ES2572631T3

ES2572631T3 - Métodos de tratamiento de infecciones virales

Info

Publication number: ES2572631T3
Application number: ES09704809.4T
Authority: ES
Inventors: Ernest Randall Lanier; Merrick R. Almond; George R. Painter
Original assignee: Chimerix Corp
Current assignee: Chimerix Corp
Priority date: 2008-01-25
Filing date: 2009-01-23
Publication date: 2016-06-01
Anticipated expiration: 2029-01-23
Also published as: CN101977610A; CN105055432A; WO2009094190A2; IL207170A; MX2010008148A; JP5562255B2; EP2254582A4; JP2011510077A; ZA201005737B; CA2713105A1; AU2009206673B2; WO2009094190A3; US20110021464A1; IL242518A; HK1151237A1; EP2254582A2; WO2009094191A3; US8993542B2; AU2009206673A1; CN102670628A

Abstract

Un compuesto antiviral de Fórmula:**Fórmula** en combinación con al menos un agente activo antiviral adicional seleccionado del grupo que consiste en lamivudina, zalcitabina, emtricitabina, delavirdina, efavirnez, etravirina, amprenavir, atazanavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, ritonavir, tipranavir y maraviroc, para su uso en un método de tratamiento de un sujeto con infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), en el que el sujeto no ha recibido previamente un agente activo antiviral para dicho VIH, método que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad del compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero, un diastereómero, un enantiómero o un racemato del mismo, eficaz para tratar la infección por VIH e inhibir el desarrollo de resistencia hacia dicho compuesto en el sujeto.

Description

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en las que:

5 B es una base de purina o de pirimidina, incluyendo, pero sin limitación: adenina, 6-cloropurina, xantina, hipoxantina, guanina, 8-bromoguanina, 8-cloroguanina, 8-aminoguanina, 8-hidrazinoguanina, 8-hidroxiguanina, 8-metil-guanina, 8-tioguanina, 2-aminopurina, 2,6-diaminopurina, timina, citosina, 5-fluorocitosina, uracilo; 5bromouracilo, 5-yodouracilo, 5-etiluracilo, 5-etiniluracilo, 5-propiniluracilo, 5-propiluracilo, 5-viniluracilo, 5bromoviniluracilo;

10 R1 es H, metilo, etilo, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH(OH)CH3 o haloalquilo C1-6; R2 es fluoro, hidroxi, -OR2a, -BH3, alquilo C1-C8, alquenilo C2-8, alquinilo C2-8, heteroalquilo C1-8, heteroalquenilo C2-8, heteroalquinilo C2-8 o -NR'H; R2a es alquilo C1-8, alquenilo C2-8, alquinilo C2-8, heteroalquilo C1-8, heteroalquenilo C2-8, heteroalquinilo C2-8, -P(=O)(OH)2 o -P(=O)(OH)OP(=O)(OH)2,

15 R' es alquilo C1-8, alquenilo C2-8, alquinilo C2-8, heteroalquilo C1-8, heteroalquinilo C2-8, heteroalquenilo C2-8, arilo C6-10 o un resto de aminoácido, R3 es -O(CH2)mO(CH2)nCH3, donde m es de 2 a 5 (en algunas realizaciones, 2 o 3) y n es de 11 a 21 (en algunas realizaciones, 15 o 17); y X es selenio, azufre u oxígeno (en algunas realizaciones, oxígeno).

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y donde:

25 Y es N o CX; X se selecciona del grupo que consiste en H, halo, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, CN, CF3, N3, NO2, arilo C6-10, heteroarilo C6-10 y CORb; Rb se selecciona del grupo que consiste en H, OH, SH, alquilo C1-6, aminoalquilo C1-6, alcoxi C1-6 y tioalquilo C1

30 6; y R11 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-6, alquinilo C2-6, alquinilo C2-6, arilo C6-10 y carbonilo sustituido con un alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6 o arilo C6-10. El ejemplo de B se describe además en la patente de EE.UU. n.º 6.583.149.

