SU1548182A1 - 5 @ -Фосфонаты 3 @ -азидо-2 @ ,3 @ -дидезоксинуклеозидов, вл ющиес специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ - Google Patents

5 @ -Фосфонаты 3 @ -азидо-2 @ ,3 @ -дидезоксинуклеозидов, вл ющиес специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ Download PDF

Info

Publication number
SU1548182A1
SU1548182A1 SU874404761A SU4404761A SU1548182A1 SU 1548182 A1 SU1548182 A1 SU 1548182A1 SU 874404761 A SU874404761 A SU 874404761A SU 4404761 A SU4404761 A SU 4404761A SU 1548182 A1 SU1548182 A1 SU 1548182A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
azido
cells
virus
aids virus
phosphonates
Prior art date
Application number
SU874404761A
Other languages
English (en)
Inventor
Александр Анатольевич Хорлин
Наталья Борисовна Тарусова
Наталья Борисовна Дяткина
Александр Антонович Краевский
Роберт Шалвович Бибилашвили
Георгий Артемьевич Галегов
Виктор Михайлович Жданов
Марина Николаевна Корнеева
Дмитрий Николаевич Носик
Светлана Николаевна Майорова
Вадим Максимович Шобухов
Original Assignee
Институт молекулярной биологии АН СССР
Институт Вирусологии Им.Д.И.Ивановского Амн Ссср
Всесоюзный кардиологический научный центр АМН СССР
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт молекулярной биологии АН СССР, Институт Вирусологии Им.Д.И.Ивановского Амн Ссср, Всесоюзный кардиологический научный центр АМН СССР filed Critical Институт молекулярной биологии АН СССР
Priority to SU874404761A priority Critical patent/SU1548182A1/ru
Priority to US07/425,197 priority patent/US5043437A/en
Priority to DE89901341T priority patent/DE3888530D1/de
Priority to PCT/SU1988/000271 priority patent/WO1989006238A1/ru
Priority to JP1501293A priority patent/JPH0689019B2/ja
Priority to EP89901341A priority patent/EP0354246B1/de
Priority to KR89701623A priority patent/KR960009930B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of SU1548182A1 publication Critical patent/SU1548182A1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение касаетс  сахаров, в частности 5Ъ-фосфонатов 3Ъ-азидо-2Ъ,3Ъ-дидезоксинуклеозидов общей ф-лы RO @ , где R - Ia)-CH2-P(O)(OH)2
IIa-IIг)-PH(O)OH
IIIa) -P(O)(CH3)OH
B-а) тимин-1-ил
б) цитозин-1-ил
в) аденин-9-ил
г) гуанил-9-ил,  вл ющихс  специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ, что может быть использовано в вирусологии и медицине. Цель - создание новых активных и малотоксичных веществ указанного класса. Синтез ведут восстановлением, например, 3Ъ-азидо-2Ъ,3Ъ-дидезокситиамидина с помощью диметилформамидной суспензии гидрида натри  с последующим добавлением диэтилоксиметиленфосоната. Выход целевых веществ 40-80%. Новые вещества менее токсичны, чем известные аналоги. 2 ил., 3 табл.

