CN109369654A - 1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109369654A
CN109369654A CN201811386835.XA CN201811386835A CN109369654A CN 109369654 A CN109369654 A CN 109369654A CN 201811386835 A CN201811386835 A CN 201811386835A CN 109369654 A CN109369654 A CN 109369654A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reaction
added
dmf
amino
dmso
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201811386835.XA
Other languages
English (en)
Inventor
赵桂森
冉凡胜
刘美霞
刘洋
王鲁华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong University
Original Assignee
Shandong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong University filed Critical Shandong University
Priority to CN201811386835.XA priority Critical patent/CN109369654A/zh
Publication of CN109369654A publication Critical patent/CN109369654A/zh
Priority to CN201911126051.8A priority patent/CN111196813B/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Abstract

本发明涉及一种1，3‑二取代‑4‑氨基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用。所述化合物具有式I所示的结构。本发明还涉及含有式I结构化合物的制备方法以及药物组合物。本发明还提供上述化合物及其药学上可接受的盐在制备抗套细胞淋巴瘤(MCL)的药物中的应用。

Description

1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和 应用
技术领域
本发明涉及有机化合物合成及医药应用领域，尤其涉及1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和制药用途。
背景技术
BTK属于非受体酪氨酸激酶Tec家族，由659个氨基酸组成，包含5个结构域，从氨基端开始分别是PH结构域(pleckstrin homology domain)，TH结构域(Tec homologydomain)，SH3结构域(Src homology 3domain)，SH2结构域(Src homology 2domain)和催化结构域(tyrosine kinase domain，也称SH1结构域)。(参见Kawakami Y,Kitaura J,HataD,Yao L,Kawakami T:Functions of Bruton's tyrosine kinase in mast and Bcells.J Leukoc Biol 1999,65(3):286-290。)其中PH结构域是BTK参与胞外刺激、识别并结合PIP3的关键域；TH结构域包含BTK基序和富含脯氨酸的保守区；SH3结构域包含自磷酸化位点Tyr 223，能特异识别TH结构域中富含脯氨酸片段，诱发分子内折叠；SH2结构域能识别具有特殊肽序的磷酸化的酪氨酸残基；催化结构域是铰链连接的双叶结构，其中N叶端(氨基酸残基394-474)由5个β片层和一个α螺旋组成；C叶端(氨基酸残基481-659)由8个α螺旋和1个β片层组成，含有一个活化环；铰链域(氨基酸残基475-480)是ATP结合区域。催化结构域和SH3结构域分别有一个酪氨酸磷酸化位点，活化的Src家族激酶使催化结构域的Tyr551发生磷酸化，诱发SH3结构域的Tyr223发生自磷酸化，使BTK处于活化状态。(参见Satterthwaite AB,Li Z,Witte ON:Btk function in B cell development andresponse.Semin Immunol 1998,10(4):309-316)
套细胞淋巴瘤(MCL)是一种恶性程度高、预后不良的非霍奇金淋巴瘤(NHL)。(参见Chen Y,Wang M,Romaguera J:Current regimens and novel agents for mantle celllymphoma.Br J Haematol 2014,167(1):3-18。)MCL为B细胞恶性肿瘤，B细胞受体(BCR)信号通路的过度活化是B细胞肿瘤发生发展的重要因素。(参见Niiro H,Clark EA:Regulation of B-cell fate by antigen-receptor signals.Nat Rev Immunol 2002,2(12):945-956。)BTK(Bruton’s tyrosine kinase)是BCR信号通路中的重要调节分子。(参见Buggy JJ,Elias L:Bruton tyrosine kinase(BTK)and its role in B-cellmalignancy.Int Rev Immunol 2012,31(2):119-132。)BTK在MCL肿瘤细胞中过度表达，研究BTK抑制剂对于MCL的治疗具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一类具有BTK抑制活性的1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物；本发明的另一目的在于提供该1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物的制备方法及其制药应用。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
一、1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物
1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物或其药用盐，其结构如通式I所示：
其中，X为如下所示的取代哌啶基、取代苄基或取代乙酰胺基：
R1是C1～6直链或支链取代酰基，C1～6直链或支链烷基；R2是氢，卤素，C1～6直链或支链烷基，氰基，三氟甲基，硝基；R3是氢，卤素，C1～6直链或支链烷基，氰基，三氟甲基，取代酰基，硝基；R4是氢，卤素，C1～6直链或支链烷基；R5是C1～6直链或支链烷基；R6是氢，卤素，C1～6直链或支链烷基，三氟甲基，氰基，C1～6直链或支链取代酰胺基；Y为碳，氮；n为0,1,2,3,4,5,6。
优选的，R1是丙烯酰基，2-丁烯酰基，2-丁炔酰基，2-羟基乙酰基，2-羟基丙酰基，3-羟基-2,2-二甲基丙酰基，3-甲氧基丙酰基，氯乙酰基；R2是氢，氟，氯，溴，氰基，三氟甲基，硝基，甲基；R3是氢，氟，溴，氰基，乙酰基，甲基，三氟甲基，硝基，甲基酰胺基；R4是氢，氟，溴，甲基；R5是甲基，乙基，叔丁基；R6是氢，氟，氯，溴，甲基，三氟甲基，氰基，氯乙酰胺基，丙烯酰胺基，2-丁烯酰胺基；Y为碳，氮；n为0,1,2。
进一步优选的，所述1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物或其药用盐选自下列化合物之一：
表1.目标化合物的结构式
上述优选的83个化合物的结构及其相应的编号，为叙述方便和表达简洁，上述括号中的代号在本说明书以下内容中将被直接应用。
二、1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物的制备方法
结构为通式I所示的1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物或其药用盐的制备方法，包括以下步骤：
合成路线如下：
试剂及条件：(a)苯酚,氢化钠(NaH),四氢呋喃(THF),80℃,12h；(b)醋酸钯(Pd(OAc)2),2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(X-PHOS),醋酸钾(KOAc),联硼酸频那醇酯,1,4-二氧六环,90℃,12h；(c)N-溴代丁二酰亚胺(NBS),N,N-二甲基甲酰胺(DMF),80℃,3h；(d)四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4),磷酸钾(K3PO4),1,4-二氧六环:水＝4:1v/v,135℃,30h；(e).N-BOC-3-羟基哌啶,三苯基膦(PPh3),偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD),THF,0℃,5h；(f)饱和HCl 1,4-二氧六环溶液,r.t.,5h；(g)取代羧酸,HBTU,N,N-二异丙基乙胺(DIEA),DMF,r.t.,5h；(h)溴乙酰溴,碳酸氢钠(NaHCO3),乙酸乙酯:水＝1:1v/v,r.t.,2h；(i)碳酸钾(K2CO3),DMF,r.t.,10h；(j)草酰氯,二氯甲烷(DCM),DMF,r.t.；(k)取代伯胺,三乙胺(Et3N),THF,0℃～r.t.1h；(l)还原性铁粉，氯化铵，乙醇：水＝3:1v/v，90℃；(m)取代酰氯,DIEA,THF,0℃～r.t.,5h.
其中，R1～R6,n如通式I所述。
所述的取代羧酸为：2-羟基乙酸，2-羟基丙酸，3-羟基-2,2-二甲基丙酸，3-甲氧基丙酸；取代伯胺为：甲胺，乙胺，叔丁胺；取代酰氯为：丙烯酰氯，2-丁烯酰氯，2-丁炔酰氯，氯乙酰氯；
具体步骤如下:
(1)起始原料1与苯酚和NaH，在THF条件下反应得中间体2，中间体2与Pd(OAc)2,X-PHOS,KOAc和联硼酸频那醇酯，在1,4-二氧六环条件下反应得中间体3；原料4与NBS在DMF条件下反应得中间体5；中间体3和中间体5与Pd(PPh3)4和K3PO4在1,4-二氧六环和水的条件下反应得中间体6；
(2)中间体6与N-BOC-3-羟基哌啶,PPh3和DIAD，在THF条件下反应得到中间体7，中间体7与浓HCl在1,4-二氧六环条件下反应得到中间体8，中间体8与各种取代羧酸或取代酰氯于碱性条件下缩合得到目标化合物Ra；
(3)不同取代胺9a-9z去溴乙酸乙酯反应得中间体10a-10z，10a-10z与中间体6在K2CO3条件下反应得到目标化合物Rb；
(4)原料11在草酰氯作用下得酰氯中间体12，进而与不同取代伯胺作用得中间体13a-13c，13a-13c与中间体6和K2CO3在DMF作用下反应得到目标化合物Rc；
(5)中间体5与原料14在Pd(PPh3)4催化用下得中间体15；
(6)中间体15与不同溴苄反应得部分终产物Rd，含硝基目标化合物Rd还原得含氨基目标化合物Rd，含氨基目标化合物Rd进一步与不同酰氯反应得部分终产物Rd；
(7)中间体15与中间体10a-10z和K2CO3在DMF作用下反应得到目标化合物Rg。
优选的，1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物或其药用盐的制备方法，包括如下之一：
(1)化合物Ra1-Ra9的制备方法，包括如下步骤：
(i)取苯酚溶于无水四氢呋喃，冰浴搅拌，逐渐加入氢化钠，搅拌30min，80℃继续反应30min，冷却至室温，加入起始原料1，80℃回流12h，反应毕，冷却至室温，用水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得无色油状物质，硅胶柱层析石油醚：乙酸乙酯＝100：1，得中间体2；
(ii)取Pd(OAc)2，X-PHOS，溶于1,4-二氧六环，N2保护室温搅拌20min，再取中间体2溶于1,4-二氧六环，加入联硼酸频那醇酯,KOAc，将活化的配体溶液加入其中，N2保护，90℃反应12h，反应毕，硅藻土热过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析石油醚：乙酸乙酯＝100:1-40:1，得中间体3；
(iii)将起始原料4溶于DMF中，加入NBS,搅拌,80℃油浴加热，溶液颜色由淡黄色变为红色，反应3h，TLC检测，反应基本完全，冷却至室温，将反应液倒入冰水中，搅拌，析出大量黄色固体，过滤，滤饼用冰水洗涤，干燥，得中间体5；
(iv)取中间体3、中间体5、Pd(PPh3)4、K3PO4.3H2O，加入两颈瓶中，加入溶剂1,4-二氧六环：水＝4:1(v/v)溶解，超声脱去溶液中的氧气，用N2置换装置中的空气，N2保护，135℃油浴加热回流，反应30h后，TLC检测，反应基本完全。将反应液冷却至室温，用硅藻土过滤，将滤液减压蒸除，得黄色固体，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:1，得中间体6；
(v)取中间体6溶于无水THF，加入N-BOC-3-羟基哌啶，PPh3，冰浴下逐滴加入DIAD,冰浴反应5h，反应毕，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析石油醚：乙酸乙酯＝5：1，得中间体7；取中间体7，溶于饱和HCl二氧六环溶液，室温搅拌5h,反应毕，抽滤得中间体8；将中间体8，溶于DMF中，加入DIEA，取代羧酸HBTU或取代酰氯，室温搅拌10h，反应完毕，将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析为石油醚：乙酸乙酯＝5:1-1:1，得目标产物Ra；
合成路线如下：
试剂及条件：(a)苯酚,氢化钠(NaH),四氢呋喃(THF),80℃,12h；(b)醋酸钯(Pd(OAc)2),2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(X-PHOS),醋酸钾(KOAc),联硼酸频那醇酯,1,4-二氧六环,90℃,12h；(c)NBS,DMF,80℃,3h；(d)四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4),磷酸钾(K3PO4),1,4-二氧六环:水＝4:1v/v,135℃,30h；(e).N-BOC-3-羟基哌啶,三苯基膦(PPh3),偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD),THF,0℃,5h；(f)饱和HCl 1,4-二氧六环溶液,r.t.,5h；(g)取代羧酸,HBTU,N,N-二异丙基乙胺(DIEA),DMF,r.t.,5h；0℃～r.t.,5h；(m)取代酰氯,DIEA,THF,0℃～r.t.,5h；
所述的取代羧酸为：2-羟基乙酸，2-羟基丙酸，3-羟基-2,2-二甲基丙酸，3-甲氧基丙酸；取代酰氯为：丙烯酰氯，2-丁烯酰氯，2-丁炔酰氯，氯乙酰氯；
(2)化合物Rb1-Rb26的制备方法，包括如下步骤：
(i)取起始原料不同取代胺9a-9z,溶于乙酸乙酯:水＝1:1(v/v)中，加入NaHCO3,室温搅拌，逐滴加入溴乙酰溴,搅拌2h,反应完毕，加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤有机相，干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂，得不同取代溴乙酰胺10a-10z；
(ii)将中间体6，溶于DMF中，加入中间体10a-10z，K2CO3，室温搅拌10h，反应完毕，反应液倾入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝200:1-60:1，得目标产物Rb；
合成路线如下：
试剂及条件：(h)溴乙酸乙酯,NaHCO3,乙酸乙酯:水＝1:1v/v,r.t.,2h；(i)K2CO3,DMF,r.t.,10h。
(3)化合物Rc1-Rc3的制备方法，包括如下步骤：
(i)将起始原料11，溶于二氯甲烷中，再加入草酰氯，2滴DMF，于室温下搅拌反应，30min后TLC检测，反应完毕，减压蒸除溶剂，得到中间体12。将取代伯胺置于反应瓶中，加入THF，三乙胺，冰浴条件下搅拌，将溶于THF中的中间体12滴加入反应瓶中，滴加完毕后，于室温下反应。1h后TLC检测，反应完全，往反应液里加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，过滤，减压蒸除溶剂，干燥，得不同取代溴苄13a-13c。
(ii)将中间体6，溶于DMF中，加入中间体13a-13c，K2CO3，室温搅拌10h，反应完毕，反应液倾入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析二氯甲烷/甲醇＝150:1-50:1，得目标产物Rc；
合成路线如下：
试剂及条件(j)草酰氯,DCM,DMF,r.t.；(k)取代伯胺,Et3N,THF,0℃～r.t.1h；(i)K2CO3,DMF,r.t.,10h；
所述的取代伯胺为：甲胺，乙胺，叔丁胺；
(4)化合物Rd1-Rd19的制备方法，包括如下步骤：
(i)取原料14、中间体5、Pd(PPh3)4、K3PO4.3H2O，加入两颈瓶中，加入溶剂(1,4-二氧六环：水＝4:1)溶解，超声脱去溶液中的氧气，用N2置换装置中的空气，N2保护，135℃油浴加热回流，反应30h后，TLC检测，反应基本完全。将反应液冷却至室温，用硅藻土过滤，将滤液减压蒸除，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:1，得中间体15。
(ii)将中间体15，溶于DMF中，加入不同取代溴苄，K2CO3，室温搅拌10h，反应完毕，反应液倾入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为二氯甲烷/甲醇＝150:1-60:1，得部分目标产物Rd。
(iii)将含硝基目标化合物Rd，溶于乙醇：水＝3:1溶液中，加入还原性铁粉，氯化铵，90℃回流5h,硅藻土热过滤，减压蒸除溶剂，加水，过滤得含氨基目标化合物Rd。
(iv)将含氨基目标化合物Rd溶于THF中，冰浴加入DIEA，逐滴滴加不同取代酰氯，室温反应5h，减压蒸除溶剂，柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:1-40:1,得部分终产物Rd。
合成路线如下：
试剂及条件：(d)四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4),磷酸钾(K3PO4),1,4-二氧六环:水＝4:1v/v,135℃,30h；(i)碳酸钾(K2CO3),DMF,r.t.,10h；(l)还原性铁粉，氯化铵，乙醇：水＝3:1v/v，90℃；(m)取代酰氯,DIEA,THF,0℃～r.t.,5h.
