타민 아미도전이효소 성분이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 menB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 메나퀴논-특이적 이소코리스민산염 합성효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 포스포리보실포르밀글리신아미딘 합성효소 I 또는 II이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 포스포리보실아미노이미다졸-숙시노카르복사이미드 합성효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 carB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 carA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 thyA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 mgsA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 aroB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 hepB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 rluB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 ilvB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 ilvN이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 alsS이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 fabF이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 fabH이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 슈도우리딘 합성효소이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 pyrG이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 truA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 pabB이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 atp 합성효소 유전자이다(예, atpC , atpD-2, aptG, atpA-2 등).

또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 phoP이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 aroA이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 aroC이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 aroD이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 plcB이다.

또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 펩타이드 수송체가 결핍되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 ABC 수송체/ ATP-결합/투과효소 단백질이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 올리고 펩타이드 ABC 수송체/올리고펩타이드-결합 단백질이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 올리고펩타이드 ABC 수송체/ 투과효소 단백질이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 아연 ABC 수송체/ 아연-결합 단백질이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 설탕 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 인산염 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 ZIP 아연 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 EmrB/QacA 과의 약물 내성 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 황산염 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 양성자-의존성 올리고펩타이드 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 마그네슘 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 포름산염/아질산염 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 스퍼미딘/퓨트레신 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 Na/Pi-공동수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 설탕 인산염 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 글루타민 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 주 촉진자(Major Facilitator) 과 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 글리신 베타인/L-프롤린 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 몰리브덴 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 테코익산 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 코발트 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 암모늄 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 아미노산 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 세포 분열 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 망간 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 철 화합물 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 말토오스/말토덱스트린 ABC 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 Bcr/CflA 과 약물 내성 수송체이다. 또 다른 실시 예에서, 상기 유전자는 상기한 단백질(들) 중 하나의 서브유닛이다.

일 실시 예에서, 본원에서 제공되는 것은 재조합 리스테리아에 도달하기 위해서 리스테리아를 형질전환시키는 데 사용되는 핵산 분자이다. 또 다른 실시 예에서의 본원에서 제공되는 핵산은 독성 유전자가 결여된 리스테리아를 형질전환시키는 데 사용된다. 또 다른 실시 예에서, 핵산 분자는 리스테리아 게놈 내에 통합되고 비-작용성 독성 유전자를 운반한다. 또 다른 실시 예에서, 독성 유전자는 재조합 리스테리아 게놈에서 변이된다. 또 다른 실시 예에서, 상기 핵산 분자는 리스테리아 게놈에 존재하는 내인성 유전자를 비활성화시키는 데에 사용된다. 또 다른 실시 예에서, 독성 유전자는 actA 유전자, inlA 유전자, 및 inlB 유전자, inlC 유전자, inlJ 유전자, plbC 유전자, bsh 유전자, 또는 prfA 유전자이다. 독성 유전자는 재조합 리스테리아 내의 독성과 연관될 수 있다고 공지된 임의의 유전자일 수 있다는 것이 숙련자에 의해 이해되어야 한다.

또 다른 실시 예에서, 상기 리스테리아 균주는 inlA 돌연변이체, inlB 돌연변이체, inlC 돌연변이체, inlJ 돌연변이체, prfA 돌연변이체, actA 돌연변이체, dal /dat 돌연변이체, prfA 돌연변이체, plcB 결실 돌연변이체, plcA와 plcB 모두가 결여된 이중 돌연변이체이다. 다른 실시 예에서, 리스테리아는 이 유전자들의 개별적 또는 조합 형태의 결실 또는 돌연변이를 포함한다. 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 리스테리아는 유전자들 중 각각 하나가 결여되어 있다. 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 리스테리아는 actA, prfA, 및 dal/dat 유전자를 비롯하여, 본원에서 제공되는 임의의 유전자 중 적어도 하나 및 최대 10까지 결여되어 있다. 다른 실시 예에서, prfA 돌연변이체는 D133V prfA 돌연변이체이다.

일 실시 예에서, 살아 있는 약독화 리스테리아는 재조합 리스테리아이다. 또 다른 실시 예에서, 재조합 리스테리아는 게놈 internalin C(inlC) 유전자의 돌연변이 또는 결실을 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 재조합 리스테리아는 게놈 actA 유전자 및 게놈 internalin C 유전자의 돌연변이 또는 결실을 포함한다. 일 실시 예에서, 인접하는 세포로의 리스테리아의 전위(translocation)는 actA 유전자 및/또는 inlC 유전자의 결실에 의해 억제되는데, 이는 상기 과정에 연관되어서, 균주 골격으로서 증가된 면역원성 및 유용성을 가지고 예기치 않게 높은 수준의 약독화 결과를 야기하게 된다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일 실시 예에서, 대사 유전자, 독성 유전자 등은 리스테리아 균주의 염색체가 결여되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 대사 유전자, 독성 유전자 등은 리스테리아 균주의 염색체 및 임의의 에피솜 유전적 요소가 결여되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 대사 유전자, 독성 유전자 등은 독성 균주의 게놈이 결여되어 있다. 일 실시 예에서, 독성 유전자는 염색체에서 돌연변이된다. 또 다른 실시 예에서, 독성 유전자는 염색체로부터 결실된다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일 실시 예에서, 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 균주는 약독화된다. 또 다른 실시 예에서, 재조합 리스테리아는 actA 독성 유전자가 결여되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 재조합 리스테리아는 prfA 독성 유전자가 결여되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 재조합 리스테리아는 inlB 유전자가 결여되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 재조합 리스테리아는 상기 actA와 inlB 유전자가 모두 결여되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 균주는 내인성 actA 유전자의 불활성화 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 균주는 내인성 inlB 유전자의 불활성화 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 균주는 내인성 inlC 유전자의 불활성화 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 균주는 내인성 actA 및 inlB 유전자의 불활성화 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 균주는 내인성 actA 및 inlC 유전자의 불활성화 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 균주는 내인성 actA, inlB 및 inlC 유전자의 불활성화 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 균주는 내인성 actA, inlB 및 inlC 유전자의 불활성화 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 균주는 내인성 actA, inlB 및 inlC 유전자의 불활성화 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 재조합 리스테리아 균주는 다음과 같은 유전자들 중 임의의 하나의 유전자 또는 조합의 불활성화 돌연변이를 포함한다: actA, dal, dat, inlB, inlC, prfA, plcA, plcB.

용어 "돌연변이" 및 그 문법적 상당물은, 서열(핵산 또는 아미노산 서열)에 대한 돌연변이 또는 개질 중 어느 유형을 포함하며, 및 결실 돌연변이, 말단 절단(truncation), 불활성화, 파괴(disruption), 또는 전좌를 포함한다는 것이 숙련자에 의해 이해될 것이다. 이러한 종류의 돌연변이는 본 기술분야에 쉽게 공지되어 있다.

일 실시 예에서, 대사효소를 암호화하는 플라스미드 또는 본원에서 제공된 보완 유전자를 포함하는 영양요구성 박테리아를 위해 선별하기 위해, 형질전환된 영양 요구성 박테리아는, 아미노산 대사 유전자 또는 보완 유전자의 발현을 위해 선별하게 될 배지에서 성장된다. 또 다른 실시 예에서, D-글루탐산 합성을 위한 영양 요구성 세균은 D-글루탐산 합성을 위한 유전자를 포함하는 플라스미드로 형질전환되고, 영양 요구성 세균은 D-글루탐산의 부재에서 성장할 것이며, 플라스미드로 형질전환되지 않았거나, 또는 D-글루탐산 합성을 위한 단백질을 암호화하는 플라스미드를 발현하지 않는 영양 요구성 세균은 성장하지 않을 것이다. 또 다른 실시 예에서, 형질전환되고 플라스미드가 D-알라닌 합성을 위한 아미노산 대사효소를 암호화하는 단리된 핵산을 포함한다면 본 발명의 플라스미드를 발현할 때, D-알라닌 합성을 위한 영양 요구성 세균은 D-알라닌 부재에서 성장할 것이다. 필요한 성장 인자, 보충제, 아미노산, 비타민, 항생제 기타 등등을 포함하거나 결여된 적절한 배지를 제조하는 이러한 방법은, 본 기술분야에서 주지되어 있고, (Becton-Dickinson, 뉴저지 프랭클린 레이크스)에서 시판되고 있다. 각 방법은 본 발명의 개별 구현예를 나타낸다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명의 플라스미드를 포함하는 영양 요구성 세균이 적절한 배지에 선택되었다면, 세균은 선택적 압력의 존재에서 전파된다. 이러한 전파는 영양요구성 인자 없는 배지에서 세균을 성장시키는 것을 포함한다. 영양 요구성 세균 내의 아미노산 대사효소를 발현하는 플라스미드의 존재는 이 플라스미드가 세균과 함께 복제할 것이며, 이에 따라 지속적으로 플라스미드를 숨기는 세균을 위해 선별하는 것을 보장한다. 숙련자라면, 본 발명과 본원에서의 방법들이 장착되는 경우, 플라스미드를 포함하는 영양 요구성 세균이 성장하고 있는 배지의 부피를 조정함으로써 리스테리아 균주의 생산 규모를 용이하게 크게 할 수 있을 것이다.

숙련자라면 또 다른 실시 예에서, 다른 영양 요구성 균주들과 보완 시스템이 본 발명에 사용하기 위해 채택된다는 것을 이해할 것이다.

일 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편 및 이종 항원은, 또 다른 실시 예에서, 서로에게 직접 융합된다. 또 다른 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편 및 이종 항원을 암호화하는 유전자는 서로에게 직접 융합된다. 또 다른 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편 및 이종 항원은 링커 펩타이드를 통해 작동가능하게 부착된다. 또 다른 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편 및 이형 항원은 링커 펩타이드를 통해 부착된다. 또 다른 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편은 PSA 항원에 대한 N-말단이다. 또 다른 실시 예에서, N-말단 LLO 단백질 단편은 융합 단백질의 N-말단-최대부분이다. 또 다른 실시 예에서, 절단된 LLO는 C-말단에서 절단되어서 N-말단 LLO에 도달한다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

본원에서 사용된 바와 같이, "링커"라는 용어는 2개의 이종 폴리펩타이드, 또는 그의 단편 또는 도메인을 합친 아미노산 서열을 가리킨다. 예를 들어, tLLO 및 PSA 폴리펩타이드에 결합. 일반적으로, 본원에서 사용된 링커는 상기 폴리펩타이드들을 공유 결합시켜 융합 폴리펩타이드를 형성하는 아미노산 서열이다. 전형적으로, 링커는 디스플레이 단백질 및 개방 구조 틀에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질을 생성하기 위해 디스플레이 벡터로부터 리포터 유전자를 제거한 후 나머지 재조합 신호로부터 번역된 아미노산을 포함한다. 숙련자에게 이해되는 바와 같이, 상기 링커는 글리신 및 기타 소(small) 중성 아미노산과 같은 추가적인 아미노산을 포함할 수 있다.

본원에서 사용된 용어 "작동가능하게 연결된"은 전사 및 번역 조절 핵산이 전사가 개시되는 방식으로 임의의 코딩 서열에 상대적으로 위치한다는 것을 가리킨다. 일반적으로, 이는 프로모터 및 전사 개시 또는 개시 서열이 코딩 영역의 5'에 위치한다는 것을 가리킨다.

"개방형 해독틀” 또는 “ORF”라는 용어는 단백질을 잠재적으로 암호화할 수 있는 염기의 서열을 함유하는 생물의 게놈의 부분이다. 다른 실시 예에서, ORF의 시작 및 종료 말단은 mRNA의 말단과 동일하지 않으나, 이들은 mRNA 내에 일반적으로 함유된다. 일 실시 예에서, ORF는 유전자의 시작-코드 서열(개시 코돈) 및 종료-코돈(종결 코돈) 사이에 위치한다. 그러므로, 일 실시 예에서, 내인성 폴리펩티드를 갖는 개방 구조 틀로서 게놈 내에 작동가능하게 통합된 핵산 분자는 내인성 폴리펩티드로서 동일한 개방 구조 틀에서 게놈 내로 통합되는 핵산 분자이다.

일 실시 예에서, 본원에서 제공된 약독화 리스테리아 균주는 재조합 폴리펩타이드를 발현한다. 또 다른 실시 예에서, 약독화 리스테리아 균주는 재조합 폴리펩타이드를 발현하는 플라스미드를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본원에서 제공된 재조합 핵산은 본원에서 제공된 약독화 리스테리아 균주 내 플라스미드 내에 있다. 또 다른 실시 예에서, 플라스미드는 상기 약독화 리스테리아 균주의 염색체에 통합되지 않는 에피솜 플라스미드이다. 또 다른 실시 예에서, 플라스미드는 상기 리스테리아 균주의 염색체에 통합하는 통합 플라스미드(integrative plasmid)이다. 또 다른 실시 예에서, 플라스미드는 멀티카피 플라스미드이다.

일 실시 예에서, 본원에서 제공된 조성물 및 방법의 약독화 리스테리아 균주는, 일 실시 예에서 전립선암용 표지로서 널리 사용되는 전립선 특이 항원(PSA)을 암호화하는 제1 또는 제2 핵산 분자를 포함한다. 일 실시 예에서, PSA는 전립선 상피세포가 분비하는 칼리크레인 세린 단백분해효소(kallikrein serine protease: KLK3)로서, 이는 일 실시 예에서, 전립선암용 표지로서 널리 사용된다.

일 실시 예에서, 본원에서 제공된 재조합 리스테리아 균주는 KLK3 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 포함한다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다:

MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 25; 유전자은행 수탁번호 CAA32915). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 25의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 25의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 25의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 25의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다:

IVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCYGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 26). 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 26의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 26의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 26의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 26의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: IVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 27; 유전자은행 수탁번호 AAA59995.1). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 27의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 27의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 27의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 27의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 갖는 뉴클레오티드 분자에 의해 암호화된다:

(서열번호 28; 유전자은행 수탁번호 X14810). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 28의 상동체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 28의 변이체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 28의 이성질체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 28의 단편에 의해 암호화된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSWVILITELTMPALPMVLHGSLVPWRGGV (서열번호 29; 유전자은행 수탁번호 NP_001025218). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 29의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 29의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 29의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 29의 단편이다. 각각의 가능성은 본원에 제공된 개별적인 실시예를 나타낸다.

(서열번호 30; 유전자은행 수탁번호 NM_001030047). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 30의 잔기 42-758에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 30의 상동체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 30의 변이체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 30의 이성질체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 30의 단편에 의해 암호화된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRK (서열번호 31; 유전자은행 수탁번호 NP_001025221). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 31의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 31의 변이체이다. 또 다른 실시 예에서, KLK3 단백질의 서열은 서열번호 31을 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 31의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 31의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 하기 서열을 가지는 뉴클레오티드 분자에 의해 암호화된다: agccccaagcttaccacctgcacccggagagctgtgtcaccatgtgggtcccggttgtcttcctcacccttccgtgacgtggattggtgctgcacccctcatcctgtctcggattgtgggaggctgggagtgcgagaagcattcccaaccctggcaggtgcttgtggcctctcgtggcagggcagtctgcggcggtgttctggtgcacccccagtgggtcctcacagctgcccactgcatcaggaagtgagtaggggcctggggtctggggagcaggtgtctgtgtcccagaggaataacagctgggcattttccccaggataacctctaaggccagccttgggactgggggagagagggaaagttctggttcaggtcacatggggaggcagggttggggctggaccaccctccccatggctgcctgggtctccatctgtgttcctctatgtctctttgtgtcgctttcattatgtctcttggtaactggcttcggttgtgtctctccgtgtgactattttgttctctctctccctctcttctctgtcttcagt (서열번호 32). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 32의 잔기 42-758에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 32의 상동체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 32의 변이체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 32의 이성질체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 32의 단편에 의해 암호화된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 펩타이드의 근원인 상기 KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 33). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 33의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 33의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 33의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 33의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 하기 서열을 가지는 뉴클레오티드 분자에 의해 암호화된다:

(서열번호 34). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 34의 잔기 42-758에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 34의 상동체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 34의 변이체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 34의 이성질체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 34의 단편에 의해 암호화된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRKPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 35; 유전자은행 수탁번호 NP_001025219). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 35의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 35의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 35의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 35의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

(서열번호 36; 유전자은행 수탁번호 NM_001030048). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 36의 잔기 42-758에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 36의 상동체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 36의 변이체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 36의 이성질체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 36의 단편에 의해 암호화된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 37; 유전자은행 수탁번호 NP_001639). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 37의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 37의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 37의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 37의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

(서열번호 38; 유전자은행 수탁번호 NM_001648). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 38의 잔기 42-827에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 38의 상동체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 38의 변이체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 38의 이성질체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 38의 단편에 의해 암호화된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 39 유전자은행 수탁번호 AAX29407.1). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 39의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 39의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 39의 이성질체이다. 또 다른 실시 예에서, KLK3 단백질의 서열은 서열번호 39를 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 39의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

(서열번호 40; 유전자은행 수탁번호 BC056665). 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 40의 잔기 47-832에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 40의 상동체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 40의 변이체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 40의 이성질체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 40의 단편에 의해 암호화된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVA (서열번호 41; 유전자은행 수탁번호 AJ459782). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 41의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 41의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 41의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 41의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSVSHPYSQDLEGKGEWGP (서열번호 42, 유전자은행 수탁번호 AJ512346). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 42의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 42의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 42의 이성질체이다. 또 다른 실시 예에서, KLK3 단백질의 서열은 서열번호 42을 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 42의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: MWVPVVFLTLSVTWIGERGHGWGDAGEGASPDCQAEALSPPTQHPSPDRELGSFLSLPAPLQAHTPSPSILQQSSLPHQVPAPSHLPQNFLPIAQPAPCSQLLY (서열번호 43 유전자은행 수탁번호 AJ459784). 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 43의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 43의 변이체이다. 또 다른 실시 예에서, KLK3 단백질의 서열은 서열번호 43을 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 43의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 43의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다: MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 44 유전자은행 수탁번호 AJ459783). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 44의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 44의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 44의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 44의 단편이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가지는 뉴클레오티드 분자에 의해 암호화된다:

(서열번호 45; 유전자은행 수탁번호 X07730). 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 45의 잔기 67-1088에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 45의 상동체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 45의 변이체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 45의 이성질체에 의해 암호화된다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 45의 단편에 의해 암호화된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다:

MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRK (서열번호 63; 유전자은행 수탁번호 NM_001030050). 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 서열번호 63의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 63의 변이체이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질의 서열은 서열번호 63을 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 63의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 63의 단편이다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 펩타이드의 근원인 상기 KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다:

MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 64; 유전자은행 수탁번호 NM_001064049). 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 64의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 64의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 64의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 64의 단편이다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다:

MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRKPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 65; 유전자은행 수탁번호 NM_001030048). 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 65의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 65의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 65의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 65의 단편이다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

또 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다:

MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVA (서열번호 66; 유전자은행 수탁번호 AJ459782). 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 66의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 66의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 66의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 66의 단편이다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다:

MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSVSHPYSQDLEGKGEWGP (서열번호 50 유전자은행 수탁번호 AJ512346). 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 50의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 50의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 50의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 50을 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 50의 단편이다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 하기 서열을 가진다:

MWVPVVFLTLSVTWIGERGHGWGDAGEGASPDCQAEALSPPTQHPSPDRELGSFLSLPAPLQAHTPSPSILQQSSLPHQVPAPSHLPQNFLPIAQPAPCSQLLY (서열번호 51 유전자은행 수탁번호 AJ459784). 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 51의 상동체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 51의 변이체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 51을 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 51의 이성질체이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 서열번호 51의 단편이다.

다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 다음의 유전자은행 수탁번호 중 하나에 기재된 서열에 의해 암호화된다: BC005307, AJ310938, AJ310937, AF335478, AF335477, M27274, 및 M26663. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 상기 유전자은행 수탁번호 중 하나에 기재된 서열에 의해 암호화된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 다음의 유전자은행 수탁번호 중 하나에 기재된 서열에 의해 암호화된다: NM_001030050, NM_001030049, NM_001030048, NM_001030047, NM_001648, AJ459782, AJ512346, 또는 AJ459784. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 본원에 기재된 서열들 중 하나의 변이에 의해 암호화되고, 이 서열은 MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSR이 결여되어 있다(서열번호 52).

다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 다음의 유전자은행 수탁번호 중 하나에 기재된 서열을 포함하는 서열을 갖는다: X13943, X13942, X13940, X13941, 및 X13944. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, 상기 KLK3 단백질은 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 KLK3 단백질이다. 각각의 KLK3은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, 상기 KLK3 펩타이드는 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 KLK3 펩타이드이다. 다른 실시 예에서, 상기 KLK3 펩타이드는 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 KLK3 펩타이드의 단편이다. KLK3 펩타이드의 각 유형은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

"KLK3 펩타이드"는 다른 실시 예에서 전장 KLK3 단백질을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상기 용어는 KLK3 단백질의 단편을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상기 용어는 KLK3 신호 펩타이드가 결여된 KLK3 단백질의 단편을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상기 용어는 KLK3 신호 펩타이드를 제외한 전체 KLK3 서열을 포함하는 KLK3 단백질을 가리킨다. "KLK3 신호 서열"은, 다른 실시 예에서, KLK3 단백질 상의 천연에서 발견되는 임의의 신호 서열을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 본원에서 제공된 방법 및 조성물의 KLK3 단백질은 임의의 신호 서열을 포함하지 않는다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, 본원에서 제공된 방법 및 조성물에 사용하기 위한 KLK3 펩타이드의 근원인 칼리크레인-관련 펩티다제 3(KLK3 단백질)은 PSA 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 P-30 항원 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 감마-세미노프로틴 단백질(gamma-seminoprotein protein)이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 칼리크레인 3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 세메노겔라제(semenogelase) 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 세미닌(seminin) 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 유형의 KLK3 단백질이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 스플라이스 변이체 1 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 스플라이스 변이체 2 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 스플라이스 변이체 3 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 전사 변이체 1 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 전사 변이체 2 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 전사 변이체 3 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 전사 변이체 4 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 전사 변이체 5 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 전사 변이체 6 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 스플라이스 변이체 RP5 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 스플라이스 변이체 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 전사 변이체 KLK3 단백질이다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 성숙한 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 프로-KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, 선도 서열(leader sequence)은 본원에서 제공된 방법 및 조성물의 성숙한 KLK3 단백질로부터 제거되었다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, 본원에서 제공된 방법 및 조성물의 KLK3 펩타이드의 근원인 KLK3 단백질은 인간 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 영장류 KLK3 단백질이다. 다른 실시 예에서, KLK3 단백질은 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 종의 KLK3 단백질이다. 또 다른 실시 예에서, 상기한 KLK3 단백질들 중 하나는 본 기술분야에서 "KLK3 단백질"로 지칭된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

“동형체(isoform)”라는 용어는 동일한 단백질의 다른 동형체 또는 변형(version)과 비교해, 약간의 차이점만 가진 분자, 예를 들어, 단백질의 변형(version)을 가리킨다. 일 실시 예에서, 동형체는 다르지만 관련된 유전자로부터 생산될 수 있으나, 다른 실시 예에서는, 선택적 접합(splicing)에 의해 동일한 유전자에서 발생될 수 있다. 다른 실시 예에서, 동형체는 단일염기 다형성에 의해 유발될 수 있다.

“단편”이라는 용어는 전장 단백질 또는 폴리펩타이드보다 더 짧거나 더 적은 아미노산을 포함하는 단백질 또는 폴리펩타이드를 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 전장 핵산보다 더 짧거나 더 적은 뉴클레오티드를 포함하는 핵산을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 N-말단 단편이다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 C-말단 단편이다. 일 실시 예에서, 상기 단편은 단백질, 펩타이드 또는 핵산의 순차 내 절편이다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 기능성 단편이다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 면역원성 단편이다. 일 실시 예에서, 상기 단편은 10-20개 핵산 또는 아미노산을 가지며, 다른 실시 예에서 상기 단편은 5개 넘는 핵산 또는 아미노산을 갖는 반면, 다른 실시 예에서는 상기 단편은 100-200개의 핵산 또는 아미노산을 갖는 반면, 일 실시 예에서, 상기 단편은 100-500개의 핵산 또는 아미노산을 가지며, 다른 실시 예에서 상기 단편은 50-200개의 핵산 또는 아미노산을 갖는 반면, 또 다른 실시 예에서 상기 단편은 10-250개의 핵산 또는 아미노산을 갖는다.

“면역원성” 또는 “면역원성의”란 용어는 본원에서 단백질, 펩타이드, 핵산, 항원 또는 유기체를 동물에 투여시 상기 동물에서 면역 반응을 유도하는 상기 단백질, 펩타이드, 핵산, 항원 또는 유기체의 선천적 능력을 가리킨다. 따라서, 일 실시 예에서 “면역원성의 향상”은, 단백질, 펩타이드, 핵산, 항원 또는 유기체를 동물에 투여시 상기 동물에서 면역 반응을 유도하는 상기 단백질, 펩타이드, 핵산, 항원 또는 유기체의 능력의 향상를 가리킨다. 상기 면역 반응을 유도하는 단백질, 펩타이드, 핵산, 항원 또는 유기체의 향상된 능력은, 일 실시 예에서, 단백질, 펩타이드, 핵산, 항원 또는 유기체에 대한 항체 수의 증가, 항원 또는 유기체에 대한 항체의 다양성 증가, 단백질, 펩타이드, 핵산, 항원 또는 유기체에 특이적인 T-세포 수의 증가, 단백질, 펩타이드, 핵산, 항원 또는 유기체에 대한 세포독성 또는 헬퍼 T-세포 반응의 증가 등에 의해 측정될 수 있다.

일 실시 예에서, PSA 항원은 절단된 PSA 개방형 해독틀 (유전자은행 수탁번호 NM_001648)을 포함하며, 그 분비 신호 서열은 처음 24개의 AA가 결여되어있다. 절단된 PSA는 하기 프라이머들을 이용하여 증폭될 수 있고: dv60-PSA(XhoI-no ATG)F: gtgCTCGAGattgtgggaggctgggagtg (서열번호 46) 및 Adv61-PSA(SpeI-Stop)R: gatACTAGTttaggggttggccacgatgg (서열번호 47) 그리고 본 발명의 tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드를 생성하는 LLO의 처음 441개의 아미노산들을 이용하여 틀에 아복제(sub-cloned)될 수 있다. LLO-PSA의 AA 서열은 다음과 같다:

MKKIMLVFITLILVSLPIAQQTEAKDASAFNKENSISSMAPPASPPASPKTPIEKKHADEIDKYIQGLDYNKNNVLVYHGDAVTNVPPRKGYKDGNEYIVVEKKKKSINQNNADIQVVNAISSLTYPGALVKANSELVENQPDVLPVKRDSLTLSIDLPGMTNQDNKIVVKNATKSNVNNAVNTLVERWNEKYAQAYPNVSAKIDYDDEMAYSESQLIAKFGTAFKAVNNSLNVNFGAISEGKMQEEVISFKQIYYNVNVNEPTRPSRFFGKAVTKEQLQALGVNAENPPAYISSVAYGRQVYLKLSTNSHSTKVKAAFDAAVSGKSVSGDVELTNIIKNSSFKAVIYGGSAKDEVQIIDGNLGDLRDILKKGATFNRETPGVPIAYTTNFLKDNELAVIKNNSEYIETTSKAYTDGKINIDHSGGYVAQFNISWDEVNYDLEIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCYGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (서열번호 48; PSA 서열은 밑줄쳐져 있다). 일부 실시 예에서, 생약독화 리스테리아 모노사이토젠은 서열번호 48을 포함하는 tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 실시 예에서, 생약독화 리스테리아 모노사이토젠은 서열번호 48로 필수적으로 구성되는 tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 실시 예에서, 생약독화 리스테리아 모노사이토젠은 서열번호 48로 구성되는 tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드를 포함한다.

N 221 Y 위치에서 이 PSA와 NM_001648의 서열 사이에는 한 개의 AA 차이가 있다.

일 실시 예에서, 본 발명의 방법 및 조성물의 재조합 융합 폴리펩타이드는 LLO-KLK3 융합 폴리펩타이드이다. 다른 실시 예에서, 상기 융합 폴리펩타이드는 서열번호 48에 기재된 서열을 가진다. 다른 실시 예에서, 상기 융합 폴리펩타이드는 서열번호 48에 기재된 서열과 상동이다. 다른 실시 예에서, 상기 융합 폴리펩타이드는 서열번호 48에 기재된 서열의 변이체이다. 다른 실시 예에서, “상동성”이란 72% 초과의 서열번호 48 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 75% 초과이다. 다른 실시 예에서, “상동성”은 78% 초과의 서열에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 80% 초과이다. 다른 실시 예에서, 상동성은 82% 초과이다. 다른 실시 예에서, “상동성”은 83% 초과 서열에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 85% 초과이다. 다른 실시 예에서, 상동성은 87% 초과이다. 다른 실시 예에서, “상동성”은 88% 초과 서열에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 90% 초과이다. 다른 실시 예에서, 상동성은 92% 초과이다. 다른 실시 예에서, “상동성”은 93% 초과 서열에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 95% 초과이다. 다른 실시 예에서, “상동성”은 96% 초과 서열에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 97% 초과이다. 다른 실시 예에서, 상동성은 98% 초과이다. 다른 실시 예에서, 상동성은 99% 초과이다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일 실시 예에서, 절단된 LLO는 PEST 아미노산 (AA) 서열을 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 PEST 아미노산 서열은 KENSISSMAPPASPPASPKTPIEKKHADEIDK(서열번호 49)이다. 다른 실시 예에서, 리스테리아 유래의 다른 LM PEST AA 서열들에 대한 항원의 융합 또한 항원의 면역원성을 향상시킬 것이다.

