JPWO2020102503A5

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Publication number: JPWO2020102503A5
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Authority: JP
Publication date: 2022-11-22

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場合によっては、２００ｐｇ／ｍｌのＣ３ａが存在するフソソームの用量は、ＨＥＫ２９３マウス血清とインキュベートしたＨＥＫ２９３フソソームよりもＨＥＫ－２９３ＤＡＦマウス血清とインキュベートしたＨＥＫ２９３－ＤＡＦフソソームの方が多く、フソソームを標的とする補体活性はＨＥＫ２９３－ＤＡＦフソソームよりもＨＥＫ２９３フソソームで処理されたマウスにおいて大きいことを示す。場合によっては、２００ｐｇ／ｍｌのＣ３ａが存在するフソソームの用量は、ナイーブマウス血清とインキュベートしたＨＥＫ２９３フソソームよりもナイーブマウス血清とインキュベートしたＨＥＫ２９３－ＤＡＦフソソームの方が多く、フソソームを標的とする補体活性はＨＥＫ２９３－ＤＡＦフソソームよりもＨＥＫ２９３フソソームで処理されたマウスにおいて大きいことを示す。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
以下：
ａ）フソゲンを含む脂質二重層、並びに
ｂ）以下：
（ｉ）外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
（ｉｉ）前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された正の標的細胞特異的調節エレメント（例えば、標的細胞特異的プロモーター）とを含む核酸、を含むフソソームであって、ここで、前記正の標的細胞特異的調節エレメントは、前記正の標的細胞特異的調節エレメントを欠く以外は同様のフソソームと比較して、標的細胞におけるペイロード遺伝子の発現を増加させ、前記標的細胞は、Ｔ細胞である、フソソーム。
(項目２)
前記核酸が、前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非Ｔ細胞特異的調節エレメントである非標的細胞特異的調節エレメント（ＮＴＣＳＲＥ）を更に含み、前記ＮＴＣＳＲＥが、前記ＮＴＣＳＲＥを欠く他は同様のフソソームと比較して、非標的細胞において前記ペイロード遺伝子の発現を減少させ、任意に、前記標的細胞が第１のタイプのＴ細胞であり、前記非標的細胞が第２の異なるタイプのＴ細胞又は非Ｔ細胞であり、任意に、前記標的細胞がＴｒｅｇ細胞であり、前記非標的細胞が従来のＣＤ４＋Ｔ細胞である、項目１に記載のフソソーム。
(項目３)
以下：
ａ）フソゲンを含む脂質二重層；並びに
ｂ）以下：
（ｉ）外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
（ｉｉ）前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結されたプロモーターとを含む核酸、を含むフソソームであって、ここで、前記プロモーターが、例えば、プロモーターの配列に従って、ＩＬ２ＲＡ、ＬＲＲＣ３２、ＦＯＸＰ３、又はＩＫＺＦ２プロモーターから選択される、フソソーム。
(項目４)
以下：
ａ）フソゲンを含む脂質二重層；並びに
ｂ）以下：
（ｉ）外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
（ｉｉ）前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非Ｔ細胞特異的調節エレメントである非標的細胞特異的調節エレメント（ＮＴＣＳＲＥ）とを含む核酸、を含むフソソームであって、前記ＮＴＣＳＲＥが、前記ＮＴＣＳＲＥを欠く以外は同様のフソソームと比較して、非標的細胞又は組織において前記ペイロード遺伝子の発現を減少させる、フソソーム。
(項目５)
前記核酸が、前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された正の標的細胞特異的調節エレメント（例えば、標的細胞特異的プロモーター）を更に含み、前記正の標的細胞特異的調節エレメントが、前記正の標的細胞特異的調節エレメントを欠く他は同様のフソソームと比較して、標的細胞における前記ペイロード遺伝子の発現を増加させ、前記標的細胞が、Ｔ細胞である、項目４に記載のフソソーム。
(項目６)
以下：
（ｉ）前記脂質二重層上の第１の外因性若しくは過剰発現された免疫抑制タンパク質、又は
（ｉｉ）存在しないか若しくは低下したレベルで存在する第１の免疫賦活タンパク質、のいずれか又は両方を更に含み、任意に、前記低下したレベルが、他の点は同様の未改変ソース細胞から生成されたフソソームと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は、９０％の低下である、項目１～５のいずれかに記載のフソソーム。
(項目７)
