CN114699520A - 一种太子参须提取物作为禽1型副黏病毒疫苗佐剂的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药应用技术领域，具体公开了一种太子参须提取物作为禽1型副黏病毒疫苗佐剂的应用。本发明首次发现太子参须提取物对禽1型副黏病毒抗体水平具显著促进作用，为太子参须作为禽1型副黏病毒疫苗佐剂的开发提供理论基础。
Description
技术领域
本发明属于中药应用技术领域，具体涉及一种太子参须提取物作为禽1型副黏病毒疫苗佐剂的应用。
背景技术
太子参为石竹科植物孩儿参的干燥块根，富含氨基酸、多糖、皂苷、环肽、黄酮和挥发物等成份，具有降血糖、抗氧化、抗皮炎、增强免疫力及改善肺功能等作用。太子参须与太子参块根基础物质一致，功效相似，参须生物量约占太子参块根干重的14.93%，然而参须皂苷总量约为0.25%，高于块根。吴建华等研究证明太子参须提取物能够促进仔猪免疫系统调理，提升仔猪免疫功能；本课题组前期研究发现太子参须提取物还具有显著的鸡源乳酸菌及饲用枯草芽孢杆菌的体外益生功能。目前为止，尚未见太子参须在水禽上的应用报道。
发明内容
为克服现有技术中存在的不足之处，本发明的目的旨在提供一种太子参须提取物作为禽1型副黏病毒疫苗佐剂的应用。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种太子参须提取物作为禽1型副黏病毒疫苗佐剂的应用。
所述太子参须提取物可按现有技术制备获得或通过市购获得，较好地，所述太子参须提取物优选按照中国专利CN 201610758305.8中公开的制备方法获得，具体为：
S1、太子参须预处理：将太子参须依次历经清洗、烘制和剪切三个工序；
S2、双段蒸汽爆破处理：以剪切后的太子参须为爆破基质，先后通过蒸汽爆破处理I和蒸汽爆破处理II，双段蒸汽爆破处理相隔时间为2~5min；蒸汽爆破处理I的条件为：爆破腔装料系数为0.8~0.9，爆破蒸汽压力达0.6~0.8MPa，爆破保压处理时间为5~10min，爆破时间不高于0.00875s；蒸汽爆破处理II的条件为：同台爆破设备的同腔体爆破处理，爆破蒸汽压力达1.5~2.5MPa，爆破保压处理时间为10~30s，爆破时间不高于0.00875s；双段蒸汽爆破处理过程中均加入夹带剂，夹带剂为细目金刚砂和Ca(OH)2粉的复合物，金刚砂：Ca(OH)2粉的质量比值为4:1~1:1；以质量百分比计，夹带剂总添加量占爆破基质的1.5~3%，且分批添加，蒸汽爆破处理I添加总量的1/3~2/5，蒸汽爆破处理II添加余量的夹带剂；
S3、热水提取：将爆破处理后的太子参须基质收集后投料至热水提取罐内，罐内热水量与太子参须基质的质量比值为15:1~20:1，提取热水温度90~100℃，提取时间2~3h，提取次数1次；在提取前期进行匀速搅拌，待提取进行至3/5提取时间时停止搅拌；
S4、提取液CO2处理：待热水提取结束后，将得到的提取液冷却至室温，再移至洁净的不锈钢容器内，然后向冷却后的提取液中通入无菌CO2气体，CO2流速为10~15m3/min，通入CO2气体时间5~15min；
S5、三级过滤：提取液CO2处理后分别经过串联组合的一级过滤器、二级过滤器和三级过滤器来实现过滤作业；其中，一级过滤器和二级过滤器均为常规筒式过滤器，一级过滤器和二级过滤器的滤芯孔径分别为4.5~5μm、0.2~0.25μm；三级过滤器为中空纤维过滤器，中空纤维的截留分子量为10000~30000道尔顿；
S6、脱毒：将三级过滤后的太子参须提取液先后通过D301树脂填充柱和NKAII树脂填充柱，提取液进柱压强均为0.15~0.2MPa，最终收集提取液即得太子参须提取物。
较好地，S5中利用自制三级过滤系统进行三级过滤，该三级过滤系统包括管式离心机、离心液储罐、动力传输组件I、动力传输组件II、动力传输组件III、一级过滤器、二级过滤器、三级过滤器及其外界附属系统；动力传输组件I由动力泵I和止回阀I串连而成；动力传输组件II由动力泵II和止回阀II串连而成；动力传输组件III由动力泵III和止回阀III串连而成；一级过滤器和二级过滤器为常规筒式过滤器；三级过滤器为自制过滤器，其结构包括筒体、中空纤维束组件、基座；筒体底部和顶部分别设有进液口和出液口，筒体外部设有夹层，夹层的上下两端分别设有夹层出口和夹层进口；中空纤维束组件包括均布有多孔的组件外壳、若干条中空纤维，这些中空纤维合并成束置于组件外壳内部；基座为圆柱体，圆柱体上段为中空呈筒状、中下段实心，基座的中下段实心上设有与中空纤维数量及其尺寸相适配的通孔；基座位于出液口下方、紧贴筒体顶壁并与其固定连接；中空纤维的上端敞口并穿设在基座的通孔内，下端封闭并与组件外壳底壁固定连接；三级过滤器的外界附属系统包括动力泵IV、止回阀IV、恒温制冷水箱，夹层出口依次串连止回阀IV、恒温制冷水箱和动力泵IV至夹层进口形成一封闭循环系统；管式离心机通过管路依次串连离心液储罐、动力泵I、止回阀I、一级过滤器、动力泵II、止回阀II、二级过滤器、动力泵III、止回阀III至三级过滤器的进液口；一级过滤器和和二级过滤器的滤芯孔径分别为4.5~5μm、0.2~0.22μm；中空纤维的截留分子量为10000~30000道尔顿；