본 발명의 방법 및 조성물의 N-말단 LLO 단백질 단편은, 또 다른 실시 예에서, 서열번호 54를 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 LLO 신호 펩타이드를 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 서열번호 55를 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 대략 서열번호 55로 구성된다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 필수적으로 서열번호 54로 구성된다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 서열번호 55에 해당한다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 서열번호 55와 상동이다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 서열번호 55의 단편과 상동이다. 일부 실시예들에서, PSA 항원에 융합된 ΔLLO는 416 AA 길이였는데(신호 서열 제외), 시스테인 484을 함유하는 활성화 도메인에 포함되는 아미노기 말단으로부터 88 잔기가 절단되었다. 활성 도메인이 없는, 특히, 시스테인 484이 없는, 어떤 ΔLLO라도 본 발명의 방법 및 조성물에 적합하다는 것이 본 기술분야의 숙련자에게 명백할 것이다. 다른 실시 예에서, PEST AA 서열, 서열 번호 49를 포함한, 임의의 ΔLLO에 대한 이종 항원의 융합은, 항원의 세포 매개 및 항-종양 면역을 향상시킨다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

본 발명의 균주를 구축하기 위해 사용되는 LLO 단백질은, 또 다른 실시 예에서, 하기 서열을 가진다:

MKKIMLVFITLILVSLPIAQQTEAKDASAFNKENSISSMAPPASPPASPKTPIEKKHADEIDKYIQGLDYNKNNVLVYHGDAVTNVPPRKGYKDGNEYIVVEKKKKSINQNNADIQVVNAISSLTYPGALVKANSELVENQPDVLPVKRDSLTLSIDLPGMTNQDNKIVVKNATKSNVNNAVNTLVERWNEKYAQAYPNVSAKIDYDDEMAYSESQLIAKFGTAFKAVNNSLNVNFGAISEGKMQEEVISFKQIYYNVNVNEPTRPSRFFGKAVTKEQLQALGVNAENPPAYISSVAYGRQVYLKLSTNSHSTKVKAAFDAAVSGKSVSGDVELTNIIKNSSFKAVIYGGSAKDEVQIIDGNLGDLRDILKKGATFNRETPGVPIAYTTNFLKDNELAVIKNNSEYIETTSKAYTDGKINIDHSGGYVAQFNISWDEVNYDPEGNEIVQHKNWSENNKSKLAHFTSSIYLPGNARNINVYAKECTGLAWEWWRTVIDDRNLPLVKNRNISIWGTTLYPKYSNKVDNPIE (GenBank 수탁번호 P13128; 서열번호: 53; 핵산 서열은 유전자은행 수탁 번호 X15127에 제시된다). 이 서열에 상응하는 프로단백질의 처음 25 AA는 신호 서열이고 세균에 의해 분비되는 경우 LLO로부터 절단(cleave)된다. 따라서, 본 실시 예에서, 전장 활성 LLO 단백질은 504 잔기 길이이다. 다른 실시 예에서, 상기 LLO 단편은 본 발명의 균주에 포함되는 LLO 단편의 근원으로서 사용된다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

본 발명의 조성물 및 방법에 사용되는 LLO 단백질의 N-말단 단편은 하기 서열을 가진다:

MKKIMLVFITLILVSLPIAQQTEAKDASAFNKENSISSVAPPASPPASPKTPIEKKHADEIDKYIQGLDYNKNNVLVYHGDAVTNVPPRKGYKDGNEYIVVEKKKKSINQNNADIQVVNAISSLTYPGALVKANSELVENQPDVLPVKRDSLTLSIDLPGMTNQDNKIVVKNATKSNVNNAVNTLVERWNEKYAQAYSNVSAKIDYDDEMAYSESQLIAKFGTAFKAVNNSLNVNFGAISEGKMQEEVISFKQIYYNVNVNEPTRPSRFFGKAVTKEQLQALGVNAENPPAYISSVAYGRQVYLKLSTNSHSTKVKAAFDAAVSGKSVSGDVELTNIIKNSSFKAVIYGGSAKDEVQIIDGNLGDLRDILKKGATFNRETPGVPIAYTTNFLKDNELAVIKNNSEYIETTSKAYTDGKINIDHSGGYVAQFNISWDEVNYD (서열번호 54).

다른 실시 예에서, LLO 단편은 본원에서 사용된 LLO 단백질의 약 AA 20-442에 상응한다.

다른 실시 예에서, LLO 단편은 하기 서열을 가진다:

MKKIMLVFITLILVSLPIAQQTEAKDASAFNKENSISSVAPPASPPASPKTPIEKKHADEIDKYIQGLDYNKNNVLVYHGDAVTNVPPRKGYKDGNEYIVVEKKKKSINQNNADIQVVNAISSLTYPGALVKANSELVENQPDVLPVKRDSLTLSIDLPGMTNQDNKIVVKNATKSNVNNAVNTLVERWNEKYAQAYSNVSAKIDYDDEMAYSESQLIAKFGTAFKAVNNSLNVNFGAISEGKMQEEVISFKQIYYNVNVNEPTRPSRFFGKAVTKEQLQALGVNAENPPAYISSVAYGRQVYLKLSTNSHSTKVKAAFDAAVSGKSVSGDVELTNIIKNSSFKAVIYGGSAKDEVQIIDGNLGDLRDILKKGATFNRETPGVPIAYTTNFLKDNELAVIKNNSEYIETTSKAYTD (서열번호 55).

다른 실시 예에서, “말단이 절단된 LLO” 또는 “tLLO”는 PEST 유사 도메인을 포함하는 LLO의 단편을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상기 용어는 PEST 아미노산 서열을 포함하는 LLO 단편을 가리킨다.

다른 실시 예에서, 상기 용어는 아미노 말단에서 활성화 도메인을 함유하지 않고 시스테인 484를 포함하지 않는 LLO 단편을 가리킨다. 또 다른 실시 예에서, 상기 용어는 용혈성이 아닌 LLO 단편을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상기 LLO 단편은 상기 활성화 도메인의 결실 또는 돌연변이에 의해 비용혈성이 부여된다. 다른 실시 예에서, 상기 LLO 단편은 시스테인 484의 결실 또는 돌연변이에 의해 비용혈성이 부여된다. 다른 실시 예에서, 상기 LLO 단편은 다른 위치에서 결실 또는 돌연변이에 의해 비-용혈성이 부여된다. 다른 실시 예에서, 상기 LLO 단편은 전체가 참조로 본원에 통합된 미국 특허 제8,771,702호에 기재된 콜레스테롤 결합 도메인(CBD)의 결실 또는 돌연변이에 의해 비용혈성이 부여된다. 다른 실시 예에서, LLO의 콜레스테롤-결합 도메인 및 그의 단편에 돌연변이가 있고, 상기 돌연변이는 CBD를 포함하는 1-50 아미노 산 펩타이드의 치환을 포함한다. 일 실시 예에서, LLO의 CBD 또는 그의 단편에 돌연변이가 있고, 상기 돌연변이는 서열번호 53의 잔기 C484, W491, W492를 단독 또는 조합하여 포함하고, 상기 재조합 단백질은 야생형 LLO와 비교하여 용혈 활성의 100배 초과 감소를 나타낸다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, LLO 단편은 LLO 단백질의 약 처음 441 AA로 구성된다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 LLO의 약 처음 420 AA로 구성된다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 LLO 단백질의 비용혈 형태이다.

다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-25로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-50으로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-75로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-100으로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-125로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-150으로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1175로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-200으로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-225로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-250으로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-275로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-300으로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-325로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-350으로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-375로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-400으로 이루어진다. 다른 실시 예에서, LLO 단편은 약 잔기 1-425로 이루어진다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, LLO 단편은 상기 AA 범위 중 하나에 해당하는 상동성 LLO 단백질의 잔기들을 포함하고 있다. 잔기 수는 필요하지 않으며, 다른 실시 예에서, 위에 열거된 잔기 수와 정확히 일치한다; 예를 들면 상동성 LLO 단백질이 본원에서 이용되는 LLO 단백질에 대해 상대적인, 삽입 또는 결실을 가지는 경우, 그 잔기 수는 적절히 조절될 수 있다. 다른 실시 예에서, 상기 LLO 단편은 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 LLO 단편이다.

다른 실시 예에서, 상동성 LLO는 70% 초과의 LLO 서열에 대한(예, 서열번호 53-55 중 하나에 대한) 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성 LLO는 72% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 75% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 78% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 80% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 82% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 83% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 85% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 87% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 88% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 90% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 또 다른 실시 예에서, 상동성은 92% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 93% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 95% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 96% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 97% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 98% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 99% 초과의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 다른 실시 예에서, 상동성은 100%의 서열번호 53-55 중 하나에 대한 동일성을 가리킨다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

미국특허공개 제2007-0253976-A1호 및 제2011-0129499-A1호의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열들은 전체가 본원에 포함되어 있다.

“상동체(homologue)”라는 용어는 특정한 핵산 또는 아미노산 서열과 일정 백분율의 서열 동일성(identity)을 공유하는 핵산 또는 아미노산 서열을 가리킨다. 일 실시 예에서, 본원에서 제공된 조성물 및 방법에 유용한 서열은 특정 LLO 서열 또는 그의 N-말단 단편의 상동체일 수 있다. 다른 실시 예에서, 본원에서 제공된 조성물 및 방법에 유용한 서열은 항원성 폴리펩타이드의 상동체일 수 있고, 일 실시 예에서, 이는 KLK3 또는 이의 기능성 단편이다. 일 실시 예에서, 폴리펩타이드의 상동체 및, 일 실시 예에서, 본 발명의 이러한 상동체를 암호화하는 상기 핵산은 상기 모(parent) 폴리펩타이드의 기능적 특성을 유지한다. 예를 들어, 일 실시 예에서, 본 발명의 항원성 폴리펩타이드의 상동체는 상기 모(parent) 폴리펩타이드의 항원 특성을 유지한다. 다른 실시 예에서, 본원에서 제공된 상기 조성물 및 방법에서 사용된 서열은 본원에 기재된 어떤 서열의 상동체일 수 있다. 일 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 70% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 72% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 75% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 78% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 80% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 82% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 83% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 85% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 87% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 88% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 90% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 92% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 93% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 95% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 96% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 97% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 98% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 적어도 99% 동일성을 공유한다. 다른 실시 예에서, 상동체는 특정 서열과 100% 동일성을 공유한다. 각각의 가능성은 본원에 제공된 개별적인 실시예를 나타낸다.

상동성은, 일 실시 예에서, 본 분야에서 널리 기재된 방법에 의해 서열 정렬을 위한 컴퓨터 알고리즘으로 결정된다. 예를 들어, 핵산 서열 상동성의 컴퓨터 알고리즘 분석은 예를 들어, BLAST, DOMAIN, BEAUTY (BLAST 증가 정렬 유틸리티), GENPEPT 및 TREMBL 패키지와 같은 입수가능한 많은 소프트웨어 패키지의 사용을 포함할 수 있다.

다른 실시 예에서, 상동성은 본 분야에서 널리 기재된 방법인 후보 서열 혼성화를 통해 결정된다(예를 들어, “Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., and Higgins S. J., Eds.(1985); Sambrook 등, 2001, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, N.Y.; and Ausubel 등, 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y). 예를 들어, 잡종형성 방법들은, 적절한 조건 내지 엄격한 조건 하에서 천연 카스파제 펩타이드를 암호화하는 DNA의 보체에 대하여 실시될 수 있다. 혼성화 조건은, 예를 들어, 하기를 포함하는 용액 내에서 42℃에서 밤새 인큐베이션하는 것이다: 10% 내지 20% 포름아미드, 5 X SSC (150 mM NaCl, 15 mM 시트르산삼나트륨), 50 mM 인산나트륨(pH 7.6), 5 X 덴하르트 용액, 10% 덱스트란황산, 및 20 μg/ml 변성된 시어드 연어 정자 DNA.

일 실시 예에서, 본원에 제공된 임의의 서열의 상동체 및/또는 본원에 기술된 서열의 상동체는 본 발명의 일부인 것으로 간주됨을 이해해야 한다.

다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 바와 같은 방법 및 조성물의 재조합 리스테리아 균주는 내인성 ActA 서열을 갖는 개방형 해독틀로서 리스테리아 게놈 내에 작동가능하게 통합된 PSA 융합 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다. 다른 실시 예에서, 본원에서 제공되는 바와 같은 방법 및 조성물의 재조합 리스테리아 균주는 ActA 또는 절단된 ActA에 융합된 항원을 포함하는 PSA 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 에피솜 발현 벡터를 포함한다. 일 실시 예에서, 상기 항원의 발현 및 분비는 actA 프로모터 및 ActA 신호 서열의 조절 하에 이루어지며 ActA (절단된(truncated) ActA 또는 tActA)의 1-233 아미노산에 융합되어 표현된다. 다른 실시 예에서, 절단된 ActA는, 이의 전체가 본원에 참조로서 통합된 미국 특허 일련 번호 제7,655,238호에 기재된 바와 같이 야생형 ActA 단백질의 처음 390개 아미노산으로 구성된다. 다른 실시 예에서, 말단이 절단된 ActA는 ActA-N100 또는 이의 개질된 버전(ActA-N100*으로서 언급됨)이며, 여기에서 미국 특허 공개 일련 번호 제2014/0186387호에 기재된 바와 같이 PEST 모티프가 결실되고 비보존성 QDNKR 치환을 함유한다.

“기능적”이란 용어는 본 발명의 의미 내에서 생물학적 활성 또는 기능을 나타내는 단백질, 펩타이드, 핵산, 단편 또는 이들의 변이체의 선천적 능력을 가리킨다. 일 실시 예에서, 이러한 생물학적 기능은 상호작용 파트너에 대한 결합성, 가령, 막-결합 수용체이고, 다른 실시 예에서는, 삼량체화 특성이다. 본 발명의 기능적 단편 및 기능적 변이체의 경우, 이들 생물학적 기능은, 가령, 그들의 특이성 또는 선택성과 관련하여 사실상 변화될 수 있으나, 기본적인 생물학적 기능은 유지되고 변화한다.

다른 실시 예에서, "기능성 단편"은 면역원성 단편이며 대상물에게 단독으로 또는 본원에서 제공된 균주 조성물로 투여될 때 면역 반응을 유발한다. 다른 실시 예에서, 기능성 단편은 숙련자에 의해 이해될 것이고 본원에서 더 제공되는 바와 같이, 생물학적 활성을 가지고 있다.

“핵산” 또는 “뉴클레오티드”란 용어는 적어도 두 염기-당-인산염 조합의 스트링을 가리킨다. 상기 용어는, 일 실시 예에서, DNA 및 RNA를 포함한다. “뉴클레오티드”는, 일 실시 예에서, 핵산 고분자의 단량체 유닛을 가리킨다. RNA는, 일 실시 예에서, tRNA (전이 RNA), snRNA (작은 핵 RNA), rRNA (리보솜 RNA), mRNA (메신저 RNA), 항-센스 RNA, 작은 억제 RNA (siRNA), 마이크로 RNA (miRNA) 및 리보솜의 형태일 수 있다. siRNA 및 miRNA의 사용이 기재되어 있다(Caudy AA 등, Genes & Devel 16:2491-96 및 여기에 인용된 참조문헌). DNA는 플라스미드 DNA, 바이러스 DNA, 선형 DNA, 또는 염색체 DNA 또는 이러한 그룹의 유도체의 형태일 수 있다. 게다가, 이들 형태의 DNA 및 RNA는 단일, 이중, 삼중 또는 사중 가닥일 수 있다. 상기 용어는 또한, 다른 실시 예에서, 다른 유형의 골격을 포함하나 상이한 염기를 함유할 수 있는 인공 핵산을 포함한다. 일 실시 예에서, 인공 핵산은 PNA(펩타이드 핵산)이다. PNA는 펩타이드 골격 및 뉴클레오티드 염기를 함유하며, 일 실시 예에서, DNA 및 RNA 분자 둘 다에 결합할 수 있다. 다른 실시 예에서, 뉴클레오티드는 개질된 옥세탄이다. 다른 실시 예에서, 뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포디에스테르 결합이 포스포로티오에이트 결합으로 치환되어 개질된다. 다른 실시 예에서, 인공 핵산은 본 분야에서 공지된 자생 핵산의 인산염 골격의 임의의 다른 변이체를 함유한다. 포스포로티오에이트 핵산 및 PNA의 사용이 본 분야의 숙련자에게 알려져 있으며, 예를 들어, Neilsen PE의 문헌(Curr Opin Struct Biol 9: 353-57); 및 Raz NK 등의 문헌(Biochem Biophys Res Commun. 297: 1075-84)에 기재되어 있다. 핵산의 생산 및 사용은 본 분야의 숙련자에게 알려져 있으며, 예를 들어, Molecular Cloning, (2001), Sambrook and Russell, eds. 및 Methods in Enzymology: Methods for molecular cloning in in eukaryotic cells (2003) Purchio 및 G. C. Fareed에 기재되어 있다. 각 핵산 유도체는 본 발명의 개별 실시예를 나타낸다.

"폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "재조합 펩타이드"는, 다른 실시 예에서는, 임의의 길이의 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 지칭한다. 다른 실시 예에서, 본원에 제공된 펩타이드 또는 재조합 펩타이드는 HMW-MAA 단편에 대해 상기 열거된 길이 중 하나를 갖는다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다. 일 실시 예에서, 용어 "펩타이드"는 본연의 펩타이드 (분해 산물, 합성적으로 합성된 펩타이드 또는 재조합 펩타이드) 및/또는 펩타이드모방제 (통상적으로 합성적으로 합성된 펩타이드), 예컨대 펩타이드 유사체이고, 예를 들어, 펩타이드를 체내에 있는 동안 더 안정적으로 만들거나 세포 내로 더 침투할 수 있게 하는 개질을 가질 수 있는, 펩토이드 및 세미펩토이드를 지칭한다. 이러한 개질은 CH2-NH, CH2-S, CH2-S=O, O=C-NH, CH2-O, CH2-CH2, S=C-NH, CH=CH 또는 CF=CH을 포함하지만 이에 제한되지 않는 N 말단 개질, C 말단 개질, 펩타이드 결합 개질, 주쇄 개질 및 잔기 개질을 포함한다. 펩타이드모방제 화합물을 제조하는 방법은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 여기에 완전히 설명된 것처럼 참조로 통합된, Quantitative Drug Design, C.A. Ramsden Gd., Chapter 17.2, F. Choplin Pergamon Press (1992)에 상세히 기재되어 있다. 이와 관련한 더 상세한 내용은 이하에서 제공된다.

"항원성 폴리펩타이드"란 용어는, 숙주에 존재시, 또는 다른 실시 예에서는, 숙주에 의해 검출될 때, 면역 반응을 초래하는, 숙주에게 이물이고 면역 반응의 표본제작으로 이어지는, 상기 기술된 바와 같은 폴리펩타이드, 펩타이드 또는 재조합 펩타이드를 가리키도록 본원에서 사용된다.

일 실시 예에서, "항원성 폴리펩타이드"는, 숙주에 존재시, 또는 다른 실시 예에서는, 숙주에 의해 검출될 때, 면역 반응을 초래하는, 대상물 세포에 존재하는 MHC 클래스 I 및/또는 클래스 II 분자 상에서 처리되고 제시되는, 상기 기술된 바와 같은 폴리펩타이드, 펩타이드 재조합 폴리펩타이드 또는 재조합 펩타이드를 가리키도록 본원에서 사용된다. 일 실시 예에서, 항원은 숙주에게 이물일 수 있다. 다른 실시 예에서, 항원은 숙주에 존재하지만 면역학적 내성 때문에 숙주의 면역 반응을 유발하지 않는다.

일 실시 예에서, 항원은 종양-연관 항원이다. 일 실시 예에서, 종양-연관 항원은 PSA이다. 일 실시 예에서, 본원에서 제공된 조성물 및 방법의 재조합 약독화 리스테리아 균주는 종양 세포에 의해 발현되는 PSA 폴리펩타이드를 발현한다. 일 실시 예에서, 본원에서 제공된 조성물 및 방법의 재조합 리스테리아 균주는, 일 실시 예에서 전립선 종양에 의해 고도로 발현되는 전립선암에 대한 표지인 PSA를 암호화하는 제1 또는 제2 핵산 분자를 포함한다. 일 실시 예에서, PSA는 전립선 상피세포가 분비하는 칼리크레인 세린 단백분해효소(kallikrein serine protease: KLK3)로서, 이는 일 실시 예에서, 전립선암용 표지로서 널리 사용된다.

펩타이드 내의 펩타이드 결합 (-CO-NH-)은, 예를 들어 N-메틸화 결합 (-N(CH3)-CO-), 에스테르 결합 (-C(R)H-C-O-O-C(R)-N-), 케토메틸렌 결합 (-CO-CH2-), *-아자 결합 (-NH-N(R)-CO-)(여기서 R은 임의의 알킬, 예를 들어 메틸), 카바 결합 (-CH2-NH-), 히드록시에틸렌 결합 (-CH(OH)-CH2-), 티오아미드 결합 (-CS-NH-), 올레핀 이중 결합 (-CH=CH-), 레트로 아미드 결합 (-NH-CO-), 펩타이드 유도체 (-N(R)-CH2-CO-)(여기서 R은 탄소 원자 상에 자연적으로 존재하는 "정상" 측쇄)로 치환될 수도 있다.

이러한 개질은 펩타이드 사슬을 따르는 임의의 결합에서도 발생할 수 있으며 동시에 여러 (2-3) 경우에서도 발생할 수 있다. 천연 방향족 아미노산, Trp, Tyr 및 Phe는 TIC, 나프틸렌라인 (Nol), Phe의 고리 메틸화 유도체, Phe의 할로겐화 유도체 또는 o-메틸-Tyr과 같은 합성 비-천연 산에 대해 치환될 수도 있다.

상기 이외에, 본원에서 제공되는 펩타이드는 또한 하나 이상의 개질된 아미노산 또는 하나 이상의 비-아미노산 단량체 (예, 지방산, 복합 탄수화물 등)를 포함할 수도 있다.

"올리고뉴클레오타이드"는 용어는 "핵산"이란 용어와 상호교환 가능하며, 원핵 서열, 진핵 mRNA, 진핵 mRNA 유래 cDNA, 진핵 생물 (예, 포유류) DNA의 게놈 DNA 서열, 심지어 합성 DNA 서열을 포함할 수 있는 분자를 가리킬 수도 있지만, 이에 한정되지 않는다. 이 용어는 또한 DNA 및 RNA의 임의의 공지된 염기 유사체를 포함하는 서열을 가리킨다.

숙련자는 “PEST 아미노산 서열”, “PEST 서열 포함 폴리펩타이드”, “PEST 서열 포함 단백질”, 또는 “PEST 서열 함유 펩타이드”란 용어가, 일 실시 예에서 N-말단 단백질인 말단 절단 LLO 단백질, 그리고 일 실시 예에서 N-말단 LLO인 말단 절단된 ActA 단백질, 또는 그의 단편들을 포괄할 수 있음을 이해할 것이다. 숙련자는 또한 "PEST-서열 포함 펩타이드"란 용어가 LLO 단백질의 PEST 서열 펩타이드 또는 펩타이드 단편 또는 그의 ActA 단백질을 포괄할 수 있음을 이해할 것이다. PEST 서열 펩타이드는 본 기술분야에 공지되어 있고, 전체가 참조로 본원에 통합된 미국 특허 일련 번호 제 7,635,479 및 미국 특허 공보 일련 번호 제2014/0186387에 기술되어 있다.

다른 실시 예에서, 원핵생물의 PEST 아미노산 서열은 Rechsteiner 및 Roberts에 의해 L. 모노사이토젠에 대해 기술된 것(TBS 21:267-271,1996)과 같은 방법에 따라 일상적으로 식별될 수 있다. 대안적으로, 다른 원핵생물의 PEST 아미노산 서열은 이 방법에 기초하여 식별될 수 있다. 다른 원핵생물은 여기서 PEST 아미노산 서열이 다른 리스테리아 종을 포함할 것으로 예상될 것이지만, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, L. 모노사이토젠 단백질 ActA는 네 가지 이러한 서열을 함유한다. 이들은 KTEEQPSEVNTGPR (서열번호 56), KASVTDTSEGDLDSSMQSADESTPQPLK (서열번호 57), KNEEVNASDFPPPPTDEELR (서열번호 58), 또는 RGGIPTSEEFSSLNSGDFTDDENSETTEEEIDR (서열번호 59)이다. 또한 스트렙토코커스 종 유래 스트렙토리신 O는 PEST 서열을 함유한다. 예를 들어, 스트렙토코커스 피오게네스 스트렙토리신 O는 아미노산 35-51에서 PEST 서열 KQNTASTETTTTNEQPK (서열번호 60)를 포함하며 스트렙토코커스 이퀴시밀리스 스트렙토리신 O는 아미노산 38-54에서 PEST 유사 서열 KQNTANTETTTTNEQPK (서열 번호 61)을 포함한다. 또한, PEST 서열은 항원 단백질 내에 내장될 수 있다고 여겨진다. 따라서, 본 발명의 목적을 위해, PEST 서열 융합에 관한 경우 "융합"이란, 항원 단백질이 항원, 예를 들어 PSA 및 항원의 한쪽 말단에 연결되거나 또는 항원 내에 내장된 PEST 아미노산 서열을 둘 다 함유한다는 것을 가리킨다.

다른 실시 예에서, 구성체 또는 핵산 분자는 PEST 서열 포함 폴리펩타이드 또는 PEST-열 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 가진 에피솜 또는 플라스미드 벡터에서 발현된다. 다른 실시 예에서, 플라스미드는 항생제 선택의 부재 시에 재조합 리스테리아 균주에 안정적으로 유지된다. 다른 실시 예에서, 플라스미드는 재조합 리스테리아에 항생제 내성을 부여하지 않는다. 다른 실시 예에서, 단편은 기능성 단편이다. 다른 실시 예에서, 상기 단편은 면역원성 단편이다.

"안정적으로 유지된다"란 용어는, 다른 실시 예에서, 검출가능한 손실 없이 10 세대 동안 선택(예, 항생제 선택)의 부재에서 핵산 분자 또는 플라스미드의 유지를 가리킨다. 다른 실시 예에서, 기간은 15세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 20세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 25세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 30세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 40세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 50세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 60세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 80세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 100세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 150세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 200세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 300세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 500세대이다. 다른 실시 예에서, 기간은 500세대를 초과한다. 다른 실시 예에서, 핵산 분자 또는 플라스미드는 시험관 내(예를 들어, 배양에서) 안정적으로 유지된다. 다른 실시 예에서, 핵산 분자 또는 플라스미드는 생체 내에서 안정적으로 유지된다. 다른 실시 예에서, 핵산 분자 또는 플라스미드는 시험관 내 및 생체 내 둘 다에서 안정적으로 유지된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

"아미노산" 또는 "아미노산들"이란 용어는 20개의 천연 발생 아미노산; 예를 들어, 하이드록시 프롤린, 포스포세린 및 포스포쓰레오닌을 비롯한 생체 내에서 종종 번역 후 개질된 아미노산; 및 2-아미노아디프산, 하이드록실라이신, 이소데스모신, 노르-발린, 노르-류신 및 오르니틴을 포함하지만 이에 한정되지 않는 기타 비정상적인 아미노산을 포함한다. 또한, 용어 "아미노산"은 D- 및 L-아미노산 모두를 포함할 수도 있다.

"핵산" 또는 "핵산 서열"이란 용어는 단일 또는 이중-가닥 형태의 디옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 올리고뉴클레오티드를 가리킨다. 상기 용어는 원하는 목적을 위해 참조 핵산으로서 유사 또는 개선된 결합 특성을 가진 공지된 천연 뉴클레오티드의 유사체를 포함하는 핵산, 즉, 올리고뉴클레오티드를 포괄한다. 또한, 상기 용어는 자연적으로 생긴 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 또는 원하는 목적을 위해 이보다 개선된 속도로 대사되는 핵산을 포함한다. 또한, 상기 용어는 합성 골격을 가진 핵산-유사 구성체를 포괄한다. 본 발명에 의해 제공된 DNA 골격 유사체은 포스포디에스테르(phosphodiester), 포스포로티오에이트(phosphorothioate), 포스포로디티오에이트(phosphorodithioate), 메틸포스포네이트(methylphosphonate), 포스포라미데이트(phosphoramidate), 알킬 포스포트리에스테르(alkyl phosphotriester), 설파메이트(sulfamate), 3'-티오아세탈, 메틸렌(메틸리미노)(3'-thioacetal, methylene(methylimino)), 3'-N-카바메이트(3'-N-carbamate), 몰폴리노 카바메이트(morpholino carbamate), 및 펩타이드 핵산(PNAs)을 포함한다 (예를 들어, 올리고뉴클레오티드 및 유사체 참조, a Practical Approach, edited by F. Eckstein, IRL Press at Oxford University Press (1991); Antisense Strategies, Annals of the New York Academy of Sciences, Volume 600, Eds. Baserga and Denhardt (NYAS 1992); Mulligan (1993) J. Med. Chem. 36:1923-1937; Antisense Research and Applications (1993, CRC Press). PNA는 N-(2-아미노에틸) 글리신 단위와 같은 비-이온성 골격을 포함한다. 포스포로티오에이트 결합(phosphorothioate linkage)은, 예를 들어, WO 97/03211; WO 96/39154; Mata (1997) Toxicol. Appi. Pharmacol. 144:189-197에 기재되어 있다. 다른 합성 골격은 메틸-포스포네이트 결합 또는 메틸포스포네이트 및 포스포디에스터의 교대 결합 (Strauss-Soukup (1997) Biochemistry 36:8692-8698) 및 벤질포스포네이트 결합 (Samstag (1996) Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 6:153-156)을 포함하는 용어에 의해 이들을 포괄한다. 상기 용어 "핵산"은 유전자, cDNA, mRNA, 올리고뉴클레오티드 프라이머, 프로브 및 증폭 산물과 상호교환적으로 사용된다.

