TW202242121A - 靶向cd8之病毒載體之用途 - Google Patents

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克利斯多福 班多羅
派特翠西亞 庫魯特
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阿奇諾拉 歐魯米德 艾曼努爾
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Abstract

本文中提供使用靶向CD8之病毒載體進行轉導休眠或未經活化之T細胞之方法。

Description

靶向CD8之病毒載體之用途
本發明係關於使用靶向CD8之病毒載體進行轉導休眠或未經活化T細胞之方法。
病毒載體(包括慢病毒載體)通常用於向細胞中遞送外源性物質。然而，將病毒載體轉導至某些目標細胞具有挑戰性。需要用於靶向所需細胞及改良遞送之方法的經改良之病毒載體，包括慢病毒載體。所提供之本發明可解決此需求。
本申請案係尤其基於可使用靶向CD8之病毒載體活體外及活體內有效轉導休眠或未經活化T細胞之意外發現。
本文中提供用於轉導T細胞之方法，該方法包含使未經活化之T細胞與包含CD8結合劑之慢病毒載體接觸，其中該慢病毒載體轉導未經活化之T細胞。在一些實施例中，T細胞為CD8+ T細胞。在一些實施例中，未經活化之T細胞之表面對一或多種選自由以下組成之群之T細胞活化標記物呈陰性：CD25、CD44及CD69。
在一些實施例中，未經活化之T細胞未經抗CD3抗體(例如，OKT3)處理。在一些實施例中，未經活化之T細胞未經抗CD28抗體(例如，CD28.2)處理。在一些實施例中，未經活化之T細胞未經抗CD3抗體(例如，OKT3)或抗CD28抗體(例如，CD28.2)處理。在一些實施例中，未經活化之T細胞未經與抗CD3抗體(例如，OKT3)及抗CD28抗體(例如，CD28.2)偶合之珠粒處理，視情況其中該珠粒為超順磁珠粒。在一些實施例中，珠粒為超順磁珠粒。在一些實施例中，未經活化之T細胞未經T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)處理，視情況其中該T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。在一些實施例中，T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。在一些實施例中，未經活化之T細胞未經可溶性T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體或可溶性CD80、可溶性CD86、可溶性CD137L或可溶性ICOS-L)處理。
在一些所提供之任何實施例中，慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原。在一些實施例中，經工程改造之受體為經工程改造之T細胞受體(eTCR)。在一些實施例中，經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)。在一些實施例中，CAR包含抗原結合域、跨膜域及細胞內信號傳導域，該細胞內信號傳導域包含CD3ζ信號傳導域及共刺激性信號傳導域之細胞內組分。在一些實施例中，共刺激性信號傳導域為CD28共刺激域。在一些實施例中，CD28共刺激性信號傳導域包含SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，共刺激性信號傳導域為4-1BB信號傳導域。在一些實施例中，4-1BB信號傳導域包含SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，CD3ζ信號傳導域包含SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:100中所闡述之序列。在一些實施例中，跨膜域包含SEQ ID NO:94、95及96中之任一者中所闡述之序列。在一些實施例中，跨膜域包含SEQ ID NO:94中所闡述之序列。在一些實施例中，跨膜域包含SEQ ID NO:95中所闡述之序列。在一些實施例中，跨膜域包含SEQ ID NO:96中所闡述之序列。在一些實施例中，CAR包含鉸鏈域。在一些實施例中，鉸鏈域包含SEQ ID NO:88、89、90、91、92、93及180中之任一者中所闡述之序列。在一些實施例中，鉸鏈域包含SEQ ID NO:88中所闡述之序列。在一些實施例中，鉸鏈域包含SEQ ID NO:89中所闡述之序列。在一些實施例中，鉸鏈域包含SEQ ID NO:90中所闡述之序列。在一些實施例中，鉸鏈域包含SEQ ID NO:91中所闡述之序列。在一些實施例中，鉸鏈域包含SEQ ID NO:92中所闡述之序列。在一些實施例中，鉸鏈域包含SEQ ID NO:93中所闡述之序列。在一些實施例中，鉸鏈域包含SEQ ID NO:180中所闡述之序列。
在一些實施例中，抗原結合域結合於選自由以下組成之群之抗原：CD19、CD20、CD22及BCMA。在一些實施例中，抗原結合域結合於CD19。在一些實施例中，抗原結合域包含有分別包含SEQ ID NO:108、109及110中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:103、104及105中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，抗原結合域包含有包含SEQ ID NO:107中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:102中所闡述之胺基酸序列之VL區。在一些實施例中，抗原結合域包含SEQ ID NO:101中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合域包含SEQ ID NO:111中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含SEQ ID NO:113中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含SEQ ID NO:115中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含SEQ ID NO:117中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含SEQ ID NO:119中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含由SEQ ID NO:112中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含由SEQ ID NO:114中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含由SEQ ID NO:116中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含由SEQ ID NO:118中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗原結合域結合於CD20。在一些實施例中，抗原結合域包含有分別包含SEQ ID NO:126、127及182中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:122、123及124中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，抗原結合域包含有包含SEQ ID NO:125中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:121中所闡述之胺基酸序列之VL區。在一些實施例中，抗原結合域包含SEQ ID NO:120中所闡述之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗原結合域結合於CD22。在一些實施例中，抗原結合域包含有分別包含SEQ ID NO:130、131及132中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:134、135及136中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，抗原結合域包含有分別包含SEQ ID NO:139、140及142中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:143、144及145中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，抗原結合域包含有包含SEQ ID NO:129中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:133中所闡述之胺基酸序列之VL區。在一些實施例中，抗原結合域包含有包含SEQ ID NO:138中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:142中所闡述之胺基酸序列之VL區。在一些實施例中，抗原結合域包含SEQ ID NO:128中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合域包含SEQ ID NO:137中所闡述之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗原結合域結合於BCMA。在一些實施例中，抗原結合域包含有分別包含SEQ ID NO:152、152及154中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:148、149及150中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，抗原結合域包含有分別包含SEQ ID NO:161、162及163中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:157、158及159中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，抗原結合域包含有分別包含SEQ ID NO:165、166及167中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3。在一些實施例中，抗原結合域包含有分別包含SEQ ID NO:174、175及176中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:170、171及172中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，抗原結合域包含有包含SEQ ID NO:151中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:147中所闡述之胺基酸序列之VL區。在一些實施例中，抗原結合域包含有包含SEQ ID NO:160中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:156中所闡述之胺基酸序列之VL區。在一些實施例中，抗原結合域包含有包含SEQ ID NO:173中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:169中所闡述之胺基酸序列之VL區。在一些實施例中，抗原結合域包含有包含SEQ ID NO:164中所闡述之胺基酸序列之VH區。在一些實施例中，抗原結合域包含SEQ ID NO:146中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合域包含SEQ ID NO:155中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合域包含SEQ ID NO:168中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含SEQ ID NO:178中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含由SEQ ID NO:177中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列集合。
在一些實施例中，未經活化之T細胞為人類T細胞。
在一些實施例中，未經活化之T細胞在個體中。在一些實施例中，未經活化之T細胞在活體外。在一些實施例中，未經活化之T細胞為來自個體之離體細胞。在所提供之方法之一些實施例中，在接觸之前，個體未被投與T細胞活化治療。
在一些實施例中，本文中任何所提供之方法係在活體內進行。在一些實施例中，本文中任何所提供之方法皆不離體或不在活體外進行。
在一些所提供之方法之任何實施例中，個體患有疾病或病狀，諸如癌症。在一些實施例中，慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原，視情況其中經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。在一些實施例中，經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。在一些實施例中，經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)。在一些實施例中，經工程改造之受體為經工程改造之T細胞受體(TCR)。
在一些所提供之任何方法中，方法進一步包含編輯T細胞以不活化B2M、CIITA、TRAC及TRB基因中之一或多者。在一些實施例中，編輯T細胞以不活化B2M、CIITA及TRAC基因。在一些所提供之任何方法中，方法進一步包含在指定的基因座處插入編碼CD47之基因。在一些實施例中，指定的基因座係選自由以下組成之群： B2M基因座、 CIITA基因座、 TRAC基因座、 TRB基因座或安全港基因座(safe harbor locus)。在一些實施例中，安全港基因座係選自由以下組成之群： AAVS1基因座、 CCR5基因座及 ROSA26基因座。
本文中亦提供由所提供之任何方法中之方法產生之經轉導之T細胞。在一些實施例中，T細胞在一或多個基因之兩個對偶基因處不活化。本文中亦提供包含所提供之經轉導之T細胞之組合物。在一些實施例中，組合物為醫藥組合物。
本文中提供用於轉導T細胞群體之方法，該方法包含：使未經活化之T細胞群體與包含慢病毒載體之組合物接觸，該等慢病毒載體包含CD8結合劑，其中以至少1%之效率轉導未經活化之T細胞群體。在一些實施例中，以至少5%之效率轉導未經活化之T細胞群體。在一些實施例中，以至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%之效率轉導未經活化之T細胞群體。在一些實施例中，以至少10%之效率轉導未經活化之T細胞群體。在一些實施例中，以至少15%之效率轉導未經活化之T細胞群體。在一些實施例中，以至少20%之效率轉導未經活化之T細胞群體。在一些實施例中，以至少25%之效率轉導未經活化之T細胞群體。在一些實施例中，以至少30%之效率轉導未經活化之T細胞群體。在一些實施例中，以至少35%之效率轉導未經活化之T細胞群體。
在一些實施例中，未經活化之T細胞群體中之至少75%的T細胞之表面對一或多種選自由以下組成之群之T細胞活化標記物呈陰性：CD25、CD44及CD69 (例如，群體中之至少80%、至少85%、至少90%、至少95%的T細胞之表面對T細胞活化標記物呈陰性)。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體包含CD8+ T細胞(例如未經活化之T細胞群體中之至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%為CD8+ T細胞)。在一些實施例中，至少75%的CD8+ T細胞之表面對一或多種選自由以下組成之群之T細胞活化標記物呈陰性：CD25、CD44及CD69 (例如，群體中至少80%、至少85%、至少90%、至少95%的CD8+ T細胞之表面對T細胞活化標記物呈陰性)。在一些實施例中，該一或多種T細胞活化標記物為CD25。在一些實施例中，該一或多種T細胞活化標記物為CD44。在一些實施例中，該一或多種T細胞活化標記物為CD69。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體中之CD8+ T細胞係以至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%之效率經轉導。
在一些實施例中，未經活化之T細胞群體未經抗CD3抗體(例如，OKT3)處理。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體未經抗CD28抗體(例如，CD28.2)處理。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體未經抗CD3抗體(例如，OKT3)或抗CD28抗體(例如，CD28.2)處理。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體未經與抗CD3抗體(例如，OKT3)及抗CD28抗體(例如，CD28.2)偶合之珠粒處理，視情況其中該珠粒為超順磁珠粒。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體未經與抗CD3抗體(例如，OKT3)及抗CD28抗體(例如，CD28.2)偶合之珠粒處理。在一些實施例中，珠粒為超順磁珠粒。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體未經T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)處理，視情況其中T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體未經T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)處理。在一些實施例中，T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體未經可溶性T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體或可溶性CD80、可溶性CD86、可溶性CD137L或可溶性ICOS-L)處理。
在一些實施例中，未經活化之T細胞群體為人類細胞。
在一些實施例中，未經活化之T細胞群體係在個體中。在一些實施例中，在接觸之前，個體未被投與T細胞活化治療。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體係在活體外。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體為來自個體之離體細胞。在一些實施例中，未經活化之T細胞群體包含周邊血液單核細胞(PBMC)或其包含CD8+ T細胞之子集。在一些實施例中，未經活化之細胞群體為經富集之選自來自個體之生物樣品的T細胞群體，視情況其中針對表面對T細胞標記物(例如，CD3或CD8)呈陽性之T細胞來選擇T細胞。在一些實施例中，未經活化之細胞群體為經富集之選自來自個體之生物樣品之T細胞群體。在一些實施例中，針對表面對T細胞標記物(例如，CD3或CD8)呈陽性之T細胞來選擇T細胞。在一些實施例中，T細胞標記物為CD3。在一些實施例中，T細胞標記物為CD8。在一些實施例中，生物樣品為全血樣品、血球分離術樣品或白血球分離術樣品。在一些實施例中，生物樣品為全血樣品。在一些實施例中，生物樣品為血球分離術樣品。在一些實施例中，生物樣品為白血球分離術樣品。
在一些實施例中，個體患有疾病或病狀。在一些實施例中，慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原，視情況其中經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。在一些實施例中，慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原。在一些實施例中，經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。在一些實施例中，經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)。在一些實施例中，經工程改造之受體為經工程改造之T細胞受體(TCR)。
在一些所提供之任何方法中，方法進一步包含編輯T細胞或T細胞群體以不活化B2M、CIITA、TRAC及TRB基因中之一或多者。在一些所提供之任何方法中，編輯T細胞群體以不活化B2M、CIITA及TRAC基因。在一些實施例中，編輯T細胞群體中之T細胞以不活化B2M、CIITA及TRB基因。在一些實施例中，方法進一步包含在指定的基因座處插入編碼CD47之基因。在一些實施例中，指定的基因座係選自由以下組成之群： B2M基因座、 CIITA基因座、 TRAC基因座、 TRB基因座或安全港基因座。在一些實施例中，安全港基因座係選自由以下組成之群： AAVS1基因座、 CCR5基因座及 ROSA26基因座。
在一些所提供之任何方法中，方法進一步包含擴增經轉導之T細胞群體。在一些實施例中，擴增包含將經轉導之細胞與一或多種T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)一起培育，視情況其中T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。在一些實施例中，擴增包含將經轉導之細胞與一或多種T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)一起培育。在一些實施例中，T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。在一些所提供之任何方法中，方法進一步包含將經轉導之T細胞與一或多種T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)一起培育，視情況其中T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。在一些所提供之任何方法中，方法進一步包含將經轉導之T細胞與一或多種T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)一起培育。在一些實施例中，T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。
本文中亦提供由任何所提供之方法產生之經轉導之T細胞群體。在一些實施例中，未經活化之細胞群體中之至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%的細胞在一或多種基因處不活化。在一些實施例中，群體中之至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%的未經活化之CD8+ T細胞經轉導且在一或多種基因處不活化。在一些實施例中，群體中之約1%的未經活化之CD8+ T細胞經轉導且在一或多種基因處不活化。在一些實施例中，群體中之約5%的未經活化之CD8+細胞經轉導且在一或多種基因處不活化。在一些實施例中，群體中之約10%的未經活化之CD8+ T細胞經轉導且在一或多種基因處不活化。在一些實施例中，群體中之約15%的未經活化之CD8+ T細胞經轉導且在一或多種基因處不活化。在一些實施例中，群體中之約20%的未經活化之CD8+ T細胞經轉導且在一或多種基因處不活化。在一些實施例中，群體中之約25%的未經活化之CD8+ T細胞經轉導且在一或多種基因處不活化。在一些實施例中，群體中之約30%的未經活化之CD8+ T細胞經轉導且在一或多種基因處不活化。在一些實施例中，群體中之約35%的未經活化之CD8+ T細胞經轉導且在一或多種基因處不活化。在一些實施例中，群體中之細胞在一或多種基因之兩個對偶基因處不活化。
本文中亦提供包含經轉導之T細胞群體之組合物，視情況其中組合物為醫藥組合物。本文中亦提供包含經轉導之T細胞群體之組合物。在一些實施例中，組合物為醫藥組合物。本文中亦提供包含經轉導之T細胞群體之醫藥組合物。本文中亦提供用於治療患有疾病或病狀之個體之方法，該方法包含向個體投與任何所提供之包含經轉導之T細胞群體之組合物。在一些實施例中，組合物並非皮下(SC)投與。在一些實施例中，組合物並非肌肉內(IM)投與。在一些實施例中，組合物並非靜脈內(IV)投與。
在一些所提供之任何組合物中，組合物進一步包含低溫保存劑。在一些實施例中，低溫保存劑為DMSO。
本文中提供用於活體內轉導T細胞之方法，該方法包含：向個體投與包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，其中慢病毒載體轉導個體內之T細胞，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向該個體投與T細胞活化治療。本文中亦提供活體內轉導T細胞之方法，該方法包含：向個體投與任何所提供之組合物，其中慢病毒載體轉導個體內之T細胞，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向該個體投與T細胞活化治療。在一些實施例中，個體患有疾病或病狀。
本文中亦提供用於治療患有疾病或病狀之個體之方法，該方法包含：向個體投與包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向該個體投與T細胞活化治療。本文中亦提供用於治療患有疾病或病狀之個體之方法，該方法包含向個體投與任何所提供之組合物，其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向該個體投與T細胞活化治療。在一些實施例中，疾病或病狀為癌症。
本文中亦提供用於擴增有需要之個體中之T細胞之方法，該等T細胞能夠識別及殺傷腫瘤細胞，該方法包含：向個體投與包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向該個體投與T細胞活化治療。本文中亦提供用於擴增有需要之個體中之T細胞之方法，該等T細胞能夠識別及殺傷腫瘤細胞，該方法包含：向個體投與本文中所提供之組合物，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向該個體投與T細胞活化治療。本文中亦提供用於擴增有需要之個體中之T細胞之方法，該等T細胞能夠識別及殺傷腫瘤細胞，該方法包含向個體投與本文中所提供之組合物。在一些實施例中，組合物並非皮下(SC)投與。在一些實施例中，組合物並非肌肉內(IM)投與。在一些實施例中，組合物並非靜脈內(IV)投與。
本文中亦提供包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體的組合物之用途，其係用於治療患有疾病或病狀(視情況地，癌症)之個體。本文中亦提供本文中所提供之組合物之用途，其係用於調配用以治療患有疾病或病狀(視情況地，癌症)之個體之藥劑。本文中亦提供包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體的組合物之用途，其係用於治療患有疾病或病狀之個體。本文中亦提供本文中所提供之組合物之用途，其係用於調配用以治療患有疾病或病狀之個體之藥劑。在一些實施例中，疾病或病狀為癌症。
本文中亦提供包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，其係用於治療患有疾病或病狀(視情況地，癌症)之個體。本文中亦提供本文中所提供之組合物，其係用於治療患有疾病或病狀(視情況地，癌症)之個體。本文中亦提供包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，其係用於治療患有疾病或病狀之個體。本文中亦提供本文中所提供之組合物，其係用於治療患有疾病或病狀之個體。在一些實施例中，疾病或病狀為癌症。
本文中亦提供包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體的組合物之用途，其係用於調配用以擴增有需要之個體中之能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞之藥劑。本文中亦提供本文中所提供之組合物之用途，其係用於調配用以擴增有需要之個體中之能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞之藥劑。
本文中提供包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，其係用於擴增有需要之個體中之能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞。本文中亦提供本文中所提供之任何組合物，其係用於擴增有需要之個體中之能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞。
在一些所提供之任何實施例中，本文中所提供之用途或供使用之組合物係用於在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)未被投與或不會被投與T細胞活化治療之個體。
在一些所提供之任何方法、本文中所提供之用途或供使用之組合物中，疾病或病狀為癌症。在一些實施例中，慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原。在一些實施例中，慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別在腫瘤細胞上表現之蛋白質。在一些實施例中，慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原，視情況其中經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。在一些實施例中，慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別在腫瘤細胞上表現之蛋白質，視情況其中經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。在一些實施例中，經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。
在一些實施例中，T細胞活化治療包含投與抗CD3抗體(例如，OKT3)。在一些實施例中，T細胞活化治療包含投與可溶性T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體或重組CD80、CD86、CD137L、ICOS-L)。在一些實施例中，T細胞活化治療包含投與T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21)。在一些實施例中，T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。在一些實施例中，T細胞活化治療包含投與T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21)，視情況其中T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。在任何實施例中之一些實施例中，T細胞活化治療包含投與重組IL-7，視情況地，人類IL-7。在任何實施例中之一些實施例中，T細胞活化治療包含投與重組IL-7。在一些實施例中，T細胞活化治療包含投與重組人類IL-7。在任何實施例中之一些實施例中，T細胞活化治療包含投與淋巴球耗減療法，視情況投與環磷醯胺及/或氟達拉濱(fludarabine)。在任何實施例中之一些實施例中，T細胞活化治療包含投與淋巴球耗減療法。在一些實施例中，T細胞活化治療包含投與環磷醯胺及/或氟達拉濱。在一些實施例中，T細胞活化治療包含投與環磷醯胺或氟達拉濱。在一些實施例中，T細胞活化治療包含投與環磷醯胺。在一些實施例中，T細胞活化治療包含投與氟達拉濱。在一些實施例中，T細胞活化治療包含投與環磷醯胺及氟達拉濱。
在一些所提供之任何實施例中，不向個體同時投與T細胞活化治療及慢病毒載體。在一些所提供之任何實施例中，在與慢病毒載體接觸或投與包含慢病毒載體之組合物之前1個月內不向個體投與T細胞活化治療。在一些所提供之任何實施例中，在與慢病毒載體接觸或投與包含慢病毒載體之組合物之前1週、2週、3週或4週內或剛好或約1週、2週、3週或4週時，視情況剛好或約1、2、3、4、5、6或7天時，不向個體投與T細胞活化治療。在一些所提供之任何實施例中，在與慢病毒載體接觸或投與包含慢病毒載體之組合物之前剛好或約1、2、3、4、5、6或7天時不向個體投與T細胞活化治療。在一些所提供之任何實施例中，在與慢病毒載體接觸或投與包含慢病毒載體之組合物之後1個月內不向個體投與T細胞活化治療。在一些所提供之任何實施例中，在與慢病毒載體接觸或投與包含慢病毒載體之組合物之後1週、2週、3週或4週內或剛好或約1週、2週、3週或4週時，視情況剛好或約1、2、3、4、5、6或7天時不向個體投與T細胞活化治療。在一些所提供之任何實施例中，在與慢病毒載體接觸或投與包含慢病毒載體之組合物之後剛好或約1、2、3、4、5、6或7天時不向個體投與T細胞活化治療。
在一些所提供之任何實施例中，慢病毒載體不包含或不編碼T細胞活化劑。在一些所提供之任何實施例中，慢病毒載體不包含或不編碼膜結合之T細胞活化劑。在一些所提供之任何實施例中，慢病毒載體不包含或不編碼呈現於表面上之T細胞活化劑。在一些所提供之任何實施例中，慢病毒載體不包含呈現於表面上之T細胞活化劑，諸如其中T細胞活化劑係選自由以下組成之群：CD3抗體(例如，抗CD3 scFv)；T細胞活化細胞介素(例如，IL-2、IL-7、IL-15或IL-21)；或T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體、CD80、CD86、CD137L或ICOS-L)。在一些實施例中，T細胞活化劑係選自由以下組成之群：CD3抗體(例如，抗CD3 scFv)；T細胞活化細胞介素(例如，IL-2、IL-7、IL-15或IL-21)；及T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體、CD80、CD86、CD137L或ICOS-L)。在一些實施例中，T細胞活化劑為能夠結合CD3及/或CD28之多肽。在一些實施例中，T細胞活化劑為能夠結合CD3之多肽。在一些實施例中，T細胞活化劑為能夠結合CD28之多肽。在一些實施例中，T細胞活化劑為淋巴增生元件。在一些實施例中，T細胞活化劑為活化STAT3路徑、STAT4路徑及/或Jak/STAT5路徑之細胞介素或細胞介素受體或其信號傳導域。在一些實施例中，T細胞活化劑為T細胞存活模體。在一些實施例中，T細胞存活模體為IL-7受體、IL-15受體或CD28或其功能部分。在一些實施例中，T細胞活化劑為微型RNA (miRNA)或短髮夾RNA (shrRNA)。在一些實施例中，miRNA或shRNA刺激STAT5路徑。在一些實施例中，miRNA或shRNA抑制SOCS路徑。在一些實施例中，miRNA或shRNA刺激STAT5路徑且抑制SOCS路徑。
在一些實施例中，慢病毒載體不包含或不編碼抑制性RNA分子。在一些實施例中，抑制性RNA分子靶向由T細胞表現之基因轉錄之mRNA。在一些實施例中，抑制性RNA分子靶向編碼T細胞受體(TCR)之組分之基因。在一些實施例中，該基因為PD-1、CTLA4、TCRα、TCRβ、CD3ζ、SOCS1、SMAD2、miR-155目標、IFNγ、TRAIL2及/或ABCG1。
在一些實施例中，慢病毒載體包含或編碼抑制性RNA分子。在一些實施例中，抑制性RNA分子靶向由T細胞表現之基因轉錄之mRNA。在一些實施例中，抑制性RNA分子靶向編碼T細胞受體(TCR)之組分之基因。在一些實施例中，該基因為PD-1、CTLA4、TCRα、TCRβ、CD3ζ、SOCS1、SMAD2、miR-155目標、IFNγ、TRAIL2及/或ABCG1。
在一些所提供之任何實施例中，CD8結合劑為抗CD8抗體或抗原結合片段。在一些所提供之任何實施例中，抗CD8抗體或抗原結合片段為小鼠、兔、人類或人類化抗體或抗原結合片段。在一些實施例中，抗原結合片段為單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，抗CD8抗體或抗原結合片段為單域抗體。在一些實施例中，抗CD8抗體或抗原結合片段為駱駝科(例如，美洲駝、羊駝、駱駝)抗體或抗原結合片段(例如，VHH)。
在一些所提供之任何實施例中，CD8結合劑結合於CD8α鏈及/或CD8β鏈。在一些所提供之任何實施例中，CD8結合劑結合於CD8α鏈。在一些所提供之任何實施例中，CD8結合劑結合於CD8β鏈。在一些所提供之任何實施例中，CD8結合劑結合於CD8α鏈及CD8β鏈。
在一些所提供之任何實施例中，CD8結合劑在慢病毒載體之表面上暴露。在一些實施例中，CD8結合劑與併入病毒包膜之跨膜域融合。
在一些實施例中，慢病毒載體經病毒融合蛋白質假模式化。在一些實施例中，病毒融合蛋白質為VSV-G蛋白或其功能變異體。在一些實施例中，病毒融合蛋白質為科卡爾病毒G蛋白(Cocal virus G protein)或其功能變異體。在一些實施例中，病毒融合蛋白質為α病毒融合蛋白質(Alphavirus fusion protein)(例如，辛得比斯病毒(Sindbis virus))或其功能變異體。在一些實施例中，病毒融合蛋白質為副黏液病毒科融合蛋白質(Paramyxoviridae fusion protein)(例如，麻疹病毒(Morbillivirus)或亨尼帕病毒(Henipavirus))或其功能變異體。在一些實施例中，病毒融合蛋白質為麻疹病毒融合蛋白質(Morbillivirus fusion protein)(例如，麻疹病毒(measles virus；MeV)、犬瘟熱病毒(canine distemper virus)、鯨麻疹病毒(Cetacean morbillivirus)、小反芻動物瘟疫病毒(Peste-des-petits-ruminants virus)、海豹瘟熱病毒(Phocine distemper virus)、牛瘟病毒(Rinderpest virus))或其功能變異體。在一些實施例中，病毒融合蛋白質為亨尼帕病毒融合蛋白質(例如，尼帕病毒(Nipah virus)、亨德拉病毒(Hendra virus)、賽得病毒(Cedar virus)、庫馬西病毒(Kumasi virus)、墨江病毒(Mòjiāng virus))或其功能變異體。
在一些所提供之任何實施例中，病毒融合蛋白質包含用於減少與其原生受體之結合之一或多個修飾。
在一些所提供之任何實施例中，病毒融合蛋白質與CD8結合劑融合。在一些實施例中，病毒融合蛋白質為或包含尼帕病毒融合蛋白質。在一些實施例中，病毒融合蛋白質為尼帕病毒融合蛋白質或其功能變異體。在一些實施例中，病毒融合蛋白質包含尼帕病毒F醣蛋白(NiV-F)或其生物活性部分及尼帕病毒G醣蛋白(NiV-G)或其生物活性部分。在一些實施例中，CD8結合劑與NiV-G或其生物活性部分融合。在一些實施例中，病毒融合蛋白質包含尼帕病毒F醣蛋白(NiV-F)或其生物活性部分及尼帕病毒G醣蛋白(NiV-G)或其生物活性部分，且其中CD8結合劑與NiV-G或其生物活性部分融合。在一些實施例中，CD8結合劑與尼帕病毒G醣蛋白或其生物活性部分之C端融合。在一些實施例中，CD8結合蛋白質直接或經由肽連接子融合。
在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分為野生型NiV-G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分。
在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分係經截短且缺少野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近至多40個相鄰胺基酸殘基。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有5個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:12中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:12中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有5個胺基酸截短。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:12中所闡述之胺基酸序列，或與SEQ ID NO:12中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:12中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有10個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:44中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:44中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有10個胺基酸截短。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:44中所闡述之胺基酸序列，或與SEQ ID NO:44中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:44中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有15個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:45中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:45中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有15個胺基酸截短。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:45中所闡述之胺基酸序列，或與SEQ ID NO:45中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:45中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有20個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:13中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:13中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有20個胺基酸截短。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:13中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:13中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:13中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有25個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:14中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:14中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有25個胺基酸截短。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:14中所闡述之胺基酸序列，或與SEQ ID NO:14中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:14中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有30個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:43中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:43中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有30個胺基酸截短。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:43中所闡述之胺基酸序列，或與SEQ ID NO:43中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:43中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有34個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:42中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:42中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有34個胺基酸截短。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:42中所闡述之胺基酸序列，或與SEQ ID NO:42中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:42中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有34個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:42中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:42中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有34個胺基酸截短。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:42中所闡述之胺基酸序列，或與SEQ ID NO:42中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分為突變型NiV-G蛋白。在一些所提供之任何實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分為呈現降低之與艾普瑞林(Ephrin) B2或艾普瑞林B3之結合之突變型NiV-G蛋白。在一些所提供之任何實施例中，突變型NiV-G蛋白或生物活性部分包含：一或多個對應於選自由E501A、W504A、Q530A及E533A組成之群的胺基酸取代之胺基酸取代，參考SEQ ID NO:4中所闡述之編號。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白或生物活性部分具有SEQ ID NO:17中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:17中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分具有SEQ ID NO:17中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分具有SEQ ID NO:18中所闡述之胺基酸序列，或與SEQ ID NO:18中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或生物活性部分具有SEQ ID NO:18中所闡述之胺基酸序列。
在一些所提供之任何實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分為野生型NiV-F蛋白質或其功能活性變異體或生物活性部分。在一些所提供之任何實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:40，不具有信號序列)之C端處或附近具有20個胺基酸截短，視情況其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:20中所闡述之序列或與SEQ ID NO:20中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些所提供之任何實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:41)之C端處或附近具有20個胺基酸截短。在一些實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:20中所闡述之序列或與SEQ ID NO:20中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:20中所闡述之序列。在一些所提供之任何實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分包含：i)在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:41)之C端處或附近具有20個胺基酸截短；及ii)N-連接之醣基化位點上之點突變，視情況其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:15中所闡述之序列或與SEQ ID NO:15中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些所提供之任何實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分包含：i)在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:41)之C端處或附近具有20個胺基酸截短；及ii)N-連接之醣基化位點上之點突變。在一些實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:15中所闡述之序列或與SEQ ID NO:15中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:15中所闡述之序列。在一些所提供之任何實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:40，不具有信號序列)之C端處或附近具有22個胺基酸截短，視情況其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:16或21中所闡述之序列或與SEQ ID NO:16或21中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些所提供之任何實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:40，不具有信號序列)之C端處或附近具有22個胺基酸截短。在一些實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:16或21中所闡述之序列或與SEQ ID NO:16或21中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:16中所闡述之序列或與SEQ ID NO:16中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:16中所闡述之序列。在一些實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:21中所闡述之序列或與SEQ ID NO:21中所闡述之序列呈現至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:21中所闡述之序列。
在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分包含SEQ ID NO:17中所闡述之胺基酸序列，且NiV-F蛋白質或其生物活性部分包含SEQ ID NO:21中所闡述之序列。在一些實施例中，NiV-G蛋白或其生物活性部分由SEQ ID NO:17中所闡述之胺基酸序列組成，且NiV-F蛋白質或其生物活性部分由SEQ ID NO:21中所闡述之序列組成。
在一些所提供之任何實施例中，慢病毒載體包含轉基因。在一些實施例中，轉基因包含核酸序列，其編碼能夠進行RNA干擾之RNA序列(例如，前miRNA、siRNA或shRNA)。在一些實施例中，轉基因係選自由以下組成之群：治療性基因、報導基因、編碼酶之基因、編碼前藥酶之基因、編碼細胞凋亡誘導劑之基因、編碼螢光蛋白之基因、編碼前藥活化酶之基因、編碼細胞凋亡蛋白質之基因、編碼細胞凋亡酶之基因、編碼自殺蛋白質之基因、編碼細胞介素之基因、編碼抗免疫抑制蛋白之基因、編碼表觀遺傳調節劑之基因、編碼T細胞受體(TCR)之基因、編碼嵌合抗原受體(CAR)之基因、編碼調節經轉導之細胞之細胞表面的蛋白質之基因、編碼調節內源性TCR之表現的蛋白質之基因及編碼將促腫瘤轉化成抗腫瘤信號之開關受體之基因。在一些實施例中，轉基因編碼結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞或病灶(例如，腫瘤)表現之蛋白質或抗原之經工程改造之受體，視情況其中該經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。在一些實施例中，轉基因編碼結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞或病灶(例如，腫瘤)表現之蛋白質或抗原之經工程改造之受體。在一些實施例中，經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。
在一些實施例中，轉基因編碼嵌合抗原受體(CAR)。在一些實施例中，轉基因編碼經工程改造之T細胞受體(TCR)。
在一些實施例中，接觸係藉由使用封閉式流體迴路向個體離體投與慢病毒載體來進行。在一些實施例中，投與係藉由使用封閉式流體迴路向個體離體投與慢病毒載體來進行。在一些實施例中，離體投藥包含(a)自個體獲得全血；(b)收集血液中之含有白血球組分之部分，該等白血球組分包含T細胞(例如，CD8+ T細胞)；(c)使包含T細胞(例如CD8+ T細胞)之白血球組分與包含慢病毒載體之組合物接觸；及(d)將經接觸之包含T細胞(例如，CD8+ T細胞)之白血球組分再輸注至個體中，其中步驟(a)-(d)係在封閉式流體迴路中依序進行。在一些實施例中，步驟(c)中之接觸持續不超過24小時、不超過18小時、不超過12小時或不超過6小時。
本申請案中所提及之所有公開案，包括專利文件、科學論文及資料庫皆以全文引用之方式併入本文中以用於所有目的，其引用之程度如同各個別公開案以引用之方式個別地併入一般。若本文中所闡述之定義與以引用之方式併入本文中之專利、申請案、公開申請案及其他出版物中所闡述之定義相反或不一致，則本文中所闡述之定義優先於以引用之方式併入本文中之定義。
本文中所使用之各小標題僅出於組織目的，且不應理解為限制所描述之標的物。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2021年1月11日提交之題為「USE OF CD8-TARGETED VIRAL VECTORS」之美國臨時申請案第63/136,202號、2021年2月17日提交之題為「USE OF CD8-TARGETED VIRAL VECTORS」之美國臨時申請案第63/150,498號、2021年3月30日提交之題為「USE OF CD8-TARGETED VIRAL VECTORS」之美國臨時申請案第63/168,235號及2021年6月17日提交之題為「USE OF CD8-TARGETED VIRAL VECTORS」之美國臨時申請案第63/211,947號之優先權，其內容以全文引用之方式併入本文中以用於所有目的。 I. 定義
除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術術語、標記法及其他技術及科學術語意欲具有與一般熟習所主張標的物所屬技術者通常所理解相同的含義。在一些情況下，為了清楚起見及/或為了便於參考，本文中定義具有通常所理解之含義的術語，且本文中包括此類定義不應必然解釋為表示與此項技術中一般理解之實質性差異。
除非另外規定，否則本文中所用之所有技術及科學術語、首字母縮寫詞及縮寫一般具有與一般熟習本發明所涉及之技術者通常所理解相同之含義。除非另外指明，否則化學及生物化學名稱之縮寫及符號係根據IUPAC-IUB命名法。除非另外指明，否則所有數值範圍包括界定範圍之值以及其間的所有整數值。
如本文中所使用，冠詞「一(a/an)」係指該冠詞之一個或超過一個(亦即，至少一個)語法賓語。作為實例，「一個元件」意謂一個元件或超過一個元件。
如本文中所使用，術語「約」將為一般熟習此項技術者理解且將在某種程度上取決於使用其之上下文而變化。如本文中所使用，當參考諸如量、時距及其類似物之可量測值時，術語「約」意謂涵蓋偏離指定值±20%或±10%，更佳±5%，甚至更佳±1%且甚至更佳±0.1%之偏差，因為該等偏差適於進行所揭示之方法。
如本文中所使用，「融質體」係指含有包裹內腔或空腔之兩性脂質雙層及與該兩性脂質雙層相互作用之促融劑之粒子。在實施例中，融質體包含核酸。在一些實施例中，融質體為膜密封之製劑。在一些實施例中，融質體係來源於源細胞。
如本文中所使用，「融質體組合物」係指包含一或多種融質體之組合物。
如本文中所使用，「促融劑」係指引起兩個膜密封之內腔之間的相互作用之試劑或分子。在實施例中，促融劑促進膜之融合。在其他實施例中，促融劑引起兩個內腔(例如，反轉錄病毒載體之內腔及目標細胞之細胞質)之間的連接，例如，孔。在一些實施例中，促融劑包含兩種或更多種蛋白質之複合物，例如，其中所有單獨的蛋白質皆不具有促融活性。在一些實施例中，促融劑包含靶向域。
如本文中所使用，「再靶向促融劑」係指包含靶向部分之促融劑，該靶向部分具有並非天然存在的促融劑形式之一部分的序列。在實施例中，促融劑包含與天然存在的促融劑形式中之靶向部分不同的靶向部分。在實施例中，天然存在的促融劑形式不具有靶向域，且再靶向促融劑包含天然存在的促融劑形式中不存在的靶向部分。在實施例中，促融劑經修飾以包含靶向部分。在實施例中，與天然存在的促融劑形式相比，促融劑包含靶向部分外(例如，跨膜域、促融活性域或細胞質域中)之一或多個序列變化。
關於蛋白質位置之術語「對應於」，諸如敍述核苷酸或胺基酸位置「對應於」所揭示之序列(諸如序列表中所闡述)中之核苷酸或胺基酸位置，係指基於結構序列比對或使用標準比對演算法(諸如GAP演算法)與所揭示之序列比對後鑑別之核苷酸或胺基酸位置。舉例而言，可藉由結構比對方法與參考序列進行比對來測定類似序列(例如，片段或物種變異體)之相應殘基。藉由比對序列，熟習此項技術者可例如使用保守性及一致胺基酸殘基作為引導物來鑑別相應殘基。
如本文中所使用之術語「有效量」意謂足以明顯且積極地改變所治療之症狀及/或病狀(例如，提供陽性臨床反應)之醫藥組合物之量。藉由主治醫師之知識及專項技能，用於醫藥組合物中之活性成分之有效量將視所治療之特定病狀、病狀之嚴重程度、治療持續時間、並行療法之性質、所使用之特定活性成分、特定醫藥學上可接受之賦形劑及/或所利用之載劑以及類似因素而變化。
如本文中所使用，關於病毒載體之「外源性試劑」係指並非包含於相應的野生型病毒或由相應的野生型源細胞製得之促融劑中且並非在相應的野生型病毒或由相應的野生型源細胞製得之促融劑中編碼之試劑。在一些實施例中，外源性試劑並非天然存在，諸如具有相對於天然存在之蛋白質或核酸改變(例如，藉由插入、缺失或取代)之序列的蛋白質或核酸。在一些實施例中，外源性試劑並非天然存在於源細胞中。在一些實施例中，外源性試劑天然存在於源細胞中，但對於病毒為外源性。在一些實施例中，外源性試劑並非天然存在於受體細胞中。在一些實施例中，外源性試劑天然存在於受體細胞中，但不以所需位準或所需時間存在。在一些實施例中，外源性試劑包含RNA或蛋白質。
如本文中所使用，「啟動子」係指順式調節DNA序列，其在可操作地連接至基因編碼序列時驅動基因之轉譯。啟動子可包含轉錄因子結合位點。在一些實施例中，啟動子與位於基因遠端之一或多種強化子協同起作用。
如本文中所使用，「可操作地連接」或「可操作地相關聯」包括對至少兩個序列之功能性連接之參考。舉例而言，可操作地連接包括啟動子與第二序列之間的連接，其中啟動子序列起始及介導對應於第二序列之DNA序列之轉錄。可操作地相關聯包括誘導或抑制元件與啟動子之間的連接，其中誘導或抑制元件充當啟動子之轉錄活化因子。
如本文中所使用，「反轉錄病毒核酸」係指至少含有用於單獨或與輔助細胞、輔助病毒或輔助質體組合封裝至反轉錄病毒或反轉錄病毒載體中所需之最小序列之核酸。在一些實施例中，反轉錄病毒核酸進一步包含或編碼外源性試劑、陽性目標細胞特異性調節元件、非目標細胞特異性調節元件或陰性TCSRE。在一些實施例中，反轉錄病毒核酸包含以下中之一或多者(例如，全部)：5' LTR (例如，用於促進整合)、U3 (例如，用於活化病毒性基因體RNA轉錄)、R (例如，Tat結合區域)、U5、3' LTR (例如，用於促進整合)、封裝位點(例如，psi (Ψ))、RRE (例如，用於結合於Rev及促進核輸出)。反轉錄病毒核酸可包含RNA (例如，當作為病毒粒子之一部分時)或DNA (例如，當引入源細胞時或在受體細胞中反轉錄之後)。在一些實施例中，使用包含gag、pol及env中之一或多者(例如，全部)之輔助細胞、輔助病毒或輔助質體封裝反轉錄病毒核酸。
如本文中所使用，術語「醫藥學上可接受」係指不會消除化合物之生物活性或特性且相對無毒的材料，諸如載劑或稀釋劑，亦即，該材料可在不引起非所需生物作用或以有害方式與含有其之組合物之任何組分相互作用的情況下向個人投與。
如本文中所使用，術語「醫藥組合物」係指至少一種本發明之化合物與諸如載劑、穩定劑、稀釋劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑及/或賦形劑之其他化學組分的混合物。醫藥組合物有助於向生物體投與化合物。此項技術中存在多種用於投與化合物之技術，包括(但不限於)靜脈內、口服、噴霧劑、腸胃外、經眼、經肺及局部投藥。
如本文中所使用，術語「治療」係指改善疾病或病症，例如，減緩或抑制或減少疾病或病症(例如，病症或其至少一種臨床症狀之根本原因)之發展。
如本文中所使用，術語「有效量」及「醫藥學上有效量」係指無毒但足以提供所需生物學結果之藥劑或藥物之量。該結果可為減少及/或緩解疾病或病症之病徵、症狀或起因；活體外或活體內系統(包括活生物體)之成像或監測；或生物系統之任何其他所需變化。可由一般熟習此項技術者使用常規實驗確定任何個別情況下之適當有效量。 II. 方法
在一些態樣中，使休眠或未經活化之T細胞與包括CD8結合劑之病毒載體(例如，反轉錄病毒載體或慢病毒載體)接觸。該接觸可在活體外(例如，藉由來源於健康供體或需要細胞療法之供體之T細胞)或藉由向個體投與病毒載體而在活體內進行。
在一些實施例中，休眠或未經活化之T細胞未經一或多種T細胞刺激性分子(例如，抗CD-3抗體)、一或多種T細胞共刺激性分子及/或一或多種T細胞活化細胞介素處理。在一些實施例中，休眠或未經活化之T細胞未經一或多種T細胞刺激性分子(例如，抗CD-3抗體)、一或多種T細胞共刺激性分子及/或一或多種T細胞活化細胞介素中之任一者處理。
在其他態樣中，施用包括用於向個體投與包括抗CD8結合劑之病毒載體之方法，其中該個體未被投與或未曾被投與T細胞活化治療。在一些實施例中，T細胞活化治療包括一或多種T細胞刺激性分子(例如，抗CD-3抗體)、一或多種T細胞共刺激性分子及/或一或多種T細胞活化細胞介素。在一些實施例中，個體未被投與或未曾被投與一或多種T細胞刺激性分子(例如，抗CD-3抗體)、一或多種T細胞共刺激性分子及/或一或多種T細胞活化細胞介素中之任一者。在一些實施例中，T細胞活化治療為淋巴球耗減。在一些實施例中，個體未被投與或未曾被投與淋巴球耗減療法。在某些實施例中，在投與病毒載體之前或之後1個月內，個體未被投與或未曾被投與T細胞活化治療。在一些實施例中，在投與病毒載體之前1個月內，諸如在投與病毒載體之前4週、3週、2週或1週內或剛好或約4週、3週、2週或1週時，諸如剛好或約1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天時，個體未被投與或未曾被投與T細胞活化治療。在一些實施例中，在投與病毒載體之後1個月內，諸如在投與病毒載體之後4週、3週、2週或1週內或剛好或約4週、3週、2週或1週時，諸如剛好或約1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天時，個體未被投與T細胞活化治療。
在一些態樣中，病毒載體不包括或不編碼T細胞活化劑。在一些實施例中，病毒載體不包括或不編碼膜結合之T細胞活化劑。在一些實施例中，病毒載體不包括或不編碼呈現於表面上之T細胞活化劑。在一些實施例中，T細胞活化劑為抗CD3抗體(例如，抗CD3 scFv)、T細胞活化細胞介素(例如，IL-2、IL-7、IL-15或IL-21)或T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體、CD80、CD86、CD137L或ICOS-L)。在一些實施例中，T細胞活化劑為能夠結合於CD3之多肽、能夠結合於CD28之多肽或其兩者。在一些態樣中，病毒載體不包括一或多種T細胞刺激性分子(例如，抗CD-3抗體)、一或多種T細胞共刺激性分子及/或一或多種T細胞活化細胞介素。
已熟知抗CD3抗體之使用係用於活化T細胞。抗CD3抗體可具有任何物種，例如，小鼠、兔、人類、人類化或駱駝。例示性抗體包括OKT3、CRIS-7、I2C、DYNABEADS人類T活化因子CD3/CD28 (Thermo Fisher)中所包括之抗CD3抗體及經批准及臨床上研究之分子之抗CD3域，諸如布林莫單抗(blinatumomab)、卡托莫西單抗(catumaxomab)、弗特珠單抗(fotetuzumab)、特立妥單抗(teclistamab)、鄂托默單抗(ertumaxomab)、艾普他單抗(epcoritamab)、塔爾科單抗(talquetamab)、奧屈奈單抗(odronextamab)、西比他單抗(cibistamab)、奧瑞達單抗(obrindatamab)、替度單抗(tidutamab)、杜沃土單抗(duvortuxizumab)、索利托單抗(solitomab)、艾路維單抗(eluvixtamab)、帕瓦盧單抗(pavurutamab)、特泊迪單抗(tepoditamab)、維克妥單抗(vibecotamab)、普拉莫單抗(plamotamab)、格菲妥單抗(glofitamab)、艾替瑞單抗(etevritamab)及塔拉妥單抗(tarlatamab)。
在一些實施例中，一或多種T細胞共刺激性分子包括CD28配位體(例如，CD80及CD86)；結合於CD28之抗體，諸如CD28.2；DYNABEADS人類T活化因子CD3/CD28 (Thermo Fisher)中所包括之抗CD28抗體，以及US2020/0199234、US2020/0223925、US2020/0181260、US2020/0239576、US2020/0199233、US2019/0389951、US2020/0299388、US2020/0399369及US2020/0140552中所揭示之抗CD28域；CD137配位體(CD137L)；抗CD137抗體，諸如優瑞路單抗(urelumab)及烏圖木單抗(utomilumab)；ICOS配位體(ICOS-L)；及抗ICOS抗體，諸如費拉迪單抗(feladilimab)、沃普瑞單抗(vopratelimab)，及艾珠利單抗(izuralimab)之抗ICOS域。
在一些實施例中，一或多種T細胞活化細胞介素包括IL-2、IL-7、IL-15、IL-21、干擾素(例如，干擾素-γ)以及其功能變異體及經修飾之版本。
在一些態樣中，病毒載體不包括或不編碼T細胞活化劑。在一些實施例中，病毒載體不包括或不編碼膜結合之T細胞活化劑。在一些實施例中，病毒載體不包括或不編碼呈現於表面上之T細胞活化劑。在一些實施例中，T細胞活化劑為淋巴增生元件。在一些實施例中，淋巴增生元件為活化STAT3路徑、STAT4路徑及/或Jak/STAT5路徑之細胞介素或細胞介素受體或其信號傳導域。在一些實施例中，淋巴增生元件為T細胞存活模體，諸如IL-7受體、IL-15受體或CD28，或其功能部分。在一些實施例中，淋巴增生元件為刺激STAT5路徑、抑制SOCS路徑或實現此兩種功能之微型RNA (miRNA)或短髮夾RNA (shRNA)。
在一些實施例中，載體不包括或不編碼抑制性RNA分子。在一些實施例中，抑制性RNA分子靶向自T細胞表現之基因、編碼T細胞受體(TCR)之組分之基因或其兩者轉錄之mRNA。在一些實施例中，該基因為PD-1、CTLA4、TCRα、TCRβ、CD3ζ、SOCS1、SMAD2、miR-155目標、IFNγ、TRAIL2及/或ABCG1。
在一些實施例中，載體包括或編碼抑制性RNA分子。在一些實施例中，抑制性RNA分子靶向自T細胞表現之基因、編碼T細胞受體(TCR)之組分之基因或其兩者轉錄之mRNA。在一些實施例中，該基因為PD-1、CTLA4、TCRα、TCRβ、CD3ζ、SOCS1、SMAD2、miR-155目標、IFNγ、TRAIL2及/或ABCG1。
在一些實施例中，方法進一步包括向個體投與淋巴球耗減療法。在一些實施例中，T細胞活化治療包含向個體投與淋巴球耗減療法。淋巴球耗減可由破壞個體中之淋巴球及T細胞之各種治療誘導。舉例而言，淋巴球耗減可包括清髓性化學療法，諸如氟達拉濱(fludarabine)、環磷醯胺、苯達莫司汀(bendamustine)及其組合。淋巴球耗減亦可由對個體進行照射(例如，全身照射)誘導。在一些實施例中，淋巴球耗減療法包含環磷醯胺及/或氟達拉濱。在一些實施例中，方法進一步包含投與環磷醯胺及/或氟達拉濱。 III. 病毒載體
在一些實施例中，本文中所揭示之病毒載體為反轉錄病毒載體(例如，慢病毒載體)。在一些實施例中，反轉錄病毒載體具有長末端重複序列(LTR)，例如來源於莫洛尼鼠類白血病病毒(Moloney murine leukemia virus；MoMLV)、骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)、鼠類胚胎幹細胞病毒(MESV)、鼠類幹細胞病毒(MSCV)、脾病灶形成病毒(SFFV)或腺相關病毒(AAV)之反轉錄病毒載體。大部分反轉錄病毒載體係來源於鼠類反轉錄病毒。在一些實施例中，反轉錄病毒包括來源於任何禽類或哺乳動物細胞來源之反轉錄病毒。反轉錄病毒通常為雙嗜性，意謂其能夠感染若干物種(包括人類)之宿主細胞。在一個實施例中，待表現之基因置換反轉錄病毒gag、pol及/或env序列。已描述多種說明性反轉錄病毒系統(例如，美國專利第5,219,740號；第6,207,453號；第5,219,740號)。
慢病毒轉導方法係已知的。例示性方法描述於例如Wang等人, J. Immunother. 35(9): 689-701, 2012；Cooper等人, Blood. 101:1637-1644, 2003；Verhoeyen等人, Methods Mol Biol. 506: 97-114, 2009；及Cavalieri等人, Blood.  102(2): 497-505, 2003中。
在一些實施例中，反轉錄病毒核酸包含以下中之一或多者(例如，全部)：5'啟動子(例如，用於控制整個封裝RNA之表現)、5' LTR (例如，其包括R (聚腺苷酸化尾區信號)及/或U5，其包括引子活化信號)、引子結合位點、psi封裝信號、用於核輸出之RRE元件、用於控制轉基因表現之直接位於轉基因上游之啟動子、轉基因(或其他外源性試劑元件)、聚嘌呤區及3' LTR (例如，其包括突變型U3、R及U5)。在一些實施例中，反轉錄病毒核酸進一步包含cPPT、WPRE及/或隔離子元件中之一或多者。
反轉錄病毒通常藉由將其基因體RNA反轉錄成線形雙鏈DNA複本且接著將其基因體DNA共價整合至宿主基因體中來複製。適用於特定實施例中之例示性反轉錄病毒包括(但不限於)：莫洛尼鼠類白血病病毒(M-MuLV)、莫洛尼鼠類肉瘤病毒(MoMSV)、哈維鼠類肉瘤病毒(Harvey murine sarcoma virus；HaMuSV)、鼠類乳房腫瘤病毒(MuMTV)、長臂猿白血病病毒(GaLV)、貓類白血病病毒(FLV)、泡沫病毒屬(spumavirus)、弗蘭德鼠類白血病病毒(Friend murine leukemia virus)、鼠類幹細胞病毒(MSCV)以及勞斯氏肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus；RSV)及慢病毒。
在一些實施例中，反轉錄病毒為γ反轉錄病毒。在一些實施例中，反轉錄病毒為ε反轉錄病毒。在一些實施例中，反轉錄病毒為α反轉錄病毒。在一些實施例中，反轉錄病毒為β反轉錄病毒。在一些實施例中，反轉錄病毒為δ反轉錄病毒。在一些實施例中，反轉錄病毒為慢病毒。在一些實施例中，反轉錄病毒為泡沫病毒。在一些實施例中，反轉錄病毒為內源性反轉錄病毒。
說明性慢病毒包括(但不限於)：HIV (人類免疫缺乏病毒；包括1型HIV及2型HIV)；維斯那-梅迪病毒(visna-maedi virus；VMV)；山羊關節炎-腦炎病毒(CAEV)；馬類感染性貧血病毒(EIAV)；貓類免疫缺乏病毒(FIV)；牛類免疫缺乏病毒(BIV)；及猿猴免疫缺乏病毒(SIV)。在一些實施例中，使用基於HIV之載體主鏈(亦即，HIV順式作用序列元件)。在一些實施例中，病毒顆粒係來源於慢病毒。在一些實施例中，慢病毒載體粒子為人類免疫缺乏病毒-1 (HIV-1)。
在一些實施例中，病毒載體(諸如反轉錄病毒或慢病毒載體)包含gag聚合蛋白質、聚合酶(例如，pol)、整合酶(例如，功能性或非功能性變異體)、蛋白酶及促融劑中之一或多者。在一些實施例中，載體進一步包含rev。在一些實施例中，一或多種前述蛋白質係在反轉錄病毒基因體中編碼，且在一些實施例中，一或多種前述蛋白質係以反式，例如由輔助細胞、輔助病毒或輔助質體提供。在一些實施例中，反轉錄病毒核酸包含以下核酸序列中之一或多者：5' LTR (例如，包含U5且不具有功能性U3域)、Psi封裝元件(Psi)、可操作地連接至有效負載基因之中心聚嘌呤區(cPPT)啟動子、有效負載基因(視情況包含開放閱讀框架之前的內含子)、Poly A尾區序列、WPRE及3' LTR (例如，包含U5且不具有功能性U3)。在一些實施例中，非反轉錄病毒型核酸進一步包含一或多個隔離子元件。在一些實施例中，識別位點位於poly A尾區序列與WPRE之間。 1. 轉移載體
在一些實施例中，病毒載體包含核酸分子(例如，轉移質體)，其包括病毒衍生之核酸元件，該等核酸元件通常促進核酸分子之轉移或整合至細胞之基因體中或轉移至介導核酸轉移之病毒顆粒。在一些態樣中，除核酸以外，載體粒子將通常包括各種病毒組分且有時亦包括宿主細胞組分。在一些實施例中，載體包含例如能夠將核酸轉移至細胞中或轉移至經轉移之核酸(例如，以裸mRNA形式)之病毒或病毒顆粒。在一些實施例中，病毒載體及轉移質體包含主要來源於病毒之結構性及/或功能性遺傳元件。反轉錄病毒載體可包含病毒載體或質體，該病毒載體或質體含有主要來源於反轉錄病毒之結構性及功能性遺傳元件或其部分。慢病毒載體可包含病毒載體或質體，該病毒載體或質體含有主要來源於慢病毒之結構性及功能性遺傳元件或其部分，包括LTR。
在實施例中，慢病毒載體(例如，慢病毒表現載體)可包含慢病毒轉移質體(例如，以裸DNA形式)或感染性慢病毒顆粒。關於諸如選殖位點、啟動子、調節元件、異源核酸等之元件，應理解，此等元件之序列可以RNA形式存在於慢病毒顆粒中且可以DNA形式存在於DNA質體中。
在一些實施例中，在本文中所描述之載體中，與相應的野生型病毒相比，一或多個有助於複製或為複製所必需的蛋白質編碼區之至少一部分可不存在。在一些實施例中，病毒載體為複製缺陷型。在一些實施例中，載體能夠轉導目標未分裂宿主細胞及/或將其基因體整合至宿主基因體中。
在一些實施例中，野生型反轉錄病毒基因體之結構通常包含5'長末端重複序列(LTR)及3' LTR，其間或其內具有使得基因體能夠被封裝之封裝信號、引子結合位點、使得能夠整合至宿主細胞基因體中之整合位點以及編碼促進病毒顆粒之組裝的封裝組分之gag、pol及env基因。更複雜的反轉錄病毒具有其他特徵，諸如HIV中之rev及RRE序列，其實現經整合之原病毒之RNA轉錄物自細胞核有效輸出至經感染之目標細胞之細胞質。在原病毒中，病毒基因之兩端由稱為長末端重複序列(LTR)之區域側接。在一些實施例中，LTR涉及原病毒整合及轉錄。在一些實施例中，LTR充當強化子-啟動子序列且可控制病毒基因之表現。在一些實施例中，反轉錄病毒RNA之衣殼化係藉助於位於病毒基因體之5'端的psi序列進行。
在一些實施例中，LTR為可分成稱為U3、R及U5之三個元件之類似序列。U3來源於RNA之3'端特有的序列。R來源於在RNA之兩端重複之序列，且U5來源於RNA之5'端特有的序列。在不同的反轉錄病毒中，三個元件之尺寸可顯著不同。
在一些實施例中，對於病毒基因體，轉譯起始位點通常位於一個LTR中之U3與R之間的邊界處且聚(A)添加(終止)位點位於另一個LTR中之R與U5之間的邊界處。U3含有原病毒之大部分轉錄控制元件，其包括對細胞及在一些情況下對病毒性轉錄活化因子蛋白質起反應之啟動子及多個強化子序列。在一些實施例中，反轉錄病毒包含以下編碼涉及基因表現之調節的蛋白質之基因中之任一或多者：tat、rev、tax及rex。
在一些實施例中，結構基因gag、pol及env、gag編碼病毒之內部結構蛋白質。在一些實施例中，GaG蛋白以蛋白水解方式處理為成熟蛋白質MA (基質)、CA (衣殼)及NC (核蛋白殼)。在一些實施例中，pol基因編碼反轉錄酶(RT)，其含有DNA聚合酶、相關RNase H及整合酶(IN)，其介導基因體之複製。在一些實施例中，env基因編碼病毒粒子之表面(SU)醣蛋白及跨膜(TM)蛋白質，該等蛋白質形成與細胞受體蛋白特異性相互作用之複合物。在一些實施例中，該相互作用藉由病毒膜與細胞膜之融合來促進感染。
在一些實施例中，複製缺陷型反轉錄病毒載體基因體gag、pol及env可不存在或不具有功能性。在一些實施例中，RNA之兩端處的R區域通常為重複序列。在一些實施例中，U5及U3分別表示RNA基因體之5'及3'端處之特有序列。
在一些實施例中，除gag、pol及env以外，反轉錄病毒亦可含有其他編碼蛋白質之基因。其他基因之實例包括(在HIV中)以下中之一或多者：vif、vpr、vpx、vpu、tat、rev及nef。EIAV (尤其)具有額外的基因S2。在一些實施例中，由額外基因編碼之蛋白質發揮多種功能，其中一些功能可與由細胞蛋白質提供之功能重複。舉例而言，在EIAV中，tat充當病毒LTR之轉錄活化因子(Derse及Newbold 1993 Virology 194:530-6；Maury等人, 1994 Virology 200:632-42)。其結合於稱為TAR之穩定的莖-環RNA二級結構。rev經由rev反應元件(RRE)調節及協調病毒基因之表現(Martarano等人, 1994 J. Virol. 68:3102-11)。
在一些實施例中，除蛋白酶、反轉錄酶及整合酶以外，非靈長類動物慢病毒含有編碼dUTPase之第四pol基因產物。在一些實施例中，此基因產物在此等慢病毒感染某些未分裂或緩慢分裂細胞類型之能力方面發揮作用。
在實施例中，重組慢病毒載體(RLV)為具有反轉錄病毒遺傳資訊之載體，該反轉錄病毒遺傳資訊在存在封裝組分之情況下足以實現將RNA基因體封裝至能夠感染目標細胞之病毒顆粒中。在一些實施例中，目標細胞之感染可包含反轉錄及整合至目標細胞基因體中。在一些實施例中，RLV通常攜帶非病毒編碼序列，其將由載體遞送至目標細胞。在一些實施例中，RLV不能獨立地複製以在目標細胞內產生感染性反轉錄病毒顆粒。在一些實施例中，RLV不具有功能性gag-pol及/或env基因以及/或其他涉及複製之基因。在一些實施例中，載體可組態為斷裂蛋白質內含子(split-intron)載體，例如PCT專利申請案WO 99/15683中所描述，其以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，慢病毒載體包含最小病毒基因體，例如，病毒載體已經操作以移除非必需元件且保留必需元件，從而提供感染、轉導及向目標宿主細胞遞送感興趣的核苷酸序列所需的功能性，例如WO 98/17815中所描述，其以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，最小慢病毒基因體可包含例如(5')R-U5-一或多個第一核苷酸序列-U3-R(3')。在一些實施例中，用於在源細胞內產生慢病毒基因體之質體載體亦可包括轉錄調節性控制序列，其可操作地連接至慢病毒基因體以引導源細胞中之基因體之轉錄。在一些實施例中，調節序列可包含與經轉錄之反轉錄病毒序列相關聯之天然序列，例如5' U3區域，或其可包含異源啟動子，諸如另一種病毒啟動子，例如CMV啟動子。在一些實施例中，慢病毒基因體包含用於促進有效病毒產生之額外序列。在一些實施例中，在HIV之情況下，可包括rev及RRE序列。在一些實施例中，可替代地或組合使用密碼子最佳化，例如，編碼外源性試劑之基因可經密碼子最佳化，例如WO 01/79518中所描述，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，亦可使用發揮與rev/RRE系統類似或相同功能之替代性序列。在一些實施例中，在Mason Pfizer猴病毒中發現rev/RRE系統之功能性類似物。在一些實施例中，此稱為CTE且包含基因體中之RRE型序列，咸信其與經感染之細胞中之因子相互作用。可將細胞因子視為rev類似物。在一些實施例中，可使用CTE作為rev/RRE系統之替代物。在一些實施例中，HTLV-I之Rex蛋白質可在功能上置換HIV-I之Rev蛋白質。Rev及Rex與IRE-BP具有類似作用。
在一些實施例中，反轉錄病毒核酸(例如，慢病毒核酸，例如靈長類動物或非靈長類動物慢病毒核酸)(1)包含缺失之gag基因，其中gag之缺失移除大致位於gag編碼序列之核苷酸350或354下游之一或多個核苷酸；(2)具有反轉錄病毒核酸中所不存在的一或多個輔助基因；(3)不具有tat基因，但包括5' LTR之末端與gag之ATG之間的前導序列；及(4)(1)、(2)及(3)之組合。在一個實施例中，慢病毒載體包含所有特徵(1)及(2)及(3)。此方案更詳細地描述於WO 99/32646中，其以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，靈長類動物慢病毒最小系統無需任何HIV/SIV額外基因vif、vpr、vpx、vpu、tat、rev及nef即可進行載體製備或分裂及非分裂細胞之轉導。在一些實施例中，EIAV最小載體系統無需S2即可進行載體製備或分裂及非分裂細胞之轉導。
在一些實施例中，額外基因之缺失可實現產生不具有與慢病毒(例如，HIV)感染中之疾病相關聯之基因之載體。在一些實施例中，tat與疾病相關聯。在一些實施例中，額外基因之缺失允許載體封裝更多的異源DNA。在一些實施例中，可省略功能未知的基因，諸如S2，由此降低引起不合需要的作用之風險。最小慢病毒載體之實例揭示於WO 99/32646及WO 98/17815中。
在一些實施例中，反轉錄病毒核酸至少不含tat及S2 (若其為EIAV載體系統)，且可能亦不含vif、vpr、vpx、vpu及nef。在一些實施例中，反轉錄病毒核酸亦不含rev、RRE或其兩者。
在一些實施例中，反轉錄病毒核酸包含vpx。Vpx多肽結合於SAMHD1限制因子且誘導其降解，從而使細胞質中之游離dNTP降解。在一些實施例中，細胞質中之游離dNTP之濃度隨著Vpx使SAMHD1降解而增加且反轉錄活性增加，由此促進反轉錄病毒基因體之反轉錄及整合至目標細胞基因體中。
在一些實施例中，不同細胞之特定密碼子之用法不同。在一些實施例中，此密碼子偏差對應於細胞類型中之特定tRNA的相對豐度之偏差。在一些實施例中，藉由改變序列中之密碼子使得其經定製以與相應的tRNA之相對豐度匹配，可增加表現。在一些實施例中，可藉由故意選擇滿足以下條件之密碼子來降低表現：已知與其對應的tRNA在特定細胞類型中係罕見的。在一些實施例中，可實現額外轉譯控制程度。密碼子最佳化之額外說明可見於例如WO 99/41397中，其以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，病毒(包括HIV及其他慢病毒)使用大量的罕見密碼子且藉由改變此等密碼子以對應於常用的哺乳動物密碼子，可實現哺乳動物生產細胞中之封裝組分之表現增加。
在一些實施例中，密碼子最佳化具有多種其他優點。在一些實施例中，藉助於序列中之變化，可減少或消除編碼封裝組分之核苷酸序列中之RNA不穩定性序列(INS)。同時，保留封裝組分之胺基酸序列編碼序列，使得由序列編碼之病毒組分保持相同或至少足夠類似，即封裝組分之功能未受損。在一些實施例中，密碼子最佳化亦滿足用於輸出之Rev/RRE需求，使得最佳化序列與Rev無關。在一些實施例中，密碼子最佳化亦減少載體系統內之不同構築體之間(例如，gag-pol與env開放讀框中之重疊區域之間)的同源重組。在一些實施例中，密碼子最佳化引起病毒效價增加及/或安全性改良。
在一些實施例中，僅與INS相關之密碼子經密碼子最佳化。在其他實施例中，除涵蓋gag-pol之讀框轉移位點之序列以外，序列全部經密碼子最佳化。
gag-pol基因包含編碼gag-pol蛋白質之兩個重疊閱讀框。兩種蛋白質之表現取決於在轉譯期間之讀框轉移。此讀框轉移係由轉譯期間之核糖體「滑移」引起。認為此滑移係至少部分由核糖體停滯RNA二級結構引起。此類二級結構位於gag-pol基因中之讀框轉移位點之下游。對於HIV，重疊區域自位於gag之起始位置(其中核苷酸1為gag ATG之A)下游之核苷酸1222延伸至gag之末端(nt 1503)。因此，281 bp片段跨越讀框轉移位點且兩個閱讀框之重疊區較佳不經密碼子最佳化。在一些實施例中，保留此片段將使得能夠更有效地表現gag-pol蛋白質。對於EIAV，重疊之起始位置位於nt 1262 (其中核苷酸1為gag ATG之A)。重疊之末端位於nt 1461。為了確保保留讀框轉移位點及gag-pol重疊，可自nt 1156至1465保留野生型序列。
在一些實施例中，可進行最佳密碼子使用之推導，例如以容納便利的限制位點，且可將保守性胺基酸變化引入gag-pol蛋白質中。
在一些實施例中，密碼子最佳化係基於哺乳動物系統中之具有不良密碼子使用之密碼子。可改變第三且有時第二及第三鹼基。
在一些實施例中，歸因於遺傳密碼之簡併性，應瞭解，熟練的工作人員可獲得大量gag-pol序列。此外，已描述多種反轉錄病毒變異體，其可用作產生經密碼子最佳化之gag-pol序列之起始點。慢病毒基因體可廣泛變化。舉例而言，存在多種仍具有功能性之HIV-I之凖種(quasi-species)。在EIAV之情況下亦如此。此等變異體可用於增強轉導過程之特定部分。HIV-I變異體之實例可見於由洛斯阿拉莫斯國家實驗室(Los Alamos National Laboratory)維護之HIV資料庫中。EIAV純系之詳細說明可見於由國立衛生研究院(National Institutes of Health)維護之NCBI資料庫中。
在一些實施例中，可關於任何反轉錄病毒(例如，EIAV、FIV、BIV、CAEV、VMR、SIV、HIV-1及HIV-2)使用經密碼子最佳化之gag-pol序列之方案。此外，此方法可用於增加來自HTLV-I、HTLV-2、HFV、HSRV及人類內源性反轉錄病毒(HERV)、MLV及其他反轉錄病毒之基因之表現。
在實施例中，反轉錄病毒載體包含封裝信號，該封裝信號包含仍保留env序列之載體中的gag之255至360個核苷酸或剪接供體突變、gag及env缺失之特定組合中的gag之約40個核苷酸。在一些實施例中，反轉錄病毒載體包括包含一或多個缺失之gag序列，例如，gag序列包含可來源於N端之約360個核苷酸。
在一些實施例中，反轉錄病毒載體、輔助細胞、輔助病毒或輔助質體可包含反轉錄病毒結構性及輔助蛋白，例如gag、pol、env、tat、rev、vif、vpr、vpu、vpx或nef蛋白質或其他反轉錄病毒蛋白質。在一些實施例中，反轉錄病毒蛋白質係來源於相同反轉錄病毒。在一些實施例中，反轉錄病毒蛋白質係來源於超過一種反轉錄病毒，例如，2、3、4種或更多種反轉錄病毒。
在一些實施例中，gag及pol編碼序列在原生慢病毒中通常組織為Gag-Pol前驅體。gag序列編碼55 kD Gag前驅蛋白質，亦稱為p55。在成熟過程期間，p55藉由經病毒編碼之蛋白酶(pol基因之產物)裂解成四種較小的蛋白質，稱為MA (基質[p17])、CA (衣殼[p24])、NC (核蛋白殼[p9])及p6。pol前驅蛋白質藉由經病毒編碼之蛋白酶自Gag裂解，且經進一步消化以分離蛋白酶(p10)、RT (p50)、RNase H (p15)及整合酶(p31)活性。
在一些實施例中，慢病毒載體為整合缺失型。在一些實施例中，pol為整合酶缺失型，諸如藉由整合酶基因中之突變引起之編碼。舉例而言，pol編碼序列可含有整合酶中之不活化突變，諸如藉由與催化活性有關之一或多個胺基酸之突變，亦即，天冬胺酸64、天冬胺酸116及/或麩胺酸152中之一或多者之突變。在一些實施例中，整合酶突變為D64V突變。在一些實施例中，整合酶中之突變允許病毒RNA封裝至慢病毒中。在一些實施例中，整合酶中之突變允許病毒蛋白質封裝至慢病毒中。在一些實施例中，整合酶中之突變降低插入突變誘發之可能性。在一些實施例中，整合酶中之突變降低產生複製勝任型重組體(RCR)之可能性(Wanisch等人, 2009. Mol Ther. 1798):1316-1332)。在一些實施例中，原生Gag-Pol序列可用於輔助載體(例如，輔助質體或輔助病毒)中，或可進行修飾。此等修飾包括嵌合Gag-Pol，其中Gag及Pol序列係自不同病毒(例如，不同物種、亞種、品系、分枝系等)獲得，及/或其中序列已經修飾以改良轉錄及/或轉譯，及/或減少重組。
在一些實施例中，反轉錄病毒核酸包括編碼gag蛋白中之具有150-250 (例如，168)個核苷酸之多核苷酸，該多核苷酸(i)包括突變型INS1抑制性序列，其相對於野生型INS1減少RNA之核輸出之限制，(ii)含有引起讀框轉移及提前終止之兩個核苷酸插入，及/或(iii)不包括gag之INS2、INS3及INS4抑制性序列。
在一些實施例中，本文中所描述之載體為雜交載體，其包含反轉錄病毒(例如，慢病毒)序列及非慢病毒型病毒序列。在一些實施例中，雜交載體包含用於反轉錄、複製、整合及/或封裝之反轉錄病毒(例如，慢病毒)序列。
在一些實施例中，大部分或所有病毒載體主鏈序列係來源於慢病毒，例如HIV-1。然而，應理解，可使用或組合反轉錄病毒及/或慢病毒序列之多種不同來源，且可容納某些慢病毒序列中之多種取代及變化而不損害轉移載體發揮本文中所描述之功能之能力。各種慢病毒載體描述於Naldini等人, (1996a、1996b及1998)；Zufferey等人, (1997)；Dull等人, 1998, 美國專利第6,013,516號；及第5,994,136號中，其中許多慢病毒載體可經調適以產生反轉錄病毒核酸。
在一些實施例中，通常在原病毒之各端發現長末端重複序列(LTR)。LTR通常包含位於反轉錄病毒核酸之末端處之域，該等域在其天然序列情況下為直接重複序列且含有U3、R及U5區域。LTR通常促進反轉錄病毒基因之表現(例如，基因轉錄物之促進、起始及聚腺苷酸化)及病毒複製。LTR可包含多種調節性信號，包括轉錄控制元件、聚腺苷酸化信號以及用於病毒基因體之複製及整合之序列。病毒LTR通常分成三個區域，稱為U3、R及U5。U3區域通常含有強化子及啟動子元件。U5區域通常為引子結合位點與R區域之間的序列且可含有聚腺苷酸化序列。R (重複)區域可由U3及U5區域側接。LTR通常由U3、R及U5區域構成且可在病毒基因體之5'及3'端處出現。在一些實施例中，用於基因體之反轉錄(tRNA引子結合位點)及病毒RNA有效封裝至粒子中(Psi位點)之序列與5' LTR相鄰。
在一些實施例中，封裝信號可包含位於反轉錄病毒基因體內之序列，其介導病毒RNA插入病毒衣殼或顆粒中，參見例如Clever等人, 1995. J. of Virology, 第69卷, 第4號; 第2101-2109頁。若干反轉錄病毒載體使用最小封裝信號(psi[Ψ]序列)進行病毒基因體之衣殼化。
在各種實施例中，反轉錄病毒核酸包含經修飾之5' LTR及/或3' LTR。該等LTR中之任一者或兩者可包含一或多個修飾，包括(但不限於)一或多個缺失、插入或取代。通常進行3' LTR之修飾以藉由使病毒呈複製缺陷型(例如，不能進行完全、有效複製，從而無法產生感染性病毒粒子之病毒(例如，複製缺陷型慢病毒後代))來改良慢病毒或反轉錄病毒系統之安全性。
在一些實施例中，載體為自身不活化(SIN)載體，例如複製缺陷型載體，例如反轉錄病毒或慢病毒載體，其中右側(3') LTR強化子-啟動子區域(稱為U3區域)經修飾(例如，藉由缺失或取代)以阻止除第一輪病毒複製以外的病毒轉錄。此係因為在病毒複製期間，右側(3') LTR U3區域可用作左側(5') LTR U3區域之模板且因此，因不存在U3強化子-啟動子而抑制病毒複製。在實施例中，修飾3' LTR使得移除、改變或置換U5，例如藉由外源性poly(A)序列。3' LTR、5' LTR或3'及5' LTR兩者可為經修飾之LTR。
在一些實施例中，在病毒顆粒之產生期間，5' LTR之U3區域由異源啟動子置換以驅動病毒基因體之轉錄。可使用之異源啟動子之實例包括例如病毒性猿猴病毒40 (SV40) (例如早期或晚期)、巨細胞病毒(CMV) (例如，即刻早期)、莫洛尼鼠類白血病病毒(MoMLV)、勞斯氏肉瘤病毒(RSV)及單純疱疹病毒(HSV) (胸苷激酶)啟動子。在一些實施例中，啟動子能夠以非Tat依賴性方式驅動大量轉錄。在某些實施例中，異源啟動子在控制病毒基因體之轉錄方式方面具有額外優點。舉例而言，異源啟動子可為可誘導的，使得僅在存在誘導因子時才發生全部或一部分病毒基因體之轉譯。誘導因子包括(但不限於)用於培養宿主細胞之一或多種化合物或生理條件，諸如溫度或pH值。
在一些實施例中，病毒載體包含TAR (反式活化反應)元件，例如位於慢病毒(例如，HIV) LTR之R區域中。此元件與慢病毒反式活化因子(tat)基因元件相互作用以增強病毒複製。然而，此元件並非必需的，例如在其中5' LTR之U3區域由異源啟動子置換之實施例中。
在一些實施例中，R區域(例如反轉錄病毒LTR內的在封端基團之起始位置(亦即，轉錄起始位置)處開始且剛好在poly A區之起始位置之前終止之區域)可由U3及U5區域側接。在反轉錄期間，R區域發揮將初生DNA自基因體之一端轉移至另一端之作用。
在一些實施例中，反轉錄病毒核酸亦可包含FLAP元件，例如在序列中包括反轉錄病毒(例如，HIV-1或HIV-2)之中心聚嘌呤區及中心終止序列(cPPT及CTS)之核酸。適合的FLAP元件描述於美國專利第6,682,907號中及Zennou等人, 2000, Cell, 101:173中，其以全文引用之方式併入本文中。在HIV-1反轉錄期間，中心聚嘌呤區(cPPT)處之正股DNA之中心起始及中心終止序列(CTS)處之中心終止可引起形成三股型DNA結構：HIV-1中心DNA摺疊片(central DNA flap)。在一些實施例中，反轉錄病毒或慢病毒載體主鏈包含位於編碼外源性試劑之基因的上游或下游之一或多個FLAP元件。舉例而言，在一些實施例中，轉移質體包括FLAP元件，例如自HIV-1衍生或分離之FLAP元件。
在實施例中，反轉錄病毒或慢病毒核酸包含一或多個輸出元件，例如，順式作用轉錄後調節元件，其調節RNA轉錄物自細胞核向細胞之細胞質之轉移。RNA輸出元件之實例包括(但不限於)人類免疫缺乏病毒(HIV) rev反應元件(RRE) (參見例如Cullen等人, 1991. J. Virol. 65: 1053；及Cullen等人, 1991. Cell 58: 423)，及B型肝炎病毒轉錄後調節元件(HPRE)，其以全文引用之方式併入本文中。通常，將RNA輸出元件置放於基因之3' UTR內且可以一或多個複本形式插入。
在一些實施例中，病毒載體中的異源序列之表現係藉由將轉錄後調節元件、聚腺苷酸化位點及轉錄終止信號中之一或多者(例如，全部)併入載體中來增加。多種轉錄後調節元件可增加蛋白質處異源核酸之表現，例如土拔鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus)轉錄後調節元件(WPRE；Zufferey等人, 1999, J. Virol., 73:2886)；B型肝炎病毒中存在之轉錄後調節元件(HPRE) (Huang等人, Mol. Cell. Biol., 5:3864)；及其類似物(Liu等人, 1995, Genes Dev., 9:1766)，其各自以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，本文中所描述之反轉錄病毒核酸包含轉錄後調節元件，諸如WPRE或HPRE。
在一些實施例中，本文中所描述之反轉錄病毒核酸不具有或不包含轉錄後調節元件，諸如WPRE或HPRE。
在一些實施例中，可包括引導異源核酸轉錄物之終止及聚腺苷酸化之元件，例如以增加外源性試劑之表現。可在聚腺苷酸化信號之下游發現轉錄終止信號。在一些實施例中，載體包含編碼外源性試劑之多核苷酸之聚腺苷酸化序列3'。polyA位點可包含DNA序列，其藉由RNA聚合酶II引導初生RNA轉錄物之終止及聚腺苷酸化。聚腺苷酸化序列可藉由在編碼序列之3'端處添加polyA尾區來促進mRNA穩定性且因此，促進轉譯效率增加。可用於反轉錄病毒核酸中之polyA信號之說明性實例包括AATAAA、ATTAAA、AGTAAA、牛生長激素polyA序列(BGHpA)、兔β-血球蛋白polyA序列(rβgpA)或另一種適合的異源性或內源性polyA序列。
在一些實施例中，反轉錄病毒或慢病毒載體進一步包含一或多個隔離子元件，例如本文中所描述之隔離子元件。
在各種實施例中，載體包含可操作地連接至編碼外源性試劑之多核苷酸之啟動子。載體可具有一或多個LTR，其中任一個LTR包含一或多個修飾，諸如一或多個核苷酸取代、添加或缺失。載體可進一步包含一或多個輔助元件以提高轉導效率(例如，cPPT/FLAP)、病毒封裝(例如，Psi (Ψ)封裝信號，RRE)，及/或其他增加外源基因表現之元件(例如，poly(A)序列)，且可包含WPRE或HPRE。
在一些實施例中，例如自5'至3'，慢病毒核酸包含以下中之一或多者(例如，全部)：啟動子(例如，CMV)、R序列(例如，包含TAR)、U5序列(例如，用於整合)、PBS序列(例如，用於反轉錄)、DIS序列(例如，用於基因體二聚作用)、psi封裝信號、部分gag序列、RRE序列(例如，用於核輸出)、cPPT序列(例如，用於核輸入)、用於驅動外源性試劑之表現之啟動子、編碼外源性試劑之基因、WPRE序列(例如，用於有效轉基因表現)、PPT序列(例如，用於反轉錄)、R序列(例如，用於聚腺苷酸化及終止)及U5信號(例如，用於整合)。
一些慢病毒載體整合內部活性基因且具有強剪接及聚腺苷酸化信號，其可引起形成異常及可能截短之轉錄物。
原癌基因活化機制可能涉及嵌合轉錄物之產生，其係由插入誘變劑之基因體中所含的啟動子元件或剪接位點與整合所靶向之細胞轉錄單元之相互作用引起(Gabriel等人, 2009. Nat Med 15: 1431 -1436；Bokhoven等人, J Virol 83:283-29)。包含載體序列及細胞mRNA之嵌合融合轉錄物可由自載體序列開始且進行至側接細胞基因之讀出轉錄(read-through transcription)產生，或反之亦然。
在一些實施例中，本文中所描述之慢病毒核酸包含慢病毒主鏈，該慢病毒主鏈中已消除至少兩個剪接位點，例如以改良慢病毒載體之安全性概況。此類剪接位點之物種及鑑別方法描述於WO2012156839A2中，其皆以引用之方式併入本文中。 2. 封裝載體
大規模載體顆粒製備通常適用於實現所需濃度之載體顆粒。可藉由將轉移載體轉染至封裝細胞株中來產生顆粒，該封裝細胞株包含病毒結構性及/或輔助基因，例如gag、pol、env、tat、rev、vif、vpr、vpu、vpx或nef基因或其他反轉錄病毒基因。
在一些實施例中，封裝載體為表現載體或病毒載體，其不具有封裝信號且包含編碼一個、兩個、三個、四個或更多個病毒結構性及/或輔助基因之多核苷酸。通常，封裝載體包括於生產細胞中且經由轉染、轉導或感染來引入細胞中。可經由轉染、轉導或感染將反轉錄病毒(例如，慢病毒)轉移載體引入生產細胞株中，以產生源細胞或細胞株。可藉由標準方法將封裝載體引入人類細胞或細胞株中，包括例如磷酸鈣轉染、脂質體轉染或電致孔。在一些實施例中，將封裝載體與顯性可選標記物(諸如新黴素(neomycin)、潮黴素(hygromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、比拉斯汀(blastocidin)、吉歐黴素(zeocin)、胸苷激酶、DHFR、Gln合成酶或ADA)一起引入細胞中，接著在存在適當藥物之情況下進行選擇及分離純系。可選標記物基因可以物理方式連接至由封裝載體(例如，IRES或自裂解病毒肽)編碼之基因。
在一些實施例中，生產細胞株包括不含封裝信號，但穩定地或短暫地表現可封裝病毒顆粒之病毒結構蛋白質及複製酶(例如，gag、pol及env)之細胞株。可使用任何適合的細胞株，例如哺乳動物細胞，例如人類細胞。可使用之適合的細胞株包括例如CHO細胞、BHK細胞、MDCK細胞、C3H 10T1/2細胞、FLY細胞、Psi-2細胞、BOSC 23細胞、PA317細胞、WEHI細胞、COS細胞、BSC 1細胞、BSC 40細胞、BMT 10細胞、VERO細胞、W138細胞、MRC5細胞、A549細胞、HT1080細胞、293細胞、293T細胞、B-50細胞、3T3細胞、NIH3T3細胞、HepG2細胞、Saos-2細胞、Huh7細胞、HeLa細胞、W163細胞、211細胞及211A細胞。在實施例中，封裝細胞為293細胞、293T細胞或A549細胞。
在一些實施例中，源細胞株包括能夠產生重組反轉錄病毒顆粒之細胞株，包含生產細胞株及轉移載體構築體(包含封裝信號)。製備病毒儲備溶液之方法由Y. Soneoka等人, (1995) Nucl. Acids Res. 23:628-633及N. R. Landau等人, (1992) J. Virol. 66:5110-5113說明，其以引用之方式併入本文中。可自生產細胞收集感染性病毒顆粒，例如藉由細胞溶解或收集細胞培養物之上清液。可將所收集之病毒顆粒富集或純化。
在一些實施例中，源細胞包含一或多種質體，其編碼可封裝病毒顆粒之病毒結構蛋白質及複製酶(例如，gag、pol及env)。在一些實施例中，編碼gag、pol及env前驅體中之至少兩者的序列位於相同質體上。在一些實施例中，編碼gag、pol及env前驅體之序列位於不同質體上。在一些實施例中，編碼gag、pol及env前驅體之序列具有相同表現信號，例如啟動子。在一些實施例中，編碼gag、pol及env前驅體之序列具有不同表現信號，例如不同啟動子。在一些實施例中，gag、pol及env前驅體之表現係可誘導的。在一些實施例中，在相同時間或在不同時間轉染編碼病毒結構蛋白質及複製酶之質體。在一些實施例中，在相同時間或在不同時間自封裝載體轉染編碼病毒結構蛋白質及複製酶之質體。
在一些實施例中，源細胞株包含一或多種穩定整合之病毒結構基因。在一些實施例中，穩定整合之病毒結構基因之表現係可誘導的。
在一些實施例中，以轉錄位準調節病毒結構基因之表現。在一些實施例中，以轉譯位準調節病毒結構基因之表現。在一些實施例中，以轉譯後位準調節病毒結構基因之表現。
在一些實施例中，藉由四環素(Tet)依賴性系統調節病毒結構基因之表現，其中經Tet調節之轉錄抑制因子(Tet-R)結合於啟動子中所包括之DNA序列且藉由位阻來抑制轉錄(Yao等人, 1998；Jones等人, 2005)，在添加多西環素(doxycycline；dox)後，釋放Tet-R，從而實現轉譯。多種其他適合的轉錄調節性啟動子、轉錄因子及小分子誘導劑適合於調節病毒結構基因之轉譯。
在一些實施例中，將第三代慢病毒組分，1型人類免疫缺乏病毒(HIV) Rev、Gag/Pol及包膜分別整合至細胞基因體源中，該包膜由經Tet調節之啟動子控制且與抗生素抗性卡匣偶合。在一些實施例中，源細胞僅具有整合至基因體中之Rev、Gag/Pol及包膜蛋白中之每一者之一個複本。
在一些實施例中，亦將編碼外源性試劑之核酸(例如，編碼外源性試劑之反轉錄病毒核酸)整合至源細胞基因體中。
在一些實施例中，本文中所描述之反轉錄病毒核酸不能進行反轉錄。在實施例中，此類核酸能夠瞬時表現外源性試劑。反轉錄病毒或VLP可包含失能的反轉錄酶蛋白質，或可不包含反轉錄酶蛋白質。在實施例中，反轉錄病毒核酸包含失能的引子結合位點(PBS)及/或att位點。在實施例中，在反轉錄病毒核酸中，一或多種病毒輔助基因(包括rev、tat、vif、nef、vpr、vpu、vpx及S2或其功能等效物)失能或不存在。在實施例中，在反轉錄病毒核酸中，一或多種選自S2、rev及tat之輔助基因失能或不存在。
在一些實施例中，本文中所描述之反轉錄病毒載體系統包含病毒基因體，其攜帶用於將病毒RNA轉錄、反轉錄、整合、轉譯及封裝至病毒顆粒中之順式作用載體序列，及(2)生產細胞株，其表現產生病毒顆粒所需之反式作用反轉錄病毒基因序列(例如，gag、pol及env)。在一些實施例中，藉由完全分離順式及反式作用載體序列，病毒不能維持用於超過一個感染循環之複製。可藉由多種策略避免活病毒之產生，例如，藉由最小化順式與反式作用序列之間的重疊以避免重組。
在一些實施例中，包含不含或不具有病毒RNA之序列之病毒載體顆粒可由自序列移除或消除病毒RNA來產生。在一個實施例中，此可使用gag上之內源性封裝信號結合位點實現。在一些實施例中，內源性封裝信號結合位點位於pol上。在此實施例中，待遞送之RNA將含有同源封裝信號。在另一實施例中，可使用位於待遞送之RNA上之異源結合域(其對gag為異源)及位於gag或pol上之同源結合位點來確保待遞送之RNA之封裝。在一些實施例中，異源序列可非病毒性或其可為病毒性，在後一種情況下，其可來源於不同病毒。在一些實施例中，使用載體顆粒遞送治療性RNA，在此情況下，無需整合酶及/或反轉錄酶。在一些實施例中，亦可使用載體顆粒遞送感興趣的治療性基因，在此情況下，通常包括pol。
在一些實施例中，改變gag-pol，且封裝信號由相應的封裝信號置換。在此實施例中，顆粒可封裝具有新封裝信號之RNA。此方法之優點在於可封裝不含病毒序列(例如，RNAi)之RNA序列。
在一些實施例中，替代性方法依賴於待封裝之RNA之過表現。在一個實施例中，在不存在任何含有封裝信號之RNA之情況下，待封裝之RNA被過表現。此可引起封裝大量治療性RNA，且此量足以轉導細胞及具有生物作用。
在一些實施例中，多核苷酸包含編碼病毒gag蛋白或反轉錄病毒gag及pol蛋白質之核苷酸序列，其中gag蛋白或pol蛋白質包含異源RNA結合域，其能夠識別RNA序列中之相應序列以促進RNA序列封裝至病毒載體顆粒中。
在一些實施例中，異源RNA結合域包含來源於以下之RNA結合域：噬菌體鞘蛋白質、Rev蛋白質、U1小型核糖核蛋白顆粒之蛋白質、諾瓦蛋白質(Nova protein)、TF111A蛋白質、TIS11蛋白質、trp RNA結合滅毒蛋白質(TRAP)或假尿苷合成酶。
在一些實施例中，本文中之方法包含偵測或證實不存在複製勝任型反轉錄病毒。該等方法可包括評估經複製勝任型反轉錄病毒(諸如γ反轉錄病毒或慢病毒)感染之某些細胞中的一或多種表現基因產物之目標基因(諸如病毒基因，例如結構或封裝基因)之RNA含量，該一或多種目標基因在用於使用異源核酸轉導細胞之病毒載體中不存在且在不含複製勝任型反轉錄病毒之細胞中不存在及/或不表現或預期不存在及/或不表現。若一或多種目標基因之RNA含量高於參考值，則可確定存在複製勝任型反轉錄病毒，該參考值可直接地或間接地量測，例如自含有目標基因之陽性對照樣品。關於其他揭示內容，參見WO2018023094A1。 IV. 促融劑
在一些實施例中，病毒載體包含一或多種促融劑。在一些實施例中，促融劑促進病毒載體與膜之融合。在一些實施例中，膜為漿細胞膜。
在一些實施例中，包含促融劑之病毒載體整合至膜中，進入目標細胞之脂質雙層。在一些實施例中，病毒載體中可包括一或多種本文中所描述之促融劑。 A. 蛋白質促融劑
在一些實施例中，促融劑為蛋白質促融劑，例如哺乳動物蛋白質或哺乳動物蛋白質之同系物(例如，具有50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的一致性)；非哺乳動物蛋白質，諸如病毒蛋白質或病毒蛋白質之同系物(例如，具有50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的一致性)；原生蛋白質或原生蛋白質之衍生物；合成蛋白質；其片段；其變異體；包含促融劑或片段中之一或多者之蛋白質融合物；及其任何組合。
在一些實施例中，促融劑引起病毒載體中之脂質與目標細胞中之脂質之間的混合。在一些實施例中，促融劑引起在病毒載體之內部與目標細胞之細胞溶質之間形成一或多個孔。 1. 哺乳動物蛋白質
在一些實施例中，促融劑可包括哺乳動物蛋白質。哺乳動物促融劑之實例可包括(但不限於)SNARE家族蛋白質，諸如vSNARE及tSNARE；合胞素蛋白質，諸如合胞素-1 (DOI: 10.1128/JVI.76.13.6442-6452.2002)及合胞素-2；成肌蛋白(myomaker) (biorxiv.org/content/early/2017/04/02/123158、doi.org/10.1101/123158、doi: 10.1096/fj.201600945R、doi:10.1038/nature12343)；麥歐米克(myomixer) (www.nature.com/nature/journal/v499/n7458/full/ nature12343.html，doi:10.1038/nature12343)；麥歐莫格(myomerger) (science.sciencemag.org/content/early/2017/04/05/science.aam9361，DOI: 10.1126/science.aam9361)；FGFRL1 (類纖維母細胞生長因子受體1)；米尼昂(Minion) (doi.org/10.1101/122697)；甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)之同功異型物(例如，US 6,099,857A中所揭示)；空位接合蛋白質，諸如接合素43、接合素40、接合素45、接合素32或接合素37 (例如，US 2007/0224176中所揭示)；Hap2；任何能夠誘導異源細胞之間的融合細胞形成之蛋白質(參見 表 2)；任何具有促融劑特性之蛋白質；其同系物；其片段；其變異體；及包含一或多種蛋白質或其片段之蛋白質融合物。在一些實施例中，促融劑係由在人類基因體中發現之人類內源性反轉錄病毒元件(hERV)編碼。其他例示性促融劑揭示於US 6,099,857A及US 2007/0224176中，其全部內容以引用之方式併入本文中。 2. 病毒蛋白質
在一些實施例中，促融劑可包括非哺乳動物蛋白質，例如病毒蛋白質。在一些實施例中，病毒促融劑為I類病毒膜融合蛋白質、II類病毒膜蛋白質、III類病毒膜融合蛋白質、病毒膜醣蛋白或其他病毒融合蛋白質，或其同系物、其片段、其變異體，或包含一或多種蛋白質或其片段之蛋白質融合物。
在一些實施例中，I類病毒膜融合蛋白質包括(但不限於)桿狀病毒(Baculovirus) F蛋白質，例如核多角體病毒(nucleopolyhedrovirus；NPV)屬之F蛋白質，例如甜菜夜蛾(Spodoptera exigua) MNPV (SeMNPV) F蛋白質及舞毒蛾(Lymantria dispar) MNPV (LdMNPV)，及副黏液病毒(paramyxovirus) F蛋白質。
在一些實施例中，II類病毒膜蛋白質包括(但不限於)蜱傳腦炎E (TBEV E)、勝利基森林病毒(Semliki Forest Virus) E1/E2。
在一些實施例中，III類病毒膜融合蛋白質包括(但不限於)棒形病毒(rhabdovirus) G (例如，口炎皰疼病毒(Vesicular Stomatatis Virus)之促融性蛋白質G (VSV-G)、科卡爾病毒(Cocal virus) G蛋白、疱疹病毒醣蛋白B (例如，單純疱疹病毒(Herpes Simplex virus) 1 (HSV-1) gB))、埃-巴二氏病毒(埃-巴二氏病毒)醣蛋白B (EBV gB)、托高土病毒G (thogotovirus G)、桿狀病毒gp64 (例如，苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(Autographa California multiple NPV；AcMNPV) gp64)及博爾納病病毒(Borna disease virus；BDV)醣蛋白(BDV G)。
其他病毒促融劑(例如，膜醣蛋白及病毒融合蛋白質)之實例包括(但不限於)：病毒融合細胞蛋白質，諸如流感血球凝集素(HA)或突變體，或其融合蛋白質；1型人類免疫缺乏病毒包膜蛋白(HIV-1 ENV)、由HIV與LFA-1結合以形成淋巴球融合細胞而產生之gp120、HIV gp41、HIV gp160或HIV反式轉譯活化因子(TAT)；病毒醣蛋白VSV-G、來自彈狀病毒科(Rhabdoviridae family)之水泡性口炎病毒之病毒醣蛋白；水痘-帶狀疱疹病毒(VZV)之醣蛋白gB及gH-gL；小鼠白血病病毒(MLV)-10A1；長臂猿白血病病毒醣蛋白(Gibbon Ape Leukemia Virus glycoprotein；GaLV)；狂犬病G型醣蛋白、莫科拉(Mokola)、水泡性口炎病毒及披衣病毒(Togaviruses)；小鼠肝炎病毒JHM表面突起蛋白質；豬呼吸道冠狀病毒刺突醣蛋白及膜醣蛋白；禽類感染性支氣管炎刺突醣蛋白及其前驅體；牛腸溶性冠狀病毒刺突蛋白；麻疹病毒屬(Morbillivirus)之F及H、HN或G基因(例如，麻疹病毒(MeV)、犬瘟熱病毒、鯨麻疹病毒(Cetacean morbillivirus)、小反芻動物瘟疫病毒(Peste-des-petits-ruminants virus)、海豹瘟熱病毒(Phocine distemper virus)、牛瘟病毒(Rinderpest virus)、新城雞瘟(Newcastle disease virus)、人類副流感病毒3、猴病毒41、仙台病毒(Sendai virus)及人類呼吸道融合性病毒；人類疱疹病毒1之gH及猴水痘病毒，具有伴隨蛋白gL；人類、牛及獼猴疱疹病毒gB；弗蘭德小鼠白血病病毒(Friend murine leukaemia virus)及梅森輝瑞猴病毒(Mason Pfizer monkey virus)之包膜醣蛋白；腮腺炎病毒血球凝集素神經胺糖酸酶，以及醣蛋白F1及F2；來自委內瑞拉馬腦脊髓炎(Venezuelan equine encephalomyelitis)之膜醣蛋白；副黏液病毒F蛋白質；SIV gp160蛋白質；埃博拉病毒(Ebola virus) G蛋白；或仙台病毒融合蛋白質，或其同系物、其片段、其變異體，及包含一或多種蛋白質或其片段之蛋白質融合物。
非哺乳動物促融劑包括病毒促融劑、其同源物、其片段，及包含一或多種蛋白質或其片段之融合蛋白質。病毒促融劑包括I類促融劑、II類促融劑、III類促融劑及IV類促融劑。在實施例中，諸如人類免疫缺乏病毒(HIV) gp41之I類促融劑具有特徵融合後構形，該構形具有特徵α-螺旋髮夾結構之三聚體，該三聚體具有中心捲曲螺旋結構。I類病毒融合蛋白質包括具有中心融合後六螺旋束之蛋白質。I類病毒融合蛋白質包括流感HA、副流感F、HIV Env、埃博拉GP、來自正黏液病毒之血球凝集素、來自副黏液病毒(例如，麻疹，(Katoh等人, BMC Biotechnology 2010, 10:37))之F蛋白質、來自反轉錄病毒之ENV蛋白質以及絲狀病毒及冠狀病毒之促融劑。在實施例中，諸如登革熱(dengue) E醣蛋白之II類病毒促融劑具有形成伸長之胞外域的β摺疊片之結構特徵，其再摺疊以產生髮夾結構之三聚體。在實施例中，II類病毒促融劑不具有中心捲曲螺旋。II類病毒促融劑可見於α病毒(例如，E1蛋白質)及黃病毒(例如，E醣蛋白)中。II類病毒促融劑包括來自勝利基森林病毒、辛德畢斯(Sinbis)、風疹病毒及登革熱病毒之促融劑。在實施例中，諸如水泡性口炎病毒G醣蛋白之III類病毒促融劑組合有在I類及II類中發現之結構特徵。在實施例中，III類病毒促融劑包含α螺旋(例如，形成六螺旋束以將蛋白質向後摺疊，如同I類病毒促融劑)，及其末端處之具有兩性融合肽之β摺疊片，使人聯想到II類病毒促融劑。III類病毒促融劑可見於棒狀病毒及疱疹病毒中。在實施例中，IV類病毒促融劑為融合相關小型跨膜(FAST)蛋白質(doi:10.1038/sj.emboj.7600767，Nesbitt, Rae L., 「Targeted Intracellular Therapeutic Delivery Using Liposomes Formulated with Multifunctional FAST proteins」 (2012). Electronic Thesis and Dissertation Repository. 第388頁)，其由非包膜呼腸孤病毒(reoviruses)編碼。在實施例中，IV類病毒促融劑足夠小使得其不形成髮夾結構(doi: 10.1146/annurev-cellbio-101512-122422，doi:10.1016/j.devcel.2007.12.008)。 a.   G蛋白
在一些實施例中，G蛋白為亨尼帕病毒(Henipavirus) G蛋白或其生物活性部分。在一些實施例中，亨尼帕病毒G蛋白為亨德拉(Hendra) (HeV)病毒G蛋白、尼帕(Nipah) (NiV)病毒G蛋白(NiV-G)、賽得(Cedar) (CedPV)病毒G蛋白、墨江病毒(Mojiang virus) G蛋白、蝙蝠副黏液病毒G蛋白或其生物活性部分。例示性G蛋白之非限制性清單展示於 表 1中。
連接G蛋白為II型跨膜醣蛋白，其含有N端細胞質尾區(例如，對應於SEQ ID NO:1之胺基酸1-49)、跨膜域(例如，對應於SEQ ID NO:1之胺基酸50-70)、以及含有細胞外柄之細胞外域(例如，對應於SEQ ID NO:1之胺基酸71-187)及球形頭部(對應於SEQ ID NO:1之胺基酸188-602)。N端細胞質域位於脂質雙層之內腔內且C端部分為在脂質雙層之外部上暴露之細胞外域。已證實C端區域中之柄之區域(例如，對應於NiV-G之胺基酸159-167)涉及與F蛋白質之相互作用及F蛋白質融合之觸發(Liu等人, 2015 J of Virology 89:1838)。在野生型G蛋白中，球形頭部介導受體與亨尼帕病毒進入受體艾普瑞林B2及艾普瑞林B3之結合，但對於膜融合而言並非必需的(Brandel-Tretheway等人, Journal of Virology. 2019. 93(13)e00577-19)。
在本文中之特定實施例中，G蛋白之向性經修飾。G蛋白與結合搭配物之結合可觸發由相容的F蛋白質或其生物活性部分介導之融合。本文中所揭示之G蛋白序列主要揭示為經表現之序列，其包括轉譯起始所需的N端甲硫胺酸。因為此類N端甲硫胺酸通常在共轉譯時或在轉譯後裂解，亦預期本文中所揭示之所有G蛋白序列之成熟蛋白質序列不具有N端甲硫胺酸。
G醣蛋白在亨尼帕病毒物種之間具有高保守性。舉例而言，NiV及HeV病毒之G蛋白共有79%胺基酸一致性。研究已證實不同物種之G蛋白與F蛋白質之高度相容性，如由異型融合活化證明(Brandel-Tretheway等人, Journal of Virology. 2019)。如下文所描述，再靶向之脂質顆粒可含有來自不同物種之異源蛋白質。
表1 ： 例示性亨尼帕病毒G 蛋白
病毒G 蛋白 序列 SEQ ID NO SEQ ID NO ( 不具有N 端甲硫胺酸)
亨德拉病毒G蛋白 MMADSKLVSLNNNLSGKIKDQGKVIKNYYGTMDIKKINDGLLDSKILGAFNTVIALLGSIIIIVMNIMIIQNYTRTTDNQALIKESLQSVQQQIKALTDKIGTEIGPKVSLIDTSSTITIPANIGLLGSKISQSTSSINENVNDKCKFTLPPLKIHECNISCPNPLPFREYRPISQGVSDLVGLPNQICLQKTTSTILKPRLISYTLPINTREGVCITDPLLAVDNGFFAYSHLEKIGSCTRGIAKQRIIGVGEVLDRGDKVPSMFMTNVWTPPNPSTIHHCSSTYHEDFYYTLCAVSHVGDPILNSTSWTESLSLIRLAVRPKSDSGDYNQKYIAITKVERGKYDKVMPYGPSGIKQGDTLYFPAVGFLPRTEFQYNDSNCPIIHCKYSKAENCRLSMGVNSKSHYILRSGLLKYNLSLGGDIILQFIEIADNRLTIGSPSKIYNSLGQPVFYQASYSWDTMIKLGDVDTVDPLRVQWRNNSVISRPGQSQCPRFNVCPEVCWEGTYNDAFLIDRLNWVSAGVYLNSNQTAENPVFAVFKDNEILYQVPLAEDDTNAQKTITDCFLLENVIWCISLVEIYDTGDSVIRPKLFAVKIPAQCSES 2 3
尼帕病毒G蛋白 MPAENKKVRFENTTSDKGKIPSKVIKSYYGTMDIKKINEGLLDSKILSAFNTVIALLGSIVIIVMNIMIIQNYTRSTDNQAVIKDALQGIQQQIKGLADKIGTEIGPKVSLIDTSSTITIPANIGLLGSKISQSTASINENVNEKCKFTLPPLKIHECNISCPNPLPFREYRPQTEGVSNLVGLPNNICLQKTSNQILKPKLISYTLPVVGQSGTCITDPLLAMDEGYFAYSHLERIGSCSRGVSKQRIIGVGEVLDRGDEVPSLFMTNVWTPPNPNTVYHCSAVYNNEFYYVLCAVSTVGDPILNSTYWSGSLMMTRLAVKPKSNGGGYNQHQLALRSIEKGRYDKVMPYGPSGIKQGDTLYFPAVGFLVRTEFKYNDSNCPITKCQYSKPENCRLSMGIRPNSHYILRSGLLKYNLSDGENPKVVFIEISDQRLSIGSPSKIYDSLGQPVFYQASFSWDTMIKFGDVLTVNPLVVNWRNNTVISRPGQSQCPRFNTCPEICWEGVYNDAFLIDRINWISAGVFLDSNQTAENPVFTVFKDNEILYRAQLASEDTNAQKTITNCFLLKNKIWCISLVEIYDTGDNVIRPKLFAVKIPEQCT 4 5
賽得病毒G蛋白 MLSQLQKNYLDNSNQQGDKMNNPDKKLSVNFNPLELDKGQKDLNKSYYVKNKNYNVSNLLNESLHDIKFCIYCIFSLLIIITIINIITISIVITRLKVHEENNGMESPNLQSIQDSLSSLTNMINTEITPRIGILVTATSVTLSSSINYVGTKTNQLVNELKDYITKSCGFKVPELKLHECNISCADPKISKSAMYSTNAYAELAGPPKIFCKSVSKDPDFRLKQIDYVIPVQQDRSICMNNPLLDISDGFFTYIHYEGINSCKKSDSFKVLLSHGEIVDRGDYRPSLYLLSSHYHPYSMQVINCVPVTCNQSSFVFCHISNNTKTLDNSDYSSDEYYITYFNGIDRPKTKKIPINNMTADNRYIHFTFSGGGGVCLGEEFIIPVTTVINTDVFTHDYCESFNCSVQTGKSLKEICSESLRSPTNSSRYNLNGIMIISQNNMTDFKIQLNGITYNKLSFGSPGRLSKTLGQVLYYQSSMSWDTYLKAGFVEKWKPFTPNWMNNTVISRPNQGNCPRYHKCPEICYGGTYNDIAPLDLGKDMYVSVILDSDQLAENPEITVFNSTTILYKERVSKDELNTRSTTTSCFLFLDEPWCISVLETNRFNGKSIRPEIYSYKIPKYC 6 7
蝙蝠副黏液病毒G蛋白，Eid_hel/GH-M74a/GHA/2009 MPQKTVEFINMNSPLERGVSTLSDKKTLNQSKITKQGYFGLGSHSERNWKKQKNQNDHYMTVSTMILEILVVLGIMFNLIVLTMVYYQNDNINQRMAELTSNITVLNLNLNQLTNKIQREIIPRITLIDTATTITIPSAITYILATLTTRISELLPSINQKCEFKTPTLVLNDCRINCTPPLNPSDGVKMSSLATNLVAHGPSPCRNFSSVPTIYYYRIPGLYNRTALDERCILNPRLTISSTKFAYVHSEYDKNCTRGFKYYELMTFGEILEGPEKEPRMFSRSFYSPTNAVNYHSCTPIVTVNEGYFLCLECTSSDPLYKANLSNSTFHLVILRHNKDEKIVSMPSFNLSTDQEYVQIIPAEGGGTAESGNLYFPCIGRLLHKRVTHPLCKKSNCSRTDDESCLKSYYNQGSPQHQVVNCLIRIRNAQRDNPTWDVITVDLTNTYPGSRSRIFGSFSKPMLYQSSVSWHTLLQVAEITDLDKYQLDWLDTPYISRPGGSECPFGNYCPTVCWEGTYNDVYSLTPNNDLFVTVYLKSEQVAENPYFAIFSRDQILKEFPLDAWISSARTTTISCFMFNNEIWCIAALEITRLNDDIIRPIYYSFWLPTDCRTPYPHTGKMTRVPLRSTYNY 8 9
墨江病毒，潼關(Tongguan) 1 G蛋白 MATNRDNTITSAEVSQEDKVKKYYGVETAEKVADSISGNKVFILMNTLLILTGAIITITLNITNLTAAKSQQNMLKIIQDDVNAKLEMFVNLDQLVKGEIKPKVSLINTAVSVSIPGQISNLQTKFLQKYVYLEESITKQCTCNPLSGIFPTSGPTYPPTDKPDDDTTDDDKVDTTIKPIEYPKPDGCNRTGDHFTMEPGANFYTVPNLGPASSNSDECYTNPSFSIGSSIYMFSQEIRKTDCTAGEILSIQIVLGRIVDKGQQGPQASPLLVWAVPNPKIINSCAVAAGDEMGWVLCSVTLTAASGEPIPHMFDGFWLYKLEPDTEVVSYRITGYAYLLDKQYDSVFIGKGGGIQKGNDLYFQMYGLSRNRQSFKALCEHGSCLGTGGGGYQVLCDRAVMSFGSEESLITNAYLKVNDLASGKPVIIGQTFPPSDSYKGSNGRMYTIGDKYGLYLAPSSWNRYLRFGITPDISVRSTTWLKSQDPIMKILSTCTNTDRDMCPEICNTRGYQDIFPLSEDSEYYTYIGITPNNGGTKNFVAVRDSDGHIASIDILQNYYSITSATISCFMYKDEIWCIAITEGKKQKDNPQRIYAHSYKIRQMCYNMKSATVTVGNAKNITIRRY 10 11
在一些實施例中，G蛋白具有SEQ ID NO:1-11中之任一者中所闡述之序列或為其功能活性變異體或生物活性部分，其具有與SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11中之任一者至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、至少或約85%、至少或約86%、至少或約87%、至少或約88%、至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、至少或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%一致之序列。在一些實施例中，G蛋白具有SEQ ID NO:1中所闡述之序列或為其功能活性變異體或生物活性部分，其具有與SEQ ID NO:1至少或約80%、至少或約90%、至少或約95%或至少或約99%一致之序列。在一些實施例中，G蛋白具有SEQ ID NO:4中所闡述之序列或為其功能活性變異體或生物活性部分，其具有與SEQ ID NO:4至少或約80%、至少或約90%、至少或約95%或至少或約99%一致之序列。在一些實施例中，G蛋白具有SEQ ID NO:5中所闡述之序列或為其功能活性變異體或生物活性部分，其具有與SEQ ID NO:5至少或約80%、至少或約90%、至少或約95%或至少或約99%一致之序列。
在特定實施例中，G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分為保留與亨尼帕病毒F蛋白質(例如，NiV-F或HeV-F)結合發揮之促融活性之蛋白質。促融活性包括以下活性：G蛋白與亨尼帕病毒F蛋白質結合促進或有助於兩個膜內腔(諸如脂質雙層中包埋有亨尼帕病毒F及G蛋白之目標脂質顆粒之內腔)及目標細胞(例如，含有由目標包膜蛋白識別或結合之表面受體或分子之細胞)之細胞質之融合。在一些實施例中，F蛋白質及G蛋白係來自相同亨尼帕病毒物種(例如，NiV-G及NiV-F)。在一些實施例中，F蛋白質及G蛋白係來自不同亨尼帕病毒物種(例如，NiV-G及HeV-F)。
在特定實施例中，G蛋白具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中所闡述之胺基酸序列或為其保留促融活性之功能活性變異體或生物活性部分。在一些實施例中，功能活性變異體包含與SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11具有至少或約80%、至少或約85%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列且保留與亨尼帕病毒F蛋白質(例如，NiV-F或HeV-F)結合發揮之促融活性。在一些實施例中，生物活性部分具有與SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11具有至少或約80%、至少或約85%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列且保留與亨尼帕病毒F蛋白質(例如，NiV-F或HeV-F)結合發揮之促融活性。
對保留促融活性之參考包括在相應野生型G蛋白(諸如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中所闡述)之結合之水準或程度之剛好或約10%與剛好或約150%之間或更多的活性(與亨尼帕病毒F蛋白質結合)，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約10%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約15%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約20%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約25%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約30%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約35%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約40%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約45%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約50%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約55%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約60%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約65%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約70%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約75%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約80%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約85%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約90%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約95%，諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約100%，或諸如相應野生型G蛋白之促融活性之水準或程度之至少或至少約120%。
在一些實施例中，G蛋白為突變型G蛋白，其為含有一或多個胺基酸突變(諸如一或多個胺基酸插入、缺失、取代或截短)之功能活性變異體或生物活性部分。在一些實施例中，本文中所描述之突變係關於與參考G蛋白序列相比之胺基酸插入、缺失、取代或胺基酸之截短。在一些實施例中，參考G蛋白序列為G蛋白或其生物活性部分之野生型序列。在一些實施例中，其功能活性變異體或生物活性部分為野生型亨德拉(HeV)病毒G蛋白、野生型尼帕(NiV)病毒G蛋白(NiV-G)、野生型賽得(CedPV)病毒G蛋白、野生型墨江病毒G蛋白、野生型蝙蝠副黏液病毒G蛋白之突變體或其生物活性部分。在一些實施例中，野生型G蛋白具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中之任一者中所闡述之序列。
在一些實施例中，G蛋白為突變型G蛋白，其為生物活性部分，該生物活性部分為野生型亨德拉(HeV)病毒G蛋白、野生型尼帕(NiV)病毒G蛋白(NiV-G)、野生型賽得(CedPV)病毒G蛋白、野生型墨江病毒G蛋白、野生型蝙蝠副黏液病毒G蛋白之N端及/或C端截短片段。在特定實施例中，截短為全部或一部分細胞質域之N端截短。在一些實施例中，突變型G蛋白為截短及不具有野生型G蛋白(諸如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中之任一者中所闡述之野生型G蛋白)之N端處或附近的至多49個相鄰胺基酸殘基之生物活性部分。在一些實施例中，突變型F蛋白質截短及不具有至多49個相鄰胺基酸，諸如野生型G蛋白之N端處的至多49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、30、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個相鄰胺基酸。
在一些實施例中，G蛋白為野生型尼帕病毒G (NiV-G)蛋白質或亨德拉病毒G蛋白，或為其功能活性變異體或生物活性部分。在一些實施例中，G蛋白為具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5中所闡述之序列之NiV-G蛋白，或為其功能變異體或生物活性部分，該功能變異體或生物活性部分具有與SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、至少或約85%、至少或約86%、至少或約87%、至少或約88%、至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%、至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，G蛋白為具有SEQ ID NO:1中所闡述之序列之NiV-G蛋白，或為其功能變異體或生物活性部分，該功能變異體或生物活性部分具有與SEQ ID NO:1具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、至少或約85%、至少或約86%、至少或約87%、至少或約88%、至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%、至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，G蛋白為具有SEQ ID NO:1中所闡述之序列之NiV-G蛋白。在一些實施例中，G蛋白為具有SEQ ID NO:4中所闡述之序列之NiV-G蛋白，或為其功能變異體或生物活性部分，該功能變異體或生物活性部分具有與SEQ ID NO:4具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、至少或約85%、至少或約86%、至少或約87%、至少或約88%、至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%、至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，G蛋白為具有SEQ ID NO:4中所闡述之序列之NiV-G蛋白。在一些實施例中，G蛋白為具有SEQ ID NO:5中所闡述之序列之NiV-G蛋白，或為其功能變異體或生物活性部分，該功能變異體或生物活性部分具有與SEQ ID NO:5具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、至少或約85%、至少或約86%、至少或約87%、至少或約88%、至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%、至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，G蛋白為具有SEQ ID NO:5中所闡述之序列之NiV-G蛋白。
在一些實施例中，G蛋白為突變型NiV-G蛋白，其為野生型NiV-G之生物活性部分。在一些實施例中，生物活性部分為N端截短片段。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白截短及不具有野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多5個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多6個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多7個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多8個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多9個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多10個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多11個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多12個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多13個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多14個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多15個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多16個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多17個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多18個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多19個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多20個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多21個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多22個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多23個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多24個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多25個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多26個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多27個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多28個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多29個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多30個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多31個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多32個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多33個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多34個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多35個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多36個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多37個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多38個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多39個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多40個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多41個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多42個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多43個相鄰胺基酸殘基、野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多44個相鄰胺基酸殘基或野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多45個相鄰胺基酸殘基。
在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白截短及不具有野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的5個相鄰胺基酸殘基。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白包含SEQ ID NO:12中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白截短及不具有野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的10個相鄰胺基酸殘基。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白包含SEQ ID NO:44中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白截短及不具有野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的15個相鄰胺基酸殘基。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白包含SEQ ID NO:45中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白截短及不具有野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的20個相鄰胺基酸殘基。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白包含SEQ ID NO:13中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白截短及不具有野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的25個相鄰胺基酸殘基。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白包含SEQ ID NO:14中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白截短及不具有野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的30個相鄰胺基酸殘基。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白包含SEQ ID NO:43中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白截短及不具有野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的34個相鄰胺基酸殘基。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白包含SEQ ID NO:42中所闡述之胺基酸序列。
在一些實施例中，NiV-G蛋白為不含細胞質域之生物活性部分。在一些實施例中，不具有細胞質域之NiV-G蛋白係由SEQ ID NO:22編碼。
在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白包含SEQ ID NO:12-14、17、18及22或42-45中之任一者中所闡述之序列或其功能變異體，該功能變異體具有與SEQ ID NO:12-14、17、18及22或42-45具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有5個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:12或其與SEQ ID NO:12具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之功能變異體中所闡述，或諸如SEQ ID NO:17或其與SEQ ID NO:17具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之功能變異體中所闡述。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有10個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:44或其與SEQ ID NO:44具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之功能變異體中所闡述。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有20個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:13或其與SEQ ID NO:13具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之功能變異體中所闡述。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有25個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:14或其與SEQ ID NO:14具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之功能變異體中所闡述。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有33個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:17或其與SEQ ID NO:17具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之功能變異體中所闡述。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有34個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:18或其與SEQ ID NO:18具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之功能變異體中所闡述。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有48個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:22或其與SEQ ID NO:22具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之功能變異體中所闡述。
在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有15個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:45或其具有與SEQ ID NO:45具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列之功能變異體中所闡述。
在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有20個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:13或其具有與SEQ ID NO:13具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列之功能變異體中所闡述。
在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有25個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:14或其具有與SEQ ID NO:14具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列之功能變異體中所闡述。
在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有30個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:43或其具有與SEQ ID NO:43具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列之功能變異體中所闡述。
在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有34個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:42或其具有與SEQ ID NO:42具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列之功能變異體中所闡述。
在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有48個胺基酸截短，諸如SEQ ID NO:22或其具有與SEQ ID NO:22具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列之功能變異體中所闡述。
在一些實施例中，G蛋白為突變型HeV-G蛋白，其為野生型HeV-G之生物活性部分。在一些實施例中，生物活性部分為N端截短片段。
在一些實施例中，G蛋白為具有SEQ ID NO:23或24中所闡述之序列之野生型HeV-G蛋白，或為其具有與SEQ ID NO:23或24具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、剛好或約85%、至少或約86%、至少或約87%、剛好或約88%、至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列之功能變異體或生物活性部分。
在一些實施例中，G蛋白為突變型HeV-G蛋白，其為野生型HeV-G (SEQ ID NO:23或24)之生物活性部分。在一些實施例中，生物活性部分為N端截短片段。在一些實施例中，突變型HeV-G蛋白截短及不具有野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多5個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多6個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多7個相鄰胺基酸殘基或野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多8個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多9個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多10個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多11個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多12個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多13個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多14個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多15個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多16個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多17個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多18個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多19個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多20個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多21個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多22個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多23個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多24個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多25個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多26個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多27個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多28個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多29個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多30個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多31個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多32個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多33個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多34個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多35個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多36個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多37個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多38個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多39個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多40個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多41個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多42個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多43個相鄰胺基酸殘基、野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多44個相鄰胺基酸殘基或野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端處或附近的至多45個相鄰胺基酸殘基。在一些實施例中，HeV-G蛋白為不含細胞質域之生物活性部分。
在一些實施例中，突變型HeV-G蛋白不具有野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端細胞質域，諸如SEQ ID NO:25或其與SEQ ID NO:25具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之功能變異體中所闡述。在一些實施例中，突變型HeV-G蛋白不具有野生型HeV-G蛋白(SEQ ID NO:23或24)之N端細胞質域，諸如SEQ ID NO:26或其與SEQ ID NO:26具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、剛好或約84%、至少或約85%、至少或約86%或至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之功能變異體中所闡述。
在一些實施例中，G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分結合於艾普瑞林B2或艾普瑞林B3。在一些態樣中，G蛋白具有SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中之任一者中所闡述之胺基酸序列，或為其能夠結合於艾普瑞林B2或艾普瑞林B3之功能活性變異體或生物活性部分。在一些實施例中，功能活性變異體或生物活性部分具有與SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中之任一者具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、至少或約85%、剛好或約86%、至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列或其功能活性變異體或生物活性部分，且保持結合於艾普瑞林B2或B3。
在一些實施例中，功能活性變異體或生物活性部分具有與SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10具有至少約80%、至少約85%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列或其功能活性變異體或生物活性部分，且保持結合於艾普瑞林B2或B3。對保持結合於艾普瑞林B2或B3之參考包括滿足以下條件之結合：諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約5%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約10%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約15%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約20%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約25%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約30%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約35%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約40%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約45%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約50%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約55%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約60%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約65%、諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約70%、例如諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約75%、例如諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約80%、例如諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約85%、例如諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約90%或例如諸如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中所闡述之相應野生型G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分之結合的水準或程度之至少或至少約95%。在一些實施例中，G蛋白為NiV-G或其功能活性變異體或生物活性部分且結合於艾普瑞林B2或艾普瑞林B3。在一些態樣中，NiV-G具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之胺基酸序列，或為其能夠結合於艾普瑞林B2或艾普瑞林B3之功能活性變異體或生物活性部分。在一些實施例中，功能活性變異體或生物活性部分具有與SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27具有至少約80%、至少約85%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列且保持結合於艾普瑞林B2或B3。例示性生物活性部分包括不具有全部或一部分細胞質域(例如，1個或更多個，諸如1至49個相鄰N端胺基酸殘基)之N端截短之變異體。對保持結合於艾普瑞林B2或B3之參考包括滿足以下條件之結合：諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約5%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約10%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約15%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約20%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約25%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約30%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約35%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約40%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約45%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約50%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約55%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約60%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約65%；諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約70%；例如諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約75%；例如諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約80%；例如諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約85%；例如諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約90%或例如諸如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:27中所闡述之相應野生型NiV-G之結合的水準或程度之至少或至少約95%。
在一些實施例中，G蛋白或其生物學變異體為呈現降低之與野生型G蛋白之原生結合搭配物之結合的突變型G蛋白。在一些實施例中，突變型G蛋白或其生物活性部分為野生型Niv-G之突變體且呈現降低之與原生結合搭配物艾普瑞林B2或艾普瑞林B3中之一或兩者之結合。在一些實施例中，突變型G蛋白或生物活性部分(諸如突變型NiV-G蛋白)呈現降低之與原生結合搭配物之結合。在一些實施例中，降低之與艾普瑞林B2或艾普瑞林B3之結合係降低超過或超過約5%、超過或超過約10%、超過或超過約15%、超過或超過約20%、超過或超過約25%、超過或超過約30%、超過或超過約40%、超過或超過約50%、超過或超過約60%、超過或超過約70%、超過或超過約80%、超過或超過約90%或超過或超過約100%。
在一些實施例中，本文中所描述之突變可改良轉導效率。在一些實施例中，本文中所描述之突變實現其他所需細胞類型(其不為艾普瑞林B2或艾普瑞林B3)之特異性靶向。在一些實施例中，本文中所描述之突變引起至少部分地不能與至少一種天然受體結合，由此降低與艾普瑞林B2或艾普瑞林B3中之至少一者之結合。在一些實施例中，本文中所描述之突變干擾天然受體識別。
