ES2590905T3

ES2590905T3 - Inhibidores de la tirosina quinasa de Bruton

Info

Publication number: ES2590905T3
Application number: ES13166272.8T
Authority: ES
Inventors: Wei Chen; David J. Loury; Tarak D. Mody; Erik Verner; Mark Stephen Smyth; Wenchen Luo
Original assignee: Pharmacyclics LLC
Current assignee: Pharmacyclics LLC
Priority date: 2009-10-12
Filing date: 2010-10-12
Publication date: 2016-11-24
Anticipated expiration: 2030-10-12
Also published as: WO2011046964A2; EA021715B1; US9012463B2; IL219076A; WO2011046964A3; US7741330B1; EP2650294B1; CO6531429A2; AU2010306921B2; CR20120244A; AU2010306921C1; US20110086866A1; EP2393816A4; MX2012004258A; JP2015134802A; CN102656173A; US7718662B1; EP2393816A2; EA201270553A1; EP2650294A1

Abstract

Un compuesto que tiene la estructura:**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

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Una "amida" es una unidad estructural química con la fórmula –C(O)NHR o –NHC(O)R, donde R se selecciona entre alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo (unido a través de un carbono del anillo) y heteroalicíclico (unido a través de un carbono del anillo). En algunas realizaciones, una unidad estructural amida forma un enlace entre un aminoácido o una molécula de péptido y un compuesto descrito en este documento, formando con ello un profármaco. Cualquier amina, o cadena lateral carboxilo en los compuestos descritos en este documento se pueden amidificar. Los procedimientos y grupos específicos para hacer tales amidas se encuentran en fuentes tales como Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Síntesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, NY, 1999, que se incorpora en este documento por referencia para esta divulgación.

El término "fragmento de aminoácido" se refiere a una parte de un aminoácido, tal como solamente a modo de ejemplo, los 20 aminoácidos codificados genéticamente, comunes (esto es, alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina y valina), o un dipéptido, tripéptido u otro polipéptido que comprende una combinación de los 20 aminoácidos comunes o un aminoácido no natural. En algunas realizaciones, el fragmento de aminoácido está unido al compuesto de Fórmula (II), u otros compuestos de pirazolopirimidina descritos en este documento a través de la cadena lateral del aminoácido. En un aspecto, el fragmento de aminoácidos es un fragmento de cisteína en donde la parte restante del compuesto de Fórmula (II) está unido mediante un enlace de azufre. En otro aspecto, la parte restante de un compuesto de Fórmula (II) está unido a través de un enlace azufre de un fragmento de glutatión. En otro los fragmentos de aminoácidos se derivan de beta–aminoácidos. En realizaciones adicionales, los fragmentos de aminoácido se derivan de partes de polipéptidos o proteínas. En todavía aspectos adicionales, el fragmento de aminoácido está unido al compuesto de Fórmula (II), u otros compuestos de pirazolopirimidina descritos en este documento a través del terminal N o el terminal acilo del aminoácido.

El término "éster" se refiere a una unidad estructural química con fórmula –COOR, donde R se selecciona entre alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo (unido a través de un carbono del anillo) y heteroalicíclico (unido a través de un carbono del anillo). Cualquier cadena lateral hidroxi, o carboxilo en los compuestos descritos en este documento puede ser esterificada. Los procedimientos y grupos específicos para hacer tales ésteres, se encuentran en fuentes tales como Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Síntesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, NY, 1999, que se incorpora en este documento por referencia para esta divulgación.

Como se utiliza en este documento, el término "anillo" se refiere a cualquier estructura covalente cerrada. Los anillos incluyen, por ejemplo, carbociclos (por ejemplo, arilos y cicloalquilos), heterociclos (por ejemplo, heteroarilos y heterociclos no aromáticos), aromáticos (por ejemplo, arilos y heteroarilos), y no aromáticos (por ejemplo, cicloalquilos y heterociclos no aromáticos). Los anillos pueden ser opcionalmente sustituidos. Los anillos pueden ser monocíclicos o policíclicos.

Como se utiliza en este documento, el término "sistema de anillos" se refiere a uno o más de un anillo.

El término "miembros del anillo" puede abarcar cualquier estructura cíclica. El término "miembros" está destinado a indicar el número de átomos del esqueleto que constituyen el anillo. Así, por ejemplo, ciclohexilo, piridina, pirano y tiopirano son anillos de 6 miembros y ciclopentilo, pirrol, furano, y tiofeno son anillos de 5 miembros.