다른 일 실시 예에서, 본원에서 제공되는 구성체 또는 핵산 분자는, 상동성 재조합을 이용하여 리스테리아 염색체에 통합된다. 상동성 재조합을 위한 기술은 본 분야에서 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, Baloglu S, Boyle SM, 등 (Immune responses of mice to vaccinia virus recombinants expressing either Listeria monocytogenes partial listeriolysin or Brucella abortus ribosomal L7/L12 protein. Vet Microbiol 2005, 109(1-2): 11-7); 및 Jiang LL, Song HH, 등, (Characterization of a mutant Listeriamonocytogenes strain expressing green fluorescent protein. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai) 2005, 37(1): 19-24)에 기재되어 있다. 또 다른 실시 예에서, 동종 재조합은 미국 특허 번호 제6,855,320호에 기재된 바와 같이 실행된다. 다른 실시 예에서, 온도 민감성 플라스미드가 재조합체를 선별하기 위해 사용된다. 각 기술은 본 발명의 개별 구현예를 나타낸다.

또 다른 실시 예에서, 구성체 또는 핵산 분자는 트랜스포손 삽입을 이용하여 리스테리아 염색체에 통합된다. 트랜스포존 삽입을 위한 기술은 본 분야에서 널리 공지되어 있으며, 그 중에서, DP-L967의 구성물에서 Sun 등의 문헌에서 기재되어 있다(Infection and Immunity 1990, 58: 3770-3778). 트랜스포존 돌연변이 생성은, 다른 실시 예에서, 안정한 게놈 삽입 돌연변이가 형성될 수 있는 이점을 갖지만 외부 유전자가 삽입된 게놈에서의 위치가 공지되지 않은 단점을 갖는다.

다른 실시 예에서, 구성물 또는 핵산 분자는 파아지 통합 부위를 사용하여 리스테리아 염색체 내로 통합된다(Lauer P, Chow MY 등, Construction, characterization, and use of two Listeria monocytogenes site-specific phage integration vectors. J Bacteriol 2002; 184(15):4177-86). 이 방법의 특정 실시 예에서, 박테리오파아지(예를 들어, U153 또는 PSA 리스테리오파아지)의 인테그라아제 유전자 및 부착 부위는 이종 유전자를 상응하는 부착 부위 내로 삽입하기 위해 사용되며, 이는 게놈 내에서의 임의의 적절한 부위일 수 있다(예를 들어, arg tRNA 유전자의 comK 또는 3’ 말단). 다른 실시 예에서, 내인성 프로파아지는 구성물 또는 이종 유전자의 통합 전에 사용되는 부착 부위로부터 치유된다. 다른 실시 예에서, 이 방법은 단일-카피 통합물을 야기한다. 또 다른 실시 예에서, 본 발명은, 임상 응용분야를 위한 파지계 염색체 통합 시스템을 더 포함하며, 이러한 응용분야에서 d-알라닌 라세미화효소를 포함한 필수 효소를 위한 영양 요구성 숙주 균주, 예를 들어, Lmdal(-)dat(-)를 사용할 수 있지만, 이러한 라세미화효소의 예로 한정되지는 않는다. 또 다른 실시 예에서는, “파지 치료 단계”를 피하도록, PSA에 기초하는 파지 통합 시스템을 사용한다. 다른 실시 예에서, 통합된 유전자를 유지하기 위해 항생제에 의한 지속적인 선별을 필요로 한다. 그러므로, 다른 실시 예에서, 현재 발명은 항생제로의 선별을 필요로 하지 않는 파아지 기반 염색체 통합 시스템의 구축을 가능하게 한다. 대신, 영양 요구성 숙주 균주가 상보화될 수 있다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

"재조합 자리" 또는 "자리 특이적 재조합 자리"라는 용어는 재조합 자리에 인접한 핵산 분절의 교환 또는 절단을 매개하는 재조합효소 (일부 경우에 연관 단백질과 함께)에 의해 인식되는 핵산 분자 내의 염기 서열을 지칭한다. 재조합효소 및 연관 단백질은 총칭하여 "재조합 단백질"이라 칭하며, 예를 들어, Landy, A., (Current Opinion in Genetics & Development) 3:699-707; 1993)를 참조한다.

“파아지 발현 벡터” 또는 “파지미드”란 용어는 실험관내 또는 생체내, 본질적으로 또는 유도성으로, 원핵, 효모, 진균류, 식물, 곤충 또는 포유류 세포를 포함하는 임의의 세포에서 본원에서 제공되는 바와 같은 방법 및 조성물의 핵산 서열을 발현하는 목적을 위한 임의의 파아지-기반 재조합 발현 시스템을 가리킨다. 파아지 발현 벡터는 전형적으로 박테리아 세포내에서 재생되고 적절한 조건 하에서 파아지 입자를 생산할 수 있다. 용어는 선형 또는 순환 발현 시스템을 포함하며 에피솜을 유지하거나 숙주 세포 게놈 내로 통합하는 파아지-기반 발현 벡터 둘 다를 포함한다.

본원에 기재된 바와 같이 "에피솜 발현 벡터"란 용어는 선형 또는 원형일 수 있고, 보통 이중가닥 형태로 된 핵산 벡터를 가리킨다. 일 실시 예에서, 에피솜 발현 벡터는 관심있는 유전자를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 삽입된, 관심있는 유전자는 세포 DNA로의 통합에 의해 종종 발생하는 규제적인 제약을 받지 않거나 이에 방해받지 않는다. 또 다른 실시 예에서, 삽입된 이종 유전자의 존재는 세포 고유의 중요 영역의 재배치 또는 방해로 이어지지 않는다. 다른 실시 예에서, 에피솜 벡터는 박테리아 세포질에서 다중 복사체로서 지속되는데, 이로 인해 관심있는 유전자의 증폭이 초래되고, 또 다른 실시 예에서는 필요한 경우 바이러스성 작용전달 인자가 공급된다. 다른 실시예에 따르면, 안정한 형질 감염 과정에서, 에피솜 벡터의 사용은 염색체 통합 플라스미드의 사용 시보다 종종 높은 형질 감염 효율을 초래한다(Belt, P.B.G.M., 등 (1991) Efficient cDNA cloning by direct phenotypic correction of mutant human cell line (HPRT2) using Epstein-Barr virus-derived cDNA experssion vector. Nucleic Acids Res. 19, 4861-4866; Mazda, O., 등 (1997) Extremely efficient gene transfection into lympho-hemotopoietic cell lines by Epstein-Barr virus-based vectors. J. Immunol. Methods 204, 143-151). 일 실시 예에서, 본원에서 제공되는 바와 같은 조성물 및 방법의 에피솜 발현 벡터는 DNA 분자를 세포에 수송하기 위해 사용되는 다양한 방법 중 어떤 것에 의해서라도 생체 내, 생체 외, 또는 시험관 내에서 세포에 수송될 수 있다. 또한, 상기 벡터는 단독으로 또는 대상물의 세포로의 수송을 향상하는 약제학적 조성물의 형태로서 수송될 수 있다

"융합된"이란 용어는 공유결합에 의한 연결을 가리킨다.

“형질전환”이란 용어는 플라스미드 또는 다른 이종 DNA 분자를 채택하기 위해 박테리아 세포를 조작하는 것을 가리킨다. 다른 실시 예에서, “형질전환”은 플라스미드의 유전자 또는 다른 이종 DNA 분자를 발현하기 위해 박테리아 세포를 조작하는 것을 가리킨다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

다른 실시 예에서, 접합은 유전 물질 및/또는 플라스미드를 박테리아 내로 도입하기 위해 사용된다. 접합을 위한 방법은 본 분야에 널리 공지되었으며, 예를 들어, Nikodinovic J 등, (A second generation snp-derived Escherichia coli-Streptomyces shuttle expression vector that is generally transferable by conjugation. Plasmid.2006 Nov;56(3):223-7) 및 Auchtung JM 등 (Regulation of a Bacillus subtilis mobile genetic element by intercellular signaling and the global DNA damage response. Proc Natl Acad Sci U S A. 2005 Aug 30;102 (35):12554-9)에서 기재된다. 각각의 방법은 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일 실시 예에서, 본원에서 제공된 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터는 대사 효소를 암호화하는 제2 개방형 해독틀을 더 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 대사 효소는 재조합 리스테리아 균주의 염색체에 결여되어 있는 내인성 유전자를 보완한다. 다른 실시 예에서, 상기 개방형 해독틀에 의해 암호화된 대사 효소는 알라닌 라세미화효소 (dal)이다. 다른 실시 예에서, 상기 개방형 해독틀에 의해 암호화된 대사 효소는 D-아미노산 전이효소 (dat)이다. 다른 실시 예에서, 본원에서 제공된 리스테리아 균주는 내인성 dal/dat 유전자에서 돌연변이를 포함한다. 다른 실시 예에서, 상기 리스테리아는 dal/dat 유전자가 결여되어 있다. 다른 실시 예에서, 상기 리스테리아는 dal/dat 및 actA 유전자가 결여되어 있다.

다른 실시 예에서, 본 발명의 방법 및 조성물의 핵산 분자는 프로모터/조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 다른 실시 예에서, 본 발명의 방법 및 조성물의 PSA를 암호화하는 핵산 서열은 프로모터/조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 다른 실시 예에서, 본 발명의 방법 및 조성물의 제2 개방형 해독틀은 프로모터/조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 다른 실시 예에서, 각 개방형 해독틀은 프로모터/조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

“대사 효소”란 용어는, 다른 실시 예에서, 숙주 박테리아에 의해 요구되는 영양소의 합성에 연관된 효소를 가리킨다. 다른 실시 예에서, 용어는 숙주 박테리아에 의해 요구되는 영양소의 합성에 요구되는 효소를 가리킨다. 다른 실시 예에서, 용어는 숙주 박테리아에 의해 사용되는 영양소의 합성에 연관된 효소를 가리킨다. 다른 실시 예에서, 용어는 숙주 박테리아의 지속되는 성장을 위해 요구되는 영양소의 합성에 연관된 효소를 가리킨다. 또 다른 실시 예에서, 효소는 영양소의 합성을 위해 요구된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일 실시 예에서, 본 발명에서 사용된 PSA 항원은 전립선암과 연관된다.

일 실시 예에서, 본원에 제공된 균주들은, 종양에 침투하여, 종양 세포를 파괴하고, 질환을 박멸할 수 있는 효과기 T 세포를 생성한다. 일 실시 예에서, 자연적으로 발생하는 종양 침투 림프구(TIL)는 몇몇 종양에서의 더 나은 예후와 연관된다. 또한, T 세포에 의한 종양 침투는 전(煎)임상 및 인간을 대상으로 한 실험 모두에서의, 면역치료 접근법의 성공과 연관된다. 일 실시 예에서, 종양 부위로의 림프구 침투는 일반적으로 IFN-γ, TNF-α 및 IL-1과 같은 전 염증성 사이토카인에 의한, 종양 맥관 구조의 내피 세포 중의 부착 분자의 상향조절에 의존적이다. 세포간 부착 분자 1(ICAM-1), 혈관내피 세포 부착 분자 1(V-CAM-1), 혈관 접착 단백질 1(VAP-1) 및 E-셀렉틴을 포함하는 몇몇 부착 분자는 종양으로 림프구가 침투하는 과정에 연관된다. 그러나, 이들 세포 부착 분자는 종양 맥관 구조 내에서 일반적으로 하향조절된다. 따라서, 일 실시 예에서, 본원에서 제공되는 바와 같은 균주들은 TIL을 증가시키고, 부착 분자(일 실시 예에서, ICAM-1, V-CAM-1, VAP-1, E-셀렉틴, 또는 이들의 조합)를 상향조절하며, 전 염증성 사이토카인(일 실시 예에서, IFN-γ, TNF-α, IL-1, 또는 이들의 조합)을 상향조절하거나, 또는 이들의 조합을 야기한다.

본 발명의 방법 및 조성물의 약독화 리스테리아 균주는, 또 다른 실시 예에서, 약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주이다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 약독화 리스테리아 실링게리 균주이다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 약독화 리스테리아 그라이 균주이다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 약독화 리스테리아 이바노비 균주이다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 약독화 리스테리아 무라이 균주이다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 약독화 리스테리아 웰쉬메리 균주이다. 또 다른 실시 예에서, 리스테리아 균주는 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 리스테리아 종의 약독화 균주이다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명의 재조합 리스테리아 균주는 동물 숙주를 통해 계대되었다. 또 다른 실시 예에서, 상기 계대는 균주 벡터로서 균주의 효능을 극대화한다. 또 다른 실시 예에서, 상기 계대는 리스테리아 균주의 면역원성을 안정화시킨다. 또 다른 실시 예에서, 상기 계대는 리스테리아 균주의 독성을 안정화시킨다. 또 다른 실시 예에서, 상기 계대는 리스테리아 균주의 면역원성을 증가시킨다. 또 다른 실시 예에서, 상기 계대는 리스테리아 균주의 독성을 증가시킨다. 또 다른 실시 예에서, 상기 계대는 리스테리아 균주의 불안정안 서브-균주를 제거한다. 또 다른 실시 예에서, 상기 계대는 리스테리아 균주의 불안정안 서브-균주의 유병률을 감소시킨다. 또 다른 실시 예에서, 상기 리스테리아 균주는 항원 함유 재조합 펩타이드를 암호화하는 유전자의 유전자 삽입을 포함하고 있다. 또 다른 실시 예에서, 상기 리스테리아 균주는 항원 함유 재조합 펩타이드를 암호화하는 유전자를 포함하는 플라스미드를 운반한다. 또 다른 실시 예에서, 상기 계대는 본원에서 기재된 바와 같이 수행된다. 또 다른 실시 예에서, 상기 계대는 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 방법에 의해 수행된다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

실시예가 본원에서 "포함하는"이라는 문구로 기재되는 모든 경우에, "구성된" 및/또는 "필수적으로 구성된"과 관련하여 기재된 유사한 실시예도 제공된다는 것으로 이해한다.

본 발명의 양태 또는 실시예가 마커시 그룹 또는 대안의 다른 그룹으로 기재되는 경우, 본 발명은 전체로서 나열된 전체 그룹뿐만 아니라 그룹의 개별적인 각 구성원 및 주요 그룹의 모든 가능한 하위 그룹, 하나 이상의 그룹 구성원이 없는 주요 그룹도 포괄한다. 본 발명은 청구된 발명에서 그룹 구성원 중 하나 이상을 명시적으로 제외하는 것 또한 예상한다.

달리 정의되지 않으면, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술의 숙련자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 가진다. 충돌이 있는 경우, 정의를 포함하여 본 명세서가 우선한다. 본 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐, "포함한다(comprise)"라는 단어 또는 "포함한다(comprises)" 또는 "포함하는(comprising)"과 같은 변형은 명시된 정수 또는 정수 그룹을 포함하지만 다른 정수 또는 정수 그룹을 배제하지 않음을 가리킨다는 것을 이해할 것이다. . 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수형 용어는 복수형을 포함하고 복수형 용어는 단수형을 포함한다. "예를 들어(e.g. 또는 for example)"라는 용어 뒤에 있는 임의의 예(들)는 완전해지거나 제한하는 것을 의미하지는 않는다.

본원에 기재된 것과 유사하거나 등가적인 방법 및 재료가 또한 본 발명의 실시 또는 테스트에 사용될 수 있지만, 예시적인 방법 및 재료가 본원에 기재되어있다. 재료, 방법 및 예는 예시적일 뿐 제한하려는 의도는 아니다.

방법, 용도 및 약제

본 발명의 일 양태에서, 본 발명은 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주 및 PD-1 길항제를 포함하는 병용 치료제를 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체의 암 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은 PD-1 길항제 및 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 포함하는 병용 치료제를 상기 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체의 암 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 본 발명은 PD-1 길항제 및 LmddA-142(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주를 포함하는 병용 치료제를 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체의 암 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 본 발명은 PD-1 길항제 및 LmddA-143 (염색체 내 hly 유전자에 융합 klk3을 가진 10403S al ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하는 병용 치료제를 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체의 암 치료 방법을 제공한다.

병용 치료제는 또한 하나 이상의 추가 치료제를 포함할 수 있다. 추가 치료제는, 예컨대 화학적 치료제, 생물학적 치료제(VEGF, VEGFR, EGFR, Her2/neu, 기타 성장인자 수용체, CD20, CD40, CD-40L, CTLA-4, OX-40, 4-1BB, 및 ICOS에 대한 항체들을 포함하지만 이에 제한되지는 않음), 면역제(예를 들어, 약독화 암세포, 종약 항원, 항원 제시 세포(예컨대, 종양 유도된 항원 또는 핵산으로 펄싱된 수지상 세포), 면역자극 사이토카인(예컨대, IL-2, IFNα2, GM-CSF), 면역 자극 사이토카인을 암호화하는 유전자로 형질감염된 세포(예컨대, GM-CSF를 포함하나 이에 제한되지 않음))일 수 있다.

화학적 치료제의 예는 티오테파 및 사이클로포스파마이드와 같은 알킬화제; 부설판, 임프로설판 및 피포설판과 같은 알킬설포네이트; 벤조 도파, 카보퀴온(carboquone), 메트레도파 및 우레도파와 같은 아지리딘; 알트레타민, 트리에틸렌렌아민, 트리에틸렌포스포아미드, 트리에틸렌티오포스포아미드 및 트리메틸로멜라민을 포함하는 에틸렌아민 및 메틸멜라민; 아세토제닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 캄토테신(합성 유사체 토포테칸을 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(그 아도젤레신, 카젤레신 및 비젤레신 합성 유사체를 포함); 크립토 파이신(특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 돌라스타틴; 듀오 카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CBI-TMI를 포함); 엘레우테로빈; 패트라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰기스타틴; 클로람부실, 클로나파진, 콜로포스파미드, 에스트라머스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 산화물 염산염, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니머스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드와 같은 질소 머스타드; 카머스틴, 클로로조토신, 포테머스틴, 로머스틴, 니머스틴, 라니미스틴과 같은 니트로소우레아; 에네딘 항생제(예컨대, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 phiI1, 예를 들어, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33 : 183-186(1994) 참조); 다이네미신 A를 포함하는 다이네미신; 클로드로네이트와 같은 비스포스포네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색단백질(에네딘 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥시토마이신, 다우노루비신, 데토류비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소류비신(몰포리노-독소루부신, 시아노몰포리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 및 데옥시독소루비신을 포함), 에리루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 마이코페놀 산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페프로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라신(5-FU)과 같은 대사길항제; 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈, 6-메르캡토푸린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 푸린 유사체; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 옥시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘과 같은 피리딘 우사체; 카루스테론, 드로모스타노론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리스탄과 같은 항부신; 프롤린 산과 같은 엽산 리플레니서; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린 산; 에니루라실; 아마사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지퀴온; 엘폴미틴; 엘립티니움 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 나이트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 마이탄신 및 안사미토신과 같은 마이탄시노이드; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린 산; 2-에틸하이드라지드; 프로카프바진; 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존 산; 트리아지퀴온; 2, 2′,2″-트리클로로트리에틸아민; 트리클로테세네스(특히, T-2 톡신, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 마노머스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드(“Ara-C”); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예컨대, 팍리탁셀 및 독세탁셀; 클로람부실; 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캡토푸린; 메토그렉세이트; 시스플라틴 및 카르보플라틴과 같은 플래티넘 유사체; 빈블라스틴; 플래티넘; 에코포시드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소메라제 저해제 RFS 2000; 디플로로메틸오르니틴(DMFO); 레티논 산과 같은 레티노이드; 카페시타빈; 및 이들 중 어느 하나의 약제학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 또한, 예컨대, 타목시펜, 라록시펜, 드로록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 토레미펜(파레스톤); 예를 들어 4(5)-이미다졸, 아미노글루티미드, 메게스트롤 아세테이트, 엑세메스탄, 포르메탄, 파드로졸, 보로졸, 레트로졸 및 아나스트로 졸과 같은 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제; 플루타미드, 닐루타미드, 바이칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린과 같은 항- 안드로겐; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체;를 포함하는 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절자(SERM)와 같이 종양에 대해 호르몬 작용을 조절하거나 억제하도록 작용하는 항호르몬제를 포함한다.

본 발명의 병용 치료제에서 각 치료제는 단독으로, 또는 표준제약업무에 따라 치료제 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및 희석제를 포함하는 약제(본원에서 약학 조성물로도 지칭됨)로 투여될 수 있다.

본 발명의 병용 치료제에서 각 치료제는 동시에(즉, 동일한 약제로), 함께(즉, 임의의 순서로 다른 약제를 투여 한 별도의 약제로) 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다. 병용 치료제 내 치료제들이 상이한 투여 형태(하나의 제제는 정제 또는 캡슐이고 다른 제제는 멸균액)이고/이거나, 예를 들어, 하루에 적어도 한번 투여되는 화학적 치료제 및1 주일에 1 회, 2 주일에 1 회 또는 3 주일에 1 회와 같이 덜 빈번하게 투여되는 생물학적 치료제와 같이 상이한 투약일정들로 투여되는 경우. 순차 투여는 특히 유용하다.

다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역 반응을 유도할 수있는 APC를 자극하는데 사용되는 생약독화 박테리아 균주 및 펨브롤리주맙(MK-3475)을 포함하는 병용 치료제를 투여함으로써 상승된 항종양 활성을 제공한다. 다른 실시 예에서, tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주 및 펨브롤리주맙(MK-3475)을 포함하는 병용 치료제를 투여함으로써 상승된 항종양 활성을 제공한다. 다른 실시 예에서, LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주 및 펨브롤리주맙(MK-3475)을 포함하는 병용 치료제를 투여함으로써 상승된 항종양 활성을 제공한다. 다른 실시 예에서, LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3 을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주 및 펨브롤리주맙(MK-3475)을 포함하는 병용 치료제를 투여함으로써 상승된 항종양 활성을 제공한다.

PD-1 길항제(예컨대, MK-3475)에 대한 투여량 단위는 일정한 투여량으로, 즉 100 mg, 200 mg, 300 mg으로 표현되거나, 환자 특이적 투여량으로, 즉, mg/kg 단위(치료제(kg)/체중(kg))로 또는 mg/m ² 단위(체 표면적 제곱미터 당 밀리그램의 양)로 표현될 수 있다.

일 실시 예에서, 본원에서 제공되는 면역원성 조성물에 의해 포함된 약독화 리스테리아 균주의 용량은 1 x 10⁷ - 3.31 x 10¹⁰ CFU의 용량으로 대상에게 투여된다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1 x 10⁸ - 3.31 x 10¹⁰ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1 x 10⁹ - 3.31 x 10¹⁰ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5-500 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 7-500 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 10-500 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 20-500 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 30-500 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 50-500 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 70-500 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 100-500 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 150-500 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5-300 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5-200 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5-150 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5-100 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5-70 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5-50 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5-30 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5-20 x 10⁸ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1-30 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1-20 x 10⁹CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 2-30 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1-10 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 2-10 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 3-10 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 2-7 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 2-5 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 3-5 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 0.5 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1 x 10¹⁰ CFU이다.

다른 실시 예에서, 투여량은 1 x 10⁷ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1 x 10⁸ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1 x 10⁹ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1.5 x 10⁹ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 2 x 10⁹ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 3 x 10⁹ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 4 x 10⁹ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5 x 10⁹ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 6 x 10⁹ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 7 x 10⁹ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 8 x 10⁹ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 10 x 10⁹ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1.5 x 10¹⁰ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 2 x 10¹⁰ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 2.5 x 10¹⁰ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 3 x 10¹⁰ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 3.3 x 10¹⁰ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 4 x 10¹⁰ 유기물이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5 x 10¹⁰ 유기물이다. 각각의 투여량 및 투여량 범위는 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

"추가투여(Boosting)"란 용어는 추가 균주 또는 면역원성 조성물 또는 재조합 리스테리아 균주 투여량 또는 면역 관문 억제자를 단독 또는 조합하여 대상물에게 투여하는 것을 포괄할 수도 있다고 숙련자에게 이해될 것이다. 다른 실시 예에서, 본 발명의 방법은, 2개 추가투여 (또는 총 3개 접종)가 투여된다. 또 다른 실시 예에서, 3개 추가투여가 투여된다. 또 다른 실시 예에서, 4개 추가투여가 투여된다. 또 다른 실시 예에서, 5개 추가투여가 투여된다. 또 다른 실시 예에서, 6개 추가투여가 투여된다. 또 다른 실시 예에서, 6개가 넘는 추가투여가 투여된다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명의 방법은 본원에서 제공된 재조합 리스테리아 균주 또는 면역 관문 억제자로 대상물을 추가투여하는 단계를 더 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 추가투여 접종에 사용되는 재조합 리스테리아 균주는 초기 "시동투여" 접종에 사용된 균주와 동일하다. 또 다른 실시 예에서, 추가투여 균주는 시동투여 균주와 다르다. 또 다른 실시 예에서, 추가투여 접종에 사용된 재조합 면역 관문 억제자(immune checkpoint inhibitor)는 초기 "시동투여 " 접종에 사용된 억제자와 동일하다. 또 다른 실시 예에서, 추가투여 억제자는 시동투여 억제자와 다르다. 또 다른 실시 예에서, 동일한 투여량이 시동투여와 추가투여 접종에 사용된다. 또 다른 실시 예에서, 더 큰 투여량이 추가투여에 사용된다. 또 다른 실시 예에서, 더 작은 투여량이 추가투여에 사용된다. 또 다른 실시 예에서, 본 발명의 방법은 추가투여 예방접종을 상기 대상물에게 투여하는 단계를 더 포함한다. 일 실시 예에서, 추가투여 예방접종은 단일 시동 예방접종을 뒤따른다. 또 다른 실시 예에서, 단일 추가투여 예방접종은 시동 예방접종 후 투여된다. 또 다른 실시 예에서, 두 개의 추가투여 예방접종은 시동 예방접종 후 투여된다. 또 다른 실시 예에서, 세 개의 추가투여 예방접종은 시동 예방접종 후 투여된다. 일 실시 예에서, 시동 및 추가투여 균주 사이의 기간은 실험적으로 숙련된 기술자에 의해 결정된다. 또 다른 실시 예에서, 시동 및 추가투여 균주 사이의 기간은 1 주이고, 또 다른 실시 예에서 2 주이고, 또 다른 실시 예에서 3 주이고, 또 다른 실시 예에서 4 주이고, 또 다른 실시 예에서 5 주이고, 또 다른 실시 예에서 6-8 주이고, 또 다른 실시 예에서 추가투여 균주는 시동 균주 후 8-10 주에 투여된다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명의 방법은 본원에서 제공된 약독화 리스테리아 균주를 포함하는 면역원성 조성물로 대상물을 추가투여하는 단계를 더 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본 발명의 방법은 본원에서 제공된 약독화 리스테리아 균주를 포함하는 면역원성 조성물의 추가투여량을 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 추가투여량은 상기 면역원성 조성물의 대안적 형태이다. 또 다른 실시 예에서, 본 발명의 방법은 추가투여 면역원성 조성물을 상기 대상물에게 투여하는 단계를 더 포함한다. 일 실시 예에서, 추가투여량은 상기 면역원성 조성물의 단일 시동투여량을 뒤따른다. 또 다른 실시 예에서, 단일 추가투여량은 시동투여량 후 투여된다. 또 다른 실시 예에서, 두 개의 추가투여량은 시동투여량 후 투여된다. 또 다른 실시 예에서, 세 개의 추가투여량은 시동투여량 후 투여된다. 일 실시 예에서, 본원에서 제공된 약독화 리스테리아를 포함하는 면역원성 조성물의 시동 투여량과 추가투여량 사이의 기간은 실험적으로 숙련된 기술자에 의해 결정된다. 또 다른 실시 예에서, 상기 투여량은 실험적으로 숙련된 기술자에 의해 결정된다. 또 다른 실시 예에서, 시동투여량과 추가투여량 사이의 기간은 1 주이고, 또 다른 실시 예에서 2 주이고, 또 다른 실시 예에서 3 주이고, 또 다른 실시 예에서 4 주이고, 또 다른 실시 예에서 5 주이고, 또 다른 실시 예에서 6-8 주이고, 또 다른 실시 예에서 추가투여량은 면역원성 조성물의 시동투여량 투여 후 8-10 주에 투여된다.