Los ejemplos adicionales de la base B incluyen, pero sin limitación, los compuestos de fórmula general:

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donde:

Z es NH2 o hidroxilo;

5 L2 es un enlace covalente (es decir, está ausente), -N(-R15)-, N(-R15)C(=O)-, -O-, -S-, -S(=O)-o es -S(=O)2-, R13 es H, alquilo C1-6, heteroalquilo C1-6, alquenilo C2-6, arilo C6-10, arilalquilo C7-16, carbociclilo C3-10, heterociclilo C6-10 o heterociclilalquilo C7-16; R14 es H, halo, hidroxi, alcoxi, -O(CH2)xOC(=O)OR15 o OC(=O)OR15, en el que X es 2 o 3 a 10, 15 o 20; y R15 es H, alquilo C1-6, heteroalquilo C1-6, alquenilo C2-6, arilo C6-10, arilalquilo C7-16, ciclilo C3-10, heterociclilo C6-10 o

10 heterociclilalquilo C7-16.

Los ejemplos adicionales de la base B incluyen, pero sin limitación, los compuestos de la fórmula general:

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R16 y R17 se seleccionan, de manera independiente, del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 o cicloalquilo 15 C3-6, o N, R16 y R17 tomados conjuntamente para formar N3, heterociclilo C3-8, pudiendo estar cicloalquilo C3-6 y heterociclilo C3-8 opcionalmente sustituidos con uno o más alquilos C1-5.

Los compuestos activos ilustrativos (análogos de tenofovir) útiles para llevar a cabo la presente invención incluyen,

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donde m es de 2 a 5 (en algunas realizaciones, 3) y n es de 11 a 21 (en algunas realizaciones, 15 o 17), o una sal farmacéuticamente aceptable, o un estereoisómero, un diastereómero, un enantiómero o racemato de los mismos.

5 El compuesto para su uso en la invención es un compuesto de Fórmula III (también denominado CMX157 en el presente documento): imagen14

o una sal farmacéuticamente aceptable, o un estereoisómero, un diastereómero, un enantiómero o racemato de los 10 mismos.

Dichos compuestos se conocen y se describen, por ejemplo, en G. Painter et al., “Evaluation of Hexadecyloxypropil9-R-[2-(Phosphonomethoxy)Propyl]-Adenine, CMX157, as a Potential Treatment for Human Immunodeficiency Virus Type 1 and Hepatitis B Virus Infections, Antimicrobial Agents and Chemotherapy” 51, 3505-3509 (2007); patente de

15 EE.UU. n.º 7.034.014 concedida a Hostetler y patente de EE.UU. n.º 6.716.825 concedida a Hostetler, y/o se pueden preparar mediante la modificación de técnicas conocidas incluyendo, pero sin limitación, las descritas en las solicitudes de patente PCT WO2005/79812 A1 (Anadys Pharmaceuticals) y WO2008/10921 A2 (Gilead).

Además de los compuestos descritos en relación con las Fórmula I-III anteriores, se puede usar una variedad de

20 derivados lipídicos de fosfonatos de nucleótidos acíclicos tales como tenofovir como agentes activos en los métodos y en las composiciones proporcionados en el presente documento. En una realización, los agentes activos tienen las

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(por ejemplo, Tenofovir está enlazado directamente al grupo metileno de Fórmula V-X mediante el grupo fosfonatohidroxilo). 5 En algunas realizaciones de las Fórmulas V-X:

W1, W2 y W3 son cada uno, de manera independiente, -O-, -S-, o -O(CO)-;

n es 0 o 1; m es 0 o 1; p es 0 o 1;

10 R1 es alquilo o alquenilo C12-24 opcionalmente sustituido (por ejemplo, alquilo o alquenilo C12, C13, C14, C15, C16, C17, C18, C19, C20, C21, C22, C23 o C24); R2 y R3 son cada uno, de manera independiente, alquilo C1-24 o alquenilo C2-24 o alquinilo C2-24 opcionalmente sustituidos. D es tenofovir enlazado directamente a un grupo metileno como se representa en las Fórmulas V-X.

15 En otra realización, el compuesto activo tiene una de las siguientes estructuras: en las que R1 es un alquilo C8-24 opcionalmente sustituido, por ejemplo, alquilo C12-24, D es tenofovir enlazado directamente a un grupo metileno como se representa en las Fórmulas V-X.

