ES2703173T3 - Composición de uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas - Google Patents
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Abstract
Una composición de uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas, composición hecha de: a) materias primas que comprenden: i) Ganoderma, ii) Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, iii) Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, iv) Flos rosae rugosae y, opcionalmente, v) uno o más de entre esporas de Ganoderma en polvo, aceite de esporas de Ganoderma, Radix pseudostellariae, Folium ginseng, Radix codonopsis y Radix astragali; y opcionalmente, b) agente/s auxiliar/es o excipiente/s que es/son aceptable/s en productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos.
Description
DESCRIPCIÓN
Composición de uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas
Campo técnico
La presente invención se refiere a una composición para la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas y al uso de la misma.
Técnica antecedente
La solicitud de patente CN1509760A divulga un medicamento para la prevención y el tratamiento adyuvante del cáncer fabricada con las materias primas de Cordyceps sinensis en polvo fermentado, Ganoderma y Fructus lycii, que funciona para mejorar la inmunidad y regular el sistema endocrino, y también desempeña un papel en la limpieza de los radicales libres perjudiciales para el organismo y en la prevención de la recurrencia del tumor. La solicitud de patente CN102228252A divulga una composición de la medicina tradicional china con de 5 a 150 partes en peso de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, de 5 a 160 partes en peso de Ganoderma y de 1 a 90 partes en peso de Cordyceps sinensis en polvo fermentado, que funciona para aliviar la fatiga física. La solicitud de patente CN102000129A divulga una composición farmacéutica que comprende polisacáridos de Cordyceps o Cordyceps sinensis en polvo fermentado, Ganoderma y Radix panacis quinquefolii, que funciona para mejorar la inmunidad. Hasta ahora, ningún informe ni literatura ha demostrado que una composición hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps funcione para prevenir y tratar enfermedades alérgicas.
Sumario de la Invención
El objetivo de la presente invención es proporcionar una composición para la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas y su método de preparación.
La presente invención se define en las reivindicaciones. De acuerdo con la presente divulgación que comprende la invención, se seleccionan y combinan las materias primas Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, y sorprendentemente, se encontró que dicha composición o productos fabricados a partir de la misma eran capaces de prevenir y tratar enfermedades alérgicas.
Se proporciona el uso de una composición que comprende Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, una composición hecha de materias primas que comprenden Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, o una composición hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, en la fabricación de productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos para la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas. Se proporciona el uso de una composición preparada mediante la adición de uno cualquiera o más componentes de Flos rosae rugosae, esporas de Ganoderma en polvo, aceite de esporas de Ganoderma, Radix pseudostellariae, Folium ginseng, Radix codonopsis y Radix astragali a una composición que comprende Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, o a una composición hecha de materias primas que comprenden Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, o a una composición hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, en la fabricación de productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos para la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas.
Se proporciona el uso de una composición que comprende Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, una composición hecha de materias primas que comprenden Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, o una composición hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, en la fabricación de productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos para la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas.
Se proporciona el uso de una composición preparada mediante la adición de uno cualquiera o más componentes de esporas de Ganoderma en polvo, aceite de esporas de Ganoderma, Radix pseudostellariae, Folium ginseng, Radix codonopsis y Radix astragali a una composición que comprende Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos Rosae Rugosae, o a una composición hecha de materias primas que comprenden Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, o a una composición hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, en la fabricación de productos para el cuidado de la salud, medicamentos o
productos para la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas.
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Se proporciona el uso de una composición preparada mediante la adición de uno cualquiera o más componentes de Flos rosae rugosae, esporas de Ganoderma en polvo, aceite de esporas de Ganoderma, Radix pseudostellariae, Folium ginseng, Radix codonopsis y Radix astragali a una composición que comprende Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, o a una composición hecha de materias primas que comprenden Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, o a una composición hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, en la fabricación de productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos para la prevención y el tratamiento de la rinitis alérgica.
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Se proporciona el uso de una composición preparada mediante la adición de uno cualquiera o más componentes de esporas de Ganoderma en polvo, aceite de esporas de Ganoderma, Radix pseudostellariae, Folium ginseng, Radix codonopsis y Radix astragali a una composición que comprende Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos Rosae Rugosae, o a una composición hecha de materias primas que comprenden Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, o a una composición hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, en la fabricación de productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos para la prevención y el tratamiento de la dermatitis alérgica.
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Se proporciona el uso de una composición que comprende Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, una composición hecha de materias primas que comprenden Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, o una composición hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, en la fabricación de productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos para la prevención y el tratamiento de la urticaria. Se proporciona el uso de una composición preparada mediante la adición de uno cualquiera o más componentes de esporas de Ganoderma en polvo, aceite de esporas de Ganoderma, Radix pseudostellariae, Folium ginseng, Radix codonopsis y Radix astragali a una composición que comprende Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos Rosae Rugosae, o a una composición hecha de materias primas que comprenden Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, o a una composición hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, en la fabricación de productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos para la prevención y el tratamiento de la urticaria.
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Se proporciona el uso de una composición preparada mediante la adición de uno cualquiera o más componentes de esporas de Ganoderma en polvo, aceite de esporas de Ganoderma, Radix pseudostellariae, Folium ginseng, Radix codonopsis y Radix astragali a una composición que comprende Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos Rosae Rugosae, o a una composición hecha de materias primas que comprenden Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, o a una composición hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y Flos rosae rugosae, en la fabricación de productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos para la prevención y el tratamiento del asma alérgico.
El término "productos" en los "productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos" mencionados anteriormente incluye aquellos que no están incluidos en los "productos para el cuidado de la salud" o "medicamentos", incluyendo los artículos que usan la composición de acuerdo con la presente invención, por ejemplo, aceites esenciales, productos de incienso y almohadas.
Preferentemente, la composición para su uso de acuerdo con la presente invención para la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas está hecha de las siguientes materias primas en partes en peso: de 5 a 200 partes de Ganoderma, de 5 a 150 partes de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, de 1 a 90 partes de Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o de 1 a 120 partes de Cordyceps y de 5 a 90 partes en peso de Flos rosae rugosae.
Se prefiere de 20 a 120 partes de Ganoderma, de 10 a 90 partes de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, de 3 a 60 partes de Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o de 3 a 90 partes de Cordyceps.
Se prefieren más 40 partes de Ganoderma, 30 partes de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, 20 partes de Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o 6,7 partes de Cordyceps.
La composición para su uso de acuerdo con la presente invención puede comprender además las siguientes materias adicionales que no comprometen la eficacia de la presente invención, o extractos de agua y/o alcohol de estas materias adicionales, en partes en peso: uno o más de 5 a 90 partes de Flos rosae rugosae, de 5 a 150 partes de esporas de Ganoderma en polvo, de 1 a 90 partes de aceite de esporas de Ganoderma, de 10 a 400 partes de Radix pseudostellariae, de 1 a 120 partes de Folium ginseng, de 3 a 400 partes de Radix codonopsis y de 3 a 400 partes de Radix astragali, o cualquiera de sus combinaciones.
Se prefieren uno o más de 10 a 60 partes de Flos rosae rugosae, de 10 a 120 partes de esporas de Ganoderma en polvo, de 10 a 60 partes de aceite de esporas de Ganoderma, de 20 a 200 partes de Radix pseudostellariae, de 20 a 90 partes de Folium ginseng, de 20 a 200 partes de Radix codonopsis y de 20 a 200 partes de Radix astragali, o cualquiera de sus combinaciones.
Se prefieren más uno o más de 30 partes de Flos rosae rugosae, 30 partes de esporas de Ganoderma en polvo, 20 partes de aceite de esporas de Ganoderma, 40 partes de Radix pseudostellariae, 30 partes de Folium ginseng, 40 partes de Radix codonopsis y 40 partes de Radix astragali, o cualquiera de sus combinaciones.
Preferentemente, la composición para su uso de acuerdo con la presente invención es una composición de 5 a 200 partes de Ganoderma, de 5 a 150 partes de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, de 1 a 90 partes de Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o de 1 a 120 partes de Cordyceps y de 5 a 90 partes de Flos rosae rugosae.
Se prefiere más de 20 a 120 partes de Ganoderma, de 10 a 90 partes de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, de 3 a 60 partes de Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o de 3 a 90 partes de Cordyceps y de 10 a 60 partes de Flos rosae rugosae.
Se prefieren más 40 partes de Ganoderma, 30 partes de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, 20 partes de Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o 6,7 partes de Cordyceps y 30 partes de Flos rosae rugosae.
De acuerdo con la presente divulgación, Folium ginseng, Radix pseudostellariae, Radix codonopsis y/o Radix astragali se pueden usar en lugar de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng.
En otro aspecto de la presente invención, se proporcionan las composiciones que se han mencionado anteriormente.
El término "Ganoderma", como se usa en el presente documento, se refiere al esporocarpo seco de las especies de hongos Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr.) Karst. o Ganoderma sinense Zhao, Xu y Zhang de la familia Polyporaceae. Tiene un sabor dulce y una naturaleza simple, participa en los canales del corazón, pulmón, hígado y riñón, y tiene los efectos de una fuerza física nutritiva, y de calmar y tranquilizar la mente. La expresión "Radix et rhizoma ginseng', como se usa en el presente documento, se refiere a la raíz y al rizoma secos de la especie vegetal Panax ginseng C. A. Mey. de la familia Araliaceae. Pueden ser varios tipos de ginseng, tales como ginseng cultivado, ginseng silvestre, ginseng fresco seco, ginseng silvestre fresco seco, ginseng procesado con azúcar y ginseng rojo. La expresión "Folium ginseng' se refiere a las hojas secas de la especie vegetal Panax ginseng C. A. Mey. de la familia Araliaceae. La expresión ‘‘Radix panacis quinquefolii’, como se usa en el presente documento, también conocido como ginseng americano, huaqishen, yangshen, o guangdongshen, se refiere a la raíz seca de la especie vegetal Panax quinquefolium L. de la familia Araliaceae. Tiene un sabor dulce y ligeramente amargo, y una naturaleza fresca, participa en los canales del corazón, los pulmones y los riñones, y tiene los efectos de vigorizar el Qi, nutrir el Yin, eliminar el calor y potenciar la producción de fluidos. El término "Cordyceps", como se usa en el presente documento, se refiere a un complejo seco de un cuerpo muerto de una larva de insecto de la familia Hepialidae y a un estroma de la especie de hongo Cordyceps sinensis (Berk.) sace. de la familia Clavicipitaceae que parasita en la larva.
La expresión "Cordyceps sinensis, como se usa en el presente documento, se refiere a un producto de cepas que se aislaron originalmente del Cordyceps natural de Cordyceps sinensis (Berk.) sace. y que se han cultivado en condiciones de fermentación, donde las cepas pueden ser una de Paecilomyces hepialli Chen y Dai, sp. nov, Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu y Zeng, sp. nov, Cephalosporium sinensis Chen sp. nov, Mortiscrslla hepialid C. T. y B. liu, Paecilomyces sinensis Chen, Xiao y Shi, sp. nov, Tolypocladium sinensis C. lan Li, Cephalosporium sinens Chen sp. nov, Scytalidium hepialii C. L. Li, Chrysosporium sinens Z. Q. liang, Verticillium sinens Wamg sp. nov, Cephalosporium acremonium Corda, Icones fungorum, Synnematium sinensis Yin y Shen, Isaria farinose (Holmsk.) Fr. Systema mycologicum, Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorokin, Hirsutella hepialid Chen y Shen, Sporothrix insectorum de Hong y H. C. Evans, Gliocladium roseum (link) Thom y Mortierella sp., o cualquier combinación de los mismos.
La cepa de la que se obtiene Cordyceps sinensis en polvo fermentado de la presente invención es preferentemente una o más de Paecilomyces hepialli Chen y Dai, sp. nov, Mortiscrslla hepialid C. T. y B. liu, Synnematium sinensis Yin y Shen, Gliocladium roseum (link) Thom, Mortierella sp., Cephalosporium sinensis Chen sp. nov o Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu y Zeng, sp. nov, o cualquier combinación de las mismas.
La expresión "Flos rosae rugosae", como se usa en el presente documento, se refiere a la yema floral seca de la especie vegetal Rosa rugosa Thumb o Rose rugosacv. Plena de la familia Rosaceae. Tiene un sabor acre, dulce y ligeramente amargo, y una naturaleza cálida, y representa un fármaco de naturaleza cálida. Sus efectos más significativos son activar el flujo de Qi, resolver el estancamiento, armonizar la sangre y aliviar el dolor.
La expresión "Radix codonopsis" se refiere a la raíz seca de la especie vegetal Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf., Codonopsis pilosula Nannf. var.modesta (Nannf.) L. T. Shen, o Codonopsis tangshen Oliv. de la familia Campanulaceae.
La expresión "Radix pseudostellariae" usada en el presente documento en referencia a la raíz tuberosa seca de la especie vegetal Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Pax ex Pax y Hoffm. de la familia Cargophyllaceae.
La expresión "Folium ginseng' se refiere a las hojas secas de la especie vegetal Panax ginseng C. A. Mey. de la familia Araliaceae.
El término "Radix astragai se refiere a la raíz seca de la especie vegetal Astragalus membranaceus (Fisch) Bge.var.mongholicus (Bge) Hsiao o Astragalus membranaceus (Fisch) Bge. de la familia Fabaceae.
Las esporas de Ganoderma en polvo de acuerdo con la presente invención son preferentemente esporas de Ganoderma con el esporodermo roto en polvo.
Las esporas de Ganoderma en polvo de acuerdo con la presente invención son las células reproductivas sexuales de Ganoderma, es decir, basidiosporas en polvo.
El aceite de esporas de Ganoderma acuerdo con la presente invención es una sustancia lipídica grasa extraída de las esporas de Ganoderma en polvo.
El método de preparación de la composición de acuerdo con la presente invención comprende: mezclar directamente las materias primas en partes en peso; o mezclar las materias primas en partes en peso y extraerlas con agua y/o alcohol, obteniéndose la composición; o extraer una o más de las materias primas con agua y/o alcohol y usar el extracto como principio activo para preparar la composición.
El alcohol de acuerdo con la presente invención es metanol o etanol; el metanol puede estar a una concentración del 5 al 95 %, y el etanol puede estar a una concentración del 5 al 95 %.
Un proceso de preparación de los extractos de agua y/o alcohol de las materias primas para la composición de medicina tradicional china de acuerdo con la presente invención comprende las etapas de:
1) pesar los fármacos de medicina tradicional china como las materias primas; y
y 2) extraer las materias primas a reflujo con alcohol o agua, obteniéndose un extracto líquido como principio activo, y añadir agente/s auxiliar/es para preparar diversas formas farmacéuticas.
El proceso de preparación de los extractos de agua y/o alcohol de las materias primas para la composición de medicina tradicional china de acuerdo con la presente invención puede comprender las etapas de:
1) pesar los fármacos de medicina tradicional china como las materias primas, añadir metanol o etanol para llevar a cabo la extracción, recuperar el metanol o etanol del líquido de extracción, proporcionándose el Extracto I;
2) evaporar el alcohol de los fármacos residuales, Añadir agua para llevar a cabo la extracción, proporcionándose el Extracto II; y
3) combinar el Extracto I y el Extracto II, llevar a cabo la filtración, concentrar el filtrado a una cantidad apropiada, añadir agente/s auxiliar/es farmacéuticamente convencional/es para preparar una formulación deseada mediante un proceso farmacéuticamente convencional.
El proceso de preparación de los extractos de agua y/o alcohol de las materias primas para la composición de medicina tradicional china de acuerdo con la presente invención puede comprender las etapas de:
1) preparación de las materias primas: pesar los fármacos de medicina tradicional china como las materias primas;
2) extracción y concentración: remojar en agua las materias primas del fármaco chino procesadas en la etapa 1), luego cocer varias veces mediante calentamiento, combinar los extractos líquidos para llevar a cabo la filtración,
concentrar el filtrado a una cantidad apropiada, enfriar el concentrado y someterlo a centrifugación de alta velocidad para eliminar las impurezas, y reservar el producto hasta su uso;
3) preparación de la formulación: preparar el concentrado obtenido en la etapa 2), solo o junto con uno o varios agentes auxiliares medicinalmente aceptables, obteniéndose una formulación deseada mediante un proceso farmacéuticamente convencional;
donde, en la etapa 2) anterior, las materias primas se remojan durante 20 a 60 minutos, luego se cuecen de 1 a 3 veces mediante calentamiento por la extracción, durando cada decocción de 1 a 2 h y teniendo una cantidad de agua añadida de 6 a 13 veces.
La composición de acuerdo con la presente invención se puede preparar en cualquier forma farmacéutica mediante la adición de un agente auxiliar o excipiente aceptable en productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos.
La forma farmacéutica puede ser una cualquiera de un comprimido, un líquido oral, un gránulo, una cápsula, un electuario, una píldora de goteo, una pastilla, un polvo, una pastilla para chupar, un extracto fluido, un extracto, una inyección y un jarabe.
Para proporcionar una mejor comprensión del espíritu de la presente invención, los experimentos con animales usando la composición farmacéutica hecha de Ganoderma, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, y a la composición farmacéutica hecha de Ganoderma, Flos rosae rugosae, Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps, así como los resultados de los mismos, se describen de aquí en adelante para demostrar la eficacia de la composición de la presente invención en la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas, rinitis alérgica, dermatitis alérgica, urticaria y asma alérgico.
De manera similar, la adición de uno cualquiera o más de entre esporas de Ganoderma en polvo, aceite de esporas de Ganoderma, Ginseng, Radix pseudostellariae, Radix codonopsis y Radix astragali, o cualquiera de sus combinaciones, también puede conducir a las mismas acciones farmacológicas.
Realizaciones detalladas
Ejemplo 1
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 67 g de Cordyceps, 200 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Paecilomyces hepialli Chen y Dai, sp. nov) y 300 g de Flos rosae rugosae se pesan. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 1 h, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 2
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 200 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu y Zeng, sp. nov) y 300 g de Flos rosae rugosae se pesan. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. Cada decocción duró 1 h, con una cantidad de agua añadida de 10 veces. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 3
2 kg de Ganoderma, 1,5 kg de Radix panacis quinquefolii y 1 kg de Cordyceps sinensis en polvo fermentado se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los tres fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 13 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para
cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos. Se concentró el filtrado, produciéndose una pasta transparente, que luego se secó por pulverización, preparándose un material compuesto en polvo. La composición obtenida, designada Composición 3, se usó en los experimentos de eficacia como se muestra a continuación.
Ejemplo 4
4 kg de Ganoderma, 3 kg de Radix panacis quinquefolii y 0,67 kg de Cordyceps se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los tres fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 13 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos. Se concentró el filtrado, produciéndose una pasta transparente, que luego se secó por pulverización, preparándose un material compuesto en polvo. La composición obtenida, la Composición 4, se usó en los experimentos de eficacia como se muestra a continuación.
Ejemplo 5
4 kg de Ganoderma, 3 kg de Radix panacis quinquefolii, 0,67 kg de Cordyceps y 2 kg de Cordyceps sinensis en polvo fermentado se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 13 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos. Se concentró el filtrado, produciéndose una pasta transparente, que luego se secó por pulverización, preparándose un material compuesto en polvo. La composición obtenida, la Composición 5, se usó en los experimentos de eficacia como se muestra a continuación.
Ejemplo 6
2.0 kg de Ganoderma, 1,5 kg de Radix panacis quinquefolii, 1,0 kg de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Hirsutella sinensis Liu, Guo,Yu y Zeng, sp. nov) y 1,5 kg de Flos rosae rugosae se pesan. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 13 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos. Se concentró el filtrado, produciéndose una pasta transparente, que luego se secó por pulverización, preparándose un material compuesto en polvo. La composición obtenida, la Composición 6, se usó en los experimentos de eficacia como se muestra a continuación.
Ejemplo 7
1,5 kg de Radix panacis quinquefolii, 2,0 kg de Ganoderma, 0,33 kg de Cordyceps y 1,5 kg de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 13 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos. Se concentró el filtrado, produciéndose una pasta transparente, que luego se secó por pulverización, preparándose un material compuesto en polvo. La composición obtenida, la Composición 7, se usó en los experimentos de eficacia como se muestra a continuación.
Ejemplo 8
2.0 kg de Ganoderma, 1,5 kg de Radix panacis quinquefolii, 0,33 kg de Cordyceps, 1,0 kg de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Paecilomyces hepialli Chen y Dai, sp. nov) y 1,5 kg de Flos rosae rugosae se pesan. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela junto con Cordyceps sinensis en polvo fermentado. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 13 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos. Se concentró el filtrado, produciéndose una pasta transparente, que luego se secó por pulverización, preparándose un material compuesto en polvo. La composición obtenida, la Composición 8, se usó en los experimentos de eficacia como se muestra a continuación.
Ejemplo 9
150 g de Radix panacis quinquefolii, 90 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Hirsutella hepialid Chen y Shen), 120 g de Cordyceps, 200 g de Ganoderma y 90 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 1 h, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 10
500 g de Radix et rhizoma ginseng, 100 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Synnematium sinensis Yin y Shen), 500 g de Ganoderma y 500 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas las Radix et rhizoma ginseng y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado y la Flos rosae rugosae en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 11
500 g de Radix panacis quinquefolii, 100 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Hirsutella sinensis Liu,Guo,Yu y Zeng, sp. nov), 500 g de Ganoderma y 500 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado y la Flos rosae rugosae en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 12
150 g de Radix panacis quinquefolii, 120 g de Cordyceps, 200 g de Ganoderma y 90 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 40 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 13
150 g de Radix et rhizoma ginseng, 90 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Gliocladium roseum (link)Thom), 200 g de Ganoderma y 90 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas las Radix et rhizoma ginseng y el Ganoderma y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 1 h, y se cocieron dos veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y la segunda decocción duró 1,5 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces. Se combinaron y se filtraron los dos extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 14
150 g de Radix panacis quinquefolii, 90 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Hirsutella hepialid Chen y Shen), 120 g de Cordyceps, 200 g de Ganoderma y 90 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas
la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 1 h, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 15
100 g de Radix panacis quinquefolii, 30 g de Cordyceps, 200 g de Ganoderma y 100 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 16
150 g de Radix panacis quinquefolii, 30 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Hirsutella sinensis Liu,Guo,Yu y Zeng, sp. nov), 200 g de Ganoderma y 100 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 1 h, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 17
90 g de Radix panacis quinquefolii, 90 g de Cordyceps, 120 g de Ganoderma y 60 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. Cada decocción duró 1 h, con una cantidad de agua añadida de 10 veces. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 18
90 g de Radix et rhizoma ginseng, 90 g de Cordyceps, 120 g de Ganoderma y 60 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas las Radix et rhizoma ginseng y el Ganoderma. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. Cada decocción duró 1 h, con una cantidad de agua añadida de 10 veces. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 19
90 g de Radix panacis quinquefolii, 60 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Cephalosporium sinensis Chen sp. nov), 120 g de Ganoderma y 60 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. Cada decocción duró 1 h, con una cantidad de agua añadida de 10 veces. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a
continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 20
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 67 g de Cordyceps y 300 g de Flos rosae rugosae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 1 h, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de comprimidos y se mezclaron uniformemente; y se prepararon diversos tipos de comprimidos mediante procesos convencionales de preparación de comprimidos.
Ejemplo 21
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 200 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Paecilomyces hepialli Chen y Dai, sp. nov) y 300 g de Flos rosae rugosae se pesan. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. Cada decocción duró 1 h, con una cantidad de agua añadida de 10 veces. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 22
500 g de Radix panacis quinquefolii, 100 g de Cordyceps, 500 g de Ganoderma, 500 g de Flos rosae rugosae y 500 g de esporas de Ganoderma en polvo con el esporodermo roto se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usados para los comprimidos y esporas de Ganoderma en polvo con el esporodermo roto, y se mezcló uniformemente; y se prepararon diversos tipos de comprimidos mediante procesos convencionales de preparación de comprimidos.
Ejemplo 23
500 g de Radix et rhizoma ginseng, 100 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Paecilomyces sinensisChen, Xiao y Shi, sp. nov), 500 g de Ganoderma, 500 g de Flos rosae rugosae y 500 g de esporas de Ganoderma en polvo con el esporodermo roto se pesaron. Se cortaron en rodajas las Radix et rhizoma ginseng y el Ganoderma, y se dispusieron el Cordyceps sinensis en polvo fermentado y las esporas de Ganoderma en polvo con el esporodermo roto en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de gránulos y se mezclaron uniformemente; y se prepararon gránulos mediante procesos convencionales de preparación de comprimidos.
Ejemplo 24
150 g de Radix panacis quinquefolii, 90 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Tolypocladium sinensis C. lan Li), 200 g de Ganoderma, 90 g de Flos rosae rugosae y 150 g de esporas de Ganoderma en polvo con el esporodermo roto se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el
Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usados para los comprimidos y esporas de Ganoderma en polvo, y se mezcló uniformemente; y se prepararon diversos tipos de comprimidos mediante procesos convencionales de preparación de comprimidos. Ejemplo 25
500 g de Radix panacis quinquefolii, 100 g de Cordyceps, 500 g de Ganoderma, 500 g de Flos rosae rugosae y 100 g de aceite de esporas de Ganoderma se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps. Tras la adición de etanol al 80%, se extrajeron los cuatro fármacos anteriores dos veces a reflujo, durando cada extracción 2 h, y luego se filtraron. Se recuperó el etanol del filtrado líquido hasta que no se pudo percibir ningún olor a etanol. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usados para las píldoras de goteo y aceite de esporas de Ganoderma, y se mezcló uniformemente; y se prepararon píldoras de goteo mediante procesos convencionales para la elaboración de píldoras de goteo.
Ejemplo 26
500 g de Radix panacis quinquefolii, 100 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Synnematium sinensis Yin y Shen), 500 g de Ganoderma, 500 g de Flos rosae rugosae, 500 g de esporas de Ganoderma en polvo con el esporodermo roto, 100 g de aceite de esporas de Ganoderma y 100 g de Folium ginseng se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los fármacos anteriores en agua durante 40 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usados para los gránulos y esporas de Ganoderma en polvo con el esporodermo roto, y se mezcló uniformemente; y se prepararon gránulos mediante procesos convencionales de preparación de gránulos.
Ejemplo 27
150 g de Radix panacis quinquefolii, 90 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Hirsutella hepialid Chen y Shen), 200 g de Ganoderma, 90 g de Flos rosae rugosae y 400 g de Radix codonopsis se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii, el Ganoderma y la Radix codonopsis, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 40 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de comprimidos y se mezclaron uniformemente; y se prepararon diversos tipos de comprimidos mediante procesos convencionales de preparación de comprimidos.
Ejemplo 28
150 g de Radix panacis quinquefolii, 120 g de Cordyceps, 200 g de Ganoderma, 90 g de Flos rosae rugosae y 400 g de Radix astragali se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii, el Ganoderma y la Radix astragali. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 14 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para las pastillas para chupar, y se mezcló uniformemente, preparándose pastillas para chupar mediante procesos convencionales para las pastillas para chupar.