이형 "시동 추가투여" 전략은 면역 반응 강화 및 다수의 병원체에 대한 보호에 효과가 있었다. Schneider 등, Immunol. Rev. 170:29-38 (1999); Robinson, H. L., Nat. Rev. Immunol. 2:239-50 (2002); Gonzalo, R. M. 등, Strain 20:1226-31 (2002); Tanghe, A., Infect. Immun. 69:3041-7 (2001). 상기 시동 및 추가투여 주사에 다양한 형태의 항원을 제공하는 것은 항원에 대한 면역 반응을 극대화하는 것처럼 보인다. 보조제 내 단백질로 추가투여하거나 또는 항원을 암호화하는 DNA의 바이러스 벡터 전달이 뒤따르는 DNA 균주 시동투여가, 항원 특이적 항체 및 CD4+T-세포 반응 또는 CD8+T-세포 반응 각각을 향상시키는 가장 효과적인 방법인 것처럼 보인다. Shiver J. W. 등, Nature 415: 331-5 (2002); Gilbert, S. C. 등, Strain 20:1039-45 (2002); Billaut-Mulot, O. 등, Strain 19:95-102 (2000); Sin, J. I. 등, DNA Cell Biol. 18:771-9 (1999). 원숭이 예방접종 연구의 최근 데이터는, HIV gag 항원을 암호화하는 DNA에, CRL1005 폴록사머 (12kDa, 5% POE)를 첨가하는 것은 HIV gag를 발현하는 아데노바이러스 벡터(Ad5-gag)로 추가투여하는 것이 뒤따르는 HIV gag DNA 시동투여로 원숭이가 예방접종되는 경우 T-세포 반응을 향상시킨다고 제시하고 있다. Ad5-gag 추가투여가 뒤따르는 DNA/폴록사머 시동투여에 대한 세포 면역 반응은 Ad5-gag 추가투여가 뒤따르는 DNA(폴록사머 없음) 시동투여 또는 Ad5-gag 만에 대해서만 유도된 반응보다 컸다. Shiver, J. W. 등 Nature 415:331-5 (2002). 미국 특허 출원 공개 번호 US 2002/0165172 A1은 항원의 면역원성 부분을 암호화하는 벡터 구성체 및 항원의 면역원성 부분을 포함하는 단백질을 공동 투여해서 면역 반응이 생성되는 것을 설명한다. 이 문서는 B 형 간염 항원들과 HIV 항원에 제한된다. 또한, 미국 특허 번호 제6,500,432호는 관심있는 폴리뉴클레오티드와 폴리펩타이드의 공동 투여에 의해 핵산 예방접종의 면역 반응을 강화하는 방법에 관한 것이다. 상기 특허에 따르면, 공동 투여는 동일한 면역 반응 동안, 바람직하게는 서로의 0-10 또는 3-7일 이내에서 폴리뉴클레오티드와 폴리펩타이드의 투여를 가리킨다. 특허에 의해 고려되는 항원은, 그 중에서도, 간염(모든 형태), HSV, HIV, CMV, EBV, RSV, VZV, HPV, 소아마비, 인플루엔자, 기생충(예를 들어, 말라리아원층 종으로부터), 및 병원성 박테리아(M. 튜버큘로시스, M. 레프래, 클라미디아, 쉬겔라, B. 부르그도르페리, 독소원성 E. coli, S. 티포사, H. 파일로리, V. 콜레라, B. 페르투시스 등을 포함하나, 이에 제한되지 않음)를 포함한다. 상기 참조문헌들 모두는 본원에 그 전체가 참조로 인용된다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명의 방법의 재조합 폴리펩타이드는 재조합 리스테리아 균주에 의해 발현된다. 또 다른 실시 예에서, 상기 발현은 재조합 리스테리아 균주에 의해 운반되는 뉴클레오티드 분자에 의해 매개된다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

본원에서 사용된 바와 같이, 일부 실시 예에서 "재조합 리스테리아"라는 용어는 전반적으로 기술된 모든 동일한 의미 및 품질을 갖는 약독화된 리스테리아를 지칭한다.

다른 실시 예에서, 본 발명의 균주를 포함하는 조성물은 보조제(adjuvant)를 더 포함한다. 또 다른 실시 예에서, 본 말명의 균주에는 보조제가 투입될 수 있다. 본 발명의 방법 및 조성물에 사용되는 보조제는, 다른 실시 예에서, 과립구/대식세포 콜로니-자극 인자 (GM-CSF) 단백질이다. 다른 실시 예에서, 보조제는 GM-CSF 단백질을 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 GM-CSF를 암호화하는 뉴클레오티드 분자이다. 다른 실시 예에서, 보조제는 GM-CSF를 암호화하는 뉴클레오티드 분자를 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 사포닌 QS21이다. 다른 실시 예에서, 보조제는 사포닌 QS21을 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 모노포스포릴 리피드 A이다. 다른 실시 예에서, 보조제는 모노포스포릴 리피드 A를 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 SBAS2이다. 다른 실시 예에서, 보조제는 SBAS2을 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 비-메틸화 CpG 함유 올리고뉴클레오티드이다. 다른 실시 예에서, 보조제는 비-메틸화 CpG 함유 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 면역 자극 사이토카인이다. 다른 실시 예에서, 보조제는 면역 자극 사이토카인을 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 면역 자극 사이토카인을 암호화하는 뉴클레오티드 분자이다. 다른 실시 예에서, 보조제는 면역 자극 사이토카인을 암호화하는 뉴클레오티드 분자를 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 퀼 글리코시드이거나 이를 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 세균 미토겐이거나 이를 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 세균 독소이거나 이를 포함한다. 다른 실시 예에서, 보조제는 본 기술분야에 공지된 임의의 다른 보조제이거나 이를 포함한다. 각각의 가능성은, 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일 실시 예에서, 본원에서 제공된 방법은 상기 재조합 리스테리아 균주의 투여와 동시, 이전 또는 이후에, 면역 관문 단백질 억제자를 공동 투여하는 단계를 더 포함한다. 일 구현예에서, 보조제는 몬타나이드 ISA 51, GM-CSF, KLH, 사이토킨, 성장 인자, 세포 집단, QS21, 프로인트 불완전 보조제, 인산 알루미늄, 수산화 알루미늄, BCG, 명반, 인터루킨, 메틸화되지 않은 CpG 올리고뉴클레오티드, 퀼 글리코시드, 모노포스포릴 지질 A, 리포좀, 세균성 미토겐, 박테리아 독소 또는 케모카인, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 경우에, PD-1 길항제 및 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역 반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주는 단일 복용 형태로 조합된다. 일부 경우에, PD-1 길항제 및 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 리스테리아 모노사이토젠을 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주는 단일 복용 형태로 조합된다 일부 경우에, PD-1 길항제 및 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주는 단일 복용 형태로 조합된다. 일부 경우에, PD-1 길항제 및 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3 을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 단일 복용 형태로 조합된다.

PD-1 길항제 및 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역 반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주의 동시 투여는 치료나 예방 기간 내내 유지될 수 있지만, 항암 활성은 하나의 화합물을 별개로 연속 투여(예를 들어, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역 반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주 없이 PD-1 길항제를 투여 후 병용 치료, 또는 대안적으로 PD-1 길항제 없이 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역 반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주를 투여 후 병용 치료)함으로써 달성될 수 있다. 또한, PD-1 길항제 및 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주의 동시 투여는 치료나 예방 기간 내내 유지될 수 있지만, 항암 활성은 하나의 화합물을 별개로 연속 투여(예를 들어, tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주 없이 PD-1 길항제를 투여 후 병용 치료, 또는 대안적으로 PD-1 길항제 없이 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 투여 후 병용 치료)함으로써 달성될 수 있다. 또한, PD-1 길항제 및 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주의 동시 투여는 치료나 예방 기간 내내 유지될 수 있지만, 항암 활성은 하나의 화합물을 별개로 연속 투여(예를 들어, LmddALmddA-142(10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주 없이 PD-1 길항제를 투여 후 병용 치료, 또는 대안적으로 PD-1 길항제 없이 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주를 투여 후 병용 치료)함으로써 달성될 수 있다. 또한, PD-1 길항제 및 LmddA -143 (염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3 을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주의 동시 투여는 치료나 예방 기간 내내 유지될 수 있지만, 항암 활성은 하나의 화합물을 별개로 연속 투여(예를 들어, LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주 없이 PD-1 길항제를 투여 후 병용 치료, 또는 대안적으로 PD-1 길항제 없이 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 투여 후 병용 치료)함으로써 달성될 수 있다.

일부 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 PD-1 길항제 투여 전에 투여되는 반면에, 다른 실시예서는, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주, 또는 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 PD-1 길항제 투여 후 투여된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일부 실시 예에서, 병용 요법의 치료제들 중 적어도 하나는 동일한 암을 치료하기 위한 단일 요법으로 사용되는 경우에 통상적으로 사용되는 동일한 투여량 요법(투여량, 빈도 및 치료 기간)을 사용하여 투여된다. 다른 실시 예에서, 단일 요법, 예를 들어, 보다 적은 투여량, 덜 빈번한 투여량 및/또는 보다 짧은 치료 기간으로 사용되는 경우 보다, 환자가 받는 병용 치료제 내 적어도 하나의 치료제들의 총량이 더 적다.

본 발명의 병용 치료제는 종양을 제거하는 수술 전에 또는 수술 후에 사용될 수 있고 방사선 요법 전, 도중 또는 후에 사용될 수 있다.

일부 실시 예에서, 본 발명의 병용 치료제는 생물학적 치료제 또는 화학적 치료제로 이전에 치료한 적이 없는, 즉, 치료경험이 없는 환자에게 투여된다. 일부 실시 예에서, 본 발명의 병용 치료제는 생물학적 치료제 또는 화학적 치료제로 이전에 치료한 이후 지속적인 반응을 얻지 못한, 즉, 치료경험이 있는 환자에게 투여된다. 특정 실시 예에서, 본 발명의 병용 치료제는 이전에 전이성 거세 저항성 전립선암(mCRPC) 치료받은 적 있는 환자에게 투여된다.

본 발명의 병용 치료제는 촉진이나 해당 분야에서 잘 알려진 영상기법(예컨대, MRI, 초음파, CAT 스캔)에 의해 충분히 발견될 정도의 커다란 종양을 치료하는 데 통상적으로 사용된다. 일부 실시 예에서, 본 발명의 병용 치료제는 적어도 200 mm³ ^, 300 mm³, 400 mm³, 500 mm³, 750 mm³, 또는1000 mm³까지의 크기를 가지는 진행단계의 종양을 치료하는 데 사용된다.

본 발명의 병용 치료제는 바람직하게는 PD-L1 발현에 양성반응을 보이는 전립선암을 진단받은 환자에게 투여된다. 일부 실시 예에서, 환자로부터 채취한 종양 샘플의 FFPE 혹은 냉동 조직 부분에 대한 IHC 분석에서 진단성 항-인간 PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 이용하여 PD-L1 발현을 검출한다. 통상적으로, 환자의 의사는, PD-1 길항제 및 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(- ) 균주로 치료를 시작하기 전에 환자로부터 채취한 종양 조직 샘플에서의 PD-L1 발현을 판단하기 위한 진단 테스트를 지시하겠지만, 해당 의사는 예를 들어 치료 사이클 완료 후와 같이 치료의 개시 후 어느 시점에서든 제1 또는 후속 진단 테스트를 주문할 수 있다고 생각된다. 각각의 가능성은, 본원에서 제공된 바와 같은 방법 및 조성물의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일 실시 예에서, 투여량 요법은 임의의 요법에 대해 통상적인 방식으로 특정 환자의 상태, 반응 및 연관 치료에 맞추어지며, 상태의 변화에 따라 그리고/또는 다른 임상적 상태에 비추어 조정될 필요가 있을 수 있다.

일부 실시 예에서, 본 발명의 병용 치료제를 위한 투여량 요법(본원에서 투여 요법으로도 지칭됨)을 선택하는 것은 독립체(entity)의 혈청 또는 조직 회전율, 증상의 레벨, 독립체의 면역원성, 및 치료 중인 개체 내의 표적 세포, 조직 또는 기관에의 접근 가능성을 포함한 여러 인자들에 의존한다. 바람직하게, 투여량 요법은 부작용의 허용레벨에 맞춰 환자에게 전달되는 각 치료제의 양을 최대화한다. 따라서, 병용에서 각 생물학적 치료제 및 화학적 치료제의 투여량 및 투여 빈도는 특정 치료제, 치료 중인 암의 중증도 및 환자 특성에 부분적으로 의존한다. 적절한 양의 항체, 사이토카인 및 소분자를 선택함에 있어 지침서가 활용될 수 있다. 예컨대, Wawrzynczak(1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina(ed.)(1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach(ed.)(1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert 등 (2003) New Engl . J. Med . 348:601-608; Milgrom 등 (1999) New Engl . J. Med . 341:1966-1973; Slamon 등 (2001) New Engl . J. Med . 344:783-792; Beniaminovitz 등. (2000) New Engl . J. Med . 342:613-619; Ghosh 등(2003) New Engl. J. Med . 348:24-32; Lipsky 등 (2000) New Engl . J. Med . 343:1594-1602; Physicians' Desk Reference 2003(Physicians' Desk Reference, 57th Ed); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (2002년 11월) 참조. 적절한 투여량 요법의 결정은 치료에 영향을 미치거나 치료에 영향을 미칠 것으로 예상되는 파라미터 또는 인자를 이용하여 임상의에 의해 결정될 수 있으며, 예를 들어, 환자의 임상 병력(예컨대, 이전의 치료), 치료 될 암의 유형 및 단계, 및 병용 치료제 내 하나 이상의 치료제에 대한 반응의 생체표지에 의존할 것이다.

본 발명의 병용 치료제 내 생물학적 치료제들은 연속 투입으로 또는 일정기간별 투여량으로, 예컨대, 매일, 격일로, 일주일에 3 회, 매주 1 회, 2 주마다, 3주마다, 또는 월별로, 격월별로 투여 할 수 있다. 일반적으로 1주일간 전체 투여량은 적어도 체중 당 0.05 μg/kg, 0.2 μg/kg, 0.5 μg/kg, 1 μg/kg, 10 μg/kg, 100 μg/kg, 0.2 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 10 mg/kg, 25 mg/kg, 50 mg/kg 이상이다. 예컨대, Yang 등 (2003) New Engl . J. Med . 349:427-434; Herold 등 (2002) New Engl . J. Med . 346:1692-1698; Liu 등 (1999) J. Neurol . Neurosurg . Psych. 67:451-456; Portielji 등 (20003) Cancer Immunol . Immunother . 52:133-144 참조.

병용 치료제 내에 PD-1 길항제로서 항-인간 PD-1 mAb를 채용하는 일부 실시 예에서, 투약 요법은 치료과정 내내 100 내지 500 mg의 일정한 투여량으로 또는 약 ± 14 일(± 2 일) 또는 약 21 일(± 2 일) 또는 약 30 일(± 2 일)의 간격으로 1 내지 10 mg/kg의 중량 기반의 투여 량으로 투여하는 것을 포함할 것이다.

병용 치료제 내에 PD-1 길항제로서 항-인간 PD-1 mAb를 이용하는 일부 실시 예에서, 투약 요법은 환자 내 투여량 증가와 함께 약 0.005 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 투여량으로 항-인간 PD-1 mAb를 투여하는 것을 포함할 것이다. 다른 증량 투여의 실시 예에서, 투여 간격은 예를 들어, 제1 및 제2 투여 사이에서 약 30 일(± 2 일), 제2 및 제3 투여 사이에서 약 14 일(± 2 일)로 점진적으로 단축 될 것이다. 특정 실시 예에서, 투약 간격은 제2 투약 이후의 투여에 대해 약 14 일(± 2 일) 일 것이다.

특정 실시 예에서, 대상체는 본원에 기재된 임의의 PD-1 길항제를 포함하는 약제의 정맥 내(IV) 주입으로 투여될 것이다.

본 발명의 일 실시 예에서, 병용 치료제 내 PD-1 길항제는 니볼루밥(nivolumab)이고, 이는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 투여량으로 정맥 내 투여된다: 2주당 1회 1 mg/kg, 2주당 1회 2 mg/kg, 2주당 1회 3 mg/kg, 2주당 1회 5 mg/kg, 2주당 1회 10 mg, 3주당 1회 1 mg/kg, 3주당 1회 2 mg/kg, 3주당 1회 3 mg/kg, 3주당 1회 5 mg/kg, 및 3주당 1회 10 mg.

본 발명의 다른 실시 예에서, 병용 치료제 내 PD-1 길항제는 MK-3475이고, 이는 3주당 1회 200 mg, 2주당 1회 1 mg/kg, 2주당 1회 2 mg/kg, 2주당 1회 3 mg/kg, 2주당 1회 5 mg/kg, 2주당 1회 10 mg, 3주당 1회 1 mg/kg, 3주당 1회 2 mg/kg, 3주당 1회 3 mg/kg, 3주당 1회 5 mg/kg 및 3주당 1회 10 mgW 또는 이러한 투여량들 중 임의의 당량(예컨대, MK-3475의 PK 모델은 3주당 1회 200mg의 고정 투여량이 3주당 1회 2mg/kg으로 얻은 것과 일치하는 노출량을 제공한다고 추정함)으로 구성된 군에서 선택된 투여량으로 액상 약제로 투여된다. 일부 실시 예에서, MK-3475는, pH 5.5인 10 mM 히스티딘 완충액 내에 25 mg/ml의 MK-3475, 7 %(w/v)의 수크로스, 0.02 %(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 액상 약제로서 투여되고, 해당 약제의 선택된 투여량은 30 분 ± 10 분의 기간에 걸쳐 정맥 내 주입에 의해 투여된다.

본 발명의 다른 실시 예에서, 병용 치료제 내 약독화 박테리아 또는 약독화 리스테리아는 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주이며, 이는 0.5 x 10⁹, 1 x 10⁹, 5 x 10⁹ 및 1 x 10¹⁰ cfu로 이루어진 군으로부터 선택된 투여량으로 액체 약제로 투여된다. 일부 실시 예에서, 투여량은 1 x 10⁹ - 3.31 x 10¹⁰ CFU, 5-500 x 10⁸ CFU, 7-500 x 10⁸ CFU, 10-500 x 10⁸ CFU, 20-500 x 10⁸ CFU, 30-500 x 10⁸ CFU, 50-500 x 10⁸ CFU, 70-500 x 10⁸ CFU, 100-500 x 10⁸ CFU, 150-500 x 10⁸ CFU, 5-300 x 10⁸ CFU, 5-200 x 10⁸ CFU, 5-150 x 10⁸ CFU, 5-100 x 10⁸ CFU, 5-70 x 10⁸ CFU, 5-50 x 10⁸ CFU, 5-30 x 10⁸ CFU, 5-20 x 10⁸ CFU, 1-30 x 10⁹ CFU, 1-20 x 10⁹CFU, 2-30 x 10⁹ CFU, 1-10 x 10⁹ CFU, 2-10 x 10⁹ CFU, 3-10 x 10⁹ CFU, 2-7 x 10⁹ CFU, 2-5 x 10⁹ CFU, 또는 3-5 x 10⁹ CFU로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 실시 예에서, 투여량은 0.5 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 5 x 10⁹ CFU이다. 다른 실시 예에서, 투여량은 1 x 10¹⁰ CFU이다.

일부 실시 예에서, 투여량은 1 x 10⁹ 유기물, 1.5 x 10⁹ 유기물, 2 x 10⁹ 유기물, 3 x 10⁹ 유기물, 4 x 10⁹ 유기물, 5 x 10⁹ 유기물, 6 x 10⁹ 유기물, 7 x 10⁹ 유기물, 8 x 10⁹ 유기물, 10 x 10⁹ 유기물, 1.5 x 10¹⁰ 유기물, x 10¹⁰ 유기물, 2.5 x 10¹⁰ 유기물, 3 x 10¹⁰ 유기물, .3 x 10¹⁰ 유기물, 4 x 10¹⁰ 유기물 또는 5 x 10¹⁰ 유기물로 이루어진 군으로부터 선택된다.

각각의 투여량 및 투여량 범위는 본 발명의 개별적인 실시예를 나타낸다.

일부 실시 예에서, 본 발명의 균주와 조성물을 함유하는 약제학적 조성물은, 비경구식으로, 암 주위로, 점막식으로, 경피식으로, 근육내로, 정맥내로, 경피내로, 피하식으로, 복막내로, 심실내로, 두개내로, 질내로, 또는 종양내로 등의 통상의 기술자에게 알려져 있는 임의의 방법에 의해 대상물에 투여된다.

본원에서 제공되는 조성물과 방법의 또 다른 실시 예에서, 균주 또는 조성물은, 경구 투여되고, 따라서, 경구 투여에 적절한 형태로, 즉, 고체 또는 액체 조제물로 제형화된다. 적절한 고체 경구 제형은, 태블릿, 캡슐, 알약, 과립, 펠릿 등을 포함한다. 적절한 액체 경구 제형은, 용액, 현탁액, 분산제, 유탁액, 오일 등을 포함한다. 본 발명의 또 다른 실시 예에서, 활성 성분은 캡슐로 제형화된다. 본 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물은, 활성 화합물과 비활성 담체 또는 희석액에 더하여, 단단한 겔화 캡슐을 포함한다.

다른 실시 예에서, 균주 또는 조성물은, 액체 조제물의 정맥내, 동맥내, 또는 근육내 주입에 의해 투여된다. 적절한 액체 제형은, 용액, 현탁액, 분산제, 유탁액, 오일 등을 포함한다. 일 실시 예에서, 제약 조성물은, 정맥내 투여되며, 따라서, 정맥내 투여에 적절한 형태로 조제된다. 또 다른 실시 예에서, 약제학적 조성물은, 동맥내 투여되고, 따라서 동맥내 투여에 적절한 형태로 제형화된다. 또 다른 실시 예에서, 약제학적 조성물은, 근육내 투여되고, 따라서 근육내 투여에 적절한 형태로 제형화된다.

또 다른 실시 예에서, 백신 또는 조성물은, 액체 조제물의 정맥내, 동맥내, 또는 근육내 주입에 의해 투여된다. 적절한 액체 제형은, 용액, 현탁액, 분산제, 유탁액, 오일 등을 포함한다. 일 실시 예에서, 제약 조성물은, 정맥내 투여되며, 따라서, 정맥내 투여에 적절한 형태로 조제된다. 또 다른 실시 예에서, 약제학적 조성물은, 동맥내 투여되고, 따라서 동맥내 투여에 적절한 형태로 제형화된다. 또 다른 실시 예에서, 약제학적 조성물은, 근육내 투여되고, 따라서 근육내 투여에 적절한 형태로 제형화된다.

일 실시 예에서, 본원에서 제공되는 바와 같은 조성물 및 방법의 백신은 숙주 척추 동물, 바람직하게는 포유류, 더욱 바람직하게는 인간에게 단독 또는 약제학적으로 허용 가능한 담체와의 조합으로서 투여될 수 있다. 다른 실시 예에서, 상기 백신은 리스테리아 균주 그 자체 또는 개질을 통해 상기 리스테리아 종에 의해 발현되도록 된 이종 항원에 대한 면역 반응을 유도하기에 효과적인 양으로 투여된다. 또 다른 실시 예에서, 투여될 면역원성 조성물 또는 백신의 양은 본 발명을 접한 숙련자에 의해 통상적으로 결정될 수 있다. 또 다른 실시 예에서, 약제학적으로 허용 가능한 담체에는 멸균 증류수, 식염수, 인산 완충 용액, 또는 중탄산 완충 용액이 포함될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 또 다른 실시 예에서, 선택된 약제학적으로 허용 가능한 담체의 종류 및 사용될 담체의 양은 투여 방법, 리스테리아 균주의 종류, 및 백신 접종자의 연령과 질병 상태를 포함하는 몇몇 인자에 따라 다르다. 또 다른 실시 예에서, 상기 백신은 경구적, 비경구적, 비강 내, 근육 내, 혈관 내, 직장 내, 복강 내, 또는 잘 알려진 다양한 투여 경로 중 어떤 하나의 경로로든지 투여될 수 있다. 또 다른 실시 예에서, 상기 투여 경로는 치료될 감염원 또는 종양의 유형에 따라 선택될 수 있다.

또 다른 실시 예에서, 본 발명은 본원에서 제공되는 면역원성 조성물의 투여를 포함하는, 대상물에서 하나 이상의 종양을 치료, 억제, 또는 저해하는 방법을 제공한다.

일부 실시 예에서 약독화 박테리아, 또는 약독화 리스테리아, 또는 LmddA-142, 또는 LmddA-143는 액체 약제로서 투여되며, 30 분 ± 10 분의 기간에 걸쳐 정맥 내 주입에 의해 투여된다.

PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA -142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주 또는 LmddA-143 (염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3를 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주와 병용되는 MK-3475의 최적 투여량은 하나 또는 둘 이상의 제제의 투여량 증가에 의해 찾아낼 수 있다.

일 실시 예에서, 환자는 12주 주기에 1, 4, 7 주의 1일째에 병합요법으로 치료를 받으며 MK-3475는 200mg의 시작 투여량으로 투여되며, PSA 발현세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 1 x 10⁹ cfu의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 0.5 x 10⁹ CFU 의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143 (염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 5 x 10⁹ CFU 의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 1 x 10¹⁰ CFU 의 시작 투여량으로 투여된다.

일 실시 예에서, 환자는 병용 치료제로 치료되며, 여기서 MK-3475는 12주 주기의 1일째에 200mg의 시작 투여량으로 3주마다 투여되며, PSA 발현세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3 을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 12주 주기의 1, 4, 7주의 1일째에 1 x 10⁹ cfu의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(- ) 균주는 0.5 x 10⁹ CFU 의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 5 x 10⁹ CFU 의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 1 x 10¹⁰ CFU 의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, 투여는 각 주기의 예정된 일자의 3일 이전 혹은 3일 이후까지 투여된다.

일 실시 예에서, 환자는 병용 치료제로 치료되며, 여기서 MK-3475는 12주 주기의 1주, 4주, 7주, 및 10주의 1일째에 200mg의 시작 투여량으로 투여되며, PSA 발현세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리 스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3 을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 12주 주기의 1주, 4주 및 7주의 1 일째에 1 x 10⁹ cfu의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 0.5 x 10⁹ CFU 의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 0.5 x 10⁹ CFU 의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 1 x 10¹⁰ CFU 의 시작 투여량으로 투여된다. 다른 실시 예에서, 투여는 각 주기의 예정된 일자의 3일 이전 혹은 3일 이후까지 투여된다.

일 실시 예에서, MK-3475 주입물을 먼저 투여하고, 이어서 NSAIDS, 예를 들어, 나프록센 또는 이부프로펜, 구강 항염증제를, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 주입하기 전 30분 이내에 투여한다.

다른 실시 예에서, MK-3475는 3주당 1회 200mg의 시작 투여량으로 투여되고, PSA 발현세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 1 x 10⁹ 및 1 x 10¹⁰ cfu 사이의 시작 투여량으로 3주마다 투여된다. 다른 실시 예에서, MK-3475는 3주당 1회 200mg의 시작 투여량으로 투여되고, PSA 발현세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 0.5 x 10⁹ 및 1 x 10¹⁰ cfu 사이의 시작 투여량으로 3주마다 투여된다.

또 다른 실시 예에서, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 5 x 10⁹의 시작 투여량으로 3주마다 투여되고, MK-3475는 200 mg의 시작 투여량으로 3주마다 투여되며, 병용 치료제의 시작 투여량을 환자가 견지지 못하는 경우, PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3 을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 3주마다 1 x 10⁹ cfu로 감소된다.

일부 실시 예에서, 상술한 범위의 하한치 미만의 투여량 레벨이 적당량 이상일 수 있지만, 다른 경우에는 숙련자에 의해 정해진 바와 같이 여전히 더 많은 투여량이 채용될 수 있다.

일부 실시 예에서, 치료 주기는 병용 요법의 첫번째 날에 시작하여 적어도 12주, 24주 혹은 48주간 지속된다. 약물이 병용 투여되는 치료주기의 어떠한 날에도, MK-3475와 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주의 별도의 정맥 내 주입 간의 타이밍은 약 15분 내지 약 45분이다. 본 발명은 MK-3475 및 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주가 순서대로 또는 동시 정맥 내 주입에 의해 투여될 수도 있음을 고려한다.

일부 실시 예에서, 병용 치료제는 환자가 CR을 달성한 후 적어도 2 내지 4주 동안 투여된다.

일부 실시 예에서, 본 발명의 병용 치료제로 치료하기 위해 선택된 환자는 전이성 전립선암으로 진단되었으며, 환자는 3회 이하의 이전의 전신 치료 요법을 진행하였거나 이에 대한 저항성이 있었다.

일 실시 예에서, 본 발명의 병용 치료제로 치료하기 위해 선택된 환자는 병용 요법을 시작하기 전 1 주 이내에서는 혈청 PSA 레벨이 5ng / mL 이상이었다.

일 실시 예에서, 본 발명의 병용 치료제로 치료하기 위해 선택된 환자는 병용 요법을 시작하기 전 4 주 이내에서는 PSA 레벨이 높았다.

본 발명은 또한 전술한 바와 같은 PD-1 길항제 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제를 제공한다. PD-1 길항제가 생물학적 치료제, 예를 들어 mAb인 경우, 길항제는 통상적인 세포 배양 및 회수/정제 기술을 사용하여 CHO 세포에서 생산될 수 있다.

일부 실시 예에서, PD-1 길항제로서 항 -PD-1 항체를 포함하는 약제는 액체 제형물로서 제공되거나, 사용 전 주사용 멸균수로 동결 건조 된 분말을 재구성하여 제조될 수있다. WO 2012/135408은 본 발명에서 사용하기에 적합한 MK-3475를 포함하는 액체 및 동결건조된 약제의 제조를 기술한다. 일부 실시 예에서, 약 50 mg의 MK-3475를 함유하는 유리 바이알(glass vial)에 MK-3475를 포함하는 약제가 제공된다.

본 발명은 또한 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주, 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제를 제공한다. PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주는 Wallecha 등(CLINICAL ANDSTRAINIMMUNOLOGY, Jan. 2009, p. 96-103)에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.

PD-1 길항제 약제 및 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주 약제는 제1 용기, 제2 용기 및 패키지 인서트를 포함하는 키트로서 제공될 수 있다. 제1 용기는 항-PD-1 항체를 포함하는 약제의 적어도 1회 투여량을 함유하고, 제2 용기는 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주의 적어도 1회 투여량을 함유하며, 패키지 인서트 또는 라벨은 상기 약제들을 이용하여 전립선암 환자를 치료하기 위한 지도를 포함한다. 제1 및 제2 용기는 동일하거나 상이한 형상(예를 들어, 바이알, 주사기 및 병) 및/또는 재료(예를 들어, 플라스틱 또는 유리)로 이루어질 수 있다. 키트는 약제를 투여하는데 유용할 수 있는 다른 물질, 예컨대, 희석제, 필터, IV 백 및 라인, 바늘 및 주사기를 추가로 포함할 수 있다. 키트의 일부 실시 예에서, 항-PD-1 길항제는 항-PD-1 항체이고, 지침은 IHC 분석에 의해 PD-L1 발현에 대하여 양성인 전립선암 환자의 치료에 약제가 사용되도록 의도된 것으로 기술되어있다.