所述的取代酰氯为：丙烯酰氯，2-丁烯酰氯，氯乙酰氯；
(5)化合物Rg1-Rg26的制备方法如下：
(i)取原料14、中间体5、Pd(PPh3)4、K3PO4.3H2O，加入两颈瓶中，加入溶剂(1,4-二氧六环：水＝4:1v/v溶解，超声脱去溶液中的氧气，用N2置换装置中的空气，N2保护，135℃油浴加热回流，反应30h后，TLC检测，反应基本完全。将反应液冷却至室温，用硅藻土过滤，将滤液减压蒸除，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:1，得中间体15；
(ii)将中间体15，溶于DMF中，加入中间体10a-10z，K2CO3，室温搅拌10h，反应完毕，反应液倾入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析为二氯甲烷：甲醇＝200:1-60:1，得目标产物Rg；
合成路线如下：
试剂及条件：(d)四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4),磷酸钾(K3PO4),1,4-二氧六环:水＝4:1v/v,135℃,30h；(i)碳酸钾(K2CO3),DMF,r.t.,10h。
本发明的室温为20℃-30℃。
以下实验例仅用于说明本发明的技术效果，但所述的实验例不用于限制本发明。
实验例1：化合物对BTK抑制活性测试及对MCL细胞的生长抑制测定实验
1)化合物对BTK激酶抑制活性实验：
实验材料和仪器：本实验由英国公司Eurofins Pharma协助完成。
实验方法：将BTK(h)与8mMMOPSpH7.0，0.2mMEDTA，250μMKVEKIGEGTYGVVYK(Cdc2肽)，10mM乙酸镁和[9-33P]-ATP(根据需要的比活性和浓度)一起温育。通过添加Mg/ATP混合物引发反应。在室温下温育40分钟后，通过加入磷酸至0.5％的浓度终止反应。然后将10μL反应物点在P30滤垫上，在0.425％磷酸中洗涤4次，每次4分钟，在甲醇中洗涤一次，然后进行干燥和闪烁计数。
实验中需设定化合物测试组(C)、阳性对照组(P)和阴性对照组(N)。测试组是将不同浓度待测化合物溶液(4μL/孔)加入到384孔板中，阳性对照组则是加入相同体积的1×激酶缓冲液，其他与测试组相同；阴性对照组不加待测化合物，也不加BTK激酶溶液，用6μL/孔的1×激酶缓冲液代替，其他与测试组相同。
抑制率的计算公式为：
其中c为测试组，n为背景组，p为空白组。
用软件Graghpad Prism6.0以浓度的对数为横坐标，抑制率为纵坐标拟合曲线，计算IC50。目标化合物对BTK激酶抑制活性测定实验结果见表2。
表2.目标化合物对BTK的抑制活性
aND：not detected
表2实验数据表明，通式I中化合物对BTK均有一定抑制活性，部分化合物的半数抑制浓度都在纳摩尔级(30nM左右)。
2)化合物对肿瘤细胞的生长抑制活性实验：
实验材料与仪器：人套细胞淋巴瘤细胞株Mino,Rec-1,Jeko-1,Maver-1,Z138,Granta-519(美国典型培养物保藏中心-American Type Culture Collection，ATCC)、RPMI-1640培养基(美国Sigma公司)、胎牛血清(美国Sigma公司)、HEPES缓冲液(美国CORNING公司)、青霉素纳(10000units/mL)-硫酸链霉素(10mg/mL)(美国Sigma公司)、台盼蓝试剂-Trypan blue solution(美国Sigma公司)、倒置光学显微镜(美国FisherScientific公司)、细胞培养箱(美国NUAIER公司)、超净工作台(美国NUAIER公司)、细胞计数器-TC20TM Automated Cell Counter)(美国Bio-Rad公司)、电热恒温水浴锅(美国Fisher Scientific公司)、台式离心机(美国Thermo Scientific公司)、酶标仪(BioTekSynergy HTX多功能检测仪)、超低温冰箱(美国Thermo Scientific公司)。
实验步骤：
取对数生长期MCL细胞株，接种于96孔培养板中，细胞数为1×104/孔，加入不同浓度所测化合物的细胞培养液，使其终浓度为0.93-60μM，同时设立阳性对照组和DMSO空白对照组，调整DMSO浓度≤1‰。每个浓度设3个复孔，加毕，置37℃，5％CO2恒温培养箱中孵育72h。随后每孔加入30μL CellTiter-试剂，用BioTek Synergy HTX多功能检测仪(BioTek,USA)测定其在570nm波长下的发光度值，所得数值与阴性DMSO对照组进行归一化处理，应用Prism 6.0软件(GraphPad Software,USA)计算IC50值。
表3.目标化合物对MCL细胞株的抑制活性
aND：not detected.
表3实验数据表明，与IBN(即依鲁替尼)相比，通式I中部分化合物对套细胞淋巴瘤(MCL)的生长抑制活性明显提高，半数抑制浓度都在低微摩尔级(1μM左右)，其生长抑制活性与治疗套细胞淋巴瘤(MCL)上市药物依鲁替尼相当或明显优于依鲁替尼。其中化合物Ra9，Rd2，Rd4，对MCL细胞的抗增殖活性显著优于依鲁替尼，共价基团氯乙酰基取代的化合物Ra9和Rd4对MCL细胞的IC50值小于1μM，相比于丙烯酰基取代得依鲁替尼活性提高了3-39倍。化合物Ra9，Rd2，Rd4对依鲁替尼不敏感的Z138和Maver-1细胞，仍具有低微摩尔级的生长抑制活性，这为MCL的治疗提供很好的选择。此外，化合物Ra9，Rd2，Rd4对BTK敲除的Jeko-1细胞(Jeko-1KO#11)，仍保持很好的生长抑制活性，表明我们化合物可能存在其他的潜在机制来治疗MCL。因此，本发明还提供1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用；优选的，所述的应用为在制备抗套细胞淋巴瘤(MCL)药物中的应用。
一种抗套细胞淋巴瘤(MCL)的药物组合物，包括本发明的1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
具体实施方式
结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。实施例中采用的条件可以根据现有的设备条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。
实施例1：
1)中间体2的制备
取苯酚(8.02g，85.23mmol)溶于50ml无水四氢呋喃，冰浴搅拌，逐渐加入氢化钠(2.5g，113.64mmol)搅拌30min，80℃继续反应30min，冷却至室温，加入2-氟-5-溴-吡啶(10g，56.82mmol)80℃回流12h，反应毕，冷却至室温，100ml水淬灭反应，乙酸乙酯(100ml×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，得无色油12.3g，产率86％，洗脱系统为石油醚：乙酸乙酯＝100：1。
2)中间体3的制备
取醋酸钯(315mg,1.4mmol)，X-PHOS(1.3g,2.8mmol)，溶于10ml1,4-二氧六环，N2保护室温搅拌20min，取5-溴-2-苯氧基吡啶(7g，28mmol)溶于100ml 1,4-二氧六环，加入联硼酸频那醇酯(14.42g,56mmol),醋酸钾(8.4g，84mmol)，将活化配体溶液加入其中，N2保护90℃反应12h，反应毕，硅藻土热过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，得白色固体4.24g，产率51％，洗脱系统为石油醚：乙酸乙酯＝100:1-40:1。
3)中间体5的制备
将4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶(5g,，37mmol)溶于30ml DMF中，加入NBS(7.9g，44.4mmol),搅拌,80℃油浴加热，溶液颜色由淡黄色变为红色，反应3h，TLC检测，基本反应完全，冷却至室温，将反应液倒入300ml冰水中，搅拌，析出大量黄色固体，过滤，滤饼用冰水洗涤，干燥，得淡黄色固体6.33g，产率79.9％。
4)中间体6的制备
取中间体5(2g，9.34mmol)、中间体3(5.55g，18.69mmol)、四(三苯基膦)钯(531mg，0.46mmol)、K3PO4.3H2O(7.45g，28.02mmol)，加入250ml两颈瓶中，加入100ml溶剂1,4-二氧六环：水＝4:1(v/v)溶解，氮气保护，超声脱去溶液中的氧气，用氮气置换装置中的空气，135℃油浴加热回流，反应30h后TLC检测，反应基本完全。将反应液冷却至室温，用硅藻土过滤，将滤液减压蒸除，得黄色固体，硅胶柱层析，得淡黄色固体2.04g，产率72％，洗脱系统为二氯甲烷：甲醇＝100:1。
5)中间体7的制备
取中间体6(1.2g,3.9mmol)溶于25ml无水四氢呋喃，加入N-BOC-3-羟基哌啶(2.4g，11.7mmol)，三苯基膦(3.2g，11.7mmol)，冰浴下逐滴加入DIAD(2.37g,11.7mmol)冰浴反应5h，反应毕，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，得白色固体1.1g，产率58％，洗脱系统为石油醚：乙酸乙酯＝5：1。
6)中间体8的制备
取中间体7(0.8g,1.6mmol)，溶于5ml HCl饱和二氧六环溶液，室温搅拌5h,反应毕，抽滤得白色固体668mg，产率95％。
7)中间体10a-10z的制备
取不同取代苯胺9a-9z(2mmol),溶于4ml乙酸乙酯/水＝1:1(v/v)中，加入碳酸氢钠(0.31g，3.7mmol),室温搅拌，逐滴加入溴乙酰溴(0.46g，2.3mmol),搅拌2h,反应完毕，加入10ml水，用乙酸乙酯(10ml×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤有机相，干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂，得中间体10a-10z。
8)中间体12的制备
将起始原料11(1g，4.65mmol)，溶于20ml二氯甲烷中，再加入2.5ml草酰氯，2滴DMF，于室温下搅拌反应，30min后TLC检测，反应完毕，减压蒸除溶剂，得到中间体12。
9)中间体13a-13c的制备
将取代伯胺(5.14mmol)置于反应瓶中，加入9ml THF，三乙胺(8.57mmol)，冰浴条件下搅拌，将溶于9ml THF中的中间体12滴加入反应瓶中，滴加完毕后，于室温下反应。1h后TLC检测，反应完全，往反应液里加入30ml水，用乙酸乙酯(30ml×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，过滤，减压蒸除溶剂，干燥，得中间体13a-13c。
10)中间体15的制备
取中间体5(2g，9.34mmol)、4-苯氧基苯硼酸(4g，18.69mmol)、Pd(PPh3)4(531mg，0.46mmol)、K3PO4.3H2O(7.45g，28.02mmol)，加入250ml两颈瓶中，加入100ml溶剂1,4-二氧六环：水＝4:1(v/v)溶解，氮气保护，超声脱去溶液中的氧气，用氮气置换装置中的空气，135℃油浴加热回流，反应30h后TLC检测，反应基本完全。将反应液冷却至室温，用硅藻土过滤，将滤液减压蒸除，得黄色固体，硅胶柱层析，得淡黄色固体2.23g，产率78.8％，洗脱系统为二氯甲烷：甲醇＝100:1。
11)目标化合物Ra的制备
将中间体8(0.42g，1mmol,)溶于3ml DMF中，加入取代羧酸(1.2mmol)HBTU(0.46g，1.2mmol)或取代酰氯(1.2mmol)，DIEA(0.65g，5mmol)，室温搅拌10h，反应完毕，将反应液倒入30ml冰水中，乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，依次用20ml水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，得目标产物Ra，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝5:1-1:1。
Ra1:1-(3-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮
白色固体，产率为52％，mp:174-180℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.37(s,1H),8.27(s,1H),8.08(d,J＝5.7Hz,1H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.28–7.14(m,4H),6.87(dd,J＝16.5,10.5Hz,0.5H),6.70(dd,J＝16.4,10.8Hz,0.5H),6.10(dd,J＝28.5,16.6Hz,1H),5.72(d,J＝10.5Hz,0.5H),5.59(d,J＝10.5Hz,0.5H),4.77-4.69(m,1H),4.55(d,J＝11.4Hz,0.5H),4.18(d,J＝12.2Hz,1H),4.07(d,J＝13.5Hz,0.5H),3.72(t,J＝12Hz,0.5),3.21(q,J＝11.5Hz,1H),3.05(t,J＝10.5Hz,1H),2.30-2.21(m,1H),2.12(d,J＝11.4Hz,1H),1.94(d,J＝13.4Hz,1H),1.65-1.56(m,1H).ESI-MS:m/z 442.19(M+H+)。
Ra2:(R)-1-(3-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮
白色固体，产率为42％，mp:160-165℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.37(s,1H),8.27(s,1H),8.08(d,J＝5.7Hz,1H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.28-7.14(m,4H),6.87(dd,J＝16.5,10.5Hz,1H),6.10(dd,J＝28.5,16.6Hz,1H),5.72(d,J＝10.5Hz,1H),4.77-4.69(m,1H),4.55(d,J＝11.4Hz,1H),4.18(d,J＝12.2Hz,1H),3.72(t,J＝12Hz,1H),3.21(q,J＝11.5Hz,1H),2.30-2.21(m,1H),2.12(d,J＝11.4Hz,1H),1.94(d,J＝13.4Hz,1H),1.65-1.56(m,1H).ESI-MS:m/z442.08(M+H+)。
Ra3:(反)1-(3-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丁-2-烯-1-酮
白色固体，产率为46％，mp:198-202℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.36(s,1H),8.27(s,1H),8.07(d,J＝8.1Hz,1H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.26-7.16(m,4H),6.73-6.68(m,0.5H),6.57(d,J＝13.8Hz,1H),6.37(d,J＝15.6Hz,0.5H),4.75-4.65(m,1H),4.54(d,J＝12.4Hz,0.5H),4.18-4.07(m,1.5H),3.21–3.16(m,1H),3.13-3.06(m,1H),2.29-2.20(m,1H),2.13-2.09(m,1H),1.93(d,J＝12.2Hz,1H),1.86(d,J＝4.8Hz,1.5H),1.71(d,J＝4.8Hz,1.5H),1.64–1.49(m,1H).ESI-MS:m/z 456.14(M+H+)。
Ra4:1-(3-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丁-2-炔-1-酮
白色固体，产率为56％，mp:120-124℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.38(s,1H),8.28(d,J＝11.4Hz,1H),8.08(d,J＝8.2Hz,1H),7.46(t,J＝7.5Hz,2H),7.29–7.15(m,4H),4.83-4.80(m,0.5H),4.74–4.64(m,0.5H),4.41(dd,J＝12.2,2.5Hz,0..5H),4.33–4.18(m,1H),3.96(dd,J＝8.9,4.0Hz,0.5H),3.83(dd,J＝12.9,8.9Hz,0.5H),3.35–3.25(m,1H),3.18(t,J＝10.0Hz,0.5H),2.30-2.22(m,1H),2.14(s,1H),2.06(s,1.5H),1.99(s,1H),1.83(s,1.5H),1.69-1.53(m,1H).ESI-MS:m/z 454.03(M+H+)。
Ra5:1-(3-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-羟基乙-1-酮
白色固体，产率为39％，mp:232-236℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.37(s,1H),8.27(d,J＝7.0Hz,1H),8.08(dd,J＝8.1,2.3Hz,1H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.28–7.15(m,4H),4.81-4.77(m,0.5H),4.71–4.64(m,0.5H),4.48(dd,J＝11.7,2.9Hz,0.5H),4.20-3.92(m,3H),3.90(d,J＝14.0Hz,0.5H),3.72(d,J＝14.0Hz,0.5H),3.21-3.05(m,1.5H),3.01–2.78(m,1H),2.29–2.17(m,1H),2.13(s,1H),1.89(d,J＝12.4Hz,1H),1.74–1.50(m,1H).ESI-MS:m/z 446.16(M+H+)。
Ra6:1-(3-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-羟基丙-1-酮
白色固体，产率为62％，mp:218-222℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.37(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(d,J＝5.0Hz,1H),8.08(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.21(ddd,J＝24.3,16.1,7.9Hz,4H),4.99(ddd,J＝37.6,32.5,6.7Hz,1H),4.77(s,0.5H),4.66(d,J＝10.5Hz,0.5H),4.54–4.44(m,1H),4.40–4.27(m,1H),4.19(d,J＝17.1Hz,0.5H),4.03(s,0.5H),3.23–3.08(m,1H),2.92–2.77(m,1H),2.31–2.18(m,1H),2.13(s,1H),1.92(d,J＝19.2Hz,1H),1.66(s,0.5H),1.52(s,0.5H),1.27–1.09(m,3H).ESI-MS:m/z 460.28(M+H+)。
Ra7:1-(3-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-羟基-2-，2-二甲基丙-1-酮
白色固体，产率为49％，mp:210-214℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.31(s,1H),8.19(s,1H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.38(t,J＝7.5Hz,2H),7.20–7.08(m,4H),4.64(t,J＝10.6Hz,1H),4.51(t,J＝5.6Hz,1H),4.39(d,J＝12.2Hz,1H),4.22(d,J＝12.9Hz,1H),3.36(d,J＝5.6Hz,3H),3.18(t,J＝11.6Hz,1H),2.89(t,J＝12.0Hz,1H),2.20(dd,J＝24.0,11.9Hz,1H),2.04(d,J＝9.9Hz,1H),1.83(d,J＝13.0Hz,1H),1.53(dd,J＝25.0,12.5Hz,1H),1.10(d,J＝7.0Hz,6H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):174.92(s),163.44(s),158.73(s),156.23(s),154.42(d,J＝13.3Hz),147.29(s),141.08(s),140.46(s),130.22(s),125.14(s),124.84(s),121.56(s),112.22(s),98.16(s),69.43(s),53.03(s),48.80(s),45.21(s),44.16(s),30.07(s),24.81(s),23.43(s),23.16(s).ESI-MS:m/z 487.91(M+H+)。
Ra8:1-(3-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基丙-1-酮
白色固体，产率为57％，mp:152-154℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.37(t,J＝2.3Hz,1H),8.27(d,J＝9.5Hz,1H),8.07(dt,J＝8.4,2.8Hz,1H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.26-7.16(mz,4H),4.80-4.73(m,0.5H),4.66-4.50(m,0.5H),4.51(d,J＝12.2Hz,0.5H),4.20(d,J＝13.1Hz,0.5H),4.05(dd,J＝13.0,2.5Hz,0.5H),3.92(d,J＝12.8Hz,0.5H),3.64–3.46(m,2.5H),3.22(d,J＝13.4Hz,3H),3.17–3.07(m,1H),2.87(t,J＝10.8Hz,0.5H),2.72–2.54(m,1.5H),2.42(dt,J＝15.4,6.3Hz,0.5H),2.28-2.19(m,1H),2.16–2.05(m,1H),1.94–1.82(m,1H),1.70–1.44(m,1H).ESI-MS:m/z 474.06(M+H+)。
