ES2248109T3 - Composicon para el cuidado de la piel. - Google Patents

Abstract

Una composición tópica que comprende: (a) ácido linoleico conjugado y/o derivado del mismo; (b) un compuesto fenólico o mezclas del mismo; (c) un vehículo dermatológicamente aceptable; con la condición de que el compuesto fenólico no sea un filtro solar.

Description

Composición para el cuidado de la piel.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a composiciones tópicas para ser aplicadas sobre la piel humana y a sus usos para mejorar la condición y apariencia de la piel.

Antecedentes de la invención

La piel esta sujeta a deterioros debidos a afecciones dermatológicas, abuso ambiental (viento, aire acondicionado y calefacción central) o bien por el proceso normal de envejecimiento (cronoenvejecimiento), el cual puede ser acelerado por la exposición de la piel al sol (fotoenvejecimiento). En los últimos años se ha incrementado enormemente la demanda de composiciones cosméticas y procedimientos cosméticos para mejorar la apariencia y condición de la piel.

Los consumidores buscan cada vez más productos cosméticos antienvejecimiento que tratan o demoran los signos visibles del cronoenvejecimiento y fotoenvejecimiento en la piel tales como arrugas, líneas, flacidez, hiperpigmentación o manchas de la edad.

Los consumidores a menudo también buscan otros beneficios de los productos cosméticos además del antienvejecimiento. También el concepto de piel sensible aumentó la demanda de los consumidores de productos cosméticos que mejoran la apariencia y condición de la piel sensible, seca y/o escamosa y que alivian la piel roja y/o irritada. Los consumidores también desean productos cosméticos que tienen un efecto de control de aceite/sebo.

Mucha gente está interesada por el grado de pigmentación de su piel. Por ejemplo, las personas que tienen manchas de la edad o pecas pueden desear que las mismas sean menos pronunciadas. Otros pueden desear una reducción del oscurecimiento de la piel causado por la exposición solar o bien aclarar su color natural de piel. Para llenar estas necesidades se han realizado muchos intentos para desarrollar productos que reduzcan la producción de pigmento en los melanocitos. Sin embargo, las sustancias identificadas hasta el momento tienden a tener efectos secundarios no deseados, por ejemplo, irritación cutánea.

Por lo tanto tales sustancias no son adecuadas para uso cosmético o pueden ser aplicadas solamente en una concentración que produce un efecto de luminosidad de la piel menor que el deseado. Puede considerarse que el uso de una combinación de diferentes sustancias iluminadoras de la piel reduce los efectos secundarios, pero existe un riesgo importante de que usando tal combinación se reduzca la iluminación de la piel debido a sus efectos competitivos. Por lo tanto, existe la necesidad de mejorar la efectividad de los productos cosméticos para iluminar la piel, particularmente de modo que no irriten la piel.

El documento J07277939 describe una composición para el cuidado de la piel para mejorar el envejecimiento de la piel y la inflamación de la piel que contiene (A) Flor de Manita y (B) al menos uno de principios activos seleccionados del grupo de eliminadores de oxígeno, antioxidantes, activadores celulares, antiinflamatorios, inhibidores de la tirosinasa y agentes que retienen la humedad. Entre las muchas opciones descritas de ingredientes para el componente B se encuentran la quercetina, quercitolina, catequina, ácido gálico, ácido gamma linolénico y ácido eicosapentanoico.

El documento J05271046 describe una composición iluminadora de la piel que contiene un ácido graso insaturado que tiene de 18 a 22 carbonos y dos o más enlaces no saturados, tal como ácido linoleico y araquidónico y un polifenol. El documento W099/26588 describe formulaciones antienvejecimiento para el cuidado de la piel que comprenden ácido linoleico conjugado y lo que puedan contener opcionalmente los filtros solares convencionales, tal como las benzofenonas.

La técnica comentada anteriormente no describe una combinación sinérgica específica de ácido linoleico conjugado con un compuesto fenólico (que no es un filtro solar) ni tampoco describe el uso de tal combinación específica para el tratamiento de arrugas, piel sensible, piel seca, control de secreción de aceite/sebo o para iluminar de la piel. Los compuestos fenólicos que actúan como filtro solar se excluyen específicamente del alcance de la presente invención.

Se define aquí filtro solar como un ingrediente que provee un factor de protección solar (SPF) de por lo menos 2 comprobado en una formulación de producto cosmético para la piel humana usando el protocolo estandarizado descrito en Food and Drug Administration Monograph Sunscreen Drug Products for Over-The-Counter Human Use; Monografía Final publicada en el Registro Federal, Volumen 64, Nº 98, Mayo 21 de 1999, páginas 27666 hasta 27691.

Hemos encontrado ahora que el tratamiento y prevención efectivos de la piel normal pero con características cosméticas indeseables debidas al cronoenvejecimiento o fotoenvejecimiento, tales como arrugas, líneas, flaccidez, hiperpigmentación y manchas de la edad, puede obtenerse mediante la aplicación de composiciones cosméticas para la piel que comprenden, ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo en combinación con un compuesto fenólico con la condición de que el compuesto fenólico no sea un filtro solar. También hemos encontrado que el uso de tales composiciones cosméticas provee ventajosamente beneficios además del antienvejecimiento tales como calmar la piel irritada y/o sensible, controlar la secreción de aceite/sebo y para iluminar la piel.

Resumen de la invención

De acuerdo con el primer aspecto de la presente invención se provee una composición tópica que comprende:

(a)

ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo;

(b)

un compuesto fenólico o mezclas del mismo; y

(c)

un vehículo dermatológicamente aceptable;

con la condición de que el compuesto fenólico no sea un filtro solar.

De acuerdo con el segundo aspecto de la presente invención se provee un procedimiento cosmético para otorgar por lo menos un beneficio en el cuidado de la piel seleccionado de: tratamiento/prevención de la formación de arrugas, flaccidez, sequedad, envejecimiento y/o fotodañado de la piel; aumento de la deposición de colágeno en la piel, aumento de la producción de decorina en la piel, mejora de la reparación tisular; calmado de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejoramiento de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; iluminación de la piel o control de la secreción de aceite/sebo, dicho procedimiento comprende la aplicación sobre la piel de una composición cosmética como la descrita anteriormente.