前記ペイロード遺伝子が、Ｔ細胞関連疾患又は障害を治療する遺伝子である、項目１～６のいずれかに記載のフソソーム。
(項目８)
フソソームであって、
ａ）フソゲンを含む脂質二重層と、
ｂ）Ｔ細胞関連疾患又は障害を治療するための外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子を含む核酸と、
ｃ）以下のうちの１つ又は両方：
（ｉ）脂質二重層上の第１の外因性の若しくは過剰発現された免疫抑制タンパク質；又は
（ｉｉ）存在しないか若しくは他の点では同様の未改変ソース細胞から生成されたフソソームと比較して、低下したレベル（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％まで低下）で存在する第１の免疫賦活タンパク質とを含む、フソソーム。
(項目９)
（ｉ）及び（ｉｉ）を含む、項目６～８のいずれかに記載のフソソーム。
(項目１０)
（ｉ）を含み、前記脂質二重層上に第２の外因性又は過剰発現された免疫抑制タンパク質を更に含む、項目６～９のいずれかに記載のフソソーム。
(項目１１)
（ｉｉ）を含み、更に、存在しないか若しくは低下したレベルで存在する第２の免疫賦活タンパク質を含み、任意に、前記低下したレベルが、他の点では同様の未改変ソース細胞から生成されたフソソームと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は、９０％の低下である、項目６～１０のいずれかに記載のフソソーム。
(項目１２)
前記核酸が、前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された正の標的細胞特異的調節エレメント（例えば、標的細胞特異的プロモーター）を更に含み、前記正の標的細胞特異的調節エレメントが、前記正の標的細胞特異的調節エレメントを欠く他は同様のフソソームと比較して、標的細胞における前記ペイロード遺伝子の発現を増加させ、前記標的細胞が、Ｔ細胞である、項目８～１１のいずれかに記載のフソソーム。
(項目１３)
前記核酸が、前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非Ｔ細胞特異的調節エレメントである非標的細胞特異的調節エレメント（ＮＴＣＳＲＥ）を更に含み、前記非Ｔ細胞特異的調節エレメントが、前記ＮＴＣＳＲＥを欠く他は同様のフソソームと比較して、非標的細胞又は組織において前記ペイロード遺伝子の発現を減少させ、任意に、前記標的細胞が第１のタイプのＴ細胞であり、前記非標的細胞が第２の異なるタイプのＴ細胞又は非Ｔ細胞であり、任意に、前記標的細胞がＴｒｅｇ細胞であり、前記非標的細胞が従来のＣＤ４＋Ｔ細胞である、項目６～１０のいずれかに記載のフソソーム。
(項目１４)
被験体に投与される場合、以下：
ｉ）前記フソソームが検出可能な抗体応答を生じないか、又は前記フソソームに対する抗体が、例えば、バックグラウンドレベルより１０％未満、５％、４％、３％、２％、若しくは１％超のレベルで存在する、
ｉｉ）前記フソソームが、検出可能な細胞性免疫応答を生じないか、又は前記フソソームに対する細胞性免疫応答がバックグラウンドレベルの１０％未満、５％、４％、３％、２％、若しくは１％超のレベルで存在する、
ｉｉｉ）前記フソソームが、検出可能な先天性免疫応答、例えば補体活性化を生じないか、又は前記フソソームに対する先天性免疫応答がバックグラウンドレベルの１０％未満、５％、４％、３％、２％、若しくは１％超のレベルで存在する、
ｉｖ）フソソームの１０％、５％、４％、３％、２％、若しくは１％未満が血清によって不活化される、
ｖ）前記フソソームから前記外因性作用物質を受容した標的細胞が検出可能な抗体応答を生じず、又は前記標的細胞に対する抗体がバックグラウンドレベルの１０％未満、５％、４％、３％、２％、若しくは１％超のレベルで存在する、或いは
ｖｉ）前記フソソームから前記外因性作用物質を受容した標的細胞が検出可能な細胞性免疫応答を生じないか、又は前記標的細胞に対する細胞性応答がバックグラウンドレベルの１０％未満、５％、４％、３％、２％、若しくは１％超のレベルで存在する、の１つ又は複数である、項目６～１３のいずれかに記載のフソソーム。
(項目１５)
前記バックグラウンドレベルが、前記フソソームの投与前の同じ被験体における対応するレベルである、項目１４に記載のフソソーム。
(項目１６)
前記免疫抑制タンパク質が、補体調節タンパク質又はＣＤ４７である、項目６～１５のいずれかに記載のフソソーム。
(項目１７)
前記免疫賦活タンパク質が、ＭＨＣＩ又はＭＨＣＩＩタンパク質である、項目６～１６のいずれかに記載のフソソーム。
(項目１８)
以下の１つ以上である、項目１～１７のいずれかに記載のフソソーム：
ｉ）前記フソソームが、非Ｔ細胞とよりもＴ細胞と高い割合で融合し、任意に、前記高い割合が、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、若しくは１００倍である、
ｉｉ）前記フソソームが、別のフソソームとよりもＴ細胞と高い割合で融合し、任意に、前記高い割合が、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、若しくは９０％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、又は１００倍である、