Ra9:1-(3-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氯乙-1-酮
白色固体，产率为63％，mp:182-184℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.37(s,1H),8.27(d,J＝7.0Hz,1H),8.08(d,J＝5.6Hz,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,2H),7.32–7.13(m,4H),4.90-4.83(m,0.5H),4.71–4.63(m,0.5H),4.49-4.41(m,2H),4.26(d,J＝12.9Hz,0.5H),4.17(d,J＝11.1Hz,0.5H),4.04(d,J＝13.6Hz,0.5H),3.85(d,J＝13.0Hz,0.5H),3.78–3.69(m,0.5H),3.24-3.18(m,1H),3.00–2.91(m,0.5H),2.30–2.07(m,2H),1.96–1.82(m,1H),1.78–1.69(m,0.5H),1.61–1.51(m,0.5H).ESI-MS:m/z 464.14(M+H+)。
12)目标化合物Rb的制备
将中间体6(0.30g，1mmol)，溶于3ml DMF中，加入中间体10a-10z(1.2mmol)，碳酸钾(0.21g，1.5mmol)，室温搅拌10h，反应完毕，反应倾入30ml冰水中，乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，得目标产物Rb，洗脱系统为二氯甲烷/甲醇＝200:1-60:1。
Rb1:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-氟苯基)乙酰胺
白色固体，产率61％，mp:198-202℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.68(s,1H),8.40(d,J＝1.9Hz,1H),8.27(s,1H),8.10(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),7.56(d,J＝11.4Hz,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,2H),7.38(dd,J＝15.0,7.9Hz,2H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.22(td,J＝14.9,8.0Hz,5H),6.92(t,J＝8.3Hz,1H),5.26(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):165.95(s),163.46(s),158.73(s),156.51(s),155.69(s),154.32(s),147.17(s),141.51(s),140.37(s),131.04(d,J＝9.7Hz),130.23(s),125.10(s),124.70(d,J＝2.9Hz),121.58(s),115.43(s),112.26(s),110.69(s),106.59(s),97.99(s),50.21(s).ESI-MS:m/z 456.19(M+H+)。
Rb2:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺
白色固体，产率43％，mp:110-114℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):10.68(s,1H),8.40(d,J＝2.4Hz,1H),8.27(s,1H),8.10(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.56(d,J＝11.6Hz,1H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.38(dd,J＝15.0,8.0Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),7.26-7.17(m,4H),6.92(td,J＝8.3,1.9Hz,1H),5.27(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):165.94(s),163.46(s),162.58(d,J＝240Hz),158.73(s),156.51(s),155.69(s),154.32(s),147.17(s),141.51(s),140.72(d,J＝11Hz),140.36(s),131.03(d,J＝9Hz),130.22(s),125.09(s),124.68(s),121.58(s),115.41(s),112.25(s),110.58(d,J＝21Hz),106.46(d,J＝26Hz),98.00(s),50.20(s).ESI-MS:m/z 456.11(M+H+)。
Rb3:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氟苄基)乙酰胺
白色固体，产率70％，mp:232-235℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.75(t,J＝5.9Hz,1H),8.39(d,J＝2.2Hz,1H),8.27(s,1H),8.08(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.37(q,J＝8Hz,1H),7.27-7.13(m,6H),7.08(t,J＝8.3Hz,1H),5.10(s,2H),4.34(d,J＝5.9Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):167.09(s),162.73(d,J＝241Hz),163.43(s),158.71(s),156.40(s),155.54(s),154.34(s),147.17(s),142.55(d,J＝7Hz),141.46(s),140.34(s),130.66(d,J＝8Hz),130.22(s),125.09(s),124.74(s),123.56(d,J＝3Hz),121.56(s),114.13(d,J＝43Hz),114.12(s),112.24(s),98.09(s),49.77(s),42.16(s).ESI-MS:m/z 470.20(M+H+)。
Rb4:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-氟苯乙基)乙酰胺
白色固体，产率61％，mp:192-196℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.38(d,J＝2.1Hz,1H),8.27(s,1H),8.23(t,J＝4.5Hz,1H),8.07(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,2H),7.27-7.17(m,6H),7.09(t,J＝8.8Hz,2H),4.97(s,2H),3.30(q,J＝6.8Hz,2H),2.72(t,J＝7.1Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):166.69(s),163.43(s),161.46(d,J＝240Hz),158.68(s),156.40(s),155.53(s),154.33(s),147.17(s),141.37(s),140.35(s),135.88(d,J＝2.9Hz),130.94(d,J＝7.9Hz),130.22(s),125.09(s),124.76(s),121.57(s),115.52(s),115.31(s),112.23(s),98.01(s),49.55(s),34.48(s).ESI-MS:m/z484.30(M+H+)。
Rb5:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氯苯基)乙酰胺
白色固体，产率67％，mp:232-236℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):10.59(s,1H),8.40(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(s,1H),8.09(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,2H),7.46(t,J＝7.8Hz,2H),7.39(d,J＝8.8Hz,2H),7.26-7.17(m,4H),5.25(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):165.71(s),163.46(s),158.72(s),156.50(s),155.68(s),154.32(s),147.17(s),141.49(s),140.36(s),137.99(s),130.22(s),129.25(s),127.64(s),125.10(s),124.68(s),121.58(s),121.21(s),112.25(s),98.00(s),50.19(s).ESI-MS:m/z 472.08(M+H+)。
Rb6:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺
白色固体，产率56％，mp:212-215℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.68(s,1H),8.40(d,J＝2.3Hz,1H),8.27(s,1H),8.09(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.89(dd,J＝6.8,2.4Hz,1H),7.48-7.38(m,4H),7.26-7.17(m,4H),5.26(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):165.89(s),163.47(s),158.72(s),156.51(s),155.71(s),154.31(s),152.53(s),147.17(s),141.55(s),140.36(s),136.26(s),130.22(s),125.10(s),124.66(s),121.80(s),121.58(s),121.11(s),120.03(s),119.61(s),117.69(s),112.25(s),98.00(s),50.13(s).ESI-MS:m/z 490.06(M+H+)。
Rb7:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-氰基苯基)乙酰胺
白色固体，产率68％，mp:224-226℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.91(s,1H),8.40(d,J＝2.1Hz,1H),8.27(s,1H),8.10(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.78(q,J＝8.9Hz,4H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.22(td,J＝15.0,8.0Hz,5H),5.31(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.43(s),163.48(s),158.73(s),156.53(s),155.68(s),154.31(s),147.17(s),143.18(s),141.57(s),140.36(s),133.90(s),130.22(s),125.10(s),124.64(s),121.59(s),119.73(s),119.41(s),112.26(s),105.89(s),98.00(s),50.31(s).ESI-MS:m/z 463.19(M+H+)。
Rb8:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氯-4-氰基苯基)乙酰胺
白色固体，产率54％，mp:152-156℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):11.10(s,1H),8.40(d,J＝2.2Hz,1H),8.27(s,1H),8.09(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),8.02(d,J＝1.7Hz,1H),7.93(d,J＝8.6Hz,1H),7.61(dd,J＝8.6,1.8Hz,1H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.26–7.17(m,4H),5.32(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.87(s),163.49(s),158.73(s),156.56(s),155.73(s),154.30(s),147.17(s),144.23(s),141.67(s),140.36(s),136.58(s),135.83(s),130.22(s),125.11(s),124.61(s),121.59(s),119.67(s),118.35(s),116.62(s),112.26(s),106.37(s),97.99(s),50.34(s).ESI-MS:m/z 497.15(M+H+)。
Rb9:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3,4-二氰基苯基)乙酰胺
白色固体，产率35％，mp:184-189℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):11.25(s,1H),8.40(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(s,1H),8.25(d,J＝1.5Hz,1H),8.09(d,J＝8.7Hz,2H),7.96(dd,J＝8.7,1.7Hz,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,2H),7.28–7.16(m,4H),5.34(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):167.05(s),163.50(s),158.73(s),156.58(s),155.74(s),154.29(s),147.16(s),143.42(s),141.72(s),140.35(s),135.68(s),130.23(s),125.11(s),124.59(s),123.64(s),123.54(s),121.59(s),116.53(s),116.53(s),116.24(s),112.26(s),108.78(s),98.00(s),50.33(s).ESI-MS:m/z 488.19(M+H+)。
Rb10:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-氰基-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
白色固体，产率59％，mp:130-134℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):11.27(s,1H),8.40(d,J＝2.2Hz,1H),8.27(s,2H),8.13(d,J＝8.6Hz,1H),8.09(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.95(dd,J＝8.6,1.6Hz,1H),7.46(t,J＝7.9Hz,2H),7.26–7.17(m,4H),5.34(s,2H).13CNMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):167.09(s),163.50(s),158.73(s),156.58(s),155.74(s),154.30(s),147.17(s),143.52(s),141.71(s),140.36(s),137.14(s),132.45(s),130.22(s),125.11(s),124.60(s),124.19(s),122.63(s),121.59(s),116.97(s),116.15(s),112.26(s),102.55(s),98.00(s),50.34(s).ESI-MS:m/z 531.09(M+H+)。
Rb11:4-(2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙酰胺基)-2-氟-N-甲基苯甲酰胺
白色固体，产率60％，mp:206-210℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):10.86(s,1H),8.41(d,J＝7.9Hz,1H),8.28(d,J＝10.6Hz,1H),8.11(s,2H),7.72–7.59(m,2H),7.52–7.42(m,2H),7.35(t,J＝8.3Hz,1H),7.24-7.17(m,5H),5.29(s,2H),2.77(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):166.31(s),163.90(s),163.49(s),161.10(s),158.74(s),156.54(s),155.72(s),154.32(s),147.18(s),142.34(s),141.58(s),140.38(s),131.45(s),130.23(s),125.11(s),124.66(s),121.60(s),118.77(s),115.12(s),112.27(s),106.70(s),98.01(s),50.25(s),26.77(s).ESI-MS:m/z 513.04(M+H+)。
Rb12:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
白色固体，产率64％，mp:188-191℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.81(s,1H),8.39(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(s,1H),8.13–8.04(m,2H),7.75(d,J＝8.1Hz,1H),7.58(t,J＝7.9Hz,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,3H),7.26-7.17(m,4H),5.28(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.25(s),163.48(s),158.74(s),156.53(s),155.74(s),154.33(s),147.18(s),141.57(s),140.37(s),139.78(s),130.65(s),130.23(s),129.85(s),125.85(s),125.11(s),124.68(s),123.22(s),121.59(s),120.52-120.46(m),115.76-115.66(m),112.26(s),98.01(s),50.20(s).ESI-MS:m/z506.13(M+H+)。
Rb13:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(2-溴苯基)乙酰胺
白色固体，产率63％，mp:104-109℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.84(s,1H),8.40(d,J＝1.8Hz,1H),8.29(s,1H),8.10(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,2H),7.46(t,J＝7.8Hz,2H),7.37(t,J＝7.5Hz,1H),7.27–7.11(m,6H),5.32(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.07(s),163.49(s),158.75(s),156.57(s),155.73(s),154.34(s),147.21(s),141.70(s),140.39(s),136.11(s),133.24(s),130.23(s),128.59(s),127.65(s),126.93(s),126.93(s),125.11(s),124.69(s),121.59(s),117.67(s),112.27(s),98.05(s),49.92(s).ESI-MS:m/z 516.09(M+H+)。
Rb14:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-溴-2-甲基苯基)乙酰胺
白色固体，产率61％，mp:274-277℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.99(s,1H),8.40(s,1H),8.29(s,1H),8.10(d,J＝8.2Hz,1H),7.46(s,3H),7.38(d,J＝7.5Hz,1H),7.30–7.08(m,6H),5.29(s,2H),2.31(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.02(s),163.48(s),158.74(s),156.50(s),155.68(s),154.33(s),147.19(s),141.55(s),140.37(s),137.55(s),132.71(s),130.23(s),130.15(s),127.85(s),125.58(s),125.25(s),125.11(s),124.73(s),121.60(s),112.27(s),98.09(s),49.92(s),18.67(s).ESI-MS:530.09m/z(M+H+)。
Rb15:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氯-2-氟苯基)乙酰胺