이하에 열거된 예시적인 특정 실시예들을 포함하는 본 발명의 이와 같은 양태 및 다른 양태는 본원에 포함된 교시로부터 명백할 것이다.

본 발명의 예시적인 특정 실시예

1. PD-1 길항제 및 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하는 병용 치료제를 환자 개인에게 투여하는 것을 포함하는 환자의 전립선암을 치료하기 위한 방법. 각각의 가능성은 본원에 제공된 개별적인 실시예를 나타낸다.

2. PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주와 병용하여 사용하기 위한 를 PD-1 길항제를 포함하는 약제. 각각의 가능성은 본원에 제공된 개별적인 실시예를 나타낸다.

3. PD-1 길항제와 병용하여 사용하기 위한 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하는 약제. 각각의 가능성은 본원에 제공된 개별적인 실시예를 나타낸다.

4. 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 보조제, 또는 이들의 조합을 포함하는 실시예 3 또는 4의 약제.

5. PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주와 병용하여 투여시 환자의 전립선암 치료용 약제의 제조에서 PD-1 길항제의 용도. 각각의 가능성은 본원에 제공된 개별적인 실시예를 나타낸다.

6. PD-1 길항제와 병용 투여시 환자의 환자의 전립선암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주의 용도. 각각의 가능성은 본원에 제공된 개별적인 실시예를 나타낸다.

7, 환자의 전립선암 치료용 약제의 제조에서 PD-1 길항제 및 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주의 용도. 각각의 가능성은 본원에 제공된 개별적인 실시예를 나타낸다.

8. 제1 용기, 제2 용기, 및 패키지 인서트를 포함하는 키트로서, 상기 제1 용기는 항-PD-1 길항제를 포함하는 약제의 적어도 1회 투여량을 함유하고, 상기 제2 용기는 PSA 발현 세포에 대한 세포성 면역반응을 유도할 수 있는 APC를 자극하는 데 사용되는 생약독화 박테리아 균주, 또는 tLLO에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현벡터로 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 형질전환하여 유전자 조작된 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주, 또는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142 ) 균주, 또는 LmddA -143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 가진 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주의 적어도 1회 투여량을 함유하며, 상기 패키지 인서트는 상기 약제들을 이용하여 전립선암 환자를 치료하기 위한 지도를 포함한다. 각각의 가능성은 본원에 제공된 개별적인 실시예를 나타낸다.

9. 면역조직화학(IHC) 분석에 의해 PD-L1 발현에 대하여 양성인 전립선암 환자의 치료에 약제를 사용하도록 의도하는 지도가 기술되어있는 실시예 8의 키트.

10. PD-1 길항제가 단클론 항체 또는 그의 항체 결합 단편인, 실시예 1 내지 9 중 하나의 방법, 약제, 키트의 용도.

11. PD-1 길항제가 MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C 또는 WO2013/019906의 서열번호 24와 서열번호 21 각각의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 단클론 항체인, 실시예 9의 방법, 약제, 키트의 용도.

12. PD-1 길항제가 단클론 항체 또는 그의 항원 결합 단편이고, PD-L1 및 PD-L2의 PD-1에 대한 결합을 차단하는, 실시예 10 의 방법, 약제, 키트의 용도.

13. 단클론 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 (a) 서열번호 1, 2 및 3의 경쇄 CDR 및 서열번호 4, 5 및 6의 중쇄 CDR; 또는 (b) 서열번호 7, 8 및 9의 경쇄 CDR 및 서열번호 10, 11 및 12의 중쇄 CDR을 포함하는, 실시예 12 의 방법, 약제, 키트의 용도.

14. 단클론 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열번호 7, 8 및 9의 경쇄 CDR 및 서열번호 10, 11 및 12의 중쇄 CDR을 포함하는, 실시예 12 의 방법, 약제, 키트의 용도.

15. PD-1 길항제가 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-PD-1 단클론 항체이고, 상기 중쇄는 서열번호 21을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호 22를 포함하는, 실시예 12의 방법, 약제, 키트의 용도.

16. PD-1 길항제가 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-PD-1 단클론 항체이고, 상기 중쇄는 서열번호 23을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호 24를 포함하는, 실시예 12의 방법, 약제, 키트의 용도.

17. 전립선암은 전이성인, 실시예 10-16 중 하나의 방법, 약제, 키트의 용도.

18. 암은 전이성의 거세 저항성 전립선암(mCRPC)인, 실시예 17의 방법, 약제, 키트의 용도.

19. 환자는 전립선암에 대한 치료를 미리 받지 않았던, 실시예 10-18 중 하나의 방법, 약제, 키트의 용도.

20. 환자는 전립선암에 대한 치료를 미리 받았던, 실시예 10-18 중 하나의 방법, 약제, 키트의 용도.

21. 전립선암은 PD-L1에 대한 양성 검사를 받는 것인, 실시예 10-20 중 하나의 방법, 약제, 키트의 용도.

22. PD-L1 발현이 높아지는, 실시예 21의 방법, 약제, 키트의 용도.

23. PD-1 길항제가 MK-3475 또는 니볼루맙인, 실시예 12의 방법, 약제, 키트의 용도.

24. MK-3475가 10 mM 히스티딘 완충액(pH 5.5) 내에 25 mg/ml MK-3475, 7% (w/v) 수크로스, 0.02% (w/v) 폴리소베이트 80을 포함하는 액체 약제로 제형화되는, 실시예 25의 방법, 약제, 키트의 용도.

25. 약독화 리스테리아가 LmddA-142 or LmddA-143인 실시예 1 내지 24 중 하나의 방법, 약제, 키트의 용도.

26. PD-1 길항제가 MK-3475이고, 약독화 리스테리아는 LmddA-142 or LmddA-143이고, 환자는 전이성 전립선암을 진단받고, PD-1 길항제 및 약독화 리스테리아의 투여량은 하기 표에 있는 조합들 중 하나로 구성되는 군으로부터 선택되는, 실시예 1 내지 25 중 하나의 방법, 약제, 키트의 용도:

일반적 방법

분자 생물학에서의 표준 방법은 Sambrook, Fritsch and Maniatis(1982 & 1989 제2판, 2001 제3판) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell(2001) Molecular Cloning, 제3판, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu(1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA)에 기술되어 있다. 또한, 분자 생물학에서의 표준 방법은 Ausbel 등 (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols .1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, 여기에서는 세균 세포에서의 클로닝과 DNA 돌연변이 유발(Vol.1), 포유 동물 세포와 효모에서의 복제(Vol.2), 복합 형질전환체와 단백질 발현(Vol.3), 및 생물 정보학(Vol.4)에 대해 설명하고있다.

면역 침강, 크로마토그래피, 전기영동, 원심분리 및 결정화를 포함하는 단백질 정제 방법이 기술되어있다(Coligan 등(2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). 화학 분석, 화학적 개질, 번역 후 개질, 융합 단백질의 생산, 단백질의 당화가 기술되어있다(예를 들어, 다음을 참조: Coligan 등 (2000), Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, 등 (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391). 다클론 항체와 단일클론 항체의 생산, 정제 및 단편화가 기술되어있다(Coligan 등 (2001) Current Protcols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, supra). 리간드/수용체 상호작용을 특성화하기 위한 표준 기술을 사용할 수 있다(예컨대, Coligan 등 (2001), Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York 참조).

단일 클론 항체, 다클론 항체 및 인간화 항체를 제조할 수 있다(예컨대, 다음을 참조: Sheperd and Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter, 등 (2000) J. Immunol. 165:6205; He, 등 (1998) J. Immunol. 160:1029; Tang 등 (1999) J. Biol. Chem. 274:27371-27378; Baca 등 (1997) J. Biol . Chem. 272:10678-10684; Chothia 등 (1989) Nature 342:877-883; Foote and Winter (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499; 미국 특허 제6,329,511호).

인간화에 대한 대안은 형질전환 마우스에서 파지(phage)나 인간 항체 라이브러리 상에 표시된 인간 항체 라이브러리를 사용하는 것이다 Vaughan 등(1996) Nature Biotechnol. 14:309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1:837-839; Mendez 등 (1997) Nature Genetics 15:146-156; Hoogenboom and Chames (2000) Immunol. Today 21:371-377; Barbas 등 (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay 등 (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin 등 (1999) Nature Biotechnol . 17:397-399).

항원의 정제는 항체 생성에 필요하지 않다. 대상 항원을 보유한 세포로 동물을 면역화 할 수 있다. 이어서, 면역화 된 동물로부터 비장 세포를 단리할 수 있고, 비장 세포를 골수종 세포주와 융합시켜 하이브리도마(hybridoma)를 생산할 수있다(예컨대, 다음을 참조: Meyaard 등(1997) Immunity 7:283-290; Wright 등 (2000) Immunity 13:233-242; Preston 등, supra; Kaithamana 등 (1999) J. Immunol. 163:5157-5164).

항체는 예컨대 작은 약물 분자, 효소, 리포좀, 폴리에틸렌글리콜(PEG)에 접합할 수 있다. 항체는 치료, 진단, 키트 또는 기타 목적에 유용하며, 예컨대, 염료, 방사성 동위원소, 효소 또는 금속(예를 들어, 콜로이드성 금)을 포함한다(예컨대, 다음을 참조: Le Doussal 등(1991) J. Immunol. 146:169-175; Gibellini 등 (1998) J. Immunol. 160:3891-3898; Hsing and Bishop (1999) J. Immunol. 162:2804-2811; Everts 등 (2002) J. Immunol. 168:883-889).

형광 활성화 세포 분류(FACS)를 포함한 유동 세포 계측법을 이용할 수 있다(예컨대, 다음을 참조: Owens, 등(1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry , 2 ^nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). 예컨대 진단 시약으로 사용하기 위한, 핵산 프라이머와 프로브를 포함한 핵산, 폴리펩타이드 및 항체를 개질하는 데 적합한 형광 시약이 사용될 수 있다((Molecular Probesy(2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich(2003) Catalogue, St. Louis, MO).

면역계의 조직학적 표준 방법들이 기술되어있다(예컨대, 다음을 참조: Muller-Harmelink(ed.)(1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, 등 (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA; Louis, 등 (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY).

예를 들어 항원, 항원 단편, 리더 서열, 단백질 접힘, 기능성 도메인, 당화 부위 및 서열 정렬을 결정하기위한 소프트웨어 패키지 및 데이터베이스를 이용할 수 있다(예컨대, 다음을 참조: GenBank, Vector NTI® Suite(Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package(Accelrys, Inc., San Diego, CA); DeCypher®(TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, 등 (2000) Bioinformatics 16: 741-742; Menne, 등 (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741-742; Wren, 등 (2002) Comput . Methods Programs Biomed . 68:177-181; von Heijne (1983) Eur . J. Biochem . 133:17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690).

표 3은 서열 목록의 서열에 대한 간략한 설명을 제공한다.

서열번호:	설명
1	hPD-1.08A 경쇄 CDR1
2	hPD-1.08A 경쇄 CDR2
3	hPD-1-08A 경쇄 CDR3
4	hPD-1.08A 중쇄 CDR1
5	hPD-1.08A 중쇄 CDR2
6	hPD-1.08A 중쇄 CDR3
7	hPD-1.09A 경쇄 CDR1
8	hPD-1.09A 경쇄 CDR2
9	hPD-1.09A 경쇄 CDR3
10	hPD-1.09A 중쇄 CDR1
11	hPD-1.09A 중쇄 CDR2
12	hPD-1.09A 중쇄 CDR3
13	109A-H 중쇄 가변 영역
14	409A-H 중쇄 전장
15	K09A-L-11 경쇄 가변 영역
16	K09A-L-16 경쇄 가변 영역
17	K09A-L-17 경쇄 가변 영역
18	K09A-L-11 경쇄 전장
19	K09A-L-16 경쇄 전장
20	K09A-L-17 경쇄 전장
21	MK-3475 중쇄
22	MK-3475 경쇄
23	니볼루맙 중쇄
24	니볼루맙 경쇄
25	KLK3 단백질
26	KLK3 단백질
27	KLK3 단백질
28	KLK3 단백질 암호화 뉴클레오티드
29	KLK3 단백질
30	KLK3 단백질 암호화 뉴클레오티드
31	KLK3 단백질
32	KLK3 단백질 암호화 뉴클레오티드
33	KLK3 단백질
34	KLK3 단백질 암호화 뉴클레오티드
35	KLK3 단백질
36	KLK3 단백질 암호화 뉴클레오티드
37	KLK3 단백질
38	KLK3 단백질 암호화 뉴클레오티드
39	KLK3 단백질
40	KLK3 단백질 암호화 뉴클레오티드
41	KLK3 단백질
42	KLK3 단백질
43	KLK3 단백질
44	KLK3 단백질
45	KLK3 단백질 암호화 뉴클레오티드
46	프라이머 Adv60-PSA
47	프라이머 Adv61-PSA
48	tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드
49	LLO PEST 서열
50	KLK3 단백질
51	KLK3 단백질
52	KLK3 단백질
53	LLO 폴리펩타이드
54	LLO 폴리펩타이드
55	LLO 폴리펩타이드
56	ActA PEST 서열
57	ActA PEST 서열
58	ActA PEST 서열
59	ActA PEST 서열
60	스트렙토코커스 파이오제네스 스트렙토리신n O PEST 서열
61	스트렙토코커스 에퀴지밀리스 스트렙토리신 O PEST 유사 서열
62	pADV142 핵산 서열
63	KLK3 단백질
64	KLK3 단백질
65	KLK3 단백질
66	KLK3 단백질

본 발명의 재조합 Lm은 전립선암의 마우스 모델에서 종양의 퇴행과 연관된 강력한 PSA 특이적 면역반응을 유도하는 tLLO(Lm-LLO-PSA)에 융합된 PSA를 분비한다. LmddA-142 균주 및 LmddA-143 균주를 생성하는 데 사용된 벡터에 대한 상세내용은 하기 표 4에 제공된다. 항생제 내성 마커가 없는 pADV142 플라스미드를 사용하여 LmddA -142 균주를 생성하였다. 이 새로운 균주는 Lm-LLO-PSA보다 10 배 이상 약독화되어 있다. 게다가, LmddA-142는 Lm-LLO-PSA보다 약간 더 면역원성이 있고 종양을 발현하는 PSA의 퇴행에 있어 현저하게 더 효과적이다.

플라스미드 및 균주

플라스미드	특징
pADV119	prfA 유전자 결실에 의한 pTV3 유래
pADV134	Bacillus dal 유전자 에 의한 Lm dal 유전자 교체에 의한 pADV119 유래
pADV142	klk3에 의한 HPV16 e7 교체에 의한 pADV134 유래(그림 9B의 맵, 시퀀스 9C)

균주	유전자형
10403S	야생형 리스테리아 모노사이토젠:: str
XFL-7	10403S prfA ^(-)
Lmdd	10403S dal ^(-) dat ^(-)
LmddA	10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-)
LmddA -142	10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142
Lmdd -143	염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3 함유 10403S dal ^(-) dat ^(-)
LmddA -143	염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3를 가지는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) (도 8은 염색체 구조를 나타내며 도 9a는 pADV143 플라스미드 지도를 나타낸다)

플라스미드 pAdv142 (6523 bp)의 서열은 다음과 같았다:

(서열번호: 62). (도9C) 이 플라스미드는 2-20-08에서 대장균 균주로부터 Genewiz 시설에서 시퀀싱되었다. 플라스미드의 맵은 도 9b로서 나타낸다.

참조문헌

1 Sharpe, A.H, Wherry, E.J., Ahmed R., and Freeman G.J. The function of programmed cell death 1 and its ligands in regulating autoimmunity and infection. Nature Immunology (2007); 8:239-245.

2. Dong H 등. Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion. Nat Med. 2002 Aug;8(8):793-800.

3. Yang 등. PD-1 interaction contributes to the functional suppression of T-cell responses to human uveal melanoma cells in vitro. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2008 Jun;49(6 (2008): 49: 2518-2525.

4. Ghebeh 등. The B7-H1 (PD-L1) T lymphocyte-inhibitory molecule is expressed in breast cancer patients with infiltrating ductal carcinoma: correlation with important high-risk propgnostic factors. Neoplasia (2006) 8: 190-198.

5. Hamanishi J 등. Programmed cell death 1 ligand 1 and tumor-infiltrating CD8+ T lymphocytes are prognostic factors of human ovarian cancer. Proceeding of the National Academy of Sciences (2007): 104: 3360-3365.

6. Thompson RH 등 Significance of B7-H1 overexpression in kidney cancer. Clinical genitourin Cancer (2006): 5: 206-211.

7. Nomi, T. Sho, M., Akahori, T., 등. Clinical significance and therapeutic potential of the programmed death- 1 ligand/programmed death-1 pathway in human pancreatic cancer. Clinical Cancer Research (2007);13:2151-2157.

8. Ohigashi Y 등 Clinical significance of programmed death-1 ligand-1 and programmed death-1 ligand 2 expression in human esophageal cancer. Clin. Cancer Research (2005): 11: 2947-2953.

9. Inman 등. PD-L1 (B7-H1) expression by urothelial carcinoma of the bladder and BCG-induced granulomata: associations with localized stage progression. Cancer (2007): 109: 1499-1505.

10. Shimauchi T 등. Augmented expression of programmed death-1 in both neoplasmatic and nonneoplastic CD4+ T-cells in adult T-cell Leukemia/ Lymphoma. Int . J. Cancer (2007): 121:2585-2590.

11. Gao 등. Overexpression of PD-L1 significantly associates with tumor aggressiveness and postoperative recurrence in human hepatocellular carcinoma. Clinical Cancer Research (2009) 15: 971-979.

12. Nakanishi J. Overexpression of B7-H1 (PD-L1) significantly associates with tumor grade and postoperative prognosis in human urothelial cancers. Cancer Immunol Immunother. (2007) 56: 1173- 1182.

13. Hino 등. Tumor cell expression of programmed cell death-1 is a prognostic factor for malignant melanoma. Cancer (2010): 00: 1-9.

14. Ghebeh H. Foxp3+ tregs and B7-H1+/PD-1+ T lymphocytes co-infiltrate the tumor tissues of high-risk breast cancer patients: implication for immunotherapy. BMC Cancer. 2008 Feb 23;8:57.

15. Ahmadzadeh M 등 Tumor antigen-specific CD8 T cells infiltrating the tumor express high levels of PD-1 and are functionally impaired. Blood (2009) 114: 1537-1544.

16. Thompson RH 등 PD-1 is expressed by tumor infiltrating cells and is associated with poor outcome for patients with renal carcinoma. Clinical Cancer Research (2007) 15: 1757-1761.

본원에 인용된 모든 참고 문헌은 각각의 개별 간행물, 데이터베이스 항목(예를 들어, Genbank 서열 또는 GeneID 항목), 특허 출원 또는 특허가 참조로서 통합되도록 구체적으로, 개별적으로 나타낸 것처럼 동등한 정도로 참조로서 통합된다. 참조로서 통합에 대한 이러한 진술은 각 개별 간행물, 데이터베이스 항목(예컨대, Genbank 서열 또는 GeneID 항목), 특허 출원 또는 특허와 관련되도록 37 C.F.R.§1.57(b)(1)에 따라 출원인이 의도한 것이며, 이러한 인용이 참조로서 통합이라는 전적인 진술에 직접적으로 근접하지 않다 하더라도 각각 37 C.F.R.§1.57(b)(2)에 따라 명확히 구별된다. 참조로서 통합이라는 전적인 진술을 명세서 내에 설사 포함되어 있는 경우에도 참조로서 통합이라는 이러한 일반적인 진술을 어떤식으로든 약화시키지 않는다. 본원에서 참조문헌을 인용하는 것은 그 참조문헌이 관련 선행 기술임을 인정하는 것이 아니며, 이들 간행물 또는 문서의 내용 또는 날짜에 대한 어떠한 인정을 구성하지도 않는다.

다음의 예시에서, 다수의 특정 세부사항들이 본 발명의 완전한 이해를 제공하기 위해 설명된다. 그러나, 본 발명은 이들 특정 세부사항들 없이도 실시될 수 있음을 숙련자라면 이해할 것이다. 본 발명을 불명료하게 하지 않도록, 주지된 방법, 절차 및 성분들이 상세하게 설명되지 않았다.

실시예

이전에 치료된 거세 저항성 전립선암( mCRPC ) 환자에서 ADXS31 - 142 단독 투여 및 펨브롤리주맙(MK-3475) 병용 투여 시 1-2 단계 투여량 증대 및 안전성 연구

거세 저항성 전립선암(mCRPC) 환자에서 1-2 단계의, 공개 라벨의, 다기관의, 비무작위성, 2-부분 연구이다. 연구의 A 부분은 전이성 거세 저항성 전립선암(mCRPC) 환자에서 ADX31-142 단일 요법의 공개 라벨의, 1단계의, 다기관의, 무작위성, 투여량 결정 시험이 될 것이다. 연구의 B 부분은 mCRPC 환자에서 펨브롤리주맙(MK-3475)과 ADX31-142의 병용 치료제의 공개 라벨의, 1-2 단계의, 다기관의, 무작위성, 투여량 결정 시험이 될 것이다. 도 10은 본 연구의 단일 요법과 병용 요법의 도표를 나타낸다.

목적

A 부분: ADXS31-142 단독 요법의 안전성과 내약성의 평가 및 mCRPC 피험자에서 권장되는 2 단계 투여량(RP2D)을 선택

B 부분: 펨브롤리주맙(MK-3475)과 ADX31-142의 병용 요법의 안전성과 내약성의 평가 및 mCRPC 피험자에서 권장되는 RP2D를 선택

또한 본 연구의 목적은 RECIST 1.1, 고형 종양 내 면역 관련 반응 평가 기준(irRECIST) 및 전립선암 워킹 그룹 2(PCWG2) 기준을 이용하여 ADXS31-142 단독 요법과 ADXS31-142 + 펨브롤리주맙(MK-3475) 병용 요법의 항 종양 활성 및 무진행 생존(PFS) 신호를 평가하여, 후속 무작위 2 단계 시험의 설계를 알려주는 것을 포함한다. ADXS31-142 단독 요법과 ADXS31-142 + 펨브롤리주맙(MK-3475) 병용 요법의 혈청 전립선 특이 항원(PSA) 및 말초 면역 척도에 미치는 영향이 결정될 것이다.

제품 설명

이 제품들 각각은 위에 자세히 설명되어 있다.

ADXS31-142는 2.7 x 10⁹ cfu/mL의 농도로 주입용 농축 현탁액으로 제공될 것이다; 1.2 mL/바이알.

펨브롤리주맙(MK-3475)은 다음 두 가지 다른 형태로 제공 될 수 있다: (1) 주입용 동결건조된 분말(50 ㎎); 및 (2) 25mg / mL의 농도의 주입용 용액.

A 부분-ADXS31-124 단독요법

재료 및 방법

피험자

이 연구는 조직학적으로 mCRPC로 확인되고, 전이성 환경에서 화학 요법, 호르몬 또는 면역 요법으로 이전에 3 회 이하의 전신적 치료 요법이 진행되었거나 이에 대한 저항성이 있는 확인된 남성 피험자(18 세 이상)로서, 0-1의 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group)의 적절한 성능 상태를 가지는 남성환자에서 수행될 것이다. 그러나, 피험자는 전이성 환경에서 1 개를 초과하는 이전의 화학적 치료 요법을 받을 수는 없다. 진행성 뼈 또는 다른 전이의 증거가 있는 피험자는 허용 가능하다. 시험 기간 동안 피험자는 거세 요법(황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH) 작용제 또는 길항제)을 유지할 수 있다.

투여량:

투여량 결정 단계는 Part B에 대해 권장되는 2단계 투여량(RP2D)을 선택하기 위한 단계이다. ADSX31-142 단독 요법의 시작 투여량 레벨(DL)은 1 x 10⁹콜로니 형성 단위(cfu)(DL 1)이다. 이러한 투여량은 수정된 독성 확률 간격(mTPI) 설계를 적용하여 DLT 율 ≤ 0.25와 연관된 사전 정의된 투여량 제한 독성(DLT) 기준에 따라 단계적으로 증가(5 x 10⁹ cfu, 1 x 10¹⁰ cfu), 동일량으로 유지, 혹은 감소될 것이다. 표 5는 사용될 ADXS31-142 단독 치료의 투여량을 요약한 것이다.

투여량 레벨	투여량	투여 경로	요법
1	1 x 10⁹ cfu	정맥내 주입	12주 주기의 1주, 4주 및 7주의 1일
2	5 x 10⁹ cfu	정맥내 주입	12주 주기의 1주, 4주 및 7주의 1일
3	1 x 10¹⁰ cfu	정맥내 주입	12주 주기의 1주, 4주 및 7주의 1일
-1	.5 x 10⁹ cfu	정맥내 주입	12주 주기의 1주, 4주 및 7주의 1일

최대 21 명의 피험자가 참가하게 될 것이다(다음 단계로 진행하기 전에 최소 6명의 피험자가 권장 복용량으로 치료 됨). 투여량 증가가 결정되기 전에 최소 3 명의 피험자가 각 코호트에서 평가될 것이다.

아래의 표 6은 ADSX31-142-단일요법에 대한 투여량 결정을 나타낸다.

샘플 크기 = 21; 목표 독성 확률 = 0.25; 엡실론 1 = 0.05; 엡실론 2 = 0.05

증대

유지

감소

부적절

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

0

E

1

D

S

E

2

DU

D

S

E

3

DU

D

S

E

4

DU

D

S

5

DU

d

S

6

DU

D

S

7

DU

S

8

DU

S

9

DU

10

DU

11

DU

12

DU

13

DU

14

DU

15

DU

16

DU

17

DU

18

DU

19

DU

20

DU

21

DU

표 6은 21 명의 피험자의 샘플 크기를 기준으로 한다. 두 개의 파라미터 엡실론1과 엡실론2는 기본값 0.05로 설정된다. x 축은 현재 투여량으로 치료받는 피험자 수; y 축은 독성의 수이다.

권장 ADXS31-142 단일 요법 투여량에서 25 % DLT 비율이 관찰되는 경우, 목표 투여량 제한 독성(DLT) 비율이 복합 요법(B 부분)에 대해서는 30 %까지 증가할 것이다.

동일한 DLT 기준이 A 부분 및 B 부분 연구에 활용 될 것이다. 모든 독성은 CTCAE Version 4.0을 이용하여 등급이 매겨질 것이다. DLT 관찰 기간은(각 약물 2 회 복용 후) 4 주가 될 것이다. 다음과 같은 독성의 발생은 조사자가 연구 치료 관리와 관련 가능성이 있거나 아마도 혹은 분명히 관련이 있다고 판단되면 DLT로 간주될 것이다.

평가변수

유효성 평가변수 - 본 연구에서 사용된 유효성 평가변수(PSA/PAP, 전립선암의 다른 혈청 표지자, 스캔, 및 측정 가능하고 평가 가능한 질병 평가)는 일반적으로 mCRPC의 항-종양 활성을 평가하는 데 사용되는 것들이다.

안전성 평가변수 - 이 시험의 주요 안전성 목적은 ADXS31-142만의 안전성과 내약성을 특성화하는 것이다. 1차 안전성 분석은 CTCAE 기준에 의해 정의된 바와 같은 독성을 경험한 피험자를 기초로 할 것이다. 심각한 부작용(SAEs)과 임상적 관심(ECIs)의 경우를 포함하여, ADXS31-142를 단독으로 투여받은 피험자가 경험한 독성 및 등급을 정량화하여 안전성을 평가할 것이다.

생체표지

PSMA, PAP 및 전립선 줄기 세포 항원(PSCA)을 포함할 수 있는 다른 전립선암항원 및 PSA에 대한 특이적인 반응에 대해 T 세포가 평가될 것이다. T 세포 반응은 효소결합면역분석(ELISA) 및/또는 ELISpot에 의해 판단될 것이다. PBMC 면역학적 유전자 발현 분석도 또한 수행될 수 있다.

혈청 사이토카인 및 케모카인 변화는 치료의 결과로서 면역 자극을 평가하기 위해 판단될 것이다. 혈청 사이토카인 레벨은 IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, 형질전환 성장인자 베타(TGFβ), 및 종양 괴사인자 알파(TNFα)를 포함할 것이다. 혈청 케모카인은 CXCL 9, 10, and 11를 포함할 것이다.

투여 경로

ADSX31-142 단독 요법은 의학적으로 훈련된 요원에 의한 정맥 내 주사에 의해 투여될 것이다.

요법

ADSX31-142 단독 요법은 12주 치료주기에서 3주마다 한번인, 1주, 4주, 7주의 1 일째에 투여될 것이다. 시험 치료는 행정상의 이유로 각 주기의 예정된 1일째의 이전 또는 이후 3 일까지 투여될 수 있다.

모든 시험 치료는 30 분간의 정맥 내 주입으로 투여될 것이다(치료주기 간격은 독성으로 인해 증가될 수 있음). A 부분에서는 NSAIDs(나프록센 또는 이부프로펜)와 항염제를 ADXS31-142 주입 30 분 전에 투여해야 한다.

종양 영상 및 질병 평가

컴퓨터 단층 촬영(CT), 자기 공명 영상(MRI) 또는 뼈 스캔은 반응 평가를 위해 선택된 표적 병변을 측정하기 위해 현재 이용 가능하고 재현가능한 최선의 방법으로 여겨진다. 복부/골반의 종래 CT와 MRI는 10mm 이하의 인접한 절개로 수행되어야 한다. 나선형 CT 스캔은 5mm 연속 재구성 알고리즘을 이용하여 수행되어야 한다(일반적으로 병변 직경은 슬라이스 두께의 두 배 이상이어야 함). 흉부 엑스선 상에서의 병변은 명확하게 정의되고 통기성 폐에 둘러싸여 있는 경우 측정 가능한 병변으로 받아들여질 수 있지만, CT가 바람직하다. 초음파는 질병을 측정할 수있는 적절한 방법이 아니다.