ｉｉｉ）前記フソソームが、前記フソソーム内の作用物質が、２４、４８、又は７２時間後に、Ｔ細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、若しくは９０％まで送達されるような速度でＴ細胞と融合する、
ｉｖ）前記フソソームが、非標的細胞よりＴ細胞に高い割合で前記核酸を送達し、任意に、前記高い割合が、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、若しくは１００倍である、
ｖ）前記フソソームが、別のフソソームよりもＴ細胞に高い割合で前記核酸を送達し、任意に、前記高い割合が、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、若しくは９０％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、若しくは１００倍である、又は
ｖｉ）前記フソソーム中の作用物質が、２４、４８、又は７２時間後にＴ細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、若しくは９０％に送達されるような割合で、前記フソソームがＴ細胞に前記核酸を送達する。
(項目１９)
前記外因性作用物質が、毛包ケラチノサイト抗原、メラノサイト抗原、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、細胞間接着分子１、グルテン、ＰＤＧＦ、細菌のフラジェリン、ＦＡＭ８４Ａ、アルファ（２）－ＨｅｒｅｍａｎｓＳｃｈｍｉｄｔ糖タンパク質（アルファ（２）－ＨＳＧ）、トランスフェリン、炭酸アンヒドラーゼ、食品ベースの抗原、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、甲状腺ペルオキシダーゼ、サイログロブリン、ＴＳＨ受容体、アルファエノラーゼ、アルファｂ－クリスタリン、ベータアレスチン、Ｓ１００－ベータ、アクアポリン－４、ＭＯＧ、ＰＬＰ、ＭＢＰ、ｎＡＣｈＲ、ＭｕＳＫ、ＮＣ１６Ａ末端ＢＰＡＧ１／２、デスモグレイン１、デスモグレイン３、ＢＰＡＧ１、プレクチン、デスモプラキンＩ、デスモプラキンＩＩ、エンボプラキン、ペリプラキン、アルファ－２－マクログロブリン様－１、シトルリン化ペプチド、非自己抗原、ｄｓＤＮＡ、ヌクレオソームヒストン、テロメア、Ｓｍコアタンパク質、ｈｓｐ６０、４３７－４６０（ｐ２７７）、ＰＰＩｎｓ／Ｐｉｎｓ、抗インスリン抗原、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、カルボキシペプチダーゼＨ、インスリノーマ抗原－２、ＩＡ－２β、又は好中球顆粒球の細胞質内の抗原から選択される抗原に結合する結合部分（例えば、ＣＡＲ分子）である、項目１～１８のいずれかに記載のフソソーム。
(項目２０)
前記フソゲンがＴ細胞を標的とし、任意に、Ｔ細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、アルファベータＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞）、制御性Ｔ細胞（例えば、胸腺由来制御性Ｔ細胞、末梢由来制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞、又はＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－１型制御性Ｔ（Ｔｒ１）細胞）、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ３細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、又はＴ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞）、メモリーＴ細胞（例えば、幹細胞メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、又はエフェクターメモリーＴ細胞）、ＮＫＴ細胞、又は粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞である、項目１～１９のいずれかに記載のフソソーム。
(項目２１)
前記フソゲンが、ウイルスエンベロープタンパク質である、項目１～２０のいずれかに記載のフソソーム。
(項目２２)
前記フソゲンがＶＳＶ－Ｇを含む、項目１～２１のいずれかに記載のフソソーム。
(項目２３)
前記フソゲンが、ニパウイルスＦ及びＧタンパク質、麻疹ウイルスＦ及びＨタンパク質、ツパイアパラミクソウイルスＦ及びＨタンパク質、パラミクソウイルスＦ及びＧタンパク質若しくはＦ及びＨタンパク質若しくはＦ及びＨＮタンパク質、ヘンドラウイルスＦ及びＧタンパク質、ヘニパウイルスＦ及びＧタンパク質、モルビリウイルスＦ及びＨタンパク質、レスピロウイルスＦ及びＨＮタンパク質、センダイウイルスＦ及びＨＮタンパク質、ルブラウイルスＦ及びＨＮタンパク質、又はアブラウイルスＦ及びＨＮタンパク質、又はそれらの誘導体、又はそれらの任意の組み合わせから選択される配列を含む、項目１～２２のいずれかに記載のフソソーム。