Ejemplo 29
500 g de Radix panacis quinquefolii, 50 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Paecilomyces hepialli Chen y Dai, sp. nov), 50 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Hirsutella sinensis Liu,Guo,Yu y Zeng, sp. nov), 500 g de Ganoderma, 500 g de Flos rosae rugosae y 300 g de Radix codonopsis se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii, el Ganoderma y la Radix codonopsis, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 1 h, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es usados frecuentemente para la elaboración de polvos y se mezclaron uniformemente; y se preparó un polvo mediante procesos convencionales de preparación de polvos.
Ejemplo 30
500 g de Radix panacis quinquefolii, 100 g de Cordyceps, 500 g de Ganoderma, 500 g de Flos rosae rugosae y 300 g de Radix astragali se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii, el Ganoderma y la Radix astragali. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 14 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 31
100 g de Radix panacis quinquefolii, 200 g de Ganoderma, 30 g de Cordyceps, 3 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Cs-C-Q80 Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu y Zeng, sp. nov), 100 g de Flos rosae rugosae y 100 g de esporas de Ganoderma en polvo se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y se dispuso en una bolsa de tela junto con las esporas de Ganoderma en polvo. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de comprimidos y se mezclaron uniformemente; y se prepararon diversos tipos de comprimidos mediante procesos convencionales de preparación de comprimidos.
Ejemplo 32
100 g de Radix panacis quinquefolii, 200 g de Ganoderma, 30 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Mortiscrslla hepialid C. T. y B. liu), 100 g de Flos rosae rugosae y 100 g de esporas de Ganoderma en polvo se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado y las esporas de Ganoderma en polvo en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de píldoras y se mezclaron uniformemente; y se prepararon diversos tipos de píldoras mediante procesos convencionales de preparación de píldoras.
Ejemplo 33
90 g de Radix panacis quinquefolii, 120 g de Ganoderma, 90 g de Cordyceps, 60 g de Flos rosae rugosae y 90 g de aceite de esporas de Ganoderma se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma. Se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se
combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usados para los gránulos y aceite de esporas de Ganoderma, y se mezcló uniformemente; y se prepararon gránulos mediante procesos convencionales de preparación de gránulos.
Ejemplo 34
100 g de Radix panacis quinquefolii, 200 g de Ganoderma, 30 g de Cordyceps, 100 g de Flos rosae rugosae y 200 g de Radix pseudostellariae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 40 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los extractos blandos y se mezcló uniformemente, preparándose un extracto blanco mediante procesos convencionales para la preparación de extractos blandos.
Ejemplo 35
100 g de Radix panacis quinquefolii, 200 g de Ganoderma, 30 g de Cordyceps, 100 g de Flos rosae rugosae y 200 g de Folium ginseng se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 40 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usado/s para los jarabes, y se mezcló uniformemente, preparándose un jarabe mediante procesos convencionales para la preparación de jarabes.
Ejemplo 36
100 g de Radix panacis quinquefolii, 200 g de Ganoderma, 30 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Mortierella sp.), 100 g de Flos rosae rugosae y 200 g de Radix codonopsis se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii, el Ganoderma y la Radix codonopsis, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 40 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de comprimidos y se mezclaron uniformemente; y se prepararon diversos tipos de comprimidos mediante procesos convencionales de preparación de comprimidos.
Ejemplo 37
100 g de Radix panacis quinquefolii, 200 g de Ganoderma, 30 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Verticillium sinens Wamg sp. nov), 100 g de Flos rosae rugosae y 200 g de Radix astragali se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii, el Ganoderma y la Radix astragali, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 40 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de cápsulas y se mezclaron uniformemente; y se prepararon cápsulas mediante procesos convencionales de preparación de cápsulas.
Ejemplo 38
90 g de Radix panacis quinquefolii, 120 g de Ganoderma, 30 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Cephalosporium sinensis Chen sp. nov), 30 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Synnematium sinensis
Yin y Shen), 60 g de Flos rosae rugosae y 60 g de aceite de esporas de Ganoderma se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 1 h, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 13 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usados para las píldoras y aceite de esporas de Ganoderma, y se mezcló uniformemente; y se prepararon diversos tipos de píldoras mediante procesos convencionales de preparación de píldoras.
Ejemplo 39
90 g de Radix panacis quinquefolii, 120 g de Ganoderma, 90 g de Cordyceps, 60 g de Flos rosae rugosae, 200 g de Radix astragali y 10 g de aceite de esporas de Ganoderma se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii, el Ganoderma y la Radix astragali, y se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 40 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usado/s para los jarabes, y se mezcló uniformemente, preparándose un jarabe mediante procesos convencionales para la preparación de jarabes.
Ejemplo 40
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 200 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Scytalidium hepialii C. L. Li), 300 g de Flos rosae rugosae y 400 g de esporas de Ganoderma en polvo se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 20 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usados para los comprimidos y esporas de Ganoderma en polvo, y se mezcló uniformemente; y se prepararon diversos tipos de comprimidos mediante procesos convencionales de preparación de comprimidos. Se preparó un líquido oral mediante la adición de agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para la preparación de líquidos orales. La composición obtenida, la Composición 40, se usó en los experimentos de eficacia como se muestra a continuación.
Ejemplo 41
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 67 g de Cordyceps, 300 g de Flos rosae rugosae y 20 g de aceite de esporas de Ganoderma se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cuatro fármacos anteriores en agua durante 30 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usados para los gránulos y aceite de esporas de Ganoderma, y se mezcló uniformemente; y se prepararon gránulos mediante procesos convencionales de preparación de gránulos.
Ejemplo 42
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 200 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Cephalosporium sinensis Chen sp. nov), 300 g de Flos rosae rugosae y 400 g de Radix pseudostellariae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 40 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h cada una, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta
mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de comprimidos y se mezclaron uniformemente; y se prepararon diversos tipos de comprimidos mediante procesos convencionales de preparación de comprimidos.
Ejemplo 43
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 67 g de Cordyceps, 300 g de Flos rosae rugosae y 400 g de Radix pseudostellariae se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Se empaparon los cinco fármacos anteriores en agua durante 40 min, y se cocieron 3 veces mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, añadiéndose una cantidad de agua de 15 veces, y cada una de las siguientes decocciones duró 1 h, añadiéndose una cantidad de agua de 10 veces para cada decocción. Se combinaron y se filtraron los tres extractos líquidos, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, a continuación, se retiraron las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agentes auxiliares frecuentemente usado/s para los jarabes, y se mezcló uniformemente, preparándose un jarabe mediante procesos convencionales para la preparación de jarabes.
Ejemplo 44
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 100 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Chrysosporium sinens Z. Q. liang), 100 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Hirsutella sinensis Liu,Guo,Yu y Zeng, sp. nov) y 300 g de Flos rosae rugosae se pesan. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Tras la adición de metanol al 5 %, se extrajeron los fármacos dos veces a reflujo, durando cada extracción 1 h. A continuación, se combinaron los extractos líquidos, y se recuperó el metanol, obteniéndose un extracto alcohólico. Entonces, se cocieron los fármacos residuales dos veces en agua mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y la siguiente decocción duró 1 h, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron el extracto alcohólico y los extractos acuosos, y se filtraron, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de gránulos y se mezclaron uniformemente; y se prepararon gránulos mediante procesos convencionales de preparación de gránulos.
Ejemplo 45
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 67 g de Cordyceps, 20 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu y Zeng, sp. nov) y 300 g de Flos rosae rugosae se pesan. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Tras la adición de etanol al 75 %, Se extrajeron los fármacos durante 2 h a reflujo, y se recuperó el etanol, obteniéndose un extracto alcohólico. Entonces, se cocieron los fármacos residuales tres veces en agua mediante calentamiento, durando cada cocción 2 h. Se combinaron el extracto alcohólico y los extractos acuosos, y se filtraron, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 46
300 g de Radix et rhizoma ginseng, 400 g de Ganoderma, 200 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Cephalosporium acremonium Corda, Icones fungorum), 300 g de Flos rosae rugosae y 400 g de Radix codonopsis se pesaron. Se cortaron en rodajas los Radix Et Rhizoma Ginseng, el Ganoderma y la Radix codonopsis, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Tras la adición de metanol al 95%, se extrajeron los fármacos dos veces a reflujo, durando cada extracción 1 h. A continuación, se combinaron los extractos líquidos, y se recuperó el metanol, obteniéndose un extracto alcohólico. Entonces, se cocieron los fármacos residuales 3 veces en agua mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron el extracto alcohólico y los extractos acuosos, y se filtraron, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de gránulos y se mezclaron uniformemente; y se prepararon gránulos mediante procesos convencionales de preparación de gránulos.
Ejemplo 47
300 g de Radix et rhizoma ginseng, 400 g de Ganoderma, 200 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Sporothrix insectorum de Hong y H. C.Evans), 300 g de Flos rosae rugosae y 400 g de Radix codonopsis se pesaron. Se cortaron en rodajas los Radix et rhizoma ginseng y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y se dispuso en una bolsa de tela. Tras la adición de etanol al 95 %, se extrajeron los fármacos durante 2 h a reflujo, y se recuperó el etanol, obteniéndose un extracto alcohólico. Entonces, se cocieron los fármacos residuales 3 veces en agua mediante calentamiento, durando cada cocción 2 h. Se combinaron el extracto alcohólico y los extractos acuosos, y se filtraron, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 48
300 g de Radix et rhizoma ginseng, 400 g de Ganoderma, 67 g de Cordyceps, 300 g de Flos rosae rugosae, 300 g de esporas Ganoderma en polvo y 400 g de Radix astragali se pesaron. Se cortaron en rodajas los Radix et rhizoma ginseng y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Tras la adición de etanol al 5 %, se extrajeron los fármacos durante 2 h a reflujo, y se recuperó el etanol, obteniéndose un extracto alcohólico. Entonces, se cocieron los fármacos residuales dos veces en agua mediante calentamiento, durando cada cocción 2 h. Se combinaron el extracto alcohólico y los extractos acuosos, y se filtraron, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 49
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 200 g de Cordyceps sinensis en polvo fermentado (Isaria farinose(Holmsk.) Fr. Systema mycologicum), 300 g de Flos rosae rugosae y 400 g de Radix astragali se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se dispuso el Cordyceps sinensis en polvo fermentado en una bolsa de tela. Tras la adición de metanol al 95 %, se extrajeron los fármacos dos veces a reflujo durante 2 h, durando cada extracción 1 h. A continuación, se combinaron los extractos líquidos, y se recuperó el metanol, obteniéndose un extracto alcohólico. Entonces, se cocieron los fármacos residuales 3 veces en agua mediante calentamiento. La primera decocción duró 2 h, y las siguientes decocciones duraron 1 h, añadiéndose una cantidad de 10 veces de agua para cada decocción. Se combinaron el extracto alcohólico y los extractos acuosos, y se filtraron, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad. Se preparó una pasta mediante concentración adicional a presión reducida o se formaron partículas finas mediante secado por pulverización; a esto, se añadieron agentes auxiliares usados frecuentemente para la elaboración de gránulos y se mezclaron uniformemente; y se prepararon gránulos mediante procesos convencionales de preparación de gránulos.
Ejemplo 50
300 g de Radix panacis quinquefolii, 400 g de Ganoderma, 67 g de Cordyceps, 300 g de Flos rosae rugosae y 90 g de Folium ginseng se pesaron. Se cortaron en rodajas la Radix panacis quinquefolii y el Ganoderma, y se pulverizó el Cordyceps y luego se dispuso en una bolsa de tela. Tras la adición de etanol al 5 %, se extrajeron los fármacos durante 2 h a reflujo, y se recuperó el etanol, obteniéndose un extracto alcohólico. Entonces, se cocieron los fármacos residuales 3 veces en agua mediante calentamiento, durando cada cocción 2 h. Se combinaron el extracto alcohólico y los extractos acuosos, y se filtraron, el filtrado líquido se concentró hasta un nivel apropiado, se dejó enfriar el concentrado líquido, y se retiraron entonces las impurezas del mismo mediante centrifugación a alta velocidad, a esto, se añadieron agente/s auxiliar/es frecuentemente usado/s para los líquidos orales, y se mezcló uniformemente, preparándose un líquido oral de 20.000 ml mediante procesos convencionales para los líquidos orales.
Ejemplo 51. Informe de experimentos con animales de la Composición 3 obtenida en el Ejemplo 3 contra la alergia y la dermatitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 3 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma y Cordyceps sinensis en polvo fermentado) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo.
1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 11,41 g de fármacos brutos totales. Su ingesta diaria recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal.
1.2 Animales de laboratorio
Se proporcionaron ratones Kunming sanos de grado limpio, la mitad de los cuales eran machos y la otra mitad hembras, cada uno de 18 a 22 g, por el Centro de Laboratorios para Animales, Universidad de Medicina Tradicional China de Jiangxi (Número de certificación: SCXK (Jiangxi) 2005-0001). Se proporcionaron ratas SD sanas de grado limpio, la mitad de las cuales eran machos y la otra mitad hembras, por el Centro de Laboratorios para Animales, Universidad de Medicina Tradicional China de Jiangxi (Número de certificación: SCXK (Jiangxi) 2006-0001).
1.3 Reactivos primarios
Ovoalbúmina (OVA) (Sigma, n.° de lote: 025K0594); Evans Blue (EB) (Sinopharm (Grupo) Shanghai Chemical Reagent Co., Ltd., n.° de lote: F20030714); fosfato de histamina, fabricado por Shanghai Biological Reagent Factory, n.° de lote: 909035; 2,4-dinitroclorobenceno, químico puro, fabricado por Guangzhou Chemical Reagent Factory, n.° de lote: 0703428; prednisona, fabricada por Xianju Pharmaceuticals Co. Ltd., n.° de lote: 090678.
1.4 Instrumentos primarios
Balanza electrónica BS110S, fabricada por Sartorius Inc.; centrífuga (Anting, Shanghai); baño de agua termostático digital (Jintan, Zhejiang); perforador (8 mm de diámetro); micropipeta (Gilson, Francia). Microscopio OLYMPUS; controlador de deslizamiento de baño de agua YT-6C (Yaguang Medical Electronics Technology Inc., Xiaogan, Hubei); incubadora/horno PH140A (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd).
2. Métodos experimentales
2.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron los animales aleatoriamente en grupos con 10 animales por grupo en función del peso corporal. Se establecieron un grupo de control modelo, grupos de dosis baja, media y alta de la Composición 3 y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona).
2.2 Pauta posológica
La ingesta diaria de la Composición de fármaco 3 de ensayo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para un ratón fue: grupo de dosis baja: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 4,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 12,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 5, 10 y 30 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (17,53 mg de polvo seco/ml, 35,06 mg de polvo seco/ml y 105,18 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
La ingesta diaria para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (8,765 mg de polvo seco/ml, 17,53 mg de polvo seco/ml y 52,59 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
2.3 Efecto de la Composición 3 sobre la anafilaxia pasiva (PCA) en ratas causada por la ovoalbúmina
2.3.1 Preparación de antisuero
Se inyectó OVA al 5 % en solución salina fisiológica en una pata trasera de las ratas a 0,2 ml/pata trasera, mientras que se inyectó una vacuna de Pertussis por vía intraperitoneal a 0,15ml/rata. Tras una alimentación normal de 13 días, se extrajo sangre de la cavidad ocular y se centrifugó a 2.000 rpm durante 15 min. Se aisló suero anti-OVA de la misma y se almacenó en un refrigerador a -20 °C hasta su uso.
2.3.2 Establecimiento de modelos de suero anti-ovoalbúmina de rata
Se tomó suero anti-ovoalbúmina y se diluyó a 1:4 o 1:8 con solución salina fisiológica. Se dividieron aleatoriamente 50 ratas SD en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 3, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 3 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 14 días consecutivos. El día 15, se afeitó el lomo de las ratas, y se inyectó por vía intradérmica un antisuero diluido en dos puntos de cada lado con 0,1 ml por punto. Tras 48 horas, se inyectó en la vena de la cola de cada rata una solución mixta de 1,0 ml de azul de Evans al 1 % y
de ovoalbúmina al 1 % en solución salina fisiológica. Tras 30 min, se extrajo sangre arterial, se aisló el suero de la misma y se determinó el contenido de histamina mediante el método12'. Se sacrificaron las ratas y se invirtió la piel del lomo para medir el diámetro de las manchas de reacción azules con el fin de determinar la diferencia entre los grupos de dosificación y el grupo modelo. Se fijó una muestra del tejido cutáneo de rata con formaldehído neutro, se deshidrató con un gradiente de alcohol, se embebió en parafina y se examinó para determinar la desgranulación de los mastocitos en el tejido [3].
2.3.3 Efecto de la Composición 3 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno
Se dividieron aleatoriamente 50 ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 3, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se aplicó una solución al 5 % de 2,4-dinitroclorobenceno en etanol sobre la piel abdominal (afeitada) de los ratones para la sensibilización. Se llevó a cabo la administración intragástrica dos días antes de la sensibilización; el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de agua destilada; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 3 recibieron las soluciones de ensayo correspondientes por vía intragástrica a un volumen de dosis de 0,1 ml/10g de peso corporal; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 7 días después de la sensibilización, se aplicó una solución al 1 % de 2,4-dinitroclorobenceno en la oreja derecha, y se sacrificaron los ratones tras 24 horas, y se cortaron ambas orejas a lo largo de la línea de base de la aurícula. Se perforaron discos que tenían un diámetro de 8 mm en la misma posición en ambas orejas, se pesaron con precisión en una balanza electrónica, y se tomó la diferencia de peso entre la oreja izquierda y derecha como el valor de hipersensibilidad retardada.
2.3.4 Efecto de la Composición 3 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular Se dividieron aleatoriamente 50 ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 3, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se llevó a cabo la administración intragástrica a los ratones una vez al día durante 10 días consecutivos. 30 min después de la administración final, se inyectó una solución de dextrano de bajo peso molecular al 0,0125% a 0,1 g/10 g en la vena de la cola. Se observó y registró el número de eventos de picazón (los eventos de picazón se indicaron al rascarse la cabeza con las patas delanteras, al rascarse el cuerpo con las patas traseras y al morder en varias partes del cuerpo) ocurrido en el transcurso de los 30 min posteriores a la inyección de la solución de dextrano de bajo peso molecular en las venas de la cola de los ratones de cada grupo.
2.3.5 Efecto de la Composición 3 sobre la permeabilidad capilar en ratas Se dividieron aleatoriamente 50 ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 3, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 3 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10 ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 1 hora después de la administración final, se inyectó en la zona afeitada (afeitada antes de la administración) del lomo de las ratas por vía intradérmica 1 mg/ml de fosfato de histamina a una dosis de 0,1 ml/rata, y luego se inyectó en la vena de la cola de inmediato una solución acuosa de azul de Evans al 1 % a una dosis de 1 ml/rata. Tras 20 minutos, se sacrificaron los animales por dislocación cervical. Se retiraron cortando las zonas de la piel con manchas azules y se cortaron en trozos pequeños, se empaparon en una solución de 5 ml de acetona:solución salina fisiológica (7:3) durante 48 horas, se centrifugaron, y se midió la absorbancia del sobrenadante a 610 nm.
2.4 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 3. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 3 sobre la anafilaxia pasiva en ratas
Los resultados del ensayo se muestran en las Tablas 1 y 2. En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de dosis baja de la Composición 3 mostró una tendencia a disminuir el diámetro de las manchas azules en ratas con sensibilidad al suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, a disminuir la desgranulación de los mastocitos y a disminuir el contenido de histamina en suero, que, sin embargo, no tuvo significación estadística; el grupo de control de prednisona y los grupos de dosis medias y altas de la Composición 3 mostraron un efecto de disminución significativa del diámetro de las manchas azules en ratas sensibilizadas con suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, reduciéndose la desgranulación de los mastocitos y reduciéndose el contenido de histamina en suero, con una
diferencia estadística significativa o muy significativa. Esto indica que la Composición 3 tuvo un efecto inhibidor significativo sobre la anafilaxia pasiva en ratas.
Tabla 1. Efecto de la Composición 3 sobre el diámetro de las manchas azules de PCA en ratas (x±s)
Diámetro de manchas azules Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales (mm)
1:4 1:8 Grupo de control modelo 0,0 10 16,90 ± 2,61 10,26 ± 1,31 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 12,79 ± 1,88** 7,43 ± 1,22** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,2 10 15,20 ± 1,44 9,44 ± 1,20 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,4 10 14,15 ± 2,08* 8,97 ± 1,33* Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 7,2 10 13,32 ± 2,17** 8,34 ± 1,15** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
Tabla 2. Efecto de la Composición 3 sobre la desgranulación dejos mastocitos y el contenido de histamina en suero _______________________________________en ratas PCA (x±s)______________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Desgranulación Fluorescencia de la bruto/kg) animales histamina (mg/l) Grupo de control modelo 0,0 10 60,80 ± 15,64 4,08 ± 0,93 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 22,54 ± 11,25** 2,35 ± 0,65** Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,2 10 48,42 ± 13,90 3,39 ± 0,86 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,4 10 42,65 ± 16,27* 2,97 ± 0,88* Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 7,2 10 35,52 ± 13,28** 2,62 ± 0,40** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.2 Efecto de la Composición 3 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno
Los resultados se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control modelo, el grado de inflamación de los discos auriculares de los ratones disminuyó significativamente en los grupos de la dosis media y alta de Composición 3, lo que indica que la Composición 3 tuvo un buen efecto inhibidor sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por 2,4-dinitroclorobenceno.
Tabla 3. Efecto de la Composición 3 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por _________________________________ el 2,4-dinitroclorobenceno (x±s)_________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Grado de inflamación de los discos bruto/kg) animales auriculares de ratón (mg) Grupo de control modelo 0,0 10 6,98 ± 0,74
Grupo de control positivo 5,0 mg 10 5,07 ± 0,59**
Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 2,0 10 6,30 ± 0,90
Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 4,0 10 6,16 ± 0,64*
Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 12,0 10 5,42 ± 0,80**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.3 Efecto de la Composición 3 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 4. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 3, lo que indica que la Composición 3 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas
causado por el fosfato de histamina.
Tabla 4. Efecto de la Composición 3 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular _____________________________________________________________ ( x ± s j _____________________________________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de eventos de picazón bruto/kg) animales (30 min)
Grupo de control modelo 0,0 10 29,30 ± 6,62 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 18,30 ± 4,62** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 2,0 10 25,52 ± 7,80 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 4,0 10 23,34 ± 5,24* Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 12,0 10 20,10 ± 4,47**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.4 Efecto de la Composición 3 sobre la permeabilidad capilar en ratas
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 3, lo que indica que la Composición 3 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina. *1
Tabla 5. Efecto de la Composición 3 sobre la permeabilidad capilar en ratas (x±s) Grupos Dosis (g de fármaco bruto/kg) Número de animales Valor de DO Grupo de control modelo 0,0 10 0,994 ± 0,142 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 0,750 ± 0,116** Grupo de dosis baja de fármaco de ensayo 1,2 10 0,960 ± 0,142 Grupo de dosis media de fármaco de ensayo 2,4 10 0,857 ± 0,135* Grupo de dosis alta de fármaco de ensayo 7,2 10 0,780 ± 0,127** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales en animales demuestran que la Composición 3 es significativamente eficaz en la inhibición de la anafilaxia pasiva en ratas causada por la ovoalbúmina, que la Composición 3 es eficaz en la inhibición de la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno y que la Composición 3 es significativamente eficaz en reducir el aumento de la permeabilidad capilar en las ratas causado por el fosfato de histamina. Los resultados anteriores indican una buena eficacia de la Composición 3 para resistir las alergias, y para prevenir y tratar enfermedades alérgicas tales como la dermatitis alérgica y la urticaria. Ejemplo 52. Informe de experimentos con animales de la Composición 3 obtenida en el Ejemplo 3 contra la prevención y el tratamiento de la rinitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 3 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma y Cordyceps sinensis en polvo fermentado) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo.
1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 11,41 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Se proporcionaron ratas SD de grado limpio, la mitad de las cuales eran machos y la otra mitad hembras, cada una de 180 a 220 g, por el Centro de Laboratorios para Animales, Universidad de Medicina Tradicional China de Jiangxi (Número de certificación: SCXK (Jiangxi) 2006-0001). Se proporcionaron cobayas, la mitad de las cuales eran machos y la otra mitad hembras, cada una de 250 a 300 g, por el Departamento de Servicios Experimentales con Animales de Dongchuang, Distrito de Kaifu, Changsha.
1.3 Reactivos primarios
Tolilen-2,4-diisocianato (TDI) (Shanghai First Reagent Factory, n.° de lote: 090301); Ovoalbúmina (OVA) (Sigma, n.° de lote: 025K0594); Comprimidos Bi-yan-kang (Foshan Dezhong Pharmaceutical Co., Ltd., n.° de lote: 090701); kits de AMPc y GMPc (Great Wall Biochemicals).
1.4 Instrumentos primarios
Analizador de sangre bioquímico automático Beckman-CX7; Microscopio OLYMPUS; Microscopio digital de contraste de fase de fluorescencia invertida TE2000-S (Nikon Inc., Japón); microtomo (Leica, Alemania); controlador de deslizamiento de baño de agua YT-6C (Yaguang Medical Electronics Technology Inc., Xiaogan, Hubei).
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la OVA
2.1.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron aleatoriamente ratas en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente, en función de su puntuación, en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo de positivo de fármaco (grupo de Bi-yan-kang) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 3, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 3 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0ml/100g de peso corporal. El grupo de control en blanco y el grupo modelo de rinitis alérgica recibieron por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica; el grupo de Bi-yan-kang recibió el fármaco a una dosis de 410 mg/kg. La administración intragástrica se inició después de una modelización exitosa y se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en ratas
Se añadió 1 ml de solución salina fisiológica a 0,3 mg de OVA como antígeno[1] y 30 mg de hidróxido de aluminio en polvo como adyuvante para preparar una suspensión, que se inyectó por vía intraperitoneal una vez cada dos días, 7 veces en total. Posteriormente, se realizó una inmunización local en cada cavidad nasal con 10 pl de OVA al 5% una vez al día durante 7 días. Se administró un volumen equivalente de solución salina fisiológica al grupo de control en blanco. Durante la administración del fármaco de ensayo, se siguió con la administración nasal de 50 pl de OVA al 1 % en días alternos.