在一些實施例中，G蛋白為HeV-G或其功能活性變異體或生物活性部分且結合於艾普瑞林B2或艾普瑞林B3。在一些態樣中，HeV-G具有SEQ ID NO:23或24中所闡述之胺基酸序列，或為其能夠結合於艾普瑞林B2或艾普瑞林B3之功能活性變異體或生物活性部分。在一些實施例中，功能活性變異體或生物活性部分具有與SEQ ID NO:23或24具有至少約80%、至少約85%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列且保持結合於艾普瑞林B2或B3。例示性生物活性部分包括不具有全部或一部分細胞質域(例如，1個或更多個，諸如1至49個相鄰N端胺基酸殘基)之N端截短之變異體。對保持結合於艾普瑞林B2或B3之參考包括滿足以下條件之結合：諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之至少或至少約5%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之10%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之15%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之20%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之25%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之30%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之35%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之40%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之45%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之50%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之55%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之60%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之65%、諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之70%、例如諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之至少或至少約75%、例如諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之至少或至少約80%、例如諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之至少或至少約85%、例如諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之至少或至少約90%或例如諸如SEQ ID NO:23或24中所闡述之相應野生型HeV-G之結合的水準或程度之至少或至少約95%。
在一些實施例中，G蛋白或其生物學變異體為呈現降低之與野生型G蛋白之原生結合搭配物之結合的突變型G蛋白。在一些實施例中，突變型G蛋白或其生物活性部分為野生型Niv-G之突變體且呈現降低之與原生結合搭配物艾普瑞林B2或艾普瑞林B3中之一或兩者之結合。在一些實施例中，突變型G蛋白或生物活性部分(諸如突變型NiV-G蛋白)呈現降低之與原生結合搭配物之結合。在一些實施例中，降低之與艾普瑞林B2或艾普瑞林B3之結合係降低超過或超過約5%、超過或超過約10%、超過或超過約15%、超過或超過約20%、超過或超過約25%、超過或超過約30%、超過或超過約40%、超過或超過約50%、超過或超過約60%、超過或超過約70%、超過或超過約80%、超過或超過約90%或超過或超過約100%。
在一些實施例中，G蛋白含有涉及與艾普瑞林B2及艾普瑞林B3中之一或兩者之相互作用的殘基中之一或多個胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代對應於突變E501A、W504A、Q530A及E533A，參考SEQ ID NO:4中所闡述之編號。
在一些實施例中，G蛋白為突變型G蛋白。在一些實施例中，G蛋白為含有一或多個選自由以下組成之群之胺基酸取代之突變型G蛋白：E501A、W504A、Q530A及E533A，參考SEQ ID NO:4中所闡述之編號。在一些實施例中，G蛋白為突變型G蛋白，其含有一或多個選自由E501A、W504A、Q530A及E533A組成之群之胺基酸取代(參考SEQ ID NO:4)且為其含有N端截短之生物活性部分。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白或其生物活性部分截短及不具有野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多5個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的6個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的7個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的8個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的9個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多10個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的11個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的12個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的13個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的14個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多15個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的16個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的17個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的18個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的19個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多20個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的21個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的22個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的23個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的24個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多25個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的26個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的27個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的28個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的29個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多30個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多31個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的32個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的33個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的34個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的35個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多36個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多37個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多38個相鄰胺基酸殘基、NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多39個相鄰胺基酸殘基或NiV-G蛋白(SEQ ID NO:4)之N端處或附近的至多40個相鄰胺基酸殘基。
在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白具有SEQ ID NO:17或18中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:17或18具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。在特定實施例中，G蛋白具有SEQ ID NO:17或18中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白具有SEQ ID NO:17中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:17具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。在特定實施例中，G蛋白具有SEQ ID NO:17中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，突變型NiV-G蛋白具有SEQ ID NO:18中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:18具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。在特定實施例中，G蛋白具有SEQ ID NO:18中所闡述之胺基酸序列。
在一些實施例中，G蛋白為含有一或多個選自由以下組成之群之胺基酸取代之突變型G蛋白：E501A、W504A、Q530A及E533A，參考SEQ ID NO:4中所闡述之編號。在一些實施例中，G蛋白為突變型G蛋白，其含有一或多個選自由E501A、W504A、Q530A及E533A組成之群之胺基酸取代(參考SEQ ID NO:4)且為其含有N端截短之生物活性部分。 b.   F蛋白質
在一些實施例中，載體表面靶向部分包含具有疏水性融合肽域之蛋白質。在一些實施例中，載體表面靶向部分包含亨尼帕病毒F蛋白質分子或其生物活性部分。在一些實施例中，亨尼帕病毒F蛋白質為亨德拉(Hev)病毒F蛋白質、尼帕(NiV)病毒F蛋白質、賽得(CedPV)病毒F蛋白質、墨江病毒F蛋白質或蝙蝠副黏液病毒F蛋白質或其生物活性部分。
表 2提供F蛋白質之非限制性實例。在一些實施例中，F蛋白質分子或其生物活性部分之N端疏水性融合肽域在脂質雙層之外部上暴露。
亨尼帕病毒之F蛋白質編碼為含有信號肽之F 0前驅體(例如，對應於SEQ ID NO:28之胺基酸殘基1-26)。在信號肽裂解後，成熟F 0(例如，SEQ ID NO:29)被輸送至細胞表面，接著內飲且由組織蛋白酶L裂解為成熟促融子單元F1及F2。在一些實施例中，信號肽包含SEQ ID NO:38中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，成熟F 0包含SEQ ID NO:41之胺基酸序列。在一些實施例中，F1子單元包含SEQ ID NO:46中所闡述之序列胺基酸序列。在一些實施例中，F2子單元包含SEQ ID NO:39中所闡述之序列胺基酸序列。F1及F2子單元藉由二硫鍵結合且再循環回細胞表面。F1子單元含有位於F1子單元之N端之融合肽域，其能夠插入細胞膜以驅動融合。在一些態樣中，融合由F蛋白質與G蛋白之結合阻斷，直至G蛋白與目標分子接合，引起其自F解離及融合肽之暴露以介導膜融合。
在不同亨尼帕病毒物種中，F蛋白質之序列及活性具有高度保守性。舉例而言，NiV及HeV病毒之F蛋白質共有89%胺基酸序列一致性。此外，在一些情況下，亨尼帕病毒F蛋白質呈現與用於觸發融合之來自其他物種之G蛋白之相容性(Brandel-Tretheway等人, Journal of Virology. 2019. 93(13):e00577-19)。在一些態樣或所提供之再靶向之脂質顆粒中，F蛋白質對於G蛋白而言係異源的，亦即，F及G蛋白或生物活性部分係來自不同亨尼帕病毒物種。舉例而言，F蛋白質來自亨德拉病毒且G蛋白來自尼帕病毒。在其他態樣中，F蛋白質可為嵌合F蛋白質，其含有來自不同亨尼帕病毒物種之F蛋白質之區域。在一些實施例中，將來自一種亨尼帕病毒物種之F蛋白質之胺基酸殘基之一個區域轉變成另一個區域可引起與包含胺基酸插入之該物種之G蛋白之融合(Brandel-Tretheway等人, Journal of Virology. 2019. 93(13):e00577-19)。在一些情況下，嵌合F蛋白質含有來自一種亨尼帕病毒物種之細胞外域以及來自不同亨尼帕病毒物種之跨膜及/或細胞質域。舉例而言，F蛋白質含有亨德拉病毒之細胞外域及尼帕病毒之跨膜/細胞質域。本文中所揭示之F蛋白質序列主要揭示為包括N端信號序列之經表現之序列。因為此類N端信號序列通常在共轉譯時或在轉譯後裂解，亦預期本文中所揭示之所有F蛋白質序列之成熟蛋白質序列不具有N端信號序列。
表2 ：F 蛋白質
完全基因名稱 序列 SEQ ID SEQ ID ( 不具有信號序列)
亨德拉病毒F蛋白質 MATQEVRLKCLLCGIIVLVLSLEGLGILHYEKLSKIGLVKGITRKYKIKSNPLTKDIVIKMIPNVSNVSKCTGTVMENYKSRLTGILSPIKGAIELYNNNTHDLVGDVKLAGVVMAGIAIGIATAAQITAGVALYEAMKNADNINKLKSSIESTNEAVVKLQETAEKTVYVLTALQDYINTNLVPTIDQISCKQTELALDLALSKYLSDLLFVFGPNLQDPVSNSMTIQAISQAFGGNYETLLRTLGYATEDFDDLLESDSIAGQIVYVDLSSYYIIVRVYFPILTEIQQAYVQELLPVSFNNDNSEWISIVPNFVLIRNTLISNIEVKYCLITKKSVICNQDYATPMTASVRECLTGSTDKCPRELVVSSHVPRFALSGGVLFANCISVTCQCQTTGRAISQSGEQTLLMIDNTTCTTVVLGNIIISLGKYLGSINYNSESIAVGPPVYTDKVDISSQISSMNQSLQQSKDYIKEAQKILDTVNPSLISMLSMIILYVLSIAALCIGLITFISFVIVEKKRGNYSRLDDRQVRPVSNGDLYYIGT 28 29
尼帕病毒F蛋白質 MVVILDKRCYCNLLILILMISECSVGILHYEKLSKIGLVKGVTRKYKIKSNPLTKDIVIKMIPNVSNMSQCTGSVMENYKTRLNGILTPIKGALEIYKNNTHDLVGDVRLAGVIMAGVAIGIATAAQITAGVALYEAMKNADNINKLKSSIESTNEAVVKLQETAEKTVYVLTALQDYINTNLVPTIDKISCKQTELSLDLALSKYLSDLLFVFGPNLQDPVSNSMTIQAISQAFGGNYETLLRTLGYATEDFDDLLESDSITGQIIYVDLSSYYIIVRVYFPILTEIQQAYIQELLPVSFNNDNSEWISIVPNFILVRNTLISNIEIGFCLITKRSVICNQDYATPMTNNMRECLTGSTEKCPRELVVSSHVPRFALSNGVLFANCISVTCQCQTTGRAISQSGEQTLLMIDNTTCPTAVLGNVIISLGKYLGSVNYNSEGIAIGPPVFTDKVDISSQISSMNQSLQQSKDYIKEAQRLLDTVNPSLISMLSMIILYVLSIASLCIGLITFISFIIVEKKRNTYSRLEDRRVRPTSSGDLYYIGT 30 31
賽得病毒F蛋白質 MSNKRTTVLIIISYTLFYLNNAAIVGFDFDKLNKIGVVQGRVLNYKIKGDPMTKDLVLKFIPNIVNITECVREPLSRYNETVRRLLLPIHNMLGLYLNNTNAKMTGLMIAGVIMGGIAIGIATAAQITAGFALYEAKKNTENIQKLTDSIMKTQDSIDKLTDSVGTSILILNKLQTYINNQLVPNLELLSCRQNKIEFDLMLTKYLVDLMTVIGPNINNPVNKDMTIQSLSLLFDGNYDIMMSELGYTPQDFLDLIESKSITGQIIYVDMENLYVVIRTYLPTLIEVPDAQIYEFNKITMSSNGGEYLSTIPNFILIRGNYMSNIDVATCYMTKASVICNQDYSLPMSQNLRSCYQGETEYCPVEAVIASHSPRFALTNGVIFANCINTICRCQDNGKTITQNINQFVSMIDNSTCNDVMVDKFTIKVGKYMGRKDINNINIQIGPQIIIDKVDLSNEINKMNQSLKDSIFYLREAKRILDSVNISLISPSVQLFLIIISVLSFIILLIIIVYLYCKSKHSYKYNKFIDDPDYYNDYKRERINGKASKSNNIYYVGD 32 33
墨江病毒，潼關1 F蛋白質 MALNKNMFSSLFLGYLLVYATTVQSSIHYDSLSKVGVIKGLTYNYKIKGSPSTKLMVVKLIPNIDSVKNCTQKQYDEYKNLVRKALEPVKMAIDTMLNNVKSGNNKYRFAGAIMAGVALGVATAATVTAGIALHRSNENAQAIANMKSAIQNTNEAVKQLQLANKQTLAVIDTIRGEINNNIIPVINQLSCDTIGLSVGIRLTQYYSEIITAFGPALQNPVNTRITIQAISSVFNGNFDELLKIMGYTSGDLYEILHSELIRGNIIDVDVDAGYIALEIEFPNLTLVPNAVVQELMPISYNIDGDEWVTLVPRFVLTRTTLLSNIDTSRCTITDSSVICDNDYALPMSHELIGCLQGDTSKCAREKVVSSYVPKFALSDGLVYANCLNTICRCMDTDTPISQSLGATVSLLDNKRCSVYQVGDVLISVGSYLGDGEYNADNVELGPPIVIDKIDIGNQLAGINQTLQEAEDYIEKSEEFLKGVNPSIITLGSMVVLYIFMILIAIVSVIALVLSIKLTVKGNVVRQQFTYTQHVPSMENINYVSH 34 35
蝙蝠副黏液病毒Eid_hel/GH-M74a/GHA/2009 F蛋白質 MKKKTDNPTISKRGHNHSRGIKSRALLRETDNYSNGLIVENLVRNCHHPSKNNLNYTKTQKRDSTIPYRVEERKGHYPKIKHLIDKSYKHIKRGKRRNGHNGNIITIILLLILILKTQMSEGAIHYETLSKIGLIKGITREYKVKGTPSSKDIVIKLIPNVTGLNKCTNISMENYKEQLDKILIPINNIIELYANSTKSAPGNARFAGVIIAGVALGVAAAAQITAGIALHEARQNAERINLLKDSISATNNAVAELQEATGGIVNVITGMQDYINTNLVPQIDKLQCSQIKTALDISLSQYYSEILTVFGPNLQNPVTTSMSIQAISQSFGGNIDLLLNLLGYTANDLLDLLESKSITGQITYINLEHYFMVIRVYYPIMTTISNAYVQELIKISFNVDGSEWVSLVPSYILIRNSYLSNIDISECLITKNSVICRHDFAMPMSYTLKECLTGDTEKCPREAVVTSYVPRFAISGGVIYANCLSTTCQCYQTGKVIAQDGSQTLMMIDNQTCSIVRIEEILISTGKYLGSQEYNTMHVSVGNPVFTDKLDITSQISNINQSIEQSKFYLDKSKAILDKINLNLIGSVPISILFIIAILSLILSIITFVIVMIIVRRYNKYTPLINSDPSSRRSTIQDVYIIPNPGEHSIRSAARSIDRDRD 36 37
在一些實施例中，F蛋白質係由核苷酸序列編碼，該核苷酸序列編碼由SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37中之任一者所闡述之序列，或為其功能活性變異體或生物活性部分，該功能活性變異體或生物活性部分具有與SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37中之任一者至少或約80%、至少或約85%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、至少或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%一致之序列。在一些實施例中，F蛋白質係由核苷酸序列編碼，該核苷酸序列編碼由SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37中之任一者所闡述之序列。
在特定實施例中，F蛋白質或其功能活性變異體或生物活性部分保留與亨尼帕病毒G蛋白(諸如章節IV.A.2中所闡述之G蛋白，例如NiV-G或HeV-G)結合發揮之促融活性。促融活性包括以下活性：F蛋白質與G蛋白結合促進或有助於兩個膜內腔(諸如脂質雙層中包埋有亨尼帕病毒F及G蛋白之目標脂質顆粒之內腔)及目標細胞(例如，含有由目標包膜蛋白識別或結合之表面受體或分子之細胞)之細胞質之融合。在一些實施例中，F蛋白質及G蛋白係來自相同亨尼帕病毒物種(例如，NiV-G及NiV-F)。在一些實施例中，F蛋白質及G蛋白係來自不同亨尼帕病毒物種(例如，NiV-G及HeV-F)。在特定實施例中，功能活性變異體或生物活性部分之F蛋白質保留由組織蛋白酶L裂解之裂解位點(例如，對應於SEQ ID NO:30之胺基酸109-110之間的裂解位點)。
在特定實施例中，F蛋白質具有SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37中所闡述之胺基酸序列，或為其保留促融活性之功能活性變異體或生物活性部分。在一些實施例中，功能活性變異體包含與SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37具有至少或約80%、至少或約85%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列且保留與亨尼帕病毒G蛋白(例如，NiV-G或HeV-G)結合發揮之促融活性。在一些實施例中，生物活性部分具有與SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37具有至少或約80%、至少或約85%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。
對保留促融活性之參考包括在相應野生型F蛋白質(諸如SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37中所闡述)之結合之水準或程度之剛好或約10%與剛好或約150%之間或更多的活性(與亨尼帕病毒F蛋白質結合)，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約10%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約15%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約20%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約25%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約30%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約35%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約40%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約45%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約50%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約55%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約60%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約65%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約70%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約75%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約80%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約85%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約90%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約95%，諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約100%或諸如相應野生型F蛋白質之促融活性之水準或程度之至少或至少約120%
在一些實施例中，F蛋白質為突變型F蛋白質，其為含有一或多個胺基酸突變(諸如一或多個胺基酸插入、缺失、取代或截短)之功能活性片段或生物活性部分。在一些實施例中，本文中所描述之突變係關於與參考F蛋白質序列相比之胺基酸插入、缺失、取代或胺基酸之截短。在一些實施例中，參考F蛋白質序列為F蛋白質或其生物活性部分之野生型序列。在一些實施例中，突變型F蛋白質或其生物活性部分為野生型亨德拉(Hev)病毒F蛋白質、尼帕(NiV)病毒F蛋白質、賽得(CedPV)病毒F蛋白質、墨江病毒F蛋白質或蝙蝠副黏液病毒F蛋白質之突變體。在一些實施例中，野生型F蛋白質係由核苷酸序列編碼，該核苷酸序列編碼SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37中之任一者。
在一些實施例中，突變型F蛋白質為野生型F蛋白質之生物活性部分，其為N端及/或C端截短片段。在一些實施例中，突變型F蛋白質或其野生型F蛋白質之生物活性部分包含一或多個胺基酸取代。在一些實施例中，本文中所描述之突變可改良轉導效率。在一些實施例中，本文中所描述之突變可提高促融能力。例示性突變包括任何如參見例如Khetawat及Broder 2010 Virology Journal 7:312；Witting等人, 2013 Gene Therapy 20:997-1005；國際專利申請公開案第WO/2013/148327號中所描述之突變。
在一些實施例中，突變型F蛋白質為截短及不具有野生型F蛋白質(諸如由編碼SEQ ID NO:28-37中之任一者中所闡述之F蛋白質的核苷酸序列編碼之野生型F蛋白質)之C端處或附近的至多20個相鄰胺基酸殘基之生物活性部分。在一些實施例中，突變型F蛋白質截短及不具有野生型F蛋白質之C端處的至多20個相鄰胺基酸，諸如至多19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個相鄰胺基酸。在一些實施例中，突變型F蛋白質包含SEQ ID NO:15中所闡述之序列。在一些實施例中，突變型F蛋白質包含SEQ ID NO:20中所闡述之序列。在一些實施例中，突變型F蛋白質截短及不具有野生型F蛋白質之C端處的至多19個相鄰胺基酸，諸如至多18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個相鄰胺基酸。
在一些實施例中，F蛋白質或其功能活性變異體或生物活性部分包含F1子單元或其促融部分。在一些實施例中，F1子單元為F 0前驅體之蛋白質裂解部分。在一些實施例中，F 0前驅體為非活性的。在一些實施例中，F 0前驅體之裂解形成二硫鍵連接之F1+F2雜二聚體。在一些實施例中，裂解使融合肽暴露且產生成熟F蛋白質。在一些實施例中，裂解係在單一鹼性殘基處或周圍進行。在一些實施例中，裂解係在NiV-F蛋白質之精胺酸109處進行。在一些實施例中，裂解係在亨德拉病毒F蛋白質之離胺酸109處進行。
在一些實施例中，F蛋白質為野生型尼帕病毒F (NiV-F)蛋白質或為其功能活性變異體或生物活性部分。在一些實施例中，F 0前驅體係由編碼SEQ ID NO:20中所闡述之序列的核苷酸序列編碼。編碼核酸可編碼具有序列MVVILDKRCY CNLLILILMI SECSVG (SEQ ID NO:38)之信號肽序列。在一些實例中，F蛋白質裂解為包含SEQ ID NO:46中所闡述之序列之F1子單元及包含SEQ ID NO:39中所闡述之序列之F2子單元。
在一些實施例中，F蛋白質為NiV-F蛋白質，其由編碼SEQ ID NO:30中所闡述之序列的核苷酸序列編碼，或為其功能活性變異體或生物活性部分，該功能活性變異體或生物活性部分具有與SEQ ID NO:30具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、至少或約85%、剛好或約86%、至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，F蛋白質為NiV-F蛋白質，其由編碼SEQ ID NO:30中所闡述之序列的核苷酸序列編碼。在一些實施例中，NiV-F蛋白質具有30中所闡述之序列，或為其功能活性變異體或生物活性部分，該功能活性變異體或生物活性部分具有與30具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、至少或約85%、剛好或約86%、至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-F蛋白質具有30中所闡述之序列。在特定實施例中，F蛋白質或其功能活性變異體或生物活性部分保留由組織蛋白酶L裂解之裂解位點。
在一些實施例中，F蛋白質或其功能活性變異體或生物活性部分包括F1子單元，該子單元具有SEQ ID NO:46中所闡述之序列或與SEQ ID NO:46具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，F蛋白質或其功能活性變異體或生物活性部分包括F2子單元，該子單元具有SEQ ID NO:39中所闡述之序列或與SEQ ID NO:39具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，F蛋白質或其功能活性變異體或生物活性部分包括F1子單元，該子單元具有SEQ ID NO:46中所闡述之序列或與SEQ ID NO:46具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、至少或約85%、剛好或約86%、至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，F蛋白質或其功能活性變異體或生物活性部分包括F2子單元，該子單元具有SEQ ID NO:39中所闡述之序列或與SEQ ID NO:39具有至少或約80%、至少或約81%、至少或約82%、至少或約83%、至少或約84%、至少或約85%、剛好或約86%、至少或約87%、至少或約88%或至少或約89%、至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，F蛋白質為突變型NiV-F蛋白質，其為截短及不具有野生型NiV-F蛋白質(例如，SEQ ID NO:40所闡述)之C端處或附近的至多20個相鄰胺基酸殘基之生物活性部分。在一些實施例中，突變型NiV-F蛋白質包含SEQ ID NO:20中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，突變型NiV-F蛋白質具有與SEQ ID NO:200具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之序列。在一些實施例中，突變型F蛋白質含有F1蛋白質，其具有SEQ ID NO:46中所闡述之序列。在一些實施例中，突變型F蛋白質具有與SEQ ID NO:46具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之序列。
在一些實施例中，F蛋白質為突變型NiV-F蛋白質，其為生物活性部分且在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:40)之C端處或附近包含20個胺基酸截短；及N-連接之醣基化位點上之點突變。在一些實施例中，突變型NiV-F蛋白質包含SEQ ID NO:15中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，突變型NiV-F蛋白質具有與SEQ ID NO:15具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之序列。
在一些實施例中，F蛋白質為突變型NiV-F蛋白質，其為在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:40)之C端處或附近包含25個胺基酸截短之生物活性部分。在一些實施例中，F蛋白質為突變型NiV-F蛋白質，其為在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:40)之C端處或附近包含22個胺基酸截短之生物活性部分。在一些實施例中，NiV-F蛋白質係由編碼SEQ ID NO:20中所闡述之序列之核苷酸序列編碼。在一些實施例中，NiV-F蛋白質由核苷酸序列編碼，該核苷酸序列編碼與SEQ ID NO:20具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之序列。
在一些實施例中，F蛋白質為突變型NiV-F蛋白質，其為在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:40)之C端處或附近包含22個胺基酸截短之生物活性部分。在一些實施例中，NiV-F蛋白質包含SEQ ID NO:21中所闡述之胺基酸序列，或與SEQ ID NO:21具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，NiV-F蛋白質係由編碼SEQ ID NO:21中所闡述之序列之核苷酸序列編碼。在一些實施例中，NiV-F蛋白質由核苷酸序列編碼，該核苷酸序列編碼與SEQ ID NO:21具有至少或約90%、至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、剛好或約96%、至少或約97%、至少或約98%或至少或約99%序列一致性之序列。 B.  CD8 結合劑
本文中所揭示之病毒載體包括一或多種CD8結合劑。舉例而言，CD8結合劑可與蛋白質促融劑或病毒包膜蛋白質融合或併入其中。在另一實施例中，CD8結合劑可經由與跨膜域融合來併入病毒包膜中。
例示性CD8結合劑包括結合於CD8α及CD8β中之一或多者之抗體及其片段(例如，scFv、VHH)。此類抗體可來源於任何物種且可為例如小鼠、兔、人類、人類化或駱駝抗體。例示性抗體包括WO2014025828、WO2014164553、WO2020069433、WO2015184203、US20160176969、WO2017134306、WO2019032661、WO2020257412、WO2018170096、WO2020060924、US10730944、US20200172620中所揭示之抗體及非人類抗體OKT8；RPA-T8、12.C7 (Novus)；17D8、3B5、LT8、RIV11、SP16、YTC182.20、MEM-31、MEM-87、RAVB3、C8/144B (Thermo Fisher)；2ST8.5H7、Bu88、3C39、Hit8a、SPM548、CA-8、SK1、RPA-T8 (GeneTex)；UCHT4 (Absolute Antibody)；BW135/80 (Miltenyi)；G42-8 (BD Biosciences)；C8/1779R、mAB 104 (Enzo Life Sciences)；B-Z31 (Sapphire North America)；32-M4、5F10、MCD8、UCH-T4、5F2 (Santa Cruz)；D8A8Y、RPA-T8 (Cell Signaling Technology)。其他例示性結合劑包括所設計之錨蛋白重複蛋白質(DARPin)及基於III型纖維結合蛋白(Fn3)骨架之結合劑。
在一些實施例中，CD8結合劑包含有分別包含SEQ ID NO:52、53及54中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及分別包含SEQ ID NO:55、56及57中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，CD8結合劑包含有包含SEQ ID NO:58中所闡述之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)及包含SEQ ID NO:59中所闡述之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:47中所闡述之序列。
在一些實施例中，CD8結合劑包含有分別包含SEQ ID NO:60、61及62中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及分別包含SEQ ID NO:63、64及65中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，CD8結合劑包含有包含SEQ ID NO:66中所闡述之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)及包含SEQ ID NO:67中所闡述之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:48中所闡述之序列。
在一些實施例中，CD8結合劑包含有分別包含SEQ ID NO:68、69及70中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及分別包含SEQ ID NO:55、56及71中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，CD8結合劑包含有包含SEQ ID NO:72中所闡述之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)及包含SEQ ID NO:73中所闡述之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:49中所闡述之序列。
在一些實施例中，CD8結合劑包含有分別包含SEQ ID NO:74、75及76中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及分別包含SEQ ID NO:77、78及79中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，CD8結合劑包含有包含SEQ ID NO:80中所闡述之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)及包含SEQ ID NO:81中所闡述之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:50中所闡述之序列。
在一些實施例中，CD8結合劑包含有分別包含SEQ ID NO:82、83及84中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。在一些實施例中，CD8結合劑包含有包含SEQ ID NO:51中所闡述之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:51中所闡述之序列。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:47、48、49、50或51中之任一者中所闡述之序列。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:47中所闡述之序列。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:48中所闡述之序列。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:49中所闡述之序列。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:50中所闡述之序列。在一些實施例中，CD8結合劑包含SEQ ID NO:51中所闡述之序列。
在一些實施例中，CD8結合劑包含如US 2019/0144885中所描述之任何CD8結合劑，其以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，可藉由使融合蛋白質或靶向蛋白質(例如，血球凝集素蛋白質)中之胺基酸殘基突變來再靶向蛋白質促融劑或病毒包膜蛋白質。在特定實施例中，促融劑(例如，G蛋白)經突變以降低促融劑之原生結合搭配物之結合。在一些實施例中，促融劑為或含有突變型G蛋白或其生物活性部分，該突變型G蛋白或其生物活性部分為野生型Niv-G之突變體且呈現降低之與原生結合搭配物艾普瑞林B2或艾普瑞林B3中之一者或兩者之結合(包括如上文所描述之任何突變型G蛋白或其生物活性部分)。因此，在一些態樣中，促融劑可經再靶向以顯示改變之向性。在一些實施例中，與野生型表面醣蛋白蛋白質之結合相比，結合提供再靶向之結合，其中提供新的或不同的結合活性。在特定實施例中，與野生型G蛋白之結合相比，結合提供再靶向之結合，其中提供新的或不同的結合活性。在一些實施例中，促融劑係隨機突變的。在一些實施例中，促融劑係合理地突變的。在一些實施例中，促融劑經歷定向演化。在一些實施例中，促融劑經截短且僅肽之子集用於病毒載體中。在一些實施例中，麻疹血球凝集素蛋白質中之胺基酸殘基可經突變以改變蛋白質之結合特性，重新引導融合(doi:10.1038/nbt942；Molecular Therapy, 第16卷, 第8號, 1427-1436, 2008年8月；doi:10.1038/nbt1060；DOI: 10.1128/JVI.76.7.3558-3563.2002；DOI: 10.1128/JVI.75.17.8016-8020.2001；doi: 10.1073pnas.0604993103)。
在一些實施例中，可藉由使CD8結合劑與融合蛋白質或靶向蛋白質(例如，血球凝集素蛋白質)共價結合來再靶向蛋白質促融劑。在一些實施例中，促融劑及CD8結合劑係藉由包含連接至CD8結合劑的促融劑之嵌合蛋白質之表現來共價結合。在一些實施例中，單鏈可變片段(scFv)可與促融劑結合以重新引導針對呈現scFv結合目標之細胞之融合活性(doi:10.1038/nbt1060；DOI 10.1182/blood-2012-11-468579；doi:10.1038/nmeth.1514；doi:10.1006/mthe.2002.0550；HUMAN GENE THERAPY 11:817- 826；doi:10.1038/nbt942；doi:10.1371/journal.pone.0026381；DOI 10.1186/s12896-015-0142-z)。在一些實施例中，所設計之錨蛋白重複蛋白質(DARPin)可與促融劑結合以重新引導針對呈現DARPin結合目標之細胞之融合活性(doi:10.1038/mt.2013.16；doi:10.1038/mt.2010.298；doi: 10.4049/jimmunol.1500956)，且不同DARPin之組合亦可如此(doi:10.1038/mto.2016.3)。在一些實施例中，受體配位體及抗原可與促融劑結合以重新引導針對呈現目標受體之細胞之融合活性(DOI: 10.1089/hgtb.2012.054；DOI: 10.1128/JVI.76.7.3558-3563.2002)。在一些實施例中，靶向蛋白質亦可包括抗體或其抗原結合片段(例如，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、scFv抗體片段、二硫鍵連接之Fv (sdFv)、由VH及CH1域組成之Fd片段、線性抗體、單域抗體(諸如sdAb (VL或VH))、奈米抗體或駱駝VHH域)、III型(Fn3)抗原結合纖維結合蛋白骨架(諸如纖維結合蛋白多肽微型抗體)、配位體、細胞介素、趨化介素或T細胞受體(TCR)。在一些實施例中，可藉由使CD8結合劑與融合蛋白質或靶向蛋白質(例如，血球凝集素蛋白質)非共價結合來再靶向蛋白質促融劑。在一些實施例中，融合蛋白質可經工程改造以結合靶向目標細胞上之抗原的抗體之Fc區，重新引導針對呈現抗體之目標的細胞之融合活性(DOI: 10.1128/JVI.75.17.8016-8020.2001；doi:10.1038/nm1192)。在一些實施例中，改變及未改變之促融劑可呈現於相同反轉錄病毒載體或VLP上(doi: 10.1016/j.biomaterials.2014.01.051)。
在一些實施例中，CD8結合劑包含人類化抗體分子、完整IgA、IgG、IgE或IgM抗體；雙特異性抗體或多特異性抗體(例如，Zybodies®等)；抗體片段，諸如Fab片段、Fab'片段、F(ab') 2片段、Fd'片段、Fd片段及經分離之CDR或其集合；單鏈Fv；多肽-Fc融合物；單域抗體(例如，鯊魚單域抗體，諸如IgNAR，或其片段)；駱駝抗體；經掩蔽之抗體(例如，Probodies®)；小型模組免疫藥物(「SMIPsTM」)；單鏈或串聯雙功能抗體(TandAb®)；VHH；Anticalins®；Nanobodies®；微型抗體；BiTE®s；錨蛋白重複蛋白質或DARPINs®；Avimers®；DARTs；TCR樣抗體；Adnectins®；Affilins®；Trans-bodies®；Affibodies®；TrimerX®；微型蛋白質；Fynomers®；Centyrins®；及KALBITOR®。
在一些實施例中，CD8結合劑為肽。在一些實施例中，CD8結合劑為抗體，諸如單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，CD8結合劑為抗體，諸如單域抗體。在一些實施例中，CD8結合劑為VHH。在一些實施例中，抗體可為人類或人類化抗體。在一些實施例中，抗體或其部分係天然存在的。在一些實施例中，抗體或其部分係合成的。
在一些實施例中，抗體可由噬菌體呈現庫產生以具有針對所需目標配位體之特異性。在一些實施例中，噬菌體呈現庫係由用各種抗原免疫接種之駱駝之VHH譜系產生，如Arbabi等人, FEBS Letters, 414, 521-526 (1997)；Lauwereys等人, EMBO J., 17, 3512-3520 (1998)；Decanniere等人, Structure, 7, 361-370 (1999)中所描述。在一些實施例中，產生包含未經免疫接種之駱駝之抗體片段之噬菌體顯示庫。在一些實施例中，藉由在一或多個骨架中引入多樣性來以合成方式產生人類單域抗體之庫。
在一些實施例中，CD8結合劑之C端連接至G蛋白(例如，促融劑)或其生物活性部分之C端。在一些實施例中，CD8結合劑之N端在脂質雙層之外部表面上暴露。
在一些實施例中，CD8結合劑為病毒載體之唯一的表面呈現之非病毒序列。在一些實施例中，CD8結合劑為病毒載體之唯一的膜結合之非病毒序列。在一些實施例中，病毒載體不含接合或刺激除CD8結合劑以外的T細胞之分子。
在一些實施例中，病毒載體可呈現CD8結合劑，該等結合劑未與蛋白質促融劑結合以重新引導針對由靶向部分結合之細胞之融合活性或影響導向。
在一些實施例中，來源於不會感染人類之病毒或生物體之蛋白質促融劑在患者中不患有天然融合目標，且因此具有高特異性。 V. 經工程改造之受體有效負載
在一些實施例中，本文中所揭示之病毒載體編碼經工程改造之受體。在一些實施例中，與所提供之方法結合使用或投與之細胞含有或經工程改造以含有經工程改造之受體，例如經工程改造之抗原受體，諸如嵌合抗原受體(CAR)。亦提供此類細胞之群體、含有此類細胞及/或富集此類細胞之組合物，諸如在其中富集或選擇某一類型之細胞，諸如T細胞或CD8+細胞。組合物包括用於投藥，諸如用於過繼性細胞療法之醫藥組合物及調配物。亦提供用於根據所提供之方法及/或所提供之製品或組合物向個體(例如，患者)投與細胞及組合物之治療方法。
在一些實施例中，在不首先刺激細胞之情況下實現基因轉移，諸如藉由將細胞與誘導諸如增殖、存活及/或活化之反應(例如藉由細胞介素或活化標記物之表現所量測)之刺激物組合，接著將核酸引入(例如，藉由轉導)經刺激之細胞中且視情況在培養物中培育或擴增至足以用於臨床應用之數目。
病毒載體可表現重組受體，諸如抗原受體，包括嵌合抗原受體(CAR)，及其他抗原結合受體，諸如轉基因T細胞受體(TCR)。受體亦包括其他嵌合受體。 A. 嵌合抗原受體 (CAR)
在所提供之方法及用途之一些實施例中，嵌合受體(諸如嵌合抗原受體)含有一或多個域，該一或多個域組合提供針對具有細胞內信號傳導域之所需抗原(例如，腫瘤抗原)的特異性之抗原結合域或配位體結合域(例如，抗體或抗體片段)。在一些實施例中，細胞內信號傳導域為刺激或活化細胞內域部分，諸如T細胞刺激或活化域，其提供初級活化信號或初級信號。在一些實施例中，細胞內信號傳導域含有或額外含有共刺激性信號傳導域以促進效應功能。在一些實施例中，當經基因工程改造至免疫細胞中時，嵌合受體可調節T細胞活性且在一些情況下，可調節T細胞分化或體內恆定，藉此活體內產生具有改良之壽命、存活率及/或持久性之經基因工程改造之細胞，諸如用於過繼性細胞療法方法。
例示性抗原受體(包括CAR)及用於將此類受體工程改造及引入至細胞中之方法包括例如W0200014257、WO2013126726、WO2012/129514、WO2014031687、WO2013/166321、WO2013/071154、W02013/123061、美國專利申請公開按第US2002131960號、第US2013287748號、第US20130149337號、美國專利案第6,451,995號、第7,446,190號、第8,252,592號、第8,339,645號、第8,398,282號、第7,446,179號、第6,410,319號、第7,070,995號、第7,265,209號、第7,354,762號、第7,446,191號、第8,324,353號及第8,479,118號以及歐洲專利申請案第EP2537416號中所描述之受體及方法，及/或由Sadelain等人, Cancer Discov. 2013年4月; 3(4): 388-398；Davila等人, (2013) PLoS ONE 8(4): e61338；Turtle等人, Curr. Opin. Immunol., 2012年10月; 24(5): 633-39；Wu等人, Cancer, 2012年3月, 18(2): 160-75中所描述之受體及方法。在一些態樣中，抗原受體包括如美國專利案第7,446,190號中所描述之CAR及WO/2014055668中所描述之受體。CAR之實例包括如前述公開案中之任一者中所揭示之CAR，諸如WO2014031687；US 8,339,645；US 7,446,179；US 2013/0149337；US 7,446,190；US 8,389,282；Kochenderfer等人, (2013) Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276；Wang等人, (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701；及Brentjens等人, Sci Transl Med. 2013 5(177)。亦參見WO2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、US 7,446,190及US 8,389,282。重組受體(諸如CAR)通常包括細胞外抗原結合域，諸如抗體分子之一部分，通常抗體之可變重(VH)鏈區及/或可變輕(VL)鏈區，例如scFv抗體片段。在一些實施例中，CAR分子之抗原結合域包含抗體、抗體片段、scFv、Fv、Fab、(Fab')2、單域抗體(SdAb)、VH或VL域或駱駝VHH域。
在一些實施例中，CAR抗原結合域為或包含抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，CAR抗原結合域為或包含scFv或Fab。在一些實施例中，CAR抗原結合域包含CD19抗體之scFv或Fab片段；CD22抗體；T細胞α鏈抗體；T細胞β鏈抗體；T細胞γ鏈抗體；T細胞δ鏈抗體；CCR7抗體；CD3抗體；CD4抗體；CD5抗體；CD7抗體；CD8抗體；CD11b抗體；CD11c抗體；CD16抗體；CD20抗體；CD21抗體；CD25抗體；CD28抗體；CD34抗體；CD35抗體；CD40抗體；CD45RA抗體；CD45RO抗體；CD52抗體；CD56抗體；CD62L抗體；CD68抗體；CD80抗體；CD95抗體；CD117抗體；CD127抗體；CD133抗體；CD137 (4-1 BB)抗體；CD163抗體；F4/80抗體；IL-4Ra抗體；Sca-1抗體；CTLA-4抗體；GITR抗體；GARP抗體；LAP抗體；顆粒酶B抗體；LFA-1抗體；MR1抗體；uPAR抗體；或運鐵蛋白受體抗體。
在一些實施例中，CAR包含信號傳導域，其為共刺激域。在一些實施例中，CAR包含第二共刺激域。在一些實施例中，CAR包含至少兩個共刺激域。在一些實施例中，CAR包含至少三個共刺激域。在一些實施例中，CAR包含選自以下中之一或多者之共刺激域：CD27、CD28、4-1BB、CD134/OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴球功能相關抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、與CD83特異性結合之配位體。在一些實施例中，若CAR包含兩個或更多個共刺激域，則兩個共刺激域不同。在一些實施例中，若CAR包含兩個或更多個共刺激域，則兩個共刺激域相同。
除本文中所描述之CAR以外，各種嵌合抗原受體及編碼其之核苷酸序列為此項技術中已知的，且將適用於活體內及活體外融合體遞送及再程式化目標細胞，如本文中所描述。參見例如WO2013040557；WO2012079000；WO2016030414；Smith T等人, Nature Nanotechnology. 2017. DOI: 10.1038/NNANO.2017.57，其揭示內容以引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，由受體靶向之抗原為多肽。在一些實施例中，其為碳水化合物或其他分子。在一些實施例中，與正常或非靶向細胞或組織相比，抗原選擇性地表現或過表現於疾病或病狀細胞，例如腫瘤或病原性細胞上。在其他實施例中，抗原表現於正常細胞上及/或表現於經工程改造之細胞上。
在一些實施例中，由受體靶向之抗原包括與B細胞惡性疾病相關之抗原，諸如多種已知的B細胞標記物中之任一者。在一些實施例中，由受體靶向之抗原為CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD47、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。
在一些實施例中，CAR結合於CD19。在一些實施例中，CAR結合於CD22。在一些實施例中，CAR結合於CD19及CD22。在一些實施例中，CAR係選自由以下組成之群：第一代CAR、第二代CAR、第三代CAR及第四代CAR。在一些實施例中，CAR包括結合於單一目標抗原之單一結合域。在一些實施例中，CAR包括結合於超過一個目標抗原(例如，2、3個或更多個目標抗原)之單一結合域。在一些實施例中，CAR包括兩個結合域使得各結合域結合於不同目標抗原。在一些實施例中，CAR包括兩個結合域使得各結合域結合於相同目標抗原。包括CD19特異性、CD22特異性及CD19/CD22雙特異性CAR之例示性CAR之詳細描述可見於WO2012/079000、WO2016/149578及WO2020/014482中，其揭示內容(包括序列表及圖式)以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括含有抗體或抗體片段之細胞外部分。在一些態樣中，嵌合抗原受體包括含有抗體或片段之細胞外部分及細胞內信號傳導域。在一些實施例中，抗體或片段包括scFv。
在一些實施例中，由抗原結合域靶向之抗原為CD19。在一些態樣中，重組受體(例如，CAR)之抗原結合域及抗原結合域結合(諸如特異性結合或特異性識別) CD19，諸如人類CD19。在一些實施例中，scFv含有來源於對CD19具有特異性的抗體或抗體片段之VH及VL。在一些實施例中，結合於CD19之抗體或抗體片段為小鼠衍生之抗體，諸如FMC63及SJ25C1。在一些實施例中，抗體或抗體片段為人類抗體，例如美國專利公開案第US 2016/0152723號中所描述。
在一些實施例中，抗原為CD19。在一些實施例中，scFv含有來源於對CD19具有特異性的抗體或抗體片段之VH及VL。在一些實施例中，結合於CD19之抗體或抗體片段為小鼠衍生之抗體，諸如FMC63及SJ25C1。在一些實施例中，抗體或抗體片段為人類抗體，例如美國專利公開案第US 2016/0152723號中所描述。
在一些實施例中，scFv係來源於FMC63。FMC63通常係指針對表現人源性CD19之Naim-1及Naim-16細胞產生之小鼠單株IgGl抗體(Fing, N. R.等人, (1987). Leucocyte typing III. 302)。
在一些實施例中，重組受體(例如，CAR)之抗體部分進一步包括跨膜域與細胞外抗原結合域之間的間隔子。在一些實施例中，間隔子包括免疫球蛋白恆定區之至少一部分，諸如鉸鏈區，例如IgG4鉸鏈區，及/或CH1/CL及/或Fc區。在一些實施例中，恆定區或其部分係來自人類IgG，諸如IgG4或IgG1。在一些態樣中，恆定區的一部分充當抗原識別組分(例如，scFv)與跨膜域之間的間隔區。間隔子之長度可使得細胞在抗原結合後之反應性與不存在間隔子之情況相比增加。例示性間隔子包括(但不限於)Hudecek等人, (2013) Clin. Cancer Res., 19:3153；WO2014031687；美國專利案第8,822,647號；或公開申請案第US 2014/0271635號中所描述之間隔子。在一些實施例中，恆定區或其部分係來自人類IgG，諸如IgG4或IgG1。
在一些實施例中，抗原受體包含直接或間接連接至細胞外域之細胞內域。在一些實施例中，嵌合抗原受體包括連接細胞外域及細胞內信號傳導域之跨膜域。在一些實施例中，細胞內信號傳導域包含IT AM。舉例而言，在一些態樣中，抗原識別域(例如，細胞外域)通常連接至一或多個細胞內信號傳導組分，諸如經由抗原受體複合物(諸如在CAR之情況下，TCR複合物)模擬活化及/或經由另一種細胞表面受體進行信號傳導之信號傳導組分。在一些實施例中，嵌合受體包含在細胞外域(例如，scFv)與細胞內信號傳導域之間連接或融合之跨膜域。因此，在一些實施例中，抗原結合組分(例如，抗體)連接至一或多個跨膜及細胞內信號傳導域。
在一個實施例中，使用與受體(例如，CAR)中之一個域天然相關聯的跨膜域。在一些情況下，跨膜域可經選擇或由胺基酸取代修飾以避免此類域結合於相同或不同表面膜蛋白質之跨膜域，以使與受體複合物之其他成員的相互作用降至最低。
在一些實施例中，CAR跨膜域包含T細胞受體之α、β或ζ鏈、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154或其功能變異體之至少一個跨膜區。在一些實施例中，跨膜域包含CD8α、CD8β、4-1BB/CD137、CD28、CD34、CD4、FcεRIγ、CD16、OX40/CD134、CD3ζ、CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRζ、CD32、CD64、CD64、CD45、CD5、CD9、CD22、CD37、CD80、CD86、CD40、CD40L/CD154、VEGFR2、FAS及FGFR2B或其功能變異體之至少一個跨膜區。在一些實施例中，跨膜域係來源於天然或合成來源。在天然來源的情況下，在一些態樣中，域係來源於任何膜結合蛋白質或跨膜蛋白質。跨膜區包括來源於以下之跨膜區(亦即，至少包含以下之跨膜區)：T細胞受體之α、β或ξ鏈、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD 154。或者，在一些實施例中，跨膜域係合成的。在一些態樣中，合成性跨膜域主要包含疏水性殘基，諸如白胺酸及纈胺酸。在一些態樣中，將在合成性跨膜域之各端發現苯丙胺酸、色胺酸及纈胺酸之三聯體。在一些實施例中，連接係藉由連接子、間隔子及/或跨膜域實現。在一些態樣中，跨膜域含有CD28之跨膜部分。
在一些實施例中，細胞外域及跨膜域可直接或間接連接。在一些實施例中，細胞外域及跨膜係藉由間隔子(諸如本文中所描述之任何間隔子)連接。在一些實施例中，受體含有衍生跨膜域之分子的細胞外部分，諸如CD28細胞外部分。
細胞內信號傳導域包括經由天然抗原受體來模擬或模仿信號、經由此類受體與共刺激性受體之組合來模擬或模仿信號及/或經由單獨的共刺激性受體來模擬或模仿信號的細胞內信號傳導域。在一些實施例中，存在短寡肽或多肽連接子(例如，長度在2個與10個胺基酸之間的連接子，諸如含有甘胺酸及絲胺酸之連接子，例如甘胺酸-絲胺酸二聯體)且其在CAR之跨膜域與細胞質信號傳導域之間形成連接。
在一些態樣中，T細胞活化描述為由兩種類別之細胞質信號傳導序列介導：經由TCR起始抗原依賴性初級活化之細胞質信號傳導序列(初級細胞質信號傳導序列)，及以非抗原依賴性方式起作用以提供二級或共刺激性信號之細胞質信號傳導序列(二級細胞質信號傳導序列)。在一些態樣中，CAR包括此類信號傳導組分中之一者或兩者。
受體(例如，CAR)通常包括至少一個或多個細胞內信號傳導組分。在一些態樣中，CAR包括調節TCR複合物之初始活化的初級細胞質信號傳導序列。以刺激方式起作用之初級細胞質信號傳導序列可含有信號傳導模體，其稱為基於免疫受體酪胺酸之活化模體或ITAM。含有ITAM之初級細胞質信號傳導序列的實例包括來源於以下之初級細胞質信號傳導序列：CD3ζ鏈、FcRγ、CD3γ、CD3δ及CD3ε。在一些實施例中，CAR中之細胞質信號傳導分子含有細胞質信號傳導域、其部分或來源於CD3ξ之序列。
在一些實施例中，受體包括TCR複合物之細胞內組分，諸如介導T細胞活化及細胞毒性的TCR CD3鏈，例如CD3ξ鏈。因此，在一些態樣中，抗原結合部分連接至一或多個細胞信號傳導模組。在一些實施例中，細胞信號傳導模組包括CD3跨膜域、CD3細胞內信號傳導域及/或其他CD跨膜域。在一些實施例中，細胞內組分為或包括CD3-ζ細胞內信號傳導域。在一些實施例中，細胞內組分為或包括來自Fc受體γ鏈之信號傳導域。在一些實施例中，受體(例如，CAR)包括細胞內信號傳導域且進一步包括一或多種其他分子(諸如CD8、CD4、CD25或CD16)之一部分，諸如跨膜域及/或鉸鏈部分。舉例而言，在一些態樣中，CAR或其他嵌合受體為CD3-ζ (CD3-z)或Fc受體g及CD8、CD4、CD25或CD16中之一者之一部分之嵌合分子。
在一些實施例中，在接合CAR或其他嵌合受體後，受體之細胞質域或細胞內信號傳導域活化免疫細胞(例如，經工程改造以表現CAR之T細胞)的正常效應功能或反應中之至少一者。舉例而言，在一些情形下，CAR誘導T細胞功能，諸如細胞溶解活性或T輔助細胞活性，諸如細胞介素或其他因子之分泌。在一些實施例中，使用抗原受體組分或共刺激性分子之細胞內信號傳導域的截短部分置換完整免疫刺激性鏈，例如在該部分轉導效應功能信號之情況下。在一些實施例中，一或多個細胞內信號傳導域包括T細胞受體(TCR)之細胞質序列，且在一些態樣中，亦包括在天然情形中與此類受體協同作用以在抗原受體接合後起始信號轉導之共受體的細胞質序列。
在天然TCR之情形下，完全活化通常不僅需要經由TCR進行傳導信號，且亦需要共刺激性信號。因此，在一些實施例中，為了促進完全活化，CAR中亦包括用於產生二級或共刺激性信號的組分。在其他實施例中，CAR不包括用於產生共刺激性信號之組分。在一些態樣中，另一種CAR表現於相同細胞中且提供用於產生二級或共刺激性信號之組分。
在一些實施例中，嵌合抗原受體含有T細胞共刺激性分子之細胞內域。在一些實施例中，CAR包括共刺激性受體(諸如CD28、4-1BB、OX40、DAP10及ICOS)之信號傳導域及/或跨膜部分。在一些態樣中，同一CAR包括活化組分及共刺激性組分。在一些實施例中，嵌合抗原受體含有來源於T細胞共刺激性分子或其功能變異體的細胞內域，諸如在跨膜域與細胞內信號傳導域之間。在一些態樣中，T細胞共刺激性分子為CD28或41BB。
在一些實施例中，活化域包括在一個CAR內，而共刺激性組分由識別另一抗原之另一CAR提供。在一些實施例中，CAR包括活化或刺激性CAR、共刺激性CAR，其皆表現於同一細胞上(參見WO2014/055668)。在一些態樣中，細胞包括一或多個刺激性或活化CAR及/或共刺激性CAR。在一些實施例中，細胞進一步包括抑制性CAR (iCAR，參見Fedorov等人, Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013年12月)，諸如識別除與疾病或病狀相關聯及/或對疾病或病狀具有特異性之抗原以外之抗原的CAR，由此經由靶向疾病之CAR遞送的活化信號由抑制性CAR與其配位體之結合而減弱或抑制，例如以減小脫靶作用。
在某些實施例中，細胞內信號傳導域包含連接至CD3 (例如，CD3-ξ)細胞內域之CD28跨膜及信號傳導域。在一些實施例中，細胞內信號傳導域包含連接至CD3ζ細胞內域之嵌合CD28及CD137 (4-1BB、TNFRSF9)共刺激域。
在一些實施例中，CAR在細胞質部分中包括一或多個，例如兩個或更多個共刺激域及活化域，例如初級活化域。例示性CAR包括CD3-ζ、CD28及4-1BB之細胞內組分。
在一些實施例中，細胞內信號傳導域包括4-1BB信號傳導域及CD3-ζ信號傳導域之細胞內組分。在一些實施例中，細胞內信號傳導域包括CD28信號傳導域及CD3ζ信號傳導域之細胞內組分。
在一些實施例中，CD19特異性CAR包括抗CD19單鏈抗體片段(scFv)、跨膜域(諸如來源於人類CD8α之跨膜域)、4-1BB (CD137)共刺激性信號傳導域及CD3ζ信號傳導域。在一些實施例中，CD22特異性CAR包括抗CD22 scFv、跨膜域(諸如來源於人類CD8α之跨膜域)、4-1BB (CD137)共刺激性信號傳導域及CD3ζ信號傳導域。在一些實施例中，CD19/CD22雙特異性CAR包括抗CD19 scFv、抗CD22 scFv、跨膜域(諸如來源於人類CD8α之跨膜域)、4-1BB (CD137)共刺激性信號傳導域及CD3ζ信號傳導域。
在一些實施例中，CAR包含由T細胞攜帶之市售CAR構築體。基於市售CAR-T細胞之療法之非限制性實例包括布萊奧妥(brexucabtagene autoleucel)(TECARTUS®)、阿基侖賽(axicabtagene ciloleucel)(YESCARTA®)、艾德侖賽(idecabtagene vicleucel)(ABECMA®)、力索嗎魯(lisocabtagene maraleucel)(BREYANZI®)、替沙津魯(tisagenlecleucel)(KYMRIAH®)、來自Cartesian Therapeutics之Descartes-08及Descartes-11、來自Novartis之CTL110、來自Poseida Therapeutics之P-BMCA-101、來自Autolus Limited之AUTO4、來自Cellectis之UCARTCS、來自Precision Biosciences之PBCAR19B及PBCAR269A、來自Fate Therapeutics之FT819及來自Clyad Oncology之CYAD-211。
本文中亦提供包含嵌合抗原受體(CAR)之細胞。在一些實施例中，本文中所描述之細胞包含多核苷酸，其編碼包含抗原結合域之嵌合抗原受體(CAR)。在一些實施例中，本文中所描述之細胞包含有包含抗原結合域之嵌合抗原受體(CAR)。在一些實施例中，多核苷酸為或包含嵌合抗原受體(CAR)，其包含抗原結合域。在一些實施例中，CAR為或包含第一代CAR，其包含抗原結合域、跨膜域及至少一個信號傳導域(例如，一個、兩個或三個信號傳導域)。在一些實施例中，CAR包含第二代CAR，其包含抗原結合域、跨膜域及至少兩個信號傳導域。在一些實施例中，CAR包含第三代CAR，其包括抗原結合域、跨膜域及至少三個信號傳導域。在一些實施例中，包含抗原結合域、跨膜域、三個或四個信號傳導域及在CAR之成功信號傳導後誘導細胞介素基因之表現之域的第四代CAR。在一些實施例中，抗原結合域為或包含抗體、抗體片段、scFv或Fab。
在一些實施例中，抗原結合域(ABD)靶向作為贅生性細胞之特徵之抗原。換言之，抗原結合域靶向由贅生性或癌細胞表現之抗原。在一些實施例中，ABD結合腫瘤相關抗原。在一些實施例中，作為贅生性細胞之特徵之抗原(例如，與贅生性或癌細胞相關之抗原)或腫瘤相關抗原係選自細胞表面受體、離子通道連接之受體、酶連接之受體、G蛋白偶合受體、受體酪胺酸激酶、酪胺酸激酶相關受體、受體樣酪胺酸磷酸酶、受體絲胺酸/蘇胺酸激酶、受體鳥苷酸環化酶、組胺酸激酶相關受體、表皮生長因子受體(EGFR)(包括ErbB1/EGFR、ErbB2/HER2、ErbB3/HER3及ErbB4/HER4)、纖維母細胞生長因子受體(FGFR)(包括FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF18及FGF21)、血管內皮生長因子受體(VEGFR)(包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D及PIGF)、RET受體及Eph受體家族(包括EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA9、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4及EphB6)CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR6、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR8、CFTR、CIC-1、CIC-2、CIC-4、CIC-5、CIC-7、CIC-Ka、CIC-Kb、斑萎蛋白(Bestrophins)、TMEM16A、GABA受體、甘胺酸受體、ABC轉運體、NAV1.1、NAV1.2、NAV1.3、NAV1.4、NAV1.5、NAV1.6、NAV1.7、NAV1.8、NAV1.9、神經鞘胺醇-1-磷酸受體(S1P1R)、NMDA通道、跨膜蛋白質、多跨距跨膜蛋白質、T細胞受體模體、T細胞α鏈、T細胞β鏈、T細胞γ鏈、T細胞δ鏈、CCR7、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD11b、CD11c、CD16、CD19、CD20、CD21、CD22、CD25、CD28、CD34、CD35、CD40、CD45RA、CD45RO、CD52、CD56、CD62L、CD68、CD80、CD95、CD117、CD127、CD133、CD137 (4-1BB)、CD163、F4/80、IL-4Ra、Sca-1、CTLA-4、GITR、GARP、LAP、顆粒酶B、LFA-1、運鐵蛋白受體、NKp46、穿孔蛋白、CD4+、Th1、Th2、Th17、Th40、Th22、Th9、Tfh、標準Treg.FoxP3+、Tr1、Th3、Treg17、T REG；CDCP、NT5E、EpCAM、CEA、gpA33、黏蛋白、TAG-72、碳酸酐酶IX、PSMA、葉酸結合蛋白質、神經節苷脂(例如，CD2、CD3、GM2)、路易斯(Lewis)-γ 2、VEGF、VEGFR 1/2/3、αVβ3、α5β1、ErbB1/EGFR、ErbB1/HER2、ErB3、c-MET、IGF1R、EphA3、TRAIL-R1、TRAIL-R2、RANKL、FAP、腱生蛋白、PDL-1、BAFF、HDAC、ABL、FLT3、KIT、MET、RET、IL-1β、ALK、RANKL、mTOR、CTLA-4、IL-6、IL-6R、JAK3、BRAF、PTCH、斯莫森德(Smoothened)、PIGF、ANPEP、TIMP1、PLAUR、PTPRJ、LTBR、ANTXR1、葉酸受體α (FRa)、ERBB2 (Her2/neu)、EphA2、IL-13Ra2、表皮生長因子受體(EGFR)、間皮素、TSHR、CD19、CD123、CD22、CD30、CD171、CS-1、CLL-1、CD33、EGFRvIII、GD2、GD3、BCMA、MUC16 (CA125)、L1CAM、LeY、MSLN、IL13Rα1、L1-CAM、Tn Ag、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD38、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、介白素-11受體a (IL-11Ra)、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、CD24、血小板衍生之生長因子受體-β (PDGFR-β)、SSEA-4、CD20、MUC1、NCAM、前列腺酶、PAP、ELF2M、艾普瑞林B2、IGF-1受體、CAIX、LMP2、gpl00、bcr-abl、酪胺酸酶、岩藻糖基GM1、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、鄰乙醯基-GD2、葉酸受體β、TEM1/CD248、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、CD97、CD179a、ALK、聚唾液酸、PLACl、GloboH、NY-BR-1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY-ESO-1、LAGE-la、MAGE-A1、豆莢蛋白、HPV E6、E7、ETV6-AML、精子蛋白質17、XAGE1、Tie 2、MAD-CT-1、MAD-CT-2、I類主要組織相容複合物相關基因蛋白質(MR1)、尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化因子受體(uPAR)、Fos相關抗原1、p53、p53突變體、前列腺素、存活素、端粒酶、PCTA-1/半乳糖凝集素8、MelanA/MART1、Ras突變體、hTERT、肉瘤易位斷點、ML-IAP、ERG (TMPRSS2 ETS融合基因)、NA17、PAX3、雄激素受體、細胞週期素B1、MYCN、RhoC、TRP-2、CYPIB I、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES1、LCK、AKAP-4、SSX2、RAGE-1、人類端粒酶反轉錄酶、RU1、RU2、腸道羧基酯酶、mut hsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRL5、IGLL1、新抗原、CD133、CD15、CD184、CD24、CD56、CD26、CD29、CD44、HLA-A、HLA-B、HLA-C、(HLA-A,B,C) CD49f、CD151 CD340、CD200、tkrA、trkB或trkC，或其抗原性片段或抗原性部分。
在一些實施例中，抗原結合域靶向作為T細胞之特徵之抗原。在一些實施例中，ABD結合與T細胞相關之抗原。在一些情況下，此類抗原由T細胞表現或位於T細胞之表面上。在一些實施例中，作為T細胞之特徵之抗原或T細胞相關抗原係選自細胞表面受體、膜轉運蛋白(例如，活性或惰性轉運蛋白，諸如離子通道蛋白、成孔蛋白等)、跨膜受體、膜酶及/或作為T細胞之特徵之細胞黏附蛋白。在一些實施例中，作為T細胞之特徵之抗原可為G蛋白偶合受體、受體酪胺酸激酶、酪胺酸激酶相關受體、受體樣酪胺酸磷酸酶、受體絲胺酸/蘇胺酸激酶、受體鳥苷酸環化酶、組胺酸激酶相關受體、AKT1；AKT2；AKT3；ATF2；BCL10；CALM1；CD3D (CD3δ)；CD3E (CD3ε)；CD3G (CD3γ)；CD4；CD8；CD28；CD45；CD80 (B7-1)；CD86 (B7-2)；CD247 (CD3ζ)；CTLA-4 (CD152)；ELK1；ERK1 (MAPK3)；ERK2；FOS；FYN；GRAP2 (GADS)；GRB2；HLA-DRA；HLA-DRB1；HLA-DRB3；HLA-DRB4；HLA-DRB5；HRAS；IKBKA (CHUK)；IKBKB；IKBKE；IKBKG (NEMO)；IL2；ITPR1；ITK；JUN；KRAS2；LAT；LCK；MAP2K1 (MEK1)；MAP2K2 (MEK2)；MAP2K3 (MKK3)；MAP2K4 (MKK4)；MAP2K6 (MKK6)；MAP2K7 (MKK7)；MAP3K1 (MEKK1)；MAP3K3；MAP3K4；MAP3K5；MAP3K8；MAP3K14 (NIK)；MAPK8 (JNK1)；MAPK9 (JNK2)；MAPK10 (JNK3)；MAPK11 (p38β)；MAPK12 (p38γ)；MAPK13 (p38δ)；MAPK14 (p38α)；NCK；NFAT1；NFAT2；NFKB1；NFKB2；NFKBIA；NRAS；PAK1；PAK2；PAK3；PAK4；PIK3C2B；PIK3C3 (VPS34)；PIK3CA；PIK3CB；PIK3CD；PIK3R1；PKCA；PKCB；PKCM；PKCQ；PLCY1；PRF1 (穿孔蛋白)；PTEN；RAC1；RAF1；RELA；SDF1；SHP2；SLP76；SOS；SRC；TBK1；TCRA；TEC；TRAF6；VAV1；VAV2；或ZAP70。
在一些實施例中，抗原結合域靶向作為自體免疫或發炎性病症之特徵之抗原。在一些實施例中，ABD結合與自體免疫或發炎性病症相關之抗原。在一些情況下，抗原由與自體免疫或發炎性病症相關之細胞表現。在一些實施例中，自體免疫或發炎性病症係選自慢性移植物抗宿主疾病(GVHD)、狼瘡、關節炎、免疫複合物絲球體腎炎、古巴士德氏症候群(goodpasture syndrome)、葡萄膜炎、肝炎、全身性硬化症或硬皮病、I型糖尿病、多發性硬化、冷凝集素病、尋常天疱瘡、格雷氏病(Grave's disease)、自體免疫溶血性貧血、A型血友病、原發性休格連氏症候群(Sjogren's Syndrome)、血栓性血小板減少性紫癜、視神經脊髓炎、艾瓦氏症候群(Evan's syndrome)、IgM介導之神經病、冷凝球蛋白血症、皮肌炎、特發性血小板減少、僵直性脊椎炎、大皰性類天疱瘡、後天性血管性水腫、慢性蕁麻疹、抗磷脂脫髓鞘多發性神經病及自體免疫血小板減少症或嗜中性球減少症或純紅血球發育不全，而同種免疫疾病之例示性非限制性實例包括由造血或實體器官移植、輸血引起之同種致敏作用(參見例如Blazar等人, 2015, Am. J. Transplant, 15(4):931-41)或異種致敏作用、孕期胎兒同種致敏作用、新生兒同種免疫血小板減少、新生兒溶血性疾病、對外來抗原過敏，諸如可在用酶或蛋白質替代療法、血液產品及基因療法治療之遺傳性或獲得性缺乏病症之替代下發生。在一些實施例中，作為自體免疫或發炎性病症之特徵之抗原係選自細胞表面受體、離子通道連接之受體、酶連接之受體、G蛋白偶合受體、受體酪胺酸激酶、酪胺酸激酶相關受體、受體樣酪胺酸磷酸酶、受體絲胺酸/蘇胺酸激酶、受體鳥苷酸環化酶或組胺酸激酶相關受體。
在一些實施例中，CAR之抗原結合域與B細胞、漿細胞或漿母細胞上表現之配位體結合。在一些實施例中，CAR之抗原結合域結合於CD10、CD19、CD20、CD22、CD24、CD27、CD38、CD45R、CD138、CD319、BCMA、CD28、TNF、干擾素受體、GM-CSF、ZAP-70、LFA-1、CD3γ、CD5或CD2。參見例如US 2003/0077249；WO 2017/058753；WO 2017/058850，其內容以引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，抗原結合域靶向作為衰老細胞之特徵之抗原，例如尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化因子受體(uPAR)。在一些實施例中，ABD結合與衰老細胞相關之抗原。在一些情況下，抗原由衰老細胞表現。在一些實施例中，CAR可用於治療或預防特徵在於衰老細胞之異常積聚的病症，例如肝及肺纖維化、動脈粥樣硬化、糖尿病及骨關節炎。
在一些實施例中，抗原結合域靶向作為傳染病之特徵之抗原。在一些實施例中，ABD結合與傳染病相關之抗原。在一些情況下，抗原由受傳染病影響之細胞表現。在一些實施例中，其中傳染病係選自HIV、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、人類疱疹病毒、人類疱疹病毒8 (HHV-8，卡堡氏肉瘤相關疱疹病毒(Kaposi sarcoma-associated herpes virus；KSHV))、人類T-淋巴病毒-1 (HTLV-1)、梅克爾細胞多瘤病毒(Merkel cell polyomavirus；MCV)、猿猴病毒40 (SV40)、埃-巴二氏病毒(Eptstein-Barr virus)、CMV、人類乳頭瘤病毒。在一些實施例中，作為傳染病之特徵之抗原係選自細胞表面受體、離子通道連接之受體、酶連接之受體、G蛋白偶合受體、受體酪胺酸激酶、酪胺酸激酶相關受體、受體樣酪胺酸磷酸酶、受體絲胺酸/蘇胺酸激酶、受體鳥苷酸環化酶、組胺酸激酶相關受體、HIV Env、gpl20或HIV-1 Env上之CD4誘導之抗原決定基。
在一些實施例中，抗原結合域結合於細胞之細胞表面抗原。在一些實施例中，細胞表面抗原為特定或特異性細胞類型之特徵(例如，由其表現)。在一些實施例中，細胞表面抗原為超過一種類型之細胞之特徵。
在一些實施例中，CAR抗原結合域結合作為T細胞之特徵之細胞表面抗原，諸如T細胞上之細胞表面抗原。在一些實施例中，作為T細胞之特徵之抗原可為細胞表面受體、膜轉運蛋白(例如，活性或惰性轉運蛋白，諸如離子通道蛋白、成孔蛋白等)、跨膜受體、膜酶及/或作為T細胞之特徵之細胞黏附蛋白。在一些實施例中，作為T細胞之特徵之抗原可為G蛋白偶合受體、受體酪胺酸激酶、酪胺酸激酶相關受體、受體樣酪胺酸磷酸酶、受體絲胺酸/蘇胺酸激酶、受體鳥苷酸環化酶或組胺酸激酶相關受體。
在一些實施例中，CAR之抗原結合域結合T細胞受體。在一些實施例中，T細胞受體可為AKT1；AKT2；AKT3；ATF2；BCL10；CALM1；CD3D (CD3δ)；CD3E (CD3ε)；CD3G (CD3γ)；CD4；CD8；CD28；CD45；CD80 (B7-1)；CD86 (B7-2)；CD247 (CD3ζ)；CTLA-4 (CD152)；ELK1；ERK1 (MAPK3)；ERK2；FOS；FYN；GRAP2 (GADS)；GRB2；HLA-DRA；HLA-DRB1；HLA-DRB3；HLA-DRB4；HLA-DRB5；HRAS；IKBKA (CHUK)；IKBKB；IKBKE；IKBKG (NEMO)；IL2；ITPR1；ITK；JUN；KRAS2；LAT；LCK；MAP2K1 (MEK1)；MAP2K2 (MEK2)；MAP2K3 (MKK3)；MAP2K4 (MKK4)；MAP2K6 (MKK6)；MAP2K7 (MKK7)；MAP3K1 (MEKK1)；MAP3K3；MAP3K4；MAP3K5；MAP3K8；MAP3K14 (NIK)；MAPK8 (JNK1)；MAPK9 (JNK2)；MAPK10 (JNK3)；MAPK11 (p38β)；MAPK12 (p38γ)；MAPK13 (p38δ)；MAPK14 (p38α)；NCK；NFAT1；NFAT2；NFKB1；NFKB2；NFKBIA；NRAS；PAK1；PAK2；PAK3；PAK4；PIK3C2B；PIK3C3 (VPS34)；PIK3CA；PIK3CB；PIK3CD；PIK3R1；PKCA；PKCB；PKCM；PKCQ；PLCY1；PRF1 (穿孔蛋白)；PTEN；RAC1；RAF1；RELA；SDF1；SHP2；SLP76；SOS；SRC；TBK1；TCRA；TEC；TRAF6；VAV1；VAV2；或ZAP70。
在一些實施例中，CAR包含結合於抗原(例如，腫瘤抗原)之細胞外抗原結合域(例如，抗體或抗體片段，諸如scFv)、間隔子(例如，含有鉸鏈域，諸如本文中所描述之任何鉸鏈域)、跨膜域(例如本文中所描述之任何跨膜域)及細胞內信號傳導域(例如，任何細胞內信號傳導域，諸如本文中所描述之初級信號傳導域或共刺激性信號傳導域)。在一些實施例中，細胞內信號傳導域為或包括初級細胞質信號傳導域。在一些實施例中，細胞內信號傳導域額外包括共刺激性分子之細胞內信號傳導域(例如，共刺激域)。CAR之例示性組分之實例描述於 表 3中。在所提供之態樣中，CAR中之各組分之序列可包括 表 3中所列舉之任何組合。
表3：CAR組分及例示性序列
組分 序列
細胞外結合域
抗CD19 scFv (FMC63) SEQ ID NO:101 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
抗CD19 scFv (FMC63) SEQ ID NO:111 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
間隔子 ( 例如，鉸鏈 )   
IgG4鉸鏈 SEQ ID NO:91 ESKYGPPCPPCP
CD8鉸鏈 SEQ ID NO:180 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPE
CD28 SEQ ID NO:89 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP
跨膜   
CD8 SEQ ID NO:179 ACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC
CD28 SEQ ID NO:95 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
CD28 SEQ ID NO:96 MFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
共刺激域   
CD28 SEQ ID NO:98 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
4-1BB SEQ ID NO:97 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL
初級信號傳導域   
CD3ζ SEQ ID NO:99 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
CD3ζ SEQ ID NO:100 RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
在一些實施例中，抗原受體進一步包括標記物及/或表現CAR之細胞或其他抗原受體進一步包括替代性標記物，諸如細胞表面標記物，其可用於確認用於表現受體之細胞之轉導或工程改造。在一些態樣中，標記物包括CD34、NGFR或表皮生長因子受體之全部或一部分(例如，截短形式)，諸如此類細胞表面受體之截短版本(例如，tEGFR)。在一些實施例中，編碼標記物之核酸可操作地連接至編碼連接子序列(諸如可裂解連接子序列，例如T2A)之多核苷酸。舉例而言，標記物及視情況存在之連接子序列可為如公開之專利申請案第WO2014031687號中所揭示之任一者。舉例而言，標記物可為截短之EGFR (tEGFR)，其視情況連接至連接子序列，諸如T2A可裂解連接子序列。
在一些實施例中，標記物係非天然存在於T細胞上或非天然存在於T細胞之表面上的分子，例如細胞表面蛋白質，或其一部分。在一些實施例中，該分子係非自身分子，例如非自身蛋白質，亦即，在細胞授受性轉移至宿主中時不能被該宿主的免疫系統識別為「自身」的分子。
在一些實施例中，標記物不具有治療功能及/或不產生除用作用於基因工程改造(例如，用於選擇成功地經工程改造之細胞)之標記物以外的作用。在其他實施例中，標記物可為治療分子或以其他方式發揮某種所需作用之分子，諸如細胞在活體內所遇到的配位體，諸如共刺激性或免疫檢查點分子，以在授受性轉移且遇到配位體時增強及/或減弱細胞反應。
在一些情況下，將CAR稱為第一、第二及/或第三代CAR。在一些態樣中，第一代CAR為僅在抗原結合時提供CD3鏈誘導之信號之CAR；在一些態樣中，第二代CAR為提供此類信號及共刺激性信號之CAR，諸如包括來自共刺激性受體(諸如CD28或CD137)之細胞內信號傳導域的CAR；在一些態樣中，第三代CAR為包括不同共刺激性受體之多個共刺激域的CAR。
舉例而言，在一些實施例中，CAR含有抗體(例如，抗體片段)、作為或含有CD28之跨膜部分或其功能變異體的跨膜域，以及含有CD28之信號傳導部分或其功能變異體及CD3ξ之信號傳導部分或其功能變異體的細胞內信號傳導域。在一些實施例中，CAR含有抗體(例如，抗體片段)、作為或含有CD28之跨膜部分或其功能變異體之跨膜域，以及含有4-IBB之信號傳導部分或其功能變異體及CD3ζ之信號傳導部分或其功能變異體之細胞內信號傳導域。在一些此類實施例中，受體進一步包括含有Ig分子(諸如人類Ig分子)之一部分(諸如Ig鉸鏈，例如IgG4鉸鏈)的間隔子，諸如僅含鉸鏈之間隔子。
在一些態樣中，間隔子僅含有IgG之鉸鏈區，諸如僅含有IgG4或IgG1之鉸鏈。在其他實施例中，間隔子為或含有Ig鉸鏈，例如IgG4衍生之鉸鏈，視情況與CH2及/或CH3域連接。在一些實施例中，間隔子為連接至CH2及CH3域之Ig鉸鏈，例如IgG4鉸鏈。在一些實施例中，間隔子為僅連接至CH3域之Ig鉸鏈，例如IgG4鉸鏈。在一些實施例中，間隔子為或包含富含甘胺酸-絲胺酸之序列或其他可撓性連接子，諸如已知的可撓性連接子。
舉例而言，在一些實施例中，CAR包括抗體(諸如抗體片段，包括scFv)、間隔子(諸如含有免疫球蛋白分子之一部分(諸如重鏈分子之鉸鏈區及/或一或多個恆定區)之間隔子，諸如含有Ig鉸鏈之間隔子)、含有CD28衍生之跨膜域之全部或一部分之跨膜域、CD28衍生之細胞內信號傳導域及CD3ζ信號傳導域。在一些實施例中，CAR包括抗體或片段(諸如scFv)、間隔子(諸如任何含有Ig鉸鏈之間隔子)、CD28衍生之跨膜域、4-1BB衍生之細胞內信號傳導域及CD3ζ衍生之信號傳導域。
由向個體投與之細胞表現的重組受體(諸如CAR)通常識別或特異性結合於所治療之疾病或病狀或其細胞中所表現、與該疾病或病狀或其細胞相關聯及/或對該疾病或病狀或其細胞具有特異性的分子。在特異性結合於分子，例如抗原後，受體通常將免疫刺激性信號，諸如ITAM轉導之信號遞送至細胞中，藉此促進靶向疾病或病狀之免疫反應。舉例而言，在一些實施例中，細胞表現特異性結合於由疾病或病狀之細胞或組織或與疾病或病狀相關聯之細胞或組織所表現之抗原的CAR。 B.  T 細胞受體 (TCR)
在一些實施例中，與所提供之方法、用途、製品或組合物結合使用之經工程改造之細胞(諸如T細胞)為表現T細胞受體(TCR)或其抗原結合部分之細胞，該T細胞受體或其抗原結合部分識別目標多肽之肽抗原決定基或T細胞抗原決定基，諸如腫瘤、病毒或自體免疫蛋白質之抗原。
在一些實施例中，「T細胞受體」或「TCR」為含有可變a鏈及b鏈(亦分別稱為TCRα及TCRβ)或可變g鏈及d鏈(亦分別稱為TCRα及TCRβ)或其抗原結合部分且能夠與結合於MHC分子之肽特異性結合之分子。在一些實施例中，TCR呈ab形式。通常，以ab及gd形式存在之TCR通常在結構上類似，但表現其之T細胞可具有不同結構位置或功能。TCR可發現於細胞表面上或呈可溶形式。通常，TCR可發現於通常負責識別結合於主要組織相容複合物(MHC)分子之抗原之T細胞(或T淋巴球)的表面上。
除非另有說明，否則術語「TCR」應該理解為涵蓋完全TCR以及其抗原結合部分或抗原結合片段。在一些實施例中，TCR為完整或全長TCR，包括呈ab形式或gd形式之TCR。在一些實施例中，TCR為小於全長TCR，但與MHC分子中所結合之特異性肽結合，諸如與MHC-肽複合物結合的抗原結合部分。在一些情況下，TCR之抗原結合部分或片段可僅含有全長或完整TCR之結構域之一部分，但仍能夠結合完全TCR所結合之肽抗原決定基，諸如MHC-肽複合物。在一些情況下，抗原結合部分含有TCR之可變域，諸如TCR之可變a鏈及可變b鏈，其足以形成用於與特異性MHC-肽複合物之結合之結合位點。通常，TCR之可變鏈含有涉及肽、MHC及/或MHC-肽複合物之識別之互補決定區。 C. 多重靶向
在一些實施例中，與所提供之方法、用途、製品及組合物結合使用之細胞包括使用多重靶向策略之細胞，該等策略諸如細胞上兩種或更多種經基因工程改造之受體之表現，該等受體各自識別相同或不同抗原且通常各自包含不同細胞內信號傳導組分。此類多重靶向策略描述於例如WO 2014055668 (描述活化及共刺激性CAR之組合，例如靶向個別地存在於非目標，例如正常細胞上，但僅共同存在於所治療之疾病或病狀之細胞上的兩種不同抗原)及Fedorov等人, Sci. Transl. Medicine, 5(215)(2013)(描述表現活化及抑制性CAR之細胞，諸如活化CAR結合於在正常或非病變細胞及所治療之疾病或病狀之細胞上表現之一種抗原，且抑制性CAR結合於僅在正常細胞或不需要治療之細胞上表現之另一種抗原的細胞)中。
舉例而言，在一些實施例中，細胞包括表現第一經基因工程改造之抗原受體(例如，CAR)之受體，其通常在特異性結合於由第一受體識別之抗原(例如，第一抗原)時能夠誘導針對細胞之活化或刺激性信號。在一些實施例中，細胞進一步包括第二經基因工程改造之抗原受體(例如，CAR)，例如嵌合共刺激性受體，其通常在特異性結合於由第二受體識別之第二抗原時能夠誘導針對免疫細胞之共刺激性信號。在一些實施例中，第一抗原與第二抗原相同。在一些實施例中，第一抗原與第二抗原不同。
在一些實施例中，第一及/或第二經基因工程改造之抗原受體(例如，CAR)能夠誘導針對細胞之活化信號。在一些實施例中，受體包括含有ITAM或ITAM樣模體之細胞內信號傳導組分。在一些實施例中，由第一受體誘導之活化涉及引起免疫反應之起始的細胞中之信號轉導或蛋白質表現變化，諸如ITAM磷酸化及/或ITAM介導之信號轉導級聯之起始、結合受體(例如，CD4或CD8等)附近的免疫突觸及/或分子叢集之形成、一或多種轉錄因子(諸如NF-kB及/或AP-1)之活化及/或因子(諸如細胞介素)之基因表現、增殖及/或存活之誘導。
在一些實施例中，第一及/或第二受體包括諸如CD28、CD137 (4-1BB)、OX40及/或ICOS之共刺激性受體之細胞內信號傳導域或區域。在一些實施例中，第一及第二受體包括不同的共刺激性受體之細胞內信號傳導域。在一個實施例中，第一受體含有CD28共刺激性信號傳導區且第二受體含有4-1BB共刺激性信號傳導區，或反之亦然。
在一些實施例中，第一及/或第二受體包括含有ITAM或ITAM樣模體之細胞內信號傳導域以及共刺激性受體之細胞內信號傳導域。
在一些實施例中，第一受體包括含有ITAM或ITAM樣模體之細胞內信號傳導域且第二受體含有共刺激性受體之細胞內信號傳導域。與在相同細胞中誘導之活化信號組合之共刺激性信號為引起免疫反應，諸如穩定且持續的免疫反應，諸如增加之基因表現、分泌細胞介素及其他因子以及T細胞介導之效應功能(諸如細胞殺傷)之信號。
在一些實施例中，本文中所描述之CAR包含一個或至少一個選自以下中之一或多者之信號傳導域：B7-1/CD80；B7-2/CD86；B7-H1/PD-L1；B7-H2；B7-H3；B7-H4；B7-H6；B7-H7；BTLA/CD272；CD28；CTLA-4；Gi24/VISTA/B7-H5；ICOS/CD278；PD-1；PD-L2/B7-DC；PDCD6)；4-1BB/TNFSF9/CD137；4-1BB配位體/TNFSF9；BAFF/BLyS/TNFSF13B；BAFF R/TNFRSF13C；CD27/TNFRSF7；CD27配位體/TNFSF7；CD30/TNFRSF8；CD30配位體/TNFSF8；CD40/TNFRSF5；CD40/TNFSF5；CD40配位體/TNFSF5；DR3/TNFRSF25；GITR/TNFRSF18；GITR配位體/TNFSF18；HVEM/TNFRSF14；LIGHT/TNFSF14；淋巴毒素-α/TNF-β；OX40/TNFRSF4；OX40配位體/TNFSF4；RELT/TNFRSF19L；TACI/TNFRSF13B；TL1A/TNFSF15；TNF-α；TNF RII/TNFRSF1B)；2B4/CD244/SLAMF4；BLAME/SLAMF8；CD2；CD2F-10/SLAMF9；CD48/SLAMF2；CD58/LFA-3；CD84/SLAMF5；CD229/SLAMF3；CRACC/SLAMF7；NTB-A/SLAMF6；SLAM/CD150)；CD2；CD7；CD53；CD82/Kai-1；CD90/Thy1；CD96；CD160；CD200；CD300a/LMIR1；I類HLA；HLA-DR；Ikaros；整合素α4/CD49d；整合素α4β1；整合素α4β7/LPAM-1；LAG-3；TCL1A；TCL1B；CRTAM；DAP12；C型凝集素(Dectin)-1/CLEC7A；DPPIV/CD26；EphB6；TIM-1/KIM-1/HAVCR；TIM-4；TSLP；TSLP R；淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1)；NKG2C、CD3ζ域、基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)、CD27、CD28、4-1BB、CD134/OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、與CD83特異性結合之配位體，或其功能片段。
在一些實施例中，至少一個信號傳導域包含CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體。在其他實施例中，至少一個信號傳導域包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；及(ii) CD28域或4-1BB域，或其功能變異體。在其他實施例中，至少一個信號傳導域包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；(ii) CD28域或其功能變異體；及(iii) 4-1BB域或CD134域，或其功能變異體。在一些實施例中，至少一個信號傳導域包含(i)CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；(ii) CD28域或其功能變異體；(iii) 4-1BB域或CD134域，或其功能變異體；及(iv)細胞介素或共刺激性配位體轉基因。
在一些實施例中，至少兩個信號傳導域包含CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體。在其他實施例中，至少兩個信號傳導域包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；及(ii) CD28域或4-1BB域，或其功能變異體。在其他實施例中，至少一個信號傳導域包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；(ii) CD28域或其功能變異體；及(iii) 4-1BB域或CD134域，或其功能變異體。在一些實施例中，至少兩個信號傳導域包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；(ii) CD28域或其功能變異體；(iii) 4-1BB域或CD134域，或其功能變異體；及(iv)細胞介素或共刺激性配位體轉基因。
在一些實施例中，至少三個信號傳導域包含CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體。在其他實施例中，至少三個信號傳導域包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；及(ii) CD28域或4-1BB域，或其功能變異體。在其他實施例中，至少三個信號傳導域包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；(ii) CD28域或其功能變異體；及(iii) 4-1BB域或CD134域，或其功能變異體。在一些實施例中，至少三個信號傳導域包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；(ii) CD28域或其功能變異體；(iii) 4-1BB域或CD134域，或其功能變異體；及(iv)細胞介素或共刺激性配位體轉基因。
在一些實施例中，CAR包含CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體。在一些實施例中，CAR包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；及(ii) CD28域或4-1BB域，或其功能變異體。
在一些實施例中，CAR包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；(ii) CD28域或其功能變異體；及(iii) 4-1BB域或CD134域，或其功能變異體。
在一些實施例中，CAR包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；(ii) CD28域或4-1BB域，或其功能變異體，及/或(iii) 4-1BB域或CD134域，或其功能變異體。
在一些實施例中，CAR包含(i) CD3ζ域或基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，或其功能變異體；(ii) CD28域或其功能變異體；(iii) 4-1BB域或CD134域，或其功能變異體；及(iv)細胞介素或共刺激性配位體轉基因。
在CAR之成功信號傳導後誘導細胞介素基因之表現之域
在一些實施例中，第一、第二、第三或第四代CAR進一步包含在CAR之成功信號傳導後誘導細胞介素基因之表現之域。在一些實施例中，細胞介素基因對於包含CAR之目標細胞為內源性或外源性的，該CAR包含在CAR之成功信號傳導後誘導細胞介素基因之表現之域。在一些實施例中，細胞介素基因編碼促炎性細胞介素。在一些實施例中，細胞介素基因編碼IL-1、IL-2、IL-9、IL-12、IL-18、TNF或IFN-γ，或其功能片段。在一些實施例中，在CAR之成功信號傳導後誘導細胞介素基因之表現之域為或包含轉錄因子或其功能域或片段。在一些實施例中，在CAR之成功信號傳導後誘導細胞介素基因之表現之域為或包含轉錄因子或其功能域或片段。在一些實施例中，轉錄因子或其功能域或片段為或包含活化T細胞核因子(NFAT)、NF-kB或其功能域或片段。參見例如Zhang. C.等人, Engineering CAR-T cells. Biomarker Research. 5:22 (2017)；WO 2016126608；Sha, H.等人, Chimaeric antigen receptor T-cell therapy for tumour immunotherapy.  Bioscience Reports, 2017年1月27日, 37 (1)。
在一些實施例中，CAR進一步包含一或多個間隔子，例如其中間隔子為抗原結合域與跨膜域之間的第一間隔子。在一些實施例中，第一間隔子包括免疫球蛋白恆定區或其變異體或經修飾之版本之至少一部分。在一些實施例中，間隔子為跨膜域與信號傳導域之間的第二間隔子。在一些實施例中，第二間隔子為寡肽，例如其中寡肽包含甘胺酸及絲胺酸殘基，諸如(但不限於)甘胺酸-絲胺酸二聯體。在一些實施例中，CAR包含兩個或更多個間隔子，例如抗原結合域與跨膜域之間的間隔子及跨膜域與信號傳導域之間的間隔子。
在一些實施例中，本文中所描述之細胞中之任一者包含編碼CAR或第一代CAR之核酸。在一些實施例中，第一代CAR包含抗原結合域、跨膜域及信號傳導域。在一些實施例中，信號傳導域在T細胞活化期間介導下游信號傳導。
在一些實施例中，本文中所描述之細胞中之任一者包含編碼CAR或第二代CAR之核酸。在一些實施例中，第二代CAR包含抗原結合域、跨膜域及兩個信號傳導域。在一些實施例中，信號傳導域在T細胞活化期間介導下游信號傳導。在一些實施例中，信號傳導域為共刺激域。在一些實施例中，共刺激域在T細胞活化期間增強細胞介素產生、CAR-T細胞增殖及/或CAR-T細胞持久性。
在一些實施例中，本文中所描述之細胞中之任一者包含編碼CAR或第三代CAR之核酸。在一些實施例中，第三代CAR包含抗原結合域、跨膜域及至少三個信號傳導域。在一些實施例中，信號傳導域在T細胞活化期間介導下游信號傳導。在一些實施例中，信號傳導域為共刺激域。在一些實施例中，共刺激域在T細胞活化期間增強細胞介素產生、CAR-T細胞增殖及/或CAR-T細胞持久性。在一些實施例中，第三代CAR包含至少兩個共刺激域。在一些實施例中，該至少兩個共刺激域係不相同的。
在一些實施例中，本文中所描述之細胞中之任一者包含編碼CAR或第四代CAR之核酸。在一些實施例中，第四代CAR包含抗原結合域、跨膜域及至少兩個、三個或四個信號傳導域。在一些實施例中，信號傳導域在T細胞活化期間介導下游信號傳導。在一些實施例中，信號傳導域為共刺激域。在一些實施例中，共刺激域在T細胞活化期間增強細胞介素產生、CAR-T細胞增殖及/或CAR-T細胞持久性。
在一些實施例中，單獨接合第一受體或單獨接合第二受體皆不能誘導穩定的免疫反應。在一些態樣中，若僅接合一種受體，則細胞變得對抗原耐受或無反應，或被抑制，及/或不會經誘導以增殖或分泌因子或發揮效應功能。然而，在一些此類實施例中，當接合複數種受體時，諸如在遇到表現第一及第二抗原之細胞時，實現所需反應，諸如完全免疫活化或刺激，例如由分泌一或多種細胞介素、增殖、持久性及/或發揮免疫效應功能(諸如目標細胞之細胞毒性殺傷)指示。
在一些實施例中，兩種受體分別誘導針對細胞之活化及抑制信號，使得一種受體與其抗原之結合活化細胞或誘導反應，但第二種抑制性受體與其抗原之結合誘導抑制或減弱該反應之信號。實例為活化CAR及抑制性CAR或iCAR之組合。此類策略可例如在以下情況下使用：活化CAR與在疾病或病狀中表現且亦在正常細胞上表現之抗原結合，且抑制性受體與在正常細胞上表現但不在疾病或病狀細胞表現上之獨立抗原結合。
在一些實施例中，在以下情況下使用多重靶向策略：與特定疾病或病狀相關之抗原在非病變細胞上表現及/或在經工程改造之細胞本身上(短暫地(例如，在與基因工程改造相關之刺激後)或永久地)表現。在此類情況下，藉由要求兩個獨立且個別地具有特異性之抗原受體之接合，可改良特異性、選擇性及/或功效。
在一些實施例中，複數種抗原，例如第一及第二抗原表現於目標細胞、組織或疾病或病狀上，諸如癌細胞上。在一些態樣中，細胞、組織、疾病或病狀為多發性骨髓瘤或多發性骨髓瘤細胞。在一些實施例中，複數種抗原中之一或多者通常亦表現於無需作為細胞療法之目標之細胞(諸如正常或非病變細胞或組織，及/或經工程改造之細胞本身)上。在此類實施例中，藉由要求多個受體之接合實現細胞反應來達成特異性及/或功效。 D. 嵌合自體抗體受體 (CAAR)
在一些實施例中，重組受體為嵌合自體抗體受體(CAAR)。在一些實施例中，CAAR結合(例如，特異性結合)或識別自體抗體。在一些實施例中，可使用表現CAAR之細胞，諸如經工程改造以表現CAAR之T細胞以結合於及殺傷表現自體抗體之細胞，但不結合於及殺傷表現正常抗體之細胞。在一些實施例中，表現CAAR之細胞可用於治療自體免疫疾病，諸如與自體抗原之表現相關之自體免疫疾病。在一些實施例中，表現CAAR之細胞可靶向最終產生自體抗體且在細胞表面上呈現自體抗體之B細胞，將此等B細胞標記為治療性介入之疾病特異性目標。在一些實施例中，藉由使用抗原特異性嵌合自體抗體受體靶向致病B細胞，表現CAAR之細胞可用於有效靶向及殺傷自體免疫疾病中之病原性B細胞。在一些實施例中，重組受體為CAAR，諸如美國專利申請公開案第US 2017/0051035號中所描述之任何CAAR。
在一些實施例中，CAAR包含自體抗體結合域、跨膜域及一或多個細胞內信號傳導區或域(亦可互換地稱為細胞質信號傳導域或區)。在一些實施例中，細胞內信號傳導區包含細胞內信號傳導域。在一些實施例中，細胞內信號傳導域為或包含初級信號傳導域、能夠刺激及/或誘導T細胞中之初級活化信號之信號傳導域)、T細胞受體(TCR)組分之信號傳導域(例如，CD3-ζ鏈之細胞內信號傳導域或區或其功能變異體或信號傳導部分)及/或包含基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)之信號傳導域。
在一些實施例中，自體抗體結合域包含自體抗原或其片段。自體抗原之選擇可取決於目標自體抗體之類型。舉例而言，自體抗原可因其識別與特定疾病病況(例如，自體免疫疾病，諸如自體抗體介導之自體免疫疾病)相關之目標細胞(諸如B細胞)上之自體抗體而被選擇。在一些實施例中，自體免疫疾病包括尋常天疱瘡(PV)。例示性自體抗原包括橋粒醣蛋白1 (Dsgl)及Dsg3。
在一些實施例中，經編碼之核酸可操作地連接至「陽性目標細胞特異性調節元件」(或陽性TCSRE)。在一些實施例中，陽性TCSRE為功能性核酸序列。在一些實施例中，陽性TCSRE包含啟動子或強化子。在一些實施例中，TCSRE為增加目標細胞中之外源性試劑之含量之核酸序列。在一些實施例中，陽性目標細胞特異性調節元件包含T細胞特異性啟動子、T細胞特異性強化子、T細胞特異性剪接位點、延長RNA或蛋白質之半衰期之T細胞特異性位點、T細胞特異性mRNA核輸出促進位點、T細胞特異性轉譯增強位點或T細胞特異性轉譯後修飾位點。在一些實施例中，T細胞特異性啟動子為以全文引用之方式併入本文中的Immgen consortium中所描述之啟動子，例如，T細胞特異性啟動子為IL2RA (CD25)、LRRC32、FOXP3或IKZF2啟動子。在一些實施例中，T細胞特異性啟動子或強化子為Schmidl等人, Blood. 2014年4月24日;123(17):e68-78.中所描述之啟動子或強化子，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，T細胞特異性啟動子為前述中之任一者之轉錄活性片段。在一些實施例中，T細胞特異性啟動子為與前述中之任一者具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之變異體。
在一些實施例中，經編碼之核酸可操作地連接至「陰性目標細胞特異性調節元件」(或陰性TCSRE)。在一些實施例中，陰性TCSRE為功能性核酸序列。在一些實施例中，陰性TCSRE為引起非目標細胞中的病毒載體之抑制降級之miRNA識別位點。在一些實施例中，外源性試劑可操作地連接至「非目標細胞特異性調節元件」(或NTCSRE)。在一些實施例中，NTCSRE包含核酸序列，該核酸序列引起與目標細胞相比，非目標細胞中之外源性試劑之含量降低。在一些實施例中，NTCSRE包含非目標細胞特異性miRNA識別序列、非目標細胞特異性蛋白酶識別位點、非目標細胞特異性泛蛋白連接酶位點、非目標細胞特異性轉錄抑制位點或非目標細胞特異性表觀遺傳抑制位點。在一些實施例中，NTCSRE包含組織特異性miRNA識別序列、組織特異性蛋白酶識別位點、組織特異性泛蛋白連接酶位點、組織特異性轉錄抑制位點或組織特異性表觀遺傳抑制位點。在一些實施例中，NTCSRE包含非目標細胞特異性miRNA識別序列、非目標細胞特異性蛋白酶識別位點、非目標細胞特異性泛蛋白連接酶位點、非目標細胞特異性轉錄抑制位點或非目標細胞特異性表觀遺傳抑制位點。在一些實施例中，NTCSRE包含非目標細胞特異性miRNA識別序列且miRNA識別序列能夠由miR31、miR363或miR29c中之一或多者結合。在一些實施例中，NTCSRE位於編碼外源性試劑之經轉錄之區域內或在該區域內編碼，視情況其中由經轉錄之區域產生之RNA包含UTR或編碼區內之miRNA識別序列。 E.  CAR 之其他說明
在某些實施例中，細胞可包含編碼CAR之外源性多核苷酸。CAR (亦稱為嵌合免疫受體、嵌合T細胞受體或人工T細胞受體)為受體蛋白質，其已經工程改造以使宿主細胞(例如，T細胞)具有新的靶向特異性蛋白質之能力。受體為嵌合性，因為其將抗原結合及T細胞活化功能組合於單一受體中。本發明之多順反子載體可用於在宿主細胞(例如，T細胞)中表現一或多種CAR，以用於針對各種目標抗原之基於細胞之療法。由一或多種表現卡匣表現之CAR可相同或不同。在此等實施例中，CAR可包含特異性結合目標抗原、跨膜域及細胞內信號傳導域之細胞外結合域(亦稱為「結合子」)。在某些實施例中，CAR可進一步包含一或多個額外元件，包括一或多個信號肽、一或多個細胞外鉸鏈域、及/或一或多個細胞內共刺激域。域可直接彼此相鄰，或可存在一或多個連接該等域之胺基酸。編碼CAR之核苷酸序列可來源於哺乳動物序列，例如小鼠序列、靈長類動物序列、人類序列或其組合。在編碼CAR之核苷酸序列為非人類序列之情況下，CAR之序列可經人類化。編碼CAR之核苷酸序列亦可經密碼子最佳化以用於哺乳動物細胞(例如，人類細胞)中之表現。在此等實施例中之任一者中，編碼CAR之核苷酸序列可與本文中所揭示之任何核苷酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)。序列變化可由密碼子最佳化、人類化、基於限制酶之選殖疤痕(restriction enzyme-based cloning scars)及/或其他連接功能域之胺基酸殘基等引起。
在某些實施例中，CAR可包含N端處之信號肽。信號肽之非限制性實例包括CD8α信號肽、IgK信號肽及粒細胞-巨噬細胞群落刺激因子受體子單元α (GMCSFR-α，亦稱為群落刺激因子2受體子單元α (CSF2RA))信號肽及其變異體，其胺基酸序列提供於以下 表 4中。 表 4. 信號肽之例示性序列
SEQ ID NO: 序列 說明
85 MALPVTALLLPLALLLHAARP CD8α信號肽
86 METDTLLLWVLLLWVPGSTG IgK信號肽
87 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP GMCSFR-α (CSF2RA)信號肽
在某些實施例中，CAR之細胞外結合域可包含一或多種對一種目標抗原或多種目標抗原具有特異性之抗體。抗體可為抗體片段，例如scFv，或單域抗體片段，例如VHH。在某些實施例中，scFv可包含由連接子連接之抗體之重鏈可變區(V H)及輕鏈可變區(V L)。V H及V L可以任何順序連接，亦即，V H-連接子-V L或V L-連接子-V H。連接子之非限制性實例包括惠特洛連接子(Whitlow linker)、(G 4S) n(n可為正整數，例如1、2、3、4、5、6等)連接子及其變異體。在某些實施例中，抗原可為僅在或優先在腫瘤細胞上表現之抗原，或作為自體免疫或發炎性疾病之特徵之抗原。例示性目標抗原包括(但不限於)CD5、CD19、CD20、CD22、CD23、CD30、CD70、κ、λ及B細胞成熟劑(BCMA)、G蛋白偶合受體家族C第5組成員D (GPRC5D)(與白血病相關)；CS1/SLAMF7、CD38、CD138、GPRC5D、TACI及BCMA (與骨髓瘤相關)；GD2、HER2、EGFR、EGFRvIII、B7H3、PSMA、PSCA、CAIX、CD171、CEA、CSPG4、EPHA2、FAP、FRα、IL-13Rα、間皮素、MUC1、MUC16及ROR1 (與實體腫瘤相關)。在此等實施例中之任一者中，CAR之細胞外結合域可經密碼子最佳化以用於宿主細胞中之表現，或具有變異型序列以增加細胞外結合域之功能。
在某些實施例中，CAR可包含鉸鏈域，亦稱為間隔子。在本發明中，術語「鉸鏈」及「間隔子」可互換使用。鉸鏈域之非限制性實例包括CD8α鉸鏈域、CD28鉸鏈域、IgG4鉸鏈域、IgG4鉸鏈-CH2-CH3域及其變異體，其胺基酸序列提供於以下 表 5中。 表 5. 鉸鏈域之例示性序列
SEQ ID NO: 序列 說明
88 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD CD8α鉸鏈域
89 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP CD28鉸鏈域
90 AAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP CD28鉸鏈域
91 ESKYGPPCPPCP IgG4鉸鏈域
92 ESKYGPPCPSCP IgG4鉸鏈域
93 ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK IgG4鉸鏈-CH2-CH3域
在某些實施例中，CAR之跨膜域可包含以下之跨膜區：T細胞受體之α、β或ζ鏈；CD28；CD3ε；CD45；CD4；CD5；CD8；CD9；CD16；CD22；CD33；CD37；CD64；CD80；CD86；CD134；CD137；CD154；或其功能變異體，包括此等序列中之每一者之人類版本。在其他實施例中，跨膜域可包含以下之跨膜區：CD8α、CD8β、4-1BB/CD137、CD28、CD34、CD4、FcεRIγ、CD16、OX40/CD134、CD3ζ、CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRζ、CD32、CD64、CD64、CD45、CD5、CD9、CD22、CD37、CD80、CD86、CD40、CD40L/CD154、VEGFR2、FAS及FGFR2B，或其功能變異體，包括此等序列中之每一者之人類版本。 表 6提供若干例示性跨膜域之胺基酸序列。 表 6. 跨膜域之例示性序列
SEQ ID NO: 序列 說明
94 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC CD8α跨膜域
95 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28跨膜域
96 MFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28跨膜域
在某些實施例中，CAR之細胞內信號傳導域及/或細胞內共刺激域可包含一或多個選自以下之信號傳導域：B7-1/CD80、B7-2/CD86、B7-H1/PD-L1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H6、B7-H7、BTLA/CD272、CD28、CTLA-4、Gi24/VISTA/B7-H5、ICOS/CD278、PD-1、PD-L2/B7-DC、PDCD6、4-1BB/TNFSF9/CD137、4-1BB配位體/TNFSF9、BAFF/BLyS/TNFSF13B、BAFF R/TNFRSF13C、CD27/TNFRSF7、CD27配位體/TNFSF7、CD30/TNFRSF8、CD30配位體/TNFSF8、CD40/TNFRSF5、CD40/TNFSF5、CD40配位體/TNFSF5、DR3/TNFRSF25、GITR/TNFRSF18、GITR配位體/TNFSF18、HVEM/TNFRSF14、LIGHT/TNFSF14、淋巴毒素-α/TNFβ、OX40/TNFRSF4、OX40配位體/TNFSF4、RELT/TNFRSF19L、TACI/TNFRSF13B、TL1A/TNFSF15、TNFα、TNF RII/TNFRSF1B、2B4/CD244/SLAMF4、BLAME/SLAMF8、CD2、CD2F-10/SLAMF9、CD48/SLAMF2、CD58/LFA-3、CD84/SLAMF5、CD229/SLAMF3、CRACC/SLAMF7、NTB-A/SLAMF6、SLAM/CD150、CD2、CD7、CD53、CD82/Kai-1、CD90/Thy1、CD96、CD160、CD200、CD300a/LMIR1、I類HLA、HLA-DR、Ikaros、整合素α4/CD49d、整合素α4β1、整合素α4β7/LPAM-1、LAG-3、TCL1A、TCL1B、CRTAM、DAP12、C型凝集素-1/CLEC7A、DPPIV/CD26、EphB6、TIM-1/KIM-1/HAVCR、TIM-4、TSLP、TSLP R、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1)、NKG2C、CD3ζ、基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)、CD27、CD28、4-1BB、CD134/OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、與CD83特異性結合之配位體，及其功能變異體，包括此等序列中之每一者之人類版本。在一些實施例中，細胞內信號傳導域及/或細胞內共刺激域包含一或多個選自CD3ζ域、ITAM、CD28域、4-1BB域之信號傳導域或其功能變異體。 表 7提供若干例示性細胞內共刺激域及/或信號傳導域之胺基酸序列。在某些實施例中，如在下文所描述之替沙津魯之情況下，SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域可具有胺基酸位置14處之突變，例如麩醯胺酸(Q)突變成離胺酸(K)(參見SEQ ID NO:100)。 表 7. 細胞內共刺激域及/或信號傳導域之例示性序列
SEQ ID NO: 序列 說明
97 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 4-1BB共刺激域
98 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28共刺激域
99 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3ζ信號傳導域
100 RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3ζ信號傳導域(其中位置14處之Q突變成K)
在其中多順反子載體編碼兩種或更多種CAR之某些實施例中，該兩種或更多種CAR可包含相同功能域，或一或多個不同功能域，如所描述。舉例而言，該兩種或更多種CAR可包含不同信號肽、細胞外結合域、鉸鏈域、跨膜域、共刺激域及/或細胞內信號傳導域，以最小化由序列類似性引起之重組風險。或者，該兩種或更多種CAR可包含相同的域。在使用相同的域及/或主鏈之情況下，視情況在核苷酸序列方面引入密碼子發散性以最小化重組風險。 CD19 CAR
在一些實施例中，CAR為CD19 CAR (「CD19-CAR」)且在此等實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD19 CAR之核苷酸序列。在一些實施例中，CD19 CAR可以串聯形式包含信號肽、特異性結合於CD19之細胞外結合域、鉸鏈域、跨膜域、細胞內共刺激域及/或細胞內信號傳導域。
在一些實施例中，CD19 CAR之信號肽包含CD8α信號肽。在一些實施例中，CD8α信號肽包含SEQ ID NO:85中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:85中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，信號肽包含IgK信號肽。在一些實施例中，IgK信號肽包含SEQ ID NO:86中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:86中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，信號肽包含GMCSFR-α或CSF2RA信號肽。在一些實施例中，GMCSFR-α或CSF2RA信號肽包含SEQ ID NO:87中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:87中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD19 CAR之細胞外結合域對CD19，例如人類CD19具有特異性。CD19 CAR之細胞外結合域可經密碼子最佳化以用於宿主細胞中之表現，或具有變異型序列以增加細胞外結合域之功能。在一些實施例中，細胞外結合域包含免疫球蛋白分子之免疫原性活性部分，例如scFv。
在一些實施例中，CD19 CAR之細胞外結合域包含來源於FMC63單株抗體(FMC63)之scFv，其包含由連接子連接之FMC63之重鏈可變區(V H)及輕鏈可變區(V L)。FMC63及衍生之scFv已描述於Nicholson等人, Mol. Immun. 34(16-17):1157-1165 (1997)及PCT申請公開案第WO2018/213337號中，其全部內容各自以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，整個FMC63衍生之scFv (亦稱為FMC63 scFv)及其不同部分之胺基酸序列提供於以下 表 8中。在一些實施例中，CD19特異性scFv包含SEQ ID NO:101、102或107中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:101、102或107中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，CD19特異性scFv可包含一或多個具有SEQ ID NO:103-105及108-110中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，CD19特異性scFv可包含輕鏈，該輕鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:103-105中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，CD19特異性scFv可包含重鏈，該重鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:108-110中所闡述之胺基酸序列之CDR。在此等實施例中之任一者中，CD19特異性scFv可包含一或多個CDR，該一或多個CDR包含一或多個胺基酸取代或包含與任何所鑑別之序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之序列。在一些實施例中，CD19 CAR之細胞外結合域包含一或多個如本文中所描述之CDR或由其組成。
在一些實施例中，連接scFv之V H及V L部分之連接子為具有SEQ ID NO:106中所闡述之胺基酸序列之惠特洛連接子。在一些實施例中，惠特洛連接子可由不同連接子置換，例如具有SEQ ID NO:181中所闡述之胺基酸序列之3xG 4S連接子，其產生不同的FMC63衍生之scFv，該scFv具有SEQ ID NO:111中所闡述之胺基酸序列。在某些此等實施例中，CD19特異性scFv包含SEQ ID NO:111中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:111中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。 表 8. 抗CD19 scFv及組分之例示性序列
SEQ ID NO: 胺基酸序列 說明
101 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS 抗CD19 FMC63 scFv完整序列，具有惠特洛連接子
102 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈可變區
103 QDISKY 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈CDR1
104 HTS 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈CDR2
105 QQGNTLPYT 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈CDR3
106 GSTSGSGKPGSGEGSTKG 惠特洛連接子
107 EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS 抗CD19 FMC63 scFv重鏈可變區
108 GVSLPDYG 抗CD19 FMC63 scFv重鏈CDR1
109 IWGSETT 抗CD19 FMC63 scFv重鏈CDR2
110 AKHYYYGGSYAMDY 抗CD19 FMC63 scFv重鏈CDR3
111 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS 抗CD19 FMC63 scFv完整序列，具有3xG 4S連接子
181 GGGGSGGGGSGGGGS 3xG 4S連接子
在一些實施例中，CD19 CAR之細胞外結合域係來源於對CD19具有特異性之抗體，包括例如SJ25C1 (Bejcek等人, Cancer Res. 55:2346-2351 (1995))、HD37 (Pezutto等人, J. Immunol. 138(9):2793-2799 (1987))、4G7 (Meeker等人, Hybridoma 3:305-320 (1984))、B43 (Bejcek (1995))、BLY3 (Bejcek (1995))、B4 (Freedman等人, 70:418-427 (1987))、B4 HB12b (Kansas及Tedder, J. Immunol. 147:4094-4102 (1991)；Yazawa等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:15178-15183 (2005)；Herbst等人, J. Pharmacol. Exp. Ther. 335:213-222 (2010))、BU12 (Callard等人, J. Immunology, 148(10): 2983-2987 (1992))及CLB-CD19 (De Rie Cell. Immunol. 118:368-381(1989))。在此等實施例中之任一者中，CD19 CAR之細胞外結合域可包含該等抗體中之任一者之V H、V L及/或一或多個CDR或由上述各者組成。
在一些實施例中，CD19 CAR之鉸鏈域包含CD8α鉸鏈域，例如人類CD8α鉸鏈域。在一些實施例中，CD8α鉸鏈域包含SEQ ID NO:88中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:88中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含CD28鉸鏈域，例如人類CD28鉸鏈域。在一些實施例中，CD28鉸鏈域包含SEQ ID NO:89中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:89中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含IgG4鉸鏈域，諸如人類IgG4鉸鏈域。在一些實施例中，IgG4鉸鏈域包含SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域，例如人類IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域。在一些實施例中，IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域包含SEQ ID NO:93中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:93中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD19 CAR之跨膜域包含CD8α跨膜域，例如人類CD8α跨膜域。在一些實施例中，CD8α跨膜域包含SEQ ID NO:94中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:94中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，跨膜域包含CD28跨膜域，例如人類CD28跨膜域。在一些實施例中，CD28跨膜域包含SEQ ID NO:95中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:95中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD19 CAR之細胞內共刺激域包含4-1BB共刺激域。4-1BB，亦稱為CD137，將強效共刺激信號傳輸至T細胞，促進分化及增強T淋巴球之長期存活。在一些實施例中，4-1BB共刺激域為人類共刺激域。在一些實施例中，4-1BB共刺激域包含SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，細胞內共刺激域包含CD28共刺激域。CD28為T細胞上之另一種共刺激性分子。在一些實施例中，CD28共刺激域為人類共刺激域。在一些實施例中，CD28共刺激域包含SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，如所描述，CD19 CAR之細胞內共刺激域包含4-1BB共刺激域及CD28共刺激域。
在一些實施例中，CD19 CAR之細胞內信號傳導域包含CD3ζ (zeta)信號傳導域。CD3ζ與T細胞受體(TCR)結合以產生信號且含有基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)。CD3ζ信號傳導域係指來自ζ鏈之細胞質域之胺基酸殘基，其足以在功能上傳輸T細胞活化所必需之初始信號。在一些實施例中，CD3ζ信號傳導域為人類信號傳導域。在一些實施例中，CD3ζ信號傳導域包含SEQ ID NO:99中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:99中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD19 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:101或SEQ ID NO:111中所闡述之序列之CD19特異性scFv、SEQ ID NO:88之CD8α鉸鏈域、SEQ ID NO:94之CD8α跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD19 CAR。在此等實施例中之任一者中，如所描述，CD19 CAR可額外包含信號肽(例如，CD8α信號肽)。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD19 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:101或SEQ ID NO:111中所闡述之序列之CD19特異性scFv、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92之IgG4鉸鏈域、SEQ ID NO:95之CD28跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD19 CAR。在此等實施例中之任一者中，如所描述，CD19 CAR可額外包含信號肽(例如，CD8α信號肽)。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD19 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:101或SEQ ID NO:111中所闡述之序列之CD19特異性scFv、SEQ ID NO:89之CD28鉸鏈域、SEQ ID NO:95之CD28跨膜域、SEQ ID NO:98之CD28共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD19 CAR。在此等實施例中之任一者中，如所描述，CD19 CAR可額外包含信號肽(例如，CD8α信號肽)。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有如SEQ ID NO:112中所闡述或與SEQ ID NO:112中所闡述之核苷酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之編碼CD19 CAR之核苷酸序列(參見 表 9)。經編碼之CD19 CAR具有SEQ ID NO:113中所闡述或與SEQ ID NO:113中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之相應胺基酸序列，以及以下組分：CD8α信號肽、FMC63 scFv (V L-惠特洛連接子-V H)、CD8α鉸鏈域、CD8α跨膜域、4-1BB共刺激域及CD3ζ信號傳導域。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼市售CD19 CAR之實施例之核苷酸序列。由T細胞表現及/或編碼之市售CD19 CAR之實施例之非限制性實例包括替沙津魯、力索嗎魯、阿基侖賽及布萊奧妥。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼替沙津魯之核苷酸序列或其一部分。替沙津魯包含具有以下組分之CD19 CAR：CD8α信號肽、FMC63 scFv (V L-3xG 4S連接子-V H)、CD8α鉸鏈域、CD8α跨膜域、4-1BB共刺激域及CD3ζ信號傳導域。替沙津魯中之CD19 CAR之核苷酸及胺基酸序列提供於 表 9中，其中序列之註釋提供於 表 10中。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼力索嗎魯之核苷酸序列或其一部分。力索嗎魯包含具有以下組分之CD19 CAR：GMCSFR-α或CSF2RA信號肽、FMC63 scFv (V L-惠特洛連接子-V H)、IgG4鉸鏈域、CD28跨膜域、4-1BB共刺激域及CD3ζ信號傳導域。力索嗎魯中之CD19 CAR之核苷酸及胺基酸序列提供於 表 9中，其中序列之註釋提供於 表 11中。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼阿基侖賽之核苷酸序列或其一部分。阿基侖賽包含具有以下組分之CD19 CAR：GMCSFR-α或CSF2RA信號肽、FMC63 scFv (V L-惠特洛連接子-V H)、CD28鉸鏈域、CD28跨膜域、CD28共刺激域及CD3ζ信號傳導域。阿基侖賽中之CD19 CAR之核苷酸及胺基酸序列提供於 表 9中，其中序列之註釋提供於表 12中。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼布萊奧妥之核苷酸序列或其一部分。布萊奧妥包含具有以下組分之CD19 CAR：GMCSFR-α信號肽、FMC63 scFv、CD28鉸鏈域、CD28跨膜域、CD28共刺激域及CD3ζ信號傳導域。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有如SEQ ID NO:114、116或118中所闡述或與SEQ ID NO:114、116或118中所闡述之核苷酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之編碼CD19 CAR之核苷酸序列。經編碼之CD19 CAR分別具有SEQ ID NO:115、117或119中所闡述或分別與SEQ ID NO:115、117或119中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之相應胺基酸序列。 表 9. CD19 CAR之例示性序列
SEQ ID NO: 序列 說明
112 atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggacatccagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattagtaaatatttaaattggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatctaccatacatcaagattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagattattctctcaccattagcaacctggagcaagaagatattgccacttacttttgccaacagggtaatacgcttccgtacacgttcggaggggggaccaagctggagatcacaggctccacctctggatccggcaagcccggatctggcgagggatccaccaagggcgaggtgaaactgcaggagtcaggacctggcctggtggcgccctcacagagcctgtccgtcacatgcactgtctcaggggtctcattacccgactatggtgtaagctggattcgccagcctccacgaaagggtctggagtggctgggagtaatatggggtagtgaaaccacatactataattcagctctcaaatccagactgaccatcatcaaggacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctgcaaactgatgacacagccatttactactgtgccaaacattattactacggtggtagctatgctatggactactggggccaaggaacctcagtcaccgtctcctcaaccacgacgccagcgccgcgaccaccaacaccggcgcccaccatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcggggggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc 例示性CD19 CAR核苷酸序列
113 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 例示性CD19 CAR胺基酸序列
114 atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggacatccagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattagtaaatatttaaattggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatctaccatacatcaagattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagattattctctcaccattagcaacctggagcaagaagatattgccacttacttttgccaacagggtaatacgcttccgtacacgttcggaggggggaccaagctggagatcacaggtggcggtggctcgggcggtggtgggtcgggtggcggcggatctgaggtgaaactgcaggagtcaggacctggcctggtggcgccctcacagagcctgtccgtcacatgcactgtctcaggggtctcattacccgactatggtgtaagctggattcgccagcctccacgaaagggtctggagtggctgggagtaatatggggtagtgaaaccacatactataattcagctctcaaatccagactgaccatcatcaaggacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctgcaaactgatgacacagccatttactactgtgccaaacattattactacggtggtagctatgctatggactactggggccaaggaacctcagtcaccgtctcctcaaccacgacgccagcgccgcgaccaccaacaccggcgcccaccatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcggggggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc 替沙津魯CD19 CAR核苷酸序列
115 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 替沙津魯CD19 CAR胺基酸序列
116 atgctgctgctggtgaccagcctgctgctgtgcgagctgccccaccccgcctttctgctgatccccgacatccagatgacccagaccacctccagcctgagcgccagcctgggcgaccgggtgaccatcagctgccgggccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaagcccgacggcaccgtcaagctgctgatctaccacaccagccggctgcacagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgccacctacttttgccagcagggcaacacactgccctacacctttggcggcggaacaaagctggaaatcaccggcagcacctccggcagcggcaagcctggcagcggcgagggcagcaccaagggcgaggtgaagctgcaggaaagcggccctggcctggtggcccccagccagagcctgagcgtgacctgcaccgtgagcggcgtgagcctgcccgactacggcgtgagctggatccggcagccccccaggaagggcctggaatggctgggcgtgatctggggcagcgagaccacctactacaacagcgccctgaagagccggctgaccatcatcaaggacaacagcaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagcgaatctaagtacggaccgccctgccccccttgccctatgttctgggtgctggtggtggtcggaggcgtgctggcctgctacagcctgctggtcaccgtggccttcatcatcttttgggtgaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgcgggtgaagttcagcagaagcgccgacgcccctgcctaccagcagggccagaatcagctgtacaacgagctgaacctgggcagaagggaagagtacgacgtcctggataagcggagaggccgggaccctgagatgggcggcaagcctcggcggaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggcatgaagggcgagcggaggcggggcaagggccacgacggcctgtatcagggcctgtccaccgccaccaaggatacctacgacgccctgcacatgcaggccctgcccccaagg 力索嗎魯CD19 CAR核苷酸序列
117 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSESKYGPPCPPCPMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 力索嗎魯CD19 CAR胺基酸序列
118 atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccacacccagcattcctcctgatcccagacatccagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattagtaaatatttaaattggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatctaccatacatcaagattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagattattctctcaccattagcaacctggagcaagaagatattgccacttacttttgccaacagggtaatacgcttccgtacacgttcggaggggggactaagttggaaataacaggctccacctctggatccggcaagcccggatctggcgagggatccaccaagggcgaggtgaaactgcaggagtcaggacctggcctggtggcgccctcacagagcctgtccgtcacatgcactgtctcaggggtctcattacccgactatggtgtaagctggattcgccagcctccacgaaagggtctggagtggctgggagtaatatggggtagtgaaaccacatactataattcagctctcaaatccagactgaccatcatcaaggacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctgcaaactgatgacacagccatttactactgtgccaaacattattactacggtggtagctatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttgggggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc 阿基侖賽CD19 CAR核苷酸序列
119 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 阿基侖賽CD19 CAR胺基酸序列
表 10. 替沙津魯CD19 CAR序列之註釋
特徵 核苷酸序列位置 胺基酸序列位置
CD8α信號肽 1-63 1-21
FMC63 scFv (V L-3xG 4S連接子-V H) 64-789 22-263
CD8α鉸鏈域 790-924 264-308
CD8α跨膜域 925-996 309-332
4-1BB共刺激域 997-1122 333-374
CD3ζ信號傳導域 1123-1458 375-486
表 11. 力索嗎魯CD19 CAR序列之註釋
特徵 核苷酸序列位置 胺基酸序列位置
GMCSFR-α信號肽 1-66 1-22
FMC63 scFv (V L-惠特洛連接子-V H) 67-801 23-267
IgG4鉸鏈域 802-837 268-279
CD28跨膜域 838-921 280-307
4-1BB共刺激域 922-1047 308-349
CD3ζ信號傳導域 1048-1383 350-461
表 12. 阿基侖賽CD19 CAR序列之註釋
特徵 核苷酸序列位置 胺基酸序列位置
CSF2RA信號肽 1-66 1-22
FMC63 scFv (V L-惠特洛連接子-V H) 67-801 23-267
CD28鉸鏈域 802-927 268-309
CD28跨膜域 928-1008 310-336
CD28共刺激域 1009-1131 337-377
CD3ζ信號傳導域 1132-1467 378-489
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有如SEQ ID NO:114、116或118中所闡述或與SEQ ID NO:114、116或118中所闡述之核苷酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之編碼CD19 CAR之核苷酸序列。經編碼之CD19 CAR分別具有SEQ ID NO:115、117或119中所闡述或分別與SEQ ID NO:115、117或119中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之相應胺基酸序列。 CD20 CAR
在一些實施例中，CAR為CD20 CAR (「CD20-CAR」)且在此等實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD20 CAR之核苷酸序列。CD20為在B細胞表面(可早在B階段之前且含量逐漸增加直至B細胞成熟)以及大部分B細胞贅瘤細胞上發現之抗原。有時亦在霍奇金氏病(Hodgkins disease)、骨髓瘤及胸腺瘤之情況下發現CD20陽性細胞。在一些實施例中，CD20 CAR可以串聯形式包含信號肽、與CD20特異性結合之細胞外結合域、鉸鏈域、跨膜域、細胞內共刺激域及/或細胞內信號傳導域。
在一些實施例中，CD20 CAR之信號肽包含CD8α信號肽。在一些實施例中，CD8α信號肽包含SEQ ID NO:85中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:85中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，信號肽包含IgK信號肽。在一些實施例中，IgK信號肽包含SEQ ID NO:86中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:86中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，信號肽包含GMCSFR-α或CSF2RA信號肽。在一些實施例中，GMCSFR-α或CSF2RA信號肽包含SEQ ID NO:87中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:87中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD20 CAR之細胞外結合域對CD20，例如人類CD20具有特異性。CD20 CAR之細胞外結合域可經密碼子最佳化以用於宿主細胞中之表現，或具有變異型序列以增加細胞外結合域之功能。在一些實施例中，細胞外結合域包含免疫球蛋白分子之免疫原性活性部分，例如scFv。
在一些實施例中，CD20 CAR之細胞外結合域係來源於對CD20具有特異性之抗體，包括例如Leu16、IF5、1.5.3、利妥昔單抗(rituximab)、奧比珠單抗(obinutuzumab)、異貝莫單抗(ibritumomab)、奧伐木單抗(ofatumumab)、托斯圖單抗(tositumumab)、奧屈奈單抗(odronextamab)、維托珠單抗(veltuzumab)、烏妥昔單抗(ublituximab)及奧克珠單抗(ocrelizumab)。在此等實施例中之任一者中，CD20 CAR之細胞外結合域可包含該等抗體中之任一者之V H、V L及/或一或多個CDR或由上述各者組成。
在一些實施例中，CD20 CAR之細胞外結合域包含來源於Leu16單株抗體之scFv，其包含由連接子連接之Leu16之重鏈可變區(V H)及輕鏈可變區(V L)。參見Wu等人, Protein Engineering. 14(12):1025-1033 (2001)。在一些實施例中，連接子為3xG 4S連接子。在其他實施例中，連接子為如本文中所描述之惠特洛連接子。在一些實施例中，整個Leu16衍生之scFv (亦稱為Leu16 scFv)之不同部分之胺基酸序列及其不同部分提供於以下 表 13中。在一些實施例中，CD20特異性scFv包含SEQ ID NO:120、121或125中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:120、121或125中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，CD20特異性scFv可包含一或多個具有SEQ ID NO:122-124、126、127及182中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，CD20特異性scFv可包含輕鏈，該輕鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:122-124中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，CD20特異性scFv可包含重鏈，該重鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:126、127及182中所闡述之胺基酸序列之CDR。在此等實施例中之任一者中，CD20特異性scFv可包含一或多個CDR，該一或多個CDR包含一或多個胺基酸取代或包含與任何所鑑別之序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之序列。在一些實施例中，CD20 CAR之細胞外結合域包含一或多個如本文中所描述之CDR或由其組成。 表 13. 抗CD20 scFv及組分之例示性序列
SEQ ID NO: 胺基酸序列 說明
120 DIVLTQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVNYMDWYQKKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGQGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSADYYCARSNYYGSSYWFFDVWGAGTTVTVSS 抗CD20 Leu16 scFv完整序列，具有惠特洛連接子
121 DIVLTQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVNYMDWYQKKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈可變區
122 RASSSVNYMD 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈CDR1
123 ATSNLAS 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈CDR2
124 QQWSFNPPT 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈CDR3
125 EVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGQGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSADYYCARSNYYGSSYWFFDVWGAGTTVTVSS 抗CD20 Leu16 scFv重鏈
126 SYNMH 抗CD20 Leu16 scFv重鏈CDR1
127 AIYPGNGDTSYNQKFKG 抗CD20 Leu16 scFv重鏈CDR2
182 SNYYGSSYWFFDV 抗CD20 Leu16 scFv重鏈CDR3
在一些實施例中，CD20 CAR之鉸鏈域包含CD8α鉸鏈域，例如人類CD8α鉸鏈域。在一些實施例中，CD8α鉸鏈域包含SEQ ID NO:88中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:88中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含CD28鉸鏈域，例如人類CD28鉸鏈域。在一些實施例中，CD28鉸鏈域包含SEQ ID NO:89中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:89中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含IgG4鉸鏈域，諸如人類IgG4鉸鏈域。在一些實施例中，IgG4鉸鏈域包含SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域，例如人類IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域。在一些實施例中，IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域包含SEQ ID NO:93中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:93中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD20 CAR之跨膜域包含CD8α跨膜域，例如人類CD8α跨膜域。在一些實施例中，CD8α跨膜域包含SEQ ID NO:94中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:94中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，跨膜域包含CD28跨膜域，例如人類CD28跨膜域。在一些實施例中，CD28跨膜域包含SEQ ID NO:95中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:95中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD20 CAR之細胞內共刺激域包含4-1BB共刺激域，例如人類4-1BB共刺激域。在一些實施例中，4-1BB共刺激域包含SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，細胞內共刺激域包含CD28共刺激域，例如人類CD28共刺激域。在一些實施例中，CD28共刺激域包含SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD20 CAR之細胞內信號傳導域包含CD3ζ (zeta)信號傳導域，例如人類CD3ζ信號傳導域。在一些實施例中，CD3ζ信號傳導域包含SEQ ID NO:99中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:99中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD20 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:120中所闡述之序列之CD20特異性scFv、SEQ ID NO:88之CD8α鉸鏈域、SEQ ID NO:94之CD8α跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD20 CAR。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD20 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:120中所闡述之序列之CD20特異性scFv、SEQ ID NO:89之CD28鉸鏈域、SEQ ID NO:94之CD8α跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD20 CAR。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD20 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:120中所闡述之序列之CD20特異性scFv、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92之IgG4鉸鏈域、SEQ ID NO:94之CD8α跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD20 CAR。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD20 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:120中所闡述之序列之CD20特異性scFv、SEQ ID NO:88之CD8α鉸鏈域、SEQ ID NO:95之CD28跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD20 CAR。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD20 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:120中所闡述之序列之CD20特異性scFv、SEQ ID NO:89之CD28鉸鏈域、SEQ ID NO:95之CD28跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD20 CAR。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD20 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:120中所闡述之序列之CD20特異性scFv、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92之IgG4鉸鏈域、SEQ ID NO:95之CD28跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD20 CAR。 CD22 CAR
在一些實施例中，CAR為CD22 CAR (「CD22-CAR」)且在此等實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD22 CAR之核苷酸序列。CD22，其為主要在成熟B細胞之表面上發現之跨膜蛋白質，充當B細胞受體(BCR)信號傳導之抑制性受體。CD22在60-70%的B細胞淋巴瘤及白血病(例如，B-慢性淋巴球性白血病、毛細胞白血病、急性淋巴球性白血病(ALL)及伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma))中表現且在B細胞發育之早期階段在細胞表面上或在幹細胞上並不存在。在一些實施例中，CD22 CAR可以串聯方式包含信號肽、與CD22特異性結合之細胞外結合域、鉸鏈域、跨膜域、細胞內共刺激域及/或細胞內信號傳導域。
在一些實施例中，CD22 CAR之信號肽包含CD8α信號肽。在一些實施例中，CD8α信號肽包含SEQ ID NO:85中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:85中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，信號肽包含IgK信號肽。在一些實施例中，IgK信號肽包含SEQ ID NO:86中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:86中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，信號肽包含GMCSFR-α或CSF2RA信號肽。在一些實施例中，GMCSFR-α或CSF2RA信號肽包含SEQ ID NO:87中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:87中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD22 CAR之細胞外結合域對CD22，例如人類CD22具有特異性。CD22 CAR之細胞外結合域可經密碼子最佳化以用於宿主細胞中之表現，或具有變異型序列以增加細胞外結合域之功能。在一些實施例中，細胞外結合域包含免疫球蛋白分子之免疫原性活性部分，例如scFv。
在一些實施例中，CD22 CAR之細胞外結合域係來源於對CD22具有特異性之抗體，包括例如SM03、伊諾妥珠單抗(inotuzumab)、依帕珠單抗(epratuzumab)、莫昔土莫單抗(moxetumomab)及匹納土珠單抗(pinatuzumab)。在此等實施例中之任一者中，CD22 CAR之細胞外結合域可包含該等抗體中之任一者之V H、V L及/或一或多個CDR或由上述各者組成。
在一些實施例中，CD22 CAR之細胞外結合域包含來源於m971單株抗體(m971)之scFv，其包含由連接子連接之m971之重鏈可變區(V H)及輕鏈可變區(V L)。在一些實施例中，連接子為3xG 4S連接子。在其他實施例中，可改為使用惠特洛連接子。在一些實施例中，整個m971衍生之scFv (亦稱為m971 scFv)及其不同部分之胺基酸序列提供於以下 表 14中。在一些實施例中，CD22特異性scFv包含SEQ ID NO:128、129或133中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:128、129或133中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，CD22特異性scFv可包含一或多個具有SEQ ID NO:130-132及134-136中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，CD22特異性scFv可包含重鏈，該重鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:130-132中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，CD22特異性scFv可包含輕鏈，該輕鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:134-136中所闡述之胺基酸序列之CDR。在此等實施例中之任一者中，CD22特異性scFv可包含一或多個CDR，該一或多個CDR包含一或多個胺基酸取代或包含與任何所鑑別之序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之序列。在一些實施例中，CD22 CAR之細胞外結合域包含一或多個如本文中所描述之CDR或由其組成。
