JP2024503027A - Ｃｄ８標的ウイルスベクターの使用方法 - Google Patents

Ｃｄ８標的ウイルスベクターの使用方法 Download PDF

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Abstract

本明細書では、ＣＤ８標的ウイルスベクターを使用して休止または非活性化Ｔ細胞に形質導入する方法が提供される。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０２１年１月１１日に出願された「ＣＤ８標的ウイルスベクターの使用」と題される米国仮出願第６３／１３６，２０２号、２０２１年２月１７日に出願された「ＣＤ８標的ウイルスベクターの使用」と題される同第６３／１５０，４９８号、２０２１年３月３０日に出願された「ＣＤ８標的ウイルスベクターの使用」と題される同第６３／１６８，２３５号、及び２０２１年６月１７日に出願された「ＣＤ８標的ウイルスベクターの使用」と題される同第６３／２１１，９４７号に対する優先権を主張するものであり、同文献の内容は参照によりそれらの全体があらゆる目的で援用される。
配列表の参照による援用
本願は、電子形式で配列表と共に出願されている。この配列表は、２０２２年１月１０日に作成された３１８，８９８バイトのサイズである１８６１５２００４６４０ＳｅｑＬｉｓｔ．ＴＸＴと題されるファイルとして提供される。この配列表の電子形式の情報は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
分野
本開示は、ＣＤ８標的ウイルスベクターを使用して休止または非活性化Ｔ細胞に形質導入する方法に関する。
背景
レンチウイルスベクターを含めたウイルスベクターは、外因性物質の細胞への送達のために一般的に使用される。しかしながら、ある特定の標的細胞へのウイルスベクターの形質導入は、困難を伴い得る。所望の細胞を標的化して送達を改善するための方法において使用するための、改善されたレンチウイルスベクターを含めたウイルスベクターが必要とされている。提供される開示は、この必要性に対処する。
概要
本願は、とりわけ、ＣＤ８標的ウイルスベクターを使用してインビトロ及びインビボの両方で休止または非活性化Ｔ細胞に効率的に形質導入することが可能であるという驚くべき知見に基づく。
本明細書では、Ｔ細胞に形質導入する方法が提供され、該方法は、非活性化Ｔ細胞を、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターと接触させる工程を含み、該レンチウイルスベクターが、非活性化Ｔ細胞に形質導入する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＣＤ２５、ＣＤ４４、及びＣＤ６９からなる群から選択される１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）で処理されていない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）で処理されていない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）または抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）で処理されていない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）に結合させたビーズで処理されておらず、任意で該ビーズは、超常磁性ビーズである。いくつかの実施形態では、ビーズは、超常磁性ビーズである。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）で処理されておらず、任意で該Ｔ細胞活性化サイトカインは、ヒトサイトカインである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化サイトカインは、ヒトサイトカインである。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、可溶性Ｔ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体または可溶性ＣＤ８０、可溶性ＣＤ８６、可溶性ＣＤ１３７Ｌまたは可溶性ＩＣＯＳ－Ｌ）で処理されていない。
いずれかの提供される実施形態のうちのいくつかでは、レンチウイルスベクターは、疾患または病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、操作された受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ｅＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインの細胞内構成要素を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号９８に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインは、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインは、配列番号９９または配列番号１００に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号９４、９５、及び９６のうちのいずれか１つに記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号９４に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号９５に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号９６に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号８８、８９、９０、９１、９２、９３、及び１８０のうちのいずれか１つに記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号８８に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号８９に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号９０に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号９１に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号９２に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号９３に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１８０に記載の配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１０８、１０９、及び１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１０３、１０４、及び１０５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１０７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１０１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１１１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１５に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１７に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１９に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１２に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１４に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１６に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１８に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＣＤ２０に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１２６、１２７、及び１８２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１２２、１２３、及び１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１２５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１２１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１２０に記載のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１３４、１３５、及び１３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１３９、１４０、及び１４２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１４３、１４４、及び１４５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１２９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１３３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１３８に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１４２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１３７に記載のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１５２、１５２、及び１５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１６１、１６２、及び１６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１５７、１５８、及び１５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１６５、１６６、及び１６７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１７４、１７５、及び１７６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号１７０、１７１、及び１７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１５１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１４７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１６０に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１５６に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１７３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１６９に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１６４に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１４６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１５５に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１６８に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１７８に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１７７に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）配列番号１０２に記載のＶＬ領域、配列番号１０６に記載のアミノ酸配列を含むリンカー、及び配列番号１０７に記載のＶＨ領域、及び／または配列番号１０１に記載のｓｃＦｖを含む、抗原結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号８８に記載のアミノ酸配列を含むヒンジ、（ｉｉｉ）配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含む膜貫通ドメイン、（ｉｖ）配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ならびに（ｖ）配列番号９９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１２に記載のヌクレオチド配列によってコードされる。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、対象内にある。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、インビトロにある。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、対象のエクスビボにある。提供される方法のいくつかの実施形態では、接触より前に、対象は、Ｔ細胞活性化処置を施されていない。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法のうちのいずれも、インビボで実施される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法のうちのいずれも、エクスビボでないか、またはインビトロでない。
提供される方法のいずれかの実施形態のうちのいくつかでは、対象は、がん等の疾患または病態を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、疾患または病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする導入遺伝子を含み、任意で該操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、操作された受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
提供される方法のうちのいずれかのいくつかでは、該方法は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢ遺伝子のうちの１つまたは複数を不活性化するようにＴ細胞を編集する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＡＣ遺伝子を不活性化するように編集される。提供される方法のうちのいずれかのいくつかでは、該方法は、ＣＤ４７をコードする遺伝子を、規定の遺伝子座にて挿入する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、規定の遺伝子座は、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、またはセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、セーフハーバー遺伝子座は、ＡＡＶＳ１遺伝子座、ＣＣＲ５遺伝子座、及びＲＯＳＡ２６遺伝子座からなる群から選択される。
また、本明細書では、提供される方法のうちのいずれかの方法によって生産される、形質導入されたＴ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、１つまたは複数の遺伝子の両方のアレルにて不活性化される。また、本明細書では、提供される形質導入されたＴ細胞を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、該組成物は、薬学的組成物である。
本明細書では、Ｔ細胞の集団に形質導入する方法が提供され、該方法は、非活性化Ｔ細胞の集団を、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させる工程を含み、該非活性化Ｔ細胞の集団は、少なくとも１％の効率で形質導入される。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、少なくとも５％の効率で形質導入される。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％の効率で形質導入される。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、少なくとも１０％の効率で形質導入される。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、少なくとも１５％の効率で形質導入される。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、少なくとも２０％の効率で形質導入される。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、少なくとも２５％の効率で形質導入される。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、少なくとも３０％の効率で形質導入される。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、少なくとも３５％の効率で形質導入される。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団中のＴ細胞の少なくとも７５％が、ＣＤ２５、ＣＤ４４、及びＣＤ６９からなる群から選択される１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である（例えば、該集団中のＴ細胞の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が、Ｔ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である）。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む（例えば、非活性化Ｔ細胞の集団の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％が、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である）。いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の少なくとも７５％が、ＣＤ２５、ＣＤ４４、及びＣＤ６９からなる群から選択される１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である（例えば、該集団中のＣＤ８＋ Ｔ細胞の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が、Ｔ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である）。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーは、ＣＤ２５である。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーは、ＣＤ４４である。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーは、ＣＤ６９である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団中のＣＤ８＋ Ｔ細胞は、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％の効率で形質導入される。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）で処理されていない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）で処理されていない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）または抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）で処理されていない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）に結合させたビーズで処理されておらず、任意で該ビーズは、超常磁性ビーズである。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）に結合させたビーズで処理されていない。いくつかの実施形態では、ビーズは、超常磁性ビーズである。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）で処理されておらず、任意で該Ｔ細胞活性化サイトカインは、ヒトサイトカインである。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）で処理されていない。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化サイトカインは、ヒトサイトカインである。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、可溶性Ｔ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体または可溶性ＣＤ８０、可溶性ＣＤ８６、可溶性ＣＤ１３７Ｌまたは可溶性ＩＣＯＳ－Ｌ）で処理されていない。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、ヒト細胞である。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、対象内にある。いくつかの実施形態では、接触より前に、対象は、Ｔ細胞活性化処置を施されていなかった。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、インビトロにある。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、対象のエクスビボにある。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞の集団は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、またはＣＤ８＋ Ｔ細胞を含むそのサブセットを含む。いくつかの実施形態では、非活性化細胞の集団は、対象からの生体試料から選択されたＴ細胞の濃縮された集団であり、任意で該Ｔ細胞は、Ｔ細胞マーカー（例えば、ＣＤ３またはＣＤ８）に関して表面陽性であるＴ細胞について選択される。いくつかの実施形態では、非活性化細胞の集団は、対象からの生体試料から選択されたＴ細胞の濃縮された集団である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、Ｔ細胞マーカー（例えば、ＣＤ３またはＣＤ８）に関して表面陽性であるＴ細胞について選択される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞マーカーは、ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞マーカーは、ＣＤ８である。いくつかの実施形態では、生体試料は、全血試料、アフェレーシス試料または白血球アフェレーシス試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は、全血試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は、アフェレーシス試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は、白血球アフェレーシス試料である。
いくつかの実施形態では、対象は、疾患または病態を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、疾患または病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする導入遺伝子を含み、任意で該操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、疾患または病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、操作された受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
提供される方法のうちのいずれかのいくつかでは、該方法は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢ遺伝子のうちの１つまたは複数を不活性化するようにＴ細胞またはＴ細胞の集団を編集する工程をさらに含む。提供される方法のうちのいずれかのいくつかでは、Ｔ細胞の集団は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＡＣ遺伝子を不活性化するように編集される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の集団のＴ細胞は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＢ遺伝子を不活性化するように編集される。いくつかの実施形態では、該方法は、ＣＤ４７をコードする遺伝子を、規定の遺伝子座にて挿入する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、規定の遺伝子座は、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、またはセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、セーフハーバー遺伝子座は、ＡＡＶＳ１遺伝子座、ＣＣＲ５遺伝子座、及びＲＯＳＡ２６遺伝子座からなる群から選択される。
提供される方法のうちのいずれかのいくつかでは、該方法は、形質導入されたＴ細胞の集団を増殖させる工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、増殖は、形質導入された細胞の、１つまたは複数のＴ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）とのインキュベーションを含み、任意で該Ｔ細胞活性化サイトカインは、ヒトサイトカインである。いくつかの実施形態では、増殖は、形質導入された細胞の、１つまたは複数のＴ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）とのインキュベーションを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化サイトカインは、ヒトサイトカインである。提供される方法のうちのいずれかのいくつかでは、該方法は、形質導入されたＴ細胞を、１つまたは複数のＴ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）と共にインキュベートする工程をさらに含み、任意で該Ｔ細胞活性化サイトカインは、ヒトサイトカインである。提供される方法のうちのいずれかのいくつかでは、該方法は、形質導入されたＴ細胞を、１つまたは複数のＴ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）と共にインキュベートする工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化サイトカインは、ヒトサイトカインである。
また、本明細書では、提供される方法のうちのいずれかによって生産される、形質導入されたＴ細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態では、非活性化細胞の集団の細胞の少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％が、１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される。いくつかの実施形態では、該集団中の非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％が形質導入され、１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される。いくつかの実施形態では、該集団中の非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の約１％が形質導入され、１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される。いくつかの実施形態では、該集団中の非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の約５％が形質導入され、１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される。いくつかの実施形態では、該集団中の非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の約１０％が形質導入され、１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される。いくつかの実施形態では、該集団中の非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の約１５％が形質導入され、１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される。いくつかの実施形態では、該集団中の非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の約２０％が形質導入され、１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される。いくつかの実施形態では、該集団中の非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の約２５％が形質導入され、１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される。いくつかの実施形態では、該集団中の非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の約３０％が形質導入され、１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される。いくつかの実施形態では、該集団中の非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の約３５％が形質導入され、１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される。いくつかの実施形態では、該集団の細胞は、１つまたは複数の遺伝子の両方のアレルにて不活性化される。
また、本明細書では、形質導入されたＴ細胞の集団を含む組成物が提供され、任意で該組成物は、薬学的組成物である。また、本明細書では、形質導入されたＴ細胞の集団を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、該組成物は、薬学的組成物である。また、本明細書では、形質導入されたＴ細胞の集団を含む薬学的組成物が提供される。また、本明細書では、疾患または病態を有する対象を処置する方法が提供され、該方法は、対象に、形質導入されたＴ細胞の集団を含む提供される組成物のうちのいずれかを投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、該組成物は、皮下（ＳＣ）には投与されない。いくつかの実施形態では、該組成物は、筋肉内（ＩＭ）には投与されない。いくつかの実施形態では、該組成物は、静脈内（ＩＶ）に投与される。
提供される組成物のうちのいずれかのいくつかでは、該組成物は、凍結保存剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、凍結保存剤は、ＤＭＳＯである。
本明細書では、インビボでのＴ細胞の形質導入方法が提供され、該方法は、対象に、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物を投与する工程を含み、該レンチウイルスベクターが、対象内でＴ細胞に形質導入し、該対象は、該組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない。また、本明細書では、インビボでのＴ細胞の形質導入方法が提供され、該方法は、対象に、提供される組成物のうちのいずれかを投与する工程を含み、該レンチウイルスベクターが、対象内でＴ細胞に形質導入し、該対象は、該組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない。いくつかの実施形態では、対象は、疾患または病態を有する。
また、本明細書では、疾患または病態を有する対象を処置する方法が提供され、該方法は、対象に、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物を投与する工程を含み、該対象は、該組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない。また、本明細書では、疾患または病態を有する対象を処置する方法が提供され、該方法は、対象に、提供される組成物のうちのいずれかを投与する工程を含み、該対象は、該組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない。いくつかの実施形態では、疾患または病態は、がんである。
また、本明細書では、腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための方法が提供され、該方法は、対象に、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物を投与する工程を含み、該対象は、該組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない。また、本明細書では、腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための方法が提供され、該方法は、対象に、本明細書で提供される組成物を投与する工程を含み、該対象は、該組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない。また、本明細書では、腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための方法が提供され、該方法は、対象に、本明細書で提供される組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、該組成物は、皮下（ＳＣ）には投与されない。いくつかの実施形態では、該組成物は、筋肉内（ＩＭ）には投与されない。いくつかの実施形態では、該組成物は、静脈内（ＩＶ）に投与される。
また、本明細書では、疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物の使用が提供される。また、本明細書では、疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置するための医薬の製剤化のための、本明細書で提供される組成物の使用が提供される。また、本明細書では、疾患または病態を有する対象を処置するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物の使用が提供される。また、本明細書では、疾患または病態を有する対象を処置するための医薬の製剤化のための、本明細書で提供される組成物の使用が提供される。いくつかの実施形態では、疾患または病態は、がんである。
また、本明細書では、疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置する際に使用するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物が提供される。また、本明細書では、疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置する際に使用するための、本明細書で提供される組成物が提供される。また、本明細書では、疾患または病態を有する対象を処置する際に使用するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物が提供される。また、本明細書では、疾患または病態を有する対象を処置する際に使用するための、本明細書で提供される組成物が提供される。いくつかの実施形態では、疾患または病態は、がんである。
また、本明細書では、腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための医薬の製剤化のための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物の使用が提供される。また、本明細書では、腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための医薬の製剤化のための、本明細書で提供される組成物の使用が提供される。
本明細書では、腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させる際に使用するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物が提供される。また、本明細書では、腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させる際に使用するための、いずれかの本明細書で提供される組成物が提供される。
提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、本明細書で提供される使用または使用に向けた組成物は、該組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されないか、または施されることにならない対象において使用するためのものである。
提供される方法、本明細書で提供される使用または使用に向けた組成物のうちのいずれかのいくつかでは、疾患または病態は、がんである。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、疾患または病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、腫瘍細胞上に発現されるタンパク質に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、疾患または病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする導入遺伝子を含み、任意で該操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、腫瘍細胞上に発現されるタンパク質に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする導入遺伝子を含み、任意で該操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）の投与を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、可溶性Ｔ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体、または組換えＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７Ｌ、ＩＣＯＳ－Ｌ）の投与を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１）の投与を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化サイトカインは、ヒトサイトカインである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１）の投与を含み、任意で該Ｔ細胞活性化サイトカインは、ヒトサイトカインである。いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、Ｔ細胞活性化処置は、組換えＩＬ－７、任意でヒトＩＬ－７の投与を含む。いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、Ｔ細胞活性化処置は、組換えＩＬ－７の投与を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、組換えヒトＩＬ－７の投与を含む。いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、Ｔ細胞活性化処置は、リンパ球枯渇療法の施術、任意でシクロホスファミド及び／またはフルダラビンの投与を含む。いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、Ｔ細胞活性化処置は、リンパ球枯渇療法の施術を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、シクロホスファミド及び／またはフルダラビンの投与を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、シクロホスファミドまたはフルダラビンの投与を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、シクロホスファミドの投与を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、フルダラビンの投与を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、シクロホスファミド及びフルダラビンの投与を含む。
提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、対象は、レンチウイルスベクターと同時にＴ細胞活性化処置を施されない。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、対象は、レンチウイルスベクターとの接触前またはレンチウイルスベクターを含む組成物の投与前の１ヶ月以内にＴ細胞活性化処置を施されない。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、対象は、レンチウイルスベクターとの接触前またはレンチウイルスベクターを含む組成物の投与前の１週間、２週間、３週間、もしくは４週間以内、または１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、または約１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、任意で１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、または約１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、Ｔ細胞活性化処置を施されない。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、対象は、レンチウイルスベクターとの接触前またはレンチウイルスベクターを含む組成物の投与前の１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、または約１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、Ｔ細胞活性化処置を施されない。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、対象は、レンチウイルスベクターとの接触後またはレンチウイルスベクターを含む組成物の投与後の１ヶ月以内にＴ細胞活性化処置を施されない。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、対象は、レンチウイルスベクターとの接触後またはレンチウイルスベクターを含む組成物の投与後の１週間、２週間、３週間、もしくは４週間以内、または１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、または約１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、任意で１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、または約１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、Ｔ細胞活性化処置を施されない。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、対象は、レンチウイルスベクターとの接触後またはレンチウイルスベクターを含む組成物の投与後の１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、または約１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、Ｔ細胞活性化処置を施されない。
提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、レンチウイルスベクターは、Ｔ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードしない。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、レンチウイルスベクターは、膜結合型のＴ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードしない。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、レンチウイルスベクターは、表面上に提示されるＴ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードしない。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、レンチウイルスベクターは、表面上に提示されるＴ細胞活性化物質を含まず、例えば、この場合、Ｔ細胞活性化物質は、ＣＤ３抗体（例えば、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ）、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはＩＬ－２１）、またはＴ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７Ｌ、またはＩＣＯＳ－Ｌ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、ＣＤ３抗体（例えば、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ）、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはＩＬ－２１）、及びＴ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７Ｌ、またはＩＣＯＳ－Ｌ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、ＣＤ３及び／またはＣＤ２８に結合することができるポリペプチドである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、ＣＤ３に結合することができるポリペプチドである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、ＣＤ２８に結合することができるポリペプチドである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、リンパ増殖要素である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、ＳＴＡＴ３経路、ＳＴＡＴ４経路、及び／またはＪａｋ／ＳＴＡＴ５経路を活性化するサイトカインまたはサイトカイン受容体もしくはそのシグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、Ｔ細胞生存モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞生存モチーフは、ＩＬ－７受容体、ＩＬ－１５受容体、もしくはＣＤ２８、またはそれらの機能的部分である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）または低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈｒＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡは、ＳＴＡＴ５経路を刺激する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡは、ＳＯＣＳ経路を阻害する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡは、ＳＴＡＴ５経路を刺激し、ＳＯＣＳ経路を阻害する。
いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、阻害性ＲＮＡ分子を含まないか、またはそれをコードしない。いくつかの実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、Ｔ細胞によって発現される遺伝子から転写されたｍＲＮＡを標的とする。いくつかの実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の構成要素をコードする遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、遺伝子は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３ζ、ＳＯＣＳ１、ＳＭＡＤ２、ｍｉＲ－１５５の標的、ＩＦＮγ、ＴＲＡＩＬ２、及び／またはＡＢＣＧ１である。
いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、阻害性ＲＮＡ分子を含むか、またはそれをコードする。いくつかの実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、Ｔ細胞によって発現される遺伝子から転写されたｍＲＮＡを標的とする。いくつかの実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の構成要素をコードする遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、遺伝子は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３ζ、ＳＯＣＳ１、ＳＭＡＤ２、ｍｉＲ－１５５の標的、ＩＦＮγ、ＴＲＡＩＬ２、及び／またはＡＢＣＧ１である。
提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＣＤ８結合物質は、抗ＣＤ８抗体または抗原結合断片である。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、抗ＣＤ８抗体または抗原結合断片は、マウス、ウサギ、ヒト、またはヒト化のものである。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ８抗体または抗原結合断片は、単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ８抗体または抗原結合断片は、ラクダ科動物（例えば、ラマ、アルパカ、ラクダ）の抗体または抗原結合断片（例えば、ＶＨＨ）である。
提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８アルファ鎖及び／またはＣＤ８ベータ鎖に結合する。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８アルファ鎖に結合する。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８ベータ鎖に結合する。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８アルファ鎖及びＣＤ８ベータ鎖に結合する。
提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＣＤ８結合物質は、レンチウイルスベクターの表面上に露出している。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ウイルスエンベロープに組み込まれた膜貫通ドメインに融合されている。
いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ウイルス融合タンパク質でシュードタイプ化されている。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質またはその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、ＣｏｃａｌウイルスＧタンパク質またはその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、アルファウイルス融合タンパク質（例えば、シンドビスウイルス）またはその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、パラミクソウイルス科融合タンパク質（例えば、モルビリウイルスまたはヘニパウイルス）またはその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、モルビリウイルス融合タンパク質（例えば、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、イヌジステンパーウイルス、クジラ目モルビリウイルス、小反芻獣疫ウイルス、アザラシジステンパーウイルス、牛疫ウイルス）またはその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、ヘニパウイルス融合タンパク質（例えば、ニパウイルス、ヘンドラウイルス、スギウイルス、クマシウイルス、Ｍｏｊｉａｎｇウイルス）またはその機能的バリアントである。
提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ウイルス融合タンパク質は、その天然受容体への結合を低減するための１つまたは複数の改変を含む。
提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ウイルス融合タンパク質は、ＣＤ８結合物質に融合されている。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、ニパウイルス融合タンパク質であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、ニパウイルス融合タンパク質またはその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、ニパウイルスＦ糖タンパク質（ＮｉＶ－Ｆ）またはその生物学的に活性な部分及びニパウイルスＧ糖タンパク質（ＮｉＶ－Ｇ）またはその生物学的に活性な部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＮｉＶ－Ｇまたはその生物学的に活性な部分に融合されている。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、ニパウイルスＦ糖タンパク質（ＮｉＶ－Ｆ）またはその生物学的に活性な部分及びニパウイルスＧ糖タンパク質（ＮｉＶ－Ｇ）またはその生物学的に活性な部分を含み、該ＣＤ８結合物質は、ＮｉＶ－Ｇまたはその生物学的に活性な部分に融合されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ニパウイルスＧ糖タンパク質またはその生物学的に活性な部分のＣ末端に融合されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合タンパク質は、直接またはペプチドリンカーを介して融合されている。
いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。
いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの最大４０個の連続アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの５アミノ酸の切り詰めを有し、任意で該ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの５アミノ酸の切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの１０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で該ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４４に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの１０アミノ酸の切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４４に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号９、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの１５アミノ酸の切り詰めを有し、任意で該ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４５に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号９、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの１５アミノ酸の切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４５に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４５に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で該ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１３に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１３に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２５アミノ酸の切り詰めを有し、任意で該ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１４に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２５アミノ酸の切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１４に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で該ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４３に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３０アミノ酸の切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４３に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３４アミノ酸の切り詰めを有し、任意で該ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３４アミノ酸の切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３４アミノ酸の切り詰めを有し、任意で該ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３４アミノ酸の切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。
いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇ－タンパク質またはその生物学的に活性な部分は、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質である。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＮｉＶ－Ｇ－タンパク質またはその生物学的に活性な部分は、エフリンＢ２またはエフリンＢ３に対して低減された結合を示す変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質である。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、配列番号４に記載の番号付けを参照してＥ５０１Ａ、Ｗ５０４Ａ、Ｑ５３０Ａ、及びＥ５３３Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換に対応する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１７に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する。
提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質であるか、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４１、またはシグナル配列のない配列番号４０）のＣ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で該ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号２０に記載の配列、あるいは配列番号２０に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４１）のＣ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号２０に記載の配列、あるいは配列番号２０に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号２０に記載の配列を有する。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、（ｉ）野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４１）のＣ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰め、及び（ｉｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位における点変異を含み、任意で該ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１５に記載の配列、あるいは配列番号１５に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、（ｉ）野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４１）のＣ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰め、及び（ｉｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位における点変異を含む。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１５に記載の配列、あるいは配列番号１５に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１５に記載の配列を有する。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４１またはシグナル配列のない配列番号４０）のＣ末端におけるまたはその近くの２２アミノ酸の切り詰めを有し、任意で該ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１６もしくは２１に記載の配列、あるいは配列番号１６もしくは２１に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４１またはシグナル配列のない配列番号４０）のＣ末端におけるまたはその近くの２２アミノ酸の切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１６もしくは２１に記載の配列、あるいは配列番号１６もしくは２１に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１６に記載の配列、あるいは配列番号１６に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号１６に記載の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号２１に記載の配列、あるいは配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号２１に記載の配列を有する。
いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号２１に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質または生物学的に活性な部分は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列からなり、ＮｉＶ－Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、配列番号２１に記載の配列からなる。
提供される実施形態のうちのいずれかのいくつかでは、レンチウイルスベクターは、導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、ＲＮＡ干渉が可能なＲＮＡ配列（例えば、ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ）をコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、治療遺伝子、レポーター遺伝子、酵素をコードする遺伝子、プロドラッグ酵素をコードする遺伝子、アポトーシス誘導物質をコードする遺伝子、蛍光タンパク質をコードする遺伝子、プロドラッグ活性化酵素をコードする遺伝子、アポトーシスタンパク質をコードする遺伝子、アポトーシス酵素をコードする遺伝子、自殺タンパク質をコードする遺伝子、サイトカインをコードする遺伝子、抗免疫抑制タンパク質をコードする遺伝子、エピジェネティックモジュレーターをコードする遺伝子、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする遺伝子、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする遺伝子、形質導入された細胞の細胞表面を改変するタンパク質をコードする遺伝子、内在性ＴＣＲの発現を改変するタンパク質をコードする遺伝子、及び腫瘍促進シグナルから抗腫瘍シグナルへと変換するスイッチ受容体をコードする遺伝子からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、疾患または病態に関連する細胞または病変（例えば、腫瘍）によって発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードし、任意で該操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、疾患または病態に関連する細胞または病変（例えば、腫瘍）によって発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする。いくつかの実施形態では、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする。
いくつかの実施形態では、接触は、閉鎖型流体回路を使用した対象へのレンチウイルスベクターのエクスビボ投与によって実施される。いくつかの実施形態では、投与は、閉鎖型流体回路を使用した対象へのレンチウイルスベクターのエクスビボ投与によって実施される。いくつかの実施形態では、エクスビボ投与は、（ａ）対象から全血を得ることと、（ｂ）Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を含む白血球構成要素を含有する血液の画分を収集することと、（ｃ）Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を含む白血球構成要素を、レンチウイルスベクターを含む組成物と接触させることと、（ｄ）Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を含む接触させた白血球構成要素を対象に再注入することとを含み、ステップ（ａ）～（ｄ）は、閉鎖型流体回路においてインラインで行われる。いくつかの実施形態では、ステップ（ｃ）における接触は、２４時間以下、１８時間以下、１２時間以下、または６時間以下にわたる。
本願で参照される、特許文献、科学論文、及びデータベースを含む全ての刊行物は、あたかも個々の刊行物の各々が参照により個々に援用されたのと同じ範囲まで、それらの全体があらゆる目的で参照により援用される。本明細書に記載される定義が、参照により本明細書に援用される特許、出願、出願公開、及び他の刊行物に記載される定義と矛盾するかまたはその他の点で不一致である場合、本明細書に記載される定義が、参照により本明細書に援用される定義に優先する。
本明細書で使用される節の見出しは、構成目的のために過ぎず、記載される主題を限定するものと解釈されるべきではない。
ＣＤ３／ＣＤ２８複合体での事前のＴ細胞活性化ありでのヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）の注射、次いで１日後のＣＤ８－ＶＨＨ ＣＤ１９ＣＡＲ ＬＶの注射に次ぐ、Ｎａｌｍ６腫瘍の経時的な増殖を図示する。これらの結果は、ＣＤ８－ＣＤ１９ＣＡＲ ＬＶ及び活性化ｈＰＢＭＣの処置が、Ｎａｌｍ６腫瘍の経時的な増殖の強固な制御をもたらすことを示す。 非活性化ｈＰＢＭＣ（事前のＴ細胞活性化なし）の注射、次いで１日後のＣＤ８－ＶＨＨ ＣＤ１９ＣＡＲ ＬＶの注射に次ぐ、Ｎａｌｍ６腫瘍の経時的な増殖を図示する。これらの結果は、高用量ＣＤ８－ＶＨＨ ＣＤ１９ＣＡＲ ＬＶ及び非活性化ｈＰＢＭＣの処置が、Ｎａｌｍ６腫瘍の増殖の遅延しながらも強固な制御をもたらすことを示す。 ＰＢＭＣ対照処置動物（上プロット）及びＣＤ８フソソーム処置動物（下プロット）の両方におけるＦＡＣｓプロットの右上の象限に示されるような、ＣＤ８－ＶＨＨ ＣＤ１９ＣＡＲ ＬＶの注射に次ぐ脾臓、骨髄、または末梢血から回収された総計の生リンパ球中のＣＤ８＋ＣＤ１９ＣＡＲ＋細胞のパーセントを示す。 ＶＳＶ－Ｇでシュードタイプ化、または２種の異なるＣＤ８ ｓｃＦｖ（ＣＤ８ ｓｃＦｖ－１及びＣＤ８ ｓｃＦＶ－２）もしくはＣＤ８ ＶＨＨのうちの１つにより標的変更された（ｒｅｔａｒｇｅｔｅｄ）ニパウイルスフソゲンでシュードタイプ化されたＬＶによる形質導入に次ぐ、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体による活性化ありまたはなしでのヒトＰＢＭＣの形質導入効率（％ＣＡＲ）を図示する。 ＶＳＶ－Ｇでシュードタイプ化、または２種の異なるＣＤ８ ｓｃＦｖ（ＣＤ８ ｓｃＦｖ－１及びＣＤ８ ｓｃＦＶ－２）もしくはＣＤ８ ＶＨＨのうちの１つにより標的変更されたニパウイルスフソゲンでシュードタイプ化されたＬＶによる形質導入によって生成されたＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞による、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体による活性化ありまたはなしでのＰＢＭＣ中のＣＤ１９＋細胞の細胞殺傷を図示する。 ＣＤ８＋ Ｔ細胞を標的とする抗ＣＤ８結合タンパク質でシュードタイプ化された、ＣＤ２０ ＣＡＲ導入遺伝子を送達するためのレンチウイルスベクターの投与に次ぐ、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）モデルにおけるＢ細胞レベルを図示する。 Ａは、エクスビボ投薬研究にわたる種々の時点での腫瘍増殖を図示する。Ｂは、Ｄ１４にて末梢血中で検出されたＣＡＲ＋ ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを示す。 エクスビボ投薬のための例示的システムを図示する。
Ｉ．定義
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての専門用語、表記、ならびに他の技術用語及び科学用語または専門用語は、特許請求される発明の主題が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有することが意図される。場合によっては、一般的に理解される意味を有する用語が、明確にするために及び／または参照を容易にするために本明細書で定義され、かかる定義の本明細書への組み込みは、必ずしも、当該技術分野で一般に理解される意味に対する実質的な相違を表すように解釈されるべきではない。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語、頭字語、ならびに略語は、本発明が関連する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。別段指示されない限り、化学名及び生化学名に対する略語及び記号は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ命名法に従う。別途指示されない限り、全ての数値範囲は、範囲を画定する値ならびにそれらの間の全ての整数値を含む。
本明細書で使用されるとき、冠詞「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、冠詞の文法上の目的語の１つまたは１つよりも多く（すなわち少なくとも１つ）を指す。例として、「１つの（ａｎ）要素」とは、１つの要素または１つよりも多くの要素を意味する。
本明細書で使用されるとき、「約」という用語は、当業者によって理解され、それが使用される文脈に応じてある程度異なろう。本明細書で使用されるとき、量、時間の持続期間等の測定可能な値を指す場合の「約」とは、明記される値から±２０％または±１０％、より好ましくは±５％、さらにより好ましくは±１％、なおもより好ましくは±０．１％の変動を、かかる変動が開示される方法を行うために適切であるように包含することが意図される。
本明細書で使用されるとき、「フソソーム」とは、内腔または空洞を囲む両親媒性脂質の二重層、及び両親媒性脂質二重層と相互作用するフソゲンを含有する粒子を指す。複数の実施形態では、フソソームは、核酸を含む。いくつかの実施形態では、フソソームは、膜に囲まれた調製物である。いくつかの実施形態では、フソソームは、供給源細胞に由来する。
本明細書で使用されるとき、「フソソーム組成物」とは、１つまたは複数のフソソームを含む組成物を指す。
本明細書で使用されるとき、「フソゲン」とは、膜に囲まれた２つの内腔間の相互作用を作り出す作用物質または分子を指す。複数の実施形態では、フソゲンは、膜の融合を容易にする。他の実施形態では、フソゲンは、２つの内腔（例えば、レトロウイルスベクターの内腔及び標的細胞の細胞質）間の接続、例えば、細孔を作り出す。いくつかの実施形態では、フソゲンは、２つ以上のタンパク質の複合体を含み、例えば、ここでいずれのタンパク質も単独では膜融合活性を有しない。いくつかの実施形態では、フソゲンは、標的化ドメインを含む。
本明細書で使用されるとき、「標的変更されたフソゲン」とは、天然に存在する形態のフソゲンの一部ではない配列を有する標的化部分を含むフソゲンを指す。複数の実施形態では、フソゲンは、天然に存在する形態のフソゲンにおける標的化部分と比べて異なる標的化部分を含む。複数の実施形態では、天然に存在する形態のフソゲンは、標的化ドメインを欠いており、標的変更されたフソゲンは、天然に存在する形態のフソゲンには存在しない標的化部分を含む。複数の実施形態では、フソゲンは、標的化部分を含むように改変される。複数の実施形態では、フソゲンは、天然に存在する形態のフソゲンと比べて、標的化部分の外側、例えば、膜貫通ドメイン、膜融合活性ドメイン、または細胞質ドメインに１つまたは複数の配列変化を含む。
ヌクレオチドまたはアミノ酸位置が、配列表に記載の配列等の開示される配列におけるヌクレオチドまたはアミノ酸位置「に対応する」という詳述等の、タンパク質の位置を参照しての「～に対応する」という用語は、構造的配列アライメントに基づいてまたはＧＡＰアルゴリズム等の標準的なアライメントアルゴリズムを使用して開示される配列とアライメントしたときに特定されるヌクレオチドまたはアミノ酸位置を指す。例えば、類似の配列（例えば、断片または種のバリアント）の対応する残基が、構造的アライメント法による参照配列に対するアライメントによって決定され得る。配列をアライメントすることによって、当業者は、例えば、保存された同一のアミノ酸残基をガイドとして使用して、対応する残基を特定することができる。
本明細書で使用される「有効量」という用語は、処置されるべき症状及び／または病態を顕著にかつ好ましく変化させる（例えば、好ましい臨床反応をもたらす）のに十分に足りている薬学的組成物の量を意味する。薬学的組成物中での使用に向けた活性成分の有効量は、担当医の知識及び専門的技術をもって、処置されている特定の病態、病態の重症度、処置の継続期間、併用療法の性質、用いられている特定の活性成分（複数可）、利用される特定の薬学的に許容される賦形剤（複数可）及び／または担体（複数可）、ならびに同様の要因により様々であろう。
本明細書でウイルスベクターを参照して使用される「外因性物質」とは、対応する野生型の供給源細胞から作製される対応する野生型ウイルスまたはフソゲンに含まれることもそれにコードされることもない作用物質を指す。いくつかの実施形態では、外因性物質は、天然に存在するタンパク質と比べて（例えば、挿入、欠失、または置換によって）変化させられている配列を有するタンパク質または核酸等、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、外因性物質は、供給源細胞に天然に存在しない。いくつかの実施形態では、外因性物質は、供給源細胞に天然に存在するが、ウイルスにとっては外因性である。いくつかの実施形態では、外因性物質は、レシピエント細胞に天然に存在しない。いくつかの実施形態では、外因性物質は、レシピエント細胞に天然に存在するが、所望のレベルでまたは所望の時間に存在しない。いくつかの実施形態では、外因性物質は、ＲＮＡまたはタンパク質を含む。
本明細書で使用されるとき、「プロモーター」とは、遺伝子コード配列に作動可能に連結された場合に遺伝子の転写を駆動するシス調節ＤＮＡ配列を指す。プロモーターは、転写因子結合部位を含んでもよい。いくつかの実施形態では、プロモーターは、遺伝子に遠位の１つまたは複数のエンハンサーと共同して働く。
本明細書で使用されるとき、「作動可能に連結された」または「作動可能に関連付けられた」とは、少なくとも２つの配列の機能的連結への言及を含む。例えば、作動可能に連結されたとは、プロモーターと第２の配列との間の連結を含み、ここで、プロモーター配列が、第２の配列に対応するＤＮＡ配列の転写を開始し、媒介する。作動可能に関連付けられたとは、誘導要素または抑制要素とプロモーターとの間の連結を含み、ここで、誘導要素または抑制要素が、プロモーターの転写活性化因子として作用する。
本明細書で使用されるとき、「レトロウイルス核酸」とは、単独でまたはヘルパー細胞、ヘルパーウイルス、もしくはヘルパープラスミドと組み合わせて、レトロウイルスまたはレトロウイルスベクターへのパッケージングのための少なくとも最小配列の必要条件を含有する核酸を指す。いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、外因性物質、正の標的細胞特異的調節要素、非標的細胞特異的調節要素、または負のＴＣＳＲＥをさらに含むか、またはそれをコードする。いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、５’ＬＴＲ（例えば、組み込みを促進するため）、Ｕ３（例えば、ウイルスゲノムＲＮＡ転写を活性化するため）、Ｒ（例えば、Ｔａｔ結合領域）、Ｕ５、３’ＬＴＲ（例えば、組み込みを促進するため）、パッケージング部位（例えば、ｐｓｉ（プサイ）（Ψ））、ＲＲＥ（例えば、Ｒｅｖに結合し、核外搬出を促進するため）のうちの１つまたは複数（例えば、それらの全て）を含む。レトロウイルス核酸は、ＲＮＡ（例えば、ビリオンの一部である場合）またはＤＮＡ（例えば、供給源細胞に導入されている場合、またはレシピエント細胞における逆転写後）を含み得る。いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖのうちの１つまたは複数（例えば、それらの全て）を含むヘルパー細胞、ヘルパーウイルス、またはヘルパープラスミドを使用してパッケージングされる。