측정 가능한 병변 및 질병, 그리고 측정 불가능한 병변 및 질병

측정 가능한 병변은 가장 긴 지름이 2.0cm 이상(나선형 CT 스캔 또는 MRI 스캔에서는, 1.0cm 이상)인 적어도 1 차원에서 정확하게 측정할 수 있는 병변일 것이다. 피험자가 하나 이상의 측정 가능한 병변을 가지고 있다면 측정 가능한 질병이 존재할 것이다.

측정 불가능한 병변/질병은 작은 병변(나선 CT로 2.0cm 미만 또는 MRI로 1.0cm 미만의 모든 측정치들을 가진 병변) 또는 다음과 같은 병변 중 어느 것을 포함하는 모든 다른 병변(또는 질병 부위)이 될 것이다: 뼈 병변, 연수막 질병, 복수, 늑막 또는 심낭 삼출, 림프관염, 절판/ 폐동맥, 확인되지 않아 이후의 영상 기술에 의해서도 확인되지 않는 복부 종괴, 낭성 병변, 및 방사선 치료 완료 이후 새로운 병변으로 기재되지 않는 경우에 이전에 조사된 영역 내에서 발생하는 병변.

표적/비표적 병변

모든 측정 가능한 병변(기관 당 최대 2군데 , 총 5 군데)을 기준선에서 측정하고 기록할 표적 병변으로 식별해야 한다. 표적 병변은 모든 연관 기관을 대표해야 한다. 표적 병변은 크기(가장 긴 직경을 가지는 병변)와 정확한 반복 측정에 대한 적합성을 기준으로 선택될 것이다. 기준선에서, 모든 표적 병변에 대해 가장 긴 직경의 합이 계산되어 기준선 종양 부하로 기록될 것이다. 기준선 합계는 표적 병변의 객관적 종양 반응을 결정하기위한 기준점으로 사용될 것이다.

표적 병변 및 모든 측정 불가능한 질병 부위들 이외의 측정 가능한 병변은 비표적 병변으로 구별되고 기준선에서 기록될 것이다. 비표적 병변은 표적 병변과 동일한 시점에서 평가될 것이다.

측정 가능한 병변에서의 반응(RECIST 1.1)

기준선에서, 모든 표적 병변(장기 당 최대 2 개의 병변, 최대 총 5 개의 병변)의 가장 긴 직경의 합(SumD)이 측정된다. 이어지는 각각의 종양 평가(TA)에서 표적 병변의 SumD 및 새로운 측정 가능한 병변의 SumD를 합산하여 총 측정가능한 종양 부하(TMTB)를 제공한다:

TMTB = 표적 병변 합계 + 새롭고 측정가능한 병변 합계

평가시점 당 TMTB의 백분율 변화는, 발생한 오래된 그리고 새로운 측정가능한 병변의 크기 및 성장 동력을 나타낸다. 각 TA에서, 표적 및 새로운 측정가능한 병변에서의 반응은 다음과 같이 TMTB의 변화(irPD를 배제한 후)에 기초하여 정의된다:

완전한 반응(CR): 모든 표적 병변의 소멸 어떠한 병리학적 림프절(표적이든 비표적이든)도 짧은 축에서의 감소가 10mm 이하 까지어야 한다.

부분 반응(PR): 총 기준선 합계 직경을 기준으로 하여 표적 병변의 직경의 합의 적어도 30% 감소.

안정적인 질병(SD): 부분 반응(PR)을 위한 충분한 수축과 충분한 증량이 없음

진행성 질병(PD): 연구에서의 가장 적은 합계(이는 연구에서의 가장 적은 경우의 기준선을 포함함)를 기준으로 하여 표적 병변 직경의 합계의 최소 20 % 증가. 20 %의 상대 증가 이외에도, 합계는 적어도 5mm의 절대 증가를 보여야 한다. (참고: 하나 이상의 새로운 병변의 출현도 진행으로 간주됨)

측정 불가능한 병변에서의 반응도 평가될 것이다.

B 부분 - ADSX31-142 + 펨브롤리주맙(MK-3475) 복합 요법

재료 및 방법

피험자

피험자는 본 연구의 A 부분에서 이미 기술하였다. B 부분의 피험자는 동일한 모집단 기준에 따라 본 연구에 포함될 것이다. 계획은 RP2D에서 총 30명의 피험자를 치료하는 것이다.

투여량

B 부분은 투여량 결정 단계와 이후의 확장 코호트 단계로 이루어질 것이다. 투여량 결정 단계는 병용요법을 위한 RP2D를 선택하기위한 단계이다. mTPI 설계를 적용하여 투여량 확대/축소 과정을 탐구할 것이다.

투여량 결정 단계에서, 200 mg의 펨브롤리주맙(MK-3475)과 병용되는 ADXS31-142(표 7 참조)의 증가된 투여량으로 최대 21 명의 피험자가 참가하게 될 것이다(최소 6 명의 피험자는 확장으로 진행 전에RP2D에서 치료됨). 투여량 결정은 예비 최대 허용 투여량/최대 허용 투여량(MTD/MAD)이 확인될 때까지는 ADXS31-142의 최대 투여량이 1 x 10¹⁰ cfu까지 계속될 것이다. MTD/MAD는 투여량 확장 부분에 대한 RP2D이다. MTD가 확인되지 않으면, 펨브롤리주맙(MK-3475)과 병용투여되는 ADXS31-142의 계획된 최고 투여량 레벨이 RP2D로 간주될 것이다. 펨브롤리주맙(MK-3475)은 200 mg에서 일정하게 유지된다.

B 부분에 사용될 ADXS31-142 및 펨브롤리주맙(MK-3475) 복합 치료 투여량

약물	투여량 레벨	투여량	투여 경로	요법
ADXS31-142	1	A 부분에서의 RP2D 보다 1 레벨 아래	정맥내 주입	12주 주기의 1주, 4주 및 7주의 1일째
	2	A 부분의 RP2D	정맥내 주입	12주 주기의 1주, 4주 및 7주의 1일째
	-1	A 부분에서의 RP2D 보다 2 레벨 아래	정맥내 주입	12주 주기의 1주, 4주 및 7주의 1일째
펨브롤리주맙 (MK-3475)		200 mg	정맥내 주입	12주 주기의 매 3주의 1일째

본 연구의 A 부분에 대해서는, ADXS31-142의 예상 투여량은 0.5 x 10⁹, 1 x 10⁹, 5 x 1⁰⁹, 및 1 x 10¹⁰이다.

일단 펨브롤리주맙(MK-3475)과 병용되는 ADXS31-142의 RP2D가 B 부분의 투여량 결정 단계에서 선택되면, 확장 코호트가 등록을 위해 개방될 것이다. RP2D에 대한 추가 평가는 mCRPC 환자 30 명을 대상으로 펨브롤리주맙(MK-3475)과 병용되는 ADXS31-142의 안전성 및 임상 활성을 평가할 예정이다.

아래의 표 8은 병용 요법에 대한 투여량 결정을 나타낸다.

샘플 크기 = 21; 목표 독성 확률 = 0.3; 엡실론 1 = 0.05; 엡실론 2 = 0.05

증대

유지

감소

부적절

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

0

E

1

D

S

E

2

DU

D

S

E

3

DU

D

S

E

4

DU

D

S

E

5

DU

D

S

6

DU

D

S

7

DU

D

S

8

DU

D

S

9

DU

S

10

DU

11

DU

12

DU

13

DU

14

DU

15

DU

16

DU

17

DU

18

DU

19

DU

20

DU

21

DU

부작용은 NCI(National Cancer Institute)의 CTCAE(Common Terminology Criteria for Adverse Events) 버전 4.0에 명시된 지침에 따라 정보에 입각한 동의가 획득되고 중증도 등급이 매겨질 때부터 감시될 것이다.

펨브롤리주맙(MK-3475)과 ADXS31-142의 병용투여에 의한 치료는 문서화된 질병 진행, 부적절한 부작용(들), 치료의 추가 관리를 방해하는 병발성 질환, 연구원의 피험자 철회 결정, 피험자 동의 철회, 피험자의 완전 반응(irCR)의 경험 및 추가 1 주기의 치료를 받음, 시험 치료나 절차 요구 사항 미준수, ADXS31142 및 펨브롤리주맙(MK-3475)의 24 개월간 병용치료 완료, 또는 행정상 이유 때까지 계속될 것이다. 최소 2주기의 치료를 받은 후 연구원이 확인한 irCR에 이른 피험자는 펨브롤리주맙(MK-3475)을 중단하고 ADXS31-142만으로 치료를 계속할 것을 고려할 수 있다. 치료가 끝난 후, 마지막 연구용 약물 투여 후 30 일 동안 부작용에 대해, 그리고 심각한 부작용 사례 혹은 임상적 관심의 감시 사례에 대해서는 90 일 동안 각 피험자를 추적할 것이다. 질병 진행 이외의 이유로 치료를 중단하는 피험자는 질병의 진행, 비연구용 암 치료의 개시, 동의 철회, 후속 조치 상실 때까지, 또는 후원자가 본 연구를 종료할 때까지 질병 상태에 대한 치료 후속 조치를 취하게 될 것이다. 시험의 주요 목적은 MTD 또는 MAD를 설정하여 mCRPC 피험자에서 펨브롤리주맙(MK-3475)과 ADXS31-142 병용의 안전성 및 내약성을 판단하는 것이다.

효능 및 안전성 평가변수는 본 연구의 A 부분에 기술된 바와 같다.

생체표지 연구는 본 연구의 A 부분에 기술된 바와 같다.

투여 경로

ADSX31-142 및 펨브롤리주맙(MK-3475)는 각각 의학적으로 훈련된 요원에 의한 정맥 내 주입으로 투여될 것이다.

요법

모든 절차/평가가 완료된 후 매 12 주 주기마다 1주, 4주, 7 주(ADXS31-142에 대해) 또는 매 3주 마다(펨브롤리주맙[MK-3475]에 대해) 1 일째에 시험 치료를 실시해야 한다. 시험 치료는 행정상의 이유로 각 주기의 예정된 1일째의 이전 또는 이후 3 일까지 투여될 수 있다.

모든 시험 치료는 30분간의 정맥 내 주입으로 실시된다(독성으로 인해 치료주기가 증가 할 수 있음). 첫 번째 주입 종료와 두 번째 주입 시작 사이는 약 60분이어야 한다. 펨브롤리주맙(MK-3475) 주입이 먼저 실시될 것이다.

표적 및 비표적 병변의 평가는 위의 A 부분에서 설명한 바와 같다.