Criterios de evaluación para la eficacia de la modelización: la eficacia se evaluó mediante puntuación; durante una observación de 30 min después de la exposición, se registraron los momentos de estornudo, el nivel de picazón nasal y la cantidad de secreción nasal. Los criterios de puntuación se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1. Criterios de puntuación para los síntomas de la rinitis alérgica Puntuación de los Momentos de
síntomas (puntos) estornudo Nivel de la picazón nasal Moco nasal
1 1~3 Rascado ligero de la nariz Llegando a la abertura nasal anterior 2 4~10 Rascado frecuente de la nariz Más allá de la abertura nasal anterior 3 superior a 10 Rascado continuo de la nariz Por toda la cara
Una puntuación total de 5 puntos indicó una modelización exitosa, Tras lo que se prosiguió con la administración nasal hasta que se completó el experimento de tratamiento.
2.1.4 Indicadores de ensayo
Se midieron los niveles de AMPc y GMPc en sangre, y se realizó un recuento de los mastocitos en los tejidos de la mucosa nasal.
2.1.4.1 Medición del AMPc y GMPc en sangre
Se extrajo sangre de la arteria carótida, y se aisló el suero mediante ELISA.
2.1.4.2 Recuento de mastocitos de la mucosa nasal
Se despegó la piel de la zona maxilar nasal, se separó el maxilar del cráneo y se diseccionó a lo largo de la mediana nasal para dejar el tabique nasal y las cavidades nasales de ambos lados al descubierto. Se cortó la sección anterior y media del tabique nasal y se fijó en una solución de formaldehído al 10 % durante 72 h, luego se colocó en una solución de descalcificación para descalcificarse durante 3 días, se deshidrató con un gradiente de alcohol hasta la claridad y se embebió en parafina. Se realizaron cortes convencionales de 4 pm y se tiñeron con azul de toluidina, y se observaron bajo un microscopio para realizar el número total de mastocitos de la muestra.
2.2 Efecto sobre la rinitis alérgica en cobayas causada por TDI
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2. Igual que en 2.1.2.
2.2.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en cobaya
La modelización se llevó a cabo con TDI. Las cobayas distintas de las del grupo de control en blanco se modelizaron usando un TDI al 10 %. Se pipetearon 10 pl gota a gota en ambas cavidades nasales de las cobayas (5 pl por cada lado) una vez al día durante 7 días consecutivos, para establecer modelos animales de rinitis alérgica en cobayas11'. Se administró por vía nasal un volumen equivalente de aceite de oliva al grupo de control en blanco. Se prosiguió con la administración nasal hasta que se completó el experimento de tratamiento.
Criterios de evaluación para la eficacia de la modelización: la eficacia se evaluó mediante puntuación; durante una observación de 30 min después de la exposición, se registraron los momentos de estornudo, el nivel de picazón nasal y la cantidad de secreción nasal. Los criterios de puntuación se muestran en la Tabla 1.
2.2.4 Indicadores de ensayo
Observación del comportamiento; recuento de eosinófilos en la secreción nasal; mediciones de IgE en suero total e histamina en sangre; medición del espesor de la mucosa nasal.
2.2.4.1 Observación del comportamiento de las cobayas
Tras la exposición a la administración nasal de TDI, se proporcionaron las puntuaciones de acuerdo con los criterios de la Tabla 1.
2.2.4.2 Recuento de eosinófilos (EOS) en la secreción nasal
Se preparó un frotis de secreción nasal de cobayas en un portaobjetos, y se mejoró de acuerdo con el método de Loren[2'. Los EOS aparentes se hicieron visibles en el campo con 40 aumentos bajo el microscopio digital, y se realizó el recuento del número de EOS de la lámina propria de este sitio en de 3 a 5 campos de alta potencia, y se usó para indicar el grado de infiltración de los EOS.
2.2.4.3 Medición de IgE en suero total e histamina en sangre
Un día después de completarse la administración, se anestesiaron las cobayas con hidrato de cloral al 10 % y se extrajo sangre de la aorta abdominal. Se midió la IgE en suero total mediante radioinmunoensayo. Se añadieron otros 5 ml de sangre en un tubo anticoagulante y se almacenaron a -20 °C hasta su uso. Se extrajo histamina, y se determinó el contenido de histamina mediante espectrofotometría de fluorescencia[3'. La ecuación para el cálculo fue la siguiente:
Contenido de histamina en sangre (mg/l) = [(valor de la muestra - valor de la muestra en blanco)/(valor del patrón - valor del patrón en blanco)] x concentración de histamina del patrón
(La concentración de histamina del patrón fue de 50,2 mg • l-1).
2.2.4.4 Medición del espesor de la mucosa nasal
La recogida de material y el corte fueron los mismos que en el Experimento 2.1.4.2. Tras la tinción con HE, se midió cuantitativamente el espesor de la mucosa nasal con un analizador de imágenes. Se determinó la distancia desde el vértice de las protuberancias de la mucosa de la superficie de la mucosa cubierta por el epitelio cilíndrico ciliado pseudoestratificado hasta el cartílago del tabique nasal (incluyendo la capa epitelial y la lámina propria) de cada muestra como el espesor de la mucosa.
2.3 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control en blanco, el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 3. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 3 sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la ovoalbúmina
3.1.1 Efecto sobre el comportamiento de las ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 2. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las ratas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 2. Efecto de la Composición 3 sobre las puntuaciones de los smtomas de la rinitis alérgica en ratas antes y ________________________________ después de la dosificación (x±s)________________________________
Número de Dosis (g de Después de la dosificación Antes de la
Grupos animales fármaco
bruto/kg) dosificación Día 7 Día 14 Día 21 Grupo de control
en blanco 10 - 0,28 ± 0,31 0,39 ± 0,30 0,37 ± 0,25 0,35 ± 0,21 Grupo de control
modelo 10 - 6,91 ± 1,80** 6,73 ± 1,49** 7,04 ± 1,72** 6,96 ± 1,49** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 7,20 ± 1,47** 3,49 ± 1,03ññ 3,81 ± 1,20aa 3,41 ± 1,20aa Grupo de dosis
baja de fármaco 10 1,0 6,91 ± 1,25** 5,79 ± 1,02 6,28 ± 1,39 5,87 ± 1,30 de ensayo
Grupo de dosis
media de fármaco 10 2,0 7,26 ± 1,68** 5,36 ± 1,19a 5,51 ± 1,40a 3,97 ± 1,35aa de ensayo
Grupo de dosis
alta de fármaco de 10 6,0 7,05 ± 1,50** 4,09 ± 1,07aa 3,85 ± 1,29aa 3,55 ± 1,13aa ensayo
Nota: **p < 0,01 frente al grupo de control en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto de la Composición 3 sobre los niveles de AMPc y GMPc en suero en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel de AMPc en suero (p < 0,01) y un nivel significativamente aumentado de GMPc en suero (p <0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de Bi-yan-kang y todos los grupos de fármaco de ensayo mostraron un nivel de AMPc en suero significativamente aumentado (p < 0,01 o p < 0,05); el grupo de Bi-yan-kang y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de GMPc en suero significativamente reducido (p < 0,01 o p < 0,05), y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
3.1.3 Efecto de la Composición 3 sobre los mastocitos en la mucosa nasal de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de control modelo aumentó significativamente con una diferencia altamente significativa (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con el fármaco de ensayo disminuyó significativamente con una diferencia significativa (p < 0,01).
Tabla 3. Efecto de la Composición 3 sobre los niveles de AMPc_y GMPc en suero y de los mastocitos de la mucosa ______________________________________ nasal en ratas (x±s)______________________________________
Dosis (g de
Grupos fármaco Número de AMPc GMPc Recuento de bruto/kg) animales (pmol/ml) (pmol/ml) mastocitos (células) Grupo de control en blanco - 10 20,85 ± 4,87 9,45 ± 2,31 1,59 ± 1,25 Grupo de control modelo - 10 10,96 ± 3,82** 14,31 ± 4,57** 13,82 ± 4,67** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 17,30 ± 3,51aa 9,51 ± 2,32aa 5,78 ± 2,18aa Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,0 10 14,45 ± 3,79 12,98 ± 3,81 8,56 ± 3,22ññ Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 15,37 ± 5,21 10,56 ± 2,72ñ 7,87 ± 3,45ññ Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 6,0 10 17,81 ± 4,22ññ 9,22 ± 3,76ññ 6,14 ± 2,23ññ Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 3 sobre la rinitis alérgica en cobayas causada por TDI
3.2.1 Efecto sobre el comportamiento de las cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las cobayas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 4. Efecto de la Composición 3 sobre las puntuaciones de los síntomas de la rinitis alérgica en cobayas antes y _________________________________ después de la dosificación (x±s)_________________________________
Número de Dosis (g de Antes de la Después de la dosificación Grupos animales fármaco
bruto/kg) dosificación Día 7 Día 14 Día 21 Grupo de control
en blanco 10 - 0,45 ± 0,28 0,47 ± 0,29 0,42 ± 0,21 0,35 ± 0,24 Grupo de control 10 modelo - 6,78 ± 1,72** 6,67 ± 1,27** 6,73 ± 1,12** 6,40 ± 0,96** Grupo de Biyan-kang 10 0,41 6,53 ± 1,59** 5,64 ± 0,96ñ 5,48 ± 0,82a 4,87 ± 1,28a Grupo de dosis
baja de fármaco 10 1,0 6,34 ± 1,60** 6,20 ± 1,25 6,15 ± 0,98 5,33 ± 1,22 de ensayo
Grupo de dosis
media de
fármaco de 10 2,0 6,82 ± 1,87** 5,83 ± 1,38a 5,76 ± 1,32aa 4,90 ± 0,76aa ensayo
Grupo de dosis
alta de fármaco 10 6,0 6,79 ± 1,73** 5,76 ± 1,17aa 5,53 ± 0,84aa 4,89 ± 0,93aa de ensayo
Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, aa p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.2 Efecto de la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control en blanco, aumentaron tanto la histamina en sangre como la IgE en suero total en el grupo modelo (p < 0,01), indicando una modelización experimental exitosa. En comparación con el grupo modelo, la absorbancia de la fluorescencia de la histamina y la concentración total de IgE en suero en los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo y en el grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05), donde la histamina en los grupos de dosis media y alta disminuyó casi hasta el nivel normal, lo que indica que la Composición 3 fue eficaz en el tratamiento de la rinitis alérgica mediante la inhibición del nivel de histamina en sangre y de IgE en suero.
Tabla 5. Efecto de la Composición 3 sobre la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas (x±s) Grupos Número de Dosis (g de fármaco Fluorescencia de la
animales bruto/kg) histamina (mg/l) lgE (Ul ml-1) Grupo de control en blanco 10 - 2,29 ± 0,48 0,132 ±
0,025 Grupo de control modelo 10 - 3,16 ± 0,89** 0,172 ±
0,032** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 2,14 ± 0,54ññ 0,128 ±
0,025ññ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 3,04 ± 0,44 0,165 ±
0,027 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 2,62 ± 0,42ñ 0,143 ±
0,027ñ Grupo de dosis alta de fármaco 136 ± de ensayo 10 6,0 2,39 ± 0,38ññ 0,
0,021ññ Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.3 Efecto sobre los eosinófilos (EOS) en la secreción nasal de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. El número de eosinófilos en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el número de eosinófilos en el grupo de Bi-yankang y en los grupos de tratamiento con el fármaco disminuyó significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
3.2.4 Efecto sobre el espesor de la mucosa nasal en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. Como resultado, en comparación con el grupo de control en blanco, en el grupo modelo, Se separó en diversos grados el epitelio de la mucosa sobre el tabique nasal de las cobayas, teniendo un espesor no uniforme y una estructura basal poco clara; las vénulas y los capilares de la lámina propria mostraron una aparente dilatación, el espacio tisular se expandió, y el espesor de la mucosa aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, los cambios patológicos anteriores en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con fármaco se aliviaron, y el espesor de la mucosa disminuyó significativamente (p < 0,01).
Tabla 6. Efecto de la Composición 3 sobre los EOS en la secreción nasal y en el espesor de la mucosa nasal en _______________________________________ cobayas(x±s)_______________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de EOS Espesor de la bruto/kg) animales (x10'9/l) mucosa (mm) Grupo de control en blanco - 10 2,77 ± 1,27 0,162 ± 0,054 Grupo de control modelo - 10 17,67 ± 4,08** 0,295 ± 0,069** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 9,30 ± 3,67ññ 0,196 ± 0,051ññ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 11,08 ± 4,01ññ 0,235 ± 0,052ññ Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 10,42 ± 3,46ññ 0,216 ± 0,056ññ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 6,0 10 9,54 ± 2,76ññ 0,207 ± 0,072ññ Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññp < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la eficacia de la Composición 3 se refleja principalmente en los siguientes aspectos: 1) es capaz de disminuir significativamente la puntuación de los síntomas nasales de las ratas modelizadas, aumentando el nivel de AMPc en suero y reduciendo el nivel de GMPc en ratas con rinitis alérgica; 2) reduce el número de mastocitos en la mucosa nasal de las ratas y reduce su infiltración en las zonas inflamadas; 3) es capaz de disminuir la puntuación de los síntomas nasales de las cobayas modelizadas; 4) disminuye el número de EOS en la secreción nasal de las cobayas y reduce la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; 5) es capaz de disminuir significativamente la concentración de histamina en sangre en las cobayas y de reducir los mediadores inflamatorios; 6) alivia la inflamación de la mucosa nasal de las cobayas. De acuerdo con los resultados de los estudios experimentales, se considera que la Composición 3 es eficaz para resistir la rinitis alérgica.
Ejemplo 53. Informe de experimentos con animales de la Composición 3 obtenida en el Ejemplo 3 contra la prevención y el tratamiento del asma alérgico
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 3 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma y Cordyceps sinensis en polvo fermentado) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo.
1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 11,41 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Se proporcionaron ratas SD, la mitad de las cuales eran machos y la otra mitad hembras, cada una de 180 a 220 g, por el Centro de Laboratorios para Animales, Universidad de Medicina Tradicional China de Jiangxi (SCXK (Jiangxi) 2006-0001). Se proporcionaron cobayas, la mitad de las cuales eran machos y la otra mitad hembras, cada una de 180 a 220 g, por el Departamento de Servicios Científicos Experimentales con Animales de Dongchuang, Distrito de Kaifu, Changsha, Provincia de Hunan (Número de certificación: SCXK (Hunan) 2006-0001).
1.3 Reactivos primarios
Ovoalbúmina (OVA) (Sigma, n.° de lote: 025K0594); Cloruro de acetilcolina (Shanghai Jingchun Reagent Co., Ltd., n.° de lote: 21205); fosfato de histamina (Shanghai Jingchun Reagent Co., Ltd., n.° de lote: 22270); dexametasona (Zhengzhou Zhuofeng Pharmaceuticals, n.° de lote: 0904213); kits de ELISA de IL-4 e If N-y (Great Wall Biochemicals).
1.4 Instrumentos primarios
Sistema de análisis y adquisición de señales biológicas MD3000 (Huaibeizhenghua Bioinstrumentation Co., Ltd.); transductor respiratorio ZH-100 (Huaibeizhenghua Bioinstrumentation Co., Ltd.); atomizador ultrasónico 402A1 (Jiangsu Juyue Medical Device Co., Ltd.); Microscopio OLYMPUS; Microscopio digital de contraste de fase de fluorescencia invertida TE2000-S (Nikon Inc., Japón); microtomo (Leica, Alemania).
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
2.1.1 Agrupamiento de animales
Las ratas (la mitad de las cuales era machos y la otra mitad era hembras) se dividieron aleatoriamente en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo positivo de fármaco (grupo de dexametasona) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 3, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en ratas
El día 1, todos los animales excepto los del grupo de control en blanco se sensibilizaron mediante inyección intraperitoneal con 1 ml de suspensión que contenía 10 mg de OVA, 200 mg de Al(OH)3 en polvo seco, y 6 x 109 vacunas de Pertussis inactivadas en solución salina fisiológica, y se sensibilizaron una vez más el día 8. A partir del día 15, se expusieron todos los grupos de animales, excepto el grupo de control en blanco, a OVA al 1 % atomizada por ultrasonidos durante aproximadamente 20 min cada vez, de 8 a 9 de la mañana todos los días, hasta que las ratas mostraron episodios asmáticos, que duraron 3 semanas. Durante la exposición a la atomización, las ratas mostraron síntomas tales como agitación, estornudos, incontinencia urinaria y fecal, rascado de las orejas y cianosis, lo que sugiere una replicación exitosa del modelo de asma.
2.1.3 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 3 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (8,76 mg de polvo seco/ml, 17,52 mg de polvo seco/ml, 52,56 mg de polvo seco/ml) para llevar a cabo los experimentos. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0ml/100g de peso corporal. el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen
equivalente de solución salina fisiológica al 0,9% 30 min antes de la exposición; y el grupo de fármaco positivo recibió dexametasona a una dosis de 0,5 mg/kg 30 min antes de cada desafío12'. Los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 3 recibieron cada uno por vía intragástrica la dosis respectiva del fármaco de ensayo 30 min antes de cada exposición. Al mismo tiempo, el grupo de control en blanco recibió por inyección intraperitoneal, se expuso a la atomización con o recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9 %. La administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.4 Registro del período latente del asma inducido en ratas
Se fijó un transductor respiratorio ZH-100 alrededor de la caja torácica de cada rata (la tensión se ajustó a de aproximadamente 1 a 2 g de modo que la amplitud de la onda respiratoria fuera de 1 a 2 mv). Se conectó el transductor a un sistema de análisis y adquisición de señales biológicas MD3000. Se dispusieron los animales en una campana de vidrio cerrada conectada a un atomizador ultrasónico. Se encendió el sistema de adquisición, y se registró un segmento de onda respiratoria normal. Luego se aplicó la atomización ultrasónica con OVA al 1 % durante 20 min, y se registraron las ondas respiratorias del asma inducido en las ratas de manera continua durante 30 min tras iniciarse la atomización. Al mismo tiempo, se observó a simple vista el período desde el inicio de la atomización hasta la aparición de los síntomas (indicado por la primera contracción), y se registró como el período latente del asma.
2.1.5 Mediciones de los niveles de IL-4 e IFN-y
24 h después de la exposición final, las ratas se anestesiaron mediante inyección intraperitoneal con pentobarbital sódico al 3 % (30 mg/kg). Se extrajeron de 5 a 10 ml de sangre, y se midieron los niveles de IL-4 e IFN-y en sangre mediante ELISA.
2.1.6 Medición del contenido de EOS en los tejidos pulmonares
Se cortaron los tejidos del pulmón izquierdo y se fijaron en poliformaldehído al 4 % durante de 4 a 5 h, después se lavaron con agua, se deshidrataron con un gradiente de alcohol, y se sumergieron y embebidos en parafina. Se realizó la tinción con HE con un proceso de corte sucesivo, se observaron cambios inflamatorios en los tejidos y se contó la infiltración de los EOS. Para cada sección, un mismo observador escogió aleatoriamente 10 campos bajo un microscopio de gran aumento (400 aumentos), y se calcularon los números de EOS infiltrados alrededor de los bronquios y de los vasos, calculándose la media como el valor representativo para esta sección.
2.2 Efecto sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
2.2.1 Igual que en 2.1.1.
2.2.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en cobayas
El día 1, Se dispusieron las cobayas en una campana de vidrio cerrada de 4 l, en la que se pulverizó una solución de mezcla a 1:1 de Ach al 2% e His al 0,4% por atomización ultrasónica durante 15 s. Una vez completada la pulverización, se registró el período latente de asma inducido en los cobayas (es decir, el período desde el final de la pulverización hasta los ataques asmáticos, desde la dificultad extrema para respirar hasta la contracción y la caída). Se excluyeron los animales que tenían un período de asma latente superior a 120 s.
2.2.3 Pauta posológica
Igual que en 2.1.3.
2.2.4 Registro del período latente del asma
Igual que en 2.14.1.
2.2.5 Medición de la IgE en suero y de BALF
Se empleó radioinmunoensayo de tipo sándwich de doble anticuerpo.
2.3 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X± S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre los grupos. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 3 sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
3.1.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 1. Se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en ratas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las ratas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
Tabla 1. Efecto sobre el período latente del asma inducido en ratas (x±s)
Grupos Número de Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la animales bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 76,03 ± 13,23** 75,62 ± 11,65** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 75,84 ± 12,36** 162,61 ± 17,88aa Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 10 1,0 76,42 ± 14,42** 87,15 ± 19,82 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 75,49 ± 15,38** 93,56 ± 21,75ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 74,07 ± 17,56** 112,87 ± 21,78ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 2. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel en suero de IFN-y (P <0,01), pero un aumento significativo del nivel de IL-4 en suero (p <0,01), lo que indica un grave desequilibrio de la proporción de IFN-y/IL-4 durante los ataques de asma. En comparación con el grupo modelo, el grupo de dexametasona y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de IL-4 significativamente reducido (p <0,05 o p < 0,01) y un nivel de IFN-y significativamente mayor (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que el fármaco de ensayo puede corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4.
Tabla 2. Efecto de la Composición 3 sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas (x±s) Grupos Dosis
b
(g
ru
d
to
e
/k
f
g
á
) rmaco Número de animales IL-4 (pg/ml) ifn -y (pg/ml) Grupo de control en blanco - 10 12,33 ± 2,43 26,35 ± 4,56 Grupo de control modelo - 10 23,06 ± 3,29** 11,52 ± 3,24** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 12,88 ± 4,13aa 20,51 ± 4,65aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 21,07 ± 3,08 12,83 ± 3,68 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 18,64 ± 3,81a 15,24 ± 3,78a Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 15,94 ± 3,26aa 18,58 ± 4,67aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de EOS en ratas en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo mostraron un número significativamente reducido de EOS (p < 0,01), lo que indica que la Composición 3 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas.
Tabla 3. Efecto de la Composición 3 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata (x±s) Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales EOS (células/HP) Grupo de control en blanco - 10 5,76 ± 1,35 Grupo de control modelo - 10 108,85 ± 12,74** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 27,51 ± 4,31aa Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,0 10 98,21 ± 10,28 Grupo de dosis media de fármaco de
ensayo 2,0 10 89,13 ± 9,24ññ Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 67,01 ± 8,57ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 3 sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
3.2.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en cobayas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las cobayas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que la Composición 3 aumenta enormemente los síntomas asmáticos en las cobayas.
Tabla 4. Efecto de la Composición 3 sobre el período latente del asma inducido en cobayas (x±s)
Grupos Número de animales Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 74,84 ± 14,6** 77,23 ± 11,61** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 77,32 ± 13,95** 160,92 ± 19,72aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 76,52 ± 14,86** 90,31 ± 19,23 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 75,58 ± 15,37** 94,74 ± 21,68ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 75,18 ± 1534** 113,73 ± 21,91a* Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.2 Efecto sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. El contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo de dexametasona y en los grupos en dosis media y alta del fármaco de ensayo disminuyeron significativamente (p <0,01 o p < 0,05), lo que indica que tanto la dexametasona como el fármaco de ensayo pueden inhibir la respuesta inflamatoria alérgica en el pulmón de cobaya y mejorar los síntomas asmáticos.
Tabla 5. Efecto de la Composición 3 sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g de f
g
á
) rmaco Número de animales Sue bruto/k ro (U/l) BALF (U/l) Grupo de control en blanco - 10 3,02 ± 0,93 3,55 ± 0,87 Grupo de control modelo - 10 5,47 ± 1,33** 5,32 ± 1,71** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 3,58 ± 1,19aa 3,49 ± 0,82aa Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,0 10 5,24 ± 2,27 4,28 ± 1,44 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 4,15 ± 1,14a 3,84 ± 1,42a Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 3,85 ± 1,12aa 3,12 ± 0,82aa
Grupos Dosis (g d
bruto
e
/k
f
g
á
) rmaco Número de animales Suero (U/l) BALF (U/l) Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. En comparación con el grupo de control en blanco, el nivel de recuento de e Os en las cobayas del grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el nivel de recuento de EOS en el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo se redujo significativamente (p < 0,01), lo que indica que la Composición 3 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de eOs en los tejidos pulmonares de las cobayas.
Tabla 6. Efecto de la Composición 3 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g de fármaco bruto/kg) Número de animales EOS (células/HP) Grupo de control en blanco - 10 4,24 ± 2,49 Grupo de control modelo - 10 97,61 ± 14,82** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 31,78 ± 7,55aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 88,28 ± 12,18 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 77,25 ± 12,14ññ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 6,0 10 61,24 ± 11,68a* Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la Composición 3 es capaz de mejorar significativamente los síntomas asmáticos en ratas y de prolongar el período de latencia del asma inducido en cobayas en los grupos modelo; de reducir el nivel de IL-4 en suero, de aumentar el nivel de IFN-y en suero y corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4 en ratas con asma; de reducir el número de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas y cobayas, y mejorar la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; de reducir el contenido total de IgE en suero y de BALF de las cobayas, y mejorar los síntomas inflamatorios pulmonares. Por lo tanto, la Composición 3 se considera eficaz en la resistencia al asma alérgico.
Ejemplo 54. Informe de experimentos con animales de la Composición 4 obtenida en el Ejemplo 4 contra la alergia y la dermatitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 4 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma y Cordyceps) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 10,97 g de fármacos brutos totales. Su ingesta diaria recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 51.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 51.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 51.
2. Métodos experimentales
2.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron los animales aleatoriamente en grupos con 10 animales por grupo en función del peso corporal. Se establecieron un grupo de control modelo, grupos de dosis baja, media y alta de la Composición 4 y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona).
2.2 Pauta posológica
La ingesta diaria de la Composición de fármaco 4 de ensayo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para un ratón fue: grupo de dosis baja: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 4,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 12,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 5, 10 y 30 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (18,23 mg de polvo seco/ml, 36,46 mg de polvo seco/ml y 109,38 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
La ingesta diaria para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (9,12 mg de polvo seco/ml, 18,23 mg de polvo seco/ml y 54,69 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
2.3 Efecto de la Composición 4 sobre la anafilaxia pasiva (PCA) en ratas causada por la ovoalbúmina
2.3.1 Preparación de antisuero
Igual que en Ejemplo 51.
2.3.2 Establecimiento de modelos de suero anti-ovoalbúmina de rata
Se tomó suero anti-ovoalbúmina y se diluyó a 1:4 o 1:8 con solución salina fisiológica. Se dividieron aleatoriamente 50 ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 4, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 4 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 14 días consecutivos. El día 15, se afeitó el lomo de las ratas, y se inyectó por vía intradérmica un antisuero diluido en dos puntos de cada lado con 0,1 ml por punto. Tras 48 horas, se inyectó en la vena de la cola de cada rata una solución mixta de 1,0 ml de azul de Evans al 1 % y de ovoalbúmina al 1 % en solución salina fisiológica. Tras 30 min, se extrajo sangre arterial, se aisló el suero de la misma y se determinó el contenido de histamina mediante el método[2]. Se sacrificaron las ratas y se invirtió la piel del lomo para medir el diámetro de las manchas de reacción azules con el fin de determinar la diferencia entre los grupos de dosificación y el grupo modelo. Se fijó una muestra del tejido cutáneo de rata con formaldehído neutro, se deshidrató con un gradiente de alcohol, se embebió en parafina y se examinó para determinar la desgranulación de los mastocitos en el tejido[3].
