JP2022507453A - T細胞送達のためのフソソーム組成物 - Google Patents
T細胞送達のためのフソソーム組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022507453A JP2022507453A JP2021526393A JP2021526393A JP2022507453A JP 2022507453 A JP2022507453 A JP 2022507453A JP 2021526393 A JP2021526393 A JP 2021526393A JP 2021526393 A JP2021526393 A JP 2021526393A JP 2022507453 A JP2022507453 A JP 2022507453A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- fusosome
- cell
- protein
- fusosomes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims description 147
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title abstract description 65
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 110
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 62
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 897
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 382
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 257
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 226
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 226
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 198
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 198
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 124
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 109
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 100
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 94
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 claims description 68
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims description 64
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 62
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 60
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims description 57
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 53
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 48
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 claims description 47
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 47
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 45
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 40
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 35
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 34
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 32
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 32
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 30
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 30
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 29
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 28
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 27
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 27
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 27
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 27
- 101710133291 Hemagglutinin-neuraminidase Proteins 0.000 claims description 25
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 24
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 22
- 239000012212 insulator Substances 0.000 claims description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 20
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 20
- 101710169105 Minor spike protein Proteins 0.000 claims description 18
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 claims description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 18
- -1 S100-beta Proteins 0.000 claims description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 17
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 16
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims description 16
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 claims description 16
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 claims description 15
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 15
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 14
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims description 13
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims description 13
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims description 13
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 claims description 13
- 230000003325 follicular Effects 0.000 claims description 13
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 210000002378 Th9 Anatomy 0.000 claims description 12
- 210000002203 alpha-beta t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 12
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims description 12
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 claims description 11
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 11
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 10
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 10
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 claims description 9
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 9
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 8
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 claims description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 claims description 8
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 7
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 7
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 claims description 7
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 claims description 7
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 claims description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 7
- 241000893570 Hendra henipavirus Species 0.000 claims description 6
- 241000035314 Henipavirus Species 0.000 claims description 6
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 6
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 claims description 6
- 108090000253 Thyrotropin Receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 230000030147 nuclear export Effects 0.000 claims description 6
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 6
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 claims description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 claims description 5
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims description 4
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 4
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 4
- 102100032249 Dystonin Human genes 0.000 claims description 4
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010064212 Eosinophilic oesophagitis Diseases 0.000 claims description 4
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 claims description 4
- 102000008214 Glutamate decarboxylase Human genes 0.000 claims description 4
- 108091022930 Glutamate decarboxylase Proteins 0.000 claims description 4
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000001204 Hashimoto Disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 claims description 4
- 101001016186 Homo sapiens Dystonin Proteins 0.000 claims description 4
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 claims description 4
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 4
- 101001004924 Homo sapiens Transforming growth factor beta activator LRRC32 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000599037 Homo sapiens Zinc finger protein Helios Proteins 0.000 claims description 4
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 claims description 4
- 102000003911 Thyrotropin Receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 102100025946 Transforming growth factor beta activator LRRC32 Human genes 0.000 claims description 4
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 4
- 108010083111 Ubiquitin-Protein Ligases Proteins 0.000 claims description 4
- 102000006275 Ubiquitin-Protein Ligases Human genes 0.000 claims description 4
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 4
- 102100037796 Zinc finger protein Helios Human genes 0.000 claims description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- 201000000708 eosinophilic esophagitis Diseases 0.000 claims description 4
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 230000036473 myasthenia Effects 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 4
- 230000037426 transcriptional repression Effects 0.000 claims description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 4
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 claims description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 3
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 claims description 3
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 claims description 3
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 claims description 3
- 201000004988 autoimmune vasculitis Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 claims description 3
- 102100033310 Alpha-2-macroglobulin-like protein 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038910 Alpha-enolase Human genes 0.000 claims description 2
- 102000012002 Aquaporin 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010036280 Aquaporin 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025279 C-X-C motif chemokine 11 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036170 C-X-C motif chemokine 9 Human genes 0.000 claims description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 102000006303 Chaperonin 60 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010058432 Chaperonin 60 Proteins 0.000 claims description 2
- 241000402754 Erythranthe moschata Species 0.000 claims description 2
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 claims description 2
- 101000799921 Homo sapiens Alpha-2-macroglobulin-like protein 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000897480 Homo sapiens C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000797762 Homo sapiens C-C motif chemokine 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000858060 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 11 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000947172 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001065830 Homo sapiens Protein LRATD1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000738765 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase N2 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100026236 Interleukin-8 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010036012 Iodide peroxidase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010047956 Nucleosomes Proteins 0.000 claims description 2
- 102100027184 Periplakin Human genes 0.000 claims description 2
- 101710202907 Periplakin Proteins 0.000 claims description 2
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030477 Plectin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010054050 Plectin Proteins 0.000 claims description 2
- 102100032095 Protein LRATD1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037404 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase N2 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000015296 acetylcholine-gated cation-selective channel activity proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108040006409 acetylcholine-gated cation-selective channel activity proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000013640 alpha-Crystallin B Chain Human genes 0.000 claims description 2
- 108010051585 alpha-Crystallin B Chain Proteins 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 102000000072 beta-Arrestins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010080367 beta-Arrestins Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 claims description 2
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 claims description 2
- 206010022498 insulinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001623 nucleosome Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000021255 pancreatic insulinoma Diseases 0.000 claims description 2
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 claims description 2
- 108010039827 snRNP Core Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000015380 snRNP Core Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 claims description 2
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims 3
- 241000526636 Nipah henipavirus Species 0.000 claims 2
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 claims 2
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 claims 1
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 claims 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 claims 1
- 102000014267 Thyroid peroxidases Human genes 0.000 claims 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 claims 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 claims 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 claims 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 claims 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 23
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 23
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 119
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 111
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 85
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 56
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 53
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 41
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 39
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 39
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 35
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 32
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 31
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 28
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 27
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 26
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 26
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 24
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 24
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 23
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 23
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 23
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 22
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 22
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 21
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 21
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 21
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 19
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 19
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 19
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 18
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 18
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 18
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 18
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 16
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 16
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 15
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 15
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 15
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 15
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 14
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 14
- 108010027225 gag-pol Fusion Proteins Proteins 0.000 description 14
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 description 14
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 14
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 13
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 13
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 13
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 13
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 13
- 102100021868 Calnexin Human genes 0.000 description 12
- 108010056891 Calnexin Proteins 0.000 description 12
- 241000713730 Equine infectious anemia virus Species 0.000 description 12
- 102100036981 Interferon regulatory factor 1 Human genes 0.000 description 12
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 12
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 12
- 239000000306 component Substances 0.000 description 12
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 12
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 12
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 12
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 12
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 12
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 11
- 108091093126 WHP Posttrascriptional Response Element Proteins 0.000 description 11
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 11
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 11
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 10
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 10
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 10
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 10
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 10
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 101000613251 Homo sapiens Tumor susceptibility gene 101 protein Proteins 0.000 description 9
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 9
- 102100040879 Tumor susceptibility gene 101 protein Human genes 0.000 description 9
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 9
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 9
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 9
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 9
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 9
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 8
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 8
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 8
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 8
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 8
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 8
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 8
- 229940076376 protein agonist Drugs 0.000 description 8
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 8
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 8
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 7
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 7
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 7
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 7
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 7
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 7
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 7
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 7
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 7
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 7
- 108700001624 vesicular stomatitis virus G Proteins 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 6
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 6
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 6
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 6
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 6
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 6
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 6
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 6
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 6
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 6
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 6
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 6
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 6
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 6
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 6
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 6
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 6
- 108091006107 transcriptional repressors Proteins 0.000 description 6
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 6
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 description 5