白色固体，产率57％，mp:214-218℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.43(d,J＝10.1Hz,1H),8.39(d,J＝9.6Hz,1H),8.27(d,J＝10.6Hz,1H),8.09(t,J＝8.3Hz,1H),7.85(d,J＝7.2Hz,1H),7.49–7.41(m,2H),7.40–7.28(m,2H),7.19(dd,J＝19.5,12.2Hz,6H),5.35(d,J＝10.4Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.35(s),163.47(s),158.74(s),156.53(s),155.69(s),154.30(s),150.88(s),147.17(s),141.57(s),140.37(s),130.22(s),127.62(s),126.24(s),125.54(s),125.10(s),124.66(s),123.01(s),121.59(s),120.30(s),112.25(s),97.99(s),49.95(s).ESI-MS:m/z 490.18(M+H+)。
Rb16:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
白色固体，产率63％，mp:116-120℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.93(d,J＝8.3Hz,1H),8.41(d,J＝7.2Hz,1H),8.29(d,J＝9.1Hz,1H),8.20(d,J＝7.2Hz,1H),8.11(t,J＝7.5Hz,1H),7.86(t,J＝8.5Hz,1H),7.74(d,J＝6.2Hz,1H),7.47(d,J＝7.5Hz,2H),7.21(dd,J＝21.9,8.1Hz,4H),5.30(d,J＝8.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.38(s),163.49(s),158.74(s),156.55(s),155.74(s),154.32(s),147.18(s),141.63(s),140.36(s),138.91(s),136.13(s),130.25(s),130.22(s),130.25–127.91(m),125.10(s),124.61(d,J＝10.5Hz),121.58(s),118.60(s),112.34(d,J＝15.8Hz),98.02(s),50.24(s).ESI-MS:m/z 584.00(M+H+)。
Rb17:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-硝基苯基)乙酰胺
白色固体，产率78％，mp:215-218℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),8.61(s,1H),8.40(s,1H),8.27(s,1H),8.10(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),7.93(dd,J＝14.5,8.2Hz,2H),7.63(t,J＝8.1Hz,1H),7.46(t,J＝7.4Hz,2H),7.26-7.17(m,5H),5.31(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.42(s),163.50(s),158.75(s),156.55(s),155.76(s),154.33(s),148.45(s),147.19(s),141.63(s),140.39(s),140.11(s),130.85(s),130.23(s),125.66(s),125.11(s),124.67(s),121.59(s),118.67(s),113.81(s),112.27(s),98.03(s),50.24(s).ESI-MS:m/z 483.15(M+H+)。
Rb18:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(对甲苯基)乙酰胺
白色固体，产率63％，mp:238-241℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.33(s,1H),8.39(s,1H),8.26(s,1H),8.09(d,J＝8.5Hz,1H),7.45(t,J＝7.1Hz,4H),7.28–7.15(m,5H),7.12(d,J＝8.1Hz,2H),5.22(s,2H),2.25(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ165.25(s),163.46(s),158.73(s),156.47(s),155.69(s),154.35(s),147.18(s),141.41(s),140.37(s),136.57(s),133.01(s),130.23(s),129.69(s),125.09(s),124.74(s),121.58(s),119.65(s),112.26(s),98.01(s),50.16(s),20.91(s).ESI-MS:m/z 452.30(M+H+)。
Rb19:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氰基苯基)乙酰胺
白色固体，产率55％，mp:218-223℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.81(s,1H),8.39(s,1H),8.27(s,1H),8.12–8.02(m,2H),7.80(d,J＝3.1Hz,1H),7.55(s,2H),7.46(t,J＝7.7Hz,2H),7.26-7.17(m,4H),5.28(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.29(s),163.49(s),158.74(s),156.54(s),155.75(s),154.34(s),147.18(s),141.59(s),140.37(s),139.80(s),130.89(s),130.23(s),127.70(s),125.10(s),124.68(s),124.28(s),122.37(s),121.59(s),119.05(s),112.27(s),112.17(s),98.02(s),50.20(s).ESI-MS:m/z 463.25(M+H+)。
Rb20:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(2,3,4-三氟苯基)乙酰胺
白色固体，产率59％，mp:234-237℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.45(s,1H),8.39(d,J＝1.9Hz,1H),8.27(s,1H),8.09(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),7.64(d,J＝7.5Hz,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,2H),7.34–7.27(m,1H),7.21(td,J＝14.7,8.0Hz,5H),5.33(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.37(s),163.49(s),158.74(s),156.53(s),155.72(s),154.34(s),147.19(s),141.60(s),140.37(s),130.23(s),125.10(s),124.68(s),124.03(s),121.58(s),119.01(s),112.44(s),112.27(s),98.02(s),49.83(s).ESI-MS:m/z 492.04(M+H+)。
Rb21:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
白色固体，产率67％，mp:236-240℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.82(s,1H),8.39(d,J＝1.9Hz,1H),8.25(d,J＝14.5Hz,1H),8.09(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),7.79(d,J＝8.5Hz,2H),7.70(d,J＝8.6Hz,2H),7.46(t,J＝7.8Hz,2H),7.21(td,J＝15.0,7.9Hz,4H),5.29(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.25(s),163.49(s),158.75(s),156.53(s),155.72(s),154.34(s),147.19(s),142.60(s),141.56(s),140.37(s),130.23(s),126.69(d,J＝3.6Hz),125.10(s),124.69(s),121.58(s),119.62(s),112.27(s),98.02(s),50.27(s).ESI-MS:m/z 506.23(M+H+)。
Rb22:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(2-氟-5-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
白色固体，产率66％，mp:228-230℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.95(s,1H),8.39(d,J＝1.6Hz,1H),8.27(s,1H),8.19(s,1H),8.09(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H),7.81(d,J＝8.6Hz,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,1H),7.46(t,J＝7.7Hz,2H),7.21(td,J＝14.9,8.0Hz,5H),5.29(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.37(s),163.49(s),158.74(s),156.55(s),155.75(s),154.34(s),147.19(s),141.62(s),140.37(s),138.49(s),132.77(s),130.23(s),127.44(s),125.10(s),124.61(dd,J＝24.4,8.9Hz),121.58(s),118.28(s),112.27(s),98.02(s),50.21(s).ESI-MS:m/z 524.15(M+H+)。
Rb23:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-硝基苯基)乙酰胺
白色固体，产率50％，mp:140-144℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.09(s,1H),8.40(d,J＝2.1Hz,1H),8.31–8.18(m,3H),8.10(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.83(d,J＝9.1Hz,2H),7.46(t,J＝7.8Hz,2H),7.26-7.17(m,4H),5.34(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.62(s),163.50(s),158.69(s),156.48(s),155.71(s),154.33(s),147.19(s),145.12(s),142.98(s),141.65(s),140.37(s),130.23(s),125.56(s),125.11(s),124.64(s),121.59(s),119.48(s),112.27(s),98.02(s),50.37(s).ESI-MS:m/z 483.15(M+H+)。
Rb24:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3,5-二甲基苯基)乙酰胺
白色固体，产率47％，mp:204-207℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.26(s,1H),8.32(s,1H),8.19(s,1H),8.02(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),7.39(t,J＝7.8Hz,2H),7.20–7.09(m,6H),6.64(s,1H),5.15(s,2H),2.15(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ165.38(s),163.46(s),158.72(s),156.46(s),155.74(s),154.35(s),147.17(s),141.42(s),140.37(s),138.92(s),138.27(s),130.23(s),125.57(s),125.10(s),124.75(s),121.57(s),117.43(s),112.27(s),98.00(s),50.20(s),21.54(s).ESI-MS:m/z 466.25(M+H+)。
Rb25:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-溴苯基)乙酰胺
白色固体，产率44％，mp:242-245℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.52(s,1H),8.32(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.02(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.51–7.41(m,5H),7.38(t,J＝7.9Hz,2H),7.14(td,J＝15.1,7.9Hz,4H),5.18(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ165.74(s),163.48(s),158.73(s),156.51(s),155.70(s),154.34(s),147.18(s),141.51(s),140.37(s),138.41(s),132.16(s),130.23(s),125.10(s),124.70(s),121.62(s),121.58(s),115.70(s),112.27(s),98.02(s),50.21(s).ESI-MS:m/z 516.09(M+H+)。
Rb26:2-(4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-溴苯基)乙酰胺
白色固体，产率67％，mp:163-167℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.64(s,1H),8.39(d,J＝2.1Hz,1H),8.26(s,1H),8.09(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.93(s,1H),7.47(dd,J＝14.7,7.1Hz,3H),7.34–7.15(m,7H),5.25(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ165.97(s),163.49(s),158.74(s),156.52(s),155.72(d,J＝4.1Hz),154.34(s),147.18(s),141.55(s),140.78–140.65(m),140.48(d,J＝21.9Hz),131.37(s),130.23(s),126.73(s),125.10(s),124.70(s),122.06(d,J＝4.9Hz),121.58(s),118.45(s),112.27(s),98.02(s),50.21(s).ESI-MS:m/z 516.00(M+H+)。
13)目标化合物Rc的制备
将中间体6(0.30g，1mmol)，溶于3ml DMF中，加入中间体13a-13c(1.2mmol)，K2CO3(0.21g，1.5mmol)，室温搅拌10h，反应完毕，反应倾入30ml冰水中，乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，得目标产物Rc，洗脱系统为二氯甲烷/甲醇＝150:1-50:1。
Rc1:4-((4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-N-甲基苯甲酰胺
白色固体，产率53％，mp:116-119℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.43–8.37(m,2H),8.30(s,1H),8.08(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.1Hz,2H),7.45(t,J＝7.8Hz,2H),7.35(d,J＝8.1Hz,2H),7.27-7.14(m,4H),5.62(s,2H),2.76(d,J＝4.5Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):166.73(s),163.46(s),158.75(s),156.64(s),154.97(s),154.32(s),147.26(s),141.58(s),140.43(s),140.39(s),134.35(s),130.20(s),127.93(s),127.82(s),125.08(s),124.68(s),121.56(s),112.22(s),98.06(s),50.00(s),26.68(s).ESI-MS:m/z 452.14(M+H+)。
Rc2:4-((4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-N-乙基苯甲酰胺
白色固体，产率49％，mp:171-175℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.42(t,J＝5.4Hz,1H),8.38(d,J＝2.2Hz,1H),8.30(s,1H),8.08(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.78(d,J＝8.2Hz,2H),7.45(t,J＝7.9Hz,2H),7.35(d,J＝8.1Hz,2H),7.27–7.14(m,4H),5.62(s,2H),3.31–3.21(m,2H),1.10(t,J＝7.2Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):166.04(s),163.45(s),158.74(s),156.62(s),154.97(s),154.32(s),147.26(s),141.57(s),140.43(s),140.35(s),134.53(s),130.20(s),127.90(s),127.88(s),125.07(s),124.68(s),121.56(s),112.21(s),98.05(s),50.02(s),34.46(s),15.25(s).ESI-MS:m/z 466.12(M+H+)。
Rc3:4-((4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-N-(叔丁基)苯甲酰胺
白色固体，产率58％，mp:182-186℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.37(d,J＝2.2Hz,1H),8.29(s,1H),8.07(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.72(s,1H),7.70(d,J＝3.4Hz,2H),7.45(t,J＝7.9Hz,2H),7.32(d,J＝8.2Hz,2H),7.26–7.14(m,5H),5.61(s,2H),1.34(s,9H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):166.54(s),163.46(s),158.75(s),156.62(s),154.97(s),154.34(s),147.25(s),141.54(s),140.42(s),140.06(s),135.80(s),130.22(s),128.11(s),127.75(s),125.09(s),124.70(s),121.57(s),112.23(s),98.06(s),51.19(s),50.07(s),29.02(s).ESI-MS:m/z 493.81(M+H+)。
14)目标化合物Rd的制备
将中间体15(0.30g，1mmol)，溶于3ml DMF中，加入不同取代溴苄(1.2mmol)，K2CO3(0.21g，1.5mmol)，室温搅拌10h，反应完毕，反应液倾入30ml冰水中，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为二氯甲烷/甲醇＝150:1-60:1，得目标产物Rd；将含硝基目标化合物Rd(1mmol)，溶于乙醇：水＝3:1溶液中，加入还原性铁粉(2mmol)，氯化铵(3mmol)，90℃回流5h,硅藻土热过滤，减压蒸除溶剂，加水，过滤得含氨基目标化合物Rd；将含氨基目标化合物Rd(0.5mmol)溶于THF中，冰浴加入DIEA(1mmol)，逐滴滴加不同取代酰氯(0.6mmol)，室温反应5h，减压蒸除溶剂，柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:1-40:1,得部分终产物Rd。