2.3.3 Efecto de la Composición 4 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno[4]
Se dividieron aleatoriamente 50 ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 4, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se aplicó una solución al 5 % de 2,4-dinitroclorobenceno en etanol sobre la piel abdominal (afeitada) de los ratones para la sensibilización. Se llevó a cabo la administración intragástrica dos días antes de la sensibilización; el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de agua destilada; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 4 recibieron las soluciones de ensayo correspondientes por vía intragástrica a un volumen de dosis de 0,1 ml/10g de peso corporal; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 7 días después de la sensibilización, se aplicó una solución al 1 % de 2,4-dinitroclorobenceno en la oreja derecha, y se sacrificaron los ratones tras 24 horas, y se cortaron ambas orejas a lo largo de la línea de base de la aurícula. Se perforaron discos que tenían un diámetro de 8 mm en la misma posición en ambas orejas, se pesaron con precisión en una balanza electrónica, y se tomó la diferencia de peso entre la oreja izquierda y derecha como el valor de hipersensibilidad retardada.
2.3.4 Efecto de la Composición 4 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular151 Se dividieron aleatoriamente los ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 4, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se llevó a cabo la administración intragástrica a los ratones una vez al día durante 10 días consecutivos. 30 min después de la administración final, se inyectó una solución de dextrano de bajo peso molecular al 0,0125% a 0,1 g/10 g en la vena de la cola. Se observó y registró el número de eventos de picazón (los eventos de picazón se indicaron al rascarse la cabeza con las patas delanteras, al rascarse el cuerpo con las patas traseras y al morder en varias partes del cuerpo) ocurrido en el transcurso de los 30 min posteriores a la inyección de la solución de dextrano de bajo peso molecular en las venas de la cola de los ratones de cada grupo.
2.3.5 Efecto de la Composición 4 sobre la permeabilidad capilar en ratas[6]
Se dividieron aleatoriamente las ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 4, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 4 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10 ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 1 hora después de la administración final, se inyectó en la zona afeitada (afeitada antes de la administración) del lomo de las ratas por vía intradérmica 1 mg/ml de fosfato de histamina a una dosis de 0,1 ml/rata, y luego se inyectó en la vena de la cola de inmediato una solución acuosa de azul de Evans al 1 % a una dosis de 1 ml/rata.
Tras 20 minutos, se sacrificaron los animales por dislocación cervical. Se retiraron cortando las zonas de la piel con manchas azules y se cortaron en trozos pequeños, se empaparon en una solución de 5 ml de acetona:solución salina fisiológica (7:3) durante 48 horas, se centrifugaron, y se midió la absorbancia del sobrenadante a 610 nm. 2.4 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 4. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 4 sobre la anafilaxia pasiva en ratas
Los resultados del ensayo se muestran en las Tablas 1 y 2. En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de dosis baja de la Composición 4 mostró una tendencia a disminuir el diámetro de las manchas azules en ratas con sensibilidad al suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, a disminuir la desgranulación de los mastocitos y a disminuir el contenido de histamina en suero, que, sin embargo, no tuvo significación estadística; el grupo de control de prednisona y los grupos de dosis medias y altas de la Composición 4 mostraron un efecto de disminución significativa del diámetro de las manchas azules en ratas sensibilizadas con suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, reduciéndose la desgranulación de los mastocitos y reduciéndose el contenido de histamina en suero, con una diferencia estadística significativa o muy significativa. Esto indica que la Composición 4 tuvo un efecto inhibidor significativo sobre la anafilaxia pasiva en ratas.
Tabla 1. Efecto de la Composición 4 sobre el diámetro de las manchas azules de PCA en ratas (x±s)
Diámetro de manchas azules Grupos Dosis
b
(g
ru
d
to
e f
g
á
) rmaco Número de animales (mm)
/k
1:4 1:8 Grupo de control modelo 0,0 10 17,22 ± 2,57 10,62 ± 2,12 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 11,94 ± 1,90** 7,23 ± 1,60** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,2 10 15,68 ± 1,58 9,36 ± 1,48 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,4 10 14,80 ± 2,10* 8,50 ± 1,62* Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 7,2 10 13,62 ± 2,07** 7,56 ± 1,70** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
Tabla 2. Efecto de la Composición 4 sobre la desgranulación dejos mastocitos y el contenido de histamina en suero ______________________________________ en ratas PCA (x±s)______________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Desgranulación Fluorescencia de la bruto/kg) animales histamina (mg/l) Grupo de control modelo 0,0 10 57,92 ± 9,65 4,17 ± 0,79 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 19,46 ± 8,72** 1,92 ± 0,61** Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,2 10 49,27 ± 9,05 3,58 ± 0,88 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,4 10 46,48 ± 8,27* 3,10 ± 0,92* Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 7,2 10 29,31 ± 7,99** 2,62 ± 0,76** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.2 Efecto de la Composición 4 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno
Los resultados se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control modelo, el grado de inflamación de los discos auriculares de los ratones disminuyó significativamente en los grupos de la dosis media y alta de Composición 4, lo que indica que la Composición 4 tuvo un buen efecto inhibidor sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por 2,4-dinitroclorobenceno.
Tabla 3. Efecto de la Composición 4 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por __________________________________el 2,4-dinitroclorobenceno (x±s)__________________________________
Dosis (g de fármaco Número de Grado de inflamación de los discos bruto/kg) animales auriculares de ratón (mg) Grupo de control modelo 0,0 10 6,20 ± 0,90
Grupo de control positivo 5,0 mg 10 4,22 ± 0,96**
Grupo de dosis baja de fármaco 2,0 de ensayo 10 5,62 ± 0,87
Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 4,0 10 5,08 ± 0,94*
Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 12,0 10 4,60 ± 0,80**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.3 Efecto de la Composición 4 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 4. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 4, lo que indica que la Composición 4 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina.
Tabla 4. Efecto de la Composición 4 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular ____________________________________________ Íí±5)________________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de eventos de picazón bruto/kg) animales (30 min)
Grupo de control modelo 0,0 10 34,12 ± 9,54 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 14,25 ± 6,72** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 2,0 10 29,46 ± 8,03 Grupo de dosis media de 4 fármaco de ensayo ,0 10 22,53 ± 9,50* Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 12,0 10 18,12 ± 8,26**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.4 Efecto de la Composición 4 sobre la permeabilidad capilar en ratas
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 4, lo que indica que la Composición 4 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina.
Tabla 5. Efecto de la Composición 4 sobre la permeabilidad capilar en ratas (x±s)
Grupos Dosis (g d
to
e
/k
f
g
á
) rmaco Número de anima bru les Valor de DO Grupo de control modelo 0,0 10 0,978 ± 0,104 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 0,656 ± 0,088** Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,2 10 0,924 ± 0,096 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,4 10 0,851 ± 0,108* Grupo de dosis alta de fármaco de 7,2 10 0,776 ±
ensayo 0,122**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales en animales demuestran que la Composición 4 es significativamente eficaz en la inhibición de la anafilaxia pasiva en ratas causada por la ovoalbúmina, que la Composición 4 es eficaz en la inhibición de la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno y que la Composición 4 es significativamente eficaz en reducir el aumento de la permeabilidad capilar en las ratas causado por el fosfato de histamina. Los resultados anteriores indican una buena eficacia de la Composición 4 para resistir las alergias, y para prevenir y tratar enfermedades alérgicas tales como la dermatitis alérgica y la urticaria. Ejemplo 55. Informe de experimentos con animales de la Composición 4 obtenida en el Ejemplo 4 contra la prevención y el tratamiento de la rinitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 4 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma y Cordyceps) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 10,97 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 52.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 52.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 52.
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la OVA
2.1.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron aleatoriamente ratas en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente, en función de su puntuación, en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo de positivo de fármaco (grupo de Bi-yan-kang) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 4, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 4 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0ml/100g de peso corporal. El grupo de control en blanco y el grupo modelo de rinitis alérgica recibieron por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica; el grupo de Bi-yan-kang recibió el fármaco a una dosis de 410 mg/kg. La administración intragástrica se inició después de una modelización exitosa y se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en ratas
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4 Indicadores de ensayo
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4.1 Medición del AMPc y GMPc en sangre
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4.2 Recuento de mastocitos de la mucosa nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.2 Efecto sobre la rinitis alérgica en cobayas causada por TDI
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2. Igual que en 2.1.2.
2.2.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en cobaya
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4 Indicadores de ensayo
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.1 Observación del comportamiento de las cobayas
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.2 Recuento de eosinófilos (EOS) en la secreción nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.3 Medición de IgE en suero total e histamina en sangre
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.4 Medición del espesor de la mucosa nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.3 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control en blanco, el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 4. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 4 sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la ovoalbúmina
3.1.1 Efecto sobre el comportamiento de las ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 2. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las ratas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 2. Efecto de la Composición 4 sobre las puntuaciones de los síntomas de la rinitis alérgica en ratas antes y ________________________________ después de la dosificación (x±s)________________________________
Después de
sis (g de
Número de Do la la
Grupos animales fármaco Antes de
bruto/kg) dosificación dosificación
Día 7 Día 14 Día 21 Grupo de control en
blanco 10 - 0,35 ± 0,31 0,40 ± 0,22 0,37 ± 0,19 0,33 ± 0,14 Grupo de control
modelo 10 - 6,68 ± 1,52** 6,60 ± 1,27** 6,90 ± 1,32** 6,54 ± 1,16** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 6,63 ± 1,24** 3,24 ± 0,96aa 3,67 ± 1,24aa 2,96 ± 0,98aa Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 10 1,0 6,74 ± 1,15** 5,80 ± 0,85 5,76 ± 1,39 5,61 ± 1,06 Grupo de dosis media
de fármaco de ensayo 10 2,0 6,52 ± 1,34** 5,27 ± 1,23a 5,29 ± 1,43a 4,56 ± 1,45aa Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 10 6,0 6,69 ± 1,08** 4,66 ± 0,82aa 4,40 ± 1,36aa 4,24 ± 1,33aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo de control en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto de la Composición 4 sobre los niveles de AMPc y GMPc en suero en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel de AMPc en suero (p < 0,01) y un nivel significativamente aumentado de GMPc en suero (p <0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de Bi-yan-kang y todos los grupos de fármaco de ensayo mostraron un nivel de AMPc en suero significativamente aumentado (p < 0,01 o p < 0,05); el grupo de Bi-yan-kang y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de GMPc en suero significativamente reducido (p < 0,01 o p < 0,05), y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
3.1.3 Efecto de la Composición 4 sobre los mastocitos en la mucosa nasal de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de control modelo aumentó significativamente con una diferencia altamente significativa (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con el fármaco de ensayo disminuyó significativamente con una diferencia significativa (p < 0,01).
Tabla 3. Efecto de la Composición 4 sobre los niveles de AMPc_y GMPc en suero y de los mastocitos de la mucosa ______________________________________ nasal en ratas (x±s)______________________________________ Grupos Dosis (g de fármaco Número de AMPc GMPc Recuento de bruto/kg) animales (pmol/ml) (pmol/ml) mastocitos (células) Grupo de control en blanco - 10 20,05 ± 4,97 9,80 ± 2,66 1,70 ± 1,39 Grupo de control modelo - 10 1
3
0
,
,
8
3
8
0
** ± 14,85 ±
4,86** 14,29 ± 4,73** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 18,30 ± 9,00 ±
3,59aa 2,46aa 5,86 ± 2,19aa Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,0 10 14,15 ±
3,90a 12,45 ± 3,95 8,91 ± 3,47aa Grupo de dosis media de 2,0 10 15,85 ± 10,60 ± 7,77 ± 3,21aa
3.2 Efecto de la Composición 4 sobre la rinitis alérgica en cobayas causada por TDI
3.2.1 Efecto sobre el comportamiento de las cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las cobayas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 4. Efecto de la Composición 4 sobre las puntuaciones de los síntomas de la rinitis alérgica en cobayas antes y d é d l d ifi ió ( ± )
3.2.2 Efecto de la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control en blanco, aumentaron tanto la histamina en sangre como la IgE en suero total en el grupo modelo (p < 0,01), indicando una modelización experimental exitosa. En comparación con el grupo modelo, la absorbancia de la fluorescencia de la histamina y la concentración total de IgE en suero en los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo y en el grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05), donde la histamina en los grupos de dosis media y alta disminuyó casi hasta el nivel normal, lo que indica que la Composición 4 fue eficaz en el tratamiento de la rinitis alérgica mediante la inhibición del nivel de histamina en sangre y de IgE en suero. _ Tabla 5. Efecto de la Composición 4 sobre la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas (x±s)
3.2.3 Efecto sobre los eosinófilos (EOS) en la secreción nasal de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. El número de eosinófilos en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el número de eosinófilos en el grupo de Bi-yankang y en los grupos de tratamiento con el fármaco disminuyó significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
3.2.4 Efecto sobre el espesor de la mucosa nasal en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. Como resultado, en comparación con el grupo de control en blanco, en el grupo modelo, Se separó en diversos grados el epitelio de la mucosa sobre el tabique nasal de las cobayas, teniendo un espesor no uniforme y una estructura basal poco clara; las vénulas y los capilares de la lámina propria mostraron una aparente dilatación, el espacio tisular se expandió, y el espesor de la mucosa aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, los cambios patológicos anteriores en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con fármaco se aliviaron, y el espesor de la mucosa disminuyó significativamente (p < 0,01).
Tabla 6. Efecto de la Composición 4 sobre los EOS en la secreción nasal y en el espesor de la mucosa nasal en _______________________________________ cobayas(x±s)_______________________________________ Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de EOS (*10‘ Espesor de la mucosa bruto/kg) animales 9/l) (mm) Grupo de control en blanco - 10 2,67 ± 1,37 0,158 ± 0,051 Grupo de control modelo - 10 18,67 ± 4,18** 0,285 ± 0,072** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 9,29 ± 3,8a4 0,198 ± 0,049ññ Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,0 10 13,28 ± 4,11AA 0,215 ± 0,048ññ Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 11,42 ± 3,56ññ 0,196 ± 0,069ññ Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 6,0 10 10,14 ± 2,86ññ 0,187 ± 0,061ññ Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, o < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la eficacia de la Composición 4 se refleja principalmente en los siguientes aspectos: 1) es capaz de disminuir significativamente la puntuación de los síntomas nasales de las ratas modelizadas, aumentando el nivel de AMPc en suero y reduciendo el nivel de GMPc en ratas con rinitis alérgica; 2) reduce el número de mastocitos en la mucosa nasal de las ratas y reduce su infiltración en las zonas inflamadas; 3) es capaz de disminuir la puntuación de los síntomas nasales de las cobayas modelizadas; 4) disminuye el número de EOS en la secreción nasal de las cobayas y reduce la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; 5) es capaz de disminuir significativamente la concentración de histamina en sangre en las cobayas y de reducir los mediadores inflamatorios; 6) alivia la inflamación de la mucosa nasal de las cobayas. De acuerdo con los resultados de los estudios experimentales, se considera que la Composición 4 es eficaz para resistir la rinitis alérgica.
Ejemplo 56. Informe de experimentos con animales de la Composición 4 obtenida en el Ejemplo 4 contra la prevención y el tratamiento del asma alérgico
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 4 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma y Cordyceps) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 10,97 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 53.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 53.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 53.
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
2.1.1 Agolpamiento de animales
Las ratas (la mitad de las cuales era machos y la otra mitad era hembras) se dividieron aleatoriamente en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo positivo de fármaco (grupo de dexametasona) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 4, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en ratas
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.3 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 4 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (9,12 mg de polvo seco/ml, 18,23 mg de polvo seco/ml, 54,69 mg de polvo seco/ml) para llevar a cabo los experimentos. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0ml/100g de peso corporal. el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9% 30 min antes de la exposición; y el grupo de fármaco positivo recibió dexametasona a una dosis de 0,5 mg/kg 30 min antes de cada desafío12'. Los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 4 recibieron cada uno por vía intragástrica la dosis respectiva del fármaco de ensayo 30 min antes de cada exposición. Al mismo tiempo, el grupo de control en blanco recibió por inyección intraperitoneal, se expuso a la atomización con o recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9 %. La administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.4 Registro del período latente del asma en ratas
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.5 Mediciones de los niveles de IL-4 e IFN-y
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.6 Medición del contenido de EOS en los tejidos pulmonares
Igual que en Ejemplo 53.
2.2 Efecto sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en cobayas
Igual que en Ejemplo 53.
2.2.3 Pauta posológica
Igual que en 2.1.3.
2.2.4 Registro del período latente del asma
Igual que en 21.4.1.
2.2.5 Medición de la IgE en suero y de BALF
Igual que en Ejemplo 53.
2.3 Método estadístico
Igual que en Ejemplo 53.
3 Resultados
3.1 Efecto de la Composición 4 sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
3.1.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 1. Se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en ratas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las ratas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
Tabla 1. Efecto de la Composición 4 sobre el período latente del asma inducido en ratas (x±s) Grupos Número de animales Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 77,24 ± 13,82** 75,54 ± 12,86** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 74,66 ± 11,09** 159,77 ± 20,28ññ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 75,63 ± 15,30** 85,03 ± 21,32 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 78,52 ± 14,07** 96,50 ± 23,65ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 78,59 ± 17,13** 102,67 ± 23,87ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 2. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel de IFN-y en suero (p < 0,01), pero un nivel significativamente aumentado de IL-4 en suero (p < 0,01), lo que indica un gran desequilibrio de la proporción de IFN-y/IL-4 durante los ataques de asma. En comparación con el grupo modelo, el grupo de dexametasona y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de IL-4 significativamente reducido (p <0,05 o p < 0,01) y un nivel de IFN-y significativamente mayor (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que el fármaco de ensayo puede corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4.
Tabla 2. Efecto de la Composición 4 sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas (x±s) Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales IL-4 (pg/ml) ifn -y (pg/ml) Grupo de control en blanco - 10 12,72 ± 2,53 24,31 ± 4,17 Grupo de control modelo - 10 22,45 ± 3,58** 11,85 ± 3,46** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 13,51 ± 4,31ññ 20,26 ± 4,86ññ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 20,57 ± 3,18 13,78 ± 3,77 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 18,25 ± 4,14ñ 15,60 ± 3,82ñ Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 16,12 ± 3,37ññ 17,36 ± 4,96ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de EOS en ratas en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo mostraron un número significativamente reducido de EOS (p < 0,01), lo que
indica que la Composición 4 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas.
Grupos Dosis (g de fár
bruto/kg).maco . N.u.mero d ,e animal .es EOS (células/HP) Grupo de control en blanco - 10 2,24 ± 0,85 Grupo de control modelo - 10 103,60 ± 13,94** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 28,39 ± 4,26“ Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,0 10 93. 21 ± 11,29 Grupo de dosis media de fármaco de
ensayo 2,0 10 78,13 ± 10,34ññ Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 65,22 ± 8,49ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; “ p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 4 sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
3.2.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en cobayas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las cobayas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que la Composición 4 aumenta enormemente los síntomas asmáticos en las cobayas.
Tabla 4. Efecto de la Composición 4 sobre el período latente del asma inducido en cobayas (x±s)
Grupos Numero de animales Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la r bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 76,18 ± 10,82** 77,00 ± 10,96** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 75,63 ± 9,09** 155,77 ± 16,28“ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 76,54 ± 14,30** 83,03 ± 21,32 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 77,82 ± 15,07** 97,50 ± 24,77ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 79,69 ± 19,13** 110,67 ± 24,93ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, “ p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.2 Efecto sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. El contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo de dexametasona y en los grupos en dosis media y alta del fármaco de ensayo disminuyeron significativamente (p <0,01 o p < 0,05), lo que indica que tanto la dexametasona como el fármaco de ensayo pueden inhibir la respuesta inflamatoria alérgica en el pulmón de cobaya y mejorar los síntomas asmáticos.
Tabla 5. Efecto de la Composición 4 sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g de fármaco Numero de animales Suer l) B bruto/kg) o (U/ ALF (U/l) Grupo de control en blanco - 10 2,04 ± 0,83 3,61 ± 0,84 Grupo de control modelo - 10 5,62 ± 1,37** 5,32 ± 1,24** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 3,75 ± 1,31“ 3,72 ± 0,72“ Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,0 10 5,11 ± 2,18 4,15 ± 1,57
Grupos Dosis (g de
k
f
g
á
) rmaco Número d bruto/ e animales Suero (U/l) BALF (U/l) Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 4,25 ± 1,14a 3,92 ± 1,45a Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 4,01 ± 1,09aa 3,89 ± 0,96aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. En comparación con el grupo de control en blanco, el nivel de recuento de e Os en las cobayas del grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el nivel de recuento de EOS en el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo se redujo significativamente (p < 0,01), lo que indica que la Composición 4 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de eOs en los tejidos pulmonares de las cobayas. *1
Tabla 6. Efecto de la Composición 4 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales EOS (células/HP) Grupo de control en blanco - 10 5,24 ± 2,85 Grupo de control modelo - 10 93,60 ± 14,94** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 30,79 ± 7,25aa Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,0 10 82,28 ± 12,19 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 70,25 ± 12,04aa Grupo de dosis alta de fármaco de 6,0 10 59,22 ± 11,69ensayo aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la Composición 4 es capaz de mejorar significativamente los síntomas asmáticos en ratas y de prolongar el período de latencia del asma inducido en cobayas en los grupos modelo; de reducir el nivel de IL-4 en suero, de aumentar el nivel de IFN-y en suero y corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4 en ratas con asma; de reducir el número de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas y cobayas, y mejorar la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; de reducir el contenido total de IgE en suero y de BALF de las cobayas, y mejorar los síntomas inflamatorios pulmonares. Por lo tanto, la Composición 4 se considera eficaz en la resistencia al asma alérgico.
Ejemplo 57. Informe de experimentos con animales de la Composición 5 obtenida en el Ejemplo 5 contra la alergia y la dermatitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 5 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y Cordyceps) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 12,39 g de fármacos brutos totales. Su ingesta diaria recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 51.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 51.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 51.
2. Métodos experimentales
2.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron los animales aleatoriamente en grupos con 10 animales por grupo en función del peso corporal. Un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 5, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona).
2.2 Pauta posológica
La ingesta diaria de la Composición de fármaco 5 de ensayo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para un ratón fue: grupo de dosis baja: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 4,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 12,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 5, 10 y 30 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (16,14 mg de polvo seco/ml, 32,28 mg de polvo seco/ml y 96,84 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
La ingesta diaria para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (8,08 mg de polvo seco/ml, 16,14 mg de polvo seco/ml y 48,42 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
2.3 Efecto de la Composición 5 sobre la anafilaxia pasiva (PCA) en ratas causada por la ovoalbúmina
2.3.1 Preparación de antisuero
Igual que en Ejemplo 51.
2.3.2 Establecimiento de modelos de suero anti-ovoalbúmina de rata[1]
Se tomó suero anti-ovoalbúmina y se diluyó a 1:4 o 1:8 con solución salina fisiológica. Se dividieron aleatoriamente 50 ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 5, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 5 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 14 días consecutivos. El día 15, se afeitó el lomo de las ratas, y se inyectó por vía intradérmica un antisuero diluido en dos puntos de cada lado con 0,1 ml por punto. Tras 48 horas, se inyectó en la vena de la cola de cada rata una solución mixta de 1,0 ml de azul de Evans al 1 % y de ovoalbúmina al 1 % en solución salina fisiológica. Tras 30 min, se extrajo sangre arterial, se aisló el suero de la misma y se determinó el contenido de histamina mediante el método[2]. Se sacrificaron las ratas y se invirtió la piel del lomo para medir el diámetro de las manchas de reacción azules con el fin de determinar la diferencia entre los grupos de dosificación y el grupo modelo. Se fijó una muestra del tejido cutáneo de rata con formaldehído neutro, se deshidrató con un gradiente de alcohol, se embebió en parafina y se examinó para determinar la desgranulación de los mastocitos en el tejido[3].
2.3.3 Efecto de la Composición 5 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno[4]
Se dividieron aleatoriamente los ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 5, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se aplicó una solución al 5 % de 2,4-dinitroclorobenceno en etanol sobre la piel abdominal (afeitada) de los ratones para la sensibilización. Se llevó a cabo la administración intragástrica dos días antes de la sensibilización; el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de agua destilada; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 5 recibieron las soluciones de ensayo correspondientes por vía intragástrica a un volumen de dosis de 0,1 ml/10g de peso corporal; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 7 días después de la sensibilización, se aplicó una solución al 1 % de 2,4-dinitroclorobenceno en la oreja derecha, y se sacrificaron los ratones tras 24 horas, y se cortaron ambas orejas a lo largo de la línea de base de la aurícula. Se perforaron discos que tenían un diámetro de 8 mm en la misma posición en ambas orejas, se pesaron con precisión en una balanza electrónica, y se tomó la diferencia de peso entre la oreja izquierda y derecha
como el valor de hipersensibilidad retardada.
2.3.4 Efecto de la Composición 5 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular151 Se dividieron aleatoriamente los ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 5, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se llevó a cabo la administración intragástrica a los ratones una vez al día durante 10 días consecutivos. 30 min después de la administración final, se inyectó una solución de dextrano de bajo peso molecular al 0,0125% a 0,1 g/10 g en la vena de la cola. Se observó y registró el número de eventos de picazón (los eventos de picazón se indicaron al rascarse la cabeza con las patas delanteras, al rascarse el cuerpo con las patas traseras y al morder en varias partes del cuerpo) ocurrido en el transcurso de los 30 min posteriores a la inyección de la solución de dextrano de bajo peso molecular en las venas de la cola de los ratones de cada grupo.
2.3.5 Efecto de la Composición 5 sobre la permeabilidad capilar en ratas[6]
Se dividieron aleatoriamente las ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 5, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 5 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10 ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 1 hora después de la administración final, se inyectó en la zona afeitada (afeitada antes de la administración) del lomo de las ratas por vía intradérmica 1 mg/ml de fosfato de histamina a una dosis de 0,1 ml/rata, y luego se inyectó en la vena de la cola de inmediato una solución acuosa de azul de Evans al 1 % a una dosis de 1 ml/rata. Tras 20 minutos, se sacrificaron los animales por dislocación cervical. Se retiraron cortando las zonas de la piel con manchas azules y se cortaron en trozos pequeños, se empaparon en una solución de 5 ml de acetona:solución salina fisiológica (7:3) durante 48 horas, se centrifugaron, y se midió la absorbancia del sobrenadante a 610 nm.
