MXPA02001028A - Composicion para el cuidado de la piel. - Google Patents

Abstract

Una composicion topica que comprende: a) acido linoleico conjugado y/o derviados del mismo; b) un compuesto fenolico y/o mezclas del mismo; y c) un vehiculo dermatologicamente aceptable; con la condicion de que el compuesto fenolico no es un bloqueador solar. El producto es particularmente util para tratar arrugas y calmar piel sensible.

Description

COMPOSICIÓN PARA EL CUIDADO DE LA PIEL CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a composiciones tópicas para apl icación a la piel h um ana y a su uso para mejorar la condición y apariencia de la piel .

ANTEC E DENTES DE LA I NVENC IÓN La piel es sometida a deterioro a través de desórde nes dermatológicos, abuso ambiental (viento, aire acondicionado y calefacción central) o a través del proceso de envejecimiento normal (cronoenvejecimiento) , el cual puede ser acelerado por exposición de la piel al sol (fotoenvejecimiento). En años recientes, ha crecido enormemente la demanda de composiciones cosméticas y métodos cosméticos para mejorar la apariencia y cond ición de la piel . Los consumidores han buscado cada vez más productos cosméticos anti-envejeci m iento q ue traten o retarden los sig nos visibles de piel cronoenvejecida y fotoenvejecida , tales com o arrugas, l íneas , colgajos , hiperpigmentación y manchas de la edad. Los consumidores también buscan frecuentemente otros beneficios de productos cosméticos además de anti-envejecim iento. El concepto de piel sensible también a elevado la demanda del consumidor de productos cosméticos q ue mejoren la apariencia y cond ición de piel sensi ble , seca y/o reseca y para calmar piel roja y/o irritada. Los consu mid ores también desean productos cosméticos que tengan un efecto de control de aceite/sebo. mu í -liÉii m??i^^tfMÜfa Muchas personas están preocupadas por el grado de pigmentación de su piel. Por ejemplo, personas con manchas de la edad o pecas pueden desear que tales manchas pigmentadas sean menos pronunciadas. Otros pueden desear reducir el obscurecimiento de la piel provocado por exposición a la luz solar o para aclarar su color de piel natural. Para satisfacer esta necesidad se han hecho muchos intentos para desarrollar productos que reducen la producción de pigmento en los melanocitos. Sin embargo, las substancias hasta ahora identificadas tienden a tener efectos laterales no deseables, por ejemplo irritación de la piel. En consecuencia, tales substancias no son adecuadas para uso cosmético, o pueden ser aplicadas solamente a una concentración a la cual su efecto aclarador de la piel es menor al deseado. Puede considerarse que usar una combinación de diferentes substancias aclaradoras de la piel reduce los efectos laterales adversos, pero existe un riesgo substancial que al usar tal combinación, la aclaración de la piel es reducida también debido a efectos de competencia. Por lo tanto, existe la necesidad de una mejora en la efectividad de productos cosméticos aclaradores de la piel, en particular de manera que no irriten la piel. J07277939 describe una composición para el cuidado de la piel para mejorar el envejecimiento de la piel y la inflamación de la piel, que contiene (A) Flor de Manita y (B) al menos 1 de activo seleccionado de removedores de oxígeno, antioxidantes, activadores de células, antiinflamatorios, inhibidores de tirosinasa y agentes de retención de humedad. Entre las muchas opciones de ingredientes descritas para el componente B se encuentran quercetina, quercitolina, catequina, ácido gal I ¡co , ácido gamma-linolénico y ácido eicosapentaenoico. J05271046 describe una composición aclaradora de la piel que contiene un ácido graso insaturado teniendo 18 a 22 carbonos y dos o más enlaces insaturados, tales como ácido linoleico y araquidónico, y un polifenol. WO99/26588 describe formulaciones anti-envejecimiento para el cuidado de la piel que comprenden ácido linoleico conjugado y las cuales opcionalmente pueden contener bloqueadores solares convencionales, tales como benzofenonas. La técnica discutida antes no describe la combinación sinérgica específica de ácido linoleico conjugado con un compuesto fenólico (que no sea un bloqueador solar) ni el uso de tal combinación específica para tratar arrugas, piel sensible, piel seca, controlar la secreción de aciete/sebo, o aclarar la piel. Los compuestos fenólicos que actúan como un bloqueador solar son excluidos específicamente del alcance de la presente invención. Un bloqueador solar es definido en la presente como un ingrediente que proporciona un factor de protección solar (SPF) de al menos 2, cuando se prueba en una formulación de producto cosmético en piel humana, usando el protocolo estandarizado descrito en the Food and Drug Administration Monograph Suscreen Drug Products for Over-The-Counter Human Use (Productos farmacéuticos de bloqueadores solares para uso humano de mostrador), monografía final publicada en el registro federal volumen 64, no 98, 21 de mayo de 1999, páginas 27666 a 27691.