20 Los compuestos activos desvelados en el presente documento, como se ha indicado anteriormente, se pueden proporcionar en forma de sus sales farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables son sales que conservan la actividad biológica deseada del compuesto precursor y no confieren efectos toxicológicos no deseados. Los ejemplos de dichas sales son (a) sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico y similares; y sales

25 formadas con ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido cítrico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tánico, ácido palmítico, ácido algínico, ácido poliglutámico, ácido naftalenosulfónico, ácido metanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido naftalenodisulfónico, ácido poligalacturónico, y similares; (b) sales formadas a partir de aniones elementales tales como cloro, bromo y yodo; y (c) sales derivadas de bases tales como

30 sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como las de litio, sodio y potasio, sales de metales alcalinotérreos tales como las de calcio y magnesio, y sales con bases orgánicas tales como diciclohexilamina y N-metil-Dglucamina.

Los compuestos activos descritos en el presente documento se pueden preparar de acuerdo con procedimientos

35 conocidos o variaciones de los mismos que serán evidentes para los expertos en la materia. Véase, por ejemplo, Painter et al., “Evaluation of Hexadecyloxypropyl-9-R-[2-(Phosphonomethoxy)Propyl]-Adenine, CMX157, as a Potential Treatment for Human Immunodeficiency Virus Type 1 and Hepatitis B Virus Infections, Amimicrobial Agents and Chemotherapy” 51, 3505 3509 (2007) y la publicación de solicitud de patente de EE.UU. n.º 2007/0003516, concedida a Almond et al.

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B. Agentes/compuestos antivirales adicionales

Los agentes activos antivirales incluyen inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores nucleósidos de la transcriptasa inversa (incluyendo dicho término en el presente documento los inhibidores nucleótidos de la

45 transcriptasa inversa), inhibidores no nucleósidos de la transcriptasa inversa, inhibidores de la integrasa, inhibidores de la entrada, inhibidores de la fusión, inhibidores de la maduración y combinaciones de los mismos. Se conocen numerosos ejemplos y se describen en, por ejemplo, la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos n.º 2006/0234982 concedida a Dahl et al. en la Tabla A de la misma, y en la Tabla A como se indica a continuación.

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diferenciadas que comprenden uno o más compuestos de la invención se pueden preparar de acuerdo con métodos convencionales. Las formulaciones de liberación controlada se pueden emplear para el tratamiento o la profilaxis de diversas infecciones microbianas bacterianas, particularmente infecciones bacterianas en seres humanos, infecciones por protozoos parásitos en seres humanos o infecciones virales en seres humanos causadas por especies microbianas que incluyen Plasmodium, Pneumocystis, virus del herpes (CMV, HSV 1, HSV 2, VZV y similares), retrovirus, adenovirus y similares. Las formulaciones de liberación controlada se pueden usar para el tratamiento de infecciones por VIH y afecciones relacionadas tales como la tuberculosis, malaria, neumonía por Pneumocystis, retinitis por CMV, SIDA, complejo relacionado con el SIDA (ARC) y linfadeopatía generalizada progresiva (PGL), y afecciones neurológicas relacionadas con el SIDA tales como esclerosis múltiple y paraparesia espástica tropical. Otras infecciones retrovirales humanas que se pueden tratar con las formulaciones de liberación controlada incluyen infecciones por el virus linfotrópico humano de linfocitos T e infecciones por VIH-2.

Potenciadores farmacocinéticos. Los compuestos de la invención se pueden emplear en combinación con potenciadores farmacocinéticos (a veces también denominados "agentes de refuerzo").

Una cantidad eficaz de un potenciador mejora o "refuerza" la farmacocinética de un compuesto. Una cantidad eficaz de un potenciador, por ejemplo, la cantidad requerida para aumentar un compuesto activo o compuesto activo adicional es la cantidad necesaria para mejorar el perfil farmacocinético o la actividad del compuesto en comparación con su perfil cuando se usa solo. El compuesto posee un perfil farmacocinético más eficaz de lo que sería sin la adición del potenciador. La cantidad de potenciador farmacocinético usada para mejorar la potencia del compuesto es, preferentemente, subterapéutica (por ejemplo, dosis inferiores a la cantidad de agente de refuerzo usado convencionalmente para el tratamiento terapéutico de la infección en un paciente). Una dosis de potenciación para los compuestos es subterapéutica para tratar la infección, pero lo suficientemente alta como para efectuar la modulación del metabolismo de los compuestos, de manera que su exposición en un paciente es potenciada por el aumento de la biodisponibilidad, el aumento de los niveles en sangre, el aumento de la semimedia, el aumento del tiempo hasta alcanzar la concentración máxima en plasma, la inhibición mayor/más rápida de la integrasa del VIH, RT o proteasa y/o la reducción del aclaramiento sistemático. Un ejemplo de potenciador farmacocinético es RITONAVIR™ (Abbott Laboratories).