La presente invención también abarca el uso de las composiciones de la invención para proveer al menos un beneficio en el cuidado de la piel seleccionado de tratamiento/prevención de la formación de arrugas, flaccidez, envejecimiento y/o fotodañado de la piel; aumento de la deposición de colágeno en la piel, aumento de la producción de decorina en la piel, mejora de la reparación tisular; calmado de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejoramiento de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; iluminación de la piel y control de la secreción de aceite/sebo.

De acuerdo con otro aspecto más de la presente invención se provee el uso de ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo en combinación con un compuesto fenólico o mezclas del mismo, con la condición de que el compuesto fenólico no sea un filtro solar, en una composición cosmética tópica para proveer por lo menos uno de los beneficios en el cuidado de la piel seleccionados de tratamiento/prevención de la formación de arrugas, flaccidez, envejecimiento y/o fotodañado de la piel; aumento de la deposición de colágeno en la piel, aumento de la producción de decorina en la piel, mejora de la reparación tisular; calmado de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejoramiento de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; iluminación de la piel y control de la secreción de aceite/sebo.

Los usos, procedimientos y composiciones de la invención proveen de esta manera beneficios antienvejecimiento que dan como resultado un mejoramiento en la suavidad y flexibilidad de la piel con un mejoramiento de la elasticidad y una reducción o demora en la aparición de arrugas y piel envejecida, con una mejora en el color de la piel. Se consigue una mejoría general en la condición, textura y apariencia, en particular con respecto a la apariencia general radiante, clara y juvenil de la piel. Los usos, procedimientos y composiciones inventados también son beneficiosos para aliviar y calmar la piel irritada y/o sensible, para iluminar la piel y para controlar la secreción de aceite/sebo. De este modo la presente invención provee ventajosamente una amplia variedad de beneficios para el cuidado de la piel.

El término tratamiento tal como se usa aquí incluye, dentro de su alcance, la reducción, demora y/o prevención de las afecciones de la piel mencionadas anteriormente que son normales pero cosméticamente indeseables tales como, arrugas, envejecimiento y/o fotodañado y/o piel irritada y la mejora en líneas generales de la calidad de la piel y la mejora de su apariencia y textura previniendo o reduciendo la irritación, la formación de arrugas y el aumento de la flexibilidad, firmeza, suavidad, flexibilidad y elasticidad de la piel. Las composiciones, procedimiento y usos de acuerdo con la invención pueden ser útiles para mejorar la piel que ya se encuentra arrugada, envejecida, fotodañada o irritada o bien para tratar la piel joven para prevenir o reducir estos cambios indeseados antes mencionados debido a un proceso normal de envejecimiento y fotoenvejecimiento.

Descripción detallada de la invención Ácido Linoleico Conjugado

El ácido linoleico conjugado (de aquí en adelante CLA) es un ácido graso diinsaturado de cadena larga (C18). CLA comprende un grupo de isómeros geométricos y de posición de ácido linoleico en el que son posibles varias configuraciones de doble enlace cis y trans en posiciones (6, 8), (7, 9), (8, 10), (9, 11), (10, 12) u (11, 13). De este modo existen veintidós isómeros de CLA diferentes.

La invención también incluye derivados del ácido libre que de este modo comprenden mitades de ácido linoleico conjugado. Los derivados de preferencia incluyen aquellos derivados de sustitución del grupo carboxilo del ácido, tal como ésteres (por ejemplo ésteres triglicéridos, ésteres monoglicéridos, ésteres diglicéridos, fosfoésteres), amidas (por ejemplo derivados de ceramida), sales (por ejemplo sales de metal alcalino y alcalinotérreos, sales de amonio); y/o aquellos derivados de la sustitución de la cadena carbonada C18, tal como los derivados alfa hidroxi y/o beta hidroxi.

En el caso de los derivados del éster triglicérido, se incluyen todos los isómeros de posición de los sustituyentes de CLA en el esqueleto de glicerol. Los triglicéridos deben contener por lo menos una mitad de CLA. Por ejemplo, de las tres posiciones esterificables del esqueleto de glicerol, las posiciones 1 y 2 pueden ser esterificadas con CLA y por otro lípido en la posición 3 o, como alternativa, el esqueleto de glicerol podría esterificarse por CLA en la posición 1 y 3 con otro lípido en la posición 2.

Los isómeros de CLA de mayor preferencia para ser usados en la presente invención son el isómero cis 9 trans 11 (c9 t11) o el trans 10 cis 12 (t10 c12). De preferencia al menos 1% en peso del CLA total (y/o mitades de CLA) presente en la composición están en la forma del isómero c9, t11 y/o t10, c12. De más preferencia al menos 20% y de mayor preferencia al menos 40% en peso del total de CLA y/o mitades de CLA presentes en la composición están en la forma del isómero c9, t11 y/o del isómero t10, c12. En una forma de realización de particular preferencia el ácido linoleico conjugado se enriquece en el isómero c9 t11 o t10, c12. Por enriquecido se quiere significar que al menos 50% en peso del CLA total y/o mitades de CLA presentes en la composición están en la forma del isómero cis 9, trans 11 o bien del trans 10, cis 12- de preferencia al menos 70%, de más preferencia al menos 80% y de mayor preferencia al menos el 90% en peso del total de CLA y/o mitades de CLA presentes en la composición están en la forma del isómero c9, t11 o del isómero t10 c12.

El CLA y/o derivados del mismo que comprenden mitades de CLA de acuerdo con la presente invención están disponibles comercialmente como aceites ricos en triglicérido de ácido linoleico conjugado tal como aceite Tung o como aceite de ricino deshidratado (Unichema). Un producto de mezcla de isómeros se consigue en Sigma y un CLA enriquecido con isómero t9 c11 se consigue en Matreya inc. Alternativamente, el CLA de acuerdo con las formas de realización de preferencia de la presente invención puede prepararse de acuerdo con el procedimiento descrito en documento WO 97/18320 cuyos contenidos se incorporan en el presente documento como referencia. Un procedimiento de preparación de preferencia se describe en el Ejemplo 1 y 2 a continuación.