Hemos encontrado ahora que el tratamiento y prevención efectivos de condiciones de la piel normales, pero cosméticamente no deseables, debido al cronoenvejecimiento o fotoenvejecimiento, tales como arrugas, líneas, colgajos, hiperpigmentación y manchas de la edad, pueden obtenerse a través de la aplicación de composiciones cosméticas a la piel, las cuales consisten de ácido linoieico conjugado y/o derivados del mismo, en combinación con el compuesto fenólico que no es un bloqueador solar. También hemos encontrado que el uso de tales composiciones cosméticas proporciona ventajosamente además, beneficios para la piel además de anti-envejecimiento, tal como calmar piel sensible y/o irritada, controlar la secreción de aceite/sebo y aclarar la piel.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención, se proporciona una composición tópica que comprende: (a) ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo, (b) un compuesto fenólico o mezclas del mismo; y (c) un vehículo dermatológicamente aceptable; con la condición de que el compuesto fenólico no sea un bloqueador solar. De acuerdo con un segundo aspecto de la presente invención, se proporciona un método cosmético para proporcionar al menos un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado de: tratar/prevenir arrugas, colgajos, piel seca, envejecida y/o fotodañada; reforzar la deposición de colágeno en la piel, reforzar la producción de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de aceite/sebo, comprendiendo el método aplicar a la piel una composición tópica como se describe antes. La presente invención también abarca el uso de las composiciones inventivas para proporcionar al menos un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado de tratar/prevenir piel arrugada, colgada, envejecida y/o fotodañada; reforzar la deposición de colágeno en la piel, reforzar la producción de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclarar la piel; y controlar la secreción de aceite/sebo. De acuerdo todavía con un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de ácido linoleico conjugado y derivados del mismo en combinación con un compuesto fenólico o mezclas del mismo, con la condición de que el compuesto fenólico no sea un bloqueador solar, en una composición tópica cosmética para proporcionar al menos un beneficio cosmético para el cuidado de la piel seleccionado de tratar/prevenir piel arrugada, colgada, envejecida y/o fotodañada; reforzar la deposición de colágeno en la piel, reforzar la producción de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclarar la piel, y controlar la secreción de aceite/sebo. Las composiciones inventivas, métodos y usos, proporcionan de esta manera, beneficios anti-envejecimiento, los cuales resultan en la promoción de piel suave y flexible con elasticidad mejorada y una aparición reducida o retardada de arrugas y piel envejecida, con color de piel mejorado. Se logra una mejora general en la apariencia, textura y condición, en particular con respecto a la apariencia radiante, clara y joven general de la piel. Las composiciones inventivas, métodos y usos también son benéficos para calmar y apaciguar piel sensible y/o irritada, para aclarar la piel y para controlar la secreción de aceite/sebo. De esta manera, la presente invención proporciona ventajosamente un amplio rango de beneficios para el cuidado de la piel. El término tratar, como se usa en la presente, incluye dentro de su alcance reducir, retardar y/o prevenir las condiciones normales de la piel antes mencionadas, pero cosméticamente indeseables, tales como piel arrugada, envejecida y/o fotodañada, y/o piel irritada e intensificar de manera general la calidad de la piel y mejorar su apariencia y textura al prevenir o reducir irritación, arrugado y aumentar la flexibilidad, firmeza, suavidad y elasticidad de la piel. Las composiciones, métodos y usos de acuerdo con la invención pueden ser útiles para tratar piel, la cual ya está en una condición arrugada, envejecida, fotodañada, irritada o para tratar piel joven para prevenir o reducir aquéllos cambios no deseables antes mencionados debido al proceso de envejecimiento/fotoenvejecimiento normal.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Acido linoleico conjugado El ácido linoleico conjugado (de aquí en adelante referido como CLA) es un ácido graso de cadena larga (C18) diinsaturada. CLA comprende un grupo de isómeros posicionales y geométricos de ácido linoleico, en el cual -* -* .k. son posibles varias configuraciones de dobles enlaces cis y trans en las posiciones (6, 8), (7, 9), (8, 10), (9, 11), (10, 12) o (11, 13). De esta manera, existen veinticuatro isómeros diferentes de CLA. La ¡nvención también incluye derivados del ácido libre, los cuales 5 comprenden así porciones de ácido linoleico conjugado. Los derivados preferibles incluyen aquéllos derivados de substitución del grupo carboxilo del ácido, tal como esteres (por ejemplo, esteres de triglicéridos, éteres de monoglicéridos, esteres de diglicéridos, fosfoésteres), amidas (por ejemplo, derivados de ceramida), sales (por ejemplo, sales de metales ío alcalinos y metales alcalino-térreos, sales de amonio), y/o aquéllos derivados de substitución de la cadena de carbono de C18, tal como derivados alfa hidroxi y/o beta hidroxi. En el caso de derivados de esteres de triglicéridos, todos los isómeros posicionales de substituyentes de CLA en el esqueleto de glicerol 15 están incluidos. Los triglicéridos deben contener al menos una porción de CLA. Por ejemplo, de las tres posiciones esterificables en el esqueleto de glicerol, las posiciones 1 y 2 pueden ser esterificadas con CLA y por otro lípido en la posición 3 o como una alternativa, el esqueleto de glicerol podría ser esterificado por CLA en las posiciones 1 y 3 con otro lípido en 20 la posición 2. Los isómeros más preferidos de CLA para usarse en la presente ¡nvención son el isómero cis 9 trans 11 (c9111 ) o trans 10 cis 12 (t 0 c12). De preferencia, al menos 1% en peso del CLA total y/o porciones de CLA presentes en la composición está en la forma del isómero c9, t11 y/o t10, 25 c12. Más preferiblemente, al menos 20% y muy preferiblemente al menos • r??i-'-r^?f?t^|| # ????