三级过滤步骤为：
（a）首先将S4处理后的提取液输入管式离心机内腔中，启动该设备进行离心工作，离心转速达4000~6000rpm/min，离心20~30min；离心结束后及时将获取的离心清液转入至离心液储罐内，且该罐内温度控制范围为5~10℃；
（b）启动动力泵I将上工序获得的冷却离心液经管路过止回阀I输送至一级过滤器内，输入压力0.2 ~0.6 Mpa，实现第一次粗过滤；
（c）启动动力泵II将经一级过滤器后获得的一级过滤液经管路过止回阀II输送至二级过滤器内，输入压力0.2 ~0.6 Mpa，实现第二次粗过滤；
（d）启动动力泵IV，将恒温制冷水箱内所制得的温度为5~15℃的凉水经管路从夹层进口进入夹层内，并由夹层出口经管路过止回阀IV再循环至恒温制冷水箱内；待筒体内腔温度达到5~15℃时再启动动力泵III将经二级过滤器后获得的二级过滤液经管路过止回阀III由进液口输送至三级过滤器内，输入压力0.2~0.6 MPa，二级过滤液先从组件外壳上的多孔进入组件外壳内部，由于中空纤维的截留作用，二级过滤液中的杂质被挡在中空纤维的外面，而提取液则通过中空纤维并从中空纤维顶口进入基座，然后从出液口出来。
较好地，S5还包括步骤（e）反清洗：待过滤工作结束时，可进行该系统的反向清洗作业，手动180°整体调整动力传输组件I、动力传输组件II、动力传输组件III的方向即原先的进口变为出口，再连接相应的管路，同时启动上述动力泵I、动力泵II、动力泵III，将清洁的纯化水经筒体出液口进入筒体内，则清洗水最终从离心液储罐排出，作业中各过滤器压力表指针不得高于0.3 MPa，重复2~3次即可。
较好地，离心液储罐与动力泵I之间、止回阀I与一级过滤器之间、一级过滤器与动力泵II之间、止回阀II与二级过滤器之间、二级过滤器与动力泵III之间、止回阀III与三级过滤器之间的管路采取活动连接方式。
较好地，所述活动连接方式为卡箍连接。
较好地，管式离心机为GF-分离型。
有益效果：本发明首次发现太子参须提取物对禽1型副黏病毒抗体水平具显著促进作用，为太子参须作为禽1型副黏病毒疫苗佐剂的开发提供理论基础。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围。
实施例
太子参须提取物对禽1型副黏病毒疫苗抗体水平影响实验
1 材料与方法
1.1材料
1日龄健康番鸭，购自莆田某家禽有限公司，经采集血清检测禽1型副黏病毒抗体为阴性；禽1型副黏病毒灭活疫苗是以分离鉴定的鸭源禽1型副黏病毒FP1/02株经灭活后制备成油乳剂疫苗。
太子参须提取物干粉：按照中国专利CN 201610758305.8中实施例1公开的制备方法获得太子参须提取液，以g/mL计向太子参须提取液中加入6%的可溶性淀粉，搅拌混匀，然后经喷雾干燥获得太子参须提取物干粉。
1.2方法
1.2.1 动物分组
将270只1日龄健康番鸭按常规饲养方法网上平养，以全价配合饲料饲喂，自由采食及饮水，于4日龄时挑取120只雏番鸭并随机分成2组，分别为太子参须提取干粉组和未给药免疫组，每组60只，并按照表1方案进行给药，连用7天。在7日龄时，各组番鸭均颈背部皮下注射禽1型副黏病毒灭活疫苗，0.3 ml/羽。
1.2.2不同药物对抗体滴度水平的影响
免疫禽1型副黏病毒灭活疫苗后，于第7天、第14 天、第21天、第28天、第35天、第42天、第49天、第56 天从各组中随机选取20只采集心血0.5 mL，置于1.5 mL离心管中，室温放置2 h后于4℃冰箱过夜，然后以3000 r/min离心10 min，分离血清，采用微量法测定禽1型副黏病毒抗体。
1.3 数据处理
数据均采用SPSS（19.0）统计处理软件进行单因素方差分析，结果用平均值±标准差值（Mean±S）表示。
2 结果
实验结果见表2，由表2可以看出：免疫后7天时，未给药免疫组的禽1型副黏病毒抗体水平为3.03，太子参须提取干粉组的禽1型副黏病毒抗体水平高于未给药免疫组，但差异不显著；但免疫后14天时，用药效果初步呈现，太子参须提取干粉组与未给药免疫组相比，差异显著，且这个现象一直持续到免疫后42天。表明：太子参须提取物对禽1型副黏病毒抗体水平具显著促进作用，可用作禽1型副黏病毒疫苗佐剂。
Claims (1)
1.一种太子参须提取物作为禽1型副黏病毒疫苗佐剂的应用。
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2022
- 2022-04-14 CN CN202210390470.8A patent/CN114699520A/zh active Pending
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