(項目２４)
前記フソゲンが、野生型パラミクソウイルスフソゲンに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する、少なくとも１００アミノ酸長のドメインを含み、任意に、前記野生型パラミクソウイルスフソゲンが、配列番号１～１３３のいずれか１つに記載されている、項目１～２３のいずれかに記載のフソソーム。
(項目２５)
前記野生型パラミクソウイルスがニパウイルスであり、任意に、前記ニパウイルスがヘニパウイルスである、項目２４に記載のフソソーム。
(項目２６)
前記フソゲンが、Ｔ細胞への送達のために再標的化され、任意に、前記Ｔ細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、アルファベータＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞）、制御性Ｔ細胞（例えば、胸腺由来制御性Ｔ細胞、末梢由来制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞、又はＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－１型制御性Ｔ（Ｔｒ１）細胞）、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ３細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、又はＴ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞）、メモリーＴ細胞（例えば、幹細胞メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、又はエフェクターメモリーＴ細胞）、ＮＫＴ細胞、又は粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞である、項目１～２５のいずれかに記載のフソソーム。
(項目２７)
前記正の標的細胞特異的調節エレメントが、Ｔ細胞特異的プロモーター、Ｔ細胞特異的エンハンサー、Ｔ細胞特異的スプライス部位、ＲＮＡ又はタンパク質の半減期を延長するＴ細胞特異的部位、Ｔ細胞特異的ｍＲＮＡ核外輸送促進部位、Ｔ細胞特異的翻訳増強部位、又はＴ細胞特異的翻訳後修飾部位を含む、項目１、２、５、６、７及び１２～２２のいずれかに記載のフソソーム。
(項目２８)
前記正の標的細胞特異的調節エレメントがＴ細胞特異的プロモーターを含む、項目１、２、５、６、７及び１２～２２のいずれかに記載のフソソーム。
(項目２９)
前記正のＴ細胞特異的調節エレメントが、ＩＬ２ＲＡ、ＬＲＲＣ３２、ＦＯＸＰ３、又はＩＫＺＦ２プロモーターから選択されるプロモーターを含む、項目２７又は２８に記載のフソソーム。
(項目３０)
前記ＮＴＣＳＲＥが、非標的細胞特異的ｍｉＲＮＡ認識配列、非標的細胞特異的プロテアーゼ認識部位、非標的細胞特異的ユビキチンリガーゼ部位、非標的細胞特異的転写抑制部位、又は非標的細胞特異的エピジェネティック抑制部位を含む、項目２、４～７、又は１３～２９のいずれかに記載のフソソーム。
(項目３１)
前記ＮＴＣＳＲＥが、組織特異的ｍｉＲＮＡ認識配列、組織特異的プロテアーゼ認識部位、組織特異的ユビキチンリガーゼ部位、組織特異的転写抑制部位又は組織特異的エピジェネティック抑制部位を含む、項目２、４～７、又は１３～３０のいずれかに記載のフソソーム。
(項目３２)
前記ＮＴＣＳＲＥが、非標的細胞特異的ｍｉＲＮＡ認識配列、非標的細胞特異的プロテアーゼ認識部位、非標的細胞特異的ユビキチンリガーゼ部位、非標的細胞特異的転写抑制部位、又は非標的細胞特異的エピジェネティック抑制部位を含む、項目２、４～７、又は１３～３１のいずれかに記載のフソソーム。
(項目３３)
前記ＮＴＣＳＲＥが、非標的細胞特異的ｍｉＲＮＡ認識配列を含み、前記ｍｉＲＮＡ認識配列が、ｍｉＲ３１、ｍｉＲ３６３、又はｍｉＲ２９ｃの１つ以上によって結合され得る、項目２、４～７、又は１３～３２のいずれかに記載のフソソーム。
(項目３４)
前記ＮＴＣＳＲＥが外因性作用物質をコードする転写領域内に位置するか又はコードされており、任意に、前記転写領域によって産生されるＲＮＡがＵＴＲ又はコード領域内のｍｉＲＮＡ認識配列を含む、項目３０～３３のいずれかに記載のフソソーム。
(項目３５)
前記核酸が１つ以上のインスレーター配列を含む、項目１～３４のいずれかに記載のフソソーム。
(項目３６)
前記核酸が２つのインスレーター配列を含み、任意に、前記２つのインスレーター配列が前記ペイロード遺伝子の上流の第１のインスレーター配列及び前記ペイロード遺伝子の下流の第２のインスレーター配列を含み、任意に、前記第１のインスレーター配列及び第２のインスレーター配列が、同一又は異なる配列を含む、項目３５に記載のフソソーム。
(項目３７)
前記フソソームがレトロウイルスベクター粒子である、項目１～３６のいずれかに記載のフソソーム。
(項目３８)
前記核酸がＴ細胞のゲノムに組み込まれることができる、項目１～３７のいずれかに記載のフソソーム。