El término "fusionado" se refiere a estructuras en las que dos o más anillos comparten uno o más enlaces.

El término "carbocíclico" o "carbociclo" se refiere a un anillo en donde cada uno de los átomos que forman el anillo es un átomo de carbono. Carbociclo incluye arilo y cicloalquilo. Así, el término distingue carbociclo de heterociclo ("heterocíclico") en el que el esqueleto del anillo contiene al menos un átomo que es diferente de carbono (esto es, un heteroátomo). Heterociclo incluye heteroarilo y heterocicloalquilo. Los carbociclos y heterociclos pueden ser opcionalmente sustituidos.

El término "aromático" se refiere a un anillo plano que tiene un sistema de electrones  deslocalizados que contiene 4n+2 electrones , donde n es un número entero. Los anillos aromáticos se pueden formar a partir de cinco, seis, siete, ocho, nueve o más de nueve átomos. Aromáticos pueden ser opcionalmente sustituidos. El término "aromático" incluye tanto grupos arilo carbocíclico (por ejemplo, fenilo) como arilo heterocíclico (o "heteroarilo" o "heteroaromático") (por ejemplo, piridina). El término incluye grupos monocíclico o policíclico de anillos condensados (esto es, anillos que comparten pares adyacentes de átomos de carbono).

Como se utiliza en este documento, el término "arilo" se refiere a un anillo aromático en donde cada uno de los átomos que forman el anillo es un átomo de carbono. Los anillos de arilo pueden estar formados por cinco, seis, siete, ocho, nueve, o más de nueve átomos de carbono. Los grupos arilo pueden ser opcionalmente sustituidos. Ejemplos de grupos arilo incluyen, pero no se limitan a fenilo, naftalenilo, fenantrenilo, antracenilo, fluorenilo, e indenilo. Dependiendo de la estructura, un grupo arilo puede ser un monorradical o un dirradical (esto es, un grupo arileno).

Un grupo "ariloxi" se refiere a un grupo (arilo) O–, donde arilo es como se define en este documento.

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(alquenilo C2–C6 sustituido o no sustituido); y cada Rs se selecciona independientemente de H, (alquilo C1–C4 sustituido o no sustituido), (cicloalquilo C3–C6 sustituido o no sustituido), heteroarilo o heteroalquilo. Los grupos protectores que forman los derivados protectores de los sustituyentes anteriores incluyen los encontrados en fuentes tales como Greene and Wuts, anteriormente.

El término "aceptable" o "farmacéuticamente aceptable", con respecto a una formulación, composición o ingrediente, como se utiliza en este documento, significa que no tiene efecto perjudicial persistente sobre la salud general del sujeto que está siendo tratado o que no anula la actividad biológica o las propiedades del compuesto, y es relativamente no tóxico.

Como se utiliza en este documento, el término "agonista" se refiere a un compuesto, la presencia de lo que resulta en una actividad biológica de una proteína que es la misma que la actividad biológica resultante de la presencia de un ligando de origen natural para la proteína, tal como, por ejemplo, Btk.

Como se utiliza en este documento, el término "agonista parcial" se refiere a un compuesto de la presencia de lo que resulta en una actividad biológica de una proteína que es del mismo tipo que la que resulta de la presencia de un ligando de origen natural para la proteína, pero de menor magnitud.

Como se utiliza en este documento, el término "antagonista" se refiere a un compuesto, la presencia de lo que resulta en una disminución en la magnitud de una actividad biológica de una proteína. En ciertas realizaciones, la presencia de un antagonista resulta en la inhibición completa de una actividad biológica de una proteína, tal como, por ejemplo, Btk. En ciertas realizaciones, un antagonista es un inhibidor.

Como se utiliza en este documento, "mejora" de los síntomas de una enfermedad en particular, trastorno o afección mediante la administración de un compuesto particular o composición farmacéutica se refiere a cualquier disminución de la gravedad, retraso en el inicio, desaceleración de la progresión, o acortamiento de la duración, ya sea permanente o temporal, duradera o transitoria que se puede atribuir a o asociar con la administración del compuesto o composición.

"Biodisponibilidad" se refiere al porcentaje del peso de los compuestos revelados en este documento, tal como, compuestos de Fórmula (II), u otros compuestos de pirazolopirimidina descritos en este documento, dosificados que se entregan en la circulación general del animal o ser humano estudiado. La exposición total (AUC(0–∞)) de un fármaco cuando se administra por vía intravenosa se define generalmente como 100% biodisponible (% F). "La biodisponibilidad oral" se refiere a la medida en que los compuestos revelados en este documento, tales como, compuestos de Fórmula (II), u otros compuestos de pirazolopirimidina descritos en este documento, se absorben en la circulación general cuando la composición farmacéutica se toma por vía oral en comparación con la inyección intravenosa.