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 5
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 5
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 5
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 5
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 description 5
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 description 5
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 5
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 5
- 101710109819 Transcription attenuation protein MtrB Proteins 0.000 description 5
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 5
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 5
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 5
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 5
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 5
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 5
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 5
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 5
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 5
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 5
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 5
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 5
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 5
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 5
- QUTFFEUUGHUPQC-ILWYWAAHSA-N (2r,3r,4s,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxy-2-[(4-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-7-yl)amino]hexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C2=NON=C12 QUTFFEUUGHUPQC-ILWYWAAHSA-N 0.000 description 4
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 4
- 102100033647 Activity-regulated cytoskeleton-associated protein Human genes 0.000 description 4
- 241000234671 Ananas Species 0.000 description 4
- 235000007119 Ananas comosus Nutrition 0.000 description 4
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 4
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 4
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 4
- 241000713756 Caprine arthritis encephalitis virus Species 0.000 description 4
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 4
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 4
- 101710170658 Endogenous retrovirus group K member 10 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 4
- 101710186314 Endogenous retrovirus group K member 21 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 4
- 101710162093 Endogenous retrovirus group K member 24 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 4
- 101710094596 Endogenous retrovirus group K member 8 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 4
- 101710177443 Endogenous retrovirus group K member 9 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 4
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 4
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 4
- 102100027421 Heat shock cognate 71 kDa protein Human genes 0.000 description 4
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 4
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 4
- 102100034347 Integrase Human genes 0.000 description 4
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 4
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 4
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 4
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 4
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 4
- 241000150350 Peribunyaviridae Species 0.000 description 4
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 4
- 102000044126 RNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010041948 SNARE Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000000583 SNARE Proteins Human genes 0.000 description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 4
- 102100037219 Syntenin-1 Human genes 0.000 description 4
- 108010083130 Syntenins Proteins 0.000 description 4
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 4
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 4
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 4
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004957 autophagosome Anatomy 0.000 description 4
- 238000003236 bicinchoninic acid assay Methods 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 4
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 4
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 4
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 4
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 4
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000001310 hydroxy propyl distarch phosphate Substances 0.000 description 4
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 4
- 230000007309 lysosomal acidification Effects 0.000 description 4
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 4
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 4
- 210000001057 smooth muscle myoblast Anatomy 0.000 description 4
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 4
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 3
- WRGQSWVCFNIUNZ-GDCKJWNLSA-N 1-oleoyl-sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O WRGQSWVCFNIUNZ-GDCKJWNLSA-N 0.000 description 3
- 108010024223 Adenine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 102100029457 Adenine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 3
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 3
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 3
- 102000000311 Cytosine Deaminase Human genes 0.000 description 3
- 108010080611 Cytosine Deaminase Proteins 0.000 description 3
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 3
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 3
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 3
- 102100028970 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E Human genes 0.000 description 3
- 102100028967 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Human genes 0.000 description 3
- 108010024164 HLA-G Antigens Proteins 0.000 description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 3
- 101000986085 Homo sapiens HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E Proteins 0.000 description 3
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 3
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 3
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 description 3
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 3
- 241000725296 JDV virus Species 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100039373 Membrane cofactor protein Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 3
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 3
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 3
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010035916 Nuclear Matrix-Associated Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000008297 Nuclear Matrix-Associated Proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 3
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 3
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 3
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 3
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 3
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010059722 Viral Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010065667 Viral Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M [(2r)-3-acetyloxy-2-hydroxypropyl] 2-aminoethyl phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCCN CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M 0.000 description 3
- FBDBXJJQMHPGMP-FNFFQOHASA-N [(2s)-2-hydroxy-3-[hydroxy-[(2r,3r,5s,6r)-2,3,4,5,6-pentahydroxycyclohexyl]oxyphosphoryl]oxypropyl] acetate Chemical compound CC(=O)OC[C@H](O)COP(O)(=O)OC1[C@H](O)[C@@H](O)C(O)[C@@H](O)[C@H]1O FBDBXJJQMHPGMP-FNFFQOHASA-N 0.000 description 3
- YEYCQJVCAMFWCO-PXBBAZSNSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] formate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 YEYCQJVCAMFWCO-PXBBAZSNSA-N 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 3
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 3
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 3
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 3
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 3
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 3
- 210000004397 glyoxysome Anatomy 0.000 description 3
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 3
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 3
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 3
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 230000034701 macropinocytosis Effects 0.000 description 3
- 210000002780 melanosome Anatomy 0.000 description 3
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 3
- 210000002500 microbody Anatomy 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 3
- 210000000299 nuclear matrix Anatomy 0.000 description 3
- 210000005134 plasmacytoid dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 3
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 3
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 3
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 3
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 3
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 3
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FABAOYOFJNAVHB-KVVVOXFISA-N (z)-octadec-9-enoic acid;propane-1,2,3-triol Chemical compound OCC(O)CO.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O FABAOYOFJNAVHB-KVVVOXFISA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091007504 ADAM10 Proteins 0.000 description 2
- 101710159080 Aconitate hydratase A Proteins 0.000 description 2
- 101710159078 Aconitate hydratase B Proteins 0.000 description 2
- 102000004373 Actin-related protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000963 Actin-related protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100036664 Adenosine deaminase Human genes 0.000 description 2
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 2
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 2
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 2
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 2
- 102100022002 CD59 glycoprotein Human genes 0.000 description 2
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100026550 Caspase-9 Human genes 0.000 description 2
- 108090000566 Caspase-9 Proteins 0.000 description 2
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 2
- 102000006912 Complement C4b-Binding Protein Human genes 0.000 description 2
- 108010047548 Complement C4b-Binding Protein Proteins 0.000 description 2
- 102000016550 Complement Factor H Human genes 0.000 description 2
- 108010053085 Complement Factor H Proteins 0.000 description 2
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 2
- 108050007222 Coronin Proteins 0.000 description 2
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 2
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 2
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 2
- 102100034289 Deoxynucleoside triphosphate triphosphohydrolase SAMHD1 Human genes 0.000 description 2
- 102100039673 Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10 Human genes 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 102000043859 Dynamin Human genes 0.000 description 2
- 108700021058 Dynamin Proteins 0.000 description 2
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 2
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 2
- 102100032036 EH domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100032037 EH domain-containing protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102100039328 Endoplasmin Human genes 0.000 description 2
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 2
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 2
- 102100026149 Fibroblast growth factor receptor-like 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 2
- 101710160621 Fusion glycoprotein F0 Proteins 0.000 description 2
- 241001663880 Gammaretrovirus Species 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- 108010036652 HSC70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010027992 HSP70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018932 HSP70 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010027814 HSP72 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100040352 Heat shock 70 kDa protein 1A Human genes 0.000 description 2
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 2
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000897353 Homo sapiens Cell division cycle protein 123 homolog Proteins 0.000 description 2
- 101000921221 Homo sapiens EH domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000921218 Homo sapiens EH domain-containing protein 4 Proteins 0.000 description 2
- 101000812663 Homo sapiens Endoplasmin Proteins 0.000 description 2
- 101000912518 Homo sapiens Fibroblast growth factor receptor-like 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001080568 Homo sapiens Heat shock cognate 71 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 2
- 101001022921 Homo sapiens Protein myomixer Proteins 0.000 description 2
- 101000803689 Homo sapiens Vacuolar protein sorting-associated protein 4B Proteins 0.000 description 2
- 241000713887 Human endogenous retrovirus Species 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 2
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 2
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- 241000713821 Mason-Pfizer monkey virus Species 0.000 description 2
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 2
- ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N Meloxicam Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=NC=C(C)S1 ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000018897 Membrane Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010027796 Membrane Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 101710146216 Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 2
- MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N Menadione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1 MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000006404 Mitochondrial Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010058682 Mitochondrial Proteins Proteins 0.000 description 2
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 2
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 2
- 241000701945 Parvoviridae Species 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 102100033344 Programmed cell death 6-interacting protein Human genes 0.000 description 2
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 2
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 2
- 102100035096 Protein myomixer Human genes 0.000 description 2
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 2
- 108700020471 RNA-Binding Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101710105008 RNA-binding protein Proteins 0.000 description 2
- 108700019718 SAM Domain and HD Domain-Containing Protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101150114242 SAMHD1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100397598 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) JNM1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000008910 Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 2
- 208000001203 Smallpox Diseases 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 108700031126 Tetraspanins Proteins 0.000 description 2
- 102000043977 Tetraspanins Human genes 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 102100029337 Thyrotropin receptor Human genes 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 2
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 2
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 2
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 2
- 241000332040 Tupaia paramyxovirus Species 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 102100035086 Vacuolar protein sorting-associated protein 4B Human genes 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010067674 Viral Nonstructural Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101100397001 Xenopus laevis ins-a gene Proteins 0.000 description 2
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 210000002534 adenoid Anatomy 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 238000004630 atomic force microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- XDHNQDDQEHDUTM-JQWOJBOSSA-N bafilomycin A1 Chemical compound CO[C@H]1\C=C\C=C(C)\C[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)\C=C(/C)\C=C(OC)\C(=O)O[C@@H]1[C@@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)[C@]1(O)O[C@H](C(C)C)[C@@H](C)[C@H](O)C1 XDHNQDDQEHDUTM-JQWOJBOSSA-N 0.000 description 2
- XDHNQDDQEHDUTM-ZGOPVUMHSA-N bafilomycin A1 Natural products CO[C@H]1C=CC=C(C)C[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)C=C(C)C=C(OC)C(=O)O[C@@H]1[C@@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)[C@]1(O)O[C@H](C(C)C)[C@@H](C)[C@H](O)C1 XDHNQDDQEHDUTM-ZGOPVUMHSA-N 0.000 description 2
- XDHNQDDQEHDUTM-UHFFFAOYSA-N bafliomycin A1 Natural products COC1C=CC=C(C)CC(C)C(O)C(C)C=C(C)C=C(OC)C(=O)OC1C(C)C(O)C(C)C1(O)OC(C(C)C)C(C)C(O)C1 XDHNQDDQEHDUTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 210000004718 centriole Anatomy 0.000 description 2
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 2
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- ZPEIMTDSQAKGNT-UHFFFAOYSA-N chlorpromazine Chemical compound C1=C(Cl)C=C2N(CCCN(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 ZPEIMTDSQAKGNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001076 chlorpromazine Drugs 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 102000018123 coronin Human genes 0.000 description 2
- KRQUGYHEWIVMJV-UHFFFAOYSA-N coronin Natural products CCCCCCCCCCCCC=C/CCC1OC1CCC2OC2CCCCCCCCCCC3=CC(C)OC3=O KRQUGYHEWIVMJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 2
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-UKLRSMCWSA-N dextrose-2-13c Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[13C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-UKLRSMCWSA-N 0.000 description 2
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- 210000000188 diaphragm Anatomy 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 210000003027 ear inner Anatomy 0.000 description 2
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 2
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 2
- 210000002514 epidermal stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 2
- QDERNBXNXJCIQK-UHFFFAOYSA-N ethylisopropylamiloride Chemical compound CCN(C(C)C)C1=NC(N)=C(C(=O)N=C(N)N)N=C1Cl QDERNBXNXJCIQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 101150047047 gag-pol gene Proteins 0.000 description 2
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 2
- 229960003132 halothane Drugs 0.000 description 2
- BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N halothane Chemical compound FC(F)(F)C(Cl)Br BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 2
- VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N hexamethylenetetramine Chemical compound C1N(C2)CN3CN1CN2C3 VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 101150032953 ins1 gene Proteins 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- YWXYYJSYQOXTPL-SLPGGIOYSA-N isosorbide mononitrate Chemical compound [O-][N+](=O)O[C@@H]1CO[C@@H]2[C@@H](O)CO[C@@H]21 YWXYYJSYQOXTPL-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 2
- HSMPDPBYAYSOBC-UHFFFAOYSA-N khellin Chemical compound O1C(C)=CC(=O)C2=C1C(OC)=C1OC=CC1=C2OC HSMPDPBYAYSOBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NSHPHXHGRHSMIK-IWQSFCKSSA-N latrunculin B Natural products C[C@H]1CC[C@@H]2C[C@@H](C[C@@](O)(O2)[C@@H]3CSC(=O)N3)OC(=O)C=C(C)/CCC=C/1 NSHPHXHGRHSMIK-IWQSFCKSSA-N 0.000 description 2