<i1li1? -,' 1 i ,.... ,....__. 40% en peso del CLA total y/o porciones de CLA presentes en la composición, está en la forma del isómero c9, t11 y/o isómero 11 O , c12. En una modalidad particularmente preferida, el ácido linoleico conjugado es enriquecido en el isómero c9 t11 o 110 , c12. Por "enriquecido" se quiere decir que al menos 50% en peso del CLA total (y/o porciones de CLA) presente en la composición, está en la forma del isómero cis 9, trans 11 o trans 10 cis 12 - de preferencia, al menos 70%, más preferiblemente al menos 80%, y muy preferiblemente al menos 90% en peso del CLA total y/o porciones de CLA presentes en la composición, está en la forma del isómero c9, t11 o t10 c12. El CLA y/o derivados del mismo comprendiendo las porciones de CLA de acuerdo con la presente invención, están comercialmente disponibles como aceites que son ricos en triglicérido de ácido linoleico conjugado, tal como aceite de Tung o como el aceite de ricino deshidratado (Unichema). Un producto de mezcla de isómeros está disponible de Sigma y un CLA enriquecido en isómero c9 t11 está disponible de Matreya Inc. De manera alternativa, CLA de acuerdo con las modalidades preferidas de la presente invención puede prepararse de acuerdo con el método descrito en WO 97/18320, cuyos contenidos son incorporados en la presente por referencia. Un método preferido de preparación se describe en el Ejemplo 1 y 2 más adelante. Donde sea que el término ácido linoleico conjugado o CLA se use en esta especificación, se entenderá que los derivados del mismo comprendiendo porciones de CLA también están incluidos. Las porciones de CLA se refieren a porción o porciones de acil graso de CLA de un derivado de CLA. El CLA, a ser empleado de acuerdo con la presente invención, está presente en la composición tópica en una cantidad efectiva Normalmente, la cantidad total del activo está presente en una cantidad entre 0.0001% y 50% en peso de la composición. Más preferiblemente, la cantidad es desde 0.01% hasta 10% y muy preferiblemente desde 0.1% hasta 5%, con el fin de maximizar los beneficios a un costo mínimo. ?o Compuestos fenólicos Los compuestos fenólicos pueden dividirse en al menos 10 clases diferentes dependiendo de su estructura química básica. Los compuestos incluyen fenoles simples (C6), benzoquinonas (C6) ácidos fenólicos (C6-C?), acetofenonas (C6-C2), ácidos fenilacéticos (C6-C2), ácidos hidroxicinámicos 15 (C6-C3) cromonas (C6-C3), naftoquinonas (C3-C4), xantonas (C6-C?-C6), estilbenos (C6-C2-C6), flavonoides (C6-C3-C6), lignanos, neolignanos (C6- C3)2 y ligninas (C6-C3)n. El término flavonoides representa un grupo muy grande de compuestos que consiste de dos anillos aromáticos unidos por una unidad 20 de tres carbonos, por ejemplo, C6-C3-C6. La familia de flavonoides incluye isoflavonoides, flavonoles monoméricos, dihidroflavonoides, catequinas, epicatequinas (por ejemplo, lauronas), leucoantocianadinas, proantocianadinas, antocianadinas, flavonas, flavononas, calconas, dihidrocalconas, isoflavonas, neoflavonas, auronas, flavan 3 oles, flavan 3 25 oles y antrocianinas. El término isoflavanoides también incluye ftÉÍL*M-?*»~y.. . ^^ ^ , ^^ ¡soflavonas, pterocarpanos, isoflavononas, rotenoides, isoflavanos e isoflavanoles. Los compuestos fenólicos preferidos para usarse en las composiciones de la presente invención son flavonoides incluyendo flavononas, tales como naringenina, flavonoles, tales como quercetina, catequina (por ejemplo, epigallocatequingallato, EGCG), isoflavonoides, tales como daidzeína, genísteína, licetina y también ácidos fenólicos, tales como ácido gállico y los polifenoles de té verde. La quercetina, naringenina, daidzeína, genisteína, EGCG y polifenoles de té verde pueden ser obtenidos de Sigma. Los extractos de plantas conteniendo los compuestos fenólicos también son adecuados para usarse en la presente invención. Por ejemplo, rutin, hierba del asno, cebolla, especie de cítrico, contienen quercetina y naringenina, la soya contiene daidzeína y genisteína y variedades de té verde, tales como Camellia sinensis y assamica contienen EGCG y polifenoles de té verde. Los compuestos fenólicos que son excluidos de manera específica de la presente invención, son aquéllos que son usados convencionalmente como bloqueadores solares, tales como ácido para-amino benzoico y benzofenonas. El compuesto fenólico o mezclas del mismo es empleado en la composición inventiva en una cantidad desde aproximadamente 0.01% hasta aproximadamente 10%, de preferencia en una cantidad desde aproximadamente 10% hasta aproximadamente 1%, muy preferiblemente en una cantidad desde aproximadamente 0.1% hasta aproximadamente 5%. '• * * * <- - Vehículo dermatológicamente aceptable La composición usada de acuerdo con la invención también comprende un vehículo dermatológica/cosméticamente aceptable para actuar como un diluyente, dispersante o portador para los activos. El vehículo puede comprende materiales comúnmente empleados en los productos para el cuidado de la piel, tales como agua, emolientes líquidos o sólidos, aceites de silicón, emulsificantes, solventes, humectantes, espesantes, polvos, propulsores y similares. El vehículo usualmente formará desde 5% hasta 99.9%, de preferencia desde 25% hasta 80% en peso de la composición, y puede, en la ausencia de otros auxiliares cosméticos, formar el resto de la composición.