(項目３９)
前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、アルファベータＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞）、制御性Ｔ細胞（例えば、胸腺由来制御性Ｔ細胞、末梢由来制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞、又はＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－１型制御性Ｔ（Ｔｒ１）細胞）、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ３細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、又はＴ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞）、メモリーＴ細胞（例えば、幹細胞メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、又はエフェクターメモリーＴ細胞）、ＮＫＴ細胞、又は粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞から選択される、項目１～３８のいずれかに記載のフソソーム。
(項目４０)
項目１～３９のいずれかに記載のフソソームと、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む、医薬組成物。
(項目４１)
項目１～３９のいずれかに記載のフソソーム又は項目４０の医薬組成物を被験体に投与し、それにより外因性作用物質を前記被験体に送達することを含む、外因性作用物質を被験体に送達する方法。
(項目４２)
被験体又はＴ細胞において、機能を調節する方法であって、前記被験体のＴ細胞を、項目１～３９のいずれかに記載のフソソーム又は項目４０に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。
(項目４３)
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、アルファベータＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞）、制御性Ｔ細胞（例えば、胸腺由来制御性Ｔ細胞、末梢由来制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞、又はＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－１型制御性Ｔ（Ｔｒ１）細胞）、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ３細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、又はＴ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞）、メモリーＴ細胞（例えば、幹細胞メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、又はエフェクターメモリーＴ細胞）、ＮＫＴ細胞、又は粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞である、項目４２に記載の方法。
(項目４４)
前記Ｔ細胞が被験体に存在する、項目４２又は項目４３に記載の方法。
(項目４５)
被験体において疾患又は障害を治療する方法であって、項目１～３９のいずれかに記載のフソソーム又は項目４０の医薬組成物を前記被験体に投与することを含む、方法。
(項目４６)
前記疾患又は障害が、前記外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子によって治療することができる疾患又は障害である、項目４５に記載の方法。
(項目４７)
前記疾患又は障害が、急性ＧｖＨＤ、円形脱毛症、自己免疫性ブドウ膜炎、セリアック病、慢性ＧｖＨＤ、クローン病、子宮内膜症、好酸球性食道炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、類天疱瘡、天疱瘡、関節リウマチ、臓器移植、全身性エリテマトーデス、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎から選択される、項目４５又は項目４６に記載の方法。
(項目４８)
前記被験体がヒト被験体である、項目４１～４７のいずれかに記載の方法。
(項目４９)
疾患又は障害を治療する際に使用するための、項目１～３９のいずれかに記載のフソソーム又は項目４０に記載の医薬組成物。
(項目５０)
疾患又は障害を治療する際に使用するための薬剤を製造するための、項目１～３９のいずれかに記載のフソソーム又は項目４０に記載の医薬組成物の使用。
(項目５１)