在一些實施例中，CD22 CAR之細胞外結合域包含來源於m971-L7之scFv，m971-L7為m971之親和力成熟變異體，其與親本抗體m971相比具有顯著改良之CD22結合親和力(改良約2 nM至小於50 pM)。在一些實施例中，來源於m971-L7之scFv包含由3xG 4S連接子連接之m971-L7之V H及V L。在其他實施例中，可改為使用惠特洛連接子。在一些實施例中，整個m971-L7衍生之scFv (亦稱為m971-L7 scFv)及其不同部分之胺基酸序列提供於以下 表 14中。在一些實施例中，CD22特異性scFv包含SEQ ID NO:137、138或142中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:137、138或142中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，CD22特異性scFv可包含一或多個具有SEQ ID NO:139-141、143-145中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，CD22特異性scFv可包含重鏈，該重鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:139-141中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，CD22特異性scFv可包含輕鏈，該輕鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:143-145中所闡述之胺基酸序列之CDR。在此等實施例中之任一者中，CD22特異性scFv可包含一或多個CDR，該一或多個CDR包含一或多個胺基酸取代或包含與任何所鑑別之序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之序列。在一些實施例中，CD22 CAR之細胞外結合域包含一或多個如本文中所描述之CDR或由其組成。 表 14. 抗CD22 scFv及組分之例示性序列
SEQ ID NO: 胺基酸序列 說明
128 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCAREVTGDLEDAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIWSYLNWYQQRPGKAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGRGSGTDFTLTISSLQAEDFATYYCQQSYSIPQTFGQGTKLEIK 抗CD22 m971 scFv完整序列，具有3xG 4S連接子
129 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCAREVTGDLEDAFDIWGQGTMVTVSS 抗CD22 m971 scFv重鏈可變區
130 GDSVSSNSAA 抗CD22 m971 scFv重鏈CDR1
131 TYYRSKWYN 抗CD22 m971 scFv重鏈CDR2
132 AREVTGDLEDAFDI 抗CD22 m971 scFv重鏈CDR3
133 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIWSYLNWYQQRPGKAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGRGSGTDFTLTISSLQAEDFATYYCQQSYSIPQTFGQGTKLEIK 抗CD22 m971 scFv輕鏈
134 QTIWSY 抗CD22 m971 scFv輕鏈CDR1
135 AAS 抗CD22 m971 scFv輕鏈CDR2
136 QQSYSIPQT 抗CD22 m971 scFv輕鏈CDR3
137 QVQLQQSGPGMVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSVAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSTWYNDYAVSMKSRITINPDTNKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCAREVTGDLEDAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMIQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIWSYLNWYRQRPGEAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGRGSGTDFTLTISSLQAEDFATYYCQQSYSIPQTFGQGTKLEIK 抗CD22 m971-L7 scFv完整序列，具有3xG 4S連接子
138 QVQLQQSGPGMVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSVAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSTWYNDYAVSMKSRITINPDTNKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCAREVTGDLEDAFDIWGQGTMVTVSS 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈可變區
139 GDSVSSNSVA 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈CDR1
140 TYYRSTWYN 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈CDR2
141 AREVTGDLEDAFDI 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈CDR3
142 DIQMIQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIWSYLNWYRQRPGEAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGRGSGTDFTLTISSLQAEDFATYYCQQSYSIPQTFGQGTKLEIK 抗CD22 m971-L7 scFv輕鏈可變區
143 QTIWSY 抗CD22 m971-L7 scFv輕鏈CDR1
144 AAS 抗CD22 m971-L7 scFv輕鏈CDR2
145 QQSYSIPQT 抗CD22 m971-L7 scFv輕鏈CDR3
在一些實施例中，CD22 CAR之細胞外結合域包含免疫毒素HA22或BL22。免疫毒素BL22及HA22為治療劑，其包含對與細菌毒素融合之CD22具有特異性之scFv，且因此可結合於表現CD22之癌細胞之表面且殺傷癌細胞。BL22包含與假單胞菌外毒素A ( Pseudomonas exotoxinA)之38 kDa截短形式融合的抗CD22抗體(RFB4)之dsFv (Bang等人, Clin. Cancer Res., 11:1545-50 (2005))。HA22 (CAT8015，帕西妥莫單抗(moxetumomab pasudotox))為BL22之突變型、更高親和力版本(Ho等人, J. Biol. Chem., 280(1): 607-17 (2005))。對CD22具有特異性的HA22及BL22之抗原結合域之適合的序列揭示於例如美國專利案第7,541,034號；第7,355,012號；及第7,982,011號中，其以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，CD22 CAR之鉸鏈域包含CD8α鉸鏈域，例如人類CD8α鉸鏈域。在一些實施例中，CD8α鉸鏈域包含SEQ ID NO:88中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:88中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含CD28鉸鏈域，例如人類CD28鉸鏈域。在一些實施例中，CD28鉸鏈域包含SEQ ID NO:89中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:89中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含IgG4鉸鏈域，諸如人類IgG4鉸鏈域。在一些實施例中，IgG4鉸鏈域包含SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域，例如人類IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域。在一些實施例中，IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域包含SEQ ID NO:93中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:93中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD22 CAR之跨膜域包含CD8α跨膜域，例如人類CD8α跨膜域。在一些實施例中，CD8α跨膜域包含SEQ ID NO:94中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:94中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，跨膜域包含CD28跨膜域，例如人類CD28跨膜域。在一些實施例中，CD28跨膜域包含SEQ ID NO:95中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:95中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD22 CAR之細胞內共刺激域包含4-1BB共刺激域，例如人類4-1BB共刺激域。在一些實施例中，4-1BB共刺激域包含SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，細胞內共刺激域包含CD28共刺激域，例如人類CD28共刺激域。在一些實施例中，CD28共刺激域包含SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，CD22 CAR之細胞內信號傳導域包含CD3ζ (zeta)信號傳導域，例如人類CD3ζ信號傳導域。在一些實施例中，CD3ζ信號傳導域包含SEQ ID NO:99中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:99中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD22 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:128或SEQ ID NO:137中所闡述之序列之CD22特異性scFv、SEQ ID NO:88之CD8α鉸鏈域、SEQ ID NO:94之CD8α跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD22 CAR。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD22 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:128或SEQ ID NO:137中所闡述之序列之CD22特異性scFv、SEQ ID NO:89之CD28鉸鏈域、SEQ ID NO:94之CD8α跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD22 CAR。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD22 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:128或SEQ ID NO:137中所闡述之序列之CD22特異性scFv、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92之IgG4鉸鏈域、SEQ ID NO:94之CD8α跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD22 CAR。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD22 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:128或SEQ ID NO:137中所闡述之序列之CD22特異性scFv、SEQ ID NO:8之CD8α鉸鏈域、SEQ ID NO:95之CD28跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD22 CAR。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD22 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:128或SEQ ID NO:137中所闡述之序列之CD22特異性scFv、SEQ ID NO:89之CD28鉸鏈域、SEQ ID NO:95之CD28跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD22 CAR。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼CD22 CAR之核苷酸序列，包括例如包含具有SEQ ID NO:128或SEQ ID NO:137中所闡述之序列之CD22特異性scFv、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92之IgG4鉸鏈域、SEQ ID NO:95之CD28跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之CD22 CAR。 BCMA CAR
在一些實施例中，CAR為BCMA CAR (「BCMA-CAR」)且在此等實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼BCMA CAR之核苷酸序列。BCMA在B細胞譜系之細胞上表現之腫瘤壞死家族受體(TNFR)成員，其中在末端分化之B細胞或成熟B淋巴球上之表現最高。BCMA涉及介導漿細胞之存活以維持長期體液免疫性。最近，已將BCMA之表現與多種癌症(諸如多發性骨髓瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)及非霍奇金氏淋巴瘤、各種白血病及神經膠母細胞瘤)相關聯。在一些實施例中，BCMA CAR可以串聯方式包含信號肽、與BCMA特異性結合之細胞外結合域、鉸鏈域、跨膜域、細胞內共刺激域及/或細胞內信號傳導域。
在一些實施例中，BCMA CAR之信號肽包含CD8α信號肽。在一些實施例中，CD8α信號肽包含SEQ ID NO:85中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:85中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，信號肽包含IgK信號肽。在一些實施例中，IgK信號肽包含SEQ ID NO:86中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:86中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，信號肽包含GMCSFR-α或CSF2RA信號肽。在一些實施例中，GMCSFR-α或CSF2RA信號肽包含SEQ ID NO:87中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:87中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域對BCMA，例如人類BCMA具有特異性。BCMA CAR之細胞外結合域可經密碼子最佳化以用於宿主細胞中之表現，或具有變異型序列以增加細胞外結合域之功能。
在一些實施例中，細胞外結合域包含免疫球蛋白分子之免疫原性活性部分，例如scFv。在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域係來源於對BCMA具有特異性之抗體，包括例如貝蘭單抗(belantamab)、厄蘭單抗(erlanatamab)、特立妥單抗(teclistamab)、LCAR-B38M及西達他金(ciltacabtagene)。在此等實施例中之任一者中，BCMA CAR之細胞外結合域可包含該等抗體中之任一者之V H、V L及/或一或多個CDR或由上述各者組成。
在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域包含來源於鼠類單株抗體C11D5.3之scFv，如Carpenter等人, Clin. Cancer Res. 19(8):2048-2060 (2013)中所描述。亦參見PCT申請公開案第WO2010/104949號。C11D5.3衍生之scFv可包含由惠特洛連接子連接之C11D5.3之重鏈可變區(V H)及輕鏈可變區(V L)，其胺基酸序列提供於以下 表 15中。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域包含SEQ ID NO:146、147或151中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:146、147或151中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域可包含一或多個具有SEQ ID NO:148-150及152-154中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域可包含輕鏈，該輕鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:148-150中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域可包含重鏈，該重鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:152-154中所闡述之胺基酸序列之CDR。在此等實施例中之任一者中，BCMA特異性scFv可包含一或多個CDR，該一或多個CDR包含一或多個胺基酸取代或包含與任何所鑑別之序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之序列。在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域包含一或多個如本文中所描述之CDR或由其組成。
在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域包含來源於另一種鼠類單株抗體C12A3.2之scFv，如Carpenter等人, Clin. Cancer Res. 19(8):2048-2060 (2013)及PCT申請公開案第WO2010/104949號中所描述，其胺基酸序列亦提供於以下 表 15中。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域包含SEQ ID NO:155、156或160中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:155、156或160中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域可包含一或多個具有SEQ ID NO:157-159及161-163中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域可包含輕鏈，該輕鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:157-159中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域可包含重鏈，該重鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:161-163中所闡述之胺基酸序列之CDR。在此等實施例中之任一者中，BCMA特異性scFv可包含一或多個CDR，該一或多個CDR包含一或多個胺基酸取代或包含與任何所鑑別之序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之序列。在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域包含一或多個如本文中所描述之CDR或由其組成。
在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域包含對人類BCMA具有高特異性之鼠類單株抗體，其在Friedman等人, Hum. Gene Ther. 29(5):585-601 (2018)中稱為BB2121。亦參見PCT申請公開案第WO2012163805號。
在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域包含可結合於BCMA之兩個抗原決定基的兩條重鏈(VHH)之單一可變片段，如Zhao等人, J. Hematol. Oncol. 11(1):141 (2018)中所描述，亦稱為LCAR-B38M。亦參見PCT申請公開案第WO2018/028647號。
在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域包含完全人類重鏈可變域(FHVH)，如Lam等人, Nat. Commun. 11(1):283 (2020)中所描述，亦稱為FHVH33。亦參見PCT申請公開案第WO2019/006072號。FHVH33及其CDR之胺基酸序列提供於以下 表 15中。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域包含SEQ ID NO:164中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:164中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域可包含一或多個具有SEQ ID NO:165-167中所闡述之胺基酸序列之CDR。在此等實施例中之任一者中，BCMA特異性細胞外結合域可包含一或多個CDR，該一或多個CDR包含一或多個胺基酸取代或包含與任何所鑑別之序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之序列。在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域包含一或多個如本文中所描述之CDR或由其組成。
在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域包含來源於CT103A (或CAR0085)之scFv，如美國專利案第11,026,975 B2號中所描述，其胺基酸序列提供於以下 表 15中。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域包含SEQ ID NO:168、169或173中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:168、169或173中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域可包含一或多個具有SEQ ID NO:170-172及174-176中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域可包含輕鏈，該輕鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:170-172中所闡述之胺基酸序列之CDR。在一些實施例中，BCMA特異性細胞外結合域可包含重鏈，該重鏈具有一或多個具有SEQ ID NO:174-176中所闡述之胺基酸序列之CDR。在此等實施例中之任一者中，BCMA特異性scFv可包含一或多個CDR，該一或多個CDR包含一或多個胺基酸取代或包含與任何所鑑別之序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之序列。在一些實施例中，BCMA CAR之細胞外結合域包含一或多個如本文中所描述之CDR或由其組成。
此外，針對BCMA之CAR及結合子已描述於美國申請公開案第2020/0246381 A1號及第2020/0339699 A1號中，其全部內容各自以引用之方式併入本文中。 表 15. 抗BCMA結合子及組分之例示性序列
SEQ ID NO: 胺基酸序列 說明
146 DIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSS 抗BCMA C11D5.3 scFv完整序列，具有惠特洛連接子
147 DIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIK 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈可變區
148 RASESVSVIGAHLIH 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈CDR1
149 LASNLET 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈CDR2
150 LQSRIFPRT 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈CDR3
151 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSS 抗BCMA C11D5.3 scFv重鏈可變區
152 DYSIN 抗BCMA C11D5.3 scFv重鏈CDR1
153 WINTETREPAYAYDFRG 抗BCMA C11D5.3 scFv重鏈CDR2
154 DYSYAMDY 抗BCMA C11D5.3 scFv重鏈CDR3
155 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSS 抗BCMA C12A3.2 scFv完整序列，具有惠特洛連接子
156 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈可變區
157 RASESVTILGSHLIY 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈CDR1
158 LASNVQT 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈CDR2
159 LQSRTIPRT 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈CDR3
160 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSS 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈可變區
161 HYSMN 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈CDR1
162 RINTESGVPIYADDFKG 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈CDR2
163 DYLYSLDF 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈CDR3
164 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGDYIYYADSVKGRFTISRDISKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKEGTGANSSLADYRGQGTLVTVSS 抗BCMA FHVH33完整序列
165 GFTFSSYA 抗BCMA FHVH33 CDR1
166 ISGSGDYI 抗BCMA FHVH33 CDR2
167 AKEGTGANSSLADY 抗BCMA FHVH33 CDR3
168 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKYDLLTFGGGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDRGDTILDVWGQGTMVTVSS 抗BCMA CT103A scFv完整序列，具有惠特洛連接子
169 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKYDLLTFGGGTKVEIK 抗BCMA CT103A scFv輕鏈可變區
170 QSISSY 抗BCMA CT103A scFv輕鏈CDR1
171 AAS 抗BCMA CT103A scFv輕鏈CDR2
172 QQKYDLLT 抗BCMA CT103A scFv輕鏈CDR3
173 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDRGDTILDVWGQGTMVTVSS 抗BCMA CT103A scFv重鏈可變區
174 GGSISSSSYY 抗BCMA CT103A scFv重鏈CDR1
175 ISYSGST 抗BCMA CT103A scFv重鏈CDR2
176 ARDRGDTILDV 抗BCMA CT103A scFv重鏈CDR3
在一些實施例中，BCMA CAR之鉸鏈域包含CD8α鉸鏈域，例如人類CD8α鉸鏈域。在一些實施例中，CD8α鉸鏈域包含SEQ ID NO:88中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:88中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含CD28鉸鏈域，例如人類CD28鉸鏈域。在一些實施例中，CD28鉸鏈域包含SEQ ID NO:89中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:89中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含IgG4鉸鏈域，諸如人類IgG4鉸鏈域。在一些實施例中，IgG4鉸鏈域包含SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，鉸鏈域包含IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域，例如人類IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域。在一些實施例中，IgG4鉸鏈-Ch2-Ch3域包含SEQ ID NO:93中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:93中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，BCMA CAR之跨膜域包含CD8α跨膜域，例如人類CD8α跨膜域。在一些實施例中，CD8α跨膜域包含SEQ ID NO:94中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:94中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，跨膜域包含CD28跨膜域，例如人類CD28跨膜域。在一些實施例中，CD28跨膜域包含SEQ ID NO:95中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:95中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，BCMA CAR之細胞內共刺激域包含4-1BB共刺激域，例如人類4-1BB共刺激域。在一些實施例中，4-1BB共刺激域包含SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，細胞內共刺激域包含CD28共刺激域，例如人類CD28共刺激域。在一些實施例中，CD28共刺激域包含SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，BCMA CAR之細胞內信號傳導域包含CD3ζ (zeta)信號傳導域，例如人類CD3ζ信號傳導域。在一些實施例中，CD3ζ信號傳導域包含SEQ ID NO:99中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:99中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之胺基酸序列或由其組成。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼BCMA CAR之核苷酸序列，包括例如包含任何如所描述之BCMA特異性細胞外結合域、SEQ ID NO:88之CD8α鉸鏈域、SEQ ID NO:94之CD8α跨膜域、SEQ ID NO:97之4-1BB共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之BCMA CAR。在此等實施例中之任一者中，如所描述，BCMA CAR可額外包含信號肽(例如，CD8α信號肽)。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼BCMA CAR之核苷酸序列，包括例如包含任何如所描述之BCMA特異性細胞外結合域、SEQ ID NO:88之CD8α鉸鏈域、SEQ ID NO:94之CD8α跨膜域、SEQ ID NO:98之CD28共刺激域、SEQ ID NO:99之CD3ζ信號傳導域及/或其變異體(亦即，具有與所揭示之序列至少80%一致，例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99一致之序列)之BCMA CAR。在此等實施例中之任一者中，如所描述，BCMA CAR可額外包含信號肽。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有如SEQ ID NO:177中所闡述或與SEQ ID NO:177中所闡述之核苷酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之編碼BCMA CAR之核苷酸序列(參見 表 16)。經編碼之BCMA CAR具有SEQ ID NO:178中所闡述或與SEQ ID NO:178中所闡述之胺基酸序列至少80%一致(例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致)之相應胺基酸序列，以及以下組分：CD8α信號肽、CT103A scFv (V L-惠特洛連接子-V H)、CD8α鉸鏈域、CD8α跨膜域、4-1BB共刺激域及CD3ζ信號傳導域。
在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼市售BCMA CAR之實施例(包括例如艾德維賽(idecabtagene vicleucel)(ide-cel，亦稱為bb2121))之核苷酸序列。在一些實施例中，多順反子載體包含表現卡匣，該表現卡匣含有編碼艾德維賽之核苷酸序列或其一部分。艾德維賽包含具有以下組分之BCMA CAR：BB2121結合子、CD8α鉸鏈域、CD8α跨膜域、4-1BB共刺激域及CD3ζ信號傳導域。 表 16. BCMA CAR之例示性序列
SEQ ID NO: 序列 說明
177 atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcagcaaaaatacgacctcctcacttttggcggagggaccaaggttgagatcaaaggcagcaccagcggctccggcaagcctggctctggcgagggcagcacaaagggacagctgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcagcagtagtagttactactggggctggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattgggagtatctcctatagtgggagcacctactacaacccgtccctcaagagtcgagtcaccatatccgtagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgagttctgtgaccgccgcagacacggcggtgtactactgcgccagagatcgtggagacaccatactagacgtatggggtcagggtacaatggtcaccgtcagctcattcgtgcccgtgttcctgcccgccaaacctaccaccacccctgcccctagacctcccaccccagccccaacaatcgccagccagcctctgtctctgcggcccgaagcctgtagacctgctgccggcggagccgtgcacaccagaggcctggacttcgcctgcgacatctacatctgggcccctctggccggcacctgtggcgtgctgctgctgagcctggtgatcaccctgtactgcaaccaccggaacaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcagatccgccgacgcccctgcctaccagcagggacagaaccagctgtacaacgagctgaacctgggcagacgggaagagtacgacgtgctggacaagcggagaggccgggaccccgagatgggcggaaagcccagacggaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggcatgaagggcgagcggaggcgcggcaagggccacgatggcctgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggacacctacgacgccctgcacatgcaggccctgccccccaga 例示性BCMA CAR核苷酸序列
178 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKYDLLTFGGGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDRGDTILDVWGQGTMVTVSSFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 例示性BCMA CAR胺基酸序列
VI. 經工程改造之 T 細胞之製造及投與
在一些實施例中，藉由與包含CD8結合劑之病毒載體接觸來活體外工程改造休眠或未經活化之T細胞。在用於產生或製造經工程改造之細胞之例示性方法之一些態樣中，CD8+細胞係選自人類周邊血液單核細胞(PBMC)，例如藉由白血球分離術獲得之細胞，從而產生經富集之CD8+細胞組合物。在一些態樣中，可將此類細胞低溫保存。在一些態樣中，可將CD8+組合物解凍且經歷用於轉導及擴增之步驟。
在用於產生或製造經工程改造之細胞之例示性方法之一些態樣中，CD8+細胞未受刺激，例如在存在與抗CD3及抗CD28抗體偶合之順磁性經聚苯乙烯塗佈之珠粒之情況下。在一些態樣中，不在含有人類重組IL-2、人類重組IL-15或N-乙醯基半胱胺酸(NAC)之培養基中進行刺激。在一些態樣中，細胞培養基不包括人類重組IL-7。在一些態樣中，在存在抗CD3及抗CD28抗體、IL-2、IL-15、N-乙醯基-半胱胺酸或IL-7之情況下，CD8+細胞未受刺激。
細胞通常為真核細胞，諸如哺乳動物細胞，且通常為人類細胞。在一些實施例中，細胞來源於血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，為免疫系統之細胞，諸如先天性或後天性免疫細胞，例如骨髓或淋巴細胞，包括淋巴球，通常為T細胞及/或NK細胞。其他例示性細胞包括幹細胞，諸如多潛能(multipotent)及多能(pluripotent)幹細胞，包括經誘導之多能幹細胞(iPSC)。細胞通常為初生細胞，諸如直接自個體分離及/或自個體分離且冷凍之細胞。在一些實施例中，細胞包括T細胞或其他細胞類型之一或多個子集，諸如完整T細胞群體、CD4+細胞、CD8+細胞及其亞群，諸如根據以下定義之彼等：功能、活化狀態、成熟度、分化潛能、擴增、再循環、位置及/或持久能力、抗原特異性、抗原受體類型、特定器官或區室中之存在、標記物或細胞介素分泌概況及/或分化程度。就所治療之個體而言，細胞可為同種異體及/或自體的。在一些實施例中，方法包括自個體分離細胞，對其進行製備、處理、培養及/或工程改造，以及在低溫保存之前或之後將其再引入同一名個體中。
在一些態樣中，衍生或用於分離細胞之樣品為血液或血液衍生之樣品，或為或來源於血球分離術或白血球分離術產物。例示性樣品包括全血、周邊血液單核細胞(PBMC)、白血球、骨髓、胸腺、組織活檢體、腫瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴結、腸道相關淋巴組織、黏膜相關淋巴組織、脾臟、其他淋巴組織、肝臟、肺、胃、腸、結腸、腎臟、胰臟、乳房、骨骼、前列腺、子宮頸、睪丸、卵巢、扁桃體或其他器官，及/或由其衍生之細胞。在細胞療法，例如過繼性細胞療法之情形中，樣品包括自體及同種異體來源的樣品。
在一些實施例中，至少一部分選擇步驟包括將細胞與選擇試劑一起培育，例如以針對CD8+ T細胞進行選擇。例如作為選擇方法之一部分，與一或多種選擇試劑一起培育，其可使用一或多種選擇試劑進行以用於基於在一或多種特異性分子(諸如表面標記物，例如表面蛋白質、細胞內標記物或核酸)之細胞中或細胞上之表現或存在而選擇一或多種不同細胞類型。在一些實施例中，可使用任何已知的基於此類標記物而使用一或多種選擇試劑進行分離之方法。在一些實施例中，一或多種選擇試劑引起分離，亦即，基於親和力或免疫親和力之分離。舉例而言，在一些態樣中，選擇包括與用於基於一或多種標記物(通常為細胞表面標記物)之細胞表現或表現量來分離細胞及細胞群體之一或多種試劑一起培育，例如藉由與特異性結合於此類標記物之抗體或結合搭配物一起培育，通常隨後進行洗滌步驟及將已結合於該抗體或結合搭配物之細胞與尚未結合於該抗體或結合搭配物之細胞分離。
分離無需引起特定細胞群體或表現特定標記物之細胞之100%富集或移除。舉例而言，對特定類型之細胞，諸如表現標記物之細胞的陽性選擇或富集係指增加此類細胞之數量或百分比，但無需使不表現該標記物之細胞完全不存在。類似地，特定類型之細胞，諸如表現標記物之細胞的陰性選擇、移除或耗減係指減少此類細胞之數目或百分比，但無需實現所有此類細胞之完全移除。
在特定實施例中，生物樣品(例如，PBMC或其他白血球之樣品)經歷CD4+ T細胞之選擇，其中保留陰性及陽性部分兩者。在某些實施例中，CD8+ T細胞係選自陰性部分。在一些實施例中，生物樣品經歷CD8+ T細胞之選擇，其中保留陰性及陽性部分兩者。在某些實施例中，CD4+ T細胞係選自陰性部分。
在一些實施例中，藉由在非T細胞(諸如B細胞、單核球或其他白血球)上表現之標記物(諸如CD14)之陰性選擇來自PBMC樣品分離T細胞。在一些態樣中，使用CD4+或CD8+選擇步驟分離CD4+輔助細胞及CD8+細胞毒性T細胞。此類CD4+及CD8+群體可藉由在一或多種未經處理、記憶及/或效應T細胞子群上表現或表現至相對較高程度的標記物之陽性或陰性選擇而進一步分類成亞群。
在一些實施例中，進一步富集或耗減CD8+細胞之未經處理、中心記憶、效應記憶及/或中心記憶幹細胞，諸如藉由基於與各別亞群相關之表面抗原的陽性或陰性選擇。在一些實施例中，進行中心記憶T (TCM)細胞之富集以增加功效，諸如改良投藥後之長期存活率、擴增及/或移植，在一些態樣中，功效在此類亞群中尤其穩定。參見Terakura等人, (2012) Blood.1:72-82；Wang等人, (2012) J Immunother. 35(9):689-701。在一些實施例中，將TcM富集之CD8+ T細胞與CD4+ T細胞組合可進一步增強功效。
在實施例中，記憶T細胞存在於CD8+周邊血液淋巴球之CD62L+及CD62L-子集中。可富集或耗減PBMC之CD62L-CD8+及/或CD62L+CD8+部分，諸如使用抗CD8及抗CD62L抗體。
在某些實施例中，一或多種組合物為或包括CD8+ T細胞之組合物，該組合物為或包括至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、至少99.5%、至少99.9%或為或為約100%之CD8+ T細胞。在某些實施例中，CD8+ T細胞之組合物含有小於40%、小於35%、小於30%、小於25%、小於20%、小於15%、小於10%、小於5%、小於1%、小於0.1%或小於0.01%之CD4+ T細胞，及/或不含CD4+ T細胞，及/或不含或基本上不含CD4+ T細胞。在一些實施例中，經富集之T細胞之組合物基本上由CD8+ T細胞組成。
在一些實施例中，用於產生經工程改造之細胞(例如，用於根據所提供之方法、用途、製品或組合物中之任一者之細胞療法)之方法包括一或多個用於培養細胞之步驟，例如在促進增殖及/或擴增之條件下培養細胞。在一些實施例中，在基因工程改造步驟(例如，藉由轉導或轉染將重組多肽引入細胞中)之後，在促進增殖及/或擴增之條件下培養細胞。在特定實施例中，在已在刺激條件下培育細胞且用重組多核苷酸(例如，編碼重組受體之多核苷酸)轉導或轉染之後培養細胞。因此，在一些實施例中，在促進增殖及/或擴增之條件下培養CAR陽性T細胞之組合物，該組合物已藉由用編碼CAR之重組多核苷酸轉導或轉染而經工程改造。
在一個態樣中，T細胞經工程改造以具有降低之I類MHC及/或II類MHC人類白血球抗原之表現或不具有該表現，及具有降低之T細胞受體(TCR)複合物之表現或不具有該表現。初生T細胞可經工程改造以除具有降低之I類MHC及/或II類MHC人類白血球抗原之表現或不具有該表現及具有降低之T細胞受體(TCR)複合物之表現或不具有該表現以外，亦過表現CD47及嵌合抗原受體(CAR)。在一些情況下，CAR為CD19特異性CAR。在其他情況下，CAR為CD22特異性CAR。在一些情況下，CAR為雙特異性CAR。在某些情況下，CAR為CD19/CD22雙特異性CAR。該等細胞中之任一者可表現結合於CD19及CD22之雙特異性CAR。
在一些實施例中，T細胞過表現CD47及嵌合抗原受體(CAR)，且包括B2M基因之基因體修飾。在一些實施例中，T細胞經工程改造以過表現CD47且包括CIITA基因之基因體修飾。在一些實施例中，T細胞經工程改造以過表現CD47及CAR，且包括TRAC基因之基因體修飾。在一些實施例中，低免疫T細胞及初生T細胞過表現CD47及CAR，且包括TRB基因之基因體修飾。在一些實施例中，低免疫T細胞及初生T細胞過表現CD47及CAR，且包括選自由以下組成之群之一或多種基因體修飾：B2M、CIITA、TRAC及TRB基因。在一些實施例中，低免疫T細胞及初生T細胞過表現CD47及CAR，且包括B2M、CIITA、TRAC及TRB基因之基因體修飾。在一些實施例中，細胞為亦表現嵌合抗原受體之 B2M -/- 、 CIITA -/- 、 TRAC -/- 、 CD47tg細胞。
在一些實施例中，細胞為亦表現嵌合抗原受體之 B2M -/- 、 CIITA -/- 、 TRB -/- 、 CD47tg細胞。在一些實施例中，細胞為亦表現嵌合抗原受體之 B2M -/- 、 CIITA -/- 、 TRAC -/- 、 TRB -/- 、 CD47tg細胞。在許多實施例中，細胞為亦表現嵌合抗原受體之 B2M 插入缺失 / 插入缺失 、 CIITA 插入缺失 / 插入缺失 、 TRAC 插入缺失 / 插入缺失 、 CD47tg細胞。在許多實施例中，細胞為亦表現嵌合抗原受體之 B2M 插入缺失 / 插入缺失 、 CIITA 插入缺失 / 插入缺失 、 TRB 插入缺失 / 插入缺失 、 CD47tg細胞。在許多實施例中，細胞為亦表現嵌合抗原受體之 B2M 插入缺失 / 插入缺失 、 CIITA 插入缺失 / 插入缺失 、 TRAC 插入缺失 / 插入缺失 、 TRB 插入缺失 / 插入缺失 、 CD47tg細胞。在一些實施例中，所描述之經修飾之細胞為多能幹細胞、誘導性多能幹細胞、由此類多能幹細胞及誘導性多能幹細胞分化之細胞，或初生T細胞。初生T細胞之非限制性實例包括CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、未經處理之T細胞、調節性T (Treg)細胞、非調節性T細胞、Th1細胞、Th2細胞、Th9細胞、Th17細胞、T濾泡輔助(Tfh)細胞、細胞毒性T淋巴球(CTL)、效應T (Teff)細胞、中心記憶T (Tcm)細胞、效應記憶T (Tem)細胞、表現CD45RA之效應記憶T細胞(TEMRA細胞)、組織駐存記憶(Trm)細胞、虛擬記憶T細胞、先天性記憶T細胞、記憶幹細胞(Tsc)、γδ T細胞及T細胞之任何其他亞型。
在一些實施例中，將CD47轉基因插入細胞之經預先選擇之基因座中。在一些實施例中，將編碼CAR之轉基因插入細胞之經預先選擇之基因座中。在許多實施例中，將CD47轉基因及編碼CAR之轉基因插入細胞之經預先選擇之基因座中。經預先選擇之基因座可為安全港基因座。安全港基因座之非限制性實例包括 AAVS1基因座、 CCR5基因座及 ROSA26基因座。在一些實施例中，經預先選擇之基因座係選自由以下組成之群： B2M基因座、 CIITA基因座、 TRAC基因座及 TRB基因座。在一些實施例中，經預先選擇之基因座為 B2M基因座。在一些實施例中，經預先選擇之基因座為 CIITA基因座。在一些實施例中，經預先選擇之基因座為 TRAC基因座。在一些實施例中，經預先選擇之基因座為 TRB基因座。
在一些實施例中，將CD47轉基因及編碼CAR之轉基因插入相同基因座中。在一些實施例中，將CD47轉基因及編碼CAR之轉基因插入不同基因座中。在許多情況下，將CD47轉基因插入安全港基因座中。在許多情況下，將編碼CAR之轉基因插入安全港基因座中。在一些情況下，將CD47轉基因插入 B2M基因座中。在一些情況下，將編碼CAR之轉基因插入 B2M基因座中。在某些情況下，將CD47轉基因插入 CIITA基因座中。在某些情況下，將編碼CAR之轉基因插入 CIITA基因座中。在特定情況下，將CD47轉基因插入 TRAC基因座中。在特定情況下，將編碼CAR之轉基因插入 TRAC基因座中。在許多其他情況下，將CD47轉基因插入 TRB基因座中。在許多其他情況下，將編碼CAR之轉基因插入 TRB基因座中。在一些實施例中，將CD47轉基因及編碼CAR之轉基因插入安全港基因座(例如， AAVS1基因座、 CCR5基因座或 ROSA26基因座)中。
在許多實施例中，將CD47轉基因及編碼CAR之轉基因插入安全港基因座中。在許多實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因由單一啟動子控制且插入安全港基因座中。在許多實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因由其自有啟動子控制且插入安全港基因座中。在許多實施例中，將CD47轉基因及編碼CAR之轉基因插入 TRAC基因座中。在許多實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因由單一啟動子控制且插入 TRAC基因座中。在許多實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因由其自有啟動子控制且插入 TRAC基因座中。在一些實施例中，將CD47轉基因及編碼CAR之轉基因插入 TRB基因座中。在一些實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因由單一啟動子控制且插入 TRB基因座中。在一些實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因由其自有啟動子控制且插入 TRB基因座中。在其他實施例中，將CD47轉基因及編碼CAR之轉基因插入 B2M基因座中。在其他實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因由單一啟動子控制且插入 B2M基因座中。在其他實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因由其自有啟動子控制且插入 B2M基因座中。在各種實施例中，將CD47轉基因及編碼CAR之轉基因插入 CIITA基因座中。在各種實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因由單一啟動子控制且插入 CIITA基因座中。在各種實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因由其自有啟動子控制且插入 CIITA基因座中。在一些情況下，所描述之控制任何轉基因之表現之啟動子為組成性啟動子。在其他情況下，所描述之任何轉基因之啟動子為誘導性啟動子。在一些實施例中，啟動子為EF1α啟動子。在一些實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因皆由組成性啟動子控制。在一些實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因皆由誘導性啟動子控制。在一些實施例中，CD47轉基因由組成性啟動子控制且編碼CAR之轉基因由誘導性啟動子控制。在一些實施例中，CD47轉基因由誘導性啟動子控制且編碼CAR之轉基因由組成性啟動子控制。在各種實施例中，CD47轉基因由EF1α啟動子控制且編碼CAR之轉基因由EF1α啟動子控制。在其他實施例中，CD47轉基因及編碼CAR之轉基因之表現皆由單一EF1α啟動子控制。
本發明技術涵蓋利用本發明技術之稀有切割核酸酶或CRISPR/Cas系統，以熟習此項技術者可用的任何方式改變目標多核苷酸序列。可使用能夠改變細胞中之目標多核苷酸序列之任何CRISPR/Cas系統。此類CRISPR-Cas系統可使用多種Cas蛋白質(Haft等人, PLoS Comput Biol. 2005; 1(6)e60)。允許CRISPR/Cas系統改變細胞中之目標多核苷酸序列之此類Cas蛋白質之分子機制包括RNA結合蛋白質、核酸內切酶及核酸外切酶、解螺旋酶及聚合酶。在一些實施例中，CRISPR/Cas系統為I型CRISPR系統。在一些實施例中，CRISPR/Cas系統為II型CRISPR系統。在一些實施例中，CRISPR/Cas系統為V型CRISPR系統。
方法及經編輯之細胞亦揭示於WO2016/183041及美國臨時專利申請案第63/133,171號中，其各自以全文引用之方式併入本文中。
如本文中進一步細節描述，本文中提供經由投與低免疫原性細胞，特定言之，低免疫原性T細胞來治療患有病症之患者之方法。如將瞭解，對於本文中所描述之與療法之時序及/或組合相關之所有多重實施例，細胞之投與係藉由引起所引入的細胞至少部分位於所需位點之方法或途徑來實現。細胞可直接輸注、植入或移植至所需位點，或者藉由任何適當途徑投與，該途徑引起遞送至個體中之所需位置，其中至少一部分所植入之細胞或細胞組分保持具有活力。在一些實施例中，不藉由皮下(SC)或肌肉內(IM)投與個體來提供細胞。在一些實施例中，藉由靜脈內(IV)投與個體來提供細胞。
本文中所描述之經工程改造之T細胞可用於用以治療患有病症之患者之方法中，該等方法包括向個體，例如人類患者投與細胞群體。
對於治療應用，根據所揭示之方法製備之細胞通常可以包含等張賦形劑之醫藥組合物形式提供，且在對於人類投藥而言足夠無菌之條件下製備。關於細胞組合物之醫藥調配之一般原理，參見「Cell Therapy: Stem Cell Transplantation, Gene Therapy, and Cellular Immunotherapy」, Morstyn及Sheridan編, Cambridge University Press, 1996；及「Hematopoietic Stem Cell Therapy」, E. D. Ball, J. Lister & P. Law, Churchill Livingstone, 2000。細胞可封裝於適用於分配或臨床用途之裝置或容器中。 VII. 醫藥組合物及製造方法
在一些態樣中，本發明亦提供醫藥組合物，其包含本文中所描述之病毒載體或T細胞組合物及醫藥學上可接受之載劑。醫藥組合物可包括任何所描述之病毒載體。
在一些實施例中，組合物符合醫藥學或良好作業規範(good manufacturing practices；GMP)標準。在一些實施例中，根據良好作業規範(GMP)製備組合物。在一些實施例中，組合物具有低於預定參考值之病原體含量，例如，實質上不含病原體。在一些實施例中，組合物具有低於預定參考值之污染物含量，例如，實質上不含污染物。在一些實施例中，組合物具有低免疫原性。
在一些實施例中，本文中提供本發明之醫藥組合物或其鹽之用途，其係用於實踐本發明之方法。此類醫藥組合物可由呈適於投與個體之形式的至少一種本發明之化合物或結合物或其鹽組成，或醫藥組合物可包含至少一種本發明之化合物或結合物或其鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑、一或多種其他成分或此等物質之某一組合。在一些實施例中，本發明之化合物或結合物可以生理學上可接受之鹽形式存在於醫藥組合物中，諸如與生理學上可接受之陽離子或陰離子之組合，如此項技術中熟知。
在一些實施例中，本發明之醫藥組合物中的活性成分、醫藥學上可接受之載劑及任何其他成分之相對量將視所治療之個體之身分、體型及病狀而變化且亦視用於投與組合物之途徑而變化。在一些實施例中，組合物可包含0.1%與100% (w/w)之間的活性成分。
在一些實施例中，適用於本發明之方法中之醫藥組合物可經適當研發以用於靜脈內、瘤內、經口、經直腸、經陰道、腸胃外、局部、經肺、鼻內、頰內、眼用或另一種投藥途徑。在一些實施例中，適用於本發明之方法之組合物可直接投與皮膚、陰道或哺乳動物之任何其他組織。在一些實施例中，調配物包括脂質體製劑、含有活性成分之再密封紅血球及基於免疫學之調配物。在一些實施例中，投藥途徑對於熟習此項技術者而言將為顯而易見的且將取決於多種因素，包括所治療之疾病之類型及嚴重程度、所治療之獸醫學或人類個體之類型及年齡以及其類似因素。
在一些實施例中，可藉由藥理學技術中已知或此後研發之任何方法製備本文中所描述之醫藥組合物之調配物。在一些實施例中，製備方法包括以下步驟：使活性成分與載劑或一或多種其他附屬成分結合，且接著(若必需或需要)將產物成形或封裝至所需單劑量或多劑量單元中。
在一些實施例中，「單位劑量」為包含預定量之活性成分之醫藥組合物的個別量。在一些實施例中，活性成分之量通常等於將向個體投與的活性成分之劑量或此類劑量之適宜部分，諸如此類劑量之二分之一或三分之一。在一些實施例中，單位劑型可為單一日劑量或多個日劑量(例如，每天約1至4次或更多次)中之一者。在一些實施例中，當使用多個日劑量時，各劑量之單位劑型可相同或不同。
在一些實施例中，儘管本文中所提供之醫藥組合物的描述大體上係關於適用於依據處方投與人類之醫藥組合物，但熟習此項技術者應理解，此類組合物一般適合於向所有類型之動物投與。在一些實施例中，可良好理解為了使組合物適用於向各種動物投與而對適用於向人類投與之醫藥組合物進行之修飾，且一般熟練的獸醫藥理學家可僅用普通實驗(若存在)即可設計及進行此類修飾。在一些實施例中，預期接受本發明之醫藥組合物之投藥之個體包括人類及其他靈長類動物、哺乳動物，包括商業相關哺乳動物，諸如牛、豬、馬、羊、貓及犬。
在任何實施例中之一些實施例中，使用一或多種醫藥學上可接受之賦形劑或載劑調配本發明之組合物。在一個實施例中，本發明之醫藥組合物包含治療有效量之本發明之化合物或結合物及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，適用的醫藥學上可接受之載劑包括(但不限於)丙三醇、水、生理鹽水、乙醇及其他醫藥學上可接受之鹽溶液，諸如磷酸鹽及有機酸之鹽。此等及其他醫藥學上可接受之載劑之實例描述於Remington's Pharmaceutical Sciences (1991, Mack Publication Co., New Jersey)中。
在一些實施例中，載劑可為溶劑或分散介質，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，丙三醇、丙二醇及液態聚乙二醇及其類似物)、其適合的混合物，及植物油。在一些實施例中，可例如藉由使用諸如卵磷脂之包衣、在分散液之情況下藉由維持所需粒度及藉由使用界面活性劑來維持適當流動性。在一些實施例中，可藉由例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞及其類似物之各種抗細菌劑及抗真菌劑來實現防止微生物作用。在一些實施例中，組合物中較佳包括等張劑，例如糖、氯化鈉或多元醇，諸如甘露醇或山梨醇。在一些實施例中，可藉由在組合物中包括延遲吸收劑(例如，單硬脂酸鋁及明膠)來實現可注射組合物之延長吸收。在一個實施例中，醫藥學上可接受之載劑並非單獨的DMSO。
在一些實施例中，可使用調配物與習知賦形劑(亦即，此項技術中已知的適用於口服、經陰道、腸胃外、經鼻、靜脈內、皮下、經腸或任何其他適合的投藥模式之醫藥學上可接受之有機或無機載劑物質)之摻合物。在一些實施例中，醫藥製劑可經滅菌且視需要與助劑混合，該等助劑例如潤滑劑、防腐劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、用於影響滲透壓緩衝液之鹽、染色劑、調味劑及/或芳族物質以及其類似物。在一些實施例中，醫藥製劑亦可視需要與其他活性劑(例如，其他鎮痛劑)組合。
在一些實施例中，「其他成分」包括(但不限於)以下中之一或多者：賦形劑；界面活性劑；分散劑；惰性稀釋劑；粒化劑及崩解劑；結合劑；潤滑劑；甜味劑；調味劑；著色劑；防腐劑；生理學上可降解之組合物，諸如明膠；水性媒劑及溶劑；油性媒劑及溶劑；懸浮劑；分散劑或濕潤劑；乳化劑、緩和劑；緩衝液；鹽；增稠劑；填充劑；乳化劑；抗氧化劑；抗生素；抗真菌劑；穩定劑；及醫藥學上可接受之聚合或疏水性材料。在一些實施例中，本發明之醫藥組合物中可包括的「其他成分」係此項技術中已知的且描述於例如Genaro編, (1985, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa.)中，其以引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，以組合物之總重量計，本發明之組合物可包含約0.005%至2.0%之防腐劑。在一些實施例中，使用防腐劑以防止在暴露於環境中之污染物之情況下腐敗。在一些實施例中，可根據本發明使用之防腐劑之實例包括(但不限於)選自由以下組成之群之防腐劑：苯甲醇、山梨酸、對羥基苯甲酸酯、咪唑啶基脲及其組合。在一些實施例中，尤其較佳防腐劑為約0.5%至2.0%苯甲醇與0.05%至0.5%山梨酸之組合。
在一些實施例中，組合物較佳包括抗氧化劑及抑制化合物降解之螯合劑。在一些實施例中，一些化合物之抗氧化劑為較佳在約0.01重量%至0.3重量%範圍內之BHT、BHA、α-生育酚及抗壞血酸且更佳為在0.03重量%至0.1重量%範圍內之BHT，以組合物之總重量計。在一些實施例中，以組合物之總重量計，螯合劑以0.01重量%至0.5重量%之量存在。尤其較佳螯合劑包括依地酸鹽(edetate salts)(例如，依地酸二鈉)及檸檬酸，其重量在約0.01重量%至0.20重量%範圍內且更佳在0.02重量%至0.10重量%範圍內，以組合物之總重量計。在一些實施例中，螯合劑適用於使組合物中之可能對調配物之存放期不利的金屬離子螯合。在一些實施例中，如熟習此項技術者已知，由此可取代其他適合的及等效的抗氧化劑及螯合劑。
在一些實施例中，可使用習知方法製備液體懸浮液，以獲得活性成分於水性或油性媒劑中之懸浮液。在一些實施例中，水性媒劑包括例如水及等張生理鹽水。在一些實施例中，油性媒劑包括例如杏仁油、油性酯、乙醇、植物油(諸如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)、分餾植物油及礦物油(諸如液體石蠟)。在一些實施例中，液體懸浮液可進一步包含一或多種其他成分，包括(但不限於)懸浮劑、分散劑或濕潤劑、乳化劑、緩和劑、防腐劑、緩衝液、鹽、調味劑、著色劑及甜味劑。在一些實施例中，油性懸浮液可進一步包含增稠劑。在一些實施例中，懸浮劑包括(但不限於)山梨醇糖漿、氫化可食用脂肪、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃蓍膠、阿拉伯膠(gum acacia)及纖維素衍生物(諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素及羥基丙基甲基纖維素)。在一些實施例中，分散劑或濕潤劑包括(但不限於)天然存在之磷脂，諸如卵磷脂；環氧烷與脂肪酸、長鏈脂族醇、來源於脂肪酸及己醣醇之部分酯或來源於脂肪酸及己醣醇酸酐之部分酯的縮合產物(分別例如聚氧乙烯硬脂酸酯、十七伸乙基氧基十六醇、聚氧乙烯山梨醇單油酸酯及聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯)。已知的乳化劑包括(但不限於)卵磷脂及阿拉伯膠。已知的防腐劑包括(但不限於)對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯、抗壞血酸及山梨酸。已知的甜味劑包括例如丙三醇、丙二醇、山梨醇、蔗糖及糖精。用於油性懸浮液之已知的增稠劑包括例如蜂蠟、硬石蠟及十六醇。
在一些實施例中，活性成分於水性或油性溶劑中之液體溶液可以與液體懸浮液實質上相同的方式製備，主要差異為使活性成分溶解，而非懸浮於溶劑中。如本文中所使用，「油性」液體為包含含有碳之液體分子且呈現比水更低的極性特徵之液體。在一些實施例中，本發明之醫藥組合物之液體溶液可包含關於液體懸浮液所描述之組分中之每一者，應理解，懸浮劑將未必有助於活性成分溶解於溶劑中。在一些實施例中，水性溶劑包括例如水及等張生理鹽水。在一些實施例中，油性溶劑包括例如杏仁油、油性酯、乙醇、植物油(諸如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)、分餾植物油及礦物油(諸如液體石蠟)。
在一些實施例中，本發明之醫藥製劑之粉末狀及顆粒狀調配物可使用已知方法製備。在一些實施例中，調配物可直接向個體投與，或用於例如形成錠劑、填充膠囊或藉由向其中添加水性或油性媒劑來製備水性或油性懸浮液或溶液。在任何實施例中之一些實施例中，調配物可進一步包含分散劑或濕潤劑、懸浮劑及防腐劑中之一或多者。此等調配物中亦可包括其他賦形劑，諸如填充劑及甜味劑、調味劑或著色劑。
在一些實施例中，本發明之醫藥組合物亦可以水包油乳液或油包水乳液形式製備、封裝或出售。在一些實施例中，油相可為植物油(諸如橄欖油或花生油)、礦物油(諸如液體石蠟)或此等物質之組合。在一些實施例中，組合物進一步包含一或多種乳化劑，諸如天然存在之膠，諸如阿拉伯膠或黃蓍膠；天然存在之磷脂，諸如大豆磷脂或卵磷脂；來源於脂肪酸及己醣醇酸酐之組合之酯或偏酯，諸如脫水山梨醇單油酸酯；及此類偏酯與環氧乙烷之縮合產物，諸如聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯。在一些實施例中，乳液亦可含有其他成分，包括例如甜味劑或調味劑。 VIII. 遞送及治療之方法
在一些實施例中，本文中所提供之病毒載體能夠向目標細胞遞送(例如，向目標細胞遞送)外源性試劑。本文中所提供之方法包括包含向目標細胞遞送試劑之方法。在一些實施例中，外源性試劑為完全異源或不會由目標細胞產生或通常不會由目標細胞表現之試劑。在一些實施例中，向目標細胞遞送外源性試劑可提供治療作用，從而治療個體中之疾病或病狀。治療作用可藉由靶向、調節或改變與疾病或病狀相關或有關的所存在之或由目標細胞表現之抗原或蛋白質來實現。治療作用可藉由提供外源性試劑來實現，其中外源性試劑為在目標細胞中不存在、呈突變體形式或含量低於野生型之蛋白質(或編碼蛋白質之核酸，例如，編碼蛋白質之mRNA)。在一些實施例中，目標細胞係來自患有遺傳疾病(例如，單基因性疾病，例如單基因性細胞內蛋白質疾病)之個體。
可向個體(例如，哺乳動物，例如人類)投與本文中所描述之病毒載體。在此類實施例中，個體可具有罹患特定疾病或病狀(例如，本文中所描述之疾病或病狀)之風險、可具有特定疾病或病狀之症狀或可被診斷患有或鑑別為患有特定疾病或病狀。在一些實施例中，疾病或病狀可為藉由向個體中之目標細胞遞送所投與之病毒載體中所含的外源性試劑而治療之疾病或病狀。
在某些態樣中，本發明亦提供向個體(例如，人類個體)、目標組織或細胞投與病毒載體之方法，其包含向個體投與以下物質或使目標組織或細胞與以下物質接觸：包含本文中所描述之複數種病毒載體之組合物、本文中所描述之病毒載體組合物或本文中所描述之醫藥組合物，藉此向個體投與病毒載體組合物。
在某些態樣中，本發明亦提供向個體、目標組織或細胞遞送外源性試劑，例如治療劑(例如，多肽、核酸、代謝物、細胞器或次細胞結構)之方法，其包含向個體投與以下物質或使目標組織或細胞與以下物質接觸：本文中所描述之複數種病毒載體、包含本文中所描述之複數種病毒載體之病毒載體組合物或本文中所描述之醫藥組合物，其中以可實現遞送治療劑之量及/或時間投與組合物。
在某些態樣中，本發明亦提供向個體、目標組織或細胞遞送功能之方法，其包含向個體投與以下物質或使目標組織或細胞與以下物質接觸：本文中所描述之複數種病毒載體、包含本文中所描述之複數種病毒載體之病毒載體組合物、本文中所描述之病毒載體組合物或本文中所描述之醫藥組合物，其中以可實現遞送功能之量及/或時間投與病毒載體組合物，該遞送係經由藉由外源性試劑(例如，治療劑)之病毒載體組合物向目標組織或細胞遞送而實現。
在一些實施例中，目標細胞或組織為WO 2020/102499、WO 2020/102485、WO 2019/222403、WO 2020/014209及WO 2020/102503中之任一者中所列舉之任何目標細胞或組織，其各自以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，目標細胞為T細胞。在一些實施例中，目標細胞為以下中之任一者：CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、αβ T細胞、γδ T細胞、未經處理之T細胞、效應T細胞、細胞毒性T細胞(例如，CD8+細胞毒性T細胞)、調節性T細胞(例如，胸腺衍生之調節性T細胞、周邊衍生之調節性T細胞、CD4+Foxp3+調節性T細胞或1型CD4+FoxP3-調節性T (Trl)細胞)、輔助T細胞(例如，CD4+輔助T細胞、Thl細胞、Th2細胞、Th3細胞、Th9細胞、Thl7細胞、Th22細胞或T濾泡輔助(Tfh)細胞)、記憶T細胞(例如，幹細胞記憶T細胞、中心記憶T細胞或效應子記憶T細胞)、NK T細胞及黏膜相關不變T (MAIT)細胞。 A. 遞送
在一些實施例中，病毒載體向目標細胞群體(例如，CD8+ T細胞)中之至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之數目的細胞遞送外源性試劑。在一些實施例中，病毒載體將至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之外源性試劑遞送至目標細胞群體(例如，CD8+ T細胞)。
在一些實施例中，病毒載體向目標細胞群體(例如，CD8+ T細胞)遞送比非目標細胞群體多至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之外源性試劑。在一些實施例中，基於包含促融劑或再靶向促融劑之病毒載體，病毒載體將更多的外源性試劑遞送至目標細胞群體，該促融劑或再靶向促融劑促進與目標細胞群體而非非目標細胞群體之結合。病毒載體可包含本文中所描述之例示性促融劑及再靶向促融劑中之任一者。在一些實施例中，當複數種病毒載體與包含目標細胞(例如CD8+ T細胞)及非目標細胞之細胞群體接觸時，含有外源性試劑之目標細胞比含有外源性試劑之非目標細胞多至少10倍。在一些實施例中，當複數種病毒載體與包含目標細胞(例如CD8+ T細胞)及非目標細胞之細胞群體接觸時，目標細胞中所含之外源性試劑比非目標細胞高至少2倍、5倍、10倍、20倍或50倍及/或目標細胞中所含之外源性試劑比非目標細胞高至少2倍、5倍、10倍、20倍或50倍。在一些實施例中，複數種病毒載體與目標細胞之融合率比非目標細胞高至少50%。
在一些實施例中，病毒載體能夠向目標細胞遞送(例如，向目標細胞遞送)核酸，例如以穩定地修飾目標細胞之基因體，例如以用於基因療法。類似地，在一些實施例中，本文中之方法包含向目標細胞遞送核酸。
在一些實施例中，本文中之方法包含藉由在病毒載體上呈現細胞表面配位體來引起目標細胞表面上之配位體呈現。在一些實施例中，病毒載體能夠引起目標細胞之細胞死亡。在一些實施例中，病毒載體係來自NK來源細胞。
在一些實施例中，病毒載體或目標細胞能夠進行(例如，病原體之)吞噬作用。類似地，在一些實施例中，本文中之方法包含引起吞噬作用。
在一些實施例中，病毒載體包含(例如，能夠向目標細胞遞送)膜蛋白質或編碼膜蛋白質之核酸。
在一些實施例中，基於包含促融劑或再靶向促融劑之病毒載體，病毒載體(例如，融質體)與目標細胞(例如，CD8+ T細胞)之融合率高於非目標細胞，該促融劑或再靶向促融劑促進與目標細胞而非非目標細胞之結合。病毒載體可包含本文中所描述之例示性促融劑及再靶向促融劑中之任一者。在一些實施例中，病毒載體(例如，融質體)與目標細胞之融合率高於非目標細胞，例如高至少1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍。在一些實施例中，病毒載體(例如，融質體)與目標細胞之融合率高於其他病毒載體，例如高至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在一些實施例中，病毒載體(例如，融質體)以使得在24、48或72小時之後，向至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%之目標細胞遞送病毒載體中之外源性試劑或編碼外源性試劑之核酸之速率與目標細胞融合。在實施例中，目標融合量為約30%-70%、35%-65%、40%-60%、45%-55%或45%-50%。在實施例中，目標融合量為約20%-40%、25%-35%或30%-35%。
在一些實施例中，促融劑以至少或不超過10、50、100、500、1,000、2,000、5,000、10,000、20,000、50,000、100,000、200,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000、100,000,000、500,000,000或1,000,000,000個複本之複本數目存在。在一些實施例中，病毒載體中之至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之促融劑安置於細胞膜中。在實施例中，病毒載體亦在內部(例如，在細胞質或細胞器中)包含促融劑。在一些實施例中，促融劑占(或鑑別為占)病毒載體中之總蛋白質之約0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、5%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%或更多，或約1-30%、5-20%、10-15%、12-15%、13-14%或13.6%，例如藉由質譜分析法測定。在實施例中，促融劑占(或鑑別為占)病毒載體中之總蛋白質之約13.6%。在一些實施例中，與一或多種其他感興趣的蛋白質相比，促融劑為(或經鑑別為)更充足或不太充足的。在一個實施例中，促融劑與EGFP之比率為(或經鑑別為)約140、145、150、151、152、153、154、155、156、157 (例如，156.9)、158、159、160、165或170。在另一實施例中，促融劑與CD63之比率為(或經鑑別為)約2700、2800、2900、2910 (例如，2912)、2920、2930、2940、2950、2960、2970、2980、2990或3000，或約1000-5000、2000-4000、2500-3500、2900-2930、2910-2915或2912.0，例如藉由質譜分析法。在一個實施例中，促融劑與ARRDC1之比率為(或經鑑別為)約600、610、620、630、640、650、660 (例如，664.9)、670、680、690或700。在另一實施例中，促融劑與GAPDH之比率為(或經鑑別為)約50、55、60、65、70 (例如，69)、75、80或85，或約1-30%、5-20%、10-15%、12-15%、13-14%或13.6%。在另一實施例中，促融劑與CNX之比率為(或經鑑別為)約500、510、520、530、540、550、560 (例如，558.4)、570、580、590或600，或約300-800、400-700、500-600、520-590、530-580、540-570、550-560或558.4，例如藉由質譜分析法。 B. 用於遞送之系統
本文中提供用於向個體投與包含CD8結合劑之慢病毒載體之方法。在一些實施例中，該方法包含：a)獲得來自個體之全血；b)收集血液中之含有包括CD8+ T細胞之白血球組分之部分；c)使包括CD8+ T細胞之白血球組分與包含慢病毒載體之組合物接觸以產生轉染混合物；及d)將經接觸之包括CD8+ T細胞之白血球組分及/或轉染混合物再輸注至個體中，藉此向個體投與脂質顆粒及/或有效負載基因。在一些實施例中，T細胞(例如，CD8+ T細胞)在該方法期間未經活化。
根據本發明之方法能夠向離體系統遞送慢病毒顆粒。該方法可包括使用各種血球分離術機器硬體組件、軟體控制模組及感測器模組之組合以連續量測檸檬酸鹽或其他溶質含量，以確保治療處方之最大準確性及安全性，及使用經設計以全面利用根據本發明之方法的系統設計之置換流體。應理解，關於一個根據本發明之系統描述之組分亦可在其他根據本發明之系統內實施。
在一些實施例中，用於向個體投與慢病毒載體之方法包含使用用於獲得來自個體之全血之血液處理集合、用於收集血液中之含有包括CD8+ T細胞之白血球組分之部分之分離室、用於使CD8+ T細胞與包含慢病毒載體之組合物接觸之接觸容器及用於向患者再輸注CD8+ T細胞之另一流體迴路。在一些實施例中，該方法進一步包含以下中之任一者：i)用於濃縮T細胞之洗滌組分，及ii)用於監測細胞密度及/或濃度之感測器及/或模組。在一些實施例中，該等方法允許處理直接來自患者之血液、用慢病毒載體進行轉導，及在不存在任何針對T細胞或CD8+ T細胞之選擇步驟之情況下直接再輸注至患者中。此外，該等方法亦可在不在任一個或多個步驟之前或之間低溫保存或冷凍任何細胞之情況下進行，使得不存在將細胞與低溫保護劑(例如，DMSO)一起調配之步驟。在一些實施例中，所提供之方法亦不包括淋巴球耗減療法。在一些實施例中，包括步驟(a)-(d)之方法可進行不超過24小時之時間，諸如在2小時與12小時之間，例如3小時至6小時。
在一些實施例中，方法係連續地進行。在一些實施例中，方法係在封閉流體迴路或功能封閉流體迴路中進行。在一些實施例中，步驟(a)-(d)中之每一者係在封閉流體迴路中連續地進行，其中系統之所有部分可操作地連接，諸如經由至少一條管線。在一些實施例中，系統為無菌的。在一些實施例中，封閉流體迴路為無菌的。
本文中亦提供用於向個體投與包含CD8結合劑之慢病毒載體之系統。例示性用於投藥之系統展示於 圖 5中。 C. 治療及用途
在一些實施例中，可向個體(例如，哺乳動物，例如人類)投與本文中所提供之病毒載體或其如本文中所描述之醫藥組合物。在一些實施例中，投藥可向個體中之目標細胞(例如，CD8+ T細胞)遞送病毒載體。在此類實施例中，個體可具有罹患特定疾病或病狀之風險、可具有特定疾病或病狀之症狀，或可被診斷患有或鑑別為患有特定疾病或病狀。在一些實施例中，該等方法由此治療個體中之疾病或病狀或病症。在一個實施例中，個體患有癌症。在一個實施例中，個體患有傳染病。在一些實施例中，病毒載體(例如，反轉錄病毒載體或其融質體)含有核酸序列，該等核酸序列編碼用於治療個體中之疾病或病狀之外源性試劑。舉例而言，外源性試劑為靶向贅生性細胞之蛋白質或對其具有特異性之試劑，且向個體投與病毒載體(例如，反轉錄病毒載體或其融質體)以用於治療個體中之腫瘤或癌症。在另一實例中，外源性試劑為發炎性介體或免疫分子，諸如細胞介素，且向個體投與病毒載體(例如，反轉錄病毒載體或其融質體)以用於治療任何需要調節(例如，增加)免疫反應之病狀，諸如癌症或傳染病。在一些實施例中，以可有效實現疾病、病狀或病症之治療的量或劑量投與病毒載體，例如，反轉錄病毒載體或其融質體。
本文中提供任何所提供之病毒載體(例如，反轉錄病毒載體或其融質體)之用途，其係用於此類方法及治療中以及用於製備用以進行此類治療方法之藥劑。在一些實施例中，藉由向患有、曾經患有或懷疑患有疾病或病狀或病症之個體投與病毒載體(例如，反轉錄病毒載體或其融質體)或包含其之組合物來進行該等方法。在一些實施例中，該等方法由此治療個體中之疾病或病狀或病症。本文中亦提供該等組合物(諸如本文中所提供之醫藥組合物)中之任一者之用途，其係用於治療與由外源性試劑靶向或提供之特定基因或蛋白質相關之疾病、病狀或病症。
在一些實施例中，所提供之方法或用途涉及投與醫藥組合物，包含經口、吸入、經皮或腸胃外(包括靜脈內、腫瘤內、腹膜內、肌肉內、腔內及皮下)投與。在一些實施例中，病毒載體可單獨投與或調配為醫藥組合物。在一些實施例中，可向個體(例如，哺乳動物，例如人類)投與本文中所描述之病毒載體或醫藥組合物。在任何實施例中之一些實施例中，個體可具有罹患特定疾病或病狀(例如，本文中所描述之疾病或病狀)之風險、可具有特定疾病或病狀之症狀或可被診斷患有或鑑別為患有特定疾病或病狀。在一些實施例中，該疾病為疾病或病症。
在一些實施例中，病毒載體可以單位劑量組合物(諸如單位劑量經口、腸胃外、經皮或吸入組合物)形式投與。在一些實施例中，組合物係藉由摻合來製備且經調適以用於經口、吸入、經皮或腸胃外投與，且因此可呈錠劑、膠囊、口服液體製劑、散劑、顆粒、口含錠、可復原散劑、可注射及可輸注溶液或懸浮液或栓劑或氣溶膠形式。
在一些實施例中，投藥方案可影響有效量之構成組分。在一些實施例中，可在疾病診斷之前或之後向個體投與治療性調配物。在一些實施例中，可每天或依次投與若干分劑量以及交錯劑量，或劑量可連續輸注，或可為推注注射。在一些實施例中，治療性調配物之劑量可如治療或預防情形之緊急程度所指示按比例增加或減少。
在一些實施例中，對個體(較佳為哺乳動物，更佳為人類)之本發明之組合物之投藥可使用已知程序，以可有效預防或治療疾病之劑量及時段進行。在一些實施例中，實現治療作用所必需之治療性化合物的有效量可根據諸如以下之因素而變化：所使用之特定化合物的活性；投藥時間；化合物之排泄率；治療持續時間；與化合物組合使用之其他藥物、化合物或材料；所治療之個體的疾病或病症之狀態、年齡、性別、體重、狀況、一般健康及先前病史；及醫學領域中熟知的類似因素。在一些實施例中，可調節給藥方案以提供最佳治療反應。在一些實施例中，可每天投與若干個分次劑量，或可如治療情形之緊急狀態所指示按比例減少劑量。一般熟習此項技術者將能夠研究相關因素且在無不當實驗之情況下作出關於治療性化合物之有效量的決定。
在一些實施例中，可以每天若干次之頻率向個體投與組合物，或可以更低頻率投與，諸如一天一次、一週一次、每兩週一次、每月一次或甚至更低的頻率，諸如每若干個月一次或甚至每年一次或更低。在一些實施例中，組合物之量在非限制性實例中可每天、每隔一天、每隔2天、每隔3天、每隔4天或每隔5天投與。給藥頻率對於熟習此項技術者而言將為顯而易見的且將視多種因素而定，諸如(但不限於)所治療之疾病之類型及嚴重程度，以及動物之類型及年齡等。
在一些實施例中，本發明之醫藥組合物中的活性成分之劑量水準可變化，以便獲得可有效實現特定個體、組合物及投藥模式之所需治療反應且對個體無毒性的活性成分之量。
一般熟習此項技術之醫生(例如，醫師或獸醫)可容易地測定及規定所需醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，醫師或獸醫可以低於實現所需治療作用所需的水準之水準開始醫藥組合物中使用之本發明之化合物之給藥，且逐漸增加劑量直至實現所需作用。
在一些實施例中，尤其宜將化合物調配成單位劑型以易於投與且使劑量均一。在一些實施例中，如本文中所使用之單位劑型係指適合作為單位劑量以用於所治療之個體的物理離散單元；各單元含有經計算以與所需醫藥媒劑結合產生所需治療作用的預定量之治療性化合物。在一些實施例中，本發明之單位劑型由以下因素規定及直接決定：(a)治療性化合物之獨特特徵及待達成之特定治療作用，及(b)用於混合/調配用以治療個體中之疾病之此類治療性化合物的技術中之固有限制。
在一些實施例中，本文中所提供之含有所提供之病毒載體(諸如本文中所描述之任何病毒載體或基於病毒之顆粒)之組合物可以基因體複本(GC)之劑量單位形式調配。已描述適用於測定GC之方法且包括例如qPCR或數位液滴式PCR (ddPCR)，如例如M. Lock等人, Hu Gene Therapy Methods, Hum Gene Ther Methods 25(2):115-25. 2014中所描述，其以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 4至約10 10個GC單元(包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 9至約10 15個GC單元(包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 5至約10 9個GC單元(包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 6至約10 9個GC單元(包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 9至約10 12個GC單元(包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 12至約10 14個GC單元(包括端值)。在一些實施例中，投藥劑量為1.0×10 9個GC單元、5.0×10 9個GC單元、1.0×10 10個GC單元、5.0×10 10個GC單元、1.0×10 11個GC單元、5.0×10 11個GC單元、1.0×10 12個GC單元、5.0×10 12個GC單元或1.0×10 13個GC單元、5.0×10 13個GC單元、1.0×10 14個GC單元、5.0×10 14個GC單元或1.0×10 15GC單元。
在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 4至約10 10個感染性單元(包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 9至約10 15個感染性單元(包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 5至約10 9個感染性單元。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 6至約10 9個感染性單元。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 9至約10 12個感染性單元(包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 12至約10 14個感染性單元(包括端值)。在一些實施例中，投藥劑量為1.0×10 9個感染性單元、5.0×10 9個感染性單元、1.0×10 10個感染性單元、5.0×10 10個感染性單元、1.0×10 11個感染性單元、5.0×10 11個感染性單元、1.0×10 12個感染性單元、5.0×10 12個感染性單元或1.0×10 13個感染性單元、5.0×10 13個感染性單元、1.0×10 14個感染性單元、5.0×10 14個感染性單元或1.0×10 15感染性單元。可用於定量感染性單元之技術為此項技術中常用的且包括病毒顆粒數目測定、螢光顯微法及藉由空斑分析法進行之滴定。舉例而言，可藉由量測在A260下之吸光度來測定腺病毒顆粒之數目。類似地，亦可藉由使用單株抗體進行之載體特異性蛋白質之定量免疫螢光或藉由空斑分析法來測定感染性單元。
在一些實施例中，計算感染性單元之方法包括空斑分析法，其中病毒之滴定物在細胞單層上生長且在若干天至若干週之後對空斑數目進行計數。舉例而言，測定感染性效價，諸如藉由空斑分析法，例如用於評估細胞病變效應(CPE)之分析法。在一些實施例中，藉由連續稀釋與瓊脂糖重疊之細胞(諸如HFF細胞)之單層上的病毒來進行CPE分析法。在培育一段時間(諸如約3至28天，通常7至10天)以實現細胞病變效應之後，可將細胞固定且測定以空斑形式觀測之不存在的細胞之焦點。在一些實施例中，可使用終點稀釋(TCID 50)方法測定感染性單元，該方法測定50%細胞培養物被感染時的病毒稀釋度，且因此通常可測定某一範圍(諸如一個對數)內之效價。
在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 4至約10 10個空斑形成單位(pfu)(包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 9至約10 15個pfu (包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 5至約10 9個pfu。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 6至約10 9個pfu。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 9至約10 12個pfu (包括端值)。在一些實施例中，病毒載體或病毒樣顆粒之投藥劑量為約10 12至約10 14個pfu (包括端值)。在一些實施例中，投藥劑量為1.0×10 9個pfu、5.0×10 9個pfu、1.0×10 10個pfu、5.0×10 10個pfu、1.0×10 11個pfu、5.0×10 11個pfu、1.0×10 12個pfu、5.0×10 12個pfu或1.0×10 13個pfu、5.0×10 13個pfu、1.0×10 14個pfu、5.0×10 14個pfu或1.0×10 15個pfu。
在一些態樣中，本文中所提供之醫藥組合物內的媒劑之投藥劑量視個體之體重而變化。舉例而言，可根據GC/公斤、感染性單元/公斤、pfu/公斤等來調配組合物。在一些態樣中，可實現治療作用之劑量為剛好或約10 8個GC/公斤個體體重至剛好或約10 14個GC/公斤個體體重計(包括端值)。在一些態樣中，可實現治療作用之劑量為剛好或約10 8個GC/公斤個體體重(GC/公斤)。在一些態樣中，劑量為剛好或約10 8個感染性單元/公斤個體體重至剛好或約10 14個感染性單元/公斤個體體重(包括端值)。
在任何實施例中之一些實施例中，以在每天一至五次或更多次之範圍內之劑量向個體投與本發明之組合物。在另一實施例中，以包括(但不限於)每天一次、每兩天一次、每三天一次至一週一次及每兩週一次之劑量範圍向個體投與本發明之組合物。熟習此項技術者將容易地顯而易見，視許多因素而定，本發明之各種組合型組合物之投藥頻率將隨各個體而變化，該等因素包括(但不限於)年齡、所治療之疾病或病症、性別、整體健康狀況及其他因素。
在任何實施例中之一些實施例中，本發明係關於封裝醫藥組合物，其包含容器，該容器收納單獨的治療有效量之本發明之化合物或結合物或其與第二藥劑之組合；及使用該化合物或結合物治療、預防或減少個體中之疾病之一或多種症狀之說明。
在一些實施例中，術語「容器」包括任何用於收納醫藥組合物之收納器。在一些實施例中，容器為含有醫藥組合物之封裝。在其他實施例中，容器不為含有醫藥組合物之封裝，亦即，容器為收納器，諸如盒子或小瓶，其含有封裝醫藥組合物或未封裝之醫藥組合物及醫藥組合物之使用說明書。應理解，含有醫藥組合物之封裝上可含有醫藥組合物之使用說明書，且因此該等說明書與封裝產品形成增強之功能關係。在一些實施例中，說明書可含有關於化合物發揮其所欲功能(例如，治療或預防個體中之疾病，或向個體遞送顯影劑或診斷劑)之能力之資訊。
在一些實施例中，本文中所揭示之任何組合物之投藥途徑包括口服、經鼻、經直腸、腸胃外、舌下、經皮、經黏膜(例如，舌下、經舌、(經)頰內、(經)尿道、陰道(例如，經陰道及陰道周)、(鼻內)經鼻及(經)直腸)、膀胱內、肺內、十二指腸內、胃內、鞘內、皮下、肌肉內、皮內、動脈內、靜脈內、腫瘤內、支氣管內、吸入及局部投藥。
在任何實施例中之一些實施例中，適合的組合物及劑型包括例如錠劑、膠囊、囊劑、丸劑、膠囊錠、糖衣錠、分散液、懸浮液、溶液、糊漿、顆粒、珠粒、經皮貼片、凝膠、散劑、丸粒、乳劑、口含錠、乳膏、糊劑、硬膏劑、洗劑、圓盤劑(discs)、栓劑、用於經鼻或經口投與之液體噴霧劑、用於吸入之乾粉或氣溶膠化調配物、用於膀胱內投與之組合物及調配物以及其類似物。
在任何實施例中之一些實施例中，本文中所描述之病毒載體組合物係離體遞送至細胞或組織，例如人類細胞或組織。在實施例中，組合物改良離體細胞或組織之功能，例如改良細胞活力、呼吸或其他功能(例如，本文中所描述之另一種功能)。
在一些實施例中，將組合物遞送至處於受損狀態(例如，由創傷、疾病、缺氧、局部缺血或其他損傷引起)之離體組織。
在一些實施例中，將組合物遞送至離體移植物(例如，組織外植體或用於移植之組織，例如人類靜脈、肌肉骨胳移植物(諸如骨骼或肌腱)、角膜、皮膚、心瓣、神經；或經分離或培養之器官，例如待移植至人類中之器官，例如人類心臟、肝臟、肺、腎臟、胰臟、腸道、胸腺、眼睛)。在一些實施例中，在移植之前、期間及/或之後將組合物遞送至組織或器官。
在一些實施例中，將組合物與細胞(例如，細胞製劑)一起遞送、投與或接觸。在一些實施例中，細胞製劑可為細胞療法製劑(意欲用於投與人類個體之細胞製劑)。在實施例中，細胞製劑包含表現嵌合抗原受體(CAR)(例如，表現重組CAR)之細胞。表現CAR之細胞可為例如T細胞、自然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴球(CTL)、調節性T細胞。在實施例中，細胞製劑為神經幹細胞製劑。在實施例中，細胞製劑為間質幹細胞(MSC)製劑。在實施例中，細胞製劑為造血幹細胞(HSC)製劑。在實施例中，細胞製劑為胰島細胞製劑。
在一些實施例中，可向個體(例如，哺乳動物，例如人類)投與本文中所描述之病毒載體組合物。在此類實施例中，個體可具有罹患特定疾病或病狀(例如，本文中所描述之疾病或病狀)之風險、可具有特定疾病或病狀之症狀或可被診斷患有或鑑別為患有特定疾病或病狀。
在一些實施例中，病毒載體之來源係來自被投與病毒載體組合物之同一名個體。在其他實施例中，病毒載體之來源與被投與病毒載體組合物之個體不同。在一些實施例中，病毒載體之來源及受體組織可為自體(來自同一名個體)或異源(來自不同個體)。在一些實施例中，本文中所描述之病毒載體組合物之供體組織可為與受體組織不同的組織類型。在一些實施例中，供體組織可為肌肉組織且受體組織可為結締組織(例如，脂肪組織)。在其他實施例中，供體組織及受體組織可具有相同或不同類型，但來自不同器官系統。
在一些實施例中，可向患有癌症、自體免疫疾病、傳染病、代謝疾病、神經退化性疾病或遺傳疾病(例如，酶缺乏症)之個體投與本文中所描述之病毒載體組合物。 IX. 例示性實施例
所提供之實施例包括： 1.      一種用於轉導T細胞之方法，該方法包含： 使未經活化之T細胞與包含CD8結合劑之慢病毒載體接觸，其中該慢病毒載體轉導該未經活化之T細胞。 2.      如實施例1之方法，其中該T細胞為CD8+ T細胞。 3.      如實施例1或實施例2之方法，其中該未經活化之T細胞之表面對一或多種選自由以下組成之群之T細胞活化標記物呈陰性：CD25、CD44及CD69。 4.      如實施例1-3中任一項之方法，其中該未經活化之T細胞未經抗CD3抗體(例如，OKT3)處理。 5.      如實施例1-4中任一項之方法，其中該未經活化之T細胞未經抗CD28抗體(例如，CD28.2)處理。 6.      如實施例1-5中任一項之方法，其中該未經活化之T細胞未經與抗CD3抗體(例如，OKT3)及抗CD28抗體(例如，CD28.2)偶合之珠粒處理，視情況其中該珠粒為超順磁珠粒。 7.      如實施例1-6中任一項之方法，其中該未經活化之T細胞未經T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)處理，視情況其中該T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。 8.      如實施例1-7中任一項之方法，其中該未經活化之T細胞未經可溶性T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體或可溶性CD80、可溶性CD86、可溶性CD137L或可溶性ICOS-L)處理。 9.      如實施例1-8中任一項之方法，其中該慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原。 10.    如實施例9之方法，其中該經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)。 11.    如實施例9或實施例10之方法，其中CAR包含抗原結合域、跨膜域及細胞內信號傳導域，該細胞內信號傳導域包含CD3ζ信號傳導域及共刺激性信號傳導域之細胞內組分。 12.    如實施例11之方法，其中該共刺激性信號傳導域為4-1BB信號傳導域。 13.    如實施例9之方法，其中該經工程改造之受體為經工程改造之T細胞受體(TCR)。 14.    如實施例1-13中任一項之方法，其中該未經活化之T細胞為人類T細胞。 15.    如實施例1-14中任一項之方法，其中該未經活化之T細胞係在個體中。 16.    如實施例1-14中任一項之方法，其中該未經活化之T細胞係在活體外。 17.    如實施例1-14中任一項之方法，其中該未經活化之T細胞係來自個體之離體細胞。 18.    如實施例15或實施例17之方法，其中在接觸之前，該個體未被投與T細胞活化治療。 19.    如實施例15、17或18之方法，其中該個體患有疾病或病狀。 20.    一種經轉導之T細胞，其係藉由如實施例1-14、16-19及56-119中任一項之方法產生。 21.    一種組合物，其包含如實施例20之經轉導之T細胞，視情況其中該組合物為醫藥組合物。 22.    一種用於轉導T細胞群體之方法，該方法包含： 使未經活化之T細胞群體與包含慢病毒載體之組合物接觸，該等慢病毒載體包含CD8結合劑，其中該未經活化之T細胞群體係以至少1%之效率經轉導。 23.    如實施例22之方法，其中該未經活化之T細胞群體係以至少5%之效率經轉導。 24.    如實施例22或實施例23之方法，其中該未經活化之T細胞群體係以至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%之效率經轉導。 25.    如實施例22-24中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體中之至少75%的T細胞之表面對一或多種選自由以下組成之群之T細胞活化標記物呈陰性：CD25、CD44及CD69 (例如，群體中之至少80%、至少85%、至少90%、至少95%的T細胞之表面對T細胞活化標記物呈陰性)。 26.    如實施例22-25中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體包含CD8+ T細胞(例如，未經活化之T細胞群體中之至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%為CD8+ T細胞)。 27.    如實施例26之方法，其中至少75%的CD8+ T細胞之表面對一或多種選自由以下組成之群之T細胞活化標記物呈陰性：CD25、CD44及CD69 (例如，群體中之至少80%、至少85%、至少90%、至少95%的CD8+ T細胞之表面對T細胞活化標記物呈陰性)。 28.    如實施例26或實施例27之方法，其中未經活化之T細胞群體中之CD8+ T細胞係以至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%之效率經轉導。 29.    如實施例22-28中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體未經抗CD3抗體(例如，OKT3)處理。 30.    如實施例22-29中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體未經抗CD28抗體(例如，CD28.2)處理。 31.    如實施例22-30中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體未經與抗CD3抗體(例如，OKT3)及抗CD28抗體(例如，CD28.2)偶合之珠粒處理，視情況其中該珠粒為超順磁珠粒。 32.    如實施例22-31中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體未經T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)處理，視情況其中該T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。 33.    如實施例22-32中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體未經可溶性T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體或可溶性CD80、可溶性CD86、可溶性CD137L或可溶性ICOS-L)處理。 34.    如實施例22-33中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體為人類細胞。 35.    如實施例22-34中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體係在個體中。 36.    如實施例35之方法，其中在接觸之前，該個體未被投與T細胞活化治療。 37.    如實施例22-34中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體係在活體外。 38.    如實施例22-34中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體係來自個體之離體細胞。 39.    如實施例22-34、37及38中任一項之方法，其中未經活化之T細胞群體包含周邊血液單核細胞(PBMC)或其包含CD8+ T細胞之子集。 40.    如實施例22-34及37-39中任一項之方法，其中未經活化之細胞群體為經富集之選自來自個體之生物樣品的T細胞群體，視情況其中針對表面對T細胞標記物(例如，CD3或CD8)呈陽性之T細胞來選擇T細胞。 41.    如實施例40之方法，其中生物樣品為全血樣品、血球分離術樣品或白血球分離術樣品。 42.    如實施例35、36及38-41之方法，其中個體患有疾病或病狀。 43.    如實施例22-34及37-42中任一項之方法，其進一步包含擴增經轉導之T細胞群體。 44.    如實施例43之方法，其中擴增包含將經轉導之細胞與一或多種T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)一起培育，視情況其中T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。 45.    如實施例22-34及37-43中任一項之方法，其進一步包含將經轉導之T細胞與一或多種T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)一起培育，視情況其中T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。 46.    一種經轉導之T細胞群體，其係由如實施例22-34、37-45及56-119中任一項之方法產生。 47.    一種組合物，其包含由如實施例22-34、37-45及56-119中任一項之方法產生之經轉導之T細胞群體，視情況其中該組合物為醫藥組合物。 48.    如實施例21或實施例47之組合物，其進一步包含低溫保存劑，視情況其中該低溫保存劑為DMSO。 49.    一種用於活體內轉導T細胞之方法，該方法包含： 向個體投與包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，其中該等慢病毒載體轉導個體內之T細胞，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向該個體投與T細胞活化治療。 50.    如實施例49之方法，其中個體患有疾病或病狀。 51.    一種用於治療患有疾病或病狀之個體之方法，該方法包含： 向個體投與包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向該個體投與T細胞活化治療。 52.    如實施例19、42及51中任一項之方法，其中該疾病或病狀為癌症。 53.    如實施例19、42、51及52中任一項之方法，其中慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原，視情況其中經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。 54.    一種用於擴增有需要之個體中之能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞之方法，該方法包含： 向個體投與包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向該個體投與T細胞活化治療。 55.    如實施例54之方法，其中慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別在腫瘤細胞上表現之蛋白質，視情況其中經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。 56.    如實施例18、36、49-55、108-112及129-131中任一項之方法，其中T細胞活化治療包含投與抗CD3抗體(例如，OKT3)。 57.    如實施例18、36、49-56、108-112及129-131中任一項之方法，其中T細胞活化治療包含投與可溶性T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體，或重組CD80、CD86、CD137L、ICOS-L)。 58.    如實施例18、36、49-57、108-112及129-131中任一項之方法，其中T細胞活化治療包含投與T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21)，視情況其中T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。 59.    如實施例18、36、49-58、108-112及129-131中任一項之方法，其中T細胞活化治療包含投與重組IL-7，視情況人類IL-7。 60.    如實施例18、36、49-59及108-112及129-131中任一項之方法，其中T細胞活化治療包含投與淋巴細胞耗減療法，視情況投與環磷醯胺及/或氟達拉濱。 61.    如實施例1-60中任一項之方法，其中CD8結合劑為抗CD8抗體或抗原結合片段。 62.    如實施例61之方法，其中抗CD8抗體或抗原結合片段為小鼠、兔、人類或人類化抗體或抗原結合片段。 63.    如實施例56或實施例57之方法，其中抗原結合片段為單鏈可變片段(scFv)。 64.    如實施例61之方法，其中抗CD8抗體或抗原結合片段為單域抗體。 65.    如實施例61或實施例64之方法，其中抗CD8抗體或抗原結合片段為駱駝科(例如，美洲駝、羊駝、駱駝)(例如，VHH)。 66.    如實施例1-65中任一項之方法，其中CD8結合劑結合於CD8α鏈及/或CD8β鏈。 67.    如實施例1-66中任一項之方法，其中CD8結合劑在慢病毒載體之表面上暴露。 68.    如實施例1-67中任一項之方法，其中CD8結合劑與併入病毒包膜中之跨膜域融合。 69.    如實施例1-68中任一項之方法，其中慢病毒載體經病毒融合蛋白質假模式化。 70.    如實施例69之方法，其中病毒融合蛋白質為VSV-G蛋白或其功能變異體。 71.    如實施例69之方法，其中病毒融合蛋白質為科卡爾病毒G蛋白或其功能變異體。 72.    如實施例69之方法，其中病毒融合蛋白質為α病毒融合蛋白質(例如，辛得比斯病毒)或其功能變異體。 73.    如實施例69之方法，其中病毒融合蛋白質為副黏液病毒科融合蛋白質(例如，麻疹病毒或亨尼帕病毒)或其功能變異體。 74.    如實施例69或實施例73之方法，其中病毒融合蛋白質為麻疹病毒融合蛋白質(例如，麻疹病毒(MeV)、犬瘟熱病毒、鯨麻疹病毒、小反芻動物瘟疫病毒、海豹瘟熱病毒、牛瘟病毒)或其功能變異體。 75.    如實施例69或實施例63之方法，其中病毒融合蛋白質為亨尼帕病毒融合蛋白質(例如，尼帕病毒、亨德拉病毒、賽得病毒、庫馬西病毒、墨江病毒)或其功能變異體。 76.    如實施例69-75中任一項之方法，其中病毒融合蛋白質包含一個或多個用於減少其原生受體之結合之修飾。 77.    如實施例69-76中任一項之方法，其中病毒融合蛋白質與CD8結合劑融合。 78.    如實施例69、73及75-77中任一項之方法，其中病毒融合蛋白質包含尼帕病毒F醣蛋白(NiV-F)或其生物活性部分及尼帕病毒G醣蛋白(NiV-G)或其生物活性部分，且其中CD8結合劑與NiV-G或其生物活性部分融合。 79.    如實施例78之方法，其中CD8結合劑與尼帕病毒G醣蛋白或其生物活性部分之C端融合。 80.    如實施例77-79中任一項之方法，其中CD8結合蛋白質係直接或經由肽連接子融合。 81.    如實施例78-80中任一項之方法，其中NiV-G或其生物活性部分為野生型NiV-G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分。 82.    如實施例78-81中任一項之方法，其中NiV-G蛋白或生物活性部分截短及不具有野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近的至多40個相鄰胺基酸殘基。 83.    如實施例78-82中任一項之方法，其中NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有5個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:12中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:12中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 84.    如實施例78-82中任一項之方法，其中NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有10個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:44中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:44中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 85.    如實施例78-82中任一項之方法，其中NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有15個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:45中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:45中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 86.    如實施例78-82中任一項之方法，其中NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有20個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:13中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:13中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 87.    如實施例78-82中任一項之方法，其中NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有25個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:14中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:14中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 88.    如實施例78-82中任一項之方法，其中NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有30個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:43中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:43中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 89.    如實施例78-82中任一項之方法，其中NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有34個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:42中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:42中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 90.    如實施例78-82中任一項之方法，其中NiV-G蛋白或生物活性部分在野生型NiV-G蛋白(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)之N端處或附近具有34個胺基酸截短，視情況其中NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:42中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:42中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 91.    如實施例78-90中任一項之方法，其中NiV-G蛋白或其生物活性部分為突變型NiV-G蛋白，其呈現降低之與艾普瑞林B2或艾普瑞林B3之結合。 92.    如實施例91之方法，其中突變型NiV-G蛋白或生物活性部分包含： 一或多個對應於選自由以下組成之群的胺基酸取代之胺基酸取代：E501A、W504A、Q530A及E533A，參考SEQ ID NO:4中所闡述之編號。 93.    如實施例91或實施例92之方法，其中突變型NiV-G蛋白或生物活性部分具有SEQ ID NO:17中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:17中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 94.    如實施例91或實施例92之方法，其中NiV-G蛋白或生物活性部分具有SEQ ID NO:18中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:18中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 95.    如實施例78-94中任一項之方法，其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分為野生型NiV-F蛋白質或其功能活性變異體或生物活性部分。 96.    如實施例78-95中任一項之方法，其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:41)之C端處或附近具有20個胺基酸截短，視情況其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:20中所闡述之序列或與SEQ ID NO:20中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 97.    如實施例78-96中任一項之方法，其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分包含： i) 在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:41)之C端處或附近具有20個胺基酸截短；及 ii) N-連接之醣基化位點上之點突變， 視情況其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:15中所闡述之序列或與SEQ ID NO:15中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 98.    如實施例78-95中任一項之方法，其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分在野生型NiV-F蛋白質(SEQ ID NO:41)之C端處或附近具有22個胺基酸截短，視情況其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:16或21中所闡述之序列或與SEQ ID NO:16或21中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 99.    如實施例1-98中任一項之方法，其中慢病毒載體包含轉基因。 100.  如實施例99之方法，其中轉基因包含核酸序列，其編碼能夠進行RNA干擾之RNA序列(例如，前miRNA、siRNA或shRNA)。 101.  如實施例99之方法，其中轉基因係選自由以下組成之群：治療性基因、報導基因、編碼酶之基因、編碼前藥酶之基因、編碼細胞凋亡誘導劑之基因、編碼螢光蛋白之基因、編碼前藥活化酶之基因、編碼細胞凋亡蛋白質之基因、編碼細胞凋亡酶之基因、編碼自殺蛋白質之基因、編碼細胞介素之基因、編碼抗免疫抑制蛋白之基因、編碼表觀遺傳調節劑之基因、編碼T細胞受體(TCR)之基因、編碼嵌合抗原受體(CAR)之基因、編碼調節經轉導之細胞之細胞表面的蛋白質之基因、編碼調節內源性TCR之表現的蛋白質之基因及編碼將促腫瘤轉化成抗腫瘤信號之開關受體之基因。 102.  如實施例99之方法，其中轉基因編碼經工程改造之受體，該經工程改造之受體結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞或病灶(例如，腫瘤)表現之蛋白質或抗原，視情況其中經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。 103.  如實施例53、實施例55、實施例99或實施例102之方法，其中轉基因編碼嵌合抗原受體(CAR)。 104.  如實施例103之方法，其中CAR包含抗原結合域、跨膜域及細胞內信號傳導域，該細胞內信號傳導域包含CD3ζ信號傳導域及共刺激性信號傳導域之細胞內組分。 105.  如實施例104之方法，其中該共刺激性信號傳導域為4-1BB信號傳導域。 106.  如實施例53、實施例55、實施例99或實施例102之方法，其中轉基因編碼經工程改造之T細胞受體(TCR)。 107.  如實施例1-106中任一項之方法，其中慢病毒載體不包含呈現於表面上之T細胞活化劑，視情況其中T細胞活化劑係選自由以下組成之群：CD3抗體(例如，抗CD3 scFv)；T細胞活化細胞介素(例如，IL-2、IL-7、IL-15或IL-21)；或T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體、CD80、CD86、CD137L或ICOS-L)。 108.  如實施例1-106中任一項之方法，其中慢病毒載體不包含或不編碼T細胞活化劑，視情況其中T細胞活化劑為淋巴增生試劑。 109.  如實施例108之方法，其中T細胞活化劑為： 能夠結合CD3及/或CD28之多肽； CD3抗體(例如，抗CD3 scFv)；T細胞活化細胞介素(例如，IL-2、IL-7、IL-15或IL-21)；或T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體、CD80、CD86、CD137L或ICOS-L)； 活化STAT3路徑、STAT4路徑及/或Jak/STAT5路徑之細胞介素或細胞介素受體或其信號傳導域； T細胞存活模體，視情況為IL-7受體、IL-15受體或CD28，或其功能部分；及/或 微型RNA (miRNA)或短髮夾RNA (shrRNA)，其中miRNA或shRNA刺激STAT5路徑及/或抑制SOCS路徑。 110.  如實施例1-106中任一項之方法，其中慢病毒載體不包含或不編碼膜結合及/或呈現於表面上之T細胞活化劑，視情況其中T細胞活化劑為淋巴增生試劑。 111.  如實施例18、36及49-110中任一項之方法，其中不向個體同時投與T細胞活化治療及慢病毒載體。 112.  如實施例18、36及49-111中任一項之方法，其中在與慢病毒載體接觸或投與包含慢病毒載體之組合物之前1個月內不向個體投與T細胞活化治療。 113.  如實施例18、36、49-112中任一項之方法，其中在與慢病毒載體接觸或投與包含慢病毒載體之組合物之前1週、2週、3週或4週內或剛好或約1週、2週、3週或4週時，視情況剛好或約1、2、3、4、5、6或7天時，不向個體投與T細胞活化治療。 114.  如實施例18、36及49-113中任一項之方法，其中在與慢病毒載體接觸或投與包含慢病毒載體之組合物之後1個月內不向個體投與T細胞活化治療。 115.  如實施例18、36、49-114中任一項之方法，其中在與慢病毒載體接觸或投與包含慢病毒載體之組合物之後1週、2週、3週或4週內或剛好或約1週、2週、3週或4週時，視情況剛好或約1、2、3、4、5、6或7天時不向個體投與T細胞活化治療。 116. 如實施例1-45中任一項之方法，其進一步包含編輯T細胞或T細胞群體以不活化B2M、CIITA、TRAC及TRB基因中之一或多者。 117. 如實施例113之方法，其中編輯T細胞或T細胞群體以不活化B2M、CIITA及TRAC基因。 118. 如實施例116之方法，其中編輯T細胞或T細胞群體以不活化B2M、CIITA及TRB基因。 119. 如實施例116-118中任一項之方法，其進一步包含在指定的基因座處插入編碼CD47之基因。 120. 如實施例119之方法，其中指定的基因座係選自由以下組成之群： B2M基因座、 CIITA基因座、 TRAC基因座、 TRB基因座或安全港基因座。 121. 如實施例120之方法，其中安全港基因座係選自由以下組成之群： AAVS1基因座、 CCR5基因座及 ROSA26基因座。 122.  如實施例116-121中任一項之方法，其中慢病毒載體包含編碼經工程改造之受體之轉基因，該經工程改造之受體結合於或識別由與疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原，視情況其中經工程改造之受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。 123.  一種經轉導之T細胞，其係由如實施例116-122中任一項之方法產生。 124.  如實施例123之經轉導之T細胞，其中T細胞在一或多個基因之兩個對偶基因處不活化。 125.  一種組合物，其包含如實施例123或實施例124之經轉導之T細胞，視情況其中該組合物為醫藥組合物。 126.  一種經轉導之T細胞群體，其係由如實施例116-122中任一項之方法產生。 127.  如實施例126之經轉導之T細胞群體，其中未經活化之細胞群體中之至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%之細胞在一或多個基因處不活化。 128.  如實施例126或實施例127之經轉導之T細胞群體，其中群體中之至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%之未經活化之CD8+ T細胞經轉導且在一或多個基因處不活化。 129.  如實施例126-128中任一項之經轉導之T細胞群體，其中群體中之細胞在一或多個基因之兩個對偶基因處不活化。 130.  一種組合物，其包含如實施例126-129中任一項之經轉導之T細胞群體，視情況其中該組合物為醫藥組合物。 131.  如實施例125或實施例130之組合物，其進一步包含低溫保存劑，視情況其中該低溫保存劑為DMSO。 132.  一種用於治療患有疾病或病狀之個體之方法，該方法包含： 向個體投與如實施例21、47、48、125、130及131中任一項之組合物，其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向個體投與T細胞活化治療。 133.  如實施例132之方法，其中該疾病或病狀為癌症。 134.  一種用於擴增有需要之個體中之能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞之方法，該方法包含： 向個體投與如實施例21、47、48、125、130及131中任一項之組合物，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不向個體投與T細胞活化治療。 135.  一種包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物之用途，其係用於治療患有疾病或病狀，視情況地，癌症之個體。 136.  一種如實施例21、47、48、125、130及131中任一項之組合物之用途，其係用於調配用以治療患有疾病或病狀，視情況地，癌症之個體之藥劑。 137.  一種包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，其係用於治療患有疾病或病狀，視情況地，癌症之個體。 138.  如實施例21、47、48、125、130及131中任一項之組合物，其係用於治療患有疾病或病狀，視情況地，癌症之個體。 139.  一種包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體的組合物之用途，其係用於調配用以擴增有需要之個體中之能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞之藥劑。 140.  一種如實施例21、47、48、125、130及131中任一項之組合物之用途，其係用於調配用以擴增有需要之個體中之能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞之藥劑。 141.  一種包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，其係用於擴增有需要之個體中之能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞。 142.  如實施例21、47、48、125、130及131中任一項之組合物，其係用於擴增有需要之個體中之能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞。 143.  如實施例135-142中任一項之用途或組合物，其係用於在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)不被投與或不會被投與T細胞活化治療之個體。 144.  如實施例11-19、104、105、107-115及117-122中任一項之方法，其中共刺激性信號傳導域為CD28共刺激域，視情況其中CD28共刺激性信號傳導域包含SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列。 145. 如實施例12-19、105、107-115、117-122及144中任一項之方法，其中4-1BB信號傳導域包含SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列。 146.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122、144及145中任一項之方法，其中CD3ζ信號傳導域包含SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:100中所闡述之序列。 147.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-146中任一項之方法，其中跨膜域包含SEQ ID NO:94、95及96中之任一者中所闡述之序列。 148.  如實施例10-19、103-105、107-115、117-122及144-147中任一項之方法，其中CAR包含鉸鏈域，視情況其中鉸鏈域包含SEQ ID NO:88、89、90、91、92、93及180中之任一者中所闡述之序列。 149.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-148中任一項之方法，其中抗原結合域結合於選自由以下組成之群之抗原：CD19、CD20、CD22及BCMA。 150.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-149中任一項之方法，其中抗原結合域結合於CD19。 151.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-150中任一項之方法，其中抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:108、109及110中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:103、104及105中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； (b) 包含SEQ ID NO:107中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:102中所闡述之胺基酸序列之VL區；及/或 (c) SEQ ID NO:101或111中所闡述之胺基酸序列。 152.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-151中任一項之方法，其中CAR包含SEQ ID NO:113、115、117或119中所闡述之胺基酸序列及/或由SEQ ID NO:112、114、116或118中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列。 153.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-149中任一項之方法，其中抗原結合域結合於CD20。 154.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-149及153中任一項之方法，其中抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:126、127及182中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:122、123及124中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； (b) 包含SEQ ID NO:125中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:121中所闡述之胺基酸序列之VL區；及/或 (c) SEQ ID NO:120中所闡述之胺基酸序列。 155.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-149中任一項之方法，其中抗原結合域結合於CD22。 156.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-149及155中任一項之方法，其中抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:130、131及132中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:134、135及136中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；或 分別包含SEQ ID NO:139、140及142中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:143、144及145中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；及/或 (b) 包含SEQ ID NO:129中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:133中所闡述之胺基酸序列之VL區；或 包含SEQ ID NO:138中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:142中所闡述之胺基酸序列之VL區；及/或 (c) SEQ ID NO:128或137中所闡述之胺基酸序列。 157.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-149中任一項之方法，其中抗原結合域結合於BCMA。 158.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122及144-149及157中任一項之方法，其中抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:152、152及154中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:148、149及150中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； 分別包含SEQ ID NO:161、162及163中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:157、158及159中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； 分別包含SEQ ID NO:165、166及167中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3；或 分別包含SEQ ID NO:174、175及176中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:170、171及172中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；及/或 (b) 包含SEQ ID NO:151中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:147中所闡述之胺基酸序列之VL區； 包含SEQ ID NO:160中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:156中所闡述之胺基酸序列之VL區； 包含SEQ ID NO:173中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:169中所闡述之胺基酸序列之VL區；或 包含SEQ ID NO:164中所闡述之胺基酸序列之VH區；及/或 (c) SEQ ID NO:146、155或168中所闡述之胺基酸序列。 159.  如實施例11-19、104、105、107-115、117-122、144-149、157及158中任一項之方法，其中CAR包含SEQ ID NO:178中所闡述之胺基酸序列及/或由SEQ ID NO:177中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列。 160.  如實施例78-105、107-122及144-159中任一項之方法、用途或組合物，其中NiV-F蛋白質或其生物活性部分包含SEQ ID NO:21中所闡述之胺基酸序列，或與SEQ ID NO:21中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。 161.  如實施例78-105、107-122及144-160中任一項之方法、用途或組合物，其中NiV-G蛋白包含SEQ ID NO:17中所闡述之胺基酸序列，且Niv-F蛋白質包含SEQ ID NO:21中所闡述之胺基酸序列。 162.  如實施例1-19、22-45、49-122、132-134及144-161中任一項之方法，其中該接觸或該投與係藉由使用封閉流體迴路向個體離體投與慢病毒載體來進行。 163.  如實施例162之方法，其中該離體投與包含： (a) 獲得來自個體之全血； (b) 收集血液中之含有白血球組分之部分，該等白血球組分包含T細胞(例如，CD8+ T細胞)； (c) 使包含T細胞(例如，CD8+ T細胞)之白血球組分與包含慢病毒載體之組合物接觸；及 (d) 將經接觸之包含T細胞(例如，CD8+ T細胞)之白血球組分再輸注至個體中，其中步驟(a)-(d)係在封閉流體迴路中連續地進行。 164.  如實施例163之方法，其中步驟(c)中之接觸持續不超過24小時、不超過18小時、不超過12小時或不超過6小時。 X. 實例
包括以下實例以僅用於說明之目的且不意欲限制本發明之範疇。 實例 1 ： 隨 T 細胞活化 狀態而變的 Nalm6 腫瘤模型中之 靶向 CD8 之 促融劑之活體內遞送
此實例描述再靶向CD8之尼帕促融劑(Nipah fusogen)及VSV-G之轉導效率之評估。
簡言之，在存在或不存在用CD3/CD28複合物進行之預先T細胞活化之情況下，經由靜脈內(IV)注射向六十二(62)隻雌性NSG小鼠注射1E6個Nalm6-Luc白血病B細胞，接著在三天後IV注射2E6個人類周邊血液單核細胞(hPBMC)。在hPBMC注射之後一天，在獨立的動物組中以2E6-5E7範圍內之整合單元(IU)注射表現CD19 CAR之CD8 VHH尼帕促融劑假型化慢病毒載體(LV)。在整個研究持續時間內，每週一次使用Lago X成像系統經由生物發光成像(BLI)來追蹤Nalm6腫瘤進展。CD19CAR含有針對CD19之抗scFv及細胞內信號傳導域，該細胞內信號傳導域含有4-1BB及CD3-ζ之細胞內組分。在整個研究持續時間內，對各組中之一半的小鼠進行周邊血液分析以評估循環T及B細胞出現率、循環CAR-T細胞出現率及細胞介素含量。在hPBMC注射後第28天或基於個別動物之健康狀況更早地終止研究。將動物處死且自周邊血液、脾臟及骨髓組織收集細胞，且藉由流動式細胞測量術來分析以進行表現CD19CAR之細胞及細胞介素分析。
如 圖 1A中所示，CD8-VHH CD19CAR LV及經活化之hPBMC治療引起隨時間推移之Nalm6腫瘤生長之穩定控制。如 圖 1B中所示，高劑量CD8-VHH CD19CAR LV及未經活化之hPBMC治療引起Nalm6腫瘤生長之略微延遲但穩定的控制。 圖 1C展示在經PBMC對照物(頂部曲線)及CD8 VHH融質體處理之動物(底部曲線)中，所有回收之活淋巴球中之中靶(on-target)的表現CD19CAR之細胞(CD8 +CD19CAR +)之百分比，如FAC曲線之右上象限中所指示。在存在或不存在hPBMC活化之情況下，接受5 E7 IU之CD8-CD19CAR LV的動物之骨髓中之CAR-T細胞之出現率不存在統計差異。結果表明在周邊血液、脾及骨髓中，直至處理後第28天仍可在CD8+ T細胞中偵測到CD19特異性CAR T細胞。 實例 2 ： 活化狀態促融劑測試 - 人類 PBMC 供體
此實例描述在人類PBMC中，在存在及不存在CD3/CD28活化之情況下，四種不同慢病毒，即三種再靶向CD8之尼帕促融劑及VSV-G (攜帶CD19CAR構築體)之轉導效率之評估。CD19CAR含有針對CD19之抗scFv及細胞內信號傳導域，該細胞內信號傳導域含有4-1BB及CD3-ζ之細胞內組分。將來自三個供體之人類PBMC解凍，且在進行或不進行CD19細胞耗減及在存在或不存在由抗CD3及抗CD28抗體進行之活化之情況下進行處理。用經尼帕病毒促融劑或VSV-G假模式化之慢病毒載體(LV)轉導PBMC群體，該尼帕病毒促融劑係藉由兩種不同的CD8 scFv (CD8 scFv-1或CD8 scFV-2)中之一種、CD8 VHH再靶向。在旋轉式感染(spinfection)之後72小時，藉由所評估之表面上之CD19CAR表現來量測轉導效率。
結果表明與在經活化之細胞中相同，再靶向CD8之促融劑亦在未經活化之細胞中轉導(圖2A)。在圖2A中，在轉導之前耗減CD19+ B細胞之PBMC中量測CAR+細胞且轉導效率視為活群體中之CAR+細胞百分比。值得注意的是，在未經活化之T細胞中使用VSV-G LV所產生的最大轉導效率為約0.5%，而三種CD8 LV能夠以約20-35%之效率轉導未經活化之T細胞。
此外，觀測到在不進行活化之情況下產生之CAR-T細胞更有效地殺傷CD19+細胞(圖2B)。在轉導時存在具有CD19+ B細胞之PBMC，且在經活化之樣品中觀測到抗原掩蔽(經由抗CD19 ab偵測)。
總而言之，CD8載體能夠高效地轉導未經活化之T細胞，且未經活化之T細胞之轉導引起所得細胞之更高的殺傷效率。 實例 3 ： 在幼年雌性 豚尾獼猴 (Nemestrina macaques) 中 藉由靜脈內輸注進行之 CD8-SFFV-CD20CAR 之 5 週及 7 週單次劑量藥物動力學及藥效學研究
此實例描述經靶向CD8+ T細胞之抗CD8結合蛋白質假模式化以遞送CD20 CAR轉基因之慢病毒載體(CD8-SFFV-CD20CAR)。CD20CAR含有針對CD20之抗scFv及細胞內信號傳導域，該細胞內信號傳導域含有4-1BB及CD3-ζ之細胞內組分。此研究之目標為表徵CD8-SFFV-CD20CAR轉導T細胞及耗減正常、健康CD20+ B細胞之能力、病毒整合之生物分佈及靜脈內投藥之耐受性。經1小時向八隻幼年雌性豚尾獼猴靜脈內投與7.69E8 IU/kg之單次最大可行劑量之CD8-SFFV-CD20CAR (n=6)或10 ml/kg之生理鹽水對照物(n=2)。在基線(第-35、-28及-21天)時評估動物中之B及T細胞之出現率且評估血液學及臨床化學參數。對於參與研究之動物，每天監測臨床觀測結果，每週監測體重、體溫、神經量表(neurological battery)以及血液學及臨床化學之變化。在研究前、第7天及終止時收集CSF樣品。在第3、5、7、10、14、17、21、28及35天對所有動物進行常規血液取樣及流動式細胞測量術免疫表型分型以觀測B及T細胞出現率之變化。在終止時，對動物進行全面屍檢，收集血液、CSF及組織以用於：淋巴組織之流動式細胞測量術、藉由Luminex進行之細胞介素分析、藉由PCR進行之轉基因表現、藉由ddPCR獲得之載體複本數目(VCN)、藉由深度定序獲得之插入位點分佈(ISD)、臨床病理學(血液學及臨床化學)、組織免疫組織化學及解剖組織病理學。
截至第35天之期中資料表明，以7.69E8 IU/kg之單次最大可行劑量進行之CD8-SFFV-CD20CAR之投藥在所有動物中皆良好耐受。在所有取樣時間時，臨床觀測結果(包括神經體徵、體溫或臨床化學值)中不存在化合物相關變化。在第7-10天存在血小板及嗜中性球之短暫極小減少，其在第14天恢復至基線。在兩隻動物中存在血容比之短暫極小降低及相關的網狀紅血球計數之增加，其可能係歸因於重複血液取樣。如 圖 3中所示，流動式細胞測量術分析顯示在6隻經處理之動物中之4隻中，與動物內給藥前相比，在第7天開始且持續至第35天的周邊血液中之CD20+ B細胞之顯著減少。此等資料與抗CD20CAR之預期藥理學活性一致。
自第-35天開始以及在第14及35天時在周邊血液單核細胞(PBMC)中且在終止時在脾及骨髓中，使用ddPCR對來自2隻對照猴子及4隻經處理之猴子的樣品進行初步VCN量測。在第-35天及注射後第35天，觀測PBMC中之VCN，但所有動物中之值皆低於定量極限(BLQ)。作為比較，在脾中，在經處理之動物中偵測到VCN，而對照動物為BLQ。在第35天，在所檢驗之經CD8-SFFV-CD20CAR處理之猴子中，0.04至1.3%之脾細胞(亦即，67至1,970個細胞)含有至少一個插入之複本。
此等資料表明即使在不投與T細胞活化治療之情況下，免疫勝任型動物中之良好耐受且與脾中之細胞中存在載體相關的CD8-SFFV-CD20CAR之中靶活性。 實例 4 ： 小鼠中之用於腫瘤控制之人類 PBMC 之離體給藥
為了評估病毒載體之離體給藥之可行性，使人類PBMC與編碼抗CD19 CAR之病毒載體顆粒接觸，且在與病毒載體之初始接觸之後4小時內向攜帶表現CD19之Nalm6腫瘤的小鼠投與經轉導之細胞。
對於病毒載體製備，用表現病毒載體蛋白質(gag/pol，rev)之質體及編碼抗CD19 CAR (含有FMC63衍生之scFv細胞外抗原結合域，及含有4-1BB共刺激性信號傳導域及CD3ζ信號傳導域之細胞內信號傳導域)之轉移質體轉染HEK293生產細胞。以表現尼帕F蛋白質及再靶向CD8之尼帕G蛋白之質體形式提供包膜蛋白質(參見US 2019/0144885，以引用之方式併入本文中)。再靶向CD8之尼帕G (NiV-G)蛋白質含有抗CD8 scFv，其呈與例示性NiV-G序列GcΔ34之融合物形式(Bender等人, 2016 PLoS Pathol 12(6):e1005641；闡述於SEQ ID NO:17中)，且尼帕F (NiV-F)蛋白質為例示性NiV-F序列NivFdel22 (SEQ ID NO:19；或不具有信號序列之SEQ ID NO:21；Bender等人, 2016 PLoS)。在病毒載體製備之後，將細胞培養物離心以使細胞集結粒化且收集含有粗病毒之上清液。
向NSG小鼠靜脈內輸注NALM6腫瘤細胞(1×10 6個腫瘤細胞/小鼠)且使腫瘤生長約72小時。所投與之腫瘤細胞經進一步工程改造以含有螢光素酶標記物。將來自健康供體之約6×10 7個人類PBMC解凍且與病毒載體一起培育，使得細胞以1×10 6IU至1×10 7IU範圍內之劑量暴露於載體。在培育4小時之後，經轉染之PBMC在500×g下集結粒化5分鐘，再懸浮於1200 µL生理鹽水中，且接著在D-1直接注射至小鼠中。在研究D1開始進行小鼠之活體成像，且在D14及D28收集用於流式細胞分析之血液。在研究D28將動物處死以研究脾。
在研究期間經由流動式細胞測量術以總通量(Total Flux)形式監測腫瘤細胞之數目。對於各ECD病毒載體劑量，如藉由總通量監測之腫瘤生長展示於 圖 4A中。亦描繪若干對照物，包括僅腫瘤型對照物、僅PBMC型對照物以及未經處理之成像對照物。如所展示，與未藉由ECD投與病毒載體之腫瘤對照小鼠相比，在此模型中，各病毒載體劑量減少腫瘤生長。
在小鼠之周邊血液中偵測到表現CAR之CD8+ T細胞，如由 圖 4B中所描繪之來自研究D14的周邊血液中之CD8+細胞之流式細胞分析所展示。未在來自對照小鼠之周邊血液之T細胞上偵測到CAR。此等結果支持藉由ECD投與病毒載體可實現將轉基因遞送至目標細胞。
本發明不意欲限於所揭示之特定實施例之範疇，提供該等實施例以例如說明本發明之各種態樣。對組合物及方法之各種修改將由本文中之描述及教示而變得顯而易見。此類變化形式可在不偏離本發明之真實範疇及精神的情況下實踐且意欲在本發明之範疇內。 XI. 序列
# 序列 說明
1 MGPAENKKVR FENTTSDKGK IPSKVIKSYY GTMDIKKINE GLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PEICWEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN QTAENPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QC NiVG蛋白連接醣蛋白(602 aa)
2 MMADSKLVSLNNNLSGKIKDQGKVIKNYYGTMDIKKINDGLLDSKILGAFNTVIALLGSIIIIVMNIMIIQNYTRTTDNQALIKESLQSVQQQIKALTDKIGTEIGPKVSLIDTSSTITIPANIGLLGSKISQSTSSINENVNDKCKFTLPPLKIHECNISCPNPLPFREYRPISQGVSDLVGLPNQICLQKTTSTILKPRLISYTLPINTREGVCITDPLLAVDNGFFAYSHLEKIGSCTRGIAKQRIIGVGEVLDRGDKVPSMFMTNVWTPPNPSTIHHCSSTYHEDFYYTLCAVSHVGDPILNSTSWTESLSLIRLAVRPKSDSGDYNQKYIAITKVERGKYDKVMPYGPSGIKQGDTLYFPAVGFLPRTEFQYNDSNCPIIHCKYSKAENCRLSMGVNSKSHYILRSGLLKYNLSLGGDIILQFIEIADNRLTIGSPSKIYNSLGQPVFYQASYSWDTMIKLGDVDTVDPLRVQWRNNSVISRPGQSQCPRFNVCPEVCWEGTYNDAFLIDRLNWVSAGVYLNSNQTAENPVFAVFKDNEILYQVPLAEDDTNAQKTITDCFLLENVIWCISLVEIYDTGDSVIRPKLFAVKIPAQCSES 亨德拉病毒G蛋白
3 MADSKLVSLNNNLSGKIKDQGKVIKNYYGTMDIKKINDGLLDSKILGAFNTVIALLGSIIIIVMNIMIIQNYTRTTDNQALIKESLQSVQQQIKALTDKIGTEIGPKVSLIDTSSTITIPANIGLLGSKISQSTSSINENVNDKCKFTLPPLKIHECNISCPNPLPFREYRPISQGVSDLVGLPNQICLQKTTSTILKPRLISYTLPINTREGVCITDPLLAVDNGFFAYSHLEKIGSCTRGIAKQRIIGVGEVLDRGDKVPSMFMTNVWTPPNPSTIHHCSSTYHEDFYYTLCAVSHVGDPILNSTSWTESLSLIRLAVRPKSDSGDYNQKYIAITKVERGKYDKVMPYGPSGIKQGDTLYFPAVGFLPRTEFQYNDSNCPIIHCKYSKAENCRLSMGVNSKSHYILRSGLLKYNLSLGGDIILQFIEIADNRLTIGSPSKIYNSLGQPVFYQASYSWDTMIKLGDVDTVDPLRVQWRNNSVISRPGQSQCPRFNVCPEVCWEGTYNDAFLIDRLNWVSAGVYLNSNQTAENPVFAVFKDNEILYQVPLAEDDTNAQKTITDCFLLENVIWCISLVEIYDTGDSVIRPKLFAVKIPAQCSES 亨德拉病毒G蛋白，不具有Met
4 MPAENKKVRFENTTSDKGKIPSKVIKSYYGTMDIKKINEGLLDSKILSAFNTVIALLGSIVIIVMNIMIIQNYTRSTDNQAVIKDALQGIQQQIKGLADKIGTEIGPKVSLIDTSSTITIPANIGLLGSKISQSTASINENVNEKCKFTLPPLKIHECNISCPNPLPFREYRPQTEGVSNLVGLPNNICLQKTSNQILKPKLISYTLPVVGQSGTCITDPLLAMDEGYFAYSHLERIGSCSRGVSKQRIIGVGEVLDRGDEVPSLFMTNVWTPPNPNTVYHCSAVYNNEFYYVLCAVSTVGDPILNSTYWSGSLMMTRLAVKPKSNGGGYNQHQLALRSIEKGRYDKVMPYGPSGIKQGDTLYFPAVGFLVRTEFKYNDSNCPITKCQYSKPENCRLSMGIRPNSHYILRSGLLKYNLSDGENPKVVFIEISDQRLSIGSPSKIYDSLGQPVFYQASFSWDTMIKFGDVLTVNPLVVNWRNNTVISRPGQSQCPRFNTCPEICWEGVYNDAFLIDRINWISAGVFLDSNQTAENPVFTVFKDNEILYRAQLASEDTNAQKTITNCFLLKNKIWCISLVEIYDTGDNVIRPKLFAVKIPEQCT 尼帕病毒G蛋白
5 PAENKKVRFENTTSDKGKIPSKVIKSYYGTMDIKKINEGLLDSKILSAFNTVIALLGSIVIIVMNIMIIQNYTRSTDNQAVIKDALQGIQQQIKGLADKIGTEIGPKVSLIDTSSTITIPANIGLLGSKISQSTASINENVNEKCKFTLPPLKIHECNISCPNPLPFREYRPQTEGVSNLVGLPNNICLQKTSNQILKPKLISYTLPVVGQSGTCITDPLLAMDEGYFAYSHLERIGSCSRGVSKQRIIGVGEVLDRGDEVPSLFMTNVWTPPNPNTVYHCSAVYNNEFYYVLCAVSTVGDPILNSTYWSGSLMMTRLAVKPKSNGGGYNQHQLALRSIEKGRYDKVMPYGPSGIKQGDTLYFPAVGFLVRTEFKYNDSNCPITKCQYSKPENCRLSMGIRPNSHYILRSGLLKYNLSDGENPKVVFIEISDQRLSIGSPSKIYDSLGQPVFYQASFSWDTMIKFGDVLTVNPLVVNWRNNTVISRPGQSQCPRFNTCPEICWEGVYNDAFLIDRINWISAGVFLDSNQTAENPVFTVFKDNEILYRAQLASEDTNAQKTITNCFLLKNKIWCISLVEIYDTGDNVIRPKLFAVKIPEQCT 尼帕病毒G蛋白(不具有Met)
6 MLSQLQKNYLDNSNQQGDKMNNPDKKLSVNFNPLELDKGQKDLNKSYYVKNKNYNVSNLLNESLHDIKFCIYCIFSLLIIITIINIITISIVITRLKVHEENNGMESPNLQSIQDSLSSLTNMINTEITPRIGILVTATSVTLSSSINYVGTKTNQLVNELKDYITKSCGFKVPELKLHECNISCADPKISKSAMYSTNAYAELAGPPKIFCKSVSKDPDFRLKQIDYVIPVQQDRSICMNNPLLDISDGFFTYIHYEGINSCKKSDSFKVLLSHGEIVDRGDYRPSLYLLSSHYHPYSMQVINCVPVTCNQSSFVFCHISNNTKTLDNSDYSSDEYYITYFNGIDRPKTKKIPINNMTADNRYIHFTFSGGGGVCLGEEFIIPVTTVINTDVFTHDYCESFNCSVQTGKSLKEICSESLRSPTNSSRYNLNGIMIISQNNMTDFKIQLNGITYNKLSFGSPGRLSKTLGQVLYYQSSMSWDTYLKAGFVEKWKPFTPNWMNNTVISRPNQGNCPRYHKCPEICYGGTYNDIAPLDLGKDMYVSVILDSDQLAENPEITVFNSTTILYKERVSKDELNTRSTTTSCFLFLDEPWCISVLETNRFNGKSIRPEIYSYKIPKYC 賽得病毒G蛋白
7 LSQLQKNYLDNSNQQGDKMNNPDKKLSVNFNPLELDKGQKDLNKSYYVKNKNYNVSNLLNESLHDIKFCIYCIFSLLIIITIINIITISIVITRLKVHEENNGMESPNLQSIQDSLSSLTNMINTEITPRIGILVTATSVTLSSSINYVGTKTNQLVNELKDYITKSCGFKVPELKLHECNISCADPKISKSAMYSTNAYAELAGPPKIFCKSVSKDPDFRLKQIDYVIPVQQDRSICMNNPLLDISDGFFTYIHYEGINSCKKSDSFKVLLSHGEIVDRGDYRPSLYLLSSHYHPYSMQVINCVPVTCNQSSFVFCHISNNTKTLDNSDYSSDEYYITYFNGIDRPKTKKIPINNMTADNRYIHFTFSGGGGVCLGEEFIIPVTTVINTDVFTHDYCESFNCSVQTGKSLKEICSESLRSPTNSSRYNLNGIMIISQNNMTDFKIQLNGITYNKLSFGSPGRLSKTLGQVLYYQSSMSWDTYLKAGFVEKWKPFTPNWMNNTVISRPNQGNCPRYHKCPEICYGGTYNDIAPLDLGKDMYVSVILDSDQLAENPEITVFNSTTILYKERVSKDELNTRSTTTSCFLFLDEPWCISVLETNRFNGKSIRPEIYSYKIPKYC 賽得病毒G蛋白(不具有Met)
8 MPQKTVEFINMNSPLERGVSTLSDKKTLNQSKITKQGYFGLGSHSERNWKKQKNQNDHYMTVSTMILEILVVLGIMFNLIVLTMVYYQNDNINQRMAELTSNITVLNLNLNQLTNKIQREIIPRITLIDTATTITIPSAITYILATLTTRISELLPSINQKCEFKTPTLVLNDCRINCTPPLNPSDGVKMSSLATNLVAHGPSPCRNFSSVPTIYYYRIPGLYNRTALDERCILNPRLTISSTKFAYVHSEYDKNCTRGFKYYELMTFGEILEGPEKEPRMFSRSFYSPTNAVNYHSCTPIVTVNEGYFLCLECTSSDPLYKANLSNSTFHLVILRHNKDEKIVSMPSFNLSTDQEYVQIIPAEGGGTAESGNLYFPCIGRLLHKRVTHPLCKKSNCSRTDDESCLKSYYNQGSPQHQVVNCLIRIRNAQRDNPTWDVITVDLTNTYPGSRSRIFGSFSKPMLYQSSVSWHTLLQVAEITDLDKYQLDWLDTPYISRPGGSECPFGNYCPTVCWEGTYNDVYSLTPNNDLFVTVYLKSEQVAENPYFAIFSRDQILKEFPLDAWISSARTTTISCFMFNNEIWCIAALEITRLNDDIIRPIYYSFWLPTDCRTPYPHTGKMTRVPLRSTYNY 蝙蝠副黏液病毒G蛋白
9 PQKTVEFINMNSPLERGVSTLSDKKTLNQSKITKQGYFGLGSHSERNWKKQKNQNDHYMTVSTMILEILVVLGIMFNLIVLTMVYYQNDNINQRMAELTSNITVLNLNLNQLTNKIQREIIPRITLIDTATTITIPSAITYILATLTTRISELLPSINQKCEFKTPTLVLNDCRINCTPPLNPSDGVKMSSLATNLVAHGPSPCRNFSSVPTIYYYRIPGLYNRTALDERCILNPRLTISSTKFAYVHSEYDKNCTRGFKYYELMTFGEILEGPEKEPRMFSRSFYSPTNAVNYHSCTPIVTVNEGYFLCLECTSSDPLYKANLSNSTFHLVILRHNKDEKIVSMPSFNLSTDQEYVQIIPAEGGGTAESGNLYFPCIGRLLHKRVTHPLCKKSNCSRTDDESCLKSYYNQGSPQHQVVNCLIRIRNAQRDNPTWDVITVDLTNTYPGSRSRIFGSFSKPMLYQSSVSWHTLLQVAEITDLDKYQLDWLDTPYISRPGGSECPFGNYCPTVCWEGTYNDVYSLTPNNDLFVTVYLKSEQVAENPYFAIFSRDQILKEFPLDAWISSARTTTISCFMFNNEIWCIAALEITRLNDDIIRPIYYSFWLPTDCRTPYPHTGKMTRVPLRSTYNY 蝙蝠副黏液病毒G蛋白(不具有Met)
10 MATNRDNTITSAEVSQEDKVKKYYGVETAEKVADSISGNKVFILMNTLLILTGAIITITLNITNLTAAKSQQNMLKIIQDDVNAKLEMFVNLDQLVKGEIKPKVSLINTAVSVSIPGQISNLQTKFLQKYVYLEESITKQCTCNPLSGIFPTSGPTYPPTDKPDDDTTDDDKVDTTIKPIEYPKPDGCNRTGDHFTMEPGANFYTVPNLGPASSNSDECYTNPSFSIGSSIYMFSQEIRKTDCTAGEILSIQIVLGRIVDKGQQGPQASPLLVWAVPNPKIINSCAVAAGDEMGWVLCSVTLTAASGEPIPHMFDGFWLYKLEPDTEVVSYRITGYAYLLDKQYDSVFIGKGGGIQKGNDLYFQMYGLSRNRQSFKALCEHGSCLGTGGGGYQVLCDRAVMSFGSEESLITNAYLKVNDLASGKPVIIGQTFPPSDSYKGSNGRMYTIGDKYGLYLAPSSWNRYLRFGITPDISVRSTTWLKSQDPIMKILSTCTNTDRDMCPEICNTRGYQDIFPLSEDSEYYTYIGITPNNGGTKNFVAVRDSDGHIASIDILQNYYSITSATISCFMYKDEIWCIAITEGKKQKDNPQRIYAHSYKIRQMCYNMKSATVTVGNAKNITIRRY 墨江病毒，潼關1 G蛋白
11 ATNRDNTITSAEVSQEDKVKKYYGVETAEKVADSISGNKVFILMNTLLILTGAIITITLNITNLTAAKSQQNMLKIIQDDVNAKLEMFVNLDQLVKGEIKPKVSLINTAVSVSIPGQISNLQTKFLQKYVYLEESITKQCTCNPLSGIFPTSGPTYPPTDKPDDDTTDDDKVDTTIKPIEYPKPDGCNRTGDHFTMEPGANFYTVPNLGPASSNSDECYTNPSFSIGSSIYMFSQEIRKTDCTAGEILSIQIVLGRIVDKGQQGPQASPLLVWAVPNPKIINSCAVAAGDEMGWVLCSVTLTAASGEPIPHMFDGFWLYKLEPDTEVVSYRITGYAYLLDKQYDSVFIGKGGGIQKGNDLYFQMYGLSRNRQSFKALCEHGSCLGTGGGGYQVLCDRAVMSFGSEESLITNAYLKVNDLASGKPVIIGQTFPPSDSYKGSNGRMYTIGDKYGLYLAPSSWNRYLRFGITPDISVRSTTWLKSQDPIMKILSTCTNTDRDMCPEICNTRGYQDIFPLSEDSEYYTYIGITPNNGGTKNFVAVRDSDGHIASIDILQNYYSITSATISCFMYKDEIWCIAITEGKKQKDNPQRIYAHSYKIRQMCYNMKSATVTVGNAKNITIRRY 墨江病毒，潼關1 G蛋白(不具有Met)
12 MKVR FENTTSDKGK IPSKVIKSYY GTMDIKKINE GLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PEICWEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN QTAENPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QCT 經截短之NiVG蛋白連接醣蛋白Δ5
13 MSKVIKSYY GTMDIKKINE GLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PEICWEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN QTAENPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QCT 經截短之NiVG蛋白連接醣蛋白Δ20
14 MSYY GTMDIKKINE GLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PEICWEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN QTAENPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QCT 經截短之NiVG蛋白連接醣蛋白Δ25
15 ILHY EKLSKIGLVK GVTRKYKIKS NPLTKDIVIK MIPNVSNMSQ CTGSVMENYK TRLNGILTPI KGALEIYKNQ THDLVGDVRL AGVIMAGVAI GIATAAQITA GVALYEAMKN ADNINKLKSS IESTNEAVVK LQETAEKTVY VLTALQDYIN TNLVPTIDKI SCKQTELSLD LALSKYLSDL LFVFGPNLQD PVSNSMTIQA ISQAFGGNYE TLLRTLGYAT EDFDDLLESD SITGQIIYVD LSSYYIIVRV YFPILTEIQQ AYIQELLPVS FNNDNSEWIS IVPNFILVRN TLISNIEIGF CLITKRSVIC NQDYATPMTN NMRECLTGST EKCPRELVVS SHVPRFALSN GVLFANCISV TCQCQTTGRA ISQSGEQTLL MIDNTTCPTA VLGNVIISLG KYLGSVNYNS EGIAIGPPVF TDKVDISSQI SSMNQSLQQS KDYIKEAQRL LDTVNPSLIS MLSMIILYVL SIASLCIGLI TFISFIIVEK KRNTGT 尼帕病毒NiV-F F0 T234截短(aa 525-544)及N-連接之醣基化位點上之突變
16 MVVILDKRCY CNLLILILMI SECSVGILHY EKLSKIGLVK GVTRKYKIKS NPLTKDIVIK MIPNVSNMSQ CTGSVMENYK TRLNGILTPI KGALEIYKNN THDLVGDVRL AGVIMAGVAI GIATAAQITA GVALYEAMKN ADNINKLKSS IESTNEAVVK LQETAEKTVY VLTALQDYIN TNLVPTIDKI SCKQTELSLD LALSKYLSDL LFVFGPNLQD PVSNSMTIQA ISQAFGGNYE TLLRTLGYAT EDFDDLLESD SITGQIIYVD LSSYYIIVRV YFPILTEIQQ AYIQELLPVS FNNDNSEWIS IVPNFILVRN TLISNIEIGF CLITKRSVIC NQDYATPMTN NMRECLTGST EKCPRELVVS SHVPRFALSN GVLFANCISV TCQCQTTGRA ISQSGEQTLL MIDNTTCPTA VLGNVIISLG KYLGSVNYNS EGIAIGPPVF TDKVDISSQI SSMNQSLQQS KDYIKEAQRL LDTVNPSLIS MLSMIILYVL SIASLCIGLI TFISFIIVEK KRNT 細胞質尾區處之經截短之NiV融合醣蛋白(FcΔ22)(具有信號序列)
17 MKKINEGLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PAICAEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN ATAANPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QCT NiVG蛋白連接醣蛋白 經截短及突變 (E501A、W504A、Q530A、E533A) NiV G蛋白(Gc Δ 34)