Rd1:1-(3-氨基苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率52％，mp:160-162℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.28(s,1H),7.66(d,J＝8.7Hz,2H),7.47–7.40(m,2H),7.20-7.11(m,5H),6.94(t,J＝8.0Hz,1H),6.46-6.43(m,3H),5.37(s,2H),5.11(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.66,157.55,156.79,156.38,154.75,149.31,143.79,138.20,130.61,130.53,129.46,128.40,124.26,119.46,119.44,115.48,113.57,113.24,97.69,50.51.ESI-MS:m/z409.11(M+H+)。
Rd2:N-(3-((4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)苯基)丙烯酰胺
白色固体，产率53％，mp:173-174℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.14(s,1H),8.30(s,1H),7.67(d,J＝7.6Hz,3H),7.52(s,1H),7.43(t,J＝7.4Hz,2H),7.29(t,J＝7.7Hz,1H),7.24–7.08(m,5H),7.03(d,J＝7.3Hz,1H),6.39(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.23(d,J＝16.8Hz,1H),5.73(d,J＝10.1Hz,1H),5.53(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ163.60,158.69,157.61,156.76,156.51,154.85,144.10,139.73,138.28,132.24,130.61,129.52,128.30,127.45,124.27,123.34,119.46,119.00,118.75,97.72,50.24.ESI-MS:m/z 463.04(M+H+)。
Rd3:(反)N-(4-((4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)苯基)-2-丁烯酰胺
白色固体，产率56％，mp:127-129℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.95(s,1H),8.29(s,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,2H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.51(s,1H),7.43(t,J＝7.8Hz,2H),7.26(t,J＝7.9Hz,1H),7.18-7.11(m,5H),7.00(d,J＝7.6Hz,1H),6.77(dq,J＝13.9,6.8Hz,1H),6.08(d,J＝15.3Hz,1H),5.52(s,2H),1.84(d,J＝6.6Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ163.93(s),158.69(s),157.60(s),156.76(s),156.49(s),154.84(s),144.08(s),140.42(s),140.01(s),138.20(s),132.91(s),130.61,130.55,129.43(s),128.31(s),126.39(s),124.27(s),122.99(s),119.46(s),118.90(s),118.66,97.72(s),50.26(s),17.99(s).ESI-MS:m/z477.12(M+H+)。
Rd4:N-(3-((4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)苯基)-2-氯乙酰胺
白色固体，产率60％，mp:166-168℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.30(s,1H),8.29(s,1H),7.67(d,J＝8.6Hz,2H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),7.43(t,J＝7.9Hz,3H),7.29(t,J＝7.9Hz,1H),7.20-7.11(m,5H),7.05(d,J＝7.7Hz,1H),5.53(s,2H),4.20(s,2H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.76,158.80,156.87,156.21,154.19,144.81,137.36,137.01,130.01,129.96,129.63,127.16,124.90,124.16,119.77,119.62,119.14,98.26,50.70,42.85.ESI-MS:m/z 485.23(M+H+)。
Rd5:1-(4-硝基苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率49％，mp:178-181℃，，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),8.20(d,J＝8.6Hz,2H),7.67(d,J＝8.5Hz,2H),7.51(d,J＝8.6Hz,2H),7.43(t,J＝7.8Hz,2H),7.22–7.09(m,5H),5.72(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.74(s),157.68(s),156.68(d,J＝4.5Hz),155.08(s),147.38(s),145.22(s),144.60(s),130.58(d,J＝5.9Hz),129.13(s),128.08(s),124.29(s),119.45(d,J＝5.2Hz),97.78(s),49.56(s).ESI-MS:m/z439.21(M+H+)。
Rd6:1-(4-氨基苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率51％，mp:165-168℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.31(s,1H),8.20(d,J＝8.4Hz,3H),7.69(d,J＝8.3Hz,2H),7.56–7.40(m,5H),7.23–7.09(m,5H),5.73(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.75,157.70,156.71,156.66,155.09,147.38,145.21,144.62,130.60,130.55,129.18,129.13,128.09,124.29,119.48,119.43,97.80,49.57.ESI-MS:m/z 408.86(M+H+)。
Rd7:N-(3-((4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)苯基)-2-丁烯酰胺
白色固体，产率53％，1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.95(s,1H),8.29(s,1H),7.67(d,J＝8.6Hz,2H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),7.43(t,J＝7.9Hz,3H),7.29(t,J＝7.9Hz,1H),7.20-7.11(m,5H),7.05(d,J＝7.7Hz,1H),6.77(dq,J＝13.9,6.8Hz,1H),6.08(d,J＝15.3Hz,1H),5.52(s,2H),1.84(d,J＝6.6Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ163.93(s),158.69(s),157.60(s),156.76(s),156.49(s),154.84(s),144.08(s),140.42(s),140.01(s),138.20(s),132.91(s),130.61,130.55,129.43(s),128.31(s),126.39(s),124.27(s),122.99(s),119.46(s),118.90(s),118.66,97.72(s),50.26(s),17.99(s).ESI-MS:m/z 477.09(M+H+)。
Rd8:1-(4-溴苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率48％，mp:207-210℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.53(d,J＝8.3Hz,2H),7.43(t,J＝7.9Hz,2H),7.25(d,J＝8.3Hz,2H),7.19(d,J＝7.4Hz,1H),7.17–7.10(m,4H),5.54(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.71(s),157.64(s),156.65(d,J＝20.3Hz),154.88(s),144.26(s),137.06(s),131.98(s),130.70–130.20(m),128.21(s),124.28(s),121.25(s),119.45(d,J＝2.4Hz),97.77(s),49.60(s).ESI-MS:m/z 472.01(M+H+)。
Rd9:1-(4-(三氟甲基)苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶白色固体，产率62％，mp:182-185℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.69(dd,J＝15.7,8.1Hz,4H),7.52–7.38(m,4H),7.23–7.08(m,5H),5.67(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.74(s),157.68(s),156.68(d,J＝12.0Hz),155.03(s),144.44(s),142.35(s),130.58(d,J＝6.1Hz),128.77(s),128.33(d,J＝34.9Hz),126.02(d,J＝3.9Hz),124.29(s),123.29(s),119.46(d,J＝3.5Hz),97.78(s),49.73(s).ESI-MS:m/z 462.31(M+H+)。
Rd10:1-(3-溴苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率69％，mp:164-166℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.30(s,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,2H),7.54–7.47(m,2H),7.43(t,J＝7.1Hz,2H),7.29(dd,J＝17.8,7.2Hz,2H),7.22–7.08(m,5H),5.57(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.72(s),157.67(s),156.66(d,J＝13.4Hz),154.91(s),144.35(s),140.35(s),131.33(s),130.89(d,J＝16.5Hz),130.57(d,J＝6.8Hz),128.16(s),127.17(s),124.28(s),122.17(s),119.46(d,J＝3.1Hz),97.77(s),49.52(s).ESI-MS:m/z472.17(M+H+)。
Rd11:1-(3-氯苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率66％，mp:162-164℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.30(s,1H),7.66(d,J＝7.2Hz,2H),7.41(dd,J＝22.1,15.1Hz,5H),7.26–7.01(m,6H),5.57(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.73(s),157.67(s),156.66(d,J＝13.5Hz),154.92(s),144.35(s),140.10(s),133.59(s),131.03(s),130.57(d,J＝6.0Hz),128.57–127.77(m),126.77(s),124.28(s),119.46(d,J＝3.1Hz),97.78(s),49.58(s).ESI-MS:m/z 428.19(M+H+)。
Rd12:1-苄基-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率58％，mp:158-160℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(t,J＝7.9Hz,2H),7.36–7.25(m,5H),7.19(t,J＝6.0Hz,1H),7.13(t,J＝9.0Hz,4H),5.56(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.70(s),157.60(s),156.77(s),156.49(s),154.85(s),144.06(s),137.67(s),130.56(d,J＝7.8Hz),129.04(s),128.30(s),128.07(d,J＝5.7Hz),124.27(s),119.40(s),97.75(s),50.26(s).ESI-MS:m/z394.17(M+H+)。
Rd13:1-(4-甲基苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率52％，mp:176-179℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.65(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(t,J＝7.9Hz,2H),7.20(d,J＝7.7Hz,3H),7.17–7.10(m,6H),5.50(s,2H),2.25(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.67(s),157.58(s),156.78(s),156.44(s),154.76(s),143.95(s),137.25(s),134.67(s),130.55(d,J＝8.9Hz),129.56(s),128.24(d,J＝19.0Hz),124.26(s),119.45(s),97.74(s),50.06(s),21.14(s).ESI-MS:m/z408.18(M+H+)。
Rd14:4-((4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)苯甲腈
白色固体，产率56％，mp:178-181℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.81(d,J＝8.1Hz,2H),7.67(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(t,J＝6.7Hz,4H),7.16(dt,J＝18.2,8.3Hz,5H),5.67(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.75,157.69,156.72,156.65,155.06,144.54,143.27,133.09,130.63,130.57,128.84,128.12,124.31,119.49,119.45,119.16,110.87,97.78,49.79.ESI-MS:m/z 419.24(M+H+)。
Rd15:1-(4-氟苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率48％，mp:182-185℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.36(dd,J＝8.3,5.7Hz,2H),7.16(dt,J＝18.2,8.3Hz,7H),5.55(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ163.25(s),160.83(s),158.70(s),157.62(s),156.89–156.81(m),156.63(d,J＝23.4Hz),154.78(s),144.16(s),133.87(d,J＝3.0Hz),130.56(d,J＝8.0Hz),130.27(d,J＝8.3Hz),128.24(s),124.27(s),119.46(s),115.99(s),115.86(d,J＝21.5Hz),97.76(s),49.51(s).ESI-MS:m/z 412.29(M+H+)。
Rd16:1-(4-氯苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率70％，mp:200-202℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.47–7.38(m,4H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H),7.16(dt,J＝17.6,8.1Hz,5H),5.56(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.70(s),157.64(s),156.74(s),156.54(s),154.86(s),144.25(s),136.65(s),132.72(s),130.57(d,J＝7.6Hz),130.01(s),129.05(s),128.21(s),124.28(s),119.45(d,J＝2.2Hz),97.76(s),49.53(s).ESI-MS:m/z 428.23(M+H+)。
Rd17:1-(2-氟苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率69％，mp:144-146℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.65(d,J＝8.6Hz,2H),7.43(t,J＝7.9Hz,2H),7.36(dd,J＝14.0,6.9Hz,1H),7.22(dd,J＝16.5,8.1Hz,3H),7.14(dd,J＝15.9,7.1Hz,5H),5.61(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ161.55(s),159.11(s),158.70(s),157.63(s),156.76(s),156.51(s),154.98(s),144.29(s),130.57(d,J＝5.8Hz),128.22(s),125.09(d,J＝3.5Hz),124.34(d,J＝15.9Hz),119.45(d,J＝2.9Hz),116.01(s),115.80(s),97.72(s),43.91(s).ESI-MS:m/z 412.21(M+H+)。
Rd18:1-(2-氯苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率55％，mp:148-151℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,2H),7.49(d,J＝7.8Hz,1H),7.42(t,J＝7.9Hz,2H),7.29(dt,J＝22.3,7.4Hz,2H),7.21–7.09(m,5H),6.99(d,J＝7.5Hz,1H),5.65(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.74(s),157.66(s),156.75(s),156.55(s),155.22(s),144.47(s),134.89(s),132.38(s),130.56(d,J＝3.5Hz),129.85(d,J＝4.2Hz),128.20(s),127.93(s),124.25(s),119.44(s),97.75(s),55.38(s),47.77(s).ESI-MS:m/z 428.21(M+H+)。
Rd19:1-(2-溴苄基)-3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
白色固体，产率64％，mp:154-157℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.28(s,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,3H),7.43(t,J＝7.7Hz,2H),7.27(dt,J＝25.6,7.2Hz,2H),7.21–7.10(m,5H),6.91(d,J＝7.3Hz,1H),5.62(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.75(s),157.66(s),156.66(d,J＝19.0Hz),155.25(s),144.51(s),136.49(s),133.14(s),130.58(d,J＝4.0Hz),130.11(s),129.69(s),128.50(s),128.19(s),124.27(s),122.45(s),119.46(d,J＝2.3Hz),97.75(s),50.19(s).ESI-MS:m/z472.10(M+H+)。
15)目标化合物Rg的制备
将中间体17(0.30g，1mmol)，溶于3ml DMF中，加入中间体10a-10z(1.2mmol)，K2CO3(0.21g，1.5mmol)，室温搅拌10h，反应完毕，反应液倾入30ml冰水中，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，得目标产物Rg，洗脱系统为二氯甲烷/甲醇＝200:1-60:1。
Rg1：2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-氟苯基)乙酰胺