本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される」という用語は、化合物の生物学的活性または特性を抑止せず、かつ比較的無毒である担体または希釈剤等の材料を指し、すなわち、その材料は、望ましくない生物学的作用を引き起こすことも、組成物中に含まれる組成物の構成成分のいずれとも有害な様態で相互作用することもなく、個体に投与され得る。
本明細書で使用されるとき、「薬学的組成物」という用語は、本発明の少なくとも１つの化合物と、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、及び／または賦形剤等の他の化学成分との混合物を指す。薬学的組成物は、生物への化合物の投与を容易にする。静脈内、経口、エアロゾル、非経口、眼用、経肺、及び局所投与を含むがこれらに限定されない、化合物を投与する複数の技法が当該技術分野において存在する。
本明細書で使用されるとき、「処置する」、「処置すること」、または「処置」という用語は、疾患または障害を改善させること、例えば、疾患または障害の発症、例えば、障害の根本原因またはその臨床症状のうちの少なくとも１つを緩徐化または停止または低減することを指す。
本明細書で使用されるとき、「有効量」及び「薬学的有効量」という用語は、無毒であるが、所望の生物学的結果をもたらすのに十分な薬剤または薬物の量を指す。その結果は、疾患もしくは障害の徴候、症状、もしくは原因の低減及び／または緩和、インビトロもしくはインビボ系（生存生物を含む）の画像化もしくは監視、または生体系の任意の他の所望の変化であり得る。任意の個々の症例における適切な有効量は、通例の実験を使用して当業者によって決定され得る。
ＩＩ．方法
いくつかの態様では、休止または非活性化Ｔ細胞は、ＣＤ８結合物質を含むウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクター）と接触させられる。接触は、インビトロで（例えば、健常ドナーまたは細胞療法を必要とするドナーに由来するＴ細胞を用いて）、または対象へのウイルスベクターの投与によってインビボで行われてもよい。
いくつかの実施形態では、休止または非活性化Ｔ細胞は、１つもしくは複数のＴ細胞刺激分子（例えば、抗ＣＤ－３抗体）、１つもしくは複数のＴ細胞共刺激分子、及び／または１つもしくは複数のＴ細胞活性化サイトカインで処理されない。いくつかの実施形態では、休止または非活性化Ｔ細胞は、１つもしくは複数のＴ細胞刺激分子（例えば、抗ＣＤ－３抗体）、１つもしくは複数のＴ細胞共刺激分子、及び／または１つもしくは複数のＴ細胞活性化サイトカインのうちのいずれでも処理されない。
追加の態様では、本明細書は、対象への抗ＣＤ８結合物質を含むウイルスベクターの投与方法を含み、該対象は、Ｔ細胞活性化処置を施されないか、または施されていない。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、１つもしくは複数のＴ細胞刺激分子（例えば、抗ＣＤ－３抗体）、１つもしくは複数のＴ細胞共刺激分子、及び／または１つもしくは複数のＴ細胞活性化サイトカインを含む。いくつかの実施形態では、対象は、１つもしくは複数のＴ細胞刺激分子（例えば、抗ＣＤ－３抗体）、１つもしくは複数のＴ細胞共刺激分子、及び／または１つもしくは複数のＴ細胞活性化サイトカインのうちのいずれも施されないか、または施されていない。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、リンパ球枯渇である。いくつかの実施形態では、対象は、リンパ球枯渇療法を施されないか、または施されていない。ある特定の実施形態では、対象は、ウイルスベクターの投与前または後の１ヶ月以内にＴ細胞活性化処置を施されないか、または施されていない。いくつかの実施形態では、対象は、ウイルスベクターの投与前の１ヶ月以内、例えば、ウイルスベクターの投与前の４週間、３週間、２週間、もしくは１週間以内、または４週間、３週間、２週間、もしくは１週間、または約４週間、３週間、２週間、もしくは１週間、例えば、１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、もしくは７日間、または約１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、もしくは７日間、Ｔ細胞活性化処置を施されないか、または施されていない。いくつかの実施形態では、対象は、ウイルスベクターの投与後の１ヶ月以内、例えば、ウイルスベクターの投与後の４週間、３週間、２週間、もしくは１週間以内、または４週間、３週間、２週間、もしくは１週間、または約４週間、３週間、２週間、もしくは１週間、例えば、１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、もしくは７日間、または約１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、もしくは７日間、Ｔ細胞活性化処置を施されない。
いくつかの態様では、該ウイルスベクターは、Ｔ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードしない。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、膜結合型のＴ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードしない。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、表面上に提示されるＴ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードしない。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、抗ＣＤ３抗体（例えば、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ）、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはＩＬ－２１）、またはＴ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７Ｌ、またはＩＣＯＳ－Ｌである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、ＣＤ３に結合することができるポリペプチド、ＣＤ２８に結合することができるポリペプチド、またはその両方である。いくつかの態様では、該ウイルスベクターは、１つもしくは複数のＴ細胞刺激分子（例えば、抗ＣＤ－３抗体）、１つもしくは複数のＴ細胞共刺激分子、及び／または１つもしくは複数のＴ細胞活性化サイトカインを含まない。
抗ＣＤ３抗体の使用は、Ｔ細胞の活性化に関して周知されている。抗ＣＤ３抗体は、任意の種、例えば、マウス、ウサギ、ヒト、ヒト化、またはラクダ科動物のものであり得る。例示的な抗体には、ＯＫＴ３、ＣＲＩＳ－７、Ｉ２Ｃ（ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に含まれる抗ＣＤ３抗体）、ならびにブリナツモマブ、カツマキソマブ、フロテツズマブ（ｆｏｔｅｔｕｚｕｍａｂ）、テクリスタマブ、エルツマキソマブ、エプコリタマブ、タルクエタマブ、オドロネクスタマブ、シビサタマブ（ｃｉｂｉｓｔａｍａｂ）、オブリンダタマブ（ｏｂｒｉｎｄａｔａｍａｂ）、チデュタマブ、ドゥボルツキシズマブ、ソリトマブ、エルビクスタマブ、パブルタマブ、テポジタマブ（ｔｅｐｏｄｉｔａｍａｂ）、ビベコタマブ、プラモタマブ、グロフィタマブ、エテブリタマブ（ｅｔｅｖｒｉｔａｍａｂ）、及びタルラタマブ等の承認され、臨床的に研究された分子の抗ＣＤ３ドメインが含まれる。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＴ細胞共刺激分子には、ＣＤ２８リガンド（例えば、ＣＤ８０及びＣＤ８６）；ＣＤ２８．２等のＣＤ２８に結合する抗体、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に含まれる抗ＣＤ２８抗体、ならびにＵＳ２０２０／０１９９２３４、ＵＳ２０２０／０２２３９２５、ＵＳ２０２０／０１８１２６０、ＵＳ２０２０／０２３９５７６、ＵＳ２０２０／０１９９２３３、ＵＳ２０１９／０３８９９５１、ＵＳ２０２０／０２９９３８８、ＵＳ２０２０／０３９９３６９、及びＵＳ２０２０／０１４０５５２に開示される抗ＣＤ２８ドメイン；ＣＤ１３７リガンド（ＣＤ１３７Ｌ）；ウレルマブ及びウトミルマブ等の抗ＣＤ１３７抗体；ＩＣＯＳリガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）；ならびにフェラジリマブ、ボプラテリマブ、及びイズラリマブの抗ＩＣＯＳドメイン等の抗ＩＣＯＳ抗体が含まれる。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＴ細胞活性化サイトカインには、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、インターフェロン（例えば、インターフェロン－ガンマ）、ならびにそれらの機能的バリアント及び改変バージョンが含まれる。
いくつかの態様では、該ウイルスベクターは、Ｔ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードしない。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、膜結合型のＴ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードしない。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、表面上に提示されるＴ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードしない。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化物質は、リンパ増殖要素である。いくつかの実施形態では、リンパ増殖要素は、ＳＴＡＴ３経路、ＳＴＡＴ４経路、及び／またはＪａｋ／ＳＴＡＴ５経路を活性化するサイトカインまたはサイトカイン受容体もしくはそのシグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、リンパ増殖要素は、ＩＬ－７受容体、ＩＬ－１５受容体、もしくはＣＤ２８等のＴ細胞生存モチーフ、またはそれらの機能的部分である。いくつかの実施形態では、リンパ増殖要素は、ＳＴＡＴ５経路を刺激するか、ＳＯＣＳ経路を阻害するか、またはその両方である、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）または低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である。
いくつかの実施形態では、該ベクターは、阻害性ＲＮＡ分子を含まないか、またはそれをコードしない。いくつかの実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、Ｔ細胞によって発現される遺伝子、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の構成要素をコードする遺伝子、またはその両方から転写されたｍＲＮＡを標的とする。いくつかの実施形態では、遺伝子は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３ζ、ＳＯＣＳ１、ＳＭＡＤ２、ｍｉＲ－１５５の標的、ＩＦＮγ、ＴＲＡＩＬ２、及び／またはＡＢＣＧ１である。
いくつかの実施形態では、該ベクターは、阻害性ＲＮＡ分子を含むか、またはそれをコードする。いくつかの実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、Ｔ細胞によって発現される遺伝子、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の構成要素をコードする遺伝子、またはその両方から転写されたｍＲＮＡを標的とする。いくつかの実施形態では、遺伝子は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３ζ、ＳＯＣＳ１、ＳＭＡＤ２、ｍｉＲ－１５５の標的、ＩＦＮγ、ＴＲＡＩＬ２、及び／またはＡＢＣＧ１である。
いくつかの実施形態では、該方法は、リンパ球枯渇療法を対象に施す工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化処置は、対象へのリンパ球枯渇療法の施術を含む。リンパ球枯渇は、対象におけるリンパ球及びＴ細胞を破壊する種々の処置によって誘導されてもよい。例えば、リンパ球枯渇は、フルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン、及びそれらの組み合わせ等の骨髄破壊的化学療法を含んでもよい。リンパ球枯渇はまた、対象の照射（例えば、全身照射）によって誘導されてもよい。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇療法は、シクロホスファミド及び／またはフルダラビンを含む。いくつかの実施形態では、該方法は、シクロホスファミド及び／またはフルダラビンを投与する工程をさらに含む。
ＩＩＩ．ウイルスベクター
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるウイルスベクターは、レトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。いくつかの実施形態では、レトロウイルスベクター、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）、マウス胚性幹細胞ウイルス（ＭＥＳＶ）、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、脾限局巣形成ウイルス（ＳＦＦＶ）、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来するレトロウイルスベクターは、長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）を有する。ほとんどのレトロウイルスベクターは、マウスレトロウイルスに由来する。いくつかの実施形態では、レトロウイルスは、任意のトリまたは哺乳類細胞源に由来するものを含む。レトロウイルスは典型的には、両種性であり、つまり、それらはヒトを含めた数種の宿主細胞に感染することができる。一実施形態では、発現される遺伝子は、レトロウイルスのｇａｇ、ｐｏｌ、及び／またはｅｎｖ配列を置き換える。いくつかの例示的なレトロウイルスシステムが記載されている（例えば、米国特許第５，２１９，７４０号、同第６，２０７，４５３号、同第５，２１９，７４０号）。
レンチウイルス形質導入の方法は既知である。例示的な方法は、例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５（９）：６８９－７０１，２０１２、Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１０１：１６３７－１６４４，２００３、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．５０６：９７－１１４，２００９、及びＣａｖａｌｉｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１０２（２）：４９７－５０５，２００３に記載される。
いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、５’プロモーター（例えば、パッケージングされたＲＮＡ全体の発現を制御するため）、５’ＬＴＲ（例えば、Ｒ（ポリアデニル化尾部シグナル）及び／またはプライマー活性化シグナルを含むＵ５を含む）、プライマー結合部位、ｐｓｉパッケージングシグナル、核外搬出のためのＲＲＥ要素、導入遺伝子発現を制御するための導入遺伝子の直接上流のプロモーター、導入遺伝子（または他の外因性物質要素）、ポリプリントラクト、及び３’ＬＴＲ（例えば、変異したＵ３、Ｒ、及びＵ５を含む）のうちの１つまたは複数（例えば、それらの全て）を含む。いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、ｃＰＰＴ、ＷＰＲＥ、及び／またはインスレーター要素のうちの１つまたは複数をさらに含む。
レトロウイルスは典型的には、そのゲノムＲＮＡの線状二本鎖ＤＮＡコピーへの逆転写によって複製し、その後、そのゲノムＤＮＡを宿主ゲノムに共有結合性で組み込む。特定の実施形態における使用に好適な例示的なレトロウイルスには、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍ－ＭｕＬＶ）、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、スプーマウイルス、フレンドマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ））、ならびにレンチウイルスが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、レトロウイルスは、ガンマレトロウイルスである。いくつかの実施形態では、レトロウイルスは、イプシロンレトロウイルスである。いくつかの実施形態では、レトロウイルスは、アルファレトロウイルスである。いくつかの実施形態では、レトロウイルスは、ベータレトロウイルスである。いくつかの実施形態では、レトロウイルスは、デルタレトロウイルスである。いくつかの実施形態では、レトロウイルスは、レンチウイルスである。いくつかの実施形態では、レトロウイルスは、スプーマレトロウイルスである。いくつかの実施形態では、レトロウイルスは、内在性レトロウイルスである。
例示的なレンチウイルスには、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス；ＨＩＶ１型及びＨＩＶ２型を含む）、ビスナ・マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス、ヤギ関節炎－脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＨＩＶベースのベクター骨格（すなわち、ＨＩＶシス作用性配列要素）が使用される。いくつかの実施形態では、ウイルス粒子は、レンチウイルスに由来する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクター粒子は、ヒト免疫不全ウイルス－１（ＨＩＶ－１）である。
いくつかの実施形態では、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクター等のウイルスベクターは、ｇａｇポリタンパク質、ポリメラーゼ（例えば、ｐｏｌ）、インテグラーゼ（例えば、機能的または機能不全バリアント）、プロテアーゼ、及びフソゲンのうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、該ベクターは、ｒｅｖをさらに含む。いくつかの実施形態では、前述のタンパク質のうちの１つまたは複数は、レトロウイルスゲノムにおいてコードされ、いくつかの実施形態では、前述のタンパク質のうちの１つまたは複数は、例えば、ヘルパー細胞、ヘルパーウイルス、またはヘルパープラスミドによってトランスに提供される。いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、以下の核酸配列、すなわち５’ＬＴＲ（例えば、Ｕ５を含み、機能的Ｕ３ドメインを欠いている）、Ｐｓｉパッケージング要素（Ｐｓｉ）、ペイロード遺伝子に作動的に連結された中央ポリプリントラクト（Ｃｅｎｔｒａｌ ｐｏｌｙｐｕｒｉｎｅ ｔｒａｃｔ）（ｃＰＰＴ）プロモーター、ペイロード遺伝子（任意でオープンリーディングフレームの前にイントロンを含む）、ポリＡ尾部配列、ＷＰＲＥ、及び３’ＬＴＲ（例えば、Ｕ５を含み、機能的Ｕ３を欠いている）のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、非レトロウイルス核酸は、１つまたは複数のインスレーター要素をさらに含む。いくつかの実施形態では、認識部位は、ポリＡ尾部配列とＷＰＲＥとの間に位置する。
１．トランスファーベクター
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、核酸分子の移入、または細胞のゲノムへの組み込みもしくは核酸移入を媒介するウイルス粒子への組み込みを典型的に容易にする、ウイルス由来核酸要素を含む核酸分子（例えば、トランスファープラスミド）を含む。いくつかの態様では、ベクター粒子は典型的には、種々のウイルス構成要素、及びときにはまた核酸（複数可）に加えて宿主細胞構成要素も含むことになる。いくつかの実施形態では、ベクターは、例えば、核酸を細胞に、または移入された核酸（例えば、裸のｍＲＮＡとして）に移入することができるウイルスまたはウイルス粒子を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスベクター及びトランスファープラスミドは、主としてウイルスに由来する構造的及び／または機能的遺伝要素を含む。レトロウイルスベクターは、主としてレトロウイルスに由来する構造的及び機能的遺伝要素またはそれらの一部分を含有するウイルスベクターまたはプラスミドを含み得る。レンチウイルスベクターは、主としてレンチウイルスに由来する、ＬＴＲを含めた構造的及び機能的遺伝要素またはそれらの一部分を含有するウイルスベクターまたはプラスミドを含み得る。
複数の実施形態では、レンチウイルスベクター（例えば、レンチウイルス発現ベクター）は、レンチウイルストランスファープラスミド（例えば、裸のＤＮＡとして）または感染性レンチウイルス粒子を含んでもよい。クローニング部位、プロモーター、調節要素、異種核酸等といった要素に関して、これらの要素の配列は、レンチウイルス粒子においてはＲＮＡ形態で存在し得、ＤＮＡプラスミドにおいてはＤＮＡ形態で存在し得ることを理解されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のベクターにおいて、複製に寄与するかまたはそれに必須である１つまたは複数のタンパク質コード領域の少なくとも一部は、対応する野生型ウイルスと比較して存在しない場合がある。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、複製欠損である。いくつかの実施形態では、該ベクターは、標的の非分裂宿主細胞に形質導入する及び／またはそのゲノムを宿主ゲノムに組み込むことができる。
いくつかの実施形態では、野生型レトロウイルスゲノムの構造は、多くの場合、５’長鎖末端反復（ＬＴＲ）及び３’ＬＴＲを含み、それらの間または内部には、ゲノムがパッケージングされることを可能にするパッケージングシグナル、プライマー結合部位、宿主細胞ゲノムへの組み込みを可能にするための組み込み部位、ならびにウイルス粒子の組み立てを促進するパッケージング構成要素をコードするｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ遺伝子が位置する。より複雑なレトロウイルスは、ＨＩＶにおけるｒｅｖ及びＲＲＥ配列等、追加の特徴を有し、これらは組み込まれたプロウイルスのＲＮＡ転写物が、感染した標的細胞の核から細胞質に効率的に搬出されることを可能にする。プロウイルスにおいて、ウイルス遺伝子の両端には、長鎖末端反復（ＬＴＲ）と呼ばれる領域が位置する。いくつかの実施形態では、ＬＴＲは、プロウイルスの組み込み及び転写に関与する。いくつかの実施形態では、ＬＴＲは、エンハンサー－プロモーター配列として機能し、ウイルス遺伝子の発現を制御することができる。いくつかの実施形態では、レトロウイルスＲＮＡのカプシド形成は、ウイルスゲノムの５’末端に位置するｐｓｉ配列により起こる。
いくつかの実施形態では、ＬＴＲは、Ｕ３、Ｒ、及びＵ５と呼ばれる３つの要素に分類され得る類似の配列である。Ｕ３とは、ＲＮＡの３’末端に固有の配列に由来する。Ｒとは、ＲＮＡの両端で反復する配列に由来し、Ｕ５とは、ＲＮＡの５’末端に固有の配列に由来する。これら３つの要素のサイズは、異なるレトロウイルスの間で大幅に異なり得る。
いくつかの実施形態では、ウイルスゲノムに関して、転写開始の部位は典型的には、一方のＬＴＲにおけるＵ３とＲとの間の境界にあり、ポリ（Ａ）付加（終結）の部位は、他方のＬＴＲにおけるＲ及びＵ５との間の境界にある。Ｕ３は、細胞の及び場合によってはウイルスの転写活性化因子タンパク質に対して反応性のプロモーター及び複数のエンハンサー配列を含む、プロウイルスの転写制御要素のほとんどを含有する。いくつかの実施形態では、レトロウイルスは、遺伝子発現の調節に関与するタンパク質をコードする以下の遺伝子、すなわちｔａｔ、ｒｅｖ、ｔａｘ、及びｒｅｘのうちのいずれか１つまたは複数を含む。
いくつかの実施形態では、構造遺伝子ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ、ｇａｇは、ウイルスの内部構造タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、Ｇａｇタンパク質は、成熟タンパク質ＭＡ（マトリックス）、ＣＡ（カプシド）、及びＮＣ（ヌクレオカプシド）へとタンパク質分解性でプロセシングされる。いくつかの実施形態では、ｐｏｌ遺伝子は、逆転写酵素（ＲＴ）をコードし、これは、ゲノムの複製を媒介する、ＤＮＡポリメラーゼ、関連するＲＮａｓｅ Ｈ及びインテグラーゼ（ＩＮ）を含有する。いくつかの実施形態では、ｅｎｖ遺伝子は、細胞受容体タンパク質と特異的に相互作用する複合体を形成する、ビリオンの表面（ＳＵ）糖タンパク質及び膜貫通型（ＴＭ）タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、この相互作用は、ウイルス膜と細胞膜との融合によって感染を促進する。
いくつかの実施形態では、複製欠損レトロウイルスベクターゲノムのｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖは、存在しないか、機能的でない場合がある。いくつかの実施形態では、ＲＮＡの両端のＲ領域は典型的には、反復配列である。いくつかの実施形態では、Ｕ５及びＵ３は、それぞれＲＮＡゲノムの５’末端及び３’末端における固有の配列を表す。
いくつかの実施形態では、レトロウイルスはまた、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ以外のタンパク質をコードする追加の遺伝子を含有し得る。追加の遺伝子の例としては（ＨＩＶにおける）、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｘ、ｖｐｕ、ｔａｔ、ｒｅｖ、及びｎｅｆのうちの１つまたは複数が挙げられる。ＥＩＡＶは、（とりわけ）追加の遺伝子Ｓ２を有する。いくつかの実施形態では、追加の遺伝子によってコードされるタンパク質は、種々の機能を果たし、これらのうちのいくつかは、細胞タンパク質によって提供される機能の重複であり得る。ＥＩＡＶにおいて、例えば、ｔａｔは、ウイルスＬＴＲの転写活性化因子として作用する（Ｄｅｒｓｅ ａｎｄ Ｎｅｗｂｏｌｄ １９９３ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １９４：５３０－６、Ｍａｕｒｙ ｅｔ ａｌ．１９９４ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２００：６３２－４２）。それは、ＴＡＲと称される安定なステム－ループＲＮＡ二次構造に結合する。Ｒｅｖは、ｒｅｖ応答要素（ＲＲＥ）によりウイルス遺伝子の発現を調節し、調整する（Ｍａｒｔａｒａｎｏ ｅｔ ａｌ．１９９４ Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：３１０２－１１）。
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ、逆転写酵素、及びインテグラーゼに加えて、非霊長類レンチウイルスは、ｄＵＴＰａｓｅをコードする第４のｐｏｌ遺伝子産物を含有する。いくつかの実施形態では、これは、これらのレンチウイルスがある特定の非分裂細胞種またはゆっくり分裂する細胞種に感染する能力において役割を果たす。
複数の実施形態では、組換えレンチウイルスベクター（ＲＬＶ）は、パッケージング構成要素の存在下で、標的細胞に感染することができるウイルス粒子にＲＮＡゲノムをパッケージングすることを可能にするのに十分なレトロウイルスの遺伝情報を有するベクターである。いくつかの実施形態では、標的細胞の感染は、逆転写及び標的細胞ゲノムへの組み込みを含み得る。いくつかの実施形態では、ＲＬＶは典型的には、ベクターによって標的細胞に送達されることになる非ウイルスコード配列を担持する。いくつかの実施形態では、ＲＬＶは、標的細胞内で非依存的に複製して感染性レトロウイルス粒子を産生することはできない。いくつかの実施形態では、ＲＬＶは、複製に関与する機能的ｇａｇ－ｐｏｌ及び／またはｅｎｖ遺伝子及び／または他の遺伝子を欠いている。いくつかの実施形態では、該ベクターは、例えば、ＰＣＴ特許出願第ＷＯ９９／１５６８３号（同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されるような、スプリット－イントロンベクターとして構成され得る。
いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、最小ウイルスゲノムを含み、例えば、ＷＯ９８／１７８１５（同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されるように、例えば、ウイルスベクターは、標的宿主細胞に感染し、形質導入し、それに目的のヌクレオチド配列を送達するために必要とされる機能性を提供するために、非必須要素を除去し、かつ必須要素を保持するように操作されている。
いくつかの実施形態では、最小レンチウイルスゲノムは、例えば、（５’）Ｒ－Ｕ５－１つまたは複数の第１のヌクレオチド配列－Ｕ３－Ｒ（３’）を含んでもよい。いくつかの実施形態では、供給源細胞内でレンチウイルスゲノムを生産するために使用されるプラスミドベクターはまた、供給源細胞においてゲノムの転写を導くためのレンチウイルスゲノムに作動可能に連結された転写調節制御配列も含み得る。いくつかの実施形態では、調節配列は、転写されたレトロウイルス配列に関連する天然配列、例えば、５’Ｕ３領域を含んでもよいし、またはそれらは、別のウイルスプロモーター、例えばＣＭＶプロモーター等の異種プロモーターを含んでもよい。いくつかの実施形態では、レンチウイルスゲノムは、効率的なウイルス産生を促進するための追加の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＶの場合、ｒｅｖ及びＲＲＥ配列もまた含まれてもよい。いくつかの実施形態では、代替としてまたは組み合わせて、コドン最適化が使用されてもよく、例えば、ＷＯ０１／７９５１８（同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されるように、例えば、外因性物質をコードする遺伝子がコドン最適化されてもよい。いくつかの実施形態では、ｒｅｖ／ＲＲＥシステムと類似のまたは同じ機能を果たす代替の配列もまた使用されてもよい。いくつかの実施形態では、ｒｅｖ／ＲＲＥシステムの機能的アナログは、Ｍａｓｏｎ Ｐｆｉｚｅｒサルウイルスに見られる。いくつかの実施形態では、これはＣＴＥとして知られ、感染細胞における因子と相互作用すると考えられるＲＲＥ型配列をゲノムに含む。この細胞因子は、ｒｅｖアナログと見なされ得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｖ／ＲＲＥシステムの代替物としてＣＴＥが使用されてもよい。いくつかの実施形態では、ＨＴＬＶ－ＩのＲｅｘタンパク質は、ＨＩＶ－ＩのＲｅｖタンパク質を機能的に置き換えることができる。Ｒｅｖ及びＲｅｘは、ＩＲＥ－ＢＰに対して類似の効果を有する。
いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸（例えば、レンチウイルス核酸、例えば、霊長類または非霊長類レンチウイルス核酸）は、（１）ｇａｇ遺伝子の欠失を含む（ｇａｇにおけるこの欠失は、ｇａｇコード配列のおよそヌクレオチド３５０または３５４の下流の１つまたは複数のヌクレオチドを除去する）、（２）レトロウイルス核酸に不在の１つまたは複数のアクセサリー遺伝子を有する、（３）ｔａｔ遺伝子を欠いているが、５’ＬＴＲの末端とｇａｇのＡＴＧとの間にリーダー配列を含む、ならびに（４）（１）、（２）、及び（３）の組み合わせである。ある実施形態では、レンチウイルスベクターは、特徴（１）及び（２）及び（３）の全てを含む。この戦略は、ＷＯ９９／３２６４６により詳細に記載され、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
いくつかの実施形態では、霊長類レンチウイルスの最小システムは、ベクター生産のためにも、分裂細胞及び非分裂細胞の形質導入のためにも、ＨＩＶ／ＳＩＶの追加の遺伝子ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｘ、ｖｐｕ、ｔａｔ、ｒｅｖ、及びｎｅｆのいずれも必要としない。いくつかの実施形態では、ＥＩＡＶの最小ベクターシステムは、ベクター生産のためにも、分裂細胞及び非分裂細胞の形質導入のためにも、Ｓ２を必要としない。
いくつかの実施形態では、追加の遺伝子の欠失により、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ）感染症における疾患に関連する遺伝子を伴わずにベクターが生産されることが可能となり得る。いくつかの実施形態では、ｔａｔは、疾患に関連する。いくつかの実施形態では、追加の遺伝子の欠失により、ベクターがより多くの異種ＤＮＡをパッケージングすることが可能となる。いくつかの実施形態では、Ｓ２等の機能が知られていない遺伝子を省略し、こうして望まれない効果を引き起こすリスクを低減してもよい。最小レンチウイルスベクターの例は、ＷＯ９９／３２６４６及びＷＯ９８／１７８１５に開示される。
いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、少なくともｔａｔ及びＳ２（それがＥＩＡＶベクターシステムである場合）が欠けており、ことによるとｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｘ、ｖｐｕ、及びｎｅｆもまた欠けている。いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸はまた、ｒｅｖ、ＲＲＥ、またはその両方が欠けている。
いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、ｖｐｘを含む。Ｖｐｘポリペプチドは、細胞質における遊離ｄＮＴＰを分解するＳＡＭＨＤ１制限因子に結合し、その分解を誘導する。いくつかの実施形態では、細胞質における遊離ｄＮＴＰの濃度は、ＶｐｘがＳＡＭＨＤ１を分解し、逆転写活性が増加するにつれて増加し、こうしてレトロウイルスゲノムの逆転写及び標的細胞ゲノムへの組み込みを容易にする。
いくつかの実施形態では、異なる細胞は、それらの特定のコドンの使用頻度が異なる。いくつかの実施形態では、このコドンバイアスは、細胞種における特定のｔＲＮＡの相対存在量におけるバイアスに対応する。いくつかの実施形態では、配列におけるコドンを、対応するｔＲＮＡの相対存在量に一致するように適合させるように変化させることによって、発現を増加させることが可能である。いくつかの実施形態では、対応するｔＲＮＡが特定の細胞種において希少であることが知られるコドンを故意に選択することによって、発現を減少させることが可能である。いくつかの実施形態では、追加の程度の翻訳制御が利用可能である。コドン最適化の追加の説明は、例えば、ＷＯ９９／４１３９７に見出され、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
いくつかの実施形態では、ＨＩＶ及び他のレンチウイルスを含めたウイルスは、多数の希少なコドンを使用し、これらを一般的に使用される哺乳類コドンに対応するように変更することによって、哺乳類プロデューサー細胞におけるパッケージング構成要素の増加した発現が達成され得る。
いくつかの実施形態では、コドン最適化は、いくつかの他の利点を有する。いくつかの実施形態では、それらの配列の変化のため、パッケージング構成要素をコードするヌクレオチド配列は、ＲＮＡ不安定性配列（ＩＮＳ）がそれらから低減または排除され得る。同時に、パッケージング構成要素に対するアミノ酸配列のコード配列は保持され、それにより、その配列によってコードされるウイルス構成要素は同じままであるか、またはパッケージング構成要素の機能が損なわれないように少なくとも十分に類似している。いくつかの実施形態では、コドン最適化はまた、搬出のためのＲｅｖ／ＲＲＥの必要条件を克服して、最適化された配列をＲｅｖ非依存性にする。いくつかの実施形態では、コドン最適化はまた、ベクターシステム内の異なる構築物間（例えば、ｇａｇ－ｐｏｌ及びｅｎｖオープンリーディングフレームにおける重複領域間）の相同組換えを低減する。いくつかの実施形態では、コドン最適化は、ウイルス価の増加及び／または改善された安全性につながる。
いくつかの実施形態では、ＩＮＳに関するコドンのみが、コドン最適化される。他の実施形態では、配列は、ｇａｇ－ｐｏｌのフレームシフト部位を含む配列を除いて、それらの全体がコドン最適化される。
ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子は、ｇａｇ－ｐｏｌタンパク質をコードする２つの重複するリーディングフレームを含む。両方のタンパク質の発現は、翻訳中のフレームシフトに依存する。このフレームシフトは、翻訳中のリボソーム「滑り」の結果として起こる。この滑りは、少なくとも部分的に、リボソームを失速させるＲＮＡ二次構造によって引き起こされると考えられる。かかる二次構造は、ｇａｇ－ｐｏｌ遺伝子においてフレームシフト部位の下流に存在する。ＨＩＶの場合、重複領域は、ｇａｇの先頭の下流のヌクレオチド１２２２（ここで、ヌクレオチド１は、ｇａｇ ＡＴＧのＡである）からｇａｇの末端（ｎｔ１５０３）まで延びる。結果として、フレームシフト部位及び２つのリーディングフレームの重複領域にまたがる２８１ｂｐ断片は、好ましくは、コドン最適化されない。いくつかの実施形態では、この断片を保持することにより、ｇａｇ－ｐｏｌタンパク質のより効率的な発現が可能となる。ＥＩＡＶの場合、重複の先頭は、ｎｔ１２６２（ここで、ヌクレオチド１は、ｇａｇ ＡＴＧのＡである）にある。重複の末端は、ｎｔ１４６１にある。フレームシフト部位及びｇａｇ－ｐｏｌ重複が保存されることを確実にするために、野生型配列がｎｔ１１５６から１４６５まで保持されてもよい。
いくつかの実施形態では、例えば、好都合な制限部位を受け入れるために、最適なコドン使用頻度からの誘導が行われてもよく、保存的アミノ酸変更がｇａｇ－ｐｏｌタンパク質に導入されてもよい。
いくつかの実施形態では、コドン最適化は、哺乳類システムにおいてコドン使用頻度の低いコドンに基づく。第３の塩基、ときには第２及び第３の塩基を変更してもよい。
いくつかの実施形態では、遺伝コードの縮重の性質に起因して、多数のｇａｇ－ｐｏｌ配列が当業者により達成され得ることが理解されよう。また、コドン最適化されたｇａｇ－ｐｏｌ配列を生成するための開始点として使用され得る、記載される多くのレトロウイルスバリアントが存在する。レンチウイルスゲノムは、非常に可変性であり得る。例えば、依然として機能的であるＨＩＶ－Ｉの多くの準種が存在する。これはＥＩＡＶにも当てはまる。これらのバリアントを使用して、形質導入プロセスの特定の部分を増強してもよい。ＨＩＶ－Ｉバリアントの例は、Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙによって維持されるＨＩＶデータベースに見出され得る。ＥＩＡＶクローンの詳細は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって維持されるＮＣＢＩデータベースに見出され得る。
いくつかの実施形態では、コドン最適化されたｇａｇ－ｐｏｌ配列のための戦略は、任意のレトロウイルス、例えば、ＥＩＡＶ、ＦＩＶ、ＢＩＶ、ＣＡＥＶ、ＶＭＲ、ＳＩＶ、ＨＩＶ－１、及びＨＩＶ－２に関連して使用することができる。さらに、この方法を使用して、ＨＴＬＶ－Ｉ、ＨＴＬＶ－２、ＨＦＶ、ＨＳＲＶ、及びヒト内在性レトロウイルス（ＨＥＲＶ）、ＭＬＶ、ならびに他のレトロウイルスからの遺伝子の発現を増加させることが可能である。
複数の実施形態では、レトロウイルスベクターは、ｅｎｖ配列を依然として保持するベクターに２５５～３６０ヌクレオチドのｇａｇを含む、または約４０ヌクレオチドのｇａｇをスプライスドナー変異、ｇａｇ及びｅｎｖ欠失の特定の組み合わせで含む、パッケージングシグナルを含む。いくつかの実施形態では、レトロウイルスベクターは、１つまたは複数の欠失を含むｇａｇ配列を含み、例えば、ｇａｇ配列は、Ｎ末端から誘導可能な約３６０ヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、レトロウイルスベクター、ヘルパー細胞、ヘルパーウイルス、またはヘルパープラスミドは、レトロウイルス構造タンパク質及びアクセサリータンパク質、例えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ、もしくはｎｅｆタンパク質、または他のレトロウイルスタンパク質を含んでもよい。いくつかの実施形態では、レトロウイルスタンパク質は、同じレトロウイルスに由来する。いくつかの実施形態では、レトロウイルスタンパク質は、１つよりも多くレトロウイルス、例えば、２、３、４、またはそれよりも多くのレトロウイルスに由来する。
いくつかの実施形態では、ｇａｇ及びｐｏｌコード配列は一般に、天然レンチウイルスにおいてＧａｇ－Ｐｏｌ前駆体として組織化される。ｇａｇ配列は、５５－ｋＤのＧａｇ前駆体タンパク質、別称ｐ５５をコードする。ｐ５５は、成熟プロセス中に、ウイルスにコードされるプロテアーゼ（ｐｏｌ遺伝子の産物）によって、ＭＡ（マトリックス［ｐ１７］）、ＣＡ（カプシド［ｐ２４］）、ＮＣ（ヌクレオカプシド［ｐ９］）、及びｐ６と表記される４つのより小さなタンパク質へと切断される。ｐｏｌ前駆体タンパク質は、ウイルスにコードされるプロテアーゼによってＧａｇから切断除去され、さらに消化されてプロテアーゼ（ｐ１０）、ＲＴ（ｐ５０）、ＲＮａｓｅ Ｈ（ｐ１５）、及びインテグラーゼ（ｐ３１）活性が分離する。
いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、組み込み欠損性である。いくつかの実施形態では、ｐｏｌは、例えば、インテグラーゼ遺伝子における変異に起因するコーディングによって、インテグラーゼ欠損性である。例えば、ｐｏｌコード配列は、例えば、触媒活性に関与するアミノ酸のうちの１つまたは複数の変異、すなわちアスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ）６４、アスパラギン酸１１６、及び／またはグルタミン酸１５２のうちの１つまたは複数の変異によって、インテグラーゼにおける不活性化変異を含有し得る。いくつかの実施形態では、インテグラーゼ変異は、Ｄ６４Ｖ変異である。いくつかの実施形態では、インテグラーゼにおける変異は、レンチウイルスへのウイルスＲＮＡのパッケージングを許容する。いくつかの実施形態では、インテグラーゼにおける変異は、レンチウイルスへのウイルスタンパク質のパッケージングを許容する。いくつかの実施形態では、インテグラーゼにおける変異は、挿入変異誘発の可能性を低減する。いくつかの実施形態では、インテグラーゼにおける変異は、複製能をもつ組換え体（ＲＣＲ）を生成する可能性を減少させる（Ｗａｎｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．２００９．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．１７９８）：１３１６－１３３２）。いくつかの実施形態では、天然Ｇａｇ－Ｐｏｌ配列がヘルパーベクター（例えば、ヘルパープラスミドまたはヘルパーウイルス）において利用され得るか、または改変が行われ得る。これらの改変は、Ｇａｇ及びＰｏｌ配列が異なるウイルス（例えば、異なる種、亜種、株、クレード等）から得られる、及び／または配列が、転写及び／または翻訳を改善する、及び／または組換えを低減するように改変されている、キメラＧａｇ－Ｐｏｌを含む。
いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、（ｉ）野生型ＩＮＳ１と比べてＲＮＡの核外搬出の制限を低減する変異ＩＮＳ１阻害配列を含む、（ｉｉ）フレームシフト及び早期終結をもたらす２つのヌクレオチド挿入を含有する、及び／または（ｉｉｉ）ｇａｇのＩＮＳ２、ＩＮＳ３、及びＩＮＳ４阻害配列を含まない、ｇａｇタンパク質の１５０～２５０（例えば、１６８）ヌクレオチド部分をコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のベクターは、レトロウイルス（例えば、レンチウイルス）配列及び非レンチウイルスウイルス配列の両方を含むハイブリッドベクターである。いくつかの実施形態では、ハイブリッドベクターは、逆転写、複製、組み込み、及び／またはパッケージングのためのレトロウイルス、例えば、レンチウイルスの配列を含む。
いくつかの実施形態では、ウイルスベクター骨格配列のほとんどまたは全ては、レンチウイルス、例えば、ＨＩＶ－１に由来する。しかしながら、レトロウイルス及び／またはレンチウイルス配列の多くの異なる供給源を使用するかまたは組み合わせることができ、ある特定のレンチウイルス配列における多数の置換及び変化が、トランスファーベクターが本明細書に記載の機能を果たす能力を損なうことなく受け入れられ得ることを理解されたい。様々なレンチウイルスベクターが、Ｎａｌｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９６ａ，１９９６ｂ，ａｎｄ １９９８）、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）、Ｄｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９８、米国特許第６，０１３，５１６号及び同第５，９９４，１３６号に記載され、これらの多くがレトロウイルス核酸を生産するために適合され得る。
いくつかの実施形態では、プロウイルスの各末端には、長鎖末端反復（ＬＴＲ）が典型的に見られる。ＬＴＲは典型的には、それらの天然配列の関連においてダイレクトリピートであり、Ｕ３、Ｒ、及びＵ５領域を含有する、レトロウイルス核酸の末端に位置するドメインを含む。ＬＴＲは一般に、レトロウイルス遺伝子の発現（例えば、遺伝子転写物の促進、開始、及びポリアデニル化）及びウイルス複製を促進する。ＬＴＲは、転写制御要素、ポリアデニル化シグナル、ならびにウイルスゲノムの複製及び組み込みのための配列を含む、多数の調節シグナルを含み得る。ウイルスＬＴＲは典型的には、Ｕ３、Ｒ、及びＵ５と呼ばれる３つの領域に分類される。Ｕ３領域は典型的には、エンハンサー及びプロモーター要素を含有する。Ｕ５領域は典型的には、プライマー結合部位とＲ領域との間の配列であり、ポリアデニル化配列を含有し得る。Ｒ（リピート）領域の両側には、Ｕ３及びＵ５領域が位置し得る。ＬＴＲは典型的には、Ｕ３、Ｒ、及びＵ５領域から構成され、ウイルスゲノムの５’末端及び３’末端の両方に現れ得る。いくつかの実施形態では、５’ＬＴＲには、ゲノムの逆転写のための配列（ｔＲＮＡプライマー結合部位）及び粒子へのウイルスＲＮＡの効率的なパッケージングのための配列（Ｐｓｉ部位）が隣接する。
いくつかの実施形態では、パッケージングシグナルは、ウイルスカプシドまたは粒子へのウイルスＲＮＡの挿入を媒介する、レトロウイルスゲノム内に位置する配列を含み得る。例えば、Ｃｌｅｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９５．Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６９，Ｎｏ．４、ｐｐ．２１０１－２１０９を参照されたい。いくつかのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムのカプシド形成のための最小パッケージングシグナル（ｐｓｉ［Ψ］配列）を使用する。
種々の実施形態では、レトロウイルス核酸は、改変された５’ＬＴＲ及び／または３’ＬＴＲを含む。ＬＴＲのいずれかまたは両方が、１つまたは複数の欠失、挿入、または置換を含むがこれらに限定されない１つまたは複数の改変を含んでもよい。３’ＬＴＲの改変は、多くの場合、感染性ビリオンが産生されないように、ウイルスを複製欠損、例えば、完全で有効な複製が可能でないウイルス（例えば、複製欠損レンチウイルス子孫）にすることによって、レンチウイルスまたはレトロウイルスシステムの安全性を改善するために行われる。
いくつかの実施形態では、ベクターは、右側（３’）のＬＴＲエンハンサー－プロモーター領域（Ｕ３領域として知られる）が、第１回目のウイルス複製より後のウイルス転写を阻止するように改変されている（例えば、欠失または置換によって）、自己不活性化（ＳＩＮ）ベクター、例えば、複製欠損ベクター、例えば、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターである。これは、ウイルス複製中に右側（３’）のＬＴＲ Ｕ３領域が左側（５’）のＬＴＲ Ｕ３領域のための鋳型として使用され得ることから、Ｕ３エンハンサー－プロモーターが存在しないとウイルス複製が阻害されるためである。複数の実施形態では、３’ＬＴＲは、Ｕ５領域が除去、変化、または例えば、外因性ポリ（Ａ）配列で置き換えられるように改変される。３’ＬＴＲ、５’ＬＴＲ、または３’ＬＴＲ及び５’ＬＴＲの両方が、改変されたＬＴＲであってもよい。
いくつかの実施形態では、５’ＬＴＲのＵ３領域は、ウイルス粒子の産生中にウイルスゲノムの転写を駆動するための異種プロモーターで置き換えられる。使用され得る異種プロモーターの例としては、例えば、ウイルス性シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、初期または後期）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば、最初期）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）のプロモーターが挙げられる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、Ｔａｔ非依存的様態で高レベルの転写を駆動することができる。ある特定の実施形態では、異種プロモーターは、ウイルスゲノムが転写される様態を制御する上で追加の利点を有する。例えば、異種プロモーターは、誘導因子が存在する場合にのみウイルスゲノムの全てまたは一部の転写が起こるように、誘導性であり得る。誘導因子には、１つもしくは複数の化学化合物、または宿主細胞が培養される温度もしくはｐＨ等の生理的条件が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、例えば、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ）ＬＴＲのＲ領域に位置する、ＴＡＲ（トランス活性化応答）要素を含む。この要素は、ウイルス複製を増強するためのレンチウイルストランス活性化因子（ｔａｔ）遺伝要素と相互作用する。しかしながら、例えば、５’ＬＴＲのＵ３領域が異種プロモーターにより置き換えられる実施形態では、この要素は必要とされない。
いくつかの実施形態では、Ｒ領域、例えば、キャッピング基の開始部（すなわち、転写の開始部）で始まり、ポリＡトラクトの開始部の直前で終わるレトロウイルスＬＴＲ内の領域の両側には、Ｕ３及びＵ５領域が位置し得る。Ｒ領域は、逆転写中に、ゲノムの一端から他端への新生ＤＮＡの移入において役割を果たす。
いくつかの実施形態では、レトロウイルス核酸はまた、ＦＬＡＰ要素、例えば、その配列がレトロウイルス、例えば、ＨＩＶ－１またはＨＩＶ－２の中央ポリプリントラクト及び中央終結配列（ｃｅｎｔｒａｌ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）（ｃＰＰＴ及びＣＴＳ）を含む核酸も含み得る。好適なＦＬＡＰ要素は、米国特許第６，６８２，９０７号及びＺｅｎｎｏｕ，ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１：１７３に記載され、同文献は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。ＨＩＶ－１の逆転写中に、中央ポリプリントラクト（ｃＰＰＴ）におけるプラス鎖ＤＮＡの中央開始（ｃｅｎｔｒａｌ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ）及び中央終結配列（ＣＴＳ）における中央終結（ｃｅｎｔｒａｌ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ）は、三本鎖ＤＮＡ構造：ＨＩＶ－１中央ＤＮＡフラップの形成につながり得る。いくつかの実施形態では、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクター骨格は、外因性物質をコードする遺伝子の上流または下流に１つまたは複数のＦＬＡＰ要素を含む。例えば、いくつかの実施形態では、トランスファープラスミドは、ＦＬＡＰ要素、例えば、ＨＩＶ－１に由来するかまたはそれから単離されたＦＬＡＰ要素を含む。
複数の実施形態では、レトロウイルスまたはレンチウイルス核酸は、細胞の核から細胞質へのＲＮＡ転写物の輸送を調節する１つまたは複数の搬出要素、例えば、シス作用性転写後調節要素を含む。ＲＮＡ搬出要素の例としては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のｒｅｖ応答要素（ＲＲＥ）（例えば、Ｃｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：１０５３、及びＣｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｃｅｌｌ ５８：４２３を参照されたい）、及びＢ型肝炎ウイルス転写後調節要素（ＨＰＲＥ）が挙げられるが、これらに限定されず、同文献は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。一般に、ＲＮＡ搬出要素は、遺伝子の３’ＵＴＲ内に配置され、１つまたは複数のコピーとして挿入され得る。
いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターにおける異種配列の発現は、転写後調節要素、ポリアデニル化部位、及び転写終結シグナルのうちの１つまたは複数、例えば、それらの全てをベクターに組み込むことによって増加する。様々な転写後調節要素、例えば、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素（ＷＰＲＥ、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７３：２８８６）、Ｂ型肝炎ウイルスに存在する転写後調節要素（ＨＰＲＥ）（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：３８６４）、及びその他（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，９：１７６６）が、タンパク質における異種核酸の発現を増加させ得、同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のレトロウイルス核酸は、ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥ等の転写後調節要素を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のレトロウイルス核酸は、ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥ等の転写後調節要素を欠いているか、または含まない。
いくつかの実施形態では、例えば、外因性物質の発現を増加させるために、異種核酸転写物の終結及びポリアデニル化を導く要素が含められてもよい。転写終結シグナルは、ポリアデニル化シグナルの下流に見られ得る。いくつかの実施形態では、ベクターは、外因性物質をコードするポリヌクレオチドの３’側にポリアデニル化配列を含む。ポリＡ部位は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによる新生ＲＮＡ転写物の終結及びポリアデニル化の両方を導くＤＮＡ配列を含んでもよい。ポリアデニル化配列は、コード配列の３’末端へのポリＡ尾部の付加によってｍＲＮＡ安定性を促進することができ、こうして増加した翻訳効率に寄与する。レトロウイルス核酸において使用され得るポリＡシグナルの例示的な例としては、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ、ウシ増殖ホルモンポリＡ配列（ＢＧＨｐＡ）、ウサギβ－グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）、または別の好適な異種もしくは内在性ポリＡ配列が挙げられる。
いくつかの実施形態では、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターは、１つまたは複数のインスレーター要素、例えば、本明細書に記載のインスレーター要素をさらに含む。
種々の実施形態では、該ベクターは、外因性物質をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む。該ベクターは、１つまたは複数のＬＴＲを有してもよく、ここで、いずれかのＬＴＲが、１つまたは複数のヌクレオチド置換、付加、または欠失等の１つまたは複数の改変を含む。該ベクターは、形質導入効率（例えば、ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）、ウイルスパッケージング（例えば、Ｐｓｉ（Ψ）パッケージングシグナル、ＲＲＥ）を増加させるための１つもしくは複数のアクセサリー要素、及び／または外因性遺伝子の発現（例えば、ポリ（Ａ）配列）を増加させる他の要素をさらに含んでもよく、ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含んでもよい。
いくつかの実施形態では、レンチウイルス核酸は、例えば、５’から３’に、プロモーター（例えば、ＣＭＶ）、Ｒ配列（例えば、ＴＡＲを含む）、Ｕ５配列（例えば、組み込みのため）、ＰＢＳ配列（例えば、逆転写のため）、ＤＩＳ配列（例えば、ゲノム二量体化のため）、ｐｓｉパッケージングシグナル、部分的ｇａｇ配列、ＲＲＥ配列（例えば、核外搬出のため）、ｃＰＰＴ配列（例えば、核内移行のため）、外因性物質の発現を駆動するためのプロモーター、外因性物質をコードする遺伝子、ＷＰＲＥ配列（例えば、効率的な導入遺伝子発現のため）、ＰＰＴ配列（例えば、逆転写のため）、Ｒ配列（例えば、ポリアデニル化及び終結のため）、及びＵ５シグナル（例えば、組み込みのため）のうちの１つまたは複数、例えば、それらの全てを含む。
いくつかのレンチウイルスベクターは、活性遺伝子の内部に組み込まれ、異常な、ことによると切り詰められた転写物の形成につながる可能性のある強力なスプライシング及びポリアデニル化シグナルを有する。
がん原遺伝子活性化の機序には、挿入変異原のゲノムに含まれるプロモーター要素またはスプライス部位と、組み込みによって標的化される細胞転写単位との相互作用に起因するキメラ転写物の生成が関与している可能性がある（Ｇａｂｒｉｅｌ ｅｔ ａｌ．２００９．Ｎａｔ Ｍｅｄ １５：１４３１－１４３６、Ｂｏｋｈｏｖｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８３：２８３－２９）。ベクター配列及び細胞のｍＲＮＡを含むキメラ融合転写物は、ベクター配列から開始して隣接する細胞遺伝子に進む読み過ごし転写、またはその逆のいずれかによって生成され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルス核酸は、例えば、レンチウイルスベクターの安全性プロファイルを改善するために、スプライス部位のうちの少なくとも２つが排除されたレンチウイルス骨格を含む。かかるスプライス部位の種及び特定方法は、ＷＯ２０１２１５６８３９Ａ２に記載され、同文献の全ては参照により含まれる。
２．パッケージングベクター
所望の濃度のベクター粒子を達成するために、ベクター粒子の大規模生産が有用である場合が多い。粒子は、トランスファーベクターを、ウイルス構造遺伝子及び／またはアクセサリー遺伝子、例えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ、もしくはｎｅｆ遺伝子または他のレトロウイルス遺伝子を含むパッケージング細胞株にトランスフェクトすることによって生産され得る。
いくつかの実施形態では、パッケージングベクターは、パッケージングシグナルを欠いており、かつ１、２、３、４つ、またはそれよりも多くのウイルス構造遺伝子及び／またはアクセサリー遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクターまたはウイルスベクターである。典型的には、パッケージングベクターは、プロデューサー細胞に含まれ、トランスフェクション、形質導入、または感染を介して細胞に導入される。レトロウイルス、例えば、レンチウイルスのトランスファーベクターは、供給源細胞または細胞株を生成するためにトランスフェクション、形質導入、または感染を介してプロデューサー細胞株に導入され得る。パッケージングベクターは、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、リポフェクション、またはエレクトロポレーションを含めた標準的な方法によってヒト細胞または細胞株に導入され得る。いくつかの実施形態では、パッケージングベクターは、優性選択可能マーカー、例えば、ネオマイシン、ハイグロマイシン、ピューロマイシン、ブラストサイジン、ゼオシン、チミジンキナーゼ、ＤＨＦＲ、Ｇｌｎシンテターゼ、またはＡＤＡと一緒に細胞に導入され、続いて適切な薬物の存在下で選択され、クローンが単離される。選択可能マーカー遺伝子は、パッケージングベクターによって、例えば、ＩＲＥＳまたは自己切断性ウイルスペプチドによってコードする遺伝子に物理的に連結され得る。
いくつかの実施形態では、プロデューサー細胞株は、パッケージングシグナルを含有しないものの、ウイルス粒子をパッケージングすることができるウイルス構造タンパク質及び複製酵素（例えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ）を安定にまたは一過性で発現する細胞株を含む。任意の好適な細胞株、例えば、哺乳類細胞、例えば、ヒト細胞を用いることができる。使用され得る好適な細胞株には、例えば、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＭＤＣＫ細胞、Ｃ３Ｈ １０Ｔ１／２細胞、ＦＬＹ細胞、Ｐｓｉ－２細胞、ＢＯＳＣ ２３細胞、ＰＡ３１７細胞、ＷＥＨＩ細胞、ＣＯＳ細胞、ＢＳＣ １細胞、ＢＳＣ ４０細胞、ＢＭＴ １０細胞、ＶＥＲＯ細胞、Ｗ１３８細胞、ＭＲＣ５細胞、Ａ５４９細胞、ＨＴ１０８０細胞、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、Ｂ－５０細胞、３Ｔ３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｓａｏｓ－２細胞、Ｈｕｈ７細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｗ１６３細胞、２１１細胞、及び２１１Ａ細胞が含まれる。複数の実施形態では、パッケージング細胞は、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、またはＡ５４９細胞である。
いくつかの実施形態では、供給源細胞株には、プロデューサー細胞株及びパッケージングシグナルを含むトランスファーベクター構築物を含む、組換えレトロウイルス粒子を産生することができる細胞株が含まれる。ウイルス原液の調製方法は、例えば、Ｙ．Ｓｏｎｅｏｋａ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：６２８－６３３、及びＮ．Ｒ．Ｌａｎｄａｕ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：５１１０－５１１３によって例示され、同文献は参照により本明細書に援用される。感染性ウイルス粒子は、例えば、細胞溶解、または細胞培養物の上清の収集によって、プロデューサー細胞から収集されてもよい。収集されたウイルス粒子は、濃縮または精製されてもよい。
いくつかの実施形態では、供給源細胞は、ウイルス粒子をパッケージングすることができるウイルス構造タンパク質及び複製酵素（例えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ）をコードする１つまたは複数のプラスミドを含む。いくつかの実施形態では、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ前駆体のうちの少なくとも２つをコードする配列は、同じプラスミド上にある。いくつかの実施形態では、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ前駆体をコードする配列は、異なるプラスミド上にある。いくつかの実施形態では、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ前駆体をコードする配列は、同じ発現シグナル、例えば、プロモーターを有する。いくつかの実施形態では、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ前駆体をコードする配列は、異なる発現シグナル、例えば、異なるプロモーターを有する。いくつかの実施形態では、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ前駆体の発現は、誘導性である。いくつかの実施形態では、ウイルス構造タンパク質及び複製酵素をコードするプラスミドは、同時にまたは異なる時点でトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、ウイルス構造タンパク質及び複製酵素をコードするプラスミドは、パッケージングベクターと同時にまたは異なる時点でトランスフェクトされる。
いくつかの実施形態では、供給源細胞株は、１つまたは複数の安定に組み込まれたウイルス構造遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、安定に組み込まれたウイルス構造遺伝子の発現は、誘導性である。
いくつかの実施形態では、ウイルス構造遺伝子の発現は、転写レベルで調節される。いくつかの実施形態では、ウイルス構造遺伝子の発現は、翻訳レベルで調節される。いくつかの実施形態では、ウイルス構造遺伝子の発現は、翻訳後レベルで調節される。
いくつかの実施形態では、ウイルス構造遺伝子の発現は、テトラサイクリン（Ｔｅｔ）依存性システムによって調節され、ここで、Ｔｅｔ調節転写リプレッサー（Ｔｅｔ－Ｒ）が、プロモーターに含まれるＤＮＡ配列に結合し、立体障害によって転写を抑制する（Ｙａｏ ｅｔ ａｌ，１９９８、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ，２００５）。ドキシサイクリン（ｄｏｘ）を添加すると、Ｔｅｔ－Ｒが放出され、転写が可能となる。複数の他の好適な転写調節プロモーター、転写因子、及び低分子誘導物質が、ウイルス構造遺伝子の転写を調節するのに好適である。
いくつかの実施形態では、Ｔｅｔ調節プロモーターの制御下にあり、抗生物質耐性カセットに連結された、第３世代レンチウイルス構成要素であるヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ）のＲｅｖ、Ｇａｇ／Ｐｏｌ、及びエンベロープは、供給源細胞ゲノムに別個に組み込まれる。いくつかの実施形態では、供給源細胞は、Ｒｅｖ、Ｇａｇ／Ｐｏｌ、及びエンベロープタンパク質の各々の１つのコピーのみがゲノムに組み込まれる。
いくつかの実施形態では、外因性物質をコードする核酸（例えば、外因性物質をコードするレトロウイルス核酸）もまた、供給源細胞ゲノムに組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のレトロウイルス核酸は、逆転写を経ることができない。複数の実施形態におけるかかる核酸は、外因性物質を一過性で発現することができる。レトロウイルスまたはＶＬＰは、無効化された逆転写酵素タンパク質を含む場合があるか、または逆転写酵素タンパク質を含まない場合がある。複数の実施形態では、レトロウイルス核酸は、無効化されたプライマー結合部位（ＰＢＳ）及び／またはａｔｔ部位を含む。複数の実施形態では、ｒｅｖ、ｔａｔ、ｖｉｆ、ｎｅｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ、及びＳ２またはその機能的同等物を含めた１つまたは複数のウイルスアクセサリー遺伝子が、無効化されるか、またはレトロウイルス核酸に存在しない。複数の実施形態では、Ｓ２、ｒｅｖ、及びｔａｔから選択される１つまたは複数のアクセサリー遺伝子が、無効化されるか、またはレトロウイルス核酸に存在しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のレトロウイルスベクターシステムは、ウイルスＲＮＡの転写、逆転写、組み込み、翻訳、及びウイルス粒子へのパッケージングのためのシス作用性ベクター配列をもつウイルスゲノム、ならびに（２）ウイルス粒子の産生に必要とされるトランス作用性レトロウイルス遺伝子配列（例えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ）を発現するプロデューサー細胞株を含む。いくつかの実施形態では、シス作用性ベクター配列及びトランス作用性ベクター配列を完全に分離することによって、ウイルスは、１サイクルの感染を超えては複製を維持することができない。生ウイルスの生成は、いくつかの戦略によって、例えば、組換えを回避するためにシス作用性配列とトランス作用性配列との間の重複を最小限に抑えることによって回避することができる。
いくつかの実施形態では、ウイルスＲＮＡが欠けているまたはそれを欠いた配列を含むウイルスベクター粒子が、配列からウイルスＲＮＡを除去または排除することの結果であり得る。一実施形態では、これは、ｇａｇ上の内在性パッケージングシグナル結合部位を使用することによって達成されてもよい。いくつかの実施形態では、内在性パッケージングシグナル結合部位は、ｐｏｌ上にある。この実施形態では、送達対象のＲＮＡは、同系のパッケージングシグナルを含有することになる。別の実施形態では、送達対象のＲＮＡ上に位置する異種結合ドメイン（ｇａｇに対して異種である）、及びｇａｇまたはｐｏｌ上に位置する同系の結合部位を使用して、送達対象のＲＮＡのパッケージングを確実にすることができる。いくつかの実施形態では、異種配列は、非ウイルス性であることもできるし、またはそれはウイルス性であることもでき、ウイルス性である場合、それは異なるウイルスに由来してもよい。いくつかの実施形態では、該ベクター粒子を使用して、治療用ＲＮＡが送達され、その場合、機能的インテグラーゼ及び／または逆転写酵素は必要とされない。いくつかの実施形態では、該ベクター粒子を使用して、目的の治療遺伝子を送達することもまた可能であり、その場合、ｐｏｌが典型的に含まれる。
いくつかの実施形態では、ｇａｇ－ｐｏｌは変化させられ、パッケージングシグナルは、対応するパッケージングシグナルで置き換えられる。この実施形態では、粒子は、新たなパッケージングシグナルを有するＲＮＡをパッケージングすることができる。この手法の利点は、ウイルス配列が欠けているＲＮＡ配列、例えば、ＲＮＡｉをパッケージングすることが可能であるということである。
いくつかの実施形態では、代替の手法は、パッケージングされるＲＮＡの過剰発現に依存することである。一実施形態では、パッケージングされるＲＮＡは、パッケージングシグナルを含有するあらゆるＲＮＡの不在下で過剰発現させられる。これは、顕著なレベルの治療用ＲＮＡのパッケージングをもたらし得、この量は、細胞に形質導入して生物学的効果を有するのに十分である。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ウイルスのｇａｇタンパク質またはレトロウイルスのｇａｇ及びｐｏｌタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み、該ｇａｇタンパク質またはｐｏｌタンパク質は、ウイルスベクター粒子へのＲＮＡ配列のパッケージングを容易にするための、ＲＮＡ配列における対応する配列を認識することができる異種ＲＮＡ結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、異種ＲＮＡ結合ドメインは、バクテリオファージコートタンパク質、Ｒｅｖタンパク質、Ｕ１核内低分子リボ核タンパク質粒子のタンパク質、Ｎｏｖａタンパク質、ＴＦ１１１Ａタンパク質、ＴＩＳ１１タンパク質、ｔｒｐ ＲＮＡ結合減弱タンパク質（ＴＲＡＰ）、またはシュードウリジンシンターゼに由来するＲＮＡ結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書における方法は、複製能をもつレトロウイルスを検出する工程、またはそれが存在しないことを確認する工程を含む。該方法は、ガンマレトロウイルスまたはレンチウイルス等の複製能をもつレトロウイルスに感染したある特定の細胞において遺伝子産物が発現されるが、細胞に異種核酸を形質導入するために使用されるウイルスベクターには存在せず、かつ、複製能をもつレトロウイルスを含有しない細胞には存在しない及び／または発現されない、または存在すること及び／または発現されることが予想されない、ウイルス遺伝子、例えば、構造遺伝子またはパッケージング遺伝子等の１つまたは複数の標的遺伝子のＲＮＡレベルを評価する工程を含んでもよい。複製能をもつレトロウイルスは、１つまたは複数の標的遺伝子のＲＮＡレベルが参照値よりも高い場合、存在すると決定され得、参照値は、例えば、標的遺伝子を含有する陽性対照試料から直接または間接的に測定することができる。さらなる開示については、ＷＯ２０１８０２３０９４Ａ１を参照されたい。
ＩＶ．フソゲン
いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、１つまたは複数のフソゲンを含む。いくつかの実施形態では、フソゲンは、膜へのウイルスベクターの融合を容易にする。いくつかの実施形態では、膜は、形質細胞膜である。
いくつかの実施形態では、フソゲンを含むウイルスベクターは、標的細胞の脂質二重層への膜に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のフソゲンのうちの１つまたは複数が、ウイルスベクターに含まれ得る。
Ａ．タンパク質フソゲン
いくつかの実施形態では、フソゲンは、タンパク質フソゲン、例えば、哺乳類タンパク質または哺乳類タンパク質のホモログ（例えば、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超える同一性を有する）、ウイルスタンパク質またはウイルスタンパク質のホモログ（例えば、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超える同一性を有する）等の非哺乳類タンパク質、天然タンパク質または天然タンパク質の誘導体、合成タンパク質、それらの断片、それらのバリアント、フソゲンまたは断片のうちの１つまたは複数を含むタンパク質融合体、及びそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、フソゲンは、ウイルスベクターにおける脂質と標的細胞における脂質との間の混合をもたらす。いくつかの実施形態では、フソゲンは、ウイルスベクターの内部と標的細胞のサイトゾルとの間に１つまたは複数の細孔の形成をもたらす。
１．哺乳類タンパク質
いくつかの実施形態では、フソゲンは、哺乳類タンパク質を含んでもよい。哺乳類フソゲンの例としては、ｖＳＮＡＲＥ及びｔＳＮＡＲＥ等のＳＮＡＲＥファミリータンパク質、シンシチン－１（ＤＯＩ：１０．１１２８／ＪＶＩ．７６．１３．６４４２－６４５２．２００２）、及びシンシチン－２等のシンシチンタンパク質、ｍｙｏｍａｋｅｒ（ｂｉｏｒｘｉｖ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／ｅａｒｌｙ／２０１７／０４／０２／１２３１５８、ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／１２３１５８、ｄｏｉ：１０．１０９６／ｆｊ．２０１６００９４５Ｒ、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１２３４３）、ｍｙｏｍｉｘｅｒ（ｗｗｗ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ／ｎａｔｕｒｅ／ｊｏｕｒｎａｌ／ｖ４９９／ｎ７４５８／ｆｕｌｌ／ｎａｔｕｒｅ１２３４３．ｈｔｍｌ、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１２３４３）、ｍｙｏｍｅｒｇｅｒ（ｓｃｉｅｎｃｅ．ｓｃｉｅｎｃｅｍａｇ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／ｅａｒｌｙ／２０１７／０４／０５／ｓｃｉｅｎｃｅ．ａａｍ９３６１、ＤＯＩ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．ａａｍ９３６１）、ＦＧＦＲＬ１（線維芽細胞増殖因子受容体様１）、Ｍｉｎｉｏｎ（ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／１２２６９７）、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）のアイソフォーム（例えば、ＵＳ６，０９９，８５７Ａに開示されるようなもの）、コネキシン４３、コネキシン４０、コネキシン４５、コネキシン３２、またはコネキシン３７等のギャップ結合タンパク質（例えば、ＵＳ２００７／０２２４１７６に開示されるようなもの、Ｈａｐ２、異種細胞間でシンシチウム形成を誘導することができる任意のタンパク質（表２を参照されたい）、フソゲン特性を有する任意のタンパク質、それらのホモログ、それらの断片、それらのバリアント、ならびに１つまたは複数のタンパク質またはその断片を含むタンパク質融合体が挙げられ得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、フソゲンは、ヒトゲノムに見られるヒト内在性レトロウイルス要素（ｈＥＲＶ）によってコードされる。追加の例示的なフソゲンは、ＵＳ６，０９９，８５７Ａ及びＵＳ２００７／０２２４１７６に開示され、同文献の内容全体は参照により本明細書に援用される。
２．ウイルスタンパク質
いくつかの実施形態では、フソゲンは、非哺乳類タンパク質、例えば、ウイルスタンパク質を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ウイルスフソゲンは、クラスＩウイルス膜融合タンパク質、クラスＩＩウイルス膜タンパク質、クラスＩＩＩウイルス膜融合タンパク質、ウイルス膜糖タンパク質、もしくは他のウイルス融合タンパク質、またはそれらのホモログ、それらの断片、それらのバリアント、または１つもしくは複数のタンパク質もしくはその断片を含むタンパク質融合体である。
いくつかの実施形態では、クラスＩのウイルス膜融合タンパク質には、バキュロウイルスＦタンパク質、例えば、核多角体ウイルス（ＮＰＶ）属、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ ＭＮＰＶ（ＳｅＭＮＰＶ）のＦタンパク質及びＬｙｍａｎｔｒｉａ ｄｉｓｐａｒ ＭＮＰＶ（ＬｄＭＮＰＶ）のＦタンパク質、ならびにパラミクソウイルスＦタンパク質が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、クラスＩＩウイルス膜タンパク質には、ダニ媒介性脳炎Ｅ（ＴＢＥＶ Ｅ）、セムリキ森林ウイルスＥ１／Ｅ２が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、クラスＩＩＩのウイルス膜融合タンパク質には、ラブドウイルスＧ（例えば、水疱性口内炎ウイルスの膜融合性タンパク質Ｇ（ＶＳＶ－Ｇ）、ＣｏｃａｌウイルスＧタンパク質）、ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｂ（例えば、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）ｇＢ））、エプスタイン・バールウイルス糖タンパク質Ｂ（ＥＢＶ ｇＢ）、トゴトウイルスＧ、バキュロウイルスｇｐ６４（例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ＮＰＶ（ＡｃＭＮＰＶ）ｇｐ６４）、及びボルナ病ウイルス（ＢＤＶ）糖タンパク質（ＢＤＶ Ｇ）が含まれるが、これらに限定されない。