Combinaciones. Las composiciones desveladas en el presente documento pueden incluir los compuestos activos descritos en el apartado A en combinación con uno o más (por ejemplo, 1, 2, 3) agentes activos adicionales tales como los descritos en el apartado B anterior, de manera análoga como se conoce en la técnica. Por ejemplo, las combinaciones de efavirenz (un NRTI), emtricitabina (un NNRTI) y tenofovir DF (un NRTI) se describen en, por ejemplo, Dahl et al., publicación de solicitud de patente de EE.UU. n.º 2007/0099902, concedida a Dahl et al. Los ejemplos específicos de dichas combinaciones incluyen, pero sin limitación: CMX157 o una sal farmacéuticamente aceptable, en combinación con:

(a): FTC/Efavirenz;

(b): 3TC/Efavirenz;

(c): AZT/3TC;

(d): FTC;

(e): 3TC;

(f): FTC/Isentress;

(g): 3TC/Isentress;

(h): PPL-100;

(i): FTC/TMC278;

(k): 3TC/TMC278;

(l): FTC/TMC125 o

(m): 3TC/TMC125.

D. Tratamiento de infecciones de compartimiento privilegiado

Como se ha señalado anteriormente, también se ha encontrado que los agentes activos desvelados en el presente documento, sorprendentemente, se asocian o se unen a partículas virales. Dado que las partículas virales migran o se filtran en compartimentos celulares o tisulares que, normalmente, no son de acceso general para los agentes terapéuticos activos (creando así un "depósito" esencialmente sin tratamiento de la infección cuando se administran sistémicamente dichos agentes a los sujetos), este hallazgo posibilita (a) el tratamiento de la infección en dichos compartimientos privilegiados; y (b) el uso de agentes activos en tratamientos profilácticos o microbicidas (donde la asociación o unión del agente activo con el virus antes de que ocurra la infección tiene beneficio terapéutico).

En general, un compartimiento privilegiado es un compartimiento celular o tisular por el que dicho virus penetra in vivo, por el que dicho agente activo no penetra de manera eficaz in vivo en ausencia de dicho virus, y al que dicho agente activo es portado in vivo por dicho virus cuando dicho agente activo se une a dicho virus. Por ejemplo, cuando el compartimento privilegiado es un compartimento tisular, puede ser cerebro (sistema nervioso central), linfoide o testículos. Los ejemplos de compartimentos celulares privilegiados incluyen, pero sin limitación, células dendríticas, microglios, monocitos/macrófagos y combinaciones de los mismos. Las composiciones y los métodos de

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Los datos mostrados en las siguientes Tablas 2 y 3 demuestran que CMX157 es activo contra todos los subtipos del VIH principales (A-G, O y VIH-2), variando CI50 de 0,2 a 7,2 nanomolar.

Tabla 2. Actividad del Compuesto de Chimerix CMX157 contra aislados del subtipo VIH-1 en PBMC

Aislado del HIV-1: Subtipo Punto final de RT

CI50 (nM): CT50 (nM) TI (CT50/CI50)

RW/92/009: A 1,75 >1.000 >571

UG/92/029: A 5,84 >1.000 >171

UG/92/037: A 2,30 >1.000 >435

ADA: B 1,08 >1.000 >925

BR/92/014: B 1,58 >1.000 >633

96USHIPS 7: B 4,80 >1.000 >208

JR-CSF: B 0,68 >1.000 >1.480

TH/92/026: B 0,44 >1.000 >2.278

BR/92/025: C 3,43 >1.000 >291

IN/93/101: C 0,53 >1.000 >1.892

MW/93/95 9: C 4,50 >1.000 >222

UG/92/001: D 5,16 >1.000 >194

UG/92/024: D 0,30 >1.000 >3.346

UG/92/046: D 0,96 >1.000 >1.039

TH/93/073: E 2,95 >1.000 >339

CMU08: E 2,81 >1.000 >356

CMU06: E 1,03 >1.000 >970

BR/93/019: F 6,40 >1.000 >156

BR/93/020: F 0,73 >1.000 >1.362

BR/93/029: F 1,03 >1.000 >972

JV1083: G 2,32 >1.000 >431

RU 132: G 1,63 >1.000 >615

G3: G 2,68 >1.000 >373

BCF01: O 7,18 >1.000 >139

BCF02: O 2,47 >1.000 >405

BCF03: O 5,29 >1.000 >189

Tabla 3. Actividad del Compuesto de Chimerix CMX157 contra el aislado de VIH-2 en PBMC