- NSHPHXHGRHSMIK-JRIKCGFMSA-N latrunculin B Chemical compound C([C@H]1[C@@]2(O)C[C@H]3C[C@H](O2)CC[C@@H](\C=C/CC\C(C)=C/C(=O)O3)C)SC(=O)N1 NSHPHXHGRHSMIK-JRIKCGFMSA-N 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 229960001929 meloxicam Drugs 0.000 description 2
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 2
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 210000001665 muscle stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 2
- 210000000282 nail Anatomy 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 210000005155 neural progenitor cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 2
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 230000008689 nuclear function Effects 0.000 description 2
- 230000012223 nuclear import Effects 0.000 description 2
- 210000004492 nuclear pore Anatomy 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 2
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 2
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 2
- 108010055837 phosphocarrier protein HPr Proteins 0.000 description 2
- 229960002702 piroxicam Drugs 0.000 description 2
- QYSPLQLAKJAUJT-UHFFFAOYSA-N piroxicam Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=CC=CC=N1 QYSPLQLAKJAUJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 108010089520 pol Gene Products Proteins 0.000 description 2
- 101150088264 pol gene Proteins 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 210000003124 radial glial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N serine Chemical compound OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 238000000856 sucrose gradient centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 108010037253 syncytin Proteins 0.000 description 2
- 229960002871 tenoxicam Drugs 0.000 description 2
- WZWYJBNHTWCXIM-UHFFFAOYSA-N tenoxicam Chemical compound O=C1C=2SC=CC=2S(=O)(=O)N(C)C1=C(O)NC1=CC=CC=N1 WZWYJBNHTWCXIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 2
- 229940041603 vitamin k 3 Drugs 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-[(1r)-1-hydroxyethyl]oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N 0.000 description 1
- SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N (4s,4ar,5s,5ar,6r,12ar)-4-(dimethylamino)-1,5,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@H](C)[C@@H]([C@H](O)[C@@H]3[C@](C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@H]3N(C)C)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N 0.000 description 1
- VJUBYQUPDRGGMP-UHFFFAOYSA-N (morpholin-4-ylamino)phosphonous acid Chemical compound OP(O)NN1CCOCC1 VJUBYQUPDRGGMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOYDNIKZWGIXJT-UHFFFAOYSA-N 1,2-difluorobenzene Chemical compound FC1=CC=CC=C1F GOYDNIKZWGIXJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCJBOOLMMGQPQU-UHFFFAOYSA-N 1,4-dichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=C(Cl)C=C1 OCJBOOLMMGQPQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPXDAIBTYWGBSL-UHFFFAOYSA-N 2,4-difluoro-1-methylbenzene Chemical compound CC1=CC=C(F)C=C1F MPXDAIBTYWGBSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010030844 2-methylcitrate synthase Proteins 0.000 description 1
- GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 2-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=S)NC(=O)C=C1 GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical group O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013043 Acetylesterase Proteins 0.000 description 1
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 241001664176 Alpharetrovirus Species 0.000 description 1
- 241000576133 Alphasatellites Species 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 241000180579 Arca Species 0.000 description 1
- 241000712891 Arenavirus Species 0.000 description 1
- 201000009695 Argentine hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 102100026444 Arrestin domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001533362 Astroviridae Species 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 241001231757 Betaretrovirus Species 0.000 description 1
- 241001446316 Bohle iridovirus Species 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010055167 CD59 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 1
- 238000010356 CRISPR-Cas9 genome editing Methods 0.000 description 1
- 101100179596 Caenorhabditis elegans ins-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100179594 Caenorhabditis elegans ins-4 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 102000000496 Carboxypeptidases A Human genes 0.000 description 1
- 108010080937 Carboxypeptidases A Proteins 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102100026548 Caspase-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 208000002691 Choroiditis Diseases 0.000 description 1
- 241001533399 Circoviridae Species 0.000 description 1
- 241001533384 Circovirus Species 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010071536 Citrate (Si)-synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000006732 Citrate synthase Human genes 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000016574 Complement C3-C5 Convertases Human genes 0.000 description 1
- 108010067641 Complement C3-C5 Convertases Proteins 0.000 description 1
- 102100025680 Complement decay-accelerating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100030886 Complement receptor type 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 201000003075 Crimean-Congo hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 241001559589 Cullen Species 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 108010072220 Cyclophilin A Proteins 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 241001663879 Deltaretrovirus Species 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 102100023933 Deoxyuridine 5'-triphosphate nucleotidohydrolase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 241000086550 Dinosauria Species 0.000 description 1
- 208000010772 Dog disease Diseases 0.000 description 1
- 241001520695 Duvenhage lyssavirus Species 0.000 description 1
- 229940123444 Dynamin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 description 1
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 1
- 208000030820 Ebola disease Diseases 0.000 description 1
- 208000001976 Endocrine Gland Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101000885147 Enterococcus avium D-arabitol-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241001455610 Ephemerovirus Species 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001663878 Epsilonretrovirus Species 0.000 description 1
- 101001091269 Escherichia coli Hygromycin-B 4-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000579695 European bat 1 lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000579698 European bat 2 lyssavirus Species 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010069446 Fertilins Proteins 0.000 description 1
- 102000001133 Fertilins Human genes 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 108700042658 GAP-43 Proteins 0.000 description 1
- 108091092584 GDNA Proteins 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 102000058061 Glucose Transporter Type 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100031547 HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100031546 HLA class II histocompatibility antigen, DO beta chain Human genes 0.000 description 1
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010010378 HLA-DP Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000015789 HLA-DP Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000700739 Hepadnaviridae Species 0.000 description 1
- 241000724675 Hepatitis E virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 108010034791 Heterochromatin Proteins 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 101000785762 Homo sapiens Arrestin domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000856022 Homo sapiens Complement decay-accelerating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000727061 Homo sapiens Complement receptor type 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000908713 Homo sapiens Dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 101000866278 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 101000866281 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DO beta chain Proteins 0.000 description 1
- 101001057156 Homo sapiens Melanoma-associated antigen C2 Proteins 0.000 description 1
- 101000961414 Homo sapiens Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 1
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001030211 Homo sapiens Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 description 1
- 101000795753 Homo sapiens mRNA decay activator protein ZFP36 Proteins 0.000 description 1
- 108700020121 Human Immunodeficiency Virus-1 rev Proteins 0.000 description 1
- 101900102211 Human T-cell leukemia virus 1 Protein Rex Proteins 0.000 description 1
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 241000701027 Human herpesvirus 6 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102100037963 Importin-7 Human genes 0.000 description 1
- 101710125784 Importin-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000668058 Infectious salmon anemia virus (isolate Atlantic salmon/Norway/810/9/99) RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 description 1
- 241000713297 Influenza C virus Species 0.000 description 1
- 101150089655 Ins2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 241000701377 Iridoviridae Species 0.000 description 1
- 108010066420 Iron-Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018434 Iron-Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- 206010023856 Laryngeal squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010023927 Lassa fever Diseases 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241000712899 Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus Species 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108010064171 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014944 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 208000000932 Marburg Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011013 Marburg hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 102100027252 Melanoma-associated antigen C2 Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 108091060585 Mir-31 Proteins 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108700021638 Neuro-Oncological Ventral Antigen Proteins 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000714209 Norwalk virus Species 0.000 description 1
- 102100025372 Nuclear pore complex protein Nup98-Nup96 Human genes 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 1
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 208000000821 Parathyroid Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034539 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A Human genes 0.000 description 1
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 1
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 102000017033 Porins Human genes 0.000 description 1
- 108010013381 Porins Proteins 0.000 description 1
- 208000003971 Posterior uveitis Diseases 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710180309 Protease 4 Proteins 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040121 Protein Methyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000055027 Protein Methyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 101710192141 Protein Nef Proteins 0.000 description 1
- 101710150344 Protein Rev Proteins 0.000 description 1
- 101710150336 Protein Rex Proteins 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 1
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 description 1
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 1
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 241000711931 Rhabdoviridae Species 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000713124 Rift Valley fever virus Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 108091006300 SLC2A4 Proteins 0.000 description 1
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 1
- 241001522306 Serinus serinus Species 0.000 description 1
- 241001529934 Simian T-lymphotropic virus 3 Species 0.000 description 1
- 241000713877 Simian sarcoma-associated virus Species 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000713675 Spumavirus Species 0.000 description 1
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 1
- 241000713820 Squirrel monkey retrovirus Species 0.000 description 1
- 101001091268 Streptomyces hygroscopicus Hygromycin-B 7''-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 238000010459 TALEN Methods 0.000 description 1
- 101150003725 TK gene Proteins 0.000 description 1
- 210000000068 Th17 cell Anatomy 0.000 description 1
- 102100033504 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100027188 Thyroid peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 208000004006 Tick-borne encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 1
- 108010043645 Transcription Activator-Like Effector Nucleases Proteins 0.000 description 1
- 108091061763 Triple-stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000008385 Urogenital Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000711970 Vesiculovirus Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000010094 Visna Diseases 0.000 description 1
- 241001492404 Woodchuck hepatitis virus Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 101100072652 Xenopus laevis ins-b gene Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Chemical class Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 230000021917 activation of membrane attack complex Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000798 anti-retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 229950004398 broxuridine Drugs 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 101150038500 cas9 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002583 cell-derived microparticle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 108700010039 chimeric receptor Proteins 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 1
- 108010011219 dUTP pyrophosphatase Proteins 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229940117389 dichlorobenzene Drugs 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- ZPTBLXKRQACLCR-XVFCMESISA-N dihydrouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)CC1 ZPTBLXKRQACLCR-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002121 endocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004651 endocytosis pathway Effects 0.000 description 1
- 229940124642 endogenous agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 1
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010304 firing Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- MUJOIMFVNIBMKC-UHFFFAOYSA-N fludioxonil Chemical compound C=12OC(F)(F)OC2=CC=CC=1C1=CNC=C1C#N MUJOIMFVNIBMKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 208000019691 hematopoietic and lymphoid cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004458 heterochromatin Anatomy 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 102000053563 human MYC Human genes 0.000 description 1
- 210000000688 human artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 108010002685 hygromycin-B kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000000266 injurious effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 230000002687 intercalation Effects 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002032 lab-on-a-chip Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 102100031622 mRNA decay activator protein ZFP36 Human genes 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000029559 malignant endocrine neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000026045 malignant tumor of parathyroid gland Diseases 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108091064282 miR-125 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091037066 miR-125-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062107 miR-125-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091079767 miR-125-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047189 miR-29c stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091054490 miR-29c-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091039521 miR-363 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091056495 miR-363-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091025820 miR-363-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 208000005871 monkeypox Diseases 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001167 myeloblast Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 108700004028 nef Genes Proteins 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 201000011682 nervous system cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000000683 nonmetastatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 108010054452 nuclear pore complex protein 98 Proteins 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000021232 nutrient availability Nutrition 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002824 peroxisome Anatomy 0.000 description 1
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 description 1
- XUYJLQHKOGNDPB-UHFFFAOYSA-N phosphonoacetic acid Chemical compound OC(=O)CP(O)(O)=O XUYJLQHKOGNDPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000036178 pleiotropy Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000023603 positive regulation of transcription initiation, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004739 secretory vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 108700004027 tat Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150098170 tat gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124598 therapeutic candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000009482 thermal adhesion granulation Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000005758 transcription activity Effects 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000004222 uncontrolled growth Effects 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 201000006266 variola major Diseases 0.000 description 1
- 201000000627 variola minor Diseases 0.000 description 1
- 208000014016 variola minor infection Diseases 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000006490 viral transcription Effects 0.000 description 1
- 230000010464 virion assembly Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
- A61K48/0058—Nucleic acids adapted for tissue specific expression, e.g. having tissue specific promoters as part of a contruct
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6901—Conjugates being cells, cell fragments, viruses, ghosts, red blood cells or viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
- A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
- A61K48/0033—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being non-polymeric
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/80—Vectors containing sites for inducing double-stranded breaks, e.g. meganuclease restriction sites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
- C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
- C12N2810/60—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses
- C12N2810/6072—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses negative strand RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
- C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
- C12N2810/60—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses
- C12N2810/6072—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses negative strand RNA viruses
- C12N2810/6081—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses negative strand RNA viruses rhabdoviridae, e.g. VSV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
Abstract
Description
本出願は、2018年11月14日に出願された「FUSOSOME COMPOSITIONS FOR T CELL DELIVERY」と題する米国仮出願第62/767,320号、及び2019年9月13日に出願された「FUSOSOME COMPOSITIONS FOR T CELL DELIVERY」と題する米国特許出願第62/900,053号の優先権を主張し、その内容は全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれる。
本出願は、電子形式の配列表と共に提出されている。配列リストは、2019年11月14日に作成された186152003240SeqList.TXTというタイトルのファイルとして提供されており、サイズは627キロバイトである。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により組み込まれる。
1.以下:
a)フソゲンを含む脂質二重層;並びに
b)以下:
(i)外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子、例えば表5の外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
(ii)ペイロード遺伝子に作動可能に連結された正の標的細胞特異的調節エレメント(例えば、標的細胞特異的プロモーター)とを含む核酸、を含むフソソームであって、ここで、正の標的細胞特異的調節エレメントは、正の標的細胞特異的調節エレメントを欠く以外は同様のフソソームと比較して、標的細胞におけるペイロード遺伝子の発現を増加させ、標的細胞は、T細胞である、フソソーム。
a)フソゲンを含む脂質二重層;並びに
b)以下:
(i)外因性作用物質、例えば表5の外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子、及び
(ii)ペイロード遺伝子に作動可能に連結されたプロモーターであって、ここで、例えば表3のプロモーターの配列、或いはそれと少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、又は99%の同一性を有する配列に従って、IL2RA、LRRC32、FOXP3、又はIKZF2プロモーターから選択されるプロモーターを含む核酸、を含むフソソーム。
a)フソゲンを含む脂質二重層;並びに
b)以下:
(i)外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子、例えば表5の外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
(ii)非標的細胞特異的調節エレメント(NTCSRE)(例えば、非標的細胞特異的miRNA認識配列)、すなわち、ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非細胞特異的調節エレメントであって、ここで、NTCSREは、NTCSREを欠く以外は同様のフソソームと比較して、非標的細胞又は組織においてペイロード遺伝子の発現を減少させる、ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非標的細胞特異的調節エレメントを含む核酸、を含む、フソソーム。
a)フソゲンを含む脂質二重層;並びに
b)以下:
(i)外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子、例えば表5の外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
(ii)ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非T細胞特異的調節エレメントである負の標的細胞特異的調節エレメント(負のTCSRE)(例えば、組織特異的なmiRNA認識配列)であって、負のTCSREが、負のTCSREを欠く他は同様の核酸と比較して、非標的細胞又は組織において外因性作用物質の発現を減少させる、ペイロード遺伝子に作動可能に連結された負の標的細胞特異的調節エレメントを含む核酸 を含む、フソソーム。
a)フソゲンを含む脂質二重層と、
b)外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子、例えば表5の外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子を含む核酸と、
c)以下のうちの1つ又は両方:
(i)脂質二重層上の第1の外因性の若しくは過剰発現された免疫抑制タンパク質;又は
(ii)存在しないか若しくは他の点では同様の未改変ソース細胞から生成されたフソソームと比較して、低下したレベル(例えば、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又は90%まで低下)で存在する第1の免疫賦活タンパク質とを含む、フソソーム。
i)フソソームが、非標的細胞とより、標的細胞と高い割合、例えば、少なくとも1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、若しくは100倍で融合する;
ii)フソソームが、別のフソソームとより、標的細胞と高い割合、例えば、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、若しくは90%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、若しくは100倍で融合する;
iii)フソソームが、該フソソーム内の作用物質が、24、48、又は72時間後に、標的細胞の少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、若しくは90%まで送達されるような速度で、標的細胞と融合する;
iv)フソソームが、非標的細胞よりも、標的細胞に高い割合、例えば、少なくとも1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、又は100倍で核酸、例えばレトロウイルス核酸を送達する;
v)フソソームが、別のフソソームよりも、標的細胞に高い割合、例えば、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、若しくは90%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、若しくは100倍で核酸、例えばレトロウイルス核酸を送達する;或いは
vi)フソソーム中の作用物質が、24、48、又は72時間後に標的細胞の少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、若しくは90%に送達されるような割合で、フソソームが標的細胞に核酸、例えばレトロウイルス核酸を送達する。
i)フソソームが、(例えば、単回投与又は複数回投与の後)検出可能な抗体応答を生じないか、又は例えば、FACS抗体検出アッセイ、例えば実施例13若しくは実施例14のアッセイによれば、フソソームに対する抗体が、バックグラウンドレベルの10%未満、5%、4%、3%、2%、若しくは1%超のレベルで存在する;
ii)フソソームが、検出可能な細胞免疫応答(例えば、T細胞応答、NK細胞胞応答、又はマクロファージ応答)を産生しないか、又はフソソームに対する細胞免疫応答が、例えば、PBMC溶解アッセイ(例えば、実施例5のアッセイ)、NK細胞溶解アッセイ(例えば、実施例6のアッセイ)、CD8キラーT細胞溶解アッセイ(例えば、実施例7のアッセイ)、又はマクロファージ食作用アッセイ(例えば、実施例8のアッセイ)によれば、フソソーム対する細胞応答がバックグラウンドレベルを10%未満、5%、4%、3%、2%、若しくは1%超のレベルで存在する;
iii)フソソームが、(例えば、単回投与又は複数回投与の後)検出可能な自然免疫応答、例えば、補体活性化を生じないか、又は例えば、補体活性アッセイ(例えば実施例9のアッセイ)によれば、フソソームに対する自然免疫応答が、バックグラウンドレベルの10%未満、5%、4%、3%、2%、若しくは1%超のレベルで存在する;
iv)例えば、血清不活化アッセイ、例えば、実施例11又は実施例12のアッセイによれば、フソソームの10%、5%、4%、3%、2%若しくは1%未満が血清によって不活化される;
v)フソソームから外因性作用物質を受けた標的細胞が、検出可能な抗体応答(例えば、単回投与又は複数回投与の後)を生じないか、又は例えば、FACS抗体検出アッセイ、例えば実施例15のアッセイによれば、標的細胞に対する抗体が、バックグラウンドレベルの10%未満、5%、4%、3%、2%、若しくは1%超のレベルで存在する;或いは
vi)フソソームから外因性作用物質を受けた標的細胞が、検出可能な細胞免疫応答(例えば、T細胞応答、NK細胞胞応答、又はマクロファージ応答)を産生しないか、又は標的細胞に対する細胞応答が、例えば、マクロファージ食作用アッセイ(例えば、実施例16のアッセイ)、PBMC溶解アッセイ(例えば、実施例17のアッセイ)、NK細胞溶解アッセイ(例えば、実施例18のアッセイ)、又はCD8キラーT細胞溶解アッセイ(例えば、実施例19のアッセイ)によれば、標的細胞に対する細胞応答がバックグラウンドレベルの10%未満、5%、4%、3%、2%、若しくは1%超のレベルで存在する。
i)被験体において検出可能に存在する外因性作用物質の10%、5%、4%、3%、2%、又は1%未満が非標的細胞にある;
ii)外因性作用物質を検出可能に含む被験体の細胞のうちの少なくとも90%、95%、96%、97%、98%、又は99%が標的細胞(例えば、単一細胞型の細胞)である;
iii)外因性作用物質を検出可能に含む被験体の細胞のうち1,000,000、500,000、200,000、100,000、50,000、20,000、又は10,000個未満の細胞が非標的細胞である;
iv)被験体の全標的細胞における外因性作用物質の平均レベルが、被験体の全非標的細胞における外因性作用物質の平均レベルよりも少なくとも100倍、200倍、500倍、又は1,000倍高いものである;或いは
v)外因性作用物質が被験体の非標的細胞において検出されない。
非標的細胞(例えば、従来のCD4+T細胞、抗原提示細胞、MHCクラスII+細胞、プロフェッショナル抗原提示細胞、非定型抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、骨髄性樹状細胞、形質細胞様樹状細胞、CD11c+細胞、CD11b+細胞、脾細胞、B細胞、肝細胞、内皮細胞、又は非癌性細胞)の10%、5%、2.5%、1%、0.5%、0.1%、0.01%未満が、外因性作用物質を含む;或いは
外因性作用物質(例えば、タンパク質)が、非標的細胞、例えば、従来のCD4+T細胞、抗原提示細胞、MHCクラスII+細胞、プロフェッショナル抗原提示細胞、非定型抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、骨髄性樹状細胞、形質細胞様樹状細胞、CD11c+細胞、CD11b+細胞、脾細胞、B細胞、肝細胞、内皮細胞、又は非癌性細胞において検出可能に存在しない、前述の実施形態のいずれかのフソソーム。
i)脂質二重層上の外因性の又は過剰発現された免疫抑制タンパク質、例えばエンベロープ;及び
(ii)他の点では同様の改変されていないソース細胞から生成されたフソソームと比較して、存在しないか若しくは低下したレベル(例えば、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又は、90%まで低下)で存在する免疫賦活タンパク質。
i)脂質二重層、例えば、エンベロープ上の第1の外因性の又は過剰発現された免疫抑制タンパク質、及び脂質二重層、例えば、エンベロープ上の第2の外因性又は過剰発現された免疫抑制タンパク質;
ii)脂質二重層、例えばエンベロープ上の第1の外因性又は過剰発現された免疫抑制タンパク質、及び他の点では同様の改変されていないソース細胞から生成されたフソソームと比較して、存在しないか若しくは低下したレベル(例えば、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又は、90%まで低下)で存在する第2の免疫賦活タンパク質;或いは
iii)他の点では同様の改変されていないソース細胞から生成されたフソソームと比較して、存在しないか若しくは低下したレベル(例えば、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又は、90%まで低下)で存在する第1の免疫賦活タンパク質、及び他の点では同様の改変されていないソース細胞から生成されたフソソームと比較して、存在しないか若しくは低下したレベル(例えば、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又は、90%まで低下)で存在する第2の免疫賦活タンパク質。
フソソーム又はフソソームを含む医薬組成物を投与される被験体が、フソソームと反応性の既存の抗体(例えば、IgG又はIgM)を有するか、又は有することが知られているか、又はそれらについて試験される;
フソソームを投与される被験体が、フソソームと反応性の検出可能なレベルの既存の抗体を有していない;
フソソーム又はフソソームを含む医薬組成物を受けた被験体が、フソソームと反応性の抗体(例えば、IgG又はIgM)を有するか、又は有することが知られているか、又はそれらについて試験される;
フソソーム又はフソソームを含む医薬組成物(例えば、少なくとも1回、2回、3回、4回、5回、又はそれ以上)を投与された被験体が、フソソームと反応性の検出可能なレベルの抗体を有していない;或いは
抗体のレベルが、2つの時点の間で1%、2%、5%、10%、20%、又は50%を超えて上昇せず、第1の時点が、フソソームの最初の投与の前であり、第2の時点が、フソソームの1回以上の投与後である。
a)核酸、例えば、レトロウイルス核酸、及びフソゲンを含む細胞を提供すること;
b)フソソームの産生を可能にする条件下で上記細胞を培養すること、並びに
c)上記細胞からフソソームを分離、濃縮、又は精製し、それによってフソソームを作製すること。
請求項及び明細書で使用される用語は、特に明記しない限り、以下に記載されるように定義される。
フソソームは様々な形をとることができる。例えば、幾つかの実施形態では、本明細書に記載のフソソームは、ソース細胞に由来する。フソソームは、例えば、細胞外小胞、微小胞、ナノベシクル、エクソソーム、アポトーシス小体(アポトーシス細胞由来)、微粒子(例えば、血小板から誘導され得る)、エクトソーム(例えば、血清中の好中球及び単球から誘導可能)、プロスタトソーム(前立腺癌細胞から得られる)、カーディオソーム(cardiosome)(心臓細胞から得られる)、又はそれらの任意の組み合わせであり得るか、又はそれらを含み得る。幾つかの実施形態では、フソソームはソース細胞から自然に放出され、幾つかの実施形態では、ソース細胞は、フソソームの形成を増強するように処理される。幾つかの実施形態では、フソソームは、直径が約10~10,000nm、例えば、直径が約30~100nmである。幾つかの実施形態では、フソソームは、1つ以上の合成脂質を含む。
例えば、幾つかの実施形態では、フソソーム(例えば、ウイルス、例えば、レトロウイルス、例えば、レンチウイルス)は、次タンパク質:gagポリタンパク質、ポリメラーゼ(例えば、pol)、インテグラーゼ(例えば、機能的又は非機能的バリアント)、プロテアーゼ、及びフソゲン、の1つ以上(例えば、全て)を含む。幾つかの実施形態では、フソソームは更にrevを含む。幾つかの実施形態では、1つ以上の前述のタンパク質は、レトロウイルスゲノムにコードされ、幾つかの実施形態では、1つ以上の前述のタンパク質は、例えば、ヘルパー細胞、ヘルパーウイルス、又はヘルパープラスミドによってトランスで提供される。幾つかの実施形態では、フソソーム核酸(例えば、レトロウイルス核酸)は、次の核酸配列:5’LTR(例えば、U5を含み、機能的U3ドメインを欠く)、Psiパッケージングエレメント(Psi)、ペイロード遺伝子に作動可能に連結された中央ポリプリン管(cPPT)プロモーター、ペイロード遺伝子(任意に、オープンリーディングフレームの前にイントロンを含む)、ポリAテール配列、WPRE、及び3’LTR(例えば、U5及び機能的なU3を欠いている)、の1つ以上(例えば、全て)を含む。幾つかの実施形態では、フソソーム核酸(例えば、レトロウイルス核酸)は、1つ以上のインスレーター配列を更に含む。幾つかの実施形態では、フソソーム核酸(例えば、レトロウイルス核酸)は、1つ以上のmiRNA認識部位を更に含む。幾つかの実施形態では、1つ以上のmiRNA認識部位は、ポリAテール配列の下流、例えば、ポリAテール配列とWPREとの間に位置する。
幾つかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、次の1つ以上(例えば、全て)を含む:5’プロモーター(例えば、パッケージされたRNA全体の発現を制御するため)、5’LTR(例えば、R(ポリアデニル化テールシグナルを含む)及び/又はプライマー活性化シグナルを含むU5)、プライマー結合部位、psiパッケージングシグナル、核エクスポート用のRREエレメント、導入遺伝子の発現を制御するための導入遺伝子のすぐ上流のプロモーター、導入遺伝子(又は他の外因性作用物質エレメント)、ポリプリントラクト、及び3’LTR(例えば、変異したU3、R、及びU5を含む)。幾つかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、cPPT、WPRE、及び/又はインスレーター配列の1つ以上を更に含む。
幾つかのレンチウイルスベクターは、活性遺伝子の内部に統合され、異常な、場合によってはトランケートな転写産物の形成につながる可能性のある強力なスプライシング及びポリアデニル化シグナルを持っている。
大規模なウイルス粒子の産生は、所望のウイルス力価を達成するためにしばしば有用である。ウイルス粒子は、ウイルスの構造及び/又はアクセサリー遺伝子、例えば、gag、pol、env、tat、rev、vif、vpr、vpu、vpx若しくはnef遺伝子、又はその他のレトロウイルス遺伝子を含むパッケージング細胞株にトランスファーベクターをトランスフェクトすることによって産生することができる。
幾つかの実施形態では、ソース細胞は、ウイルス構造タンパク質、及びウイルス粒子をパッケージングできる複製酵素(例えば、gag、pol、及びenv)をコードする1つ以上のプラスミドを含む。幾つかの実施形態では、gag、pol、及びenv前駆体のうちの少なくとも2つをコードする配列は、同じプラスミド上にある。幾つかの実施形態では、gag、pol、及びenv前駆体をコードする配列は、異なるプラスミド上にある。幾つかの実施形態では、gag、pol、及びenv前駆体をコードする配列は、同じ発現シグナル、例えば、プロモーターを有する。幾つかの実施形態では、gag、pol、及びenv前駆体をコードする配列は、異なる発現シグナル、例えば、異なるプロモーターを有する。幾つかの実施形態では、gag、pol、及びenv前駆体の発現は誘導可能である。幾つかの実施形態では、ウイルス構造タンパク質及び複製酵素をコードするプラスミドを同時に又は異なる時間にトランスフェクトする。幾つかの実施形態では、パッケージングベクターからウイルス構造タンパク質及び複製酵素をコードするプラスミドを同時に又は異なる時間にトランスフェクトする。
通常、最新のレトロウイルスベクターシステムは、ウイルスRNAのウイルス粒子への転写、逆転写、組み込み、翻訳、及びパッケージングのためのシス作用性ベクター配列を有するウイルスゲノム、及び(2)ウイルス粒子の産生に必要なトランス作用性レトロウイルス遺伝子配列(例えば、gag、pol、及びenv)を発現するプロデューサー細胞株からなる。シス及びトランス作用のベクター配列を完全に分離することにより、ウイルスは感染の2回以上のサイクルで複製を維持することができない。生きたウイルスの生成は、幾つかの戦略によって、例えば、組換えを回避するためにシス及びトランス作用配列間の重複を最小限に抑えることによって、回避され得る。
ソース細胞で(過剰)発現されたタンパク質は、ベクタービリオンの集合及び/又は感染力に間接的又は直接的な影響を与える可能性がある。外因性作用物質のベクタービリオンへの取り込みも、ベクター粒子の下流プロセシングに影響を与える可能性がある。
幾つかの実施形態では、外因性作用物質をコードする遺伝子を保有するポリヌクレオチド又は細胞は、自殺遺伝子、例えば、誘導性自殺遺伝子を利用して、直接毒性の及び/又は制御されない増殖のリスクを低減する。特定の態様において、自殺遺伝子は、外因性作用物質を宿す宿主細胞に対して免疫原性ではない。自殺遺伝子の例には、カスパーゼ-9、カスパーゼ-8、又はシトシンデアミナーゼが含まれる。カスパーゼ-9は、特定の二量体化化学誘導物質(CID)を使用して活性化され得る。
レトロウイルス又はレンチウイルスゲノムの標的細胞ゲノムへの統合を防ぐために、重要なタンパク質/配列が欠如しているか又は無効にされているレトロウイルス及びレンチウイルス核酸が開示されている。例えば、レトロウイルスインテグラーゼの高度に保存されたDDEモチーフ(Engelman and Craigie(1992)J.Virol.66:6361-6369;Johnson et al.(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83:7648-7652;Khan et al.(1991)Nucleic Acids Res.19:851-860)は、統合欠損レトロウイルス核酸の生産を可能にする。
統合が不十分なレトロウイルスでは、逆転写の環状cDNA副産物(例えば、1-LTR及び2-LTR)は、宿主ゲノムに統合されることなく細胞核に蓄積する可能性がある(Yanez-Munoz R J et al.,Nat.Med.2006,12:348-353)。次に、他の外因性DNAのように、これらの中間体を、同じ周波数(例えば、103~105/細胞)で細胞DNAに統合することができる。
フソソームの組成物は、培養中の細胞、例えば、培養された哺乳動物細胞、例えば、培養されたヒト細胞から生成され得る。細胞は、始原細胞又は非始原(例えば、分化した)細胞であり得る。細胞は、初代細胞又は細胞株(例えば、哺乳動物、例えば、ヒト、本明細書に記載の細胞株)であり得る。実施形態では、培養細胞は、始原細胞、例えば、骨髄間質細胞、骨髄由来成体前駆細胞(MAPC)、内皮前駆細胞(EPC)、芽細胞、脳室下帯に形成された中間前駆細胞、神経幹細胞、筋肉幹細胞、衛星細胞、肝臓幹細胞、造血幹細胞、骨髄間質細胞、表皮幹細胞、胚性幹細胞、間葉系幹細胞、臍帯幹細胞、前駆細胞、筋肉前駆細胞、筋芽細胞、心筋芽球、神経前駆細胞、グリア前駆細胞、神経前駆細胞、肝芽球である。
i)糸状粒子、エクソソーム、又は他の膜で囲まれた小胞の出芽を誘発すること;
ii)以下の方法のいずれか又はそれらの組み合わせによって、核の不活性化、例えば、除核を誘発すること:
a)遺伝的方法;
b)例えばアクチノマイシンDを使用する化学的方法;又は
c)機械的方法、例えば、圧搾又は吸引;又は
iii)例えば、以下の方法のいずれか又はそれらの組み合わせによって、細胞断片化を誘導すること:
a)化学的方法;
b)機械的方法、例えば遠心分離(例えば、超遠心分離又は密度遠心分離);凍結融解;又は超音波処理。
幾つかの態様では、改変は、フソソーム生成の前に、対象、組織又は細胞の改変等の細胞に対して行われる。そのような改変は、例えば、融合、フソゲンの発現又は活性、カーゴの構造又は機能、又は標的細胞の構造又は機能を改善するのに効果的であり得る。
幾つかの実施形態では、細胞は、フソソームを生成する前に物理的に改変される。例えば、本明細書の他の場所に記載されているように、フソゲンは、細胞の表面に連結され得る。
幾つかの実施形態では、細胞は、フソソームを生成する前に遺伝子改変されて、細胞内の内因性フソゲンの発現を増加させる(例えば、幾つかの実施形態では、ソース細胞に対して内因性であり、幾つかの実施形態では、標的細胞に対して内因性である)。幾つかの実施形態では、遺伝子改変は、内因性フソゲンの転写活性化因子の発現又は活性を増加させ得る。幾つかの実施形態では、遺伝子改変は、内因性フソゲンの調節転写リプレッサーの発現又は活性を低下させ得る。幾つかの実施形態では、アクチベーター又はリプレッサーは、ガイドRNAによって内因性フソゲンを標的とする転写活性化因子又はリプレッサーに連結されたヌクレアーゼ不活性cas9(dCas9)である。幾つかの実施形態では、遺伝子改変は、内因性フソゲン遺伝子をエピジェネティックに改変して、その発現を増加させる。幾つかの実施形態では、エピジェネティック活性化因子は、ガイドRNAによって内因性フソゲンを標的とするエピジェネティック修飾因子に連結されたヌクレアーゼ不活性cas9(dCas9)である。
(iii)任意に、正の標的細胞特異的調節エレメント、例えば、ペイロード遺伝子に作動可能に連結された正の標的細胞特異的調節エレメント(例えば、標的細胞特異的プロモーター)であって、ここで、正の標的細胞特異的調節エレメントは、正の標的細胞特異的調節エレメントを欠く以外は同様のフソソームと比較して、標的細胞におけるペイロード遺伝子の発現を増加させ、ここで、標的細胞は第1のタイプのT細胞である;任意に、非標的細胞は第2の異なるタイプのT細胞又は非T細胞であり、任意に、標的細胞はTreg細胞であり、非標的細胞は従来のCD4+T細胞である;ここで、フソソームは核を含まない;及びここで、フソソーム組成物中のウイルスキャプシドタンパク質の量は、総タンパク質の1%未満である。
xvi)フソソームは、例えば、実施例50のアッセイを使用して測定した場合、グルコースの不在下で、陰性対照、例えば、他の点では同様のフソソームよりも、少なくとも1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%多く(例えば、約11.6%多く)グルコース(例えば、標識グルコース、例えば、2-NBDG)を、膜を横切って、輸送する;xvii)フソソームは、例えば、実施例51のアッセイを使用して、参照細胞、例えば、ソース細胞又はマウス胚線維芽細胞におけるエステラーゼ活性の1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%以内の内腔におけるエステラーゼ活性を含む;
xviii)フソソームは、例えば、実施例53に記載されるように、参照細胞、例えばソース細胞におけるクエン酸合成酵素活性の1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、又は100%以内の代謝活性レベルを含む;xiv)フソソームは、例えば、実施例54に記載されるように、参照細胞、例えばソース細胞における呼吸レベルの1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、又は100%以内の呼吸レベル(例えば、酸素消費率)を含む;xx)フソソームは、例えば、実施例55のアッセイを使用して、最大で18,000、17,000、16,000、15,000、14,000、13,000、12,000、11,000、若しくは10,000MFIのアネキシンV染色レベルを含むか、又はフソソームは、実施例55のアッセイにおいてメナジオンで処理された他の点では同様のフソソームのアネキシンV染色レベルよりも少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、若しくは50%低いアネキシンV染色レベルを含むか、又はフソソームは、実施例55のアッセイにおいてメナジオンで処理されたマクロファージのアネキシンV染色レベルよりも少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、又は50%低いアネキシンV染色レベルを含む、xxi)フソソームは、例えば、実施例33のアッセイにより、ソース細胞のものよりも少なくとも1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%又はそれ以上のmiRNA含有量レベルを有する;xxii)フソソームは可溶性:不溶性タンパク質比は、例えば、実施例38のアッセイにより、ソース細胞のものの1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%以内若しくはそれよりも大きいか、又は、例えば、ソース細胞のものの1%~2%、2%~3%、3%~4%、4%~5%、5%~10%、10%~20%、20%~30%、30%~40%、40%~50%、50%~60%、60%~70%、70%~80%、若しくは80%~90%以内若しくはそれよりも大きい;xxiii)フソソームは、例えば、実施例39のアッセイにおいて、例えば質量分析により測定した場合、ソース細胞のLPS含有量の5%未満、1%、0.5%、0.01%、0.005%、0.0001%、0.00001%以下のLPSレベルを有する;xxiv)フソソームは、例えば、実施例49のアッセイを使用してインスリンの不在下で陰性対照、例えば他の点では同様のフソソームよりも1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%多い、シグナル伝達、例えば、インスリンに応答した細胞外シグナルの送達、例えば、AKTリン酸化、又はインスリンに応答したグルコース(例えば、標識グルコース、例えば、2-NBDG)取り込みが可能である;xxv)フソソームは、組織、例えば、肝臓、肺、心臓、脾臓、膵臓、胃腸管、腎臓、精巣、卵巣、脳、生殖器官、中枢神経系、末梢神経系、骨格筋、内皮、内耳、又は眼等を標的とし、被験体、例えばマウスに投与された場合、例えば、実施例64のアッセイによって24、48又は72時間後、例えば、投与されたフソソームの集団の少なくとも0.1%、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又は90%のフソソームが標的組織に存在する;xxvi)フソソームは、例えば、実施例56のアッセイにより、参照細胞、例えばソース細胞又は骨髄間質細胞(BMSC)によって誘導されるジャクスタクリンシグナル伝達よりも、少なくとも1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%又は100%大きいジャクスタクリンシグナル伝達レベルを有する;xxvii)フソソームは、例えば、実施例57のアッセイにより、参照細胞、例えばソース細胞又はマクロファージによって誘導されるパラクリンシグナル伝達のレベルよりも、少なくとも1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%大きいパラクリンシグナル伝達レベルを有する;xxviii)フソソームは、例えば、実施例58のアッセイにより、参照細胞、例えばソース細胞又はC2C12細胞において重合されるアクチンレベルと比較して、1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、又は100%以内のレベルでアクチンを重合する;xxix)フソソームは、例えば、実施例59のアッセイによって、参照細胞、例えば、ソース細胞又はC2C12細胞の膜電位の約1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%以内の膜電位を有するか、又はフソソームは、約-20~-150mV、-20~-50mV、-50~-100mV、又は-100~-150mVの膜電位を有する;xxx)フソソームは、例えば、実施例44のアッセイを使用して、ソース細胞又はソース細胞と同じタイプの細胞の割合の、例えば、少なくとも1%、2%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又は90%の割合で、血管からの血管外漏出が可能であり、ここで、ソース細胞は、好中球、リンパ球、B細胞、マクロファージ、又はNK細胞である;xxxi)フソソームは、細胞膜、例えば、内皮細胞膜又は血液脳関門を通過することができる;xxxii)フソソームは、例えば、実施例48のアッセイを使用して、参照細胞、例えば、マウス胚性線維芽細胞よりも、例えば、少なくとも1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、又は100%より大きい割合でタンパク質を分泌することができる;xxxiii)フソソームは、医薬品又は適正製造基準(GMP)基準を満たしている;xxxiv)フソソームは適正製造基準(GMP)に従って製造された;xxxv)フソソームは、所定の基準値を下回る病原体レベルを有し、例えば、病原体を実質的に含まない;xxxvi)フソソームは、所定の基準値を下回る汚染物質レベルを有し、例えば、汚染物質を実質的に含まない;xxxvii)フソソームは、例えば、本明細書に記載されるように、免疫原性が低い;xxxviii)ソース細胞は、好中球、顆粒球、間葉系幹細胞、骨髄幹細胞、誘導多能性幹細胞、胚性幹細胞、骨髄芽細胞、筋芽細胞、肝細胞、又はニューロン、例えば網膜神経細胞から選択される;又はxxxix)ソース細胞は、293細胞、HEK細胞、ヒト内皮細胞、又はヒト上皮細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、又は幹細胞以外のものである。
viii)ソース細胞は、アデノウイルスを介した不死化以外の方法を使用して形質転換又は不死化され、例えば、自然突然変異又はテロメラーゼ発現によって不死化される;ix)フソゲンは、VSVG、SNAREタンパク質、又は分泌顆粒タンパク質以外のものである;x)フソソームはCre又はGFP、例えばEGFPを含まない;xi)フソソームは、Cre又はGFP以外の外因性タンパク質、例えばEGFPを更に含む;xii)フソソームは、例えば内腔内に外因性核酸(例えば、RNA、例えば、mRNA、miRNA、又はsiRNA)又は外因性タンパク質(例えば、抗体、例えば、抗体)を更に含む;又はxiii)フソソームはミトコンドリアを含まない。
幾つかの実施形態では、本明細書に記載のフソソーム(例えば、小胞又は細胞の一部を含む)は、例えば膜、例えば細胞膜へのフソソームの融合を促進するために、1つ以上のフソゲンを含む。また、これらの組成物は、1つ以上のフソゲンを含むように合成中又は合成後に行われる表面修飾を含み得る。表面修飾は、膜への修飾、例えば、脂質又はタンパク質の膜への挿入を含み得る。
i)タンパク質フソゲン
幾つかの実施形態では、フソソームは、飽和脂肪酸等の融合性脂質で処理され得る。幾つかの実施形態では、飽和脂肪酸は、10~14個の炭素を有する。幾つかの実施形態では、飽和脂肪酸は、より長鎖のカルボン酸を有する。幾つかの実施形態では、飽和脂肪酸は、モノエステルである。
幾つかの実施形態では、フソソームは、融合性化学物質で処理され得る。幾つかの実施形態では、融合性化学物質は、ポリエチレングリコール(PEG)又はその誘導体である。
幾つかの実施形態では、フソソームは、融合性小分子で処理され得る。幾つかの非限定的な例としては、ハロタン、メロキシカム、ピロキシカム、テノキシカム、及びクロルプロマジン等の非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)が挙げられる。
幾つかの実施形態では、フソゲンは、切断可能なタンパク質に連結される。幾つかの場合、切断可能なタンパク質は、プロテアーゼへの曝露によって切断され得る。操作された融合タンパク質は、膜貫通タンパク質の任意のドメインに結合し得る。操作された融合タンパク質は、膜間空間内に位置するタンパク質ドメインに切断ペプチドによって連結され得る。切断ペプチドは、膜間プロテアーゼ(例えば、非極性脂肪族アミノ酸-バリン、イソロイシン又はメチオニンを必要とするHTRA2/OMIが、-P1位において好ましく、親水性残基-アルギニンが、-P2位及びP3位において好ましい)の1つ又は組み合わせによって切断され得る。
幾つかの実施形態では、本明細書に記載のフソソーム、例えば、ウイルス、例えば、レトロウイルスは、組織特異的プロモーター、組織特異的エンハンサー、組織特異的スプライス部位、RNA又はタンパク質の半減期を延長する組織特異的部位、組織特異的mRNA核外輸送促進部位、組織特異的翻訳増強部位、又は組織特異的翻訳後修飾部位等の正の標的細胞特異的調節エレメントを含む核酸(例えば、外因性作用物質をコードする遺伝子)、例えば、レトロウイルス核酸を含む。
幾つかの実施形態では、レトロウイルス核酸は、外因性作用物質の条件付き発現、例えば、誘導性発現、抑制可能な発現、細胞型特異的発現、又は組織特異的発現を含むがこれに限定されない任意のタイプの条件付き発現を可能にするエレメントを含む。幾つかの実施形態では、外因性作用物質の条件付き発現を達成するために、細胞、組織、又は生物を、外因性作用物質を発現させる、又は外因性作用物質の発現の増加若しくは減少を引き起こす処理又は条件に供することによって発現を制御する。
本明細書で提供される組成物及び方法の幾つかは、1つ以上のリボスイッチ、又は1つ以上のリボスイッチを含むポリヌクレオチドを含む。リボスイッチは、遺伝子発現を調節する細菌の一般的な機能であり、生物学的機能のRNA制御を実現する手段である。リボスイッチは、mRNAの5’非翻訳領域に存在する可能性があり、リボスイッチ活性を誘導又は抑制する小分子リガンドの結合を通じて遺伝子発現の調節制御を可能にすることができる。幾つかの実施形態では、リボスイッチは、小分子リガンドの生成に関与する遺伝子産物を制御する。リボスイッチは通常、シス方式で動作するが、トランス方式で動作するリボスイッチが特定されている。天然のリボスイッチは、3次元の折りたたまれたRNA構造を介してリガンドに結合するアプタマードメイン、及びリガンドの有無に基づいてリボスイッチの活性を誘導又は抑制する機能スイッチングドメインである、2つのドメインで構成されている。したがって、リボスイッチによって達成される2つのリガンド感受性コンフォメーションがあり、オン状態とオフ状態を表す(Garst et al.,2011)。機能スイッチングドメインは、内部リボソーム侵入部位、レトロウイルス遺伝子コンストラクトにおけるプレmRNAスプライスドナーのアクセシビリティ、翻訳、転写の終了、転写産物分解、miRNA発現、又はshRNA発現を調節することによってポリヌクレオチドの発現に影響を与える可能性がある(Dambach and Winkler 2009)。アプタマー及び機能スイッチングドメインをモジュラーコンポーネントとして使用でき、合成RNAデバイスが、ネイティブアプタマー、変異/進化したネイティブアプタマー、又はランダムRNAライブラリのスクリーニングから特定される完全合成アプタマーとして遺伝子発現を制御できるようにする(McKeague et al 2016)。
幾つかの実施形態では、非標的細胞特異的調節エレメント又は負のTCSREは、組織特異的miRNA認識配列、組織特異的プロテアーゼ認識部位、組織特異的ユビキチンリガーゼ部位、組織特異的転写抑制部位、又は組織特異的エピジェネティック抑制部位を含む。
幾つかの実施形態では、フソソーム、例えば本明細書に記載のレトロウイルスベクター又はVLPは、上昇したCD47を含む。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第9,050,269号を参照。幾つかの実施形態では、フソソーム、例えば本明細書に記載されるレトロウイルスベクター又はVLPは、補体調節タンパク質の上昇を含む。例えば、スペイン国特許第2627445号T3及び米国特許第6790641号を参照、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。幾つかの実施形態では、フソソーム、例えば本明細書に記載のレトロウイルスベクター又はVLPは、MHCタンパク質、例えば、MHC-1クラス1又はクラスIIを欠くか、又はレベルの低下を含む。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第20170165348号を参照。
免疫調節タンパク質CD47
主要組織適合遺伝子複合体クラスI(MHC-I)は、ウイルスエンベロープに組み込むことができる宿主細胞膜タンパク質であり、本質的に多型性が高いため、身体の免疫応答の主要な標的である(McDevitt H.O.(2000)Annu.Rev.Immunol.18:1-17ソース細胞の原形質膜に露出したMHC-I分子は、ベクターの出芽の過程でウイルス粒子エンベロープに組み込まれる可能性がある。ソース細胞に由来し、ウイルス粒子に組み込まれたこれらのMHC-I分子を、次に、標的細胞の原形質膜に移すことができる。或いは、MHC-I分子は、ウイルス粒子が標的細胞膜を吸収して結合したままになる傾向の結果として、標的細胞膜と密接に関連したままである可能性がある。
幾つかの実施形態では、レトロウイルスベクター又はVLPは、そのエンベロープ上に、免疫寛容原性タンパク質、例えば、ILT-2又はILT-4アゴニスト、例えば、HLA-E若しくはHLA-G、又は任意の他のILT-2又はILT-4アゴニストを表示する。幾つかの実施形態では、レトロウイルスベクター又はVLPは、参照レトロウイルス、例えば、他の点ではレトロウイルスと同様の未改変のレトロウイルスと比較して、HLA-E、HLA-G、ILT-2又はILT-4の発現が増加している。
補体活性は通常、幾つかの補体調節タンパク質(CRP)によって制御される。これらのタンパク質は、偽炎症及び宿主組織の損傷を防ぐ。CD55/崩壊促進因子(DAF)及びCD46/膜補因子タンパク質(MCP)を含むタンパク質の1つのグループは、古典的及び代替経路のC3/C5転換酵素を阻害する。CD59を含む別のタンパク質セットはMACアッセンブリを調節する。CRPは、異種移植組織の拒絶反応を防ぐために使用されており、ウイルス及びウイルスベクターを補体の不活化から保護することも示されている。
幾つかの実施形態では、レンチウイルスは、アルブミンに結合する。幾つかの実施形態では、レンチウイルスは、その表面上に、アルブミンに結合するタンパク質を含む。幾つかの実施形態では、レンチウイルスは、その表面にアルブミン結合タンパク質を含む。幾つかの実施形態では、アルブミン結合タンパク質は、連鎖球菌のアルブミン結合タンパク質である。幾つかの実施形態では、アルブミン結合タンパク質は、連鎖球菌のアルブミン結合ドメインである。
幾つかの実施形態では、レンチウイルスは、その表面上に1つ以上のタンパク質を含むように操作される。幾つかの実施形態では、タンパク質は、被験体との免疫相互作用に影響を与える。幾つかの実施形態では、タンパク質は、被験体におけるレンチウイルスの薬理学に影響を与える。幾つかの実施形態では、タンパク質は受容体である。幾つかの実施形態では、タンパク質はアゴニストである。幾つかの実施形態では、タンパク質はシグナル伝達分子である。幾つかの実施形態では、レンチウイルス表面上のタンパク質は、OKT3又はIL7を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの幾つかの実施形態では、レトロウイルスベクター、VLP、又は医薬組成物は、実質的に非免疫原性である。免疫原性は、例えば、本明細書に記載されるように定量化することができる。
a.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター又は他の点ではソース細胞と同様のソース細胞、HeLa細胞若しくはHEK293細胞に由来するVLPと比較して、MHCクラスI又はMHCクラスIIの発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