他のウイルスフソゲン、例えば、膜糖タンパク質及びウイルス融合タンパク質の例としては、インフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）またはその変異体もしくは融合タンパク質等のウイルスシンシチウムタンパク質；ヒト免疫不全ウイルス１型エンベロープタンパク質（ＨＩＶ－１ ＥＮＶ）、ＨＩＶがＬＦＡ－１に結合してリンパ球シンシチウムを形成することによるｇｐ１２０、ＨＩＶ ｇｐ４１、ＨＩＶ ｇｐ１６０、もしくはＨＩＶの転写トランス活性化因子（ＴＡＴ）；ウイルス糖タンパク質ＶＳＶ－Ｇ、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ科の水疱性口内炎ウイルス由来のウイルス糖タンパク質；水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）の糖タンパク質ｇＢ及びｇＨ－ｇＬ；マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）－１０Ａ１；テナガザル白血病ウイルス糖タンパク質（ＧａＬＶ）；狂犬病、モコラ、水疱性口内炎ウイルス、及びトガウイルスにおけるＧ型糖タンパク質；マウス肝炎ウイルスＪＨＭ表面突起タンパク質；ブタ呼吸器コロナウイルススパイク糖タンパク質及び膜糖タンパク質；トリ感染性気管支炎スパイク糖タンパク質及びその前駆体；ウシ腸コロナウイルススパイクタンパク質；モルビリウイルス（例えば、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、イヌジステンパーウイルス、クジラ目モルビリウイルス、小反芻獣疫ウイルス、アザラシジステンパーウイルス、牛疫ウイルス）、ニューカッスル病ウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス３、シミアンウイルス４１、センダイウイルス、及びヒト呼吸器合胞体ウイルスのＦ及びＨ、ＨＮもしくはＧ遺伝子；シャペロンタンパク質ｇＬを伴う、ヒトヘルペスウイルス１及びサル水痘ウイルスのｇＨ；ヒト、ウシ、及びオナガザルヘルヘルペスウイルスｇＢ；フレンドマウス白血病ウイルス及びメイソンファイザーサルウイルスのエンベロープ糖タンパク質；ムンプスウイルスヘマグルチニンノイラミニダーゼ、ならびに糖タンパク質Ｆ１及びＦ２；ベネズエラウマ脳脊髄炎由来の膜糖タンパク質；パラミクソウイルスＦタンパク質；ＳＩＶ ｇｐ１６０タンパク質；エボラウイルスＧタンパク質；またはセンダイウイルス融合タンパク質、またはそれらのホモログ、それらの断片、それらのバリアント、ならびに１つもしくは複数のタンパク質もしくはその断片を含むタンパク質融合体が挙げられるが、これらに限定されない。
非哺乳類フソゲンには、ウイルスフソゲン、そのホモログ、その断片、及び１つまたは複数のタンパク質またはその断片を含む融合タンパク質が含まれる。ウイルスフソゲンには、クラスＩフソゲン、クラスＩＩフソゲン、クラスＩＩＩフソゲン、及びクラスＩＶフソゲンが含まれる。複数の実施形態では、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｇｐ４１等のクラスＩフソゲンは、中央コイルドコイル構造を有するαヘリックスヘアピンのシグネチャ三量体との特徴的な融合後構造を有する。クラスＩウイルス融合タンパク質には、中央融合後６ヘリックスバンドルを有するタンパク質が含まれる。クラスＩのウイルス融合タンパク質には、インフルエンザＨＡ、パラインフルエンザＦ、ＨＩＶ Ｅｎｖ、エボラＧＰ、オルトミクソウイルスからのヘマグルチニン、パラミクソウイルスからのＦタンパク質（例えば、麻疹（Ｋａｔｏｈ ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１０，１０：３７））、レトロウイルスからのＥＮＶタンパク質、ならびにフィロウイルス及びコロナウイルスのフソゲンが含まれる。複数の実施形態では、デングＥ糖タンパク質等のクラスＩＩウイルスフソゲンは、再び折り畳まれてヘアピンの三量体をもたらす細長い外部ドメインを形成するβシートの構造的シグネチャを有する。複数の実施形態では、クラスＩＩウイルスフソゲンは、中央コイルドコイルを欠いている。クラスＩＩウイルスフソゲンは、アルファウイルス（例えば、Ｅ１タンパク質）及びフラビウイルス（例えば、Ｅ糖タンパク質）に見られ得る。クラスＩＩウイルスフソゲンには、セムリキ森林ウイルス、シンビス、風疹ウイルス、及びデング熱ウイルス由来のフソゲンが含まれる。複数の実施形態では、水疱性口内炎ウイルスＧ糖タンパク質等のクラスＩＩＩウイルスフソゲンは、クラスＩ及びＩＩに見られる構造的シグネチャを組み合わせる。複数の実施形態では、クラスＩＩＩウイルスフソゲンは、αヘリックス（例えば、クラスＩウイルスフソゲンと同様にタンパク質を折り返す６ヘリックスバンドルを形成する）、及びクラスＩＩウイルスフソゲンを連想させる、両親媒性融合ペプチドをその末端に有するβシートを含む。クラスＩＩＩウイルスフソゲンは、ラブドウイルス及びヘルペスウイルスに見られ得る。複数の実施形態では、クラスＩＶウイルスフソゲンは、融合関連小型膜貫通型（ＦＡＳＴ）タンパク質であり（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｅｍｂｏｊ．７６００７６７，Ｎｅｓｂｉｔｔ，Ｒａｅ Ｌ．，“Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｕｓｉｎｇ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ Ｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ＦＡＳＴ ｐｒｏｔｅｉｎｓ”（２０１２）．Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ．Ｐａｐｅｒ ３８８）、これらは非エンベロープレオウイルスによってコードされる。複数の実施形態では、クラスＩＶウイルスフソゲンは、ヘアピンを形成しないほど十分に小さい（ｄｏｉ：１０．１１４６／ａｎｎｕｒｅｖ－ｃｅｌｌｂｉｏ－１０１５１２－１２２４２２、ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｄｅｖｃｅｌ．２００７．１２．００８）。
ａ．Ｇタンパク質
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、ヘニパウイルスＧタンパク質またはその生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、ヘニパウイルスＧタンパク質は、ヘンドラ（ＨｅＶ）ウイルスＧタンパク質、ニパ（ＮｉＶ）ウイルスＧ－タンパク質（ＮｉＶ－Ｇ）、スギ（ＣｅｄＰＶ）ウイルスＧ－タンパク質、ＭｏｊｉａｎｇウイルスＧ－タンパク質、コウモリパラミクソウイルスＧ－タンパク質、またはそれらの生物学的に活性な部分である。例示的なＧタンパク質の非限定的なリストが、表１に示される。
結合Ｇタンパク質は、Ｎ末端の細胞質側末端（例えば、配列番号１のアミノ酸１～４９に対応する）、膜貫通ドメイン（例えば、配列番号１のアミノ酸５０～７０に対応する）、ならびに細胞外の茎（例えば、配列番号１のアミノ酸７１～１８７に対応する）及び球状頭部（配列番号１のアミノ酸１８８～６０２に対応する）を含有する細胞外ドメインを含有する、ＩＩ型膜貫通型糖タンパク質である。Ｎ末端細胞質ドメインは、脂質二重層の内側の内腔内にあり、Ｃ末端部分は、脂質二重層の外側で露出した細胞外ドメインである。Ｃ末端領域における茎の領域（例えば、ＮｉＶ－Ｇのアミノ酸１５９～１６７に対応する）は、Ｆタンパク質との相互作用及びＦタンパク質融合の誘発に関与することが示されている（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．２０１５ Ｊ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８９：１８３８）。野生型Ｇタンパク質において、球状頭部は、ヘニパウイルス侵入受容体エフリンＢ２及びエフリンＢ３への受容体結合を媒介するが、膜融合に必ずしも必要ではない（Ｂｒａｎｄｅｌ－Ｔｒｅｔｈｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２０１９．９３（１３）ｅ００５７７－１９）。
本明細書における特定の実施形態では、Ｇタンパク質の指向性が改変される。結合パートナーへのＧタンパク質の結合は、適合性のＦタンパク質またはその生物学的に活性な部分によって媒介される融合を誘発し得る。本明細書に開示されるＧタンパク質配列は、主として、翻訳の開始に必要とされるＮ末端メチオニンを含む発現配列として開示される。かかるＮ末端メチオニンは、翻訳と同時または翻訳後に一般的に切断されるため、Ｎ末端メチオニンを欠いたものとして、本明細書に開示される全てのＧタンパク質配列に対する成熟タンパク質配列もまた企図される。
Ｇ糖タンパク質は、ヘニパウイルス種間で高度に保存されている。例えば、ＮｉＶ及びＨｅＶウイルスのＧタンパク質は、７９％のアミノ酸同一性を共有する。研究は、異型融合活性化によって実証されるように、Ｇタンパク質の中で異なる種のＦタンパク質との高い適合度を示している（Ｂｒａｎｄｅｌ－Ｔｒｅｔｈｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２０１９）。下記に記載されるように、標的変更された脂質粒子は、異なる種由来の異種タンパク質を含有し得る。
Figure 2024503027000002
Figure 2024503027000003
Figure 2024503027000004
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号１～１１のうちのいずれかに記載の配列を有するか、または配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１のうちのいずれか１つと少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、少なくとも９６％もしくは少なくとも約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％同一である配列を有するその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号１に記載の配列を有するか、または配列番号１と少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％同一である配列を有するその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号４に記載の配列を有するか、または配列番号４と少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％同一である配列を有するその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号５に記載の配列を有するか、または配列番号５と少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％同一である配列を有するその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。
特定の実施形態では、Ｇタンパク質または機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分は、ヘニパウイルスＦタンパク質、例えば、ＮｉＶ－ＦまたはＨｅＶ－Ｆと併せて膜融合活性を保持するタンパク質である。膜融合活性は、２つの膜内腔の融合、例えば、ヘニパウイルスＦ及びＧタンパク質をその脂質二重層に埋め込まれた状態で有する標的化脂質粒子の内腔と、標的細胞、例えば、標的化エンベロープタンパク質によって認識されるかまたは結合される表面受容体または分子を含有する細胞の細胞質との融合を促進するか、または容易にするための、ヘニパウイルスＦタンパク質と併せたＧタンパク質の活性を含む。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質及びＧタンパク質は、同じヘニパウイルス種（例えば、ＮｉＶ－Ｇ及びＮｉＶ－Ｆ）に由来する。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質及びＧタンパク質は、異なるヘニパウイルス種（例えば、ＮｉＶ－Ｇ及びＨｅＶ－Ｆ）に由来する。
特定の実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、もしくは配列番号１１に記載のアミノ酸の配列を有するか、または膜融合活性を保持するその機能的に活性なバリアントもしくはその生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、機能的に活性なバリアントは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ヘニパウイルスＦタンパク質（例えば、ＮｉＶ－ＦまたはＨｅＶ－Ｆ）と併せて膜融合活性を保持する。いくつかの実施形態では、生物学的に活性な部分は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヘニパウイルスＦタンパク質（例えば、ＮｉＶ－ＦまたはＨｅＶ－Ｆ）と併せて膜融合活性を保持する。
膜融合活性を保持するという言及は、例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１に記載の対応する野生型Ｇタンパク質の結合レベルまたは結合度の１０％～１５０％もしくは約１０％～約１５０％またはそれよりも高い、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも１０％もしくは少なくとも約１０％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも１５％もしくは少なくとも約１５％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも２０％もしくは少なくとも約２０％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも２５％もしくは少なくとも約２５％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも３０％もしくは少なくとも約３０％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも３５％もしくは少なくとも約３５％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも４０％もしくは少なくとも約４０％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも４５％もしくは少なくとも約４５％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも５０％もしくは少なくとも約５０％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも５５％もしくは少なくとも約５５％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも６０％もしくは少なくとも約６０％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも６５％もしくは少なくとも約６５％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも７０％もしくは少なくとも約７０％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも７５％もしくは少なくとも約７５％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも１００％もしくは少なくとも約１００％、または例えば、対応する野生型Ｇタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも１２０％もしくは少なくとも約１２０％である、（ヘニパウイルスＦタンパク質と併せた）活性を含む。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、１つまたは複数のアミノ酸挿入、欠失、置換、または切り詰め等の１つまたは複数のアミノ酸変異を含有する機能的に活性なバリアントまたは生物学的に活性な部分である変異体Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異は、参照Ｇタンパク質配列と比較した、アミノ酸のアミノ酸挿入、欠失、置換、または切り詰めに関する。いくつかの実施形態では、参照Ｇタンパク質配列は、Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分の野生型配列である。いくつかの実施形態では、その機能的に活性なバリアントまたは生物学的に活性な部分は、野生型ヘンドラ（ＨｅＶ）ウイルスＧタンパク質、野生型ニパ（ＮｉＶ）ウイルスＧ－タンパク質（ＮｉＶ－Ｇ）、野生型スギ（ＣｅｄＰＶ）ウイルスＧ－タンパク質、野生型ＭｏｊｉａｎｇウイルスＧ－タンパク質、野生型コウモリパラミクソウイルスＧ－タンパク質、またはそれらの生物学的に活性な部分の変異体である。いくつかの実施形態では、野生型Ｇタンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１に記載の配列のうちのいずれか１つを有する。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、野生型ヘンドラ（ＨｅＶ）ウイルスＧタンパク質、野生型ニパ（ＮｉＶ）ウイルスＧ－タンパク質（ＮｉＶ－Ｇ）、野生型スギ（ＣｅｄＰＶ）ウイルスＧ－タンパク質、野生型ＭｏｊｉａｎｇウイルスＧ－タンパク質、野生型コウモリパラミクソウイルスＧ－タンパク質のＮ末端及び／またはＣ末端切り詰め断片である、生物学的に活性な部分である変異体Ｇタンパク質である。特定の実施形態では、切り詰めは、細胞質ドメインの全てまたは一部分のＮ末端切り詰めである。いくつかの実施形態では、変異体Ｇタンパク質は、切り詰められており、野生型Ｇタンパク質、例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１のうちのいずれか１つに記載の野生型Ｇタンパク質のＮ末端におけるまたはその近くの最大４９個の連続アミノ酸残基を欠いている、生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質は、切り詰められており、野生型Ｇタンパク質のＮ末端における最大４９個の連続アミノ酸、例えば、最大４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３０、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個の連続アミノ酸を欠いている。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、野生型ニパウイルスＧ（ＮｉＶ－Ｇ）タンパク質もしくはヘンドラウイルスＧタンパク質であるか、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号１、配列番号４、もしくは配列番号５に記載の配列を有するか、または配列番号１、配列番号４、もしくは配列番号５に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントもしくは生物学的に活性な部分である、ＮｉＶ－Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号１に記載の配列を有するか、または配列番号１に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは少なくとも約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントもしくは生物学的に活性な部分である、ＮｉＶ－Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号１に記載の配列を有するＮｉＶ－Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号４に記載の配列を有するか、または配列番号４に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントもしくは生物学的に活性な部分である、ＮｉＶ－Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号４に記載の配列を有するＮｉＶ－Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号５に記載の配列を有するか、または配列番号５に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントもしくは生物学的に活性な部分である、ＮｉＶ－Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号５に記載の配列を有するＮｉＶ－Ｇタンパク質である。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇの生物学的に活性な部分である変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、生物学的に活性な部分は、Ｎ末端切り詰め断片である。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大５個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大６個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大７個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大８個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大９個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１０個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１１個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１２個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１３個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１４個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１５個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１６個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１７個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１８個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１９個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２０個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２１個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２２個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２３個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２４個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２５個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２６個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２７個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２８個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２９個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３０個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３１個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３２個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３３個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３４個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３５個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３６個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３７個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３８個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３９個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４０個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４１個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４２個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４３個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４４個の連続アミノ酸残基、または野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４５個の連続アミノ酸残基を欠いている。
いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの５個の連続アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの１０個の連続アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの１５個の連続アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２０個の連続アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２５個の連続アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３０個の連続アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３４個の連続アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、細胞質ドメインを含有しない生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、細胞質ドメインを有しないＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号２２によってコードされる。
いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号１２～１４、１７、１８、及び２２、もしくは４２～４５のうちのいずれかに記載の配列を含むか、または配列番号１２～１４、１７、１８、及び２２、もしくは４２～４５に対して少なくとも８０％もしくは８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントである。
いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの５アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号１２に記載のもの、または配列番号１２に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するその機能的バリアント、または例えば、配列番号１７に記載のもの、または配列番号１７に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの１０アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号４４に記載のもの、または配列番号４４に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号１３に記載のもの、または配列番号１３に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２５アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号１４に記載のもの、または配列番号１４に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３３アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号１７に記載のもの、または配列番号１７に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３４アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号１８に記載のもの、または配列番号１８に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの４８アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号２２に記載のもの、または配列番号２２に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するその機能的バリアントである。
いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの１５アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号４５に記載のもの、または配列番号４５に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントである。
いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号１３に記載のもの、または配列番号１３に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントである。
いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２５アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号１４に記載のもの、または配列番号１４に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントである。
いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３０アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号４３に記載のもの、または配列番号４３に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントである。
いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３４アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号４２に記載のもの、または配列番号４２に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントである。
いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの４８アミノ酸の切り詰めを有し、例えば、配列番号２２に記載のもの、または配列番号２２に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントである。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、野生型ＨｅＶ－Ｇの生物学的に活性な部分である変異体ＨｅＶ－Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、生物学的に活性な部分は、Ｎ末端切り詰め断片である。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号２３もしくは２４に記載の配列を有する野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質であるか、または配列番号２３もしくは２４に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、８５％もしくは約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、８８％もしくは約８８％、少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的バリアントもしくは生物学的に活性な部分である。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、野生型ＨｅＶ－Ｇ（配列番号２３または２４）の生物学的に活性な部分である変異体ＨｅＶ－Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、生物学的に活性な部分は、Ｎ末端切り詰め断片である。いくつかの実施形態では、変異体ＨｅＶ－Ｇタンパク質は、切り詰められており、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大５個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大６個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大７個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるまたはその近くの最大８個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大９個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１０個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１１個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１２個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１３個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１４個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１５個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１６個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１７個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１８個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１９個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２０個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２１個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２２個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２３個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２４個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２５個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２６個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２７個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２８個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２９個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３０個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３１個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３２個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３３個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３４個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３５個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３６個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３７個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３８個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３９個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４０個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４１個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４２個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４３個の連続アミノ酸残基、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４４個の連続アミノ酸残基、または野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４５個の連続アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、ＨｅＶ－Ｇタンパク質は、細胞質ドメインを含有しない生物学的に活性な部分である。
いくつかの実施形態では、変異体ＨｅＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端細胞質ドメインを欠いており、例えば、配列番号２５に記載のもの、または配列番号２５に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するその機能的バリアントである。いくつかの実施形態では、変異体ＨｅＶ－Ｇタンパク質は、野生型ＨｅＶ－Ｇタンパク質（配列番号２３または２４）のＮ末端細胞質ドメインを欠いており、例えば、配列番号２６に記載のもの、または配列番号２６に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、８４％もしくは約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも８６％もしくは少なくとも約８６％、または少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するその機能的バリアントである。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分は、エフリンＢ２またはエフリンＢ３に結合する。いくつかの態様では、Ｇタンパク質は、配列番号２４、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸の配列を有するか、またはエフリンＢ２もしくはエフリンＢ３に結合することができるその機能的に活性なバリアントもしくはその生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、機能的に活性なバリアントまたは生物学的に活性な部分は、配列番号２４、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０のうちのいずれかに対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、８６％もしくは約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するか、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分であり、エフリンＢ２またはＢ３への結合を保持する。
いくつかの実施形態では、機能的に活性なバリアントまたは生物学的に活性な部分は、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するか、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分であり、エフリンＢ２またはＢ３への結合を保持する。エフリンＢ２またはＢ３への結合を保持するという言及は、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の少なくとも５％または少なくとも約５％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の１０％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の１５％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の２０％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、または機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の２５％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の３０％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の３５％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の４０％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の４５％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の５０％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の５５％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の６０％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の６５％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の７０％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも７５％もしくは少なくとも約７５％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型Ｇタンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、または例えば、配列番号２７、配列番号２３、配列番号４、配列番号６、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番号１０に記載の対応する野生型タンパク質、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分の結合レベルまたは結合度の、例えば、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％である結合を含む。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、ＮｉＶ－Ｇまたはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分であり、エフリンＢ２またはエフリンＢ３に結合する。いくつかの態様では、ＮｉＶ－Ｇは、配列番号４、配列番号５、または配列番号２７に記載のアミノ酸の配列を有するか、またはエフリンＢ２もしくはエフリンＢ３に結合することができるその機能的に活性なバリアントもしくはその生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、機能的に活性なバリアントまたは生物学的に活性な部分は、配列番号４、配列番号５、または配列番号２７に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、エフリンＢ２またはＢ３への結合を保持する。例示的な生物学的に活性な部分は、細胞質ドメインの全てまたは一部分、例えば、１つまたは複数、例えば、１～４９個の連続Ｎ末端アミノ酸残基を欠いたＮ末端切り詰めバリアントを含む。エフリンＢ２またはＢ３への結合を保持するという言及は、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の少なくとも５％または少なくとも約５％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の１０％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の１５％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の２０％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の２５％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の３０％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の３５％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の４０％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の４５％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の５０％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の５５％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の６０％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の６５％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の７０％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも７５％もしくは少なくとも約７５％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、または例えば、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号２７に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％である結合を含む。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質またはその生物学的は、野生型Ｇタンパク質の天然結合パートナーに対して低減された結合を示す変異体Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、変異体Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、野生型Ｎｉｖ－Ｇの変異体であり、天然結合パートナーであるエフリンＢ２またはエフリンＢ３の一方または両方に対して低減された結合を示す。いくつかの実施形態では、変異体Ｇ－タンパク質または生物学的に活性な部分、例えば、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、天然結合パートナーに対して低減された結合を示す。いくつかの実施形態では、エフリンＢ２またはエフリンＢ３に対する低減された結合は、５％もしくは約５％、１０％もしくは約１０％、１５％もしくは約１５％、２０％もしくは約２０％、２５％もしくは約２５％、３０％もしくは約３０％、４０％もしくは約４０％、５０％もしくは約５０％、６０％もしくは約６０％、７０％もしくは約７０％、８０％もしくは約８０％、９０％もしくは約９０％、または１００％もしくは約１００％を超えて低減される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異は、形質導入効率を改善し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異は、エフリンＢ２またはエフリンＢ３ではない他の所望の細胞種の特異的標的化を許容する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異は、少なくとも１つの天然受容体に結合する能力の少なくとも部分的な欠如をもたらし、例えば、エフリンＢ２またはエフリンＢ３のうちの少なくとも一方への結合を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異は、天然受容体の認識を妨害する。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、ＨｅＶ－Ｇまたはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分であり、エフリンＢ２またはエフリンＢ３に結合する。いくつかの態様では、ＨｅＶ－Ｇは、配列番号２３または２４に記載のアミノ酸の配列を有するか、またはエフリンＢ２もしくはエフリンＢ３に結合することができるその機能的に活性なバリアントもしくはその生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、機能的に活性なバリアントまたは生物学的に活性な部分は、配列番号２３または２４に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、エフリンＢ２またはＢ３への結合を保持する。例示的な生物学的に活性な部分は、細胞質ドメインの全てまたは一部分、例えば、１つまたは複数、例えば、１～４９個の連続Ｎ末端アミノ酸残基を欠いたＮ末端切り詰めバリアントを含む。エフリンＢ２またはＢ３への結合を保持するという言及は、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の少なくとも５％または少なくとも約５％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の１０％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の１５％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の２０％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の２５％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の３０％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の３５％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の４０％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の４５％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の５０％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の５５％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の６０％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の６５％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の７０％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも７５％もしくは少なくとも約７５％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＮｉＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、または例えば、配列番号２３もしくは２４に記載の対応する野生型ＨｅＶ－Ｇの結合レベルもしくは結合度の、例えば、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％である結合を含む。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質またはその生物学的は、野生型Ｇタンパク質の天然結合パートナーに対して低減された結合を示す変異体Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、変異体Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、野生型Ｎｉｖ－Ｇの変異体であり、天然結合パートナーであるエフリンＢ２またはエフリンＢ３の一方または両方に対して低減された結合を示す。いくつかの実施形態では、変異体Ｇ－タンパク質または生物学的に活性な部分、例えば、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、天然結合パートナーに対して低減された結合を示す。いくつかの実施形態では、エフリンＢ２またはエフリンＢ３に対する低減された結合は、５％もしくは約５％、１０％もしくは約１０％、１５％もしくは約１５％、２０％もしくは約２０％、２５％もしくは約２５％、３０％もしくは約３０％、４０％もしくは約４０％、５０％もしくは約５０％、６０％もしくは約６０％、７０％もしくは約７０％、８０％もしくは約８０％、９０％もしくは約９０％、または１００％もしくは約１００％を超えて低減される。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、エフリンＢ２及びエフリンＢ３の一方または両方との相互作用に関与する残基において１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、配列番号４に記載の番号付けを参照して変異Ｅ５０１Ａ、Ｗ５０４Ａ、Ｑ５３０Ａ、及びＥ５３３Ａに対応する。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、変異体Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号４に記載の番号付けを参照してＥ５０１Ａ、Ｗ５０４Ａ、Ｑ５３０Ａ、及びＥ５３３Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する変異体Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号４を参照してＥ５０１Ａ、Ｗ５０４Ａ、Ｑ５３０Ａ、及びＥ５３３Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含有し、Ｎ末端切り詰めを含有するその生物学的に活性な部分である、変異体Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるまたはその近くの最大５個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの６個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの７個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの８個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの９個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１０個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの１１個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの１２個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの１３個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの１４個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大１５個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの１６個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの１７個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの１８個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの１９個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２０個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの２１個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるまたはその近くの２２個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの２３個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの２４個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大２５個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの２６個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの２７個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの２８個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの２９個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３０個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３１個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの３２個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの３３個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるまたはその近くの３４個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの３５個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるまたはその近くの最大３６個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３７個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３８個の連続アミノ酸残基、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大３９個の連続アミノ酸残基、または野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号４）のＮ末端におけるもしくはその近くの最大４０個の連続アミノ酸残基を欠いている。
いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号１７もしくは１８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１７もしくは１８に対して少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。特定の実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号１７または１８に記載のアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１７に対して少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。特定の実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号１７に記載のアミノ酸の配列を有する。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１８に対して少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。特定の実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号１８に記載のアミノ酸の配列を有する。
いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号４に記載の番号付けを参照してＥ５０１Ａ、Ｗ５０４Ａ、Ｑ５３０Ａ、及びＥ５３３Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する変異体Ｇタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号４を参照してＥ５０１Ａ、Ｗ５０４Ａ、Ｑ５３０Ａ、及びＥ５３３Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含有し、Ｎ末端切り詰めを含有するその生物学的に活性な部分である、変異体Ｇタンパク質である。
ｂ．Ｆタンパク質
いくつかの実施形態では、ベクター表面標的化部分は、疎水性融合ペプチドドメインを有するタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ベクター表面標的化部分は、ヘニパウイルスＦタンパク質分子またはその生物学的に活性な部分を含む。いくつかの実施形態では、ヘニパウイルスＦタンパク質は、ヘンドラ（Ｈｅｖ）ウイルスＦタンパク質、ニパ（ＮｉＶ）ウイルスＦ－タンパク質、スギ（ＣｅｄＰＶ）ウイルスＦタンパク質、ＭｏｊｉａｎｇウイルスＦタンパク質、もしくはコウモリパラミクソウイルスＦタンパク質、またはそれらの生物学的に活性な部分である。
表２は、Ｆタンパク質の非限定的な例を提供する。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質分子またはその生物学的に活性な部分のＮ末端疎水性融合ペプチドドメインは、脂質二重層の外側で露出している。
ヘニパウイルスのＦタンパク質は、シグナルペプチド（例えば、配列番号２８のアミノ酸残基１～２６に対応する）を含有するＦ０前駆体としてコードされる。シグナルペプチドの切断に次いで、成熟Ｆ０（例えば、配列番号２９）は、細胞表面に輸送され、次いで細胞内に取り込まれ、カテプシンＬによって成熟した膜融合性サブユニットＦ１及びＦ２へと切断される。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、成熟Ｆ０は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆ１サブユニットは、配列番号４６に記載のアミノ酸配列の配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆ２サブユニットは、配列番号３９に記載のアミノ酸配列の配列を含む。Ｆ１及びＦ２サブユニットは、ジスルフィド結合によって会合し、細胞表面に戻ってリサイクルされる。Ｆ１サブユニットは、Ｆ１サブユニットのＮ末端に位置する融合ペプチドドメインを含有し、そこでそれは細胞膜に挿入して融合を駆動することができる。いくつかの態様では、融合は、Ｆタンパク質とＧタンパク質との会合によって遮断され、これはＧタンパク質が標的分子と結合して、Ｆからのその解離及び融合ペプチドの露出をもたらして膜融合が媒介されるまで続く。
異なるヘニパウイルス種の間で、Ｆタンパク質の配列及び活性は、高度に保存されている。例えば、ＮｉＶ及びＨｅＶウイルスのＦタンパク質は、８９％のアミノ酸配列同一性を共有する。さらに、場合によっては、ヘニパウイルスＦタンパク質は、融合を誘発するための他の種由来のＧタンパク質との適合性を示す（Ｂｒａｎｄｅｌ－Ｔｒｅｔｈｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２０１９．９３（１３）：ｅ００５７７－１９）。いくつかの態様または提供される標的変更された脂質粒子において、Ｆタンパク質は、Ｇタンパク質に対して異種であり、すなわちＦ及びＧタンパク質または生物学的に活性な部分は、異なるヘニパウイルス種に由来する。例えば、Ｆタンパク質は、ヘンドラウイルスに由来し、Ｇタンパク質は、ニパウイルスに由来する。他の態様では、Ｆタンパク質は、ヘニパウイルスの異なる種由来のＦタンパク質の領域を含有するキメラＦタンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質のアミノ酸残基の領域をヘニパウイルスの１つの種から別の種に交換することにより、そのアミノ酸挿入を含む種のＧタンパク質への融合がもたらされ得る（Ｂｒａｎｄｅｌ－Ｔｒｅｔｈｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２０１９．９３（１３）：ｅ００５７７－１９）。場合によっては、キメラＦタンパク質は、１つのヘニパウイルス種由来の細胞外ドメインならびに異なるヘニパウイルス種由来の膜貫通及び／または細胞質ドメインを含有する。例えば、Ｆタンパク質は、ヘンドラウイルスの細胞外ドメイン及びニパウイルスの膜貫通／細胞質ドメインを含有する。本明細書に開示されるＦタンパク質配列は、主として、Ｎ末端シグナル配列を含む発現配列として開示される。かかるＮ末端シグナル配列は、翻訳と同時または翻訳後に一般的に切断されるため、Ｎ末端シグナル配列を欠いたものとして、本明細書に開示される全てのＦタンパク質配列に対する成熟タンパク質配列もまた企図される。
Figure 2024503027000005
Figure 2024503027000006
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、もしくは配列番号３７のうちのいずれか１つによって記載される配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされるか、または配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、もしくは配列番号３７のうちのいずれか１つと少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、少なくとも９６％もしくは少なくとも約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％同一である配列を有するその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、または配列番号３７のうちのいずれか１つによって記載される配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされる。
特定の実施形態では、Ｆタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分は、第ＩＶ．Ａ．２節に記載のＧタンパク質（例えば、ＮｉＶ－ＧまたはＨｅＶ－Ｇ）等のヘニパウイルスＧタンパク質と併せて、膜融合活性を保持する。膜融合活性は、２つの膜内腔の融合、例えば、ヘニパウイルスＦ及びＧタンパク質をその脂質二重層に埋め込まれた状態で有する標的化脂質粒子の内腔と、標的細胞、例えば、標的化エンベロープタンパク質によって認識されるかまたは結合される表面受容体または分子を含有する細胞の細胞質との融合を促進するか、または容易にするための、Ｇタンパク質と併せたＦタンパク質の活性を含む。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質及びＧタンパク質は、同じヘニパウイルス種（例えば、ＮｉＶ－Ｇ及びＮｉＶ－Ｆ）に由来する。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質及びＧタンパク質は、異なるヘニパウイルス種（例えば、ＮｉＶ－Ｇ及びＨｅＶ－Ｆ）に由来する。特定の実施形態では、機能的に活性なバリアントまたは生物学的に活性な部分のＦタンパク質は、カテプシンＬによって切断される切断部位（例えば、配列番号３０のアミノ酸１０９～１１０の間の切断部位に対応する）を保持する。
特定の実施形態では、Ｆタンパク質は、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、もしくは配列番号３７に記載のアミノ酸の配列を有するか、または膜融合活性を保持するその機能的に活性なバリアントもしくはその生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、機能的に活性なバリアントは、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、または配列番号３７に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ヘニパウイルスＧタンパク質（例えば、ＮｉＶ－ＧまたはＨｅＶ－Ｇ）と併せて膜融合活性を保持する。いくつかの実施形態では、生物学的に活性な部分は、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、または配列番号３７に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。
膜融合活性を保持するという言及は、例えば、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、または配列番号３７に記載の対応する野生型Ｆタンパク質の結合レベルまたは結合度の１０％～１５０％もしくは約１０％～約１５０％またはそれよりも高い、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも１０％もしくは少なくとも約１０％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも１５％もしくは少なくとも約１５％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも２０％もしくは少なくとも約２０％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも２５％もしくは少なくとも約２５％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも３０％もしくは少なくとも約３０％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも３５％もしくは少なくとも約３５％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも４０％もしくは少なくとも約４０％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも４５％もしくは少なくとも約４５％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも５０％もしくは少なくとも約５０％、例えば、対応する野生型ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも５５％もしくは少なくとも約５５％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも６０％もしくは少なくとも約６０％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも６５％もしくは少なくとも約６５％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも７０％もしくは少なくとも約７０％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも７５％もしくは少なくとも約７５％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも１００％もしくは少なくとも約１００％、または例えば、対応する野生型Ｆタンパク質の膜融合活性レベルもしくは膜融合活性度の少なくとも１２０％もしくは少なくとも約１２０％である、（ヘニパウイルスＦタンパク質と併せた）活性を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、１つまたは複数のアミノ酸挿入、欠失、置換、または切り詰め等の１つまたは複数のアミノ酸変異を含有する機能的に活性な断片または生物学的に活性な部分である変異体Ｆタンパク質である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異は、参照Ｆタンパク質配列と比較した、アミノ酸のアミノ酸挿入、欠失、置換、または切り詰めに関する。いくつかの実施形態では、参照Ｆタンパク質配列は、Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分の野生型配列である。いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質またはその生物学的に活性な部分は、野生型ヘンドラ（Ｈｅｖ）ウイルスＦタンパク質、ニパ（ＮｉＶ）ウイルスＦ－タンパク質、スギ（ＣｅｄＰＶ）ウイルスＦタンパク質、ＭｏｊｉａｎｇウイルスＦタンパク質、またはコウモリパラミクソウイルスＦタンパク質の変異体である。いくつかの実施形態では、野生型Ｆタンパク質は、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、または配列番号３７のうちのいずれか１つをコードするヌクレオチドの配列によってコードされる。
いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質は、Ｎ末端及び／またはＣ末端切り詰め断片である、野生型Ｆタンパク質の生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質またはその野生型Ｆタンパク質の生物学的に活性な部分は、１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異は、形質導入効率を改善し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異は、膜融合性能力を増加させ得る。例示的な変異は、記載される任意のものを含み、例えば、Ｋｈｅｔａｗａｔ ａｎｄ Ｂｒｏｄｅｒ ２０１０ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ７：３１２、Ｗｉｔｔｉｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１３ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０：９９７－１００５、国際公開、特許出願第ＷＯ／２０１３／１４８３２７号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質は、切り詰められており、野生型Ｆタンパク質、例えば、配列番号２８～３７のうちのいずれか１つに記載のＦタンパク質をコードするヌクレオチドの配列によってコードされる野生型Ｆタンパク質のＣ末端におけるまたはその近くの最大２０個の連続アミノ酸残基を欠いている、生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質は、切り詰められており、野生型Ｆタンパク質のＣ末端における最大２０個の連続アミノ酸、例えば、最大１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個の連続アミノ酸を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質は、配列番号１５に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質は、配列番号２０に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質は、切り詰められており、野生型Ｆタンパク質のＣ末端における最大１９個の連続アミノ酸、例えば、最大１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個の連続アミノ酸を欠いている。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分は、Ｆ１サブユニットまたはその膜融合性部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｆ１サブユニットは、Ｆ０前駆体のタンパク質分解的に切断された部分である。いくつかの実施形態では、Ｆ０前駆体は、不活性である。いくつかの実施形態では、Ｆ０前駆体の切断は、ジスルフィド結合したＦ１＋Ｆ２ヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、切断は、融合ペプチドを露出させ、成熟Ｆタンパク質を生み出す。いくつかの実施形態では、切断は、単一の塩基性残基にてまたはその周辺で起こる。いくつかの実施形態では、切断は、ＮｉＶ－Ｆタンパク質のアルギニン１０９にて起こる。いくつかの実施形態では、切断は、ヘンドラウイルスＦタンパク質のリジン１０９にて起こる。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、野生型ニパウイルスＦ（ＮｉＶ－Ｆ）タンパク質であるか、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、Ｆ０前駆体は、配列番号２０に記載の配列をコードするヌクレオチドの配列によってコードされる。コーディング核酸は、配列ＭＶＶＩＬＤＫＲＣＹ ＣＮＬＬＩＬＩＬＭＩ ＳＥＣＳＶＧ（配列番号３８）を有するシグナルペプチド配列をコードし得る。いくつかの例では、Ｆタンパク質は、配列番号４６に記載の配列を含むＦ１サブユニット及び配列番号３９に記載の配列を含むＦ２サブユニットへと切断される。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、配列番号３０に記載の配列をコードするヌクレオチドの配列によってコードされるＮｉＶ－Ｆタンパク質であるか、または配列番号３０に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、８６％もしくは約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、配列番号３０に記載の配列をコードするヌクレオチドの配列によってコードされるＮｉＶ－Ｆタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆ－タンパク質は、３０に記載の配列を有するか、または３０に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、８６％もしくは約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆ－タンパク質は、３０に記載の配列を有する。特定の実施形態では、Ｆタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分は、カテプシンＬによって切断される切断部位を保持する。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分は、配列番号４６に記載の配列、あるいは配列番号４６に対して少なくとも９０％もしくは約９０％、少なくとも９１％もしくは約９１％、少なくとも９２％もしくは約９２％、少なくとも９３％もしくは約９３％、少なくとも９４％もしくは約９４％、少なくとも９５％もしくは約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは約９７％、少なくとも９８％もしくは約９８％、または少なくとも９９％もしくは約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、Ｆ１サブユニットを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分は、配列番号３９に記載の配列、あるいは配列番号３９に対して少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、Ｆ２サブユニットを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分は、配列番号４６に記載の配列、あるいは配列番号４６に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、８６％もしくは約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、Ｆ１サブユニットを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分は、配列番号３９に記載の配列、あるいは配列番号３９に対して少なくとも８０％もしくは少なくとも約８０％、少なくとも８１％もしくは少なくとも約８１％、少なくとも８２％もしくは少なくとも約８２％、少なくとも８３％もしくは少なくとも約８３％、少なくとも８４％もしくは少なくとも約８４％、少なくとも８５％もしくは少なくとも約８５％、８６％もしくは約８６％、少なくとも８７％もしくは少なくとも約８７％、少なくとも８８％もしくは少なくとも約８８％、または少なくとも８９％もしくは少なくとも約８９％、少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、Ｆ２サブユニットを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、切り詰められており、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（例えば、配列番号４０に記載）のＣ末端におけるまたはその近くの最大２０個の連続アミノ酸残基を欠いている、その生物学的に活性な部分である変異体ＮｉＶ－Ｆタンパク質である。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｆタンパク質は、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｆタンパク質は、配列番号２００に対して少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有する配列を有する。いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質は、配列番号４６に記載の配列を有するＦ１タンパク質を含有する。いくつかの実施形態では、変異体Ｆタンパク質は、配列番号４６に対して少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有する配列を有する。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４０）のＣ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰め、及びＮ結合型グリコシル化部位における点変異を含む、その生物学的に活性な部分である変異体ＮｉＶ－Ｆタンパク質である。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｆタンパク質は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＮｉＶ－Ｆタンパク質は、配列番号１５に対して少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有する配列を有する。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４０）のＣ末端におけるまたはその近くの２５アミノ酸の切り詰めを含む、その生物学的に活性な部分である変異体ＮｉＶ－Ｆタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４０）のＣ末端におけるまたはその近くの２２アミノ酸の切り詰めを含む、その生物学的に活性な部分である変異体ＮｉＶ－Ｆタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質は、配列番号２０に記載の配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質は、配列番号２０に対して少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有する配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされる。
いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質は、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４０）のＣ末端におけるまたはその近くの２２アミノ酸の切り詰めを含む、その生物学的に活性な部分である変異体ＮｉＶ－Ｆタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号２１に対して少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質は、配列番号２１に記載の配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＮｉＶ－Ｆタンパク質は、配列番号２１に対して少なくとも９０％もしくは少なくとも約９０％、少なくとも９１％もしくは少なくとも約９１％、少なくとも９２％もしくは少なくとも約９２％、少なくとも９３％もしくは少なくとも約９３％、少なくとも９４％もしくは少なくとも約９４％、少なくとも９５％もしくは少なくとも約９５％、９６％もしくは約９６％、少なくとも９７％もしくは少なくとも約９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも約９８％、または少なくとも９９％もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有する配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされる。
Ｂ．ＣＤ８結合物質
本明細書に開示されるウイルスベクターは、１つまたは複数のＣＤ８結合物質を含む。例えば、ＣＤ８結合物質は、タンパク質フソゲンまたはウイルスエンベロープタンパク質に融合されるか、またはそれに組み込まれてもよい。別の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、膜貫通ドメインとの融合を介してウイルスエンベロープに組み込まれてもよい。
例示的なＣＤ８結合物質には、ＣＤ８アルファ及びＣＤ８ベータのうちの１つまたは複数に結合する抗体及びその断片（例えば、ｓｃＦｖ、ＶＨＨ）が含まれる。かかる抗体は、任意の種に由来してもよく、例えば、マウス、ウサギ、ヒト、ヒト化、またはラクダ科動物抗体であり得る。例示的な抗体には、ＷＯ２０１４０２５８２８、ＷＯ２０１４１６４５５３、ＷＯ２０２００６９４３３、ＷＯ２０１５１８４２０３、ＵＳ２０１６０１７６９６９、ＷＯ２０１７１３４３０６、ＷＯ２０１９０３２６６１、ＷＯ２０２０２５７４１２、ＷＯ２０１８１７００９６、ＷＯ２０２００６０９２４、ＵＳ１０７３０９４４、ＵＳ２０２００１７２６２０に開示されるもの、及び非ヒト抗体ＯＫＴ８；ＲＰＡ－Ｔ８、１２．Ｃ７（Ｎｏｖｕｓ）；１７Ｄ８、３Ｂ５、ＬＴ８、ＲＩＶ１１、ＳＰ１６、ＹＴＣ１８２．２０、ＭＥＭ－３１、ＭＥＭ－８７、ＲＡＶＢ３、Ｃ８／１４４Ｂ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）；２ＳＴ８．５Ｈ７、Ｂｕ８８、３Ｃ３９、Ｈｉｔ８ａ、ＳＰＭ５４８、ＣＡ－８、ＳＫ１、ＲＰＡ－Ｔ８（ＧｅｎｅＴｅｘ）；ＵＣＨＴ４（Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ）；ＢＷ１３５／８０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）；Ｇ４２－８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；Ｃ８／１７７９Ｒ、ｍＡＢ １０４（Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）；Ｂ－Ｚ３１（Ｓａｐｐｈｉｒｅ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ）；３２－Ｍ４、５Ｆ１０、ＭＣＤ８、ＵＣＨ－Ｔ４、５Ｆ２（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）；Ｄ８Ａ８Ｙ、ＲＰＡ－Ｔ８（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）が含まれる。他の例示的な結合物質には、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎｓ）、及びフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）骨格に基づく結合物質が含まれる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号５５、５６、及び５７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号４７に記載の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、それぞれ配列番号６０、６１、及び６２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号６３、６４、及び６５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号４８に記載の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、それぞれ配列番号６８、６９、及び７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号５５、５６、及び７１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号４９に記載の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、それぞれ配列番号７４、７５、及び７６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号７７、７８、及び７９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号８１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号５０に記載の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、それぞれ配列番号８２、８３、及び８４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号５１に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号４７、４８、４９、５０、または５１のうちのいずれか１つに記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号４７に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号４８に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号４９に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号５０に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号５１に記載の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＵＳ２０１９／０１４４８８５（参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されるような任意のＣＤ８結合物質を含む。
いくつかの実施形態では、タンパク質フソゲンまたはウイルスエンベロープタンパク質は、融合タンパク質または標的化タンパク質（例えば、ヘマグルチニンタンパク質）におけるアミノ酸残基を変異させることによって標的変更されてもよい。特定の実施形態では、フソゲン（例えば、Ｇタンパク質）は、フソゲンの天然結合パートナーに対する結合を低減するように変異させられる。いくつかの実施形態では、フソゲンは、野生型Ｎｉｖ－Ｇの変異体であり、天然結合パートナーであるエフリンＢ２またはエフリンＢ３の一方または両方に対して低減された結合を示す、上記に記載される任意のものを含めた、変異体Ｇタンパク質またはその生物学的に活性な部分であるか、またはそれを含有する。故に、いくつかの態様では、フソゲンは、変化した指向性を示すように標的変更され得る。いくつかの実施形態では、該結合は、野生型表面糖タンパク質の結合と比較して標的変更された結合を付与し、その場合、新たなまたは異なる結合活性が付与される。特定の実施形態では、該結合は、野生型Ｇタンパク質の結合と比較して標的変更された結合を付与し、その場合、新たなまたは異なる結合活性が付与される。いくつかの実施形態では、フソゲンは、ランダムに変異させられる。いくつかの実施形態では、フソゲンは、合理的に変異させられる。いくつかの実施形態では、フソゲンは、指向性進化に供される。いくつかの実施形態では、フソゲンは、切り詰められており、ペプチドのサブセットのみがウイルスベクターにおいて使用される。いくつかの実施形態では、麻疹ヘマグルチニンタンパク質におけるアミノ酸残基を、タンパク質の結合特性を変化させるように変異させて、融合を方向転換してもよい（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ９４２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ｖｏｌ．１６ ｎｏ．８，１４２７－１４３６ Ａｕｇ．２００８、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ１０６０、ＤＯＩ：１０．１１２８／ＪＶＩ．７６．７．３５５８－３５６３．２００２、ＤＯＩ：１０．１１２８／ＪＶＩ．７５．１７．８０１６－８０２０．２００１、ｄｏｉ：１０．１０７３ｐｎａｓ．０６０４９９３１０３）。
いくつかの実施形態では、タンパク質フソゲンは、ＣＤ８結合物質を融合タンパク質または標的化タンパク質（例えば、ヘマグルチニンタンパク質）に共有結合性でコンジュゲートすることによって標的変更されてもよい。いくつかの実施形態では、フソゲン及びＣＤ８結合物質は、ＣＤ８結合物質に連結されたフソゲンを含むキメラタンパク質の発現によって共有結合性でコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が、ｃＦｖの結合標的を提示する細胞の方へ融合活性を方向転換するためにフソゲンにコンジュゲートされ得る（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ１０６０、ＤＯＩ １０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１２－１１－４６８５７９、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍｅｔｈ．１５１４、ｄｏｉ：１０．１００６／ｍｔｈｅ．２００２．０５５０，ＨＵＭＡＮ ＧＥＮＥ ＴＨＥＲＡＰＹ １１：８１７－ ８２６、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ９４２、ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２６３８１、ＤＯＩ １０．１１８６／ｓ１２８９６－０１５－０１４２－ｚ）。いくつかの実施形態では、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、ならびに異なるＤＡＲＰｉｎｓの組み合わせ（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｔｏ．２０１６．３）が、ＤＡＲＰｉｎの結合標的を提示する細胞の方へ融合活性を方向転換するためにフソゲンにコンジュゲートされ得る（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｔ．２０１３．１６、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｔ．２０１０．２９８、ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１５００９５６）。いくつかの実施形態では、受容体リガンド及び抗原が、標的受容体を提示する細胞の方へ融合活性を方向転換するためにフソゲンにコンジュゲートされ得る（ＤＯＩ：１０．１０８９／ｈｇｔｂ．２０１２．０５４、ＤＯＩ：１０．１１２８／ＪＶＩ．７６．７．３５５８－３５６３．２００２）。いくつかの実施形態では、標的化タンパク質にはまた、抗体またはその抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド結合型Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、線状抗体、単一ドメイン抗体、例えば、ｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨのいずれか）、ナノボディ、またはラクダ科動物ＶＨＨドメイン）、フィブロネクチンポリペプチドミニボディ等の抗原結合フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）骨格、リガンド、サイトカイン、ケモカイン、またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）も含まれ得る。いくつかの実施形態では、タンパク質フソゲンは、ＣＤ８結合物質を融合タンパク質または標的化タンパク質（例えば、ヘマグルチニンタンパク質）に非共有結合性でコンジュゲートすることによって標的変更されてもよい。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、標的細胞上の抗原を標的とする抗体のＦｃ領域に結合するように操作して、抗体の標的を提示する細胞の方へ融合活性を方向転換することができる（ＤＯＩ：１０．１１２８／ＪＶＩ．７５．１７．８０１６－８０２０．２００１、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ１１９２）。いくつかの実施形態では、変化したフソゲン及び変化していないフソゲンが、同じレトロウイルスベクターまたはＶＬＰ上に提示されてもよい（ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１４．０１．０５１）。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質には、ヒト化抗体分子、無傷のＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体；二重または多重特異性抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）等）；Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、及び単離されたＣＤＲまたはそれらの組等の抗体断片；一本鎖Ｆｖ；ポリペプチド－Ｆｃ融合体；単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲ等のサメ単一ドメイン抗体またはその断片）；ラクダ科抗体；マスクされた抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））；Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（「ＳＭＩＰ（商標）」）；一本鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））；ＶＨＨ；Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）；ナノボディ（登録商標）；ミニボディ；ＢｉＴＥ（登録商標）；アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮ（登録商標）；Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）；ＤＡＲＴ；ＴＣＲ様抗体；Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）；Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）；ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎｓ；Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）；ならびにＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）が含まれる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ペプチドである。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）等の抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、単一ドメイン抗体等の抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＶＨＨである。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトまたはヒト化のものであり得る。いくつかの実施形態では、抗体またはその一部分は、天然に存在する。いくつかの実施形態では、抗体またはその一部分は、合成である。
いくつかの実施形態では、抗体は、所望の標的リガンドに対する特異性を有するようにファージディスプレイライブラリーから生成され得る。いくつかの実施形態では、ファージディスプレイライブラリーは、Ａｒｂａｂｉ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，４１４，５２１－５２６（１９９７）、Ｌａｕｗｅｒｅｙｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１７，３５１２－３５２０（１９９８）、Ｄｅｃａｎｎｉｅｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，７，３６１－３７０（１９９９）に記載されるように、種々の抗原で免疫化されたラクダ科動物のＶＨＨレパートリーから生成される。いくつかの実施形態では、ファージディスプレイライブラリーは、非免疫化ラクダ科動物の抗体断片を含めて生成される。いくつかの実施形態では、ヒト単一ドメイン抗体のライブラリーが、１つまたは複数の骨格に多様性を導入することによって合成的に生成される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質のＣ末端は、Ｇタンパク質（例えば、フソゲン）またはその生物学的に活性な部分のＣ末端に結合されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質のＮ末端は、脂質二重層の外表面で露出している。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ウイルスベクターの表面に提示された唯一の非ウイルス配列である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ウイルスベクターの唯一の膜結合型非ウイルス配列である。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、Ｔ細胞に結合するかまたはそれを刺激する分子をＣＤ８結合物質以外に含有しない。
いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、標的化部分によって結合される細胞の方へ融合活性を方向転換するため、またはホーミングに影響を及ぼすために、タンパク質フソゲンにコンジュゲートされていないＣＤ８結合物質を提示し得る。
いくつかの実施形態では、ヒトに感染しないウイルスまたは生物に由来するタンパク質フソゲンは、患者において天然の融合標的を有せず、故に高い特異性を有する。
Ｖ．操作された受容体ペイロード
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるウイルスベクターは、操作された受容体をコードする。いくつかの実施形態では、提供される方法において使用するための、または提供される方法に関連して投与される細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）等の操作された抗原受容体を含有するか、またはそれを含有するように操作される。また、かかる細胞の集団、かかる細胞を含有する及び／またはかかる細胞が濃縮された、例えば、Ｔ細胞またはＣＤ８＋細胞等のある特定の種類の細胞が濃縮または選択される組成物も提供される。組成物の中には、例えば、養子細胞療法のための投与に向けた、薬学的組成物及び製剤がある。また、提供される方法及び／または提供される製造品もしくは組成物に従って、該細胞及び該組成物を対象、例えば、患者に投与するための治療方法も提供される。
いくつかの実施形態では、遺伝子移入は、最初に細胞を刺激することなく、例えば、サイトカインまたは活性化マーカーの発現によって測定されるような、例えば、増殖、生存、及び／または活性化等の応答を誘導する刺激物質と細胞を組み合わせ、続いて刺激された細胞に核酸を導入、例えば、形質導入し、任意で培養においてインキュベートまたは増殖させて臨床応用に十分な数にすることによって遂行される。
ウイルスベクターは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む抗原受容体、及びトランスジェニックＴ細胞受容体（ＴＣＲ）等の他の抗原結合受容体等の、組換え受容体を発現し得る。また、受容体の中には、他のキメラ受容体がある。
Ａ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
提供される方法及び使用のいくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体等のキメラ受容体は、所望の抗原（例えば、腫瘍抗原）に対する特異性を提供する抗原結合またはリガンド結合ドメイン（例えば、抗体または抗体断片）を細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わせる、１つまたは複数のドメインを含有する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次活性化シグナルまたは一次シグナルを提供する、Ｔ細胞刺激性または活性化ドメイン等の刺激性または活性化細胞内ドメイン部分である。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能を容易にするための共刺激シグナル伝達ドメインを含有するか、または追加的に含有する。いくつかの実施形態では、免疫細胞内に遺伝子操作された場合のキメラ受容体は、Ｔ細胞活性を調節することができ、また場合によっては、Ｔ細胞の分化または恒常性を調節することができ、それによって、例えば、養子細胞療法において使用するための、インビボでの寿命、生存、及び／または存続が改善された遺伝子操作された細胞をもたらす。
ＣＡＲを含めた例示的な抗原受容体、ならびにかかる受容体を細胞内に操作及び導入するための方法には、例えば、Ｗ０２０００１４２５７、ＷＯ２０１３１２６７２６、ＷＯ２０１２／１２９５１４、ＷＯ２０１４０３１６８７、ＷＯ２０１３／１６６３２１、ＷＯ２０１３／０７１１５４、Ｗ０２０１３／１２３０６１、米国特許出願公開第ＵＳ２００２１３１９６０号、同第ＵＳ２０１３２８７７４８号、同第ＵＳ２０１３０１４９３３７号、米国特許第６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，２５２，５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４４６，１７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６５，２０９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４，３５３号、及び同第８，４７９，１１８号、ならびに欧州特許出願第ＥＰ２５３７４１６号に記載されるもの、及び／またはＳａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１３ Ａｐｒｉｌ、３（４）：３８８－３９８、Ｄａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（４）：ｅ６１３３８、Ｔｕｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２ Ｏｃｔｏｂｅｒ、２４（５）：６３３－３９、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，２０１２ Ｍａｒｃｈ １８（２）：１６０－７５により記載されるものが含まれる。いくつかの態様では、抗原受容体には、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されるようなＣＡＲ、及びＷＯ／２０１４０５５６６８に記載されるものが含まれる。ＣＡＲの例としては、ＷＯ２０１４０３１６８７、ＵＳ８，３３９，６４５、ＵＳ７，４４６，１７９、ＵＳ２０１３／０１４９３３７、ＵＳ７，４４６，１９０、ＵＳ８，３８９，２８２、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１０，２６７－２７６、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５（９）：６８９－７０１、及びＢｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１３ ５（１７７）等の、上述の刊行物のうちのいずれかに開示されるようなＣＡＲが挙げられる。また、ＷＯ２０１４０３１６８７、ＵＳ８，３３９，６４５、ＵＳ７，４４６，１７９、ＵＳ２０１３／０１４９３３７、ＵＳ７，４４６，１９０、及びＵＳ８，３８９，２８２も参照されたい。ＣＡＲ等の組換え受容体は一般に、抗体分子の一部分、一般には抗体の可変重（ＶＨ）鎖領域及び／または可変軽（ＶＬ）鎖領域、例えば、ｓｃＦｖ抗体断片等の、細胞外抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ分子の抗原結合ドメインには、抗体、抗体断片、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ａ（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳｄＡｂ）、ＶＨもしくはＶＬドメイン、またはラクダ科動物ＶＨＨドメインが含まれる。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗原結合ドメインは、抗体またはその抗原結合部分であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖまたはＦａｂであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗原結合ドメインは、ＣＤ１９抗体、ＣＤ２２抗体、Ｔ細胞アルファ鎖抗体、Ｔ細胞β鎖抗体、Ｔ細胞γ鎖抗体、Ｔ細胞δ鎖抗体、ＣＣＲ７抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ４抗体、ＣＤ５抗体、ＣＤ７抗体、ＣＤ８抗体、ＣＤ１１ｂ抗体、ＣＤ１１ｃ抗体、ＣＤ１６抗体、ＣＤ２０抗体、ＣＤ２１抗体、ＣＤ２５抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ３４抗体、ＣＤ３５抗体、ＣＤ４０抗体、ＣＤ４５ＲＡ抗体、ＣＤ４５ＲＯ抗体、ＣＤ５２抗体、ＣＤ５６抗体、ＣＤ６２Ｌ抗体、ＣＤ６８抗体、ＣＤ８０抗体、ＣＤ９５抗体、ＣＤ１１７抗体、ＣＤ１２７抗体、ＣＤ１３３抗体、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）抗体、ＣＤ１６３抗体、Ｆ４／８０抗体、ＩＬ－４Ｒａ抗体、Ｓｃａ－１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＧＩＴＲ抗体ＧＡＲＰ抗体、ＬＡＰ抗体、グランザイムＢ抗体、ＬＦＡ－１抗体、ＭＲ１抗体、ｕＰＡＲ抗体、またはトランスフェリン受容体抗体のｓｃＦｖまたはＦａｂ断片を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、共刺激ドメインであるシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、第２の共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも２つの共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも３つの共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、リガンドであって、ＣＤ８３と特異的に結合するもののうちの１つまたは複数から選択される共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲが２つ以上の共刺激ドメインを含む場合、２つの共刺激ドメインは、異なる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲが２つ以上の共刺激ドメインを含む場合、２つの共刺激ドメインは、同じである。
本明細書に記載のＣＡＲに加えて、種々のキメラ抗原受容体及びそれらをコードするヌクレオチド配列が当該技術分野で既知であり、本明細書に記載されるようなインビボ及びインビトロでの標的細胞のフソソーム送達及びリプログラミングに好適であろう。例えば、ＷＯ２０１３０４０５５７、ＷＯ２０１２０７９０００、ＷＯ２０１６０３０４１４、Ｓｍｉｔｈ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２０１７．ＤＯＩ：１０．１０３８／ＮＮＡＮＯ．２０１７．５７を参照されたく、同文献の開示は参照により本明細書に援用される。
いくつかの実施形態では、受容体によって標的化される抗原は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、それは、炭水化物または他の分子である。いくつかの実施形態では、抗原は、正常または非標的細胞または組織と比較して、疾患または病態をもつ細胞、例えば、腫瘍または病原性細胞上に選択的に発現または過剰発現される。他の実施形態では、抗原は、正常細胞上に発現され、及び／または操作された細胞上に発現される。
いくつかの実施形態では、受容体によって標的化される抗原は、いくつかの既知のＢ細胞マーカーのうちのいずれか等、Ｂ細胞悪性腫瘍に関連する抗原を含む。いくつかの実施形態では、受容体によって標的化される抗原は、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ２１、ＣＤ５、ＣＤ３３、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、またはＣＤ３０である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９及びＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、第１世代ＣＡＲ、第２世代ＣＡＲ、第３世代ＣＡＲ、及び第４世代ＣＡＲからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、単一の標的抗原に結合する単一の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１つよりも多くの標的抗原、例えば、２つ、３つ、またはそれよりも多くの標的抗原に結合する単一の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、２つの結合ドメインを、各結合ドメインが異なる標的抗原に結合するように含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、２つの結合ドメインを、各結合ドメインが同じ標的抗原に結合するように含む。ＣＤ１９特異的ＣＡＲ、ＣＤ２２特異的ＣＡＲ、及びＣＤ１９／ＣＤ２２二重特異的ＣＡＲを含めた例示的なＣＡＲの詳細な説明は、ＷＯ２０１２／０７９０００、ＷＯ２０１６／１４９５７８、及びＷＯ２０２０／０１４４８２に見出され得、配列表及び図を含めたこれらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗体または抗体断片を含有する細胞外部分を含む。いくつかの態様では、キメラ抗原受容体は、抗体または断片を含有する細胞外部分及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体または断片は、ｓｃＦｖを含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインによって標的化される抗原は、ＣＤ１９である。いくつかの態様では、組換え受容体、例えばＣＡＲの抗原結合ドメイン、及び抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９等のＣＤ１９に結合、例えば、特異的に結合するか、またはそれを特異的に認識する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ１９に特異的な抗体または抗体断片に由来するＶＨ及びＶＬを含有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に結合する抗体または抗体断片は、ＦＭＣ６３及びＳＪ２５Ｃ１等のマウス由来抗体である。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片は、例えば、米国特許公開第ＵＳ２０１６／０１５２７２３号に記載されるようなヒト抗体である。
いくつかの実施形態では、抗原は、ＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ１９に特異的な抗体または抗体断片に由来するＶＨ及びＶＬを含有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に結合する抗体または抗体断片は、ＦＭＣ６３及びＳＪ２５Ｃ１等のマウス由来抗体である。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片は、例えば、米国特許公開第ＵＳ２０１６／０１５２７２３号に記載されるようなヒト抗体である。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＦＭＣ６３に由来する。ＦＭＣ６３とは一般に、ヒト起源のＣＤ１９を発現しているＮａｉｍ－１及びＮａｉｍ－１６細胞に対して産生されたマウスモノクローナルＩｇＧ１抗体を指す（Ｆｉｎｇ，Ｎ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．（１９８７）．Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ ｔｙｐｉｎｇ ＩＩＩ．３０２）。
いくつかの実施形態では、組換え受容体、例えばＣＡＲの抗体部分は、膜貫通ドメインと細胞外抗原結合ドメインとの間のスペーサーをさらに含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ヒンジ領域、例えば、ＩｇＧ４ヒンジ領域、及び／またはＣＨ１／ＣＬ及び／またはＦｃ領域等の、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分を含む。いくつかの実施形態では、定常領域または部分は、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１等のヒトＩｇＧのものである。いくつかの態様では、定常領域の一部分は、抗原認識構成要素、例えばｓｃＦｖと、膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域として機能する。スペーサーは、スペーサーの不在下と比較して、抗原結合に次ぐ細胞の応答性の増加をもたらす長さのものであり得る。例示的なスペーサーには、Ｈｕｄｅｃｅｋ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１９：３１５３、ＷＯ２０１４０３１６８７、米国特許第８，８２２，６４７号または出願公開第ＵＳ２０１４／０２７１６３５号に記載されるものが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、定常領域または部分は、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１等のヒトＩｇＧのものである。
いくつかの実施形態では、抗原受容体は、細胞外ドメインに直接または間接的に連結された細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、細胞外ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを連結する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴ ＡＭを含む。例えば、いくつかの態様では、抗原認識ドメイン（例えば、細胞外ドメイン）は一般に、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達構成要素、例えば、ＣＡＲの場合はＴＣＲ複合体等の抗原受容体複合体を介した活性化、及び／または別の細胞表面受容体を経由するシグナルを模倣するシグナル伝達構成要素に連結されている。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、細胞外ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）と細胞内シグナル伝達ドメインとの間に連結または融合された膜貫通ドメインを含む。故に、いくつかの実施形態では、抗原結合構成要素（例えば、抗体）は、１つまたは複数の膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインに連結されている。
一実施形態では、天然では受容体、例えばＣＡＲにおけるドメインのうちの１つに会合する膜貫通ドメインが使用される。いくつかの事例では、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるために、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのかかるドメインの結合を回避するためのアミノ酸置換によって選択または改変される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、もしくはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、またはそれらの機能的バリアントの少なくとも膜貫通領域を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳ、及びＦＧＦＲ２Ｂ、またはそれらの機能的バリアントの少なくとも膜貫通領域（複数可）を含む。いくつかの実施形態における膜貫通ドメインは、天然供給源または合成供給源のいずれかに由来する。供給源が天然である場合、いくつかの態様におけるドメインは、任意の膜結合型または膜貫通型タンパク質に由来する。膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４に由来するものが含まれる（すなわち、その少なくとも膜貫通領域（複数可）を含む）。代替として、いくつかの実施形態における膜貫通ドメインは、合成である。いくつかの態様では、合成膜貫通ドメインは、主としてロイシン及びバリン等の疎水性残基を含む。いくつかの態様では、フェニルアラニン、トリプトファン、及びバリンのトリプレットが合成膜貫通ドメインの各末端に見られる。いくつかの実施形態では、連結は、リンカー、スペーサー、及び／または膜貫通ドメイン（複数可）による。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通部分を含有する。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインは、直接または間接的に連結され得る。いくつかの実施形態では、細胞外ドメイン及び膜貫通は、本明細書に記載の任意のスペーサー等のスペーサーによって連結される。いくつかの実施形態では、受容体は、ＣＤ２８の細胞外部分等の、膜貫通ドメインの由来となる分子の細胞外部分を含有する。
細胞内シグナル伝達ドメインの中には、天然抗原受容体を介したシグナル、共刺激受容体と組み合わせたかかる受容体を介したシグナル、及び／または共刺激受容体の単独を介したシグナルを模倣または近似するものがある。いくつかの実施形態では、短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカー、例えば、グリシン及びセリン、例えば、グリシン－セリンダブレットを含有するリンカー等の２～１０アミノ酸長のリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインとの間に存在し、それらの間の連結を形成する。
Ｔ細胞活性化は、いくつかの態様では、ＴＣＲを介した抗原依存性一次活性化を開始するもの（一次細胞質シグナル伝達配列）、及び抗原非依存的様態で作用して二次または共刺激シグナルを提供するもの（二次細胞質シグナル伝達配列）の２つのクラスの細胞質シグナル伝達配列によって媒介されるとして説明される。いくつかの態様では、ＣＡＲは、かかるシグナル伝達構成要素の一方または両方を含む。
受容体、例えばＣＡＲは一般に、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達構成要素（単数または複数）を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する一次細胞質シグナル伝達配列を含む。刺激性の様態で作用する一次細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含有し得る。一次細胞質シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例としては、ＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃＲガンマ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、及びＣＤ３イプシロンに由来するものが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲにおける細胞質シグナル伝達分子（複数可）は、細胞質シグナル伝達ドメイン、その一部分、またはＣＤ３ゼータに由来する配列を含有する。
いくつかの実施形態では、受容体は、Ｔ細胞活性化及び細胞傷害作用を媒介するＴＣＲ ＣＤ３鎖、例えば、ＣＤ３ゼータ鎖等の、ＴＣＲ複合体の細胞内構成要素を含む。故に、いくつかの態様では、抗原結合部分は、１つまたは複数の細胞シグナル伝達モジュールに連結されている。いくつかの実施形態では、細胞シグナル伝達モジュールは、ＣＤ３膜貫通ドメイン、ＣＤ３細胞内シグナル伝達ドメイン、及び／または他のＣＤ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内構成要素は、ＣＤ３－ゼータの細胞内シグナル伝達ドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、細胞内構成要素は、Ｆｃ受容体ガンマ鎖由来のシグナル伝達ドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、受容体、例えばＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、またはＣＤ１６等の１つまたは複数の追加の分子の膜貫通ドメイン及び／またはヒンジ部分等の一部分をさらに含む。例えば、いくつかの態様では、ＣＡＲまたは他のキメラ受容体は、ＣＤ３－ゼータ（ＣＤ３－ｚ）またはＦｃ受容体ｇと、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、またはＣＤ１６のうちの１つの一部分とのキメラ分子である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは他のキメラ受容体がライゲーションされると、その受容体の細胞質ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞、例えば、ＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞の正常なエフェクター機能または応答のうちの少なくとも１つを活性化する。例えば、いくつかの関連において、ＣＡＲは、サイトカインまたは他の因子の分泌等、細胞溶解活性またはヘルパーＴ活性等のＴ細胞の機能を誘導する。いくつかの実施形態では、例えば、無傷の免疫刺激性鎖がエフェクター機能シグナルを伝達する場合、抗原受容体構成要素または共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインの切り詰められた部分が、それの代わりに使用される。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメイン（単数または複数）は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列を含み、いくつかの態様では、天然の関連において抗原受容体結合に次いでかかる受容体と共同して作用してシグナル伝達を開始する、共受容体のそれらもまた含む。
天然ＴＣＲの関連において、完全な活性化は一般に、ＴＣＲを介したシグナル伝達のみならず、共刺激シグナルもまた必要とする。故に、いくつかの実施形態では、完全な活性化を促進するために、二次または共刺激シグナルを生成するための構成要素もまたＣＡＲに含められる。他の実施形態では、ＣＡＲは、共刺激シグナルを生成するための構成要素を含まない。いくつかの態様では、同じ細胞において追加のＣＡＲが発現され、二次または共刺激シグナルを生成するための構成要素を提供する。
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞共刺激分子の細胞内ドメインを含有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、０Ｘ４０、ＤＡＰ１０、及びＩＣＯＳ等の共刺激受容体のシグナル伝達ドメイン及び／または膜貫通部分を含む。いくつかの態様では、同じＣＡＲは、活性化構成要素及び共刺激構成要素の両方を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、例えば、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に、Ｔ細胞共刺激分子またはその機能的バリアントに由来する細胞内ドメインを含有する。いくつかの態様では、Ｔ細胞共刺激分子は、ＣＤ２８または４１ＢＢである。
いくつかの実施形態では、活性化ドメインは、１つのＣＡＲ内に含まれるが、一方で、共刺激構成要素は、別の抗原を認識する別のＣＡＲによって提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、活性化または刺激性ＣＡＲ、共刺激性ＣＡＲを含み、両方とも同じ細胞上に発現される（ＷＯ２０１４／０５５６６８を参照されたい）。いくつかの態様では、細胞は、１つまたは複数の刺激性または活性化ＣＡＲ及び／または共刺激性ＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、細胞は、阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，５（２１５）（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３）を参照されたい）、例えば、疾患または病態に関連する及び／またはそれに特異的な抗原以外の抗原を認識するＣＡＲをさらに含み、そうすることで、疾患標的化ＣＡＲを介して送達される活性化シグナルが、阻害性ＣＡＲのそのリガンドへの結合によって減弱または阻害されて、例えば、オフターゲット効果が低減される。
ある特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３－ゼータ）細胞内ドメインに連結されたＣＤ２８膜貫通及びシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ細胞内ドメインに連結されたキメラＣＤ２８及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）共刺激ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、細胞質部分において１つまたは複数、例えば、２つ以上の共刺激ドメイン及び活性化ドメイン、例えば、一次活性化ドメインを包含する。例示的なＣＡＲは、ＣＤ３－ゼータ、ＣＤ２８、及び４－１ＢＢの細胞内構成要素を含む。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン及びＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインの細胞内構成要素を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインの細胞内構成要素を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、抗ＣＤ１９一本鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）、ヒトＣＤ８αに由来するもの等の膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ＣＡＲは、抗ＣＤ２２ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８αに由来するもの等の膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９／ＣＤ２２二重特異的ＣＡＲは、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、抗ＣＤ２２ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８αに由来するもの等の膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｔ細胞によって担持される商用のＣＡＲ構築物を含む。商用のＣＡＲ－Ｔ細胞ベースの療法の非限定的な例としては、ブレクスカブタゲンオートルユーセル（ＴＥＣＡＲＴＵＳ（登録商標））、アキシカブタゲンシロルユーセル（ＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標））、イデカブタゲンビクルユーセル（ＡＢＥＣＭＡ（登録商標））、リソカブタゲンマラルユーセル（ＢＲＥＹＡＮＺＩ（登録商標））、チサゲンレクルユーセル（ＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標））、Ｃａｒｔｅｓｉａｎ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓからのＤｅｓｃａｒｔｅｓ－０８及びＤｅｓｃａｒｔｅｓ－１１、ＮｏｖａｒｔｉｓからのＣＴＬ１１０、Ｐｏｓｅｉｄａ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓからのＰ－ＢＭＣＡ－１０１、Ａｕｔｏｌｕｓ ＬｉｍｉｔｅｄからのＡＵＴＯ４、ＣｅｌｌｅｃｔｉｓからのＵＣＡＲＴＣＳ、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからのＰＢＣＡＲ１９Ｂ及びＰＢＣＡＲ２６９Ａ、Ｆａｔｅ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓからのＦＴ８１９、ならびにＣｌｙａｄ ＯｎｃｏｌｏｇｙからのＣＹＡＤ－２１１が挙げられる。
また、本明細書では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも１つのシグナル伝達ドメイン（例えば、１、２、または３つのシグナル伝達ドメイン）を含む第１世代ＣＡＲであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも２つのシグナル伝達ドメインを含む第２世代ＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも３つのシグナル伝達ドメインを含む第３世代ＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、３つまたは４つのシグナル伝達ドメイン、及びＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインを含む第４世代ＣＡＲ。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体断片、ｓｃＦｖ、またはＦａｂであるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）は、新生細胞に特有の抗原を標的とする。換言すれば、抗原結合ドメインは、新生細胞またはがん細胞によって発現される抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＢＤは、腫瘍関連抗原に結合する。いくつかの実施形態では、新生細胞に特有の抗原（例えば、新生細胞またはがん細胞に関連する抗原）または腫瘍関連抗原は、細胞表面受容体、イオンチャネル連結型受容体、酵素連結型受容体、Ｇタンパク質共役型受容体、受容体型チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ会合型受容体、受容体様チロシンホスファターゼ、受容体型セリン／トレオニンキナーゼ、受容体型グアニリルシクラーゼ、ヒスチジンキナーゼ会合型受容体、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）（ＥｒｂＢ１／ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２／ＨＥＲ２、ＥｒｂＢ３／ＨＥＲ３、及びＥｒｂＢ４／ＨＥＲ４を含む）、線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）（ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ１８、及びＦＧＦ２１を含む）、血管内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）（ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、及びＰＩＧＦを含む）、ＲＥＴ受容体及びＥｐｈ受容体ファミリー（ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ６、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ＥｐｈＡ９、ＥｐｈＡ１０、ＥｐｈＢ１、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ３、ＥｐｈＢ４、及びＥｐｈＢ６）、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ８、ＣＦＴＲ、ＣＩＣ－１、ＣＩＣ－２、ＣＩＣ－４、ＣＩＣ－５、ＣＩＣ－７、ＣＩＣ－Ｋａ、ＣＩＣ－Ｋｂ、ベストロフィン、ＴＭＥＭ１６Ａ、ＧＡＢＡ受容体、グリシン受容体、ＡＢＣ輸送体、ＮＡＶ１．１、ＮＡＶ１．２、ＮＡＶ１．３、ＮＡＶ１．４、ＮＡＶ１．５、ＮＡＶ１．６、ＮＡＶ１．７、ＮＡＶ１．８、ＮＡＶ１．９、スフィンゴシン－１－リン酸受容体（Ｓ１Ｐ１Ｒ）、ＮＭＤＡチャネル、膜貫通型タンパク質、マルチスパン膜貫通型タンパク質、Ｔ細胞受容体モチーフ、Ｔ細胞アルファ鎖、Ｔ細胞β鎖、Ｔ細胞γ鎖、Ｔ細胞δ鎖、ＣＣＲ７、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ４０、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６８、ＣＤ８０、ＣＤ９５、ＣＤ１１７、ＣＤ１２７、ＣＤ１３３、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１６３、Ｆ４／８０、ＩＬ－４Ｒａ、Ｓｃａ－１、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＧＡＲＰ、ＬＡＰ、グランザイムＢ、ＬＦＡ－１、トランスフェリン受容体、ＮＫｐ４６、パーフォリン、ＣＤ４＋、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７、Ｔｈ４０、Ｔｈ２２、Ｔｈ９、Ｔｆｈ、古典的Ｔｒｅｇ、ＦｏｘＰ３＋、Ｔｒ１、Ｔｈ３、Ｔｒｅｇ１７、ＴＲＥＧ、ＣＤＣＰ、ＮＴ５Ｅ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ムチン、ＴＡＧ－７２、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＳＭＡ、葉酸結合タンパク質、ガングリオシド（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＧＭ２）、ルイス－γ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１／２／３、αＶβ３、α５β１、ＥｒｂＢ１／ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１／ＨＥＲ２、ＥｒＢ３、ｃ－ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＥｐｈＡ３、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、ＰＤＬ－１、ＢＡＦＦ、ＨＤＡＣ、ＡＢＬ、ＦＬＴ３、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＲＥＴ、ＩＬ－１β、ＡＬＫ、ＲＡＮＫＬ、ｍＴＯＲ、ＣＴＬＡ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＪＡＫ３、ＢＲＡＦ、ＰＴＣＨ、スムーズンド、ＰＩＧＦ、ＡＮＰＥＰ、ＴＩＭＰ１、ＰＬＡＵＲ、ＰＴＰＲＪ、ＬＴＢＲ、ＡＮＴＸＲ１、葉酸受容体アルファ（ＦＲａ）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥｐｈＡ２、ＩＬ－１３Ｒａ２、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、メソテリン、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、ＭＵＣ１６（ＣＡ１２５）、Ｌ１ＣＡＭ、ＬｅＹ、ＭＳＬＮ、ＩＬ１３Ｒα１、Ｌ１－ＣＡＭ、Ｔｎ Ａｇ、前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、インターロイキン－１１受容体ａ（ＩＬ－１１Ｒａ）、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、血小板由来成長因子受容体－ベータ（ＰＤＧＦＲ－ベータ）、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、ＭＵＣ１、ＮＣＡＭ、前立腺、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－１受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣｌ、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、主要組織適合性複合体クラスＩ関連遺伝子タンパク質（ＭＲ１）、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰＩＢ Ｉ、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、新生抗原、ＣＤ１３３、ＣＤ１５、ＣＤ１８４、ＣＤ２４、ＣＤ５６、ＣＤ２６、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ（ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ）、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ１５１、ＣＤ３４０、ＣＤ２００、ｔｋｒＡ、ｔｒｋＢ、もしくはｔｒｋＣ、またはそれらの抗原断片もしくは抗原部分から選択される。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｔ細胞に特有の抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＢＤは、Ｔ細胞に関連する抗原に結合する。いくつかの事例では、かかる抗原は、Ｔ細胞によって発現されるか、またはＴ細胞の表面上に位置する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞に特有の抗原すなわちＴ細胞関連抗原は、Ｔ細胞に特有の細胞表面受容体、膜輸送タンパク質（例えば、イオンチャネルタンパク質、膜孔形成タンパク質等といった、例えば、能動または受動輸送タンパク質）、膜貫通型受容体、膜酵素、及び／または細胞接着タンパク質から選択される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞に特有の抗原は、Ｇタンパク質共役型受容体、受容体型チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ会合型受容体、受容体様チロシンホスファターゼ、受容体型セリン／トレオニンキナーゼ、受容体グアニリルシクラーゼ、ヒスチジンキナーゼ会合型受容体、ＡＫＴ１；ＡＫＴ２；ＡＫＴ３；ＡＴＦ２；ＢＣＬ１０；ＣＡＬＭ１；ＣＤ３Ｄ（ＣＤ３δ）；ＣＤ３Ｅ（ＣＤ３ε）；ＣＤ３Ｇ（ＣＤ３γ）；ＣＤ４；ＣＤ８；ＣＤ２８；ＣＤ４５；ＣＤ８０（Ｂ７－１）；ＣＤ８６（Ｂ７－２）；ＣＤ２４７（ＣＤ３ζ）；ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）；ＥＬＫ１；ＥＲＫ１（ＭＡＰＫ３）；ＥＲＫ２；ＦＯＳ；ＦＹＮ；ＧＲＡＰ２（ＧＡＤＳ）；ＧＲＢ２；ＨＬＡ－ＤＲＡ；ＨＬＡ－ＤＲＢ１；ＨＬＡ－ＤＲＢ３；ＨＬＡ－ＤＲＢ４；ＨＬＡ－ＤＲＢ５；ＨＲＡＳ；ＩＫＢＫＡ（ＣＨＵＫ）；ＩＫＢＫＢ；ＩＫＢＫＥ；ＩＫＢＫＧ（ＮＥＭＯ）；ＩＬ２；ＩＴＰＲ１；ＩＴＫ；ＪＵＮ；ＫＲＡＳ２；ＬＡＴ；ＬＣＫ；ＭＡＰ２Ｋ１（ＭＥＫ１）；ＭＡＰ２Ｋ２（ＭＥＫ２）；ＭＡＰ２Ｋ３（ＭＫＫ３）；ＭＡＰ２Ｋ４（ＭＫＫ４）；ＭＡＰ２Ｋ６（ＭＫＫ６）；ＭＡＰ２Ｋ７（ＭＫＫ７）；ＭＡＰ３Ｋ１（ＭＥＫＫ１）；ＭＡＰ３Ｋ３；ＭＡＰ３Ｋ４；ＭＡＰ３Ｋ５；ＭＡＰ３Ｋ８；ＭＡＰ３Ｋ１４（ＮＩＫ）；ＭＡＰＫ８（ＪＮＫ１）；ＭＡＰＫ９（ＪＮＫ２）；ＭＡＰＫ１０（ＪＮＫ３）；ＭＡＰＫ１１（ｐ３８β）；ＭＡＰＫ１２（ｐ３８γ）；ＭＡＰＫ１３（ｐ３８δ）；ＭＡＰＫ１４（ｐ３８α）；ＮＣＫ；ＮＦＡＴ１；ＮＦＡＴ２；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＦＫＢＩＡ；ＮＲＡＳ；ＰＡＫ１；ＰＡＫ２；ＰＡＫ３；ＰＡＫ４；ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ；ＰＩＫ３Ｃ３（ＶＰＳ３４）；ＰＩＫ３ＣＡ；ＰＩＫ３ＣＢ；ＰＩＫ３ＣＤ；ＰＩＫ３Ｒ１；ＰＫＣＡ；ＰＫＣＢ；ＰＫＣＭ；ＰＫＣＱ；ＰＬＣＹ１；ＰＲＦ１（パーフォリン）；ＰＴＥＮ；ＲＡＣ１；ＲＡＦ１；ＲＥＬＡ；ＳＤＦ１；ＳＨＰ２；ＳＬＰ７６；ＳＯＳ；ＳＲＣ；ＴＢＫ１；ＴＣＲＡ；ＴＥＣ；ＴＲＡＦ６；ＶＡＶ１；ＶＡＶ２；またはＺＡＰ７０であり得る。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、自己免疫障害または炎症性障害に特有の抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＢＤは、自己免疫障害または炎症性障害に関連する抗原に結合する。いくつかの事例では、抗原は、自己免疫障害または炎症性障害に関連する細胞によって発現される。いくつかの実施形態では、自己免疫障害または炎症性障害は、慢性移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、ループス、関節炎、免疫複合体糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、ブドウ膜炎、肝炎、全身性硬化症または強皮症、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、寒冷凝集素症、尋常性天疱瘡、グレーブス病、自己免疫溶血性貧血、血友病Ａ、原発性シェーグレン症候群、血栓性血小板減少性紫斑病、視神経脊髄炎、エバンス症候群、ＩｇＭ媒介性ニューロパチー、クリオグロブリン血症、皮膚筋炎、特発性血小板減少症、強直性脊椎炎、水疱性類天疱瘡、後天性血管性浮腫、慢性蕁麻疹、抗リン脂質脱髄性多発ニューロパチー、及び自己免疫血小板減少症または好中球減少症または赤芽球癆から選択され、一方で、同種異系免疫疾患の例となる非限定的例としては、造血または実質臓器移植、輸血による同種異系感作（ａｌｌｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ）（例えば、Ｂｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，１５（４）：９３１－４１を参照されたい）または異種感作、胎児同種異系感作を伴う妊娠、新生児の同種異系免疫性血小板減少症、新生児溶血性疾患、酵素またはタンパク質補充療法、血液製剤、及び遺伝子療法で処置される遺伝性または後天性欠損障害の補充に伴い起こり得るもの等の外来抗原への感作が挙げられる。いくつかの実施形態では、自己免疫障害または炎症性障害に特有の抗原は、細胞表面受容体、イオンチャネル連結型受容体、酵素連結型受容体、Ｇタンパク質共役型受容体、受容体型チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ会合型受容体、受容体様チロシンホスファターゼ、受容体型セリン／トレオニンキナーゼ、受容体型グアニリルシクラーゼ、またはヒスチジンキナーゼ会合型受容体から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｂ細胞、形質細胞、または形質芽細胞上に発現したリガンドに結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ３８、ＣＤ４５Ｒ、ＣＤ１３８、ＣＤ３１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ２８、ＴＮＦ、インターフェロン受容体、ＧＭ－ＣＳＦ、ＺＡＰ－７０、ＬＦＡ－１、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ５、またはＣＤ２に結合する。例えば、ＵＳ２００３／００７７２４９、ＷＯ２０１７／０５８７５３、ＷＯ２０１７／０５８８５０を参照されたく、同文献の内容は参照により本明細書に援用される。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、老化細胞に特有の抗原、例えば、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＢＤは、老化細胞に関連する抗原に結合する。いくつかの事例では、抗原は、老化細胞によって発現される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、老化細胞の異常な蓄積を特徴とする障害、例えば、肝臓及び肺線維症、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、ならびに骨関節炎の処置または予防に使用されてもよい。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、感染性疾患に特有の抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＢＤは、感染性疾患に関連する抗原に結合する。いくつかの事例では、抗原は、感染性疾患に罹患した細胞によって発現される。いくつかの実施形態では、該感染性疾患は、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒトヘルペスウイルス、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ－８、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ））、ヒトＴリンパ向性ウイルス－１（ＨＴＬＶ－１）、メルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、エプスタイン・バールウイルス、ＣＭＶ、ヒトパピローマウイルスから選択される。いくつかの実施形態では、感染性疾患に特有の抗原は、細胞表面受容体、イオンチャネル連結型受容体、酵素連結型受容体、Ｇタンパク質共役型受容体、受容体型チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ会合型受容体、受容体様チロシンホスファターゼ、受容体型セリン／トレオニンキナーゼ、受容体型グアニリルシクラーゼ、ヒスチジンキナーゼ会合型受容体、ＨＩＶ Ｅｎｖ、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ上のｇｐ１２０またはＣＤ４誘導性エピトープから選択される。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、細胞の細胞表面抗原に結合する。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、特定のまたは具体的な細胞種に特有である（例えば、それによって発現される）。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、１つよりも多くの種類の細胞に特有である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｔ細胞上の細胞表面抗原等の、Ｔ細胞に特有の細胞表面抗原に結合する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞に特有の抗原は、Ｔ細胞に特有の細胞表面受容体、膜輸送タンパク質（例えば、イオンチャネルタンパク質、膜孔形成タンパク質等といった、例えば、能動または受動輸送タンパク質）、膜貫通型受容体、膜酵素、及び／または細胞接着タンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞に特有の抗原は、Ｇタンパク質共役型受容体、受容体型チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ会合型受容体、受容体様チロシンホスファターゼ、受容体型セリン／トレオニンキナーゼ、受容体型グアニリルシクラーゼ、またはヒスチジンキナーゼ会合型受容体であり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体に結合する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体は、ＡＫＴ１；ＡＫＴ２；ＡＫＴ３；ＡＴＦ２；ＢＣＬ１０；ＣＡＬＭ１；ＣＤ３Ｄ（ＣＤ３δ）；ＣＤ３Ｅ（ＣＤ３ε）；ＣＤ３Ｇ（ＣＤ３γ）；ＣＤ４；ＣＤ８；ＣＤ２８；ＣＤ４５；ＣＤ８０（Ｂ７－１）；ＣＤ８６（Ｂ７－２）；ＣＤ２４７（ＣＤ３ζ）；ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）；ＥＬＫ１；ＥＲＫ１（ＭＡＰＫ３）；ＥＲＫ２；ＦＯＳ；ＦＹＮ；ＧＲＡＰ２（ＧＡＤＳ）；ＧＲＢ２；ＨＬＡ－ＤＲＡ；ＨＬＡ－ＤＲＢ１；ＨＬＡ－ＤＲＢ３；ＨＬＡ－ＤＲＢ４；ＨＬＡ－ＤＲＢ５；ＨＲＡＳ；ＩＫＢＫＡ（ＣＨＵＫ）；ＩＫＢＫＢ；ＩＫＢＫＥ；ＩＫＢＫＧ（ＮＥＭＯ）；ＩＬ２；ＩＴＰＲ１；ＩＴＫ；ＪＵＮ；ＫＲＡＳ２；ＬＡＴ；ＬＣＫ；ＭＡＰ２Ｋ１（ＭＥＫ１）；ＭＡＰ２Ｋ２（ＭＥＫ２）；ＭＡＰ２Ｋ３（ＭＫＫ３）；ＭＡＰ２Ｋ４（ＭＫＫ４）；ＭＡＰ２Ｋ６（ＭＫＫ６）；ＭＡＰ２Ｋ７（ＭＫＫ７）；ＭＡＰ３Ｋ１（ＭＥＫＫ１）；ＭＡＰ３Ｋ３；ＭＡＰ３Ｋ４；ＭＡＰ３Ｋ５；ＭＡＰ３Ｋ８；ＭＡＰ３Ｋ１４（ＮＩＫ）；ＭＡＰＫ８（ＪＮＫ１）；ＭＡＰＫ９（ＪＮＫ２）；ＭＡＰＫ１０（ＪＮＫ３）；ＭＡＰＫ１１（ｐ３８β）；ＭＡＰＫ１２（ｐ３８γ）；ＭＡＰＫ１３（ｐ３８δ）；ＭＡＰＫ１４（ｐ３８α）；ＮＣＫ；ＮＦＡＴ１；ＮＦＡＴ２；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＦＫＢＩＡ；ＮＲＡＳ；ＰＡＫ１；ＰＡＫ２；ＰＡＫ３；ＰＡＫ４；ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ；ＰＩＫ３Ｃ３（ＶＰＳ３４）；ＰＩＫ３ＣＡ；ＰＩＫ３ＣＢ；ＰＩＫ３ＣＤ；ＰＩＫ３Ｒ１；ＰＫＣＡ；ＰＫＣＢ；ＰＫＣＭ；ＰＫＣＱ；ＰＬＣＹ１；ＰＲＦ１（パーフォリン）；ＰＴＥＮ；ＲＡＣ１；ＲＡＦ１；ＲＥＬＡ；ＳＤＦ１；ＳＨＰ２；ＳＬＰ７６；ＳＯＳ；ＳＲＣ；ＴＢＫ１；ＴＣＲＡ；ＴＥＣ；ＴＲＡＦ６；ＶＡＶ１；ＶＡＶ２；またはＺＡＰ７０であり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗原（例えば、腫瘍抗原）に結合する細胞外抗原結合ドメイン（例えば、抗体、またはｓｃＦｖ等の抗体断片）、スペーサー（例えば、本明細書に記載される任意のもの等のヒンジドメインを含有する）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載される任意のもの）、及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載される一次シグナル伝達ドメインまたは共刺激シグナル伝達ドメイン等の任意の細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞質シグナル伝達ドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン）を追加的に含む。ＣＡＲの例示的な構成要素の例が表３に記載される。提供される態様では、ＣＡＲにおける各構成要素の配列は、表３に列挙される任意の組み合わせを含み得る。
Figure 2024503027000007
いくつかの実施形態では、抗原受容体は、マーカーをさらに含み、及び／またはＣＡＲもしくは他の抗原受容体を発現している細胞は、細胞表面マーカー等の代用マーカーをさらに含み、これを使用して、受容体を発現させるための細胞の形質導入または操作を確認してもよい。いくつかの態様では、マーカーは、ＣＤ３４、ＮＧＦＲ、または上皮成長因子受容体の全てまたは一部（例えば、切り詰め形態）、例えば、かかる細胞表面受容体の切り詰めバージョン（例えば、ｔＥＧＦＲ）を含む。いくつかの実施形態では、マーカーをコードする核酸は、切断可能なリンカー配列、例えば、Ｔ２Ａ等のリンカー配列をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されている。例えば、マーカー、及び任意でリンカー配列は、特許出願公開第ＷＯ２０１４０３１６８７号に開示される任意のものであり得る。例えば、マーカーは、任意でＴ２Ａ切断可能リンカー配列等のリンカー配列に連結されている、切り詰められたＥＧＦＲ（ｔＥＧＦＲ）であり得る。
いくつかの実施形態では、マーカーは、分子、例えば、Ｔ細胞上に天然には見られないもしくはＴ細胞の表面上に天然には見られない細胞表面タンパク質、またはその一部分である。いくつかの実施形態では、分子は、非自己分子、例えば、非自己タンパク質、すなわち、細胞が養子移入されることになる宿主の免疫系によって「自己」として認識されないものである。
いくつかの実施形態では、マーカーは、治療機能を何ら果たさない、及び／または遺伝子操作のため、例えば、操作が成功した細胞を選択するためのマーカーとして使用される以外に効果を何ら生み出さない。他の実施形態では、マーカーは、治療分子またはいくつかの所望の効果を別様に発揮する分子、例えば、インビボで遭遇する細胞に対するリガンド、例えば、養子移入及びリガンドとの遭遇時に細胞の応答を増強及び／または減衰するための共刺激分子または免疫チェックポイント分子であり得る。