"Concentración en plasma de sangre" se refiere a la concentración de compuestos revelados en este documento, tales como, los compuestos de Fórmula (II), u otros compuestos de pirazolopirimidina descritos en este documento, en el componente de plasma de la sangre de un sujeto. Se entiende que la concentración en plasma de los compuestos de Fórmula (II), u otros compuestos de pirazolopirimidina descritos en este documento, puede variar significativamente entre los sujetos, debido a la variabilidad con respecto al metabolismo y/o posibles interacciones con otros agentes terapéuticos. De acuerdo con un aspecto revelado en este documento, la concentración en plasma de sangre de los compuestos de Fórmula (II), u otros compuestos de pirazolopirimidina descritos en este documento, varía de un sujeto a otro. Del mismo modo, los valores tales como la concentración plasmática máxima (Cmax) o el tiempo para alcanzar la concentración plasmática máxima (Tmax), o el área total bajo la curva de tiempo de concentración plasmática (AUC(0–∞)) pueden variar de un sujeto a otro. Debido a esta variabilidad, la cantidad necesaria para constituir una "cantidad terapéuticamente eficaz" de un compuesto de Fórmula (II), u otros compuestos de pirazolopirimidina descritos en este documento, se espera que varíen de un sujeto a otro.

El término "tirosina quinasa de Bruton", como se utiliza en este documento, se refiere a la tirosina quinasa de Bruton de Homo sapiens, como se revela en, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 6,326,469 (No. de acceso GenBank NP_000052).

El término "homólogo de tirosina quinasa de Bruton”, como se utiliza en este documento, se refiere a ortólogos de la tirosina quinasa de Bruton, por ejemplo, los ortólogos de ratón (No. de acceso GenBank AAB47246), perro (No. de acceso GenBank XP_549139.), rata (No. de acceso GenBank NP_001007799), pollo (No. de acceso GenBank NP_989564), o pez cebra (No. de acceso GenBank XP_698117), y proteínas de fusión de cualquiera de los anteriores que muestran actividad quinasa hacia uno o más sustratos de tirosina quinasa de Bruton (por ejemplo, un sustrato de péptido que tiene la secuencia de aminoácidos "AVLESEEELYSSARQ").

Los términos "coadministración" o similares, como se utiliza en este documento, están destinados a abarcar la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un solo paciente, y están destinados a incluir regímenes de tratamiento en los que los agentes se administran por la misma o diferente ruta de administración o al mismo o diferente momento.

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Los términos "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz", como se utiliza en este documento, se refieren a una cantidad suficiente de un agente o un compuesto que se administra que aliviará en cierto grado uno o más de los síntomas de la enfermedad o afección ser tratado. El resultado puede ser la reducción y/o alivio de los signos, síntomas, o causas de una enfermedad, o cualquier otra alteración deseada de un sistema biológico. Por ejemplo, una "cantidad eficaz" para usos terapéuticos es la cantidad de la composición que incluye un compuesto como se revela en este documento requerido para proporcionar una disminución clínicamente significativa en los síntomas de la enfermedad sin efectos secundarios adversos indebidos. Una "cantidad eficaz" apropiada en cualquier caso individual se determina opcionalmente utilizando técnicas, tales como un estudio de escalada de dosis. El término "cantidad terapéuticamente eficaz" incluye, por ejemplo, una cantidad profilácticamente eficaz. Una "cantidad eficaz" de un compuesto revelado en este documento es una cantidad eficaz para conseguir un efecto farmacológico deseado o mejora terapéutica sin efectos secundarios adversos indebidos. Se entiende que "una cantidad efectiva" o "una cantidad terapéuticamente eficaz" puede variar de un sujeto a otro, debido a la variación en el metabolismo de la de la Fórmula (II), u otros compuestos de pirazolopirimidina descritos en este documento, edad, peso, estado general del sujeto, la afección que se va a tratar, la gravedad de la afección que se va a tratar, y el juicio del médico prescriptor.