Ya sea que se use el término ácido linoleico conjugado o CLA en esta memoria, ha de entenderse que se incluyen también los derivados del mismo que comprenden mitades de CLA. Las mitades de CLA se refieren a la(s) porción(es) de ácidos grasos CLA de un derivado de CLA.

El CLA, para ser usado de acuerdo con la presente invención está presente en la composición tópica en una cantidad efectiva. Normalmente, la cantidad total del principio activo está presente en una cantidad entre 0,0001% y 50% en peso de la composición. De más preferencia la cantidad es desde 0,01% hasta 10% y de mayor preferencia desde 0,1% hasta 5% con el fin de maximizar los beneficios a un mínimo costo.

Compuestos fenólicos

Los compuestos fenólicos pueden dividirse en al menos 10 clases diferentes, dependiendo de sus estructuras químicas básicas. Los compuestos incluyen fenoles simples (C_{6}), benzoquinonas (C_{6}), ácidos fenólicos (C_{6}-C_{1}), acetofenonas (C_{6}-C_{2}), ácidos fenilacéticos (C_{6}-C_{2}), ácidos hidroxicinámicos (C_{6}-C_{3}), fenilpropenos (C_{6}-C_{3}), cumarinas, isocumarinas,(C_{6}-C_{3}), cromonas (C_{6}-C_{3}), naftoquinonas (C_{6}-C_{4}), xantonas (C_{6}-C_{1}-C_{6}), estilbenos (C_{6}-C_{2}-C_{6}), flavonoides (C_{6}-C_{3}-C_{6}), lignanos, neolignanos (C_{6}-C_{3})_{2} y ligninas (C_{6}-C_{3})_{n}.

El término flavonoides representa un grupo muy grande de compuestos que consisten de dos anillos aromáticos unidos por una unidad de tres carbonos, por ejemplo C_{6}-C_{3}-C_{6}. La familia de los flavonoides incluye: isoflavonoides, flavonoles monoméricos, dihidroflavonoides, catequinas, epicatequinas (por ejemplo lauronas), leucoantocianadinas, proantocianadinas, antocianadinas, flavonas, flavononas, chalconas, dihidrochalconas, isoflavonas, neoflavonas, auronas, flavan 3 oles y antrocianinas. El término isoflavonoides también incluye isoflavonas, pterocarpanos, isoflavononas, rotenoides, isoflavanos e isoflavanoles.

Los compuesto fenólicos de preferencia para ser usados en las composiciones de la presente invención son los flavonoides que incluyen flavononas tales como naringenina, flavonoles tales como quercetina, catequina (por ejemplo epigalocatequingalato, EGCG), isoflavonoides tales como daidzeína, genisteína, licetina y también ácidos fenólicos, tales como ácido gálico y los polifenoles del té verde.

Se pueden conseguir quercetina, naringenina, daidzeína, genisteína, EGCG y polifenoles del té verde en Sigma. Los extractos de plantas que contienen los compuestos fenólicos también son adecuados para ser usados en la presente invención. Por ejemplo, rutin, onagra, cebolla, especies cítricas que contienen quercetina y naringenina, la soja contiene daidzeína y genisteína y las variedades de té verde tal como Camelia sinensis y assámica contiene EGCG y polifenoles del té verde.

Los compuestos fenólicos que son específicamente excluidos de la presente invención son aquellos que son convencionalmente usados como filtros solares, tales como el ácido paraaminobenzoico y las benzofenonas.

El compuesto fenólico o mezclas del mismo se emplean en la composición de la invención en una cantidad desde aproximadamente 0,01% hasta aproximadamente 10%, de preferencia en una cantidad desde aproximadamente 10% hasta aproximadamente 1% y de mayor preferencia en una cantidad desde 0,1% hasta aproximadamente 5%.

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Vehículo Aceptable Dermatológicamente

La composición usada de acuerdo con la invención también comprende un vehículo aceptable dermatológica/cos-
méticamente para actuar como diluyente, dispersante o vehículo para los principios activos. El vehículo puede comprender materiales usados comúnmente en los productos de cuidado de la piel tales como, agua, emolientes sólidos o líquidos, aceites siliconados, emulsificantes, solventes, humectantes, espesantes, polvos, propelentes y similares.

El vehículo comprenderá usualmente desde 5% hasta 99,9%, de preferencia desde 25% hasta 80% en peso de la composición y pueden formar el resto de la composición en ausencia de otros adjuntos cosméticos.

Materiales Opcionales para el Beneficio de la Piel y Adjuntos Cosméticos

Además de los activos, pueden incluirse otros principios activos específicos para el beneficio de la piel, tales como filtros solares, agentes de luminosidad de la piel y agentes bronceadores de la piel. El vehículo puede además contener adjuntos tales como antioxidantes, perfumes, opacantes, conservantes, colorantes y tamponadores.

Preparación del Producto, Forma, Uso y Envasado

Para preparar la composición tópica usada en el procedimiento de la presente invención, puede usarse la manera habitual de preparar los productos de cuidado de la piel. Los componentes activos se incorporan generalmente en un vehículo aceptable dermatológica y cosméticamente de una manera convencional. Los componentes activos pueden disolverse o dispersarse previamente en una porción del agua u otro solvente o líquido a ser incorporado en la composición. Las composiciones de preferencia son aceite en agua o agua en aceite o emulsiones de agua en aceite en agua.

Las composiciones pueden estar en la forma de productos convencionales del cuidado de la piel, tales como crema, gel o loción, cápsulas o similares. La composición también puede estar en la forma de un producto que se puede aclarar con agua, llamado wash-off, por ejemplo un gel de baño o ducha, posiblemente conteniendo un sistema de administración para los principios activos que promueva la adherencia a la piel durante el aclarado. De mayor preferencia el producto es un producto que no requiere aclarado (leave-on); un producto para ser aplicado en la piel sin una etapa de aclarado deliberado inmediatamente después de su aplicación en la piel.