SEQUENCE LISTING <110> Advaxis, Inc. Merck Sharpe and Dohme Corp. PETIT, Robert PERINI, Rodolfo F. MAURO, David J. <120> COMBINATION OF A PD-1 ANTAGONIST AND A LISTERIA-BASED VACCINE FOR TREATING PROSTATE CANCER <130> P-78441-US <140> US 14/802,607 <141> 2015-07-17 <150> US 15/999999 <151> 2015-07-16 <150> US 62/039,011 <151> 2014-08-14 <160> 66 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Light Chain CDR <400> 1 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Phe Ser Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Light Chain CDR <400> 2 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Light Chain CDR <400> 3 Gln His Ser Trp Glu Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Heavy Chain CDR <400> 4 Ser Tyr Tyr Leu Tyr 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Heavy Chain CDR <400> 5 Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Heavy Chain CDR <400> 6 Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 7 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Light Chain CDR <400> 7 Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Light Chain CDR <400> 8 Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Light Chain CDR <400> 9 Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Heavy Chain CDR <400> 10 Asn Tyr Tyr Met Tyr 1 5 <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Heavy Chain CDR <400> 11 Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Heavy Chain CDR <400> 12 Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 13 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody Heavy Chain Variable Region <400> 13 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 14 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody Heavy Chain <400> 14 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 15 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody Light Chain Variable Region <400> 15 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 16 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody Light Chain Variable Region <400> 16 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 17 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody Light Chain Variable Region <400> 17 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 18 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody Light Chain <400> 18 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 19 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody Light Chain <400> 19 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 20 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody Light Chain <400> 20 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 21 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody Heavy Chain <400> 21 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 22 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody Light Chain <400> 22 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 23 <211> 440 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 115 120 125 Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 130 135 140 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 145 150 155 160 Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys 180 185 190 Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 195 200 205 Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala 210 215 220 Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 245 250 255 Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 260 265 270 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 275 280 285 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 290 295 300 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 305 310 315 320 Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 325 330 335 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr 340 345 350 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 355 360 365 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 370 375 380 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 385 390 395 400 Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe 405 410 415 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 420 425 430 Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 24 <211> 214 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 25 <211> 261 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu 115 120 125 Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln 130 135 140 Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile 145 150 155 160 Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu 165 170 175 His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val 180 185 190 Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr 195 200 205 Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Gly Val Leu Gln 210 215 220 Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro 225 230 235 240 Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr 245 250 255 Ile Val Ala Asn Pro 260 <210> 26 <211> 237 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val 1 5 10 15 Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala Val Cys Gly Gly Val Leu Val His 20 25 30 Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val 35 40 45 Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln 50 55 60 Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser 65 70 75 80 Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp 85 90 95 Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val 100 105 110 Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys 115 120 125 Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro 130 135 140 Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys 145 150 155 160 Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly 165 170 175 Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro 180 185 190 Leu Val Cys Tyr Gly Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu 195 200 205 Pro Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His 210 215 220 Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr Ile Val Ala Asn Pro 225 230 235 <210> 27 <211> 237 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val 1 5 10 15 Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala Val Cys Gly Gly Val Leu Val His 20 25 30 Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val 35 40 45 Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln 50 55 60 Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser 65 70 75 80 Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp 85 90 95 Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val 100 105 110 Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys 115 120 125 Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro 130 135 140 Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys 145 150 155 160 Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly 165 170 175 Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro 180 185 190 Leu Val Cys Asn Gly Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu 195 200 205 Pro Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His 210 215 220 Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr Ile Val Ala Asn Pro 225 230 235 <210> 28 <211> 5873 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 28 ggtgtcttag gcacactggt cttggagtgc aaaggatcta ggcacgtgag gctttgtatg 60 aagaatcggg gatcgtaccc accccctgtt tctgtttcat cctgggcatg tctcctctgc 120 ctttgtcccc tagatgaagt ctccatgagc tacaagggcc tggtgcatcc agggtgatct 180 agtaattgca gaacagcaag tgctagctct ccctcccctt ccacagctct gggtgtggga 240 gggggttgtc cagcctccag cagcatgggg agggccttgg tcagcctctg ggtgccagca 300 gggcaggggc ggagtcctgg ggaatgaagg ttttataggg ctcctggggg aggctcccca 360 gccccaagct taccacctgc acccggagag ctgtgtcacc atgtgggtcc cggttgtctt 420 cctcaccctg tccgtgacgt ggattggtga gaggggccat ggttgggggg atgcaggaga 480 gggagccagc cctgactgtc aagctgaggc tctttccccc ccaacccagc accccagccc 540 agacagggag ctgggctctt ttctgtctct cccagcccca cttcaagccc atacccccag 600 tcccctccat attgcaacag tcctcactcc cacaccaggt ccccgctccc tcccacttac 660 cccagaactt tcttcccatt tgcccagcca gctccctgct cccagctgct ttactaaagg 720 ggaagttcct gggcatctcc gtgtttctct ttgtggggct caaaacctcc aaggacctct 780 ctcaatgcca ttggttcctt ggaccgtatc actggtccat ctcctgagcc cctcaatcct 840 atcacagtct actgactttt cccattcagc tgtgagtgtc caaccctatc ccagagacct 900 tgatgcttgg cctcccaatc ttgccctagg atacccagat gccaaccaga cacctccttc 960 tttcctagcc aggctatctg gcctgagaca acaaatgggt ccctcagtct ggcaatggga 1020 ctctgagaac tcctcattcc ctgactctta gccccagact cttcattcag tggcccacat 1080 tttccttagg aaaaacatga gcatccccag ccacaactgc cagctctctg agtccccaaa 1140 tctgcatcct tttcaaaacc taaaaacaaa aagaaaaaca aataaaacaa aaccaactca 1200 gaccagaact gttttctcaa cctgggactt cctaaacttt ccaaaacctt cctcttccag 1260 caactgaacc tcgccataag gcacttatcc ctggttccta gcacccctta tcccctcaga 1320 atccacaact tgtaccaagt ttcccttctc ccagtccaag accccaaatc accacaaagg 1380 acccaatccc cagactcaag atatggtctg ggcgctgtct tgtgtctcct accctgatcc 1440 ctgggttcaa ctctgctccc agagcatgaa gcctctccac cagcaccagc caccaacctg 1500 caaacctagg gaagattgac agaattccca gcctttccca gctccccctg cccatgtccc 1560 aggactccca gccttggttc tctgcccccg tgtcttttca aacccacatc ctaaatccat 1620 ctcctatccg agtcccccag ttccccctgt caaccctgat tcccctgatc tagcaccccc 1680 tctgcaggcg ctgcgcccct catcctgtct cggattgtgg gaggctggga gtgcgagaag 1740 cattcccaac cctggcaggt gcttgtggcc tctcgtggca gggcagtctg cggcggtgtt 1800 ctggtgcacc cccagtgggt cctcacagct gcccactgca tcaggaagtg agtaggggcc 1860 tggggtctgg ggagcaggtg tctgtgtccc agaggaataa cagctgggca ttttccccag 1920 gataacctct aaggccagcc ttgggactgg gggagagagg gaaagttctg gttcaggtca 1980 catggggagg cagggttggg gctggaccac cctccccatg gctgcctggg tctccatctg 2040 tgtccctcta tgtctctttg tgtcgctttc attatgtctc ttggtaactg gcttcggttg 2100 tgtctctccg tgtgactatt ttgttctctc tctccctctc ttctctgtct tcagtctcca 2160 tatctccccc tctctctgtc cttctctggt ccctctctag ccagtgtgtc tcaccctgta 2220 tctctctgcc aggctctgtc tctcggtctc tgtctcacct gtgccttctc cctactgaac 2280 acacgcacgg gatgggcctg ggggaccctg agaaaaggaa gggctttggc tgggcgcggt 2340 ggctcacacc tgtaatccca gcactttggg aggccaaggc aggtagatca cctgaggtca 2400 ggagttcgag accagcctgg ccaactggtg aaaccccatc tctactaaaa atacaaaaaa 2460 ttagccaggc gtggtggcgc atgcctgtag tcccagctac tcaggagctg agggaggaga 2520 attgcattga acctggaggt tgaggttgca gtgagccgag accgtgccac tgcactccag 2580 cctgggtgac agagtgagac tccgcctcaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaga 2640 aaagaaaaga aaagaaaagg aagtgtttta tccctgatgt gtgtgggtat gagggtatga 2700 gagggcccct ctcactccat tccttctcca ggacatccct ccactcttgg gagacacaga 2760 gaagggctgg ttccagctgg agctgggagg ggcaattgag ggaggaggaa ggagaagggg 2820 gaaggaaaac agggtatggg ggaaaggacc ctggggagcg aagtggagga tacaaccttg 2880 ggcctgcagg caggctacct acccacttgg aaacccacgc caaagccgca tctacagctg 2940 agccactctg aggcctcccc tccccggcgg tccccactca gctccaaagt ctctctccct 3000 tttctctccc acactttatc atcccccgga ttcctctcta cttggttctc attcttcctt 3060 tgacttcctg cttccctttc tcattcatct gtttctcact ttctgcctgg ttttgttctt 3120 ctctctctct ttctctggcc catgtctgtt tctctatgtt tctgtctttt ctttctcatc 3180 ctgtgtattt tcggctcacc ttgtttgtca ctgttctccc ctctgccctt tcattctctc 3240 tgccctttta ccctcttcct tttcccttgg ttctctcagt tctgtatctg cccttcaccc 3300 tctcacactg ctgtttccca actcgttgtc tgtattttgg cctgaactgt gtcttcccaa 3360 ccctgtgttt tctcactgtt tctttttctc ttttggagcc tcctccttgc tcctctgtcc 3420 cttctctctt tccttatcat cctcgctcct cattcctgcg tctgcttcct ccccagcaaa 3480 agcgtgatct tgctgggtcg gcacagcctg tttcatcctg aagacacagg ccaggtattt 3540 caggtcagcc acagcttccc acacccgctc tacgatatga gcctcctgaa gaatcgattc 3600 ctcaggccag gtgatgactc cagccacgac ctcatgctgc tccgcctgtc agagcctgcc 3660 gagctcacgg atgctgtgaa ggtcatggac ctgcccaccc aggagccagc actggggacc 3720 acctgctacg cctcaggctg gggcagcatt gaaccagagg agtgtacgcc tgggccagat 3780 ggtgcagccg ggagcccaga tgcctgggtc tgagggagga ggggacagga ctcctgggtc 3840 tgagggagga gggccaagga accaggtggg gtccagccca caacagtgtt tttgcctggc 3900 ccgtagtctt gaccccaaag aaacttcagt gtgtggacct ccatgttatt tccaatgacg 3960 tgtgtgcgca agttcaccct cagaaggtga ccaagttcat gctgtgtgct ggacgctgga 4020 cagggggcaa aagcacctgc tcggtgagtc atccctactc ccaagatctt gagggaaagg 4080 tgagtgggac cttaattctg ggctggggtc tagaagccaa caaggcgtct gcctcccctg 4140 ctccccagct gtagccatgc cacctccccg tgtctcatct cattccctcc ttccctcttc 4200 tttgactccc tcaaggcaat aggttattct tacagcacaa ctcatctgtt cctgcgttca 4260 gcacacggtt actaggcacc tgctatgcac ccagcactgc cctagagcct gggacatagc 4320 agtgaacaga cagagagcag cccctccctt ctgtagcccc caagccagtg aggggcacag 4380 gcaggaacag ggaccacaac acagaaaagc tggagggtgt caggaggtga tcaggctctc 4440 ggggagggag aaggggtggg gagtgtgact gggaggagac atcctgcaga aggtgggagt 4500 gagcaaacac ctgcgcaggg gaggggaggg cctgcggcac ctgggggagc agagggaaca 4560 gcatctggcc aggcctggga ggaggggcct agagggcgtc aggagcagag aggaggttgc 4620 ctggctggag tgaaggatcg gggcagggtg cgagagggaa caaaggaccc ctcctgcagg 4680 gcctcacctg ggccacagga ggacactgct tttcctctga ggagtcagga actgtggatg 4740 gtgctggaca gaagcaggac agggcctggc tcaggtgtcc agaggctgcg ctggcctcct 4800 atgggatcag actgcaggga gggagggcag cagggatgtg gagggagtga tgatggggct 4860 gacctggggg tggctccagg cattgtcccc acctgggccc ttacccagcc tccctcacag 4920 gctcctggcc ctcagtctct cccctccact ccattctcca cctacccaca gtgggtcatt 4980 ctgatcaccg aactgaccat gccagccctg ccgatggtcc tccatggctc cctagtgccc 5040 tggagaggag gtgtctagtc agagagtagt cctggaaggt ggcctctgtg aggagccacg 5100 gggacagcat cctgcagatg gtcctggccc ttgtcccacc gacctgtcta caaggactgt 5160 cctcgtggac cctcccctct gcacaggagc tggaccctga agtcccttcc taccggccag 5220 gactggagcc cctacccctc tgttggaatc cctgcccacc ttcttctgga agtcggctct 5280 ggagacattt ctctcttctt ccaaagctgg gaactgctat ctgttatctg cctgtccagg 5340 tctgaaagat aggattgccc aggcagaaac tgggactgac ctatctcact ctctccctgc 5400 ttttaccctt agggtgattc tgggggccca cttgtctgta atggtgtgct tcaaggtatc 5460 acgtcatggg gcagtgaacc atgtgccctg cccgaaaggc cttccctgta caccaaggtg 5520 gtgcattacc ggaagtggat caaggacacc atcgtggcca acccctgagc acccctatca 5580 agtccctatt gtagtaaact tggaaccttg gaaatgacca ggccaagact caagcctccc 5640 cagttctact gacctttgtc cttaggtgtg aggtccaggg ttgctaggaa aagaaatcag 5700 cagacacagg tgtagaccag agtgtttctt aaatggtgta attttgtcct ctctgtgtcc 5760 tggggaatac tggccatgcc tggagacata tcactcaatt tctctgagga cacagttagg 5820 atggggtgtc tgtgttattt gtgggataca gagatgaaag aggggtggga tcc 5873 <210> 29 <211> 238 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu 115 120 125 Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln 130 135 140 Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile 145 150 155 160 Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu 165 170 175 His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val 180 185 190 Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr 195 200 205 Cys Ser Trp Val Ile Leu Ile Thr Glu Leu Thr Met Pro Ala Leu Pro 210 215 220 Met Val Leu His Gly Ser Leu Val Pro Trp Arg Gly Gly Val 225 230 235 <210> 30 <211> 1906 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 30 agccccaagc ttaccacctg cacccggaga gctgtgtcac catgtgggtc ccggttgtct 60 tcctcaccct gtccgtgacg tggattggtg ctgcacccct catcctgtct cggattgtgg 120 gaggctggga gtgcgagaag cattcccaac cctggcaggt gcttgtggcc tctcgtggca 180 gggcagtctg cggcggtgtt ctggtgcacc cccagtgggt cctcacagct gcccactgca 240 tcaggaacaa aagcgtgatc ttgctgggtc ggcacagcct gtttcatcct gaagacacag 300 gccaggtatt tcaggtcagc cacagcttcc cacacccgct ctacgatatg agcctcctga 360 agaatcgatt cctcaggcca ggtgatgact ccagccacga cctcatgctg ctccgcctgt 420 cagagcctgc cgagctcacg gatgctgtga aggtcatgga cctgcccacc caggagccag 480 cactggggac cacctgctac gcctcaggct ggggcagcat tgaaccagag gagttcttga 540 ccccaaagaa acttcagtgt gtggacctcc atgttatttc caatgacgtg tgtgcgcaag 600 ttcaccctca gaaggtgacc aagttcatgc tgtgtgctgg acgctggaca gggggcaaaa 660 gcacctgctc gtgggtcatt ctgatcaccg aactgaccat gccagccctg ccgatggtcc 720 tccatggctc cctagtgccc tggagaggag gtgtctagtc agagagtagt cctggaaggt 780 ggcctctgtg aggagccacg gggacagcat cctgcagatg gtcctggccc ttgtcccacc 840 gacctgtcta caaggactgt cctcgtggac cctcccctct gcacaggagc tggaccctga 900 agtcccttcc ccaccggcca ggactggagc ccctacccct ctgttggaat ccctgcccac 960 cttcttctgg aagtcggctc tggagacatt tctctcttct tccaaagctg ggaactgcta 1020 tctgttatct gcctgtccag gtctgaaaga taggattgcc caggcagaaa ctgggactga 1080 cctatctcac tctctccctg cttttaccct tagggtgatt ctgggggccc acttgtctgt 1140 aatggtgtgc ttcaaggtat cacgtcatgg ggcagtgaac catgtgccct gcccgaaagg 1200 ccttccctgt acaccaaggt ggtgcattac cggaagtgga tcaaggacac catcgtggcc 1260 aacccctgag cacccctatc aaccccctat tgtagtaaac ttggaacctt ggaaatgacc 1320 aggccaagac tcaagcctcc ccagttctac tgacctttgt ccttaggtgt gaggtccagg 1380 gttgctagga aaagaaatca gcagacacag gtgtagacca gagtgtttct taaatggtgt 1440 aattttgtcc tctctgtgtc ctggggaata ctggccatgc ctggagacat atcactcaat 1500 ttctctgagg acacagatag gatggggtgt ctgtgttatt tgtggggtac agagatgaaa 1560 gaggggtggg atccacactg agagagtgga gagtgacatg tgctggacac tgtccatgaa 1620 gcactgagca gaagctggag gcacaacgca ccagacactc acagcaagga tggagctgaa 1680 aacataaccc actctgtcct ggaggcactg ggaagcctag agaaggctgt gagccaagga 1740 gggagggtct tcctttggca tgggatgggg atgaagtaag gagagggact ggaccccctg 1800 gaagctgatt cactatgggg ggaggtgtat tgaagtcctc cagacaaccc tcagatttga 1860 tgatttccta gtagaactca cagaaataaa gagctgttat actgtg 1906 <210> 31 <211> 69 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Lys 65 <210> 32 <211> 554 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 32 agccccaagc ttaccacctg cacccggaga gctgtgtcac catgtgggtc ccggttgtct 60 tcctcaccct tccgtgacgt ggattggtgc tgcacccctc atcctgtctc ggattgtggg 120 aggctgggag tgcgagaagc attcccaacc ctggcaggtg cttgtggcct ctcgtggcag 180 ggcagtctgc ggcggtgttc tggtgcaccc ccagtgggtc ctcacagctg cccactgcat 240 caggaagtga gtaggggcct ggggtctggg gagcaggtgt ctgtgtccca gaggaataac 300 agctgggcat tttccccagg ataacctcta aggccagcct tgggactggg ggagagaggg 360 aaagttctgg ttcaggtcac atggggaggc agggttgggg ctggaccacc ctccccatgg 420 ctgcctgggt ctccatctgt gttcctctat gtctctttgt gtcgctttca ttatgtctct 480 tggtaactgg cttcggttgt gtctctccgt gtgactattt tgttctctct ctccctctct 540 tctctgtctt cagt 554 <210> 33 <211> 220 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser Ile Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys 115 120 125 Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala 130 135 140 Gln Val His Pro Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg 145 150 155 160 Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu 165 170 175 Val Cys Asn Gly Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro 180 185 190 Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr 195 200 205 Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr Ile Val Ala Asn Pro 210 215 220 <210> 34 <211> 1341 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 34 agccccaagc ttaccacctg cacccggaga gctgtgtcac catgtgggtc ccggttgtct 60 tcctcaccct gtccgtgacg tggattggtg ctgcacccct catcctgtct cggattgtgg 120 gaggctggga gtgcgagaag cattcccaac cctggcaggt gcttgtggcc tctcgtggca 180 gggcagtctg cggcggtgtt ctggtgcacc cccagtgggt cctcacagct gcccactgca 240 tcaggaacaa aagcgtgatc ttgctgggtc ggcacagcct gtttcatcct gaagacacag 300 gccaggtatt tcaggtcagc cacagcttcc cacacccgct ctacgatatg agcctcctga 360 agaatcgatt cctcaggcca ggtgatgact ccagcattga accagaggag ttcttgaccc 420 caaagaaact tcagtgtgtg gacctccatg ttatttccaa tgacgtgtgt gcgcaagttc 480 accctcagaa ggtgaccaag ttcatgctgt gtgctggacg ctggacaggg ggcaaaagca 540 cctgctcggg tgattctggg ggcccacttg tctgtaatgg tgtgcttcaa ggtatcacgt 600 catggggcag tgaaccatgt gccctgcccg aaaggccttc cctgtacacc aaggtggtgc 660 attaccggaa gtggatcaag gacaccatcg tggccaaccc ctgagcaccc ctatcaaccc 720 cctattgtag taaacttgga accttggaaa tgaccaggcc aagactcaag cctccccagt 780 tctactgacc tttgtcctta ggtgtgaggt ccagggttgc taggaaaaga aatcagcaga 840 cacaggtgta gaccagagtg tttcttaaat ggtgtaattt tgtcctctct gtgtcctggg 900 gaatactggc catgcctgga gacatatcac tcaatttctc tgaggacaca gataggatgg 960 ggtgtctgtg ttatttgtgg ggtacagaga tgaaagaggg gtgggatcca cactgagaga 1020 gtggagagtg acatgtgctg gacactgtcc atgaagcact gagcagaagc tggaggcaca 1080 acgcaccaga cactcacagc aaggatggag ctgaaaacat aacccactct gtcctggagg 1140 cactgggaag cctagagaag gctgtgagcc aaggagggag ggtcttcctt tggcatggga 1200 tggggatgaa gtaaggagag ggactggacc ccctggaagc tgattcacta tggggggagg 1260 tgtattgaag tcctccagac aaccctcaga tttgatgatt tcctagtaga actcacagaa 1320 ataaagagct gttatactgt g 1341 <210> 35 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Lys Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu 65 70 75 80 Leu Arg Leu Ser Glu Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met 85 90 95 Asp Leu Pro Thr Gln Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser 100 105 110 Gly Trp Gly Ser Ile Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu 115 120 125 Gln Cys Val Asp Leu His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val 130 135 140 His Pro Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr 145 150 155 160 Gly Gly Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys 165 170 175 Asn Gly Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala 180 185 190 Leu Pro Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys 195 200 205 Trp Ile Lys Asp Thr Ile Val Ala Asn Pro 210 215 <210> 36 <211> 1325 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 36 agccccaagc ttaccacctg cacccggaga gctgtgtcac catgtgggtc ccggttgtct 60 tcctcaccct gtccgtgacg tggattggtg ctgcacccct catcctgtct cggattgtgg 120 gaggctggga gtgcgagaag cattcccaac cctggcaggt gcttgtggcc tctcgtggca 180 gggcagtctg cggcggtgtt ctggtgcacc cccagtgggt cctcacagct gcccactgca 240 tcaggaagcc aggtgatgac tccagccacg acctcatgct gctccgcctg tcagagcctg 300 ccgagctcac ggatgctgtg aaggtcatgg acctgcccac ccaggagcca gcactgggga 360 ccacctgcta cgcctcaggc tggggcagca ttgaaccaga ggagttcttg accccaaaga 420 aacttcagtg tgtggacctc catgttattt ccaatgacgt gtgtgcgcaa gttcaccctc 480 agaaggtgac caagttcatg ctgtgtgctg gacgctggac agggggcaaa agcacctgct 540 cgggtgattc tgggggccca cttgtctgta atggtgtgct tcaaggtatc acgtcatggg 600 gcagtgaacc atgtgccctg cccgaaaggc cttccctgta caccaaggtg gtgcattacc 660 caaggacacc atcgtggcca acccctgagc acccctatca accccctatt gtagtaaact 720 tggaaccttg gaaatgacca ggccaagact caagcctccc cagttctact gacctttgtc 780 cttaggtgtg aggtccaggg ttgctaggaa aagaaatcag cagacacagg tgtagaccag 840 agtgtttctt aaatggtgta attttgtcct ctctgtgtcc tggggaatac tggccatgcc 900 tggagacata tcactcaatt tctctgagga cacagatagg atggggtgtc tgtgttattt 960 gtggggtaca gagatgaaag aggggtggga tccacactga gagagtggag agtgacatgt 1020 gctggacact gtccatgaag cactgagcag aagctggagg cacaacgcac cagacactca 1080 cagcaaggat ggagctgaaa acataaccca ctctgtcctg gaggcactgg gaagcctaga 1140 gaaggctgtg agccaaggag ggagggtctt cctttggcat gggatgggga tgaagtaagg 1200 agagggactg gaccccctgg aagctgattc actatggggg gaggtgtatt gaagtcctcc 1260 agacaaccct cagatttgat gatttcctag tagaactcac agaaataaag agctgttata 1320 ctgtg 1325 <210> 37 <211> 261 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu 115 120 125 Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln 130 135 140 Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile 145 150 155 160 Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu 165 170 175 His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val 180 185 190 Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr 195 200 205 Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Gly Val Leu Gln 210 215 220 Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro 225 230 235 240 Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr 245 250 255 Ile Val Ala Asn Pro 260 <210> 38 <211> 1464 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 38 agccccaagc ttaccacctg cacccggaga gctgtgtcac catgtgggtc ccggttgtct 60 tcctcaccct gtccgtgacg tggattggtg ctgcacccct catcctgtct cggattgtgg 120 gaggctggga gtgcgagaag cattcccaac cctggcaggt gcttgtggcc tctcgtggca 180 gggcagtctg cggcggtgtt ctggtgcacc cccagtgggt cctcacagct gcccactgca 240 tcaggaacaa aagcgtgatc ttgctgggtc ggcacagcct gtttcatcct gaagacacag 300 gccaggtatt tcaggtcagc cacagcttcc cacacccgct ctacgatatg agcctcctga 360 agaatcgatt cctcaggcca ggtgatgact ccagccacga cctcatgctg ctccgcctgt 420 cagagcctgc cgagctcacg gatgctgtga aggtcatgga cctgcccacc caggagccag 480 cactggggac cacctgctac gcctcaggct ggggcagcat tgaaccagag gagttcttga 540 ccccaaagaa acttcagtgt gtggacctcc atgttatttc caatgacgtg tgtgcgcaag 600 ttcaccctca gaaggtgacc aagttcatgc tgtgtgctgg acgctggaca gggggcaaaa 660 gcacctgctc gggtgattct gggggcccac ttgtctgtaa tggtgtgctt caaggtatca 720 cgtcatgggg cagtgaacca tgtgccctgc ccgaaaggcc ttccctgtac accaaggtgg 780 tgcattaccg gaagtggatc aaggacacca tcgtggccaa cccctgagca cccctatcaa 840 ccccctattg tagtaaactt ggaaccttgg aaatgaccag gccaagactc aagcctcccc 900 agttctactg acctttgtcc ttaggtgtga ggtccagggt tgctaggaaa agaaatcagc 960 agacacaggt gtagaccaga gtgtttctta aatggtgtaa ttttgtcctc tctgtgtcct 1020 ggggaatact ggccatgcct ggagacatat cactcaattt ctctgaggac acagatagga 1080 tggggtgtct gtgttatttg tggggtacag agatgaaaga ggggtgggat ccacactgag 1140 agagtggaga gtgacatgtg ctggacactg tccatgaagc actgagcaga agctggaggc 1200 acaacgcacc agacactcac agcaaggatg gagctgaaaa cataacccac tctgtcctgg 1260 aggcactggg aagcctagag aaggctgtga gccaaggagg gagggtcttc ctttggcatg 1320 ggatggggat gaagtaagga gagggactgg accccctgga agctgattca ctatgggggg 1380 aggtgtattg aagtcctcca gacaaccctc agatttgatg atttcctagt agaactcaca 1440 gaaataaaga gctgttatac tgtg 1464 <210> 39 <211> 261 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> kallikrein 3, partial <400> 39 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu 115 120 125 Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln 130 135 140 Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile 145 150 155 160 Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu 165 170 175 His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val 180 185 190 Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr 195 200 205 Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Gly Val Leu Gln 210 215 220 Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro 225 230 235 240 Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr 245 250 255 Ile Val Ala Asn Pro 260 <210> 40 <211> 1495 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 40 gggggagccc caagcttacc acctgcaccc ggagagctgt gtcaccatgt gggtcccggt 60 tgtcttcctc accctgtccg tgacgtggat tggtgctgca cccctcatcc tgtctcggat 120 tgtgggaggc tgggagtgcg agaagcattc ccaaccctgg caggtgcttg tggcctctcg 180 tggcagggca gtctgcggcg gtgttctggt gcacccccag tgggtcctca cagctgccca 240 ctgcatcagg aacaaaagcg tgatcttgct gggtcggcac agcctgtttc atcctgaaga 300 cacaggccag gtatttcagg tcagccacag cttcccacac ccgctctacg atatgagcct 360 cctgaagaat cgattcctca ggccaggtga tgactccagc cacgacctca tgctgctccg 420 cctgtcagag cctgccgagc tcacggatgc tgtgaaggtc atggacctgc ccacccagga 480 gccagcactg gggaccacct gctacgcctc aggctggggc agcattgaac cagaggagtt 540 cttgacccca aagaaacttc agtgtgtgga cctccatgtt atttccaatg acgtgtgtgc 600 gcaagttcac cctcagaagg tgaccaagtt catgctgtgt gctggacgct ggacaggggg 660 caaaagcacc tgctcgggtg attctggggg cccacttgtc tgtaatggtg tgcttcaagg 720 tatcacgtca tggggcagtg aaccatgtgc cctgcccgaa aggccttccc tgtacaccaa 780 ggtggtgcat taccggaagt ggatcaagga caccatcgtg gccaacccct gagcacccct 840 atcaactccc tattgtagta aacttggaac cttggaaatg accaggccaa gactcaggcc 900 tccccagttc tactgacctt tgtccttagg tgtgaggtcc agggttgcta ggaaaagaaa 960 tcagcagaca caggtgtaga ccagagtgtt tcttaaatgg tgtaattttg tcctctctgt 1020 gtcctgggga atactggcca tgcctggaga catatcactc aatttctctg aggacacaga 1080 taggatgggg tgtctgtgtt atttgtgggg tacagagatg aaagaggggt gggatccaca 1140 ctgagagagt ggagagtgac atgtgctgga cactgtccat gaagcactga gcagaagctg 1200 gaggcacaac gcaccagaca ctcacagcaa ggatggagct gaaaacataa cccactctgt 1260 cctggaggca ctgggaagcc tagagaaggc tgtgagccaa ggagggaggg tcttcctttg 1320 gcatgggatg gggatgaagt agggagaggg actggacccc ctggaagctg attcactatg 1380 gggggaggtg tattgaagtc ctccagacaa ccctcagatt tgatgatttc ctagtagaac 1440 tcacagaaat aaagagctgt tatactgcga aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 1495 <210> 41 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser Ile Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys 115 120 125 Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala 130 135 140 Gln Val His Pro Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg 145 150 155 160 Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu 165 170 175 Val Cys Asn Gly Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro 180 185 190 Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr 195 200 205 Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr Ile Val Ala 210 215 <210> 42 <211> 227 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu 115 120 125 Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln 130 135 140 Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile 145 150 155 160 Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu 165 170 175 His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val 180 185 190 Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr 195 200 205 Cys Ser Val Ser His Pro Tyr Ser Gln Asp Leu Glu Gly Lys Gly Glu 210 215 220 Trp Gly Pro 225 <210> 43 <211> 104 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Glu Arg Gly His Gly Trp Gly Asp Ala Gly Glu Gly Ala Ser Pro Asp 20 25 30 Cys Gln Ala Glu Ala Leu Ser Pro Pro Thr Gln His Pro Ser Pro Asp 35 40 45 Arg Glu Leu Gly Ser Phe Leu Ser Leu Pro Ala Pro Leu Gln Ala His 50 55 60 Thr Pro Ser Pro Ser Ile Leu Gln Gln Ser Ser Leu Pro His Gln Val 65 70 75 80 Pro Ala Pro Ser His Leu Pro Gln Asn Phe Leu Pro Ile Ala Gln Pro 85 90 95 Ala Pro Cys Ser Gln Leu Leu Tyr 100 <210> 44 <211> 261 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu 115 120 125 Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln 130 135 140 Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile 145 150 155 160 Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu 165 170 175 His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val 180 185 190 Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr 195 200 205 Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Gly Val Leu Gln 210 215 220 Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro 225 230 235 240 Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr 245 250 255 Ile Val Ala Asn Pro 260 <210> 45 <211> 1729 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 45 aagtttccct tctcccagtc caagacccca aatcaccaca aaggacccaa tccccagact 60 caagatatgg tctgggcgct gtcttgtgtc tcctaccctg atccctgggt tcaactctgc 120 tcccagagca tgaagcctct ccaccagcac cagccaccaa cctgcaaacc tagggaagat 180 tgacagaatt cccagccttt cccagctccc cctgcccatg tcccaggact cccagccttg 240 gttctctgcc cccgtgtctt ttcaaaccca catcctaaat ccatctccta tccgagtccc 300 ccagttcctc ctgtcaaccc tgattcccct gatctagcac cccctctgca ggtgctgcac 360 ccctcatcct gtctcggatt gtgggaggct gggagtgcga gaagcattcc caaccctggc 420 aggtgcttgt agcctctcgt ggcagggcag tctgcggcgg tgttctggtg cacccccagt 480 gggtcctcac agctacccac tgcatcagga acaaaagcgt gatcttgctg ggtcggcaca 540 gcctgtttca tcctgaagac acaggccagg tatttcaggt cagccacagc ttcccacacc 600 cgctctacga tatgagcctc ctgaagaatc gattcctcag gccaggtgat gactccagcc 660 acgacctcat gctgctccgc ctgtcagagc ctgccgagct cacggatgct atgaaggtca 720 tggacctgcc cacccaggag ccagcactgg ggaccacctg ctacgcctca ggctggggca 780 gcattgaacc agaggagttc ttgaccccaa agaaacttca gtgtgtggac ctccatgtta 840 tttccaatga cgtgtgtgcg caagttcacc ctcagaaggt gaccaagttc atgctgtgtg 900 ctggacgctg gacagggggc aaaagcacct gctcgggtga ttctgggggc ccacttgtct 960 gtaatggtgt gcttcaaggt atcacgtcat ggggcagtga accatgtgcc ctgcccgaaa 1020 ggccttccct gtacaccaag gtggtgcatt accggaagtg gatcaaggac accatcgtgg 1080 ccaacccctg agcaccccta tcaactccct attgtagtaa acttggaacc ttggaaatga 1140 ccaggccaag actcaggcct ccccagttct actgaccttt gtccttaggt gtgaggtcca 1200 gggttgctag gaaaagaaat cagcagacac aggtgtagac cagagtgttt cttaaatggt 1260 gtaattttgt cctctctgtg tcctggggaa tactggccat gcctggagac atatcactca 1320 atttctctga ggacacagat aggatggggt gtctgtgtta tttgtggggt acagagatga 1380 aagaggggtg ggatccacac tgagagagtg gagagtgaca tgtgctggac actgtccatg 1440 aagcactgag cagaagctgg aggcacaacg caccagacac tcacagcaag gatggagctg 1500 aaaacataac ccactctgtc ctggaggcac tgggaagcct agagaaggct gtgaaccaag 1560 gagggagggt cttcctttgg catgggatgg ggatgaagta aggagaggga ctgaccccct 1620 ggaagctgat tcactatggg gggaggtgta ttgaagtcct ccagacaacc ctcagatttg 1680 atgatttcct agtagaactc acagaaataa agagctgtta tactgtgaa 1729 <210> 46 <211> 29 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 46 gtgctcgaga ttgtgggagg ctgggagtg 29 <210> 47 <211> 29 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 47 gatactagtt taggggttgg ccacgatgg 29 <210> 48 <211> 680 <212> PRT <213> Listeria monocytogenes <400> 48 Met Lys Lys Ile Met Leu Val Phe Ile Thr Leu Ile Leu Val Ser Leu 1 5 10 15 Pro Ile Ala Gln Gln Thr Glu Ala Lys Asp Ala Ser Ala Phe Asn Lys 20 25 30 Glu Asn Ser Ile Ser Ser Met Ala Pro Pro Ala Ser Pro Pro Ala Ser 35 40 45 Pro Lys Thr Pro Ile Glu Lys Lys His Ala Asp Glu Ile Asp Lys Tyr 50 55 60 Ile Gln Gly Leu Asp Tyr Asn Lys Asn Asn Val Leu Val Tyr His Gly 65 70 75 80 Asp Ala Val Thr Asn Val Pro Pro Arg Lys Gly Tyr Lys Asp Gly Asn 85 90 95 Glu Tyr Ile Val Val Glu Lys Lys Lys Lys Ser Ile Asn Gln Asn Asn 100 105 110 Ala Asp Ile Gln Val Val Asn Ala Ile Ser Ser Leu Thr Tyr Pro Gly 115 120 125 Ala Leu Val Lys Ala Asn Ser Glu Leu Val Glu Asn Gln Pro Asp Val 130 135 140 Leu Pro Val Lys Arg Asp Ser Leu Thr Leu Ser Ile Asp Leu Pro Gly 145 150 155 160 Met Thr Asn Gln Asp Asn Lys Ile Val Val Lys Asn Ala Thr Lys Ser 165 170 175 Asn Val Asn Asn Ala Val Asn Thr Leu Val Glu Arg Trp Asn Glu Lys 180 185 190 Tyr Ala Gln Ala Tyr Pro Asn Val Ser Ala Lys Ile Asp Tyr Asp Asp 195 200 205 Glu Met Ala Tyr Ser Glu Ser Gln Leu Ile Ala Lys Phe Gly Thr Ala 210 215 220 Phe Lys Ala Val Asn Asn Ser Leu Asn Val Asn Phe Gly Ala Ile Ser 225 230 235 240 Glu Gly Lys Met Gln Glu Glu Val Ile Ser Phe Lys Gln Ile Tyr Tyr 245 250 255 Asn Val Asn Val Asn Glu Pro Thr Arg Pro Ser Arg Phe Phe Gly Lys 260 265 270 Ala Val Thr Lys Glu Gln Leu Gln Ala Leu Gly Val Asn Ala Glu Asn 275 280 285 Pro Pro Ala Tyr Ile Ser Ser Val Ala Tyr Gly Arg Gln Val Tyr Leu 290 295 300 Lys Leu Ser Thr Asn Ser His Ser Thr Lys Val Lys Ala Ala Phe Asp 305 310 315 320 Ala Ala Val Ser Gly Lys Ser Val Ser Gly Asp Val Glu Leu Thr Asn 325 330 335 Ile Ile Lys Asn Ser Ser Phe Lys Ala Val Ile Tyr Gly Gly Ser Ala 340 345 350 Lys Asp Glu Val Gln Ile Ile Asp Gly Asn Leu Gly Asp Leu Arg Asp 355 360 365 Ile Leu Lys Lys Gly Ala Thr Phe Asn Arg Glu Thr Pro Gly Val Pro 370 375 380 Ile Ala Tyr Thr Thr Asn Phe Leu Lys Asp Asn Glu Leu Ala Val Ile 385 390 395 400 Lys Asn Asn Ser Glu Tyr Ile Glu Thr Thr Ser Lys Ala Tyr Thr Asp 405 410 415 Gly Lys Ile Asn Ile Asp His Ser Gly Gly Tyr Val Ala Gln Phe Asn 420 425 430 Ile Ser Trp Asp Glu Val Asn Tyr Asp Leu Glu Ile Val Gly Gly Trp 435 440 445 Glu Cys Glu Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg 450 455 460 Gly Arg Ala Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu 465 470 475 480 Thr Ala Ala His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg 485 490 495 His Ser Leu Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser 500 505 510 His Ser Phe Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg 515 520 525 Phe Leu Arg Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg 530 535 540 Leu Ser Glu Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu 545 550 555 560 Pro Thr Gln Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp 565 570 575 Gly Ser Ile Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys 580 585 590 Val Asp Leu His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro 595 600 605 Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly 610 615 620 Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Tyr Gly 625 630 635 640 Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala Leu Pro 645 650 655 Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile 660 665 670 Lys Asp Thr Ile Val Ala Asn Pro 675 680 <210> 49 <211> 32 <212> PRT <213> Listeria monocytogenes <400> 49 Lys Glu Asn Ser Ile Ser Ser Met Ala Pro Pro Ala Ser Pro Pro Ala 1 5 10 15 Ser Pro Lys Thr Pro Ile Glu Lys Lys His Ala Asp Glu Ile Asp Lys 20 25 30 <210> 50 <211> 227 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu 115 120 125 Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln 130 135 140 Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile 145 150 155 160 Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu 165 170 175 His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val 180 185 190 Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr 195 200 205 Cys Ser Val Ser His Pro Tyr Ser Gln Asp Leu Glu Gly Lys Gly Glu 210 215 220 Trp Gly Pro 225 <210> 51 <211> 104 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Glu Arg Gly His Gly Trp Gly Asp Ala Gly Glu Gly Ala Ser Pro Asp 20 25 30 Cys Gln Ala Glu Ala Leu Ser Pro Pro Thr Gln His Pro Ser Pro Asp 35 40 45 Arg Glu Leu Gly Ser Phe Leu Ser Leu Pro Ala Pro Leu Gln Ala His 50 55 60 Thr Pro Ser Pro Ser Ile Leu Gln Gln Ser Ser Leu Pro His Gln Val 65 70 75 80 Pro Ala Pro Ser His Leu Pro Gln Asn Phe Leu Pro Ile Ala Gln Pro 85 90 95 Ala Pro Cys Ser Gln Leu Leu Tyr 100 <210> 52 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg 20 <210> 53 <211> 529 <212> PRT <213> Listeria monocytogenes <400> 53 Met Lys Lys Ile Met Leu Val Phe Ile Thr Leu Ile Leu Val Ser Leu 1 5 10 15 Pro Ile Ala Gln Gln Thr Glu Ala Lys Asp Ala Ser Ala Phe Asn Lys 20 25 30 Glu Asn Ser Ile Ser Ser Met Ala Pro Pro Ala Ser Pro Pro Ala Ser 35 40 45 Pro Lys Thr Pro Ile Glu Lys Lys His Ala Asp Glu Ile Asp Lys Tyr 50 55 60 Ile Gln Gly Leu Asp Tyr Asn Lys Asn Asn Val Leu Val Tyr His Gly 65 70 75 80 Asp Ala Val Thr Asn Val Pro Pro Arg Lys Gly Tyr Lys Asp Gly Asn 85 90 95 Glu Tyr Ile Val Val Glu Lys Lys Lys Lys Ser Ile Asn Gln Asn Asn 100 105 110 Ala Asp Ile Gln Val Val Asn Ala Ile Ser Ser Leu Thr Tyr Pro Gly 115 120 125 Ala Leu Val Lys Ala Asn Ser Glu Leu Val Glu Asn Gln Pro Asp Val 130 135 140 Leu Pro Val Lys Arg Asp Ser Leu Thr Leu Ser Ile Asp Leu Pro Gly 145 150 155 160 Met Thr Asn Gln Asp Asn Lys Ile Val Val Lys Asn Ala Thr Lys Ser 165 170 175 Asn Val Asn Asn Ala Val Asn Thr Leu Val Glu Arg Trp Asn Glu Lys 180 185 190 Tyr Ala Gln Ala Tyr Pro Asn Val Ser Ala Lys Ile Asp Tyr Asp Asp 195 200 205 Glu Met Ala Tyr Ser Glu Ser Gln Leu Ile Ala Lys Phe Gly Thr Ala 210 215 220 Phe Lys Ala Val Asn Asn Ser Leu Asn Val Asn Phe Gly Ala Ile Ser 225 230 235 240 Glu Gly Lys Met Gln Glu Glu Val Ile Ser Phe Lys Gln Ile Tyr Tyr 245 250 255 Asn Val Asn Val Asn Glu Pro Thr Arg Pro Ser Arg Phe Phe Gly Lys 260 265 270 Ala Val Thr Lys Glu Gln Leu Gln Ala Leu Gly Val Asn Ala Glu Asn 275 280 285 Pro Pro Ala Tyr Ile Ser Ser Val Ala Tyr Gly Arg Gln Val Tyr Leu 290 295 300 Lys Leu Ser Thr Asn Ser His Ser Thr Lys Val Lys Ala Ala Phe Asp 305 310 315 320 Ala Ala Val Ser Gly Lys Ser Val Ser Gly Asp Val Glu Leu Thr Asn 325 330 335 Ile Ile Lys Asn Ser Ser Phe Lys Ala Val Ile Tyr Gly Gly Ser Ala 340 345 350 Lys Asp Glu Val Gln Ile Ile Asp Gly Asn Leu Gly Asp Leu Arg Asp 355 360 365 Ile Leu Lys Lys Gly Ala Thr Phe Asn Arg Glu Thr Pro Gly Val Pro 370 375 380 Ile Ala Tyr Thr Thr Asn Phe Leu Lys Asp Asn Glu Leu Ala Val Ile 385 390 395 400 Lys Asn Asn Ser Glu Tyr Ile Glu Thr Thr Ser Lys Ala Tyr Thr Asp 405 410 415 Gly Lys Ile Asn Ile Asp His Ser Gly Gly Tyr Val Ala Gln Phe Asn 420 425 430 Ile Ser Trp Asp Glu Val Asn Tyr Asp Pro Glu Gly Asn Glu Ile Val 435 440 445 Gln His Lys Asn Trp Ser Glu Asn Asn Lys Ser Lys Leu Ala His Phe 450 455 460 Thr Ser Ser Ile Tyr Leu Pro Gly Asn Ala Arg Asn Ile Asn Val Tyr 465 470 475 480 Ala Lys Glu Cys Thr Gly Leu Ala Trp Glu Trp Trp Arg Thr Val Ile 485 490 495 Asp Asp Arg Asn Leu Pro Leu Val Lys Asn Arg Asn Ile Ser Ile Trp 500 505 510 Gly Thr Thr Leu Tyr Pro Lys Tyr Ser Asn Lys Val Asp Asn Pro Ile 515 520 525 Glu <210> 54 <211> 441 <212> PRT <213> Listeria monocytogenes <400> 54 Met Lys Lys Ile Met Leu Val Phe Ile Thr Leu Ile Leu Val Ser Leu 1 5 10 15 Pro Ile Ala Gln Gln Thr Glu Ala Lys Asp Ala Ser Ala Phe Asn Lys 20 25 30 Glu Asn Ser Ile Ser Ser Val Ala Pro Pro Ala Ser Pro Pro Ala Ser 35 40 45 Pro Lys Thr Pro Ile Glu Lys Lys His Ala Asp Glu Ile Asp Lys Tyr 50 55 60 Ile Gln Gly Leu Asp Tyr Asn Lys Asn Asn Val Leu Val Tyr His Gly 65 70 75 80 Asp Ala Val Thr Asn Val Pro Pro Arg Lys Gly Tyr Lys Asp Gly Asn 85 90 95 Glu Tyr Ile Val Val Glu Lys Lys Lys Lys Ser Ile Asn Gln Asn Asn 100 105 110 Ala Asp Ile Gln Val Val Asn Ala Ile Ser Ser Leu Thr Tyr Pro Gly 115 120 125 Ala Leu Val Lys Ala Asn Ser Glu Leu Val Glu Asn Gln Pro Asp Val 130 135 140 Leu Pro Val Lys Arg Asp Ser Leu Thr Leu Ser Ile Asp Leu Pro Gly 145 150 155 160 Met Thr Asn Gln Asp Asn Lys Ile Val Val Lys Asn Ala Thr Lys Ser 165 170 175 Asn Val Asn Asn Ala Val Asn Thr Leu Val Glu Arg Trp Asn Glu Lys 180 185 190 Tyr Ala Gln Ala Tyr Ser Asn Val Ser Ala Lys Ile Asp Tyr Asp Asp 195 200 205 Glu Met Ala Tyr Ser Glu Ser Gln Leu Ile Ala Lys Phe Gly Thr Ala 210 215 220 Phe Lys Ala Val Asn Asn Ser Leu Asn Val Asn Phe Gly Ala Ile Ser 225 230 235 240 Glu Gly Lys Met Gln Glu Glu Val Ile Ser Phe Lys Gln Ile Tyr Tyr 245 250 255 Asn Val Asn Val Asn Glu Pro Thr Arg Pro Ser Arg Phe Phe Gly Lys 260 265 270 Ala Val Thr Lys Glu Gln Leu Gln Ala Leu Gly Val Asn Ala Glu Asn 275 280 285 Pro Pro Ala Tyr Ile Ser Ser Val Ala Tyr Gly Arg Gln Val Tyr Leu 290 295 300 Lys Leu Ser Thr Asn Ser His Ser Thr Lys Val Lys Ala Ala Phe Asp 305 310 315 320 Ala Ala Val Ser Gly Lys Ser Val Ser Gly Asp Val Glu Leu Thr Asn 325 330 335 Ile Ile Lys Asn Ser Ser Phe Lys Ala Val Ile Tyr Gly Gly Ser Ala 340 345 350 Lys Asp Glu Val Gln Ile Ile Asp Gly Asn Leu Gly Asp Leu Arg Asp 355 360 365 Ile Leu Lys Lys Gly Ala Thr Phe Asn Arg Glu Thr Pro Gly Val Pro 370 375 380 Ile Ala Tyr Thr Thr Asn Phe Leu Lys Asp Asn Glu Leu Ala Val Ile 385 390 395 400 Lys Asn Asn Ser Glu Tyr Ile Glu Thr Thr Ser Lys Ala Tyr Thr Asp 405 410 415 Gly Lys Ile Asn Ile Asp His Ser Gly Gly Tyr Val Ala Gln Phe Asn 420 425 430 Ile Ser Trp Asp Glu Val Asn Tyr Asp 435 440 <210> 55 <211> 416 <212> PRT <213> Listeria monocytogenes <400> 55 Met Lys Lys Ile Met Leu Val Phe Ile Thr Leu Ile Leu Val Ser Leu 1 5 10 15 Pro Ile Ala Gln Gln Thr Glu Ala Lys Asp Ala Ser Ala Phe Asn Lys 20 25 30 Glu Asn Ser Ile Ser Ser Val Ala Pro Pro Ala Ser Pro Pro Ala Ser 35 40 45 Pro Lys Thr Pro Ile Glu Lys Lys His Ala Asp Glu Ile Asp Lys Tyr 50 55 60 Ile Gln Gly Leu Asp Tyr Asn Lys Asn Asn Val Leu Val Tyr His Gly 65 70 75 80 Asp Ala Val Thr Asn Val Pro Pro Arg Lys Gly Tyr Lys Asp Gly Asn 85 90 95 Glu Tyr Ile Val Val Glu Lys Lys Lys Lys Ser Ile Asn Gln Asn Asn 100 105 110 Ala Asp Ile Gln Val Val Asn Ala Ile Ser Ser Leu Thr Tyr Pro Gly 115 120 125 Ala Leu Val Lys Ala Asn Ser Glu Leu Val Glu Asn Gln Pro Asp Val 130 135 140 Leu Pro Val Lys Arg Asp Ser Leu Thr Leu Ser Ile Asp Leu Pro Gly 145 150 155 160 Met Thr Asn Gln Asp Asn Lys Ile Val Val Lys Asn Ala Thr Lys Ser 165 170 175 Asn Val Asn Asn Ala Val Asn Thr Leu Val Glu Arg Trp Asn Glu Lys 180 185 190 Tyr Ala Gln Ala Tyr Ser Asn Val Ser Ala Lys Ile Asp Tyr Asp Asp 195 200 205 Glu Met Ala Tyr Ser Glu Ser Gln Leu Ile Ala Lys Phe Gly Thr Ala 210 215 220 Phe Lys Ala Val Asn Asn Ser Leu Asn Val Asn Phe Gly Ala Ile Ser 225 230 235 240 Glu Gly Lys Met Gln Glu Glu Val Ile Ser Phe Lys Gln Ile Tyr Tyr 245 250 255 Asn Val Asn Val Asn Glu Pro Thr Arg Pro Ser Arg Phe Phe Gly Lys 260 265 270 Ala Val Thr Lys Glu Gln Leu Gln Ala Leu Gly Val Asn Ala Glu Asn 275 280 285 Pro Pro Ala Tyr Ile Ser Ser Val Ala Tyr Gly Arg Gln Val Tyr Leu 290 295 300 Lys Leu Ser Thr Asn Ser His Ser Thr Lys Val Lys Ala Ala Phe Asp 305 310 315 320 Ala Ala Val Ser Gly Lys Ser Val Ser Gly Asp Val Glu Leu Thr Asn 325 330 335 Ile Ile Lys Asn Ser Ser Phe Lys Ala Val Ile Tyr Gly Gly Ser Ala 340 345 350 Lys Asp Glu Val Gln Ile Ile Asp Gly Asn Leu Gly Asp Leu Arg Asp 355 360 365 Ile Leu Lys Lys Gly Ala Thr Phe Asn Arg Glu Thr Pro Gly Val Pro 370 375 380 Ile Ala Tyr Thr Thr Asn Phe Leu Lys Asp Asn Glu Leu Ala Val Ile 385 390 395 400 Lys Asn Asn Ser Glu Tyr Ile Glu Thr Thr Ser Lys Ala Tyr Thr Asp 405 410 415 <210> 56 <211> 14 <212> PRT <213> Listeria monocytogenes <400> 56 Lys Thr Glu Glu Gln Pro Ser Glu Val Asn Thr Gly Pro Arg 1 5 10 <210> 57 <211> 28 <212> PRT <213> Listeria monocytogenes <400> 57 Lys Ala Ser Val Thr Asp Thr Ser Glu Gly Asp Leu Asp Ser Ser Met 1 5 10 15 Gln Ser Ala Asp Glu Ser Thr Pro Gln Pro Leu Lys 20 25 <210> 58 <211> 20 <212> PRT <213> Listeria monocytogenes <400> 58 Lys Asn Glu Glu Val Asn Ala Ser Asp Phe Pro Pro Pro Pro Thr Asp 1 5 10 15 Glu Glu Leu Arg 20 <210> 59 <211> 33 <212> PRT <213> Listeria monocytogenes <400> 59 Arg Gly Gly Ile Pro Thr Ser Glu Glu Phe Ser Ser Leu Asn Ser Gly 1 5 10 15 Asp Phe Thr Asp Asp Glu Asn Ser Glu Thr Thr Glu Glu Glu Ile Asp 20 25 30 Arg <210> 60 <211> 17 <212> PRT <213> Streptococcus pyogenes <400> 60 Lys Gln Asn Thr Ala Ser Thr Glu Thr Thr Thr Thr Asn Glu Gln Pro 1 5 10 15 Lys <210> 61 <211> 17 <212> PRT <213> Streptococcus equisimilis <400> 61 Lys Gln Asn Thr Ala Asn Thr Glu Thr Thr Thr Thr Asn Glu Gln Pro 1 5 10 15 Lys <210> 62 <211> 6523 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 62 cggagtgtat actggcttac tatgttggca ctgatgaggg tgtcagtgaa gtgcttcatg 60 tggcaggaga aaaaaggctg caccggtgcg tcagcagaat atgtgataca ggatatattc 120 cgcttcctcg ctcactgact cgctacgctc ggtcgttcga ctgcggcgag cggaaatggc 180 ttacgaacgg ggcggagatt tcctggaaga tgccaggaag atacttaaca gggaagtgag 240 agggccgcgg caaagccgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacaagca tcacgaaatc 300 tgacgctcaa atcagtggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc 360 cctggcggct ccctcgtgcg ctctcctgtt cctgcctttc ggtttaccgg tgtcattccg 420 ctgttatggc cgcgtttgtc tcattccacg cctgacactc agttccgggt aggcagttcg 480 ctccaagctg gactgtatgc acgaaccccc cgttcagtcc gaccgctgcg ccttatccgg 540 taactatcgt cttgagtcca acccggaaag acatgcaaaa gcaccactgg cagcagccac 600 tggtaattga tttagaggag ttagtcttga agtcatgcgc cggttaaggc taaactgaaa 660 ggacaagttt tggtgactgc gctcctccaa gccagttacc tcggttcaaa gagttggtag 720 ctcagagaac cttcgaaaaa ccgccctgca aggcggtttt ttcgttttca gagcaagaga 780 ttacgcgcag accaaaacga tctcaagaag atcatcttat taatcagata aaatatttct 840 agccctcctt tgattagtat attcctatct taaagttact tttatgtgga ggcattaaca 900 tttgttaatg acgtcaaaag gatagcaaga ctagaataaa gctataaagc aagcatataa 960 tattgcgttt catctttaga agcgaatttc gccaatatta taattatcaa aagagagggg 1020 tggcaaacgg tatttggcat tattaggtta aaaaatgtag aaggagagtg aaacccatga 1080 aaaaaataat gctagttttt attacactta tattagttag tctaccaatt gcgcaacaaa 1140 ctgaagcaaa ggatgcatct gcattcaata aagaaaattc aatttcatcc atggcaccac 1200 cagcatctcc gcctgcaagt cctaagacgc caatcgaaaa gaaacacgcg gatgaaatcg 1260 ataagtatat acaaggattg gattacaata aaaacaatgt attagtatac cacggagatg 1320 cagtgacaaa tgtgccgcca agaaaaggtt acaaagatgg aaatgaatat attgttgtgg 1380 agaaaaagaa gaaatccatc aatcaaaata atgcagacat tcaagttgtg aatgcaattt 1440 cgagcctaac ctatccaggt gctctcgtaa aagcgaattc ggaattagta gaaaatcaac 1500 cagatgttct ccctgtaaaa cgtgattcat taacactcag cattgatttg ccaggtatga 1560 ctaatcaaga caataaaata gttgtaaaaa atgccactaa atcaaacgtt aacaacgcag 1620 taaatacatt agtggaaaga tggaatgaaa aatatgctca agcttatcca aatgtaagtg 1680 caaaaattga ttatgatgac gaaatggctt acagtgaatc acaattaatt gcgaaatttg 1740 gtacagcatt taaagctgta aataatagct tgaatgtaaa cttcggcgca atcagtgaag 1800 ggaaaatgca agaagaagtc attagtttta aacaaattta ctataacgtg aatgttaatg 1860 aacctacaag accttccaga tttttcggca aagctgttac taaagagcag ttgcaagcgc 1920 ttggagtgaa tgcagaaaat cctcctgcat atatctcaag tgtggcgtat ggccgtcaag 1980 tttatttgaa attatcaact aattcccata gtactaaagt aaaagctgct tttgatgctg 2040 ccgtaagcgg aaaatctgtc tcaggtgatg tagaactaac aaatatcatc aaaaattctt 2100 ccttcaaagc cgtaatttac ggaggttccg caaaagatga agttcaaatc atcgacggca 2160 acctcggaga cttacgcgat attttgaaaa aaggcgctac ttttaatcga gaaacaccag 2220 gagttcccat tgcttataca acaaacttcc taaaagacaa tgaattagct gttattaaaa 2280 acaactcaga atatattgaa acaacttcaa aagcttatac agatggaaaa attaacatcg 2340 atcactctgg aggatacgtt gctcaattca acatttcttg ggatgaagta aattatgatc 2400 tcgagattgt gggaggctgg gagtgcgaga agcattccca accctggcag gtgcttgtgg 2460 cctctcgtgg cagggcagtc tgcggcggtg ttctggtgca cccccagtgg gtcctcacag 2520 ctgcccactg catcaggaac aaaagcgtga tcttgctggg tcggcacagc ctgtttcatc 2580 ctgaagacac aggccaggta tttcaggtca gccacagctt cccacacccg ctctacgata 2640 tgagcctcct gaagaatcga ttcctcaggc caggtgatga ctccagccac gacctcatgc 2700 tgctccgcct gtcagagcct gccgagctca cggatgctgt gaaggtcatg gacctgccca 2760 cccaggagcc agcactgggg accacctgct acgcctcagg ctggggcagc attgaaccag 2820 aggagttctt gaccccaaag aaacttcagt gtgtggacct ccatgttatt tccaatgacg 2880 tgtgtgcgca agttcaccct cagaaggtga ccaagttcat gctgtgtgct ggacgctgga 2940 cagggggcaa aagcacctgc tcgggtgatt ctgggggccc acttgtctgt tatggtgtgc 3000 ttcaaggtat cacgtcatgg ggcagtgaac catgtgccct gcccgaaagg ccttccctgt 3060 acaccaaggt ggtgcattac cggaagtgga tcaaggacac catcgtggcc aacccctaac 3120 ccgggccact aactcaacgc tagtagtgga tttaatccca aatgagccaa cagaaccaga 3180 accagaaaca gaacaagtaa cattggagtt agaaatggaa gaagaaaaaa gcaatgattt 3240 cgtgtgaata atgcacgaaa tcattgctta tttttttaaa aagcgatata ctagatataa 3300 cgaaacaacg aactgaataa agaatacaaa aaaagagcca cgaccagtta aagcctgaga 3360 aactttaact gcgagcctta attgattacc accaatcaat taaagaagtc gagacccaaa 3420 atttggtaaa gtatttaatt actttattaa tcagatactt aaatatctgt aaacccatta 3480 tatcgggttt ttgaggggat ttcaagtctt taagaagata ccaggcaatc aattaagaaa 3540 aacttagttg attgcctttt ttgttgtgat tcaactttga tcgtagcttc taactaatta 3600 attttcgtaa gaaaggagaa cagctgaatg aatatccctt ttgttgtaga aactgtgctt 3660 catgacggct tgttaaagta caaatttaaa aatagtaaaa ttcgctcaat cactaccaag 3720 ccaggtaaaa gtaaaggggc tatttttgcg tatcgctcaa aaaaaagcat gattggcgga 3780 cgtggcgttg ttctgacttc cgaagaagcg attcacgaaa atcaagatac atttacgcat 3840 tggacaccaa acgtttatcg ttatggtacg tatgcagacg aaaaccgttc atacactaaa 3900 ggacattctg aaaacaattt aagacaaatc aataccttct ttattgattt tgatattcac 3960 acggaaaaag aaactatttc agcaagcgat attttaacaa cagctattga tttaggtttt 4020 atgcctacgt taattatcaa atctgataaa ggttatcaag catattttgt tttagaaacg 4080 ccagtctatg tgacttcaaa atcagaattt aaatctgtca aagcagccaa aataatctcg 4140 caaaatatcc gagaatattt tggaaagtct ttgccagttg atctaacgtg caatcatttt 4200 gggattgctc gtataccaag aacggacaat gtagaatttt ttgatcccaa ttaccgttat 4260 tctttcaaag aatggcaaga ttggtctttc aaacaaacag ataataaggg ctttactcgt 4320 tcaagtctaa cggttttaag cggtacagaa ggcaaaaaac aagtagatga accctggttt 4380 aatctcttat tgcacgaaac gaaattttca ggagaaaagg gtttagtagg gcgcaatagc 4440 gttatgttta ccctctcttt agcctacttt agttcaggct attcaatcga aacgtgcgaa 4500 tataatatgt ttgagtttaa taatcgatta gatcaaccct tagaagaaaa agaagtaatc 4560 aaaattgtta gaagtgccta ttcagaaaac tatcaagggg ctaataggga atacattacc 4620 attctttgca aagcttgggt atcaagtgat ttaaccagta aagatttatt tgtccgtcaa 4680 gggtggttta aattcaagaa aaaaagaagc gaacgtcaac gtgttcattt gtcagaatgg 4740 aaagaagatt taatggctta tattagcgaa aaaagcgatg tatacaagcc ttatttagcg 4800 acgaccaaaa aagagattag agaagtgcta ggcattcctg aacggacatt agataaattg 4860 ctgaaggtac tgaaggcgaa tcaggaaatt ttctttaaga ttaaaccagg aagaaatggt 4920 ggcattcaac ttgctagtgt taaatcattg ttgctatcga tcattaaatt aaaaaaagaa 4980 gaacgagaaa gctatataaa ggcgctgaca gcttcgttta atttagaacg tacatttatt 5040 caagaaactc taaacaaatt ggcagaacgc cccaaaacgg acccacaact cgatttgttt 5100 agctacgata caggctgaaa ataaaacccg cactatgcca ttacatttat atctatgata 5160 cgtgtttgtt tttctttgct ggctagctta attgcttata tttacctgca ataaaggatt 5220 tcttacttcc attatactcc cattttccaa aaacatacgg ggaacacggg aacttattgt 5280 acaggccacc tcatagttaa tggtttcgag ccttcctgca atctcatcca tggaaatata 5340 ttcatccccc tgccggccta ttaatgtgac ttttgtgccc ggcggatatt cctgatccag 5400 ctccaccata aattggtcca tgcaaattcg gccggcaatt ttcaggcgtt ttcccttcac 5460 aaggatgtcg gtccctttca attttcggag ccagccgtcc gcatagccta caggcaccgt 5520 cccgatccat gtgtcttttt ccgctgtgta ctcggctccg tagctgacgc tctcgccttt 5580 tctgatcagt ttgacatgtg acagtgtcga atgcagggta aatgccggac gcagctgaaa 5640 cggtatctcg tccgacatgt cagcagacgg gcgaaggcca tacatgccga tgccgaatct 5700 gactgcatta aaaaagcctt ttttcagccg gagtccagcg gcgctgttcg cgcagtggac 5760 cattagattc tttaacggca gcggagcaat cagctcttta aagcgctcaa actgcattaa 5820 gaaatagcct ctttcttttt catccgctgt cgcaaaatgg gtaaataccc ctttgcactt 5880 taaacgaggg ttgcggtcaa gaattgccat cacgttctga acttcttcct ctgtttttac 5940 accaagtctg ttcatccccg tatcgacctt cagatgaaaa tgaagagaac cttttttcgt 6000 gtggcgggct gcctcctgaa gccattcaac agaataacct gttaaggtca cgtcatactc 6060 agcagcgatt gccacatact ccgggggaac cgcgccaagc accaatatag gcgccttcaa 6120 tccctttttg cgcagtgaaa tcgcttcatc caaaatggcc acggccaagc atgaagcacc 6180 tgcgtcaaga gcagcctttg ctgtttctgc atcaccatgc ccgtaggcgt ttgctttcac 6240 aactgccatc aagtggacat gttcaccgat atgttttttc atattgctga cattttcctt 6300 tatcgcggac aagtcaattt ccgcccacgt atctctgtaa aaaggttttg tgctcatgga 6360 aaactcctct cttttttcag aaaatcccag tacgtaatta agtatttgag aattaatttt 6420 atattgatta atactaagtt tacccagttt tcacctaaaa aacaaatgat gagataatag 6480 ctccaaaggc taaagaggac tataccaact atttgttaat taa 6523 <210> 63 <211> 69 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Lys 65 <210> 64 <211> 220 <212> PRT <213> Oryza sativa <400> 64 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser Ile Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys 115 120 125 Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala 130 135 140 Gln Val His Pro Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg 145 150 155 160 Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu 165 170 175 Val Cys Asn Gly Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro 180 185 190 Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr 195 200 205 Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr Ile Val Ala Asn Pro 210 215 220 <210> 65 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Lys Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu 65 70 75 80 Leu Arg Leu Ser Glu Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met 85 90 95 Asp Leu Pro Thr Gln Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser 100 105 110 Gly Trp Gly Ser Ile Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu 115 120 125 Gln Cys Val Asp Leu His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val 130 135 140 His Pro Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr 145 150 155 160 Gly Gly Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys 165 170 175 Asn Gly Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala 180 185 190 Leu Pro Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys 195 200 205 Trp Ile Lys Asp Thr Ile Val Ala Asn Pro 210 215 <210> 66 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser Ile Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys 115 120 125 Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala 130 135 140 Gln Val His Pro Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg 145 150 155 160 Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu 165 170 175 Val Cys Asn Gly Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro 180 185 190 Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr 195 200 205 Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr Ile Val Ala 210 215