白色固体，产率61％，mp:216-220℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.51(s,1H),8.26(s,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.61(dd,J＝8.6,5.0Hz,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,2H),7.21–7.12(m,7H),5.22(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ170.81(s),158.66(s),157.65(s),157.41(s),157.36(s),156.72(s),156.37(s),155.64(s),144.12(s),135.50(s),135.47(s),130.62(s),130.47(s),128.25(s),124.30(s),121.46(s),121.38(s),119.52(s),119.42(s),116.02(s),115.80(s),97.73(s),50.05(s).ESI-MS:m/z 455.21(M+H+)。
Rg2：2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺
白色固体，产率58％，mp:242-244℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.49(s,1H),8.26(s,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(dd,J＝8.4,5.0Hz,2H),7.44(t,J＝7.7Hz,2H),7.22–7.11(m,7H),5.22(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ170.82(s),159.80(s),158.67(s),157.65(s),157.42(s),156.72(s),156.38(s),155.63(s),144.12(s),135.49(s),135.46(s),130.62(s),130.47(s),128.24(s),124.31(s),121.46(s),121.38(s),119.52(s),119.42(s),116.04(s),115.81(s),97.73(s),50.05(s).ESI-MS:m/z 455.19(M+H+)。
Rg3：2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氟苄基)乙酰胺
白色固体，产率47％，mp:229-232℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.75(t,J＝5.6Hz,1H),8.26(s,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,2H),7.37(q,J＝7.4Hz,1H),7.22–7.11(m,7H),7.07(t,J＝8.5Hz,1H),5.07(s,2H),4.34(d,J＝5.8Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ167.17(s),163.95(s),161.53(s),158.65(s),157.62(s),156.74(s),156.30(s),155.50(s),144.12(s),142.63(s),142.56(s),130.71(s),130.62(s),130.47(s),128.30(s),124.30(s),123.59(s),123.57(s),119.51(s),119.42(s),114.35(s),114.13(s),97.81(s),49.70(s),42.15(s).ESI-MS:m/z 469.25(M+H+)。
Rg4：2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-氟苯乙基)乙酰胺
白色固体，产率60％，mp:186-190℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.38-8.33(m,1H),8.25(s,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,2H),7.44(t,J＝7.7Hz,2H),7.30–7.03(m,11H),4.96(s,2H),3.22-3.27(m,2H),2.72(t,J＝6.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.78(s),158.62(s),157.61(s),157.26(s),156.74(s),156.30(s),155.49(s),144.01(s),135.93(s),130.90(s),130.99(s),130.91(s),130.62(s),130.47(s),128.32(s),124.30(s),119.50(s),119.41(s),115.53(s),115.32(s),97.72(s),49.04(s),40.87(s),34.48(s).ESI-MS:m/z 483.22(M+H+)。
Rg5：2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氯苯基)乙酰胺
白色固体，产率63％，mp:234-238℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.58(s,1H),8.26(s,1H),7.65(dd,J＝27.0,5.5Hz,4H),7.41(d,J＝18.7Hz,4H),7.28–7.05(m,5H),5.23(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ165.80(s),158.67(s),157.66(s),156.72(s),156.39(s),155.64(s),144.15(s),138.03(s),130.62(s),130.47(s),129.26(s),128.23(s),127.64(s),124.31(s),121.21(s),119.62(s),119.53(s),119.42(s),97.72(s),50.12(s).ESI-MS:m/z 471.13(M+H+)。
Rg6：2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺
白色固体，产率49％，mp:226-230℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.68(s,1H),8.26(s,1H),7.89(d,J＝4.7Hz,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.48–7.36(m,4H),7.22–7.11(m,5H),5.23(s,2H).ESI-MS:m/z 489.12(M+H+)。
Rg7：2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-氰基苯基)乙酰胺
白色固体，产率55％，mp:228-230℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.92(s,1H),8.26(s,1H),7.78(dd,J＝17.7,8.6Hz,5H),7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,2H),7.23–7.10(m,5H),5.29(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ170.84(s),158.67(s),157.67(s),156.71(s),156.57(d,J＝26.8Hz),155.64(s),144.24(s),143.23(s),133.90(s),130.55(d,J＝15.6Hz),128.16(s),124.32(s),119.56(t,J＝15.2Hz),105.87(s),97.71(s),50.23(s).ESI-MS:m/z 462.19(M+H+)。
Rg8:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氯-4-氰基苯基)乙酰胺
白色固体，产率61％，mp:219-224℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.10(s,1H),8.26(s,1H),8.02(d,J＝1.8Hz,1H),7.94(d,J＝8.6Hz,1H),7.68(d,J＝8.6Hz,2H),7.61(dd,J＝8.7,1.8Hz,1H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.22–7.11(m,5H),5.30(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.96(s),158.68(s),157.72(s),156.94–156.78(m),156.59(d,J＝24.9Hz),155.71(s),144.31(d,J＝6.6Hz),136.58(s),135.83(s),130.55(d,J＝15.1Hz),128.15(s),124.33(s),119.55(t,J＝13.6Hz),118.37(s),116.62(s),106.37(s),97.75(s),50.28(s).ESI-MS:m/z 496.24(M+H+)。
Rg9:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3,4-二氰基苯基)乙酰胺
白色固体，产率46％，mp:228-230℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.24(s,1H),8.29–8.24(m,2H),8.09(d,J＝8.7Hz,1H),8.01–7.93(m,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,2H),7.23–7.09(m,5H),5.32(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ167.13(s),158.67(s),157.71(s),157.04–156.72(m),156.57(d,J＝22.3Hz),155.70(s),144.38(s),143.45(s),135.66(s),130.53(d,J＝15.1Hz),128.11(s),124.32(s),123.60(d,J＝9.7Hz),119.47(d,J＝12.7Hz),116.53(s),116.16(d,J＝14.4Hz),108.77(s),97.74(s),50.27(s).ESI-MS:m/z 487.22(M+H+)。
Rg10:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-氰基-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
白色固体，产率48％，mp:226-230℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.27(s,1H),8.27(s,2H),8.13(d,J＝8.5Hz,1H),7.95(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(d,J＝8.6Hz,2H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.23–7.11(m,5H),5.33(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ167.17(s),158.58(s),157.72(s),156.69(s),156.34(s),155.66(s),144.42(s),143.55(s),137.16(s),132.15(s),130.63(s),130.47(s),128.09(s),124.33(s),122.64(s),121.49(s),119.55(s),119.42(s),116.98(s),116.16(s),102.55(s),97.72(s),50.29(s).ESI-MS:m/z 530.21(M+H+)。
Rg11:4-(2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙酰胺基)-2-氟-N-甲基苯甲酰胺
白色固体，产率66％，mp:241-243℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.94(s,1H),8.26(s,1H),8.09(d,J＝2.9Hz,1H),7.72–7.60(m,4H),7.44(t,J＝7.8Hz,2H),7.36(d,J＝8.3Hz,1H),7.23–7.10(m,5H),5.28(s,2H),2.76(d,J＝4.3Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.40(s),163.92(s),161.10(s),158.68(s),158.64(s),157.67(s),156.71(s),156.42(s),155.67(s),144.23(s),142.51(s),142.39(s),131.43(s),131.39(s),130.62(s),130.47(s),128.19(s),124.32(s),119.53(s),119.42(s),118.74(s),118.60(s),115.10(s),115.08(s),106.66(s),106.37(s),97.72(s),50.17(s),26.76(s).ESI-MS:m/z512.23(M+H+)。
Rg12:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
白色固体，产率69％，mp:208-212℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.73(s,1H),8.18(d,J＝13.8Hz,1H),8.02(s,1H),7.66(dd,J＝29.1,7.3Hz,3H),7.55–7.47(m,1H),7.37(s,3H),7.19–7.01(m,6H),5.21(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.33(s),158.69(s),157.69(s),157.18–156.88(m),156.57(d,J＝30.5Hz),155.71(s),144.25(s),139.80(s),130.55(d,J＝14.1Hz),130.47–130.45(m),130.03(d,J＝31.9Hz),128.22(s),125.86(s),124.31(s),123.24(s),120.45(s),119.48(d,J＝10.5Hz),115.74(d,J＝3.8Hz),97.76(s),50.15(s).ESI-MS:m/z 505.15(M+H+)。
Rg13:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(2-溴苯基)乙酰胺
白色固体，产率58％，mp:184-186℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.83(s,1H),8.27(s,1H),7.68(t,J＝7.2Hz,4H),7.47–7.41(m,2H),7.37(t,J＝7.5Hz,2H),7.21–7.12(m,5H),5.29(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.15(s),158.68(s),157.87(s),157.67(s),156.72(s),156.46(s),155.66(s),144.36(s),136.11(s),133.24(s),130.63(s),130.50(s),128.59(s),128.20(s),127.64(s),126.88(s),124.31(s),119.52(s),119.44(s),97.74(s),49.83(s).ESI-MS:m/z 515.13(M+H+)。
Rg14:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-溴-2-甲基苯基)乙酰胺
白色固体，产率60％，mp:264-268℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.99(s,1H),8.29(s,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.45(dd,J＝14.3,7.7Hz,3H),7.37(t,J＝8.8Hz,1H),7.23–7.08(m,7H),5.28(s,2H),2.30(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.09(s),158.63(s),157.66(s),156.70(s),156.34(s),155.59(s),144.21(s),137.55(s),132.68(s),130.55(d,J＝15.4Hz),130.12(s),128.23(s),127.86(s),125.41(d,J＝31.5Hz),124.32(s),119.48(d,J＝10.9Hz),97.78(s),49.83(s),18.68(s).ESI-MS:m/z 529.06(M+H+)。
Rg15:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氯-2-氟苯基)乙酰胺
白色固体，产率80％，mp:200-204℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.34(s,1H),8.20(s,1H),7.77(dd,J＝16.4,9.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.2Hz,2H),7.37(t,J＝7.6Hz,2H),7.27(t,J＝7.2Hz,1H),7.09(td,J＝12.5,8.2Hz,7H),5.27(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.43(s),158.68(s),157.69(s),156.87–156.74(m),156.57(d,J＝30.5Hz),155.67(s),144.25(s),130.55(d,J＝13.9Hz),128.22(s),127.71(d,J＝11.6Hz),126.25(s),125.54(d,J＝4.5Hz),124.31(s),123.04(s),120.38(d,J＝15.9Hz),119.48(d,J＝10.5Hz),97.75(s),49.89(s).ESI-MS:m/z 489.14(M+H+)。
Rg16:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
白色固体，产率77％，mp:184-187℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.83(s,1H),8.14(dd,J＝31.7,13.4Hz,3H),7.77(d,J＝8.6Hz,1H),7.64(dd,J＝15.5,8.5Hz,4H),7.37(t,J＝7.4Hz,2H),7.17–7.02(m,6H),5.21(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.46(s),166.06(s),158.68(s),157.70(s),156.71(s),156.44(s),155.70(s),144.29(s),138.94(s),136.14(s),130.54(d,J＝14.1Hz),129.26(s),128.18(s),124.55(s),124.31(s),119.48(d,J＝11.3Hz),118.60(s),112.41(s),97.75(s),50.17(s).ESI-MS:m/z 583.07(M+H+)。
Rg17:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-硝基苯基)乙酰胺
白色固体，产率71％，mp:236-240℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.61(s,1H),8.26(s,1H),7.97–7.89(m,2H),7.72–7.61(m,3H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.22–7.11(m,5H),5.29(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.51(s),158.67(s),157.68(s),156.70(s),156.44(s),155.69(s),148.44(s),144.28(s),140.11(s),130.86(s),130.55(d,J＝15.0Hz),128.17(s),125.65(s),124.32(s),119.48(d,J＝10.5Hz),118.67(s),113.79(s),97.74(s),50.16(s).ESI-MS:m/z482.22(M+H+)。
Rg18:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(对甲苯基)乙酰胺
白色固体，产率69％，mp:222-226℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.27(d,J＝7.4Hz,1H),8.19(s,1H),7.61(d,J＝8.5Hz,2H),7.38(dd,J＝16.4,8.0Hz,5H),7.15–7.09(m,2H),7.08–7.03(m,5H),5.14(s,2H),2.18(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ165.34(s),158.66(s),157.65(s),156.73(s),156.36(s),155.64(s),144.08(s),136.59(s),133.00(s),130.55(d,J＝14.8Hz),129.69(s),128.28(s),124.31(s),119.54(t,J＝11.2Hz),97.74(s),50.09(s),20.91(s).ESI-MS:m/z 451.20(M+H+)。