Description

Изобретение относитс  к молекул рной биологии, вирусологии и медицине и касаетс  группы новых соединений 5 -фосфонатов 3 -азидо-2 ,3 -диде- зоксинуклеозидов: 5 -метиленфосфонат 3 -азидо-2 ,3 -дидезоксинуклеоэидов (I), 5 -гидрофосфонат 37-аэидо-2 ,З - дидезоксинуклеозидов (II), 5 -метилфосфонат 3 -азидо-2 ,З -дидезоксинуклеозидов (ill) формулы
RO-/° B
О
No
О II
где la R- -СИ2-Р-ОН
ОН
О
Ц- -Р-ОН
н
о
II Р-ОН
д-СН:
В - а) тимин-1-ил; б) цитозин-1-ил; в) аденин-9-ил; г) гуанин-9-ил, которые избирательно подавл ют репро- дукцию вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ.
Целью изобретени   вл етс  снижение токсичности избирательных ингибиторов репродукции вируса СПИД в культуре клеток лимфоцитов человека , котора  достигаетс  применением в качестве веществ, блокирующих разм ножение вируса СПИД, соединений формулы (I-III).
Пример 1. Синтез 5 -метилен- фосфоната 3 -азидо-27,3 -дидезокси- тимидина (la).
К суспензии гидрида натри  (54 мг 2,25 моль) в 3 мл диметилформамида в течение 15-20 мин в атмосфере инерт ного газа добавл ют раствор З -ази- до-21 ,3 -дидезокситимидина (Azl) (200 мг, 0,75 моль) в 5 мл диметилформамида , перемешивают 30 мин при 20°С. Затем добавл ют раствор толу- олсульфоната диэтилоксиметиленфосфо- ната (240 мг, 0,75 моль) в 3 мл диметилформамида и интенсивно перемешивают 3 сут при 20°С. Ход реакции контролируют по ТСХ в системе В. По окончании реакции добавл ют 0,13 мл уксусной кислоты, реакционную массу упаривают, переупаривают с 5 мл диметилформамида . Остаток экстрагируют хлороформом (5«5 мл). Экстракты упаривают , остаток очищают на колонке с силикагелем 40/100 (12-2,5 см). Элюцию провод т 300 мл хлороформа, затем 400 мл смеси хлороформ-этанол (9:0, собира  фракции по 2 мл. Соответствующие фракции собирают и упари вают. Получают в виде масла 130 мг вещества с РЈ 0,63 (в), которое раст
5
5
0
Q
,
0
5
0
5
вор ют в 3 мл диметилЛормамида, добавл ют триметилсилилбромид (0,3 мл), при 4°С, перемешивают 30 мин и выдерживают еще 24 ч при 20°С. Реакционную массу упаривают, добавл ют 5 мл воды и триэтиламин до рН 9, выдерживают 1 ч и экстрагируют хлороформом ( мл). Водный слой упаривают , остаток очищают на колонке с целлюлозой ДЕ-32 в НСО -форме объемом 300 мл в линейном градиенте бикарбоната аммони  от 0 до 0,ЗМ, об- щий объем элюента 3 л. Фракции, содержащие соединение (Га), упаривают , переупаривают с водой (510 мл) и этанолом (3-20 мл).
Остаток экстрагируют 10 мл метанола , упаривают до 2 мл, добавл ют 30 мг NaCIO,}. и 5 мл ацетона. Осадок отдел ют, промывают ацетоном, сушат. Получают белое аморфное вещество, выход 82 мг, 40%, R 0,2 (А).
УФ-спектр:Амакс265 нм (Ј 9600, рН 1).
1Н-ЯМР-спектр (ДгО,Ј), м.д.: 1,95 д (ЗН, СН,, J СН,Н6 - 0,5 Гц); 2,60 м (2Н, Н2); 3,69 д (2Н, , J CHfcP 8,6 Гц); 3,70-4,80 м (ЗН, Н4 + 2Н5 ); 6,18 м (1Н, HP, J Hi , Н2 6 Гц); 7,54 д (1Н, Н6, J 0,5 Гц).
П р и м е р 2. Синтез гидрофосйю- ната 3 -азидо-2 ,3 -дидезокситимиди- на (IT a).
Раствор ют имидазол (0,50 г, 7,36 моль) в 15 мл. абс. ацетонитри- ла и охлаждают до 0°С. При перемешивании добавл ют треххлористьй фосфор (О,19 мл, 2,17 моль) и затем триэтиламин (1,05 мл, 7,54 моль). Реакционную смесь перемешивают 15 мин при 0°С, затем в течение 30 мин добавл ют по капл м раствор 3 -азидо-2 ,3 -диде- зокситимидина 135 мг (0,5 моль) в 10 мл ацетонитрила так, чтобы температура реакционной массы не поднима- лась выше +5 С.
Реакционную масу перемешивают 2 ч при 20°С, добавл ют 3,5 мл и через 30 мин упаривают. Удаление ацильных защит с аминогрупп гетероциклов провод т насыщенным раствором аммиака в метаноле при 20°С в течение 24 ч. Затем вещество нанос т на колонку с тоеперлом (525 см) и элюируют бикарбонатом аммони  в линейном градиенте концентраций от 0 до 0,3 М, общий объем 1 л. Соответствующие фракции