Materiales de beneficio para la piel opcionales y auxiliares cosméticos Además de los activos, también pueden incluirse otros activos de beneficio para la piel específicos, tales como bloqueadores solares, otros agentes aclaradores de la piel, agentes bronceadores de la piel. El vehículo también puede incluir además auxiliares tales como perfumes, opacantes, conservadores, colorantes y amortiguadores.

Preparación, forma, uso y empaque del producto Para preparar la composición tópica usada en el método de la presente invención, puede emplearse la manera usual para preparar productos para el cuidado de la piel. Los componentes activos generalmente son incorporados en un portador dermatológica/cosméticamente aceptable en una manera convencional. Los componentes activos pueden ser disueltos o dispersados primero convenientemente en una porción del agua u otro solvente o líquido a ser incorporado en la composición. Las composiciones preferidas son emulsiones aceite-en-agua, agua-en-aceite o agua-en-aceite-en-agua. La composición puede estar en la forma de productos para el cuidado de la piel convencionales, tales como una crema, gel o loción, cápsulas o similares. La composición también puede estar en la forma de un producto así llamado de lavado, por ejemplo, un gel para tina o regadera, conteniendo posiblemente un sistema de entrega para los activos para promover la adherencia a la piel durante el enjuague. Muy preferiblemente, el producto es un producto que se deja puesto, un producto a ser aplicado a la piel sin un paso de enjuague deliberado poco después de su aplicación a la piel. La composición puede ser empacada en cualquier manera adecuada, tal como en un tarro, botella, tubo, bola giratoria o similar, en la manera convencional. También se prevee que las composiciones inventivas podrían empacarse como un conjunto de dos composiciones separadas, una conteniendo el ácido linoleico conjugado y la segunda conteniendo el compuesto fenólico, a ser aplicado a la piel de manera simultánea o consecutiva. La composición de acuerdo con la presente invención también puede ser formulada en una forma adecuada para ingestión oral, tal como una tableta, cápsula o similar.