前記疾患又は障害が、前記外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子によって治療することができる、項目４９に記載の使用のためのフソソーム又は医薬組成物、又は項目５０に記載の使用。
(項目５２)
前記疾患又は障害が、急性ＧｖＨＤ、円形脱毛症、自己免疫性ブドウ膜炎、セリアック病、慢性ＧｖＨＤ、クローン病、子宮内膜症、好酸球性食道炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、類天疱瘡、天疱瘡、関節リウマチ、臓器移植、全身性エリテマトーデス、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎である、項目４９又は項目５１に記載の使用のためのフソソーム又は医薬組成物、或いは項目５０又は項目５１に記載の使用。
(項目５３)
以下：
ａ）前記核酸及び前記フソゲンを含む細胞を提供すること、
ｂ）フソソームの産生を可能にする条件下で上記細胞を培養すること、並びに
ｃ）前記細胞からフソソームを分離、濃縮、又は精製し、それによってフソソームを作製することを含む、項目１～３９のいずれかに記載のフソソームを作製する方法。

Claims

以下：
ａ）フソゲンを含む脂質二重層、並びに
ｂ）以下：
外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
（ｉ）前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された正の標的細胞特異的調節エレメントであって、ここで、前記正の標的細胞特異的調節エレメントは、前記正の標的細胞特異的調節エレメントを欠く以外は同様のフソソームと比較して、標的細胞におけるペイロード遺伝子の発現を増加させ、前記標的細胞は、Ｔ細胞である、正の標的細胞特異的調節エレメント、および／または
（ｉｉ）前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非Ｔ細胞特異的調節エレメントである非標的細胞特異的調節エレメント（ＮＴＣＳＲＥ）であって、前記ＮＴＣＳＲＥが、前記ＮＴＣＳＲＥを欠く他は同様のフソソームと比較して、非標的細胞において前記ペイロード遺伝子の発現を減少させる、非標的細胞特異的調節エレメント（ＮＴＣＳＲＥ）
とを含む核酸を含み、
（ｉ）前記フソゲンがパラミクソウイルスフソゲンであるか、または
（ｉｉ）前記フソソームがターゲティングドメインを含む、
フソソーム。
前記標的細胞が第１のタイプのＴ細胞であり、前記非標的細胞が第２の異なるタイプのＴ細胞又は非Ｔ細胞である、請求項１に記載のフソソーム。
以下：
ａ）フソゲンを含む脂質二重層；並びに
ｂ）以下：
（ｉ）外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子と、
（ｉｉ）前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結されたプロモーターとを含む核酸、を含むフソソームであって、ここで、前記プロモーターが、ＩＬ２ＲＡ、ＬＲＲＣ３２、ＦＯＸＰ３、又はＩＫＺＦ２プロモーターから選択される、フソソーム。
以下：
（ｉ）前記フソソームが前記脂質二重層上の第１の外因性若しくは過剰発現された免疫抑制タンパク質をさらに含む、および／又は
（ｉｉ）第１の免疫賦活タンパク質が前記フソソームに存在しないか若しくは前記フソソームが、低下したレベルで存在する第１の免疫賦活タンパク質を更に含み、任意に、前記低下したレベルが、他の点は同様の未改変ソース細胞から生成されたフソソームと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は、９０％の低下である、請求項１～３のいずれかに記載のフソソーム。
フソソームであって、
ａ）フソゲンを含む脂質二重層と、
ｂ）外因性作用物質をコードするペイロード遺伝子を含む核酸と、
ｃ）以下のうちの１つ又は両方：
（ｉ）脂質二重層上の第１の外因性の若しくは過剰発現された免疫抑制タンパク質；又は
（ｉｉ）存在しないか若しくは他の点では同様の未改変ソース細胞から生成されたフソソームと比較して、低下したレベルで存在する第１の免疫賦活タンパク質とを含む、フソソーム。
前記核酸が、前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された正の標的細胞特異的調節エレメント（例えば、標的細胞特異的プロモーター）を更に含み、前記正の標的細胞特異的調節エレメントが、前記正の標的細胞特異的調節エレメントを欠く他は同様のフソソームと比較して、標的細胞における前記ペイロード遺伝子の発現を増加させ、前記標的細胞が、Ｔ細胞である、および／または
前記核酸が、前記ペイロード遺伝子に作動可能に連結された非Ｔ細胞特異的調節エレメントである非標的細胞特異的調節エレメント（ＮＴＣＳＲＥ）を更に含み、前記非Ｔ細胞特異的調節エレメントが、前記ＮＴＣＳＲＥを欠く他は同様のフソソームと比較して、非標的細胞又は組織において前記ペイロード遺伝子の発現を減少させ、任意に、前記標的細胞が第１のタイプのＴ細胞であり、前記非標的細胞が第２の異なるタイプのＴ細胞又は非Ｔ細胞である、
請求項５に記載のフソソーム。
前記免疫抑制タンパク質が、補体調節タンパク質又はＣＤ４７である、および／または