собирают и упаривают. Избыток соли удал ют многократным переупариванием с водой. Остаток лиофилизуют из воды Выход На 140 мг, 80% в расчете на аммонийную соль. R, (А): 0,25 (На).
УФ-спектр (вода) Амакс269 нм.
Врем  удерживани  на колонке Пис- leosil 120-7 NHU в линейном градиен- те КНгР04 от 0,05 до 1 М 7,2 мин, скорость потока 1 мл/мин.
мР-ЯМР-спектр (Д20,Ј), м.д.: 6,5 д (Ш, Н/, JHip 629 Гц, j s 6,3 Гц, J((|, 1,6 Гц). И
Н-ЯМР-спектр (Дг0,Ј ), м.д.: 7,66 д (1Н, Н6, JH6Cn, 1 Гц); 6,16 т (1Н, HP, Jn ,m. М Гц); 4,60-3,95 м (4Н, Н3 + Н4 + 2Н5 ); 2,55 (2Н, Н2); 1,92 д (ЗН, СН3,
JH6,CH3 Гц
П р и м е р 3. Синтез 5-гидрофосфо ната 3 -азидо-2 ,З -дидезоксицитиди- на (Нб), метод А.
Синтез (Нб) провод т, исход  из 150 мг, 0,5 моль 3 -азидо-2 , дидезокси-N -ацетилцитидина аналогично примеру 2.
Выход 116 94 мг, 62%, R 0,20, УФ-спектр (вода). А макс 273 нм. ВЭЖХ врем  удерживани  5,1 мин, услови  как в примере 2.
э Р-ЯМР-спектр (ДаО,Ј), м.д.: 6,4 д (1Н, Hf, Jn, - 631 Гц, J , 6,3 Гц, JJiH4t 1,5 Гц).
Н-ЯМР-спектр/(ДО, i ), м.д.: 7,66 д (1Н, Н5, JH5 ((6 8,0 Гц);
5.79д (1Н, Нб, JH5( H6 8,0 Гц);.
5,95 т (1Н, HI , JM,,HZ Гц); 4,21-3,89 м (2Н, Н3 + Н4 ); 3,843 .80м (2Н, Н5 ); 2,91-2,14 м (2Н,
Н21).
П р и м е р 4. Синтез-5 -гидрофос фоиата 3 -азидо-2 ,3 -дидезоксицити- дина {Нб), метод Б.
К раствору 252 мг (моль) З -азидо2 ,3 -дидезоксицитидина (AzC) в 10 мл абс. пиридина добавл ют
1,4 моль трибутиламмониевой соли фосфористой кислоты в 5 мл пиридина и далее 290 мг (1,4 моль) Ы,К -ди- циклогексилкарбодиимида (ДЦК). Через
3сут к реакционной смеси добавл ют 20 мл воды, перемешивают 1 ч, упари- вают досуха, остаток раствор ют в 200 мл воды, нанос т на колонку с
20 мл Даукса (НСОр, промывают в градиенте концентрации
0-0,5 М, затем 0,5 М , спирте элюируют Нб, упаривают досуха , остаток очищают еще раз на колонке (,0 см) с ДЕАЕ-целлюлозой (HCO-j), элюиру  градиентом концентрации ИНфНСО (0- 0,3 М).
Фракции.с веществом упаривают, пе- реупарнвают с водой и высушивают отгонкой абс. спирта. Выход 97 мг, 32%, константы как в примере 3.
П р и м е р 5. Синтез 5 -гидрофос- фоната 3 -азидо-2 ,3 -дидезоксиаде- ноэина (Ив), метод А.
Синтез Ив провод т, исход  из 190 мг (0,5 моль) 3 -азидо-2 ,3;-диде- зокси-Нб-бенэоиладенозина по методу, как в примере 2.
Выход Ив 116 мг, 66%, EJ. 0,18, УФ (вода) .МОКС260 нм, ВЭЖХ, врем  удерживани  в услови х примера 2-8, 9 мин.
Р-ЯМР-спектр (Д„0),§ , м.д.: 6,5 д (Ш, НР, Ju.p 630 Гц, 63 Гц, , 1,6 Гц).
1 Н-ЯМР-спектр RtO, о , м.д.: 8,42 с, (1Н, Н8); 8,18 с (lH, H2); 6,39 т (1Н, HI, JH,;JU 6,5 Гц); 5,05-4.22 м (2Н, НЗ + Н41); 4,16- 4,01 м (1Н, НЗ ); 3,06-2,52 м (2Н, Н2).
Пример 6. Синтез 5 -гидро- фосфоната З1 -азидо-2 ,3 -дидезокси- аденозина (Ив), метод Б.
Синтез Ив провод т, исход  из 275 мг О моль) 3 -азидо-2 ,3 -ди- дезокспаденозина (AzA), как в примере 4. Выход 70 мг, 20%, константы как в примере 5.
Пример 7. Синтез 5 -гндрофосг фоната 31-азидо-2 ,з -дидезоксигуано- зина (Иг), метод А.
Синтез Иг провод т, исход  из 225 мг (0,5 моль) 3 -азидо-2 ,3 -ди- дезокси-К2-пальмитоилгуанозина по методу, как в примере 2.
Выход (Иг) 97 мг,- 52%, R 0,14, УФ (вода),макс 250, 270 нм, ВЭЖХ, врем  удерживани  8,4 мин, услови  примера 2.,
ЯР-ЯМР-спектр (Дг0,5 , м. 6,45 д (1Н, Нр, JH, 630 Гц, J i 6,3 Гц, jJilH 1,5 Гц).
Н-ЯМР-спектр (), м.д.: 7,91 с (1Н, Н8 7 6,85 т (Ш, НГ ), JR4 . Н2 7,0 Гц); 4,85-4,00 м (4Н, H 4-k4- -2H5l)42,02-2,61 м (2Н, Н2).
В качестве источника вируса СПИД использовали перевиваемую лимфоблас- тоиднуто линию клеток человека - про5 дуцентов вируса СПИД - Н9/ШВ. Культура клеток была получена от д-ра Б. Галло, Национальный институт рака , США. Продукци  вируса клетками контролировалась в реакции непр мой
Ю иммунофлюоресценции, электронно-мик- роскопически и в реакции иммуно- блот. Клетки культивировали в среде