La composición puede ser envasada de cualquier manera adecuada tal como un frasco, botella, tubo, bolilla o similar, de la manera convencional. También se prevé que las composiciones de la invención pudieran ser envasadas como un kit conjunto de dos composiciones separadas, una que contenga el ácido linoleico conjugado y la segunda que contenga el compuesto fenólico, para ser aplicado a la piel simultánea o consecutivamente.

La composición de acuerdo con la presente invención también puede ser formulada en una forma adecuada para ingestión oral tal como una cápsula, comprimido o similar.

El procedimiento de la presente invención puede llevarse a cabo una o más veces por día sobre la piel que requiere tratamiento. La mejoría en la apariencia de la piel será usualmente visible tras 3 a 6 meses, dependiendo de la condición de la piel, la concentración de los componentes activos usados en el procedimiento de la invención, la cantidad de composición usada y la frecuencia con la que se la aplica. En general, una pequeña cantidad de la composición, por ejemplo desde 0,1 hasta 5 ml se aplica a la piel desde un envase o aplicador adecuado y se esparce y/o frota en la piel usando las manos o dedos o bien un dispositivo adecuado. Opcionalmente, puede seguir una etapa de aclarado dependiendo de si la composición se formuló como un producto que requiera o no aclarado.

Para que la presente invención pueda ser entendida más fácilmente, se exponen los siguientes ejemplos, solamente ilustrativos.

Ejemplos Ejemplo 1

Este ejemplo ilustra la síntesis del ácido linoleico conjugado que comprende el isómero c9 t11 y el isómero
t10 c12.

Producción de Isómeros Mixtos de CLA

Se disolvió "Reactivo Analar" (AR) hidróxido de sodio (0,6 kg) en 6 kg de propilenglicol de grado farmacéutico mezclando y calentando hasta 80-85ºC. La muestra se enfrió y se agregaron 2 kg de aceite de cártamo. La mezcla se sometió a reflujo durante 3 horas con agitación rápida a 170ºC mediante el uso de equipamiento de escala piloto estándar. La mezcla de reacción se enfrió hasta aproximadamente 95ºC y se redujo el agitado a una velocidad intermedia y la mezcla se neutralizó usando 1,280 litro de ácido clorhídrico 35,5% disuelto en agua desmineralizada (8 litros), manteniendo la temperatura en aproximadamente 90ºC. La mezcla de reacción se dejó asentar y se descartó la fase acuosa. La fase oleosa se lavó con 2x1 litro de solución salina AR 5% y con 2x1 litro de agua desmineralizada a 90ºC, descartando todo material jabonoso. El aceite CLA enriquecido se secó a 100ºC bajo vacío antes de ser drenado a aproximadamente 50ºC y filtrado a través de un sistema Buchner conteniendo un filtro Whatman y una fina capa de filtro de celite de flujo rápido. El aceite de isómeros mixtos de CLA se almacenó bajo nitrógeno a -25ºC hasta que se necesitó. La composición del aceite producido por este procedimiento está expuesta en la tabla 1 a continuación:

TABLA 1

Composición de ácidos grasos	Porcentaje Relativo de Lípidos de
de CLA mixtos (peso %):	Ácidos Grasos Totales
c9, t11	34,1 (47% de CLA total)
t10, c12	34,1 (47% de CLA total)
c9, c11 \textamp c10, c12	2,3
t9, t11 t y t10, 12t	0,7
Otros CLA	1,4
CLA total	72,6
16:0	7,0
16:1	0,8
18:0	2,5
18:1	13,3
18:2 (no-CLA)	3,3
Otro ácido graso	0,5

2. Producción de CLA enriquecido con isómero c9 t11 (I) Preparación de ésteres de laurilo

Se agregó CLA preparado a partir de Cártamo (2,0 kg) a 2 equivalentes molares de alcohol laurílico (1-dodecanol; 98% de Aldrich chemicals) junto con 5,96 kg de agua desmineralizada. La temperatura se ajustó a 25ºC y se agregó 1% p/p de Geotrichum Candidum (de Amano Pharmaceuticals, Japan), mezclado previamente con un poco de agua y mezclado enérgicamente. La reacción se detuvo a las 44 horas. El recipiente se calentó hasta 80-90ºC, la capa acuosa se drenó y el aceite se lavó con agua desmineralizada y se secó a 100ºC bajo vacío durante 30 minutos. Se enfrió el aceite hasta 50ºC y se filtró a través de un sistema Buchner conteniendo un filtro Whatman y una fina capa de adyuvante de filtro de celite de flujo rápido.

(II) Separación de los ésteres de CLA c9, t11 enriquecidos

El alcohol laurílico residual se eliminó a 130ºC a 25-35 ml por minuto por medio de destilación molecular. El residuo se separó groseramente en los ésteres de laurilo (enriquecidos en CLA c9, t11) y ácidos libres (enriquecidos en CLA t10, c12) por medio de evaporación a 158ºC a una velocidad de flujo de 25-35 ml por minuto. Se redujo cualquier ácido libre remanente en el residuo del éster de laurilo por una posterior destilación a 171ºC a una velocidad de flujo de 30-40 ml por minuto. Se neutralizaron 2790 g de residuo de éster de laurilo a 90ºC usando 330 ml de AR hidróxido de sodio 4 M, seguido por la separación del aceite de la fase acuosa, 3x lavados del aceite en agua desmineralizada caliente y otro lavado posterior con alcali 0,1 M y dos lavados con agua caliente. La muestra de aceite de éster de laurilo enriquecido se secó como la anterior.