Los términos "mejorar" o "que mejora" se refieren a aumentar o prolongar, ya sea en potencia o duración un efecto deseado. A modo de ejemplo, "que mejora" el efecto de los agentes terapéuticos se refiere a la capacidad de aumentar o prolongar, ya sea en potencia o duración, el efecto de los agentes terapéuticos en durante el tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección. Una "cantidad eficaz de mejora", como se utiliza en este documento, se refiere a una cantidad apropiada para mejorar el efecto de un agente terapéutico en el tratamiento de una enfermedad, trastorno o condición. Cuando se utiliza en un paciente, las cantidades eficaces para este uso dependerán de la gravedad y curso de la enfermedad, trastorno o afección, terapia previa, el estado de salud del paciente y la respuesta a los fármacos, y el juicio del médico tratante.

El término "cisteína homóloga”, como se utiliza en este documento se refiere a un residuo de cisteína encontrado con en una posición de la secuencia que es homóloga a la de la cisteína 481 de la tirosina quinasa de Bruton, como se define en este documento. Por ejemplo, la cisteína 482 es la cisteína homóloga del ortólogo de rata de la tirosina quinasa de Bruton; cisteína 479 es la cisteína homóloga del ortólogo de pollo; y la cisteína 481 es la cisteína homóloga en el ortólogo de pez cebra. En otro ejemplo, la cisteína homóloga de TXK, un miembro de la familia Tec quinasa relacionada con tirosina de Bruton, es Cys 350. Véase también la secuencia de alineaciones de tirosinas quinasa (TK) publicadas en la World Wide Web en kinase.com/human/kinome/phylogeny.html.

El término "idéntico", como se utiliza en este documento, se refiere a dos o más secuencias o subsecuencias que son iguales. Además, el término "sustancialmente idéntico", como se utiliza en este documento, se refiere a dos o más secuencias que tienen un porcentaje de unidades secuenciales que son iguales cuando se comparan y alinean para una correspondencia máxima sobre una ventana de comparación, o región designada medida utilizando algoritmos de comparación o mediante alineamiento manual e inspección visual. Solamente a modo de ejemplo, dos

o más secuencias son "sustancialmente idénticas" si las unidades secuenciales son aproximadamente 60% idénticas, aproximadamente 65% idénticas, aproximadamente 70% idénticas, aproximadamente 75% idénticas, aproximadamente 80% idénticas, aproximadamente 85% idénticas, aproximadamente 90% idénticas, o aproximadamente 95% idénticas sobre una región específica. Tales porcentajes para describir el "porcentaje de identidad" de dos o más secuencias. La identidad de una secuencia puede existir más de una región que es al menos aproximadamente 75–100 unidades secuenciales de longitud, sobre una región que tiene aproximadamente 50 unidades secuenciales de longitud, o, si no se especifica, a través de toda la secuencia. Esta definición también se refiere al complemento de una secuencia de prueba. Solamente a modo de ejemplo, dos o más secuencias de polipéptidos son idénticos cuando los residuos de aminoácidos son los mismos, mientras que dos o más secuencias de polipéptidos son "sustancialmente idénticas" si los residuos de aminoácidos son aproximadamente 60% idénticos, aproximadamente 65% idénticos, aproximadamente 70% idénticos, aproximadamente 75% idénticos, aproximadamente 80% idénticos, aproximadamente 85% idénticos, aproximadamente 90% idénticos, o aproximadamente 95% idénticos sobre una región específica. La identidad puede existir más de una región que es al menos aproximadamente 75–100 aminoácidos de longitud, sobre una región que es de aproximadamente 50 aminoácidos de longitud, o, si no se especifica, a través de toda la secuencia de una secuencia de polipéptido. Además, a modo de ejemplo solamente, dos o más secuencias de polinucleótidos son idénticas cuando los residuos de ácido nucleico son los mismos, mientras que dos o más secuencias de polinucleótidos son "sustancialmente idénticas" si los residuos de ácido nucleico son aproximadamente el 60% idénticos, aproximadamente el 65% idénticos, aproximadamente el 70% idénticos, aproximadamente 75% idénticos, aproximadamente 80% idénticos, aproximadamente 85% idénticos, aproximadamente 90% idénticos, o aproximadamente 95% idénticos sobre una región específica. La identidad puede existir sobre una región que es al menos aproximadamente 75–100 ácidos nucleicos de longitud, sobre una región que es de aproximadamente 50 ácidos nucleicos de longitud, o, si no se especifica, a través de toda la secuencia de una secuencia de polinucleótidos.