ровани  культуры неинфицированных кле ток Н9 из расчета мл суперпатанта культивируемой жидкости, содержащего
ч D
Примерб. Синтез 5 -гидро- фосфоната 3 -аэидо-2 ,3 -дидечокси- гуанозина (Иг), метод Б.
Синтез (Иг) провод т, исход  из 292 мг (1 моль) 3 -азидо-2 ,3 -диде- зоксигуанозина (AzG), как в примере 4. Выход 98 мг, 26%, константы как в примере 7.
П р и м е р 9. Синтез 5 -метил- фосфоната 31-азидо-2),3 -дидезоксити- мидина (ilia).
К раствору 3 -азидо-2 ,3 -дидезок- RPM1 1640 с 15%-ной инактивированной ситимидина (130 мг, 0,5 моль) в 2 мл сывороткой эмбриона коров, с триметилфосфата при 0-4 С прибавл ют )5 300 мкг/мл глутамина, 100 мкг/мл ген- в течение 3 ч дихлорметанфосфонат тамицина, 10 мМ НЕРЕ-буфера и выра- (200 мг, 1, 5 моль), перемешивают щивали в виде суспензии. Культураль- ночь при 4°С и 5 ч при Ј0°С. Реакцией- ную жидкость, содержащую вирус, цент- ную массу упаривают, к остатку добав- рифугировали при 5000 об/мин в тече- л ют при охлаждении до ОаС 5 мл во- 20 ние О №Ш и использовали дл  инфици- ды и 1 мл триэтиламина, выдерживают 1 ч и вновь.упаривают. Остаток очища ют хроматографией на колонке(20%4 см)
с целлюлозой ДЕ-32 в форме. Элю- приблизительно 10Ь вирусных частиц в цию провод т 3 л линейного градиента 25 1 мл на 1 мл клеточной суспензии, бикарбоната аммони  от 0 до 0,1 М. содержащей 10 клеток. Инфицирование Соответствующие фракции упаривают. клетки Н9 культивировали в греде КРМ.1 Избыток соли удал ют многократным 1640 с 15% инактивированной сыворот- переупариванием с водой. Остаток экст- кой эмбриона коров, 300 мкг/мл глута- рагируют Ю мл метанола, концентриру- 30 мина, 100 мкг/мл гентамицина, 100 мМ ют до 2 мл, добавл ют 30 мг NaC104 HEPE S-буфера и инкубировали при 37 С и 5 мл ацетона. Осадок отдел ют, про- Е увлажненной атмосфере 5% СО. Все мывают ацетоном, сушат. Выход 120 мг, изучаемые соединени  добавл лись в 33%, счита  на натриевую соль. Белое , среду непосредственно после инфицирозе вани  клеток вирусом. Учет результатов провод т через п ть-шесть суток после инфицировани  клеток. Реакцию непр мой иммунофлуоресценции проводили в фиксированных препаратах анти- 40 ген-содержащих клеток - продуцентов вируса СПИД. Подсчеты жизнеспособных клеток осуществл ли с использованием красител  трипанового синего в гемо- цитометрической камере Гор ева. 45 Р д опытов, в частности с AzT проводили в аналогичных услови х с использованием культуры лимфоцитов периферической крови здоровых
265 нм
аморфное вещество.
ГЦ 0,6 (А), УФ-спектр. акс (Ј9600).
(Н-ЯМР-спектр & , м.д.: 1,3 д (ЗН, CHf, Jc 17 Гц); 1,88 д (ЗН, СРг, JH6cH- Гц(; 2,43-249 м (2Н, Н2 , а.б); 3,80 - 4,90 м (ЗН, Н4 +2Н5 а,б); 6,16 т (1Н, НГ , 6,0 Гц); 7,60 д (III,
Н6, J 0,5 Гц).
Спектры ЯМР новых соединений регистрируют в RgO на спектрометре Varian XL - 100-15. В качестве внутреннего стандарта используют триме- тилфосфат в случае Р-ЯМР-спектров и тетраметилсилан в случае Н-ЯМР- спектров. Спектры УФ регистрируют на спектрофотометре Specord UV-vis М-40 (ГДР). ТСХ провод т на силуфоле в системах изопропанол-25%-ный водный аммиак-вода 7:1:2 (А) и хлороформ-этанол 9:1 (в).
Пример 10. Изучение свойств соединений I-III ингибировать репродукцию вируса СПИД.
50
55
доноров, выдел емых в градиенте фи- колла-изонака. За А8 ч до инфицировани  клеток в среду добавл ли фито- гемаггютинин концентрации Ю мкг/мл, а после инфицировани  вносили в среду 10%-ный раствор природного интер- лейкина-2.
,i
На фиг.1 и 2 и в ri6n.1, 2 приведены данные по изучению подавлени  вируса СПИД в клетках с помощью AzT,
В качестве источника вируса СПИД использовали перевиваемую лимфоблас- тоиднуто линию клеток человека - продуцентов вируса СПИД - Н9/ШВ. Культура клеток была получена от д-ра Б. Галло, Национальный институт рака , США. Продукци  вируса клетками контролировалась в реакции непр мой