(III) Saponificación de los ésteres de laurilo CLA c9, t11 enriquecidos

Los ésteres de laurilo de CLA enriquecido c9, t11 se saponificaron usando hidróxido de sodio AR/etanol de grado alimenticio 96%, y se acidificaron nuevamente usando ácido clorhídrico concentrado AR. La mezcla de reacción conteniendo los ácidos grasos libres CLA enriquecidos se secó a 100ºC y se filtró como antes a aproximadamente 50ºC. El alcohol laurílico se evaporó totalmente a 132ºC a una velocidad de 25-30 ml por minuto. Con el objeto de eliminar cualquier residuo de alcohol laurílico, se esterificaron los alcoholes libres en los ácidos grasos presentes en la mezcla de reacción, usando SP392 lipasa de Mucor miehei, (5%, lote 0110 de Novo Nordisk). Los ácidos grasos conteniendo CLA c9 t11 enriquecidos se separaron de los ésteres de laurilo usando destilación molecular bajo vacío a 155ºC a 15-20 ml por minuto.

La composición de CLA enriquecido c9 t11 producido por el procedimiento anterior está expuesta en la tabla 2 a continuación:

TABLA 2

Composición de preparación típica de ácidos	Porcentaje Relativo de Lípidos
grasos CLA enriquecidos c9, t11 (peso %):	de Ácidos Grasos Totales
c9, t11	66,1 (93% de CLA total)
t10, c12	4,1
c9, c11 \textamp c10, c12	0,3
t9, t11t y t10, 12t	0,4
Otros CLA	0,2
CLA total	71,1
16:0	1,6
16:1	-
18:0	0,4
18:1	22,3
18:2 (no-CLA)	4,5
Otro ácido graso	0,1

(II) Separación del CLA t10, c12 enriquecido

El alcohol laurílico residual se eliminó a 130ºC a 25-35 ml por minuto por medio de destilación molecular. El residuo se separó groseramente en ésteres delaurilo (enriquecidos en CLA c9, t11) y ácidos libres (enriquecidos en CLA t10, c12) mediante evaporación a 158ºC a una velocidad de flujo de 25-35 ml por minuto.

Aislamiento del CLA t10, c12 enriquecido

Los ácidos libres CLA de la etapa (II) anterior se destilaron nuevamente a 160-165ºC y 20-30 ml/minuto para reducir el contenido de éster. El alcohol laurílico residual se redujo además mediante destilación a 131ºC y velocidad de flujo de 25-30 ml/minuto. Con el fin de eliminar cualquier residuo de alcohol laurílico, se esterificaron los alcoholes libres con los ácidos grasos presentes en la mezcla de reacción, usando lipasa de SP392 Mucor miehei (5%, lote 0110 de Novo Nordisk). El CLA enriquecido t10, c12 conteniendo ácidos grasos se separó de los ésteres de laurilo usando destilación molecular bajo vacío a 155ºC a 15-20 ml por minuto. La composición de CLA enriquecido t10, c12 generado por este procedimiento está expuesta en la tabla 3 a continuación:

TABLA 3

Composición de preparación típica de ácidos	B
grasos CLA enriquecidos t10, c12 (peso %):
c9, t11	8,3
t10, c12	53,9 (80,5% de CLA total)
c9, c11 \textamp c10, c12	2,9
t9, t11t \textamp t10, 12t	1,1

TABLA 3 (continuación)

Composición de preparación típica de ácidos	B
grasos CLA enriquecidos t10, c12 (peso %):
Otros CLA	0,7
CLA total	66,9
16:0	13,6
16:1	-
18:0	4,6
18:1	10,3
18:2 (no-CLA)	3,1
Otro ácido graso	1,5

Ejemplo 2 Preparación de triglicéridos CLA t10, c12

Se mezcló CLA enriquecido t10, c12 (10 g) preparada de acuerdo con el ejemplo 1 con 1,01 g (10,1%) de glicerol (glicerina Pricerine 9083 CP de Ellis y Everards) y se agregaron 0,5 g (aproximadamente 5%) de lipasa no específica de SP392 Mucor Meihie (Mucor Meihie de Novo Nordisk Lote 0110). Los materiales de la mezcla se agitaron bajo vacío en un evaporador rotativo a 60ºC con un pequeño agregado de nitrógeno.

Tras 96 horas la reacción se detuvo mediante la filtración de la mezcla a través de una fina capa de filtro de celite de flujo rápido en un filtro buchner recolectando la fase de aceite triglicérido CLA, la composición de la cual está expuesta en la tabla 4 a continuación:

TABLA 4

Composición de ácidos grasos	Porcentaje Relativo de Lípidos
de los triglicéridos	de Ácidos Grasos Totales
c9, t11	8,3
t10, c12	54,8 (81,7% de CLA total)
c9, c11 \textamp c10, c12	2,7
t9, t11t y t10, 12t	1,3
Otros CLA	0
CLA total	67,1
16:0	13,5
16:1	0,1
18:0	4,9
18:1	10,3
18:2 (no-CLA)	3,4
Otro ácido graso	0,7

Ejemplo 3 Procedimiento para Medir Procolágeno-I y Síntesis de Decorina en Fibroblastos Dérmicos Humanos Preparación del Medio Acondicionado de Fibroblasto Dérmico

Se sembraron fibroblastos primarios de prepucio humano en el pasaje 2 (P2) en placas de 12 pocillos a 10.000 células/cm^{2} y se mantuvieron durante 24 horas en una atmósfera de dióxido de carbono 5% y oxígeno 4% en Medio Eagles Dulbeccos Modificado (DMEM) suplementado con 10% de suero fetal de bovino. Luego de este tiempo las células se lavaron con DMEM libre de suero y luego se incubaron en DMEM fresco libre de suero durante otras 60 horas.

Las monocapas de fibroblastos se lavaron entonces nuevamente con DMEM libre de suero. Se agregaron los reactivos de la prueba y controles de vehículos a las células por triplicado en un volumen final de 0,4 ml/pocillo de DMEM fresco libre de suero y se incubaron durante otras 24 horas. Este medio acondicionada de fibroblastos fue analizado inmediatamente o bien congelado rápidamente en nitrógeno líquido y almacenado a -70ºC para futuros análisis. Posteriormente se contaron las células y los datos del análisis dot blot subsiguiente se estandardizaron para el número de células.