2.4 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 5. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 5 sobre la anafilaxia pasiva en ratas
Los resultados del ensayo se muestran en las Tablas 1 y 2. En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de dosis baja de la Composición 5 mostró una tendencia a disminuir el diámetro de las manchas azules en ratas con sensibilidad al suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, a disminuir la desgranulación de los mastocitos y a disminuir el contenido de histamina en suero, que, sin embargo, no tuvo significación estadística; el grupo de control de prednisona y los grupos de dosis medias y altas de la Composición 5 mostraron un efecto de disminución significativa del diámetro de las manchas azules en ratas sensibilizadas con suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, reduciéndose la desgranulación de los mastocitos y reduciéndose el contenido de histamina en suero, con una diferencia estadística significativa o muy significativa. Esto indica que la Composición 5 tuvo un efecto inhibidor significativo sobre la anafilaxia pasiva en ratas.
Tabla 1. Efecto de la Composición 5 sobre el diámetro de las manchas azules de PCA en ratas (x±s)
Diámetro de manchas azules Grupos Dosis (g de fármaco Número de bruto/kg) animales (mm)
1:4 1:8 Grupo de control modelo 0,0 10 15,66 ± 2,28 9,54 ± 1,52 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 11,35 ± 1,74** 6,72 ± 1,31** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,2 10 13,92 ± 1,95 8,53 ± 1,28 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,4 10 12,77 ± 2,24* 8,07 ± 1,30* Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 7,2 10 12,10 ± 2,30** 7,32 ± 1,17** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
Tabla 2. Efecto de la Composición 5 sobre la desgranulación de los mastocitos y el contenido de histamina en suero ______________________________________ en ratas PCA (x±s)______________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Desgranulación Fluorescencia de la bruto/kg) animales histamina (mg/l) Grupo de control modelo 0,0 10 59,42 ± 12,16 3,95 ± 0,87 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 21,33 ± 10,48** 2,12 ± 0,72** Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,2 10 48,05 ± 12,54 3,21 ± 0,80 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,4 10 44,29 ± 12,66* 2,85 ± 0,84* Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 7,2 10 34,80 ± 12,07** 2,43 ± 0,62** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.2 Efecto de la Composición 5 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno
Los resultados se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control modelo, el grado de inflamación de los discos auriculares de los ratones disminuyó significativamente en los grupos de la dosis media y alta de Composición 5, lo que indica que la Composición 5 tuvo un buen efecto inhibidor sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por 2,4-dinitroclorobenceno.
Tabla 3. Efecto de la Composición 5 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por _________________________________ el 2,4-dinitroclorobenceno (X±s)_________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Grado de inflamación de los discos bruto/kg) animales auriculares de ratón (mg) Grupo de control modelo 0,0 10 6,82 ± 0,86
Grupo de control positivo 5,0 mg 10 4,80 ± 0,73**
Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 2,0 10 6,21 ± 0,69
Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 4,0 10 5,86 ± 0,76*
Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 12,0 10 5,21 ± 0,85**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.3 Efecto de la Composición 5 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 4. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 5, lo que indica que la Composición 5 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina.
Tabla 4. Efecto de la Composición 5 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular ____________________________________________ ( í ± s ) ____________________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de eventos de picazón bruto/kg) animales (30 min) Grupo de control modelo 0,0 10 28,66 ± 6,70 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 17,20 ± 4,08** Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 2,0 10 23,21 ± 5,90 Grupo de dosis media de fármaco de
ensayo 4,0 10 20,42 ± 6,34* Grupo de dosis alta de fármaco de 12,0 ensayo 10 18,55 ± 4,92** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.4 Efecto de la Composición 5 sobre la permeabilidad capilar en ratas
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 5, lo que indica que la Composición 5 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina.
Tabla 5. Efecto de la Composición 5 sobre la permeabilidad capilar en ratas (x±s) Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales Valor de DO Grupo de control modelo 0,0 10 1,020 ± 0,130 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 0,756 ± 0,102** Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,2 10 0,953 ± 0,133 Grupo de dosis media de fármaco de
ensayo 2,4 10 0,908 ± 0,105* Grupo de dosis alta de fármaco de
sayo 7,2 10 0,84 en 2 ± 0,094** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales en animales demuestran que la Composición 5 es significativamente eficaz en la inhibición de la anafilaxia pasiva en ratas causada por la ovoalbúmina, que la Composición 5 es eficaz en la inhibición de la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno y que la Composición 5 es significativamente eficaz en reducir el aumento de la permeabilidad capilar en las ratas causado por el fosfato de histamina. Los resultados anteriores indican una buena eficacia de la Composición 5 para resistir las alergias, y para prevenir y tratar enfermedades alérgicas tales como la dermatitis alérgica y la urticaria. Ejemplo 58. Informe de experimentos con animales de la Composición 5 obtenida en el Ejemplo 5 contra la prevención y el tratamiento de la rinitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 5 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y Cordyceps) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 12,39 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 52.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 52.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 52.
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la OVA
2.1.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron aleatoriamente ratas en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente, en función de su puntuación, en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo de positivo de fármaco (grupo de Bi-yan-kang) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 5, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 5 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. El grupo de control en blanco y el grupo modelo de rinitis alérgica recibieron por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica; el grupo de Biyan-kang recibió el fármaco a una dosis de 410 mg/kg. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0 ml/100 g de peso corporal. La administración intragástrica se inició después de una modelización exitosa y se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en ratas
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4 Indicadores de ensayo
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4.1 Medición del AMPc y GMPc en sangre
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4.2 Recuento de mastocitos de la mucosa nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.2 Efecto sobre la rinitis alérgica en cobayas causada por TDI
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2. Igual que en 2.1.2.
2.2.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en cobaya
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4 Indicadores de ensayo
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.1 Observación del comportamiento de las cobayas
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.2 Recuento de eosinófilos (EOS) en la secreción nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.3 Medición de IgE en suero total e histamina en sangre
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.4 Medición del espesor de la mucosa nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.3 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control en blanco, el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 5. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 5 sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la ovoalbúmina 3.1.1 Efecto sobre el comportamiento de las ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 2. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las ratas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 2. Efecto de la Composición 5 sobre las puntuaciones de los síntomas de la rinitis alérgica en ratas antes y ________________________________ después de la dosificación (x±s)__________________________________
Después de
sis (g de
Grupos Número de Do
fármaco Antes de la la
animales dosificación
bruto/kg) dosificación
Día 7 Día 14 Día 21 Grupo de control en
blanco 10 - 0,33 ± 0,29 0,44 ± 0,26 0,39 ± 0,21 0,35 ± 0,19 Grupo de control
modelo 10 - 6,71 ± 1,49** 6,57 ± 1,24** 7,10 ± 1,35** 6,51 ± 1,18** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 6,58 ± 1,21** 3,21 ± 0,97aa 3,68 ± 1,23aa 2,95 ± 1,02aa Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 10 1,0 6,75 ± 1,18** 5,82 ± 0,87 5,89 ± 1,42 5,63 ± 1,08 Grupo de dosis media
de fármaco de ensayo 10 2,0 6,54 ± 1,29** 5,40 ± 1,24a 5,31 ± 1,45a 4,57 ± 1,43aa Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 10 6,0 6,75 ± 1,14** 4,68 ± 0,84aa 4,45 ± 1,38aa 4,26 ± 1,31 aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo de control en blanco; p < 0,05, p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto de la Composición 5 sobre los niveles de AMPc y GMPc en suero en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel de AMPc en suero (p < 0,01) y un nivel significativamente aumentado de GMPc en suero (p <0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de Bi-yan-kang y todos los grupos de fármaco de ensayo mostraron un nivel de AMPc en suero significativamente aumentado (p < 0,01 o p < 0,05); el grupo de Bi-yan-kang y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de GMPc en suero significativamente reducido (p < 0,01 o p < 0,05), y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
3.1.3 Efecto de la Composición 5 sobre los mastocitos en la mucosa nasal de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de control modelo aumentó significativamente con una diferencia altamente significativa (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con el fármaco de ensayo disminuyó significativamente con una diferencia significativa (p < 0,01).
Tabla 3. Efecto de la Composición 5 sobre los niveles de AMPc y GMPc en suero y de los mastocitos de la mucosa ______________________________________ nasal en ratas (X±s)________________________________________ Grupos Dosis (g de Número de AMPc GMPc Recuento de fármaco bruto/kg) animales (pmol/ml) (pmol/ml) mastocitos (células) Grupo de control en
blanco - 10 19,98 ± 4,96 9,72 ± 2,64 1,69 ± 1,41 Grupo de control modelo - 10 10,27 ± 3,85** 14,83 ± 4,88** 14,33 ± 4,75** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 18,25 ± 3,62aa 9,03 ± 2,52aa 5,87 ± 2,23aa Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,0 10 14,13 ± 3,91a 12,40 ± 4,01 8,64 ± 3,51 aa Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 15,86 ± 5,23a 10,58 ± 2,84a 7,79 ± 3,18aa Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 6,0 10 17,74 ± 4,12aa 9,25 ± 4,05aa 6,56 ± 2,17aa
Grupos Dosis (g de Número de AMPc GMPc Recuento de fármaco bruto/kg) animales (pmol/ml) (pmol/ml) mastocitos (células) Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; p < 0,05, p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 5 sobre la rinitis alérgica en cobayas causada por TDI
3.2.1 Efecto sobre el comportamiento de las cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las cobayas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 4. Efecto de la Composición 5 sobre las puntuaciones de los síntomas de la rinitis alérgica en cobayas antes y _________________________________ después de la dosificación (x±s)_________________________________
Después de
Dosis (g de la
Grupos Número de fármaco Antes de la animales ión
bruto/kg) dosificación dosificac
Día 7 Día 14 Día 21 Grupo de control en 10 blanco - 0,57 ± 0,73 0,48 ± 0,35 0,36 ± 0,30 0,41 ± 0,66 Grupo de control modelo 10 - 6,27 ± 1,24** 6,51 ± 1,18** 6,51 ± 1,04** 5,91 ± 0,92** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 6,65 ± 1,13** 5,31 ± 0,87a 5,364 ± 0,91a 4,79 ± 1,31a Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 10 1,0 6,56 ± 1,28** 5,37 ± 1,35 5,72 ± 0,99 5,08 ± 1,35 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 6,44 ± 1,05** 5,35 ± 1,26a 4,75 ± 1,30aa 4,54 ± 0,79aa Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 10 6,0 6,71 ± 1,15** 4,57 ± 1,08aa 3,94 ± 0,87aa 3,66 ± 0,95aa Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.2 Efecto de la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control en blanco, aumentaron tanto la histamina en sangre como la IgE en suero total en el grupo modelo (p < 0,01), indicando una modelización experimental exitosa. En comparación con el grupo modelo, la absorbancia de la fluorescencia de la histamina y la concentración total de IgE en suero en los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo y en el grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05), donde la histamina en los grupos de dosis media y alta disminuyó casi hasta el nivel normal, lo que indica que la Composición 5 fue eficaz en el tratamiento de la rinitis alérgica mediante la inhibición del nivel de histamina en sangre y de IgE en suero.
Tabla 5. Efecto de la Composición 5 sobre la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas (x±s) Grupos Número de Dosis (g de fármaco Fluorescencia de la
animales bruto/kg) histamina (mg/l) lgE (Ul ml-1) Grupo de control en blanco 10 - 2,13 ± 0,34 0,125 ±
0,021 Grupo de control modelo 10 - 3,17 ± 0,88** 0,160 ±
0,033** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 2,15 ± 0,46aa 0,121 ±
0,025aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 2,94 ± 0,46 0,135 ±
0,029 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 2,33 ± 0,41a 0,124 ±
0,026a Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 2,15 ± 0,37aa 0,118 ±
0,009aa Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.3 Efecto sobre los eosinófilos (EOS) en la secreción nasal de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. El número de eosinófilos en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el número de eosinófilos en el grupo de Bi-yankang y en los grupos de tratamiento con el fármaco disminuyó significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
3.2.4 Efecto sobre el espesor de la mucosa nasal en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. Como resultado, en comparación con el grupo de control en blanco, en el grupo modelo, Se separó en diversos grados el epitelio de la mucosa sobre el tabique nasal de las cobayas, teniendo un espesor no uniforme y una estructura basal poco clara; las vénulas y los capilares de la lámina propria mostraron una aparente dilatación, el espacio tisular se expandió, y el espesor de la mucosa aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, los cambios patológicos anteriores en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con fármaco se aliviaron, y el espesor de la mucosa disminuyó significativamente (p < 0,01). *1
Tabla 6. Efecto de la Composición 5 sobre los EOS en la secreción nasal y en el espesor de la mucosa nasal en _______________________________________ cobayas(x±s)_______________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de EOS Espesor de la bruto/kg) animales (x10'Vl) mucosa (mm) Grupo de control en blanco - 10 2,68 ± 1,36 0,157 ± 0,050 Grupo de control modelo - 10 18,64 ± 4,14** 0,283 ± 0,071** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 9,27 ± 3,75ññ 0,199 ± 0,047ññ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 11,27 ± 4,13ññ 0,214 ± 0,049ññ Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 9,44 ± 3,55ññ 0,191 ± 0,067ññ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 6,0 10 7,12 ± 2,76ññ 0,186 ± 0,059ññ Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññp < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la eficacia de la Composición 5 se refleja principalmente en los siguientes aspectos: 1) es capaz de disminuir significativamente la puntuación de los síntomas nasales de las ratas modelizadas, aumentando el nivel de AMPc en suero y reduciendo el nivel de GMPc en ratas con rinitis alérgica; 2) reduce el número de mastocitos en la mucosa nasal de las ratas y reduce su infiltración en las zonas inflamadas; 3) es capaz de disminuir la puntuación de los síntomas nasales de las cobayas modelizadas; 4) disminuye el número de EOS en la secreción nasal de las cobayas y reduce la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; 5) es capaz de disminuir significativamente la concentración de histamina en sangre en las cobayas y de reducir los mediadores inflamatorios; 6) alivia la inflamación de la mucosa nasal de las cobayas. De acuerdo con los resultados de los estudios experimentales, se considera que la Composición 5 es eficaz para resistir la rinitis alérgica.
Ejemplo 59. Informe de experimentos con animales de la Composición 5 obtenida en el Ejemplo 5 contra la prevención y el tratamiento del asma alérgico
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 5 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y Cordyceps) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 12,39 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 53.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 53.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 53.
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
2.1.1 Ag o l pamiento de animales
Las ratas (la mitad de las cuales era machos y la otra mitad era hembras) se dividieron aleatoriamente en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo positivo de fármaco (grupo de dexametasona) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 5, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en ratas
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.3 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 5 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (8,07 mg de polvo seco/ml, 16,14 mg de polvo seco/ml, 48,43 mg de polvo seco/ml) para llevar a cabo los experimentos. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0ml/100g de peso corporal. el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9% 30 min antes de la exposición; y el grupo de fármaco positivo recibió dexametasona a una dosis de 0,5 mg/kg 30 min antes de cada desafío12'. Los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 5 recibieron cada uno por vía intragástrica la dosis respectiva del fármaco de ensayo 30 min antes de cada exposición. Al mismo tiempo, el grupo de control en blanco recibió por inyección intraperitoneal, se expuso a la atomización con o recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9 %. La administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.4 Registro del período latente del asma en ratas
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.5 Mediciones de los niveles de IL-4 e IFN-y
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.6 Medición del contenido de EOS en los tejidos pulmonares
Igual que en Ejemplo 53.
2.2 Efecto sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en cobayas
Igual que en Ejemplo 53.
2.2.3 Pauta posológica
Igual que en 2.1.3.
2.2.4 Registro del período latente del asma
Igual que en 21.4.1.
2.2.5 Medición de la IgE en suero y de BALF
Se empleó radioinmunoensayo de tipo sándwich de doble anticuerpo.
2.3 Método estadístico
Igual que en Ejemplo 53.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 5 sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
3.1.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 1. Se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en ratas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las ratas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
Tabla 1. Efecto de la Composición 5 sobre el período latente del asma inducido en ratas (x±s) Grupos Número de animales Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 77,31 ± 13,84** 75,61 ± 12,89** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 74,64 ± 11,03** 160,21 ± 20,32ññ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 75,62 ± 15,28** 85,04 ± 21,35 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 78,49 ± 14,08** 96,48 ± 23,61ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 77,84 ± 17,43** 102,68 ± 23,85ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 2. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel en suero de IFN-y (P <0,01), pero un aumento significativo del nivel de IL-4 en suero (p <0,01), lo que indica un grave desequilibrio de la proporción de IFN-y/IL-4 durante los ataques de asma. En comparación con el grupo modelo, el grupo de dexametasona y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de IL-4 significativamente reducido (p < 0,05 o p < 0,01) y un nivel de IFN-y significativamente mayor (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que el fármaco de ensayo puede corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4.
Tabla 2. Efecto de la Composición 5 sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas (x±s) Grupos Dosis
b
(g
ru
d
to
e
/k
f
g
á
) rmaco Número de animales IL-4 (pg/ml) ifn -y (pg/ml) Grupo de control en blanco - 10 12,70 ± 2,55 24,29 ± 4,18 Grupo de control modelo - 10 22,46 ± 3,57** 11,81 ± 3,42** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 13,50 ± 4,28ññ 20,27 ± 4,88ññ Grupo de dosis baja de fármaco 1,0 de ensayo 10 20,59 ± 3,15 13,79 ± 3,71 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 18,26 ± 4,13ñ 15,58 ± 3,80ñ Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 16,14 ± 3,32ññ 17,32 ± 4,98ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de EOS en ratas en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo mostraron un número significativamente reducido de EOS (p < 0,01), lo que
indica que la Composición 5 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas.
Tabla 3. Efecto de la Composición 5 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata (x±s)
Grupos Dosis (g
u
d
to
e
/k
f
g
á
) rmaco Núme br ro de animales EOS (células/HP) Grupo de control en blanco - 10 2,26 ± 0,87 Grupo de control modelo - 10 105,60 ± 13,96** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 28,42 ± 4,24“ Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,0 10 95,23 ± 11,32 Grupo de dosis media de fármaco de
ensayo 2,0 10 71,43 ± 10,44ññ Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 65,32 ± 8,59ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; “ p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 5 sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
3.2.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en cobayas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las cobayas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que la Composición 5 aumenta enormemente los síntomas asmáticos en las cobayas.
Tabla 4. Efecto de la Composición 5 sobre el período latente del asma inducido en cobayas (x±s)
Grupos Número de animales Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la r bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 77,18 ± 10,82** 78,03 ± 10,94** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 75,65 ± 9,10** 155,78 ± 16,24“ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 76,51 ± 14,32** 83,01 ± 21,35 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 77,83 ± 15,08** 97,49 ± 24,75ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 79,64 ± 19,14** 110,64 ± 24,91ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, “ p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.2 Efecto sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. El contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo de dexametasona y en los grupos en dosis media y alta del fármaco de ensayo disminuyeron significativamente (p <0,01 o p < 0,05), lo que indica que tanto la dexametasona como el fármaco de ensayo pueden inhibir la respuesta inflamatoria alérgica en el pulmón de cobaya y mejorar los síntomas asmáticos.
Tabla 5. Efecto de la Composición 5 sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g de fármaco Número de animales Suero (U/l) BALF (U/l) bruto/kg)
Grupo de control en blanco - 10 2,01 ± 0,85 3,60 ± 0,81 Grupo de control modelo - 10 5,63 ± 1,36** 5,30 ± 1,25** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 3,74 ± 1,32“ 3,70 ± 0,73“ Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,0 10 5,13 ± 2,17 4,18 ± 1,59
Grupos Dosis (g de
k
f
g
á
) rmaco Número d bruto/ e animales Suero (U/l) BALF (U/l) Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 4,27 ± 1,11a 3,90 ± 1,46a Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 3,98 ± 1,13aa 3,88 ± 0,94aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. En comparación con el grupo de control en blanco, el nivel de recuento de eOs en las cobayas del grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el nivel de recuento de EOS en el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo se redujo significativamente (p < 0,01), lo que indica que la Composición 5 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de eOs en los tejidos pulmonares de las cobayas.
Tabla 6. Efecto de la Composición 5 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales EOS (células/HP) Grupo de control en blanco - 10 5,23 ± 2,75 Grupo de control modelo - 10 93,63 ± 14,91** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 30,77 ± 7,21aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 85. 27 ± 12,09 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 70,27 ± 12,14aa Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 6,0 10 59,24 ± 11,68aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la Composición 5 es capaz de mejorar significativamente los síntomas asmáticos en ratas y de prolongar el período de latencia del asma inducido en cobayas en los grupos modelo; de reducir el nivel de IL-4 en suero, de aumentar el nivel de IFN-y en suero y corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4 en ratas con asma; de reducir el número de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas y cobayas, y mejorar la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; de reducir el contenido total de IgE en suero y de BALF de las cobayas, y mejorar los síntomas inflamatorios pulmonares. Por lo tanto, la Composición 5 se considera eficaz en la resistencia al asma alérgico.
Ejemplo 60. Informe de experimentos con animales de la Composición 6 obtenida en el Ejemplo 6 contra la alergia y la dermatitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 6 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y Flos rosae rugosae) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 12,56 g de fármacos brutos totales. Su ingesta diaria recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 51.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 51.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 51.
2. Métodos experimentales
2.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron los animales aleatoriamente en grupos con 10 animales por grupo en función del peso corporal. Un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 6, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona).
2.2 Pauta posológica
La ingesta diaria de la Composición de fármaco 6 de ensayo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para un ratón fue: grupo de dosis baja: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 4,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 12,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 5, 10 y 30 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (15,925 mg de polvo seco/ml, 31,85 mg de polvo seco/ml y 95,55 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
La ingesta diaria para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (7,96 mg de polvo seco/ml, 15,92 mg de polvo seco/ml y 47,76 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
2.3 Efecto de la Composición 6 sobre la anafilaxia pasiva (PCA) en ratas causada por la ovoalbúmina
2.3.1 Preparación de antisuero
Igual que en Ejemplo 51.
2.3.2 Establecimiento de modelos de suero anti-ovoalbúmina de rata
Se tomó suero anti-ovoalbúmina y se diluyó a 1:4 o 1:8 con solución salina fisiológica. Se dividieron aleatoriamente 50 ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 6, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 6 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 14 días consecutivos. El día 15, se afeitó el lomo de las ratas, y se inyectó por vía intradérmica un antisuero diluido en dos puntos de cada lado con 0,1 ml por punto. Después de 48 horas, se inyectó en la vena de la cola de cada rata una solución mixta de 1,0 ml de azul de Evans al 1 % y de ovoalbúmina al 1 % en solución salina fisiológica. Después de 30 min, se extrajo sangre arterial, se aisló el suero de la misma y se determinó el contenido de histamina mediante el método[2]. Se sacrificaron las ratas y se invirtió la piel del lomo para medir el diámetro de las manchas de reacción azules con el fin de determinar la diferencia entre los grupos de dosificación y el grupo modelo. Se fijó una muestra del tejido cutáneo de rata con formaldehído neutro, se deshidrató con un gradiente de alcohol, se embebió en parafina y se examinó para determinar la desgranulación de los mastocitos en el tejido[3].
2.3.3 Efecto de la Composición 6 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno
Se dividieron aleatoriamente 50 ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 6, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se aplicó una solución al 5 % de 2,4-dinitroclorobenceno en etanol sobre la piel abdominal (afeitada) de los ratones para la sensibilización. Se llevó a cabo la administración intragástrica dos días antes de la sensibilización; el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de agua destilada; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 6 recibieron las soluciones de ensayo correspondientes por vía intragástrica a un volumen de dosis de 0,1 ml/10g de peso corporal; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 7 días después de la sensibilización, se aplicó una solución al 1 % de 2,4-dinitroclorobenceno en la oreja derecha, y se sacrificaron los ratones tras 24 horas, y se cortaron ambas orejas a lo largo de la línea de base de la aurícula. Se perforaron discos que tenían un diámetro de 8 mm en la misma posición en ambas orejas, se
pesaron con precisión en una balanza electrónica, y se tomó la diferencia de peso entre la oreja izquierda y derecha como el valor de hipersensibilidad retardada.
2.3.4 Efecto de la Composición 6 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular Se dividieron aleatoriamente los ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 6, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se llevó a cabo la administración intragástrica a los ratones una vez al día durante 10 días consecutivos. 30 min después de la administración final, se inyectó una solución de dextrano de bajo peso molecular al 0,0125% a 0,1 g/10 g en la vena de la cola. Se observó y registró el número de eventos de picazón (los eventos de picazón se indicaron al rascarse la cabeza con las patas delanteras, al rascarse el cuerpo con las patas traseras y al morder en varias partes del cuerpo) ocurrido en el transcurso de los 30 min posteriores a la inyección de la solución de dextrano de bajo peso molecular en las venas de la cola de los ratones de cada grupo.
2.3.5 Efecto de la Composición 6 sobre la permeabilidad capilar en ratas
Se dividieron aleatoriamente las ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 6, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 6 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10 ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 1 hora después de la administración final, se inyectó en la zona afeitada (afeitada antes de la administración) del lomo de las ratas por vía intradérmica 1 mg/ml de fosfato de histamina a una dosis de 0,1 ml/rata, y luego se inyectó en la vena de la cola de inmediato una solución acuosa de azul de Evans al 1 % a una dosis de 1 ml/rata. Después de 20 minutos, se sacrificaron los animales por dislocación cervical. Se retiraron cortando las zonas de la piel con manchas azules y se cortaron en trozos pequeños, se empaparon en una solución de 5 ml de acetona:solución salina fisiológica (7:3) durante 48 horas, se centrifugaron, y se midió la absorbancia del sobrenadante a 610 nm.
2.4 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 6. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 6 sobre la anafilaxia pasiva en ratas
Los resultados del ensayo se muestran en las Tablas 1 y 2. En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de dosis baja de la Composición 6 mostró una tendencia a disminuir el diámetro de las manchas azules en ratas con sensibilidad al suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, a disminuir la desgranulación de los mastocitos y a disminuir el contenido de histamina en suero, que, sin embargo, no tuvo significación estadística; el grupo de control de prednisona y los grupos de dosis medias y altas de la Composición 6 mostraron un efecto de disminución significativa del diámetro de las manchas azules en ratas sensibilizadas con suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, reduciéndose la desgranulación de los mastocitos y reduciéndose el contenido de histamina en suero, con una diferencia estadística significativa o muy significativa. Esto indica que la Composición 6 tuvo un efecto inhibidor significativo sobre la anafilaxia pasiva en ratas.