前記免疫賦活タンパク質が、ＭＨＣＩもしくＭＨＣＩＩタンパク質である、
請求項４～６のいずれかに記載のフソソーム。
前記外因性作用物質がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはキメラ自己抗体（ＣＡＡＲ）である、請求項１～７のいずれかに記載のフソソーム。
前記外因性作用物質がＣＡＲである、前記ＣＡＲがＢ細胞抗原、自己抗原、新生細胞に特徴的な抗原または感染症に特徴的な抗原である抗原を標的とする、請求項１～８のいずれか一項に記載のフソソーム。
前記Ｔ細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、アルファベータＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞）、制御性Ｔ細胞（例えば、胸腺由来制御性Ｔ細胞、末梢由来制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞、又はＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－１型制御性Ｔ（Ｔｒ１）細胞）、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ３細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、又はＴ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞）、メモリーＴ細胞（例えば、幹細胞メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、又はエフェクターメモリーＴ細胞）、ＮＫＴ細胞、又は粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞である、請求項１～９のいずれかに記載のフソソーム。
前記Ｔ細胞がＴｒｅｇである、請求項１～１０のいずれかに記載のフソソーム。
前記フソゲンが、ウイルスエンベロープタンパク質である、請求項１～１１のいずれかに記載のフソソーム。
前記フソゲンがＶＳＶ－Ｇを含むか、または
前記フソゲンがパラミクソウイルスフソゲンである、
請求項１～１２のいずれかに記載のフソソーム。
前記フソゲンがパラミクソウイルスフソゲンであり、パラミクソウイルスフソゲンＦおよびＧタンパク質またはＦおよびＨタンパク質またはＦおよびＨＮタンパク質から選択される配列を含む、請求項１～１３のいずれかに記載のフソソーム。
前記フソゲンが、ニパウイルスＦ及びＧタンパク質、麻疹ウイルスＦ及びＨタンパク質、ツパイアパラミクソウイルスＦ及びＨタンパク質、ヘンドラウイルスＦ及びＧタンパク質、ヘニパウイルスＦ及びＧタンパク質、モルビリウイルスＦ及びＨタンパク質、レスピロウイルスＦ及びＨＮタンパク質、センダイウイルスＦ及びＨＮタンパク質、ルブラウイルスＦ及びＨＮタンパク質、又はアブラウイルスＦ及びＨＮタンパク質、又はそれらの誘導体、又はそれらの任意の組み合わせから選択される配列を含む、請求項１４に記載のフソソーム。
前記フソゲンが、ニパウイルスＦ及びＧタンパク質から選択される配列を含む、請求項１４または請求項１５に記載のフソソーム。
前記フソゲンが、前記Ｔ細胞への送達のために再標的化される、請求項１～１６のいずれかに記載のフソソーム。
前記正の標的細胞特異的調節エレメントが、Ｔ細胞特異的プロモーター、Ｔ細胞特異的エンハンサー、Ｔ細胞特異的スプライス部位、ＲＮＡ又はタンパク質の半減期を延長するＴ細胞特異的部位、Ｔ細胞特異的ｍＲＮＡ核外輸送促進部位、Ｔ細胞特異的翻訳増強部位、又はＴ細胞特異的翻訳後修飾部位を含む、請求項１、２、４および６～１７のいずれかに記載のフソソーム。
前記正の標的細胞特異的調節エレメントがＴ細胞特異的プロモーターを含む、請求項１、２、４および６～１８のいずれかに記載のフソソーム。
前記Ｔ細胞特異的プロモーターが、
ＣＤ３δプロモーター、ＣＤ２プロモーター、チロシンープロテインキナーゼＬｃｋプロモーター、ＩＣＯＳプロモーター、ＣＤ２８プロモーター、ＴＧＦ７プロモーター、もしくはＴＣＲＶβ８．１プロモーター、または
ＣＤ８プロモーターもしくはＧＺＭＢプロモーター、または
ＣＤ４プロモーター
である、請求項１９に記載のフソソーム。
前記Ｔ細胞特異的プロモーターが、ＩＬ２ＲＡプロモーター、ＬＲＲＣ３２プロモーター、ＦＯＸＰ３プロモーター、又はＩＫＺＦ２プロモーターである、請求項１８～２０のいずれか一項に記載のフソソーム。
前記ＮＴＣＳＲＥが、非標的細胞特異的ｍｉＲＮＡ認識配列、非標的細胞特異的プロテアーゼ認識部位、非標的細胞特異的ユビキチンリガーゼ部位、非標的細胞特異的転写抑制部位、もしくは非標的細胞特異的エピジェネティック抑制部位を含む、および／または
前記ＮＴＣＳＲＥが、非標的細胞特異的ｍｉＲＮＡ認識配列を含み、前記ｍｉＲＮＡ認識配列が、ｍｉＲ３１、ｍｉＲ３６３、もしくはｍｉＲ２９ｃの１つ以上によって結合され得る、および／または
前記ＮＴＣＳＲＥが前記外因性作用物質をコードする転写領域内に位置するか又はコードされており、任意に、前記転写領域によって産生されるＲＮＡがＵＴＲもしくはコード領域内の前記ｍｉＲＮＡ認識配列を含む、