Ejemplo 4 Ensayo Dot Blot para Procolágeno -I y Proteína Decorina en Medio Acondicionado para Fibroblastos Dérmicos

Se suplementaron muestras de medio acondicionado para fibroblastos dérmicos tratados con vehículo (como control) o reactivos de la prueba con ditiotreitol 20 mM (dilución 1:10 de solución stock 200 mM) y dodecilsulfato de sodio 0,1% (dilución 1:100 de la solución stock 10%), se mezclaron bien e incubaron a 75ºC durante 2 minutos. Se generó un estándar para el ensayo por dilución serial de medio acondicionado de fibroblastos puro a partir de fibroblastos sembrados a 10.000 células/cm^{2} en un matraz de 175 cm^{2} y se lo mantuvo en DMEM libre de suero como el que se describió anteriormente.

Las muestras de los ensayos se aplicaron subsiguientemente por triplicado a una membrana de transferencia Inmobilon-P previamente humedecida, usando el aparato Bio-Dot de 96 pocillos de Bio-Rad tal como está descrito en las instrucciones del fabricante. Se aplicaron aproximadamente 200 \mul de medio en cada pocillo. Se dejó filtrar el medio a través de la membrana por gravedad (30 minutos) luego de esto la membrana se lavó dos veces con PBS (200 \mul). Estos lavados con PBS se dejaron filtrar a través de la membrana por gravedad (2x15 minutos). El aparato Bio-Dot fue luego adosado a un colector de vacío y se llevó a cabo un tercer y último lavado con PBS lavado por succión. Se desarmó el aparto, se quitó la membrana y se la cortó rápidamente como se requiere antes de ser colocada en un tampón de bloqueo durante toda la noche a 4ºC.

Las membranas preparadas para el análisis de decorina se bloquearon con 3% (p/v) BSA/Tween 20 al 0,1% (v/v) en PBS, mientras aquellas para el análisis de procolágeno-I se bloquearon con 5% (p/v) de leche en polvo descremada/Tween 20 al 0,05% en PBS. Al día siguiente, se investigaron las membranas con una dilución de 1:10.000 de anticuerpos primarios para el procolágeno humano-I (MAB1912); monoclonal de rata; Chemicon Int. Inc., Temecula, CA) o bien decorina humana (policlonal de conejo; Biogenesis) durante 2 horas a temperatura ambiente. Las membranas se lavaron subsiguientemente con TBS/Tween 20 al 0,05% (3 x 5 minutos) y luego se incubaron con una dilución de 1:1.000 de fragmentos F (ab')2 anti rata o anti conejo conjugados con ^{125}I-(Amersham) durante una hora a temperatura ambiente. Siguiendo a esto las tiras de Inmobilon se lavaron nuevamente con TBS/Tween 20 (3 x 5 minutos) antes de dejarlas secar al aire a temperatura ambiente. Las membranas secas se envolvieron en celofán y se expusieron a una pantalla fosfórica de almacenamiento Molecular Dynamics durante 16-18 horas. Cumplido este período la pantalla expuesta se barrió con un generador de imagen de fósforo (Molecular Dynamics Phosphorimager SF) usando un programa informático ImageQuant^{TM}. La intensidad de los puntos fue evaluada por análisis de imagen asistido por ordenador usando las herramientas de cuantificación del ImageQuant^{TM}, estandarizada para el número de células y se determinaron los efectos de varios reactivos de la prueba en la síntesis de decorina y procolágeno-I, en relación a un valor de vehículo control de 100 unidades arbitrarias.

Ejemplo 5 Pruebas

La tabla 5 a continuación indica el efecto sinérgico del ácido linoleico conjugado en combinación con el compuesto fenólico epigalocatequingalato (EGCG) sobre procolágeno-I y/o síntesis de decorina en fibroblastos dérmicos humanos y las cantidades en que se aplicaron los principios activos. Para normalizar los resultados se determinaron los efectos de las sustancias probadas en relación con un valor de control tratado con vehículo de 100 unidades arbitrarias. La concentración de los reactivos usado en los ensayos no tuvo influencia en la viabilidad de la células.

TABLA 5

Tratamiento	Procolágeno-I	Decorina
Control (Vehículo)	100	100
0,1 \muM CLA		68,29%
0,5 \mug/ml EGCG		99,6%
0,1 \muM CLA 0,5 \mug/ml de EGCG		157,11%

Los resultados en la Tabla 5 indican que la combinación del ácido linoleico conjugado con un compuesto fenólico regula positiva y sinérgicamente la síntesis de procolágeno-I y/o decorina en fibroblastos dérmicos humanos.

El nivel de decorina en la piel se asocia con una mejora en la condición y apariencia de la misma. Es importante aumentar el nivel de decorina en la piel para una deposición controlada y correcta del colágeno en la piel, la que se asocia con muchos beneficios para la piel tal como la disminución de arrugas y la reparación dérmica de la piel fotodañada.

Ejemplo 6

Este ejemplo demuestra el efecto sinérgico de la combinación específica de ácido linoleico conjugado con un compuesto fenólico para reducir la respuesta inflamatoria de los fibroblastos dérmicos.

Fibroblastos PGE_{2} y Ensayo ICAM

La producción de moléculas de adhesión intracelular (ICAM) y PEG_{2} por los fibroblastos de la piel humana puede ser inducida por el estímulo inflamatorio PMA (acetato de forbol miristato). El PMA representa un factor de estrés externo que induce un estrés oxidativo y respuestas inflamatorias en las células, este modelo se usa para modelar inflamaciones in vivo.

Se sembraron fibroblastos primarios de prepucio humano en el pasaje 2 (P2) en placas de 96 pocillos a razón de 10.000 células/pocillo y se mantuvieron durante 24 horas en una atmósfera de dióxido de carbono 5% en Medio Eagles Modificado Dulbeccos (DMEM) suplementado con 10% de suero bovino fetal. Se agregaron las sustancias de la prueba, tal como se indica en la tabla 7 a continuación en medio celular fresco (DMEM, suplementado con 10% de suero bovino fetal) en dimetilsulfóxido y etanol, concentración final <1%) por triplicado y se incubaron durante otras 24 horas. Se agregaron 10 nM de acetato de forbol miristato (PMA) (Sigma) al medio y las células se incubaron durante otras 24 horas. El control sólo contenía el vehículo y no contenía ninguno de los compuestos de la prueba ni PMA. Los fibroblastos/medio fueron entonces analizados como se describe a continuación de forma inmediata o bien se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenaron a -70ºC para futuros análisis. Posteriormente se contaron las células y los datos del análisis dot-blot estandarizaron a número de células.