Los términos "inhibe", "que inhibe" o "inhibidor" de una quinasa, como se utiliza en este documento, se refiere a la inhibición de la actividad fosfotransferasa enzimática.

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n es 0–4;

R1 se selecciona entre F, Cl, Br, I, –CN, –NO2, –SR2, –OR3, alquilo C1–C6, haloalquilo C1–C6, hidroxialquilo C1–C6, – O haloalquilo C1–C6, heteroalquilo C1–C6, cicloalquilo C3–C6, heterocicloalquilo C2–C6, fenilo, –NR3S(=O)2R2, – S(=O)2N(R2)2, –C(=O)CF3,–C(=O)NR3S(=O)2R2, –S(=O)2NR3C(=O)R2, –N(R2)2, en donde opcionalmente los dos

5 grupos R2 de N(R2)2 y el átomo de nitrógeno al cual se unen forman un anillo heterocicloalquilo C2–C6, – NR2C(=O)R2, –NR2C(=O)NR2, –CO2R2, –C(=O)R2, –OC(=O)R2, –C(=O)N(R2)2, –OS(=O)2R2, –OS(=O)2OR2, – S(=O)R2, –S(=O)2R2, y al menos un fragmento de aminoácido;

Rb es NH2, OH, OSO3H o NHSO3H;

R2 es H, alquilo C1–C6, haloalquilo C1–C6, hidroxialquilo C1–C6, dihidroxialquilo C1–C6, o cicloalquilo C3–C6;

10 R3 es H, metilo, etilo, n–propilo, iso–propilo, n–butilo, iso–butilo, tert–butilo o SO3H;

R4 y R5 cada uno se selecciona independientemente entre H, F, Cl, Br, I, –CN, –NO2, –SR2, –OR3, alquilo C1–C6, haloalquilo C1–C6, hidroxialquilo C1–C6, –Ohaloalquilo C1–C6, heteroalquilo C1–C6, cicloalquilo C3–C6, heterocicloalquilo C2–C6, fenilo, –OSO3H, –NR2S(=O)2R2, –S(=O)2N(R2),–C(=O)CF3, –C(=O)NR2S(=O)2R2, – S(=O)2NR2C(=O)R2, –N(R2)2, –NR2C(=O)R2, –CO2R2,–C(=O)R2, –OC(=O)R2, –C(=O)N(R2)2,

–

15 OS(=O)2OR2, –S(=O)R2, –S(=O)2R2, y al menos un fragmento de aminoácido; u opcionalmente cuando es un enlace sencillo entonces Rimagen144 y R5 junto con los átomos de carbono al cual se unen forman un epóxido; en donde cuando es un enlace sencillo entonces R4 y R5 no son ambos hidrógeno;

W se selecciona entre –C(=O)–, –C(=O)R2–, –C(=O)OR2–, –C(=NR2)–, –C(=N–OR3)–,–(C=S)–, –S(=O)v–;

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20 en donde J es O, NR6 o C(R2)2. R6 se selecciona entre H, alquilo C1–C6, haloalquilo C1–C6, hidroxialquilo C1–C6, heteroalquilo C1–C6, cicloalquilo C3–C6, heterocicloalquilo C2–C6, fenilo, –S(=O)2N(R2)2, –C(=O)CF3, –CO2R2,– C(=O)R2, –C(=O)N(R2)2, –OS(=O)2R2, –OS(=O)2OR2, –S(=O)R2, –S(=O)2R2; o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero, o solvato del mismo.

En una realización es un compuesto que tiene la estructura:

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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

También se describen en este documento inhibidores irreversibles de Btk. Además, se describen inhibidores irreversibles de Btk que forman un enlace covalente con un residuo de cisteína en Btk. Además, se describen en este documento inhibidores irreversibles de otras tirosinas quinasa, en donde las otras tirosinas quinasa comparten 30 homología con Btk por tener un residuo de cisteína (incluyendo un residuo Cys 481) que puede formar un enlace covalente con el inhibidor irreversible (tales tirosinas quinasa, se denominan en este documento como " homólogos

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de cisteína tirosina quinasa Btk"). También se describen en este documento métodos para sintetizar tales inhibidores irreversibles, métodos para usar tales inhibidores irreversibles en el tratamiento de enfermedades (incluyendo enfermedades en donde la inhibición irreversible de Btk proporciona un beneficio terapéutico a un paciente que tiene la enfermedad). Además, se describen formulaciones farmacéuticas que incluyen un inhibidor irreversible de Btk.