Rg19:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-氰基苯基)乙酰胺
白色固体，产率59％，mp:236-238℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.77(s,1H),8.20(s,1H),7.99(s,1H),7.79–7.71(m,1H),7.62(d,J＝8.6Hz,2H),7.50–7.45(m,2H),7.37(t,J＝7.9Hz,2H),7.15–7.03(m,5H),5.21(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.37(s),158.68(s),157.69(s),156.72(s),156.43(s),155.70(s),144.26(s),139.83(s),130.87(s),130.55(d,J＝14.3Hz),128.20(s),127.68(s),124.29(d,J＝4.2Hz),122.37(s),119.48(d,J＝11.0Hz),119.06(s),112.16(s),97.75(s),50.13(s).ESI-MS:m/z 462.18(M+H+)。
Rg20:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(2,3,4-三氟苯基)乙酰胺
白色固体，产率71％，mp:224-226℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.46(s,1H),8.26(s,1H),7.71–7.58(m,3H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.34-7.27(m,1H),7.22–7.11(m,4H),5.31(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.46(s),158.67(s),157.69(s),156.72(s),156.42(s),155.67(s),144.26(s),138.43(d,J＝14.1Hz),130.55(d,J＝14.0Hz),128.20(s),124.31(s),123.97(d,J＝3.5Hz),119.56(s),119.55–118.71(m),112.37(dd,J＝17.7,3.6Hz),97.75(s),49.75(s).ESI-MS:m/z 491.17(M+H+)。
Rg21:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
白色固体，产率70％，mp:228-230℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.83(s,1H),8.26(s,1H),7.79(d,J＝8.6Hz,2H),7.75–7.66(m,4H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.23–7.11(m,4H),5.28(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.34(s),158.69(s),157.70(s),156.72(s),156.42(s),155.68(s),144.23(s),142.61(s),130.54(d,J＝13.7Hz),128.22(s),126.67(d,J＝3.6Hz),126.13(s),124.31(s),123.96(s),123.44(s),119.53(t,J＝10.5Hz),97.76(s),50.21(s).ESI-MS:m/z 505.16(M+H+)。
Rg22:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(2-氟-5-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
白色固体，产率59％，mp:158-160℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.93(s,1H),8.26(s,1H),8.19(d,J＝2.1Hz,1H),7.80(dd,J＝8.7,2.1Hz,1H),7.69(t,J＝8.5Hz,3H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.22–7.12(m,4H),5.27(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.46,158.68,157.70,156.72,156.71,156.44,155.70,144.29,138.50,132.76,130.61,130.47,128.18,127.14,124.79,124.79,124.49,124.31,119.53,119.42,118.33,97.75,50.14.ESI-MS:m/z 523.11(M+H+)。
Rg23:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-硝基苯基)乙酰胺
白色固体，产率60％，mp:198-202℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.10(s,1H),8.35–8.21(m,4H),7.83(d,J＝9.0Hz,2H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(t,J＝7.6Hz,2H),7.22–7.11(m,4H),5.33(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ170.83(s),158.67(s),157.69(s),156.70(s),156.45(s),155.67(s),145.13(s),144.28(s),142.97(s),130.55(d,J＝15.2Hz),128.16(s),125.57(s),124.32(s),119.68–119.23(m),97.73(s),50.28(s).ESI-MS:m/z 482.19(M+H+)。
Rg24:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3,5-二甲基苯基)乙酰胺
白色固体，产率64％，mp:250-254℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.30(s,1H),8.27(s,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.23–7.11(m,7H),6.72(s,1H),5.20(s,2H),2.22(s,6H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ165.47(s),158.65(s),157.62(s),156.73(s),156.35(s),155.67(s),144.07(s),138.95(s),138.27(s),130.55(d,J＝16.4Hz),128.27(s),125.55(s),124.30(s),119.47(d,J＝8.6Hz),117.39(s),97.70(s),50.11(s),21.55(s).ESI-MS:m/z 465.07(M+H+)。
Rg25:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(4-溴苯基)乙酰胺
白色固体，产率62％，mp:238-240℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.71(s,1H),8.25(s,1H),7.68(d,J＝8.6Hz,2H),7.62–7.48(m,5H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.24–7.09(m,5H),5.24(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ165.86(s),158.65(s),157.64(s),156.71(s),156.38(s),155.63(s),144.12(s),138.58(s),132.09(s),130.63(s),130.47(s),128.22(s),124.31(s),121.55(s),119.52(s),119.42(s),115.58(s),97.69(s),50.11(s).ESI-MS:m/z 515.12(M+H+)。
Rg26:2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-(3-溴苯基)乙酰胺
白色固体，产率74％，mp:188-192℃，1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.64(s,1H),8.26(s,1H),7.93(s,1H),7.68(d,J＝8.6Hz,2H),7.52–7.41(m,3H),7.32-7.26(m,2H),7.22–7.11(m,5H),5.24(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.06(s),158.67(s),157.66(s),156.72(s),156.41(s),155.66(s),144.19(s),140.60(s),131.39(s),130.63(s),130.47(s),128.21(s),126.72(s),124.32(s),122.09(s),122.00(s),119.53(s),119.43(s),118.42(s),97.71(s),50.12(s).ESI-MS:m/z515.01(M+H+)。

Claims (8)

1.1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物或其药用盐，其特征在于，具有如通式I所示的结构：
其中，X为如下所示的取代哌啶基、取代苄基或取代乙酰胺基：
R1是C1～6直链或支链取代酰基，C1～6直链或支链烷基；R2是氢，卤素，C1～6直链或支链烷基，氰基，三氟甲基，硝基；R3是氢，卤素，C1～6直链或支链烷基，氰基，三氟甲基，取代酰基，硝基；R4是氢，卤素，C1～6直链或支链烷基；R5是C1～6直链或支链烷基；R6是氢，卤素，C1～6直链或支链烷基，三氟甲基，氰基，C1～6直链或支链取代酰胺基；Y为碳，氮；n为0,1,2,3,4,5,6。
2.如权利要求1所述的1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物，其特征在于，R1是丙烯酰基，2-丁烯酰基，2-丁炔酰基，2-羟基乙酰基，2-羟基丙酰基，3-羟基-2,2-二甲基丙酰基，3-甲氧基丙酰基，氯乙酰基；R2是氢，氟，氯，溴，氰基，三氟甲基，硝基，甲基；R3是氢，氟，溴，氰基，乙酰基，甲基，三氟甲基，硝基，甲基酰胺基；R4是氢，氟，溴，甲基；R5是甲基，乙基，叔丁基；R6是氢，氟，氯，溴，甲基，三氟甲基，氰基，氯乙酰胺基，丙烯酰胺基，2-丁烯酰胺基；Y为碳，氮；n为0,1,2。
3.如权利要求1或2所述的1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物，其特征在于，选自下列化合物之一：
4.如权利要求1所述的1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物的制备方法，包括以下步骤：
合成路线如下：
试剂及条件：(a)苯酚,氢化钠(NaH),四氢呋喃(THF),80℃,12h；(b)醋酸钯(Pd(OAc)2),2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(X-PHOS),醋酸钾(KOAc),联硼酸频那醇酯,1,4-二氧六环,90℃,12h；(c)N-溴代丁二酰亚胺(NBS),N,N-二甲基甲酰胺(DMF),80℃,3h；(d)四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4),磷酸钾(K3PO4),1,4-二氧六环:水＝4:1v/v,135℃,30h；(e).N-BOC-3-羟基哌啶,三苯基膦(PPh3),偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD),THF,0℃,5h；(f)饱和HCl1,4-二氧六环溶液,r.t.,5h；(g)取代羧酸,HBTU,N,N-二异丙基乙胺(DIEA),DMF,r.t.,5h；(h)溴乙酰溴,碳酸氢钠(NaHCO3),乙酸乙酯:水＝1:1v/v,r.t.,2h；(i)碳酸钾(K2CO3),DMF,r.t.,10h；(j)草酰氯,二氯甲烷(DCM),DMF,r.t.；(k)取代伯胺,三乙胺(Et3N),THF,0℃～r.t.1h；(l)还原性铁粉，氯化铵，乙醇：水＝3:1v/v，90℃；(m)取代酰氯,DIEA,THF,0℃～r.t.,5h；
其中，R1～R6,n如权利要求1中通式I所述；
所述的取代羧酸为：2-羟基乙酸，2-羟基丙酸，3-羟基-2,2-二甲基丙酸，3-甲氧基丙酸；取代伯胺为：甲胺，乙胺，叔丁胺；取代酰氯为：丙烯酰氯，2-丁烯酰氯，2-丁炔酰氯，氯乙酰氯；
具体步骤如下：
(1)起始原料1与苯酚和NaH，在THF条件下反应得中间体2，中间体2与Pd(OAc)2,X-PHOS,KOAc和联硼酸频那醇酯，在1,4-二氧六环条件下反应得中间体3；原料4与NBS在DMF条件下反应得中间体5；中间体3和中间体5与Pd(PPh3)4和K3PO4在1,4-二氧六环和水的条件下反应得中间体6；
(2)中间体6与N-BOC-3-羟基哌啶,PPh3和DIAD，在THF条件下反应得到中间体7，中间体7与浓HCl在1,4-二氧六环条件下反应得到中间体8，中间体8与各种取代羧酸或取代酰氯碱性条件下缩合得到目标化合物Ra；
(3)不同取代胺9a-9z去溴乙酸乙酯反应得中间体10a-10z，10a-10z与中间体6在K2CO3条件下反应得到目标化合物Rb；
(4)原料11在草酰氯作用下得酰氯中间体12，进而与不同取代伯胺作用得中间体13a-13c，13a-13c与中间体6和K2CO3在DMF作用下反应得到目标化合物Rc；
(5)中间体5与原料14在Pd(PPh3)4催化用下得中间体15；
(6)中间体15与不同溴苄反应得部分终产物Rd，含硝基目标化合物Rd还原得含氨基目标化合物Rd，含氨基目标化合物Rd进一步与不同酰氯反应得部分终产物Rd；
(7)中间体15与中间体10a-10z和K2CO3在DMF作用下反应得到目标化合物Rg。
5.如权利要求3所述的1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物的制备方法，包括如下之一：
(1)化合物Ra1-Ra9的制备方法，包括如下步骤：
(i)取苯酚溶于无水四氢呋喃，冰浴搅拌，逐渐加入氢化钠，搅拌30min，80℃继续反应30min，冷却至室温，加入起始原料1，80℃回流12h，反应毕，冷却至室温，用水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得无色油状物质，硅胶柱层析石油醚：乙酸乙酯＝100：1，得中间体2；
(ii)取Pd(OAc)2，X-PHOS，溶于1,4-二氧六环，N2保护室温搅拌20min，再取中间体2溶于1,4-二氧六环，加入联硼酸频那醇酯,KOAc，将活化的配体溶液加入其中，N2保护，90℃反应12h，反应毕，硅藻土热过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析石油醚：乙酸乙酯＝100:1-40:1，得中间体3；
(iii)将起始原料4溶于DMF中，加入NBS,搅拌,80℃油浴加热，溶液颜色由淡黄色变为红色，反应3h，TLC检测，反应基本完全，冷却至室温，将反应液倒入冰水中，搅拌，析出大量黄色固体，过滤，滤饼用冰水洗涤，干燥，得中间体5；
(iv)取中间体3、中间体5、Pd(PPh3)4、K3PO4·3H2O，加入两颈瓶中，加入溶剂1,4-二氧六环：水＝4:1(v/v)溶解，超声脱去溶液中的氧气，用N2置换装置中的空气，N2保护，135℃油浴加热回流，反应30h后，TLC检测，反应基本完全；将反应液冷却至室温，用硅藻土过滤，将滤液减压蒸除，得黄色固体，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:1，得中间体6；
(v)取中间体6溶于无水THF，加入N-BOC-3-羟基哌啶，PPh3，冰浴下逐滴加入DIAD,冰浴反应5h，反应毕，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析石油醚：乙酸乙酯＝5：1，得中间体7；取中间体7，溶于饱和HCl二氧六环溶液，室温搅拌5h,反应毕，抽滤得中间体8；将中间体8，溶于DMF中，加入DIEA，取代羧酸HBTU或取代酰氯，室温搅拌10h，反应完毕，将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析为石油醚：乙酸乙酯＝5:1-1:1，得目标产物Ra；
合成路线如下：
试剂及条件：(a)苯酚,氢化钠(NaH),四氢呋喃(THF),80℃,12h；(b)醋酸钯(Pd(OAc)2),2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(X-PHOS),醋酸钾(KOAc),联硼酸频那醇酯,1,4-二氧六环,90℃,12h；(c)NBS,DMF,80℃,3h；(d)四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4),磷酸钾(K3PO4),1,4-二氧六环:水＝4:1v/v,135℃,30h；(e).N-BOC-3-羟基哌啶,三苯基膦(PPh3),偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD),THF,0℃,5h；(f)饱和HCl 1,4-二氧六环溶液,r.t.,5h；(g)取代羧酸,HBTU,N,N-二异丙基乙胺(DIEA),DMF,r.t.,5h；0℃～r.t.,5h；(m)取代酰氯,DIEA,THF,0℃～r.t.,5h；
所述的取代羧酸为：2-羟基乙酸，2-羟基丙酸，3-羟基-2,2-二甲基丙酸，3-甲氧基丙酸；取代酰氯为：丙烯酰氯，2-丁烯酰氯，2-丁炔酰氯，氯乙酰氯；
(2)化合物Rb1-Rb26的制备方法，包括如下步骤：
(i)取起始原料不同取代胺9a-9z,溶于乙酸乙酯:水＝1:1(v/v)中，加入NaHCO3,室温搅拌，逐滴加入溴乙酰溴,搅拌2h,反应完毕，加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤有机相，干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂，得不同取代溴乙酰胺10a-10z；
(ii)将中间体6，溶于DMF中，加入中间体10a-10z，K2CO3，室温搅拌10h，反应完毕，反应液倾入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝200:1-60:1，得目标产物Rb；
合成路线如下：
试剂及条件：(h)溴乙酸乙酯,NaHCO3,乙酸乙酯:水＝1:1v/v,r.t.,2h；(i)K2CO3,DMF,r.t.,10h；
(3)化合物Rc1-Rc3的制备方法，包括如下步骤：
(i)将起始原料11，溶于二氯甲烷中，再加入草酰氯，2滴DMF，于室温下搅拌反应，30min后TLC检测，反应完毕，减压蒸除溶剂，得到中间体12；将取代伯胺置于反应瓶中，加入THF，三乙胺，冰浴条件下搅拌，将溶于THF中的中间体12滴加入反应瓶中，滴加完毕后，于室温下反应；1h后TLC检测，反应完全，往反应液里加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，过滤，减压蒸除溶剂，干燥，得不同取代溴苄13a-13c；
(ii)将中间体6，溶于DMF中，加入中间体13a-13c，K2CO3，室温搅拌10h，反应完毕，反应液倾入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析二氯甲烷/甲醇＝150:1-50:1，得目标产物Rc；
合成路线如下：
试剂及条件(j)草酰氯,DCM,DMF,r.t.；(k)取代伯胺,Et3N,THF,0℃～r.t.1h；(i)K2CO3,DMF,r.t.,10h；
所述的取代伯胺为：甲胺，乙胺，叔丁胺；
(4)化合物Rd1-Rd19的制备方法，包括如下步骤：
(i)取原料14、中间体5、Pd(PPh3)4、K3PO4·3H2O，加入两颈瓶中，加入溶剂1,4-二氧六环：水＝4:1(v/v)溶解，超声脱去溶液中的氧气，用N2置换装置中的空气，N2保护，135℃油浴加热回流，反应30h后，TLC检测，反应基本完全；将反应液冷却至室温，用硅藻土过滤，将滤液减压蒸除，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:1，得中间体15；
(ii)将中间体15，溶于DMF中，加入不同取代溴苄，K2CO3，室温搅拌10h，反应完毕，反应液倾入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为二氯甲烷/甲醇＝150:1-60:1，得部分目标产物Rd；
(iii)将含硝基目标化合物Rd，溶于乙醇：水＝3:1溶液中，加入还原性铁粉，氯化铵，90℃回流5h,硅藻土热过滤，减压蒸除溶剂，加水，过滤得含氨基目标化合物Rd；
(iv)将含氨基目标化合物Rd溶于THF中，冰浴加入DIEA，逐滴滴加不同取代酰氯，室温反应5h，减压蒸除溶剂，柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:1-40:1,得部分终产物Rd；
合成路线如下：
试剂及条件：(d)四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4),磷酸钾(K3PO4),1,4-二氧六环:水＝4:1v/v,135℃,30h；(i)碳酸钾(K2CO3),DMF,r.t.,10h；(l)还原性铁粉，氯化铵，乙醇：水＝3:1v/v，90℃；(m)取代酰氯,DIEA,THF,0℃～r.t.,5h.