Tabla 1. Efecto de la Composición 6 sobre el diámetro de las manchas azules de PCA en ratas (x±s)
Diámetro de manchas azules Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales (mm)
1:4 1:8 Grupo de control modelo 0,0 10 17,34 ± 2,35 11,32 ± 1,64 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 13,22 ± 1,90** 8,65 ± 1,52** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,2 10 15,78 ± 2,02 10,56 ± 1,43 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,4 10 14,61 ± 2,32* 9,72 ± 1,52* Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 7,2 10 14,16 ± 2,08** 9,10 ± 1,29** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
Tabla 2. Efecto de la Composición 6 sobre la desgranulación dejos mastocitos y el contenido de histamina en suero _______________________________________en ratas PCA (x±s)______________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de
bruto/kg) animales Desgranulación Fluorescencia de la histamina (mg/l) Grupo de control modelo 0,0 10 58,42 ± 12,33 3,86 ± 0,82 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 19,80 ± 10,57** 2,07 ± 0,76** Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,2 10 47,16 ± 12,72 3,10 ± 0,84 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,4 10 43,26 ± 11,42* 2,84 ± 0,80* Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 7,2 10 33,60 ± 10,67** 2,21 ± 0,67** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.2 Efecto de la Composición 6 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno
Los resultados se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control modelo, el grado de inflamación de los discos auriculares de los ratones disminuyó significativamente en los grupos de la dosis media y alta de Composición 6, lo que indica que la Composición 6 tuvo un buen efecto inhibidor sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por 2,4-dinitroclorobenceno.
Tabla 3. Efecto de la Composición 6 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por _________________________________ el 2,4-dinitroclorobenceno (x±s)_________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Grado de inflamación de los discos bruto/kg) animales auriculares de ratón (mg) Grupo de control modelo 0,0 10 6,67 ±0,69
Grupo de control positivo 5,0 mg 10 4,62 ± 0,79**
Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 2,0 10 6,05 ± 0,82
Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 4,0 10 5,72 ± 0,84*
Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 12,0 10 5,07 ± 0,80**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.3 Efecto de la Composición 6 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 4. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 6, lo que indica que la Composición 6 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina.
Tabla 4. Efecto de la Composición 6 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular ____________________________________________ ( x ± U ____________________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de eventos de picazón bruto/kg) animales (30 min)
Grupo de control modelo 0,0 10 27,38 ± 6,82 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 15,43 ± 4,56** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 2,0 10 22,39 ± 5,73 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 4,0 10 19,54 ± 6,02* Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 12,0 10 17,27 ± 4,22**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.4 Efecto de la Composición 6 sobre la permeabilidad capilar en ratas
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 6, lo que indica que la Composición 6 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina.
Tabla 5. Efecto de la Composición 6 sobre la permeabilidad capilar en ratas (x±s) Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales Valor de DO Grupo de control modelo 0,0 10 1,037 ± 0,108 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 0,773 ± 0,109** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,2 10 0,969 ± 0,136 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,4 10 0,924 ± 0,121* Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 7,2 10 0,860 ± 0,090** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales en animales demuestran que la Composición 6 es significativamente eficaz en la inhibición de la anafilaxia pasiva en ratas causada por la ovoalbúmina, que la Composición 6 es eficaz en la inhibición de la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno y que la Composición 6 es significativamente eficaz en reducir el aumento de la permeabilidad capilar en las ratas causado por el fosfato de histamina. Los resultados anteriores indican una buena eficacia de la Composición 6 para resistir las alergias, y para prevenir y tratar enfermedades alérgicas tales como la dermatitis alérgica y la urticaria. Ejemplo 61. Informe de experimentos con animales de la Composición 6 obtenida en el Ejemplo 6 contra la prevención y el tratamiento de la rinitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 6 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y Flos rosae rugosae) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 12,56 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 52.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 52.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 52.
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la OVA
2.1.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron aleatoriamente ratas en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente, en función de su puntuación, en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo de positivo de fármaco (grupo de Bi-yan-kang) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 6, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 6 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. El grupo de control en blanco y el grupo modelo de rinitis alérgica recibieron por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica; el grupo de Biyan-kang recibió el fármaco a una dosis de 410 mg/kg. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0 ml/100 g de peso corporal. La administración intragástrica se inició después de una modelización exitosa y se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en ratas
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4 Indicadores de ensayo
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4.1 Medición del AMPc y GMPc en sangre
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4.2 Recuento de mastocitos de la mucosa nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.2 Efecto sobre la rinitis alérgica en cobayas causada por TDI
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2. Igual que en 2.1.2.
2.2.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en cobaya
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4 Indicadores de ensayo
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.1 Observación del comportamiento de las cobayas
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.2 Recuento de eosinófilos (EOS) en la secreción nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.3 Medición de IgE en suero total e histamina en sangre
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.4 Medición del espesor de la mucosa nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.3 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control en blanco, el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 6. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 6 sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la ovoalbúmina
3.1.1 Efecto sobre el comportamiento de las ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 2. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las ratas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 2. Efecto de la Composición 6 sobre las puntuaciones de los smtomas de la rinitis alérgica en ratas antes y _________________________________después de la dosificación (x±s)_________________________________
Dosis (g de Después de la dosificación Grupos animales fármaco
bruto/kg) dosificación Día 7 Día 14 Día 21 Grupo de control en 10 blanco - 0,33 ± 0,29 0,44 ± 0,26 0,39 ± 0,21 0,35 ± 0,19 Grupo de control
modelo 10 - 6,71 ± 1,49** 6,57 ± 1,24** 7,10 ± 1,35** 6,51 ± 1,18** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 6,58 ± 1,21** 3,21 ± 0,97aa 3,68 ± 1,23aa 2,95 ± 1,02aa Grupo de dosis baja 10 de fármaco de ensayo 1,0 6,75 ± 1,18** 5,82 ± 0,87 5,89 ± 1,42 5,63 ± 1,08 Grupo de dosis media
de fármaco de ensayo 10 2,0 6,54 ± 1,29** 5,40 ± 1,24a 5,31 ± 1,45a 4,57 ± 1,43aa Grupo de dosis alta
de fármaco de ensayo 10 6,0 6,75 ± 1,14** 4,68 ± 0,84aa 4,45 ± 1,38aa 4,26 ± 1,31 aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo de control en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto de la Composición 6 sobre los niveles de AMPc y GMPc en suero en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel de AMPc en suero (p < 0,01) y un nivel significativamente aumentado de GMPc en suero (p <0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de Bi-yan-kang y todos los grupos de fármaco de ensayo mostraron un nivel de AMPc en suero significativamente aumentado (p < 0,01 o p < 0,05); el grupo de Bi-yan-kang y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de GMPc en suero significativamente reducido (p < 0,01 o p < 0,05), y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
3.1.3 Efecto de la Composición 6 sobre los mastocitos en la mucosa nasal de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de control modelo aumentó significativamente con una diferencia altamente significativa (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con el fármaco de ensayo disminuyó significativamente con una diferencia significativa (p < 0,01).
Tabla 3. Efecto de la Composición 6 sobre los niveles de AMPc_y GMPc en suero y de los mastocitos de la mucosa ______________________________________ nasal en ratas (x±s)______________________________________ Grupos Dosis (g de fármaco Número de AMPc GMPc Recuento de bruto/kg) animales (pmol/ml) (pmol/ml) mastocitos (células) Grupo de control en blanco - 10 19,98 ± 4,96 9,72 ± 2,64 1,69 ± 1,41 Grupo de control modelo - 10 10,27 ± 14,83 ±
3,85** 4,88** 14,33 ± 4,75** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 18,25 ± 9,03 ±
3,62aa 2,52aa 5,87 ± 2,23aa Grupo de dosis baja de 14,13 ±
fármaco de ensayo 1,0 10 3,91a 12,40 ± 4,01 8,64 ± 3,51 aa Grupo de dosis media de 10,58 ±
fármaco de ensayo 2,0 10 15,86 ±
5,23a 2,84a 7,79 ± 3,18
Grupos Dosis (g de fármaco Número de AMPc GMPc Recuento de bruto/kg) animales (pmol/ml) (pmol/ml) mastocitos (células) Grupo de dosis alta de ±
fármaco de ensayo 6,0 10 17,74 ± 9,25
4,12ññ 4,05ññ 6,56 ± 2,17ññ Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 6 sobre la rinitis alérgica en cobayas causada por TDI
3.2.1 Efecto sobre el comportamiento de las cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las cobayas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 4. Efecto de la Composición 6 sobre las puntuaciones de los síntomas de la rinitis alérgica en cobayas antes y _________________________________ después de la dosificación (x±s)__________________________________
Dosis (g de Después de la dosificación Grupos animales b fá
ru
rm
to
a
/k
c
g
o
) dosificación Día 7 Día 14 Día 21 Grupo de control en
blanco 10 - 0,54 ± 0,70 0,48 ± 0,33 0,35 ± 0,27 0,41 ± 0,63 Grupo de control modelo 10 - 6,27 ± 1,21** 6,3 ± 1,19** 6,53 ± 1,01** 6,01 ± 0,97** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 6,64 ± 1,08** 5,28 ± 0,86a 5,35 ± 0,94a 4,79 ± 1,25 Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 10 1,0 6,56 ± 1,31** 5,31 ± 1,37 5,68 ± 0,93 5,04 ± 1,35 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 6,43 ± 1,09** 5,02 ± 1,29a 4,74 ± 1,31 aa 4,51 ± 0,79aa Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 10 6,0 6,66 ± 1,12** 4,53 ± 1,08aa 3,93 ± 0,82aa 3,63 ± 0,92aa Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.2 Efecto de la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control en blanco, aumentaron tanto la histamina en sangre como la IgE en suero total en el grupo modelo (p < 0,01), indicando una modelización experimental exitosa. En comparación con el grupo modelo, la absorbancia de la fluorescencia de la histamina y la concentración total de IgE en suero en los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo y en el grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05), donde la histamina en los grupos de dosis media y alta disminuyó casi hasta el nivel normal, lo que indica que la Composición 6 fue eficaz en el tratamiento de la rinitis alérgica mediante la inhibición del nivel de histamina en sangre y de IgE en suero.
Tabla 5. Efecto de la Composición 6 sobre la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas (x±s) Grupos Número de Dosis (g de fármaco Fluorescencia de la histamina animales bruto/kg) (mg/l) lgE (Ul ml-1) Grupo de control en blanco 10 - 2,08 ± 0,41 0,124 ± 0,023 Grupo de control modelo 10 - 3,14 ± 0,91** 0,163 ± 0,037** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 2,14 ± 0,48aa 0,121 ± 0,020aa Grupo de dosis baja de 10 fármaco de ensayo 1,0 3,01 ± 0,46 0,137 ± 0,026 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 2,31 ± 0,45a 0,127 ± 0,024a Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 10 6,0 2,10 ± 0,39aa 0,121 ± 0,019aa Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.3 Efecto sobre los eosinófilos (EOS) en la secreción nasal de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. El número de eosinófilos en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el número de eosinófilos en el grupo de Bi-yankang y en los grupos de tratamiento con el fármaco disminuyó significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
3.2.4 Efecto sobre el espesor de la mucosa nasal en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. Como resultado, en comparación con el grupo de control en blanco, en el grupo modelo, Se separó en diversos grados el epitelio de la mucosa sobre el tabique nasal de las cobayas, teniendo un espesor no uniforme y una estructura basal poco clara; las vénulas y los capilares de la lámina propria mostraron una aparente dilatación, el espacio tisular se expandió, y el espesor de la mucosa aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, los cambios patológicos anteriores en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con fármaco se aliviaron, y el espesor de la mucosa disminuyó significativamente (p < 0,01). *1
Tabla 6. Efecto de la Composición 6 sobre los EOS en la secreción nasal y en el espesor de la mucosa nasal en _______________________________________ cobayas (x±s)_______________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de EOS Espesor de la bruto/kg) animales (x10'9/l) mucosa (mm) Grupo de control en blanco - 10 2,68 ± 1,39 0,159 ± 0,050 Grupo de control modelo - 10 18,66 ± 4,17** 0,286 ± 0,071** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 10,30 ± 3,81ññ 0,199 ± 0,048ññ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 13,29 ± 4,12ññ 0,216 ± 0,047ññ Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 12,41 ± 3,54ññ 0,195 ± 0,068ññ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 6,0 10 11,13 ± 2,87ññ 0,196 ± 0,063ññ Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññp < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la eficacia de la Composición 6 se refleja principalmente en los siguientes aspectos: 1) es capaz de disminuir significativamente la puntuación de los síntomas nasales de las ratas modelizadas, aumentando el nivel de AMPc en suero y reduciendo el nivel de GMPc en ratas con rinitis alérgica; 2) reduce el número de mastocitos en la mucosa nasal de las ratas y reduce su infiltración en las zonas inflamadas; 3) es capaz de disminuir la puntuación de los síntomas nasales de las cobayas modelizadas; 4) disminuye el número de EOS en la secreción nasal de las cobayas y reduce la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; 5) es capaz de disminuir significativamente la concentración de histamina en sangre en las cobayas y de reducir los mediadores inflamatorios; 6) alivia la inflamación de la mucosa nasal de las cobayas. De acuerdo con los resultados de los estudios experimentales, se considera que la Composición 6 es eficaz para resistir la rinitis alérgica.
Ejemplo 62. Informe de experimentos con animales de la Composición 6 obtenida en el Ejemplo 6 contra la prevención y el tratamiento del asma alérgico
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 6 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps sinensis en polvo fermentado y Flos rosae rugosae) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 12,56 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 53.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 53.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 53.
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
2.1.1 Agolpamiento de animales
Las ratas (la mitad de las cuales era machos y la otra mitad era hembras) se dividieron aleatoriamente en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo positivo de fármaco (grupo de dexametasona) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 6, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en ratas
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.3 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 6 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (7,96 mg de polvo seco/ml, 15,92 mg de polvo seco/ml, 47,77 mg de polvo seco/ml) para llevar a cabo los experimentos. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0ml/100g de peso corporal. el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9% 30 min antes de la exposición; y el grupo de fármaco positivo recibió dexametasona a una dosis de 0,5 mg/kg 30 min antes de cada desafío12'. Los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 6 recibieron cada uno por vía intragástrica la dosis respectiva del fármaco de ensayo 30 min antes de cada exposición. Al mismo tiempo, el grupo de control en blanco recibió por inyección intraperitoneal, se expuso a la atomización con o recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9 %. La administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.4 Registro del período latente del asma en ratas
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.5 Mediciones de los niveles de IL-4 e IFN-y
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.6 Medición del contenido de EOS en los tejidos pulmonares
Igual que en Ejemplo 53.
2.2 Efecto sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en cobayas
Igual que en Ejemplo 53.
2.2.3 Pauta posológica
Igual que en 2.1.3.
2.2.4 Registro del período latente del asma
Igual que en 21.4.1.
2.2.5 Medición de la IgE en suero y de BALF
Igual que en Ejemplo 53.
2.3 Método estadístico
Igual que en Ejemplo 53.
3 Resultados
3.1 Efecto de la Composición 6 sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
3.1.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 1. Se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en ratas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las ratas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
Tabla 1. Efecto de la Composición 6 sobre el período latente del asma inducido en ratas (x±s) Grupos Número de Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la animales bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 77,23 ± 13,81** 75,52 ± 12,88** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 74,67 ± 11,10** 159,78 ± 20,27aa Grupo de dosis baja de fármaco
nsayo 10 1 de e ,0 75,62 ± 15,31** 85,01 ± 21,33 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 78,51 ± 14,09** 96,52 ± 23,67ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 78,58 ± 17,14** 112,30 ± 25,8647ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 2. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel de IFN-y en suero (p < 0,01), pero un nivel significativamente aumentado de IL-4 en suero (p < 0,01), lo que indica un gran desequilibrio de la proporción de IFN-y/IL-4 durante los ataques de asma. En comparación con el grupo modelo, el grupo de dexametasona y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de IL-4 significativamente reducido (p <0,05 o p < 0,01) y un nivel de IFN-y significativamente mayor (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que el fármaco de ensayo puede corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4.
Tabla 2. Efecto de la Composición 6 sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas (x±s) Grupos Dosis (g de fármaco Número de animales IL-4 (pg/ml) bruto/kg) ifn -y (pg/ml) Grupo de control en blanco - 10 12,71 ± 2,52 24,31 ± 4,19 Grupo de control modelo - 10 22,43 ± 3,57** 11,83 ± 3,48** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 13,50 ± 4,32aa 20,27 ± 4,89aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 20,56 ± 3,19 13,79 ± 3,75 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 18,23 ± 4,12ñ 15,61 ± 3,81a Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 16,11 ± 3,38ññ 17,35 ± 4,92aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de EOS en ratas en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo mostraron un número significativamente reducido de EOS (p < 0,01), lo que
indica que la Composición 6 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas.
Tabla 3. Efecto de la Composición 6 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata (x±s)
Grupos Dosis (g
ru
d
to
e
/k
f
g
á
) rmaco Núm b ero de animales EOS (células/HP) Grupo de control en blanco - 10 2,22 ± 0,86 Grupo de control modelo - 10 103,61 ± 13,93** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 28,40 ± 4,25“ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 93,22 ± 11,28 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 78,11 ± 10,36ññ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 6,0 10 65,20 ± 8,47ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; “ p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 6 sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
3.2.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en cobayas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las cobayas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que la Composición 6 aumenta enormemente los síntomas asmáticos en las cobayas.
Tabla 4. Efecto de la Composición 6 sobre el período latente del asma inducido en cobayas (x±s)
Grupos Número de animales Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 76,17 ± 10,81** 77,01 ± 10,95** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 75,62 ± 9,10** 155,78 ± 16,29“ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 76,52 ± 14,31** 83,02 ± 21,31 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 77,80 ± 15,09** 97,51 ± 24,78ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 79,71 ± 19,12** 110,68 ± 24,91ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, “ p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.2 Efecto sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. El contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo de dexametasona y en los grupos en dosis media y alta del fármaco de ensayo disminuyeron significativamente (p <0,01 o p < 0,05), lo que indica que tanto la dexametasona como el fármaco de ensayo pueden inhibir la respuesta inflamatoria alérgica en el pulmón de cobaya y mejorar los síntomas asmáticos.
Tabla 5. Efecto de la Composición 6 sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas (x±s)
Grupos Dosis
b
(
r
g
ut
d
o
e
/k
f
g
á
) rmaco Número de animales Suero (U/l) BALF (U/l) Grupo de control en blanco - 10 2,08 ± 0,81 3,60 ± 0,85 Grupo de control modelo - 10 5,61 ± 1,38** 5,30 ± 1,26** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 3,74 ± 1,30“ 3,71 ± 0,70“ Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,0 10 5,10 ± 2,19 4,13 ± 1,56
Grupos Dosis (g de
k
f
g
á
) rmaco Número d bruto/ e animales Suero (U/l) BALF (U/l) Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 4,24 ± 1,12a 3,91 ± 1,47a Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 4,03 ± 1,04aa 3,87 ± 0,91 aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. En comparación con el grupo de control en blanco, el nivel de recuento de eOs en las cobayas del grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el nivel de recuento de EOS en el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo se redujo significativamente (p < 0,01), lo que indica que la Composición 6 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de eOs en los tejidos pulmonares de las cobayas.
Tabla 6. Efecto de la Composición 6 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales EOS (células/HP) Grupo de control en blanco - 10 5,22 ± 2,86 Grupo de control modelo - 10 93,61 ± 14,95** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 30,80 ± 7,23aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 82,29 ± 12,21 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 66,26 ± 12,02aa Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 6,0 10 59,2137 ± 10,66aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la Composición 6 es capaz de mejorar significativamente los síntomas asmáticos en ratas y de prolongar el período de latencia del asma inducido en cobayas en los grupos modelo; de reducir el nivel de IL-4 en suero, de aumentar el nivel de IFN-y en suero y corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4 en ratas con asma; de reducir el número de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas y cobayas, y mejorar la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; de reducir el contenido total de IgE en suero y de BALF de las cobayas, y mejorar los síntomas inflamatorios pulmonares. Por lo tanto, la Composición 6 se considera eficaz en la resistencia al asma alérgico.
Ejemplo 63. Informe de experimentos con animales de la Composición 7 obtenida en el Ejemplo 7 contra la alergia y la dermatitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 7 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps y Flos rosae rugosae) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 12,19 g de fármacos brutos totales. Su ingesta diaria recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 51.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 51.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 51.
2. Métodos experimentales
2.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron los animales aleatoriamente en grupos con 10 animales por grupo en función del peso corporal. Un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 7, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona).
2.2 Pauta posológica
La ingesta diaria de la Composición de fármaco 7 de ensayo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para un ratón fue: grupo de dosis baja: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 4,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 12,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 5, 10 y 30 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (16,405 mg de polvo seco/ml, 32,81 mg de polvo seco/ml y 98,43 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
La ingesta diaria para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (8,205 mg de polvo seco/ml, 16,41 mg de polvo seco/ml y 49,23 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
2.3 Efecto de la Composición 7 sobre la anafilaxia pasiva (PCA) en ratas causada por la ovoalbúmina
2.3.1 Preparación de antisuero
Igual que en Ejemplo 51.
2.3.2 Establecimiento de los modelos de suero anti-ovoalbúmina de rata
Se tomó suero anti-ovoalbúmina y se diluyó a 1:4 o 1:8 con solución salina fisiológica. Se dividieron aleatoriamente 50 ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 7, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 7 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 14 días consecutivos. El día 15, se afeitó el lomo de las ratas, y se inyectó por vía intradérmica un antisuero diluido en dos puntos de cada lado con 0,1 ml por punto. Después de 48 horas, se inyectó en la vena de la cola de cada rata una solución mixta de 1,0 ml de azul de Evans al 1 % y de ovoalbúmina al 1 % en solución salina fisiológica. Después de 30 min, se extrajo sangre arterial, se aisló el suero de la misma y se determinó el contenido de histamina mediante el método[2]. Se sacrificaron las ratas y se invirtió la piel del lomo para medir el diámetro de las manchas de reacción azules con el fin de determinar la diferencia entre los grupos de dosificación y el grupo modelo. Se fijó una muestra del tejido cutáneo de rata con formaldehído neutro, se deshidrató con un gradiente de alcohol, se embebió en parafina y se examinó para determinar la desgranulación de los mastocitos en el tejido[3].
2.3.3 Efecto de la Composición 7 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno[4]
Se dividieron aleatoriamente 50 ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 7, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se aplicó una solución al 5 % de 2,4-dinitroclorobenceno en etanol sobre la piel abdominal (afeitada) de los ratones para la sensibilización. Se llevó a cabo la administración intragástrica dos días antes de la sensibilización; el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de agua destilada; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 7 recibieron las soluciones de ensayo correspondientes por vía intragástrica a un volumen de dosis de 0,1 ml/10g de peso corporal; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 7 días después de la sensibilización, se aplicó una solución al 1 % de 2,4-dinitroclorobenceno en la oreja derecha, y se sacrificaron los ratones tras 24 horas, y se cortaron ambas orejas a lo largo de la línea de base de la aurícula. Se perforaron discos que tenían un diámetro de 8 mm en la misma posición en ambas orejas, se
pesaron con precisión en una balanza electrónica, y se tomó la diferencia de peso entre la oreja izquierda y derecha como el valor de hipersensibilidad retardada.
2.3.4 Efecto de la Composición 7 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular151 Se dividieron aleatoriamente los ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 7, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se llevó a cabo la administración intragástrica a los ratones una vez al día durante 10 días consecutivos. 30 min después de la administración final, se inyectó una solución de dextrano de bajo peso molecular al 0,0125% a 0,1 g/10 g en la vena de la cola. Se observó y registró el número de eventos de picazón (los eventos de picazón se indicaron al rascarse la cabeza con las patas delanteras, al rascarse el cuerpo con las patas traseras y al morder en varias partes del cuerpo) ocurrido en el transcurso de los 30 min posteriores a la inyección de la solución de dextrano de bajo peso molecular en las venas de la cola de los ratones de cada grupo.
2.3.5 Efecto de la Composición 7 sobre la permeabilidad capilar en ratas[6]
Se dividieron aleatoriamente las ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 7, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 7 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10 ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 1 hora después de la administración final, se inyectó en la zona afeitada (afeitada antes de la administración) del lomo de las ratas por vía intradérmica 1 mg/ml de fosfato de histamina a una dosis de 0,1 ml/rata, y luego se inyectó en la vena de la cola de inmediato una solución acuosa de azul de Evans al 1 % a una dosis de 1 ml/rata. Después de 20 minutos, se sacrificaron los animales por dislocación cervical. Se retiraron cortando las zonas de la piel con manchas azules y se cortaron en trozos pequeños, se empaparon en una solución de 5 ml de acetona:solución salina fisiológica (7:3) durante 48 horas, se centrifugaron, y se midió la absorbancia del sobrenadante a 610 nm.
2.4 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±s. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 7. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 7 sobre la anafilaxia pasiva en ratas
Los resultados del ensayo se muestran en las Tablas 1 y 2. En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de dosis baja de la Composición 7 mostró una tendencia a disminuir el diámetro de las manchas azules en ratas con sensibilidad al suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, a disminuir la desgranulación de los mastocitos y a disminuir el contenido de histamina en suero, que, sin embargo, no tuvo significación estadística; el grupo de control de prednisona y los grupos de dosis medias y altas de la Composición 7 mostraron un efecto de disminución significativa del diámetro de las manchas azules en ratas sensibilizadas con suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, reduciéndose la desgranulación de los mastocitos y reduciéndose el contenido de histamina en suero, con una diferencia estadística significativa o muy significativa. Esto indica que la Composición 7 tuvo un efecto inhibidor significativo sobre la anafilaxia pasiva en ratas.
Tabla 1. Efecto de la Composición 7 sobre el diámetro de las manchas azules de PCAen ratas (x±s)
Diámetro de manchas azules Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales (mm)
1:4 1:8 Grupo de control modelo 0,0 10 17,50 ± 2,27 11,66 ± 1,92 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 12,48 ± 2,16** 8,32 ± 1,63** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,2 10 15,65 ± 2,44 10,55 ± 1,78 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,4 10 14,80 ± 2,02* 9,70 ± 1,39* Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 7,2 10 13,68 ± 2,50** 9,02 ± 1,56** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
Tabla 2. Efecto de la Composición 7 sobre la desgranulación dejos mastocitos y el contenido de histamina en suero _______________________________________en ratas PCA (x±s)_______________________________________
Dosis (g de
Grupos fármaco Número de animales Desgranulación Fluorescencia de la histaminabruto/kg)
Grupo de control modelo 0,0 10 59,60 ± 12,88 3,95 ± 0,95 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 17,54 ± 11,23** 2,11 ± 0,70** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,2 10 48,20 ± 12,54 3,24 ± 0,82 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,4 10 44,17 ± 11,96* 2,96 ± 0,77* Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 7,2 10 32,54 ± 10,03** 2,32 ± 0,69** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.2 Efecto de la Composición 7 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno
Los resultados se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control modelo, el grado de inflamación de los discos auriculares de los ratones disminuyó significativamente en los grupos de la dosis media y alta de Composición 7, lo que indica que la Composición 7 tuvo un buen efecto inhibidor sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por 2,4-dinitroclorobenceno.