También se describen en este documento inhibidores irreversibles de tirosinas quinasa que tienen un residuo de cisteína accesible cerca de un sitio activo de la tirosina quinasa (denominado en este documento como "quinasas de cisteína accesibles" o ACKs). También se describen en este documento inhibidores irreversibles de cualquiera de las tirosinas quinasa mencionadas anteriormente, en la que el inhibidor irreversible incluye una unidad estructural aceptor de Michael. Además, se describen tales inhibidores irreversibles en los que la unidad estructural aceptor de Michael forma preferentemente un enlace covalente con el residuo de cisteína apropiado en la tirosina quinasa deseada con respecto a la formación de un enlace covalente con otras moléculas biológicas que contienen una unidad estructural SH accesible. También se describen en este documento métodos para sintetizar tales inhibidores irreversibles, métodos para usar tales inhibidores irreversibles en el tratamiento de enfermedades (incluyendo enfermedades en donde la inhibición irreversible de Btk proporciona un beneficio terapéutico a un paciente que tiene la enfermedad). Además, se describen formulaciones farmacéuticas que incluyen un inhibidor irreversible de Btk.

En un aspecto, el compuesto inhibidor de Btk irreversible inhibe selectiva e irreversiblemente una forma activada de su tirosina quinasa diana (por ejemplo, una forma fosforilada de la tirosina quinasa). Por ejemplo, Btk activada es transfosforilada en tirosina 551. Por lo tanto, en estos aspectos el inhibidor de Btk irreversible inhibe la quinasa diana en células sólo una vez que la quinasa diana se activa mediante los eventos de señalización.

En general, un compuesto inhibidor irreversible utilizado en los métodos descritos en este documento se identifica o caracteriza en un ensayo in vitro, por ejemplo, un ensayo bioquímico acelular o un ensayo funcional celular. Tales ensayos son útiles para determinar una IC50 in vitro para un compuesto inhibidor irreversible.

Por ejemplo, en algunos aspectos se utiliza un ensayo de quinasa acelular para determinar la actividad quinasa después de la incubación de la quinasa en ausencia o presencia de un intervalo de concentraciones de un compuesto inhibidor candidato. Si el compuesto candidato es, de hecho, un inhibidor, la actividad de quinasa no será recuperado por repetición de lavado con medio libre de inhibidor. Véase, por ejemplo, J. B. Smaill, et al. (1999), J. Med. Chem. 42(10):1803–1815. Además, la formación del complejo covalente entre una quinasa y un inhibidor candidato es un indicador útil de la inhibición de la quinasa que puede ser fácilmente determinada por una serie de métodos (por ejemplo, espectrometría de masas). Por ejemplo, en algunos aspectos, algunos compuestos inhibidores de quinasa–forman un enlace covalente con el residuo de cisteína antes mencionado (por ejemplo, mediante una reacción de Michael).

Ensayos de alto rendimiento para muchos ensayos bioquímicos acelulares (por ejemplo, ensayos de quinasa) y ensayos funcionales celulares (por ejemplo, flujo de calcio) son metodologías documentadas. Además, los sistemas de selección de alto rendimiento están disponibles comercialmente (véase, por ejemplo, Zymark Corp., Hopkinton, MA; Air Technical Industries, Mentor, OH; Beckman Instruments, Inc. Fullerton, CA; Precision Systems, Inc., Natick, MA, etc.). Estos sistemas por lo general automatizan procedimientos enteros que incluyen toda la medición con la pipeta de la muestra y reactivo, dispensación de líquido, incubaciones cronometradas, y lecturas finales de la microplaca en detector(es) apropiado(s) para el ensayo. Los sistemas automatizados permiten así la identificación y caracterización de un gran número de compuestos.

En algunos aspectos, los inhibidores descritos en este documento se utilizan para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cualquiera de las condiciones anteriores (por ejemplo, enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, trastornos alérgicos, trastornos proliferativos de células B, o trastornos tromboembólicos).