場合によっては、ＣＡＲは、第１、第２、及び／または第３世代ＣＡＲと称される。いくつかの態様では、第１世代ＣＡＲは、抗原結合時にＣＤ３鎖誘導性シグナルを単に提供するものであり、いくつかの態様では、第２世代ＣＡＲは、かかるシグナル及び共刺激シグナルを提供するもの、例えば、ＣＤ２８またはＣＤ１３７等の共刺激受容体からの細胞内シグナル伝達ドメインを含むものであり、いくつかの態様では、第３世代ＣＡＲは、異なる共刺激受容体の複数の共刺激ドメインを含むものである。
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗体、例えば抗体断片、ＣＤ２８またはその機能的バリアントの膜貫通部分であるか、またはそれを含有する膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ２８またはその機能的バリアントのシグナル伝達部分及びＣＤ３ゼータまたはその機能的バリアントのシグナル伝達部分を含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗体、例えば抗体断片、ＣＤ２８またはその機能的バリアントの膜貫通部分であるか、またはそれを含有する膜貫通ドメイン、ならびに４－ＩＢＢまたはその機能的バリアントのシグナル伝達部分及びＣＤ３ゼータまたはその機能的バリアントのシグナル伝達部分を含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。いくつかのかかる実施形態では、受容体は、ヒトＩｇ分子等のＩｇ分子の一部分、例えばＩｇヒンジ、例えばＩｇＧ４ヒンジを含有するスペーサー、例えばヒンジのみのスペーサー（ｈｉｎｇｅ－ｏｎｌｙ ｓｐａｃｅｒ）をさらに含む。
いくつかの態様では、スペーサーは、ＩｇＧのヒンジ領域のみ、例えば、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１のヒンジのみを含有する。他の実施形態では、スペーサーは、任意でＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインに連結されたＩｇヒンジ、例えばＩｇＧ４由来ヒンジであるか、またはそれを含有する。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに連結されたＩｇヒンジ、例えばＩｇＧ４ヒンジである。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＣＨ３ドメインのみに連結されたＩｇヒンジ、例えばＩｇＧ４ヒンジである。いくつかの実施形態では、スペーサーは、グリシン－セリンリッチ配列、または既知の柔軟なリンカー等の他の柔軟なリンカーであるか、またはそれを含む。
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含めた抗体断片等の抗体、スペーサー、例えば、重鎖分子のヒンジ領域及び／または１つもしくは複数の定常領域等の免疫グロブリン分子の一部分を含有するスペーサー、例えば、Ｉｇ－ヒンジ含有スペーサー、ＣＤ２８由来膜貫通ドメインの全てまたは一部分を含有する膜貫通ドメイン、ＣＤ２８由来細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗体またはｓｃＦｖ等の断片、Ｉｇ－ヒンジ含有スペーサーのうちのいずれか等のスペーサー、ＣＤ２８由来膜貫通ドメイン、４－ｌＢＢ由来細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ゼータ由来シグナル伝達ドメインを含む。
対象に投与される細胞によって発現される、ＣＡＲ等の組換え受容体は一般に、処置されている疾患もしくは病態またはそれをもつ細胞において発現される、それに関連する、及び／またはそれに特異的な分子を認識するか、またはそれに特異的に結合する。分子、例えば、抗原に特異的に結合すると、受容体は一般に、ＩＴＡＭにより伝達されるシグナル等の免疫刺激シグナルを細胞内に送達し、それによって疾患または病態に標的化された免疫応答を促進する。例えば、いくつかの実施形態では、細胞は、疾患もしくは病態をもつまたは疾患もしくは病態に関連する細胞または組織によって発現される抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する。
Ｂ．Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）
いくつかの実施形態では、提供される方法、使用、製造品または組成物に関連して使用される、Ｔ細胞等の操作された細胞は、腫瘍、ウイルスタンパク質または自己免疫タンパク質の抗原等の標的ポリペプチドのペプチドエピトープまたはＴ細胞エピトープを認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）またはその抗原結合部分を発現する細胞である。
いくつかの実施形態では、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」とは、可変ａ鎖及びｂ鎖（別名、それぞれＴＣＲアルファ及びＴＣＲベータ）もしくは可変ｇ鎖及びｄ鎖（別名、それぞれＴＣＲアルファ及びＴＣＲベータ）、またはその抗原結合部分を含有し、ＭＨＣ分子に結合したペプチドに特異的に結合することができる分子である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ａｂ型である。典型的には、ａｂ型及びｇｄ型で存在するＴＣＲは一般に、構造的に類似しているが、それらを発現しているＴ細胞は、特有の解剖学的位置または機能を有し得る。ＴＣＲは、細胞の表面上にまたは可溶型で見られ得る。一般に、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表面上に見られ、そこでそれは一般に、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に結合した抗原の認識を担う。
別途定めのない限り、「ＴＣＲ」という用語は、完全なＴＣＲならびにその抗原結合部分または抗原結合断片を包含するように理解されるべきである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ａｂ型またはｇｄ型のＴＣＲを含めた、無傷のまたは完全長ＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、完全長に満たないＴＣＲであるが、ＭＨＣ分子において結合した特定のペプチドに結合する、例えば、ＭＨＣ－ペプチド複合体に結合する抗原結合部分である。場合によっては、ＴＣＲの抗原結合部分または断片は、完全長または無傷のＴＣＲの構造的ドメインの一部分のみを含有し得るが、なおも、完全なＴＣＲが結合するＭＨＣ－ペプチド複合体等のペプチドエピトープに結合することができる。場合によっては、抗原結合部分は、特定のＭＨＣ－ペプチド複合体への結合のための結合部位を形成するのに十分な、ＴＣＲの可変ａ鎖及び可変ｂ鎖等のＴＣＲの可変ドメインを含有する。一般に、ＴＣＲの可変鎖は、ペプチド、ＭＨＣ、及び／またはＭＨＣ－ペプチド複合体の認識に関与する相補性決定領域を含有する。
Ｃ．多標的化
いくつかの実施形態では、提供される方法、使用、製造品及び組成物に関連して使用される細胞は、各々が異なる抗原の同じものを認識し、典型的には各々が異なる細胞内シグナル伝達構成要素を含む２つ以上の遺伝子操作された受容体の細胞上での発現等の、多標的化戦略を用いる細胞を含む。かかる多標的化戦略は、例えば、ＷＯ２０１４０５５６６８（例えば、オフターゲット、例えば正常細胞上では個々に存在するが、処置されるべき疾患または病態をもつ細胞上でのみ一緒に存在する２つの異なる抗原を標的とする、活性化ＣＡＲ及び共刺激性ＣＡＲの組み合わせについて記載する）、及びＦｅｄｏｒｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，５（２１５）（２０１３）（活性化ＣＡＲ及び阻害性ＣＡＲを発現している細胞、例えば、活性化ＣＡＲが、正常または非病変細胞及び処置されるべき疾患または病態をもつ細胞の両方の上に発現される１つの抗原に結合し、阻害性ＣＡＲが、正常細胞または処置が望まれない細胞上にのみ発現される別の抗原に結合する細胞等について記載する）に記載される。
例えば、いくつかの実施形態では、細胞は、一般に第１の受容体によって認識される抗原、例えば、第１の抗原への特異的結合時に、細胞に対して活性化または刺激シグナルを誘導することができる第１の遺伝子操作された抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現している受容体を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、一般に第２の受容体によって認識される第２の抗原への特異的結合時に、免疫細胞に対して共刺激シグナルを誘導することができる第２の遺伝子操作された抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）、例えば、キメラ共刺激受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原及び第２の抗原は、同じである。いくつかの実施形態では、第１の抗原及び第２の抗原は、異なる。
いくつかの実施形態では、第１及び／または第２の遺伝子操作された抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）は、細胞に対して活性化シグナルを誘導することができる。いくつかの実施形態では、受容体は、ＩＴＡＭまたはＩＴＡＭ様モチーフを含有する細胞内シグナル伝達構成要素を含む。いくつかの実施形態では、第１の受容体によって誘導される活性化は、免疫応答の開始、例えば、ＩＴＡＭリン酸化及び／またはＩＴ ＡＭ媒介性シグナル伝達カスケードの開始、結合した受容体（例えば、ＣＤ４またはＣＤ８等）の近くでの免疫シナプスの形成及び／または分子のクラスタ化、ＮＦ－ＫＢ及び／またはＡＰ－１等の１つもしくは複数の転写因子の活性化、及び／またはサイトカイン等の因子の遺伝子発現の誘導、増殖、及び／または生存をもたらす、細胞におけるシグナル伝達またはタンパク質発現の変化を伴う。
いくつかの実施形態では、第１の受容体及び／または第２の受容体は、細胞内シグナル伝達ドメイン、またはＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＯＸ４０、及び／またはＩＣＯＳ等の共刺激受容体の領域を含む。いくつかの実施形態では、第１の受容体及び第２の受容体は、異なる共刺激受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態では、第１の受容体は、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域を含有し、第２の受容体は、４－ＩＢＢ共刺激シグナル伝達領域を含有するか、またはその逆である。
いくつかの実施形態では、第１の受容体及び／または第２の受容体は、ＩＴＡＭまたはＩＴＡＭ様モチーフを含有する細胞内シグナル伝達ドメイン、及び共刺激受容体の細胞内シグナル伝達ドメインの両方を含む。
いくつかの実施形態では、第１の受容体は、ＩＴＡＭまたはＩＴＡＭ様モチーフを含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含有し、第２の受容体は、共刺激受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。同じ細胞において誘導される活性化シグナルと組み合わせた共刺激シグナルは、免疫応答、例えば、強固で持続的な免疫応答、例えば、増加した遺伝子発現、サイトカイン及び他の因子の分泌、ならびに細胞殺傷等のＴ細胞媒介性エフェクター機能をもたらすものである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、Ｂ７－１／ＣＤ８０；Ｂ７－２／ＣＤ８６；Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１；Ｂ７－Ｈ２；Ｂ７－Ｈ３；Ｂ７－Ｈ４；Ｂ７－Ｈ６；Ｂ７－Ｈ７；ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２；ＣＤ２８；ＣＴＬＡ－４；Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５；ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８；ＰＤ－１；ＰＤ－Ｌ２／Ｂ７－ＤＣ；ＰＤＣＤ６）；４－１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７；４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９；ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ；ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７；ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７；ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８；ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８；ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５；ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５；ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５；ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５；ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８；ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８；ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４；ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４；リンホトキシン－アルファ／ＴＮＦ－ベータ；ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４；ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４；ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ；ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ；ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５；ＴＮＦ－アルファ；ＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）；２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４；ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８；ＣＤ２；ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９；ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２；ＣＤ５８／ＬＦＡ－３；ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５；ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３；ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７；ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６；ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０）；ＣＤ２；ＣＤ７；ＣＤ５３；ＣＤ８２／Ｋａｉ－１；ＣＤ９０／Ｔｈｙ１；ＣＤ９６；ＣＤ１６０；ＣＤ２００；ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１；ＨＬＡクラスＩ；ＨＬＡ－ＤＲ；Ｉｋａｒｏｓ；インテグリンアルファ４／ＣＤ４９ｄ；インテグリンアルファ４ベータ１；インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ－１；ＬＡＧ－３；ＴＣＬ１Ａ；ＴＣＬ１Ｂ；ＣＲＴＡＭ；ＤＡＰ１２；デクチン－１／ＣＬＥＣ７Ａ；ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６；ＥｐｈＢ６；ＴＩＭ－１／ＫＩＭ－１／ＨＡＶＣＲ；ＴＩＭ－４；ＴＳＬＰ；ＴＳＬＰ Ｒ；リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）；ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ３ゼータドメイン、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、リガンドであって、ＣＤ８３と特異的に結合するもの、またはそれらの機能的断片のうちの１つまたは複数から選択される１つまたは少なくとも１つのシグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアントを含む。他の実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、及び（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインもしくは４－１ＢＢドメイン、またはその機能的バリアントを含む。なおも他の実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的バリアント、及び（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的バリアントを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的バリアント、（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的バリアント、及び（ｉｖ）サイトカインまたは共刺激リガンド導入遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも２つのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアントを含む。他の実施形態では、少なくとも２つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、及び（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインもしくは４－１ＢＢドメイン、またはその機能的バリアントを含む。なおも他の実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的バリアント、及び（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的バリアントを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的バリアント、（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的バリアント、及び（ｉｖ）サイトカインまたは共刺激リガンド導入遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも３つのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアントを含む。他の実施形態では、少なくとも３つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、及び（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインもしくは４－１ＢＢドメイン、またはその機能的バリアントを含む。なおも他の実施形態では、少なくとも３つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的バリアント、及び（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的バリアントを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも３つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的バリアント、（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的バリアント、及び（ｉｖ）サイトカインまたは共刺激リガンド導入遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、及び（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインもしくは４－１ＢＢドメイン、またはその機能的バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的バリアント、及び（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインもしくは４－１ＢＢドメイン、またはその機能的バリアント、及び／または（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的バリアント、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的バリアント、（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的バリアント、及び（ｉｖ）サイトカインまたは共刺激リガンド導入遺伝子を含む。
ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメイン
いくつかの実施形態では、第１世代、第２世代、第３世代、または第４世代ＣＡＲは、ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、サイトカイン遺伝子は、ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインを含むＣＡＲを含む標的細胞にとって内在性または外因性である。いくつかの実施形態では、サイトカイン遺伝子は、炎症促進性サイトカインをコードする。いくつかの実施形態では、サイトカイン遺伝子は、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－９、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＴＮＦ、もしくはＩＦＮ－ガンマ、またはそれらの機能的断片をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインは、転写因子またはその機能的ドメインもしくは断片であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインは、転写因子またはその機能的ドメインもしくは断片であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、転写因子またはその機能的ドメインもしくは断片は、活性化Ｔ細胞の核内因子（ＮＦＡＴ）、ＮＦ－ｋＢ、またはその機能的ドメインもしくは断片であるか、またはそれを含む。例えば、Ｚｈａｎｇ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＣＡＲ－Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．５：２２（２０１７）、ＷＯ２０１６１２６６０８、Ｓｈａ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｃｈｉｍａｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｕｍｏｕｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ Ｊａｎ ２７，２０１７，３７（１）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１つまたは複数のスペーサーをさらに含み、例えば、該スペーサーは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間の第１のスペーサーである。いくつかの実施形態では、第１のスペーサーは、免疫グロブリン定常領域またはそのバリアントもしくは改変バージョンの少なくとも一部分を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、膜貫通ドメインとシグナル伝達ドメインとの間の第２のスペーサーである。いくつかの実施形態では、第２のスペーサーは、オリゴペプチドであり、例えば、該オリゴペプチドは、限定されないがグリシン－セリンダブレット等のグリシン及びセリン残基を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、２つ以上のスペーサー、例えば、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間のスペーサー及び膜貫通ドメインとシグナル伝達ドメインとの間のスペーサーを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞のうちのいずれか１つは、ＣＡＲまたは第１世代ＣＡＲをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、第１世代ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化中の下流シグナル伝達を媒介する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞のうちのいずれか１つは、ＣＡＲまたは第２世代ＣＡＲをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、第２世代ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び２つのシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化中の下流シグナル伝達を媒介する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインである。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、Ｔ細胞活性化中のサイトカイン産生、ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＡＲ－Ｔ細胞存続を増強する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞のうちのいずれか１つは、ＣＡＲまたは第３世代ＣＡＲをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、第３世代ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも３つのシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化中の下流シグナル伝達を媒介する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインである。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、Ｔ細胞活性化中のサイトカイン産生、ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＡＲ－Ｔ細胞存続を増強する。いくつかの実施形態では、第３世代ＣＡＲは、少なくとも２つの共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの共刺激ドメインは、同じでない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞のうちのいずれか１つは、ＣＡＲまたは第４世代ＣＡＲをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、第４世代ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも２、３、または４つのシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化中の下流シグナル伝達を媒介する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインである。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、Ｔ細胞活性化中のサイトカイン産生、ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＡＲ－Ｔ細胞存続を増強する。
いくつかの実施形態では、第１の受容体の単独でのライゲーションも、第２の受容体の単独でのライゲーションも、強固な免疫応答を誘導しない。いくつかの態様では、１つのみの受容体がライゲーションされる場合、細胞は抗原に対して寛容化されるか、もしくは非応答性になるか、または阻害されるようになり、及び／または増殖する、もしくは因子を分泌する、もしくはエフェクター機能を実行するよう誘導されない。しかしながら、いくつかのかかる実施形態では、第１の抗原及び第２の抗原を発現している細胞に遭遇したとき等、複数の受容体がライゲーションされる場合、例えば、１つもしくは複数のサイトカインの分泌、増殖、存続、及び／または標的細胞の細胞傷害性殺傷等の免疫エフェクター機能の実行によって示されるような、完全な免疫活性化または刺激等の所望の応答が達成される。
いくつかの実施形態では、これら２つの受容体は、受容体のうちの一方によるその抗原への結合が、細胞を活性化するかまたは応答を誘導する一方で、第２の阻害性受容体によるその抗原への結合が、その応答を抑制または減衰するシグナルを誘導するように、細胞に対してそれぞれ活性化シグナル及び阻害性シグナルを誘導する。活性化ＣＡＲ及び阻害性ＣＡＲまたはｉＣＡＲの組み合わせが例である。例えば、活性化ＣＡＲが、疾患または病態において発現されるが正常細胞上にも発現される抗原に結合し、阻害性受容体が、正常細胞上に発現されるが疾患または病態をもつ細胞上には発現されない別個の抗原に結合するように、かかる戦略が使用されてもよい。
いくつかの実施形態では、特定の疾患または病態に関連する抗原が、非病変細胞上に発現される及び／または操作された細胞自体の上に一過性で（例えば、遺伝子操作に関連する刺激時に）もしくは永久的に、のいずれかで発現される場合に、多標的化戦略が用いられる。そのような場合、２つの別個の個々に特異的な抗原受容体のライゲーションを必要とすることによって、特異性、選択性、及び／または有効性が改善され得る。
いくつかの実施形態では、複数の抗原、例えば、第１の抗原及び第２の抗原は、標的とされている細胞、組織、または疾患もしくは病態、例えばがん細胞上に発現される。いくつかの態様では、細胞、組織、疾患または病態は、多発性骨髄腫または多発性骨髄腫細胞である。いくつかの実施形態では、複数の抗原のうちの１つまたは複数は一般に、正常もしくは非病変細胞もしくは組織、及び／または操作された細胞自体等の、細胞療法で標的とすることが望まれない細胞上にも発現される。かかる実施形態では、細胞応答を達成するために複数の受容体のライゲーションを必要とすることによって、特異性及び／または有効性が達成される。
Ｄ．キメラ自己抗体受容体（ＣＡＡＲ）
いくつかの実施形態では、組換え受容体は、キメラ自己抗体受容体（ＣＡＡＲ）である。いくつかの実施形態では、ＣＡＡＲは、自己抗体に結合、例えば、特異的に結合するか、またはそれを認識する。いくつかの実施形態では、ＣＡＡＲを発現している細胞、例えば、ＣＡＡＲを発現するように操作されたＴ細胞を使用して、自己抗体発現細胞に結合し、それを殺傷するが、正常な抗体発現細胞には結合せず、それを殺傷しないようにすることができる。いくつかの実施形態では、ＣＡＡＲ発現細胞を使用して、自己免疫疾患等の、自己抗原の発現に関連する自己免疫疾患を処置することができる。いくつかの実施形態では、ＣＡＡＲ発現細胞は、最終的に自己抗体を産生して、自己抗体をそれらの細胞表面上に提示するＢ細胞を標的とし、これらのＢ細胞を治療介入のための疾患特異的標的として標識することができる。いくつかの実施形態では、ＣＡＡＲ発現細胞を使用して、抗原特異的キメラ自己抗体受容体を使用して病因性Ｂ細胞を標的化することによって自己免疫疾患における病原性Ｂ細胞を効率的に標的化し、殺傷することができる。いくつかの実施形態では、組換え受容体は、ＣＡＡＲ、例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２０１７／００５１０３５号に記載される任意のものである。
いくつかの実施形態では、ＣＡＡＲは、自己抗体結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び１つまたは複数の細胞内シグナル伝達領域またはドメイン（互換的に細胞質シグナル伝達ドメインまたは領域とも呼ばれる）を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン、Ｔ細胞において一次活性化シグナルを刺激及び／または誘導することができるシグナル伝達ドメイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の構成要素のシグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３－ゼータ鎖の細胞内シグナル伝達ドメインもしくは領域またはその機能的バリアントもしくはシグナル伝達部分）、及び／または免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むシグナル伝達ドメインであるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、自己抗体結合ドメインは、自己抗原またはその断片を含む。自己抗原の選定は、標的とされている自己抗体の種類に依存し得る。例えば、自己抗原は、それが特定の疾患状態、例えば、自己抗体媒介性自己免疫疾患等の自己免疫疾患に関連するＢ細胞等の標的細胞上の自己抗体を認識するという理由で選定され得る。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、尋常性天疱瘡（ＰＶ）を含む。例示的な自己抗原には、デスモグレイン１（Ｄｓｇ１）及びＤｓｇ３が含まれる。
いくつかの実施形態では、コード化核酸は、「正の標的細胞特異的調節要素」（または正のＴＣＳＲＥ）に作動的に連結されている。いくつかの実施形態では、正のＴＣＳＲＥは、機能的核酸配列である。いくつかの実施形態では、正のＴＣＳＲＥは、プロモーターまたはエンハンサーを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＳＲＥは、標的細胞における外因性物質のレベルを増加させる核酸配列である。いくつかの実施形態では、正の標的細胞特異的調節要素は、Ｔ細胞特異的プロモーター、Ｔ細胞特異的エンハンサー、Ｔ細胞特異的スプライス部位、ＲＮＡもしくはタンパク質の半減期を延長するＴ細胞特異的部位、Ｔ細胞特異的ｍＲＮＡ核外搬出促進部位、Ｔ細胞特異的翻訳増強部位、またはＴ細胞特異的翻訳後修飾部位を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞特異的プロモーターは、Ｉｍｍｇｅｎ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されるプロモーターであり、例えば、Ｔ細胞特異的プロモーターは、ＩＬ２ＲＡ（ＣＤ２５）、ＬＲＲＣ３２、ＦＯＸＰ３、またはＩＫＺＦ２プロモーターである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞特異的プロモーターまたはエンハンサーは、Ｓｃｈｍｉｄｌ ｅｔ ａ ，Ｂｌｏｏｄ．２０１４ Ａｐｒ ２４；１２３（１７）：ｅ６８－７８．（参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されるプロモーターまたはエンハンサーである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞特異的プロモーターは、上述のもののうちのいずれかの転写的に活性な断片である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞特異的プロモーターは、上述のもののうちのいずれかに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するバリアントである。
いくつかの実施形態では、コード化核酸は、「負の標的細胞特異的調節要素」（または負のＴＣＳＲＥ）に作動的に連結されている。いくつかの実施形態では、負のＴＣＳＲＥは、機能的核酸配列である。いくつかの実施形態では、負のＴＣＳＲＥは、非標的細胞においてウイルスベクターの分解または阻害を引き起こすｍｉＲＮＡ認識部位である。いくつかの実施形態では、外因性物質は、「非標的細胞特異的調節要素」（またはＮＴＣＳＲＥ）に作動的に連結されている。いくつかの実施形態では、ＮＴＣＳＲＥは、標的細胞と比較して非標的細胞における外因性物質のレベルを減少させる核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮＴＣＳＲＥは、非標的細胞特異的ｍｉＲＮＡ認識配列、非標的細胞特異的プロテアーゼ認識部位、非標的細胞特異的ユビキチンリガーゼ部位、非標的細胞特異的転写抑制部位、または非標的細胞特異的エピジェネティック抑制部位を含む。いくつかの実施形態では、ＮＴＣＳＲＥは、組織特異的ｍｉＲＮＡ認識配列、組織特異的プロテアーゼ認識部位、組織特異的ユビキチンリガーゼ部位、組織特異的転写抑制部位、または組織特異的エピジェネティック抑制部位を含む。いくつかの実施形態では、ＮＴＣＳＲＥは、非標的細胞特異的ｍｉＲＮＡ認識配列、非標的細胞特異的プロテアーゼ認識部位、非標的細胞特異的ユビキチンリガーゼ部位、非標的細胞特異的転写抑制部位、または非標的細胞特異的エピジェネティック抑制部位を含む。いくつかの実施形態では、ＮＴＣＳＲＥは、非標的細胞特異的ｍｉＲＮＡ認識配列を含み、このｍｉＲＮＡ認識配列は、ｍｉＲ３１、ｍｉＲ３６３、またはｍｉＲ２９ｃのうちの１つまたは複数によって結合されることができる。いくつかの実施形態では、ＮＴＣＳＲＥは、外因性物質をコードする転写領域内に位置するか、またはその領域内でコードされ、任意で該転写領域によって生産されたＲＮＡは、ＵＴＲまたはコード領域内にｍｉＲＮＡ認識配列を含む。
Ｅ．ＣＡＲの追加の説明
ある特定の実施形態では、細胞は、ＣＡＲをコードする外因性ポリヌクレオチドを含んでもよい。ＣＡＲ（別名、キメラ免疫受容体、キメラＴ細胞受容体、または人工Ｔ細胞受容体）は、特定のタンパク質を標的とする新たな能力を宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）に与えるように操作された受容体タンパク質である。この受容体は、それらが抗原結合機能及びＴ細胞活性化機能の両方を単一受容体に組み合わせるため、キメラである。本開示のポリシストロン性ベクターを使用して、細胞ベースの療法において使用するための宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）において、種々の標的抗原に対する１つまたは複数のＣＡＲを発現させてもよい。１つまたは複数の発現カセットによって発現されるＣＡＲは、同じであっても、異なってもよい。これらの実施形態では、ＣＡＲは、標的抗原に特異的に結合する細胞外結合ドメイン（別称、「結合剤」）、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、１つもしくは複数のシグナルペプチド、１つもしくは複数の細胞外ヒンジドメイン、及び／または１つもしくは複数の細胞内共刺激ドメインを含めた、１つまたは複数の追加の要素をさらに含んでもよい。ドメインは、互いに直接隣接してもよいし、またはドメインを連結する１つもしくは複数のアミノ酸が存在してもよい。ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列は、哺乳類配列、例えば、マウス配列、霊長類配列、ヒト配列、またはそれらの組み合わせに由来し得る。ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列が非ヒトである場合、ＣＡＲの配列は、ヒト化されてもよい。ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列はまた、哺乳類細胞、例えば、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されてもよい。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列は、本明細書に開示されるヌクレオチド配列のうちのいずれかに対して少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であり得る。配列多様性は、コドン最適化、ヒト化、制限酵素ベースのクローニングの痕跡、及び／または機能的ドメインを連結する追加のアミノ酸残基等に起因し得る。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、Ｎ末端にシグナルペプチドを含んでもよい。シグナルペプチドの非限定的な例としては、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＩｇＫシグナルペプチド、及び顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子受容体サブユニットアルファ（ＧＭＣＳＦＲ－α、別名、コロニー刺激因子２受容体サブユニットアルファ（ＣＳＦ２ＲＡ））シグナルペプチド、ならびにそれらのバリアントが挙げられ、これらのアミノ酸配列が下記の表４で提供される。
Figure 2024503027000008
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つの標的抗原または複数の標的抗原に特異的な１つまたは複数の抗体を含んでもよい。抗体は、抗体断片、例えばｓｃＦｖ、または単一ドメイン抗体断片、例えばＶＨＨであり得る。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカーによって接続された抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。ＶＨ及びＶＬは、いずれの順序、すなわち、ＶＨ－リンカー－ＶＬまたはＶＬ－リンカー－ＶＨで接続されてもよい。リンカーの非限定的な例としては、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー、（Ｇ４Ｓ）ｎ（ｎは、正の整数、例えば、１、２、３、４、５、６等であり得る）リンカー、及びそのバリアントが挙げられる。ある特定の実施形態では、抗原は、腫瘍細胞上に限ってもしくはその上に優先的に発現される抗原、または自己免疫もしくは炎症性疾患に特有の抗原であり得る。例示的な標的抗原には、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７０、カッパ、ラムダ、及びＢ細胞成熟因子（ＢＣＭＡ）、Ｇタンパク質共役型受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）（白血病に関連する）；ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＴＡＣＩ、及びＢＣＭＡ（骨髄腫に関連する）；ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｂ７Ｈ３、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＣＡＩＸ、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＰＨＡ２、ＦＡＰ、ＦＲα、ＩＬ－１３Ｒα、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、及びＲＯＲ１（固形腫瘍に関連する）が含まれるが、これらに限定されない。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のために、または細胞外結合ドメインの機能を増加させるためのバリアント配列を有するようにコドン最適化され得る。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ヒンジドメイン、別称、スペーサーを含んでもよい。「ヒンジ」及び「スペーサー」という用語は、本開示で互換的に使用され得る。ヒンジドメインの非限定的な例としては、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン、及びそれらのバリアントが挙げられ、これらのアミノ酸配列が下記の表５で提供される。
Figure 2024503027000009
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、もしくはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、またはこれらの配列の各々のヒトバージョンを含めたそれらの機能的バリアントの膜貫通領域を含んでもよい。他の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳ、及びＦＧＦＲ２Ｂ、またはこれらの配列の各々のヒトバージョンを含めたそれらの機能的バリアントの膜貫通領域を含んでもよい。表６は、少数の例示的な膜貫通ドメインのアミノ酸配列を提供する。
Figure 2024503027000010
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン及び／または細胞内共刺激ドメインは、Ｂ７－１／ＣＤ８０、Ｂ７－２／ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ２／Ｂ７－ＤＣ、ＰＤＣＤ６、４－１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシン－アルファ／ＴＮＦβ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦα、ＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ－３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ５３、ＣＤ８２／Ｋａｉ－１、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｉｋａｒｏｓ、インテグリンアルファ４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンアルファ４ベータ１、インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ－１、ＬＡＧ－３、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン－１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－１／ＫＩＭ－１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ－４、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ Ｒ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ３ζ、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、リガンドであって、ＣＤ８３と特異的に結合するもの、及びこれらの配列の各々のヒトバージョンを含めたその機能的バリアントから選択される１つまたは複数のシグナル伝達ドメインを含んでもよい。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメイン及び／または細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ３ζドメイン、ＩＴＡＭ、ＣＤ２８ドメイン、４－１ＢＢドメイン、またはそれらの機能的バリアントから選択される１つまたは複数のシグナル伝達ドメインを含む。表７は、少数の例示的な細胞内共刺激及び／またはシグナル伝達ドメインのアミノ酸配列を提供する。ある特定の実施形態では、下記に記載されるチサゲンレクルユーセルの場合のように、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、変異、例えば、アミノ酸１４位におけるグルタミン（Ｑ）からリジン（Ｋ）への変異を有してもよい（配列番号１００を参照されたい）。
Figure 2024503027000011
ポリシストロン性ベクターが２つ以上のＣＡＲをコードする、ある特定の実施形態では、これら２つ以上のＣＡＲは、記載されるような同じ機能的ドメインまたは１つもしくは複数の異なる機能的ドメインを含んでもよい。例えば、２つ以上のＣＡＲは、配列類似性に起因する組換えのリスクを最小限に抑えるために、異なるシグナルペプチド、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインを含んでもよい。あるいは、代替として、２つ以上のＣＡＲは、同じドメインを含んでもよい。同じドメイン（複数可）及び／または骨格が使用される場合、組換えのリスクを最小限に抑えるためにヌクレオチド配列レベルでコドン多様化を導入することは任意選択的である。
ＣＤ１９ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９ ＣＡＲ（「ＣＤ１９－ＣＡＲ」）であり、これらの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＣＤ１９に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインをタンデムで含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号８６に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＣＤ１９、例えば、ヒトＣＤ１９に特異的である。ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のために、または細胞外結合ドメインの機能を増加させるためのバリアント配列を有するようにコドン最適化され得る。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子、例えば、ｓｃＦｖの免疫原的に活性な部分を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、リンカーによって接続されたＦＭＣ６３の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ＦＭＣ６３モノクローナル抗体（ＦＭＣ６３）に由来するｓｃＦｖを含む。ＦＭＣ６３及び派生したｓｃＦｖは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５（１９９７）及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１８／２１３３３７号に記載されており、同文献の各々の内容全体は参照により本明細書に援用される。いくつかの実施形態では、ＦＭＣ６３由来ｓｃＦｖ全体（別称、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ）及びその異なる部分のアミノ酸配列が下記の表８で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号１０１、１０２、もしくは１０７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１０１、１０２、もしくは１０７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号１０３～１０５及び１０８～１１０に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号１０３～１０５に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する軽鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号１０８～１１０に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する重鎖を含んでもよい。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、１つもしくは複数のアミノ酸置換、または特定される配列のうちのいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である配列を含む、１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つまたは複数のＣＤＲを含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ部分を連結するリンカーは、配列番号１０６に記載のアミノ酸配列を有するＷｈｉｔｌｏｗリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーは、異なるリンカー、例えば、配列番号１８１に記載のアミノ酸配列を有する３ｘＧ４Ｓリンカーによって置き換えられてもよく、これにより配列番号１１１に記載のアミノ酸配列を有する異なるＦＭＣ６３由来ｓｃＦｖが生じる。これらの実施形態のうちのある特定のものにおいて、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号１１１に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１１１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
Figure 2024503027000012
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、ＳＪ２５Ｃ１（Ｂｅｊｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：２３４６－２３５１（１９９５））、ＨＤ３７（Ｐｅｚｕｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８（９）：２７９３－２７９９（１９８７））、４Ｇ７（Ｍｅｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ３：３０５－３２０（１９８４））、Ｂ４３（Ｂｅｊｃｅｋ（１９９５））、ＢＬＹ３（Ｂｅｊｃｅｋ（１９９５））、Ｂ４（Ｆｒｅｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，７０：４１８－４２７（１９８７））、Ｂ４ ＨＢ１２ｂ（Ｋａｎｓａｓ ＆ Ｔｅｄｄｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：４０９４－４１０２（１９９１）、Ｙａｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１５１７８－１５１８３（２００５）、Ｈｅｒｂｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３３５：２１３－２２２（２０１０））、ＢＵ１２（Ｃａｌｌａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４８（１０）：２９８３－２９８７（１９９２））、及びＣＬＢ－ＣＤ１９（Ｄｅ Ｒｉｅ Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１８：３６８－３８１（１９８９））を含めた、ＣＤ１９に特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、該抗体のうちのいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つもしくは複数のＣＤＲを含み得るか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号８８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号８９に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号９１もしくは配列番号９２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９１もしくは配列番号９２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号９３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号９４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号９５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。４－１ＢＢ、別名、ＣＤ１３７は、強力な共刺激シグナルをＴ細胞に伝達して、Ｔリンパ球の分化を促進すると共に長期生存を増強する。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、ヒトのものである。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメインを含む。ＣＤ２８は、Ｔ細胞上の別の共刺激分子である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、ヒトのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号９８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、記載される４－１ＢＢ共刺激ドメイン及びＣＤ２８共刺激ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメインを含む。ＣＤ３ζは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と会合してシグナルを生み出し、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化に必要な最初のシグナルを機能的に伝達するのに十分である、ゼータ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、ヒトのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号９９に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１０１もしくは配列番号１１１に記載の配列を有するＣＤ１９特異的ｓｃＦｖ、配列番号８８のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号９４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ１９ ＣＡＲを含めたＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＤ１９ ＣＡＲは、記載されるシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を追加的に含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１０１もしくは配列番号１１１に記載の配列を有するＣＤ１９特異的ｓｃＦｖ、配列番号９１もしくは配列番号９２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号９５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ１９ ＣＡＲを含めたＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＤ１９ ＣＡＲは、記載されるシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を追加的に含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１０１もしくは配列番号１１１に記載の配列を有するＣＤ１９特異的ｓｃＦｖ、配列番号８９のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号９５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号９８のＣＤ２８共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ１９ ＣＡＲを含めたＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＤ１９ ＣＡＲは、記載されるシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を追加的に含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、配列番号１１２に記載のＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する、または配列番号１１２に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である、発現カセットを含む（表９を参照されたい）。コードされたＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１１３に記載の対応するアミノ酸配列を有するか、または配列番号１１３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であり、以下の構成要素、すなわちＣＤ８αシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有する。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ＣＤ１９ ＣＡＲの市販の実施形態をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。Ｔ細胞によって発現及び／またはコードされるＣＤ１９ ＣＡＲの市販の実施形態の非限定的な例としては、チサゲンレクルユーセル、リソカブタゲンマラルユーセル、アキシカブタゲンシロルユーセル、及びブレクスカブタゲンオートルユーセルが挙げられる。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、チサゲンレクルユーセルまたはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。チサゲンレクルユーセルは、以下の構成要素、すなわちＣＤ８αシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－３ｘＧ４Ｓリンカー－ＶＨ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有する、ＣＤ１９ ＣＡＲを含む。チサゲンレクルユーセルにおけるＣＤ１９ ＣＡＲのヌクレオチド及びアミノ酸配列が表９で提供され、これらの配列の注釈が表１０で提供される。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、リソカブタゲンマラルユーセルまたはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。リソカブタゲンマラルユーセルは、以下の構成要素、すなわちＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有する、ＣＤ１９ ＣＡＲを含む。リソカブタゲンマラルユーセルにおけるＣＤ１９ ＣＡＲのヌクレオチド及びアミノ酸配列が表９で提供され、これらの配列の注釈が表１１で提供される。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、アキシカブタゲンシロルユーセルまたはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。アキシカブタゲンシロルユーセルは、以下の構成要素、すなわちＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有する、ＣＤ１９ ＣＡＲを含む。アキシカブタゲンシロルユーセルにおけるＣＤ１９ ＣＡＲのヌクレオチド及びアミノ酸配列が表９で提供され、これらの配列の注釈が表１２で提供される。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ブレクスカブタゲンオートルユーセルまたはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。ブレクスカブタゲンオートルユーセルは、以下の構成要素、すなわちＧＭＣＳＦＲ－αシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有する、ＣＤ１９ ＣＡＲを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、配列番号１１４、１１６、もしくは１１８に記載のＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する、または配列番号１１４、１１６、もしくは１１８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である、発現カセットを含む。コードされたＣＤ１９ ＣＡＲは、それぞれ配列番号１１５、１１７、もしくは１１９に記載の対応するアミノ酸配列を有するか、またはそれぞれ配列番号１１５、１１７、もしくは１１９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である。
Figure 2024503027000013
Figure 2024503027000014
Figure 2024503027000015
Figure 2024503027000016
Figure 2024503027000017
Figure 2024503027000018
Figure 2024503027000019
Figure 2024503027000020
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、配列番号１１４、１１６、もしくは１１８に記載のＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する、または配列番号１１４、１１６、もしくは１１８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である、発現カセットを含む。コードされたＣＤ１９ ＣＡＲは、それぞれ配列番号１１５、１１７、もしくは１１９に記載の対応するアミノ酸配列を有し、それぞれ配列番号１１５、１１７、もしくは１１９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である。
ＣＤ２０ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２０ ＣＡＲ（「ＣＤ２０－ＣＡＲ」）であり、これらの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。ＣＤ２０は、Ｂ細胞の表面上においてプロＢ期ほどの早期から、Ｂ細胞成熟まで次第に増加するレベルで見られると同様に、ほとんどのＢ細胞腫瘍の細胞上でも見られる抗原である。ＣＤ２０陽性細胞はまた、ホジキン病、骨髄腫、及び胸腺腫の症例に見られるときもある。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＣＤ２０に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインをタンデムで含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号８６に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＣＤ２０、例えば、ヒトＣＤ２０に特異的である。ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のために、または細胞外結合ドメインの機能を増加させるためのバリアント配列を有するようにコドン最適化され得る。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子、例えば、ｓｃＦｖの免疫原的に活性な部分を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、Ｌｅｕ１６、ＩＦ５、１．５．３、リツキシマブ、オビヌツズマブ、イブリツモマブ、オファツムマブ、トシツモマブ（ｔｏｓｉｔｕｍｕｍａｂ）、オドロネクスタマブ、ベルツズマブ、ウブリツキシマブ、及びオクレリズマブを含めた、ＣＤ２０に特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、該抗体のうちのいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つもしくは複数のＣＤＲを含み得るか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、リンカーによって接続されたＬｅｕ１６の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、Ｌｅｕ１６モノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖを含む。Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．１４（１２）：１０２５－１０３３（２００１）を参照されたい。いくつかの実施形態では、リンカーは、３ｘＧ４Ｓリンカーである。他の実施形態では、リンカーは、本明細書に記載されるＷｈｉｔｌｏｗリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｌｅｕ１６由来ｓｃＦｖ全体（別称、Ｌｅｕ１６ ｓｃＦｖ）及びその異なる部分の異なる部分のアミノ酸配列が下記の表１３で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号１２０、１２１、もしくは１２５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１２０、１２１、もしくは１２５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号１２２～１２４、１２６、１２７、及び１８２に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号１２２～１２４に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する軽鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号１２６、１２７、及び１８２に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する重鎖を含んでもよい。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、１つもしくは複数のアミノ酸置換、または特定される配列のうちのいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である配列を含む、１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つまたは複数のＣＤＲを含むか、またはそれからなる。
Figure 2024503027000021
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号８８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号８９に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号９１もしくは配列番号９２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９１もしくは配列番号９２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号９３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号９４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号９５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、例えば、ヒト４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号９８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメイン、例えば、ヒトＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号９９に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２０に記載の配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号８８のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号９４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含めたＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２０に記載の配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号８９のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号９４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含めたＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２０に記載の配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号９１もしくは配列番号９２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号９４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含めたＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２０に記載の配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号８８のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号９５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含めたＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２０に記載の配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号８９のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号９５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含めたＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２０に記載の配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号９１もしくは配列番号９２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号９５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含めたＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
ＣＤ２２ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２２ ＣＡＲ（「ＣＤ２２－ＣＡＲ」）であり、これらの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達に対する阻害性受容体として機能する、成熟Ｂ細胞の表面上に主として見られる膜貫通型タンパク質であるＣＤ２２。ＣＤ２２は、６０～７０％のＢ細胞リンパ腫及び白血病（例えば、Ｂ慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及びバーキットリンパ腫）において発現し、Ｂ細胞発生の早期段階における細胞表面上または幹細胞上には存在しない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＣＤ２２に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインをタンデムで含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号８６に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＣＤ２２、例えば、ヒトＣＤ２２に特異的である。ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のために、または細胞外結合ドメインの機能を増加させるためのバリアント配列を有するようにコドン最適化され得る。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子、例えば、ｓｃＦｖの免疫原的に活性な部分を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、ＳＭ０３、イノツズマブ、エプラツズマブ、モキセツモマブ、及びピナツズマブを含めた、ＣＤ２２に特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、該抗体のうちのいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つもしくは複数のＣＤＲを含み得るか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、リンカーによって接続されたｍ９７１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ｍ９７１モノクローナル抗体（ｍ９７１）に由来するｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、３ｘＧ４Ｓリンカーである。他の実施形態では、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーが代わりに使用されてもよい。いくつかの実施形態では、ｍ９７１由来ｓｃＦｖ全体（別称、ｍ９７１ ｓｃＦｖ）及びその異なる部分のアミノ酸配列が下記の表１４で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号１２８、１２９、もしくは１３３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１２８、１２９、もしくは１３３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号１３０～１３２及び１３４～１３６に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号１３０～１３２に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する重鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号１３４～１３６に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する軽鎖を含んでもよい。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、１つもしくは複数のアミノ酸置換、または特定される配列のうちのいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である配列を含む、１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つまたは複数のＣＤＲを含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、親抗体ｍ９７１と比較して顕著に改善された（約２ｎＭから５０ｐＭ未満に改善された）ＣＤ２２結合親和性を有する、ｍ９７１の親和性成熟バリアントであるｍ９７１－Ｌ７に由来するｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｍ９７１－Ｌ７に由来するｓｃＦｖは、３ｘＧ４Ｓリンカーによって接続されたｍ９７１－Ｌ７のＶＨ及びＶＬを含む。他の実施形態では、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーが代わりに使用されてもよい。いくつかの実施形態では、ｍ９７１－Ｌ７由来ｓｃＦｖ全体（別称、ｍ９７１－Ｌ７ ｓｃＦｖ）及びその異なる部分のアミノ酸配列が下記の表１４で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号１３７、１３８、もしくは１４２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１３７、１３８、もしくは１４２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号１３９～１４１、１４３～１４５に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号１３９～１４１に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する重鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号１４３～１４５に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する軽鎖を含んでもよい。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、１つもしくは複数のアミノ酸置換、または特定される配列のうちのいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である配列を含む、１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つまたは複数のＣＤＲを含むか、またはそれからなる。