Ensayo de Prostaglandina E2 (PGE_{2})

Se tomaron volúmenes de 50 \mul de medio de cultivo para el ensayo de PGE_{2} tras agitar suavemente la placa de cultivo. Los niveles de PGE_{2} en el medio se determinaron con un equipo de inmunoensayo Biotrak PGE_{2} (Amersham, UK). El ensayo se basa en la competencia entre el PGE_{2} no marcada en la muestra y una cantidad fija de PGE_{2} marcada con peroxidasa de rábano picante para una cantidad limitada fija de anticuerpo específico para PGE_{2}. Las concentraciones de PGE_{2} no marcada de la muestra se determinaron de acuerdo con una curva estándar que se obtuvo al mismo tiempo.

Ensayo de ICAM-1

Se descartó el medio y las células se lavaron con PBS Dulbecco. Se agregaron 150 \mul de Triton X-100 0,1% (Sigma) a las células lavadas durante 3 minutos para extraer ICAM de la membrana de las células. Los extractos se trasfirieron a tubos de centrífuga Eppendorff y se centrifugaron a 1000 g durante 2 minutos para eliminar los residuos celulares. Se usó un volumen de 100 \mul de sobrenadante para el ensayo de ICAM. El ICAM-1 soluble se evaluó con un equipo de ensayo inmunoenzimométrico que se encuentra comercialmente disponible (R&D Systems). Se determinaron las concentraciones de ICAM-1 en las muestras en base a una curva estándar realizada paralelamente.

Los resultados que se obtuvieron de los ensayos de PGE_{2} e ICAM se resumen en la tabla 6 a continuación.

TABLA 6

Tratamiento	% de Inhibición de Niveles de	% de Inhibición de Producción
	PGE_{2} en Fibroblastos	de ICAM en Fibroblastos
Control	100	100
Tratado con PMA	0	0
PMA+CLA 0,1 \muM	16,9
PMA + EGCG 5 \muM	35,6
PMA + CLA 0,1 \muM + EGCG 5 \muM	59,4
PMA + CLA 1 \muM		27,7
PMA + EGCG 5 \muM		4,5
PMA + CLA 1 \muM + EGCG 5 \muM		93,1
PMA+CLA 5 \muM	14,5
PMA + genisteína 5 \muM	52
PMA + CLA 5 \muM + genisteína 5 \muM	85,7

Los resultados anteriores muestran que desafiando células con un estímulo inflamatorio tal como PMA (acetato de forbol miristato) se produce un aumento en la respuesta inflamatoria como la que se mide por la producción de prostaglandina E2 (PGE_{2}). La combinación específica de ácido linoleico conjugado con un compuesto fenólico reduce sinérgicamente la respuesta inflamatoria tal como se mide por la producción de PGE_{2}. Los resultados demuestran de esta manera que las combinaciones específicas de principios activos dentro del alcance de la presente invención exhiben una sorprendente actividad antiinflamatoria sinérgica.

Los anteriores resultados también demuestran que desafiando células con PMA se produce un aumento de la producción de ICAM. Tratando las células con una combinación de ácido linoleico conjugado con un compuesto fenólico disminuye sinérgicamente la producción de moléculas de adhesión Intracelular (ICAM), que es otro marcador de la inflamación. Estos resultados demuestran que las combinaciones específicas de principios activos dentro del alcance de la presente invención exhiben una buena y sorprendente actividad antiinflamatoria sinérgica.

Ejemplo 7

La siguiente formulación describe una crema de aceite en agua adecuada para los procedimientos y usos de acuerdo con la presente invención. Los porcentajes indicados son en peso de la composición.

\vskip1.000000\baselineskip

	Peso %	Peso %	Peso %
Aceite Mineral	4	4	4
Ácido linoleico conjugado (triglicérido) de Loders Croklaan	1,15	2	3
Polifenoles de té verde	0	2	0
EFCG	0	0	1
Quercetina	0,5	0	0
Brij 56*	4	4	4
Alfol 16RD*	4	4	4
Trietanolamina	0,75	0,75	0,75
Butan-1,3-diol	3	3	3
Goma xantán	0,3	0,3	0,3

(Continuación)

	Peso %	Peso %	Peso %
Perfume	cs	cs	cs
Hidroxitolueno butilado	0,01	0,01	0,01
Agua	hasta 100	hasta 100	hasta 100
*Brij 56 es alcohol cetílico POE (10)
Alfol 16RD es alcohol cetílico.

Ejemplo 8

La siguiente formulación describe una crema emulsión de acuerdo con la presente invención.

Nombre Químico Completo	Nombre Comercial	% Peso	% Peso	% Peso
o Nombre CTFA Triglicérido de CLA		2,0	3	1,5
93%, isómero c9, t11 en peso de
mitades de CLA total producido de
acuerdo al Ejemplo 1 Croklaan
Ácido gálico	1	0	0	0
Genisteína		0	2
Diadzeína		0	0	1,5
EDTA disódico	Sequestrene Na2	0,05	0,05	0,05
Silicato de magnesio y aluminio	Veegum Ultra	0,6	0,6	0,6
Metilparabeno	Metilparabeno	0,15	0,15	0,15
Simeticona	Emulsión Antiespuma DC	0,01	0,01	0,01
Butilenglicol 1,3	Butilenglicol 1,3	3,0	3,0	3,0
Hidroxietilcelulosa	Natrosol 250HHR	0,5	0,5	0,5
Glicerina, USP	Glicerina USP	2,0	2,0	2,0
Goma Xantán	Keltrol 1000	0,2	0,2	0,2
Trietanolamina	Trietanolamina (99%)	1,2	1,2	1,2
Ácido esteárico	Pristereno 4911	3,0	3,0	3,0
Propilparabeno NF	Propilparabeno NF	0,1	0,1	0,1
Hidroestearato de glicerilo	Naturechem GMHS	1,5	1,5	1,5
Alcohol estearílico	Lanette 18 DEO	1,5	1,5	1,5
Palmitato de isostearilo	Protachem ISP	6,0	6,0	6,0
Octanoato de alcoholes C12-15	Hetester FAO	3,0	3,0	3,0
Dimeticona	Fluido Silicona 200 (50 cts)	1,0	1,0	1,0.
Colesterol NF	Colesterol NF	0,5	0,5	0,5