HIV-2 + Aislado: Punto final de RT

CI50 (nM): CT50 (nM) TI (CT50/CI50)

CDC310319: 1,77 >1.000 >564

CDC310342: 4,31 >1.000 >232

CBL-20: 4,48 >1.000 >223

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Para estos estudios, la sinergia se define como combinaciones de fármacos que producen volúmenes de sinergia superiores a 50. La actividad ligeramente sinérgica y la actividad altamente sinérgica se han definido operativamente como las que producen volúmenes de sinergia de 50-100 y > 100, respectivamente. Las interacciones con otros fármacos aditivos tienen volúmenes de sinergia en el intervalo de -50 a 50, mientras que los volúmenes de sinergia 5 entre -50 y -100 se consideran poco antagónicos y aquellos < -100 son altamente antagónicos. Al evaluar las interacciones a las concentraciones inhibidoras del 50 % (CI50) para los dos fármacos, se determina la respuesta de dosis media de tres experimentos para cada combinación de dos fármacos, y el intervalo de CI50 para los dos fármacos se evalúa como las dos concentraciones de fármaco que catalogan el valor de CI50 (datos no mostrados). Si una de las concentraciones de un fármaco en particular produce un porcentaje de inhibición media del 50 % ±

10 5 %, entonces esta concentración, más las dos a cada lado se incluyen en el intervalo de CI50. Posteriormente, las interacciones dentro del intervalo de CI50 de los dos fármacos se definieron operacionalmente como: 1) las interacciones con volúmenes de sinergia > 20 se consideran sinérgicas; 2) las interacciones con volúmenes de sinergia en el intervalo de -20 a 20 se consideran aditivas; y 3) las interacciones con volúmenes de sinergia < 20 se consideran antagonistas.

15 En general, se determina que CMX-157 tiene interacciones aditivas o sinérgicas para todas las combinaciones de dos fármacos realizadas con fármacos antirretrovirales aprobados por la FDA. Ninguna de las interacciones resulta ser antagónica. Esta conclusión de interacciones aditivas a sinérgicas para todas las combinaciones también se alcanza cuando se evalúan las interacciones en el intervalo de CI50 de los dos fármacos de cada combinación. Por el

20 contrario, como era de esperar, el control de antagonismo positivo de la estavudina en combinación con la ribavirina generó interacciones antagonistas.

Tabla 8. Eficacia antiviral de CMX157 en combinación con antirretrovirales aprobados en células CEM y MAGI-CCR5 (valores de confianza del 95 %)

Compuesto: Volumen de sinergia/antagonismo(nM2%, μM2% o nMμM%)1 Volumen de sinergia/antagonismo medio (nM2%, μM2% o nMμM%; n = 3)2

Resultado 1: Resultado 2 Resultado 3

Inhibidores nucleósidos de la transcriptasa inversa (NRTI)

Lamivudina (3TC): 87,5/-42,6 51,8/0 79,0/0 69,8/-11,3

Abacavir (ABC): 25,1/-35,8 0/-2,32 19,7/-12,1 14,9/-16,7

Zidovudina (AZT): 5,01/-67,8 32,7/0 0/-0,77 11,5/-21,7

Estavidina (d4T): 4,47/0 40,6/0 0,39/-1,83 15,2/-0,61

Zalcitabina (ddC): 154/0 80,0/0 131/-15,9 122/-5,29

Didanosina (ddI): 3,38/-1,01 3,04/0 29,6/0 12,0/-0,34

Emtricitabina (FTC): 61,5/0 72,0/0 84,1/0 72,5/0

Tenofovir (TFV): 17,6/-0,53 37,2/0 30,3/0 28,4/-0,18

Inhibidores no nucleósidos de la transcriptasa inversa (NNRTI)