Figure 2024503027000022
Figure 2024503027000023
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、免疫毒素ＨＡ２２またはＢＬ２２を含む。免疫毒素ＢＬ２２及びＨＡ２２は、細菌毒素に融合されたＣＤ２２に特異的なｓｃＦｖを含み、故にＣＤ２２を発現するがん細胞の表面に結合して、がん細胞を殺傷することができる治療剤である。ＢＬ２２は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａの３８－ｋＤａの切り詰め形態に融合された抗ＣＤ２２抗体ＲＦＢ４のｄｓＦｖを含む（Ｂａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１１：１５４５－５０（２００５））。ＨＡ２２（ＣＡＴ８０１５、モキセツモマブパスドトックス）は、ＢＬ２２の変異したより高親和性のバージョンである（Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８０（１）：６０７－１７（２００５））。ＣＤ２２に特異的なＨＡ２２及びＢＬ２２の抗原結合ドメインの好適な配列は、例えば、米国特許第７，５４１，０３４号、同第７，３５５，０１２号、及び同第７，９８２，０１１号に開示され、同文献は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号８８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号８９に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号９１もしくは配列番号９２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９１もしくは配列番号９２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号９３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号９４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号９５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、例えば、ヒト４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号９８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメイン、例えば、ヒトＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号９９に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２８もしくは配列番号１３７に記載の配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号８８のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号９４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含めたＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２８もしくは配列番号１３７に記載の配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号８９のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号９４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含めたＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２８もしくは配列番号１３７に記載の配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号９１もしくは配列番号９２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号９４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含めたＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２８もしくは配列番号１３７に記載の配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号８８のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号９５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含めたＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２８もしくは配列番号１３７に記載の配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号８９のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号９５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含めたＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１２８もしくは配列番号１３７に記載の配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号９１もしくは配列番号９２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号９５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含めたＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
ＢＣＭＡ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲ（「ＢＣＭＡ－ＣＡＲ」）であり、これらの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。ＢＣＭＡは、Ｂ細胞系列の細胞上に発現した腫瘍壊死ファミリー受容体（ＴＮＦＲ）のメンバーであり、最終分化したＢ細胞または成熟Ｂリンパ球上で最も高発現する。ＢＣＭＡは、長期的な液性免疫を維持するための形質細胞の生存の媒介に関与する。ＢＣＭＡの発現は、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫、種々の白血病、ならびに神経膠芽腫等のいくつかのがんに最近関連付けられている。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＢＣＭＡに特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインをタンデムで含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号８６に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＢＣＭＡ、例えば、ヒトＢＣＭＡに特異的である。ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のために、または細胞外結合ドメインの機能を増加させるためのバリアント配列を有するようにコドン最適化され得る。
いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子、例えば、ｓｃＦｖの免疫原的に活性な部分を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、ベランタマブ、エルラナタマブ（ｅｒｌａｎａｔａｍａｂ）、テクリスタマブ、ＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍ、及びシルタカブタゲンを含めた、ＢＣＭＡに特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、該抗体のうちのいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つもしくは複数のＣＤＲを含み得るか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８）：２０４８－２０６０（２０１３）に記載されるようなマウスモノクローナル抗体であるＣ１１Ｄ５．３に由来するｓｃＦｖを含む。また、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／１０４９４９号も参照されたい。Ｃ１１Ｄ５．３由来ｓｃＦｖは、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーによって接続されたＣ１１Ｄ５．３の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよく、このアミノ酸配列が下記の表１５で提供される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１４６、１４７、もしくは１５１に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１４６、１４７、もしくは１５１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１４８～１５０及び１５２～１５４に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１４８～１５０に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する軽鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１５２～１５４に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する重鎖を含んでもよい。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖは、１つもしくは複数のアミノ酸置換、または特定される配列のうちのいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である配列を含む、１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つまたは複数のＣＤＲを含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８）：２０４８－２０６０（２０１３）及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／１０４９４９号に記載されるような別のマウスモノクローナル抗体Ｃ１２Ａ３．２に由来するｓｃＦｖを含み、このアミノ酸配列もまた下記の表１５で提供される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１５５、１５６、もしくは１６０に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１５５、１５６、もしくは１６０に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１５７～１５９及び１６１～１６３に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１５７～１５９に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する軽鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１６１～１６３に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する重鎖を含んでもよい。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖは、１つもしくは複数のアミノ酸置換、または特定される配列のうちのいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である配列を含む、１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つまたは複数のＣＤＲを含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２９（５）：５８５－６０１（２０１８））でＢＢ２１２１と称される、ヒトＢＣＭＡに対して高い特異性を有するマウスモノクローナル抗体を含む。また、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１２１６３８０５号も参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１１（１）：１４１（２０１８）に記載されるような、ＢＣＭＡの２つのエピトープに結合することができる２本の重鎖（ＶＨＨ）でできた単一可変断片、別称、ＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍを含む。また、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１８／０２８６４７号も参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｌａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．１１（１）：２８３（２０２０）に記載されるような完全ヒト重鎖可変ドメイン（ＦＨＶＨ）、別称、ＦＨＶＨ３３を含む。また、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１９／００６０７２号も参照されたい。ＦＨＶＨ３３及びそのＣＤＲのアミノ酸配列が下記の表１５で提供される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１６４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１６４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１６５～１６７に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、１つもしくは複数のアミノ酸置換、または特定される配列のうちのいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である配列を含む、１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つまたは複数のＣＤＲを含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、米国特許第１１，０２６，９７５Ｂ２号に記載されるようなＣＴ１０３Ａ（またはＣＡＲ００８５）に由来するｓｃＦｖを含み、このアミノ酸配列が下記の表１５で提供される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１６８、１６９、もしくは１７３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１６８、１６９、もしくは１７３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１７０～１７２及び１７４～１７６に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１７０～１７２に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する軽鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１７４～１７６に記載のアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを有する重鎖を含んでもよい。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖは、１つもしくは複数のアミノ酸置換、または特定される配列のうちのいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である配列を含む、１つまたは複数のＣＤＲを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つまたは複数のＣＤＲを含むか、またはそれからなる。
さらに、ＢＣＭＡに向けられたＣＡＲ及び結合剤が、米国出願公開第２０２０／０２４６３８１Ａ１号及び同第２０２０／０３３９６９９Ａ１号に記載されており、同文献の各々の内容全体は参照により本明細書に援用される。
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Figure 2024503027000025
Figure 2024503027000026
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号８８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号８９に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号８９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号９１もしくは配列番号９２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９１もしくは配列番号９２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号９３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号９４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号９５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、例えば、ヒト４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号９８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメイン、例えば、ヒトＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号９９に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号９９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、記載されるＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインのうちのいずれか、配列番号８８のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号９４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号９７の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＢＣＭＡ ＣＡＲを含めたＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、記載されるシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を追加的に含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、記載されるＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインのうちのいずれか、配列番号８８のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号９４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号９８のＣＤ２８共刺激ドメイン、配列番号９９のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＢＣＭＡ ＣＡＲを含めたＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。これらの実施形態のうちのいずれかでは、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、記載されるシグナルペプチドを追加的に含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、配列番号１７７に記載のＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する、または配列番号１７７に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である、発現カセットを含む（表１６を参照されたい）。コードされたＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号１７８に記載の対応するアミノ酸配列を有するか、または配列番号１７８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であり、以下の構成要素、すなわちＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＴ１０３Ａ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有する。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、イデカブタゲンビクルユーセル（ｉｄｅ－ｃｅｌ、別称ｂｂ２１２１）を含めたＢＣＭＡ ＣＡＲの市販の実施形態をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、イデカブタゲンビクルユーセルまたはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。イデカブタゲンビクルユーセルは、以下の構成要素、すなわちＢＢ２１２１結合剤、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有する、ＢＣＭＡ ＣＡＲを含む。
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ＶＩ．操作されたＴ細胞の製造及び投与
いくつかの実施形態では、休止または非活性化Ｔ細胞は、ＣＤ８結合物質を含むウイルスベクターと接触させることによってインビトロで操作される。操作された細胞を生成または製造するための例示的なプロセスのいくつかの態様では、ＣＤ８＋細胞が、例えば、白血球アフェレーシスによって得られたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から選択されて、濃縮されたＣＤ８＋細胞の組成物が生成される。いくつかの態様では、かかる細胞は、冷凍保存され得る。いくつかの態様では、ＣＤ８＋組成物は、解凍され、形質導入及び増殖のためのステップに供され得る。
操作された細胞を生成または製造するための例示的なプロセスのいくつかの態様では、ＣＤ８＋細胞は、例えば、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体に結合させた超常磁性ポリスチレンコーティングビーズの存在下では刺激されない。いくつかの態様では、刺激は、ヒト組換えＩＬ－２、ヒト組換えＩＬ－１５、またはＮ－アセチルシステイン（ＮＡＣ）を含有する培地中では実施されない。いくつかの態様では、細胞培養培地は、ヒト組換えＩＬ－７を含まない。いくつかの態様では、ＣＤ８＋細胞は、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、Ｎ－アセチル－システイン、またはＩＬ－７のうちのいずれの存在下でも刺激されない。
細胞は一般に、哺乳類細胞等の真核細胞であり、典型的にはヒト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、血液、骨髄、リンパ、またはリンパ器官に由来し、自然免疫または適応免疫の細胞等の免疫系の細胞、例えば、骨髄系細胞、またはリンパ球、典型的にはＴ細胞及び／またはＮＫ細胞を含めたリンパ系細胞である。他の例示的な細胞には、複能性（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ）幹細胞、及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含めた多能性幹細胞等の幹細胞が含まれる。細胞は典型的には、対象から直接単離されたもの及び／または対象から単離され、凍結されたもの等の初代細胞である。いくつかの実施形態では、細胞には、Ｔ細胞または他の細胞種の１つまたは複数のサブセット、例えば、全Ｔ細胞集団、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及びそれらの亜集団、例えば、機能、活性化状態、成熟度、分化能、増殖能力、再循環能力、局在能力、及び／または存続能力、抗原特異性、抗原受容体の種類、特定の臓器もしくは区画における存在、マーカーもしくはサイトカイン分泌プロファイル、及び／または分化度によって定義される亜集団が含まれる。処置されるべき対象に関連して、細胞は、同種異系及び／または自家であり得る。いくつかの実施形態では、該方法は、対象から細胞を単離することと、それらを調製、プロセシング、培養、及び／または操作することと、冷凍保存の前または後にそれらを同じ対象に再導入することとを含む。
いくつかの態様では、細胞の由来となるまたは細胞が単離される試料は、血液もしくは血液由来試料であるか、またはアフェレーシスもしくは白血球アフェレーシス産物であるか、もしくはそれに由来する。例示的な試料には、全血、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、白血球、骨髄、胸腺、組織生検、腫瘍、白血病、リンパ腫、リンパ節、腸管関連リンパ組織、粘膜関連リンパ組織、脾臓、他のリンパ組織、肝臓、肺、胃、腸、結腸、腎臓、膵臓、乳房、骨、前立腺、子宮頸部、精巣、卵巣、扁桃腺、もしくは他の臓器、及び／またはそれらに由来する細胞が含まれる。試料には、細胞療法、例えば、養子細胞療法の関連において、自家供給源及び同種異系供給源由来の試料が含まれる。
いくつかの実施形態では、選択ステップの少なくとも一部分は、例えばＣＤ８＋ Ｔ細胞について選択するための、選択試薬との細胞のインキュベーションを含む。表面マーカー、例えば、表面タンパク質、細胞内マーカー、または核酸等の１つまたは複数の特定の分子の細胞におけるまたは細胞上での発現または存在に基づいて、例えば、１つまたは複数の異なる細胞種の選択のために１つまたは複数の選択試薬を使用して行われ得る、選択方法の一部としての選択試薬（単数または複数）とのインキュベーション。いくつかの実施形態では、かかるマーカーに基づく分離のための選択試薬（単数または複数）を使用した任意の既知の方法が使用されてもよい。いくつかの実施形態では、選択試薬（単数または複数）は、親和性ベースまたは免疫親和性ベースの分離である分離をもたらす。例えば、いくつかの態様における選択は、細胞の発現または１つもしくは複数のマーカー、典型的には細胞表面マーカーの発現レベルに基づく細胞及び細胞集団の分離のための試薬（単数または複数）とのインキュベーション、例えば、かかるマーカーに特異的に結合する抗体または結合パートナーとのインキュベーションによるもの、続いて一般には洗浄ステップ及び抗体または結合パートナーに結合した細胞の、抗体または結合パートナーに結合していない細胞からの分離を含む。
分離は、特定の細胞集団または特定のマーカーを発現している細胞の１００％の濃縮または除去をもたらす必要はない。例えば、マーカーを発現している細胞等の特定の種類の細胞の正の選択または濃縮は、かかる細胞の数またはパーセンテージを増加させることを指すが、マーカーを発現していない細胞の完全な不在をもたらす必要はない。同様に、マーカーを発現している細胞等の特定の種類の細胞の負の選択、除去、または枯渇は、かかる細胞の数またはパーセンテージを減少させることを指すが、全てのかかる細胞の完全な除去をもたらす必要はない。
特定の実施形態では、生体試料、例えば、ＰＢＭＣまたは他の白血球の試料は、負の画分及び正の画分の両方が保持される、ＣＤ４＋ Ｔ細胞の選択に供される。ある特定の実施形態では、ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、負の画分から選択される。いくつかの実施形態では、生体試料は、負の画分及び正の画分の両方が保持される、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の選択に供される。ある特定の実施形態では、ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、負の画分から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、Ｂ細胞、単球、またはＣＤ１４等の他の白血球等の非Ｔ細胞上に発現されるマーカーの負の選択によってＰＢＭＣ試料から分離される。いくつかの態様では、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋選択ステップを使用して、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞及びＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞が分離される。かかるＣＤ４＋及びＣＤ８＋集団は、１つまたは複数のナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞、及び／またはエフェクターＴ細胞の亜集団上に発現されるまたは比較的高い度合いで発現されるマーカーについての正の選択または負の選択によって、亜集団へとさらに選別され得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、例えば、それぞれの亜集団に関連する表面抗原に基づく正の選択または負の選択によって、ナイーブ幹細胞、セントラルメモリー幹細胞、エフェクターメモリー幹細胞、及び／またはセントラルメモリー幹細胞がさらに濃縮されるか、または枯渇させられる。いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮が、有効性を増加させるため、例えば、投与に次ぐ長期生存、増殖、及び／または生着を改善するために実施され、これはいくつかの態様でかかる亜集団において特に強固である。Ｔｅｒａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｂｌｏｏｄ．１：７２－８２、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５（９）：６８９－７０１を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＴｃＭ濃縮ＣＤ８＋ Ｔ細胞及びＣＤ４＋ Ｔ細胞を組み合わせることにより、有効性がさらに増強される。
複数の実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ＋サブセット及びＣＤ６２Ｌ－サブセットの両方に存在する。ＰＢＭＣは、例えば、抗ＣＤ８抗体及び抗ＣＤ６２Ｌ抗体を使用して、ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ８＋画分及び／またはＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ８＋画分が濃縮されるか、または枯渇させられ得る。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数の組成物は、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％もしくは約１００％のＣＤ８＋ Ｔ細胞であるか、またはそれを含む、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の組成物であるか、またはそれを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の組成物は、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、１％未満、０．１％未満、または０．０１％未満のＣＤ４＋ Ｔ細胞を含有し、及び／またはＣＤ４＋ Ｔ細胞を何ら含有せず、及び／またはＣＤ４＋ Ｔ細胞を含まないもしくは実質的に含まない。いくつかの実施形態では、濃縮されたＴ細胞の組成物は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞から本質的になる。
いくつかの実施形態では、例えば、提供される方法、使用、製造品、または組成物のうちのいずれかに従った細胞療法のための、操作された細胞を生成するための方法は、細胞を培養する、例えば、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）及び／または増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）を促進する条件下で細胞を培養するための１つまたは複数のステップを含む。いくつかの実施形態では、細胞は、細胞を遺伝子操作するステップ、例えば、形質導入またはトランスフェクションによって細胞に組換えポリペプチドを導入するステップに後続して、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）及び／または増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）を促進する条件下で培養される。特定の実施形態では、細胞は、細胞が刺激条件下でインキュベートされ、組換えポリヌクレオチド、例えば、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドで形質導入またはトランスフェクトされた後に培養される。故に、いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする組換えポリヌクレオチドによる形質導入またはトランスフェクションによって操作されたＣＡＲ陽性Ｔ細胞の組成物が、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）及び／または増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）を促進する条件下で培養される。
一態様では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の低減された発現または発現の欠如に向けて操作され、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の低減された発現を有するかまたはその発現を欠いている。初代Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の低減された発現または発現の欠如に加えてＣＤ４７及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を過剰発現するように操作され得、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の低減された発現を有するかまたはその発現を欠いていることが可能である。いくつかの事例では、ＣＡＲは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲである。他の事例では、ＣＡＲは、ＣＤ２２特異的ＣＡＲである。いくつかの事例では、ＣＡＲは、二重特異的ＣＡＲである。ある特定の事例では、ＣＡＲは、ＣＤ１９／ＣＤ２２二重特異的ＣＡＲである。該細胞のうちのいずれも、ＣＤ１９及びＣＤ２２に結合する二重特異的ＣＡＲを発現し得る。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４７及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を過剰発現し、Ｂ２Ｍ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４７を過剰発現するように操作され、ＣＩＩＴＡ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４７及びＣＡＲを過剰発現するように操作され、ＴＲＡＣ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、低免疫Ｔ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＣＤ４７及びＣＡＲを過剰発現し、ＴＲＢ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、低免疫Ｔ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＣＤ４７及びＣＡＲを過剰発現し、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢ遺伝子からなる群から選択される１つまたは複数のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、低免疫Ｔ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＣＤ４７及びＣＡＲを過剰発現し、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、キメラ抗原受容体もまた発現する、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＣＤ４７ｔｇ細胞である。
いくつかの実施形態では、細胞は、キメラ抗原受容体もまた発現する、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＢ－／－、ＣＤ４７ｔｇ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、キメラ抗原受容体もまた発現する、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＴＲＢ－／－、ＣＤ４７ｔｇ細胞である。多くの実施形態では、細胞は、キメラ抗原受容体もまた発現する、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル、ＣＤ４７ｔｇ細胞である。多くの実施形態では、細胞は、キメラ抗原受容体もまた発現する、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル、ＣＤ４７ｔｇ細胞である。多くの実施形態では、細胞は、キメラ抗原受容体もまた発現する、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル、ＣＤ４７ｔｇ細胞である。いくつかの実施形態では、記載される改変細胞は、多能性幹細胞、人工多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞から分化した細胞、または初代Ｔ細胞である。初代Ｔ細胞の非限定的な例としては、ＣＤ３＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、非制御性Ｔ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔｃｍ）細胞、エフェクターメモリーＴ（Ｔｅｍ）細胞、ＣＤ４５ＲＡを発現するエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭＲＡ細胞）、組織常在メモリー（Ｔｒｍ）細胞、仮想メモリーＴ細胞、自然メモリーＴ細胞、メモリー幹細胞（Ｔｓｃ）、γδＴ細胞、及びＴ細胞の任意の他のサブタイプが挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子は、細胞のあらかじめ選択された遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、細胞のあらかじめ選択された遺伝子座内に挿入される。多くの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、細胞のあらかじめ選択された遺伝子座内に挿入される。あらかじめ選択された遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座であり得る。セーフハーバー遺伝子座の非限定的な例としては、ＡＡＶＳ１遺伝子座、ＣＣＲ５遺伝子座、及びＲＯＳＡ２６遺伝子座が挙げられる。いくつかの実施形態では、あらかじめ選択された遺伝子座は、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、及びＴＲＢ遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、あらかじめ選択された遺伝子座は、Ｂ２Ｍ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、あらかじめ選択された遺伝子座は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、あらかじめ選択された遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、あらかじめ選択された遺伝子座は、ＴＲＢ遺伝子座である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、同じ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、異なる遺伝子座内に挿入される。多くの事例では、ＣＤ４７導入遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座内に挿入される。多くの事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座内に挿入される。いくつかの事例では、ＣＤ４７導入遺伝子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座内に挿入される。いくつかの事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座内に挿入される。ある特定の事例では、ＣＤ４７導入遺伝子は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入される。ある特定の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入される。特定の事例では、ＣＤ４７導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子座内に挿入される。特定の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子座内に挿入される。多くの他の事例では、ＣＤ４７導入遺伝子は、ＴＲＢ遺伝子座内に挿入される。多くの他の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＢ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座（例えば、ＡＡＶＳ１遺伝子座、ＣＣＲ５遺伝子座、またはＲＯＳＡ２６遺伝子座）内に挿入される。
多くの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座内に挿入される。多くの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、セーフハーバー遺伝子座内に挿入される。多くの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それらの独自のプロモーターによって制御され、セーフハーバー遺伝子座内に挿入される。多くの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子座内に挿入される。多くの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、ＴＲＡＣ遺伝子座内に挿入される。多くの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それらの独自のプロモーターによって制御され、ＴＲＡＣ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＢ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、ＴＲＢ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それらの独自のプロモーターによって制御され、ＴＲＢ遺伝子座内に挿入される。他の実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座内に挿入される。他の実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、Ｂ２Ｍ遺伝子座内に挿入される。他の実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それらの独自のプロモーターによって制御され、Ｂ２Ｍ遺伝子座内に挿入される。種々の実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入される。種々の実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、ＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入される。種々の実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それらの独自のプロモーターによって制御され、ＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入される。いくつかの事例では、記載される任意の導入遺伝子の発現を制御するプロモーターは、構成的プロモーターである。他の事例では、記載される任意の導入遺伝子に対するプロモーターは、誘導性プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１アルファプロモーターである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は両方とも、構成的プロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子は両方とも、誘導性プロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子は、構成的プロモーターによって制御され、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、誘導性プロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子は、誘導性プロモーターによって制御され、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、構成的プロモーターによって制御される。種々の実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子は、ＥＦ１アルファプロモーターによって制御され、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＥＦ１アルファプロモーターによって制御される。他の実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子及びＣＡＲをコードする導入遺伝子の両方の発現が、単一のＥＦ１アルファプロモーターによって制御される。
本技術は、当業者に利用可能な任意の様態で、本技術のレアカットヌクレアーゼまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを利用して、標的ポリヌクレオチド配列を変化させることを企図する。細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変化させることができる任意のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムが使用され得る。かかるＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステムは、様々なＣａｓタンパク質を用いることができる（Ｈａｆｔ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ．２００５；１（６）ｅ６０）。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムが細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変化させることを可能にするかかるＣａｓタンパク質の分子機構には、ＲＮＡ結合タンパク質、エンドヌクレアーゼ及びエキソヌクレアーゼ、ヘリカーゼ、ならびにポリメラーゼが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、Ｉ型ＣＲＩＳＰＲシステムである。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲシステムである。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、Ｖ型ＣＲＩＳＰＲシステムである。
方法及び編集された細胞はまた、ＷＯ２０１６／１８３０４１及び米国仮特許出願第６３／１３３，１７１号にも開示され、同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。
本明細書にさらに詳細に記載されるように、本明細書では、低免疫原性細胞、特に低免疫原性Ｔ細胞の投与により障害を有する患者を処置するための方法が提供される。理解されようが、療法のタイミング及び／または組み合わせに関連する本明細書に記載の全ての複数の実施形態に関して、該細胞の投与は、所望の部位での導入細胞の少なくとも部分的な局在化をもたらす方法または経路によって遂行される。細胞は、所望の部位に直接注入、埋め込み、または移植され得るか、または代替として、対象内の所望の箇所への送達をもたらす任意の適切な経路によって投与され得、ここで、埋め込まれた細胞または細胞の構成要素の少なくとも一部分は、生存したままである。いくつかの実施形態では、細胞は、対象への皮下（ＳＣ）または筋肉内（ＩＭ）投与によっては提供されない。いくつかの実施形態では、細胞は、対象への静脈内（ＩＶ）投与によって提供される。
本明細書に記載の操作されたＴ細胞は、対象、例えばヒト患者への細胞集団の投与を含む、障害を有する患者を処置するための方法において使用されてもよい。
治療用途では、開示される方法に従って調製された細胞は、典型的には、等張性賦形剤を含む薬学的組成物の形態で供給することができ、ヒト投与のために十分に滅菌された条件下で調製される。細胞組成物の医薬製剤における一般原則については、“Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，”ｂｙ Ｍｏｒｓｔｙｎ ＆ Ｓｈｅｒｉｄａｎ ｅｄｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９６、及び“Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｅ．Ｄ．Ｂａｌｌ，Ｊ．Ｌｉｓｔｅｒ ＆ Ｐ．Ｌａｗ，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，２０００を参照されたい。細胞は、流通または臨床使用に好適なデバイスまたは容器に包装され得る。
ＶＩＩ．薬学的組成物及び製造方法
本開示はまた、いくつかの態様では、本明細書に記載のウイルスベクターまたはＴ細胞組成物及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物も提供する。薬学的組成物は、記載されるウイルスベクターのうちのいずれも含み得る。
いくつかの実施形態では、組成物は、医薬品または適正製造規範（ＧＭＰ）基準を満たす。いくつかの実施形態では、組成物は、適正製造規範（ＧＭＰ）に従って作製される。いくつかの実施形態では、組成物は、既定の参照値を下回る病原体レベルを有し、例えば、病原体を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、既定の参照値を下回る混入物レベルを有し、例えば、混入物を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、低い免疫原性を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書では、本発明の方法を実施するための本発明の薬学的組成物またはその塩の使用が提供される。かかる薬学的組成物は、対象への投与に好適な形態での本発明の少なくとも１つの化合物もしくはコンジュゲートまたはその塩からなってもよく、あるいは薬学的組成物は、本発明の少なくとも１つの化合物もしくはコンジュゲートまたはその塩、及び１つもしくは複数の薬学的に許容される担体、１つもしくは複数の追加の成分、またはこれらの何らかの組み合わせを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本発明の化合物またはコンジュゲートは、当該技術分野で周知されるように、例えば、生理学的に許容されるカチオンまたはアニオンと組み合わせて、生理学的に許容される塩の形態で薬学的組成物中に存在してもよい。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中の活性成分、薬学的に許容される担体、及び任意の追加の成分の相対量は、処置される対象の特性、サイズ、及び病態に応じて、またさらに組成物が投与される経路に応じて様々であろう。いくつかの実施形態では、組成物は、０．１％～１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含んでもよい。
いくつかの実施形態では、本発明の方法において有用である薬学的組成物は、静脈内、腫瘍内、経口、直腸、膣内、非経口、局所、経肺、鼻腔内、頬側、眼内、または別の投与経路のために好適に開発され得る。いくつかの実施形態では、本発明の方法内で有用な組成物は、哺乳動物の皮膚、膣、または任意の他の組織に直接投与され得る。いくつかの実施形態では、製剤には、リポソーム調製物、活性成分を含有する再封された赤血球、及び免疫学に基づく製剤が含まれる。いくつかの実施形態では、投与経路（複数可）は、当業者に容易に明らかとなり、処置されている疾患の種類及び重症度、処置されている獣医学的対象またはヒト対象の種類及び年齢等を含めたいくつもの要因に依存するであろう。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の薬学的組成物の製剤は、薬理学の分野において既知の、または今後開発される任意の方法によって調製され得る。いくつかの実施形態では、調製方法は、活性成分を担体または１つもしくは複数の他の補助成分と関連付け、次いで、必要であれば、または望ましければ、製品を所望の単回または複数回投与単位に成形または包装するステップを含む。
いくつかの実施形態では、「単位用量」とは、既定量の活性成分を含む薬学的組成物の個別的量である。いくつかの実施形態では、活性成分の量は、対象に投与されるであろう活性成分の投薬量、または、例えばそのような投薬量の２分の１もしくは３分の１等の、そのような投薬量の好都合な分数にほぼ等しい。いくつかの実施形態では、単位剤形は、単回１日用量、または複数回１日用量（例えば、１日当たり約１～４回以上）のうちの１つのためのものであり得る。いくつかの実施形態では、複数回１日用量が使用されるとき、単位剤形は、各用量につき同じであっても、または異なってもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される薬学的組成物の説明は、原則として、ヒトへの医療用投与に好適な薬学的組成物を対象とするものの、かかる組成物は一般に、あらゆる動物への投与に好適であることが当業者には理解されよう。いくつかの実施形態では、ヒトへの投与に好適な薬学的組成物を種々の動物への投与に好適なものとするための組成物の改変は、十分に理解されており、通常の知識を有する獣医薬理学者は、たとえあるとしても通例にすぎない実験により、かかる改変を設計し、実施し得る。いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物の投与が企図される対象には、ヒト及び他の霊長類、商業的に関連のある哺乳動物、例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、及びイヌを含めた哺乳動物が含まれる。
いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、本発明の組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤または担体を使用して製剤化される。一実施形態では、本発明の薬学的組成物は、本発明の治療上有効量の化合物またはコンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む。いくつかの実施形態では、有用である薬学的に許容される担体には、グリセロール、水、生理食塩水、エタノール、ならびにリン酸塩及び有機酸の塩等の他の薬学的に許容される塩溶液が含まれるが、これらに限定されない。これら及び他の薬学的に許容される担体の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９１，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）に記載される。
いくつかの実施形態では、担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、それらの好適な混合物、及び植物油を含有する、溶媒または分散媒であってもよい。いくつかの実施形態では、適正な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散剤の場合には必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持され得る。いくつかの実施形態では、微生物の作用の阻止は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等によって達成され得る。いくつかの実施形態では、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウム、またはマンニトール及びソルビトール等のポリアルコールを組成物中に含めることが好ましい。いくつかの実施形態では、注射用組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを組成物中に含めることによってもたらされ得る。一実施形態では、薬学的に許容される担体は、ＤＭＳＯのみではない。
いくつかの実施形態では、製剤は、従来の賦形剤、すなわち、経口、膣内、非経口、鼻腔、静脈内、皮下、経腸、または当該技術分野で既知の任意の他の好適な投与様式に好適な、薬学的に許容される有機または無機担体物質と混和して用いられてもよい。いくつかの実施形態では、薬学的調製物は、滅菌されてもよく、また所望であれば、補助剤、例えば、滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧緩衝液に影響を及ぼすための塩、着色剤、香味剤、及び／または芳香物質等と混合されてもよい。いくつかの実施形態では、薬学的調製物はまた、所望の場合、他の活性剤、例えば、他の鎮痛剤と組み合わされてもよい。
いくつかの実施形態では、「追加の成分」には、以下のうちの１つまたは複数、すなわち、賦形剤、表面活性剤、分散剤、不活性希釈剤、造粒剤及び崩壊剤、結合剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、着色剤、防腐剤、ゼラチン等の生理学的に分解性の組成物、水性ビヒクル及び溶媒、油性ビヒクル及び溶媒、懸濁剤、分散剤または湿潤剤、乳化剤、粘滑剤、緩衝剤、塩、増粘剤、充填剤、乳化剤、酸化防止剤、抗生物質、抗真菌剤、安定剤、ならびに薬学的に許容されるポリマー材料または疎水性材料が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物に含まれ得る「追加の成分」は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｇｅｎａｒｏ，ｅｄ．（１９８５，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ）に記載され、同文献は参照により本明細書に援用される。
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、組成物の総重量に基づいて約０．００５％～２．０％の防腐剤を含んでもよい。いくつかの実施形態では、防腐剤は、環境中の汚染物質に曝露された場合に腐敗を阻止するために使用される。いくつかの実施形態では、本発明に従って有用な防腐剤の例としては、ベンジルアルコール、ソルビン酸、パラベン、イミド尿素、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるものが挙げられたが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、特に好ましい防腐剤は、約０．５％～２．０％のベンジルアルコール及び０．０５％～０．５％のソルビン酸の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、組成物は、好ましくは、酸化防止剤、及び化合物の分解を阻害するキレート剤を含む。いくつかの実施形態では、いくつかの化合物に対する酸化防止剤は、組成物の総重量に基づいて約０．０１重量％～０．３重量％の好ましい範囲でのＢＨＴ、ＢＨＡ、アルファ－トコフェロール、及びアスコルビン酸、より好ましくは０．０３重量％～０．１重量％の範囲でのＢＨＴである。いくつかの実施形態では、キレート剤は、組成物の総重量に基づいて０．０１重量％～０．５重量％の量で存在する。特に好ましいキレート剤は、組成物の総重量に基づいて約０．０１重量％～０．２０重量％の重量範囲での、より好ましくは０．０２重量％～０．１０重量％の範囲でのエデト酸塩（例えば、エデト酸二ナトリウム）及びクエン酸を含む。いくつかの実施形態では、キレート剤は、製剤の貯蔵寿命に有害であり得る組成物中の金属イオンをキレートするのに有用である。いくつかの実施形態では、当業者には既知であろう他の好適な同等の酸化防止剤及びキレート剤をそれらの代用としてもよい。
いくつかの実施形態では、液体懸濁液は、水性または油性ビヒクル中の活性成分の懸濁を達成するための従来の方法を使用して調製され得る。いくつかの実施形態では、水性ビヒクルには、例えば、水及び等張生理食塩水が含まれる。いくつかの実施形態では、油性ビヒクルには、例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、落花生油、オリーブ油、ゴマ油、またはヤシ油、分別植物油等の植物油、及び流動パラフィン等の鉱油が含まれる。いくつかの実施形態では、液体懸濁液は、懸濁剤、分散剤または湿潤剤、乳化剤、粘滑剤、防腐剤、緩衝剤、塩、香味剤、着色剤、及び甘味剤を含むがこれらに限定されない１つまたは複数の追加の成分をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、油性懸濁液は、増粘剤をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、懸濁化剤には、ソルビトールシロップ、硬化食用油脂、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、アカシアガム、及びカルボキシルメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等のセルロース誘導体が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、分散剤または湿潤剤には、レシチン等の天然に存在するホスファチド、アルキレンオキシドと、脂肪酸、長鎖脂肪族アルコール、脂肪酸及びヘキシトールに由来する部分エステル、または脂肪酸及びヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの縮合物（例えば、それぞれ、ステアリン酸ポリオキシエチレン、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、及びポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）が含まれるが、これらに限定されない。既知の乳化剤には、レシチン、及びアカシアが含まれるが、これらに限定されない。既知の防腐剤には、パラ－ヒドロキシ安息香酸メチル、パラ－ヒドロキシ安息香酸エチル、またはパラ－ヒドロキシ安息香酸ｎ－プロピル、アスコルビン酸、及びソルビン酸が含まれるが、これらに限定されない。既知の甘味剤には、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、スクロース、及びサッカリンが含まれる。油性懸濁液のための既知の増粘剤には、例えば、蜜蝋、固形パラフィン、及びセチルアルコールが含まれる。
いくつかの実施形態では、水性または油性溶媒中の活性成分の液体溶液は、液体懸濁液と実質的に同じ様態で調製され得、このうち主要な相違は、活性成分が溶媒中に縣濁されるのではなく溶解されるということである。本明細書で使用されるとき、「油性」液体は、炭素含有液体分子を含み、水よりも低い極性を示すものである。いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物の液体溶液は、液体懸濁液に関して記載される構成要素の各々を含んでもよいが、懸濁剤が必ずしも溶媒中の活性成分の溶解を補助するわけではないことが理解される。いくつかの実施形態では、水性溶媒には、例えば、水及び等張生理食塩水が含まれる。いくつかの実施形態では、油性溶媒には、例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、落花生油、オリーブ油、ゴマ油、またはヤシ油、分別植物油等の植物油、及び流動パラフィン等の鉱油が含まれる。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的調製物の粉末製剤及び顆粒製剤は、既知の方法を使用して調製され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、対象に直接投与されてもよく、例えば、錠剤を形成するため、カプセルを充填するため、または水性もしくは油性ビヒクルをそれに添加することによって水性もしくは油性懸濁液もしくは溶液を調製するために使用されてもよい。いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、製剤は、分散剤または湿潤剤、懸濁剤、及び防腐剤のうちの１つまたは複数をさらに含んでもよい。充填剤及び甘味剤、香味剤、または着色剤等の追加の賦形剤もまた、これらの製剤中に含められてもよい。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物はまた、水中油型乳濁液または油中水型乳濁液の形態で調製、包装、または販売されてもよい。いくつかの実施形態では、油相は、オリーブ油もしくは落花生油等の植物油、流動パラフィン等の鉱油、またはこれらの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、組成物は、アカシアガムまたはトラガカントガム等の天然に存在するガム、ダイズまたはレシチンホスファチド等の天然に存在するホスファチド、ソルビタンモノオレエート等の脂肪酸及びヘキシトール無水物の組み合わせに由来するエステルまたは部分エステル、ならびにポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート等のそのような部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物等の、１つまたは複数の乳化剤をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、乳濁液はまた、例えば、甘味剤または香味剤を含めた追加の成分を含有してもよい。
ＶＩＩＩ．送達方法及び処置方法
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるウイルスベクターは、外因性物質を標的細胞に送達することができる（例えば、送達する）。本明細書で提供される方法の中には、作用物質を標的細胞に送達する工程を含む方法がある。いくつかの実施形態では、外因性物質は、完全に異種であるか、または標的細胞によって産生されないもしくは通常発現されない作用物質である。いくつかの実施形態では、標的細胞への外因性物質の送達は、対象における疾患または病態を処置するような治療効果を提供し得る。治療効果は、疾患または病態に関連するかまたはそれに関与する標的細胞に存在するかまたはそれによって発現される抗原またはタンパク質を標的化するか、調節するか、または変化させることによるものであり得る。治療効果は、外因性物質を提供することによるものであり得、ここで、外因性物質は、標的細胞において存在しない、変異体である、または野生型よりも低いレベルであるタンパク質（または該タンパク質をコードする核酸、例えば、該タンパク質をコードするｍＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、遺伝子疾患、例えば、単一遺伝子疾患、例えば、単一遺伝子細胞内タンパク質疾患を有する対象からのものである。
本明細書に記載のウイルスベクターは、対象、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトに投与され得る。かかる実施形態では、対象は、特定の疾患または病態（例えば、本明細書に記載の疾患または病態）のリスクがあり得るか、その症状を有し得るか、またはそれであると診断もしくはそれを有すると特定され得る。いくつかの実施形態では、疾患または病態は、対象における標的細胞に投与されるウイルスベクターに含まれる外因性物質の送達によって処置されるものであり得る。
本開示はまた、ある特定の態様では、ウイルスベクターを対象（例えば、ヒト対象）、標的組織、または細胞に投与する方法も提供し、該方法は、本明細書に記載の複数のウイルスベクターを含む組成物、本明細書に記載のウイルスベクター組成物、もしくは本明細書に記載の薬学的組成物を対象に投与するか、またはそれと標的組織もしくは細胞を接触させて、それによってウイルスベクター組成物を対象に投与する工程を含む。
本開示はまた、ある特定の態様では、外因性物質、例えば、治療剤（例えば、ポリペプチド、核酸、代謝産物、細胞小器官、または細胞内構造）を対象、標的組織、または細胞に送達する方法も提供し、該方法は、本明細書に記載の複数のウイルスベクター、本明細書に記載の複数のウイルスベクターを含むウイルスベクター組成物、もしくは本明細書に記載の薬学的組成物を対象に投与する工程、またはそれと標的組織もしくは細胞を接触させる工程を含み、該組成物は、治療剤が送達されるような量及び／または時間で投与される。
本開示はまた、ある特定の態様では、機能を対象、標的組織、または細胞に送達する方法も提供し、該方法は、本明細書に記載の複数のウイルスベクター、本明細書に記載の複数のウイルスベクターを含むウイルスベクター組成物、本明細書に記載のウイルスベクター組成物、もしくは本明細書に記載の薬学的組成物を対象に投与する工程、またはそれと標的組織もしくは細胞を接触させる工程を含み、該ウイルスベクター組成物は、標的組織または細胞への外因性物質（例えば、治療剤）のウイルスベクター組成物の送達を介して該機能が送達されるような量及び／または時間で投与される。
いくつかの実施形態では、標的細胞または組織は、ＷＯ２０２０／１０２４９９、ＷＯ２０２０／１０２４８５、ＷＯ２０１９／２２２４０３、ＷＯ２０２０／０１４２０９、及びＷＯ２０２０／１０２５０３のうちのいずれかに列挙されるような任意のものであり、同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。いくつかの実施形態では、標的細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、アルファベータＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞）、制御性Ｔ細胞（例えば、胸腺由来制御性Ｔ細胞、末梢由来制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞、またはＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－１型制御性Ｔ（Ｔｒｌ）細胞）、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ３細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、または濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞）、メモリーＴ細胞（例えば、幹細胞メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、またはエフェクターメモリーＴ細胞）、ＮＫＴ細胞、及び粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞のうちのいずれかである。
Ａ．送達
いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、標的細胞集団（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）における細胞の数の少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％に外因性物質を送達する。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、標的細胞集団（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）に外因性物質の少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％を送達する。
いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、外因性物質を、非標的細胞集団と比較して少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％多く標的細胞集団（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）に送達する。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、標的細胞集団への結合を容易にするが、非標的細胞集団への結合は容易にしないフソゲンまたは標的変更フソゲンを含むウイルスベクターに基づいて、より多くの外因性物質を標的細胞集団に送達する。ウイルスベクターは、本明細書に記載の例示的なフソゲン及び標的変更されたフソゲンのうちのいずれも含み得る。いくつかの実施形態では、複数のウイルスベクターが、標的細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）及び非標的細胞を含む細胞集団と接触させられる場合、外因性物質は、非標的細胞よりも標的細胞に少なくとも１０倍多く存在する。いくつかの実施形態では、複数のウイルスベクターが、標的細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）及び非標的細胞を含む細胞集団と接触させられる場合、外因性物質は、非標的細胞よりも標的細胞に少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、もしくは５０倍多く存在し、及び／または外因性物質は、非標的細胞よりも標的細胞に少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、もしくは５０倍多く存在する。いくつかの実施形態では、複数のウイルスベクターは、非標的細胞よりも標的細胞と少なくとも５０％高い率で融合する。
いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、例えば、遺伝子療法のために、例えば、標的細胞のゲノムを安定に改変するために、核酸を標的細胞に送達することができる（例えば、送達する）。同様に、いくつかの実施形態では、本明細書における方法は、核酸を標的細胞に送達する工程を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書における方法は、ウイルスベクター上で細胞表面リガンドを提示することによって、標的細胞の表面上でリガンド提示を引き起こす工程を含む。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、標的細胞の細胞死を引き起こすことができる。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、ＮＫ供給源細胞に由来する。
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたは標的細胞は、（例えば、病原体）の食作用が可能である。同様に、いくつかの実施形態では、本明細書における方法は、食作用を引き起こす工程を含む。
いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、膜タンパク質または膜タンパク質をコードする核酸を含む（例えば、それを標的細胞に送達することができる）。
いくつかの実施形態では、該ウイルスベクター、例えば、フソソームは、標的細胞への結合を容易にするが、非標的細胞への結合は容易にしないフソゲンまたは標的変更フソゲンを含むウイルスベクターに基づいて、非標的細胞よりも標的細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）とより高い率で融合する。ウイルスベクターは、本明細書に記載の例示的なフソゲン及び標的変更されたフソゲンのうちのいずれも含み得る。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクター、例えば、フソソームは、非標的細胞よりも標的細胞と、例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、または１００倍高い率で融合する。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクター、例えば、フソソームは、他のウイルスベクターを用いるよりも標的細胞と、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％高い率で融合する。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクター、例えば、フソソームは、ウイルスベクターにおける外因性物質または外因性物質をコードする核酸が２４、４８、または７２時間後に標的細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％に送達されるような率で標的細胞と融合する。複数の実施形態では、標的化融合の量は、約３０％～７０％、３５％～６５％、４０％～６０％、４５％～５５％、または４５％～５０％である。複数の実施形態では、標的化融合の量は、約２０％～４０％、２５％～３５％、または３０％～３５％である。