иммунофлюоресценции, электронно-мик- роскопически и в реакции иммуно- блот. Клетки культивировали в среде
RPM1 1640 с 15%-ной инактивированной сывороткой эмбриона коров, с 300 мкг/мл глутамина, 100 мкг/мл ген- тамицина, 10 мМ НЕРЕ-буфера и выра- щивали в виде суспензии. Культураль- ную жидкость, содержащую вирус, цент- рифугировали при 5000 об/мин в тече- ние О №Ш и использовали дл  инфици-
ровани  культуры неинфицированных клеток Н9 из расчета мл суперпатанта культивируемой жидкости, содержащего
ч D
RPM1 1640 с 15%-ной инактивированной сывороткой эмбриона коров, с 300 мкг/мл глутамина, 100 мкг/мл ген- тамицина, 10 мМ НЕРЕ-буфера и выра- щивали в виде суспензии. Культураль- ную жидкость, содержащую вирус, цент- рифугировали при 5000 об/мин в тече- ние О №Ш и использовали дл  инфици-
приблизительно 10Ь вирусных частиц в 1 мл на 1 мл клеточной суспензии, содержащей 10 клеток. Инфицирование клетки Н9 культивировали в греде КРМ.1 1640 с 15% инактивированной сыворот- кой эмбриона коров, 300 мкг/мл глута- мина, 100 мкг/мл гентамицина, 100 мМ HEPE S-буфера и инкубировали при 37 С Е увлажненной атмосфере 5% СО. Все изучаемые соединени  добавл лись в среду непосредственно после инфициро
доноров, выдел емых в градиенте фи- колла-изонака. За А8 ч до инфицировани  клеток в среду добавл ли фито- гемаггютинин концентрации Ю мкг/мл, а после инфицировани  вносили в среду 10%-ный раствор природного интер- лейкина-2.
,i
На фиг.1 и 2 и в ri6n.1, 2 приведены данные по изучению подавлени  вируса СПИД в клетках с помощью AzT,
91
AzC, AzA и AzG (как контрол ) и fcoc- фонатов I-TIT. Как видно из этих данных , например АгТингнбирует репродукцию вируса СПИД, начина  с концентрации 1 мкК, хот  при этой концентраци общее количество выросших составл ет лишь 50% от контрол . Подавление роста клеток вызвано главным образом цнтотоксическим эффектом вируса (ана логично, как в контроле клеток с вирусом . Далее при более высоких концентраци х AzT начинает оказывать токсическое действие, так как количество клеток уменьшаетс  по мере по вышени  концентрации AzT (0,58-Ю6 клеток/мл при 5 мкМ и 0, клеток/мл при 10 мкМ). В то же врем  в случае новых соединений, например 1а и На, количество выросших клеток резко увеличиваетс  по сравнению с услови ми при низших концентраци х 1а и На (с 0,75 Ч 0е до 1-Ю кл/мл дл  1а и с 0,65«10 до 1,0-10 кл/мл дл  На).
При этом содержание инфицированных вирусом клеток дл  Та и На сохран етс  на уровне фонов (10%).
Данные экспериментов показывают, что все 5-фосйонаты 3 -азидо-2 ,3- дидезоксинуклеозидов эффективно подавл ют репродукцию вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека.
Пример 11. Определение токсичности веществ на клетках Н9/ШВ и МТ4 (табл.3).
К пробам суспензий по 1 мл клеток около 1 млн , растущих на среде , как в примере 0, после окончани  одной генерации размножени  (около 18 ч) прибавл ют 1-2 мкКюри L HJ тимидина, уд. активность 22-26 Кюри/ ммоль и затем ингибитор до концентраций 1, 10, 30, 100, 300 мкМ и 1 мМ. Растворы инкубируют половину периода генерации (около 9 ч) и клетки
2
10
о/мъшают иентриАугиропаниег-f (1,5 тыс оборотов в 1 мин, 10 мин), промывают средой еше 2-3 раза с подобным центрифугированием , обрабатывают тритоном XI00 (прибавл   его до концентрации 5%), нанос т на фильтры GF/C, фильтры промывают 5%-нон трихлор- уксусной кислотой. Включение радиоактивного материала в контроле около 60 тыс. имп/мин, фоновое включение 500-600 имп./мин.
Таким образом, соединени  формулы IIII ингибируют размножение вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека и про вл ют меньшую токсичность по сравнению с известными структурными аналогами (Фиг.1 и 2 и табл.1-3).