b.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、又はHEK細胞、又は本明細書に記載される参照細胞に由来するVLPと比較して、限定されるものではないが、LAG3、ICOS-L、ICOS、Ox40L、OX40、CD28、B7、CD30、CD30L 4-1BB、4-1BBL、SLAM、CD27、CD70、HVEM、LIGHT、B7-H3又はB7-H4を含む1つ以上の共刺激タンパク質の発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、又は5%以下;
c.マクロファージ貪食を抑制する表面タンパク質、例えばCD47の発現、例えば、本明細書に記載の方法によって検出可能な発現、例えば、参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば、未改変のレトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、Jurkat細胞若しくはHEK293細胞に由来するVLPと比較して、1.5倍超、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、又はそれ以上のマクロファージ貪食を抑制する表面タンパク質、例えばCD47の発現;
d.可溶性免疫抑制性サイトカイン、例えばIL-10の発現、例えば、本明細書に記載の方法によって検出可能な発現、例えば、参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば、未改変のレトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞若しくはHEK293細胞に由来するVLPと比較して、1.5倍超、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、又はそれ以上の可溶性免疫抑制性サイトカイン、例えばIL-10の発現;
e.可溶性免疫抑制タンパク質、例えばPD-L1の発現、例えば、本明細書に記載の方法によって検出可能な発現、例えば、参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば、未改変のレトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞若しくはHEK293細胞に由来するVLPと比較して、1.5倍超、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、又はそれ以上の可溶性免疫抑制タンパク質、例えばPD-L1の発現;
f.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、若しくはHEK293細胞、若しくはU-266細胞に由来するVLPと比較して、可溶性免疫賦活サイトカイン、例えばIFN-ガンマ又はTNF-aの発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
g.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、若しくはHEK293細胞、若しくはA549細胞、若しくはSK-BR-3細胞に由来するVLPと比較して、内因性免疫賦活抗原、例えばZg16又はHormad1の発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
h.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変のレトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、若しくはHEK293細胞、若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較した、例えば、本明細書に記載の方法による検出可能な、HLA-E又はHLA-Gの発現;
i.例えば、NK細胞の活性化を抑制するように作用するシアル酸を含む、表面のグリコシル化プロファイル;
j.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較して、TCRα/βの発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
k.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはHeLa細胞に由来するVLPと比較して、ABO血液型の発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
l.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較して、マイナー組織適合抗原(MHA)の発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;又は
m.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば、未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較して、ミトコンドリアMHAが10%未満、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%以下であるか、又は検出可能なミトコンドリアMHAを有していない。
a.MHCクラスI、MHCクラスII又はMHA;
b.LAG3、ICOS-L、ICOS、Ox40L、OX40、CD28、B7、CD30、CD30L 4-1BB、4-1BBL、SLAM、CD27、CD70、HVEM、LIGHT、B7-H3、又はB7-H4を含むがこれらに限定されない1つ以上の共刺激タンパク質;
c.可溶性免疫刺激サイトカイン、例えば、IFN-γ又はTNF-α;
d.内因性免疫刺激抗原、例えば、Zg16又はHormad1;
e.T細胞受容体(TCR);
f.ABO式血液型をコードする遺伝子、例えばABO遺伝子;
g.免疫活性化を促進する転写因子、例えばNFkB;
h.MHC発現を制御する転写因子、例えば、クラスIIトランスアクチベーター(CIITA)、Xbox 5の調節因子(RFX5)、RFX関連タンパク質(RFXAP)、又はRFXアンキリンリピート(RFXANK;RFXBとしても知られる);又は
i.MHCクラスIの発現を低下させるTAPタンパク質(TAP2、TAP1、TAPBP等)。
a.マクロファージの貪食を抑制する表面タンパク質、例えばCD47;参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば、未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較したCD47の発現の増加;
b.可溶性免疫抑制性サイトカイン、例えば、IL-10、参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば、未改変のレトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較した、IL-10の発現の増加;
c.可溶性免疫抑制タンパク質、例えば、PD-1、PD-L1、CTLA4、又はBTLA;参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば、未改変のレトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較した、免疫抑制タンパク質の発現の増加;
d.免疫寛容原性タンパク質、例えば、ILT-2又はILT-4アゴニスト、例えば、HLA-E又はHLA-G又は他の内因性ILT-2又はILT-4アゴニスト、例えば、参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば、未改変のレトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較した、HLA-E、HLA-G、ILT-2又はILT-4の発現の増加;又は
e.補体活性を抑制する表面タンパク質、例えば補体調節タンパク質、例えば崩壊促進因子(DAF、CD55)に結合するタンパク質、例えば因子H(FH)様タンパク質-1(FHL-1)、例えばC4b結合タンパク質(C4BP)、例えば補体受容体1(CD35)、例えば膜補体タンパク質(MCP、CD46)、例えばプロフェクチン(CD59)、例えば、古典的及び代替の補体経路CD/C5コンバターゼ酵素を阻害するタンパク質、例えばMACアッセンブリを調節するタンパク質;例えば、参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変のレトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較して、補体調節タンパク質の発現が増加している。
a.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはHeLa細胞に由来するVLPと比較して、MHCクラスI又はMHCクラスIIの発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
b.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター又はそれ以外はソース細胞であるHEK293細胞に類似する細胞、若しくは本明細書に記載される参照細胞に由来するVLPと比較して、限定されるものではないが、LAG3、ICOS-L、ICOS、Ox40L、OX40、CD28、B7、CD30、CD30L 4-1BB、4-1BBL、SLAM、CD27、CD70、HVEM、LIGHT、B7-H3、又はB7-H4を含む1つ以上の共刺激タンパク質の発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、又は5%以下;
c.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター又はそれ以外はソース細胞であるHEK293細胞に類似する細胞、若しくはU-266細胞に由来するVLPと比較して、可溶性免疫賦活サイトカイン、例えばIFN-ガンマ又はTNF-aの発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
d.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター又はそれ以外はソース細胞であるHEK293細胞に類似する細胞、又はA549細胞若しくはSK-BR-3細胞に由来するVLPと比較して、内因性免疫賦活抗原、例えばZg16又はHormad1の発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
e.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター又はそれ以外はソース細胞であるHEK293細胞に類似する細胞、若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較して、T細胞受容体(TCR)の発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
f.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはHeLa細胞に由来するVLPと比較して、ABO血液型の発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
g.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較して、免疫活性化を駆動する転写因子、例えばNFkBの発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下;
h.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはJurkat細胞に由来するVLPと比較して、MHC発現を制御する転写因子、例えば、クラスIIトランスアクチベーター(CIITA)、Xbox 5の調節因子(RFX5)、RFX関連タンパク質(RFXAP)、又はRFXアンキリンリピート(RFXANK;RFXBとしても知られる)の発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、又は5%以下;
i.参照レトロウイルスベクター又はVLP、例えば未改変レトロウイルスベクター、又は他の点ではソース細胞と同様の細胞、HEK293細胞若しくはHeLa細胞に由来するVLPと比較して、TAPタンパク質、例えば、MHCクラスI発現を減少させるTAP2、TAP1、又はTAPBPの発現が50%未満、40%、30%、20%、15%、10%、若しくは5%以下。
幾つかの実施形態では、レトロウイルスベクター又はVLPは、実質的に免疫原性ではない、又は免疫原性の低下を有するように改変された、例えば、本明細書に記載の方法を使用して改変されたソース細胞、例えば哺乳動物細胞に由来する。ソース細胞及びレトロウイルスベクター又はVLPの免疫原性は、本明細書に記載のアッセイのいずれかによって決定することができる。
a.ソース細胞は自家細胞供給源、例えば、レトロウイルスベクター又はVLPを受ける、例えば投与されたレシピエントから得られた細胞から得られる;
b.ソース細胞は、レシピエント、例えば、レトロウイルスベクター又はVLPを受ける、例えば投与される本明細書に記載のレシピエントに一致した、例えば、同様の性別の同種異形細胞供給源から得られる;
c.ソース細胞は、例えば1つ以上の対立遺伝子において、レシピエントのHLAとHLAが一致する同種異系細胞供給源から得られる;
d.ソース細胞は、HLAホモ接合体である同種異系細胞供給源から得られる;
e.ソース細胞は、MHCクラスI及びIIを欠いている(又は参照細胞と比較してレベルが低下している)同種異系細胞ソースから得られる;又は
f.ソース細胞は、限定されるものではないが、幹細胞、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞、セルトリ細胞又は網膜色素上皮細胞を含む、実質的に非免疫原性であることが知られている細胞供給源から得られる。
幾つかの実施形態では、本明細書に記載のレトロウイルスベクター、VLP、又は医薬組成物は、外因性作用物質を含む。幾つかの実施形態では、フソソーム、例えば、本明細書に記載のレトロウイルスベクター、VLP、又は医薬組成物は、外因性作用物質をコードする核酸を含む。A.外因性タンパク質作用物質
幾つかの実施形態では、本明細書に記載のペイロード遺伝子は、抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体(CAR)をコードする。幾つかの実施形態では、本明細書に記載の外因性作用物質は、抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体(CAR)を含む。幾つかの実施形態では、ペイロードは、抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体(CAR)であるか、又はそれを含む。幾つかの実施形態では、CARは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメイン(例えば、1つ、2つ、又は3つのシグナル伝達ドメイン)を含む第一世代CARであり、又は含む。幾つかの実施形態では、CARは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも3つのシグナル伝達ドメインを含む第三世代CARを含む。幾つかの実施形態において、第四世代CARは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、3つ又は4つのシグナル伝達ドメイン、及びCARのシグナル伝達が成功するとサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインを含む。幾つかの実施形態では、抗原結合ドメインは、scFv又はFabであり、又はそれを含む。
幾つかの実施形態では、フソソーム、レトロウイルス又はレンチウイルスベクター、又はVLPは、1つ以上のインスレーター配列、例えば、本明細書に記載のインスレーター配列を更に含む。インスレーター配列は、ゲノムDNAに存在するシス作用エレメントによって媒介されて転移配列の脱調節発現(例えば、位置効果;例えば、Burgess-Beusse et al,2002,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,99:16433、及びZhan et al,2001,Hum.Genet.,109:471を参照)又はトランスファーされた配列に隣接する内因性配列の脱調節発現につながる可能性がある組み込み部位効果から、レンチウイルス発現配列、例えば治療用ポリペプチドを保護することに寄与する可能性がある。幾つかの実施形態では、トランスファーベクターが、1つ以上のインスレーター配列3’LTRを含み、プロウイルスが宿主ゲノムに組み込まれると、プロウイルスは、3’LTRを複製することによって、5’LTR及び/又は3’LTRにおいて、1つ以上のインスレーターを含む。好適なインスレーターには、限定されないが、ニワトリHS4等のニワトリβ-グロビンインスレーター(本明細書に参照により組み込まれるChungら、1993.Cell 74:505、Chungら、1997.N4S 94:575、及びBellら、1999.Cell 98:387を参照)、又はヒトβ-グロビン遺伝子座に由来するインスレーターが含まれる。幾つかの実施形態では、インスレーターは、CCCTC結合因子(CTCF)に結合する。幾つかの実施形態では、インスレーターはバリアインスレーターである。幾つかの実施形態では、インスレーターは、エンハンサー遮断インスレーターである。例えば、Emery et al.,Human Gene Therapy,2011及びBrowning and Trobridge,Biomedicines,2016を参照、これらはいずれも参照によりそれらの全体が含まれる。
本開示はまた、幾つかの態様では、被験体における標的細胞のフソソーム含有量(例えば、標的細胞へのフソソーム融合)を評価する方法を提供し、フソソーム組成物(例えば、本明細書に記載のフソソーム組成物)を受けた被験体からの生物学的サンプルを提供すること、及び生物学的サンプル中の標的細胞と、本明細書に記載のフソソームとの融合から生じる生物学的サンプルの1つ以上の特性を決定するためにアッセイを実施することを含む。幾つかの態様において、本開示は、例えば、実施例71に記載されるように、標的細胞との融合を測定する方法を提供する。幾つかの実施形態では、生物学的サンプルの1つ以上の特性を決定することは、フソゲンの存在、カーゴ又はペイロードのレベル、又はカーゴ又はペイロードに関連する活性を決定することを含む。
幾つかの実施形態では、フソソームは、作用物質、例えば、タンパク質、核酸(例えば、mRNA)、細胞小器官、又は代謝産物を、標的細胞の細胞質ゾルに送達する(例えば、送達する)ことができる。同様に、幾つかの実施形態では、本明細書の方法は、標的細胞の細胞質ゾルに作用物質を送達することを含む。幾つかの実施形態では、作用物質は、標的細胞に存在しないか、変異体であるか、又は野生型よりも低いレベルであるタンパク質(又はタンパク質をコードする核酸、例えば、タンパク質をコードするmRNA)である。幾つかの実施形態では、標的細胞は、遺伝性疾患、例えば、単一遺伝子性疾患、例えば、単一遺伝子性細胞内タンパク質疾患を有する被験体に由来する。幾つかの実施形態では、作用物質は、転写因子、例えば、外因性転写因子又は内因性転写因子を含む。幾つかの実施形態では、フソソームは又は方法は、1つ以上(例えば、少なくとも2、3、4、5、10、20、又は50)の追加の転写因子、例えば、外因性転写因子、内因性転写因子、又はそれらの組み合わせを更に含む、又はそれを送達することを更に含む。
%以内のホスファチジルセリン:リゾホスファチジルエタノールアミンの比を有する;又は、ソース細胞内のホスファチジルセリン:リゾホスファチジルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のホスファチジルセリン:リゾホスファチジルグリセロールの比を有する;又はソース細胞内のホスファチジルセリン:リゾホスファチジルイノシトールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内の、ホスファチジルセリン:リゾホスファチジルイノシトールの比を有する;又は、ソース細胞内のホスファチジルセリン:リゾホスファチジルセリンの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のホスファチジルセリン:リゾホスファチジルセリンの比を有する;又は、ソース細胞内のホスファチジルセリン:ホスファチジルセリンの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のホスファチジルセリン:ホスファチジルセリンの比を有する;又は、ソース細胞内のホスファチジルセリン:ホスファチジルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のホスファチジルセリン:ホスファチジルグリセロールの比を有する;又は、ソース細胞内のホスファチジルセリン:ホスファチジルイノシトールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のホスファチジルセリン:ホスファチジルイノシトールの比を有する;又は、ソース細胞内のホスファチジルセリン:コレステロールエステルの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のホスファチジルセリン:コレステロールエステルの比を有する;又は、ソース細胞内のホスファチジルセリン:スフィンゴミエリンの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のホスファチジルセリン:スフィンゴミエリンの比を有する;又は、ソース細胞内のホスファチジルセリン:トリアシルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のホスファチジルセリン:トリアシルグリセロールの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:セラミドの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:セラミドの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:ジアシルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:ジアシルグリセロールの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:ヘキソシルセラミドの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:ヘキソシルセラミドの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジン酸塩の比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジン酸塩の比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジルコリンの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジルコリンの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジルエタノールアミンの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジルエタノールアミンの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジルグリセロールの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジルイノシトールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジルイノシトールの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジルセリンの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:リゾホスファチジルセリンの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:ホスファチジン酸塩の比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:ホスファチジン酸塩の比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:ホスファチジルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:ホスファチジルグリセロールの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:ホスファチジルイノシトールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:ホスファチジルイノシトールの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:コレステロールエステルの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:コレステロールエステルの比を有する;又は、ソース細胞内のスフィンゴミエリン:トリアシルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のスフィンゴミエリン:トリアシルグリセロールの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:セラミドの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:セラミドの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:ジアシルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:ジアシルグリセロールの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:ヘキソシルセラミドの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:ヘキソシルセラミドの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:リゾホスファチジン酸塩の比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:リゾホスファチジン酸塩の比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:リゾホスファチジルコリンの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:リゾホスファチジルコリンの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:リゾホスファチジルエタノールアミンの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:リゾホスファチジルエタノールアミンの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:リゾホスファチジルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:リゾホスファチジルグリセロールの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:リゾホスファチジルイノシトールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:リゾホスファチジルイノシトールの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:リゾホスファチジルセリンの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:リゾホスファチジルセリンの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:ホスファチジン酸塩の比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:ホスファチジン酸塩の比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:ホスファチジルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:ホスファチジルグリセロールの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:ホスファチジルイノシトールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:ホスファチジルイノシトールの比を有する;又は、ソース細胞内のコレステロールエステル:トリアシルグリセロールの比の10%、20%、30%、40%若しくは50%以内のコレステロールエステル:トリアシルグリセロールの比を有する。
本開示はまた、幾つかの態様では、本明細書に記載のフソソーム組成物及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、記載されたフソソーム、例えばレトロウイルスベクター、又はVLPのいずれかを含むことができる。
幾つかの実施形態では、本明細書に記載のレトロウイルスベクター製剤は、例えば、時系列で、以下の工程(i)~(vi)の1つ以上、例えば、全てを含むプロセスによって産生され得る:
(i)レトロウイルスベクターを産生する細胞を培養する工程;
(ii)レトロウイルスベクターを含む上清を回収する工程;
(iii)必要に応じて上清を清澄化する工程;
(iv)レトロウイルスベクターを精製してレトロウイルスベクター調製物を得る工程;
(v)任意に、レトロウイルスベクター調製物をフィルター滅菌する工程;及び
(vi)レトロウイルスベクター調製物を濃縮して最終的なバルク産物を産生する工程。
幾つかの実施形態では、レトロウイルス粒子は、様々なソース細胞ゲノム由来タンパク質、外因性タンパク質、及びウイルスゲノム由来タンパク質を含む。幾つかの実施形態では、レトロウイルス粒子は、ソース細胞ゲノム由来タンパク質対ウイルスゲノム由来タンパク質、ソース細胞ゲノム由来タンパク質対外因性タンパク質、及び外因性タンパク質対ウイルスゲノム由来タンパク質の様々な比率を含む。
幾つかの実施形態では、レトロウイルスベクターの直径の中央値は、10~1000nM、25~500nm、40~300nm、50~250nm、60~225nm、70~200nm、80~175nm、又は90~150nmである。
本明細書に記載のフソソーム、レトロウイルスベクター、VLP、又は医薬組成物を、被験体、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトに投与することができる。かかる実施形態では、被験体は、特定の疾患又は状態(例えば、本明細書に記載の疾患又は状態)のリスクがあるか、症状があるか、又は診断され得るか、又はそうであると識別され得る。幾つかの実施形態では、疾患は、疾患又は障害、例えば、表5に列挙された疾患又は障害である。
幾つかの実施形態では、フソソーム組成物は、追加の作用物質、例えば、治療薬と共に、被験体、例えば、レシピエント、例えば、本明細書に記載のレシピエントに同時投与される。幾つかの実施形態では、同時投与される治療薬は、免疫抑制物質、例えば、糖質コルチコイド(例えば、デキサメタゾン)、細胞増殖抑制物質(例えば、メトトレキサート)、抗体(例えば、ムロモナブ-CD3)、又はイムノフィリンモジュレーター(例えば、シクロスポリン又はラパマイシン)である。実施形態では、免疫抑制物質は、フソソームの免疫介在性クリアランスを減少させる。幾つかの実施形態では、フソソーム組成物は、免疫賦活物質、例えば、アジュバント、インターロイキン、サイトカイン、又はケモカインと同時投与される。
この実施例では、単一細胞のベクターコピー数を測定することにより、オフターゲットレシピエント細胞の核酸を定量する方法について説明する。
この実施例は、単一細胞における外因性作用物質の発現による、オフターゲットレシピエント細胞における外因性作用物質の発現の定量化を説明する。
この実施例では、単一細胞のベクターコピー数を測定することにより、標的レシピエント細胞の核酸を定量する方法について説明する。
この実施例は、単一細胞における外因性タンパク質作用物質の発現による、標的レシピエント細胞における外因性タンパク質作用物質の発現の定量化を説明する。
この実施例は、末梢血単核細胞(PBMC)による細胞溶解に起因して細胞毒性が低下するように改変された細胞に由来するレトロウイルスベクターを記載している。
この実施例は、NK細胞による細胞毒性媒介性細胞溶解を減少させるように改変された細胞源に由来するレトロウイルスベクター組成物の生成を説明する。一実施形態では、NK細胞によるレトロウイルスベクターの細胞毒性媒介細胞溶解は、レトロウイルスベクターの免疫原性の尺度である。
この実施例は、CD8+細胞による細胞毒性媒介性細胞溶解を減少させるように改変された細胞源に由来するレトロウイルスベクター組成物の生成を説明する。一実施形態では、CD8+細胞によるレトロウイルスベクターの細胞毒性媒介細胞溶解は、レトロウイルスベクターの免疫原性の尺度である。
この実施例は、改変レトロウイルスベクターによる食作用の回避の定量化を説明する。一実施形態では、改変されたレトロウイルスベクターは、マクロファージによる食作用を回避するであろう。
この実施例は、in vitroアッセイを使用したレトロウイルスベクターに対する補体活性の定量化を説明する。幾つかの実施形態では、本明細書に記載の改変レトロウイルスベクターは、改変されていないレトロウイルスベクターと比較して、補体活性が低下している。
この実施例は、免疫原性である分子の発現を減少させるように改変された細胞源に由来するレトロウイルスベクター組成物の生成、及び発現現象の定量化を説明する。一実施形態では、レトロウイルスベクターは、免疫原性である分子の発現を低下させるように改変された細胞源に由来し得る。
この実施例は、in vitro送達アッセイを使用したレトロウイルスベクターの既存の血清不活化の定量化を説明する。
この実施例は、レトロウイルスベクターの複数回投与後のin vitro送達アッセイを使用したレトロウイルスベクターの血清不活化の定量化を説明する。一実施形態では、改変ウイルスベクター、例えば、本明細書に記載の方法によって改変されたものは、複数回(例えば、1より多い、例えば、2回以上)の改変レトロウイルスベクターの投与に続いて、血清不活化の減少を有する(例えば、未改変レトロウイルスベクターの投与と比較して減少する)であろうと考えられる。一実施形態では、本明細書に記載のレトロウイルスベクターは、複数回の投与後に血清によって不活化されないであろう。
この実施例では、フローサイトメトリーを使用して測定された既存の抗レトロウイルスベクター抗体価の定量化について説明する。
この実施例は、改変レトロウイルスベクターの複数回投与後の改変レトロウイルスベクターの体液性応答の定量化を説明する。一実施形態では、改変ウイルスベクター、例えば、本明細書に記載の方法によって改変されたものは、複数回(例えば、1より多い、例えば、2回以上)の改変レトロウイルスベクターの投与に続いて、体液性応答の減少を有する(例えば、未改変レトロウイルスベクターの投与と比較して減少する)であろうと考えられる。
この実施例では、フローサイトメトリーを使用したレシピエント細胞(レトロウイルスベクターと融合した細胞)に対する抗体価の定量化について説明する。幾つかの実施形態では、レシピエント細胞の免疫原性の尺度は、抗体応答である。レシピエント細胞を認識する抗体は、細胞の活性又は寿命を制限できる方法で結合することができる。一実施形態では、レシピエント細胞は、抗体応答の標的とならないか、又は抗体応答が参照レベルを下回るであろう。
この実施例は、食作用アッセイを用いたレシピエント細胞に対するマクロファージ応答の定量化を説明する。
この実施例は、細胞溶解アッセイを用いたレシピエント細胞に対するPBMC応答の定量化を説明する。
この実施例は、細胞溶解アッセイを用いたレシピエント細胞に対するナチュラルキラー細胞応答の定量化を説明する。
この実施例では、細胞溶解アッセイによるレシピエント細胞(レトロウイルスベクターと融合した細胞)に対するCD8+T細胞応答の定量化について説明する。
この実施例では、非標的細胞と比較したT細胞におけるT細胞特異的プロモーター(正のTCSRE)の活性の測定について説明する。
この実施例は、非標的細胞と比較したT細胞における非標的細胞拘束性マイクロRNA(NTCSRE)の活性の測定について説明する。
この例では、in vitroでのTregへのキメラ抗原受容体の送達について記載する。この例では、キメラ抗原受容体は癌胎児性抗原(CEA)に特異的である。
この例では、in vivoでのTregへのキメラ抗原受容体の送達について記載する。この例では、キメラ抗原受容体は癌胎児性抗原(CEA)に特異的である。
この実施例は、フソソーム生成に使用される親細胞、例えば、ソース細胞と比較したフソソームにおける転写活性を定量化する。一実施形態では、転写活性は、親細胞、例えば、ソース細胞と比較して、フソソームでは低いか、又は存在しないであろう。
この実施例では、フソソームでのDNA複製を定量化する。一実施形態では、フソソームは、細胞と比較して低い速度でDNAを複製する。
この例では、フソソームあたりのフソゲンの絶対数の定量化について説明する。
この例では、フソソームの平均サイズの測定について説明する。
この実施例では、フソソームの粒度分布の測定について説明する。
この実施例はフソソームの平均量の測定について説明する。理論に拘束されることを望まないが、フソソームのサイズ(例えば、体積)を変えることは、それらを別個のカーゴ積載、治療計画又は適用に関して用途の広いものにすることができる。
フソソーム密度を、Thery et al.,Curr Protoc Cell Biol.2006 Apr;Chapter 3:Unit 3.22.に記載されているように連続ショ糖勾配遠心分離アッセイを介して測定する。フソソームは、前の実施例に記載されているように得られる。
この例では、除核されたフソソームの核膜含有量の測定について説明する。核膜は、細胞の細胞質からDNAを分離する。
この例では、除核されたフソソームのクロマチンの測定について説明する。
この例では、フソソーム中のマイクロRNA(miRNA)の定量について説明する。一実施形態では、フソソームはmiRNAを含む。
この実施例では、発現が変化した内因性RNA、又はフソソームで発現する合成RNAのレベルの定量化について説明する。
この実施例では、フソソームのタンパク質組成の定量化について説明する。一実施形態では、フソソームのタンパク質組成は、それらが由来する細胞に類似している。
このアッセイでは、フソソーム内のグリセルアルデヒド3-リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)のレベル、及び親細胞と比較したフソソーム内のGAPDHの相対レベルの定量化について説明する。
このアッセイでは、フソソーム内のカルネキシン(CNX)のレベル、及び親細胞と比較したフソソーム内のCNXの相対レベルの定量化について説明する。
この実施例では、フソソーム中のタンパク質質量の可溶性:不溶性比の定量化について説明する。一実施形態では、フソソーム中のタンパク質質量の可溶性:不溶性の比は、有核細胞と同様である。
この例では、親細胞と比較したフソソーム中のリポ多糖(LPS)のレベルの定量化について説明する。一実施形態では、フソソームは、親細胞と比較してより低いレベルのLPSを有するであろう。
この実施例では、フソソームの脂質質量とタンパク質質量の比率の定量化について説明する。一実施形態では、フソソームは、有核細胞と同様の脂質質量対タンパク質質量の比を有するであろう。
この実施例では、フソソームのタンパク質質量とDNAの比率の定量化について説明する。一実施形態では、フソソームは、細胞よりもはるかに大きいタンパク質質量対DNA質量の比を有するであろう。
この実施例では、非標的細胞と比較した標的細胞とのフソソーム融合の定量化について説明する。
この実施例では、in vitroでの細胞とのフソソーム融合について説明する。一実施形態では、in vitroでの細胞とのフソソーム融合は、レシピエント細胞への活性膜タンパク質の送達をもたらす。
この実施例では、in vitroマイクロ流体システム(J.S Joen et al.2013,journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0056910)で試験した内皮単層全体のフソソーム血管外漏出の定量化について説明する。
この実施例では、フソソーム走化性の定量化について説明する。細胞は、走化性を介して化学勾配に向かって、又は化学勾配から離れて移動することができる。一実施形態では、走化性は、フソソームが傷害部位にホーミングすること、又は病原体を追跡することを可能にする。前の実施例に記載された方法のいずれかによって産生された精製フソソーム組成物を、その走化性について以下のとおりアッセイする。
この実施例では、傷害の部位へのフソソームのホーミングを説明する。細胞は、遠位部位から移動することができる、及び/又は特定の部位、例えば、ホーミングするある部位に蓄積し得る。通常、その部位は傷害部位である。一実施形態では、フソソームは、例えば、傷害部位に移動するか、又は傷害部位に蓄積する。
この実施例は、フソソームの食作用を実証する。一実施形態では、フソソームは、食作用活性を有し、例えば、食作用が可能である。細胞は食作用に関与し、粒子を貪食し、バクテリア又は死細胞等の外来侵入者の隔離及び破壊を可能にする。
この実施例では、フソソームによる分泌の定量化について説明する。一実施形態では、フソソームは、分泌、例えば、タンパク質分泌が可能である。細胞は分泌物を介して物質を処分又は排出することができる。一実施形態では、フソソームは、分泌を介してそれらの環境において化学的に相互作用し、通信する。
この実施例では、フソソームにおけるシグナル伝達の定量化について説明する。一実施形態では、フソソームはシグナル伝達が可能である。細胞は、シグナル伝達として知られるプロセスで、リン酸化等のシグナル伝達カスケードを介して細胞外環境から分子シグナルを送受信できる。部分的又は完全な核不活化を有する哺乳動物細胞からのフソソームを含む、前の実施例に記載の方法のいずれか1つによって産生される精製フソソーム組成物は、インスリンによって誘導されるシグナル伝達が可能である。インスリンによって誘発されるシグナル伝達は、AKTリン酸化レベル、インスリン受容体シグナル伝達カスケードの重要な経路、及びインスリンに応答したグルコース取り込みを測定することによって評価される。
インスリン又は陰性対照溶液に応答したグルコース取り込みは、標識グルコース(2-NBDG)を使用して、グルコース取り込みの欄で説明されているように測定される。(S.Galic et al.,Molecular Cell Biology 25(2):819-829,2005).