Claims

예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제 및 생약독화 박테리아 균주를 포함하는 병용 치료제를 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 생약독화 박테리아 균주는 PSA 발현 세포에 대한 세포의 면역 반응을 유도할 수 있는 항원 제시 세포(APC)를 자극하는, 환자의 전립선암 치료 방법.
예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제 및 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 포함하는 병용 치료제를 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주는 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현 벡터로 형질전환된, 유전자 조작된 균주를 포함하는, 환자의 전립선암 치료 방법.
제2항에 있어서, 상기 tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드는 서열번호 54의 서열 또는 거기에 적어도 99% 상동인 서열로 구성되고, 상기 N-말단 LLO 펩타이드는 상기 융합 단백질의 면역원성을 향상시키는, 방법.
예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제 및 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 포함하는 병용 치료제를 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주를 포함하는, 환자의 전립선암 치료 방법.
예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제 및 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 포함하는 병용 치료제를 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주는 LmddA-143 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) (염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하는, 환자의 전립선암 치료 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 길항제는 항-PD-1 단클론 항체인, 방법.
제6항에 있어서, 상기 항-PD-1 단클론 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄 및 경쇄는 서열번호 21과 서열번호 22를 각각 포함하는, 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 길항제 및 상기 생약독화 박테리아 균주 또는 상기 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주는 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 길항제는 상기 생약독화 박테리아 균주 또는 상기 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와 별도의 시간에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 전립선암은 전이성의 거세 저항성 전립선암(mCRPC)인, 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 균주는 보조제와 함께 투여되는, 방법.
제11항에 있어서, 상기 보조제는 몬타나이드 ISA 51, GM-CSF, KLH, 사이토킨, 성장 인자, 세포 집단, QS21, 프로인트 불완전 보조제, 인산 알루미늄, 수산화 알루미늄, BCG, 명반, 인터루킨, 메틸화되지 않은 CpG 올리고뉴클레오티드, 퀼 글리코시드, 모노포스포릴 지질 A, 리포좀, 세균성 미토겐, 박테리아 독소 또는 케모카인, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 방법.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 박테리아 균주와의 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생약독화 박테리아 균주는 PSA 발현 세포에 대한 세포의 면역 반응을 유도할 수 있는 항원 제시 세포(APC)를 자극하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생 약독화 리 스테리아 모노사이토젠 균주는 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현 벡터로 형질전환된, 유전자 조작된 균주를 포함하는, 약제.
제14항에 있어서, 상기 tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드는 서열번호 54의 서열 또는 거기에 적어도 99% 상동인 서열로 구성되고, 상기 N-말단 LLO 펩타이드는 상기 융합 단백질의 면역원성을 향상시키는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와의 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생약독화 리스테리아모노사이토젠 균주는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주를 포함하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와의 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생약독화 리스테리아모노사이토젠 균주는 LmddA-143 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) (염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 박테리아 균주와의 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생약독화 박테리아 균주는 PSA 발현 세포에 대한 세포의 면역 반응을 유도할 수 있는 항원 제시 세포(APC)를 자극하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생 약독화 리 스테리아 모노사이토젠 균주는 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현 벡터로 형질전환된, 유전자 조작된 균주를 포함하는, 약제.
제19항에 있어서, 상기 tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드는 서열번호 54의 서열 또는 거기에 적어도 99% 상동인 서열로 구성되고, 상기 N-말단 LLO 펩타이드는 상기 융합 단백질의 면역원성을 향상시키는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와의 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생약독화 리스테리아모노사이토젠 균주는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주를 포함하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와의 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생약독화 리스테리아모노사이토젠 균주는 LmddA-143 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) (염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 박테리아 균주와의 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생약독화 박테리아 균주는 PSA 발현 세포에 대한 세포의 면역 반응을 유도할 수 있는 항원 제시 세포(APC)를 자극하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와의 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주는 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현 벡터로 형질전환된, 유전자 조작된 균주를 포함하는, 약제.
제24항에 있어서, 상기 tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드는 서열번호 54의 서열 또는 거기에 적어도 99% 상동인 서열로 구성되고, 상기 N-말단 LLO 펩타이드는 상기 융합 단백질의 면역원성을 향상시키는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와의 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생약독화 리스테리아모노사이토젠 균주는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주를 포함하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주와의 병용을 위한 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하되, 상기 생약독화 리스테리아모노사이토젠 균주는 LmddA-143 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) (염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제와의 병용을 위한 생약독화 박테리아 균주를 포함하되, 상기 생약독화 박테리아 균주는 PSA 발현 세포에 대한 세포의 면역 반응을 유도할 수 있는 항원 제시 세포(APC)를 자극하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제와의 병용을 위한 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 포함하되, 상기 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주는 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현 벡터로 형질전환된, 유전자 조작된 균주를 포함하는, 약제.
제29항에 있어서, 상기 tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드는 서열번호 54의 서열 또는 거기에 적어도 99% 상동인 서열로 구성되고, 상기 N-말단 LLO 펩타이드는 상기 융합 단백질의 면역원성을 향상시키는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제와의 병용을 위한 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 포함하되, 상기 생약독화 리스테리아모노사이토젠 균주는 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주를 포함하고, 상기 PD-1 길항제는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-PD-1 단클론 항체이고, 상기 중쇄 및 경쇄는 서열번호 21과 서열번호 22를 각각 포함하는, 약제.
전립선암을 진단받은 환자를 치료하기 위해 예정된 사멸-1 단백질(PD-1)의 길항제와의 병용을 위한 생약독화 리스테리아 모노사이토젠 균주를 포함하되, 상기 생약독화 리스테리아모노사이토젠 균주는 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하고, 상기 PD-1 길항제는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-PD-1 단클론 항체이고, 상기 중쇄 및 경쇄는 서열번호 21과 서열번호 22를 각각 포함하는, 약제.
제13항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 길항제는 항-PD-1 단클론 항체인, 약제.
제13항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 균주는 보조제와 함께 투여되는, 약제.
제34항에 있어서, 상기 보조제는 몬타나이드 ISA 51, GM-CSF, KLH, 사이토킨, 성장 인자, 세포 집단, QS21, 프로인트 불완전 보조제, 인산 알루미늄, 수산화 알루미늄, BCG, 명반, 인터루킨, 메틸화되지 않은 CpG 올리고뉴클레오티드, 퀼 글리코시드, 모노포스포릴 지질 A, 리포좀, 세균성 미토겐, 박테리아 독소 또는 케모카인, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 약제.
제13항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 길항제는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-PD-1 단클론 항체이고, 상기 중쇄 및 경쇄는 서열번호 21과 서열번호 22를 각각 포함하며, 상기 항체는 pH 5.5의 10 mM 히스티딘 완충액 내에 7% (w/v) 수크로스, 0.02% (w/v) 폴리소베이트 80을 포함하는 액체 약제로 제형화되는, 약제.
제13항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 전이성의 거세 저항성 전립선암(mCRPC)인, 약제.
제13항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 전립선암은 PD-L1 발현에 대해 양성반응을 보이는, 약제.
제13항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 길항제는 MK-3475인, 약제.
제1 용기, 제2 용기 및 패키지 인서트를 포함하는 키트로서, 상기 제1 용기는 예정된 사멸 1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하는 약제의 적어도 1회 투여량을 포함하고, 상기 제2 용기는 생약독화 박테리아 균주를 포함하는 약제의 적어도 1회 투여량을 포함하고, 상기 패키지 인서트는 상기 약제들을 사용하여 전립선암 환자를 치료하기 위한 지도를 포함하고, 상기 생약독화 박테리아 균주는 PSA 발현 세포들에 대한 세포 면역 반응을 유인할 수 있는 항원 제시 세포(APC)들을 자극하는, 키트.
제1 용기, 제2 용기 및 패키지 인서트를 포함하는 키트로서, 상기 제1 용기는 예정된 사멸 1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하는 약제의 적어도 1회 투여량을 포함하고, 상기 제2 용기는 생약독화 리스테리아 모노사이토젠를 포함하는 약제의 적어도 1회 투여량을 포함하고, 상기 패키지 인서트는 상기 약제들을 사용하여 전립선암 환자를 치료하기 위한 지도를 포함하고, 상기 생약독화 리스테리아 모노사이토젠은 말단이 절단된 리스테리오리신 O(tLLO)에 융합된 PSA 항원을 발현하는 발현 벡터로 형질전환되어, 유전자 조작된 균주를 포함하는, 키트.
제41항에 있어서, 상기 tLLO-PSA 융합 폴리펩타이드는 서열번호 54의 서열 또는 거기에 적어도 99% 상동인 서열로 구성되고, 상기 N-말단 LLO 펩타이드는 상기 융합 단백질의 면역원성을 향상시키는, 키트.
제1 용기, 제2 용기 및 패키지 인서트를 포함하는 키트로서, 상기 제1 용기는 예정된 사멸 1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하는 약제의 적어도 1회 투여량을 포함하고, 상기 제2 용기는 생약독화 리스테리아 모노사이토젠를 포함하는 약제의 적어도 1회 투여량을 포함하고, 상기 패키지 인서트는 상기 약제들을 사용하여 전립선암 환자를 치료하기 위한 지도를 포함하고, 상기 생약독화 리스테리아 모노사이토젠은 LmddA-142 (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) pADV142) 균주를 포함하는, 키트.
제1 용기, 제2 용기 및 패키지 인서트를 포함하는 키트로서, 상기 제1 용기는 예정된 사멸 1 단백질(PD-1)의 길항제를 포함하는 약제의 적어도 1회 투여량을 포함하고, 상기 제2 용기는 생약독화 리스테리아 모노사이토젠를 포함하는 약제의 적어도 1회 투여량을 포함하고, 상기 패키지 인서트는 상기 약제들을 사용하여 전립선암 환자를 치료하기 위한 지도를 포함하고, 상기 생약독화 리스테리아 모노사 이토젠은 LmddA-143(염색체 내 hly 유전자에 융합된 klk3을 갖는 10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) (10403S dal ^(-) dat ^(-) actA ^(-) ) 균주를 포함하는, 키트.
제40항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 균주는 보조제와 함께 투여되는, 키트.
제45항에 있어서, 상기 보조제는 몬타나이드 ISA 51, GM-CSF, KLH, 사이토킨, 성장 인자, 세포 집단, QS21, 프로인트 불완전 보조제, 인산 알루미늄, 수산화 알루미늄, BCG, 명반, 인터루킨, 메틸화되지 않은 CpG 올리고뉴클레오티드, 퀼 글리코시드, 모노포스포릴 지질 A, 리포좀, 세균성 미토겐, 박테리아 독소 또는 케모카인, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 키트.
제40항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 면역조직화학(IHC) 분석에 의해 PD-L1 발현에 대하여 양성반응을 보이는 전립선암 환자의 치료에 약제를 사용하도록 의도하는 지도가 기술되어있는, 키트.
제40항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 전립선암은 전이성의 거세 저항성 전립선암(mCRPC)인, 키트.
제40항 내지 48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 길항제는 항-PD-1 단클론 항체인, 키트.
제49항에 있어서, 상기 항-PD-1 단클론 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄 및 경쇄는 서열번호 21과 서열번호 22를 각각 포함하는, 키트.