Tabla 3. Efecto de la Composición 7 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por _________________________________ el 2,4-dinitroclorobenceno (x±s)___________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Grado de inflamación de los discos bruto/kg) animales auriculares de ratón (mg) Grupo de control modelo 0,0 10 6,95 ± 0,77
Grupo de control positivo 5,0 mg 10 4,84 ± 0,70**
Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 2,0 10 6,23 ± 0,89
Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 4,0 10 5,90 ± 0,80*
Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 12,0 10 5,21 ± 0,85**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.3 Efecto de la Composición 7 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 4. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 7, lo que indica que la Composición 7 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina.
Tabla 4. Efecto de la Composición 7 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular ______________________________________ í*±5)______________________________________
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de eventos de picazón bruto/kg) animales (30 min)
Grupo de control modelo 0,0 10 28,42 ± 6,08 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 15,57 ± 5,33** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 2,0 10 23,44 ± 6,21 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 4,0 10 20,38 ± 6,92* Grupo de dosis alta de fármaco 12,0 de ensayo 10 17,62 ± 5,06**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.4 Efecto de la Composición 7 sobre la permeabilidad capilar en ratas
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 7, lo que indica que la Composición 7 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina.
Tabla 5. Efecto de la Composición 7 sobre la permeabilidad capilar en ratas (x±s) Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales Valor de DO Grupo de control modelo 0,0 10 0,943 ± 0,086 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 0,662 ± 0,090** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,2 10 0,885 ± 0,102 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,4 10 0,832 ± 0,088* Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 7,2 10 0,724 ± 0,095** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales en animales demuestran que la Composición 7 es significativamente eficaz en la inhibición de la anafilaxia pasiva en ratas causada por la ovoalbúmina, que la Composición 7 es eficaz en la inhibición de la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno y que la Composición 7 es significativamente eficaz en reducir el aumento de la permeabilidad capilar en las ratas causado por el fosfato de histamina. Los resultados anteriores indican una buena eficacia de la Composición 7 para resistir las alergias, y para prevenir y tratar enfermedades alérgicas tales como la dermatitis alérgica y la urticaria. Ejemplo 64. Informe de experimentos con animales de la Composición 7 obtenida en el Ejemplo 7 contra la prevención y el tratamiento de la rinitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 7 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps y Flos rosae rugosae) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 12,19 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 52.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 52.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 52.
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la OVA
2.1.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron aleatoriamente ratas en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente, en función de su puntuación, en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo de positivo de fármaco (grupo de Bi-yan-kang) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 7, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 7 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. El grupo de control en blanco y el grupo modelo de rinitis alérgica recibieron por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica; el grupo de Biyan-kang recibió el fármaco a una dosis de 410 mg/kg. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0 ml/100 g de peso corporal. La administración intragástrica se inició después de una modelización exitosa y se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en ratas
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4 Indicadores de ensayo
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4.1 Medición del AMPc y GMPc en sangre
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4.2 Recuento de mastocitos de la mucosa nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.2 Efecto sobre la rinitis alérgica causada por TDI en cobayas
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2. Igual que en 2.1.2.
2.2.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en cobaya
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4 Indicadores de ensayo
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.1 Observación del comportamiento de las cobayas
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.2 Recuento de eosinófilos (EOS) en la secreción nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.3 Medición de IgE en suero total e histamina en sangre
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.4 Medición del espesor de la mucosa nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.3 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control en blanco, el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 7. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 7 sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la ovoalbúmina 3.1.1 Efecto sobre el comportamiento de las ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 2. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las ratas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 2. Efecto de la Composición 7 sobre las puntuaciones de los síntomas de la rinitis alérgica en ratas antes y _________________________________después de la dosificación (x±s)_________________________________
Dosis (g de Después de la dosificación Grupos animales fármaco
bruto/kg) dosificación Día 7 Día 14 Día 21 Grupo de control en 10 blanco - 0,34 ± 0,30 0,41 ± 0,23 0,38 ± 0,21 0,32 ± 0,15 Grupo de control modelo 10 - 6,69 ± 1,51** 6,61 ± 1,28** 6,91 ± 1,31** 6,51 ± 1,18** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 6,62 ± 1,23** 3,22 ± 0,97aa 3,68 ± 1,22aa 2,93 ± 1,01aa Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 10 1,0 6,72 ± 1,16** 5,81 ± 0,86 5,75 ± 1,41 5,60 ± 1,07 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 6,51 ± 1,32** 5,28 ± 1,21a 5,31 ± 1,44 4,54 ± 1,46aa Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 10 6,0 6,71 ± 1,09** 4,68 ± 0,81 aa 4,41 ± 1,37aa 4,22 ± 1,36aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo de control en blanco; p < 0,05, p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto de la Composición 7 sobre los niveles de AMPc y GMPc en suero en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel de AMPc en suero (p < 0,01) y un nivel significativamente aumentado de GMPc en suero (p <0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de Bi-yan-kang y todos los grupos de fármaco de ensayo mostraron un nivel de AMPc en suero significativamente aumentado (p < 0,01 o p < 0,05); el grupo de Bi-yan-kang y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de GMPc en suero significativamente reducido (p < 0,01 o p < 0,05), y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
3.1.3 Efecto de la Composición 7 sobre los mastocitos en la mucosa nasal de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de control modelo aumentó significativamente con una diferencia altamente significativa (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con el fármaco de ensayo disminuyó significativamente con una diferencia significativa (p < 0,01).
Tabla 3. Efecto de la Composición 7 sobre los niveles de AMPc_y GMPc en suero y de los mastocitos de la mucosa ______________________________________ nasal en ratas (x±s)______________________________________ Grupos Dosis (g de fármaco Número de AMPc o de bruto/kg) animales (pmol/ml) (p G
m
M
ol
P
/m
c
l) mas
R
to
e
c c i u to e s nt (células) Grupo de control en blanco - 10 20,06 ± 4,99 9,81 ± 2,67 1,70 ± 1,39 Grupo de control modelo - 10 10,31 ± 14,84 ±
3,89** 4,88** 14,28 ± 4,71** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 18,3
2
1
aa ± 9,01 ±
3,6 2,49aa 5,87 ± 2,21aa Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,0 10 14,01 ± 3,99 12,43 ± 3,94 9,83 ± 3,54aa Grupo de dosis media de 84 ± 10,61 ±
fármaco de ensayo 2,0 10 15,
5,22a 2,83a 8,75 ± 3,20aa Grupo de dosis alta de 21 ±
fármaco de ensayo 6,0 10 17,73 ± 9,
4,10aa 3,97aa 6,53 ± 2,08aa Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 7 sobre la rinitis alérgica en cobayas causada por TDI
3.2.1 Efecto sobre el comportamiento de las cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las cobayas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 4. Efecto de la Composición 7 sobre las puntuaciones de los síntomas de la rinitis alérgica en cobayas antes y después de la dosificación (x±s)
3.2.2 Efecto de la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control en blanco, aumentaron tanto la histamina en sangre como la IgE en suero total en el grupo modelo (p < 0,01), indicando una modelización experimental exitosa. En comparación con el grupo modelo, la absorbancia de la fluorescencia de la histamina y la concentración total de IgE en suero en los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo y en el grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05), donde la histamina en los grupos de dosis media y alta disminuyó casi hasta el nivel normal, lo que indica que la Composición 7 fue eficaz en el tratamiento de la rinitis alérgica mediante la inhibición del nivel de histamina en sangre y de IgE en suero.
Tabla 5. Efecto de la Composición 7 sobre la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas (x±s)
3.2.3 Efecto sobre los eosinófilos (EOS) en la secreción nasal de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. El número de eosinófilos en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el número de eosinófilos en el grupo de Bi-yankang y en los grupos de tratamiento con el fármaco disminuyó significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
3.2.4 Efecto sobre el espesor de la mucosa nasal en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. Como resultado, en comparación con el grupo de control en blanco, en el grupo modelo, Se separó en diversos grados el epitelio de la mucosa sobre el tabique nasal de las cobayas, teniendo un espesor no uniforme y una estructura basal poco clara; las vénulas y los capilares de la lámina propria mostraron una aparente dilatación, el espacio tisular se expandió, y el espesor de la mucosa aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, los cambios patológicos anteriores en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con fármaco se aliviaron, y el espesor de la mucosa disminuyó significativamente (p < 0,01).
Tabla 6. Efecto de la Composición 7 sobre los EOS en la secreción nasal y en el espesor de la mucosa nasal en _______________________________________ cobayas (X±s)_______________________________________ Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de EOS (*10‘ Espesor de la mucosa bruto/kg) animales 9/l) (mm) Grupo de control en blanco - 10 2,60 ± 1,36 0,157 ± 0,052 Grupo de control modelo - 10 17,52 ± 4,21** 0,284 ± 0,070** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 12,28 ± 3,81ññ 0,197 ± 0,045ññ Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,0 10 12,29 ± 4,13ññ 0,204 ± 0,049ññ Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 11,41 ± 3,57ññ 0,184 ± 0,066ññ Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 6,0 10 10,13 ± 2,86ñ 0,166 ± 0,068ññ Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññ,p < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la eficacia de la Composición 7 se refleja principalmente en los siguientes aspectos: 1) es capaz de disminuir significativamente la puntuación de los síntomas nasales de las ratas modelizadas, aumentando el nivel de AMPc en suero y reduciendo el nivel de GMPc en ratas con rinitis alérgica; 2) reduce el número de mastocitos en la mucosa nasal de las ratas y reduce su infiltración en las zonas inflamadas; 3) es capaz de disminuir la puntuación de los síntomas nasales de las cobayas modelizadas; 4) disminuye el número de EOS en la secreción nasal de las cobayas y reduce la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; 5) es capaz de disminuir significativamente la concentración de histamina en sangre en las cobayas y de reducir los mediadores inflamatorios; 6) alivia la inflamación de la mucosa nasal de las cobayas. De acuerdo con los resultados de los estudios experimentales, se considera que la Composición 7 es eficaz para resistir la rinitis alérgica.
Ejemplo 65. Informe de experimentos con animales de la Composición 7 obtenida en el Ejemplo 7 contra la prevención y el tratamiento del asma alérgico
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 7 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps y Flos rosae rugosae) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 12,19 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 53.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 53.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 53.
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
2.1.1 Agolpamiento de animales
Las ratas (la mitad de las cuales era machos y la otra mitad era hembras) se dividieron aleatoriamente en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo positivo de fármaco (grupo de dexametasona) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 7, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en ratas
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.3 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 7 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (8,20 mg de polvo seco/ml, 16,41 mg de polvo seco/ml, 49,22 mg de polvo seco/ml) para llevar a cabo los experimentos. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0ml/100g de peso corporal. el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9% 30 min antes de la exposición; y el grupo de fármaco positivo recibió dexametasona a una dosis de 0,5 mg/kg 30 min antes de cada desafío12'. Los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 7 recibieron cada uno por vía intragástrica la dosis respectiva del fármaco de ensayo 30 min antes de cada exposición. Al mismo tiempo, el grupo de control en blanco recibió por inyección intraperitoneal, se expuso a la atomización con o recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9 %. La administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.4 Registro del período latente del asma en ratas
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.5 Mediciones de los niveles de IL-4 e IFN-y
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.6 Medición del contenido de EOS en los tejidos pulmonares
Igual que en Ejemplo 53.
2.2 Efecto sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en cobayas
Igual que en Ejemplo 53.
2.2.3 Pauta posológica
Igual que en 2.1.3.
2.2.4 Registro del período latente del asma
Igual que en 21.4.1.
2.2.5 Medición de la IgE en suero y de BALF
Igual que en Ejemplo 53.
2.3 Método estadístico
Igual que en Ejemplo 53.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 7 sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
3.1.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 1. Se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en ratas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las ratas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
Tabla 1. Efecto de la Composición 7 sobre el período latente del asma inducido en ratas (x±s) Grupos Número de animales Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 75,46 ± 13,57** 76,92 ± 12,05** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 72. 88 ± 10,96** 156,30 ± 21,44** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 73,72 ± 14,20** 86,27 ± 20,88 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 72,65 ± 14,33** 95,64 ± 22,62ñ Grupo de dosis alta de fármaco
yo 10 6,0 73,19 ± de ensa 13,36** 102,68 ± 23,89ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 2. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel en suero de IFN-y (P <0,01), pero un aumento significativo del nivel de IL-4 en suero (p <0,01), lo que indica un grave desequilibrio de la proporción de IFN-y/IL-4 durante los ataques de asma. En comparación con el grupo modelo, el grupo de dexametasona y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de IL-4 significativamente reducido (p <0,05 o p < 0,01) y un nivel de IFN-y significativamente mayor (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que el fármaco de ensayo puede corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4.
Tabla 2. Efecto de la Composición 7 sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas (x±s) Grupos Dosis
b
(g
ru
d
to
e
/k
f
g
á
) rmaco Número de animales IL-4 (pg/ml) ifn -y (pg/ml) Grupo de control en blanco - 10 12,84 ± 2,66 23,87 ± 4,26 Grupo de control modelo - 10 22,18 ± 3,09** 12,45 ± 3,35** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 12,90 ± 4,67** 19,29 ± 4,04** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 20,21 ± 3,56 13,66 ± 3,21 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 18,90:1:4,06* 15,87 ± 3,26* Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 16,97 ± 3,54** 18,92 ± 4,24** Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de EOS en ratas en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo mostraron un número significativamente reducido de EOS (p < 0,01), lo que indica que la Composición 7 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas.
Tabla 3. Efecto de la Composición 7 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata (x±s)
Grupos Dosis (g de fá
bruto/kg) rmaco Número de animales EOS (células/HP) Grupo de control en blanco - 10 2,60 ± 0,92 Grupo de control modelo - 10 105,72 ± 14,56** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 35,64 ± 6,18aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 93,76 ± 11,90 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 79,47 ± 12,08ññ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 6,0 10 68,6 ± 8,32ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 7 sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
3.2.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en cobayas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las cobayas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que la Composición 7 aumenta enormemente los síntomas asmáticos en las cobayas.
Tabla 4. Efecto de la Composición 7 sobre el período latente del asma inducido en cobayas (x±s)
Grupos Número de animales Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 74,33 ± 11,26** 72,87 ± 11,21** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 70,68 ± 9,65** 150,46 ± 16,80aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 72,92 ± 10,65** 82,96 ± 21,65 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 73,67 ± 11,86** 96,44 ± 20,27ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 75,42 ± 10,45** 113,35 ± 25,92ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.2 Efecto sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. El contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo de dexametasona y en los grupos en dosis media y alta del fármaco de ensayo disminuyeron significativamente (p <0,01 o p < 0,05), lo que indica que tanto la dexametasona como el fármaco de ensayo pueden inhibir la respuesta inflamatoria alérgica en el pulmón de cobaya y mejorar los síntomas asmáticos.
Tabla 5. Efecto de la Composición 7 sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g de fármaco Número de animales Suero bruto/k (U/l) BALF (U/l)g)
Grupo de control en blanco - 10 2,04 ± 0,83 3,72 ± 0,76 Grupo de control modelo - 10 5,69 ± 1,22** 5,41 ± 1,38** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 3,70 ± 1,26“ 3,50 ± 0,78“ Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,0 10 5,24 ± 2,45 4,36 ± 1,21 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 4,28 ± 1,02ñ 3,88 ± 1,49a Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 3,95 ± 1,34“ 3,65 ± 0,91 aa
Grupos Dosis (g de fármaco Número de a bruto/kg) nimales Suero (U/l) BALF (U/l) Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. En comparación con el grupo de control en blanco, el nivel de recuento de eOs en las cobayas del grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el nivel de recuento de EOS en el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo se redujo significativamente (p < 0,01), lo que indica que la Composición 7 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de eOs en los tejidos pulmonares de las cobayas.
Tabla 6. Efecto de la Composición 7 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g de fármaco Número de animales EOS (cél bruto/kg) ulas/HP) Grupo de control en blanco - 10 5,40 ± 2,67 Grupo de control modelo - 10 90,613 ± 13,25** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 31,70 ± 9,52aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 86,80 ± 11,93 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 75,60 ± 13,41a Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 6,0 10 55,72 ± 15,54aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la Composición 7 es capaz de mejorar significativamente los síntomas asmáticos en ratas y de prolongar el período de latencia del asma inducido en cobayas en los grupos modelo; de reducir el nivel de IL-4 en suero, de aumentar el nivel de IFN-y en suero y corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4 en ratas con asma; de reducir el número de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas y cobayas, y mejorar la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; de reducir el contenido total de IgE en suero y de BALF de las cobayas, y mejorar los síntomas inflamatorios pulmonares. Por lo tanto, la Composición 7 se considera eficaz en la resistencia al asma alérgico.
Ejemplo 66. Informe de experimentos con animales de la Composición 8 obtenida en el Ejemplo 8 contra la alergia y la dermatitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 8 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps sinensis en polvo fermentado, Flos rosae rugosae y Cordyceps) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 13,78 g de fármacos brutos totales. Su ingesta diaria recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 51.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 51.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 51.
2. Métodos experimentales
2.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron los animales aleatoriamente en grupos con 10 animales por grupo en función del peso corporal. Un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 8, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona).
2.2 Pauta posológica
La ingesta diaria de la Composición de fármaco 8 de ensayo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para un ratón fue: grupo de dosis baja: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 4,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 12,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 5, 10 y 30 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (14,515 mg de polvo seco/ml, 29,03 mg de polvo seco/ml y 87,09 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
La ingesta diaria para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (7,255 mg de polvo seco/ml, 14,51 mg de polvo seco/ml y 43,53 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos.
2.3 Efecto de la Composición 8 sobre la anafilaxia pasiva (PCA) en ratas causada por la ovoalbúmina
2.3.1 Preparación de antisuero
Igual que en Ejemplo 51.
2.3.2 Establecimiento de los modelos de suero anti-ovoalbúmina de rata[1]
Se tomó suero anti-ovoalbúmina y se diluyó a 1:4 o 1:8 con solución salina fisiológica. Se dividieron aleatoriamente 50 ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 8, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 8 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 14 días consecutivos. El día 15, se afeitó el lomo de las ratas, y se inyectó por vía intradérmica un antisuero diluido en dos puntos de cada lado con 0,1 ml por punto. Después de 48 horas, se inyectó en la vena de la cola de cada rata una solución mixta de 1,0 ml de azul de Evans al 1 % y de ovoalbúmina al 1 % en solución salina fisiológica. Después de 30 min, se extrajo sangre arterial, se aisló el suero de la misma y se determinó el contenido de histamina mediante el método[2]. Se sacrificaron las ratas y se invirtió la piel del lomo para medir el diámetro de las manchas de reacción azules con el fin de determinar la diferencia entre los grupos de dosificación y el grupo modelo. Se fijó una muestra del tejido cutáneo de rata con formaldehído neutro, se deshidrató con un gradiente de alcohol, se embebió en parafina y se examinó para determinar la desgranulación de los mastocitos en el tejido[3].
2.3.3 Efecto de la Composición 8 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno[4]
Se dividieron aleatoriamente 50 ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 8, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se aplicó una solución al 5 % de 2,4-dinitroclorobenceno en etanol sobre la piel abdominal (afeitada) de los ratones para la sensibilización. Se llevó a cabo la administración intragástrica dos días antes de la sensibilización; el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de agua destilada; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 8 recibieron las soluciones de ensayo correspondientes por vía intragástrica a un volumen de dosis de 0,1 ml/10g de peso corporal; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 7 días después de la sensibilización, se aplicó una solución al 1 % de 2,4-dinitroclorobenceno en la oreja derecha, y se sacrificaron los ratones tras 24 horas, y se cortaron ambas orejas a lo largo de la línea de base de la aurícula. Se perforaron discos que tenían un diámetro de 8 mm en la misma posición en ambas orejas, se pesaron con precisión en una balanza electrónica, y se tomó la diferencia de peso entre la oreja izquierda y derecha como el valor de hipersensibilidad retardada.
2.3.4 Efecto de la Composición 8 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular[5] Se dividieron aleatoriamente los ratones en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y
alta dosis de la Composición 8, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratones por grupo. Se llevó a cabo la administración intragástrica a los ratones una vez al día durante 10 días consecutivos. 30 min después de la administración final, se inyectó una solución de dextrano de bajo peso molecular al 0,0125% a 0,1 g/10 g en la vena de la cola. Se observó y registró el número de eventos de picazón (los eventos de picazón se indicaron al rascarse la cabeza con las patas delanteras, al rascarse el cuerpo con las patas traseras y al morder en varias partes del cuerpo) ocurrido en el transcurso de los 30 min posteriores a la inyección de la solución de dextrano de bajo peso molecular en las venas de la cola de los ratones de cada grupo.
2.3.5 Efecto de la Composición 8 sobre la permeabilidad capilar en ratas[6]
Se dividieron aleatoriamente las ratas en 5 grupos, es decir, un grupo de control modelo, grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 8, y un grupo de control positivo de fármaco (prednisona), con 10 ratas por grupo. El grupo de control modelo recibió agua destilada por vía intragástrica; el grupo de control positivo de fármaco recibió prednisona por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg; los grupos de baja, media y alta dosis de la Composición 8 recibieron las soluciones de ensayo por vía intragástrica a diferentes concentraciones en un volumen de dosificación de 10 ml/kg; la administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 10 días consecutivos. 1 hora después de la administración final, se inyectó en la zona afeitada (afeitada antes de la administración) del lomo de las ratas por vía intradérmica 1 mg/ml de fosfato de histamina a una dosis de 0,1 ml/rata, y luego se inyectó en la vena de la cola de inmediato una solución acuosa de azul de Evans al 1 % a una dosis de 1 ml/rata. Después de 20 minutos, se sacrificaron los animales por dislocación cervical. Se retiraron cortando las zonas de la piel con manchas azules y se cortaron en trozos pequeños, se empaparon en una solución de 5 ml de acetona:solución salina fisiológica (7:3) durante 48 horas, se centrifugaron, y se midió la absorbancia del sobrenadante a 610 nm.
2.4 Método estadístico
Igual que en Ejemplo 51.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 8 sobre la anafilaxia pasiva en ratas
Los resultados del ensayo se muestran en las Tablas 1 y 2. En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de dosis baja de la Composición 8 mostró una tendencia a disminuir el diámetro de las manchas azules en ratas con sensibilidad al suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, a disminuir la desgranulación de los mastocitos y a disminuir el contenido de histamina en suero, que, sin embargo, no tuvo significación estadística; el grupo de control de prednisona y los grupos de dosis medias y altas de la Composición 8 mostraron un efecto de disminución significativa del diámetro de las manchas azules en ratas sensibilizadas con suero anti-ovoalbúmina a 1:4 y 1:8, reduciéndose la desgranulación de los mastocitos y reduciéndose el contenido de histamina en suero, con una diferencia estadística significativa o muy significativa. Esto indica que la Composición 8 tuvo un efecto inhibidor significativo sobre la anafilaxia pasiva en ratas.
Tabla 1. Efecto de la Composición 8 sobre el diámetro de las manchas azules de PCA en ratas (x±s)
Diámetro de manchas azules Grupos Dosis
b
(g
ru
d
to
e
/k
f
g
á
) rmaco Número de animales - (mm)
1:4 1:8 Grupo de control modelo 0,0 10 18,14 ± 3,08 11,93 ± 2,17 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 12,82 ± 2,62** 8,54 ± 1,82** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,2 10 16,27 ± 2,75 10,81 ± 1,64 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,4 10 15,04 ± 2,80* 9,94 ± 1,47* Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 7,2 10 13,89 ± 2,62** 9,36 ± 1,80** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
Tabla 2. Efecto de la Composición 8 sobre la desgranulación dejos mastocitos y el contenido de histamina en suero ______________________________________ en ratas PCA (x±s)______________________________________ Grupos Dosis (g de fármaco Número de Desgranulación Fluorescencia de la bruto/kg) animales histamina (mg/l) Grupo de control modelo 0,0 10 60,24 ± 12,47 4,28 ± 0,87 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 17,95 ± 11,82** 2,25 ± 0,76** Grupo de dosis baja de 1,2 10 49,72 ± 10,98 3,52 ± 0,80
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Desgranulación Fluorescencia de la bruto/kg) animales histamina (mg/l) fármaco de ensayo
Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,4 10 45,90 ± 11,04* 3,30 ± 0,69* Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 7,2 10 33,16 ± 10,56** 2,54 ± 0,83** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.2 Efecto de la Composición 8 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno
Los resultados se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control modelo, el grado de inflamación de los discos auriculares de los ratones disminuyó significativamente en los grupos de la dosis media y alta de Composición 8, lo que indica que la Composición 8 tuvo un buen efecto inhibidor sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por 2,4-dinitroclorobenceno.
Tabla 3. Efecto de la Composición 8 sobre la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno (x±s)
Dosis (g de fármaco Número de Grado de inflamación de los discos Grupos bruto/kg) animales auriculares de ratón (mg) Grupo de control modelo 0,0 10 6,73 ± 0,65
Grupo de control positivo 5,0 mg 10 4,60 ± 0,82**
Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 2,0 10 6,04 ± 0,97
Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 4,0 10 5,82 ± 0,83*
Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 12,0 10 5,08 ± 0,64**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.3 Efecto de la Composición 8 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 4. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 8, lo que indica que la Composición 8 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina.
Tabla 4. Efecto de la Composición 8 sobre la picazón local en ratones causada por dextrano de bajo peso molecular jx±s).
Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de eventos de picazón bruto/kg) animales (30 min)
Grupo de control modelo 0,0 10 26,60 ± 6,22 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 14,88 ± 5,08** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 2,0 10 21,53 ± 5,21 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 4,0 10 18,94 ± 6,04* Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 12,0 10 15,62 ± 4,78**
*p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
3.4 Efecto de la Composición 8 sobre la permeabilidad capilar en ratas
Los resultados de los ensayos se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control modelo, el valor de DO disminuyó significativamente en los grupos de ratas de dosis media y alta de Composición 8, lo que indica que la Composición 8 fue significativamente eficaz en disminuir el aumento de la permeabilidad capilar en ratas causado por el fosfato de histamina.
Tabla 5. Efecto de la Composición 8 sobre la permeabilidad capilar en ratas (x±s) Grupos Dosis (g de fármaco
bruto/kg) Número de animales Valor de DO Grupo de control modelo 0,0 10 0,962 ± 0,069 Grupo de control positivo 5,0 mg 10 0,662 ± 0,073** Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,2 10 0,890 ± 0,084 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,4 10 0,856 ± 0,089* Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 7,2 10 0,724 ± 0,097** *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo de control modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales en animales demuestran que la Composición 8 es significativamente eficaz en la inhibición de la anafilaxia pasiva en ratas causada por la ovoalbúmina, que la Composición 8 es eficaz en la inhibición de la hipersensibilidad retardada en la piel de la oreja de ratón causada por el 2,4-dinitroclorobenceno y que la Composición 8 es significativamente eficaz en reducir el aumento de la permeabilidad capilar en las ratas causado por el fosfato de histamina. Los resultados anteriores indican una buena eficacia de la Composición 8 para resistir las alergias, y para prevenir y tratar enfermedades alérgicas tales como la dermatitis alérgica y la urticaria.