いくつかの実施形態では、フソゲンは、少なくとも１０、５０、１００、５００、１，０００、２，０００、５，０００、１０，０００、２０，０００、５０，０００、１００，０００、２００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００、１００，０００，０００、５００，０００，０００、もしくは１，０００，０００，０００コピー、または１０、５０、１００、５００、１，０００、２，０００、５，０００、１０，０００、２０，０００、５０，０００、１００，０００、２００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００、１００，０００，０００、５００，０００，０００、もしくは１，０００，０００，０００コピー以下のコピー数で存在する。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターによって含まれるフソゲンの少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が細胞膜に配置される。複数の実施形態では、該ウイルスベクターはまた、フソゲンを内部にも、例えば、細胞質または細胞小器官にも含む。いくつかの実施形態では、フソゲンは、例えば、質量分析アッセイによって決定したとき、ウイルスベクターにおける総タンパク質の約０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、５％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、もしくはそれよりも多く、または約１～３０％、５～２０％、１０～１５％、１２～１５％、１３～１４％、もしくは１３．６％を構成する（または構成すると特定される）。複数の実施形態では、フソゲンは、ウイルスベクターにおける総タンパク質の約１３．６％を構成する（または構成すると特定される）。いくつかの実施形態では、フソゲンは、目的となる１つまたは複数の追加のタンパク質よりも存在量が多いかまたは少ない（またはそのように特定される）。複数の実施形態では、フソゲンは、ＥＧＦＰに対して約１４０、１４５、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７（例えば、１５６．９）、１５８、１５９、１６０、１６５、または１７０の比を有する（または有すると特定される）。別の実施形態では、フソゲンは、例えば、質量分析アッセイによって、ＣＤ６３に対して約２７００、２８００、２９００、２９１０（例えば、２９１２）、２９２０、２９３０、２９４０、２９５０、２９６０、２９７０、２９８０、２９９０、もしくは３０００、または約１０００～５０００、２０００～４０００、２５００～３５００、２９００～２９３０、２９１０～２９１５、もしくは２９１２．０の比を有する（または有すると特定される）。複数の実施形態では、フソゲンは、ＡＲＲＤＣ１に対して約６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０（例えば、６６４．９）、６７０、６８０、６９０、または７００の比を有する（または有すると特定される）。別の実施形態では、フソゲンは、ＧＡＰＤＨに対して約５０、５５、６０、６５、７０（例えば、６９）、７５、８０、または８５、または約１～３０％、５～２０％、１０～１５％、１２～１５％、１３～１４％、または１３．６％の比を有する（または有すると特定される）。別の実施形態では、フソゲンは、例えば、質量分析アッセイによって、ＣＮＸに対して約５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０（例えば、５５８．４）、５７０、５８０、５９０、もしくは６００、または約３００～８００、４００～７００、５００～６００、５２０～５９０、５３０～５８０、５４０～５７０、５５０～５６０、もしくは５５８．４の比を有する（または有すると特定される）。
Ｂ．送達のためのシステム
本明細書では、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを対象に投与する方法が提供される。いくつかの実施形態では、該方法は、（ａ）対象から全血を得ることと、（ｂ）ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む白血球構成要素を含有する血液の画分を収集することと、（ｃ）ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む白血球構成要素を、レンチウイルスベクターを含む組成物と接触させて、トランスフェクション混合物を作り出すことと、（ｄ）接触させたＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む白血球構成要素及び／またはトランスフェクション混合物を対象に再注入し、それによって脂質粒子及び／またはペイロード遺伝子を対象に投与することとを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）は、該方法中に活性化されない。
本開示による方法は、レンチウイルス粒子をエクスビボシステムに送達することができる。該方法は、処置の処方の最大の精度及び安全性を確実にするためのインラインでの種々のアフェレーシスマシンハードウェア構成要素、ソフトウェアコントロールモジュール、及びクエン酸塩または他の溶質レベルを測定するためのセンサーモジュールの組み合わせの使用、ならびに本方法によるシステムの設計を十分に利用するように設計された交換液の使用を含んでもよい。本発明による１つのシステムに関して記載される構成要素は、本発明による他のシステム内でも実装され得ることを理解されたい。
いくつかの実施形態では、対象へのレンチウイルスベクターの投与のための方法は、対象から全血を得るための血液処理セット、ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む白血球構成要素を含有する血液の画分を収集するための分離チャンバ、レンチウイルスベクターを含む組成物とＣＤ８＋ Ｔ細胞を接触させるための接触用容器、及び患者へのＣＤ８＋ Ｔ細胞の再注入のためのさらなる流体回路の使用を含む。いくつかの実施形態では、該方法は、（ｉ）Ｔ細胞を濃縮するための洗浄用構成要素、ならびに（ｉｉ）細胞の密度及び／または濃度を監視するためのセンサー及び／またはモジュールのうちのいずれかをさらに含む。いくつかの実施形態では、該方法は、Ｔ細胞またはＣＤ８＋ Ｔ細胞について選択するいずれのステップも伴わずに、患者からの直接の血液の処理、レンチウイルスベクターによる形質導入、及び患者への直接の再注入を可能にする。さらに、該方法はまた、ステップのうちのいずれか１つまたは複数の前またはそれらの間にいずれの細胞も冷凍保存または凍結することなしに実施され得、それにより、細胞に凍結保護剤、例えば、ＤＭＳＯを配合するステップは何ら存在しない。いくつかの実施形態では、提供される方法はまた、リンパ球枯渇レジメンも含まない。いくつかの実施形態では、ステップ（ａ）～（ｄ）を含む該方法は、２４時間以下、例えば、２時間～１２時間、例えば、３時間～６時間の時間にわたって実施され得る。
いくつかの実施形態では、該方法は、インラインで行われる。いくつかの実施形態では、該方法は、閉鎖型流体回路、または機能的閉鎖型流体回路において行われる。いくつかの実施形態では、ステップ（ａ）～（ｄ）の各々は、システムの全てのパーツが、例えば、少なくとも１つのチュービングラインを介して作動的に接続されている、閉鎖型流体回路においてインラインで行われる。いくつかの実施形態では、システムは、滅菌されている。いくつかの実施形態では、閉鎖型流体回路は、滅菌されている。
また、本明細書では、米国特許出願第６３／２９８，１９６号（参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されるシステムのうちのいずれも含めた、対象へのＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターの投与のためのシステムが提供される。投与のための例示的なシステムが図５に示される。
Ｃ．処置及び使用
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるウイルスベクター、または本明細書に記載されるその薬学的組成物は、対象、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトに投与され得る。いくつかの実施形態では、投与は、ウイルスベクターを対象における標的細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）に送達する。かかる実施形態では、対象は、特定の疾患または病態のリスクがあり得るか、その症状を有し得るか、またはそれであると診断もしくはそれを有すると特定され得る。いくつかの実施形態では、該方法は、それによって対象における疾患または病態または障害を処置する。一実施形態では、対象は、がんを有する。一実施形態では、対象は、感染性疾患を有する。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクター、例えば、レトロウイルス粒子、他のウイルスベクターまたはそのフソソームは、対象における疾患または病態を処置するための外因性物質をコードする核酸配列を含有する。例えば、外因性物質は、新生細胞のタンパク質を標的とするものであるか、またはそれに特異的であり、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルス粒子、他のウイルスベクターまたはそのフソソームは、対象における腫瘍またはがんを処置するために対象に投与される。別の例では、外因性物質は、サイトカイン等の炎症メディエーターまたは免疫分子であり、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルス粒子、他のウイルスベクターまたはそのフソソームは、がんまたは感染性疾患等の、免疫応答を調節する（例えば、増加させる）ことが所望される任意の病態を処置するために対象に投与される。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクター、例えば、レトロウイルス粒子、他のウイルスベクターまたはそのフソソームは、疾患、病態、または障害の処置を達成するような有効量または有効用量で投与される。
本明細書では、かかる方法及び処置における、ならびにかかる治療方法を実行するための医薬の調製における、提供されるウイルスベクター、例えば、レトロウイルス粒子、他のウイルスベクターまたはそのフソソームのうちのいずれかの使用が提供される。いくつかの実施形態では、該方法は、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルス粒子、他のウイルスベクターもしくはそのフソソーム、またはそれを含む組成物を、疾患または病態または障害を有する、それを有したことがある、またはそれを有することが疑われる対象に投与することによって実施される。いくつかの実施形態では、該方法は、それによって対象における疾患または病態または障害を処置する。また、本明細書では、外因性物質によって標的化されるかまたはそれによって提供される特定の遺伝子またはタンパク質に関連する疾患、病態、または障害の処置のための、本明細書で提供される薬学的組成物等の組成物のうちのいずれかの使用が提供される。
いくつかの実施形態では、提供される方法または使用は、経口、吸入、経皮、または非経口（静脈内、腫瘍内、腹腔内、筋肉内、腔内、及び皮下を含む）投与を含む、薬学的組成物の投与を伴う。いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、単独で投与されても、または薬学的組成物として製剤化されてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスベクターまたは薬学的組成物は、対象、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトに投与され得る。いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、対象は、特定の疾患または病態（例えば、本明細書に記載の疾患または病態）のリスクがあり得るか、その症状を有し得るか、またはそれであると診断もしくはそれを有すると特定され得る。いくつかの実施形態では、疾患は、疾患または障害である。
いくつかの実施形態では、該ウイルスベクターは、単位用量の経口、非経口、経皮または吸入組成物等の単位用量組成物の形態で投与されてもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、混和によって調製され、経口、吸入、経皮、または非経口投与に適応させられ、したがって錠剤、カプセル、経口液体調製物、粉末、顆粒、ロゼンジ、再構成可能な粉末、注射可能及び注入可能な溶液もしくは懸濁液、または坐剤、またはエアロゾルの形態であってもよい。
いくつかの実施形態では、投与のレジメンは、有効量を構成するものに影響を及ぼし得る。いくつかの実施形態では、治療製剤は、疾患の診断の前または後のいずれで対象に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、いくつかの分割投薬量、ならびに時間差を設けた投薬量が毎日もしくは順次に投与されてもよいし、または用量は継続的に注入されてもよいし、もしくはボーラス注射であってもよい。いくつかの実施形態では、治療製剤の投薬量は、治療状況または予防状況の急場によって指示されるように比例的に増加または減少させてもよい。
いくつかの実施形態では、本発明の組成物の、対象、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトへの投与は、既知の手順を使用して、疾患を予防または治療するのに有効な投薬量及び期間で実施されてもよい。いくつかの実施形態では、治療効果を達成するために必要な治療用化合物の有効量は、用いられる特定の化合物の活性、投与時間、化合物の排泄率、処置の持続期間、その化合物と併用される他の薬物、化合物、または材料、処置されている対象の疾患または障害の状況、年齢、性別、体重、病態、全身の健康状態、及び以前の病歴、ならびに医療分野で周知の同様の要因等の要因に応じて様々であり得る。いくつかの実施形態では、投薬量レジメンを調整して、最適な治療反応を提供してもよい。いくつかの実施形態では、いくつかの分割用量が毎日投与されてもよいし、または用量は、治療状況の急場によって指示されるように比例的に低減されてもよい。当業者であれば、関連性のある要因を研究し、過度の実験を伴わずに治療用化合物の有効量に関して決定を下すことが可能であろう。
いくつかの実施形態では、組成物は、１日数回ほどに頻繁に対象に投与されてもよいし、あるいはより低い頻度で、例えば、１日１回、週１回、２週間に１回、月１回、またはさらに低い頻度で、例えば、数ヶ月に１回もしくはさらには年１回もしくはそれ未満で投与されてもよい。いくつかの実施形態では、組成物の量は、非限定的な例では、毎日、１日おき、２日毎、３日毎、４日毎、または５日毎に投与されてもよい。投薬の頻度は、当業者には容易に明らかであり、限定されないが、処置されている疾患の種類及び重症度、動物の種類及び年齢等といったいくつもの要因に依存するであろう。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中の活性成分の投薬量レベルは、対象に有毒であることなく、特定の対象、組成物、及び投与様式に対する所望の治療反応を達成するために有効である活性成分の量を得るように、変化させられてもよい。
当該技術分野において通常の知識を有する臨床医、例えば、医師または獣医は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定し、処方し得る。いくつかの実施形態では、医師または獣医は、薬学的組成物中で用いられる本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで投薬量を徐々に増加させることが可能であろう。
いくつかの実施形態では、投与の容易性及び投薬量の均一性のために、化合物を単位剤形で製剤化することがとりわけ有利である。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される単位剤形とは、対象を処置するために、単位投薬として適した物理的に個別的な単位を指し、ここで各単位は、必要とされる薬剤ビヒクルに関連して所望の治療効果を生み出すように算出された既定量の治療用化合物を含有する。いくつかの実施形態では、本発明の単位剤形は、（ａ）治療用化合物の独特の特性及び達成されるべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）対象における疾患の処置のためにそのような治療用化合物を調合する／製剤化する技術分野に本質的に存在する限界によって決定付けられ、またそれに直接依存する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスベクターまたはウイルスベースの粒子のうちのいずれか等の提供されるウイルスベクターを含有する、本明細書で提供される組成物は、ゲノムコピー（ＧＣ）の投薬量単位で製剤化され得る。ＧＣを決定するための好適な方法が記載されており、これには例えば、Ｍ．Ｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ，Ｈｕ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５（２）：１１５－２５．２０１４（参照により本明細書に援用される）に記載されるような、例えば、ｑＰＣＲまたはデジタルドロップレットＰＣＲ（ｄｄＰＣＲ）が含まれる。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０４～約１０１０ＧＣ単位（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０９～約１０１５ＧＣ単位（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０５～約１０９ＧＣ単位（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０６～約１０９ＧＣ単位（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０９～約１０１２ＧＣ単位（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０１２～約１０１４ＧＣ単位（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、投与の投薬量は、１．０×１０９ＧＣ単位、５．０×１０９ＧＣ単位、１．０×１０１０ＧＣ単位、５．０×１０１０ＧＣ単位、１．０×１０１１ＧＣ単位、５．０×１０１１ＧＣ単位、１．０×１０１２ＧＣ単位、５．０×１０１２ＧＣ単位、または１．０×１０１３ＧＣ単位、５．０×１０１３ＧＣ単位、１．０×１０１４ＧＣ単位、５．０×１０１４ＧＣ単位、または１．０×１０１５ＧＣ単位である。
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０４～約１０１０感染単位（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０９～約１０１５感染単位（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０５～約１０９感染単位である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０６～約１０９感染単位である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０９～約１０１２感染単位（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０１２～約１０１４感染単位（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、投与の投薬量は、１．０×１０９感染単位、５．０×１０９感染単位、１．０×１０１０感染単位、５．０×１０１０感染単位、１．０×１０１１感染単位、５．０×１０１１感染単位、１．０×１０１２感染単位、５．０×１０１２感染単位、または１．０×１０１３感染単位、５．０×１０１３感染単位、１．０×１０１４感染単位、５．０×１０１４感染単位、または１．０×１０１５感染単位である。感染単位を定量するために利用可能な技法は、当該技術分野で通例であり、ウイルス粒子数の決定、蛍光顕微鏡法、及びプラークアッセイによる力価を含む。例えば、アデノウイルス粒子の数は、Ａ２６０での吸光度を測定することによって決定することができる。同様に、感染単位もまた、モノクローナル抗体を使用したベクター特異的タンパク質の定量的免疫蛍光法によって、またはプラークアッセイによって決定することができる。
いくつかの実施形態では、感染単位を算出する方法は、ウイルスの力価測定を細胞単層上で増殖させ、数日から数週間後にプラークの数を数える、プラークアッセイを含む。例えば、感染力価は、プラークアッセイ、例えば、細胞変性効果（ＣＰＥ）を評価するためのアッセイ等によって決定される。いくつかの実施形態では、ＣＰＥアッセイは、ＨＦＦ細胞等の細胞の単層上でウイルスを段階希釈し、それにアガロースを重ねることによって行われる。細胞変性効果を達成するために一定期間、例えば、約３～２８日間、一般には７～１０日間インキュベーションした後、細胞は固定され得、プラークとして可視化された欠損細胞の感染巣が決定される。いくつかの実施形態では、感染単位は、終末点希釈（ＴＣＩＤ５０）法を使用して決定することができ、これは細胞培養物の５０％が感染するウイルスの希釈率を決定するものであり、よって一般に、対数１等のある特定の範囲内の力価を決定することができる。
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０４～約１０１０プラーク形成単位（ｐｆｕ）（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０９～約１０１５ｐｆｕ（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０５～約１０９ｐｆｕである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０６～約１０９ｐｆｕである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０９～約１０１２ｐｆｕ（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子の投与の投薬量は、約１０１２～約１０１４ｐｆｕ（境界値を含む）である。いくつかの実施形態では、投与の投薬量は、１．０×１０９ｐｆｕ、５．０×１０９ｐｆｕ、１．０×１０１０ｐｆｕ、５．０×１０１０ｐｆｕ、１．０×１０１１ｐｆｕ、５．０×１０１１ｐｆｕ、１．０×１０１２ｐｆｕ、５．０×１０１２ｐｆｕ、または１．０×１０１３ｐｆｕ、５．０×１０１３ｐｆｕ、１．０×１０１４ｐｆｕ、５．０×１０１４ｐｆｕ、または１．０×１０１５ｐｆｕである。
いくつかの態様では、本明細書で提供される薬学的組成物内のビヒクルの投与の投薬量は、対象の体重に応じて様々である。例えば、組成物は、ＧＣ／ｋｇ、感染単位／ｋｇ、ｐｆｕ／ｋｇ等として製剤化されてもよい。いくつかの態様では、治療効果が得られる投薬量は、対象の体重に基づいて１０８ＧＣ／ｋｇまたは約１０８ＧＣ／ｋｇ～約１０１４ＧＣ／ｋｇまたは約１０１４ＧＣ／ｋｇ（境界値を含む）である。いくつかの態様では、治療効果が得られる投薬量は、対象の体重（ＧＣ／ｋｇ）に基づいて１０８ＧＣ／ｋｇまたは約１０８ＧＣ／ｋｇである。いくつかの態様では、投薬量は、対象の体重に基づいて１０８感染単位／ｋｇまたは約１０８感染単位／ｋｇ～１０１４感染単位／ｋｇまたは約１０１４感染単位／ｋｇ（境界値を含む）である。
いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、本発明の組成物は、１日当たり１～５回以上の範囲の投薬量で対象に投与される。別の実施形態では、本発明の組成物は、毎日、２日、３日に１回から週１回、及び２週間に１回を含むがこれらに限定されない投薬量の範囲で対象に投与される。本発明の組成物の種々の組み合わせの投与の頻度が、年齢、処置されるべき疾患または障害、性別、全体的な健康状態、及び他の要因を含むがこれらに限定されない多くの要因に応じて対象間で様々であろうことは、当業者に容易に明らかとなろう。
いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、本開示は、単独でまたは第２の医薬品と組み合わせた治療上有効量の本発明の化合物またはコンジュゲートと、化合物またはコンジュゲートを使用して、対象において疾患の１つまたは複数の症状を処置、予防、または低減するための説明書とを保有する容器を含む、包装された薬学的組成物に関する。
いくつかの実施形態では、「容器」という用語は、薬学的組成物を保有するための任意の入れ物を含む。いくつかの実施形態では、容器は、薬学的組成物を収容する包装である。他の実施形態では、容器は、薬学的組成物を収容する包装ではなく、すなわち、容器は、包装された薬学的組成物または包装されていない薬学的組成物及び薬学的組成物の使用に関する説明書を収容する、箱またはバイアル等の入れ物である。薬学的組成物の使用に関する説明書は、薬学的組成物を収容する包装上に含まれてもよく、したがって、説明書は、包装された製品との増加した機能的関係を形成することを理解されたい。いくつかの実施形態では、説明書は、その意図される機能、例えば、対象において疾患を処置もしくは予防すること、または画像化剤もしくは診断剤を対象に送達することを果たす化合物の能力に関する情報を含んでもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物のうちのいずれかの投与経路には、経口、鼻腔、直腸、非経口、舌下、経皮、経粘膜（例えば、舌下、舌、（経）頬側、（経）尿道、膣内（例えば、経膣及び膣周囲）、鼻腔（内）、及び（経）直腸）、膀胱内、肺内、十二指腸内、胃内、髄腔内、皮下、筋肉内、皮内、動脈内、静脈内、腫瘍内、気管支内、吸入、及び局所投与が含まれる。
いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、好適な組成物及び剤形には、例えば、錠剤、カプセル、カプレット、丸薬、ゲルカプセル、トローチ、分散剤、懸濁液、溶液、シロップ、顆粒、ビーズ、経皮パッチ、ゲル、粉末、ペレット、マグマ、ロゼンジ、クリーム、ペースト、膏薬、ローション、ディスク、座剤、鼻腔または経口投与のための液体スプレー、吸入のための乾燥粉末またはエアロゾル化製剤、膀胱内投与のための組成物及び製剤等が含まれる。
いずれかの実施形態のうちのいくつかでは、本明細書に記載のウイルスベクター組成物は、細胞または組織、例えば、ヒト細胞または組織にエクスビボで送達される。複数の実施形態では、該組成物は、細胞または組織の機能をエクスビボで改善し、例えば、細胞生存率、呼吸、または他の機能（例えば、本明細書に記載の別の機能）を改善する。
いくつかの実施形態では、該組成物は、傷害状態（例えば、外傷、疾患、低酸素症、虚血、または他の損傷による）にあるエクスビボの組織に送達される。
いくつかの実施形態では、該組成物は、エクスビボ移植片（例えば、組織外植片または移植用の組織、例えば、ヒト静脈、骨もしくは腱等の筋骨格移植片、角膜、皮膚、心臓弁、神経；または単離もしくは培養された臓器、例えば、ヒトに移植される臓器、例えば、ヒト心臓、肝臓、肺、腎臓、膵臓、腸、胸腺、眼）に送達される。いくつかの実施形態では、該組成物は、移植の前、その最中及び／または後に組織または臓器に送達される。
いくつかの実施形態では、該組成物は、細胞、例えば、細胞調製物と共に送達、投与、またはそれと接触させられる。いくつかの実施形態では、細胞調製物は、細胞療法調製物（ヒト対象への投与が意図される細胞調製物）であり得る。複数の実施形態では、細胞調製物は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現している、例えば、組換えＣＡＲを発現している細胞を含む。ＣＡＲを発現している細胞は、例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞であり得る。複数の実施形態では、細胞調製物は、神経幹細胞調製物である。複数の実施形態では、細胞調製物は、間葉幹細胞（ＭＳＣ）調製物である。複数の実施形態では、細胞調製物は、造血幹細胞（ＨＳＣ）調製物である。複数の実施形態では、細胞調製物は、膵島細胞調製物である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスベクター組成物は、対象、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトに投与され得る。かかる実施形態では、対象は、特定の疾患または病態（例えば、本明細書に記載の疾患または病態）のリスクがあり得るか、その症状を有し得るか、またはそれであると診断もしくはそれを有すると特定され得る。
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターの供給源は、ウイルスベクター組成物を投与される同じ対象からのものである。他の実施形態では、それらは異なる。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターの供給源及びレシピエント組織は、自家（同じ対象からのもの）または異種（異なる対象からのもの）であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスベクター組成物のためのドナー組織は、レシピエント組織とは異なる組織種であってもよい。いくつかの実施形態では、ドナー組織は、筋肉組織であってもよく、レシピエント組織は、結合組織（例えば、脂肪組織）であってもよい。他の実施形態では、ドナー組織及びレシピエント組織は、同じ種類のものであっても異なる種類のものであってもよいが、異なる臓器系からのものではない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスベクター組成物は、がん、自己免疫疾患、感染性疾患、代謝疾患、神経変性疾患、または遺伝子疾患（例えば、酵素欠損症）を有する対象に投与されてもよい。
ＩＸ．例示的な実施形態
提供される実施形態の中には以下のものがある。
１．Ｔ細胞に形質導入する方法であって、前記方法が、
非活性化Ｔ細胞を、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターと接触させる工程
を含み、前記レンチウイルスベクターが、前記非活性化Ｔ細胞に形質導入する、前記方法。
２．前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である、実施形態１に記載の方法。
３．前記非活性化Ｔ細胞が、ＣＤ２５、ＣＤ４４、及びＣＤ６９からなる群から選択される１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である、実施形態１または実施形態２に記載の方法。
４．前記非活性化Ｔ細胞が、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）で処理されていない、実施形態１～３のいずれかに記載の方法。
５．前記非活性化Ｔ細胞が、抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）で処理されていない、実施形態１～４のいずれかに記載の方法。
６．前記非活性化Ｔ細胞が、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）に結合させたビーズで処理されておらず、任意で前記ビーズが、超常磁性ビーズである、実施形態１～５のいずれかに記載の方法。
７．前記非活性化Ｔ細胞が、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）で処理されておらず、任意で前記Ｔ細胞活性化サイトカインが、ヒトサイトカインである、実施形態１～６のいずれかに記載の方法。
８．前記非活性化Ｔ細胞が、可溶性Ｔ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体または可溶性ＣＤ８０、可溶性ＣＤ８６、可溶性ＣＤ１３７Ｌまたは可溶性ＩＣＯＳ－Ｌ）で処理されていない、実施形態１～７のいずれかに記載の方法。
９．前記レンチウイルスベクターが、
疾患または病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする、導入遺伝子
を含む、実施形態１～８のいずれかに記載の方法。
１０．前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態９に記載の方法。
１１．前記ＣＡＲが、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインの細胞内構成要素を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態９または実施形態１０に記載の方法。
１２．前記共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインである、実施形態１１に記載の方法。
１３．前記操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態９に記載の方法。
１４．前記非活性化Ｔ細胞が、ヒトＴ細胞である、実施形態１～１３のいずれかに記載の方法。
１５．前記非活性化Ｔ細胞が、対象内にある、実施形態１～１４のいずれかに記載の方法。
１６．前記非活性化Ｔ細胞が、インビトロにある、実施形態１～１４のいずれかに記載の方法。
１７．前記非活性化Ｔ細胞が、対象のエクスビボにある、実施形態１～１４のいずれかに記載の方法。
１８．前記接触工程より前に、前記対象が、Ｔ細胞活性化処置を施されていなかった、実施形態１５または実施形態１７に記載の方法。
１９．前記対象が、疾患または病態を有する、実施形態１５、１７、または１８に記載の方法。
２０．実施形態１～１４、１６～１９、及び５６～１１９のいずれかに記載の方法によって生産される、形質導入されたＴ細胞。
２１．任意で薬学的組成物である、実施形態２０に記載の形質導入されたＴ細胞を含む組成物。
２２．Ｔ細胞の集団に形質導入する方法であって、前記方法が、
非活性化Ｔ細胞の集団を、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させる工程
を含み、前記非活性化Ｔ細胞の集団が、少なくとも１％の効率で形質導入される、前記方法。
２３．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、少なくとも５％の効率で形質導入される、実施形態２２に記載の方法。
２４．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％の効率で形質導入される、実施形態２２または実施形態２３に記載の方法。
２５．前記非活性化Ｔ細胞の集団中の前記Ｔ細胞の少なくとも７５％が、ＣＤ２５、ＣＤ４４、及びＣＤ６９からなる群から選択される１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である（例えば、前記集団中の前記Ｔ細胞の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が、前記Ｔ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である）、実施形態２２～２４のいずれかに記載の方法。
２６．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む（例えば、前記非活性化Ｔ細胞の集団の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％が、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である）、実施形態２２～２５のいずれかに記載の方法。
２７．前記ＣＤ８＋ Ｔ細胞の少なくとも７５％が、ＣＤ２５、ＣＤ４４、及びＣＤ６９からなる群から選択される１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である（例えば、前記集団中の前記ＣＤ８＋ Ｔ細胞の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が、前記Ｔ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である）、実施形態２６に記載の方法。
２８．前記非活性化Ｔ細胞の集団中の前記ＣＤ８＋ Ｔ細胞が、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％の効率で形質導入される、実施形態２６または実施形態２７に記載の方法。
２９．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）で処理されていない、実施形態２２～２８のいずれかに記載の方法。
３０．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）で処理されていない、実施形態２２～２９のいずれかに記載の方法。
３１．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）に結合させたビーズで処理されておらず、任意で前記ビーズが、超常磁性ビーズである、実施形態２２～３０のいずれかに記載の方法。
３２．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）で処理されておらず、任意で前記Ｔ細胞活性化サイトカインが、ヒトサイトカインである、実施形態２２～３１のいずれかに記載の方法。
３３．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、可溶性Ｔ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体または可溶性ＣＤ８０、可溶性ＣＤ８６、可溶性ＣＤ１３７Ｌまたは可溶性ＩＣＯＳ－Ｌ）で処理されていない、実施形態２２～３２のいずれかに記載の方法。
３４．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、ヒト細胞である、実施形態２２～３３のいずれかに記載の方法。
３５．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、対象内にある、実施形態２２～３４のいずれかに記載の方法。
３６．前記接触工程より前に、前記対象が、Ｔ細胞活性化処置を施されていなかった、実施形態３５に記載の方法。
３７．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、インビトロにある、実施形態２２～３４のいずれかに記載の方法。
３８．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、対象のエクスビボにある、実施形態２２～３４のいずれかに記載の方法。
３９．前記非活性化Ｔ細胞の集団が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、またはＣＤ８＋ Ｔ細胞を含むそのサブセットを含む、実施形態２２～３４、３７、及び３８のいずれかに記載の方法。
４０．前記非活性化細胞の集団が、対象からの生体試料から選択されたＴ細胞の濃縮された集団であり、任意で前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞マーカー（例えば、ＣＤ３またはＣＤ８）に関して表面陽性であるＴ細胞について選択される、実施形態２２～３４及び３７～３９のいずれかに記載の方法。
４１．前記生体試料が、全血試料、アフェレーシス試料または白血球アフェレーシス試料である、実施形態４０に記載の方法。
４２．前記対象が、疾患または病態を有する、実施形態３５、３６、及び３８～４１に記載の方法。
４３．前記形質導入されたＴ細胞の集団を増殖させる工程をさらに含む、実施形態２２～３４及び３７～４２のいずれかに記載の方法。
４４．前記増殖工程が、前記形質導入された細胞の、１つまたは複数のＴ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）とのインキュベーションを含み、任意で前記Ｔ細胞活性化サイトカインが、ヒトサイトカインである、実施形態４３に記載の方法。
４５．前記形質導入されたＴ細胞を、１つまたは複数のＴ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）と共にインキュベートする工程をさらに含み、任意で前記Ｔ細胞活性化サイトカインが、ヒトサイトカインである、実施形態２２～３４及び３７～４３のいずれかに記載の方法。
４６．実施形態２２～３４、３７～４５、及び５６～１１９のいずれかに記載の方法によって生産される、形質導入されたＴ細胞の集団。
４７．任意で薬学的組成物である、実施形態２２～３４、３７～４５、及び５６～１１９のいずれかに記載の方法によって生産される形質導入されたＴ細胞の集団を含む組成物。
４８．凍結保存剤をさらに含み、任意で前記凍結保存剤がＤＭＳＯである、実施形態２１または実施形態４７に記載の組成物。
４９．インビボでのＴ細胞の形質導入方法であって、前記方法が、
対象に、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物を投与する工程
を含み、前記レンチウイルスベクターが、前記対象内でＴ細胞に形質導入し、前記対象が、前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない、前記方法。
５０．前記対象が、疾患または病態を有する、実施形態４９に記載の方法。
５１．疾患または病態を有する対象を処置する方法であって、前記方法が、
前記対象に、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物を投与する工程
を含み、前記対象が、前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない、前記方法。
５２．前記疾患または前記病態が、がんである、実施形態１９、４２、及び５１のいずれかに記載の方法。
５３．前記レンチウイルスベクターが、
前記疾患または前記病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする、導入遺伝子
を含み、任意で前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態１９、４２、５１、及び５２のいずれかに記載の方法。
５４．腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための方法であって、前記方法が、
前記対象に、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物を投与する工程
を含み、前記対象が、前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない、前記方法。
５５．前記レンチウイルスベクターが、
前記腫瘍細胞上に発現されるタンパク質に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする、導入遺伝子
を含み、任意で前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態５４に記載の方法。
５６．前記Ｔ細胞活性化処置が、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）の投与を含む、実施形態１８、３６、４９～５５５、１０８～１１２、及び１２９～１３１のいずれかに記載の方法。
５７．前記Ｔ細胞活性化処置が、可溶性Ｔ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体、または組換えＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７Ｌ、ＩＣＯＳ－Ｌ）の投与を含む、実施形態１８、３６、４９～５６、１０８～１１２、及び１２９～１３１のいずれかに記載の方法。
５８．前記Ｔ細胞活性化処置が、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１）の投与を含み、任意で前記Ｔ細胞活性化サイトカインが、ヒトサイトカインである、実施形態１８、３６、４９～５７、１０８～１１２、及び１２９～１３１のいずれかに記載の方法。
５９．前記Ｔ細胞活性化処置が、組換えＩＬ－７、任意でヒトＩＬ－７の投与を含む、実施形態１８、３６、４９～５８、１０８～１１２、及び１２９～１３１のいずれかに記載の方法。
６０．前記Ｔ細胞活性化処置が、リンパ球枯渇療法の施術、任意でシクロホスファミド及び／またはフルダラビンの投与を含む、実施形態１８、３６、４９～５９、及び１０８～１１２、及び１２９～１３１のいずれかに記載の方法。
６１．前記ＣＤ８結合物質が、抗ＣＤ８抗体または抗原結合断片である、実施形態１～６０のいずれかに記載の方法。
６２．前記抗ＣＤ８抗体または前記抗原結合断片が、マウス、ウサギ、ヒト、またはヒト化のものである、実施形態６１に記載の方法。
６３．前記抗原結合断片が、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、実施形態５６または実施形態５７に記載の方法。
６４．前記抗ＣＤ８抗体または前記抗原結合断片が、単一ドメイン抗体である、実施形態６１に記載の方法。
６５．前記抗ＣＤ８抗体または前記抗原結合断片が、ラクダ科動物（例えば、ラマ、アルパカ、ラクダ）（例えば、ＶＨＨ）である、実施形態６１または実施形態６４に記載の方法。
６６．前記ＣＤ８結合物質が、ＣＤ８アルファ鎖及び／またはＣＤ８ベータ鎖に結合する、実施形態１～６５のいずれかに記載の方法。
６７．前記ＣＤ８結合物質が、前記レンチウイルスベクターの表面上に露出している、実施形態１～６６のいずれかに記載の方法。
６８．前記ＣＤ８結合物質が、ウイルスエンベロープに組み込まれた膜貫通ドメインに融合されている、実施形態１～６７のいずれかに記載の方法。
６９．前記レンチウイルスベクターが、ウイルス融合タンパク質でシュードタイプ化されている、実施形態１～６８のいずれかに記載の方法。
７０．前記ウイルス融合タンパク質が、ＶＳＶ－Ｇタンパク質またはその機能的バリアントである、実施形態６９に記載の方法。
７１．前記ウイルス融合タンパク質が、ＣｏｃａｌウイルスＧタンパク質またはその機能的バリアントである、実施形態６９に記載の方法。
７２．前記ウイルス融合タンパク質が、アルファウイルス融合タンパク質（例えば、シンドビスウイルス）またはその機能的バリアントである、実施形態６９に記載の方法。
７３．前記ウイルス融合タンパク質が、パラミクソウイルス科融合タンパク質（例えば、モルビリウイルスまたはヘニパウイルス）またはその機能的バリアントである、実施形態６９に記載の方法。
７４．前記ウイルス融合タンパク質が、モルビリウイルス融合タンパク質（例えば、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、イヌジステンパーウイルス、クジラ目モルビリウイルス、小反芻獣疫ウイルス、アザラシジステンパーウイルス、牛疫ウイルス）またはそれらの機能的バリアントである、実施形態６９または実施形態７３に記載の方法。
７５．前記ウイルス融合タンパク質が、ヘニパウイルス融合タンパク質（例えば、ニパウイルス、ヘンドラウイルス、スギウイルス、クマシウイルス、Ｍｏｊｉａｎｇウイルス）またはその機能的バリアントである、実施形態６９または実施形態６３に記載の方法。
７６．前記ウイルス融合タンパク質が、その天然受容体への結合を低減するための１つまたは複数の改変を含む、実施形態６９～７５のいずれかに記載の方法。
７７．前記ウイルス融合タンパク質が、前記ＣＤ８結合物質に融合されている、実施形態６９～７６のいずれかに記載の方法。
７８．前記ウイルス融合タンパク質が、ニパウイルスＦ糖タンパク質（ＮｉＶ－Ｆ）またはその生物学的に活性な部分及びニパウイルスＧ糖タンパク質（ＮｉＶ－Ｇ）またはその生物学的に活性な部分を含み、前記ＣＤ８結合物質が、前記ＮｉＶ－Ｇまたは前記その生物学的に活性な部分に融合されている、実施形態６９、７３、及び７５～７７のいずれかに記載の方法。
７９．前記ＣＤ８結合物質が、前記ニパウイルスＧ糖タンパク質または前記その生物学的に活性な部分のＣ末端に融合されている、実施形態７８に記載の方法。
８０．前記ＣＤ８結合タンパク質が、直接またはペプチドリンカーを介して融合されている、実施形態７７～７９のいずれかに記載の方法。
８１．前記ＮｉＶ－Ｇまたは前記その生物学的に活性な部分が、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である、実施形態７８～８０のいずれかに記載の方法。
８２．前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、切り詰められており、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１９、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの最大４０個の連続アミノ酸残基を欠いている、実施形態７８～８１のいずれかに記載の方法。
８３．前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの５アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号１２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～８２のいずれかに記載の方法。
８４．前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの１０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号４４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４４に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～８２のいずれかに記載の方法。
８５．前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号９、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの１５アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号４５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４５に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～８２のいずれかに記載の方法。
８６．前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号１３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１３に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～８２のいずれかに記載の方法。
８７．前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの２５アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号１４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１４に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～８２のいずれかに記載の方法。
８８．前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号４３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４３に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～８２のいずれかに記載の方法。
８９．前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３４アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号４２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～８２のいずれかに記載の方法。
９０．前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質（配列番号１、配列番号４、または配列番号５）のＮ末端におけるまたはその近くの３４アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号４２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～８２のいずれかに記載の方法。
９１．前記ＮｉＶ－Ｇ－タンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、エフリンＢ２またはエフリンＢ３に対して低減された結合を示す変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質である、実施形態７８～９０のいずれかに記載の方法。
９２．前記変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、
配列番号４に記載の番号付けを参照してＥ５０１Ａ、Ｗ５０４Ａ、Ｑ５３０Ａ、及びＥ５３３Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換に対応する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、実施形態９１に記載の方法。
９３．前記変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、配列番号１７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１７に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態９１または実施形態９２に記載の方法。
９４．前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態９１または実施形態９２に記載の方法。
９５．前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質であるか、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である、実施形態７８～９４のいずれかに記載の方法。
９６．前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４１）のＣ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号２０に記載の配列、あるいは配列番号２０に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～９５のいずれかに記載の方法。
９７．前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、
（ｉ）前記野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４１）のＣ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰め、及び
（ｉｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位における点変異
を含み、
任意で前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号１５に記載の配列、あるいは配列番号１５に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～９６のいずれかに記載の方法。
９８．前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質（配列番号４１）のＣ末端におけるまたはその近くの２２アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号１６もしくは２１に記載の配列、あるいは配列番号１６もしくは２１に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、実施形態７８～９５のいずれかに記載の方法。
９９．前記レンチウイルスベクターが、導入遺伝子を含む、実施形態１～９８のいずれかに記載の方法。
１００．前記導入遺伝子が、ＲＮＡ干渉が可能なＲＮＡ配列（例えば、ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ）をコードする核酸配列を含む、実施形態９９に記載の方法。
１０１．前記導入遺伝子が、治療遺伝子、レポーター遺伝子、酵素をコードする遺伝子、プロドラッグ酵素をコードする遺伝子、アポトーシス誘導物質をコードする遺伝子、蛍光タンパク質をコードする遺伝子、プロドラッグ活性化酵素をコードする遺伝子、アポトーシスタンパク質をコードする遺伝子、アポトーシス酵素をコードする遺伝子、自殺タンパク質をコードする遺伝子、サイトカインをコードする遺伝子、抗免疫抑制タンパク質をコードする遺伝子、エピジェネティックモジュレーターをコードする遺伝子、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする遺伝子、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする遺伝子、形質導入された細胞の細胞表面を改変するタンパク質をコードする遺伝子、内在性ＴＣＲの発現を改変するタンパク質をコードする遺伝子、及び腫瘍促進シグナルから抗腫瘍シグナルへと変換するスイッチ受容体をコードする遺伝子からなる群から選択される、実施形態９９に記載の方法。
１０２．前記導入遺伝子が、疾患または病態に関連する細胞または病変（例えば、腫瘍）によって発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードし、任意で前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態９９に記載の方法。
１０３．前記導入遺伝子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、実施形態５３、実施形態５５、実施形態９９、または実施形態１０２に記載の方法。
１０４．前記ＣＡＲが、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインの細胞内構成要素を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１０３に記載の方法。
１０５．前記共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインである、実施形態１０４に記載の方法。
１０６．前記導入遺伝子が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする、実施形態５３、実施形態５５、実施形態９９、または実施形態１０２に記載の方法。
１０７．前記レンチウイルスベクターが、前記表面上に提示されるＴ細胞活性化物質を含まず、任意で前記Ｔ細胞活性化物質が、ＣＤ３抗体（例えば、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ）、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはＩＬ－２１）、またはＴ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７Ｌ、またはＩＣＯＳ－Ｌ）からなる群から選択される、実施形態１～１０６のいずれかに記載の方法。
１０８．前記レンチウイルスベクターが、Ｔ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードせず、任意で前記Ｔ細胞活性化物質が、リンパ増殖物質である、実施形態１～１０６のいずれかに記載の方法。
１０９．前記Ｔ細胞活性化物質が、
ＣＤ３及び／またはＣＤ２８に結合することができるポリペプチド；
ＣＤ３抗体（例えば、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ）、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、もしくはＩＬ－２１）、またはＴ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７Ｌ、もしくはＩＣＯＳ－Ｌ）；
ＳＴＡＴ３経路、ＳＴＡＴ４経路、及び／またはＪａｋ／ＳＴＡＴ５経路を活性化するサイトカインまたはサイトカイン受容体もしくはそのシグナル伝達ドメイン；
Ｔ細胞生存モチーフ、任意でＩＬ－７受容体、ＩＬ－１５受容体、もしくはＣＤ２８、またはそれらの機能的部分；ならびに／あるいは
前記ＳＴＡＴ５経路を刺激するかつ／または前記ＳＯＣＳ経路を阻害する、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）もしくは低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈｒＲＮＡ）
である、実施形態１０８に記載の方法。
１１０．前記レンチウイルスベクターが、膜結合型である及び／または前記表面上に提示されるＴ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードせず、任意で前記Ｔ細胞活性化物質が、リンパ増殖物質である、実施形態１～１０６のいずれかに記載の方法。
１１１．前記対象が、前記レンチウイルスベクターと同時にＴ細胞活性化処置を施されない、実施形態１８、３６、及び４９～１１０のいずれかに記載の方法。
１１２．前記対象が、前記レンチウイルスベクターとの前記接触工程前または前記レンチウイルスベクターを含む前記組成物の前記投与前の１ヶ月以内にＴ細胞活性化処置を施されない、実施形態１８、３６、及び４９～１１１のいずれかに記載の方法。
１１３．前記対象が、前記レンチウイルスベクターとの前記接触工程前または前記レンチウイルスベクターを含む前記組成物の前記投与前の１週間、２週間、３週間、もしくは４週間以内、または１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、または約１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、任意で１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、または約１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、Ｔ細胞活性化処置を施されない、実施形態１８、３６、４９～１１２のいずれかに記載の方法。
１１４．前記対象が、前記レンチウイルスベクターとの前記接触工程後または前記レンチウイルスベクターを含む前記組成物の前記投与後の１ヶ月以内にＴ細胞活性化処置を施されない、実施形態１８、３６、及び４９～１１３のいずれかに記載の方法。
１１５．前記対象が、前記レンチウイルスベクターとの前記接触工程後または前記レンチウイルスベクターを含む前記組成物の前記投与後の１週間、２週間、３週間、もしくは４週間以内、または１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、または約１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、任意で１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、または約１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、Ｔ細胞活性化処置を施されない、実施形態１８、３６、４９～１１４のいずれかに記載の方法。
１１６．Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢ遺伝子のうちの１つまたは複数を不活性化するように前記Ｔ細胞またはＴ細胞の集団を編集する工程をさらに含む、実施形態１～４５のいずれか１項に記載の方法。
１１７．前記Ｔ細胞またはＴ細胞の集団が、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＡＣ遺伝子を不活性化するように編集される、実施形態１１３に記載の方法。
１１８．前記Ｔ細胞の集団の前記Ｔ細胞が、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＢ遺伝子を不活性化するように編集される、実施形態１１６に記載の方法。
１１９．ＣＤ４７をコードする遺伝子を、規定の遺伝子座にて挿入する工程をさらに含む、実施形態１１６～１１８のいずれか１項に記載の方法。
１２０．前記規定の遺伝子座が、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、またはセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される、実施形態１１９に記載の方法。
１２１．前記セーフハーバー遺伝子座が、ＡＡＶＳ１遺伝子座、ＣＣＲ５遺伝子座、及びＲＯＳＡ２６遺伝子座からなる群から選択される、実施形態１２０に記載の方法。
１２２．前記レンチウイルスベクターが、
前記疾患または前記病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする、導入遺伝子
を含み、任意で前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態１１６～１２１のいずれかに記載の方法。
１２３．実施形態１１６～１２２のいずれかに記載の方法によって生産される、形質導入されたＴ細胞。
１２４．前記Ｔ細胞が、前記１つまたは複数の遺伝子の両方のアレルにて不活性化される、実施形態１２３に記載の形質導入されたＴ細胞。
１２５．任意で薬学的組成物である、実施形態１２３または実施形態１２４に記載の形質導入されたＴ細胞を含む組成物。
１２６．実施形態１１６～１２２のいずれかに記載の方法によって生産される、形質導入されたＴ細胞の集団。
１２７．前記非活性化細胞の集団の前記細胞の少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％が、前記１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される、実施形態１２６に記載の形質導入されたＴ細胞の集団。
１２８．前記集団中の前記非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％が形質導入され、前記１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される、実施形態１２６または実施形態１２７に記載の形質導入されたＴ細胞の集団。
１２９．前記集団の細胞が、前記１つまたは複数の遺伝子の両方のアレルにて不活性化される、実施形態１２６～１２８のいずれかに記載の形質導入されたＴ細胞の集団。
１３０．任意で薬学的組成物である、実施形態１２６～１２９のいずれかに記載の形質導入されたＴ細胞の集団を含む組成物。
１３１．凍結保存剤をさらに含み、任意で前記凍結保存剤がＤＭＳＯである、実施形態１２５または実施形態１３０に記載の組成物。
１３２．疾患または病態を有する対象を処置する方法であって、前記方法が、
前記対象に、実施形態２１、４７、４８、１２５、１３０、及び１３１のいずれかに記載の組成物を投与する工程
を含み、前記対象が、前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない、前記方法。
１３３．前記疾患または前記病態が、がんである、実施形態１３２に記載の方法。
１３４．腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための方法であって、前記方法が、
前記対象に、実施形態２１、４７、４８、１２５、１３０、及び１３１のいずれかに記載の組成物を投与する工程
を含み、前記対象が、前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない、前記方法。
１３５．疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物の使用。
１３６．疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置するための医薬の製剤化のための、実施形態２１、４７、４８、１２５、１３０、及び１３１のいずれかに記載の組成物の使用。
１３７．疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置する際に使用するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物。
１３８．疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置する際に使用するための、実施形態２１、４７、４８、１２５、１３０、及び１３１のいずれかに記載の組成物。
１３９．腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための医薬の製剤化のための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物の使用。
１４０．腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための医薬の製剤化のための、実施形態２１、４７、４８、１２５、１３０、及び１３１のいずれかに記載の組成物の使用。
１４１．腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させる際に使用するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物。
１４２．腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させる際に使用するための、実施形態２１、４７、４８、１２５、１３０、及び１３１のいずれかに記載の組成物。
１４３．前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されないか、または施されることにならない対象において使用するためのものである、実施形態１３５～１４２のいずれかに記載の使用または組成物。
１４４．前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメインであり、任意で前記ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインが、配列番号９８に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、及び１１７～１２２のいずれかに記載の方法。
１４５．前記４－１ＢＢシグナル伝達ドメインが、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１２～１９、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４のいずれかに記載の方法。
１４６．前記ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインが、配列番号９９または配列番号１００に記載の配列を含む、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、１４４、及び１４５のいずれかに記載の方法。
１４７．前記膜貫通ドメインが、配列番号９４、９５、及び９６のうちのいずれか１つに記載の配列を含む、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４～１４６のいずれかに記載の方法。
１４８．前記ＣＡＲが、ヒンジドメインを含み、任意で前記ヒンジドメインが、配列番号８８、８９、９０、９１、９２、９３、及び１８０のうちのいずれか１つに記載の配列を含む、実施形態１０～１９、１０３～１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４～１４７のいずれかに記載の方法。
１４９．前記抗原結合ドメインが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４～１４８のいずれかに記載の方法。
１５０．前記抗原結合ドメインが、ＣＤ１９に結合する、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４～１４９のいずれかに記載の方法。
１５１．前記抗原結合ドメインが、
（ａ）それぞれ配列番号１０８、１０９、及び１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１０３、１０４、及び１０５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；
（ｂ）配列番号１０７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；及び／または
（ｃ）配列番号１０１もしくは１１１に記載のアミノ酸配列
を含む、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４～１５０のいずれかに記載の方法。
１５２．前記ＣＡＲが、配列番号１１３、１１５、１１７、もしくは１１９に記載のアミノ酸配列、及び／または配列番号１１２、１１４、１１６、もしくは１１８に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４～１５１のいずれかに記載の方法。
１５３．前記抗原結合ドメインが、ＣＤ２０に結合する、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４～１４９のいずれかに記載の方法。
１５４．前記抗原結合ドメインが、
（ａ）それぞれ配列番号１２６、１２７、及び１８２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１２２、１２３、及び１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；
（ｂ）配列番号１２５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１２１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；及び／または
（ｃ）配列番号１２０に記載のアミノ酸配列
を含む、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、１４４～１４９、及び１５３のいずれかに記載の方法。
１５５．前記抗原結合ドメインが、ＣＤ２２に結合する、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４～１４９のいずれかに記載の方法。
１５６．前記抗原結合ドメインが、
（ａ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１３４、１３５、及び１３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３、もしくは
それぞれ配列番号１３９、１４０、及び１４２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１４３、１４４、及び１４５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；及び／または
（ｂ）配列番号１２９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１３３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、もしくは
配列番号１３８に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１４２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；及び／または
（ｃ）配列番号１２８もしくは１３７に記載のアミノ酸配列
を含む、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４～１４９、及び１５５のいずれかに記載の方法。
１５７．前記抗原結合ドメインが、ＢＣＭＡに結合する、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、及び１４４～１４９のいずれかに記載の方法。
１５８．前記抗原結合ドメインが、
（ａ）それぞれ配列番号１５２、１５２、及び１５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３、
それぞれ配列番号１６１、１６２、及び１６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１５７、１５８、及び１５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３、
それぞれ配列番号１６５、１６６、及び１６７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、もしくは
それぞれ配列番号１７４、１７５、及び１７６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１７０、１７１、及び１７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；及び／または
（ｂ）配列番号１５１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１４７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
配列番号１６０に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１５６に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
配列番号１７３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１６９に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、もしくは
配列番号１６４に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域；及び／または
（ｃ）配列番号１４６、１５５、もしくは１６８に記載のアミノ酸配列
を含む、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、１４４～１４９、及び１５７のいずれかに記載の方法。
１５９．前記ＣＡＲが、配列番号１７８に記載のアミノ酸配列、及び／または配列番号１７７に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、実施形態１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、１４４～１４９、１５７、及び１５８のいずれかに記載の方法。
１６０．前記ＣＡＲが、
（ａ）配列番号１０２に記載の前記ＶＬ領域、配列番号１０６に記載のアミノ酸配列を含むリンカー、及び配列番号１０７に記載の前記ＶＨ領域、及び／もしくは配列番号１０１に記載の前記ｓｃＦｖを含む、抗原結合ドメイン；
（ｂ）配列番号８８に記載のアミノ酸配列を含むヒンジ；
（ｃ）配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含む膜貫通ドメイン；
（ｄ）配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン；ならびに／または
（ｅ）配列番号９９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン
を含む、１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、１４４～１４９、及び１５７～１５９のいずれかに記載の方法、使用、または組成物。
１６１．前記ＣＡＲが、配列番号１１３に記載のアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号１１２に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、１１～１９、１０４、１０５、１０７～１１５、１１７～１２２、１４４～１４９、及び１５７～１６０のいずれかに記載の方法、使用、または組成物。
１６２．前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号２１に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む、実施形態７８～１０５、１０７～１２２、及び１４４～１６１のいずれかに記載の方法、使用、または組成物。