Claims (1)

  1. Формула изобретени 
    5- Фосфонаты 3 -азидо-2 ,3 -дидезоксинуклеозидов общей Формулы
    котфв
    N:
    О
    и
    где la) R--CH2-P-OH
    ОН
    О
    N - Ч
    На-г) t}- -P-OH I
    н о
    та) : д -р-он
    снг
    В - а) тимин-1-ил; б) цитозин-1-ил; в) аденин-9-ил; г) гуанин-9-нл,  вл ющиес  специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ.
    Таблиц
    4 дн  инкубации
    Примечание. Данные выражены в процентах к исходному состо нию 1,2-10 клеток в I мл.
    Таблица2
    ТаблицаЗ
    13
    К - контрольный эксперимент в-Вирус
    -клетки, инфицированные вирусом слн&
    -клетки, не содержащие вируса
    Фиг.1
    154818214
    Продолжение табл.3
    1t2 W s U
    а
    fff AzC в дней
    30
    10
    //Л
    15
    Uri
    ъ
    / Л
    У/7/ / //
    У/ Ш
    Е6 АъС
    Составитель Г. Коннова Редактор Н. Гунько Техред А.Кравчук
    Заказ 112
    Тираж 316
    ВНИИПИ Государственного комитета по изобретени м и открыти м при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушска  наб., д. 4/5
    S6 АгА
    Ег Az6
    30
    ,М
    ЗОмкМ
    SB AZA
    Фиг.г
    Ег Агб
    Корректор В. Кабаций
    Подписное
SU874404761A 1987-12-29 1987-12-29 5 @ -Фосфонаты 3 @ -азидо-2 @ ,3 @ -дидезоксинуклеозидов, вл ющиес специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ SU1548182A1 (ru)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU874404761A SU1548182A1 (ru) 1987-12-29 1987-12-29 5 @ -Фосфонаты 3 @ -азидо-2 @ ,3 @ -дидезоксинуклеозидов, вл ющиес специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ
US07/425,197 US5043437A (en) 1987-12-29 1988-12-20 5'phosphonates of 3'-azido-2',3'dideoxynucleosides
DE89901341T DE3888530D1 (de) 1987-12-29 1988-12-20 3'-Azido-2',3'-dideoxynucleosid-5'-phosphonate.
PCT/SU1988/000271 WO1989006238A1 (en) 1987-12-29 1988-12-20 5'-phosphonates 3'-azido-2',3'-dideoxynucleosides
JP1501293A JPH0689019B2 (ja) 1987-12-29 1988-12-20 ３′‐アジド‐２′，３′‐ジデオキシヌクレオシドの５′‐ホスホネート
EP89901341A EP0354246B1 (de) 1987-12-29 1989-07-19 3'-Azido-2',3'-dideoxynucleosid-5'-phosphonate
KR89701623A KR960009930B1 (en) 1987-12-29 1989-08-28 5'-phosphonates of 3'-azido-2,'3'-dideoxynucleosides