Ejemplo 67. Informe de experimentos con animales de la Composición 8 obtenida en el Ejemplo 8 contra la prevención y el tratamiento de la rinitis alérgica
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 8 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps sinensis en polvo fermentado, Flos rosae rugosae y Cordyceps) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 13,78 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 52.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 52.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 52.
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la OVA
2.1.1 Agrupamiento de animales
Se dividieron aleatoriamente ratas en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente, en función de su puntuación, en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo de positivo de fármaco (grupo de Bi-yan-kang) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 8, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 8 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y
15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (7,26 mg de polvo seco/ml, 14,51 mg de polvo seco/ml y 43,54 mg de polvo seco/ml) con agua destilada para llevar a cabo los experimentos. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0ml/100g de peso corporal. El grupo de control en blanco y el grupo modelo de rinitis alérgica recibieron por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica; el grupo de Biyan-kang recibió el fármaco a una dosis de 410mg/kg. La administración intragástrica se inició después de una modelización exitosa y se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en ratas
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4 Indicadores de ensayo
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4.1 Medición del AMPc y GMPc en sangre
Igual que en Ejemplo 52.
2.1.4.2 Recuento de mastocitos de la mucosa nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.2 Efecto sobre la rinitis alérgica causada por TDI en cobayas
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2. Igual que en 2.1.2.
2.2.3 Establecimiento de modelos animales de rinitis alérgica en cobaya
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4 Indicadores de ensayo
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.1 Observación del comportamiento de las cobayas
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.2 Recuento de eosinófilos (EOS) en la secreción nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.3 Medición de IgE en suero total e histamina en sangre
Igual que en Ejemplo 52.
2.2.4.4 Medición del espesor de la mucosa nasal
Igual que en Ejemplo 52.
2.3 Método estadístico
Los datos experimentales se presentaron en X±S. Se empleó un análisis ANOVA de una vía para comparar las diferencias entre el grupo de control en blanco, el grupo de control modelo y los grupos en varias dosis de la Composición 8. p < 0,05 se consideró como significativamente diferente. p < 0,01 se consideró como muy significativamente diferente.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 8 sobre la rinitis alérgica en ratas causada por la ovoalbúmina
3.1.1 Efecto sobre el comportamiento de las ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 2. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las ratas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 2. Efecto de la Composición 8 sobre las puntuaciones de los síntomas de la rinitis alérgica en ratas antes y ________________________________ después de la dosificación (x±s)________________________________
sis (g de Después de
Grupos Número de Do
fármaco Antes de la la dosificación
animales dosificación
bruto/kg) Día 7 Día 14 Día 21 Grupo de control en
blanco 10 - 0,36 ± 0,38 0,44 ± 0,23 0,35 ± 0,29 0,35 ± 0,16 Grupo de control
modelo 10 - 6,78 ± 1,62** 6,70 ± 1,37** 6,98 ± 1,42** 6,64 ± 1,06** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 6,53 ± 1,14** 3,14 ± 0,98aa 3,77 ± 1,14aa 2,76 ± 0,98aa Grupo de dosis baja 10 de fármaco de ensayo 1,0 6,84 ± 1,25** 5,90 ± 0,75 5,72 ± 1,29 5,78 ± 1,16 Grupo de dosis media
de fármaco de ensayo 10 2,0 6,42 ± 1,44** 5,37 ± 1,33a 5,23 ± 1,53a 4,26 ± 1,35aa Grupo de dosis alta
de fármaco de ensayo 10 6,0 6,79 ± 1,18** 4,76 ± 0,92aa 4,30 ± 1,26aa 4,34 ± 1,23aa Nota: **p < 0,01 frente al grupo de control en blanco; p < 0,05, p < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.2 Efecto de la Composición 8 sobre los niveles de AMPc y GMPc en suero en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel de AMPc en suero (p < 0,01) y un nivel significativamente aumentado de GMPc en suero (p <0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el grupo de Bi-yan-kang y todos los grupos de fármaco de ensayo mostraron un nivel de AMPc en suero significativamente aumentado (p < 0,01 o p < 0,05); el grupo de Bi-yan-kang y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de GMPc en suero significativamente reducido (p < 0,01 o p < 0,05), y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
3.1.3 Efecto de la Composición 8 sobre los mastocitos en la mucosa nasal de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de control modelo aumentó significativamente con una diferencia altamente significativa (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, el número de mastocitos de la mucosa nasal en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con el fármaco de ensayo disminuyó significativamente con una diferencia significativa (p < 0,01).
Tabla 3. Efecto de la Composición 8 sobre los niveles de AMPcy GMPc en suero y de los mastocitos de la mucosa ______________________________________ nasal en ratas (x±s)______________________________________ Grupos Dosis (g de fármaco Número de AMPc GMPc Recuento de bruto/kg) animales (pmol/ml) (pmol/ml) mastocitos (células) Grupo de control en blanco - 10 20,24 ± 4,87 9,88 ± 2,56 1,74 ± 1,38 Grupo de control modelo ,20 ± 14,95 ±
- 10 10
3,90** 4,96** 14,39 ± 4,83** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 18,40 ± 9,08 ±
3,49aa 2,36aa 5,76 ± 2,09aa Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,0 10 14,25 ±
3,80a 12,55 ± 3,85 9,71 ± 3,57aa Grupo de dosis media de 10,70 ±
fármaco de ensayo 2,0 10 15,95 ±
5,34a 2,72a 8,87 ± 3,11 aa Grupo de dosis alta de 9,10 ±
fármaco de ensayo 6,0 10 16,85 ±
4,19aa 3,86aa 6,64 ± 2,16aa Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, 'AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 8 sobre la rinitis alérgica en cobayas causada por TDI
3.2.1 Efecto sobre el comportamiento de las cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los signos de las cobayas de cada grupo modelizado sin que hubiera una diferencia significativa entre los mismos, lo que indicó una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, todas las puntuaciones de los signos de los grupos de dosis medias y altas del fármaco de ensayo y del grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05) y el grupo de dosis baja también mostró una tendencia a disminuir.
Tabla 4. Efecto de la Composición 8 sobre las puntuaciones de los síntomas de la rinitis alérgica en cobayas antes y _________________________________ después de la dosificación (x±s)__________________________________
Dosis (g de Después de la dosificación Grupos animales fármaco dosificaciónbruto/kg) Día 7 Día 14 Día 21 Grupo de control en
blanco 10 - 0,55 ± 0,71 0,41 ± 0,42 0,31 ± 0,39 0,45 ± 0,61 Grupo de control
modelo 10 - 6,18 ± 1,32** 6,57 ± 1,27** 6,64 ± 1,12** 6,10 ± 0,86** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 6,73 ± 1,07** 5,24 ± 0,60a 5,72 ± 0,82a 4,98 ± 1,18a Grupo de dosis baja
de fármaco de ensayo 10 1,0 6,64 ± 1,20** 5,46 ± 1,25 5,59 ± 0,88 5,13 ± 1,42 Grupo de dosis media
de fármaco de ensayo 10 2,0 6,52 ± 1,17** 5,13 ± 1,38a 4,66 ± 1,42aa 4,20 ± 0,87aa Grupo de dosis alta
de fármaco de ensayo 10 6,0 6,79 ± 1,23** 4,46 ± 1,17aa 3,83 ± 0,74aa 3,77 ± 0,83aa Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.2 Efecto de la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. En comparación con el grupo de control en blanco, aumentaron tanto la histamina en sangre como la IgE en suero total en el grupo modelo (p < 0,01), indicando una modelización experimental exitosa. En comparación con el grupo modelo, la absorbancia de la fluorescencia de la histamina y la concentración total de IgE en suero en los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo y en el grupo de Bi-yan-kang disminuyeron significativamente (p < 0,01 o p < 0,05), donde la histamina en los grupos de dosis media y alta disminuyó casi hasta el nivel normal, lo que indica que la Composición 8 fue eficaz en el tratamiento de la rinitis alérgica mediante la inhibición del nivel de histamina en sangre y de IgE en suero.
Tabla 5. Efecto de la Composición 8 sobre la histamina en sangre y de la IgE en suero total en cobayas (x±s) Grupos Número de Dosis (g de fármaco Fluorescencia de la
animales bruto/kg) histamina (mg/l) lgE (Ul ml-1) Grupo de control en blanco 10 - 2,04 ± 0,45 0,128 ±
0,032 Grupo de control modelo 10 - 3,25 ± 0,98** 0,172 ±
0,044** Grupo de Bi-yan-kang 10 0,41 2,03 ± 0,37aa 0,112 ±
0,014aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 3,10 ± 0,55 0,146 ±
0,038 Grupo de dosis media de ± fármaco de ensayo 10 2,0 2,42 ± 0,32a 0,138 0,015a Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 2,19 ± 0,28aa 0,130 ±
0,020aa Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.3 Efecto sobre los eosinófilos (EOS) en la secreción nasal de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. El número de eosinófilos en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el número de eosinófilos en el grupo de Bi-yankang y en los grupos de tratamiento con el fármaco disminuyó significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
3.2.4 Efecto sobre el espesor de la mucosa nasal en cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. Como resultado, en comparación con el grupo de control en blanco, en el grupo modelo, Se separó en diversos grados el epitelio de la mucosa sobre el tabique nasal de las cobayas, teniendo un espesor no uniforme y una estructura basal poco clara; las vénulas y los capilares de la lámina propria mostraron una aparente dilatación, el espacio tisular se expandió, y el espesor de la mucosa aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo de control modelo, los cambios patológicos anteriores en el grupo de Bi-yan-kang y en los grupos de tratamiento con fármaco se aliviaron, y el espesor de la mucosa disminuyó significativamente (p < 0,01).
Tabla 6. Efecto de la Composición 8 sobre los EOS en la secreción nasal y en el espesor de la mucosa nasal en _______________________________________ cobayas(x±s)_________________________________________ Grupos Dosis (g de fármaco Número de Número de EOS (*10‘ Espesor de la mucosa bruto/kg) animales 9/l) (mm) Grupo de control en blanco - 10 2,63 ± 1,02 0,151 ± 0,055 Grupo de control modelo - 10 18,77 ± 4,28** 0,289 ± 0,082** Grupo de Bi-yan-kang 0,41 10 13,19 ± 3,70ññ 0,188 ± 0,039ññ Grupo de dosis baja de
fármaco de ensayo 1,0 10 13,38 ± 4,21ññ 0,188 ± 0,058ññ Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 13,52 ± 3,46ññ 0,182 ± 0,079ññ Grupo de dosis alta de
fármaco de ensayo 6,0 10 12,24 ± 2,70ññ 0,177 ± 0,071ññ Nota: *p < 0,05, **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ^ o < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la eficacia de la Composición 8 se refleja principalmente en los siguientes aspectos: 1) es capaz de disminuir significativamente la puntuación de los síntomas nasales de las ratas modelizadas, aumentando el nivel de AMPc en suero y reduciendo el nivel de GMPc en ratas con rinitis alérgica; 2) reduce el número de mastocitos en la mucosa nasal de las ratas y reduce su infiltración en las zonas inflamadas; 3) es capaz de disminuir la puntuación de los síntomas nasales de las cobayas modelizadas; 4) disminuye el número de EOS en la secreción nasal de las cobayas y reduce la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; 5) es capaz de disminuir significativamente la concentración de histamina en sangre en las cobayas y de reducir los mediadores inflamatorios; 6) alivia la inflamación de la mucosa nasal de las cobayas. De acuerdo con los resultados de los estudios experimentales, se considera que la Composición 8 es eficaz para resistir la rinitis alérgica.
Ejemplo 68. Informe de experimentos con animales de la Composición 8 obtenida en el Ejemplo 8 contra la prevención y el tratamiento del asma alérgico
1. Materiales y métodos
1.1 Fuentes de muestras
El fármaco de ensayo fue la Composición 8 (Radix panacis quinquefolii, Ganoderma, Cordyceps sinensis en polvo fermentado, Flos rosae rugosae y Cordyceps) proporcionada por Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd. en forma de un material compuesto en polvo. 1 g de material compuesto en polvo seco era equivalente a 13,78 g de fármacos brutos totales.
1.2 Animales de laboratorio
Igual que en Ejemplo 53.
1.3 Reactivos primarios
Igual que en Ejemplo 53.
1.4 Instrumentos primarios
Igual que en Ejemplo 53.
2. Métodos experimentales
2.1 Efecto sobre el asma alérgico en ratas causado por la OVA
2.1.1 Ag o l pamiento de animales
Las ratas (la mitad de las cuales era machos y la otra mitad era hembras) se dividieron aleatoriamente en dos grupos, es decir, un grupo de control en blanco de 10 animales y un grupo de modelización de 70 animales. Tras una modelización exitosa, las ratas se dividieron aleatoriamente en los siguientes grupos: un grupo de control modelo, un grupo positivo de fármaco (grupo de dexametasona) y los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 8, con 10 animales en cada grupo.
2.1.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en ratas
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.3 Pauta posológica
La ingesta diaria del material compuesto de la Composición de fármaco 8 de ensayo en polvo recomendada para una persona era de 24 g de fármaco bruto/60 kg de peso corporal. Basándose en ella, la ingesta diaria calculada para una rata fue: grupo de dosis baja: 1,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis media: 2,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal; grupo de dosis alta: 6,0 g de fármaco bruto/kg de peso corporal, que eran 2,5, 5 y 15 veces la ingesta diaria para un ser humano, respectivamente. Las muestras se prepararon en soluciones intragástricas a las concentraciones correspondientes (7,26 mg de polvo seco/ml, 14,51 mg de polvo seco/ml, 43,54 mg de polvo seco/ml) para llevar a cabo los experimentos. El volumen de administración intragástrica se calculó como 1,0ml/100g de peso corporal. el grupo de control modelo recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9% 30 min antes de la exposición; y el grupo de fármaco positivo recibió dexametasona a una dosis de 0,5 mg/kg 30 min antes de cada desafío12'. Los grupos de baja, media y alta dosis de Composición 8 recibieron cada uno por vía intragástrica la dosis respectiva del fármaco de ensayo 30 min antes de cada exposición. Al mismo tiempo, el grupo de control en blanco recibió por inyección intraperitoneal, se expuso a la atomización con o recibió por vía intragástrica un volumen equivalente de solución salina fisiológica al 0,9 %. La administración intragástrica se llevó a cabo una vez al día durante 21 días consecutivos.
2.1.4 Registro del período latente del asma en ratas
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.5 Mediciones de los niveles de IL-4 e IFN-y
Igual que en Ejemplo 53.
2.1.6 Medición del contenido de EOS en los tejidos pulmonares
Igual que en Ejemplo 53.
2.2 Efecto sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
2.2.1. Igual que en 2.1.1.
2.2.2 Establecimiento de modelos animales de asma alérgico en cobayas
Igual que en Ejemplo 53.
2.2.3 Pauta posológica
Igual que en 2.1.3.
2.2.4 Registro del período latente del asma
Igual que en 21.4.1.
2.2.5 Medición de la IgE en suero y de BALF
Igual que en Ejemplo 53.
2.3 Método estadístico
Igual que en Ejemplo 53.
3. Resultados
3.1 Efecto de la Composición 8 sobre el asma alérgico en ratas causado por las OVA
3.1.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en ratas
Los resultados se muestran en la Tabla 1. Se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en ratas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las ratas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01).
Tabla 1. Efecto de la Composición 8 sobre el período latente del asma inducido en ratas (x±s) Grupos Número de Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la animales bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 78,24 ± 13,92** 75,44 ± 12,76** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 73,66 ± 11,19** 159,87 ± 20,38ññ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 76,63 ± 15,20** 85,13 ± 21,42 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 78,42 ± 14,17** 96,60 ± 20,75ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 78,49 ± 17,23** 106,54 ± 20,97ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññp < 0,01 frente al grupo modelo.
Efecto sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 2. En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo mostró una significativa disminución del nivel de IFN-y en suero (p < 0,01), pero un nivel significativamente aumentado de IL-4 en suero (p < 0,01), lo que indica un gran desequilibrio de la proporción de IFN-y/IL-4 durante los ataques de asma. En comparación con el grupo modelo, el grupo de dexametasona y los grupos de dosis media y alta del fármaco de ensayo mostraron un nivel de IL-4 significativamente reducido (p <0,05 o p < 0,01) y un nivel de IFN-y significativamente mayor (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que el fármaco de ensayo puede corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4.
Tabla 2. Efecto de la Composición 8 sobre los niveles de IL-4 e IFN-y en ratas (x±s) Grupos Dosis (g de f
g
á
)
rma
bruto/k co Número de animales IL-4 (pg/ml) ifn -y (pg/ml) Grupo de control en blanco - 10 12,75 ± 2,63 24,41 ± 4,27 Grupo de control modelo - 10 22,55 ± 3,68" 11,95 ± 3,36ññ Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 13,41 ± 4,21ññ 20,16 ± 4,96ññ Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 20,67 ± 3,28 13,88 ± 3,87 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 18,35 ± 4,24ñ 15,70 ± 3,92ñ Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 16,22 ± 3,47ññ 17,46 ± 4,86ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; ñp < 0,05, ññp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.1.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3. El número de EOS en ratas en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo mostraron un número significativamente reducido de EOS (p < 0,01), lo que indica que la Composición 8 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas.
Tabla 3. Efecto de la Composición 8 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de rata (x±s)
Grupos Dosis
b
(g
ru
d
to
e
/k
f
g
á
) rmaco Número de animales EOS (células/HP) Grupo de control en blanco - 10 2,24 ± 0,85 Grupo de control modelo - 10 103,60 ± 13,94** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 28,39 ± 4,26aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 93. 21 ± 11,29 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 72,13 ± 10,34ññ Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 65,22 ± 8,49ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2 Efecto de la Composición 8 sobre el asma alérgico en cobayas causado por un gas mixto de Ach e His
3.2.1 Efecto sobre el período latente del asma inducido en cobayas
Los resultados se muestran en la Tabla 4. Tras la modelización, se puntuaron los períodos latentes de asma inducido en cobayas de cada grupo modelizado, sin una diferencia significativa entre ellos, lo que indica una modelización exitosa. Tras la dosificación y el tratamiento, en comparación con el grupo de control modelo, los períodos latentes de asma inducido en las cobayas del grupo de control positivo y los grupos de dosis alta y media del fármaco de ensayo se prolongaron significativamente (p < 0,05 o p < 0,01), lo que indica que la Composición 8 aumenta enormemente los síntomas asmáticos en las cobayas.
Tabla 4. Efecto de la Composición 8 sobre el período latente del asma inducido en cobayas (x±s)
Grupos Número de animales Dosis (g de fármaco Antes de la Después de la bruto/kg) dosificación dosificación Grupo de control en blanco 10 - 360 360 Grupo de control modelo 10 - 77,18 ± 10,92** 78,00 ± 10,76** Grupo de control positivo 10 0,5 mg/kg 74,63 ± 9,04** 156,77 16,18aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 10 1,0 76,64 ± 14,20** 84,03 ± 21,42 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 10 2,0 77,92 ± 15,17** 97,40 ± 24,67ñ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 10 6,0 79,79 ± 19,23** 110,87 ± 24,53ññ Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.2 Efecto sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5. El contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el contenido total de IgE en suero y de BALF en el grupo de dexametasona y en los grupos en dosis media y alta del fármaco de ensayo disminuyeron significativamente (p <0,01 o p < 0,05), lo que indica que tanto la dexametasona como el fármaco de ensayo pueden inhibir la respuesta inflamatoria alérgica en el pulmón de cobaya y mejorar los síntomas asmáticos.
Tabla 5. Efecto de la Composición 8 sobre la IgE total en suero y sobre BALF de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g d
o
e
/k
f
g
á
) rmaco Número de animales brut Suero (U/l) BALF (U/l) Grupo de control en blanco - 10 2,10 ± 0,87 3,69 ± 0,86 Grupo de control modelo - 10 5,72 ± 1,47** 5,42 ± 1,34** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 3,65 ± 1,21“ 3,62 ± 0,62“ Grupo de dosis baja de fármaco de
ensayo 1,0 10 5,21 ± 2,08 4,25 ± 1,67 Grupo de dosis media de fármaco
de ensayo 2,0 10 4,35 ± 1,24ñ 3,82 ± 1,55a Grupo de dosis alta de fármaco de
ensayo 6,0 10 3,98 ± 1,19“ 3,79 ± 0,86aa
Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; Ap < 0,05, AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
3.2.3 Efecto sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares cobayas
Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6. En comparación con el grupo de control en blanco, el nivel de recuento de eOs en las cobayas del grupo modelo aumentó significativamente (p < 0,01). En comparación con el grupo modelo, el nivel de recuento de EOS en el grupo de control positivo y los grupos de dosis media y alta de fármaco de ensayo se redujo significativamente (p < 0,01), lo que indica que la Composición 8 es eficaz en el tratamiento del asma alérgico, posiblemente al reducir el contenido de eOs en los tejidos pulmonares de las cobayas.
Tabla 6. Efecto de la Composición 8 sobre el contenido de EOS en los tejidos pulmonares de cobayas (x±s)
Grupos Dosis (g de fá
) rmaco Número de animales EOS (célula bruto/kg s/HP) Grupo de control en blanco - 10 5,26 ± 2,85 Grupo de control modelo - 10 94,60 ± 14,98** Grupo de control positivo 0,5 mg/kg 10 30,69 ± 7,35aa Grupo de dosis baja de fármaco
de ensayo 1,0 10 82,38 ± 12,29 Grupo de dosis media de
fármaco de ensayo 2,0 10 67,35 ± 12,05ññ Grupo de dosis alta de fármaco
de ensayo 6,0 10 59,32 ± 11,79a* Nota: **p < 0,01 frente al grupo en blanco; AAp < 0,01 frente al grupo modelo.
4. Conclusiones
Los estudios experimentales con animales demuestran que la Composición 8 es capaz de mejorar significativamente los síntomas asmáticos en ratas y de prolongar el período de latencia del asma inducido en cobayas en los grupos modelo; de reducir el nivel de IL-4 en suero, de aumentar el nivel de IFN-y en suero y corregir la proporción desequilibrada de IFN-y/IL-4 en ratas con asma; de reducir el número de EOS en los tejidos pulmonares de las ratas y cobayas, y mejorar la infiltración de los EOS en las zonas inflamadas; de reducir el contenido total de IgE en suero y de BALF de las cobayas, y mejorar los síntomas inflamatorios pulmonares. Por lo tanto, la Composición 8 se considera eficaz en la resistencia al asma alérgico.
Claims (11)
1. Una composición de uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas, composición hecha de: a) materias primas que comprenden:
i) Ganoderma,
ii) Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng,
iii) Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps,
iv) Flos rosae rugosae y,
opcionalmente, v) uno o más de entre esporas de Ganoderma en polvo, aceite de esporas de Ganoderma, Radix pseudostellariae, Folium ginseng, Radix codonopsis y Radix astragali; y
opcionalmente, b) agente/s auxiliar/es o excipiente/s que es/son aceptable/s en productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos.
2. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, composición que se puede obtener mezclando directamente las materias primas en partes en peso; o mezclando las materias primas en partes en peso y extrayéndolas con agua y/o alcohol, obteniéndose la composición; o extrayendo las materias primas con agua y/o alcohol y usando el extracto como principio activo para preparar la composición.
3. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, composición que consiste en: a) materias primas:
i) Ganoderma,
ii) Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng,
iii) Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o Cordyceps,
iv) Flos rosae rugosae y,
opcionalmente, v) uno o más de entre esporas de Ganoderma en polvo, aceite de esporas de Ganoderma, Radix pseudostellariae, Folium ginseng, Radix codonopsis y Radix astragali; y
opcionalmente, b) agente/s auxiliar/es o excipiente/s que es/son aceptable/s en productos para el cuidado de la salud, medicamentos o productos.
4. La composición para el uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, caracterizada por que la composición está hecha de materias primas que comprenden de 5 a 200 partes en peso de Ganoderma, de 5 a 150 partes en peso de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, de 1 a 90 partes en peso de Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o de 1 a 120 partes en peso de Cordyceps y de 5 a 90 partes en peso de Flos rosae rugosae.
5. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 4, caracterizada por que hay de 20 a 120 partes en peso de Ganoderma, de 10 a 90 partes en peso de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, de 3 a 60 partes en peso de Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o de 3 a 90 partes en peso de Cordyceps y de 10 a 60 partes en peso de Flos rosae rugosae, preferentemente, hay 40 partes en peso de Ganoderma, 30 partes en peso de Radix panacis quinquefolii o Radix et rhizoma ginseng, 20 partes en peso de Cordyceps sinensis en polvo fermentado y/o 6,7 partes en peso de Cordyceps y 30 partes en peso de Flos rosae rugosae.
6. La composición para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 3-5, caracterizada por que la composición comprende uno o más de entre de 5 a 150 partes en peso de esporas de Ganoderma en polvo, de 1 a 90 partes en peso de aceite de esporas de Ganoderma, de 10 a 400 partes en peso de Radix pseudostellariae, de 1 a 120 partes en peso de Folium ginseng, de 3 a 400 partes en peso de Radix codonopsis y de 3 a 400 partes en peso de Radix astragali, o cualquiera de sus combinaciones.
7. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizada por que hay uno o más de entre de 10 a 120 partes en peso de esporas de Ganoderma en polvo, de 10 a 60 partes en peso de aceite de esporas de Ganoderma, de 20 a 200 partes en peso de Radix pseudostellariae, de 20 a 90 partes en peso de Folium ginseng, de 20 a 200 partes en peso de Radix codonopsis y de 20 a 200 partes en peso de Radix astragali, o cualquiera de sus combinaciones, en la composición.
8. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizada por que hay uno o más de entre 30 partes en peso de esporas de Ganoderma en polvo, 20 partes en peso de aceite de esporas de Ganoderma, 40 partes en peso de Radix pseudostellariae, 30 partes en peso de Folium ginseng, 40 partes en peso de Radix codonopsis y 40 partes en peso de Radix astragali, o cualquiera de sus combinaciones, en la composición.
9. La composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizada por que las enfermedades alérgicas son rinitis alérgica, dermatitis alérgica, asma alérgico y/o urticaria.
10. La composición para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizada por que la especie a la que pertenece el Cordyceps sinensis en polvo fermentado es una de o cualquier combinación de: Paecilomyces hepialli Chen y Dai, sp. nov, Mortiscrslla hepialid C. T. y B. liu, Synnematium sinensis Yin y Shen, Gliocladium roseum (link) Thom, Mortierella sp., Cephalosporium sinensis Chen sp. nov o Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu y Zeng, sp. nov.
11. La composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizada por que las esporas de Ganoderma en polvo son esporas de Ganoderma en polvo con el esporodermo roto.
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