18 KKINEGLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PAICAEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN ATAANPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QCT NiVG蛋白連接醣蛋白 經截短及突變 (E501A、W504A、Q530A、E533A) NiV G蛋白(Gc Δ 34) 不具有N端甲硫胺酸
19 MVVILDKRCY CNLLILILMI SECSVGILHY EKLSKIGLVK GVTRKYKIKS NPLTKDIVIK MIPNVSNMSQ CTGSVMENYK TRLNGILTPI KGALEIYKNN THDLVGDVRL AGVIMAGVAI GIATAAQITA GVALYEAMKN ADNINKLKSS IESTNEAVVK LQETAEKTVY VLTALQDYIN TNLVPTIDKI SCKQTELSLD LALSKYLSDL LFVFGPNLQD PVSNSMTIQA ISQAFGGNYE TLLRTLGYAT EDFDDLLESD SITGQIIYVD LSSYYIIVRV YFPILTEIQQ AYIQELLPVS FNNDNSEWIS IVPNFILVRN TLISNIEIGF CLITKRSVIC NQDYATPMTN NMRECLTGST EKCPRELVVS SHVPRFALSN GVLFANCISV TCQCQTTGRA ISQSGEQTLL MIDNTTCPTA VLGNVIISLG KYLGSVNYNS EGIAIGPPVF TDKVDISSQI SSMNQSLQQS KDYIKEAQRL LDTVNPSLIS MLSMIILYVL SIASLCIGLI TFISFIIVEK KRNT 細胞質尾區處之經截短之NiV融合醣蛋白(FcΔ22)(具有信號序列)
20 ILHY EKLSKIGLVK GVTRKYKIKS NPLTKDIVIK MIPNVSNMSQ CTGSVMENYK TRLNGILTPI KGALEIYKNN THDLVGDVRL AGVIMAGVAI GIATAAQITA GVALYEAMKN ADNINKLKSS IESTNEAVVK LQETAEKTVY VLTALQDYIN TNLVPTIDKI SCKQTELSLD LALSKYLSDL LFVFGPNLQD PVSNSMTIQA ISQAFGGNYE TLLRTLGYAT EDFDDLLESD SITGQIIYVD LSSYYIIVRV YFPILTEIQQ AYIQELLPVS FNNDNSEWIS IVPNFILVRN TLISNIEIGF CLITKRSVIC NQDYATPMTN NMRECLTGST EKCPRELVVS SHVPRFALSN GVLFANCISV TCQCQTTGRA ISQSGEQTLL MIDNTTCPTA VLGNVIISLG KYLGSVNYNS EGIAIGPPVF TDKVDISSQI SSMNQSLQQS KDYIKEAQRL LDTVNPSLIS MLSMIILYVL SIASLCIGLI TFISFIIVEK KRNTGT 尼帕病毒NiV-F F0 T234截短(aa 525-544)
21 ILHY EKLSKIGLVK GVTRKYKIKS NPLTKDIVIK MIPNVSNMSQ CTGSVMENYK TRLNGILTPI KGALEIYKNN THDLVGDVRL AGVIMAGVAI GIATAAQITA GVALYEAMKN ADNINKLKSS IESTNEAVVK LQETAEKTVY VLTALQDYIN TNLVPTIDKI SCKQTELSLD LALSKYLSDL LFVFGPNLQD PVSNSMTIQA ISQAFGGNYE TLLRTLGYAT EDFDDLLESD SITGQIIYVD LSSYYIIVRV YFPILTEIQQ AYIQELLPVS FNNDNSEWIS IVPNFILVRN TLISNIEIGF CLITKRSVIC NQDYATPMTN NMRECLTGST EKCPRELVVS SHVPRFALSN GVLFANCISV TCQCQTTGRA ISQSGEQTLL MIDNTTCPTA VLGNVIISLG KYLGSVNYNS EGIAIGPPVF TDKVDISSQI SSMNQSLQQS KDYIKEAQRL LDTVNPSLIS MLSMIILYVL SIASLCIGLI TFISFIIVEK KRNT 細胞質尾區處之經截短之成熟NiV融合醣蛋白(FcΔ22)
22 FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PEICWEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN QTAENPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QC NivG蛋白連接醣蛋白    不具有細胞質尾區    Uniprot Q9IH62
23 MMADSKLVSL NNNLSGKIKD QGKVIKNYYG TMDIKKINDG LLDSKILGAF NTVIALLGSI IIIVMNIMII QNYTRTTDNQ ALIKESLQSV QQQIKALTDK IGTEIGPKVS LIDTSSTITI PANIGLLGSK ISQSTSSINE NVNDKCKFTL PPLKIHECNI SCPNPLPFRE YRPISQGVSD LVGLPNQICL QKTTSTILKP RLISYTLPIN TREGVCITDP LLAVDNGFFA YSHLEKIGSC TRGIAKQRII GVGEVLDRGD KVPSMFMTNV WTPPNPSTIH HCSSTYHEDF YYTLCAVSHV GDPILNSTSW TESLSLIRLA VRPKSDSGDY NQKYIAITKV ERGKYDKVMP YGPSGIKQGD TLYFPAVGFL PRTEFQYNDS NCPIIHCKYS KAENCRLSMG VNSKSHYILR SGLLKYNLSL GGDIILQFIE IADNRLTIGS PSKIYNSLGQ PVFYQASYSW DTMIKLGDVD TVDPLRVQWR NNSVISRPGQ SQCPRFNVCP EVCWEGTYND AFLIDRLNWV SAGVYLNSNQ TAENPVFAVF KDNEILYQVP LAEDDTNAQK TITDCFLLEN VIWCISLVEI YDTGDSVIRP KLFAVKIPAQ CSES 亨德拉病毒G蛋白Uniprot O89343   
24 MADSKLVSL NNNLSGKIKD QGKVIKNYYG TMDIKKINDG LLDSKILGAF NTVIALLGSI IIIVMNIMII QNYTRTTDNQ ALIKESLQSV QQQIKALTDK IGTEIGPKVS LIDTSSTITI PANIGLLGSK ISQSTSSINE NVNDKCKFTL PPLKIHECNI SCPNPLPFRE YRPISQGVSD LVGLPNQICL QKTTSTILKP RLISYTLPIN TREGVCITDP LLAVDNGFFA YSHLEKIGSC TRGIAKQRII GVGEVLDRGD KVPSMFMTNV WTPPNPSTIH HCSSTYHEDF YYTLCAVSHV GDPILNSTSW TESLSLIRLA VRPKSDSGDY NQKYIAITKV ERGKYDKVMP YGPSGIKQGD TLYFPAVGFL PRTEFQYNDS NCPIIHCKYS KAENCRLSMG VNSKSHYILR SGLLKYNLSL GGDIILQFIE IADNRLTIGS PSKIYNSLGQ PVFYQASYSW DTMIKLGDVD TVDPLRVQWR NNSVISRPGQ SQCPRFNVCP EVCWEGTYND AFLIDRLNWV SAGVYLNSNQ TAENPVFAVF KDNEILYQVP LAEDDTNAQK TITDCFLLEN VIWCISLVEI YDTGDSVIRP KLFAVKIPAQ CSES 亨德拉病毒G蛋白Uniprot O89343 不具有N端甲硫胺酸   
25 FNTVIALLGSI IIIVMNIMII QNYTRTTDNQ ALIKESLQSV QQQIKALTDK IGTEIGPKVS LIDTSSTITI PANIGLLGSK ISQSTSSINE NVNDKCKFTL PPLKIHECNI SCPNPLPFRE YRPISQGVSD LVGLPNQICL QKTTSTILKP RLISYTLPIN TREGVCITDP LLAVDNGFFA YSHLEKIGSC TRGIAKQRII GVGEVLDRGD KVPSMFMTNV WTPPNPSTIH HCSSTYHEDF YYTLCAVSHV GDPILNSTSW TESLSLIRLA VRPKSDSGDY NQKYIAITKV ERGKYDKVMP YGPSGIKQGD TLYFPAVGFL PRTEFQYNDS NCPIIHCKYS KAENCRLSMG VNSKSHYILR SGLLKYNLSL GGDIILQFIE IADNRLTIGS PSKIYNSLGQ PVFYQASYSW DTMIKLGDVD TVDPLRVQWR NNSVISRPGQ SQCPRFNVCP EVCWEGTYND AFLIDRLNWV SAGVYLNSNQ TAENPVFAVF KDNEILYQVP LAEDDTNAQK TITDCFLLEN VIWCISLVEI YDTGDSVIRP KLFAVKIPAQ CSES 亨德拉病毒G蛋白Uniprot O89343 不具有細胞質尾區
26 FNTVIALLGSI IIIVMNIMII QNYTRTTDNQ ALIKESLQSV QQQIKALTDK IGTEIGPKVS LIDTSSTITI PANIGLLGSK ISQSTSSINE NVNDKCKFTL PPLKIHECNI SCPNPLPFRE YRPISQGVSD LVGLPNQICL QKTTSTILKP RLISYTLPIN TREGVCITDP LLAVDNGFFA YSHLEKIGSC TRGIAKQRII GVGEVLDRGD KVPSMFMTNV WTPPNPSTIH HCSSTYHEDF YYTLCAVSHV GDPILNSTSW TESLSLIRLA VRPKSDSGDY NQKYIAITKV ERGKYDKVMP YGPSGIKQGD TLYFPAVGFL PRTEFQYNDS NCPIIHCKYS KAENCRLSMG VNSKSHYILR SGLLKYNLSL GGDIILQFIE IADNRLTIGS PSKIYNSLGQ PVFYQASYSW DTMIKLGDVD TVDPLRVQWR NNSVISRPGQ SQCPRFNVCP EVCWEGTYND AFLIDRLNWV SAGVYLNSNQ TAENPVFAVF KDNEILYQVP LAEDDTNAQK TITDCFLLEN VIWCISLVEI YDTGDSVIRP KLFAVKIPAQ CSES 亨德拉病毒G蛋白Uniprot O89343 不具有細胞質尾區
27 MGPAENKKVR FENTTSDKGK IPSKVIKSYY GTMDIKKINE GLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PEICWEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN QTAENPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QC NiVG蛋白連接醣蛋白(602 aa)   
28 MATQEVRLKCLLCGIIVLVLSLEGLGILHYEKLSKIGLVKGITRKYKIKSNPLTKDIVIKMIPNVSNVSKCTGTVMENYKSRLTGILSPIKGAIELYNNNTHDLVGDVKLAGVVMAGIAIGIATAAQITAGVALYEAMKNADNINKLKSSIESTNEAVVKLQETAEKTVYVLTALQDYINTNLVPTIDQISCKQTELALDLALSKYLSDLLFVFGPNLQDPVSNSMTIQAISQAFGGNYETLLRTLGYATEDFDDLLESDSIAGQIVYVDLSSYYIIVRVYFPILTEIQQAYVQELLPVSFNNDNSEWISIVPNFVLIRNTLISNIEVKYCLITKKSVICNQDYATPMTASVRECLTGSTDKCPRELVVSSHVPRFALSGGVLFANCISVTCQCQTTGRAISQSGEQTLLMIDNTTCTTVVLGNIIISLGKYLGSINYNSESIAVGPPVYTDKVDISSQISSMNQSLQQSKDYIKEAQKILDTVNPSLISMLSMIILYVLSIAALCIGLITFISFVIVEKKRGNYSRLDDRQVRPVSNGDLYYIGT    亨德拉病毒F蛋白質   
29 ILHYEKLSKIGLVKGITRKYKIKSNPLTKDIVIKMIPNVSNVSKCTGTVMENYKSRLTGILSPIKGAIELYNNNTHDLVGDVKLAGVVMAGIAIGIATAAQITAGVALYEAMKNADNINKLKSSIESTNEAVVKLQETAEKTVYVLTALQDYINTNLVPTIDQISCKQTELALDLALSKYLSDLLFVFGPNLQDPVSNSMTIQAISQAFGGNYETLLRTLGYATEDFDDLLESDSIAGQIVYVDLSSYYIIVRVYFPILTEIQQAYVQELLPVSFNNDNSEWISIVPNFVLIRNTLISNIEVKYCLITKKSVICNQDYATPMTASVRECLTGSTDKCPRELVVSSHVPRFALSGGVLFANCISVTCQCQTTGRAISQSGEQTLLMIDNTTCTTVVLGNIIISLGKYLGSINYNSESIAVGPPVYTDKVDISSQISSMNQSLQQSKDYIKEAQKILDTVNPSLISMLSMIILYVLSIAALCIGLITFISFVIVEKKRGNYSRLDDRQVRPVSNGDLYYIGT 亨德拉病毒F蛋白質，不具有信號序列
30 MVVILDKRCYCNLLILILMISECSVGILHYEKLSKIGLVKGVTRKYKIKSNPLTKDIVIKMIPNVSNMSQCTGSVMENYKTRLNGILTPIKGALEIYKNNTHDLVGDVRLAGVIMAGVAIGIATAAQITAGVALYEAMKNADNINKLKSSIESTNEAVVKLQETAEKTVYVLTALQDYINTNLVPTIDKISCKQTELSLDLALSKYLSDLLFVFGPNLQDPVSNSMTIQAISQAFGGNYETLLRTLGYATEDFDDLLESDSITGQIIYVDLSSYYIIVRVYFPILTEIQQAYIQELLPVSFNNDNSEWISIVPNFILVRNTLISNIEIGFCLITKRSVICNQDYATPMTNNMRECLTGSTEKCPRELVVSSHVPRFALSNGVLFANCISVTCQCQTTGRAISQSGEQTLLMIDNTTCPTAVLGNVIISLGKYLGSVNYNSEGIAIGPPVFTDKVDISSQISSMNQSLQQSKDYIKEAQRLLDTVNPSLISMLSMIILYVLSIASLCIGLITFISFIIVEKKRNTYSRLEDRRVRPTSSGDLYYIGT 尼帕病毒F蛋白質
31 ILHYEKLSKIGLVKGVTRKYKIKSNPLTKDIVIKMIPNVSNMSQCTGSVMENYKTRLNGILTPIKGALEIYKNNTHDLVGDVRLAGVIMAGVAIGIATAAQITAGVALYEAMKNADNINKLKSSIESTNEAVVKLQETAEKTVYVLTALQDYINTNLVPTIDKISCKQTELSLDLALSKYLSDLLFVFGPNLQDPVSNSMTIQAISQAFGGNYETLLRTLGYATEDFDDLLESDSITGQIIYVDLSSYYIIVRVYFPILTEIQQAYIQELLPVSFNNDNSEWISIVPNFILVRNTLISNIEIGFCLITKRSVICNQDYATPMTNNMRECLTGSTEKCPRELVVSSHVPRFALSNGVLFANCISVTCQCQTTGRAISQSGEQTLLMIDNTTCPTAVLGNVIISLGKYLGSVNYNSEGIAIGPPVFTDKVDISSQISSMNQSLQQSKDYIKEAQRLLDTVNPSLISMLSMIILYVLSIASLCIGLITFISFIIVEKKRNTYSRLEDRRVRPTSSGDLYYIGT 尼帕病毒F蛋白質，不具有信號序列
32 MSNKRTTVLIIISYTLFYLNNAAIVGFDFDKLNKIGVVQGRVLNYKIKGDPMTKDLVLKFIPNIVNITECVREPLSRYNETVRRLLLPIHNMLGLYLNNTNAKMTGLMIAGVIMGGIAIGIATAAQITAGFALYEAKKNTENIQKLTDSIMKTQDSIDKLTDSVGTSILILNKLQTYINNQLVPNLELLSCRQNKIEFDLMLTKYLVDLMTVIGPNINNPVNKDMTIQSLSLLFDGNYDIMMSELGYTPQDFLDLIESKSITGQIIYVDMENLYVVIRTYLPTLIEVPDAQIYEFNKITMSSNGGEYLSTIPNFILIRGNYMSNIDVATCYMTKASVICNQDYSLPMSQNLRSCYQGETEYCPVEAVIASHSPRFALTNGVIFANCINTICRCQDNGKTITQNINQFVSMIDNSTCNDVMVDKFTIKVGKYMGRKDINNINIQIGPQIIIDKVDLSNEINKMNQSLKDSIFYLREAKRILDSVNISLISPSVQLFLIIISVLSFIILLIIIVYLYCKSKHSYKYNKFIDDPDYYNDYKRERINGKASKSNNIYYVGD 賽得病毒F蛋白質
33 TVLIIISYTLFYLNNAAIVGFDFDKLNKIGVVQGRVLNYKIKGDPMTKDLVLKFIPNIVNITECVREPLSRYNETVRRLLLPIHNMLGLYLNNTNAKMTGLMIAGVIMGGIAIGIATAAQITAGFALYEAKKNTENIQKLTDSIMKTQDSIDKLTDSVGTSILILNKLQTYINNQLVPNLELLSCRQNKIEFDLMLTKYLVDLMTVIGPNINNPVNKDMTIQSLSLLFDGNYDIMMSELGYTPQDFLDLIESKSITGQIIYVDMENLYVVIRTYLPTLIEVPDAQIYEFNKITMSSNGGEYLSTIPNFILIRGNYMSNIDVATCYMTKASVICNQDYSLPMSQNLRSCYQGETEYCPVEAVIASHSPRFALTNGVIFANCINTICRCQDNGKTITQNINQFVSMIDNSTCNDVMVDKFTIKVGKYMGRKDINNINIQIGPQIIIDKVDLSNEINKMNQSLKDSIFYLREAKRILDSVNISLISPSVQLFLIIISVLSFIILLIIIVYLYCKSKHSYKYNKFIDDPDYYNDYKRERINGKASKSNNIYYVGD 賽得病毒F蛋白質，不具有信號序列
34 MALNKNMFSSLFLGYLLVYATTVQSSIHYDSLSKVGVIKGLTYNYKIKGSPSTKLMVVKLIPNIDSVKNCTQKQYDEYKNLVRKALEPVKMAIDTMLNNVKSGNNKYRFAGAIMAGVALGVATAATVTAGIALHRSNENAQAIANMKSAIQNTNEAVKQLQLANKQTLAVIDTIRGEINNNIIPVINQLSCDTIGLSVGIRLTQYYSEIITAFGPALQNPVNTRITIQAISSVFNGNFDELLKIMGYTSGDLYEILHSELIRGNIIDVDVDAGYIALEIEFPNLTLVPNAVVQELMPISYNIDGDEWVTLVPRFVLTRTTLLSNIDTSRCTITDSSVICDNDYALPMSHELIGCLQGDTSKCAREKVVSSYVPKFALSDGLVYANCLNTICRCMDTDTPISQSLGATVSLLDNKRCSVYQVGDVLISVGSYLGDGEYNADNVELGPPIVIDKIDIGNQLAGINQTLQEAEDYIEKSEEFLKGVNPSIITLGSMVVLYIFMILIAIVSVIALVLSIKLTVKGNVVRQQFTYTQHVPSMENINYVSH 墨江病毒，潼關1 F蛋白質
35 IHYDSLSKVGVIKGLTYNYKIKGSPSTKLMVVKLIPNIDSVKNCTQKQYDEYKNLVRKALEPVKMAIDTMLNNVKSGNNKYRFAGAIMAGVALGVATAATVTAGIALHRSNENAQAIANMKSAIQNTNEAVKQLQLANKQTLAVIDTIRGEINNNIIPVINQLSCDTIGLSVGIRLTQYYSEIITAFGPALQNPVNTRITIQAISSVFNGNFDELLKIMGYTSGDLYEILHSELIRGNIIDVDVDAGYIALEIEFPNLTLVPNAVVQELMPISYNIDGDEWVTLVPRFVLTRTTLLSNIDTSRCTITDSSVICDNDYALPMSHELIGCLQGDTSKCAREKVVSSYVPKFALSDGLVYANCLNTICRCMDTDTPISQSLGATVSLLDNKRCSVYQVGDVLISVGSYLGDGEYNADNVELGPPIVIDKIDIGNQLAGINQTLQEAEDYIEKSEEFLKGVNPSIITLGSMVVLYIFMILIAIVSVIALVLSIKLTVKGNVVRQQFTYTQHVPSMENINYVSH 墨江病毒，潼關1 F蛋白質，不具有信號序列
36 MKKKTDNPTISKRGHNHSRGIKSRALLRETDNYSNGLIVENLVRNCHHPSKNNLNYTKTQKRDSTIPYRVEERKGHYPKIKHLIDKSYKHIKRGKRRNGHNGNIITIILLLILILKTQMSEGAIHYETLSKIGLIKGITREYKVKGTPSSKDIVIKLIPNVTGLNKCTNISMENYKEQLDKILIPINNIIELYANSTKSAPGNARFAGVIIAGVALGVAAAAQITAGIALHEARQNAERINLLKDSISATNNAVAELQEATGGIVNVITGMQDYINTNLVPQIDKLQCSQIKTALDISLSQYYSEILTVFGPNLQNPVTTSMSIQAISQSFGGNIDLLLNLLGYTANDLLDLLESKSITGQITYINLEHYFMVIRVYYPIMTTISNAYVQELIKISFNVDGSEWVSLVPSYILIRNSYLSNIDISECLITKNSVICRHDFAMPMSYTLKECLTGDTEKCPREAVVTSYVPRFAISGGVIYANCLSTTCQCYQTGKVIAQDGSQTLMMIDNQTCSIVRIEEILISTGKYLGSQEYNTMHVSVGNPVFTDKLDITSQISNINQSIEQSKFYLDKSKAILDKINLNLIGSVPISILFIIAILSLILSIITFVIVMIIVRRYNKYTPLINSDPSSRRSTIQDVYIIPNPGEHSIRSAARSIDRDRD 蝙蝠副黏液病毒F蛋白質
37 SRALLRETDNYSNGLIVENLVRNCHHPSKNNLNYTKTQKRDSTIPYRVEERKGHYPKIKHLIDKSYKHIKRGKRRNGHNGNIITIILLLILILKTQMSEGAIHYETLSKIGLIKGITREYKVKGTPSSKDIVIKLIPNVTGLNKCTNISMENYKEQLDKILIPINNIIELYANSTKSAPGNARFAGVIIAGVALGVAAAAQITAGIALHEARQNAERINLLKDSISATNNAVAELQEATGGIVNVITGMQDYINTNLVPQIDKLQCSQIKTALDISLSQYYSEILTVFGPNLQNPVTTSMSIQAISQSFGGNIDLLLNLLGYTANDLLDLLESKSITGQITYINLEHYFMVIRVYYPIMTTISNAYVQELIKISFNVDGSEWVSLVPSYILIRNSYLSNIDISECLITKNSVICRHDFAMPMSYTLKECLTGDTEKCPREAVVTSYVPRFAISGGVIYANCLSTTCQCYQTGKVIAQDGSQTLMMIDNQTCSIVRIEEILISTGKYLGSQEYNTMHVSVGNPVFTDKLDITSQISNINQSIEQSKFYLDKSKAILDKINLNLIGSVPISILFIIAILSLILSIITFVIVMIIVRRYNKYTPLINSDPSSRRSTIQDVYIIPNPGEHSIRSAARSIDRDRD 蝙蝠副黏液病毒F蛋白質，不具有信號序列
38 MVVILDKRCYCNLLILILMISECSVG 信號序列
39 ILHYEKLSKIGLVKGVTRKYKIKSNPLTKDIVIKMIPNVSNMSQCTGSVMENYKTRLNGILTPIKGALEIYKNNTHDLVGDVR 尼帕病毒NiV-F F2 (aa 27-109)
40 MVVILDKRCYCNLLILILMISECSVGILHYEKLSKIGLVKGVTRKYKIKSNPLTKDIVIKMIPNVSNMSQCTGSVMENYKTRLNGILTPIKGALEIYKNNTHDLVGDVRLAGVIMAGVAIGIATAAQITAGVALYEAMKNADNINKLKSSIESTNEAVVKLQETAEKTVYVLTALQDYINTNLVPTIDKISCKQTELSLDLALSKYLSDLLFVFGPNLQDPVSNSMTIQAISQAFGGNYETLLRTLGYATEDFDDLLESDSITGQIIYVDLSSYYIIVRVYFPILTEIQQAYIQELLPVSFNNDNSEWISIVPNFILVRNTLISNIEIGFCLITKRSVICNQDYATPMTNNMRECLTGSTEKCPRELVVSSHVPRFALSNGVLFANCISVTCQCQTTGRAISQSGEQTLLMIDNTTCPTAVLGNVIISLGKYLGSVNYNSEGIAIGPPVFTDKVDISSQISSMNQSLQQSKDYIKEAQRLLDTVNPSLISMLSMIILYVLSIASLCIGLITFISFIIVEKKRNTYSRLEDRRVRPTSSGDLYYIGT 尼帕病毒F蛋白質
41 ILHY EKLSKIGLVK GVTRKYKIKS NPLTKDIVIK MIPNVSNMSQ CTGSVMENYK TRLNGILTPI KGALEIYKNN THDLVGDVRL AGVIMAGVAI GIATAAQITA GVALYEAMKN ADNINKLKSS IESTNEAVVK LQETAEKTVY VLTALQDYIN TNLVPTIDKI SCKQTELSLD LALSKYLSDL LFVFGPNLQD PVSNSMTIQA ISQAFGGNYE TLLRTLGYAT EDFDDLLESD SITGQIIYVD LSSYYIIVRV YFPILTEIQQ AYIQELLPVS FNNDNSEWIS IVPNFILVRN TLISNIEIGF CLITKRSVIC NQDYATPMTN NMRECLTGST EKCPRELVVS SHVPRFALSN GVLFANCISV TCQCQTTGRA ISQSGEQTLL MIDNTTCPTA VLGNVIISLG KYLGSVNYNS EGIAIGPPVF TDKVDISSQI SSMNQSLQQS KDYIKEAQRL LDTVNPSLIS MLSMIILYVL SIASLCIGLI TFISFIIVEK KRNTYSRLED RRVRPTSSGD LYYIGT 尼帕病毒NiV-F F0 (aa 27-546)
42 MKKINEGLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PEICWEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN QTAENPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QCT 經截短之NiVG蛋白連接醣蛋白(Gc Δ 34)
43 MTMDIKKINE GLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PEICWEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN QTAENPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QCT 經截短之NiVG蛋白連接醣蛋白Δ30   
44 MGNTTSDKGK IPSKVIKSYY GTMDIKKINE GLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PEICWEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN QTAENPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QC 經截短之NiVG蛋白連接醣蛋白Δ10
45 MGKGK IPSKVIKSYY GTMDIKKINE GLLDSKILSA FNTVIALLGS IVIIVMNIMI IQNYTRSTDN QAVIKDALQG IQQQIKGLAD KIGTEIGPKV SLIDTSSTIT IPANIGLLGS KISQSTASIN ENVNEKCKFT LPPLKIHECN ISCPNPLPFR EYRPQTEGVS NLVGLPNNIC LQKTSNQILK PKLISYTLPV VGQSGTCITD PLLAMDEGYF AYSHLERIGS CSRGVSKQRI IGVGEVLDRG DEVPSLFMTN VWTPPNPNTV YHCSAVYNNE FYYVLCAVST VGDPILNSTY WSGSLMMTRL AVKPKSNGGG YNQHQLALRS IEKGRYDKVM PYGPSGIKQG DTLYFPAVGF LVRTEFKYND SNCPITKCQY SKPENCRLSM GIRPNSHYIL RSGLLKYNLS DGENPKVVFI EISDQRLSIG SPSKIYDSLG QPVFYQASFS WDTMIKFGDV LTVNPLVVNW RNNTVISRPG QSQCPRFNTC PEICWEGVYN DAFLIDRINW ISAGVFLDSN QTAENPVFTV FKDNEILYRA QLASEDTNAQ KTITNCFLLK NKIWCISLVE IYDTGDNVIR PKLFAVKIPE QC 經截短之NiVG蛋白連接醣蛋白Δ15
46 LAGVIMAGVAIGIATAAQITAGVALYEAMKNADNINKLKSSIESTNEAVVKLQETAEKTVYVLTALQDYINTNLVPTIDKISCKQTELSLDLALSKYLSDLLFVFGPNLQDPVSNSMTIQAISQAFGGNYETLLRTLGYATEDFDDLLESDSITGQIIYVDLSSYYIIVRVYFPILTEIQQAYIQELLPVSFNNDNSEWISIVPNFILVRNTLISNIEIGFCLITKRSVICNQDYATPMTNNMRECLTGSTEKCPRELVVSSHVPRFALSNGVLFANCISVTCQCQTTGRAISQSGEQTLLMIDNTTCPTAVLGNVIISLGKYLGSVNYNSEGIAIGPPVFTDKVDISSQISSMNQSLQQSKDYIKEAQRLLDTVNPSLISMLSMIILYVLSIASLCIGLITFISFIIVEKKRNTYSRLEDRRVRPTSSGDLYYIGT 尼帕病毒NiV F F1 (aa 110-546)
47 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGIIDPSDGNTNYAQNFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAKERAAAGYYYYMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKR CD8 scFv
48 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYIQWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGDYYYGMDAWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLQTPHTFGQGTKVEIKR CD8 scFv
49 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGWGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTYSTPYTFGQGTKLEIKR CD8 scFv
50 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNHYMHWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCASSESGSDLDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIGNYVNWYQQKPGKAPKLLIYGASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTYSAPLTFGGGTKVEIKR CD8 scFv
51 QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSGYVMGWFRQAPGKQRKFVAAISRGGLSTSYADSVKGRFTISRDNAKNTVFLQMNTLKPEDTAVYYCAADRSDLYEITAASNIDSWGQGTLVTVSS CD8 VHH
52 SYAIS CDR-H1
53 IIDPSDGNTNYAQNFQG CDR-H2
54 ERAAAGYYYYMDV CDR-H3
55 RASQSISSYLN CDR-L1
56 AASSLQS CDR-L2
57 QQSYSTPLT CDR-L3
58 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGIIDPSDGNTNYAQNFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAKERAAAGYYYYMDVWGQGTTVTVSS VH
59 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKR VL
60 DYYIQ CDR-H1
61 WINPNSGGTSYAQKFQG CDR-H2
62 EGDYYYGMDA CDR-H3
63 RSSQSLLHSNGYNYLD CDR-L1
64 LGSNRAS CDR-L2
65 MQGLQTPHT CDR-L3
66 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYIQWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGDYYYGMDAWGQGTMVTVSS VH
67 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLQTPHTFGQGTKVEIKR VL
68 SYYMH CDR-H1
69 GFDPEDGETIYAQKFQG CDR-H2
70 DQGWGMDV CDR-H3
71 QQTYSTPYT CDR-L3
72 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGWGMDVWGQGTTVTVSS VH
73 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTYSTPYTFGQGTKLEIKR VL
74 NHYMH CDR-H1
75 WMNPNSGNTGYAQKFQG CDR-H2
76 SESGSDLDY CDR-H3
77 RASQTIGNYVN CDR-L1
78 GASNLHT CDR-L2
79 QQTYSAPLT CDR-L3
80 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNHYMHWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCASSESGSDLDYWGQGTLVTVSS VH
81 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIGNYVNWYQQKPGKAPKLLIYGASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTYSAPLTFGGGTKVEIKR VL
82 GYVMG CDR-H1
83 AISRGGLSTSYADSVKG CDR-H2
84 DRSDLYEITAASNIDS CDR-H3
85 MALPVTALLLPLALLLHAARP CD8α信號肽
86 METDTLLLWVLLLWVPGSTG IgK信號肽
87 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP GMCSFR-α (CSF2RA)信號肽
88 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD CD8α鉸鏈域
89 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP CD28鉸鏈域
90 AAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP CD28鉸鏈域
91 ESKYGPPCPPCP IgG4鉸鏈域
92 ESKYGPPCPSCP IgG4鉸鏈域
93 ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK IgG4鉸鏈-CH2-CH3域
94 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC CD8α跨膜域
95 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28跨膜域
96 MFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28跨膜域
97 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 4-1BB共刺激域
98 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28共刺激域
99 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3ζ信號傳導域
100 RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3ζ信號傳導域(其中位置14處之Q突變成K)
101 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS 抗CD19 FMC63 scFv完整序列，具有惠特洛連接子
102 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈可變區
103 QDISKY 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈CDR1
104 HTS 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈CDR2
105 QQGNTLPYT 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈CDR3
106 GSTSGSGKPGSGEGSTKG 惠特洛連接子
107 EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS 抗CD19 FMC63 scFv重鏈可變區
108 GVSLPDYG 抗CD19 FMC63 scFv重鏈CDR1
109 IWGSETT 抗CD19 FMC63 scFv重鏈CDR2
110 AKHYYYGGSYAMDY 抗CD19 FMC63 scFv重鏈CDR3
111 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS 抗CD19 FMC63 scFv完整序列，具有3xG 4S連接子
112 atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggacatccagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattagtaaatatttaaattggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatctaccatacatcaagattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagattattctctcaccattagcaacctggagcaagaagatattgccacttacttttgccaacagggtaatacgcttccgtacacgttcggaggggggaccaagctggagatcacaggctccacctctggatccggcaagcccggatctggcgagggatccaccaagggcgaggtgaaactgcaggagtcaggacctggcctggtggcgccctcacagagcctgtccgtcacatgcactgtctcaggggtctcattacccgactatggtgtaagctggattcgccagcctccacgaaagggtctggagtggctgggagtaatatggggtagtgaaaccacatactataattcagctctcaaatccagactgaccatcatcaaggacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctgcaaactgatgacacagccatttactactgtgccaaacattattactacggtggtagctatgctatggactactggggccaaggaacctcagtcaccgtctcctcaaccacgacgccagcgccgcgaccaccaacaccggcgcccaccatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcggggggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc 例示性CD19 CAR核苷酸序列
113 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 例示性CD19 CAR胺基酸序列
114 atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggacatccagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattagtaaatatttaaattggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatctaccatacatcaagattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagattattctctcaccattagcaacctggagcaagaagatattgccacttacttttgccaacagggtaatacgcttccgtacacgttcggaggggggaccaagctggagatcacaggtggcggtggctcgggcggtggtgggtcgggtggcggcggatctgaggtgaaactgcaggagtcaggacctggcctggtggcgccctcacagagcctgtccgtcacatgcactgtctcaggggtctcattacccgactatggtgtaagctggattcgccagcctccacgaaagggtctggagtggctgggagtaatatggggtagtgaaaccacatactataattcagctctcaaatccagactgaccatcatcaaggacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctgcaaactgatgacacagccatttactactgtgccaaacattattactacggtggtagctatgctatggactactggggccaaggaacctcagtcaccgtctcctcaaccacgacgccagcgccgcgaccaccaacaccggcgcccaccatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcggggggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc 替沙津魯CD19 CAR核苷酸序列
115 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 替沙津魯CD19 CAR胺基酸序列
116 atgctgctgctggtgaccagcctgctgctgtgcgagctgccccaccccgcctttctgctgatccccgacatccagatgacccagaccacctccagcctgagcgccagcctgggcgaccgggtgaccatcagctgccgggccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaagcccgacggcaccgtcaagctgctgatctaccacaccagccggctgcacagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgccacctacttttgccagcagggcaacacactgccctacacctttggcggcggaacaaagctggaaatcaccggcagcacctccggcagcggcaagcctggcagcggcgagggcagcaccaagggcgaggtgaagctgcaggaaagcggccctggcctggtggcccccagccagagcctgagcgtgacctgcaccgtgagcggcgtgagcctgcccgactacggcgtgagctggatccggcagccccccaggaagggcctggaatggctgggcgtgatctggggcagcgagaccacctactacaacagcgccctgaagagccggctgaccatcatcaaggacaacagcaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagcgaatctaagtacggaccgccctgccccccttgccctatgttctgggtgctggtggtggtcggaggcgtgctggcctgctacagcctgctggtcaccgtggccttcatcatcttttgggtgaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgcgggtgaagttcagcagaagcgccgacgcccctgcctaccagcagggccagaatcagctgtacaacgagctgaacctgggcagaagggaagagtacgacgtcctggataagcggagaggccgggaccctgagatgggcggcaagcctcggcggaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggcatgaagggcgagcggaggcggggcaagggccacgacggcctgtatcagggcctgtccaccgccaccaaggatacctacgacgccctgcacatgcaggccctgcccccaagg 力索嗎魯CD19 CAR核苷酸序列
117 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSESKYGPPCPPCPMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 力索嗎魯CD19 CAR胺基酸序列
118 atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccacacccagcattcctcctgatcccagacatccagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattagtaaatatttaaattggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatctaccatacatcaagattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagattattctctcaccattagcaacctggagcaagaagatattgccacttacttttgccaacagggtaatacgcttccgtacacgttcggaggggggactaagttggaaataacaggctccacctctggatccggcaagcccggatctggcgagggatccaccaagggcgaggtgaaactgcaggagtcaggacctggcctggtggcgccctcacagagcctgtccgtcacatgcactgtctcaggggtctcattacccgactatggtgtaagctggattcgccagcctccacgaaagggtctggagtggctgggagtaatatggggtagtgaaaccacatactataattcagctctcaaatccagactgaccatcatcaaggacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctgcaaactgatgacacagccatttactactgtgccaaacattattactacggtggtagctatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttgggggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc 阿基侖賽CD19 CAR核苷酸序列
119 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 阿基侖賽CD19 CAR胺基酸序列
120 DIVLTQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVNYMDWYQKKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGQGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSADYYCARSNYYGSSYWFFDVWGAGTTVTVSS 抗CD20 Leu16 scFv完整序列，具有惠特洛連接子
121 DIVLTQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVNYMDWYQKKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈可變區
122 RASSSVNYMD 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈CDR1
123 ATSNLAS 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈CDR2
124 QQWSFNPPT 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈CDR3
125 EVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGQGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSADYYCARSNYYGSSYWFFDVWGAGTTVTVSS 抗CD20 Leu16 scFv重鏈
126 SYNMH 抗CD20 Leu16 scFv重鏈CDR1
127 AIYPGNGDTSYNQKFKG 抗CD20 Leu16 scFv重鏈CDR2
128 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCAREVTGDLEDAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIWSYLNWYQQRPGKAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGRGSGTDFTLTISSLQAEDFATYYCQQSYSIPQTFGQGTKLEIK 抗CD22 m971 scFv完整序列，具有3xG 4S連接子
129 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCAREVTGDLEDAFDIWGQGTMVTVSS 抗CD22 m971 scFv重鏈可變區
130 GDSVSSNSAA 抗CD22 m971 scFv重鏈CDR1
131 TYYRSKWYN 抗CD22 m971 scFv重鏈CDR2
132 AREVTGDLEDAFDI 抗CD22 m971 scFv重鏈CDR3
133 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIWSYLNWYQQRPGKAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGRGSGTDFTLTISSLQAEDFATYYCQQSYSIPQTFGQGTKLEIK 抗CD22 m971 scFv輕鏈
134 QTIWSY 抗CD22 m971 scFv輕鏈CDR1
135 AAS 抗CD22 m971 scFv輕鏈CDR2
136 QQSYSIPQT 抗CD22 m971 scFv輕鏈CDR3
137 QVQLQQSGPGMVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSVAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSTWYNDYAVSMKSRITINPDTNKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCAREVTGDLEDAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMIQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIWSYLNWYRQRPGEAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGRGSGTDFTLTISSLQAEDFATYYCQQSYSIPQTFGQGTKLEIK 抗CD22 m971-L7 scFv完整序列，具有3xG 4S連接子
138 QVQLQQSGPGMVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSVAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSTWYNDYAVSMKSRITINPDTNKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCAREVTGDLEDAFDIWGQGTMVTVSS 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈可變區
139 GDSVSSNSVA 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈CDR1
140 TYYRSTWYN 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈CDR2
141 AREVTGDLEDAFDI 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈CDR3
142 DIQMIQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIWSYLNWYRQRPGEAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGRGSGTDFTLTISSLQAEDFATYYCQQSYSIPQTFGQGTKLEIK 抗CD22 m971-L7 scFv輕鏈可變區
143 QTIWSY 抗CD22 m971-L7 scFv輕鏈CDR1
144 AAS 抗CD22 m971-L7 scFv輕鏈CDR2
145 QQSYSIPQT 抗CD22 m971-L7 scFv輕鏈CDR3
146 DIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSS 抗BCMA C11D5.3 scFv完整序列，具有惠特洛連接子
147 DIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIK 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈可變區
148 RASESVSVIGAHLIH 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈CDR1
149 LASNLET 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈CDR2
150 LQSRIFPRT 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈CDR3
151 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSS 抗BCMA C11D5.3 scFv重鏈可變區
152 DYSIN 抗BCMA C11D5.3 scFv重鏈CDR1
153 WINTETREPAYAYDFRG 抗BCMA C11D5.3 scFv重鏈CDR2
154 DYSYAMDY 抗BCMA C11D5.3 scFv重鏈CDR3
155 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSS 抗BCMA C12A3.2 scFv完整序列，具有惠特洛連接子
156 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈可變區
157 RASESVTILGSHLIY 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈CDR1
158 LASNVQT 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈CDR2
159 LQSRTIPRT 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈CDR3
160 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSS 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈可變區
161 HYSMN 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈CDR1
162 RINTESGVPIYADDFKG 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈CDR2
163 DYLYSLDF 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈CDR3
164 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGDYIYYADSVKGRFTISRDISKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKEGTGANSSLADYRGQGTLVTVSS 抗BCMA FHVH33完整序列
165 GFTFSSYA 抗BCMA FHVH33 CDR1
166 ISGSGDYI 抗BCMA FHVH33 CDR2
167 AKEGTGANSSLADY 抗BCMA FHVH33 CDR3
168 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKYDLLTFGGGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDRGDTILDVWGQGTMVTVSS 抗BCMA CT103A scFv完整序列，具有惠特洛連接子
169 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKYDLLTFGGGTKVEIK 抗BCMA CT103A scFv輕鏈可變區
170 QSISSY 抗BCMA CT103A scFv輕鏈CDR1
171 AAS 抗BCMA CT103A scFv輕鏈CDR2
172 QQKYDLLT 抗BCMA CT103A scFv輕鏈CDR3
173 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDRGDTILDVWGQGTMVTVSS 抗BCMA CT103A scFv重鏈可變區
174 GGSISSSSYY 抗BCMA CT103A scFv重鏈CDR1
175 ISYSGST 抗BCMA CT103A scFv重鏈CDR2
176 ARDRGDTILDV 抗BCMA CT103A scFv重鏈CDR3
177 atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcagcaaaaatacgacctcctcacttttggcggagggaccaaggttgagatcaaaggcagcaccagcggctccggcaagcctggctctggcgagggcagcacaaagggacagctgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcagcagtagtagttactactggggctggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattgggagtatctcctatagtgggagcacctactacaacccgtccctcaagagtcgagtcaccatatccgtagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgagttctgtgaccgccgcagacacggcggtgtactactgcgccagagatcgtggagacaccatactagacgtatggggtcagggtacaatggtcaccgtcagctcattcgtgcccgtgttcctgcccgccaaacctaccaccacccctgcccctagacctcccaccccagccccaacaatcgccagccagcctctgtctctgcggcccgaagcctgtagacctgctgccggcggagccgtgcacaccagaggcctggacttcgcctgcgacatctacatctgggcccctctggccggcacctgtggcgtgctgctgctgagcctggtgatcaccctgtactgcaaccaccggaacaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcagatccgccgacgcccctgcctaccagcagggacagaaccagctgtacaacgagctgaacctgggcagacgggaagagtacgacgtgctggacaagcggagaggccgggaccccgagatgggcggaaagcccagacggaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggcatgaagggcgagcggaggcgcggcaagggccacgatggcctgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggacacctacgacgccctgcacatgcaggccctgccccccaga 例示性BCMA CAR核苷酸序列
178 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKYDLLTFGGGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDRGDTILDVWGQGTMVTVSSFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 例示性BCMA CAR胺基酸序列
179 ACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC CD8跨膜
180 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPE CD8鉸鏈
181 GGGGSGGGGSGGGGS 連接子
182 SNYYGSSYWFFDV 抗CD20 Leu16 scFv重鏈CDR3
圖 1A描繪在注射人類周邊血液單核細胞(hPBMC)且接著在一天之後注射CD8-VHH CD19CAR LV之後，隨時間推移的Nalm6腫瘤生長，其中人類周邊血液單核細胞使用CD3/CD28複合物預先進行T細胞活化。結果表明CD8-CD19CAR LV及經活化之hPBMC治療引起隨時間推移的Nalm6腫瘤生長之穩定控制。
圖 1B描繪在注射未經活化之hPBMC (未進行預先T細胞活化)且接著在一天之後注射CD8-VHH CD19CAR LV之後，隨時間推移的Nalm6腫瘤生長。結果表明高劑量CD8-VHH CD19CAR LV及未經活化之hPBMC治療引起Nalm6腫瘤生長之延遲但穩定的控制。
圖 1C展示在注射CD8-VHH CD19CAR LV之後，自脾臟、骨髓或周邊血液回收之所有活的淋巴球中之CD8 +CD19CAR +細胞之百分比，如PBMC對照物(頂部曲線)及經CD8融質體處理之動物(底部曲線)中的FAC曲線之右上象限中所指示。
圖 2A描繪在存在或不存在藉由抗CD3及抗CD28抗體進行之活化之情況下，在用經VSV-G或尼帕病毒促融劑假模式化之LV轉導之後，人類PBMC之轉導效率(%CAR)，該尼帕病毒促融劑係用兩種不同的CD8 scFv (CD8 scFv-1及CD8 scFV-2)中之一種或CD8 VHH再靶向。
圖 2B描繪在存在或不存在藉由抗CD3及抗CD28抗體進行之活化之情況下，PBMC中之由轉導產生的CD19CAR-T細胞進行之CD19+細胞之細胞殺傷，該轉導係用經VSV-G或尼帕病毒促融劑假模式化之LV進行，該尼帕病毒促融劑係用兩種不同CD8 scFv (CD8 scFv-1及CD8 scFV-2)中之一種或CD8 VHH再靶向。
圖 3描繪在投與經靶向CD8+ T細胞之抗CD8結合蛋白質假模式化以遞送CD20 CAR轉基因之慢病毒載體後，非人類靈長類動物(NHP)模型中之B細胞含量。
圖 4A描繪在離體給藥研究中之多個時間點時的腫瘤生長。
圖 4B展示如在D14時，在周邊血液中偵測之CAR+ CD8+ T細胞百分比。
圖 5描繪離體給藥之例示性系統。 

          <![CDATA[<110> 美商薩那生物科技公司(Sana Biotechnology, Inc.)]]>
          <![CDATA[<120> 靶向CD8之病毒載體之用途]]>
          <![CDATA[<130> 18615-20046.41]]>
          <![CDATA[<140> TW 111100986]]>
          <![CDATA[<141> 2022-01-10            ]]>
          <![CDATA[<150> US 63/211,947       ]]>
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          <![CDATA[<150> US 63/168,235       ]]>
          <![CDATA[<151> 2021-03-30  ]]>
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          <![CDATA[<151> 2021-02-17  ]]>
          <![CDATA[<150> US 63/136,202       ]]>
          <![CDATA[<151> 2021-01-11  ]]>
          <![CDATA[<160> 182]]>
          <![CDATA[<170> 用於Windows版本4.0之FastSEQ]]>
          <![CDATA[<210> 1]]>
          <![CDATA[<211> 602]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 尼帕病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> NiVG蛋白質連接醣蛋白(602 aa)]]>
          <![CDATA[<400> 1]]>
          Met Gly Pro Ala Glu Asn Lys Lys Val Arg Phe Glu Asn Thr Thr Ser
           1               5                  10                  15      
          Asp Lys Gly Lys Ile Pro Ser Lys Val Ile Lys Ser Tyr Tyr Gly Thr
                      20                  25                  30          
          Met Asp Ile Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile
              50                  55                  60                  
          Val Met Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn
          65                  70                  75                  80  
          Gln Ala Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys
                          85                  90                  95      
          Gly Leu Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu
                      100                 105                 110         
          Ile Asp Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn
              130                 135                 140                 
          Glu Lys Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn
          145                 150                 155                 160 
          Ile Ser Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr
                          165                 170                 175     
          Glu Gly Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln
                      180                 185                 190         
          Lys Thr Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu
                  195                 200                 205             
          Pro Val Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala
              210                 215                 220                 
          Met Asp Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser
          225                 230                 235                 240 
          Cys Ser Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val
                          245                 250                 255     
          Leu Asp Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp
                      260                 265                 270         
          Thr Pro Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn
                  275                 280                 285             
          Asn Glu Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro
              290                 295                 300                 
          Ile Leu Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu
          305                 310                 315                 320 
          Ala Val Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu
                          325                 330                 335     
          Ala Leu Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr
                      340                 345                 350         
          Gly Pro Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro
              370                 375                 380                 
          Ile Thr Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ile Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys
                          405                 410                 415     
          Tyr Asn Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile
                      420                 425                 430         
          Ser Asp Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser
                  435                 440                 445             
          Leu Gly Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met
              450                 455                 460                 
          Ile Lys Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp
          465                 470                 475                 480 
          Arg Asn Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg
                          485                 490                 495     
          Phe Asn Thr Cys Pro Glu Ile Cys Trp Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala
                      500                 505                 510         
          Phe Leu Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp
                  515                 520                 525             
          Ser Asn Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn
              530                 535                 540                 
          Glu Ile Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln
          545                 550                 555                 560 
          Lys Thr Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile
                          565                 570                 575     
          Ser Leu Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys
                      580                 585                 590         
          Leu Phe Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys
                  595                 600         
          <![CDATA[<210> 2]]>
          <![CDATA[<211> 604]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 亨德拉病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 亨德拉病毒G蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 2]]>
          Met Met Ala Asp Ser Lys Leu Val Ser Leu Asn Asn Asn Leu Ser Gly
           1               5                  10                  15      
          Lys Ile Lys Asp Gln Gly Lys Val Ile Lys Asn Tyr Tyr Gly Thr Met
                      20                  25                  30          
          Asp Ile Lys Lys Ile Asn Asp Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Gly
                  35                  40                  45              
          Ala Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Ile Ile Ile Val
              50                  55                  60                  
          Met Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Thr Thr Asp Asn Gln
          65                  70                  75                  80  
          Ala Leu Ile Lys Glu Ser Leu Gln Ser Val Gln Gln Gln Ile Lys Ala
                          85                  90                  95      
          Leu Thr Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile
                      100                 105                 110         
          Asp Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly
                  115                 120                 125             
          Ser Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ser Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Asp
              130                 135                 140                 
          Lys Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile
          145                 150                 155                 160 
          Ser Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Ile Ser Gln
                          165                 170                 175     
          Gly Val Ser Asp Leu Val Gly Leu Pro Asn Gln Ile Cys Leu Gln Lys
                      180                 185                 190         
          Thr Thr Ser Thr Ile Leu Lys Pro Arg Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro
                  195                 200                 205             
          Ile Asn Thr Arg Glu Gly Val Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Val
              210                 215                 220                 
          Asp Asn Gly Phe Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Lys Ile Gly Ser Cys
          225                 230                 235                 240 
          Thr Arg Gly Ile Ala Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu
                          245                 250                 255     
          Asp Arg Gly Asp Lys Val Pro Ser Met Phe Met Thr Asn Val Trp Thr
                      260                 265                 270         
          Pro Pro Asn Pro Ser Thr Ile His His Cys Ser Ser Thr Tyr His Glu
                  275                 280                 285             
          Asp Phe Tyr Tyr Thr Leu Cys Ala Val Ser His Val Gly Asp Pro Ile
              290                 295                 300                 
          Leu Asn Ser Thr Ser Trp Thr Glu Ser Leu Ser Leu Ile Arg Leu Ala
          305                 310                 315                 320 
          Val Arg Pro Lys Ser Asp Ser Gly Asp Tyr Asn Gln Lys Tyr Ile Ala
                          325                 330                 335     
          Ile Thr Lys Val Glu Arg Gly Lys Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly
                  355                 360                 365             
          Phe Leu Pro Arg Thr Glu Phe Gln Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile
              370                 375                 380                 
          Ile His Cys Lys Tyr Ser Lys Ala Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly
          385                 390                 395                 400 
          Val Asn Ser Lys Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr
                          405                 410                 415     
          Asn Leu Ser Leu Gly Gly Asp Ile Ile Leu Gln Phe Ile Glu Ile Ala
                      420                 425                 430         
          Asp Asn Arg Leu Thr Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asn Ser Leu
                  435                 440                 445             
          Gly Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Tyr Ser Trp Asp Thr Met Ile
              450                 455                 460                 
          Lys Leu Gly Asp Val Asp Thr Val Asp Pro Leu Arg Val Gln Trp Arg
          465                 470                 475                 480 
          Asn Asn Ser Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe
                          485                 490                 495     
          Asn Val Cys Pro Glu Val Cys Trp Glu Gly Thr Tyr Asn Asp Ala Phe
                      500                 505                 510         
          Leu Ile Asp Arg Leu Asn Trp Val Ser Ala Gly Val Tyr Leu Asn Ser
                  515                 520                 525             
          Asn Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Ala Val Phe Lys Asp Asn Glu
              530                 535                 540                 
          Ile Leu Tyr Gln Val Pro Leu Ala Glu Asp Asp Thr Asn Ala Gln Lys
          545                 550                 555                 560 
          Thr Ile Thr Asp Cys Phe Leu Leu Glu Asn Val Ile Trp Cys Ile Ser
                          565                 570                 575     
          Leu Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Ser Val Ile Arg Pro Lys Leu
                      580                 585                 590         
          Phe Ala Val Lys Ile Pro Ala Gln Cys Ser Glu Ser
                  595                 600                 
          <![CDATA[<210> 3]]>
          <![CDATA[<211> 603]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 亨德拉病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 亨德拉病毒G蛋白質，不具有Met]]>
          <![CDATA[<400> 3]]>
          Met Ala Asp Ser Lys Leu Val Ser Leu Asn Asn Asn Leu Ser Gly Lys
           1               5                  10                  15      
          Ile Lys Asp Gln Gly Lys Val Ile Lys Asn Tyr Tyr Gly Thr Met Asp
                      20                  25                  30          
          Ile Lys Lys Ile Asn Asp Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Gly Ala
                  35                  40                  45              
          Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Ile Ile Ile Val Met
              50                  55                  60                  
          Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Thr Thr Asp Asn Gln Ala
          65                  70                  75                  80  
          Leu Ile Lys Glu Ser Leu Gln Ser Val Gln Gln Gln Ile Lys Ala Leu
                          85                  90                  95      
          Thr Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp
                      100                 105                 110         
          Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser
                  115                 120                 125             
          Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ser Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Asp Lys
              130                 135                 140                 
          Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser
          145                 150                 155                 160 
          Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Ile Ser Gln Gly
                          165                 170                 175     
          Val Ser Asp Leu Val Gly Leu Pro Asn Gln Ile Cys Leu Gln Lys Thr
                      180                 185                 190         
          Thr Ser Thr Ile Leu Lys Pro Arg Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Ile
                  195                 200                 205             
          Asn Thr Arg Glu Gly Val Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Val Asp
              210                 215                 220                 
          Asn Gly Phe Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Lys Ile Gly Ser Cys Thr
          225                 230                 235                 240 
          Arg Gly Ile Ala Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp
                          245                 250                 255     
          Arg Gly Asp Lys Val Pro Ser Met Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro
                      260                 265                 270         
          Pro Asn Pro Ser Thr Ile His His Cys Ser Ser Thr Tyr His Glu Asp
                  275                 280                 285             
          Phe Tyr Tyr Thr Leu Cys Ala Val Ser His Val Gly Asp Pro Ile Leu
              290                 295                 300                 
          Asn Ser Thr Ser Trp Thr Glu Ser Leu Ser Leu Ile Arg Leu Ala Val
          305                 310                 315                 320 
          Arg Pro Lys Ser Asp Ser Gly Asp Tyr Asn Gln Lys Tyr Ile Ala Ile
                          325                 330                 335     
          Thr Lys Val Glu Arg Gly Lys Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro
                      340                 345                 350         
          Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe
                  355                 360                 365             
          Leu Pro Arg Thr Glu Phe Gln Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Ile
              370                 375                 380                 
          His Cys Lys Tyr Ser Lys Ala Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Val
          385                 390                 395                 400 
          Asn Ser Lys Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn
                          405                 410                 415     
          Leu Ser Leu Gly Gly Asp Ile Ile Leu Gln Phe Ile Glu Ile Ala Asp
                      420                 425                 430         
          Asn Arg Leu Thr Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asn Ser Leu Gly
                  435                 440                 445             
          Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Tyr Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys
              450                 455                 460                 
          Leu Gly Asp Val Asp Thr Val Asp Pro Leu Arg Val Gln Trp Arg Asn
          465                 470                 475                 480 
          Asn Ser Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn
                          485                 490                 495     
          Val Cys Pro Glu Val Cys Trp Glu Gly Thr Tyr Asn Asp Ala Phe Leu
                      500                 505                 510         
          Ile Asp Arg Leu Asn Trp Val Ser Ala Gly Val Tyr Leu Asn Ser Asn
                  515                 520                 525             
          Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Ala Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile
              530                 535                 540                 
          Leu Tyr Gln Val Pro Leu Ala Glu Asp Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr
          545                 550                 555                 560 
          Ile Thr Asp Cys Phe Leu Leu Glu Asn Val Ile Trp Cys Ile Ser Leu
                          565                 570                 575     
          Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Ser Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe
                      580                 585                 590         
          Ala Val Lys Ile Pro Ala Gln Cys Ser Glu Ser
                  595                 600             
          <![CDATA[<210> 4]]>
          <![CDATA[<211> 602]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 尼帕病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 尼帕病毒G蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 4]]>
          Met Pro Ala Glu Asn Lys Lys Val Arg Phe Glu Asn Thr Thr Ser Asp
           1               5                  10                  15      
          Lys Gly Lys Ile Pro Ser Lys Val Ile Lys Ser Tyr Tyr Gly Thr Met
                      20                  25                  30          
          Asp Ile Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ser
                  35                  40                  45              
          Ala Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile Val
              50                  55                  60                  
          Met Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln
          65                  70                  75                  80  
          Ala Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile
                      100                 105                 110         
          Asp Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly
                  115                 120                 125             
          Ser Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu
              130                 135                 140                 
          Lys Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile
          145                 150                 155                 160 
          Ser Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu
                          165                 170                 175     
          Gly Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys
                      180                 185                 190         
          Thr Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro
                  195                 200                 205             
          Val Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met
              210                 215                 220                 
          Asp Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys
          225                 230                 235                 240 
          Ser Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu
                          245                 250                 255     
          Asp Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp Thr
                      260                 265                 270         
          Pro Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn
                  275                 280                 285             
          Glu Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile
              290                 295                 300                 
          Leu Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu Ala
          305                 310                 315                 320 
          Val Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala
                          325                 330                 335     
          Leu Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly
                  355                 360                 365             
          Phe Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile
              370                 375                 380                 
          Thr Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly
          385                 390                 395                 400 
          Ile Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr
                          405                 410                 415     
          Asn Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile Ser
                      420                 425                 430         
          Asp Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu
                  435                 440                 445             
          Gly Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile
              450                 455                 460                 
          Lys Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp Arg
          465                 470                 475                 480 
          Asn Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe
                          485                 490                 495     
          Asn Thr Cys Pro Glu Ile Cys Trp Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe
                      500                 505                 510         
          Leu Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser
                  515                 520                 525             
          Asn Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu
              530                 535                 540                 
          Ile Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys
          545                 550                 555                 560 
          Thr Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser
                          565                 570                 575     
          Leu Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu
                      580                 585                 590         
          Phe Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys Thr
                  595                 600         
          <![CDATA[<210> 5]]>
          <![CDATA[<211> 601]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 尼帕病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 尼帕病毒G蛋白質，不具有Met]]>
          <![CDATA[<400> 5]]>
          Pro Ala Glu Asn Lys Lys Val Arg Phe Glu Asn Thr Thr Ser Asp Lys
           1               5                  10                  15      
          Gly Lys Ile Pro Ser Lys Val Ile Lys Ser Tyr Tyr Gly Thr Met Asp
                      20                  25                  30          
          Ile Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ser Ala
                  35                  40                  45              
          Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile Val Met
              50                  55                  60                  
          Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln Ala
          65                  70                  75                  80  
          Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly Leu
                          85                  90                  95      
          Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp
                      100                 105                 110         
          Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser
                  115                 120                 125             
          Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu Lys
              130                 135                 140                 
          Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser
          145                 150                 155                 160 
          Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu Gly
                          165                 170                 175     
          Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys Thr
                      180                 185                 190         
          Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Val
                  195                 200                 205             
          Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met Asp
              210                 215                 220                 
          Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys Ser
          225                 230                 235                 240 
          Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp
                          245                 250                 255     
          Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro
                      260                 265                 270         
          Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn Glu
                  275                 280                 285             
          Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile Leu
              290                 295                 300                 
          Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu Ala Val
          305                 310                 315                 320 
          Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala Leu
                          325                 330                 335     
          Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro
                      340                 345                 350         
          Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe
                  355                 360                 365             
          Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Thr
              370                 375                 380                 
          Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Ile
          385                 390                 395                 400 
          Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn
                          405                 410                 415     
          Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile Ser Asp
                      420                 425                 430         
          Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu Gly
                  435                 440                 445             
          Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys
              450                 455                 460                 
          Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp Arg Asn
          465                 470                 475                 480 
          Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn
                          485                 490                 495     
          Thr Cys Pro Glu Ile Cys Trp Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe Leu
                      500                 505                 510         
          Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser Asn
                  515                 520                 525             
          Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile
              530                 535                 540                 
          Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr
          545                 550                 555                 560 
          Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser Leu
                          565                 570                 575     
          Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe
                      580                 585                 590         
          Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys Thr
                  595                 600     
          <![CDATA[<210> 6]]>
          <![CDATA[<211> 622]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 賽得病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 賽得病毒G蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 6]]>
          Met Leu Ser Gln Leu Gln Lys Asn Tyr Leu Asp Asn Ser Asn Gln Gln
           1               5                  10                  15      
          Gly Asp Lys Met Asn Asn Pro Asp Lys Lys Leu Ser Val Asn Phe Asn
                      20                  25                  30          
          Pro Leu Glu Leu Asp Lys Gly Gln Lys Asp Leu Asn Lys Ser Tyr Tyr
                  35                  40                  45              
          Val Lys Asn Lys Asn Tyr Asn Val Ser Asn Leu Leu Asn Glu Ser Leu
              50                  55                  60                  
          His Asp Ile Lys Phe Cys Ile Tyr Cys Ile Phe Ser Leu Leu Ile Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ile Thr Ile Ile Asn Ile Ile Thr Ile Ser Ile Val Ile Thr Arg Leu
                          85                  90                  95      
          Lys Val His Glu Glu Asn Asn Gly Met Glu Ser Pro Asn Leu Gln Ser
                      100                 105                 110         
          Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Leu Thr Asn Met Ile Asn Thr Glu Ile
                  115                 120                 125             
          Thr Pro Arg Ile Gly Ile Leu Val Thr Ala Thr Ser Val Thr Leu Ser
              130                 135                 140                 
          Ser Ser Ile Asn Tyr Val Gly Thr Lys Thr Asn Gln Leu Val Asn Glu
          145                 150                 155                 160 
          Leu Lys Asp Tyr Ile Thr Lys Ser Cys Gly Phe Lys Val Pro Glu Leu
                          165                 170                 175     
          Lys Leu His Glu Cys Asn Ile Ser Cys Ala Asp Pro Lys Ile Ser Lys
                      180                 185                 190         
          Ser Ala Met Tyr Ser Thr Asn Ala Tyr Ala Glu Leu Ala Gly Pro Pro
                  195                 200                 205             
          Lys Ile Phe Cys Lys Ser Val Ser Lys Asp Pro Asp Phe Arg Leu Lys
              210                 215                 220                 
          Gln Ile Asp Tyr Val Ile Pro Val Gln Gln Asp Arg Ser Ile Cys Met
          225                 230                 235                 240 
          Asn Asn Pro Leu Leu Asp Ile Ser Asp Gly Phe Phe Thr Tyr Ile His
                          245                 250                 255     
          Tyr Glu Gly Ile Asn Ser Cys Lys Lys Ser Asp Ser Phe Lys Val Leu
                      260                 265                 270         
          Leu Ser His Gly Glu Ile Val Asp Arg Gly Asp Tyr Arg Pro Ser Leu
                  275                 280                 285             
          Tyr Leu Leu Ser Ser His Tyr His Pro Tyr Ser Met Gln Val Ile Asn
              290                 295                 300                 
          Cys Val Pro Val Thr Cys Asn Gln Ser Ser Phe Val Phe Cys His Ile
          305                 310                 315                 320 
          Ser Asn Asn Thr Lys Thr Leu Asp Asn Ser Asp Tyr Ser Ser Asp Glu
                          325                 330                 335     
          Tyr Tyr Ile Thr Tyr Phe Asn Gly Ile Asp Arg Pro Lys Thr Lys Lys
                      340                 345                 350         
          Ile Pro Ile Asn Asn Met Thr Ala Asp Asn Arg Tyr Ile His Phe Thr
                  355                 360                 365             
          Phe Ser Gly Gly Gly Gly Val Cys Leu Gly Glu Glu Phe Ile Ile Pro
              370                 375                 380                 
          Val Thr Thr Val Ile Asn Thr Asp Val Phe Thr His Asp Tyr Cys Glu
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Asn Cys Ser Val Gln Thr Gly Lys Ser Leu Lys Glu Ile Cys
                          405                 410                 415     
          Ser Glu Ser Leu Arg Ser Pro Thr Asn Ser Ser Arg Tyr Asn Leu Asn
                      420                 425                 430         
          Gly Ile Met Ile Ile Ser Gln Asn Asn Met Thr Asp Phe Lys Ile Gln
                  435                 440                 445             
          Leu Asn Gly Ile Thr Tyr Asn Lys Leu Ser Phe Gly Ser Pro Gly Arg
              450                 455                 460                 
          Leu Ser Lys Thr Leu Gly Gln Val Leu Tyr Tyr Gln Ser Ser Met Ser
          465                 470                 475                 480 
          Trp Asp Thr Tyr Leu Lys Ala Gly Phe Val Glu Lys Trp Lys Pro Phe
                          485                 490                 495     
          Thr Pro Asn Trp Met Asn Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Asn Gln Gly
                      500                 505                 510         
          Asn Cys Pro Arg Tyr His Lys Cys Pro Glu Ile Cys Tyr Gly Gly Thr
                  515                 520                 525             
          Tyr Asn Asp Ile Ala Pro Leu Asp Leu Gly Lys Asp Met Tyr Val Ser
              530                 535                 540                 
          Val Ile Leu Asp Ser Asp Gln Leu Ala Glu Asn Pro Glu Ile Thr Val
          545                 550                 555                 560 
          Phe Asn Ser Thr Thr Ile Leu Tyr Lys Glu Arg Val Ser Lys Asp Glu
                          565                 570                 575     
          Leu Asn Thr Arg Ser Thr Thr Thr Ser Cys Phe Leu Phe Leu Asp Glu
                      580                 585                 590         
          Pro Trp Cys Ile Ser Val Leu Glu Thr Asn Arg Phe Asn Gly Lys Ser
                  595                 600                 605             
          Ile Arg Pro Glu Ile Tyr Ser Tyr Lys Ile Pro Lys Tyr Cys
              610                 615                 620         
          <![CDATA[<210> 7]]>
          <![CDATA[<211> 621]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 賽得病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 賽得病毒G蛋白質(不具有Met)]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Leu Ser Gln Leu Gln Lys Asn Tyr Leu Asp Asn Ser Asn Gln Gln Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Lys Met Asn Asn Pro Asp Lys Lys Leu Ser Val Asn Phe Asn Pro
                      20                  25                  30          
          Leu Glu Leu Asp Lys Gly Gln Lys Asp Leu Asn Lys Ser Tyr Tyr Val
                  35                  40                  45              
          Lys Asn Lys Asn Tyr Asn Val Ser Asn Leu Leu Asn Glu Ser Leu His
              50                  55                  60                  
          Asp Ile Lys Phe Cys Ile Tyr Cys Ile Phe Ser Leu Leu Ile Ile Ile
          65                  70                  75                  80  
          Thr Ile Ile Asn Ile Ile Thr Ile Ser Ile Val Ile Thr Arg Leu Lys
                          85                  90                  95      
          Val His Glu Glu Asn Asn Gly Met Glu Ser Pro Asn Leu Gln Ser Ile
                      100                 105                 110         
          Gln Asp Ser Leu Ser Ser Leu Thr Asn Met Ile Asn Thr Glu Ile Thr
                  115                 120                 125             
          Pro Arg Ile Gly Ile Leu Val Thr Ala Thr Ser Val Thr Leu Ser Ser
              130                 135                 140                 
          Ser Ile Asn Tyr Val Gly Thr Lys Thr Asn Gln Leu Val Asn Glu Leu
          145                 150                 155                 160 
          Lys Asp Tyr Ile Thr Lys Ser Cys Gly Phe Lys Val Pro Glu Leu Lys
                          165                 170                 175     
          Leu His Glu Cys Asn Ile Ser Cys Ala Asp Pro Lys Ile Ser Lys Ser
                      180                 185                 190         
          Ala Met Tyr Ser Thr Asn Ala Tyr Ala Glu Leu Ala Gly Pro Pro Lys
                  195                 200                 205             
          Ile Phe Cys Lys Ser Val Ser Lys Asp Pro Asp Phe Arg Leu Lys Gln
              210                 215                 220                 
          Ile Asp Tyr Val Ile Pro Val Gln Gln Asp Arg Ser Ile Cys Met Asn
          225                 230                 235                 240 
          Asn Pro Leu Leu Asp Ile Ser Asp Gly Phe Phe Thr Tyr Ile His Tyr
                          245                 250                 255     
          Glu Gly Ile Asn Ser Cys Lys Lys Ser Asp Ser Phe Lys Val Leu Leu
                      260                 265                 270         
          Ser His Gly Glu Ile Val Asp Arg Gly Asp Tyr Arg Pro Ser Leu Tyr
                  275                 280                 285             
          Leu Leu Ser Ser His Tyr His Pro Tyr Ser Met Gln Val Ile Asn Cys
              290                 295                 300                 
          Val Pro Val Thr Cys Asn Gln Ser Ser Phe Val Phe Cys His Ile Ser
          305                 310                 315                 320 
          Asn Asn Thr Lys Thr Leu Asp Asn Ser Asp Tyr Ser Ser Asp Glu Tyr
                          325                 330                 335     
          Tyr Ile Thr Tyr Phe Asn Gly Ile Asp Arg Pro Lys Thr Lys Lys Ile
                      340                 345                 350         
          Pro Ile Asn Asn Met Thr Ala Asp Asn Arg Tyr Ile His Phe Thr Phe
                  355                 360                 365             
          Ser Gly Gly Gly Gly Val Cys Leu Gly Glu Glu Phe Ile Ile Pro Val
              370                 375                 380                 
          Thr Thr Val Ile Asn Thr Asp Val Phe Thr His Asp Tyr Cys Glu Ser
          385                 390                 395                 400 
          Phe Asn Cys Ser Val Gln Thr Gly Lys Ser Leu Lys Glu Ile Cys Ser
                          405                 410                 415     
          Glu Ser Leu Arg Ser Pro Thr Asn Ser Ser Arg Tyr Asn Leu Asn Gly
                      420                 425                 430         
          Ile Met Ile Ile Ser Gln Asn Asn Met Thr Asp Phe Lys Ile Gln Leu
                  435                 440                 445             
          Asn Gly Ile Thr Tyr Asn Lys Leu Ser Phe Gly Ser Pro Gly Arg Leu
              450                 455                 460                 
          Ser Lys Thr Leu Gly Gln Val Leu Tyr Tyr Gln Ser Ser Met Ser Trp
          465                 470                 475                 480 
          Asp Thr Tyr Leu Lys Ala Gly Phe Val Glu Lys Trp Lys Pro Phe Thr
                          485                 490                 495     
          Pro Asn Trp Met Asn Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Asn Gln Gly Asn
                      500                 505                 510         
          Cys Pro Arg Tyr His Lys Cys Pro Glu Ile Cys Tyr Gly Gly Thr Tyr
                  515                 520                 525             
          Asn Asp Ile Ala Pro Leu Asp Leu Gly Lys Asp Met Tyr Val Ser Val
              530                 535                 540                 
          Ile Leu Asp Ser Asp Gln Leu Ala Glu Asn Pro Glu Ile Thr Val Phe
          545                 550                 555                 560 
          Asn Ser Thr Thr Ile Leu Tyr Lys Glu Arg Val Ser Lys Asp Glu Leu
                          565                 570                 575     
          Asn Thr Arg Ser Thr Thr Thr Ser Cys Phe Leu Phe Leu Asp Glu Pro
                      580                 585                 590         
          Trp Cys Ile Ser Val Leu Glu Thr Asn Arg Phe Asn Gly Lys Ser Ile
                  595                 600                 605             
          Arg Pro Glu Ile Tyr Ser Tyr Lys Ile Pro Lys Tyr Cys
              610                 615                 620     
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 632]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 蝙蝠副黏液病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 蝙蝠副黏液病毒G蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Met Pro Gln Lys Thr Val Glu Phe Ile Asn Met Asn Ser Pro Leu Glu
           1               5                  10                  15      
          Arg Gly Val Ser Thr Leu Ser Asp Lys Lys Thr Leu Asn Gln Ser Lys
                      20                  25                  30          
          Ile Thr Lys Gln Gly Tyr Phe Gly Leu Gly Ser His Ser Glu Arg Asn
                  35                  40                  45              
          Trp Lys Lys Gln Lys Asn Gln Asn Asp His Tyr Met Thr Val Ser Thr
              50                  55                  60                  
          Met Ile Leu Glu Ile Leu Val Val Leu Gly Ile Met Phe Asn Leu Ile
          65                  70                  75                  80  
          Val Leu Thr Met Val Tyr Tyr Gln Asn Asp Asn Ile Asn Gln Arg Met
                          85                  90                  95      
          Ala Glu Leu Thr Ser Asn Ile Thr Val Leu Asn Leu Asn Leu Asn Gln
                      100                 105                 110         
          Leu Thr Asn Lys Ile Gln Arg Glu Ile Ile Pro Arg Ile Thr Leu Ile
                  115                 120                 125             
          Asp Thr Ala Thr Thr Ile Thr Ile Pro Ser Ala Ile Thr Tyr Ile Leu
              130                 135                 140                 
          Ala Thr Leu Thr Thr Arg Ile Ser Glu Leu Leu Pro Ser Ile Asn Gln
          145                 150                 155                 160 
          Lys Cys Glu Phe Lys Thr Pro Thr Leu Val Leu Asn Asp Cys Arg Ile
                          165                 170                 175     
          Asn Cys Thr Pro Pro Leu Asn Pro Ser Asp Gly Val Lys Met Ser Ser
                      180                 185                 190         
          Leu Ala Thr Asn Leu Val Ala His Gly Pro Ser Pro Cys Arg Asn Phe
                  195                 200                 205             
          Ser Ser Val Pro Thr Ile Tyr Tyr Tyr Arg Ile Pro Gly Leu Tyr Asn
              210                 215                 220                 
          Arg Thr Ala Leu Asp Glu Arg Cys Ile Leu Asn Pro Arg Leu Thr Ile
          225                 230                 235                 240 
          Ser Ser Thr Lys Phe Ala Tyr Val His Ser Glu Tyr Asp Lys Asn Cys
                          245                 250                 255     
          Thr Arg Gly Phe Lys Tyr Tyr Glu Leu Met Thr Phe Gly Glu Ile Leu
                      260                 265                 270         
          Glu Gly Pro Glu Lys Glu Pro Arg Met Phe Ser Arg Ser Phe Tyr Ser
                  275                 280                 285             
          Pro Thr Asn Ala Val Asn Tyr His Ser Cys Thr Pro Ile Val Thr Val
              290                 295                 300                 
          Asn Glu Gly Tyr Phe Leu Cys Leu Glu Cys Thr Ser Ser Asp Pro Leu
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Lys Ala Asn Leu Ser Asn Ser Thr Phe His Leu Val Ile Leu Arg
                          325                 330                 335     
          His Asn Lys Asp Glu Lys Ile Val Ser Met Pro Ser Phe Asn Leu Ser
                      340                 345                 350         
          Thr Asp Gln Glu Tyr Val Gln Ile Ile Pro Ala Glu Gly Gly Gly Thr