Delavirdina (DLV): 152/0 68,4/0 1,01/-2,58 72,9/0

Efavirenz (EFV): 85,7/0 80,6/0 43,2/0 69,8/0

Etravirina (ETV): 34,9/-0,75 106/0 67,4/-0,87 69,0/-0,29

Nevirapina (NVP): 74,1/0 41,5/0 0/0 38,5/0

Inhibidores de la proteasa (PI)

Amprenavir (APV): 104/0 43,1/0 7,31/0 51,4/0

Atazanavir (ATV): 104/0 67,4/0 12,7/-0,72 61,5/-0,24

Darunavir (DRV): 109/0 11,5/-2,31 9,48/0 43,2/-0,54

Indinavir (IDV): 78,7/-0,56 62,7/0 17,6/0 53,0/-0,19

Lopinavir (LPV): 78,8/-0,31 28,3/0 59,8/-0,12 55,6/-0,14

Nelfinavir (NFV): 32,1/0 85,1/0 125/0 80,9/0

Ritonavir (RTV): 47,5/0 38,0/0 116/-2,61 66,4/0

Compuesto: Volumen de sinergia/antagonismo(nM2%, μM2% o nMμM%)1 Volumen de sinergia/antagonismomedio (nM2%, μM2% o nMμM%; n = 3)2

Resultado 1: Resultado 2 Resultado 3

Saquinavir (SQV): 123/-2,54 8,35/-0,81 3,93/0 45,2/-1,12

Tipranavir (TPV): 110/0 29,4/-8,60 16,8/0 52,2/-2,87

Inhibidores de la entrada

Maraviroc (MVC)3: 145/-3,82 14,1/-3,12 96,6/0 85,3/-2,31

Enfuvirtida (T-20): 0/0 3,05/0 0/0 1,02/0

Raltegravir (RAL): 18,4/0 1,92/0 82,6/0 34,3/0

1El programa MacSynergy II toma los datos en bruto de los experimentos individuales y calcula un valor positivo (sinergia) o negativo (antagonismo) para cada combinación de fármaco-fármaco. Los valores positivos se suman para dar un Volumen de sinergia y los valores negativos se suman para dar un Volumen de antagonismo (ambos valores se presentan para cada experimento).2Se combinan conjuntos de datos de la representación de la sinergia antiviral (95 %) de múltiples experimentos (n = 3), y se calculan las medias aritméticas para cada concentración de fármaco-fármaco. Los valores positivos y negativos se suman de forma individual para dar respectivamente volúmenes medios de interacciones sinérgicas y antagónicas.3Los resultados de eficacia antiviral de CMX157 en combinación con Maraviroc se realizaron en células MAGI-CCR5. El resto de evaluaciones se realizó en células CEM-SS.

Tabla 9 Interpretación del análisis MacSynergy antiviral para la eficacia de CMX157 en combinación confármacos antirretrovirales aprobados

Fármaco antirretroviral: Interpretación de resultados antivirales

Inhibidores nucleósidos de la transcriptasa inversa (NRTI)

Lamivudina (3TC): Ligeramente sinérgico

Abacavir (ABC): Aditivo

Zidovudina (AZT): Aditivo

Estavidina (d4T): Aditivo

Zalcitabina (ddC): Altamente sinérgico

Didanosina (ddI): Aditivo

Emtricitabina (FTC): Ligeramente sinérgico

Tenofovir (TFV): Aditivo

Inhibidores no nucleósidos de la transcriptasa inversa (NRTI)

Delavirdina (DLV): Ligeramente sinérgico

Efavirenz (EFV): Ligeramente sinérgico

Etravirina (ETV): Ligeramente sinérgico

Nevirapina (NVP): Aditivo

Inhibidores de la proteasa (PI)

Amprenavir (APV): Ligeramente sinérgico

Atazanavir (ATV): Ligeramente sinérgico

Darunavir (DRV): Aditivo

Indinavir (IDV): Ligeramente sinérgico

Lopinavir (LPV): Ligeramente sinérgico

Nelfinavir (NFV): Ligeramente sinérgico

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Fármaco antirretroviral: Interpretación de resultados antivirales

Ritonavir (RTV): Ligeramente sinérgico

Saquinavir (SQV): Aditivo

Tipranavir (TPV): Ligeramente sinérgico

Inhibidores de la entrada

Maraviroc (MVC): Ligeramente sinérgico

Enfuvirtida (T-20): Aditivo

Inhibidor de la integrasa

Raltegravir (RAL): Aditivo

Control de antagonismo positivo (células CEM-SS)