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU874404761A SU1548182A1 (ru) 1987-12-29 1987-12-29 5 @ -Фосфонаты 3 @ -азидо-2 @ ,3 @ -дидезоксинуклеозидов, вл ющиес специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1548182A1 true SU1548182A1 (ru) 1990-03-07

Family

ID=21366471

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU874404761A SU1548182A1 (ru) 1987-12-29 1987-12-29 5 @ -Фосфонаты 3 @ -азидо-2 @ ,3 @ -дидезоксинуклеозидов, вл ющиес специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ

Country Status (7)

Country Link
US (1) US5043437A (ru)
EP (1) EP0354246B1 (ru)
JP (1) JPH0689019B2 (ru)
KR (1) KR960009930B1 (ru)
DE (1) DE3888530D1 (ru)
SU (1) SU1548182A1 (ru)
WO (1) WO1989006238A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997049717A1 (fr) * 1996-06-25 1997-12-31 Ivan Igorevich Fedorov 3'-oxymino-2',3'-didesoxynucleosides et derives de ces derniers
WO2006062434A1 (en) * 2004-11-25 2006-06-15 Kukhanova Marina Konstantinovn Modified 5'- phosphonate azidothymidine-potential anti-viral preparations

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE68919169T2 (de) * 1988-08-16 1995-04-20 Nippon Shinyaku Co Ltd Nucleotid-Derivate.
US5559102A (en) * 1988-08-16 1996-09-24 Nippon Shinyaku Company, Limited Adenosine and guanosine-3'-5'-cyclic methylphosphonate derivatives
US5132414A (en) * 1990-05-10 1992-07-21 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Dideoxynucleoside-5'-phosphonoformic acid compounds
EP0477454A1 (en) * 1990-09-28 1992-04-01 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Novel phosphonate derivatives of certain nucleosides
US5672697A (en) * 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
FR2781229B1 (fr) * 1998-07-17 2001-11-30 Univ Nice Sophia Antipolis Nouveaux composes analogues des nucleotides, leurs procedes de preparation et leurs applications
WO2001010882A1 (en) * 1999-08-10 2001-02-15 Adani, Alexander Depot forms of modified nucleoside 5'-hydrogenphosphates as inhibitors of reproduction of human immunodeficiency virus and human hepatitis b virus
WO2005090370A1 (en) 2004-02-05 2005-09-29 The Regents Of The University Of California Pharmacologically active agents containing esterified phosphonates and methods for use thereof
US20070003608A1 (en) * 2005-04-08 2007-01-04 Almond Merrick R Compounds, compositions and methods for the treatment of viral infections and other medical disorders
JP2008535862A (ja) 2005-04-08 2008-09-04 キメリクス，インコーポレイテッド ポックスウイルス感染の治療のための化合物、組成物および方法
WO2009094190A2 (en) * 2008-01-25 2009-07-30 Chimerix, Inc. Methods of treating viral infections
WO2011011519A1 (en) 2009-07-21 2011-01-27 Chimerix, Inc. Compounds, compositions and methods for treating ocular conditions
JP2013501056A (ja) 2009-08-03 2013-01-10 キメリクス，インコーポレイテッド ウイルス感染およびウイルス誘発腫瘍を治療する組成物および方法
DK2534150T3 (en) 2010-02-12 2017-06-12 Chimerix Inc METHODS OF TREATING VIRUS INFECTION
US9278135B2 (en) 2010-04-26 2016-03-08 Chimerix Inc. Methods of treating retroviral infections and related dosage regimes

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3524846A (en) * 1967-06-02 1970-08-18 Syntex Corp Process for the didealkylation of phosphonate esters
US3560478A (en) * 1968-06-14 1971-02-02 Terrell C Myers Analogues of nucleoside phosphates
US4469863A (en) * 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4816570A (en) * 1982-11-30 1989-03-28 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Biologically reversible phosphate and phosphonate protective groups
US4507433A (en) * 1983-10-07 1985-03-26 The Johns Hopkins University Preparation of oligodeoxyribonucleoside alkyl or arylphosphonates
DK166805B1 (da) * 1985-03-16 1993-07-19 Wellcome Found Threo-isomeren af 3'-azido-3'-deoxythymidin til anvendelse ved behandling af eller profylakse for humane retrovirusinfektioner, anvendelse af forbindelsen til fremstilling af et laegemiddel med naevnte indikation og farmaceutisk praeparat indeholdende forbindelsen
DE3687069T2 (de) * 1985-03-16 1993-03-25 Wellcome Found Verwendung von 3'-azido-3'-deoxythymidin zur behandlung oder vorbeugung von menschlichen retrovirus-infektionen.
DK167377B1 (da) * 1985-09-17 1993-10-25 Wellcome Found 3'-azidopyrimidinnucleosider eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf til anvendelse ved behandling af eller profylakse for en human retrovirusinfektion
US4681933A (en) * 1986-05-01 1987-07-21 University Of Georgia Research Foundation, Inc. 2',3'-dideoxy-5-substituted uridines and related compounds as antiviral agents