                  355                 360                 365             
          Ala Glu Ser Gly Asn Leu Tyr Phe Pro Cys Ile Gly Arg Leu Leu His
              370                 375                 380                 
          Lys Arg Val Thr His Pro Leu Cys Lys Lys Ser Asn Cys Ser Arg Thr
          385                 390                 395                 400 
          Asp Asp Glu Ser Cys Leu Lys Ser Tyr Tyr Asn Gln Gly Ser Pro Gln
                          405                 410                 415     
          His Gln Val Val Asn Cys Leu Ile Arg Ile Arg Asn Ala Gln Arg Asp
                      420                 425                 430         
          Asn Pro Thr Trp Asp Val Ile Thr Val Asp Leu Thr Asn Thr Tyr Pro
                  435                 440                 445             
          Gly Ser Arg Ser Arg Ile Phe Gly Ser Phe Ser Lys Pro Met Leu Tyr
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Val Ser Trp His Thr Leu Leu Gln Val Ala Glu Ile Thr
          465                 470                 475                 480 
          Asp Leu Asp Lys Tyr Gln Leu Asp Trp Leu Asp Thr Pro Tyr Ile Ser
                          485                 490                 495     
          Arg Pro Gly Gly Ser Glu Cys Pro Phe Gly Asn Tyr Cys Pro Thr Val
                      500                 505                 510         
          Cys Trp Glu Gly Thr Tyr Asn Asp Val Tyr Ser Leu Thr Pro Asn Asn
                  515                 520                 525             
          Asp Leu Phe Val Thr Val Tyr Leu Lys Ser Glu Gln Val Ala Glu Asn
              530                 535                 540                 
          Pro Tyr Phe Ala Ile Phe Ser Arg Asp Gln Ile Leu Lys Glu Phe Pro
          545                 550                 555                 560 
          Leu Asp Ala Trp Ile Ser Ser Ala Arg Thr Thr Thr Ile Ser Cys Phe
                          565                 570                 575     
          Met Phe Asn Asn Glu Ile Trp Cys Ile Ala Ala Leu Glu Ile Thr Arg
                      580                 585                 590         
          Leu Asn Asp Asp Ile Ile Arg Pro Ile Tyr Tyr Ser Phe Trp Leu Pro
                  595                 600                 605             
          Thr Asp Cys Arg Thr Pro Tyr Pro His Thr Gly Lys Met Thr Arg Val
              610                 615                 620                 
          Pro Leu Arg Ser Thr Tyr Asn Tyr
          625                 630         
          <![CDATA[<210> 9]]>
          <![CDATA[<211> 631]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 蝙蝠副黏液病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 蝙蝠副黏液病毒G蛋白質(不具有Met)]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Pro Gln Lys Thr Val Glu Phe Ile Asn Met Asn Ser Pro Leu Glu Arg
           1               5                  10                  15      
          Gly Val Ser Thr Leu Ser Asp Lys Lys Thr Leu Asn Gln Ser Lys Ile
                      20                  25                  30          
          Thr Lys Gln Gly Tyr Phe Gly Leu Gly Ser His Ser Glu Arg Asn Trp
                  35                  40                  45              
          Lys Lys Gln Lys Asn Gln Asn Asp His Tyr Met Thr Val Ser Thr Met
              50                  55                  60                  
          Ile Leu Glu Ile Leu Val Val Leu Gly Ile Met Phe Asn Leu Ile Val
          65                  70                  75                  80  
          Leu Thr Met Val Tyr Tyr Gln Asn Asp Asn Ile Asn Gln Arg Met Ala
                          85                  90                  95      
          Glu Leu Thr Ser Asn Ile Thr Val Leu Asn Leu Asn Leu Asn Gln Leu
                      100                 105                 110         
          Thr Asn Lys Ile Gln Arg Glu Ile Ile Pro Arg Ile Thr Leu Ile Asp
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Thr Thr Ile Thr Ile Pro Ser Ala Ile Thr Tyr Ile Leu Ala
              130                 135                 140                 
          Thr Leu Thr Thr Arg Ile Ser Glu Leu Leu Pro Ser Ile Asn Gln Lys
          145                 150                 155                 160 
          Cys Glu Phe Lys Thr Pro Thr Leu Val Leu Asn Asp Cys Arg Ile Asn
                          165                 170                 175     
          Cys Thr Pro Pro Leu Asn Pro Ser Asp Gly Val Lys Met Ser Ser Leu
                      180                 185                 190         
          Ala Thr Asn Leu Val Ala His Gly Pro Ser Pro Cys Arg Asn Phe Ser
                  195                 200                 205             
          Ser Val Pro Thr Ile Tyr Tyr Tyr Arg Ile Pro Gly Leu Tyr Asn Arg
              210                 215                 220                 
          Thr Ala Leu Asp Glu Arg Cys Ile Leu Asn Pro Arg Leu Thr Ile Ser
          225                 230                 235                 240 
          Ser Thr Lys Phe Ala Tyr Val His Ser Glu Tyr Asp Lys Asn Cys Thr
                          245                 250                 255     
          Arg Gly Phe Lys Tyr Tyr Glu Leu Met Thr Phe Gly Glu Ile Leu Glu
                      260                 265                 270         
          Gly Pro Glu Lys Glu Pro Arg Met Phe Ser Arg Ser Phe Tyr Ser Pro
                  275                 280                 285             
          Thr Asn Ala Val Asn Tyr His Ser Cys Thr Pro Ile Val Thr Val Asn
              290                 295                 300                 
          Glu Gly Tyr Phe Leu Cys Leu Glu Cys Thr Ser Ser Asp Pro Leu Tyr
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ala Asn Leu Ser Asn Ser Thr Phe His Leu Val Ile Leu Arg His
                          325                 330                 335     
          Asn Lys Asp Glu Lys Ile Val Ser Met Pro Ser Phe Asn Leu Ser Thr
                      340                 345                 350         
          Asp Gln Glu Tyr Val Gln Ile Ile Pro Ala Glu Gly Gly Gly Thr Ala
                  355                 360                 365             
          Glu Ser Gly Asn Leu Tyr Phe Pro Cys Ile Gly Arg Leu Leu His Lys
              370                 375                 380                 
          Arg Val Thr His Pro Leu Cys Lys Lys Ser Asn Cys Ser Arg Thr Asp
          385                 390                 395                 400 
          Asp Glu Ser Cys Leu Lys Ser Tyr Tyr Asn Gln Gly Ser Pro Gln His
                          405                 410                 415     
          Gln Val Val Asn Cys Leu Ile Arg Ile Arg Asn Ala Gln Arg Asp Asn
                      420                 425                 430         
          Pro Thr Trp Asp Val Ile Thr Val Asp Leu Thr Asn Thr Tyr Pro Gly
                  435                 440                 445             
          Ser Arg Ser Arg Ile Phe Gly Ser Phe Ser Lys Pro Met Leu Tyr Gln
              450                 455                 460                 
          Ser Ser Val Ser Trp His Thr Leu Leu Gln Val Ala Glu Ile Thr Asp
          465                 470                 475                 480 
          Leu Asp Lys Tyr Gln Leu Asp Trp Leu Asp Thr Pro Tyr Ile Ser Arg
                          485                 490                 495     
          Pro Gly Gly Ser Glu Cys Pro Phe Gly Asn Tyr Cys Pro Thr Val Cys
                      500                 505                 510         
          Trp Glu Gly Thr Tyr Asn Asp Val Tyr Ser Leu Thr Pro Asn Asn Asp
                  515                 520                 525             
          Leu Phe Val Thr Val Tyr Leu Lys Ser Glu Gln Val Ala Glu Asn Pro
              530                 535                 540                 
          Tyr Phe Ala Ile Phe Ser Arg Asp Gln Ile Leu Lys Glu Phe Pro Leu
          545                 550                 555                 560 
          Asp Ala Trp Ile Ser Ser Ala Arg Thr Thr Thr Ile Ser Cys Phe Met
                          565                 570                 575     
          Phe Asn Asn Glu Ile Trp Cys Ile Ala Ala Leu Glu Ile Thr Arg Leu
                      580                 585                 590         
          Asn Asp Asp Ile Ile Arg Pro Ile Tyr Tyr Ser Phe Trp Leu Pro Thr
                  595                 600                 605             
          Asp Cys Arg Thr Pro Tyr Pro His Thr Gly Lys Met Thr Arg Val Pro
              610                 615                 620                 
          Leu Arg Ser Thr Tyr Asn Tyr
          625                 630     
          <![CDATA[<210> 10]]>
          <![CDATA[<211> 625]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 墨江病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 墨江病毒，潼關1 G蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Met Ala Thr Asn Arg Asp Asn Thr Ile Thr Ser Ala Glu Val Ser Gln
           1               5                  10                  15      
          Glu Asp Lys Val Lys Lys Tyr Tyr Gly Val Glu Thr Ala Glu Lys Val
                      20                  25                  30          
          Ala Asp Ser Ile Ser Gly Asn Lys Val Phe Ile Leu Met Asn Thr Leu
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Leu Thr Gly Ala Ile Ile Thr Ile Thr Leu Asn Ile Thr Asn
              50                  55                  60                  
          Leu Thr Ala Ala Lys Ser Gln Gln Asn Met Leu Lys Ile Ile Gln Asp
          65                  70                  75                  80  
          Asp Val Asn Ala Lys Leu Glu Met Phe Val Asn Leu Asp Gln Leu Val
                          85                  90                  95      
          Lys Gly Glu Ile Lys Pro Lys Val Ser Leu Ile Asn Thr Ala Val Ser
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ile Pro Gly Gln Ile Ser Asn Leu Gln Thr Lys Phe Leu Gln
                  115                 120                 125             
          Lys Tyr Val Tyr Leu Glu Glu Ser Ile Thr Lys Gln Cys Thr Cys Asn
              130                 135                 140                 
          Pro Leu Ser Gly Ile Phe Pro Thr Ser Gly Pro Thr Tyr Pro Pro Thr
          145                 150                 155                 160 
          Asp Lys Pro Asp Asp Asp Thr Thr Asp Asp Asp Lys Val Asp Thr Thr
                          165                 170                 175     
          Ile Lys Pro Ile Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Gly Cys Asn Arg Thr Gly
                      180                 185                 190         
          Asp His Phe Thr Met Glu Pro Gly Ala Asn Phe Tyr Thr Val Pro Asn
                  195                 200                 205             
          Leu Gly Pro Ala Ser Ser Asn Ser Asp Glu Cys Tyr Thr Asn Pro Ser
              210                 215                 220                 
          Phe Ser Ile Gly Ser Ser Ile Tyr Met Phe Ser Gln Glu Ile Arg Lys
          225                 230                 235                 240 
          Thr Asp Cys Thr Ala Gly Glu Ile Leu Ser Ile Gln Ile Val Leu Gly
                          245                 250                 255     
          Arg Ile Val Asp Lys Gly Gln Gln Gly Pro Gln Ala Ser Pro Leu Leu
                      260                 265                 270         
          Val Trp Ala Val Pro Asn Pro Lys Ile Ile Asn Ser Cys Ala Val Ala
                  275                 280                 285             
          Ala Gly Asp Glu Met Gly Trp Val Leu Cys Ser Val Thr Leu Thr Ala
              290                 295                 300                 
          Ala Ser Gly Glu Pro Ile Pro His Met Phe Asp Gly Phe Trp Leu Tyr
          305                 310                 315                 320 
          Lys Leu Glu Pro Asp Thr Glu Val Val Ser Tyr Arg Ile Thr Gly Tyr
                          325                 330                 335     
          Ala Tyr Leu Leu Asp Lys Gln Tyr Asp Ser Val Phe Ile Gly Lys Gly
                      340                 345                 350         
          Gly Gly Ile Gln Lys Gly Asn Asp Leu Tyr Phe Gln Met Tyr Gly Leu
                  355                 360                 365             
          Ser Arg Asn Arg Gln Ser Phe Lys Ala Leu Cys Glu His Gly Ser Cys
              370                 375                 380                 
          Leu Gly Thr Gly Gly Gly Gly Tyr Gln Val Leu Cys Asp Arg Ala Val
          385                 390                 395                 400 
          Met Ser Phe Gly Ser Glu Glu Ser Leu Ile Thr Asn Ala Tyr Leu Lys
                          405                 410                 415     
          Val Asn Asp Leu Ala Ser Gly Lys Pro Val Ile Ile Gly Gln Thr Phe
                      420                 425                 430         
          Pro Pro Ser Asp Ser Tyr Lys Gly Ser Asn Gly Arg Met Tyr Thr Ile
                  435                 440                 445             
          Gly Asp Lys Tyr Gly Leu Tyr Leu Ala Pro Ser Ser Trp Asn Arg Tyr
              450                 455                 460                 
          Leu Arg Phe Gly Ile Thr Pro Asp Ile Ser Val Arg Ser Thr Thr Trp
          465                 470                 475                 480 
          Leu Lys Ser Gln Asp Pro Ile Met Lys Ile Leu Ser Thr Cys Thr Asn
                          485                 490                 495     
          Thr Asp Arg Asp Met Cys Pro Glu Ile Cys Asn Thr Arg Gly Tyr Gln
                      500                 505                 510         
          Asp Ile Phe Pro Leu Ser Glu Asp Ser Glu Tyr Tyr Thr Tyr Ile Gly
                  515                 520                 525             
          Ile Thr Pro Asn Asn Gly Gly Thr Lys Asn Phe Val Ala Val Arg Asp
              530                 535                 540                 
          Ser Asp Gly His Ile Ala Ser Ile Asp Ile Leu Gln Asn Tyr Tyr Ser
          545                 550                 555                 560 
          Ile Thr Ser Ala Thr Ile Ser Cys Phe Met Tyr Lys Asp Glu Ile Trp
                          565                 570                 575     
          Cys Ile Ala Ile Thr Glu Gly Lys Lys Gln Lys Asp Asn Pro Gln Arg
                      580                 585                 590         
          Ile Tyr Ala His Ser Tyr Lys Ile Arg Gln Met Cys Tyr Asn Met Lys
                  595                 600                 605             
          Ser Ala Thr Val Thr Val Gly Asn Ala Lys Asn Ile Thr Ile Arg Arg
              610                 615                 620                 
          Tyr
          625 
          <![CDATA[<210> 11]]>
          <![CDATA[<211> 624]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 墨江病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 墨江病毒，潼關1 G蛋白質(不具有Met)]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Ala Thr Asn Arg Asp Asn Thr Ile Thr Ser Ala Glu Val Ser Gln Glu
           1               5                  10                  15      
          Asp Lys Val Lys Lys Tyr Tyr Gly Val Glu Thr Ala Glu Lys Val Ala
                      20                  25                  30          
          Asp Ser Ile Ser Gly Asn Lys Val Phe Ile Leu Met Asn Thr Leu Leu
                  35                  40                  45              
          Ile Leu Thr Gly Ala Ile Ile Thr Ile Thr Leu Asn Ile Thr Asn Leu
              50                  55                  60                  
          Thr Ala Ala Lys Ser Gln Gln Asn Met Leu Lys Ile Ile Gln Asp Asp
          65                  70                  75                  80  
          Val Asn Ala Lys Leu Glu Met Phe Val Asn Leu Asp Gln Leu Val Lys
                          85                  90                  95      
          Gly Glu Ile Lys Pro Lys Val Ser Leu Ile Asn Thr Ala Val Ser Val
                      100                 105                 110         
          Ser Ile Pro Gly Gln Ile Ser Asn Leu Gln Thr Lys Phe Leu Gln Lys
                  115                 120                 125             
          Tyr Val Tyr Leu Glu Glu Ser Ile Thr Lys Gln Cys Thr Cys Asn Pro
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Gly Ile Phe Pro Thr Ser Gly Pro Thr Tyr Pro Pro Thr Asp
          145                 150                 155                 160 
          Lys Pro Asp Asp Asp Thr Thr Asp Asp Asp Lys Val Asp Thr Thr Ile
                          165                 170                 175     
          Lys Pro Ile Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Gly Cys Asn Arg Thr Gly Asp
                      180                 185                 190         
          His Phe Thr Met Glu Pro Gly Ala Asn Phe Tyr Thr Val Pro Asn Leu
                  195                 200                 205             
          Gly Pro Ala Ser Ser Asn Ser Asp Glu Cys Tyr Thr Asn Pro Ser Phe
              210                 215                 220                 
          Ser Ile Gly Ser Ser Ile Tyr Met Phe Ser Gln Glu Ile Arg Lys Thr
          225                 230                 235                 240 
          Asp Cys Thr Ala Gly Glu Ile Leu Ser Ile Gln Ile Val Leu Gly Arg
                          245                 250                 255     
          Ile Val Asp Lys Gly Gln Gln Gly Pro Gln Ala Ser Pro Leu Leu Val
                      260                 265                 270         
          Trp Ala Val Pro Asn Pro Lys Ile Ile Asn Ser Cys Ala Val Ala Ala
                  275                 280                 285             
          Gly Asp Glu Met Gly Trp Val Leu Cys Ser Val Thr Leu Thr Ala Ala
              290                 295                 300                 
          Ser Gly Glu Pro Ile Pro His Met Phe Asp Gly Phe Trp Leu Tyr Lys
          305                 310                 315                 320 
          Leu Glu Pro Asp Thr Glu Val Val Ser Tyr Arg Ile Thr Gly Tyr Ala
                          325                 330                 335     
          Tyr Leu Leu Asp Lys Gln Tyr Asp Ser Val Phe Ile Gly Lys Gly Gly
                      340                 345                 350         
          Gly Ile Gln Lys Gly Asn Asp Leu Tyr Phe Gln Met Tyr Gly Leu Ser
                  355                 360                 365             
          Arg Asn Arg Gln Ser Phe Lys Ala Leu Cys Glu His Gly Ser Cys Leu
              370                 375                 380                 
          Gly Thr Gly Gly Gly Gly Tyr Gln Val Leu Cys Asp Arg Ala Val Met
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Gly Ser Glu Glu Ser Leu Ile Thr Asn Ala Tyr Leu Lys Val
                          405                 410                 415     
          Asn Asp Leu Ala Ser Gly Lys Pro Val Ile Ile Gly Gln Thr Phe Pro
                      420                 425                 430         
          Pro Ser Asp Ser Tyr Lys Gly Ser Asn Gly Arg Met Tyr Thr Ile Gly
                  435                 440                 445             
          Asp Lys Tyr Gly Leu Tyr Leu Ala Pro Ser Ser Trp Asn Arg Tyr Leu
              450                 455                 460                 
          Arg Phe Gly Ile Thr Pro Asp Ile Ser Val Arg Ser Thr Thr Trp Leu
          465                 470                 475                 480 
          Lys Ser Gln Asp Pro Ile Met Lys Ile Leu Ser Thr Cys Thr Asn Thr
                          485                 490                 495     
          Asp Arg Asp Met Cys Pro Glu Ile Cys Asn Thr Arg Gly Tyr Gln Asp
                      500                 505                 510         
          Ile Phe Pro Leu Ser Glu Asp Ser Glu Tyr Tyr Thr Tyr Ile Gly Ile
                  515                 520                 525             
          Thr Pro Asn Asn Gly Gly Thr Lys Asn Phe Val Ala Val Arg Asp Ser
              530                 535                 540                 
          Asp Gly His Ile Ala Ser Ile Asp Ile Leu Gln Asn Tyr Tyr Ser Ile
          545                 550                 555                 560 
          Thr Ser Ala Thr Ile Ser Cys Phe Met Tyr Lys Asp Glu Ile Trp Cys
                          565                 570                 575     
          Ile Ala Ile Thr Glu Gly Lys Lys Gln Lys Asp Asn Pro Gln Arg Ile
                      580                 585                 590         
          Tyr Ala His Ser Tyr Lys Ile Arg Gln Met Cys Tyr Asn Met Lys Ser
                  595                 600                 605             
          Ala Thr Val Thr Val Gly Asn Ala Lys Asn Ile Thr Ile Arg Arg Tyr
              610                 615                 620                 
          <![CDATA[<210> 12]]>
          <![CDATA[<211> 597]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 經截短之NiVG蛋白質連接醣蛋白△5]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Met Lys Val Arg Phe Glu Asn Thr Thr Ser Asp Lys Gly Lys Ile Pro
           1               5                  10                  15      
          Ser Lys Val Ile Lys Ser Tyr Tyr Gly Thr Met Asp Ile Lys Lys Ile
                      20                  25                  30          
          Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ser Ala Phe Asn Thr Val
                  35                  40                  45              
          Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile Val Met Asn Ile Met Ile
              50                  55                  60                  
          Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln Ala Val Ile Lys Asp
          65                  70                  75                  80  
          Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly Leu Ala Asp Lys Ile
                          85                  90                  95      
          Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp Thr Ser Ser Thr
                      100                 105                 110         
          Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser Lys Ile Ser Gln
                  115                 120                 125             
          Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu Lys Cys Lys Phe Thr
              130                 135                 140                 
          Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser Cys Pro Asn Pro
          145                 150                 155                 160 
          Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu Gly Val Ser Asn Leu
                          165                 170                 175     
          Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys Thr Ser Asn Gln Ile
                      180                 185                 190         
          Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Val Val Gly Gln Ser
                  195                 200                 205             
          Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met Asp Glu Gly Tyr Phe
              210                 215                 220                 
          Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys Ser Arg Gly Val Ser
          225                 230                 235                 240 
          Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp Arg Gly Asp Glu
                          245                 250                 255     
          Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro Pro Asn Pro Asn
                      260                 265                 270         
          Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn Glu Phe Tyr Tyr Val
                  275                 280                 285             
          Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile Leu Asn Ser Thr Tyr
              290                 295                 300                 
          Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu Ala Val Lys Pro Lys Ser
          305                 310                 315                 320 
          Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala Leu Arg Ser Ile Glu
                          325                 330                 335     
          Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro Ser Gly Ile Lys
                      340                 345                 350         
          Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe Leu Val Arg Thr
                  355                 360                 365             
          Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Thr Lys Cys Gln Tyr
              370                 375                 380                 
          Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Ile Arg Pro Asn Ser
          385                 390                 395                 400 
          His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn Leu Ser Asp Gly
                          405                 410                 415     
          Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile Ser Asp Gln Arg Leu Ser
                      420                 425                 430         
          Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu Gly Gln Pro Val Phe
                  435                 440                 445             
          Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys Phe Gly Asp Val
              450                 455                 460                 
          Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp Arg Asn Asn Thr Val Ile
          465                 470                 475                 480 
          Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn Thr Cys Pro Glu
                          485                 490                 495     
          Ile Cys Trp Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe Leu Ile Asp Arg Ile
                      500                 505                 510         
          Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser Asn Gln Thr Ala Glu
                  515                 520                 525             
          Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile Leu Tyr Arg Ala
              530                 535                 540                 
          Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr Ile Thr Asn Cys
          545                 550                 555                 560 
          Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser Leu Val Glu Ile Tyr
                          565                 570                 575     
          Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe Ala Val Lys Ile
                      580                 585                 590         
          Pro Glu Gln Cys Thr
                  595         
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 582]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 經截短之NiVG蛋白質連接醣蛋白△20]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Met Ser Lys Val Ile Lys Ser Tyr Tyr Gly Thr Met Asp Ile Lys Lys
           1               5                  10                  15      
          Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ser Ala Phe Asn Thr
                      20                  25                  30          
          Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile Val Met Asn Ile Met
                  35                  40                  45              
          Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln Ala Val Ile Lys
              50                  55                  60                  
          Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly Leu Ala Asp Lys
          65                  70                  75                  80  
          Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp Thr Ser Ser
                          85                  90                  95      
          Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser Lys Ile Ser
                      100                 105                 110         
          Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu Lys Cys Lys Phe
                  115                 120                 125             
          Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser Cys Pro Asn
              130                 135                 140                 
          Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu Gly Val Ser Asn
          145                 150                 155                 160 
          Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys Thr Ser Asn Gln
                          165                 170                 175     
          Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Val Val Gly Gln
                      180                 185                 190         
          Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met Asp Glu Gly Tyr
                  195                 200                 205             
          Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys Ser Arg Gly Val
              210                 215                 220                 
          Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp Arg Gly Asp
          225                 230                 235                 240 
          Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro Pro Asn Pro
                          245                 250                 255     
          Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn Glu Phe Tyr Tyr
                      260                 265                 270         
          Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile Leu Asn Ser Thr
                  275                 280                 285             
          Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu Ala Val Lys Pro Lys
              290                 295                 300                 
          Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala Leu Arg Ser Ile
          305                 310                 315                 320 
          Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro Ser Gly Ile
                          325                 330                 335     
          Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe Leu Val Arg
                      340                 345                 350         
          Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Thr Lys Cys Gln
                  355                 360                 365             
          Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Ile Arg Pro Asn
              370                 375                 380                 
          Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn Leu Ser Asp
          385                 390                 395                 400 
          Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile Ser Asp Gln Arg Leu
                          405                 410                 415     
          Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu Gly Gln Pro Val
                      420                 425                 430         
          Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys Phe Gly Asp
                  435                 440                 445             
          Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp Arg Asn Asn Thr Val
              450                 455                 460                 
          Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn Thr Cys Pro
          465                 470                 475                 480 
          Glu Ile Cys Trp Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe Leu Ile Asp Arg
                          485                 490                 495     
          Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser Asn Gln Thr Ala
                      500                 505                 510         
          Glu Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile Leu Tyr Arg
                  515                 520                 525             
          Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr Ile Thr Asn
              530                 535                 540                 
          Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser Leu Val Glu Ile
          545                 550                 555                 560 
          Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe Ala Val Lys
                          565                 570                 575     
          Ile Pro Glu Gln Cys Thr
                      580         
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 經截短之NiVG蛋白質連接醣蛋白△25]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Met Ser Tyr Tyr Gly Thr Met Asp Ile Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu
           1               5                  10                  15      
          Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ser Ala Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu
                      20                  25                  30          
          Gly Ser Ile Val Ile Ile Val Met Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr
                  35                  40                  45              
          Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln Ala Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly
              50                  55                  60                  
          Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly Leu Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile
          65                  70                  75                  80  
          Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser
                      100                 105                 110         
          Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu Lys Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu
                  115                 120                 125             
          Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg
              130                 135                 140                 
          Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu Gly Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro
          145                 150                 155                 160 
          Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys Thr Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys
                          165                 170                 175     
          Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Val Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile
                      180                 185                 190         
          Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met Asp Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His
                  195                 200                 205             
          Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys Ser Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile
              210                 215                 220                 
          Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu
          225                 230                 235                 240 
          Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His
                          245                 250                 255     
          Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn Glu Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val
                      260                 265                 270         
          Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile Leu Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser
                  275                 280                 285             
          Leu Met Met Thr Arg Leu Ala Val Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly
              290                 295                 300                 
          Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala Leu Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr
          305                 310                 315                 320 
          Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr
                          325                 330                 335     
          Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr
                      340                 345                 350         
          Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Thr Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu
                  355                 360                 365             
          Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Ile Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu
              370                 375                 380                 
          Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys
          385                 390                 395                 400 
          Val Val Phe Ile Glu Ile Ser Asp Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro
                          405                 410                 415     
          Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu Gly Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser
                      420                 425                 430         
          Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn
                  435                 440                 445             
          Pro Leu Val Val Asn Trp Arg Asn Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn Thr Cys Pro Glu Ile Cys Trp Glu
          465                 470                 475                 480 
          Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe Leu Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser
                          485                 490                 495     
          Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser Asn Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe
                      500                 505                 510         
          Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser
                  515                 520                 525             
          Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys
              530                 535                 540                 
          Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser Leu Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp
          545                 550                 555                 560 
          Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys
                          565                 570                 575     
          Thr
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 500]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 尼帕病毒NiV-F F0 T234截短(aa 525-544)及N-連接之醣基化位點上之突變]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          Ile Leu His Tyr Glu Lys Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Val
           1               5                  10                  15      
          Thr Arg Lys Tyr Lys Ile Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val
                      20                  25                  30          
          Ile Lys Met Ile Pro Asn Val Ser Asn Met Ser Gln Cys Thr Gly Ser
                  35                  40                  45              
          Val Met Glu Asn Tyr Lys Thr Arg Leu Asn Gly Ile Leu Thr Pro Ile
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Ala Leu Glu Ile Tyr Lys Asn Gln Thr His Asp Leu Val Gly
          65                  70                  75                  80  
          Asp Val Arg Leu Ala Gly Val Ile Met Ala Gly Val Ala Ile Gly Ile
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Ala Ala Gln Ile Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met
                      100                 105                 110         
          Lys Asn Ala Asp Asn Ile Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr
                  115                 120                 125             
          Asn Glu Ala Val Val Lys Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr
              130                 135                 140                 
          Val Leu Thr Ala Leu Gln Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr
          145                 150                 155                 160 
          Ile Asp Lys Ile Ser Cys Lys Gln Thr Glu Leu Ser Leu Asp Leu Ala
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Lys Tyr Leu Ser Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Pro Val Ser Asn Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala
                  195                 200                 205             
          Phe Gly Gly Asn Tyr Glu Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr
              210                 215                 220                 
          Glu Asp Phe Asp Asp Leu Leu Glu Ser Asp Ser Ile Thr Gly Gln Ile
          225                 230                 235                 240 
          Ile Tyr Val Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe
                          245                 250                 255     
          Pro Ile Leu Thr Glu Ile Gln Gln Ala Tyr Ile Gln Glu Leu Leu Pro
                      260                 265                 270         
          Val Ser Phe Asn Asn Asp Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn
                  275                 280                 285             
          Phe Ile Leu Val Arg Asn Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Ile Gly Phe
              290                 295                 300                 
          Cys Leu Ile Thr Lys Arg Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr
          305                 310                 315                 320 
          Pro Met Thr Asn Asn Met Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Glu Lys
                          325                 330                 335     
          Cys Pro Arg Glu Leu Val Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu
                      340                 345                 350         
          Ser Asn Gly Val Leu Phe Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys
                  355                 360                 365             
          Gln Thr Thr Gly Arg Ala Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu
              370                 375                 380                 
          Met Ile Asp Asn Thr Thr Cys Pro Thr Ala Val Leu Gly Asn Val Ile
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Leu Gly Lys Tyr Leu Gly Ser Val Asn Tyr Asn Ser Glu Gly
                          405                 410                 415     
          Ile Ala Ile Gly Pro Pro Val Phe Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser
                      420                 425                 430         
          Gln Ile Ser Ser Met Asn Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile
                  435                 440                 445             
          Lys Glu Ala Gln Arg Leu Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser
              450                 455                 460                 
          Met Leu Ser Met Ile Ile Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ser Leu Cys
          465                 470                 475                 480 
          Ile Gly Leu Ile Thr Phe Ile Ser Phe Ile Ile Val Glu Lys Lys Arg
                          485                 490                 495     
          Asn Thr Gly Thr
                      500 
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 524]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 細胞質尾區處之經截短之NiV融合醣蛋白(Fc△22)(具有信號序列)]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Met Val Val Ile Leu Asp Lys Arg Cys Tyr Cys Asn Leu Leu Ile Leu
           1               5                  10                  15      
          Ile Leu Met Ile Ser Glu Cys Ser Val Gly Ile Leu His Tyr Glu Lys
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Val Thr Arg Lys Tyr Lys Ile
                  35                  40                  45              
          Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val Ile Lys Met Ile Pro Asn
              50                  55                  60                  
          Val Ser Asn Met Ser Gln Cys Thr Gly Ser Val Met Glu Asn Tyr Lys
          65                  70                  75                  80  
          Thr Arg Leu Asn Gly Ile Leu Thr Pro Ile Lys Gly Ala Leu Glu Ile
                          85                  90                  95      
          Tyr Lys Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly Asp Val Arg Leu Ala Gly
                      100                 105                 110         
          Val Ile Met Ala Gly Val Ala Ile Gly Ile Ala Thr Ala Ala Gln Ile
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met Lys Asn Ala Asp Asn Ile
              130                 135                 140                 
          Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr Asn Glu Ala Val Val Lys
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr Val Leu Thr Ala Leu Gln
                          165                 170                 175     
          Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr Ile Asp Lys Ile Ser Cys
                      180                 185                 190         
          Lys Gln Thr Glu Leu Ser Leu Asp Leu Ala Leu Ser Lys Tyr Leu Ser
                  195                 200                 205             
          Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu Gln Asp Pro Val Ser Asn
              210                 215                 220                 
          Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala Phe Gly Gly Asn Tyr Glu
          225                 230                 235                 240 
          Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr Glu Asp Phe Asp Asp Leu
                          245                 250                 255     
          Leu Glu Ser Asp Ser Ile Thr Gly Gln Ile Ile Tyr Val Asp Leu Ser
                      260                 265                 270         
          Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe Pro Ile Leu Thr Glu Ile
                  275                 280                 285             
          Gln Gln Ala Tyr Ile Gln Glu Leu Leu Pro Val Ser Phe Asn Asn Asp
              290                 295                 300                 
          Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn Phe Ile Leu Val Arg Asn
          305                 310                 315                 320 
          Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Ile Gly Phe Cys Leu Ile Thr Lys Arg
                          325                 330                 335     
          Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr Pro Met Thr Asn Asn Met
                      340                 345                 350         
          Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Glu Lys Cys Pro Arg Glu Leu Val
                  355                 360                 365             
          Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu Ser Asn Gly Val Leu Phe
              370                 375                 380                 
          Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys Gln Thr Thr Gly Arg Ala
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu Met Ile Asp Asn Thr Thr
                          405                 410                 415     
          Cys Pro Thr Ala Val Leu Gly Asn Val Ile Ile Ser Leu Gly Lys Tyr
                      420                 425                 430         
          Leu Gly Ser Val Asn Tyr Asn Ser Glu Gly Ile Ala Ile Gly Pro Pro
                  435                 440                 445             
          Val Phe Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser Gln Ile Ser Ser Met Asn
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile Lys Glu Ala Gln Arg Leu
          465                 470                 475                 480 
          Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser Met Leu Ser Met Ile Ile
                          485                 490                 495     
          Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ser Leu Cys Ile Gly Leu Ile Thr Phe
                      500                 505                 510         
          Ile Ser Phe Ile Ile Val Glu Lys Lys Arg Asn Thr
                  515                 520                 
          <![CDATA[<210> 17]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 經截短及突變之NiVG蛋白質連接醣蛋白]]>
          <![CDATA[<400> 17]]>
          Met Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ser Ala
           1               5                  10                  15      
          Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile Val Met
                      20                  25                  30          
          Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln Ala
                  35                  40                  45              
          Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly Leu
              50                  55                  60                  
          Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp
          65                  70                  75                  80  
          Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser
                          85                  90                  95      
          Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu Lys
                      100                 105                 110         
          Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser
                  115                 120                 125             
          Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu Gly
              130                 135                 140                 
          Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys Thr
          145                 150                 155                 160 
          Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Val
                          165                 170                 175     
          Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met Asp
                      180                 185                 190         
          Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys Ser
                  195                 200                 205             
          Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp
              210                 215                 220                 
          Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro
          225                 230                 235                 240 
          Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn Glu
                          245                 250                 255     
          Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile Leu
                      260                 265                 270         
          Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu Ala Val
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala Leu
              290                 295                 300                 
          Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro
          305                 310                 315                 320 
          Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe
                          325                 330                 335     
          Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Thr
                      340                 345                 350         
          Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Ile
                  355                 360                 365             
          Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn
              370                 375                 380                 
          Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile Ser Asp
          385                 390                 395                 400 
          Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu Gly
                          405                 410                 415     
          Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys
                      420                 425                 430         
          Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp Arg Asn
                  435                 440                 445             
          Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn
              450                 455                 460                 
          Thr Cys Pro Ala Ile Cys Ala Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe Leu
          465                 470                 475                 480 
          Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser Asn
                          485                 490                 495     
          Ala Thr Ala Ala Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile
                      500                 505                 510         
          Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr
                  515                 520                 525             
          Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser Leu
              530                 535                 540                 
          Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe
          545                 550                 555                 560 
          Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys Thr
                          565                 
          <![CDATA[<210> 18]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 經截短及突變之NiVG蛋白質連接醣蛋白]]>
          <![CDATA[<400> 18]]>
          Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ser Ala Phe
           1               5                  10                  15      
          Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile Val Met Asn
                      20                  25                  30          
          Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln Ala Val
                  35                  40                  45              
          Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly Leu Ala
              50                  55                  60                  
          Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp Thr
          65                  70                  75                  80  
          Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser Lys
                          85                  90                  95      
          Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu Lys Cys
                      100                 105                 110         
          Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser Cys
                  115                 120                 125             
          Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu Gly Val
              130                 135                 140                 
          Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys Thr Ser
          145                 150                 155                 160 
          Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Val Val
                          165                 170                 175     
          Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met Asp Glu
                      180                 185                 190         
          Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys Ser Arg
                  195                 200                 205             
          Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp Arg
              210                 215                 220                 
          Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro Pro
          225                 230                 235                 240 
          Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn Glu Phe
                          245                 250                 255     
          Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile Leu Asn
                      260                 265                 270         
          Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu Ala Val Lys
                  275                 280                 285             
          Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala Leu Arg
              290                 295                 300                 
          Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro Ser
          305                 310                 315                 320 
          Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe Leu
                          325                 330                 335     
          Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Thr Lys
                      340                 345                 350         
          Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Ile Arg
                  355                 360                 365             
          Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn Leu
              370                 375                 380                 
          Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile Ser Asp Gln
          385                 390                 395                 400 
          Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu Gly Gln
                          405                 410                 415     
          Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys Phe
                      420                 425                 430         
          Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp Arg Asn Asn
                  435                 440                 445             
          Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn Thr
              450                 455                 460                 
          Cys Pro Ala Ile Cys Ala Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe Leu Ile
          465                 470                 475                 480 
          Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser Asn Ala
                          485                 490                 495     
          Thr Ala Ala Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile Leu
                      500                 505                 510         
          Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr Ile
                  515                 520                 525             
          Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser Leu Val
              530                 535                 540                 
          Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe Ala
          545                 550                 555                 560 
          Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys Thr
                          565             
          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 524]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 經截短之NiV融合醣蛋白]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 細胞質尾區處之(Fc△22)(具有信號序列)]]>
          <![CDATA[<400> 19]]>
          Met Val Val Ile Leu Asp Lys Arg Cys Tyr Cys Asn Leu Leu Ile Leu
           1               5                  10                  15      
          Ile Leu Met Ile Ser Glu Cys Ser Val Gly Ile Leu His Tyr Glu Lys
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Val Thr Arg Lys Tyr Lys Ile
                  35                  40                  45              
          Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val Ile Lys Met Ile Pro Asn
              50                  55                  60                  
          Val Ser Asn Met Ser Gln Cys Thr Gly Ser Val Met Glu Asn Tyr Lys
          65                  70                  75                  80  
          Thr Arg Leu Asn Gly Ile Leu Thr Pro Ile Lys Gly Ala Leu Glu Ile
                          85                  90                  95      
          Tyr Lys Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly Asp Val Arg Leu Ala Gly
                      100                 105                 110         
          Val Ile Met Ala Gly Val Ala Ile Gly Ile Ala Thr Ala Ala Gln Ile
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met Lys Asn Ala Asp Asn Ile
              130                 135                 140                 
          Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr Asn Glu Ala Val Val Lys
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr Val Leu Thr Ala Leu Gln
                          165                 170                 175     
          Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr Ile Asp Lys Ile Ser Cys
                      180                 185                 190         
          Lys Gln Thr Glu Leu Ser Leu Asp Leu Ala Leu Ser Lys Tyr Leu Ser
                  195                 200                 205             
          Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu Gln Asp Pro Val Ser Asn
              210                 215                 220                 
          Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala Phe Gly Gly Asn Tyr Glu
          225                 230                 235                 240 
          Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr Glu Asp Phe Asp Asp Leu
                          245                 250                 255     
          Leu Glu Ser Asp Ser Ile Thr Gly Gln Ile Ile Tyr Val Asp Leu Ser
                      260                 265                 270         
          Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe Pro Ile Leu Thr Glu Ile
                  275                 280                 285             
          Gln Gln Ala Tyr Ile Gln Glu Leu Leu Pro Val Ser Phe Asn Asn Asp
              290                 295                 300                 
          Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn Phe Ile Leu Val Arg Asn
          305                 310                 315                 320 
          Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Ile Gly Phe Cys Leu Ile Thr Lys Arg
                          325                 330                 335     
          Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr Pro Met Thr Asn Asn Met
                      340                 345                 350         
          Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Glu Lys Cys Pro Arg Glu Leu Val
                  355                 360                 365             
          Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu Ser Asn Gly Val Leu Phe
              370                 375                 380                 
          Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys Gln Thr Thr Gly Arg Ala
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu Met Ile Asp Asn Thr Thr
                          405                 410                 415     
          Cys Pro Thr Ala Val Leu Gly Asn Val Ile Ile Ser Leu Gly Lys Tyr
                      420                 425                 430         
          Leu Gly Ser Val Asn Tyr Asn Ser Glu Gly Ile Ala Ile Gly Pro Pro
                  435                 440                 445             
          Val Phe Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser Gln Ile Ser Ser Met Asn
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile Lys Glu Ala Gln Arg Leu
          465                 470                 475                 480 
          Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser Met Leu Ser Met Ile Ile
                          485                 490                 495     
          Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ser Leu Cys Ile Gly Leu Ile Thr Phe
                      500                 505                 510         
          Ile Ser Phe Ile Ile Val Glu Lys Lys Arg Asn Thr
                  515                 520                 
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 500]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 尼帕病毒NiV-F F0 T234截短(aa 525-544)]]>
          <![CDATA[<400> 20]]>
          Ile Leu His Tyr Glu Lys Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Val
           1               5                  10                  15      
          Thr Arg Lys Tyr Lys Ile Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val
                      20                  25                  30          
          Ile Lys Met Ile Pro Asn Val Ser Asn Met Ser Gln Cys Thr Gly Ser
                  35                  40                  45              
          Val Met Glu Asn Tyr Lys Thr Arg Leu Asn Gly Ile Leu Thr Pro Ile
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Ala Leu Glu Ile Tyr Lys Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly
          65                  70                  75                  80  
          Asp Val Arg Leu Ala Gly Val Ile Met Ala Gly Val Ala Ile Gly Ile
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Ala Ala Gln Ile Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met
                      100                 105                 110         
          Lys Asn Ala Asp Asn Ile Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr
                  115                 120                 125             
          Asn Glu Ala Val Val Lys Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr
              130                 135                 140                 
          Val Leu Thr Ala Leu Gln Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr
          145                 150                 155                 160 
          Ile Asp Lys Ile Ser Cys Lys Gln Thr Glu Leu Ser Leu Asp Leu Ala
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Lys Tyr Leu Ser Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Pro Val Ser Asn Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala
                  195                 200                 205             
          Phe Gly Gly Asn Tyr Glu Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr
              210                 215                 220                 
          Glu Asp Phe Asp Asp Leu Leu Glu Ser Asp Ser Ile Thr Gly Gln Ile
          225                 230                 235                 240 
          Ile Tyr Val Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe
                          245                 250                 255     
          Pro Ile Leu Thr Glu Ile Gln Gln Ala Tyr Ile Gln Glu Leu Leu Pro
                      260                 265                 270         
          Val Ser Phe Asn Asn Asp Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn
                  275                 280                 285             
          Phe Ile Leu Val Arg Asn Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Ile Gly Phe
              290                 295                 300                 
          Cys Leu Ile Thr Lys Arg Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr
          305                 310                 315                 320 
          Pro Met Thr Asn Asn Met Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Glu Lys
                          325                 330                 335     
          Cys Pro Arg Glu Leu Val Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu
                      340                 345                 350         
          Ser Asn Gly Val Leu Phe Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys
                  355                 360                 365             
          Gln Thr Thr Gly Arg Ala Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu
              370                 375                 380                 
          Met Ile Asp Asn Thr Thr Cys Pro Thr Ala Val Leu Gly Asn Val Ile
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Leu Gly Lys Tyr Leu Gly Ser Val Asn Tyr Asn Ser Glu Gly
                          405                 410                 415     
          Ile Ala Ile Gly Pro Pro Val Phe Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser
                      420                 425                 430         
          Gln Ile Ser Ser Met Asn Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile
                  435                 440                 445             
          Lys Glu Ala Gln Arg Leu Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser
              450                 455                 460                 
          Met Leu Ser Met Ile Ile Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ser Leu Cys
          465                 470                 475                 480 
          Ile Gly Leu Ile Thr Phe Ile Ser Phe Ile Ile Val Glu Lys Lys Arg
                          485                 490                 495     
          Asn Thr Gly Thr
                      500 
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 498]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 細胞質尾區處之經截短之成熟NiV融合醣蛋白(Fc△22)]]>
          <![CDATA[<400> 21]]>
          Ile Leu His Tyr Glu Lys Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Val
           1               5                  10                  15      
          Thr Arg Lys Tyr Lys Ile Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val
                      20                  25                  30          
          Ile Lys Met Ile Pro Asn Val Ser Asn Met Ser Gln Cys Thr Gly Ser
                  35                  40                  45              
          Val Met Glu Asn Tyr Lys Thr Arg Leu Asn Gly Ile Leu Thr Pro Ile
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Ala Leu Glu Ile Tyr Lys Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly
          65                  70                  75                  80  
          Asp Val Arg Leu Ala Gly Val Ile Met Ala Gly Val Ala Ile Gly Ile
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Ala Ala Gln Ile Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met
                      100                 105                 110         
          Lys Asn Ala Asp Asn Ile Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr
                  115                 120                 125             
          Asn Glu Ala Val Val Lys Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr
              130                 135                 140                 
          Val Leu Thr Ala Leu Gln Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr
          145                 150                 155                 160 
          Ile Asp Lys Ile Ser Cys Lys Gln Thr Glu Leu Ser Leu Asp Leu Ala
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Lys Tyr Leu Ser Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Pro Val Ser Asn Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala
                  195                 200                 205             
          Phe Gly Gly Asn Tyr Glu Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr
              210                 215                 220                 
          Glu Asp Phe Asp Asp Leu Leu Glu Ser Asp Ser Ile Thr Gly Gln Ile
          225                 230                 235                 240 
          Ile Tyr Val Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe
                          245                 250                 255     
          Pro Ile Leu Thr Glu Ile Gln Gln Ala Tyr Ile Gln Glu Leu Leu Pro
                      260                 265                 270         
          Val Ser Phe Asn Asn Asp Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn
                  275                 280                 285             
          Phe Ile Leu Val Arg Asn Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Ile Gly Phe
              290                 295                 300                 
          Cys Leu Ile Thr Lys Arg Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr
          305                 310                 315                 320 
          Pro Met Thr Asn Asn Met Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Glu Lys
                          325                 330                 335     
          Cys Pro Arg Glu Leu Val Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu
                      340                 345                 350         
          Ser Asn Gly Val Leu Phe Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys
                  355                 360                 365             
          Gln Thr Thr Gly Arg Ala Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu
              370                 375                 380                 
          Met Ile Asp Asn Thr Thr Cys Pro Thr Ala Val Leu Gly Asn Val Ile
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Leu Gly Lys Tyr Leu Gly Ser Val Asn Tyr Asn Ser Glu Gly
                          405                 410                 415     
          Ile Ala Ile Gly Pro Pro Val Phe Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser
                      420                 425                 430         
          Gln Ile Ser Ser Met Asn Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile
                  435                 440                 445             
          Lys Glu Ala Gln Arg Leu Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser
              450                 455                 460                 
          Met Leu Ser Met Ile Ile Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ser Leu Cys
          465                 470                 475                 480 
          Ile Gly Leu Ile Thr Phe Ile Ser Phe Ile Ile Val Glu Lys Lys Arg
                          485                 490                 495     
          Asn Thr
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 552]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> NivG蛋白質連接醣蛋白，不具有細胞質尾區]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> Uniprot Q9IH62]]>
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile Val Met
           1               5                  10                  15      
          Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln Ala
                      20                  25                  30          
          Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly Leu
                  35                  40                  45              
          Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp
              50                  55                  60                  
          Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser
          65                  70                  75                  80  
          Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu Lys
                          85                  90                  95      
          Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser
                      100                 105                 110         
          Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu Gly
                  115                 120                 125             
          Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys Thr
              130                 135                 140                 
          Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Val
          145                 150                 155                 160 
          Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met Asp
                          165                 170                 175     
          Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys Ser
                      180                 185                 190         
          Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp
                  195                 200                 205             
          Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro
              210                 215                 220                 
          Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn Glu
          225                 230                 235                 240 
          Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile Leu
                          245                 250                 255     
          Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu Ala Val
                      260                 265                 270         
          Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala Leu
                  275                 280                 285             
          Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro
              290                 295                 300                 
          Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe
          305                 310                 315                 320 
          Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Thr
                          325                 330                 335     
          Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Ile
                      340                 345                 350         
          Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile Ser Asp
              370                 375                 380                 
          Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu Gly
          385                 390                 395                 400 
          Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys
                          405                 410                 415     
          Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp Arg Asn
                      420                 425                 430         
          Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn
                  435                 440                 445             
          Thr Cys Pro Glu Ile Cys Trp Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe Leu
              450                 455                 460                 
          Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser Asn
          465                 470                 475                 480 
          Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile
                          485                 490                 495     
          Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr
                      500                 505                 510         
          Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser Leu
                  515                 520                 525             
          Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe
              530                 535                 540                 
          Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys
          545                 550         
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 604]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 亨德拉病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 亨德拉病毒G蛋白質Uniprot O89343]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          Met Met Ala Asp Ser Lys Leu Val Ser Leu Asn Asn Asn Leu Ser Gly
           1               5                  10                  15      
          Lys Ile Lys Asp Gln Gly Lys Val Ile Lys Asn Tyr Tyr Gly Thr Met
                      20                  25                  30          
          Asp Ile Lys Lys Ile Asn Asp Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Gly
                  35                  40                  45              
          Ala Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Ile Ile Ile Val
              50                  55                  60                  
          Met Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Thr Thr Asp Asn Gln
          65                  70                  75                  80  
          Ala Leu Ile Lys Glu Ser Leu Gln Ser Val Gln Gln Gln Ile Lys Ala
                          85                  90                  95      
          Leu Thr Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile
                      100                 105                 110         
          Asp Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly
                  115                 120                 125             
          Ser Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ser Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Asp
              130                 135                 140                 
          Lys Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile
          145                 150                 155                 160 
          Ser Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Ile Ser Gln
                          165                 170                 175     
          Gly Val Ser Asp Leu Val Gly Leu Pro Asn Gln Ile Cys Leu Gln Lys
                      180                 185                 190         
          Thr Thr Ser Thr Ile Leu Lys Pro Arg Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro
                  195                 200                 205             
          Ile Asn Thr Arg Glu Gly Val Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Val
              210                 215                 220                 
          Asp Asn Gly Phe Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Lys Ile Gly Ser Cys
          225                 230                 235                 240 
          Thr Arg Gly Ile Ala Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu
                          245                 250                 255     
          Asp Arg Gly Asp Lys Val Pro Ser Met Phe Met Thr Asn Val Trp Thr
                      260                 265                 270         
          Pro Pro Asn Pro Ser Thr Ile His His Cys Ser Ser Thr Tyr His Glu
                  275                 280                 285             
          Asp Phe Tyr Tyr Thr Leu Cys Ala Val Ser His Val Gly Asp Pro Ile
              290                 295                 300                 
          Leu Asn Ser Thr Ser Trp Thr Glu Ser Leu Ser Leu Ile Arg Leu Ala
          305                 310                 315                 320 
          Val Arg Pro Lys Ser Asp Ser Gly Asp Tyr Asn Gln Lys Tyr Ile Ala
                          325                 330                 335     
          Ile Thr Lys Val Glu Arg Gly Lys Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly
                  355                 360                 365             
          Phe Leu Pro Arg Thr Glu Phe Gln Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile
              370                 375                 380                 
          Ile His Cys Lys Tyr Ser Lys Ala Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly
          385                 390                 395                 400 
          Val Asn Ser Lys Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr
                          405                 410                 415     
          Asn Leu Ser Leu Gly Gly Asp Ile Ile Leu Gln Phe Ile Glu Ile Ala
                      420                 425                 430         
          Asp Asn Arg Leu Thr Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asn Ser Leu
                  435                 440                 445             
          Gly Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Tyr Ser Trp Asp Thr Met Ile
              450                 455                 460                 
          Lys Leu Gly Asp Val Asp Thr Val Asp Pro Leu Arg Val Gln Trp Arg
          465                 470                 475                 480 
          Asn Asn Ser Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe
                          485                 490                 495     
          Asn Val Cys Pro Glu Val Cys Trp Glu Gly Thr Tyr Asn Asp Ala Phe
                      500                 505                 510         
          Leu Ile Asp Arg Leu Asn Trp Val Ser Ala Gly Val Tyr Leu Asn Ser
                  515                 520                 525             
          Asn Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Ala Val Phe Lys Asp Asn Glu
              530                 535                 540                 
          Ile Leu Tyr Gln Val Pro Leu Ala Glu Asp Asp Thr Asn Ala Gln Lys
          545                 550                 555                 560 
          Thr Ile Thr Asp Cys Phe Leu Leu Glu Asn Val Ile Trp Cys Ile Ser
                          565                 570                 575     
          Leu Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Ser Val Ile Arg Pro Lys Leu
                      580                 585                 590         
          Phe Ala Val Lys Ile Pro Ala Gln Cys Ser Glu Ser
                  595                 600                 
          <![CDATA[<210> 24]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 亨德拉病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 亨德拉病毒G蛋白質，不具有N端甲硫胺酸]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> Uniprot O89343]]>
          <![CDATA[<400> 24]]>
          Met Ala Asp Ser Lys Leu Val Ser Leu Asn Asn Asn Leu Ser Gly Lys
           1               5                  10                  15      
          Ile Lys Asp Gln Gly Lys Val Ile Lys Asn Tyr Tyr Gly Thr Met Asp
                      20                  25                  30          
          Ile Lys Lys Ile Asn Asp Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Gly Ala
                  35                  40                  45              
          Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Ile Ile Ile Val Met
              50                  55                  60                  
          Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Thr Thr Asp Asn Gln Ala
          65                  70                  75                  80  
          Leu Ile Lys Glu Ser Leu Gln Ser Val Gln Gln Gln Ile Lys Ala Leu
                          85                  90                  95      
          Thr Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp
                      100                 105                 110         
          Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser
                  115                 120                 125             
          Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ser Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Asp Lys
              130                 135                 140                 
          Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser
          145                 150                 155                 160 
          Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Ile Ser Gln Gly
                          165                 170                 175     
          Val Ser Asp Leu Val Gly Leu Pro Asn Gln Ile Cys Leu Gln Lys Thr
                      180                 185                 190         
          Thr Ser Thr Ile Leu Lys Pro Arg Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Ile
                  195                 200                 205             
          Asn Thr Arg Glu Gly Val Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Val Asp
              210                 215                 220                 
          Asn Gly Phe Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Lys Ile Gly Ser Cys Thr
          225                 230                 235                 240 
          Arg Gly Ile Ala Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp
                          245                 250                 255     
          Arg Gly Asp Lys Val Pro Ser Met Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro
                      260                 265                 270         
          Pro Asn Pro Ser Thr Ile His His Cys Ser Ser Thr Tyr His Glu Asp
                  275                 280                 285             
          Phe Tyr Tyr Thr Leu Cys Ala Val Ser His Val Gly Asp Pro Ile Leu
              290                 295                 300                 
          Asn Ser Thr Ser Trp Thr Glu Ser Leu Ser Leu Ile Arg Leu Ala Val
          305                 310                 315                 320 
          Arg Pro Lys Ser Asp Ser Gly Asp Tyr Asn Gln Lys Tyr Ile Ala Ile
                          325                 330                 335     
          Thr Lys Val Glu Arg Gly Lys Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro
                      340                 345                 350         
          Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe
                  355                 360                 365             
          Leu Pro Arg Thr Glu Phe Gln Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Ile
              370                 375                 380                 
          His Cys Lys Tyr Ser Lys Ala Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Val
          385                 390                 395                 400 
          Asn Ser Lys Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn
                          405                 410                 415     
          Leu Ser Leu Gly Gly Asp Ile Ile Leu Gln Phe Ile Glu Ile Ala Asp
                      420                 425                 430         
          Asn Arg Leu Thr Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asn Ser Leu Gly
                  435                 440                 445             
          Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Tyr Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys
              450                 455                 460                 
          Leu Gly Asp Val Asp Thr Val Asp Pro Leu Arg Val Gln Trp Arg Asn
          465                 470                 475                 480 
          Asn Ser Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn
                          485                 490                 495     
          Val Cys Pro Glu Val Cys Trp Glu Gly Thr Tyr Asn Asp Ala Phe Leu
                      500                 505                 510         
          Ile Asp Arg Leu Asn Trp Val Ser Ala Gly Val Tyr Leu Asn Ser Asn
                  515                 520                 525             
          Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Ala Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile
              530                 535                 540                 
          Leu Tyr Gln Val Pro Leu Ala Glu Asp Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr
          545                 550                 555                 560 
          Ile Thr Asp Cys Phe Leu Leu Glu Asn Val Ile Trp Cys Ile Ser Leu
                          565                 570                 575     
          Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Ser Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe
                      580                 585                 590         
          Ala Val Lys Ile Pro Ala Gln Cys Ser Glu Ser
                  595                 600             
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 555]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Ile Ile Ile Val Met
           1               5                  10                  15      
          Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Thr Thr Asp Asn Gln Ala
                      20                  25                  30          
          Leu Ile Lys Glu Ser Leu Gln Ser Val Gln Gln Gln Ile Lys Ala Leu
                  35                  40                  45              
          Thr Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp
              50                  55                  60                  
          Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser
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          Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ser Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Asp Lys
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          Ala Val Lys Ile Pro Ala Gln Cys Ser Glu Ser
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          Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Ile Ile Ile Val Met
           1               5                  10                  15      
          Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Thr Thr Asp Asn Gln Ala
                      20                  25                  30          
          Leu Ile Lys Glu Ser Leu Gln Ser Val Gln Gln Gln Ile Lys Ala Leu
                  35                  40                  45              
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          Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser
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                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          Val Ser Asp Leu Val Gly Leu Pro Asn Gln Ile Cys Leu Gln Lys Thr
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          Thr Ser Thr Ile Leu Lys Pro Arg Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Ile
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          Asn Ser Lys Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn
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          Asn Ser Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn
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          Ile Thr Asp Cys Phe Leu Leu Glu Asn Val Ile Trp Cys Ile Ser Leu
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          Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Ser Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe
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          Ala Val Lys Ile Pro Ala Gln Cys Ser Glu Ser
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          <![CDATA[<400> 27]]>
          Met Gly Pro Ala Glu Asn Lys Lys Val Arg Phe Glu Asn Thr Thr Ser
           1               5                  10                  15      
          Asp Lys Gly Lys Ile Pro Ser Lys Val Ile Lys Ser Tyr Tyr Gly Thr
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          Met Asp Ile Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile
              50                  55                  60                  
          Val Met Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn
          65                  70                  75                  80  
          Gln Ala Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys
                          85                  90                  95      
          Gly Leu Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu
                      100                 105                 110         
          Ile Asp Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn
              130                 135                 140                 
          Glu Lys Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn
          145                 150                 155                 160 
          Ile Ser Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr
                          165                 170                 175     
          Glu Gly Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln
                      180                 185                 190         
          Lys Thr Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu
                  195                 200                 205             
          Pro Val Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala
              210                 215                 220                 
          Met Asp Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser
          225                 230                 235                 240 
          Cys Ser Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val
                          245                 250                 255     
          Leu Asp Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp
                      260                 265                 270         
          Thr Pro Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn
                  275                 280                 285             
          Asn Glu Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro
              290                 295                 300                 
          Ile Leu Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu
          305                 310                 315                 320 
          Ala Val Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu
                          325                 330                 335     
          Ala Leu Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr
                      340                 345                 350         
          Gly Pro Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro
              370                 375                 380                 
          Ile Thr Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ile Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys
                          405                 410                 415     
          Tyr Asn Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile
                      420                 425                 430         
          Ser Asp Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser
                  435                 440                 445             
          Leu Gly Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met
              450                 455                 460                 
          Ile Lys Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp
          465                 470                 475                 480 
          Arg Asn Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg
                          485                 490                 495     
          Phe Asn Thr Cys Pro Glu Ile Cys Trp Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala
                      500                 505                 510         
          Phe Leu Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp
                  515                 520                 525             
          Ser Asn Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn
              530                 535                 540                 
          Glu Ile Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln
          545                 550                 555                 560 
          Lys Thr Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile
                          565                 570                 575     
          Ser Leu Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys
                      580                 585                 590         
          Leu Phe Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys
                  595                 600         
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 546]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 亨德拉病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 亨德拉病毒F蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          Met Ala Thr Gln Glu Val Arg Leu Lys Cys Leu Leu Cys Gly Ile Ile
           1               5                  10                  15      
          Val Leu Val Leu Ser Leu Glu Gly Leu Gly Ile Leu His Tyr Glu Lys
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Ile Thr Arg Lys Tyr Lys Ile
                  35                  40                  45              
          Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val Ile Lys Met Ile Pro Asn
              50                  55                  60                  
          Val Ser Asn Val Ser Lys Cys Thr Gly Thr Val Met Glu Asn Tyr Lys
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Leu Thr Gly Ile Leu Ser Pro Ile Lys Gly Ala Ile Glu Leu
                          85                  90                  95      
          Tyr Asn Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly Asp Val Lys Leu Ala Gly
                      100                 105                 110         
          Val Val Met Ala Gly Ile Ala Ile Gly Ile Ala Thr Ala Ala Gln Ile
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met Lys Asn Ala Asp Asn Ile
              130                 135                 140                 
          Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr Asn Glu Ala Val Val Lys
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr Val Leu Thr Ala Leu Gln
                          165                 170                 175     
          Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr Ile Asp Gln Ile Ser Cys
                      180                 185                 190         
          Lys Gln Thr Glu Leu Ala Leu Asp Leu Ala Leu Ser Lys Tyr Leu Ser
                  195                 200                 205             
          Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu Gln Asp Pro Val Ser Asn
              210                 215                 220                 
          Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala Phe Gly Gly Asn Tyr Glu
          225                 230                 235                 240 
          Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr Glu Asp Phe Asp Asp Leu
                          245                 250                 255     
          Leu Glu Ser Asp Ser Ile Ala Gly Gln Ile Val Tyr Val Asp Leu Ser
                      260                 265                 270         
          Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe Pro Ile Leu Thr Glu Ile
                  275                 280                 285             
          Gln Gln Ala Tyr Val Gln Glu Leu Leu Pro Val Ser Phe Asn Asn Asp
              290                 295                 300                 
          Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn Phe Val Leu Ile Arg Asn
          305                 310                 315                 320 
          Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Val Lys Tyr Cys Leu Ile Thr Lys Lys
                          325                 330                 335     
          Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr Pro Met Thr Ala Ser Val
                      340                 345                 350         
          Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Asp Lys Cys Pro Arg Glu Leu Val
                  355                 360                 365             
          Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu Ser Gly Gly Val Leu Phe
              370                 375                 380                 
          Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys Gln Thr Thr Gly Arg Ala
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu Met Ile Asp Asn Thr Thr
                          405                 410                 415     
          Cys Thr Thr Val Val Leu Gly Asn Ile Ile Ile Ser Leu Gly Lys Tyr
                      420                 425                 430         
          Leu Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Ser Glu Ser Ile Ala Val Gly Pro Pro
                  435                 440                 445             
          Val Tyr Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser Gln Ile Ser Ser Met Asn
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile Lys Glu Ala Gln Lys Ile
          465                 470                 475                 480 
          Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser Met Leu Ser Met Ile Ile
                          485                 490                 495     
          Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ala Leu Cys Ile Gly Leu Ile Thr Phe
                      500                 505                 510         
          Ile Ser Phe Val Ile Val Glu Lys Lys Arg Gly Asn Tyr Ser Arg Leu
                  515                 520                 525             
          Asp Asp Arg Gln Val Arg Pro Val Ser Asn Gly Asp Leu Tyr Tyr Ile
              530                 535                 540                 
          Gly Thr
          545     
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 520]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 亨德拉病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 亨德拉病毒F蛋白質，不具有信號序列]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          Ile Leu His Tyr Glu Lys Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Ile
           1               5                  10                  15      
          Thr Arg Lys Tyr Lys Ile Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val
                      20                  25                  30          
          Ile Lys Met Ile Pro Asn Val Ser Asn Val Ser Lys Cys Thr Gly Thr
                  35                  40                  45              
          Val Met Glu Asn Tyr Lys Ser Arg Leu Thr Gly Ile Leu Ser Pro Ile
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Ala Ile Glu Leu Tyr Asn Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly
          65                  70                  75                  80  
          Asp Val Lys Leu Ala Gly Val Val Met Ala Gly Ile Ala Ile Gly Ile
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Ala Ala Gln Ile Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met
                      100                 105                 110         
          Lys Asn Ala Asp Asn Ile Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr
                  115                 120                 125             
          Asn Glu Ala Val Val Lys Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr
              130                 135                 140                 
          Val Leu Thr Ala Leu Gln Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr
          145                 150                 155                 160 
          Ile Asp Gln Ile Ser Cys Lys Gln Thr Glu Leu Ala Leu Asp Leu Ala
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Lys Tyr Leu Ser Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Pro Val Ser Asn Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala
                  195                 200                 205             
          Phe Gly Gly Asn Tyr Glu Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr
              210                 215                 220                 
          Glu Asp Phe Asp Asp Leu Leu Glu Ser Asp Ser Ile Ala Gly Gln Ile
          225                 230                 235                 240 
          Val Tyr Val Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe
                          245                 250                 255     
          Pro Ile Leu Thr Glu Ile Gln Gln Ala Tyr Val Gln Glu Leu Leu Pro
                      260                 265                 270         
          Val Ser Phe Asn Asn Asp Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn
                  275                 280                 285             
          Phe Val Leu Ile Arg Asn Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Val Lys Tyr
              290                 295                 300                 
          Cys Leu Ile Thr Lys Lys Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr
          305                 310                 315                 320 
          Pro Met Thr Ala Ser Val Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Asp Lys
                          325                 330                 335     
          Cys Pro Arg Glu Leu Val Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu
                      340                 345                 350         
          Ser Gly Gly Val Leu Phe Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys
                  355                 360                 365             
          Gln Thr Thr Gly Arg Ala Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu
              370                 375                 380                 
          Met Ile Asp Asn Thr Thr Cys Thr Thr Val Val Leu Gly Asn Ile Ile
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Leu Gly Lys Tyr Leu Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Ser Glu Ser
                          405                 410                 415     
          Ile Ala Val Gly Pro Pro Val Tyr Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser
                      420                 425                 430         
          Gln Ile Ser Ser Met Asn Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile
                  435                 440                 445             
          Lys Glu Ala Gln Lys Ile Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser
              450                 455                 460                 
          Met Leu Ser Met Ile Ile Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ala Leu Cys
          465                 470                 475                 480 
          Ile Gly Leu Ile Thr Phe Ile Ser Phe Val Ile Val Glu Lys Lys Arg
                          485                 490                 495     
          Gly Asn Tyr Ser Arg Leu Asp Asp Arg Gln Val Arg Pro Val Ser Asn
                      500                 505                 510         
          Gly Asp Leu Tyr Tyr Ile Gly Thr
                  515                 520 
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<211> 546]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 尼帕病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 尼帕病毒F蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 30]]>
          Met Val Val Ile Leu Asp Lys Arg Cys Tyr Cys Asn Leu Leu Ile Leu
           1               5                  10                  15      
          Ile Leu Met Ile Ser Glu Cys Ser Val Gly Ile Leu His Tyr Glu Lys
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Val Thr Arg Lys Tyr Lys Ile
                  35                  40                  45              
          Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val Ile Lys Met Ile Pro Asn
              50                  55                  60                  
          Val Ser Asn Met Ser Gln Cys Thr Gly Ser Val Met Glu Asn Tyr Lys
          65                  70                  75                  80  
          Thr Arg Leu Asn Gly Ile Leu Thr Pro Ile Lys Gly Ala Leu Glu Ile
                          85                  90                  95      
          Tyr Lys Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly Asp Val Arg Leu Ala Gly
                      100                 105                 110         
          Val Ile Met Ala Gly Val Ala Ile Gly Ile Ala Thr Ala Ala Gln Ile
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met Lys Asn Ala Asp Asn Ile
              130                 135                 140                 
          Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr Asn Glu Ala Val Val Lys
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr Val Leu Thr Ala Leu Gln
                          165                 170                 175     
          Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr Ile Asp Lys Ile Ser Cys
                      180                 185                 190         
          Lys Gln Thr Glu Leu Ser Leu Asp Leu Ala Leu Ser Lys Tyr Leu Ser
                  195                 200                 205             
          Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu Gln Asp Pro Val Ser Asn
              210                 215                 220                 
          Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala Phe Gly Gly Asn Tyr Glu
          225                 230                 235                 240 
          Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr Glu Asp Phe Asp Asp Leu
                          245                 250                 255     
          Leu Glu Ser Asp Ser Ile Thr Gly Gln Ile Ile Tyr Val Asp Leu Ser
                      260                 265                 270         
          Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe Pro Ile Leu Thr Glu Ile
                  275                 280                 285             
          Gln Gln Ala Tyr Ile Gln Glu Leu Leu Pro Val Ser Phe Asn Asn Asp
              290                 295                 300                 
          Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn Phe Ile Leu Val Arg Asn
          305                 310                 315                 320 
          Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Ile Gly Phe Cys Leu Ile Thr Lys Arg
                          325                 330                 335     
          Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr Pro Met Thr Asn Asn Met
                      340                 345                 350         
          Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Glu Lys Cys Pro Arg Glu Leu Val
                  355                 360                 365             
          Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu Ser Asn Gly Val Leu Phe
              370                 375                 380                 
          Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys Gln Thr Thr Gly Arg Ala
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu Met Ile Asp Asn Thr Thr
                          405                 410                 415     
          Cys Pro Thr Ala Val Leu Gly Asn Val Ile Ile Ser Leu Gly Lys Tyr
                      420                 425                 430         
          Leu Gly Ser Val Asn Tyr Asn Ser Glu Gly Ile Ala Ile Gly Pro Pro
                  435                 440                 445             
          Val Phe Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser Gln Ile Ser Ser Met Asn
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile Lys Glu Ala Gln Arg Leu
          465                 470                 475                 480 
          Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser Met Leu Ser Met Ile Ile
                          485                 490                 495     
          Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ser Leu Cys Ile Gly Leu Ile Thr Phe
                      500                 505                 510         
          Ile Ser Phe Ile Ile Val Glu Lys Lys Arg Asn Thr Tyr Ser Arg Leu
                  515                 520                 525             
          Glu Asp Arg Arg Val Arg Pro Thr Ser Ser Gly Asp Leu Tyr Tyr Ile
              530                 535                 540                 
          Gly Thr
          545     
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 520]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 尼帕病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 尼帕病毒F蛋白質，不具有信號序列]]>
          <![CDATA[<400> 31]]>
          Ile Leu His Tyr Glu Lys Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Val
           1               5                  10                  15      
          Thr Arg Lys Tyr Lys Ile Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val
                      20                  25                  30          
          Ile Lys Met Ile Pro Asn Val Ser Asn Met Ser Gln Cys Thr Gly Ser
                  35                  40                  45              
          Val Met Glu Asn Tyr Lys Thr Arg Leu Asn Gly Ile Leu Thr Pro Ile
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Ala Leu Glu Ile Tyr Lys Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly
          65                  70                  75                  80  
          Asp Val Arg Leu Ala Gly Val Ile Met Ala Gly Val Ala Ile Gly Ile
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Ala Ala Gln Ile Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met
                      100                 105                 110         
          Lys Asn Ala Asp Asn Ile Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr
                  115                 120                 125             
          Asn Glu Ala Val Val Lys Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr
              130                 135                 140                 
          Val Leu Thr Ala Leu Gln Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr
          145                 150                 155                 160 
          Ile Asp Lys Ile Ser Cys Lys Gln Thr Glu Leu Ser Leu Asp Leu Ala
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Lys Tyr Leu Ser Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Pro Val Ser Asn Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala
                  195                 200                 205             
          Phe Gly Gly Asn Tyr Glu Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr
              210                 215                 220                 
          Glu Asp Phe Asp Asp Leu Leu Glu Ser Asp Ser Ile Thr Gly Gln Ile
          225                 230                 235                 240 
          Ile Tyr Val Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe
                          245                 250                 255     
          Pro Ile Leu Thr Glu Ile Gln Gln Ala Tyr Ile Gln Glu Leu Leu Pro
                      260                 265                 270         
          Val Ser Phe Asn Asn Asp Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn
                  275                 280                 285             
          Phe Ile Leu Val Arg Asn Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Ile Gly Phe
              290                 295                 300                 
          Cys Leu Ile Thr Lys Arg Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr
          305                 310                 315                 320 
          Pro Met Thr Asn Asn Met Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Glu Lys
                          325                 330                 335     
          Cys Pro Arg Glu Leu Val Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu
                      340                 345                 350         
          Ser Asn Gly Val Leu Phe Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys
                  355                 360                 365             
          Gln Thr Thr Gly Arg Ala Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu
              370                 375                 380                 
          Met Ile Asp Asn Thr Thr Cys Pro Thr Ala Val Leu Gly Asn Val Ile
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Leu Gly Lys Tyr Leu Gly Ser Val Asn Tyr Asn Ser Glu Gly
                          405                 410                 415     
          Ile Ala Ile Gly Pro Pro Val Phe Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser
                      420                 425                 430         
          Gln Ile Ser Ser Met Asn Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile
                  435                 440                 445             
          Lys Glu Ala Gln Arg Leu Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser
              450                 455                 460                 
          Met Leu Ser Met Ile Ile Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ser Leu Cys
          465                 470                 475                 480 
          Ile Gly Leu Ile Thr Phe Ile Ser Phe Ile Ile Val Glu Lys Lys Arg
                          485                 490                 495     
          Asn Thr Tyr Ser Arg Leu Glu Asp Arg Arg Val Arg Pro Thr Ser Ser
                      500                 505                 510         
          Gly Asp Leu Tyr Tyr Ile Gly Thr
                  515                 520 
          <![CDATA[<210> 32]]>
          <![CDATA[<211> 557]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 賽得病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 賽得病毒F蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 32]]>
          Met Ser Asn Lys Arg Thr Thr Val Leu Ile Ile Ile Ser Tyr Thr Leu
           1               5                  10                  15      
          Phe Tyr Leu Asn Asn Ala Ala Ile Val Gly Phe Asp Phe Asp Lys Leu
                      20                  25                  30          
          Asn Lys Ile Gly Val Val Gln Gly Arg Val Leu Asn Tyr Lys Ile Lys
                  35                  40                  45              
          Gly Asp Pro Met Thr Lys Asp Leu Val Leu Lys Phe Ile Pro Asn Ile
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ile Thr Glu Cys Val Arg Glu Pro Leu Ser Arg Tyr Asn Glu
          65                  70                  75                  80  
          Thr Val Arg Arg Leu Leu Leu Pro Ile His Asn Met Leu Gly Leu Tyr
                          85                  90                  95      
          Leu Asn Asn Thr Asn Ala Lys Met Thr Gly Leu Met Ile Ala Gly Val
                      100                 105                 110         
          Ile Met Gly Gly Ile Ala Ile Gly Ile Ala Thr Ala Ala Gln Ile Thr
                  115                 120                 125             
          Ala Gly Phe Ala Leu Tyr Glu Ala Lys Lys Asn Thr Glu Asn Ile Gln
              130                 135                 140                 
          Lys Leu Thr Asp Ser Ile Met Lys Thr Gln Asp Ser Ile Asp Lys Leu
          145                 150                 155                 160 
          Thr Asp Ser Val Gly Thr Ser Ile Leu Ile Leu Asn Lys Leu Gln Thr
                          165                 170                 175     
          Tyr Ile Asn Asn Gln Leu Val Pro Asn Leu Glu Leu Leu Ser Cys Arg
                      180                 185                 190         
          Gln Asn Lys Ile Glu Phe Asp Leu Met Leu Thr Lys Tyr Leu Val Asp
                  195                 200                 205             
          Leu Met Thr Val Ile Gly Pro Asn Ile Asn Asn Pro Val Asn Lys Asp
              210                 215                 220                 
          Met Thr Ile Gln Ser Leu Ser Leu Leu Phe Asp Gly Asn Tyr Asp Ile
          225                 230                 235                 240 
          Met Met Ser Glu Leu Gly Tyr Thr Pro Gln Asp Phe Leu Asp Leu Ile
                          245                 250                 255     
          Glu Ser Lys Ser Ile Thr Gly Gln Ile Ile Tyr Val Asp Met Glu Asn
                      260                 265                 270         
          Leu Tyr Val Val Ile Arg Thr Tyr Leu Pro Thr Leu Ile Glu Val Pro
                  275                 280                 285             
          Asp Ala Gln Ile Tyr Glu Phe Asn Lys Ile Thr Met Ser Ser Asn Gly
              290                 295                 300                 
          Gly Glu Tyr Leu Ser Thr Ile Pro Asn Phe Ile Leu Ile Arg Gly Asn
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Met Ser Asn Ile Asp Val Ala Thr Cys Tyr Met Thr Lys Ala Ser
                          325                 330                 335     
          Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ser Leu Pro Met Ser Gln Asn Leu Arg
                      340                 345                 350         
          Ser Cys Tyr Gln Gly Glu Thr Glu Tyr Cys Pro Val Glu Ala Val Ile
                  355                 360                 365             
          Ala Ser His Ser Pro Arg Phe Ala Leu Thr Asn Gly Val Ile Phe Ala
              370                 375                 380                 
          Asn Cys Ile Asn Thr Ile Cys Arg Cys Gln Asp Asn Gly Lys Thr Ile
          385                 390                 395                 400 
          Thr Gln Asn Ile Asn Gln Phe Val Ser Met Ile Asp Asn Ser Thr Cys
                          405                 410                 415     
          Asn Asp Val Met Val Asp Lys Phe Thr Ile Lys Val Gly Lys Tyr Met
                      420                 425                 430         
          Gly Arg Lys Asp Ile Asn Asn Ile Asn Ile Gln Ile Gly Pro Gln Ile
                  435                 440                 445             
          Ile Ile Asp Lys Val Asp Leu Ser Asn Glu Ile Asn Lys Met Asn Gln
              450                 455                 460                 
          Ser Leu Lys Asp Ser Ile Phe Tyr Leu Arg Glu Ala Lys Arg Ile Leu
          465                 470                 475                 480 
          Asp Ser Val Asn Ile Ser Leu Ile Ser Pro Ser Val Gln Leu Phe Leu
                          485                 490                 495     
          Ile Ile Ile Ser Val Leu Ser Phe Ile Ile Leu Leu Ile Ile Ile Val
                      500                 505                 510         
          Tyr Leu Tyr Cys Lys Ser Lys His Ser Tyr Lys Tyr Asn Lys Phe Ile
                  515                 520                 525             
          Asp Asp Pro Asp Tyr Tyr Asn Asp Tyr Lys Arg Glu Arg Ile Asn Gly
              530                 535                 540                 
          Lys Ala Ser Lys Ser Asn Asn Ile Tyr Tyr Val Gly Asp
          545                 550                 555         
          <![CDATA[<210> 33]]>
          <![CDATA[<211> 551]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 賽得病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 賽得病毒F蛋白質，不具有信號序列]]>
          <![CDATA[<400> 33]]>
          Thr Val Leu Ile Ile Ile Ser Tyr Thr Leu Phe Tyr Leu Asn Asn Ala
           1               5                  10                  15      
          Ala Ile Val Gly Phe Asp Phe Asp Lys Leu Asn Lys Ile Gly Val Val
                      20                  25                  30          
          Gln Gly Arg Val Leu Asn Tyr Lys Ile Lys Gly Asp Pro Met Thr Lys
                  35                  40                  45              
          Asp Leu Val Leu Lys Phe Ile Pro Asn Ile Val Asn Ile Thr Glu Cys
              50                  55                  60                  
          Val Arg Glu Pro Leu Ser Arg Tyr Asn Glu Thr Val Arg Arg Leu Leu
          65                  70                  75                  80  
          Leu Pro Ile His Asn Met Leu Gly Leu Tyr Leu Asn Asn Thr Asn Ala
                          85                  90                  95      
          Lys Met Thr Gly Leu Met Ile Ala Gly Val Ile Met Gly Gly Ile Ala
                      100                 105                 110         
          Ile Gly Ile Ala Thr Ala Ala Gln Ile Thr Ala Gly Phe Ala Leu Tyr
                  115                 120                 125             
          Glu Ala Lys Lys Asn Thr Glu Asn Ile Gln Lys Leu Thr Asp Ser Ile
              130                 135                 140                 
          Met Lys Thr Gln Asp Ser Ile Asp Lys Leu Thr Asp Ser Val Gly Thr
          145                 150                 155                 160 
          Ser Ile Leu Ile Leu Asn Lys Leu Gln Thr Tyr Ile Asn Asn Gln Leu
                          165                 170                 175     
          Val Pro Asn Leu Glu Leu Leu Ser Cys Arg Gln Asn Lys Ile Glu Phe
                      180                 185                 190         
          Asp Leu Met Leu Thr Lys Tyr Leu Val Asp Leu Met Thr Val Ile Gly
                  195                 200                 205             
          Pro Asn Ile Asn Asn Pro Val Asn Lys Asp Met Thr Ile Gln Ser Leu
              210                 215                 220                 
          Ser Leu Leu Phe Asp Gly Asn Tyr Asp Ile Met Met Ser Glu Leu Gly
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Thr Pro Gln Asp Phe Leu Asp Leu Ile Glu Ser Lys Ser Ile Thr
                          245                 250                 255     
          Gly Gln Ile Ile Tyr Val Asp Met Glu Asn Leu Tyr Val Val Ile Arg
                      260                 265                 270         
          Thr Tyr Leu Pro Thr Leu Ile Glu Val Pro Asp Ala Gln Ile Tyr Glu
                  275                 280                 285             
          Phe Asn Lys Ile Thr Met Ser Ser Asn Gly Gly Glu Tyr Leu Ser Thr
              290                 295                 300                 
          Ile Pro Asn Phe Ile Leu Ile Arg Gly Asn Tyr Met Ser Asn Ile Asp
          305                 310                 315                 320 
          Val Ala Thr Cys Tyr Met Thr Lys Ala Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp
                          325                 330                 335     
          Tyr Ser Leu Pro Met Ser Gln Asn Leu Arg Ser Cys Tyr Gln Gly Glu
                      340                 345                 350         
          Thr Glu Tyr Cys Pro Val Glu Ala Val Ile Ala Ser His Ser Pro Arg
                  355                 360                 365             
          Phe Ala Leu Thr Asn Gly Val Ile Phe Ala Asn Cys Ile Asn Thr Ile
              370                 375                 380                 
          Cys Arg Cys Gln Asp Asn Gly Lys Thr Ile Thr Gln Asn Ile Asn Gln
          385                 390                 395                 400 
          Phe Val Ser Met Ile Asp Asn Ser Thr Cys Asn Asp Val Met Val Asp
                          405                 410                 415     
          Lys Phe Thr Ile Lys Val Gly Lys Tyr Met Gly Arg Lys Asp Ile Asn
                      420                 425                 430         
          Asn Ile Asn Ile Gln Ile Gly Pro Gln Ile Ile Ile Asp Lys Val Asp
                  435                 440                 445             
          Leu Ser Asn Glu Ile Asn Lys Met Asn Gln Ser Leu Lys Asp Ser Ile
              450                 455                 460                 
          Phe Tyr Leu Arg Glu Ala Lys Arg Ile Leu Asp Ser Val Asn Ile Ser
          465                 470                 475                 480 
          Leu Ile Ser Pro Ser Val Gln Leu Phe Leu Ile Ile Ile Ser Val Leu
                          485                 490                 495     
          Ser Phe Ile Ile Leu Leu Ile Ile Ile Val Tyr Leu Tyr Cys Lys Ser
                      500                 505                 510         
          Lys His Ser Tyr Lys Tyr Asn Lys Phe Ile Asp Asp Pro Asp Tyr Tyr
                  515                 520                 525             
          Asn Asp Tyr Lys Arg Glu Arg Ile Asn Gly Lys Ala Ser Lys Ser Asn
              530                 535                 540                 
          Asn Ile Tyr Tyr Val Gly Asp
          545                 550     
          <![CDATA[<210> 34]]>
          <![CDATA[<211> 545]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 墨江病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 墨江病毒，潼關1 F蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 34]]>
          Met Ala Leu Asn Lys Asn Met Phe Ser Ser Leu Phe Leu Gly Tyr Leu
           1               5                  10                  15      
          Leu Val Tyr Ala Thr Thr Val Gln Ser Ser Ile His Tyr Asp Ser Leu
                      20                  25                  30          
          Ser Lys Val Gly Val Ile Lys Gly Leu Thr Tyr Asn Tyr Lys Ile Lys
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Pro Ser Thr Lys Leu Met Val Val Lys Leu Ile Pro Asn Ile
              50                  55                  60                  
          Asp Ser Val Lys Asn Cys Thr Gln Lys Gln Tyr Asp Glu Tyr Lys Asn
          65                  70                  75                  80  
          Leu Val Arg Lys Ala Leu Glu Pro Val Lys Met Ala Ile Asp Thr Met
                          85                  90                  95      
          Leu Asn Asn Val Lys Ser Gly Asn Asn Lys Tyr Arg Phe Ala Gly Ala
                      100                 105                 110         
          Ile Met Ala Gly Val Ala Leu Gly Val Ala Thr Ala Ala Thr Val Thr
                  115                 120                 125             
          Ala Gly Ile Ala Leu His Arg Ser Asn Glu Asn Ala Gln Ala Ile Ala
              130                 135                 140                 
          Asn Met Lys Ser Ala Ile Gln Asn Thr Asn Glu Ala Val Lys Gln Leu
          145                 150                 155                 160 
          Gln Leu Ala Asn Lys Gln Thr Leu Ala Val Ile Asp Thr Ile Arg Gly
                          165                 170                 175     
          Glu Ile Asn Asn Asn Ile Ile Pro Val Ile Asn Gln Leu Ser Cys Asp
                      180                 185                 190         
          Thr Ile Gly Leu Ser Val Gly Ile Arg Leu Thr Gln Tyr Tyr Ser Glu
                  195                 200                 205             
          Ile Ile Thr Ala Phe Gly Pro Ala Leu Gln Asn Pro Val Asn Thr Arg
              210                 215                 220                 
          Ile Thr Ile Gln Ala Ile Ser Ser Val Phe Asn Gly Asn Phe Asp Glu
          225                 230                 235                 240 
          Leu Leu Lys Ile Met Gly Tyr Thr Ser Gly Asp Leu Tyr Glu Ile Leu
                          245                 250                 255     
          His Ser Glu Leu Ile Arg Gly Asn Ile Ile Asp Val Asp Val Asp Ala
                      260                 265                 270         
          Gly Tyr Ile Ala Leu Glu Ile Glu Phe Pro Asn Leu Thr Leu Val Pro
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Val Val Gln Glu Leu Met Pro Ile Ser Tyr Asn Ile Asp Gly
              290                 295                 300                 
          Asp Glu Trp Val Thr Leu Val Pro Arg Phe Val Leu Thr Arg Thr Thr
          305                 310                 315                 320 
          Leu Leu Ser Asn Ile Asp Thr Ser Arg Cys Thr Ile Thr Asp Ser Ser
                          325                 330                 335     
          Val Ile Cys Asp Asn Asp Tyr Ala Leu Pro Met Ser His Glu Leu Ile
                      340                 345                 350         
          Gly Cys Leu Gln Gly Asp Thr Ser Lys Cys Ala Arg Glu Lys Val Val
                  355                 360                 365             
          Ser Ser Tyr Val Pro Lys Phe Ala Leu Ser Asp Gly Leu Val Tyr Ala
              370                 375                 380                 
          Asn Cys Leu Asn Thr Ile Cys Arg Cys Met Asp Thr Asp Thr Pro Ile
          385                 390                 395                 400 
          Ser Gln Ser Leu Gly Ala Thr Val Ser Leu Leu Asp Asn Lys Arg Cys
                          405                 410                 415     
          Ser Val Tyr Gln Val Gly Asp Val Leu Ile Ser Val Gly Ser Tyr Leu
                      420                 425                 430         
          Gly Asp Gly Glu Tyr Asn Ala Asp Asn Val Glu Leu Gly Pro Pro Ile
                  435                 440                 445             
          Val Ile Asp Lys Ile Asp Ile Gly Asn Gln Leu Ala Gly Ile Asn Gln
              450                 455                 460                 
          Thr Leu Gln Glu Ala Glu Asp Tyr Ile Glu Lys Ser Glu Glu Phe Leu
          465                 470                 475                 480 
          Lys Gly Val Asn Pro Ser Ile Ile Thr Leu Gly Ser Met Val Val Leu
                          485                 490                 495     
          Tyr Ile Phe Met Ile Leu Ile Ala Ile Val Ser Val Ile Ala Leu Val
                      500                 505                 510         
          Leu Ser Ile Lys Leu Thr Val Lys Gly Asn Val Val Arg Gln Gln Phe
                  515                 520                 525             
          Thr Tyr Thr Gln His Val Pro Ser Met Glu Asn Ile Asn Tyr Val Ser
              530                 535                 540                 
          His
          545 
          <![CDATA[<210> 35]]>
          <![CDATA[<211> 519]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 墨江病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 墨江病毒，潼關1 F蛋白質，不具有信號序列]]>
          <![CDATA[<400> 35]]>
          Ile His Tyr Asp Ser Leu Ser Lys Val Gly Val Ile Lys Gly Leu Thr
           1               5                  10                  15      
          Tyr Asn Tyr Lys Ile Lys Gly Ser Pro Ser Thr Lys Leu Met Val Val
                      20                  25                  30          
          Lys Leu Ile Pro Asn Ile Asp Ser Val Lys Asn Cys Thr Gln Lys Gln
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Glu Tyr Lys Asn Leu Val Arg Lys Ala Leu Glu Pro Val Lys
              50                  55                  60                  
          Met Ala Ile Asp Thr Met Leu Asn Asn Val Lys Ser Gly Asn Asn Lys
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Arg Phe Ala Gly Ala Ile Met Ala Gly Val Ala Leu Gly Val Ala
                          85                  90                  95      
          Thr Ala Ala Thr Val Thr Ala Gly Ile Ala Leu His Arg Ser Asn Glu
                      100                 105                 110         
          Asn Ala Gln Ala Ile Ala Asn Met Lys Ser Ala Ile Gln Asn Thr Asn
                  115                 120                 125             
          Glu Ala Val Lys Gln Leu Gln Leu Ala Asn Lys Gln Thr Leu Ala Val
              130                 135                 140                 
          Ile Asp Thr Ile Arg Gly Glu Ile Asn Asn Asn Ile Ile Pro Val Ile
          145                 150                 155                 160 
          Asn Gln Leu Ser Cys Asp Thr Ile Gly Leu Ser Val Gly Ile Arg Leu
                          165                 170                 175     
          Thr Gln Tyr Tyr Ser Glu Ile Ile Thr Ala Phe Gly Pro Ala Leu Gln
                      180                 185                 190         
          Asn Pro Val Asn Thr Arg Ile Thr Ile Gln Ala Ile Ser Ser Val Phe
                  195                 200                 205             
          Asn Gly Asn Phe Asp Glu Leu Leu Lys Ile Met Gly Tyr Thr Ser Gly
              210                 215                 220                 
          Asp Leu Tyr Glu Ile Leu His Ser Glu Leu Ile Arg Gly Asn Ile Ile
          225                 230                 235                 240 
          Asp Val Asp Val Asp Ala Gly Tyr Ile Ala Leu Glu Ile Glu Phe Pro
                          245                 250                 255     
          Asn Leu Thr Leu Val Pro Asn Ala Val Val Gln Glu Leu Met Pro Ile
                      260                 265                 270         
          Ser Tyr Asn Ile Asp Gly Asp Glu Trp Val Thr Leu Val Pro Arg Phe
                  275                 280                 285             
          Val Leu Thr Arg Thr Thr Leu Leu Ser Asn Ile Asp Thr Ser Arg Cys
              290                 295                 300                 
          Thr Ile Thr Asp Ser Ser Val Ile Cys Asp Asn Asp Tyr Ala Leu Pro
          305                 310                 315                 320 
          Met Ser His Glu Leu Ile Gly Cys Leu Gln Gly Asp Thr Ser Lys Cys
                          325                 330                 335     
          Ala Arg Glu Lys Val Val Ser Ser Tyr Val Pro Lys Phe Ala Leu Ser
                      340                 345                 350         
          Asp Gly Leu Val Tyr Ala Asn Cys Leu Asn Thr Ile Cys Arg Cys Met
                  355                 360                 365             
          Asp Thr Asp Thr Pro Ile Ser Gln Ser Leu Gly Ala Thr Val Ser Leu
              370                 375                 380                 
          Leu Asp Asn Lys Arg Cys Ser Val Tyr Gln Val Gly Asp Val Leu Ile
          385                 390                 395                 400 
          Ser Val Gly Ser Tyr Leu Gly Asp Gly Glu Tyr Asn Ala Asp Asn Val
                          405                 410                 415     
          Glu Leu Gly Pro Pro Ile Val Ile Asp Lys Ile Asp Ile Gly Asn Gln
                      420                 425                 430         
          Leu Ala Gly Ile Asn Gln Thr Leu Gln Glu Ala Glu Asp Tyr Ile Glu
                  435                 440                 445             
          Lys Ser Glu Glu Phe Leu Lys Gly Val Asn Pro Ser Ile Ile Thr Leu
              450                 455                 460                 
          Gly Ser Met Val Val Leu Tyr Ile Phe Met Ile Leu Ile Ala Ile Val
          465                 470                 475                 480 
          Ser Val Ile Ala Leu Val Leu Ser Ile Lys Leu Thr Val Lys Gly Asn
                          485                 490                 495     
          Val Val Arg Gln Gln Phe Thr Tyr Thr Gln His Val Pro Ser Met Glu
                      500                 505                 510         
          Asn Ile Asn Tyr Val Ser His
                  515                 
          <![CDATA[<210> 36]]>
          <![CDATA[<211> 662]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 蝙蝠副黏液病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 蝙蝠副黏液病毒F蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 36]]>
          Met Lys Lys Lys Thr Asp Asn Pro Thr Ile Ser Lys Arg Gly His Asn
           1               5                  10                  15      
          His Ser Arg Gly Ile Lys Ser Arg Ala Leu Leu Arg Glu Thr Asp Asn
                      20                  25                  30          
          Tyr Ser Asn Gly Leu Ile Val Glu Asn Leu Val Arg Asn Cys His His
                  35                  40                  45              
          Pro Ser Lys Asn Asn Leu Asn Tyr Thr Lys Thr Gln Lys Arg Asp Ser
              50                  55                  60                  
          Thr Ile Pro Tyr Arg Val Glu Glu Arg Lys Gly His Tyr Pro Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Lys His Leu Ile Asp Lys Ser Tyr Lys His Ile Lys Arg Gly Lys Arg
                          85                  90                  95      
          Arg Asn Gly His Asn Gly Asn Ile Ile Thr Ile Ile Leu Leu Leu Ile
                      100                 105                 110         
          Leu Ile Leu Lys Thr Gln Met Ser Glu Gly Ala Ile His Tyr Glu Thr
                  115                 120                 125             
          Leu Ser Lys Ile Gly Leu Ile Lys Gly Ile Thr Arg Glu Tyr Lys Val
              130                 135                 140                 
          Lys Gly Thr Pro Ser Ser Lys Asp Ile Val Ile Lys Leu Ile Pro Asn
          145                 150                 155                 160 
          Val Thr Gly Leu Asn Lys Cys Thr Asn Ile Ser Met Glu Asn Tyr Lys
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Leu Asp Lys Ile Leu Ile Pro Ile Asn Asn Ile Ile Glu Leu
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Asn Ser Thr Lys Ser Ala Pro Gly Asn Ala Arg Phe Ala Gly
                  195                 200                 205             
          Val Ile Ile Ala Gly Val Ala Leu Gly Val Ala Ala Ala Ala Gln Ile
              210                 215                 220                 
          Thr Ala Gly Ile Ala Leu His Glu Ala Arg Gln Asn Ala Glu Arg Ile
          225                 230                 235                 240 
          Asn Leu Leu Lys Asp Ser Ile Ser Ala Thr Asn Asn Ala Val Ala Glu
                          245                 250                 255     
          Leu Gln Glu Ala Thr Gly Gly Ile Val Asn Val Ile Thr Gly Met Gln
                      260                 265                 270         
          Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Gln Ile Asp Lys Leu Gln Cys
                  275                 280                 285             
          Ser Gln Ile Lys Thr Ala Leu Asp Ile Ser Leu Ser Gln Tyr Tyr Ser
              290                 295                 300                 
          Glu Ile Leu Thr Val Phe Gly Pro Asn Leu Gln Asn Pro Val Thr Thr
          305                 310                 315                 320 
          Ser Met Ser Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ser Phe Gly Gly Asn Ile Asp
                          325                 330                 335     
          Leu Leu Leu Asn Leu Leu Gly Tyr Thr Ala Asn Asp Leu Leu Asp Leu
                      340                 345                 350         
          Leu Glu Ser Lys Ser Ile Thr Gly Gln Ile Thr Tyr Ile Asn Leu Glu
                  355                 360                 365             
          His Tyr Phe Met Val Ile Arg Val Tyr Tyr Pro Ile Met Thr Thr Ile
              370                 375                 380                 
          Ser Asn Ala Tyr Val Gln Glu Leu Ile Lys Ile Ser Phe Asn Val Asp
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Glu Trp Val Ser Leu Val Pro Ser Tyr Ile Leu Ile Arg Asn
                          405                 410                 415     
          Ser Tyr Leu Ser Asn Ile Asp Ile Ser Glu Cys Leu Ile Thr Lys Asn
                      420                 425                 430         
          Ser Val Ile Cys Arg His Asp Phe Ala Met Pro Met Ser Tyr Thr Leu
                  435                 440                 445             
          Lys Glu Cys Leu Thr Gly Asp Thr Glu Lys Cys Pro Arg Glu Ala Val
              450                 455                 460                 
          Val Thr Ser Tyr Val Pro Arg Phe Ala Ile Ser Gly Gly Val Ile Tyr
          465                 470                 475                 480 
          Ala Asn Cys Leu Ser Thr Thr Cys Gln Cys Tyr Gln Thr Gly Lys Val
                          485                 490                 495     
          Ile Ala Gln Asp Gly Ser Gln Thr Leu Met Met Ile Asp Asn Gln Thr
                      500                 505                 510         
          Cys Ser Ile Val Arg Ile Glu Glu Ile Leu Ile Ser Thr Gly Lys Tyr
                  515                 520                 525             
          Leu Gly Ser Gln Glu Tyr Asn Thr Met His Val Ser Val Gly Asn Pro
              530                 535                 540                 
          Val Phe Thr Asp Lys Leu Asp Ile Thr Ser Gln Ile Ser Asn Ile Asn
          545                 550                 555                 560 
          Gln Ser Ile Glu Gln Ser Lys Phe Tyr Leu Asp Lys Ser Lys Ala Ile
                          565                 570                 575     
          Leu Asp Lys Ile Asn Leu Asn Leu Ile Gly Ser Val Pro Ile Ser Ile
                      580                 585                 590         
          Leu Phe Ile Ile Ala Ile Leu Ser Leu Ile Leu Ser Ile Ile Thr Phe
                  595                 600                 605             
          Val Ile Val Met Ile Ile Val Arg Arg Tyr Asn Lys Tyr Thr Pro Leu
              610                 615                 620                 
          Ile Asn Ser Asp Pro Ser Ser Arg Arg Ser Thr Ile Gln Asp Val Tyr
          625                 630                 635                 640 
          Ile Ile Pro Asn Pro Gly Glu His Ser Ile Arg Ser Ala Ala Arg Ser
                          645                 650                 655     
          Ile Asp Arg Asp Arg Asp
                      660         
          <![CDATA[<210> 37]]>
          <![CDATA[<211> 640]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 蝙蝠副黏液病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 蝙蝠副黏液病毒F蛋白質，不具有信號序列]]>
          <![CDATA[<400> 37]]>
          Ser Arg Ala Leu Leu Arg Glu Thr Asp Asn Tyr Ser Asn Gly Leu Ile
           1               5                  10                  15      
          Val Glu Asn Leu Val Arg Asn Cys His His Pro Ser Lys Asn Asn Leu
                      20                  25                  30          
          Asn Tyr Thr Lys Thr Gln Lys Arg Asp Ser Thr Ile Pro Tyr Arg Val
                  35                  40                  45              
          Glu Glu Arg Lys Gly His Tyr Pro Lys Ile Lys His Leu Ile Asp Lys
              50                  55                  60                  
          Ser Tyr Lys His Ile Lys Arg Gly Lys Arg Arg Asn Gly His Asn Gly
          65                  70                  75                  80  
          Asn Ile Ile Thr Ile Ile Leu Leu Leu Ile Leu Ile Leu Lys Thr Gln
                          85                  90                  95      
          Met Ser Glu Gly Ala Ile His Tyr Glu Thr Leu Ser Lys Ile Gly Leu
                      100                 105                 110         
          Ile Lys Gly Ile Thr Arg Glu Tyr Lys Val Lys Gly Thr Pro Ser Ser
                  115                 120                 125             
          Lys Asp Ile Val Ile Lys Leu Ile Pro Asn Val Thr Gly Leu Asn Lys
              130                 135                 140                 
          Cys Thr Asn Ile Ser Met Glu Asn Tyr Lys Glu Gln Leu Asp Lys Ile
          145                 150                 155                 160 
          Leu Ile Pro Ile Asn Asn Ile Ile Glu Leu Tyr Ala Asn Ser Thr Lys
                          165                 170                 175     
          Ser Ala Pro Gly Asn Ala Arg Phe Ala Gly Val Ile Ile Ala Gly Val
                      180                 185                 190         
          Ala Leu Gly Val Ala Ala Ala Ala Gln Ile Thr Ala Gly Ile Ala Leu
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Arg Gln Asn Ala Glu Arg Ile Asn Leu Leu Lys Asp Ser
              210                 215                 220                 
          Ile Ser Ala Thr Asn Asn Ala Val Ala Glu Leu Gln Glu Ala Thr Gly
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ile Val Asn Val Ile Thr Gly Met Gln Asp Tyr Ile Asn Thr Asn
                          245                 250                 255     