この実施例では、生細胞でのグルコース取り込みを監視し、脂質二重層を通過する能動輸送を測定するために使用できる蛍光グルコース類似体である、2-NBDG(2-(N-(7-ニトロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル)アミノ)-2-デオキシグルコース)のレベルの定量化について説明する。一実施形態では、このアッセイを使用して、フソソームの脂質二重層を横切るグルコース取り込み及び能動輸送のレベルを測定することができる。
この実施例は、フソソームにおける代謝活性の代用としてのエステラーゼ活性の定量化を説明している。フソソームの細胞質ゾルエステラーゼ活性は、カルセイン-AM染色の定量的評価によって決定される(Bratosin et al.,Cytometry 66(1):78-84,2005)。
アセチルコリンエステラーゼ活性を、以前に記載された手順(Ellman,et al.,Biochem.Pharmacol.7,88,1961)及び製造業者の推奨事項に従うキット(MAK119、SIGMA)を使用して測定する。
この実施例は、フソソームにおけるクエン酸合成酵素活性の測定の定量化を説明する。
この例では、フソソームの呼吸レベルの測定の定量化について説明する。細胞内の呼吸レベルは、代謝を促進する酸素消費量の尺度になり得る。Seahorse細胞外フラックスアナライザー(Agilent)により、酸素消費率のフソソーム呼吸を測定する(Zhang 2012)。
この実施例は、フソソームの表面に結合するアネキシンVのレベルの定量化について説明する。
この実施例では、フソソームにおけるジャクスタクリンシグナル伝達の定量化について説明する。
この例では、フソソームにおけるパラクリンシグナル伝達の定量化について説明する。
この実施例では、フソソームにおけるアクチン等の細胞骨格成分の定量について説明する。一実施形態では、フソソームは、アクチン等の細胞骨格成分を含み、アクチン重合が可能である。
この実施例では、フソソームのミトコンドリア膜電位の定量化について説明する。一実施形態では、ミトコンドリア膜を含むフソソームは、ミトコンドリア膜電位を維持するであろう。
この実施例では、フソソーム半減期の測定について説明する。
この実施例では、非エンドサイトーシス経路を介したレシピエント細胞へのCreのフソソーム送達の定量化について説明する。
この実施例では、エンドサイトーシス経路を介したレシピエント細胞へのCreのフソソーム送達について説明する。
この実施例では、ダイナミン媒介経路を介したレシピエント細胞へのCreのフソソーム送達について説明する。微小胞を含むフソソームを、前の実施例で説明したように産生することができる。フソソームを受けるレシピエント細胞の群をダイナミンの阻害剤であるダイナソア(120μM)で処理することを除いて、フソソームを、前の実施例に従って、ダイナミン媒介経路を介したCreの送達についてアッセイする。ダイナミン媒介経路を介して送達されるフソソームCreの値を計算するために、ダイナソアの存在下でのフソソームCre送達のレベル(FusL+DS)と並んで、ダイナソアの不在下でのフソソームCre送達のレベル(FusL-DS)を決定する。送達されたフソソームCreの正規化された値を、前の実施例で説明したように計算することができる。
この実施例では、フソソームによる眼への治療薬の送達について説明する。
この実施例は、フソソームによる奇形腫形成がないことを説明する。一実施形態では、フソソームを被験体に投与されたときに奇形腫の形成をもたらさないであろう。
この実施例は、ソース細胞と比較したフソソーム中のRNAの量を定量化する方法を説明する。一実施形態では、フソソームは、ソース細胞と同様のRNAレベルを有するであろう。このアッセイでは、RNAレベルはトータルRNAを測定することによって決定される。
この実施例では、細胞から自由に放出される融合性微小胞の分離について説明する。融合性微小胞を以下のように単離した。9.2×106HEK-293T(ATCC、カタログ番号CRL-3216)を、100mmコラーゲンコーティングディッシュ(Corning)において、完全培地GlutaMAX(ThermoFisher)、10%胎児子牛血清(ThermoFisher)、及びペニシリン/ストレプトマイシン抗生物質(ThermoFisher)を添加したダルベッコ改変イーグル培地(DMEM))7.5mL中、VSVgに対するオープンリーディングフレームを含むpcDNA3.1発現プラスミド10μg及びSV40核局在化配列を有するバクテリオファージP1 Creリコンビナーゼのオープンリーディングフレームを含むpcDNA3.1発現プラスミド15ugを含むXfectトランスフェクション試薬(Takara、カタログ番号631317)を使用して逆トランスフェクトした。播種の12時間後、7.5mLの完全培地を注意深く加えた。200×gで10分間遠心分離することにより、細胞を培地から分離した。上清を収集し、500×gで10分間を2回、2,000×gで15分間を1回、10,000×gで30分間を1回、70,000×gで60分間を1回を順次遠心分離した。自由に放出されたフソソームを、最後の遠心分離工程中にペレット化し、PBSに再懸濁し、70,000×gで再ペレット化した。最終ペレットをPBSに再懸濁した。
この実施例では、フソソームの粒度分布の測定について説明する。
この実施例はフソソームの平均量の測定について説明する。フソソームのサイズ(例えば、体積)を変えることは、それらを別個のカーゴ積載、治療計画又は適用に関して用途の広いものにすることができる。
この実施例では、フソソーム中のタンパク質質量の可溶性:不溶性比の定量化について説明する。フソソームにおけるタンパク質質量の可溶性:不溶性の比率は、場合によっては、有核細胞のそれと類似し得る。
麻疹ウイルス(MvH)の操作されたヘマグルチニン糖タンパク質及び融合タンパク質(F)を細胞表面に発現するHEK-293T細胞に由来するフソソーム、並びにCreリコンビナーゼタンパク質を、本明細書に記載するように生成した。MvHは、その天然の受容体結合が除去され、細胞表面抗原を認識する一本鎖抗体(scFv)を介して標的細胞の特異性が提供されるように設計されており、この場合、scFvは、T細胞受容体に対する供受容体、CD8を標的とするように設計されている。表面にフソゲンVSV-Gを発現し、Creリコンビナーゼタンパク質を含むHEK-293T細胞に由来する対照フソソームを使用した。標的細胞を、CMVプロモーター下で「Loxp-GFP-stop-Loxp-RFP」カセットを発現するように設計されたHEK-293T細胞であり、共受容体CD8a及びCD8bを過剰発現するように設計した。非標的細胞は、「Loxp-GFP-stop-Loxp-RFP」カセットを発現しているがCD8a/bの過剰発現がない同じHEK-293T細胞であった。標的又は非標的レシピエント細胞を30,000細胞/ウェルで黒色の透明底96ウェルプレートに蒔き、37℃及び5%CO2で10%ウシ胎児血清を含むDMEM培地で培養した。レシピエント細胞をプレーティングしてから4~6時間後、Creリコンビナーゼタンパク質を発現するフソソーム及びMvH+Fを、DMEM培地の標的又は非標的レシピエント細胞に適用した。レシピエント細胞を10μgのフソソームで処理し、37℃及び5%CO2で24時間インキュベートした。
水疱性口内炎ウイルス(VSV-G)由来のエンベロープ糖タンパク質Gを細胞表面に発現し、Creリコンビナーゼタンパク質を発現するHEK-293T細胞からのフソソームを、フィコール勾配による超遠心分離の標準的な手順に従って生成し、本明細書に記載される小さな粒子のフソソームを得た。細胞膜を横切ってグルコースを輸送するフソソームの能力を測定するために、生細胞におけるグルコース取り込みをモニターするために使用できる蛍光グルコース類似体である2-NBDG(2-(N-(7-ニトロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル)アミノ)-2-デオキシグルコース)のレベルを定量化して、脂質二重層を横切る能動輸送を評価した。Biovision Inc.から市販されているキット(カタログ番号K682)を、製造業者の指示に従ってアッセイに使用した。
C2C12細胞からのフソソームは、フィコール勾配による超遠心分離の標準的な手順に従って生成され、本明細書に記載されるような小粒子フソソームを得た。フソソームの細胞質ゾルにおけるエステラーゼ活性を測定するために、生細胞の細胞膜を受動的に通過し、細胞質ゾルエステラーゼによって緑色の蛍光カルセインへと変換されるフルオレセイン誘導体及び非蛍光性の生体色素であって、無傷の膜及び不活性な多剤耐性タンパク質を持つ細胞によって保持されるカルセインAM(BD Pharmigen、カタログ番号564061)でサンプルを染色した。
細胞表面に胎盤細胞間融合タンパク質シンシチン-1(Syn1)を発現し、Creリコンビナーゼタンパク質を発現するHEK-293T細胞からのフソソームを本明細書に記載のように生成した。アセチルコリンエステラーゼ活性をFluoroCet Quantitation Kit(System Biosciences、カタログ番号FCET96A-1)を使用して、製造業者の推奨に従って測定した。
水疱性口内炎ウイルス(VSV-G)由来のエンベロープ糖タンパク質Gを細胞表面に発現し、Creリコンビナーゼタンパク質を発現するHEK-293T細胞からのフソソームを本明細書に記載されるように生成した。フソソーム調製物の代謝活性レベルを決定するために、クエン酸合成酵素活性を、必要な全ての試薬を提供するSigmaから市販されているキット(カタログ番号CS0720)を使用して評価した。クエン酸合成酵素は、トリカルボン酸(TCA)回路内の酵素であり、オキサロ酢酸(OAA)とアセチルCoAの間の反応を触媒してクエン酸を生成する。アセチルCoAが加水分解されると、チオール基を持つCoA(CoA-SH)が放出される。チオール基は化学試薬5,5-ジチオビス-(2-ニトロ安息香酸)(DTNB)と反応して、5-チオ-2-ニトロ安息香酸(TNB)を形成し、これは、412nmで分光光度的に測定できる黄色の生成物を有する。
水疱性口内炎ウイルス(VSV-G)由来のエンベロープ糖タンパク質Gを細胞表面に発現するHEK-293T細胞からのフソソームを、フィコール勾配による超遠心分離の標準的な手順に従って生成し、本明細書に記載される小さな粒子のフソソームを得た。Seahorse細胞外フラックスアナライザー(Agilent)でミトコンドリアの酸素消費率を測定することにより、フソソーム調製物の呼吸レベルを決定した。
水疱性口内炎ウイルス(VSV-G)由来のエンベロープ糖タンパク質Gを細胞表面に発現し、Creリコンビナーゼタンパク質を発現するHEK-293T細胞からのフソソームを、フィコール勾配による超遠心分離の標準的な手順に従って生成し、本明細書に記載される小さな粒子のフソソームを得た。フソソームのホスファチジルセリンレベルを測定するために、Alexa Fluor 647色素(カタログ番号A23204)と複合化された市販のアネキシンVを製造業者の指示に従って使用して、アネキシンV染色を行った。アネキシンVは、原形質膜の外側の小葉に露出したときにホスファチジルセリンに結合できる細胞タンパク質であるため、サンプルに結合するアネキシンVの読み取りは、サンプル中のホスファチジルセリンレベルの評価を提供できる。
水疱性口内炎ウイルス(VSV-G)由来のエンベロープ糖タンパク質Gを細胞表面に発現し、Creリコンビナーゼタンパク質を発現するHEK-293T細胞からのフソソームを、フィコール勾配による超遠心分離の標準的な手順に従って生成し、本明細書に記載される小さな粒子のフソソームを得た。フソソームの平均ミトコンドリア膜電位レベルを測定するために、ミトコンドリア膜電位に感受性の市販の色素、テトラメチルローダミン、エチルエステル、過塩素酸塩(TMRE;Abcam、カタログ番号T669)を使用して、ミトコンドリア膜電位を評価した。TMRE蛍光強度(FI)をサンプル中のミトコンドリアの量に正規化するために、MitoTracker Green FM色素(MTG;ThermoFisher、カタログ番号M7514)を使用してサンプルを共染色し、TMRE FIをMTG FI、たがってサンプル中のミトコンドリアの量に正規化した。更に、カルボニルシアニド-p-トリフルオロメトキシフェニルヒドラゾン(FCCP;Sigma カタログ番号C2920)を使用して、ミトコンドリア膜電位を完全に脱分極させ、TMRE FIの減少に基づいたミリボルト単位の定量化を可能にするために、サンプルの並列セットを処理した。
この実施例は、特定の身体部位を標的とするフソソームの能力を評価する。フソソームは、本明細書に記載の方法を使用して誘導され、cre-リコンビナーゼタンパク質がロードされていた。
多くの場合、標的細胞への複雑な生物学的カーゴの侵入は、エンドサイトーシスによって達成される。エンドサイトーシスでは、カーゴがエンドソームに入る必要があり、エンドソームは成熟して酸性化したリソソームになる。不利なことに、エンドサイトーシスを介して細胞に入るカーゴは、エンドソーム又はリソソームに捕捉され、細胞質に到達できなくなる場合がある。カーゴはまた、リソソームの酸性条件によって損傷を受ける可能性がある。一部のウイルスは、標的細胞への非エンドサイトーシス侵入が可能であるが、このプロセスは完全には理解されていない。この実施例は、ウイルスのフソゲンを残りのウイルスから分離し、他のウイルスタンパク質を欠くフソソームに非エンドサイトーシスの侵入を与えることができることを示している。
フソソームは、本明細書に記載されているように、細胞表面に水疱性口内炎ウイルス(VSV-G)からのエンベロープ糖タンパク質Gを発現するHEK-293T細胞から産生されたフソソームを収集及び調製する標準的な手順によって産生された。対照粒子(非融合性フソソーム)は、pcDNA3.1空ベクターで一過性に逆トランスフェクトされたHEK-293T細胞から産生された。次に、フソソーム及び親細胞を、ローダミンファロイジンフローサイトメトリーアッセイ及びチューブリンELISAを用いて、アクチンを重合する能力について(時間の経過と共に)アッセイした。簡単に言えば、標準VSV-Gのフソソーム調製物60μLに対応するおよそ1×106のフソソーム及びフソソームを生成するために使用される1×105親細胞を、完全な96ウェル低付着マルチウェルプレートで完全培地1mLに播種し、37℃、5%CO2でインキュベートした。プレーティング後3時間、5時間、24時間に定期的にサンプルを採取した。サンプルを21,000×gで10分間遠心分離し、リン酸緩衝生理食塩水中の200uLの4%(v/v)PFAに10分間再懸濁し、1mLのリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、21,000×gで10分間遠心分離し、再度洗浄して、更に使用するまで4℃で保存した。
この実施例では、フソソーム内のグリセルアルデヒド3-リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)のレベル、及び親細胞と比較したフソソーム内のGAPDHの相対レベルの定量化について説明する。フソソームを、実施例67及び86に記載されているように調製した。
この実施例では、フソソームの脂質質量とタンパク質質量の比率の定量化について説明する。フソソームは、有核細胞のそれと同様の脂質質量対タンパク質質量の比を有することができると考えられる。フソソーム及び親細胞を、本明細書の実施例67及び86に記載されているように調製した。
この実施例では、フソソームのタンパク質質量とDNAの比率の定量化について説明する。フソソームは、細胞のそれよりもはるかに大きいタンパク質質量対DNA質量の比を有することができると考えられる。フソソームを、実施例67及び86に記載されているように調製した。
この実施例では、親細胞と比較したフソソームの脂質とDNAの比率の定量化について説明する。一実施形態では、フソソームは、親細胞と比較して、DNAに対する脂質のより大きな比率を有するであろう。フソソームを、実施例67及び86に以前に記載されたように調製した。
この比率は、実施例40に概説されている脂質含有量として定義され、核酸含有量は、実施例41に記載されているように決定される。測定された脂質レベル、DNAレベル、及び脂質対DNAの比を図15及び下記表に示す:
この実施例では、フソソームの脂質組成の定量化について説明する。フソソームの脂質組成は、それらが由来する細胞に類似している可能性があると考えられる。脂質組成は、サイズ、静電相互作用、及びコロイド挙動等、フソソーム及び細胞の重要な生物物理学的パラメーターに影響を与える。
この実施例では、フソソームのタンパク質組成の定量化について説明する。フソソームのタンパク質組成は、それらが由来する親細胞に類似している可能性があると考えられる。
この実施例では、フソソームの内因性又は合成タンパク質カーゴの定量について説明する。フソソームは、場合によっては、内因性又は合成タンパク質カーゴを含むことができる。この実施例に記載されているフソソーム又は親細胞は、内因性タンパク質の発現を変更するか、又は治療的な若しくは新規の細胞機能を媒介する合成カーゴを発現するように設計された。
このアッセイは、エクソソームの特異的マーカーであることが知られているタンパク質の割合の定量化について説明している。
このアッセイでは、フソソーム内のカルネキシン(CNX)のレベル、及び親細胞と比較したフソソーム内のCNXの相対レベルの定量化について説明する。
この実施例では、親細胞と比較したフソソームの脂質とDNAの比率の定量化について説明する。一実施形態では、フソソームは、親細胞と比較して、DNAに対する脂質のより大きな比率を有するであろう。フソソームを、実施例67及び86に以前に記載されたように調製した。
このアッセイでは、フソソームの表面マーカーの同定について説明する。
この実施例では、サンプル調製物の構成を分析し、ウイルスキャプシド源に由来するタンパク質の割合を評価した。
この実施例では、総タンパク質又はフソソーム内の他の目的のタンパク質に対するフソゲンタンパク質の比率の定量化について説明する。対象となる他のタンパク質としては、限定されるものではないが、EGFP、CD63、ARRDC1、GAPDH、カルネキシン(CNX)、及びTSG101が挙げられる。フソソームを、実施例67及び86の方法により、本明細書に記載されるように調製した。フソソーム質量分析によるタンパク質の定量化は、本明細書の実施例35に記載されているように実施した。全タンパク質の定量化を、本明細書の実施例35に記載されているように計算し、フソソームサンプルに対して平均し、分率として表した。
この実施例では、総タンパク質又はフソソーム内の他の目的のタンパク質と比較した、内因性又は合成タンパク質カーゴの定量化について説明する。対象となる他のタンパク質としては、限定されるものではないが、VSV-G、CD63、ARRDC1、GAPDH、カルネキシン(CNX)、又はTSG101が挙げられる。フソソームを、実施例67及び86の方法により、本明細書に記載されるように調製した。フソソーム質量分析によるタンパク質の定量化は、本明細書の実施例35に記載されているように実施した。全タンパク質の定量化を、本明細書の実施例35に記載されているように計算し、フソソームサンプルに対して平均し、分率として表した。
この実施例では、フソソーム、親細胞、及びエクソソームの脂質組成の定量化について説明する。フソソームの脂質組成は、それらが由来する細胞と比較して、特定の脂質について濃縮及び/又は枯渇させることができると考えられる。脂質組成は、サイズ、静電相互作用、及びコロイド挙動等、フソソーム及び細胞の重要な生物物理学的パラメーターに影響を与える。
この実施例では、フソソーム、フソソーム親細胞、及びエクソソームの特定の細胞内コンパートメントに由来することが知られているタンパク質の割合の定量化について説明する。
この実施例では、細胞からのフソソーム放出に重要であることが知られているタンパク質の割合の定量化について説明する。
この実施例は、フソソームの複数回投与後のin vitro送達アッセイを使用したフソソームの血清不活化の定量化を説明する。改変されたフソソーム、例えば、本明細書に記載の方法によって改変されたものは、複数回(例えば、1回より多い、例えば、2回以上)の改変フソソームの投与に続いて、血清不活化の減少を有し得る(例えば、未改変フソソームの投与と比較して減少する)と考えられる。場合によっては、本明細書に記載のフソソームは、複数回の投与後に血清によって不活化されないであろう。
この実施例は、in vitroアッセイを使用したフソソームに対する補体活性の定量化を説明する。本明細書に記載の改変フソソームは、対応する未改変フソソームと比較して、補体活性の低下を誘発し得ると考えられる。
Claims (53)
- 以下:
a)フソゲンを含む脂質二重層、並びに
b)以下:
(i)外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
(ii)前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された正の標的細胞特異的調節エレメント(例えば、標的細胞特異的プロモーター)とを含む核酸、を含むフソソームであって、ここで、前記正の標的細胞特異的調節エレメントは、前記正の標的細胞特異的調節エレメントを欠く以外は同様のフソソームと比較して、標的細胞におけるペイロード遺伝子の発現を増加させ、前記標的細胞は、T細胞である、フソソーム。 - 前記核酸が、前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非T細胞特異的調節エレメントである非標的細胞特異的調節エレメント(NTCSRE)を更に含み、前記NTCSREが、前記NTCSREを欠く他は同様のフソソームと比較して、非標的細胞において前記ペイロード遺伝子の発現を減少させ、任意に、前記標的細胞が第1のタイプのT細胞であり、前記非標的細胞が第2の異なるタイプのT細胞又は非T細胞であり、任意に、前記標的細胞がTreg細胞であり、前記非標的細胞が従来のCD4+T細胞である、請求項1に記載のフソソーム。
- 以下:
a)フソゲンを含む脂質二重層;並びに
b)以下:
(i)外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
(ii)前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結されたプロモーターとを含む核酸、を含むフソソームであって、ここで、前記プロモーターが、例えば、プロモーターの配列に従って、IL2RA、LRRC32、FOXP3、又はIKZF2プロモーターから選択される、フソソーム。 - 以下:
a)フソゲンを含む脂質二重層;並びに
b)以下:
(i)外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
(ii)前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非T細胞特異的調節エレメントである非標的細胞特異的調節エレメント(NTCSRE)とを含む核酸、を含むフソソームであって、前記NTCSREが、前記NTCSREを欠く以外は同様のフソソームと比較して、非標的細胞又は組織において前記ペイロード遺伝子の発現を減少させる、フソソーム。 - 前記核酸が、前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された正の標的細胞特異的調節エレメント(例えば、標的細胞特異的プロモーター)を更に含み、前記正の標的細胞特異的調節エレメントが、前記正の標的細胞特異的調節エレメントを欠く他は同様のフソソームと比較して、標的細胞における前記ペイロード遺伝子の発現を増加させ、前記標的細胞が、T細胞である、請求項4に記載のフソソーム。
- 以下:
(i)前記脂質二重層上の第1の外因性若しくは過剰発現された免疫抑制タンパク質、又は
(ii)存在しないか若しくは低下したレベルで存在する第1の免疫賦活タンパク質、のいずれか又は両方を更に含み、任意に、前記低下したレベルが、他の点は同様の未改変ソース細胞から生成されたフソソームと比較して、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又は、90%の低下である、請求項1~5のいずれかに記載のフソソーム。 - 前記ペイロード遺伝子が、T細胞関連疾患又は障害を治療する遺伝子である、請求項1~6のいずれかに記載のフソソーム。
- フソソームであって、
a)フソゲンを含む脂質二重層と、
b)T細胞関連疾患又は障害を治療するための外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子を含む核酸と、
c)以下のうちの1つ又は両方:
(i)脂質二重層上の第1の外因性の若しくは過剰発現された免疫抑制タンパク質;又は
(ii)存在しないか若しくは他の点では同様の未改変ソース細胞から生成されたフソソームと比較して、低下したレベル(例えば、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又は90%まで低下)で存在する第1の免疫賦活タンパク質とを含む、フソソーム。 - (i)及び(ii)を含む、請求項6~8のいずれかに記載のフソソーム。
- (i)を含み、前記脂質二重層上に第2の外因性又は過剰発現された免疫抑制タンパク質を更に含む、請求項6~9のいずれかに記載のフソソーム。