Estavudina/Ribavirina (d4T/RBV): Altamente antagonista a las concentraciones esperadas

Control de antagonismo positivo (células MAGI-CCR5)

No se observaron interacciones antagónicas dentro de los intervalos de concentraciones examinados para determinar la eficacia antiviral entre CMX157 y los veinticuatro fármacos antirretrovirales aprobados por la FDA. Se observó una interacción altamente sinérgica entre CMX157 y la zalcitabina, y se observaron interacciones ligeramente sinérgicas con lamivudina, emtricitabina, delavirdina, efavirenz, etravirina, amprenavir, atazanavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, ritonavir, tipranavir y maraviroc, lo que sugiere posibles interacciones beneficiosas con estos fármacos. Las interacciones de CMX157 con el resto de fármacos generaron resultados estrictamente aditivos. Por el contrario, el control de antagonismo positivo de la estavudina en combinación con la ribavirina mostró una interacción muy antagónica en todos los experimentos (volumen de antagonismo medio = -330 μM2% en las células CEM y -111 μM2% en las células MAGI-R5). Por lo tanto, la interpretación general de estos datos sugiere que el antagonismo de los efectos antivirales de los veinticuatro fármacos antirretrovirales aprobados por la FDA evaluados en este estudio no debería ser una cuestión problemática asociada con el uso de CMX157 en un entorno clínico.

Es importante señalar que no hubo pruebas de citotoxicidad sinérgica en las concentraciones de fármaco examinadas para CMX157 (10 μM = concentración más alta de ensayo). Esto era de esperar, porque ninguno de los fármacos es citotóxico en los intervalos de concentraciones evaluados. Se requerirían concentraciones mucho más altas de todos los fármacos (en torno a la concentración CT50) para examinar correctamente las posibles interacciones de citotoxicidad sinérgicas. Sin embargo, es importante documentar que no hay citotoxicidades sinérgicas notables observadas a concentraciones en las que los fármacos aprobados por la FDA muestran potentes propiedades antivirales.

EJEMPLO 4

La mutación distintiva para tenofovir (TFV) es K65R que, en general, se asocia con un aumento de 2 a 4 veces en la CI50 para el tenofovir y la falta de respuesta clínica al Viread. Los estudios in vitro diseñados para seleccionar mutantes resistentes a CMX157 usan VIH-1 de tipo silvestre como el inóculo primario y TFV como control positivo. Estos estudios se realizan mediante el paso en serie del VIH-1IIIB y VIH-1RF en las células CEM-SS usando concentraciones crecientes de TFV o CMX157. Se aumentan los niveles de fármaco tras la detección del crecimiento viral en cada paso usando procedimientos conocidos para un experto en la materia. Al término de cada paso, se secuencia la región de codificación de la transcriptasa inversa del genoma viral para identificar cualquier posible mutación asociada a la resistencia que pueda haber surgido en la combinación de virus.

Como se muestra en las Tablas 10 y 11, no hay resistencia a CMX157 a lo largo de los 9 pasos. Por el contrario, K65R fue seleccionado por TFV en el paso 8. Estos datos indican que puede ser más difícil para el VIH desarrollar resistencia hacia CMX157 que hacia TFV.

Tabla 10: Pasos de VIH-1IIIB en CMX157

Paso: Concentración de pasada deCMX157 (veces porencima de la CI50) Día de producción máxima de virusa (actividad deRT) Mutaciones observadas en RT del virus pasado Comentarios

1: 300 nM (2 x CI50) Día 6 (23.615 cpm) Ninguna Potente replicación del virus observada

2: 600 nM (4 x CI50) Día 6 (6.706 cpm) Ninguna Replicación reducida del virus observada

3: 900 nM (6 x CI50) Día 14 (11.364 cpm) Ninguna Replicación moderada del virus observada

4: 1.200 nM (8 x CI50) Día 6 (34.440 cpm) Ninguna Potente replicación del virus observada

5: 1.800 nM (12 x CI50) Día 6 (14.061 cpm) Ninguna Replicación moderada del virus observada

6: 2,400 nM (16X IC50) Día 7 (9.933 cpm) Mezcla de T2151 (población menor) Replicación del virus de nivel bajo a moderado observada; mezcla menor de T2151 poco probablemente asociada con la resistencia hacia CMX157 (no observada en el paso 7)

7: 2,800 nM (19X IC50) Día 5 (1.900 cpm) Ninguna Replicación del virus de nivel bajo observada a lo largo de 16 días en cultivo; prosigue con el paso 8 usando la misma concentración para dejar que el virus crezca.