請求項１、２、４および６～２１のいずれかに記載のフソソーム。
前記核酸が１つ以上のインスレーター配列を含む、請求項１～２２のいずれかに記載のフソソーム。
前記核酸が２つのインスレーター配列を含み、任意に、前記２つのインスレーター配列が前記ペイロード遺伝子の上流の第１のインスレーター配列及び前記ペイロード遺伝子の下流の第２のインスレーター配列を含み、任意に、前記第１のインスレーター配列及び第２のインスレーター配列が、同一又は異なる配列を含む、請求項２３に記載のフソソーム。
前記フソソームがレトロウイルスベクター粒子である、請求項１～２４のいずれかに記載のフソソーム。
前記フソソームがレンチウイルスベクター粒子である、請求項１～２５のいずれかに記載のフソソーム。
請求項１～２６のいずれかに記載のフソソームと、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む、医薬組成物。
外因性作用物質を被験体に送達し、それにより前記外因性作用物質を前記被験体に送達する方法における使用のための、請求項１～２６のいずれか一項に記載の複数のフソソームを含むフソソーム組成物又は請求項２７の医薬組成物。
前記外因性作用物質が前記被験体のＴ細胞に送達される、請求項２８に記載の使用のためのフソソーム組成物又は医薬組成物。
被験体又は被験体のＴ細胞において、機能を調節する方法における使用のための、請求項１～２６のいずれか一項に記載の複数のフソソームを含むフソソーム組成物又は請求項２７に記載の医薬組成物。
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、アルファベータＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞）、制御性Ｔ細胞（例えば、胸腺由来制御性Ｔ細胞、末梢由来制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞、又はＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－１型制御性Ｔ（Ｔｒ１）細胞）、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ３細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、又はＴ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞）、メモリーＴ細胞（例えば、幹細胞メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、又はエフェクターメモリーＴ細胞）、ＮＫＴ細胞、又は粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞である、請求項３０に記載の使用のためのフソソーム組成物又は医薬組成物。
前記Ｔ細胞が調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である、請求項３０または請求項３１に記載の使用のためのフソソーム組成物又は医薬組成物。
前記Ｔ細胞が被験体に存在する、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の使用のためのフソソーム組成物又は医薬組成物。
被験体における疾患又は障害を治療する際に使用するための、請求項１～２６のいずれかに記載のフソソームを含む組成物又は請求項２７に記載の医薬組成物。
被験体における疾患又は障害を治療する際に使用するための薬剤を製造するための、請求項１～２６のいずれかに記載のフソソーム又は請求項２７に記載の医薬組成物の使用。
前記疾患または障害は、癌、自己免疫疾患、感染症、代謝性疾患、神経変性疾患、又は遺伝性疾患である、請求項３４に記載の使用のための組成物もしくは医薬組成物または請求項３５に記載の使用。
前記疾患又は障害が、急性ＧｖＨＤ、円形脱毛症、自己免疫性ブドウ膜炎、セリアック病、慢性ＧｖＨＤ、クローン病、子宮内膜症、好酸球性食道炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、類天疱瘡、天疱瘡、関節リウマチ、臓器移植、全身性エリテマトーデス、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎である、請求項３４又は請求項３６に記載の使用のための組成物又は医薬組成物、或いは請求項３５又は請求項３６に記載の使用。
前記被験体はヒト被験体である、請求項２８～３３のいずれか一項に記載のフソソーム組成物もしくは医薬組成物、請求項３４、３６および３７のいずれかに記載の組成物もしくは医薬組成物または請求項３５～３７のいずれか一項に記載の使用。
以下：
ａ）前記核酸及び前記フソゲンを含む細胞を提供すること、
ｂ）フソソームの産生を可能にする条件下で上記細胞を培養すること、並びに
ｃ）前記細胞からフソソームを分離、濃縮、又は精製し、それによってフソソームを作製することを含む、請求項１～２６のいずれかに記載のフソソームを作製する方法。