- (ii)を含み、更に、存在しないか若しくは低下したレベルで存在する第2の免疫賦活タンパク質を含み、任意に、前記低下したレベルが、他の点では同様の未改変ソース細胞から生成されたフソソームと比較して、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又は、90%の低下である、請求項6~10のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記核酸が、前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された正の標的細胞特異的調節エレメント(例えば、標的細胞特異的プロモーター)を更に含み、前記正の標的細胞特異的調節エレメントが、前記正の標的細胞特異的調節エレメントを欠く他は同様のフソソームと比較して、標的細胞における前記ペイロード遺伝子の発現を増加させ、前記標的細胞が、T細胞である、請求項8~11のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記核酸が、前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非T細胞特異的調節エレメントである非標的細胞特異的調節エレメント(NTCSRE)を更に含み、前記非T細胞特異的調節エレメントが、前記NTCSREを欠く他は同様のフソソームと比較して、非標的細胞又は組織において前記ペイロード遺伝子の発現を減少させ、任意に、前記標的細胞が第1のタイプのT細胞であり、前記非標的細胞が第2の異なるタイプのT細胞又は非T細胞であり、任意に、前記標的細胞がTreg細胞であり、前記非標的細胞が従来のCD4+T細胞である、請求項6~10のいずれかに記載のフソソーム。
- 被験体に投与される場合、以下:
i)前記フソソームが検出可能な抗体応答を生じないか、又は前記フソソームに対する抗体が、例えば、バックグラウンドレベルより10%未満、5%、4%、3%、2%、若しくは1%超のレベルで存在する、
ii)前記フソソームが、検出可能な細胞性免疫応答を生じないか、又は前記フソソームに対する細胞性免疫応答がバックグラウンドレベルの10%未満、5%、4%、3%、2%、若しくは1%超のレベルで存在する、
iii)前記フソソームが、検出可能な先天性免疫応答、例えば補体活性化を生じないか、又は前記フソソームに対する先天性免疫応答がバックグラウンドレベルの10%未満、5%、4%、3%、2%、若しくは1%超のレベルで存在する、
iv)フソソームの10%、5%、4%、3%、2%、若しくは1%未満が血清によって不活化される、
v)前記フソソームから前記外因性作用物質を受容した標的細胞が検出可能な抗体応答を生じず、又は前記標的細胞に対する抗体がバックグラウンドレベルの10%未満、5%、4%、3%、2%、若しくは1%超のレベルで存在する、或いは
vi)前記フソソームから前記外因性作用物質を受容した標的細胞が検出可能な細胞性免疫応答を生じないか、又は前記標的細胞に対する細胞性応答がバックグラウンドレベルの10%未満、5%、4%、3%、2%、若しくは1%超のレベルで存在する、の1つ又は複数である、請求項6~13のいずれかに記載のフソソーム。 - 前記バックグラウンドレベルが、前記フソソームの投与前の同じ被験体における対応するレベルである、請求項14に記載のフソソーム。
- 前記免疫抑制タンパク質が、補体調節タンパク質又はCD47である、請求項6~15のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記免疫賦活タンパク質が、MHC I又はMHC IIタンパク質である、請求項6~16のいずれかに記載のフソソーム。
- 以下の1つ以上である、請求項1~17のいずれかに記載のフソソーム:
i)前記フソソームが、非T細胞とよりもT細胞と高い割合で融合し、任意に、前記高い割合が、少なくとも1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、若しくは100倍である、
ii)前記フソソームが、別のフソソームとよりもT細胞と高い割合で融合し、任意に、前記高い割合が、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、若しくは90%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、又は100倍である、
iii)前記フソソームが、前記フソソーム内の作用物質が、24、48、又は72時間後に、T細胞の少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、若しくは90%まで送達されるような速度でT細胞と融合する、
iv)前記フソソームが、非標的細胞よりT細胞に高い割合で前記核酸を送達し、任意に、前記高い割合が、少なくとも1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、若しくは100倍である、
v)前記フソソームが、別のフソソームよりもT細胞に高い割合で前記核酸を送達し、任意に、前記高い割合が、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、若しくは90%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、若しくは100倍である、又は
vi)前記フソソーム中の作用物質が、24、48、又は72時間後にT細胞の少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、若しくは90%に送達されるような割合で、前記フソソームがT細胞に前記核酸を送達する。 - 前記外因性作用物質が、毛包ケラチノサイト抗原、メラノサイト抗原、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CCL2、CCL5、細胞間接着分子1、グルテン、PDGF、細菌のフラジェリン、FAM84A、アルファ(2)-Heremans Schmidt糖タンパク質(アルファ(2)-HSG)、トランスフェリン、炭酸アンヒドラーゼ、食品ベースの抗原、甲状腺刺激ホルモン受容体(TSHR)、甲状腺ペルオキシダーゼ、サイログロブリン、TSH受容体、アルファエノラーゼ、アルファb-クリスタリン、ベータアレスチン、S100-ベータ、アクアポリン-4、MOG、PLP、MBP、nAChR、MuSK、NC16A末端BPAG1/2、デスモグレイン1、デスモグレイン3、BPAG1、プレクチン、デスモプラキンI、デスモプラキンII、エンボプラキン、ペリプラキン、アルファ-2-マクログロブリン様-1、シトルリン化ペプチド、非自己抗原、dsDNA、ヌクレオソームヒストン、テロメア、Smコアタンパク質、hsp60、437-460(p277)、PPIns/Pins、抗インスリン抗原、グルタミン酸デカルボキシラーゼ(GAD)、カルボキシペプチダーゼH、インスリノーマ抗原-2、IA-2β、又は好中球顆粒球の細胞質内の抗原から選択される抗原に結合する結合部分(例えば、CAR分子)である、請求項1~18のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記フソゲンがT細胞を標的とし、任意に、T細胞がCD4+T細胞、CD8+T細胞、アルファベータT細胞、ガンマデルタT細胞、ナイーブT細胞、エフェクターT細胞、細胞傷害性T細胞(例えば、CD8+細胞傷害性T細胞)、制御性T細胞(例えば、胸腺由来制御性T細胞、末梢由来制御性T細胞、CD4+Foxp3+制御性T細胞、又はCD4+FoxP3-1型制御性T(Tr1)細胞)、ヘルパーT細胞(例えば、CD4+ヘルパーT細胞、Th1細胞、Th2細胞、Th3細胞、Th9細胞、Th17細胞、Th22細胞、又はT濾胞性ヘルパー(Tfh)細胞)、メモリーT細胞(例えば、幹細胞メモリーT細胞、セントラルメモリーT細胞、又はエフェクターメモリーT細胞)、NKT細胞、又は粘膜関連インバリアントT(MAIT)細胞である、請求項1~19のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記フソゲンが、ウイルスエンベロープタンパク質である、請求項1~20のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記フソゲンがVSV-Gを含む、請求項1~21のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記フソゲンが、ニパウイルスF及びGタンパク質、麻疹ウイルスF及びHタンパク質、ツパイアパラミクソウイルスF及びHタンパク質、パラミクソウイルスF及びGタンパク質若しくはF及びHタンパク質若しくはF及びHNタンパク質、ヘンドラウイルスF及びGタンパク質、ヘニパウイルスF及びGタンパク質、モルビリウイルスF及びHタンパク質、レスピロウイルスF及びHNタンパク質、センダイウイルスF及びHNタンパク質、ルブラウイルスF及びHNタンパク質、又はアブラウイルスF及びHNタンパク質、又はそれらの誘導体、又はそれらの任意の組み合わせから選択される配列を含む、請求項1~22のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記フソゲンが、野生型パラミクソウイルスフソゲンに対して、少なくとも80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、又は99%の配列同一性を有する、少なくとも100アミノ酸長のドメインを含み、任意に、前記野生型パラミクソウイルスフソゲンが、配列番号1~133のいずれか1つに記載されている、請求項1~23のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記野生型パラミクソウイルスがニパウイルスであり、任意に、前記ニパウイルスがヘニパウイルスである、請求項24に記載のフソソーム。
- 前記フソゲンが、T細胞への送達のために再標的化され、任意に、前記T細胞がCD4+T細胞、CD8+T細胞、アルファベータT細胞、ガンマデルタT細胞、ナイーブT細胞、エフェクターT細胞、細胞傷害性T細胞(例えば、CD8+細胞傷害性T細胞)、制御性T細胞(例えば、胸腺由来制御性T細胞、末梢由来制御性T細胞、CD4+Foxp3+制御性T細胞、又はCD4+FoxP3-1型制御性T(Tr1)細胞)、ヘルパーT細胞(例えば、CD4+ヘルパーT細胞、Th1細胞、Th2細胞、Th3細胞、Th9細胞、Th17細胞、Th22細胞、又はT濾胞性ヘルパー(Tfh)細胞)、メモリーT細胞(例えば、幹細胞メモリーT細胞、セントラルメモリーT細胞、又はエフェクターメモリーT細胞)、NKT細胞、又は粘膜関連インバリアントT(MAIT)細胞である、請求項1~25のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記正の標的細胞特異的調節エレメントが、T細胞特異的プロモーター、T細胞特異的エンハンサー、T細胞特異的スプライス部位、RNA又はタンパク質の半減期を延長するT細胞特異的部位、T細胞特異的mRNA核外輸送促進部位、T細胞特異的翻訳増強部位、又はT細胞特異的翻訳後修飾部位を含む、請求項1、2、5、6、7及び12~22のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記正の標的細胞特異的調節エレメントがT細胞特異的プロモーターを含む、請求項1、2、5、6、7及び12~22のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記正のT細胞特異的調節エレメントが、IL2RA、LRRC32、FOXP3、又はIKZF2プロモーターから選択されるプロモーターを含む、請求項27又は28に記載のフソソーム。
- 前記NTCSREが、非標的細胞特異的miRNA認識配列、非標的細胞特異的プロテアーゼ認識部位、非標的細胞特異的ユビキチンリガーゼ部位、非標的細胞特異的転写抑制部位、又は非標的細胞特異的エピジェネティック抑制部位を含む、請求項2、4~7、又は13~29のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記NTCSREが、組織特異的miRNA認識配列、組織特異的プロテアーゼ認識部位、組織特異的ユビキチンリガーゼ部位、組織特異的転写抑制部位又は組織特異的エピジェネティック抑制部位を含む、請求項2、4~7、又は13~30のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記NTCSREが、非標的細胞特異的miRNA認識配列、非標的細胞特異的プロテアーゼ認識部位、非標的細胞特異的ユビキチンリガーゼ部位、非標的細胞特異的転写抑制部位、又は非標的細胞特異的エピジェネティック抑制部位を含む、請求項2、4~7、又は13~31のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記NTCSREが、非標的細胞特異的miRNA認識配列を含み、前記miRNA認識配列が、miR31、miR363、又はmiR29cの1つ以上によって結合され得る、請求項2、4~7、又は13~32のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記NTCSREが外因性作用物質をコードする転写領域内に位置するか又はコードされており、任意に、前記転写領域によって産生されるRNAがUTR又はコード領域内のmiRNA認識配列を含む、請求項30~33のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記核酸が1つ以上のインスレーター配列を含む、請求項1~34のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記核酸が2つのインスレーター配列を含み、任意に、前記2つのインスレーター配列が前記ペイロード遺伝子の上流の第1のインスレーター配列及び前記ペイロード遺伝子の下流の第2のインスレーター配列を含み、任意に、前記第1のインスレーター配列及び第2のインスレーター配列が、同一又は異なる配列を含む、請求項35に記載のフソソーム。
- 前記フソソームがレトロウイルスベクター粒子である、請求項1~36のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記核酸がT細胞のゲノムに組み込まれることができる、請求項1~37のいずれかに記載のフソソーム。
- 前記T細胞が、T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、アルファベータT細胞、ガンマデルタT細胞、ナイーブT細胞、エフェクターT細胞、細胞傷害性T細胞(例えば、CD8+細胞傷害性T細胞)、制御性T細胞(例えば、胸腺由来制御性T細胞、末梢由来制御性T細胞、CD4+Foxp3+制御性T細胞、又はCD4+FoxP3-1型制御性T(Tr1)細胞)、ヘルパーT細胞(例えば、CD4+ヘルパーT細胞、Th1細胞、Th2細胞、Th3細胞、Th9細胞、Th17細胞、Th22細胞、又はT濾胞性ヘルパー(Tfh)細胞)、メモリーT細胞(例えば、幹細胞メモリーT細胞、セントラルメモリーT細胞、又はエフェクターメモリーT細胞)、NKT細胞、又は粘膜関連インバリアントT(MAIT)細胞から選択される、請求項1~38のいずれかに記載のフソソーム。
- 請求項1~39のいずれかに記載のフソソームと、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む、医薬組成物。
- 請求項1~39のいずれかに記載のフソソーム又は請求項40の医薬組成物を被験体に投与し、それにより外因性作用物質を前記被験体に送達することを含む、外因性作用物質を被験体に送達する方法。
- 被験体又はT細胞において、機能を調節する方法であって、前記被験体のT細胞を、請求項1~39のいずれかに記載のフソソーム又は請求項40に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。
- 前記T細胞が、CD4+T細胞、CD8+T細胞、アルファベータT細胞、ガンマデルタT細胞、ナイーブT細胞、エフェクターT細胞、細胞傷害性T細胞(例えば、CD8+細胞傷害性T細胞)、制御性T細胞(例えば、胸腺由来制御性T細胞、末梢由来制御性T細胞、CD4+Foxp3+制御性T細胞、又はCD4+FoxP3-1型制御性T(Tr1)細胞)、ヘルパーT細胞(例えば、CD4+ヘルパーT細胞、Th1細胞、Th2細胞、Th3細胞、Th9細胞、Th17細胞、Th22細胞、又はT濾胞性ヘルパー(Tfh)細胞)、メモリーT細胞(例えば、幹細胞メモリーT細胞、セントラルメモリーT細胞、又はエフェクターメモリーT細胞)、NKT細胞、又は粘膜関連インバリアントT(MAIT)細胞である、請求項42に記載の方法。
- 前記T細胞が被験体に存在する、請求項42又は請求項43に記載の方法。
- 被験体において疾患又は障害を治療する方法であって、請求項1~39のいずれかに記載のフソソーム又は請求項40の医薬組成物を前記被験体に投与することを含む、方法。
- 前記疾患又は障害が、前記外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子によって治療することができる疾患又は障害である、請求項45に記載の方法。
- 前記疾患又は障害が、急性GvHD、円形脱毛症、自己免疫性ブドウ膜炎、セリアック病、慢性GvHD、クローン病、子宮内膜症、好酸球性食道炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、類天疱瘡、天疱瘡、関節リウマチ、臓器移植、全身性エリテマトーデス、1型糖尿病、潰瘍性大腸炎から選択される、請求項45又は請求項46に記載の方法。
- 前記被験体がヒト被験体である、請求項41~47のいずれかに記載の方法。
- 疾患又は障害を治療する際に使用するための、請求項1~39のいずれかに記載のフソソーム又は請求項40に記載の医薬組成物。
- 疾患又は障害を治療する際に使用するための薬剤を製造するための、請求項1~39のいずれかに記載のフソソーム又は請求項40に記載の医薬組成物の使用。
- 前記疾患又は障害が、前記外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子によって治療することができる、請求項49に記載の使用のためのフソソーム又は医薬組成物、又は請求項50に記載の使用。
- 前記疾患又は障害が、急性GvHD、円形脱毛症、自己免疫性ブドウ膜炎、セリアック病、慢性GvHD、クローン病、子宮内膜症、好酸球性食道炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、類天疱瘡、天疱瘡、関節リウマチ、臓器移植、全身性エリテマトーデス、1型糖尿病、潰瘍性大腸炎である、請求項49又は請求項51に記載の使用のためのフソソーム又は医薬組成物、或いは請求項50又は請求項51に記載の使用。
- 以下:
a)前記核酸及び前記フソゲンを含む細胞を提供すること、
b)フソソームの産生を可能にする条件下で上記細胞を培養すること、並びに
c)前記細胞からフソソームを分離、濃縮、又は精製し、それによってフソソームを作製することを含む、請求項1~39のいずれかに記載のフソソームを作製する方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862767320P | 2018-11-14 | 2018-11-14 | |
US62/767,320 | 2018-11-14 | ||
US201962900053P | 2019-09-13 | 2019-09-13 | |
US62/900,053 | 2019-09-13 | ||
PCT/US2019/061434 WO2020102503A2 (en) | 2018-11-14 | 2019-11-14 | Fusosome compositions for t cell delivery |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022507453A true JP2022507453A (ja) | 2022-01-18 |
JPWO2020102503A5 JPWO2020102503A5 (ja) | 2022-11-22 |
Family
ID=68808602
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021526393A Pending JP2022507453A (ja) | 2018-11-14 | 2019-11-14 | T細胞送達のためのフソソーム組成物 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20230043255A1 (ja) |
EP (1) | EP3880180A2 (ja) |
JP (1) | JP2022507453A (ja) |
AU (1) | AU2019378883A1 (ja) |
WO (1) | WO2020102503A2 (ja) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3235908A1 (en) | 2016-04-21 | 2017-10-25 | Ecole Normale Superieure De Lyon | Methods for selectively modulating the activity of distinct subtypes of cells |
WO2021046143A1 (en) | 2019-09-03 | 2021-03-11 | Sana Biotechnology, Inc. | Cd24-associated particles and related methods and uses thereof |
CN116096866A (zh) * | 2020-03-31 | 2023-05-09 | 萨那生物科技公司 | 靶向脂质颗粒及其组合物和用途 |
WO2022150731A1 (en) | 2021-01-11 | 2022-07-14 | Sana Biotechnology, Inc. | Use of cd8-targeted viral vectors |
IL307544A (en) | 2021-04-08 | 2023-12-01 | Sana Biotechnology Inc | Constructs of CD8-specific antibodies and preparations thereof |
CA3219487A1 (en) | 2021-05-28 | 2022-12-01 | Richard C. Mulligan | Lipid particles containing a truncated baboon endogenous retrovirus (baev) envelope glycoprotein and related methods and uses |
WO2023015217A1 (en) | 2021-08-04 | 2023-02-09 | Sana Biotechnology, Inc. | Use of cd4-targeted viral vectors |
TW202342757A (zh) | 2021-12-17 | 2023-11-01 | 美商薩那生物科技公司 | 經修飾副黏液病毒科附著醣蛋白 |
WO2023115039A2 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | Sana Biotechnology, Inc. | Modified paramyxoviridae fusion glycoproteins |
WO2023150518A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Sana Biotechnology, Inc. | Cd3-targeted lentiviral vectors and uses thereof |
WO2023150647A1 (en) | 2022-02-02 | 2023-08-10 | Sana Biotechnology, Inc. | Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses |
WO2023193015A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Sana Biotechnology, Inc. | Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies |
WO2024026377A1 (en) * | 2022-07-27 | 2024-02-01 | Sana Biotechnology, Inc. | Methods of transduction using a viral vector and inhibitors of antiviral restriction factors |
WO2024044655A1 (en) | 2022-08-24 | 2024-02-29 | Sana Biotechnology, Inc. | Delivery of heterologous proteins |
WO2024064838A1 (en) | 2022-09-21 | 2024-03-28 | Sana Biotechnology, Inc. | Lipid particles comprising variant paramyxovirus attachment glycoproteins and uses thereof |