En algunos aspectos, el compuesto inhibidor utilizado para los métodos descritos en este documento inhibe una actividad de quinasa con una IC50 in vitro de menos de aproximadamente 10 M. (por ejemplo, menos de aproximadamente 1 M, menos de aproximadamente 0.5 M, menos de aproximadamente 0.4 M, menos de aproximadamente 0.3 M, menos de aproximadamente 0.1, menos de aproximadamente 0.08 M, menos de aproximadamente 0.06 M, menos de aproximadamente 0.05 M, menos de aproximadamente 0.04 M, menos de aproximadamente 0.03 M, menos de aproximadamente 0.02 M, menos de aproximadamente 0.01, menos de aproximadamente 0.008 M, menos de aproximadamente 0.006 M, menos de aproximadamente 0.005 M, menos de aproximadamente 0.004 M, menos de aproximadamente 0.003 M, menos de aproximadamente 0.002 M, menos de aproximadamente 0.001, menos de aproximadamente 0.00099 M, menos de aproximadamente 0.00098 M, menos de aproximadamente 0.00097 M, menos de aproximadamente 0.00096 M, menos de aproximadamente 0.00095 M, menos de aproximadamente 0.00094 M, menos de aproximadamente 0.00093 M, menos de aproximadamente 0.00092, o menos de aproximadamente 0.00090 M).

En un aspecto, el compuesto inhibidor inhibe selectivamente una forma activada de su tirosina quinasa diana (por ejemplo, una forma fosforilada de la tirosina quinasa). Por ejemplo, Btk activado se transfosforila en tirosina 551. Por

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lo tanto, en estos aspectos, el inhibidor de Btk inhibe la quinasa diana en células sólo una vez que la quinasa diana se activa mediante los eventos de señalización.

Preparación de los compuestos

Los compuestos de Fórmula (II), u otros compuestos de pirazolopirimidina descritos en este documento,

5 opcionalmente, se sintetizan utilizando técnicas de síntesis estándar o utilizando tales métodos conocidos en combinación con los métodos descritos en este documento. Además, solventes, temperaturas y otras condiciones de reacción se presentan en este documento sólo para ilustración, y no para limitar el alcance de los métodos y composiciones descritos en este documento. Como una guía adicional también se pueden utilizar los siguientes métodos de síntesis.

10 Las reacciones se emplean opcionalmente en una secuencia lineal para proporcionar los compuestos descritos en este documento o se utilizan para sintetizar fragmentos que posteriormente se unen por los métodos descritos en este documento y/o documentados en otros lugares.

Formación de enlaces covalentes por reacción de un electrófilo con un nucleófilo

Los compuestos descritos en este documento se pueden modificar mediante diversos electrófilos o nucleófilos para

15 formar nuevos grupos funcionales o sustituyentes. La Tabla 1 titulada "Ejemplos de enlaces covalentes y precursores de los mismos" enumera los ejemplos seleccionados de enlaces covalentes y grupos funcionales precursores que producen y se pueden utilizar como guía hacia la variedad de electrófilos y nucleófilos combinaciones disponibles. Los grupos funcionales precursores se muestran como grupos electrófilos y grupos nucleófilos.

20 Tabla 1: Ejemplos de enlaces covalentes y precursores de los mismos

Producto de enlace covalente: Electrófilo Nucleófilo

Carboxamidas: ésteres activados aminas/anilinas

Carboxamidas: azidas de acilo aminas/anilinas

Carboxamidas: haluros de acilo aminas/anilinas

Ésteres: haluros de acilo Alcoholes/fenoles

Ésteres: nitrilos de acilo Alcoholes/fenoles

Carboxamidas: nitrilos de acilo aminas/anilinas

Iminas: Aldehídos aminas/anilinas

Hidrazonas: aldehídos o cetonas Hidracinas

Oximas: aldehídos o cetonas Hidroxilaminas

Alquil aminas: haluros de alquilo aminas/anilinas

Ésteres: haluros de alquilo ácidos carboxílicos

Tioéteres: haluros de alquilo tioles

Éteres: haluros de alquilo Alcoholes/fenoles

Tioeteres: sulfonatos de alquilo Tioles

Ésteres: sulfonatos de alquilo Ácidos carboxílicos

Éteres: Sulfonatos de alquilo Alcoholes/fenoles

Ésteres: Anhídridos Alcoholes/fenoles

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Carboxamidas: Anhídridos aminas/anilinas