所述的取代酰氯为：丙烯酰氯，2-丁烯酰氯，氯乙酰氯；
(5)化合物Rg1-Rg26的制备方法如下：
(i)取原料14、中间体5、Pd(PPh3)4、K3PO4·3H2O，加入两颈瓶中，加入溶剂1,4-二氧六环：水＝4:1v/v溶解，超声脱去溶液中的氧气，用N2置换装置中的空气，N2保护，135℃油浴加热回流，反应30h后，TLC检测，反应基本完全；将反应液冷却至室温，用硅藻土过滤，将滤液减压蒸除，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:1，得中间体15；
(ii)将中间体15，溶于DMF中，加入中间体10a-10z，K2CO3，室温搅拌10h，反应完毕，反应液倾入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析为二氯甲烷：甲醇＝200:1-60:1，得目标产物Rg；
合成路线如下：
试剂及条件：(d)四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4),磷酸钾(K3PO4),1,4-二氧六环:水＝4:1v/v,135℃,30h；(i)碳酸钾(K2CO3),DMF,r.t.,10h。
6.如权利要求1-3任一所述的1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于为在制备抗套细胞淋巴瘤(MCL)药物中的应用。
8.一种抗套细胞淋巴瘤(MCL)的药物组合物，其特征在于包括权利要求1-3任一所述的1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
CN201811386835.XA 2018-11-20 2018-11-20 1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用 Withdrawn CN109369654A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811386835.XA CN109369654A (zh) 2018-11-20 2018-11-20 1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用
CN201911126051.8A CN111196813B (zh) 2018-11-20 2019-11-18 1,3,4-三取代吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811386835.XA CN109369654A (zh) 2018-11-20 2018-11-20 1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109369654A true CN109369654A (zh) 2019-02-22

Family

ID=65376840

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811386835.XA Withdrawn CN109369654A (zh) 2018-11-20 2018-11-20 1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用
CN201911126051.8A Active CN111196813B (zh) 2018-11-20 2019-11-18 1,3,4-三取代吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911126051.8A Active CN111196813B (zh) 2018-11-20 2019-11-18 1,3,4-三取代吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (2) CN109369654A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111018865A (zh) * 2019-10-17 2020-04-17 山东大学 1-取代苄基吡唑并嘧啶衍生物及其制备方法与应用
CN111087412A (zh) * 2019-12-31 2020-05-01 卓和药业集团有限公司 一类吡咯并嘧啶衍生物及其合成方法
CN111171035A (zh) * 2018-11-13 2020-05-19 山东大学 4-苯氧基苯基吡唑并嘧啶酰胺衍生物的制备方法和应用
CN112574216A (zh) * 2020-12-16 2021-03-30 天津济坤医药科技有限公司 一种化合物及其制备方法以及其在制备治疗抗癌药物中的应用
CN114957261A (zh) * 2022-05-17 2022-08-30 重庆文理学院 一种具有抗头颈癌作用的化合物及其制备方法和应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111662296B (zh) * 2020-06-02 2021-12-31 山东大学 一种含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物及其制备方法和应用
CN115521313B (zh) * 2021-06-24 2023-11-03 山东大学 一种降解btk蛋白的化合物及其制备方法和应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013177668A1 (en) * 2012-05-31 2013-12-05 Pharmascience, Inc. Protein kinase inhibitors
WO2014188173A1 (en) * 2013-05-20 2014-11-27 Redx Pharma Limited Pyrazolopyrimidine derivatives useful as inhibitors of bruton's tyrosine kinase
CN105503879A (zh) * 2014-10-20 2016-04-20 北京大学深圳研究生院 一种固定化蛋白的方法
CN105777759A (zh) * 2016-04-29 2016-07-20 杭州和正医药有限公司 一种布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂
WO2016180334A1 (zh) * 2015-05-12 2016-11-17 杭州和正医药有限公司 双位点不可逆布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂、组合物及其应用
CN106146518A (zh) * 2016-06-30 2016-11-23 苏州爱玛特生物科技有限公司 一种布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂中间体及其制备方法
CN107406454A (zh) * 2015-03-19 2017-11-28 浙江导明医药科技有限公司 优化的联合用药及其治疗癌症和自身免疫疾病的用途
WO2018090792A1 (zh) * 2016-11-15 2018-05-24 杭州和正医药有限公司 一种选择性布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂及其应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2201840B1 (en) * 2006-09-22 2011-11-02 Pharmacyclics, Inc. Inhibitors of Bruton's Tyrosine Kinase
EP2307025B1 (en) * 2008-07-16 2017-09-20 Pharmacyclics LLC Inhibitors of bruton's tyrosine kinase for the treatment of solid tumors
US7741330B1 (en) * 2009-10-12 2010-06-22 Pharmacyclics, Inc. Pyrazolo-pyrimidine inhibitors of Bruton's tyrosine kinase
WO2016151438A1 (en) * 2015-03-20 2016-09-29 Sun Pharmaceutical Industries Limited A process for the preparation of ibrutinib

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013177668A1 (en) * 2012-05-31 2013-12-05 Pharmascience, Inc. Protein kinase inhibitors
CN104379586A (zh) * 2012-05-31 2015-02-25 制药科学公司 蛋白激酶抑制剂
WO2014188173A1 (en) * 2013-05-20 2014-11-27 Redx Pharma Limited Pyrazolopyrimidine derivatives useful as inhibitors of bruton's tyrosine kinase
CN105503879A (zh) * 2014-10-20 2016-04-20 北京大学深圳研究生院 一种固定化蛋白的方法
CN107406454A (zh) * 2015-03-19 2017-11-28 浙江导明医药科技有限公司 优化的联合用药及其治疗癌症和自身免疫疾病的用途
WO2016180334A1 (zh) * 2015-05-12 2016-11-17 杭州和正医药有限公司 双位点不可逆布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂、组合物及其应用
CN105777759A (zh) * 2016-04-29 2016-07-20 杭州和正医药有限公司 一种布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂
CN106146518A (zh) * 2016-06-30 2016-11-23 苏州爱玛特生物科技有限公司 一种布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂中间体及其制备方法
WO2018090792A1 (zh) * 2016-11-15 2018-05-24 杭州和正医药有限公司 一种选择性布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
COLIMBUS,OHIO,US: "REGISTRY[online]", 《REGISTRY》 *
FANSHENG RAN ET AL.: "Discovery of pyrazolopyrimidine derivatives as potent BTK inhibitors with effective anticancer activity in MCL", 《BIOORGANIC CHEMISTRY》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111171035A (zh) * 2018-11-13 2020-05-19 山东大学 4-苯氧基苯基吡唑并嘧啶酰胺衍生物的制备方法和应用
CN111018865A (zh) * 2019-10-17 2020-04-17 山东大学 1-取代苄基吡唑并嘧啶衍生物及其制备方法与应用
CN111018865B (zh) * 2019-10-17 2021-01-15 山东大学 1-取代苄基吡唑并嘧啶衍生物及其制备方法与应用
CN111087412A (zh) * 2019-12-31 2020-05-01 卓和药业集团有限公司 一类吡咯并嘧啶衍生物及其合成方法
CN111087412B (zh) * 2019-12-31 2021-04-09 卓和药业集团有限公司 一类吡咯并嘧啶衍生物及其合成方法
CN112574216A (zh) * 2020-12-16 2021-03-30 天津济坤医药科技有限公司 一种化合物及其制备方法以及其在制备治疗抗癌药物中的应用
CN114957261A (zh) * 2022-05-17 2022-08-30 重庆文理学院 一种具有抗头颈癌作用的化合物及其制备方法和应用
CN114957261B (zh) * 2022-05-17 2023-06-23 重庆文理学院 一种具有抗头颈癌作用的化合物及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111196813B (zh) 2021-10-26
CN111196813A (zh) 2020-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109369654A (zh) 1，3-二取代-4-氨基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法和应用
ES2426951T3 (es) Imidazopiridazinacarbonitrilos útiles como inhibidores de quinasa
CN108794411B (zh) 某些化学实体、组合物及方法
CN108349940A (zh) 布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂
WO2016161952A1 (zh) 酪氨酸激酶抑制剂及包含该酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物
WO2014149164A1 (en) Mk2 inhibitors and uses thereof
CA2691100A1 (en) Protein kinase inhibitors and methods for using thereof
CN101707863A (zh) 蛋白激酶抑制剂及其使用方法
JP2006503081A (ja) 化学化合物
CN104926788B (zh) 取代哌啶类衍生物、含其的药物组合物及其在抗肿瘤中的应用
CN111393415B (zh) 一种杂芳腈类化合物及其应用
AU2017239625B2 (en) Novel heterocyclic carboxamides as modulators of kinase activity
KR20180094880A (ko) 5원 헤테로시클릭 아미드계 wnt 경로 억제제
CN109942505A (zh) 异噻唑啉酮类化合物及相应用途
JP2006516626A (ja) 化学的化合物
JP7190755B2 (ja) オキサジノキナゾリンおよびオキサジノキノリン系化合物、ならびに調製方法およびその使用
CN106565674A (zh) 一种八氢环戊烷并[c]吡咯衍生物及其制备方法和在医药上的用途
CN104788410B (zh) 一类苯环‑芳香环串联化合物、其制备方法和医药用途
CN113999210B (zh) 一组2-苯氨基-4-三氮唑基嘧啶类衍生物及其应用
CN109761957B (zh) 一种含有羟脯氨酸的化合物及其制备方法和应用
CN114573567B (zh) 一种吲唑环联三氮唑类化合物及其制备方法和应用
CN109824582B (zh) 一种丙氨酸衍生物及其制备方法和应用
WO2023031308A1 (en) Ccr2 inhibitors
CN103342665A (zh) 一种具有抑制组蛋白去乙酰化酶活性的化合物及其制备方法
Islam et al. Full Text HTML

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20190222