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Mitsuya H., Eroder S. Strategy for antivirus teropy in AIDS. Nature, 1987, v. 325, № 6107, p. 773-778. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997049717A1 (fr) * 1996-06-25 1997-12-31 Ivan Igorevich Fedorov 3'-oxymino-2',3'-didesoxynucleosides et derives de ces derniers
WO2006062434A1 (en) * 2004-11-25 2006-06-15 Kukhanova Marina Konstantinovn Modified 5'- phosphonate azidothymidine-potential anti-viral preparations

Also Published As

Publication number Publication date
KR960009930B1 (en) 1996-07-25
DE3888530D1 (de) 1994-04-21
EP0354246B1 (de) 1994-03-16
WO1989006238A1 (en) 1989-07-13
JPH0689019B2 (ja) 1994-11-09
EP0354246A4 (de) 1990-05-14
EP0354246A1 (de) 1990-02-14
JPH02502827A (ja) 1990-09-06
US5043437A (en) 1991-08-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SU1548182A1 (ru) 5 @ -Фосфонаты 3 @ -азидо-2 @ ,3 @ -дидезоксинуклеозидов, вл ющиес специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ
EP0934325B1 (en) Mycophenolic bisphosphonate compounds
US5952294A (en) Peptidyl prodrugs and methods of making and using the same
US5055459A (en) Selective elimination of malignant cells from bone marrow by bis (acyloxy) propylphosphoramidates
McGuigan et al. Synthesis and anti-HIV activity of some haloalkyl phosphoramidate derivatives of 3′-azido-3′-deoxythymidine (AZT): potent activity of the trichloroethyl methoxyalaninyl compound
GB1591934A (en) Cyclosporin derivatives
WO1992008727A1 (en) L-2'-desoxyuridines and pharmaceutical compositions containing them
Moffatt et al. The total synthesis of coenzyme A
EP0263533A2 (en) A method for preparing the cytidine monophosphate of 5-acetamido-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galactononulosaminic acid
US4396623A (en) Carbocyclic analogs of uracil nucleosides as antiviral agents
KR0145680B1 (ko) "류스트로덕신"으로 명명된 신규 화합물, 그의 제조방법 및 그의 치료학적 용도
CA2044846A1 (en) Antagonists of immunosuppressive macrolides
WO1993012132A1 (fr) PHOSPHOTRIESTERS DE LA ddU, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE
KR880000094B1 (ko) 뉴클레오시드 유도체의 제조방법
Jones et al. Synthesis, properties, and biological activity of some nucleoside cyclic phosphoramidates
Li et al. Synthesis of a dinucleoside 3′-S-phosphorothiolate containing 2′-deoxy-3′-thioadenosine
US4740501A (en) Interference of b-type retrovirus replication with a tripeptide compound
Petrović et al. The effect of depolymerized deoxyribonucleic acid and deoxyribonucleotides on the survival of X-irradiated mammalian cells in culture
CA1248105A (en) Sparsomycin (s.sub.c-r.sub.s) derivative; pharmaceutical composition having anti-tumor activity
RU2187509C1 (ru) Производные 5'-h-фосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина и фармацевтические композиции на их основе
EP1991554B1 (en) Thiopyrophosphate organic compounds, method for preparing thereof and compositions containing them
JPH0453867B2 (ru)
US4482708A (en) 3', 5'-Dinucleoside phosphates of 5,6-dichloro-1-β-D-ribofuranosyl-1-benzimidazole and methods of making and using the same
Ingate et al. Synthesis and anti-HIV-1 Activity of [1-[2′, 5′-Bis-O-(Tert-Butyldimethylsilyl)-β-L-Ribofuranosyl] Thymine]-3′-Spiro-5 ″-(4 ″-Amino-1 ″, 2 ″-Oxathiole-2 ″, 2 ″-Dioxide)(L-TSAO-T), the L-enantiomer of the Highly Specific HIV-1 Reverse Transcriptase Inhibitor TSAO-T
US5739120A (en) Treatment of viral infections by administration of α- 1-(3-alkylthio-3-deoxy-2-O-acylglyceryl)!-ω 5'-(9-arabinosylpurinyl)! diphosphates or purine isosters thereof