Tiofenoles: Haluros de arilo Tioles

Arilaminas: Haluros de arilo Aminas

Tioeteres: Azindines Tioles

Ésteres de boronato: Boronato Glicoles

Carboxamidas: Ácidos carboxílicos aminas/anilinas

Ésteres: Ácidos carboxílicos Alcoholes

Hidrazinas: Hidrazidas Ácidos carboxílicos

N–acilureas o Anhídridos: Carbodiimidas Ácidos carboxílicos

Ésteres: diazoalcanos Ácidos carboxílicos

Tioeteres: Epóxidos Tioles

Tioeteres: Haloacetamidas Tioles

Aminotriazinas: Halotriazinas Aminas/anilinas

Triazinil éteres: Halotriazinas Alcoholes/fenoles

Amidinas: Imido ésteres Aminas/anilinas

Ureas: Isocianatos Aminas/anilinas

Uretanos: Isocianatos Alcoholes/fenoles

Tioureas: Isotiocianatos Aminas/anilinas

Tioeteres: Maleimidas Tioles

Fosfito ésteres: Fosforamiditas Alcoholes

Silil éteres: Haluros de sililo Alcoholes

Alquil aminas: Ésteres sulfonato Aminas/anilinas

Tioeteres: Ésteres sulfonato Tioles

Ésteres: Ésteres sulfonato Ácidos carboxílicos

Éteres: Ésteres sulfonato Alcoholes

Sulfonamidas: Haluros de sulfonilo Aminas/anilinas

Ésteres sulfonato: Haluros de sulfonilo Fenoles/alcoholes

Tiol de alquilo: éster ,β–insaturado Tioles

Éteres de alquilo: éster ,β–insaturado Alcoholes

Aminas de alquilo: éster ,β–insaturado Aminas

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Tiol de alquilo: Vinilsulfona Tioles

Éteres de alquilo: Vinilsulfona Alcoholes

Aminas de alquilo: Vinilsulfona Aminas

Sulfuro de vinilo: Propargilamida Tiol

Uso de grupos protectores

En las reacciones descritas, puede ser necesario proteger grupos funcionales reactivos, por ejemplo, grupos hidroxi, amino, imino, tio o carboxi, cuando éstos se desean en el producto final, para evitar su participación no deseada en 5 las reacciones. Los grupos protectores se utilizan para bloquear algunas o todas las unidades estructurales reactivas y evitar que tales grupos participen en reacciones químicas hasta que se retira el grupo protector. En una realización, cada grupo protector sea extraíble por un medio diferente. Los grupos protectores que se escinden en condiciones de reacción totalmente dispares satisfacen el requerimiento de la eliminación diferencial. Los grupos protectores se pueden eliminar por ácido, base, e hidrogenólisis. Los grupos tales como tritilo, dimetoxitritilo, acetal y 10 t–butildimetilsililo son lábiles a un ácido y se pueden utilizar para proteger las unidades estructurales reactivas carboxi e hidroxilo en la presencia de grupos amino protegidos con grupos Cbz, que son extraíbles por hidrogenólisis, y grupos Fmoc, que son lábiles a una base. Las unidades estructurales reactivas hidroxi y ácido carboxílico pueden ser bloqueadas con grupos lábiles a una base, tales como, pero no limitando a, metilo, etilo y acetilo en presencia de aminas bloqueadas con grupos lábiles a un ácido, tales como carbamato de t–butilo o con

15 carbamatos que son estables tanto a ácidos como a bases, pero hidrolíticamente extraíbles.

Las unidades estructurales reactivas de ácido carboxílico e hidroxi también pueden ser bloqueadas con grupos protectores removibles hidrolíticamente tales como el grupo bencilo, mientras que los grupos amina capaces de enlace de hidrógeno con los ácidos se pueden bloquear con grupos lábiles a una base, tales como Fmoc. Las unidades estructurales reactivos de ácido carboxílico pueden estar protegidas mediante la conversión en

20 compuestos de éster simples como se ejemplifica en este documento, o pueden ser bloqueados con grupos protectores oxidativamente extraíbles tales como 2,4–dimetoxibencilo, mientras que los grupos amino coexistentes pueden ser bloqueados con carbamatos de sililo lábiles a fluoruro.

Los grupos bloqueadores de alilo son útiles entonces en presencia de grupos protectores de ácido y base ya que los primeros son estables y pueden ser eliminados posteriormente por catalizadores de metal o pi–ácido. Por ejemplo,

25 un ácido carboxílico alil–bloqueado se puede desproteger con una reacción catalizada por Pd0 en presencia de grupos protectores carbamato de t–butilo lábil en un ácido o acetato de amina lábil en una base. Sin embargo, otra forma de grupo protector es una resina a la que un compuesto o intermedio pueden estar unidos. Mientras que el residuo está unido a la resina, ese grupo funcional está bloqueado y no puede reaccionar. Una vez liberado de la resina, el grupo funcional está disponible para reaccionar.

30 Por lo general grupos de bloqueo/ protectores se pueden seleccionar de:

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Claims

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