WO2024081820A1 (en) | 2022-10-13 | 2024-04-18 | Sana Biotechnology, Inc. | Viral particles targeting hematopoietic stem cells |
Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH10501403A (ja) * | 1994-03-04 | 1998-02-10 | ユニバーシティ オブ メディシン アンド デンティストリー オブ ニュージャージー | 抗体−エンベロープ融合タンパク質および野生型エンベロープ融合タンパク質を含むレトロウィルスベクターを用いる細胞型特異的遺伝子移入 |
JPH10313865A (ja) * | 1997-05-15 | 1998-12-02 | Deinabetsuku Kenkyusho:Kk | ヒト補体制御因子が呈示されたベクター |
JP2002522090A (ja) * | 1998-08-17 | 2002-07-23 | トーマス ジェファーソン ユニヴァーシティー | 抗体エンベロープ融合タンパク質および野生型エンベロープタンパク質を含有するレトロウイルスベクターを用いる細胞型特異的遺伝子移入 |
WO2004038029A1 (ja) * | 2002-10-24 | 2004-05-06 | Dnavec Research Inc. | T細胞に遺伝子を導入する方法 |
WO2008071959A1 (en) * | 2006-12-12 | 2008-06-19 | Oxford Biomedica (Uk) Limited | Lentiviral vectors comprising micrornas |
US20100316570A1 (en) * | 2009-03-10 | 2010-12-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Protection of Virus from Immune Cell Uptake |
JP2017525344A (ja) * | 2014-07-14 | 2017-09-07 | オスペダーレ サン ラファエレ エス.アール.エル | ベクター生産 |
WO2017165245A2 (en) * | 2016-03-19 | 2017-09-28 | F1 Oncology, Inc. | Methods and compositions for transducing lymphocytes and regulated expansion thereof |
WO2017182585A1 (en) * | 2016-04-21 | 2017-10-26 | Ecole Normale Superieure De Lyon | Methods for selectively modulating the activity of distinct subtypes of cells |
WO2018088519A1 (ja) * | 2016-11-10 | 2018-05-17 | 株式会社カネカ | 遺伝子導入細胞の製造方法 |
JP2018525979A (ja) * | 2015-07-13 | 2018-09-13 | サンガモ セラピューティクス, インコーポレイテッド | ヌクレアーゼ媒介ゲノム遺伝子操作のための送達方法及び組成物 |
JP2021523724A (ja) * | 2018-05-15 | 2021-09-09 | フラッグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ, インコーポレイテッド | フソソーム組成物およびその使用 |
Family Cites Families (42)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IL78703A (en) | 1985-05-10 | 1993-02-21 | Benzon Alfred | Method of producing extracellular enzymes, the enzymes produced thereby and compositions containing them; a hybrid plasmid and a dna fragment comprising dna encoding the enzymes; a microorganism harbouring the plasmid; and a method for removing nucleic acids from biological materials |
GB9526131D0 (en) | 1995-12-21 | 1996-02-21 | Celltech Therapeutics Ltd | Recombinant chimeric receptors |
CN1195863C (zh) | 1996-10-17 | 2005-04-06 | 牛津生物医学(英国)有限公司 | 逆转录病毒载体 |
AU9399498A (en) | 1997-09-18 | 1999-04-05 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Receptor-binding pocket mutants of influenza a virus hemagglutinin for use in targeted gene delivery |
GB9720465D0 (en) | 1997-09-25 | 1997-11-26 | Oxford Biomedica Ltd | Dual-virus vectors |
EP1042493A1 (en) | 1997-12-22 | 2000-10-11 | Oxford Biomedica (UK) Limited | Equine infectious anaemia virus (eiav) based retroviral vectors |
GB9803351D0 (en) | 1998-02-17 | 1998-04-15 | Oxford Biomedica Ltd | Anti-viral vectors |
FR2777909B1 (fr) | 1998-04-24 | 2002-08-02 | Pasteur Institut | Utilisation de sequences d'adn de structure triplex pour le tranfert de sequences de nucleotides dans des cellules, vecteurs recombinants contenant ces sequences triplex |
GB0009760D0 (en) | 2000-04-19 | 2000-06-07 | Oxford Biomedica Ltd | Method |
ATE452972T1 (de) | 2001-05-01 | 2010-01-15 | Ca Nat Research Council | Induzierbares expressionssystem in eukaryotischen zellen |
US20040028687A1 (en) | 2002-01-15 | 2004-02-12 | Waelti Ernst Rudolf | Methods and compositions for the targeted delivery of therapeutic substances to specific cells and tissues |
CA2479763A1 (en) | 2002-03-27 | 2003-10-09 | Baylor College Of Medicine | Potent oncolytic herpes simplex virus for cancer therapy |
EP1497437A4 (en) | 2002-05-01 | 2005-11-16 | Cell Genesys Inc | LENTIVIRAL VECTOR PARTICLES RESISTANT TO THE INACTIVATION OF A COMPLEMENT |
DK1506287T3 (da) | 2002-05-14 | 2007-08-20 | Merck & Co Inc | Fremgangsmåder til oprensning af adenovirus |
PL377161A1 (pl) | 2002-11-21 | 2006-01-23 | Pevion Biotech Ltd. | Wysoce efektywne pęcherzyki fuzogenne, sposób ich wytwarzania oraz kompozycje farmaceutyczne zawierające te pęcherzyki |
WO2006027202A1 (en) | 2004-09-06 | 2006-03-16 | Unite De Recherche En Biotherapie Et Oncologie (Rubio) | Generation of multiparent cell hybrids |
EP1828953B1 (en) | 2004-11-08 | 2013-03-06 | Yale University Corporation | Crystalline xpt guanine riboswitch from Bacillus subtilis and structure-based compound identification employing said riboswitch |
US10000757B2 (en) | 2005-05-27 | 2018-06-19 | Ospedale San Raffaele S.R.L. | Gene vector |
WO2007099387A1 (en) | 2006-03-03 | 2007-09-07 | Mymetics Corporation | Virosome-like vesicles comprising gp41-derived antigens |
EP2221364A1 (en) | 2009-02-23 | 2010-08-25 | TXCell | Compositions for treating an allergic or asthmatic condition |
US8697439B2 (en) | 2009-11-13 | 2014-04-15 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Direct protein delivery with engineered microvesicles |
EP2439534A1 (en) | 2010-10-08 | 2012-04-11 | TXCell | Method for assessing the efficacy of a TR1 cell therapy in asubject |
SG10201510092QA (en) | 2010-12-09 | 2016-01-28 | Univ Pennsylvania | Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer |
BR112013023968A2 (pt) | 2011-03-25 | 2016-12-13 | Txcell | uso de células t reguladoras para a fabricação de medicamentos para tratar condição inflamatória ou autoimune |
WO2012156839A2 (en) | 2011-05-19 | 2012-11-22 | Ospedale San Raffaele S.R.L. | New generation of splice-less lentiviral vectors for safer gene therapy applications |
SG11201400527XA (en) | 2011-09-16 | 2014-04-28 | Univ Pennsylvania | Rna engineered t cells for the treatment of cancer |
CA2984484C (en) | 2014-05-02 | 2024-01-23 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods of chimeric autoantibody receptor t cells |
EP2982746A1 (en) | 2014-08-07 | 2016-02-10 | TXCell | Regulatory T cells with therapeutic potential |
ES2688035T3 (es) | 2014-08-29 | 2018-10-30 | Gemoab Monoclonals Gmbh | Receptor de antígeno universal que expresa células inmunes para direccionamiento de antígenos múltiples diversos, procedimiento para fabricación del mismo y utilización del mismo para tratamiento de cáncer, infecciones y enfermedades autoinmunes |
WO2016126608A1 (en) | 2015-02-02 | 2016-08-11 | Novartis Ag | Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof |
CA2997646C (en) | 2015-09-07 | 2024-04-23 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | A new subpopulation of cd8+cd45rclow tregs and uses thereof |
CN108348620A (zh) | 2015-09-28 | 2018-07-31 | 明尼苏达大学董事会 | 嵌合抗原受体(car)t细胞作为获得自体免疫和同种免疫的治疗性干预 |
WO2017058753A1 (en) | 2015-09-28 | 2017-04-06 | Trustees Of Dartmouth College | Chimeric antigen receptor, regulatory cells and methods of use |
US20170112773A1 (en) | 2015-10-23 | 2017-04-27 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Plasma membrane vesicles comprising functional transmembrane proteins |
CN108697798A (zh) | 2016-02-16 | 2018-10-23 | 达纳-法伯癌症研究所有限公司 | 免疫疗法组合物及方法 |
US20170274095A1 (en) | 2016-03-23 | 2017-09-28 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced regulatory t cells targeted to sites of inflammation with chimeric antigen receptors and expressing factors that enhance viability of pancreatic cells |
MA45498A (fr) | 2016-06-16 | 2019-04-24 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Cellules treg génétiquement modifiées |
AU2017292936C1 (en) * | 2016-07-08 | 2024-05-02 | Exuma Biotech Corp | Methods and compositions for transducing lymphocytes and regulating the activity thereof |
MA45783A (fr) | 2016-07-29 | 2019-06-05 | Juno Therapeutics Inc | Procédés d'évaluation de la présence ou de l'absence d'un virus compétent pour la réplication |
EP3346001A1 (en) | 2017-01-06 | 2018-07-11 | TXCell | Monospecific regulatory t cell population with cytotoxicity for b cells |
WO2018127585A1 (en) | 2017-01-06 | 2018-07-12 | Txcell | Monospecific regulatory t cell population with cytotoxicity for b cells |
JP2020503390A (ja) * | 2017-01-09 | 2020-01-30 | オイシン バイオテクノロジーズ, インコーポレイテッド | 治療用タンパク質の標的細胞特異的な産生のため、および標的細胞に関連する疾患、状態、または障害の治療のための、膜融合性脂質ナノ粒子、ならびにその作製および使用のための方法 |
-
2019
- 2019-11-14 EP EP19817067.2A patent/EP3880180A2/en active Pending
- 2019-11-14 WO PCT/US2019/061434 patent/WO2020102503A2/en unknown
- 2019-11-14 US US17/293,802 patent/US20230043255A1/en active Pending
- 2019-11-14 JP JP2021526393A patent/JP2022507453A/ja active Pending
- 2019-11-14 AU AU2019378883A patent/AU2019378883A1/en active Pending
Patent Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH10501403A (ja) * | 1994-03-04 | 1998-02-10 | ユニバーシティ オブ メディシン アンド デンティストリー オブ ニュージャージー | 抗体−エンベロープ融合タンパク質および野生型エンベロープ融合タンパク質を含むレトロウィルスベクターを用いる細胞型特異的遺伝子移入 |
JPH10313865A (ja) * | 1997-05-15 | 1998-12-02 | Deinabetsuku Kenkyusho:Kk | ヒト補体制御因子が呈示されたベクター |
JP2002522090A (ja) * | 1998-08-17 | 2002-07-23 | トーマス ジェファーソン ユニヴァーシティー | 抗体エンベロープ融合タンパク質および野生型エンベロープタンパク質を含有するレトロウイルスベクターを用いる細胞型特異的遺伝子移入 |
WO2004038029A1 (ja) * | 2002-10-24 | 2004-05-06 | Dnavec Research Inc. | T細胞に遺伝子を導入する方法 |
WO2008071959A1 (en) * | 2006-12-12 | 2008-06-19 | Oxford Biomedica (Uk) Limited | Lentiviral vectors comprising micrornas |
US20100316570A1 (en) * | 2009-03-10 | 2010-12-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Protection of Virus from Immune Cell Uptake |
JP2017525344A (ja) * | 2014-07-14 | 2017-09-07 | オスペダーレ サン ラファエレ エス.アール.エル | ベクター生産 |
JP2018525979A (ja) * | 2015-07-13 | 2018-09-13 | サンガモ セラピューティクス, インコーポレイテッド | ヌクレアーゼ媒介ゲノム遺伝子操作のための送達方法及び組成物 |
WO2017165245A2 (en) * | 2016-03-19 | 2017-09-28 | F1 Oncology, Inc. | Methods and compositions for transducing lymphocytes and regulated expansion thereof |
WO2017182585A1 (en) * | 2016-04-21 | 2017-10-26 | Ecole Normale Superieure De Lyon | Methods for selectively modulating the activity of distinct subtypes of cells |
WO2018088519A1 (ja) * | 2016-11-10 | 2018-05-17 | 株式会社カネカ | 遺伝子導入細胞の製造方法 |
JP2021523724A (ja) * | 2018-05-15 | 2021-09-09 | フラッグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ, インコーポレイテッド | フソソーム組成物およびその使用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20230043255A1 (en) | 2023-02-09 |
AU2019378883A8 (en) | 2021-08-05 |
WO2020102503A3 (en) | 2020-07-30 |
EP3880180A2 (en) | 2021-09-22 |
AU2019378883A1 (en) | 2021-06-03 |
WO2020102503A2 (en) | 2020-05-22 |
WO2020102503A8 (en) | 2020-06-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2022507453A (ja) | T細胞送達のためのフソソーム組成物 | |
US20220008557A1 (en) | Fusosome compositions for cns delivery | |
JP2021530985A (ja) | フソソームの組成物及びその使用 | |
US20230048166A1 (en) | Fusosome compositions for hematopoietic stem cell delivery | |
KR20210021473A (ko) | 푸소솜 조성물 및 그의 용도 | |
US20210137839A1 (en) | Compositions and methods for membrane protein delivery | |
JP2022513040A (ja) | コンパートメント特異的カーゴ送達のための組成物および方法 | |
US20210198698A1 (en) | Fusosome compositions and uses thereof | |
CA3120103A1 (en) | Fusosome compositions for t cell delivery | |
US20210353543A1 (en) | Targeted lipid particles and compositions and uses thereof | |
KR20230044420A (ko) | 바이러스 푸소좀을 생산하기 위한 방법 및 조성물 | |
TW202342757A (zh) | 經修飾副黏液病毒科附著醣蛋白 | |
TW202342498A (zh) | 經修飾副黏液病毒科融合醣蛋白 | |
WO2024064838A1 (en) | Lipid particles comprising variant paramyxovirus attachment glycoproteins and uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221114 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20221114 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20231018 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231129 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20240229 |