          Leu Val Pro Gln Ile Asp Lys Leu Gln Cys Ser Gln Ile Lys Thr Ala
                      260                 265                 270         
          Leu Asp Ile Ser Leu Ser Gln Tyr Tyr Ser Glu Ile Leu Thr Val Phe
                  275                 280                 285             
          Gly Pro Asn Leu Gln Asn Pro Val Thr Thr Ser Met Ser Ile Gln Ala
              290                 295                 300                 
          Ile Ser Gln Ser Phe Gly Gly Asn Ile Asp Leu Leu Leu Asn Leu Leu
          305                 310                 315                 320 
          Gly Tyr Thr Ala Asn Asp Leu Leu Asp Leu Leu Glu Ser Lys Ser Ile
                          325                 330                 335     
          Thr Gly Gln Ile Thr Tyr Ile Asn Leu Glu His Tyr Phe Met Val Ile
                      340                 345                 350         
          Arg Val Tyr Tyr Pro Ile Met Thr Thr Ile Ser Asn Ala Tyr Val Gln
                  355                 360                 365             
          Glu Leu Ile Lys Ile Ser Phe Asn Val Asp Gly Ser Glu Trp Val Ser
              370                 375                 380                 
          Leu Val Pro Ser Tyr Ile Leu Ile Arg Asn Ser Tyr Leu Ser Asn Ile
          385                 390                 395                 400 
          Asp Ile Ser Glu Cys Leu Ile Thr Lys Asn Ser Val Ile Cys Arg His
                          405                 410                 415     
          Asp Phe Ala Met Pro Met Ser Tyr Thr Leu Lys Glu Cys Leu Thr Gly
                      420                 425                 430         
          Asp Thr Glu Lys Cys Pro Arg Glu Ala Val Val Thr Ser Tyr Val Pro
                  435                 440                 445             
          Arg Phe Ala Ile Ser Gly Gly Val Ile Tyr Ala Asn Cys Leu Ser Thr
              450                 455                 460                 
          Thr Cys Gln Cys Tyr Gln Thr Gly Lys Val Ile Ala Gln Asp Gly Ser
          465                 470                 475                 480 
          Gln Thr Leu Met Met Ile Asp Asn Gln Thr Cys Ser Ile Val Arg Ile
                          485                 490                 495     
          Glu Glu Ile Leu Ile Ser Thr Gly Lys Tyr Leu Gly Ser Gln Glu Tyr
                      500                 505                 510         
          Asn Thr Met His Val Ser Val Gly Asn Pro Val Phe Thr Asp Lys Leu
                  515                 520                 525             
          Asp Ile Thr Ser Gln Ile Ser Asn Ile Asn Gln Ser Ile Glu Gln Ser
              530                 535                 540                 
          Lys Phe Tyr Leu Asp Lys Ser Lys Ala Ile Leu Asp Lys Ile Asn Leu
          545                 550                 555                 560 
          Asn Leu Ile Gly Ser Val Pro Ile Ser Ile Leu Phe Ile Ile Ala Ile
                          565                 570                 575     
          Leu Ser Leu Ile Leu Ser Ile Ile Thr Phe Val Ile Val Met Ile Ile
                      580                 585                 590         
          Val Arg Arg Tyr Asn Lys Tyr Thr Pro Leu Ile Asn Ser Asp Pro Ser
                  595                 600                 605             
          Ser Arg Arg Ser Thr Ile Gln Asp Val Tyr Ile Ile Pro Asn Pro Gly
              610                 615                 620                 
          Glu His Ser Ile Arg Ser Ala Ala Arg Ser Ile Asp Arg Asp Arg Asp
          625                 630                 635                 640 
          <![CDATA[<210> 38]]>
          <![CDATA[<211> 26]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 信號序列]]>
          <![CDATA[<400> 38]]>
          Met Val Val Ile Leu Asp Lys Arg Cys Tyr Cys Asn Leu Leu Ile Leu
           1               5                  10                  15      
          Ile Leu Met Ile Ser Glu Cys Ser Val Gly
                      20                  25      
          <![CDATA[<210> 39]]>
          <![CDATA[<211> 83]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 尼帕病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 尼帕病毒NiV-F F2 (aa 27-109)]]>
          <![CDATA[<400> 39]]>
          Ile Leu His Tyr Glu Lys Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Val
           1               5                  10                  15      
          Thr Arg Lys Tyr Lys Ile Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val
                      20                  25                  30          
          Ile Lys Met Ile Pro Asn Val Ser Asn Met Ser Gln Cys Thr Gly Ser
                  35                  40                  45              
          Val Met Glu Asn Tyr Lys Thr Arg Leu Asn Gly Ile Leu Thr Pro Ile
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Ala Leu Glu Ile Tyr Lys Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly
          65                  70                  75                  80  
          Asp Val Arg
          <![CDATA[<210> 40]]>
          <![CDATA[<211> 546]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 尼帕病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 尼帕病毒F蛋白質]]>
          <![CDATA[<400> 40]]>
          Met Val Val Ile Leu Asp Lys Arg Cys Tyr Cys Asn Leu Leu Ile Leu
           1               5                  10                  15      
          Ile Leu Met Ile Ser Glu Cys Ser Val Gly Ile Leu His Tyr Glu Lys
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Val Thr Arg Lys Tyr Lys Ile
                  35                  40                  45              
          Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val Ile Lys Met Ile Pro Asn
              50                  55                  60                  
          Val Ser Asn Met Ser Gln Cys Thr Gly Ser Val Met Glu Asn Tyr Lys
          65                  70                  75                  80  
          Thr Arg Leu Asn Gly Ile Leu Thr Pro Ile Lys Gly Ala Leu Glu Ile
                          85                  90                  95      
          Tyr Lys Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly Asp Val Arg Leu Ala Gly
                      100                 105                 110         
          Val Ile Met Ala Gly Val Ala Ile Gly Ile Ala Thr Ala Ala Gln Ile
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met Lys Asn Ala Asp Asn Ile
              130                 135                 140                 
          Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr Asn Glu Ala Val Val Lys
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr Val Leu Thr Ala Leu Gln
                          165                 170                 175     
          Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr Ile Asp Lys Ile Ser Cys
                      180                 185                 190         
          Lys Gln Thr Glu Leu Ser Leu Asp Leu Ala Leu Ser Lys Tyr Leu Ser
                  195                 200                 205             
          Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu Gln Asp Pro Val Ser Asn
              210                 215                 220                 
          Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala Phe Gly Gly Asn Tyr Glu
          225                 230                 235                 240 
          Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr Glu Asp Phe Asp Asp Leu
                          245                 250                 255     
          Leu Glu Ser Asp Ser Ile Thr Gly Gln Ile Ile Tyr Val Asp Leu Ser
                      260                 265                 270         
          Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe Pro Ile Leu Thr Glu Ile
                  275                 280                 285             
          Gln Gln Ala Tyr Ile Gln Glu Leu Leu Pro Val Ser Phe Asn Asn Asp
              290                 295                 300                 
          Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn Phe Ile Leu Val Arg Asn
          305                 310                 315                 320 
          Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Ile Gly Phe Cys Leu Ile Thr Lys Arg
                          325                 330                 335     
          Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr Pro Met Thr Asn Asn Met
                      340                 345                 350         
          Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Glu Lys Cys Pro Arg Glu Leu Val
                  355                 360                 365             
          Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu Ser Asn Gly Val Leu Phe
              370                 375                 380                 
          Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys Gln Thr Thr Gly Arg Ala
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu Met Ile Asp Asn Thr Thr
                          405                 410                 415     
          Cys Pro Thr Ala Val Leu Gly Asn Val Ile Ile Ser Leu Gly Lys Tyr
                      420                 425                 430         
          Leu Gly Ser Val Asn Tyr Asn Ser Glu Gly Ile Ala Ile Gly Pro Pro
                  435                 440                 445             
          Val Phe Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser Gln Ile Ser Ser Met Asn
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile Lys Glu Ala Gln Arg Leu
          465                 470                 475                 480 
          Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser Met Leu Ser Met Ile Ile
                          485                 490                 495     
          Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ser Leu Cys Ile Gly Leu Ile Thr Phe
                      500                 505                 510         
          Ile Ser Phe Ile Ile Val Glu Lys Lys Arg Asn Thr Tyr Ser Arg Leu
                  515                 520                 525             
          Glu Asp Arg Arg Val Arg Pro Thr Ser Ser Gly Asp Leu Tyr Tyr Ile
              530                 535                 540                 
          Gly Thr
          545     
          <![CDATA[<210> 41]]>
          <![CDATA[<211> 520]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 尼帕病毒]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 尼帕病毒NiV-F F0 (aa 27-546)]]>
          <![CDATA[<400> 41]]>
          Ile Leu His Tyr Glu Lys Leu Ser Lys Ile Gly Leu Val Lys Gly Val
           1               5                  10                  15      
          Thr Arg Lys Tyr Lys Ile Lys Ser Asn Pro Leu Thr Lys Asp Ile Val
                      20                  25                  30          
          Ile Lys Met Ile Pro Asn Val Ser Asn Met Ser Gln Cys Thr Gly Ser
                  35                  40                  45              
          Val Met Glu Asn Tyr Lys Thr Arg Leu Asn Gly Ile Leu Thr Pro Ile
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Ala Leu Glu Ile Tyr Lys Asn Asn Thr His Asp Leu Val Gly
          65                  70                  75                  80  
          Asp Val Arg Leu Ala Gly Val Ile Met Ala Gly Val Ala Ile Gly Ile
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Ala Ala Gln Ile Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met
                      100                 105                 110         
          Lys Asn Ala Asp Asn Ile Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr
                  115                 120                 125             
          Asn Glu Ala Val Val Lys Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr
              130                 135                 140                 
          Val Leu Thr Ala Leu Gln Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr
          145                 150                 155                 160 
          Ile Asp Lys Ile Ser Cys Lys Gln Thr Glu Leu Ser Leu Asp Leu Ala
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Lys Tyr Leu Ser Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Pro Val Ser Asn Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala
                  195                 200                 205             
          Phe Gly Gly Asn Tyr Glu Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr
              210                 215                 220                 
          Glu Asp Phe Asp Asp Leu Leu Glu Ser Asp Ser Ile Thr Gly Gln Ile
          225                 230                 235                 240 
          Ile Tyr Val Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe
                          245                 250                 255     
          Pro Ile Leu Thr Glu Ile Gln Gln Ala Tyr Ile Gln Glu Leu Leu Pro
                      260                 265                 270         
          Val Ser Phe Asn Asn Asp Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn
                  275                 280                 285             
          Phe Ile Leu Val Arg Asn Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Ile Gly Phe
              290                 295                 300                 
          Cys Leu Ile Thr Lys Arg Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr
          305                 310                 315                 320 
          Pro Met Thr Asn Asn Met Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Glu Lys
                          325                 330                 335     
          Cys Pro Arg Glu Leu Val Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu
                      340                 345                 350         
          Ser Asn Gly Val Leu Phe Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys
                  355                 360                 365             
          Gln Thr Thr Gly Arg Ala Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu
              370                 375                 380                 
          Met Ile Asp Asn Thr Thr Cys Pro Thr Ala Val Leu Gly Asn Val Ile
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Leu Gly Lys Tyr Leu Gly Ser Val Asn Tyr Asn Ser Glu Gly
                          405                 410                 415     
          Ile Ala Ile Gly Pro Pro Val Phe Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser
                      420                 425                 430         
          Gln Ile Ser Ser Met Asn Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile
                  435                 440                 445             
          Lys Glu Ala Gln Arg Leu Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser
              450                 455                 460                 
          Met Leu Ser Met Ile Ile Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ser Leu Cys
          465                 470                 475                 480 
          Ile Gly Leu Ile Thr Phe Ile Ser Phe Ile Ile Val Glu Lys Lys Arg
                          485                 490                 495     
          Asn Thr Tyr Ser Arg Leu Glu Asp Arg Arg Val Arg Pro Thr Ser Ser
                      500                 505                 510         
          Gly Asp Leu Tyr Tyr Ile Gly Thr
                  515                 520 
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          <![CDATA[<400> 42]]>
          Met Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ser Ala
           1               5                  10                  15      
          Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile Val Met
                      20                  25                  30          
          Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln Ala
                  35                  40                  45              
          Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly Leu
              50                  55                  60                  
          Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp
          65                  70                  75                  80  
          Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser
                          85                  90                  95      
          Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu Lys
                      100                 105                 110         
          Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser
                  115                 120                 125             
          Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu Gly
              130                 135                 140                 
          Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys Thr
          145                 150                 155                 160 
          Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Val
                          165                 170                 175     
          Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met Asp
                      180                 185                 190         
          Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys Ser
                  195                 200                 205             
          Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp
              210                 215                 220                 
          Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro
          225                 230                 235                 240 
          Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn Glu
                          245                 250                 255     
          Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile Leu
                      260                 265                 270         
          Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu Ala Val
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala Leu
              290                 295                 300                 
          Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro
          305                 310                 315                 320 
          Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe
                          325                 330                 335     
          Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Thr
                      340                 345                 350         
          Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Ile
                  355                 360                 365             
          Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn
              370                 375                 380                 
          Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile Ser Asp
          385                 390                 395                 400 
          Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu Gly
                          405                 410                 415     
          Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys
                      420                 425                 430         
          Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp Arg Asn
                  435                 440                 445             
          Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn
              450                 455                 460                 
          Thr Cys Pro Glu Ile Cys Trp Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe Leu
          465                 470                 475                 480 
          Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser Asn
                          485                 490                 495     
          Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile
                      500                 505                 510         
          Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr
                  515                 520                 525             
          Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser Leu
              530                 535                 540                 
          Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe
          545                 550                 555                 560 
          Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys Thr
                          565                 
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          <![CDATA[<400> 43]]>
          Met Thr Met Asp Ile Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys
           1               5                  10                  15      
          Ile Leu Ser Ala Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val
                      20                  25                  30          
          Ile Ile Val Met Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr
                  35                  40                  45              
          Asp Asn Gln Ala Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln
              50                  55                  60                  
          Ile Lys Gly Leu Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Ile Asp Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly
                          85                  90                  95      
          Leu Leu Gly Ser Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn
                      100                 105                 110         
          Val Asn Glu Lys Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu
                  115                 120                 125             
          Cys Asn Ile Ser Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro
              130                 135                 140                 
          Gln Thr Glu Gly Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gln Lys Thr Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr
                          165                 170                 175     
          Thr Leu Pro Val Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu
                      180                 185                 190         
          Leu Ala Met Asp Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile
                  195                 200                 205             
          Gly Ser Cys Ser Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly
              210                 215                 220                 
          Glu Val Leu Asp Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn
          225                 230                 235                 240 
          Val Trp Thr Pro Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val
                          245                 250                 255     
          Tyr Asn Asn Glu Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Ile Leu Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr
                  275                 280                 285             
          Arg Leu Ala Val Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His
              290                 295                 300                 
          Gln Leu Ala Leu Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met
          305                 310                 315                 320 
          Pro Tyr Gly Pro Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro
                          325                 330                 335     
          Ala Val Gly Phe Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn
                      340                 345                 350         
          Cys Pro Ile Thr Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu
                  355                 360                 365             
          Ser Met Gly Ile Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu
              370                 375                 380                 
          Leu Lys Tyr Asn Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile
          385                 390                 395                 400 
          Glu Ile Ser Asp Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr
                          405                 410                 415     
          Asp Ser Leu Gly Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp
                      420                 425                 430         
          Thr Met Ile Lys Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val
                  435                 440                 445             
          Asn Trp Arg Asn Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys
              450                 455                 460                 
          Pro Arg Phe Asn Thr Cys Pro Glu Ile Cys Trp Glu Gly Val Tyr Asn
          465                 470                 475                 480 
          Asp Ala Phe Leu Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe
                          485                 490                 495     
          Leu Asp Ser Asn Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys
                      500                 505                 510         
          Asp Asn Glu Ile Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn
                  515                 520                 525             
          Ala Gln Lys Thr Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp
              530                 535                 540                 
          Cys Ile Ser Leu Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg
          545                 550                 555                 560 
          Pro Lys Leu Phe Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys Thr
                          565                 570             
          <![CDATA[<210> 44]]>
          <![CDATA[<211> 592]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 經截短之NiVG蛋白質連接醣蛋白△10]]>
          <![CDATA[<400> 44]]>
          Met Gly Asn Thr Thr Ser Asp Lys Gly Lys Ile Pro Ser Lys Val Ile
           1               5                  10                  15      
          Lys Ser Tyr Tyr Gly Thr Met Asp Ile Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu
                      20                  25                  30          
          Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ser Ala Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Val Ile Ile Val Met Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr
              50                  55                  60                  
          Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln Ala Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly
          65                  70                  75                  80  
          Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly Leu Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile
                          85                  90                  95      
          Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro
                      100                 105                 110         
          Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser
                  115                 120                 125             
          Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu Lys Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu
              130                 135                 140                 
          Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg
          145                 150                 155                 160 
          Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu Gly Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro
                          165                 170                 175     
          Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys Thr Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys
                      180                 185                 190         
          Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Val Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile
                  195                 200                 205             
          Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met Asp Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His
              210                 215                 220                 
          Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys Ser Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile
          225                 230                 235                 240 
          Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu
                          245                 250                 255     
          Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His
                      260                 265                 270         
          Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn Glu Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val
                  275                 280                 285             
          Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile Leu Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser
              290                 295                 300                 
          Leu Met Met Thr Arg Leu Ala Val Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala Leu Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr
                          325                 330                 335     
          Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr
                      340                 345                 350         
          Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr
                  355                 360                 365             
          Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Thr Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu
              370                 375                 380                 
          Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Ile Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu
          385                 390                 395                 400 
          Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys
                          405                 410                 415     
          Val Val Phe Ile Glu Ile Ser Asp Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro
                      420                 425                 430         
          Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu Gly Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser
                  435                 440                 445             
          Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn
              450                 455                 460                 
          Pro Leu Val Val Asn Trp Arg Asn Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly
          465                 470                 475                 480 
          Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn Thr Cys Pro Glu Ile Cys Trp Glu
                          485                 490                 495     
          Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe Leu Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser
                      500                 505                 510         
          Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser Asn Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe
                  515                 520                 525             
          Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser
              530                 535                 540                 
          Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys
          545                 550                 555                 560 
          Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser Leu Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp
                          565                 570                 575     
          Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys
                      580                 585                 590         
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 經截短之NiVG蛋白質連接醣蛋白△15]]>
          <![CDATA[<400> 45]]>
          Met Gly Lys Gly Lys Ile Pro Ser Lys Val Ile Lys Ser Tyr Tyr Gly
           1               5                  10                  15      
          Thr Met Asp Ile Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Ala Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile
                  35                  40                  45              
          Ile Val Met Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp
              50                  55                  60                  
          Asn Gln Ala Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile
          65                  70                  75                  80  
          Lys Gly Leu Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser
                          85                  90                  95      
          Leu Ile Asp Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu
                      100                 105                 110         
          Leu Gly Ser Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val
                  115                 120                 125             
          Asn Glu Lys Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys
              130                 135                 140                 
          Asn Ile Ser Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln
          145                 150                 155                 160 
          Thr Glu Gly Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu
                          165                 170                 175     
          Gln Lys Thr Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr
                      180                 185                 190         
          Leu Pro Val Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu
                  195                 200                 205             
          Ala Met Asp Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly
              210                 215                 220                 
          Ser Cys Ser Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu
          225                 230                 235                 240 
          Val Leu Asp Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val
                          245                 250                 255     
          Trp Thr Pro Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr
                      260                 265                 270         
          Asn Asn Glu Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp
                  275                 280                 285             
          Pro Ile Leu Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg
              290                 295                 300                 
          Leu Ala Val Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln
          305                 310                 315                 320 
          Leu Ala Leu Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro
                          325                 330                 335     
          Tyr Gly Pro Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala
                      340                 345                 350         
          Val Gly Phe Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys
                  355                 360                 365             
          Pro Ile Thr Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser
              370                 375                 380                 
          Met Gly Ile Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu
          385                 390                 395                 400 
          Lys Tyr Asn Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu
                          405                 410                 415     
          Ile Ser Asp Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp
                      420                 425                 430         
          Ser Leu Gly Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr
                  435                 440                 445             
          Met Ile Lys Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn
              450                 455                 460                 
          Trp Arg Asn Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro
          465                 470                 475                 480 
          Arg Phe Asn Thr Cys Pro Glu Ile Cys Trp Glu Gly Val Tyr Asn Asp
                          485                 490                 495     
          Ala Phe Leu Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu
                      500                 505                 510         
          Asp Ser Asn Gln Thr Ala Glu Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp
                  515                 520                 525             
          Asn Glu Ile Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala
              530                 535                 540                 
          Gln Lys Thr Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys
          545                 550                 555                 560 
          Ile Ser Leu Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro
                          565                 570                 575     
          Lys Leu Phe Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys
                      580                 585         
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          <![CDATA[<400> 46]]>
          Leu Ala Gly Val Ile Met Ala Gly Val Ala Ile Gly Ile Ala Thr Ala
           1               5                  10                  15      
          Ala Gln Ile Thr Ala Gly Val Ala Leu Tyr Glu Ala Met Lys Asn Ala
                      20                  25                  30          
          Asp Asn Ile Asn Lys Leu Lys Ser Ser Ile Glu Ser Thr Asn Glu Ala
                  35                  40                  45              
          Val Val Lys Leu Gln Glu Thr Ala Glu Lys Thr Val Tyr Val Leu Thr
              50                  55                  60                  
          Ala Leu Gln Asp Tyr Ile Asn Thr Asn Leu Val Pro Thr Ile Asp Lys
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Cys Lys Gln Thr Glu Leu Ser Leu Asp Leu Ala Leu Ser Lys
                          85                  90                  95      
          Tyr Leu Ser Asp Leu Leu Phe Val Phe Gly Pro Asn Leu Gln Asp Pro
                      100                 105                 110         
          Val Ser Asn Ser Met Thr Ile Gln Ala Ile Ser Gln Ala Phe Gly Gly
                  115                 120                 125             
          Asn Tyr Glu Thr Leu Leu Arg Thr Leu Gly Tyr Ala Thr Glu Asp Phe
              130                 135                 140                 
          Asp Asp Leu Leu Glu Ser Asp Ser Ile Thr Gly Gln Ile Ile Tyr Val
          145                 150                 155                 160 
          Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr Ile Ile Val Arg Val Tyr Phe Pro Ile Leu
                          165                 170                 175     
          Thr Glu Ile Gln Gln Ala Tyr Ile Gln Glu Leu Leu Pro Val Ser Phe
                      180                 185                 190         
          Asn Asn Asp Asn Ser Glu Trp Ile Ser Ile Val Pro Asn Phe Ile Leu
                  195                 200                 205             
          Val Arg Asn Thr Leu Ile Ser Asn Ile Glu Ile Gly Phe Cys Leu Ile
              210                 215                 220                 
          Thr Lys Arg Ser Val Ile Cys Asn Gln Asp Tyr Ala Thr Pro Met Thr
          225                 230                 235                 240 
          Asn Asn Met Arg Glu Cys Leu Thr Gly Ser Thr Glu Lys Cys Pro Arg
                          245                 250                 255     
          Glu Leu Val Val Ser Ser His Val Pro Arg Phe Ala Leu Ser Asn Gly
                      260                 265                 270         
          Val Leu Phe Ala Asn Cys Ile Ser Val Thr Cys Gln Cys Gln Thr Thr
                  275                 280                 285             
          Gly Arg Ala Ile Ser Gln Ser Gly Glu Gln Thr Leu Leu Met Ile Asp
              290                 295                 300                 
          Asn Thr Thr Cys Pro Thr Ala Val Leu Gly Asn Val Ile Ile Ser Leu
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Tyr Leu Gly Ser Val Asn Tyr Asn Ser Glu Gly Ile Ala Ile
                          325                 330                 335     
          Gly Pro Pro Val Phe Thr Asp Lys Val Asp Ile Ser Ser Gln Ile Ser
                      340                 345                 350         
          Ser Met Asn Gln Ser Leu Gln Gln Ser Lys Asp Tyr Ile Lys Glu Ala
                  355                 360                 365             
          Gln Arg Leu Leu Asp Thr Val Asn Pro Ser Leu Ile Ser Met Leu Ser
              370                 375                 380                 
          Met Ile Ile Leu Tyr Val Leu Ser Ile Ala Ser Leu Cys Ile Gly Leu
          385                 390                 395                 400 
          Ile Thr Phe Ile Ser Phe Ile Ile Val Glu Lys Lys Arg Asn Thr Tyr
                          405                 410                 415     
          Ser Arg Leu Glu Asp Arg Arg Val Arg Pro Thr Ser Ser Gly Asp Leu
                      420                 425                 430         
          Tyr Tyr Ile Gly Thr
                  435         
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Asn Phe
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Glu Arg Ala Ala Ala Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
              130                 135                 140                 
          Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
          145                 150                 155                 160 
          Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys
                          165                 170                 175     
          Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln
                      180                 185                 190         
          Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                  195                 200                 205             
          Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
              210                 215                 220                 
          Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
          225                 230                 235                 240 
          Val Glu Ile Lys Arg
                          245 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly
                      100                 105                 110         
          Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
                  115                 120                 125             
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser
              130                 135                 140                 
          Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
          145                 150                 155                 160 
          Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu
                          165                 170                 175     
          Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn
                      180                 185                 190         
          Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
                  195                 200                 205             
          Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val
              210                 215                 220                 
          Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Leu Gln Thr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly
          225                 230                 235                 240 
          Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Gly Trp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
              130                 135                 140                 
          Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser
          145                 150                 155                 160 
          Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
                          165                 170                 175     
          Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
                      180                 185                 190         
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr
              210                 215                 220                 
          Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
          225                 230                 235                 240 
          <![CDATA[<210> 50]]>
          <![CDATA[<211> 241]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD8 scFv]]>
          <![CDATA[<400> 50]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Ser Ser Glu Ser Gly Ser Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
              130                 135                 140                 
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
          145                 150                 155                 160 
          Thr Ile Gly Asn Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
                          165                 170                 175     
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro
                      180                 185                 190         
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
                  195                 200                 205             
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr
              210                 215                 220                 
          Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
          225                 230                 235                 240 
          Arg
          <![CDATA[<210> 51]]>
          <![CDATA[<211> 125]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD8 VHH]]>
          <![CDATA[<400> 51]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Tyr
                      20                  25                  30          
          Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Lys Phe Val
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Ser Arg Gly Gly Leu Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Phe
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Thr Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Asp Arg Ser Asp Leu Tyr Glu Ile Thr Ala Ala Ser Asn Ile
                      100                 105                 110         
          Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                  115                 120                 125 
          <![CDATA[<210> 52]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400> 52]]>
          Ser Tyr Ala Ile Ser
           1               5  
          <![CDATA[<210> 53]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400> 53]]>
          Ile Ile Asp Pro Ser Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Asn Phe Gln
           1               5                  10                  15      
          Gly
          <![CDATA[<210> 54]]>
          <![CDATA[<211> 13]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400> 54]]>
          Glu Arg Ala Ala Ala Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val
           1               5                  10              
          <![CDATA[<210> 55]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400> 55]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
           1               5                  10      
          <![CDATA[<210> 56]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400> 56]]>
          Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
           1               5          
          <![CDATA[<210> 57]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400> 57]]>
          Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 58]]>
          <![CDATA[<211> 122]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成VH]]>
          <![CDATA[<400> 58]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Asn Phe
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Glu Arg Ala Ala Ala Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
                  115                 120         
          <![CDATA[<210> 59]]>
          <![CDATA[<211> 108]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構築體VL]]>
          <![CDATA[<400> 59]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                      100                 105             
          <![CDATA[<210> 60]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400> 60]]>
          Asp Tyr Tyr Ile Gln
           1               5  
          <![CDATA[<210> 61]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400> 61]]>
          Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
           1               5                  10                  15      
          Gly
          <![CDATA[<210> 62]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400> 62]]>
          Glu Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Ala
           1               5                  10  
          <![CDATA[<210> 63]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400> 63]]>
          Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
           1               5                  10                  15      
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          Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
           1               5          
          <![CDATA[<210> 65]]>
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          <![CDATA[<400> 65]]>
          Met Gln Gly Leu Gln Thr Pro His Thr
           1               5                  
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          <![CDATA[<400> 66]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly
                      100                 105                 110         
          Thr Met Val Thr Val Ser Ser
                  115                 
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          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
           1               5                  10                  15      
          Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Thr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          Arg
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          Ser Tyr Tyr Met His
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          <![CDATA[<400> 69]]>
          Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
           1               5                  10                  15      
          Gly
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Gly Trp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser
                  115         
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Tyr
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
                      100                 105             
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          Asn His Tyr Met His
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          Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
           1               5                  10                  15      
          Gly
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          Arg Ala Ser Gln Thr Ile Gly Asn Tyr Val Asn
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Ser Ser Glu Ser Gly Ser Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser
                  115             
          <![CDATA[<210> 81]]>
          <![CDATA[<211> 108]]>
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          <![CDATA[<223> 合成構築體VL]]>
          <![CDATA[<400> 81]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Gly Asn Tyr
                      20                  25                  30          
          Val Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Gly Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Ala Pro Leu
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                      100                 105             
          <![CDATA[<210> 82]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400> 82]]>
          Gly Tyr Val Met Gly
           1               5  
          <![CDATA[<210> 83]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400> 83]]>
          Ala Ile Ser Arg Gly Gly Leu Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
           1               5                  10                  15      
          Gly
          <![CDATA[<210> 84]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400> 84]]>
          Asp Arg Ser Asp Leu Tyr Glu Ile Thr Ala Ala Ser Asn Ile Asp Ser
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 85]]>
          <![CDATA[<211> 21]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD8α信號肽]]>
          <![CDATA[<400> 85]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
           1               5                  10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro
                      20      
          <![CDATA[<210> 86]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> IgK信號肽]]>
          <![CDATA[<400> 86]]>
          Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
           1               5                  10                  15      
          Gly Ser Thr Gly
                      20  
          <![CDATA[<210> 87]]>
          <![CDATA[<211> 22]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> GMCSFR-α (CSF2RA)信號肽]]>
          <![CDATA[<400> 87]]>
          Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
           1               5                  10                  15      
          Ala Phe Leu Leu Ile Pro
                      20          
          <![CDATA[<210> 88]]>
          <![CDATA[<211> 45]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD8α鉸鏈域]]>
          <![CDATA[<400> 88]]>
          Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
                      20                  25                  30          
          Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
                  35                  40                  45  
          <![CDATA[<210> 89]]>
          <![CDATA[<211> 39]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD28鉸鏈域]]>
          <![CDATA[<400> 89]]>
          Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
           1               5                  10                  15      
          Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
                  35                  
          <![CDATA[<210> 90]]>
          <![CDATA[<211> 42]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD28鉸鏈域]]>
          <![CDATA[<400> 90]]>
          Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu
           1               5                  10                  15      
          Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro
                      20                  25                  30          
          Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
                  35                  40          
          <![CDATA[<210> 91]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> IgG4鉸鏈域]]>
          <![CDATA[<400> 91]]>
          Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
           1               5                  10          
          <![CDATA[<210> 92]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> IgG4鉸鏈域]]>
          <![CDATA[<400> 92]]>
          Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
           1               5                  10          
          <![CDATA[<210> 93]]>
          <![CDATA[<211> 229]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> IgG4鉸鏈-CH2-CH3域]]>
          <![CDATA[<400> 93]]>
          Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
           1               5                  10                  15      
          Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
                      20                  25                  30          
          Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
                  35                  40                  45              
          Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
              50                  55                  60                  
          Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
          65                  70                  75                  80  
          Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
                          85                  90                  95      
          Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
                      100                 105                 110         
          Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
                  115                 120                 125             
          Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
              130                 135                 140                 
          Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
          145                 150                 155                 160 
          Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
                          165                 170                 175     
          Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
                      180                 185                 190         
          Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
                  195                 200                 205             
          Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
              210                 215                 220                 
          Leu Ser Leu Gly Lys
          225                 
          <![CDATA[<210> 94]]>
          <![CDATA[<211> 24]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD8α跨膜域]]>
          <![CDATA[<400> 94]]>
          Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
                      20                  
          <![CDATA[<210> 95]]>
          <![CDATA[<211> 27]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD28跨膜域]]>
          <![CDATA[<400> 95]]>
          Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
           1               5                  10                  15      
          Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
                      20                  25          
          <![CDATA[<210> 96]]>
          <![CDATA[<211> 28]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD28跨膜域]]>
          <![CDATA[<400> 96]]>
          Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser
           1               5                  10                  15      
          Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
                      20                  25              
          <![CDATA[<210> 97]]>
          <![CDATA[<211> 42]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 4-1BB共刺激域]]>
          <![CDATA[<400> 97]]>
          Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
           1               5                  10                  15      
          Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
                  35                  40          
          <![CDATA[<210> 98]]>
          <![CDATA[<211> 41]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD28共刺激域]]>
          <![CDATA[<400> 98]]>
          Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
           1               5                  10                  15      
          Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
                      20                  25                  30          
          Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
                  35                  40      
          <![CDATA[<210> 99]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD3ζ信號傳導域]]>
          <![CDATA[<400> 99]]>
          Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
                      20                  25                  30          
          Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
              50                  55                  60                  
          Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
                          85                  90                  95      
          Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 100]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD3ζ信號傳導域(其中位置14處之Q突變成K)]]>
          <![CDATA[<400> 100]]>
          Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
                      20                  25                  30          
          Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
              50                  55                  60                  
          Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
                          85                  90                  95      
          Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 101]]>
          <![CDATA[<211> 245]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD19 FMC63 scFv完整序列，具有惠特洛連接子]]>
          <![CDATA[<400> 101]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
                      100                 105                 110         
          Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
                  115                 120                 125             
          Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
              130                 135                 140                 
          Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
          145                 150                 155                 160 
          Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
                          165                 170                 175     
          Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
                      180                 185                 190         
          Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
              210                 215                 220                 
          Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
          225                 230                 235                 240 
          Val Thr Val Ser Ser
                          245 
          <![CDATA[<210> 102]]>
          <![CDATA[<211> 107]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 102]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
                      100                 105         
          <![CDATA[<210> 103]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 103]]>
          Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
           1               5      
          <![CDATA[<210> 104]]>
          <![CDATA[<211> 3]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 104]]>
          His Thr Ser
           1          
          <![CDATA[<210> 105]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD19 FMC63 scFv輕鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 105]]>
          Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 106]]>
          <![CDATA[<211> 18]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 惠特洛連接子]]>
          <![CDATA[<400> 106]]>
          Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
           1               5                  10                  15      
          Lys Gly
          <![CDATA[<210> 107]]>
          <![CDATA[<211> 120]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD19 FMC63 scFv重鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 107]]>
          Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
                      20                  25                  30          
          Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
          65                  70                  75                  80  
          Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
                          85                  90                  95      
          Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
                  115                 120 
          <![CDATA[<210> 108]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD19 FMC63 scFv重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 108]]>
          Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly
           1               5              
          <![CDATA[<210> 109]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD19 FMC63 scFv重鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 109]]>
          Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr
           1               5          
          <![CDATA[<210> 110]]>
          <![CDATA[<211> 14]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD19 FMC63 scFv重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 110]]>
          Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
           1               5                  10                  
          <![CDATA[<210> 111]]>
          <![CDATA[<211> 242]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD19 FMC63 scFv完整序列，具有3xG4S連接子]]>
          <![CDATA[<400> 111]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser
                      100                 105                 110         
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu
                  115                 120                 125             
          Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys
              130                 135                 140                 
          Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg
          145                 150                 155                 160 
          Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser
                          165                 170                 175     
          Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile
                      180                 185                 190         
          Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln
                  195                 200                 205             
          Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly
              210                 215                 220                 
          Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
          225                 230                 235                 240 
          Ser Ser
          <![CDATA[<210> 112]]>
          <![CDATA[<211> 1467]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 例示性CD19 CAR核苷酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 112]]>
          atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
          ccggacatcc agatgacaca gactacatcc tccctgtctg cctctctggg agacagagtc 120
          accatcagtt gcagggcaag tcaggacatt agtaaatatt taaattggta tcagcagaaa 180
          ccagatggaa ctgttaaact cctgatctac catacatcaa gattacactc aggagtccca 240
          tcaaggttca gtggcagtgg gtctggaaca gattattctc tcaccattag caacctggag 300
          caagaagata ttgccactta cttttgccaa cagggtaata cgcttccgta cacgttcgga 360
          ggggggacca agctggagat cacaggctcc acctctggat ccggcaagcc cggatctggc 420
          gagggatcca ccaagggcga ggtgaaactg caggagtcag gacctggcct ggtggcgccc 480
          tcacagagcc tgtccgtcac atgcactgtc tcaggggtct cattacccga ctatggtgta 540
          agctggattc gccagcctcc acgaaagggt ctggagtggc tgggagtaat atggggtagt 600
          gaaaccacat actataattc agctctcaaa tccagactga ccatcatcaa ggacaactcc 660
          aagagccaag ttttcttaaa aatgaacagt ctgcaaactg atgacacagc catttactac 720
          tgtgccaaac attattacta cggtggtagc tatgctatgg actactgggg ccaaggaacc 780
          tcagtcaccg tctcctcaac cacgacgcca gcgccgcgac caccaacacc ggcgcccacc 840
          atcgcgtcgc agcccctgtc cctgcgccca gaggcgtgcc ggccagcggc ggggggcgca 900
          gtgcacacga gggggctgga cttcgcctgt gatatctaca tctgggcgcc cttggccggg 960
          acttgtgggg tccttctcct gtcactggtt atcacccttt actgcaaacg gggcagaaag 1020
          aaactcctgt atatattcaa acaaccattt atgagaccag tacaaactac tcaagaggaa 1080
          gatggctgta gctgccgatt tccagaagaa gaagaaggag gatgtgaact gagagtgaag 1140
          ttcagcagga gcgcagacgc ccccgcgtac cagcagggcc agaaccagct ctataacgag 1200
          ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct 1260
          gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag 1320
          aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc 1380
          aaggggcacg atggccttta ccagggtctc agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc 1440
          cttcacatgc aggccctgcc ccctcgc                                     1467
          <![CDATA[<210> 113]]>
          <![CDATA[<211> 489]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 例示性CD19 CAR胺基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 113]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
           1               5                  10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln
                  35                  40                  45              
          Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr
              50                  55                  60                  
          Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile
                          85                  90                  95      
          Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly
                      100                 105                 110         
          Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
              130                 135                 140                 
          Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro
                          165                 170                 175     
          Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu
                      180                 185                 190         
          Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala
                  195                 200                 205             
          Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val
              210                 215                 220                 
          Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
          225                 230                 235                 240 
          Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
                          245                 250                 255     
          Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro
                      260                 265                 270         
          Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu
                  275                 280                 285             
          Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg
              290                 295                 300                 
          Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
          305                 310                 315                 320 
          Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys
                          325                 330                 335     
          Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg
                      340                 345                 350         
          Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro
                  355                 360                 365             
          Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
              370                 375                 380                 
          Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
                          405                 410                 415     
          Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
                      420                 425                 430         
          Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
                  435                 440                 445             
          Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
              450                 455                 460                 
          Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
          465                 470                 475                 480 
          Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                          485                 
          <![CDATA[<210> 114]]>
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          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 替沙津魯CD19 CAR核苷酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 114]]>
          atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
          ccggacatcc agatgacaca gactacatcc tccctgtctg cctctctggg agacagagtc 120
          accatcagtt gcagggcaag tcaggacatt agtaaatatt taaattggta tcagcagaaa 180
          ccagatggaa ctgttaaact cctgatctac catacatcaa gattacactc aggagtccca 240
          tcaaggttca gtggcagtgg gtctggaaca gattattctc tcaccattag caacctggag 300
          caagaagata ttgccactta cttttgccaa cagggtaata cgcttccgta cacgttcgga 360
          ggggggacca agctggagat cacaggtggc ggtggctcgg gcggtggtgg gtcgggtggc 420
          ggcggatctg aggtgaaact gcaggagtca ggacctggcc tggtggcgcc ctcacagagc 480
          ctgtccgtca catgcactgt ctcaggggtc tcattacccg actatggtgt aagctggatt 540
          cgccagcctc cacgaaaggg tctggagtgg ctgggagtaa tatggggtag tgaaaccaca 600
          tactataatt cagctctcaa atccagactg accatcatca aggacaactc caagagccaa 660
          gttttcttaa aaatgaacag tctgcaaact gatgacacag ccatttacta ctgtgccaaa 720
          cattattact acggtggtag ctatgctatg gactactggg gccaaggaac ctcagtcacc 780
          gtctcctcaa ccacgacgcc agcgccgcga ccaccaacac cggcgcccac catcgcgtcg 840
          cagcccctgt ccctgcgccc agaggcgtgc cggccagcgg cggggggcgc agtgcacacg 900
          agggggctgg acttcgcctg tgatatctac atctgggcgc ccttggccgg gacttgtggg 960
          gtccttctcc tgtcactggt tatcaccctt tactgcaaac ggggcagaaa gaaactcctg 1020
          tatatattca aacaaccatt tatgagacca gtacaaacta ctcaagagga agatggctgt 1080
          agctgccgat ttccagaaga agaagaagga ggatgtgaac tgagagtgaa gttcagcagg 1140
          agcgcagacg cccccgcgta caagcagggc cagaaccagc tctataacga gctcaatcta 1200
          ggacgaagag aggagtacga tgttttggac aagagacgtg gccgggaccc tgagatgggg 1260
          ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa ggcctgtaca atgaactgca gaaagataag 1320