(Continuación)

Nombre Químico Completo	Nombre Comercial	% Peso	% Peso	% Peso
o Nombre CTFA Triglicérido de CLA		2,0	3	1,5
93%, isómero c9, t11 en peso de
mitades de CLA total producido de
acuerdo al Ejemplo 1 Croklaan
Estearato de sorbitán	Estearato de sorbitán	1,0	1,0	1,0
Hidroxitolueno butilado	Embanox BHT	0,05	0,05	0,05
Acetato de tocoferilo	Acetato de Vitamina E	0,1	0,1	0,1
Estearato de PEG-100	Myrj 59	2,0	2,0	2,0
Estearoil lactilato de sodio	Pationic SSL	0,5	0,5	0,5
Ácido hidroxicaprílico	Ácido Hidroxicaprílico	0,1	0,1	0,1
Alfa-bisabolol	Alpha-bisabolol	0,2	0,2	0,2
Agua, DI		c.s.	c.s.	c.s.
		hasta	hasta	hasta
		100	100	100

Ambos ejemplos 7 y 8 de composiciones tópicas proveen un tratamiento cosmético efectivo para mejorar la apariencia de la piel arrugada, envejecida, fotodañada y/o irritada, cuando es aplicada a la piel normal que se ha deteriorado a través del tiempo o del fotoenvejecimiento o cuando se aplica a pieles jóvenes para ayudar a prevenir o demorar tales cambios deteriorantes. Las composiciones también son efectivas para suavizar pieles irritadas, reacondicionar piel seca, iluminar el color de la piel y reducir las secreciones de aceite y sebo. Las composiciones pueden ser procesadas de las maneras convencionales.

Claims (11)

1. Una composición tópica que comprende:

(a)

ácido linoleico conjugado y/o derivado del mismo;

(b)

un compuesto fenólico o mezclas del mismo;

(c)

un vehículo dermatológicamente aceptable;

con la condición de que el compuesto fenólico no sea un filtro solar.

2. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 1 en la que al menos 1% en peso de las mitades del ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo están presentes como el isómero cis 9, trans 11 y/o el isómero trans 10, cis 12.

3. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 2 en la que al menos 50%, de preferencia al menos 90% en peso de las mitades del ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo están presentes como el isómero cis 9, trans 11 y/o el isómero trans 10, cis 12.

4. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la que el compuesto fenólico es elegido de fenoles simples (C_{6}), benzoquinonas (C_{6}), ácidos fenólicos (C_{6}-C_{1}), acetofenonas (C_{6}-C_{2}), ácidos fenilacéticos (C_{6}-C_{2}), ácidos hidroxicinámicos (C_{6}-C_{3}), fenilpropenos (C_{6}-C_{3}), cumarinas, isocumarinas, (C_{6}-C_{3}), cromonas (C_{6}-C_{3}), naftoquinonas (C_{6}-C_{4}), xantonas(C_{6}-C_{1}-C_{6}), estilbenos (C_{6}-C_{2}-C_{6}), flavonoides (C_{6}-C_{3}-C_{6}), lignanos, neolignanos (C_{6}-C_{3})_{2} y ligninas (C_{6}-C_{3})_{n}.

5. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la que el compuesto fenólico es seleccionado del grupo constituido por ácidos fenólicos, flavonoides, isoflavonoides, o derivados de los mismos o mezclas de los mismos.

6. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 5 en la que el compuesto fenólico es epigalocatequingalato, naringenina, quercitina, catequina, daidzeína, genisteína, licetina, ácido gálico, o un fenol de té verde.

7. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la que el compuesto fenólico está presente en un nivel de 0,01 hasta 10% en peso de la composición.

8. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la que la composición es una composición que no necesita aclarado (tipo "leave on").

9. Un procedimiento cosmético para proveer al menos un beneficio cosmético para el cuidado de la piel seleccionado de: tratamiento/prevención de la formación de arrugas, flaccidez, sequedad, de la piel envejecida y/o fotodañada; aumento/mantenimiento de niveles de colágeno en la piel, aumento/mantenimiento de niveles de decorina en la piel, mejora de la reparación tisular; calmado de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejoramiento de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; iluminación de la piel; control de la secreción de aceite/sebo, dicho procedimiento comprende la aplicación sobre la piel de una composición tópica como las reivindicadas en cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

10. El uso de una composición cosmética como la reivindicada en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 en la fabricación de un medicamento para proveer al menos un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado de: tratamiento/prevención de la formación de arrugas, flaccidez, sequedad, de la piel envejecida y/o fotodañada; aumento/mantenimiento de niveles de colágeno en la piel, aumento/mantenimiento de niveles de decorina en la piel, mejora de la reparación tisular; calmado de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejoramiento de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; iluminación de la piel; control de la secreción de aceite/sebo.

11. El uso de ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo en combinación con un compuesto fenólico o mezclas de los mismos en la fabricación de una composición tópica que provee al menos un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado de: tratamiento/prevención de la formación de arrugas, flaccidez, sequedad, de la piel envejecida y/o fotodañada; aumento/mantenimiento de niveles de colágeno en la piel, aumento/mantenimiento de niveles de decorina en la piel, mejora de la reparación tisular; calmado de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejoramiento de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; iluminación de la piel; control de la secreción de aceite/sebo; con la condición de que el compuesto fenólico no sea un filtro solar.