１６３．前記Ｎｉｖ－Ｇタンパク質が、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、前記Ｎｉｖ－Ｆタンパク質が、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態７８～１０５、１０７～１２２、及び１４４～１６２のいずれかに記載の方法、使用、または組成物。
１６４．前記接触工程または前記投与工程が、閉鎖型流体回路を使用した対象への前記レンチウイルスベクターのエクスビボ投与によって実施される、実施形態１～１９、２２～４５，４９～１２２、１３２～１３４、及び１４４～１６３のいずれか１項に記載の方法。
１６５．前記エクスビボ投与が、
（ａ）対象から全血を得る工程と；
（ｂ）Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を含む白血球構成要素を含有する血液の画分を収集する工程と；
（ｃ）Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を含む前記白血球構成要素を、前記レンチウイルスベクターを含む組成物と接触させる工程と；
（ｄ）Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を含む前記接触させた白血球構成要素を前記対象に再注入する工程と
を含み、ステップ（ａ）～（ｄ）が、閉鎖型流体回路においてインラインで行われる、実施形態１６４に記載の方法。
１６６．ステップ（ｃ）における前記接触工程が、２４時間以下、１８時間以下、１２時間以下、または６時間以下にわたる、実施形態１６５に記載の方法。
Ｘ．実施例
以下の実施例は、例示の目的のためにのみ含まれ、本発明の範囲を限定することは意図されていない。
実施例１：Ｔ細胞活性化状態の関数としてのＮａｌｍ６腫瘍モデルにおけるＣＤ８標的化フソゲンのインビボ送達
この実施例は、ＣＤ８に標的変更されたニパフソゲン及びＶＳＶ－Ｇの形質導入効率の評価について記載する。
簡潔に述べると、６２匹の雌ＮＳＧマウスに、静脈内（ＩＶ）注射を介して１Ｅ６のＮａｌｍ６－Ｌｕｃ白血病Ｂ細胞を注射し、続いて３日後に、ＣＤ３／ＣＤ２８複合体での事前のＴ細胞活性化ありまたはなしで２Ｅ６のヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）をＩＶ注射した。ｈＰＢＭＣ注射から１日後、ＣＤ１９ ＣＡＲを発現している、ＣＤ８ ＶＨＨニパフソゲンでシュードタイプ化されたレンチウイルスベクター（ＬＶ）を組み込み単位（ＩＵ）２Ｅ６～５Ｅ７の範囲で別々の群の動物に注射した。Ｎａｌｍ６腫瘍の進行を、研究の継続期間全体を通して毎週、Ｌａｇｏ Ｘイメージングシステムを使用した生物発光イメージング（ＢＬＩ）を介して追跡した。ＣＤ１９ＣＡＲは、ＣＤ１９に対して向けられた抗ｓｃＦｖならびに４－１ＢＢ及びＣＤ３－ゼータの細胞内構成要素を含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含んでいた。循環Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度、循環ＣＡＲ－Ｔ細胞の頻度、ならびにサイトカインレベルを評価するために、研究の継続期間全体を通して末梢血分析を各群からのマウスの半分に対して行った。研究は、ｈＰＢＭＣ注射後２８日で、または個々の動物の健康に基づいてより早期に終えた。動物を屠殺し、末梢血、脾臓、及び骨髄組織からの細胞を採取し、ＣＤ１９ＣＡＲ発現細胞及びサイトカイン解析のためにフローサイトメトリーによって解析した。
図１Ａに示されるように、ＣＤ８－ＶＨＨ ＣＤ１９ＣＡＲ ＬＶ及び活性化ｈＰＢＭＣの処置は、Ｎａｌｍ６腫瘍の経時的な増殖の強固な制御をもたらした。図１Ｂに示されるように、高用量ＣＤ８－ＶＨＨ ＣＤ１９ＣＡＲ ＬＶ及び非活性化ｈＰＢＭＣの処置は、Ｎａｌｍ６腫瘍の増殖の若干遅延しながらも強固な制御をもたらした。図１Ｃは、ＰＢＭＣ対照処置動物（上プロット）及びＣＤ８ ＶＨＨフソソーム処置動物（下プロット）の両方におけるＦＡＣｓプロットの右上の象限に示されるような回収された総計の生リンパ球中のオンターゲットＣＤ１９ＣＡＲ発現細胞（ＣＤ８＋ＣＤ１９ＣＡＲ＋）のパーセントを示す。ｈＰＢＭＣ活性化ありまたはなしのいずれでも、５ Ｅ７ ＩＵのＣＤ８－ＣＤ１９ＣＡＲ ＬＶを与えた動物の骨髄中のＣＡＲ－Ｔ細胞頻度に統計的有意差は何ら存在しなかった。これらの結果は、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ Ｔ細胞が、末梢血、脾臓、及び骨髄中で処置後２８日までＣＤ８＋ Ｔ細胞において検出可能であったことを示す。
実施例２：活性化状態フソゲン試験－ヒトＰＢＭＣドナー
この実施例は、ヒトＰＢＭＣにおける、ＣＤ３／ＣＤ２８活性化の存在または不在下での、ＣＤ１９ＣＡＲ構築物を担持する、ＣＤ８に標的変更された３種のニパフソゲン及びＶＳＶ－Ｇの４種の異なるレンチウイルスの形質導入効率の評価について記載する。ＣＤ１９ＣＡＲは、ＣＤ１９に対して向けられた抗ｓｃＦｖならびに４－１ＢＢ及びＣＤ３－ゼータの細胞内構成要素を含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含んでいた。３人のドナーからのヒトＰＢＭＣを解凍し、ＣＤ１９細胞の枯渇ありまたはなし、ならびに抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体による活性化ありまたはなしで処置した。ＰＢＭＣ集団を、２種の異なるＣＤ８ ｓｃＦｖ（ＣＤ８ ｓｃＦｖ－１またはＣＤ８ ｓｃＦＶ－２）、ＣＤ８ ＶＨＨのうちの１つにより標的変更されたニパウイルスフソゲン、またはＶＳＶ－Ｇでシュードタイプ化されたレンチウイルスベクター（ＬＶ）により形質導入した。スピンフェクション（ｓｐｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）から７２時間後、表面上のＣＤ１９ＣＡＲ発現を評価することによって形質導入効率を測定した。
結果は、標的変更されたＣＤ８フソゲンが、活性化細胞と同程度に良好に活性化されていない細胞に形質導入することを実証する（図２Ａ）。図２Ａにおいて、形質導入の前にＣＤ１９＋ Ｂ細胞を枯渇させたＰＢＭＣ中でＣＡＲ＋細胞を測定し、生集団中のＣＡＲ＋細胞の％を形質導入効率と見なした。注目すべきことに、非活性化Ｔ細胞に対するＶＳＶ－Ｇ ＬＶの使用は、約０．５％の最大形質導入効率をもたらしたが、一方で、３種のＣＤ８ ＬＶは、約２０～３５％の効率で非活性化Ｔ細胞に形質導入することができた。
さらに、活性化なしの生成されたＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９＋細胞をより効率的に殺傷することが観察された（図２Ｂ）。ＣＤ１９＋ Ｂ細胞を含むＰＢＭＣは形質導入の時点で存在し、活性化試料中で抗原マスキングが観察された（抗ＣＤ１９ａｂを介した検出）。
要約すると、ＣＤ８ベクターは、高い効率で非活性化Ｔ細胞に形質導入することができ、非活性化Ｔ細胞の形質導入は、結果として生じる細胞のより高い殺傷効率をもたらした。
実施例３：若齢雌ブタオザルにおける静脈内注入によるＣＤ８－ＳＦＦＶ－ＣＤ２０ＣＡＲの５週間及び７週間の単回投与薬物動態及び薬力学研究
この実施例は、ＣＤ２０ ＣＡＲ導入遺伝子を送達するための、ＣＤ８＋ Ｔ細胞を標的とする抗ＣＤ８結合タンパク質でシュードタイプ化されたレンチウイルスベクター（ＣＤ８－ＳＦＦＶ－ＣＤ２０ＣＡＲ）について記載する。ＣＤ２０ＣＡＲは、ＣＤ２０に対して向けられた抗ｓｃＦｖならびに４－１ＢＢ及びＣＤ３－ゼータの細胞内構成要素を含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含んでいた。この研究の目的は、ＣＤ８－ＳＦＦＶ－ＣＤ２０ＣＡＲがＴ細胞に形質導入すると共に、正常で健常なＣＤ２０＋ Ｂ細胞を枯渇させる能力、ウイルス組み込みの体内分布、及び静脈内投与の忍容性を特性評価することであった。８匹の若齢雌ブタオザルに、ＣＤ８－ＳＦＦＶ－ＣＤ２０ＣＡＲを投与可能な単回最大用量７．６９Ｅ８ ＩＵ／ｋｇ（ｎ＝６）で、または生理食塩水対照を１０ｍｌ／ｋｇ（ｎ＝２）で１時間にわたって静脈内から投与した。動物をベースライン（－３５、－２８、及び－２１日目）で、血液学的パラメータ及び臨床化学パラメータの評価と併せてＢ細胞及びＴ細胞の頻度に関して評価した。研究中の動物を臨床観察に関して毎日、体重、体温、神経学的バッテリーの変化、ならびに血液学及び臨床化学に関して毎週監視した。ＣＳＦ試料を研究前、７日目、及び終了で収集した。全ての動物に対して３、５、７、１０、１４、１７、２１、２８、及び３５日目に、Ｂ細胞及びＴ細胞の頻度の変化に関して通例の血液試料採取及びフローサイトメトリーによる免疫表現型解析を行った。終了時に、動物に対して完全な剖検を行い、リンパ組織のフローサイトメトリー、Ｌｕｍｉｎｅｘによるサイトカイン解析、ＰＣＲによる導入遺伝子発現、ｄｄＰＣＲによるベクターコピー数（ＶＣＮ）、ディープシーケンシングによる挿入部位分布（ＩＳＤ）、臨床病理（血液学及び臨床化学）、組織の免疫組織化学、及び解剖組織病理学のために血液、ＣＳＦ、及び組織を採取した。
３５日目までの中間データは、投与可能な単回最大用量７．６９Ｅ８ ＩＵ／ｋｇでのＣＤ８－ＳＦＦＶ－ＣＤ２０ＣＡＲの投与が、全ての動物において忍容性が良好であることを実証した。全ての試料採取時点にわたって、神経学的徴候、体温を含めた臨床観察においても、臨床化学検査値においても化合物に関連する変化は何ら存在しなかった。７～１０日目で血小板及び好中球の一過性で最小限の低減が存在し、これは１４日目までにベースラインに戻った。２匹の動物においてヘマトクリットの一過性で最小限の減少及び関連する網赤血球数の増加が存在したが、これは繰り返す血液試料採取に起因し得る。図３に示されるように、フローサイトメトリー解析は、６匹の処置動物中４匹において同じ動物の投薬前と比較して、７日目から始まり末梢血中のＣＤ２０＋ Ｂ細胞の顕著な減少を示し、これは３５日目まで持続した。これらのデータは、抗ＣＤ２０ＣＡＲの予期された薬理活性と一致する。
ｄｄＰＣＲを使用した予備ＶＣＮ測定を、２匹の対照サル及び４匹の処置サルからの試料に対して末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中では－３５日目から１４及び３５日目、脾臓及び骨髄中では終了時まで行った。－３５日目、及び注射後３５日目で、ＰＢＭＣ中のＶＣＮが観察されたが、値は全ての動物において定量下限未満（ＢＬＱ）であった。比較して、脾臓中では、ＶＣＮが処置動物において検出されたが、一方で、対照動物はＢＬＱであった。３５日目で、検査したＣＤ８－ＳＦＦＶ－ＣＤ２０ＣＡＲ処置サルにおいて０．０４～１．３％の脾細胞（すなわち６７～１，９７０個の細胞）が少なくとも１つの挿入されたコピーを含んでいた。
これらのデータは、忍容性が良好であり、Ｔ細胞活性化処置の施行の不在下であっても脾臓の細胞中のベクターの存在と相関があった、免疫応答性動物におけるＣＤ８－ＳＦＦＶ－ＣＤ２０ＣＡＲのオンターゲット活性を実証する。
実施例４：マウスにおける腫瘍制御のためのヒトＰＢＭＣのエクスビボ投薬
ウイルスベクターのエクスビボ投薬の実行可能性を評価するために、ヒトＰＢＭＣを、抗ＣＤ１９ ＣＡＲをコードするウイルスベクター粒子と接触させ、形質導入された細胞を、ウイルスベクターとの最初の接触から４時間以内にＣＤ１９発現Ｎａｌｍ６腫瘍担持マウスに投与した。
ウイルスベクター生産のために、ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞を、ウイルスベクタータンパク質（ｇａｇ／ｐｏｌ、ｒｅｖ）を発現しているプラスミド及び抗ＣＤ１９ ＣＡＲ（ＦＭＣ６３由来ｓｃＦｖ細胞外抗原結合ドメイン、ならびに４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含有する）をコードするトランスファープラスミドによりトランスフェクトした。エンベロープタンパク質は、ニパＦタンパク質及びＣＤ８に標的変更されたニパＧタンパク質（ＵＳ２０１９／０１４４８８５を参照されたい（参照により本明細書に援用される））を発現しているプラスミドとして用意した。ＣＤ８に標的変更されたニパＧ（ＮｉＶ－Ｇ）タンパク質は、例示的なＮｉＶ－Ｇ配列ＧｃΔ３４（Ｂｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１６ ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｌ １２（６）：ｅ１００５６４１；配列番号１７に記載）との融合体としての抗ＣＤ８ ｓｃＦｖを含んでおり、ニパＦ（ＮｉＶ－Ｆ）タンパク質は、例示的なＮｉＶ－Ｆ配列ＮｉｖＦｄｅｌ２２（配列番号１９；またはシグナル配列のない配列番号２１；Ｂｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１６ ＰＬｏＳ）であった。ウイルスベクター生産に次いで、細胞培養物を遠心分離して細胞をペレット状にし、粗製ウイルスを含有する上清を収集した。
担持ＮＳＧマウスにＮＡＬＭ６腫瘍細胞（１×１０７個の腫瘍細胞／マウス）を静脈内から注入し、腫瘍をおよそ７２時間増殖させた。投与した腫瘍細胞は、ルシフェラーゼマーカーを含有するようにさらに操作した。健常ドナーからのおよそ６×１０７個のヒトＰＢＭＣを解凍し、細胞が１×１０６ＩＵ～１×１０７ＩＵの範囲の用量でベクターに曝露されるようにウイルスベクターと共にインキュベートした。４時間インキュベーションした後、トランスフェクトされたＰＢＭＣを５００×ｇで５分間ペレット状にし、１２００μＬの生理食塩水に再懸濁し、次いでＤ－１にマウスに直接注射した。マウスのライブイメージングを研究のＤ１から開始して実施し、フローサイトメトリー解析のための採血をＤ１４及びＤ２８に収集した。脾臓の研究のために研究のＤ２８に動物を屠殺した。
研究期間にわたって腫瘍細胞の数を、フローサイトメトリーを介して全光子束として監視した。全光子束によって監視した腫瘍増殖がウイルスベクター用量の各々について図４Ａに示される。また、腫瘍のみの対照、ＰＢＭＣのみの対照、ならびにナイーブイメージング対照を含めたいくつかの対照も図示される。示されるように、ウイルスベクター用量の各々は、このモデルにおいて、エクスビボでウイルスベクターを投与されなかった腫瘍対照マウスと比較して腫瘍増殖を低減した。
図４Ｂに図示される研究のＤ１４からの末梢血中のＣＤ８＋細胞のフローサイトメトリー解析によって示されるように、ＣＡＲを発現しているＣＤ８＋ Ｔ細胞がマウスの末梢血中で検出された。ＣＡＲは、対照マウスの末梢血からのＴ細胞上では検出されなかった。これらの結果は、エクスビボ投薬によるウイルスベクターの投薬が標的細胞への導入遺伝子の送達を達成することを支持する。
本発明は、例えば、本発明の種々の態様を例示するために提供される、特定の開示された実施形態に範囲が限定されることは意図されない。記載される組成物及び方法に対する種々の修正が、本明細書の説明及び教示から明らかとなろう。かかる変形形態は、本開示の真の範囲及び趣旨から逸脱することなく実施され得、本開示の範囲内に該当することが意図される。
ＸＩ．配列
Figure 2024503027000029
Figure 2024503027000030
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Claims (174)

  1. Ｔ細胞に形質導入する方法であって、前記方法が、
    非活性化Ｔ細胞を、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターと接触させる工程
    を含み、前記レンチウイルスベクターが、前記非活性化Ｔ細胞に形質導入する、前記方法。
  2. 前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記非活性化Ｔ細胞が、ＣＤ２５、ＣＤ４４、及びＣＤ６９からなる群から選択される１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である、請求項１または請求項２に記載の方法。
  4. 前記非活性化Ｔ細胞が、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）で処理されていない、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 前記非活性化Ｔ細胞が、抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）で処理されていない、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 前記非活性化Ｔ細胞が、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）に結合させたビーズで処理されておらず、任意で前記ビーズが、超常磁性ビーズである、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 前記非活性化Ｔ細胞が、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）で処理されておらず、任意で前記Ｔ細胞活性化サイトカインが、ヒトサイトカインである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記非活性化Ｔ細胞が、可溶性Ｔ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体または可溶性ＣＤ８０、可溶性ＣＤ８６、可溶性ＣＤ１３７Ｌまたは可溶性ＩＣＯＳ－Ｌ）で処理されていない、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記レンチウイルスベクターが、
    疾患または病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする、導入遺伝子
    を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項９に記載の方法。
  11. 前記ＣＡＲが、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインの細胞内構成要素を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメインであり、任意で前記ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインが、配列番号９８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインであり、任意で前記４－１ＢＢシグナル伝達ドメインが、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１１または請求項１２に記載の方法。
  14. 前記ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインが、配列番号９９または配列番号１００に記載の配列を含む、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記膜貫通ドメインが、配列番号９４、９５、及び９６のうちのいずれか１つに記載の配列を含む、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記ＣＡＲが、ヒンジドメインを含み、任意で前記ヒンジドメインが、配列番号８８、８９、９０、９１、９２、９３、及び１８０のうちのいずれか１つに記載の配列を含む、請求項１１～１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記抗原結合ドメインが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する、請求項１１～１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記抗原結合ドメインが、ＣＤ１９に結合する、請求項１１～１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記抗原結合ドメインが、
    （ａ）それぞれ配列番号１０８、１０９、及び１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１０３、１０４、及び１０５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；
    （ｂ）配列番号１０７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；及び／または
    （ｃ）配列番号１０１もしくは１１１に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項１１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記ＣＡＲが、配列番号１１３、１１５、１１７、もしくは１１９に記載のアミノ酸配列、及び／または配列番号１１２、１１４、１１６、もしくは１１８に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、請求項１１～１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. 前記抗原結合ドメインが、ＣＤ２０に結合する、請求項１１～１７のいずれか一項に記載の方法。
  22. 前記抗原結合ドメインが、
    （ａ）それぞれ配列番号１２６、１２７、及び１８２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１２２、１２３、及び１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；
    （ｂ）配列番号１２５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１２１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；及び／または
    （ｃ）配列番号１２０に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項１１～１７及び２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記抗原結合ドメインが、ＣＤ２２に結合する、請求項１１～１７のいずれか一項に記載の方法。
  24. 前記抗原結合ドメインが、
    （ａ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１３４、１３５、及び１３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３、もしくは
    それぞれ配列番号１３９、１４０、及び１４２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１４３、１４４、及び１４５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；及び／または
    （ｂ）配列番号１２９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１３３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、もしくは
    配列番号１３８に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１４２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；及び／または
    （ｃ）配列番号１２８もしくは１３７に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項１１～１７及び２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記抗原結合ドメインが、ＢＣＭＡに結合する、請求項１１～１７のいずれか一項に記載の方法。
  26. 前記抗原結合ドメインが、
    （ａ）それぞれ配列番号１５２、１５２、及び１５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３、
    それぞれ配列番号１６１、１６２、及び１６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１５７、１５８、及び１５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３、
    それぞれ配列番号１６５、１６６、及び１６７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、もしくは
    それぞれ配列番号１７４、１７５、及び１７６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１７０、１７１、及び１７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；及び／または
    （ｂ）配列番号１５１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１４７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
    配列番号１６０に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１５６に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
    配列番号１７３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１６９に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、もしくは
    配列番号１６４に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域；及び／または
    （ｃ）配列番号１４６、１５５、もしくは１６８に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項１１～１７及び２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記ＣＡＲが、配列番号１７８に記載のアミノ酸配列、及び／または配列番号１７７に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、請求項１１～１７、２５、及び２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記操作された受容体が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項９に記載の方法。
  29. 前記非活性化Ｔ細胞が、ヒトＴ細胞である、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記非活性化Ｔ細胞が、対象内にある、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記非活性化Ｔ細胞が、インビトロにある、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記非活性化Ｔ細胞が、対象のエクスビボにある、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記接触工程より前に、前記対象が、Ｔ細胞活性化処置を施されていなかった、請求項３０または請求項３２に記載の方法。
  34. 前記対象が、疾患または病態を有する、請求項３０、３２、及び３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. Ｔ細胞の集団に形質導入する方法であって、前記方法が、
    非活性化Ｔ細胞の集団を、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させる工程
    を含み、前記非活性化Ｔ細胞の集団が、少なくとも１％の効率で形質導入される、前記方法。
  36. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、少なくとも５％の効率で形質導入される、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％の効率で形質導入される、請求項３５または請求項３６に記載の方法。
  38. 前記非活性化Ｔ細胞の集団中の前記Ｔ細胞の少なくとも７５％が、ＣＤ２５、ＣＤ４４、及びＣＤ６９からなる群から選択される１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である（例えば、前記集団中の前記Ｔ細胞の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が、前記Ｔ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である）、請求項３５～３７のいずれか一項に記載の方法。
  39. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む（例えば、前記非活性化Ｔ細胞の集団の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％が、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である）、請求項３５～３８のいずれか一項に記載の方法。
  40. 前記ＣＤ８＋ Ｔ細胞の少なくとも７５％が、ＣＤ２５、ＣＤ４４、及びＣＤ６９からなる群から選択される１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である（例えば、前記集団中の前記ＣＤ８＋ Ｔ細胞の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が、前記Ｔ細胞活性化マーカーに関して表面陰性である）、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記非活性化Ｔ細胞の集団中の前記ＣＤ８＋ Ｔ細胞が、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％の効率で形質導入される、請求項３９または請求項４０に記載の方法。
  42. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）で処理されていない、請求項３５～４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）で処理されていない、請求項３５～４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８抗体（例えば、ＣＤ２８．２）に結合させたビーズで処理されておらず、任意で前記ビーズが、超常磁性ビーズである、請求項３５～４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）で処理されておらず、任意で前記Ｔ細胞活性化サイトカインが、ヒトサイトカインである、請求項３５～４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、可溶性Ｔ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体または可溶性ＣＤ８０、可溶性ＣＤ８６、可溶性ＣＤ１３７Ｌまたは可溶性ＩＣＯＳ－Ｌ）で処理されていない、請求項３５～４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、ヒト細胞である、請求項３５～４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、対象内にある、請求項３５～４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記接触工程より前に、前記対象が、Ｔ細胞活性化処置を施されていない、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、インビトロにある、請求項３５～４７のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、対象のエクスビボにある、請求項３５～４７のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記非活性化Ｔ細胞の集団が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、またはＣＤ８＋ Ｔ細胞を含むそのサブセットを含む、請求項３５～４７、５０、及び５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. 前記非活性化細胞の集団が、対象からの生体試料から選択されたＴ細胞の濃縮された集団であり、任意で前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞マーカー（例えば、ＣＤ３またはＣＤ８）に関して表面陽性であるＴ細胞について選択される、請求項３５～４７及び５０～５２のいずれか一項に記載の方法。
  54. 前記生体試料が、全血試料、アフェレーシス試料または白血球アフェレーシス試料である、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記対象が、疾患または病態を有する、請求項４８、４９、及び５１～５４に記載の方法。
  56. 前記形質導入されたＴ細胞の集団を増殖させる工程をさらに含む、請求項３５～４７及び５０～５５のいずれか一項に記載の方法。
  57. 前記増殖工程が、前記形質導入された細胞の、１つまたは複数のＴ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）とのインキュベーションを含み、任意で前記Ｔ細胞活性化サイトカインが、ヒトサイトカインである、請求項５６に記載の方法。
  58. 前記形質導入されたＴ細胞を、１つまたは複数のＴ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせ）と共にインキュベートする工程をさらに含み、任意で前記Ｔ細胞活性化サイトカインが、ヒトサイトカインである、請求項３５～４７及び５０～５６のいずれか一項に記載の方法。
  59. インビボでのＴ細胞の形質導入方法であって、前記方法が、
    対象に、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物を投与する工程
    を含み、前記レンチウイルスベクターが、前記対象内でＴ細胞に形質導入し、前記対象が、前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない、前記方法。
  60. 前記対象が、疾患または病態を有する、請求項５９に記載の方法。
  61. 疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物の使用。
  62. 疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置する際に使用するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物。
  63. 疾患または病態を有する対象を処置する方法であって、前記方法が、
    前記対象に、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物を投与する工程
    を含み、前記対象が、前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない、前記方法。
  64. 前記疾患または前記病態が、がんである、請求項９～６０及び６３のいずれか一項に記載の方法、請求項６１に記載の使用、または請求項６２に記載の組成物。
  65. 前記レンチウイルスベクターが、
    前記疾患または前記病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする、導入遺伝子
    を含み、任意で前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項３４、５５～５８、６０、６３、及び６４のいずれか一項に記載の方法、請求項６１もしくは請求項６４に記載の使用、または請求項６２もしくは請求項６４に記載の組成物。
  66. 腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための方法であって、前記方法が、
    前記対象に、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物を投与する工程
    を含み、前記対象が、前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない、前記方法。
  67. 前記レンチウイルスベクターが、
    前記腫瘍細胞上に発現されるタンパク質に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする、導入遺伝子
    を含み、任意で前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記Ｔ細胞活性化処置が、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）の投与を含む、請求項３３～３４、４９、５５～６０、６３～６７、１３８～１４２、及び１６３～１６５のいずれか一項に記載の方法。
  69. 前記Ｔ細胞活性化処置が、可溶性Ｔ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体、または組換えＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７Ｌ、ＩＣＯＳ－Ｌ）の投与を含む、請求項３３～３４、４９、５５～６０、６３～６８、１３８～１４２、及び１６３～１６５のいずれか一項に記載の方法。
  70. 前記Ｔ細胞活性化処置が、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、組換えＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１）の投与を含み、任意で前記Ｔ細胞活性化サイトカインが、ヒトサイトカインである、請求項３３～３４、４９、５５～６０、６３～６９、１３８～１４２、及び１６３～１６５のいずれか一項に記載の方法。
  71. 前記Ｔ細胞活性化処置が、組換えＩＬ－７、任意でヒトＩＬ－７の投与を含む、請求項３３～３４、４９、５５～６０、６３～７０、１３８～１４２、及び１６３～１６５のいずれか一項に記載の方法。
  72. 前記Ｔ細胞活性化処置が、リンパ球枯渇療法の施術、任意でシクロホスファミド及び／またはフルダラビンの投与を含む、請求項３３～３４、４９、５５～６０、６３～７１、１３８～１４２、及び１６３～１６５のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記ＣＤ８結合物質が、抗ＣＤ８抗体または抗原結合断片である、請求項１～６０及び６３～７２のいずれか一項に記載の方法、請求項６１、６４、及び６５のいずれか一項に記載の使用、または請求項６２、６４、及び６５のいずれか一項に記載の組成物。
  74. 前記抗ＣＤ８抗体または前記抗原結合断片が、マウス、ウサギ、ヒト、またはヒト化のものである、請求項７３に記載の方法、使用、または組成物。
  75. 前記抗ＣＤ８抗体または前記抗原結合断片が、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項７３または請求項７４に記載の方法、使用、または組成物。
  76. 前記抗ＣＤ８抗体または前記抗原結合断片が、単一ドメイン抗体である、請求項７３に記載の方法、使用、または組成物。
  77. 前記抗ＣＤ８抗体または前記抗原結合断片が、ラクダ科動物（例えば、ラマ、アルパカ、ラクダ）の抗ＣＤ８抗体または抗原結合断片（例えば、ＶＨＨ）である、請求項７３、７４、及び７６のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  78. 前記ＣＤ８結合物質が、ＣＤ８アルファ鎖及び／またはＣＤ８ベータ鎖に結合する、請求項１～６０及び６３～７７のいずれか一項に記載の方法、請求項６１、６４～６５、及び７３～７７のいずれか一項に記載の使用、または請求項６２、６４、６５、及び７３～７７のいずれか一項に記載の組成物。
  79. 前記ＣＤ８結合物質が、前記レンチウイルスベクターの表面上に露出している、請求項１～６０及び６３～７８のいずれか一項に記載の方法、請求項６１、６４～６５、及び７３～７８のいずれか一項に記載の使用、または請求項６２、６４～６５、及び７３～７８のいずれか一項に記載の組成物。
  80. 前記ＣＤ８結合物質が、ウイルスエンベロープに組み込まれた膜貫通ドメインに融合されている、請求項１～６０及び６３～７９のいずれか一項に記載の方法、請求項６１、６４～６５、及び７３～７９のいずれか一項に記載の使用、または請求項６２、６４～６５、及び７３～７９のいずれか一項に記載の組成物。
  81. 前記レンチウイルスベクターが、ウイルス融合タンパク質でシュードタイプ化されている、請求項１～６０及び６３～８０のいずれか一項に記載の方法、請求項６１、６４～６５、及び７３～８０のいずれか一項に記載の使用、または請求項６２、６４～６５、及び７３～８０のいずれか一項に記載の組成物。
  82. 前記ウイルス融合タンパク質が、ＶＳＶ－Ｇタンパク質またはその機能的バリアントである、請求項８１に記載の方法、使用、または組成物。
  83. 前記ウイルス融合タンパク質が、ＣｏｃａｌウイルスＧタンパク質またはその機能的バリアントである、請求項８１に記載の方法、使用、または組成物。
  84. 前記ウイルス融合タンパク質が、アルファウイルス融合タンパク質（例えば、シンドビスウイルス）またはその機能的バリアントである、請求項８１に記載の方法、使用、または組成物。
  85. 前記ウイルス融合タンパク質が、パラミクソウイルス科融合タンパク質（例えば、モルビリウイルスまたはヘニパウイルス）またはその機能的バリアントである、請求項８１に記載の方法、使用、または組成物。
  86. 前記ウイルス融合タンパク質が、モルビリウイルス融合タンパク質（例えば、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、イヌジステンパーウイルス、クジラ目モルビリウイルス、小反芻獣疫ウイルス、アザラシジステンパーウイルス、牛疫ウイルス）またはその機能的バリアントである、請求項８１または請求項８５に記載の方法、使用、または組成物。
  87. 前記ウイルス融合タンパク質が、ヘニパウイルス融合タンパク質（例えば、ニパウイルス、ヘンドラウイルス、スギウイルス、クマシウイルス、Ｍｏｊｉａｎｇウイルス）またはその機能的バリアントである、請求項８１または請求項８５に記載の方法、使用、または組成物。
  88. 前記ウイルス融合タンパク質が、その天然受容体への結合を低減するための１つまたは複数の改変を含む、請求項８１～８７のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  89. 前記ウイルス融合タンパク質が、前記ＣＤ８結合物質に融合されている、請求項８１～８８のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  90. 前記ウイルス融合タンパク質が、ニパウイルスＦ糖タンパク質（ＮｉＶ－Ｆ）またはその生物学的に活性な部分及びニパウイルスＧ糖タンパク質（ＮｉＶ－Ｇ）またはその生物学的に活性な部分を含み、前記ＣＤ８結合物質が、前記ＮｉＶ－Ｇまたは前記その生物学的に活性な部分に融合されている、請求項８１、８５、及び８７～８９のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  91. 前記ＣＤ８結合物質が、前記ニパウイルスＧ糖タンパク質または前記その生物学的に活性な部分のＣ末端に融合されている、請求項９０に記載の方法、使用、または組成物。
  92. 前記ＣＤ８結合タンパク質が、前記ウイルス融合タンパク質に直接またはペプチドリンカーを介して融合されている、請求項８９～９１のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  93. 前記ＮｉＶ－Ｇまたは前記その生物学的に活性な部分が、野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である、請求項８９～９２のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  94. 前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、切り詰められており、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質のＮ末端におけるまたはその近くの最大４０個の連続アミノ酸残基を欠いている、請求項８９～９３のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  95. 前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質のＮ末端におけるまたはその近くの５アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号１２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項８９～９４のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  96. 前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質のＮ末端におけるまたはその近くの１０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号４４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４４に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項８９～９５のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  97. 前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質のＮ末端におけるまたはその近くの１５アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号４５に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４５に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項８９～９４のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  98. 前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質のＮ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号１３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１３に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項８９～９４のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  99. 前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質のＮ末端におけるまたはその近くの２５アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号１４に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１４に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項８９～９４のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  100. 前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質のＮ末端におけるまたはその近くの３０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号４３に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４３に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項８９～９４のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  101. 前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｇタンパク質のＮ末端におけるまたはその近くの３４アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号４２に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号４２に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項８９～９４のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  102. 前記ＮｉＶ－Ｇ－タンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、エフリンＢ２またはエフリンＢ３に対して低減された結合を示す変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質である、請求項８９～１０１のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  103. 前記変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、配列番号４に記載の番号付けを参照してＥ５０１Ａ、Ｗ５０４Ａ、Ｑ５３０Ａ、及びＥ５３３Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換に対応する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、請求項１０２に記載の方法、使用、または組成物。
  104. 前記変異体ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、配列番号１７に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１７に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む、請求項１０２または請求項１０３に記載の方法、使用、または組成物。
  105. 前記ＮｉＶ－Ｇタンパク質または前記生物学的に活性な部分が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項１０２または請求項１０３に記載の方法、使用、または組成物。
  106. 前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質であるか、またはその機能的に活性なバリアントもしくは生物学的に活性な部分である、請求項８９～１０５のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  107. 前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質のＣ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号２０に記載の配列、あるいは配列番号２０に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項８９～１０６のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  108. 前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、
    （ｉ）前記野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質のＣ末端におけるまたはその近くの２０アミノ酸の切り詰め、及び
    （ｉｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位における点変異
    を含み、
    任意で前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号１５に記載の配列、あるいは配列番号１５に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項８９～１０７のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  109. 前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、前記野生型ＮｉＶ－Ｆタンパク質のＣ末端におけるまたはその近くの２２アミノ酸の切り詰めを有し、任意で前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号１６もしくは２１に記載の配列、あるいは配列番号１６もしくは２１に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する、請求項８９～１０６のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  110. 前記ＮｉＶ－Ｆタンパク質または前記その生物学的に活性な部分が、配列番号２１に記載のアミノ酸配列、あるいは配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、または少なくとも約８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む、請求項８９～１０６及び１０９のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  111. 前記Ｎｉｖ－Ｇタンパク質が、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、前記Ｎｉｖ－Ｆタンパク質が、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項８９～１０６、１０９、及び１１０のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  112. 前記レンチウイルスベクターが、導入遺伝子を含む、請求項１～１１１のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  113. 前記導入遺伝子が、ＲＮＡ干渉が可能なＲＮＡ配列（例えば、ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ）をコードする核酸配列を含む、請求項１１２に記載の方法、使用、または組成物。
  114. 前記導入遺伝子が、治療遺伝子、レポーター遺伝子、酵素をコードする遺伝子、プロドラッグ酵素をコードする遺伝子、アポトーシス誘導物質をコードする遺伝子、蛍光タンパク質をコードする遺伝子、プロドラッグ活性化酵素をコードする遺伝子、アポトーシスタンパク質をコードする遺伝子、アポトーシス酵素をコードする遺伝子、自殺タンパク質をコードする遺伝子、サイトカインをコードする遺伝子、抗免疫抑制タンパク質をコードする遺伝子、エピジェネティックモジュレーターをコードする遺伝子、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする遺伝子、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする遺伝子、形質導入された細胞の細胞表面を改変するタンパク質をコードする遺伝子、内在性ＴＣＲの発現を改変するタンパク質をコードする遺伝子、及び腫瘍促進シグナルから抗腫瘍シグナルへと変換するスイッチ受容体をコードする遺伝子からなる群から選択される、請求項１１２に記載の方法、使用、または組成物。
  115. 前記導入遺伝子が、疾患または病態に関連する細胞または病変（例えば、腫瘍）によって発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードし、任意で前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項１１２に記載の方法、使用、または組成物。
  116. 前記導入遺伝子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、請求項６５及び６７～１１５のいずれか一項に記載の方法、または請求項１１２～１１５のいずれか一項に記載の使用もしくは組成物。
  117. 前記ＣＡＲが、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインの細胞内構成要素を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１１６に記載の方法、使用、または組成物。
  118. 前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメインであり、任意で前記ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインが、配列番号９８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１１７に記載の方法、使用、または組成物。
  119. 前記共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインであり、任意で前記４－１ＢＢシグナル伝達ドメインが、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１１７または請求項１１８に記載の方法、使用、または組成物。
  120. 前記ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインが、配列番号９９または配列番号１００に記載の配列を含む、請求項１１７～１１９のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  121. 前記膜貫通ドメインが、配列番号９４、９５、及び９６のうちのいずれか１つに記載の配列を含む、請求項１１７～１２０のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  122. 前記ＣＡＲが、ヒンジドメインを含み、任意で前記ヒンジドメインが、配列番号８８、８９、９０、９１、９２、９３、及び１８０のうちのいずれか１つに記載の配列を含む、請求項１１７～１２１のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  123. 前記抗原結合ドメインが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する、請求項１１７～１２２のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  124. 前記抗原結合ドメインが、ＣＤ１９に結合する、請求項１１７～１２３のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  125. 前記抗原結合ドメインが、
    （ａ）それぞれ配列番号１０８、１０９、及び１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１０３、１０４、及び１０５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；
    （ｂ）配列番号１０７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；及び／または
    （ｃ）配列番号１０１もしくは１１１に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項のいずれかに記載の方法、請求項１１７～１２４のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  126. 前記ＣＡＲが、配列番号１１３、１１５、１１７、もしくは１１９に記載のアミノ酸配列、及び／または配列番号１１２、１１４、１１６、もしくは１１８に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、請求項１１７～１２５のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  127. 前記抗原結合ドメインが、ＣＤ２０に結合する、請求項１１７～１２３のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  128. 前記抗原結合ドメインが、
    （ａ）それぞれ配列番号１２６、１２７、及び１８２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１２２、１２３、及び１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；
    （ｂ）配列番号１２５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１２１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；及び／または
    （ｃ）配列番号１２０に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項１１７～１２３及び１２７のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  129. 前記抗原結合ドメインが、ＣＤ２２に結合する、請求項１１７～１２３のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  130. 前記抗原結合ドメインが、
    （ａ）それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１３４、１３５、及び１３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３、もしくは
    それぞれ配列番号１３９、１４０、及び１４２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１４３、１４４、及び１４５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；及び／または
    （ｂ）配列番号１２９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１３３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、もしくは
    配列番号１３８に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１４２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；及び／または
    （ｃ）配列番号１２８もしくは１３７に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項１１７～１２３及び１２９のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  131. 前記抗原結合ドメインが、ＢＣＭＡに結合する、請求項１１７～１２３のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  132. 前記抗原結合ドメインが、
    （ａ）それぞれ配列番号１５２、１５２、及び１５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１４８、１４９、及び１５０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３、
    それぞれ配列番号１６１、１６２、及び１６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１５７、１５８、及び１５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３、
    それぞれ配列番号１６５、１６６、及び１６７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、もしくは
    それぞれ配列番号１７４、１７５、及び１７６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲＨ－２、及びＣＤＲ－Ｈ３、ならびにそれぞれ配列番号１７０、１７１、及び１７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３；及び／または
    （ｂ）配列番号１５１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１４７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
    配列番号１６０に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１５６に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
    配列番号１７３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１６９に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、もしくは
    配列番号１６４に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域；及び／または
    （ｃ）配列番号１４６、１５５、もしくは１６８に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項１１７～１２３及び１３１のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  133. 前記ＣＡＲが、配列番号１７８に記載のアミノ酸配列、及び／または配列番号１７７に記載のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、請求項のいずれかに記載の方法、請求項１１７～１２３、１３１、及び１３２のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  134. 前記導入遺伝子が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする、請求項６５及び６７～１１５のいずれか一項に記載の方法、または請求項１１２～１１５のいずれか一項に記載の使用もしくは組成物。
  135. 前記レンチウイルスベクターが、Ｔ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードせず、任意で前記Ｔ細胞活性化物質が、リンパ増殖物質である、請求項１～１３４のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  136. 前記Ｔ細胞活性化物質が、
    ＣＤ３及び／またはＣＤ２８に結合することができるポリペプチド；
    ＣＤ３抗体（例えば、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ）、Ｔ細胞活性化サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、もしくはＩＬ－２１）、またはＴ細胞共刺激分子（例えば、抗ＣＤ２８抗体、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７Ｌ、もしくはＩＣＯＳ－Ｌ）；
    ＳＴＡＴ３経路、ＳＴＡＴ４経路、及び／またはＪａｋ／ＳＴＡＴ５経路を活性化するサイトカインまたはサイトカイン受容体もしくはそのシグナル伝達ドメイン；
    Ｔ細胞生存モチーフ、任意でＩＬ－７受容体、ＩＬ－１５受容体、もしくはＣＤ２８、またはそれらの機能的部分；ならびに／あるいは
    前記ＳＴＡＴ５経路を刺激するかつ／または前記ＳＯＣＳ経路を阻害する、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）もしくは低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈｒＲＮＡ）
    である、請求項１３５に記載の方法、使用、または組成物。
  137. 前記レンチウイルスベクターが、膜結合型である及び／または前記表面上に提示されるＴ細胞活性化物質を含まないか、またはそれをコードせず、任意で前記Ｔ細胞活性化物質が、リンパ増殖物質である、請求項１～１３６のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  138. 前記対象が、前記レンチウイルスベクターと同時にＴ細胞活性化処置を施されない、請求項３３～３４、４９、及び５５～１３７のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  139. 前記対象が、前記レンチウイルスベクターとの前記接触工程前または前記レンチウイルスベクターを含む前記組成物の前記投与前の１ヶ月以内にＴ細胞活性化処置を施されない、請求項３３～３４、４９、及び５５～１３８のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  140. 前記対象が、前記レンチウイルスベクターとの前記接触工程前または前記レンチウイルスベクターを含む前記組成物の前記投与前の１週間、２週間、３週間、もしくは４週間以内、または１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、または約１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、任意で１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、または約１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、Ｔ細胞活性化処置を施されない、請求項３３～３４、４９、及び５５～１３９のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  141. 前記対象が、前記レンチウイルスベクターとの前記接触工程後または前記レンチウイルスベクターを含む前記組成物の前記投与後の１ヶ月以内にＴ細胞活性化処置を施されない、請求項３３～３４、４９、及び５５～１４０のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  142. 前記対象が、前記レンチウイルスベクターとの前記接触工程後または前記レンチウイルスベクターを含む前記組成物の前記投与後の１週間、２週間、３週間、もしくは４週間以内、または１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、または約１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、任意で１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、または約１、２、３、４、５、６、もしくは７日間、Ｔ細胞活性化処置を施されない、請求項３３～３４、４９、及び５５～１４１のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  143. Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢ遺伝子のうちの１つまたは複数を不活性化するように前記Ｔ細胞または前記Ｔ細胞の集団を編集する工程をさらに含む、請求項１～５８のいずれか一項に記載の方法。
  144. 前記Ｔ細胞または前記Ｔ細胞の集団が、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＡＣ遺伝子を不活性化するように編集される、請求項１４３に記載の方法。
  145. 前記Ｔ細胞または前記Ｔ細胞の集団が、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＢ遺伝子を不活性化するように編集される、請求項１４３に記載の方法。
  146. ＣＤ４７をコードする遺伝子を、規定の遺伝子座にて前記Ｔ細胞または前記Ｔ細胞の集団に挿入する工程をさらに含む、請求項１４３～１４５のいずれか一項に記載の方法。
  147. 前記規定の遺伝子座が、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、またはセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される、請求項１４６に記載の方法。
  148. 前記セーフハーバー遺伝子座が、ＡＡＶＳ１遺伝子座、ＣＣＲ５遺伝子座、及びＲＯＳＡ２６遺伝子座からなる群から選択される、請求項１４７に記載の方法。
  149. 前記レンチウイルスベクターが、
    前記疾患または前記病態に関連する細胞（例えば、腫瘍細胞）によってまたはその上に発現されるタンパク質または抗原に結合するかまたはそれを認識する操作された受容体をコードする、導入遺伝子
    を含み、任意で前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項１４３～１４８のいずれか一項に記載の方法。
  150. 前記接触工程または前記投与工程が、閉鎖型流体回路を使用した対象への前記レンチウイルスベクターのエクスビボ投与によって実施される、請求項１～６０または６３～１４９のいずれか一項に記載の方法。
  151. 前記エクスビボ投与が、
    （ａ）対象から全血を得る工程と；
    （ｂ）Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を含む白血球構成要素を含有する血液の画分を収集する工程と；
    （ｃ）Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を含む前記白血球構成要素を、前記レンチウイルスベクターを含む組成物と接触させる工程と；
    （ｄ）Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を含む前記接触させた白血球構成要素を前記対象に再注入する工程と
    を含み、ステップ（ａ）～（ｄ）が、閉鎖型流体回路においてインラインで行われる、請求項１５０に記載の方法。
  152. ステップ（ｃ）における前記接触工程が、２４時間以下、１８時間以下、１２時間以下、または６時間以下にわたる、請求項１５１に記載の方法。
  153. 請求項１～２９及び３１～６０及び６８～１５２のいずれか一項に記載の方法によって生産される、形質導入されたＴ細胞。
  154. 前記Ｔ細胞が、前記１つまたは複数の遺伝子の両方のアレルにて不活性化される、請求項１５３に記載の形質導入されたＴ細胞。
  155. 任意で薬学的組成物である、請求項１５３または請求項１５４に記載の形質導入されたＴ細胞を含む組成物。
  156. 請求項３５～４７、５０～５８、及び６８～１５２のいずれか一項に記載の方法によって生産される、形質導入されたＴ細胞の集団。
  157. 前記非活性化細胞の集団の前記細胞の少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％が、前記１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される、請求項１５６に記載の形質導入されたＴ細胞の集団。
  158. 前記集団中の前記非活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、または少なくとも３５％が形質導入され、前記１つまたは複数の遺伝子にて不活性化される、請求項１５６または請求項１５７に記載の形質導入されたＴ細胞の集団。
  159. 前記集団の細胞が、前記１つまたは複数の遺伝子の両方のアレルにて不活性化される、請求項１５６～１５８のいずれか一項に記載の形質導入されたＴ細胞の集団。
  160. 任意で薬学的組成物である、請求項１５６～１５９のいずれか一項に記載の形質導入されたＴ細胞の集団を含む組成物。
  161. 任意で薬学的組成物である、請求項３５～４７、５０～５８、及び６８～１５２のいずれか一項に記載の方法によって生産される形質導入されたＴ細胞の集団を含む組成物。
  162. 凍結保存剤をさらに含み、任意で前記凍結保存剤がＤＭＳＯである、請求項６２、６４、６５、７３～１４２、１５５、１６０、及び１６１のいずれか一項に記載の組成物。
  163. 疾患または病態を有する対象を処置する方法であって、前記方法が、
    前記対象に、請求項６２、６４、６５、７３～１４２、１５５、及び１６０～１６２のいずれか一項に記載の組成物を投与する工程
    を含み、前記対象が、前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない、前記方法。
  164. 前記疾患または前記病態が、がんである、請求項１６３に記載の方法。
  165. 腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための方法であって、前記方法が、
    前記対象に、請求項６２、６４、６５、７３～１４２、１５５、及び１６０～１６２のいずれか一項に記載の組成物を投与する工程
    を含み、前記対象が、前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されない、前記方法。
  166. 疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置するための医薬の製剤化のための、請求項６２、６４、６５、７３～１４２、１５５、及び１６０～１６２のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  167. 疾患または病態、任意でがんを有する対象を処置する際に使用するための、請求項６２、６４、６５、７３～１４２、１５５、及び１６０～１６２のいずれか一項に記載の組成物。
  168. 腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための医薬の製剤化のための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物の使用。
  169. 腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させるための医薬の製剤化のための、請求項６２、６４、６５、７３～１４２、１５５、及び１６０～１６２のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  170. 腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させる際に使用するための、ＣＤ８結合物質を含むレンチウイルスベクターを含む組成物。
  171. 腫瘍細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、それを必要とする対象において増殖させる際に使用するための、請求項６２、６４、６５、７３～１４２、１５５、及び１６０～１６２のいずれか一項に記載の組成物。
  172. 前記組成物の投与に加えて（例えば、その前、後、または同時に）Ｔ細胞活性化処置を施されないか、または施されることにならない対象において使用するためのものである、請求項１６６～１７１のいずれか一項に記載の使用または組成物。
  173. 前記ＣＡＲが、
    （ａ）配列番号１０２に記載の前記ＶＬ領域、配列番号１０６に記載のアミノ酸配列を含むリンカー、及び配列番号１０７に記載の前記ＶＨ領域、及び／もしくは配列番号１０１に記載の前記ｓｃＦｖを含む、抗原結合ドメイン；
    （ｂ）配列番号８８に記載のアミノ酸配列を含むヒンジ；
    （ｃ）配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含む膜貫通ドメイン；
    （ｄ）配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン；ならびに／または
    （ｅ）配列番号９９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン
    を含む、請求項１１～２０及び１１７～１２６のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
  174. 前記ＣＡＲが、配列番号１１３に記載のアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号１１２に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１１～２０、１１７～１２６、及び１７３のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
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