          atggcggagg cctacagtga gattgggatg aaaggcgagc gccggagggg caaggggcac 1380
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          <![CDATA[<220> ]]>
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          <![CDATA[<400> 115]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
           1               5                  10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln
                  35                  40                  45              
          Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr
              50                  55                  60                  
          Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro
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          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile
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          Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly
                      100                 105                 110         
          Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
              130                 135                 140                 
          Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser
          145                 150                 155                 160 
          Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly
                          165                 170                 175     
          Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly
                      180                 185                 190         
          Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
                  195                 200                 205             
          Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys
              210                 215                 220                 
          Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys
          225                 230                 235                 240 
          His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
                          245                 250                 255     
          Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro
                      260                 265                 270         
          Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
                  275                 280                 285             
          Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
              290                 295                 300                 
          Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
          305                 310                 315                 320 
          Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg
                          325                 330                 335     
          Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln
                      340                 345                 350         
          Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu
                  355                 360                 365             
          Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
              370                 375                 380                 
          Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
          385                 390                 395                 400 
          Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
                          405                 410                 415     
          Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
                      420                 425                 430         
          Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
                  435                 440                 445             
          Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
              450                 455                 460                 
          Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
          465                 470                 475                 480 
          Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                          485     
          <![CDATA[<210> 116]]>
          <![CDATA[<211> 1383]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 力索嗎魯CD19 CAR核苷酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 116]]>
          atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgcgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
          atccccgaca tccagatgac ccagaccacc tccagcctga gcgccagcct gggcgaccgg 120
          gtgaccatca gctgccgggc cagccaggac atcagcaagt acctgaactg gtatcagcag 180
          aagcccgacg gcaccgtcaa gctgctgatc taccacacca gccggctgca cagcggcgtg 240
          cccagccggt ttagcggcag cggctccggc accgactaca gcctgaccat ctccaacctg 300
          gaacaggaag atatcgccac ctacttttgc cagcagggca acacactgcc ctacaccttt 360
          ggcggcggaa caaagctgga aatcaccggc agcacctccg gcagcggcaa gcctggcagc 420
          ggcgagggca gcaccaaggg cgaggtgaag ctgcaggaaa gcggccctgg cctggtggcc 480
          cccagccaga gcctgagcgt gacctgcacc gtgagcggcg tgagcctgcc cgactacggc 540
          gtgagctgga tccggcagcc ccccaggaag ggcctggaat ggctgggcgt gatctggggc 600
          agcgagacca cctactacaa cagcgccctg aagagccggc tgaccatcat caaggacaac 660
          agcaagagcc aggtgttcct gaagatgaac agcctgcaga ccgacgacac cgccatctac 720
          tactgcgcca agcactacta ctacggcggc agctacgcca tggactactg gggccagggc 780
          accagcgtga ccgtgagcag cgaatctaag tacggaccgc cctgcccccc ttgccctatg 840
          ttctgggtgc tggtggtggt cggaggcgtg ctggcctgct acagcctgct ggtcaccgtg 900
          gccttcatca tcttttgggt gaaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 960
          ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1020
          gaagaagaag aaggaggatg tgaactgcgg gtgaagttca gcagaagcgc cgacgcccct 1080
          gcctaccagc agggccagaa tcagctgtac aacgagctga acctgggcag aagggaagag 1140
          tacgacgtcc tggataagcg gagaggccgg gaccctgaga tgggcggcaa gcctcggcgg 1200
          aagaaccccc aggaaggcct gtataacgaa ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac 1260
          agcgagatcg gcatgaaggg cgagcggagg cggggcaagg gccacgacgg cctgtatcag 1320
          ggcctgtcca ccgccaccaa ggatacctac gacgccctgc acatgcaggc cctgccccca 1380
          agg                                                               1383
          <![CDATA[<210> 117]]>
          <![CDATA[<211> 461]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 力索嗎魯CD19 CAR胺基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 117]]>
          Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
           1               5                  10                  15      
          Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser
                  35                  40                  45              
          Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly
              50                  55                  60                  
          Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val
          65                  70                  75                  80  
          Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr
                          85                  90                  95      
          Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln
                      100                 105                 110         
          Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
                  115                 120                 125             
          Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser
              130                 135                 140                 
          Thr Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala
          145                 150                 155                 160 
          Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu
                          165                 170                 175     
          Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu
                      180                 185                 190         
          Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser
                  195                 200                 205             
          Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln
              210                 215                 220                 
          Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
                          245                 250                 255     
          Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly
                      260                 265                 270         
          Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
                  275                 280                 285             
          Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
              290                 295                 300                 
          Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln
          305                 310                 315                 320 
          Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser
                          325                 330                 335     
          Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys
                      340                 345                 350         
          Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln
                  355                 360                 365             
          Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu
              370                 375                 380                 
          Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
          385                 390                 395                 400 
          Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
                          405                 410                 415     
          Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
                      420                 425                 430         
          Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
                  435                 440                 445             
          Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
              450                 455                 460     
          <![CDATA[<210> 118]]>
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          atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
          atcccagaca tccagatgac acagactaca tcctccctgt ctgcctctct gggagacaga 120
          gtcaccatca gttgcagggc aagtcaggac attagtaaat atttaaattg gtatcagcag 180
          aaaccagatg gaactgttaa actcctgatc taccatacat caagattaca ctcaggagtc 240
          ccatcaaggt tcagtggcag tgggtctgga acagattatt ctctcaccat tagcaacctg 300
          gagcaagaag atattgccac ttacttttgc caacagggta atacgcttcc gtacacgttc 360
          ggagggggga ctaagttgga aataacaggc tccacctctg gatccggcaa gcccggatct 420
          ggcgagggat ccaccaaggg cgaggtgaaa ctgcaggagt caggacctgg cctggtggcg 480
          ccctcacaga gcctgtccgt cacatgcact gtctcagggg tctcattacc cgactatggt 540
          gtaagctgga ttcgccagcc tccacgaaag ggtctggagt ggctgggagt aatatggggt 600
          agtgaaacca catactataa ttcagctctc aaatccagac tgaccatcat caaggacaac 660
          tccaagagcc aagttttctt aaaaatgaac agtctgcaaa ctgatgacac agccatttac 720
          tactgtgcca aacattatta ctacggtggt agctatgcta tggactactg gggtcaagga 780
          acctcagtca ccgtctcctc agcggccgca attgaagtta tgtatcctcc tccttaccta 840
          gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt 900
          cccctatttc ccggaccttc taagcccttt tgggtgctgg tggtggttgg gggagtcctg 960
          gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc tttattattt tctgggtgag gagtaagagg 1020
          agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc 1080
          aagcattacc agccctatgc cccaccacgc gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag 1140
          ttcagcagga gcgcagacgc ccccgcgtac cagcagggcc agaaccagct ctataacgag 1200
          ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct 1260
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          Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
           1               5                  10                  15      
          Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser
                  35                  40                  45              
          Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly
              50                  55                  60                  
          Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val
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                      100                 105                 110         
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                  115                 120                 125             
          Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser
              130                 135                 140                 
          Thr Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala
          145                 150                 155                 160 
          Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu
                          165                 170                 175     
          Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu
                      180                 185                 190         
          Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser
                  195                 200                 205             
          Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln
              210                 215                 220                 
          Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
                          245                 250                 255     
          Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu
                      260                 265                 270         
          Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr
                  275                 280                 285             
          Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro
              290                 295                 300                 
          Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu
          305                 310                 315                 320 
          Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
                          325                 330                 335     
          Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
                      340                 345                 350         
          Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
                  355                 360                 365             
          Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
              370                 375                 380                 
          Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
                          405                 410                 415     
          Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
                      420                 425                 430         
          Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
                  435                 440                 445             
          Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
              450                 455                 460                 
          Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
          465                 470                 475                 480 
          Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                          485                 
          <![CDATA[<210> 120]]>
          <![CDATA[<211> 246]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD20 Leu16 scFv完整序列，具有惠特洛連接子]]>
          <![CDATA[<400> 120]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
           1               5                  10                  15      
          Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met
                      20                  25                  30          
          Asp Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Ser Thr Ser Gly Ser
                      100                 105                 110         
          Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Gln Leu
                  115                 120                 125             
          Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met
              130                 135                 140                 
          Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn Met His Trp
          145                 150                 155                 160 
          Val Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala Ile Tyr
                          165                 170                 175     
          Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala
                      180                 185                 190         
          Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Asn
              210                 215                 220                 
          Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr
          225                 230                 235                 240 
          Thr Val Thr Val Ser Ser
                          245     
          <![CDATA[<210> 121]]>
          <![CDATA[<211> 106]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 121]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
           1               5                  10                  15      
          Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met
                      20                  25                  30          
          Asp Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105     
          <![CDATA[<210> 122]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 122]]>
          Arg Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met Asp
           1               5                  10  
          <![CDATA[<210> 123]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 123]]>
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser
           1               5          
          <![CDATA[<210> 124]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD20 Leu16 scFv輕鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 124]]>
          Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 125]]>
          <![CDATA[<211> 122]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD20 Leu16 scFv重鏈]]>
          <![CDATA[<400> 125]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
                  35                  40                  45              
          Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Asp Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ser Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp
                      100                 105                 110         
          Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
                  115                 120         
          <![CDATA[<210> 126]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD20 Leu16 scFv重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 126]]>
          Ser Tyr Asn Met His
           1               5  
          <![CDATA[<210> 127]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD20 Leu16 scFv重鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 127]]>
          Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
           1               5                  10                  15      
          Gly
          <![CDATA[<210> 128]]>
          <![CDATA[<211> 246]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971 scFv完整序列，具有3xG4S連接子]]>
          <![CDATA[<400> 128]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
           1               5                  10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
                  35                  40                  45              
          Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
              50                  55                  60                  
          Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
          65                  70                  75                  80  
          Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
                          85                  90                  95      
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Thr Gly Asp Leu Glu Asp Ala Phe Asp
                      100                 105                 110         
          Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
                  115                 120                 125             
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
              130                 135                 140                 
          Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
          145                 150                 155                 160 
          Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Trp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln
                          165                 170                 175     
          Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser
                      180                 185                 190         
          Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr
                  195                 200                 205             
          Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Phe Ala Thr
              210                 215                 220                 
          Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Gln Thr Phe Gly Gln Gly
          225                 230                 235                 240 
          Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                          245     
          <![CDATA[<210> 129]]>
          <![CDATA[<211> 124]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971 scFv重鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 129]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
           1               5                  10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
                  35                  40                  45              
          Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
              50                  55                  60                  
          Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
          65                  70                  75                  80  
          Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
                          85                  90                  95      
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Thr Gly Asp Leu Glu Asp Ala Phe Asp
                      100                 105                 110         
          Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
                  115                 120                 
          <![CDATA[<210> 130]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971 scFv重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 130]]>
          Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala
           1               5                  10  
          <![CDATA[<210> 131]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971 scFv重鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 131]]>
          Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 132]]>
          <![CDATA[<211> 14]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971 scFv重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 132]]>
          Ala Arg Glu Val Thr Gly Asp Leu Glu Asp Ala Phe Asp Ile
           1               5                  10                  
          <![CDATA[<210> 133]]>
          <![CDATA[<211> 107]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971 scFv輕鏈]]>
          <![CDATA[<400> 133]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Trp Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Gln
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105         
          <![CDATA[<210> 134]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971 scFv輕鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 134]]>
          Gln Thr Ile Trp Ser Tyr
           1               5      
          <![CDATA[<210> 135]]>
          <![CDATA[<211> 3]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971 scFv輕鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 135]]>
          Ala Ala Ser
           1          
          <![CDATA[<210> 136]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971 scFv輕鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 136]]>
          Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Gln Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 137]]>
          <![CDATA[<211> 246]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971-L7 scFv完整序列，具有3xG4S連接子]]>
          <![CDATA[<400> 137]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Met Val Lys Pro Ser Gln
           1               5                  10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
                      20                  25                  30          
          Ser Val Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
                  35                  40                  45              
          Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Thr Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
              50                  55                  60                  
          Val Ser Met Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Asn Lys Asn
          65                  70                  75                  80  
          Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
                          85                  90                  95      
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Thr Gly Asp Leu Glu Asp Ala Phe Asp
                      100                 105                 110         
          Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
                  115                 120                 125             
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Ile
              130                 135                 140                 
          Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
          145                 150                 155                 160 
          Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Trp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Arg
                          165                 170                 175     
          Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser
                      180                 185                 190         
          Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr
                  195                 200                 205             
          Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Phe Ala Thr
              210                 215                 220                 
          Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Gln Thr Phe Gly Gln Gly
          225                 230                 235                 240 
          Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                          245     
          <![CDATA[<210> 138]]>
          <![CDATA[<211> 124]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 138]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Met Val Lys Pro Ser Gln
           1               5                  10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
                      20                  25                  30          
          Ser Val Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
                  35                  40                  45              
          Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Thr Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
              50                  55                  60                  
          Val Ser Met Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Asn Lys Asn
          65                  70                  75                  80  
          Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
                          85                  90                  95      
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Thr Gly Asp Leu Glu Asp Ala Phe Asp
                      100                 105                 110         
          Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
                  115                 120                 
          <![CDATA[<210> 139]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 139]]>
          Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Val Ala
           1               5                  10  
          <![CDATA[<210> 140]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 140]]>
          Thr Tyr Tyr Arg Ser Thr Trp Tyr Asn
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 141]]>
          <![CDATA[<211> 14]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971-L7 scFv重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 141]]>
          Ala Arg Glu Val Thr Gly Asp Leu Glu Asp Ala Phe Asp Ile
           1               5                  10                  
          <![CDATA[<210> 142]]>
          <![CDATA[<211> 107]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD22 m971-L7 scFv輕鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 142]]>
          Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Trp Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Arg Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Asn Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Gln
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105         
          <![CDATA[<210> 143]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
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          <![CDATA[<400> 143]]>
          Gln Thr Ile Trp Ser Tyr
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
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          <![CDATA[<400> 144]]>
          Ala Ala Ser
           1          
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          <![CDATA[<211> 9]]>
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          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
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          Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Gln Thr
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          <![CDATA[<400> 146]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile
                      20                  25                  30          
          Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Ile Tyr Ser Cys Leu Gln Ser Arg
                          85                  90                  95      
          Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
                      100                 105                 110         
          Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys
                  115                 120                 125             
          Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly
              130                 135                 140                 
          Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp
                          165                 170                 175     
          Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp
                      180                 185                 190         
          Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala
                  195                 200                 205             
          Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
              210                 215                 220                 
          Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
          225                 230                 235                 240 
          Ser Val Thr Val Ser Ser
                          245     
          <![CDATA[<210> 147]]>
          <![CDATA[<211> 111]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
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          <![CDATA[<400> 147]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile
                      20                  25                  30          
          Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Ile Tyr Ser Cys Leu Gln Ser Arg
                          85                  90                  95      
          Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210> 148]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 148]]>
          Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile Gly Ala His Leu Ile His
           1               5                  10                  15  
          <![CDATA[<210> 149]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 149]]>
          Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr
           1               5          
          <![CDATA[<210> 150]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C11D5.3 scFv輕鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 150]]>
          Leu Gln Ser Arg Ile Phe Pro Arg Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 151]]>
          <![CDATA[<211> 117]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C11D5.3 scFv重鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 151]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
           1               5                  10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
                      20                  25                  30          
          Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe
              50                  55                  60                  
          Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser
                  115         
          <![CDATA[<210> 152]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<400> 152]]>
          Asp Tyr Ser Ile Asn
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          <![CDATA[<400> 153]]>
          Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg
           1               5                  10                  15      
          Gly
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          Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
           1               5              
          <![CDATA[<210> 155]]>
          <![CDATA[<211> 246]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
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          <![CDATA[<400> 155]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
                      20                  25                  30          
          Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
                  35                  40                  45              
          Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
                          85                  90                  95      
          Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
                      100                 105                 110         
          Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys
                  115                 120                 125             
          Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly
              130                 135                 140                 
          Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp
                          165                 170                 175     
          Met Gly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp
                      180                 185                 190         
          Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala
                  195                 200                 205             
          Tyr Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe
              210                 215                 220                 
          Cys Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
          225                 230                 235                 240 
          Ala Leu Thr Val Ser Ser
                          245     
          <![CDATA[<210> 156]]>
          <![CDATA[<211> 111]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 156]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
                      20                  25                  30          
          Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
                  35                  40                  45              
          Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
                          85                  90                  95      
          Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210> 157]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 157]]>
          Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr
           1               5                  10                  15  
          <![CDATA[<210> 158]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 158]]>
          Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr
           1               5          
          <![CDATA[<210> 159]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C12A3.2 scFv輕鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 159]]>
          Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 160]]>
          <![CDATA[<211> 117]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 160]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
           1               5                  10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys
                          85                  90                  95      
          Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ala
                      100                 105                 110         
          Leu Thr Val Ser Ser
                  115         
          <![CDATA[<210> 161]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 161]]>
          His Tyr Ser Met Asn
           1               5  
          <![CDATA[<210> 162]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 162]]>
          Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
           1               5                  10                  15      
          Gly
          <![CDATA[<210> 163]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA C12A3.2 scFv重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 163]]>
          Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe
           1               5              
          <![CDATA[<210> 164]]>
          <![CDATA[<211> 121]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA FHVH33完整序列]]>
          <![CDATA[<400> 164]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                  35                  40                  45              
          Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Asp Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Glu Gly Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Ala Asp Tyr Arg Gly
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                  115                 120     
          <![CDATA[<210> 165]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA FHVH33 CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 165]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
           1               5              
          <![CDATA[<210> 166]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA FHVH33 CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 166]]>
          Ile Ser Gly Ser Gly Asp Tyr Ile
           1               5              
          <![CDATA[<210> 167]]>
          <![CDATA[<211> 14]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA FHVH33 CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 167]]>
          Ala Lys Glu Gly Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Ala Asp Tyr
           1               5                  10                  
          <![CDATA[<210> 168]]>
          <![CDATA[<211> 243]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA CT103A scFv完整序列，具有惠特洛連接子]]>
          <![CDATA[<400> 168]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Lys Tyr Asp Leu Leu Thr
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Ser Thr Ser Gly Ser
                      100                 105                 110         
          Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Leu Gln Leu
                  115                 120                 125             
          Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu
              130                 135                 140                 
          Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp
          145                 150                 155                 160 
          Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser
                          165                 170                 175     
          Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg
                      180                 185                 190         
          Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu
                  195                 200                 205             
          Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp
              210                 215                 220                 
          Arg Gly Asp Thr Ile Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
          225                 230                 235                 240 
          Val Ser Ser
          <![CDATA[<210> 169]]>
          <![CDATA[<211> 106]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA CT103A scFv輕鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 169]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Lys Tyr Asp Leu Leu Thr
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
                      100                 105     
          <![CDATA[<210> 170]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA CT103A scFv輕鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 170]]>
          Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
           1               5      
          <![CDATA[<210> 171]]>
          <![CDATA[<211> 3]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA CT103A scFv輕鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 171]]>
          Ala Ala Ser
           1          
          <![CDATA[<210> 172]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA CT103A scFv輕鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 172]]>
          Gln Gln Lys Tyr Asp Leu Leu Thr
           1               5              
          <![CDATA[<210> 173]]>
          <![CDATA[<211> 119]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA CT103A scFv重鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400> 173]]>
          Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
           1               5                  10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
                      20                  25                  30          
          Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
                  35                  40                  45              
          Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
              50                  55                  60                  
          Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
                          85                  90                  95      
          Cys Ala Arg Asp Arg Gly Asp Thr Ile Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly
                      100                 105                 110         
          Thr Met Val Thr Val Ser Ser
                  115                 
          <![CDATA[<210> 174]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA CT103A scFv重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400> 174]]>
          Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr
           1               5                  10  
          <![CDATA[<210> 175]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA CT103A scFv重鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400> 175]]>
          Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr
           1               5          
          <![CDATA[<210> 176]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗BCMA CT103A scFv重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 176]]>
          Ala Arg Asp Arg Gly Asp Thr Ile Leu Asp Val
           1               5                  10      
          <![CDATA[<210> 177]]>
          <![CDATA[<211> 1503]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 例示性BCMA CAR核苷酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 177]]>
          atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
          ccggacatcc agatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 120
          accatcactt gccgggcaag tcagagcatt agcagctatt taaattggta tcagcagaaa 180
          ccagggaaag cccctaagct cctgatctat gctgcatcca gtttgcaaag tggggtccca 240
          tcaaggttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagtctgcaa 300
          cctgaagatt ttgcaactta ctactgtcag caaaaatacg acctcctcac ttttggcgga 360
          gggaccaagg ttgagatcaa aggcagcacc agcggctccg gcaagcctgg ctctggcgag 420
          ggcagcacaa agggacagct gcagctgcag gagtcgggcc caggactggt gaagccttcg 480
          gagaccctgt ccctcacctg cactgtctct ggtggctcca tcagcagtag tagttactac 540
          tggggctgga tccgccagcc cccagggaag gggctggagt ggattgggag tatctcctat 600
          agtgggagca cctactacaa cccgtccctc aagagtcgag tcaccatatc cgtagacacg 660
          tccaagaacc agttctccct gaagctgagt tctgtgaccg ccgcagacac ggcggtgtac 720
          tactgcgcca gagatcgtgg agacaccata ctagacgtat ggggtcaggg tacaatggtc 780
          accgtcagct cattcgtgcc cgtgttcctg cccgccaaac ctaccaccac ccctgcccct 840
          agacctccca ccccagcccc aacaatcgcc agccagcctc tgtctctgcg gcccgaagcc 900
          tgtagacctg ctgccggcgg agccgtgcac accagaggcc tggacttcgc ctgcgacatc 960
          tacatctggg cccctctggc cggcacctgt ggcgtgctgc tgctgagcct ggtgatcacc 1020
          ctgtactgca accaccggaa caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1080
          ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1140
          gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcagatccgc cgacgcccct 1200
          gcctaccagc agggacagaa ccagctgtac aacgagctga acctgggcag acgggaagag 1260
          tacgacgtgc tggacaagcg gagaggccgg gaccccgaga tgggcggaaa gcccagacgg 1320
          aagaaccccc aggaaggcct gtataacgaa ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac 1380
          agcgagatcg gcatgaaggg cgagcggagg cgcggcaagg gccacgatgg cctgtaccag 1440
          ggcctgagca ccgccaccaa ggacacctac gacgccctgc acatgcaggc cctgcccccc 1500
          aga                                                               1503
          <![CDATA[<210> 178]]>
          <![CDATA[<211> 501]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 例示性BCMA CAR胺基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 178]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
           1               5                  10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
                  35                  40                  45              
          Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
              50                  55                  60                  
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
                          85                  90                  95      
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Lys
                      100                 105                 110         
          Tyr Asp Leu Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
                  115                 120                 125             
          Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys
              130                 135                 140                 
          Gly Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
          145                 150                 155                 160 
          Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu
                      180                 185                 190         
          Glu Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln
              210                 215                 220                 
          Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly Asp Thr Ile Leu Asp Val Trp Gly Gln
                          245                 250                 255     
          Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala
                      260                 265                 270         
          Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr
                  275                 280                 285             
          Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala
              290                 295                 300                 
          Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser
                          325                 330                 335     
          Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Lys Arg Gly Arg Lys
                      340                 345                 350         
          Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr
                  355                 360                 365             
          Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu
              370                 375                 380                 
          Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro
          385                 390                 395                 400 
          Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly
                          405                 410                 415     
          Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro
                      420                 425                 430         
          Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr
                  435                 440                 445             
          Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
              450                 455                 460                 
          Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
          465                 470                 475                 480 
          Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
                          485                 490                 495     
          Ala Leu Pro Pro Arg
                      500     
          <![CDATA[<210> 179]]>
          <![CDATA[<211> 44]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD8跨膜]]>
          <![CDATA[<400> 179]]>
          Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
           1               5                  10                  15      
          Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
                      20                  25                  30          
          Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
                  35                  40                  
          <![CDATA[<210> 180]]>
          <![CDATA[<211> 25]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> CD8鉸鏈]]>
          <![CDATA[<400> 180]]>
          Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
                      20                  25  
          <![CDATA[<210> 181]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 連接子]]>
          <![CDATA[<400> 181]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
           1               5                  10                  15  
          <![CDATA[<210> 182]]>
          <![CDATA[<211> 13]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD20 Leu16 scFv重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400> 182]]>
          Ser Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Trp Phe Phe Asp Val
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
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Claims (172)

  1. 一種轉導T細胞之方法，該方法包含： 使未經活化T細胞與包含CD8結合劑之慢病毒載體接觸，其中該慢病毒載體轉導該未經活化T細胞。
  2. 如請求項1之方法，其中該T細胞為CD8+ T細胞。
  3. 如請求項1或請求項2之方法，其中該未經活化T細胞之表面對一或多種選自由以下組成之群之T細胞活化標記物呈陰性：CD25、CD44及CD69。
  4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該未經活化T細胞尚未經抗CD3抗體(例如，OKT3)處理。
  5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中該未經活化T細胞尚未經抗CD28抗體(例如，CD28.2)處理。
  6. 如請求項1至5中任一項之方法，其中該未經活化T細胞未經與抗CD3抗體(例如，OKT3)及抗CD28抗體(例如，CD28.2)偶合之珠粒處理，視情況其中該珠粒為超順磁珠粒。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中該未經活化T細胞尚未經T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)處理，視情況其中該T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。
  8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中該未經活化T細胞尚未經可溶性T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體或可溶性CD80、可溶性CD86、可溶性CD137L或可溶性ICOS-L)處理。
  9. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該慢病毒載體包含編碼經工程改造受體之轉基因，該經工程改造受體結合至或識別與疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)所表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原。
  10. 如請求項9之方法，其中該經工程改造受體為嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor；CAR)。
  11. 如請求項10之方法，其中該CAR包含抗原結合域、跨膜域及細胞內信號傳導域，該細胞內信號傳導域包含CD3ζ信號傳導域及共刺激性信號傳導域之細胞內組分。
  12. 如請求項11之方法，其中該共刺激性信號傳導域為CD28共刺激域，視情況其中該CD28共刺激性信號傳導域包含SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列。
  13. 如請求項11或請求項12之方法，其中該共刺激性信號傳導域為4-1BB信號傳導域，視情況其中該4-1BB信號傳導域包含SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列。
  14. 如請求項11至13中任一項之方法，其中該CD3ζ信號傳導域包含SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:100中所闡述之序列。
  15. 如請求項11至14中任一項之方法，其中該跨膜域包含SEQ ID NO:94、95及96中任一者所闡述之序列。
  16. 如請求項11至15中任一項之方法，其中該CAR包含鉸鏈域，視情況其中該鉸鏈域包含SEQ ID NO:88、89、90、91、92、93及180中任一者所闡述之序列。
  17. 如請求項11至16中任一項之方法，其中該抗原結合域結合於選自由以下組成之群之抗原：CD19、CD20、CD22及BCMA。
  18. 如請求項11至17中任一項之方法，其中該抗原結合域結合於CD19。
  19. 如請求項11至18中任一項之方法，其中該抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:108、109及110中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:103、104及105中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； (b) 包含SEQ ID NO:107中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:102中所闡述之胺基酸序列之VL區；及/或 (c) SEQ ID NO:101或111中所闡述之胺基酸序列。
  20. 如請求項11至19中任一項之方法，其中該CAR包含SEQ ID NO:113、115、117或119中所闡述之胺基酸序列及/或由SEQ ID NO:112、114、116或118中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列。
  21. 如請求項11至17中任一項之方法，其中該抗原結合域結合於CD20。
  22. 如請求項11至17及21中任一項之方法，其中該抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:126、127及182中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:122、123及124中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； (b) 包含SEQ ID NO:125中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:121中所闡述之胺基酸序列之VL區；及/或 (c) SEQ ID NO:120中所闡述之胺基酸序列。
  23. 如請求項11至17中任一項之方法，其中該抗原結合域結合於CD22。
  24. 如請求項11至17及23中任一項之方法，其中該抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:130、131及132中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:134、135及136中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；或 分別包含SEQ ID NO:139、140及142中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:143、144及145中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；及/或 (b) 包含SEQ ID NO:129中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:133中所闡述之胺基酸序列之VL區；或 包含SEQ ID NO:138中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:142中所闡述之胺基酸序列之VL區；及/或 (c) SEQ ID NO:128或137中所闡述之胺基酸序列。
  25. 如請求項11至17中任一項之方法，其中該抗原結合域結合於BCMA。
  26. 如請求項11至17及25中任一項之方法，其中該抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:152、152及154中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:148、149及150中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； 分別包含SEQ ID NO:161、162及163中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:157、158及159中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； 分別包含SEQ ID NO:165、166及167中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3；或 分別包含SEQ ID NO:174、175及176中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:170、171及172中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；及/或 (b) 包含SEQ ID NO:151中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:147中所闡述之胺基酸序列之VL區； 包含SEQ ID NO:160中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:156中所闡述之胺基酸序列之VL區； 包含SEQ ID NO:173中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:169中所闡述之胺基酸序列之VL區；或 包含SEQ ID NO:164中所闡述之胺基酸序列之VH區；及/或 (c) SEQ ID NO:146、155或168中所闡述之胺基酸序列。
  27. 如請求項11至17、25及26中任一項之方法，其中該CAR包含SEQ ID NO:178中所闡述之胺基酸序列及/或由SEQ ID NO:177中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列。
  28. 如請求項9之方法，其中該經工程改造受體為經工程改造T細胞受體(T cell receptor；TCR)。
  29. 如請求項1至28中任一項之方法，其中該未經活化T細胞為人類T細胞。
  30. 如請求項1至29中任一項之方法，其中該未經活化T細胞係在個體中。
  31. 如請求項1至29中任一項之方法，其中該未經活化T細胞係在活體外。
  32. 如請求項1至29中任一項之方法，其中該未經活化T細胞係來自個體之離體細胞。
  33. 如請求項30或請求項32之方法，其中在該接觸之前，該個體尚未投與T細胞活化治療。
  34. 如請求項30、32及33中任一項之方法，其中該個體患有疾病或病狀。
  35. 一種轉導T細胞群體之方法，該方法包含： 使未經活化T細胞群體與包含慢病毒載體之組合物接觸，該慢病毒載體包含CD8結合劑，其中該未經活化T細胞群體係經以至少1%之效率轉導。
  36. 如請求項35之方法，其中該未經活化T細胞群體係經以至少5%之效率轉導。
  37. 如請求項35或請求項36之方法，其中該未經活化T細胞群體係經以至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%之效率轉導。
  38. 如請求項35至37中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體中至少75%的該等T細胞之表面對一或多種選自由以下組成之群之T細胞活化標記物呈陰性：CD25、CD44及CD69 (例如，該群體中至少80%、至少85%、至少90%、至少95%的該等T細胞之表面對該T細胞活化標記物呈陰性)。
  39. 如請求項35至38中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體包含CD8+ T細胞(例如，該未經活化T細胞群體中至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%為CD8+ T細胞)。
  40. 如請求項39之方法，其中至少75%的該等CD8+ T細胞之表面對一或多種選自由以下組成之群之T細胞活化標記物呈陰性：CD25、CD44及CD69 (例如，該群體中至少80%、至少85%、至少90%、至少95%的該等CD8+ T細胞之表面對該T細胞活化標記物呈陰性)。
  41. 如請求項39或請求項40之方法，其中該未經活化T細胞群體中之該等CD8+ T細胞係經以至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%之效率轉導。
  42. 如請求項35至41中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體尚未經抗CD3抗體(例如，OKT3)處理。
  43. 如請求項35至42中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體尚未經抗CD28抗體(例如，CD28.2)處理。
  44. 如請求項35至43中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體尚未經與抗CD3抗體(例如，OKT3)及抗CD28抗體(例如，CD28.2)偶合之珠粒處理，視情況其中該珠粒為超順磁珠粒。
  45. 如請求項35至44中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體尚未經T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)處理，視情況其中該T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。
  46. 如請求項35至45中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體尚未經可溶性T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體或可溶性CD80、可溶性CD86、可溶性CD137L或可溶性ICOS-L)處理。
  47. 如請求項35至46中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體為人類細胞。
  48. 如請求項35至47中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體係在個體中。
  49. 如請求項48之方法，其中在該接觸之前，該個體尚未投與T細胞活化治療。
  50. 如請求項35至47中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體係在活體外。
  51. 如請求項35至47中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體係來自個體之離體細胞。
  52. 如請求項35至47、50及51中任一項之方法，其中該未經活化T細胞群體包含周邊血液單核細胞(peripheral blood mononuclear cell；PBMC)或其包含CD8+ T細胞之子集。
  53. 如請求項35至47及50至52中任一項之方法，其中該未經活化細胞群體為選自來自個體之生物樣品的經富集T細胞群體，視情況其中針對表面對T細胞標記物(例如，CD3或CD8)呈陽性之T細胞來選擇該等T細胞。
  54. 如請求項53之方法，其中該生物樣品為全血樣品、血球分離術樣品或白血球分離術樣品。
  55. 如請求項48、49及51至54之方法，其中該個體患有疾病或病狀。
  56. 如請求項35至47及50至55中任一項之方法，其進一步包含擴增該經轉導之T細胞群體。
  57. 如請求項56之方法，其中該擴增包含將該等經轉導之細胞與一或多種T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)一起培育，視情況其中該T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。
  58. 如請求項35至47及50至56中任一項之方法，其進一步包含將該等經轉導之T細胞與一或多種T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21或其組合)一起培育，視情況其中該T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。
  59. 一種活體內轉導T細胞之方法，該方法包含： 向個體投與包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，其中該慢病毒載體轉導該個體內之T細胞，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)未向該個體投與T細胞活化治療。
  60. 如請求項59之方法，其中該個體患有疾病或病狀。
  61. 一種包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物之用途，其係用於治療患有疾病或病狀(視情況地，癌症)之個體。
  62. 一種包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，其係用於治療患有疾病或病狀(視情況地，癌症)之個體。
  63. 一種治療患有疾病或病狀之個體之方法，該方法包含： 向該個體投與包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)未向該個體投與T細胞活化治療。
  64. 如請求項9至60及63中任一項之方法、如請求項61之用途或如請求項62之組合物，其中該疾病或病狀為癌症。
  65. 如請求項34、55至58、60、63及64中任一項之方法、如請求項61或請求項64之用途或如請求項62或請求項64之組合物，其中該慢病毒載體包含編碼經工程改造受體之轉基因，該經工程改造受體結合至或識別與該疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)所表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原，視情況其中該經工程改造受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。
  66. 一種用於在有需要個體中擴增能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞之方法，該方法包含： 向該個體投與包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，且其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)未向該個體投與T細胞活化治療。
  67. 如請求項66之方法，其中該慢病毒載體包含編碼經工程改造受體之轉基因，該經工程改造之受體結合至或識別該等腫瘤細胞上所表現之蛋白質，視情況其中該經工程改造受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。
  68. 如請求項33至34、49、55至60、63至67、138至142及163至165中任一項之方法，其中該T細胞活化治療包含投與抗CD3抗體(例如，OKT3)。
  69. 如請求項33至34、49、55至60、63至68、138至142及163至165中任一項之方法，其中該T細胞活化治療包含投與可溶性T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體，或重組CD80、CD86、CD137L、ICOS-L)。
  70. 如請求項33至34、49、55至60、63至69、138至142及163至165中任一項之方法，其中該T細胞活化治療包含投與T細胞活化細胞介素(例如，重組IL-2、IL-7、IL-15、IL-21)，視情況其中該T細胞活化細胞介素為人類細胞介素。
  71. 如請求項33至34、49、55至60、63至70、138至142及163至165中任一項之方法，其中該T細胞活化治療包含投與重組IL-7，視情況人類IL-7。
  72. 如請求項33至34、49、55至60、63至71、138至142及163至165中任一項之方法，其中該T細胞活化治療包含投與淋巴細胞耗減療法，視情況投與環磷醯胺及/或氟達拉濱(fludarabine)。
  73. 如請求項1至60及63至72中任一項之方法、如請求項61、64及65中任一項之用途或如請求項62、64及65中任一項之組合物，其中該CD8結合劑為抗CD8抗體或抗原結合片段。
  74. 如請求項73之方法、用途或組合物，其中該抗CD8抗體或抗原結合片段為小鼠、兔、人類或人類化抗體或抗原結合片段。
  75. 如請求項73或請求項74之方法、用途或組合物，其中該抗CD8抗體或抗原結合片段為單鏈可變片段(scFv)。
  76. 如請求項73之方法、用途或組合物，其中該抗CD8抗體或抗原結合片段為單域抗體。
  77. 如請求項73、74及76中任一項之方法、用途或組合物，其中該抗CD8抗體或抗原結合片段為駱駝科(例如，美洲駝、羊駝、駱駝)抗CD8抗體或抗原結合片段(例如，VHH)。
  78. 如請求項1至60及63至77中任一項之方法、如請求項61、64至65及73至77中任一項之用途或如請求項62、64、65及73至77中任一項之組合物，其中該CD8結合劑結合於CD8α鏈及/或CD8β鏈。
  79. 如請求項1至60及63至78中任一項之方法、如請求項61、64至65及73至78中任一項之用途或如請求項62、64至65及73至78中任一項之組合物，其中該CD8結合劑在該慢病毒載體之表面上暴露。
  80. 如請求項1至60及63至79中任一項之方法、如請求項61、64至65及73至79中任一項之用途或如請求項62、64至65及73至79中任一項之組合物，其中該CD8結合劑與併入病毒包膜中之跨膜域融合。
  81. 如請求項1至60及63至80中任一項之方法、如請求項61、64至65及73至80中任一項之用途或如請求項62、64至65及73至80中任一項之組合物，其中該慢病毒載體經病毒融合蛋白質假模式化。
  82. 如請求項81之方法、用途或組合物，其中該病毒融合蛋白質為VSV-G蛋白或其功能變異體。
  83. 如請求項81之方法、用途或組合物，其中該病毒融合蛋白質為科卡爾病毒G蛋白(Cocal virus G protein)或其功能變異體。
  84. 如請求項81之方法、用途或組合物，其中該病毒融合蛋白質為α病毒融合蛋白質(Alphavirus fusion protein)(例如，辛得比斯病毒(Sindbis virus))或其功能變異體。
  85. 如請求項81之方法、用途或組合物，其中該病毒融合蛋白質為副黏液病毒科融合蛋白質(Paramyxoviridae fusion protein)(例如，麻疹病毒(Morbillivirus)或亨尼帕病毒(Henipavirus))或其功能變異體。
  86. 如請求項81或請求項85之方法、用途或組合物，其中該病毒融合蛋白質為麻疹病毒融合蛋白質(Morbillivirus fusion protein)(例如，麻疹病毒(measles virus；MeV)、犬瘟熱病毒(canine distemper virus)、鯨麻疹病毒(Cetacean morbillivirus)、小反芻動物瘟疫病毒(Peste-des-petits-ruminants virus)、海豹瘟熱病毒(Phocine distemper virus)、牛瘟病毒(Rinderpest virus))或其功能變異體。
  87. 如請求項81或請求項85之方法、用途或組合物，其中該病毒融合蛋白質為亨尼帕病毒融合蛋白質(例如，尼帕病毒(Nipah virus)、亨德拉病毒(Hendra virus)、賽得病毒(Cedar virus)、庫馬西病毒(Kumasi virus)、墨江病毒(Mòjiāng virus))或其功能變異體。
  88. 如請求項81至87中任一項之方法、用途或組合物，其中該病毒融合蛋白質包含一或多種用於減少結合至其原生受體之修飾。
  89. 如請求項81至88中任一項之方法、用途或組合物，其中該病毒融合蛋白質與該CD8結合劑融合。
  90. 如請求項81、85及87至89中任一項之方法、用途或組合物，其中該病毒融合蛋白質包含尼帕病毒F醣蛋白(NiV-F)或其生物活性部分及尼帕病毒G醣蛋白(NiV-G)或其生物活性部分，且其中該CD8結合劑與該NiV-G或其生物活性部分融合。
  91. 如請求項90之方法、用途或組合物，其中該CD8結合劑與該尼帕病毒G醣蛋白或其生物活性部分之C端融合。
  92. 如請求項89至91中任一項之方法、用途或組合物，其中該CD8結合蛋白質直接或經由肽連接子與該病毒融合蛋白質融合。
  93. 如請求項89至92中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-G或其生物活性部分為野生型NiV-G蛋白或其功能活性變異體或生物活性部分。
  94. 如請求項89至93中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-G蛋白或該生物活性部分係經截短及缺少該野生型NiV-G蛋白之N端處或附近至多40個相鄰胺基酸殘基。
  95. 如請求項89至94中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-G蛋白或該生物活性部分在該野生型NiV-G蛋白之N端處或附近具有5個胺基酸截短，視情況其中該NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:12中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:12中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  96. 如請求項89至95中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-G蛋白或該生物活性部分在該野生型NiV-G蛋白之N端處或附近具有10個胺基酸截短，視情況其中該NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:44中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:44中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  97. 如請求項89至94中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-G蛋白或該生物活性部分在該野生型NiV-G蛋白之N端處或附近具有15個胺基酸截短，視情況其中該NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:45中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:45中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  98. 如請求項89至94中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-G蛋白或該生物活性部分在該野生型NiV-G蛋白之N端處或附近具有20個胺基酸截短，視情況其中該NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:13中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:13中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  99. 如請求項89至94中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-G蛋白或該生物活性部分在該野生型NiV-G蛋白之N端處或附近具有25個胺基酸截短，視情況其中該NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:14中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:14中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  100. 如請求項89至94中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-G蛋白或該生物活性部分在該野生型NiV-G蛋白之N端處或附近具有30個胺基酸截短，視情況其中該NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:43中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:43中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  101. 如請求項89至94中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-G蛋白或該生物活性部分在該野生型NiV-G蛋白之N端處或附近具有34個胺基酸截短，視情況其中該NiV-G蛋白或其生物活性部分具有SEQ ID NO:42中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:42中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  102. 如請求項89至101中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-G蛋白或其生物活性部分為突變型NiV-G蛋白，其呈現經降低結合至艾普瑞林(Ephrin)B2或艾普瑞林B3。
  103. 如請求項102之方法、用途或組合物，其中該突變型NiV-G蛋白或該生物活性部分包含一或多個對應於選自由以下組成之群的胺基酸取代之胺基酸取代：E501A、W504A、Q530A及E533A，參考SEQ ID NO:4中所闡述之編號。
  104. 如請求項102或請求項103之方法、用途或組合物，其中該突變型NiV-G蛋白或該生物活性部分包含SEQ ID NO:17中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:17中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  105. 如請求項102或請求項103之方法、用途或組合物，其中該NiV-G蛋白或該生物活性部分具有SEQ ID NO:18中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:18中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  106. 如請求項89至105中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-F蛋白質或其生物活性部分為野生型NiV-F蛋白質或其功能活性變異體或生物活性部分。
  107. 如請求項89至106中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-F蛋白質或其生物活性部分在該野生型NiV-F蛋白質之C端處或附近具有20個胺基酸截短，視情況其中該NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:20中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:20中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  108. 如請求項89至107中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-F蛋白質或其生物活性部分包含： i) 在該野生型NiV-F蛋白質之C端處或附近具有20個胺基酸截短；及 ii) N-連接之醣基化位點上之點突變， 視情況其中該NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:15中所闡述之序列或與SEQ ID NO:15中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  109. 如請求項89至106中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-F蛋白質或其生物活性部分在該野生型NiV-F蛋白質之C端處或附近具有22個胺基酸截短，視情況其中該NiV-F蛋白質或其生物活性部分具有SEQ ID NO:16或21中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:16或21中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  110. 如請求項89至106及109中任一項之方法、用途或組合物，其中該NiV-F蛋白質或其生物活性部分包含SEQ ID NO:21中所闡述之胺基酸序列或與SEQ ID NO:21中所闡述之序列具有至少或約80%、85%、90%或95%序列一致性之胺基酸序列。
  111. 如請求項89至106、109及110中任一項之方法、用途或組合物，其中該Niv-G蛋白包含SEQ ID NO:17中所闡述之胺基酸序列，且該Niv-F蛋白質包含SEQ ID NO:21中所闡述之胺基酸序列。
  112. 如請求項1至111中任一項之方法、用途或組合物，其中該慢病毒載體包含轉基因。
  113. 如請求項112之方法、用途或組合物，其中該轉基因包含核酸序列，該核酸序列編碼能夠進行RNA干擾之RNA序列(例如，前miRNA、siRNA或shRNA)。
  114. 如請求項112之方法、用途或組合物，其中該轉基因係選自由以下組成之群：治療性基因、報導基因、編碼酶之基因、編碼前藥酶之基因、編碼細胞凋亡誘導劑之基因、編碼螢光蛋白之基因、編碼前藥活化酶之基因、編碼細胞凋亡蛋白質之基因、編碼細胞凋亡酶之基因、編碼自殺蛋白質之基因、編碼細胞介素之基因、編碼抗免疫抑制蛋白之基因、編碼表觀遺傳調節劑之基因、編碼T細胞受體(TCR)之基因、編碼嵌合抗原受體(CAR)之基因、編碼調節經轉導之細胞之細胞表面的蛋白質之基因、編碼調節內源性TCR之表現的蛋白質之基因及編碼將促腫瘤轉化成抗腫瘤信號之開關受體之基因。
  115. 如請求項112之方法、用途或組合物，其中該轉基因編碼經工程改造受體，該經工程改造受體結合至或識別與疾病或病狀相關聯之細胞或病灶(例如，腫瘤)所表現之蛋白質或抗原，視情況其中該經工程改造受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。
  116. 如請求項65及請求項67至115中任一項之方法，或如請求項112至115中任一項之用途或組合物，其中該轉基因編碼嵌合抗原受體(CAR)。
  117. 如請求項116之方法、用途或組合物，其中該CAR包含抗原結合域、跨膜域及細胞內信號傳導域，該細胞內信號傳導域包含CD3ζ信號傳導域及共刺激性信號傳導域之細胞內組分。
  118. 如請求項117之方法、用途或組合物，其中該共刺激性信號傳導域為CD28共刺激域，視情況其中該CD28共刺激性信號傳導域包含SEQ ID NO:98中所闡述之胺基酸序列。
  119. 如請求項117或請求項118之方法、用途或組合物，其中該共刺激性信號傳導域為4-1BB信號傳導域，視情況其中該4-1BB信號傳導域包含SEQ ID NO:97中所闡述之胺基酸序列。
  120. 如請求項117至119中任一項之方法、用途或組合物，其中該CD3ζ信號傳導域包含SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:100中所闡述之序列。
  121. 如請求項117至120中任一項之方法、用途或組合物，其中該跨膜域包含SEQ ID NO:94、95及96中之任一者中所闡述之序列。
  122. 如請求項117至121中任一項之方法、用途或組合物，其中該CAR包含鉸鏈域，視情況其中該鉸鏈域包含SEQ ID NO:88、89、90、91、92、93及180中之任一者中所闡述之序列。
  123. 如請求項117至122中任一項之方法、用途或組合物，其中該抗原結合域結合於選自由以下組成之群之抗原：CD19、CD20、CD22及BCMA。
  124. 如請求項117至123中任一項之方法、用途或組合物，其中該抗原結合域結合於CD19。
  125. 如請求項117至124中任一項之方法、用途或組合物，其中該抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:108、109及110中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:103、104及105中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； (b) 包含SEQ ID NO:107中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:102中所闡述之胺基酸序列之VL區；及/或 (c) SEQ ID NO:101或111中所闡述之胺基酸序列。
  126. 如請求項117至125中任一項之方法、用途或組合物，其中該CAR包含SEQ ID NO:113、115、117或119中所闡述之胺基酸序列及/或由SEQ ID NO:112、114、116或118中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列。
  127. 如請求項117至123中任一項之方法、用途或組合物，其中該抗原結合域結合於CD20。
  128. 如請求項117至123及127中任一項之方法、用途或組合物，其中該抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:126、127及182中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:122、123及124中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； (b) 包含SEQ ID NO:125中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:121中所闡述之胺基酸序列之VL區；及/或 (c) SEQ ID NO:120中所闡述之胺基酸序列。
  129. 如請求項117至123中任一項之方法、用途或組合物，其中該抗原結合域結合於CD22。
  130. 如請求項117至123及129中任一項之方法、用途或組合物，其中該抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:130、131及132中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:134、135及136中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；或 分別包含SEQ ID NO:139、140及142中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:143、144及145中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；及/或 (b) 包含SEQ ID NO:129中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:133中所闡述之胺基酸序列之VL區；或 包含SEQ ID NO:138中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:142中所闡述之胺基酸序列之VL區；及/或 (c) SEQ ID NO:128或137中所闡述之胺基酸序列。
  131. 如請求項117至123中任一項之方法、用途或組合物，其中該抗原結合域結合於BCMA。
  132. 如請求項117至123及131中任一項之方法、用途或組合物，其中該抗原結合域包含： (a) 分別包含SEQ ID NO:152、152及154中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:148、149及150中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； 分別包含SEQ ID NO:161、162及163中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:157、158及159中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3； 分別包含SEQ ID NO:165、166及167中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3；或 分別包含SEQ ID NO:174、175及176中所闡述之胺基酸序列之CDR-H1、CDRH-2及CDR-H3，以及分別包含SEQ ID NO:170、171及172中所闡述之胺基酸序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；及/或 (b) 包含SEQ ID NO:151中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:147中所闡述之胺基酸序列之VL區； 包含SEQ ID NO:160中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:156中所闡述之胺基酸序列之VL區； 包含SEQ ID NO:173中所闡述之胺基酸序列之VH區，及包含SEQ ID NO:169中所闡述之胺基酸序列之VL區；或 包含SEQ ID NO:164中所闡述之胺基酸序列之VH區；及/或 (c) SEQ ID NO:146、155或168中所闡述之胺基酸序列。
  133. 如請求項117至123、131及132中任一項之方法、用途或組合物，其中該CAR包含SEQ ID NO:178中所闡述之胺基酸序列及/或由SEQ ID NO:177中所闡述之多核苷酸序列編碼之胺基酸序列。
  134. 如請求項65及請求項67至115中任一項之方法，或如請求項112至115中任一項之用途或組合物，其中該轉基因編碼經工程改造T細胞受體(TCR)。
  135. 如請求項1至134中任一項之方法、用途或組合物，其中該慢病毒載體不包含或不編碼T細胞活化劑，視情況其中該T細胞活化劑為淋巴增生試劑。
  136. 如請求項135之方法、用途或組合物，其中該T細胞活化劑為： 能夠結合CD3及/或CD28之多肽； CD3抗體(例如，抗CD3 scFv)；T細胞活化細胞介素(例如，IL-2、IL-7、IL-15或IL-21)；或T細胞共刺激性分子(例如，抗CD28抗體、CD80、CD86、CD137L或ICOS-L)； 活化STAT3路徑、STAT4路徑及/或Jak/STAT5路徑之細胞介素或細胞介素受體或其信號傳導域； T細胞存活模體，視情況為IL-7受體、IL-15受體或CD28，或其功能部分；及/或 微型RNA (miRNA)或短髮夾RNA (shrRNA)，其中該miRNA或該shRNA刺激該STAT5路徑及/或抑制該SOCS路徑。
  137. 如請求項1至136中任一項之方法、用途或組合物，其中該慢病毒載體不包含或不編碼膜結合及/或呈現於表面上之T細胞活化劑，視情況其中該T細胞活化劑為淋巴增生試劑。
  138. 如請求項33至34、49及55至137中任一項之方法、用途或組合物，其中未向該個體同時投與T細胞活化治療及該慢病毒載體。
  139. 如請求項33至34、49及55至138中任一項之方法、用途或組合物，其中在與該慢病毒載體接觸或投與該包含慢病毒載體之組合物之前1個月內未向該個體投與T細胞活化治療。
  140. 如請求項33至34、49及55至139中任一項之方法、用途或組合物，其中在與該慢病毒載體接觸或投與該包含慢病毒載體之組合物之前1週、2週、3週或4週內或剛好或約1週、2週、3週或4週時，視情況剛好或約1、2、3、4、5、6或7天時，未向該個體投與T細胞活化治療。
  141. 如請求項33至34、49及55至140中任一項之方法、用途或組合物，其中在與該慢病毒載體接觸或投與該包含慢病毒載體之組合物之後1個月內未向該個體投與T細胞活化治療。
  142. 如請求項33至34、49及55至141中任一項之方法、用途或組合物，其中在與該慢病毒載體接觸或投與該包含慢病毒載體之組合物之後1週、2週、3週或4週內或剛好或約1週、2週、3週或4週時，視情況剛好或約1、2、3、4、5、6或7天時未向該個體投與T細胞活化治療。
  143. 如請求項1至58中任一項之方法，其進一步包含編輯該T細胞或該T細胞群體，以使B2M、CIITA、TRAC及TRB基因中之一或多者失活。
  144. 如請求項143之方法，其中編輯該T細胞或該T細胞群體以不活化B2M、CIITA及TRAC基因。
  145. 如請求項143之方法，其中編輯該T細胞或該T細胞群體，以使B2M、CIITA及TRB基因失活。
  146. 如請求項143至145中任一項之方法，其進一步包含在指定的基因座處將編碼CD47之基因插入該T細胞或該T細胞群體中。
  147. 如請求項146之方法，其中該指定的基因座係選自由以下組成之群： B2M基因座、 CIITA基因座、 TRAC基因座、 TRB基因座或安全港基因座。
  148. 如請求項147之方法，其中該安全港基因座係選自由以下組成之群： AAVS1基因座、 CCR5基因座及 ROSA26基因座。
  149. 如請求項143至148中任一項之方法，其中該慢病毒載體包含編碼經工程改造受體之轉基因，該經工程改造受體結合至或識別與該疾病或病狀相關聯之細胞(例如，腫瘤細胞)所表現或在該等細胞上表現之蛋白質或抗原，視情況其中該經工程改造受體為嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造T細胞受體(TCR)。
  150. 如請求項1至60或63至149中任一項之方法，其中該接觸或該投與係藉由使用封閉流體迴路向個體離體投與該慢病毒載體來進行。
  151. 如請求項150之方法，其中該離體投與包含： (a) 獲得來自個體之全血； (b) 收集血液中之含有白血球組分之部分，該等白血球組分包含T細胞(例如，CD8+ T細胞)； (c) 使該等包含T細胞(例如，CD8+ T細胞)之白血球組分與包含該慢病毒載體之組合物接觸；及 (d) 將該等經接觸之包含T細胞(例如，CD8+ T細胞)之白血球組分再輸注至該個體中，其中步驟(a)-(d)係以產線方式於封閉流體迴路中進行。
  152. 如請求項151之方法，其中該步驟(c)中之接觸不超過24小時、不超過18小時、不超過12小時或不超過6小時。
  153. 一種經轉導T細胞，其係由如請求項1至29及31至60及68至152中任一項之方法產生。
  154. 如請求項153之經轉導T細胞，其中該T細胞在一或多個基因之兩個對偶基因處失活。
  155. 一種組合物，其包含如請求項153或請求項154之經轉導T細胞，視情況其中該組合物為醫藥組合物。
  156. 一種經轉導T細胞群體，其係由如請求項35至47、50至58及68至152中任一項之方法產生。
  157. 如請求項156之經轉導T細胞群體，其中未經活化細胞群體中至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%之細胞在一或多個基因處失活。
  158. 如請求項156或請求項157之經轉導T細胞群體，其中該群體中至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%或至少35%之未經活化CD8+ T細胞經轉導且在該一或多個基因處失活。
  159. 如請求項156至158中任一項之經轉導T細胞群體，其中該群體中之細胞在該一或多個基因之兩個對偶基因處失活。
  160. 一種組合物，其包含如請求項156至159中任一項之經轉導T細胞群體，視情況其中該組合物為醫藥組合物。
  161. 一種組合物，其包含由如請求項35至47、50至58及68至152中任一項之方法產生之經轉導T細胞群體，視情況其中該組合物為醫藥組合物。
  162. 如請求項62、64、65、73至142、155、160及161中任一項之組合物，其進一步包含低溫保存劑，視情況其中該低溫保存劑為DMSO。
  163. 一種治療患有疾病或病狀之個體之方法，該方法包含： 向該個體投與如請求項62、64、65、73至142、155及160至162中任一項之組合物，其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)未向該個體投與T細胞活化治療。
  164. 如請求項163之方法，其中該疾病或病狀為癌症。
  165. 一種用於在有需要個體中擴增能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞之方法，該方法包含： 向該個體投與如請求項62、64、65、73至142、155及160至162中任一項之組合物，其中在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)未向該個體投與T細胞活化治療。
  166. 一種如請求項62、64、65、73至142、155及160至162中任一項之組合物之用途，其係用於調配用以治療患有疾病或病狀(視情況地，癌症)之個體之藥劑。
  167. 如請求項62、64、65、73至142、155及160至162中任一項之組合物，其係用於治療患有疾病或病狀(視情況地，癌症)之個體。
  168. 一種包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體的組合物之用途，其係用於調配用以在有需要個體中擴增能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞之藥劑。
  169. 一種如請求項62、64、65、73至142、155及160至162中任一項之組合物之用途，其係用於調配用以在有需要個體中擴增能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞之藥劑。
  170. 一種包含有包含CD8結合劑之慢病毒載體之組合物，其係用於在有需要個體中擴增能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞。
  171. 如請求項62、64、65、73至142、155及160至162中任一項之組合物，其係用於在有需要個體中擴增能夠識別及殺傷腫瘤細胞之T細胞。
  172. 如請求項166至171中任一項之用途或組合物，其係用於在投與該組合物時(例如，之前、之後或同時)未投與或未待投與T細胞活化治療之個體。
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