8: 2,800 nM (19X IC50) Día 9 (18.638 cpm) Poblaciones mixtas, menores, observadas: E122K, T2001, Q207E, P272A, R277K, 1293V, P294Q, E297K y T400A Replicación del virus relativamente potente observada; mezclas menores de aminoácidos observadas poco probablemente asociadas con la resistencia hacia CMX157, estos cambios se informan basándose en las bajas alturas de los picos observadas en los cromatogramas. Sin embargo, la mayoría de estos picos bajos son probablemente aberraciones de la secuenciación.

9: 5,600 nM (36X IC50) Día 11 (1.585 cpm) Poblaciones mixtas, menores, observadas: E122K, D123E, T200I, Q207E, R211K, P272A, R277K, I293V, P294Q, E297K, I375V, T400A, N519S, A554T Replicación del virus de nivel bajo observada a lo largo de 13 días en cultivo; la actividad de RT alcanza un máximo el día 11 y cae los días 12 y 13. Por lo tanto, se usó el sobrenadante del día 11, aunque la actividad de RT es relativamente baja a 1.585 cpm. Mezclas menores de los aminoácidos presentes; poco probablemente asociadas con la resistencia hacia CMX157.

aDía tras la infección cuando se observó el nivel más alto de virus basándose en la actividad de RT. bmenor = la mutación es la menor población en la mezcla; principal = la mutación es la población principal; igual = alturas iguales de los picos. N/A = no aplicable (replicación del virus no observada o RT no secuenciada).

Tabla 11: Pasos de VIH-1IIIB en Tenofovir

Paso: Concentración de pasada de Tenofovir(veces por encimade la CI50) Día de producciónmáxima de virusa (actividad de RT) Mutaciones observadas en RT del virus pasado Comentarios

1: 10 μM (2 x CI50) Día 6 (3.525 cpm) Ninguna Replicación del virus de nivel bajo observada

2: 20 μM (4 x CI50) Día 7 (2.016 cpm) Ninguna Replicación del virus de nivel bajo observada

3: 30 μM (6 x CI50) Día 14 (2.062 cpm) Ninguna Replicación del virus de nivel bajo observada

4: 40 μM (8 x CI50) Día 6 (3.109 cpm) Ninguna Replicación del virus de nivel bajo observada

5: 40 μM (8 x CI50) Día 14 (1.788 cpm) Ninguna Replicación del virus de nivel bajo observada; prosigue con el paso 6 usando la misma concentración para dejar que el virus crezca.

6: 40 μM (8 x CI50) Día 19 (23.508) Ninguna Potente replicación del virus observada; importante aumento aparente en la replicación en comparación con los pasos 1-5

7: 45 μM (9 x CI50) Día 7 (24.408 cpm) Mezcla E300D (población menor) Potente replicación del virus observada; mezcla menor de E300D poco probablemente asociadas con la resistencia hacia el tenofovir (no observada en el paso 8)

8: 50 μM (10 x CI50) Día 9 (57.455 cpm) Mezcla E404D (menor) Mezcla G436E(menor) Potente replicación del virus observada; cambios de E404D y G436E posiblemente asociados con la selección de resistencia por el tenofovir

9: 55 μM (11 x CI50) Día 11 (25.458 cpm) Mezcla K65R (igual) Mezcla E404D (principal) Mezcla G436E (menor) Potente replicación del virus observada; mutación prototipo de resistencia hacia el tenofovir K65R comenzando a aparecer; las mutaciones E404D y G436E parecen estar asociadas con la resistencia hacia el tenofovir

10: 60 μM (12 x CI50) Día 7 (31.549 cpm) Mezcla K65R (principal) Mezcla E404D (menor) Mezcla G436E (menor) Potente replicación del virus observada; mutación prototipo de resistencia hacia el tenofovir K65R = población principal; las mutaciones E404D y G436E parecen estar asociadas con la resistencia hacia el tenofovir

Claims

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