El método de la presente invención puede ser realizado una o más veces al día para la piel que requiere tratamiento. La mejora en la apariencia de la piel usualmente se volverá visible después de 3 a 6 meses, dependiendo de la condición de la piel, la concentración de los componentes activos usados en el método inventivo, la cantidad de composición usada y la frecuencia con la cual se aplica. En general, una pequeña cantidad de la composición, por ejemplo, de OJ a 5 ml es aplicada a la piel a partir de un recipiente o aplicador adecuado, y se esparce sobre y/o frota en la piel usando las manos, dedos o un dispositivo adecuado. Un paso de enjuague puede seguir de manera opcional, dependiendo de si la composición es formulada como un producto para dejarse puesto o de enjuague. Con el fin de que la presente invención pueda entenderse más fácilmente, los siguientes ejemplos están dados a manera de ilustración solamente.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Este ejemplo ilustra la síntesis de ácido linoleico conjugado 20 comprendiendo el isómero c9111 y el isómero 110 c12.

Producción de isómeros mixtos de CLA "Analar Reagent" (AR) hidróxido de sodio (0.6 kg) se disolvió en 6 kg de propilenglicol de grado farmacéutico mediante mezclado y 25 calentamiento a 80-85°C. La muestra se enfrió y se adicionaron 2 kg de •*aM>»»---! aceite de cártamo. Usando equipo de escala piloto estándar, la mezcla se sometió a reflujo durante 3 horas con agitación rápida a 170°C. La mezcla de reacción se enfrió a aproximadamente 95°C, el agitador se redujo a una velocidad intermedia, y la mezcla se neutralizó usando 1.280 litros de 5 ácido clorhídrico 35.5% disuelto en agua desmineralizada (8 litros), manteniendo la temperatura a aproximadamente 90°C. Se permitió que la mezcla de reacción se asentara y la fase acuosa se eliminó. La fase oleosa se lavó con 2 x 1 litro de 5% de solución de sal de AR y por 2 x 1 litro de agua desmineralizada a 90°C, desechando cualquier material 10 jabonoso. El aceite enriquecido en CLA se secó a 100CC bajo vacío antes de drenarse a aproximadamente 50°C y se filtró a través de un sistema de Buchner conteniendo un filtro Whatman y una capa delgada de auxiliar de filtro celite-hyflo. El aceite de CLA de isómeros mezclados se almacenó bajo nitrógeno a -25°C hasta que fue requerido. La composición del aceite 5 producido por este método se expone en la tabla 1 a continuación: •**M^--"J— ' -•-*- • -.-» ... - * »-*• TABLA 1 2. Producción de CLA enriquecido con isómero c9 t11 (I) Preparación de lauril esteres: El CLA preparado a partir de cártamo (2.0 kg) se adicionó a 2 x equivalentes molares de alcohol laurílico (1-dodecanol: 98% ej Aldrich Chemicals), junto con 5.96 kg de agua desmineralizada. La temperatura se ajustó a 25°C y 1% (p/p) de Geotrichum Candidum (ej Amano Pharmaceuticals, Japón) se adicionó premezclado con un poco de agua, y se mezcló vigorosamente. La reacción se detuvo a las 44 horas. El recipiente se calentó a 80-90°C, la capa acuosa se drenó y el aceite se lavó con agua desmineralizada y se secó a 100°C bajo vacío durante 30 minutos. El aceite se enfrió a 50°C y se filtró a través de un sistema de Buchner conteniendo un filtro Whatman y una capa delgada de auxiliar de filtración celite-hyflo. 5 (II) Separación de los esteres de CLA de c9,t11 enriquecidos: Se removió alcohol laurílico residual a 130°C a 25-35 ml por minuto mediante destilación molecular. El residuo se separó de manera gruesa en los lauril esteres (enriquecidos en CLA c9,t11) y ácidos grasos ío (enriquecidos en CLA t10,c12) mediante evaporación a 158°C a una velocidad de flujo de 25-35 ml por minuto. Cualquier ácido libre restante en el residuo de lauril éster fuer reducido mediante una destilación adicional a 171°C a una velocidad de flujo de 30-40 ml por minuto. Se neutralizaron 2790 g de residuo de lauril éster a 90°C usando 330 ml de 15 hidróxido de sodio AR 4M, seguido por la separación del aceite de la fase acuosa, 3x lavados del aceite en agua caliente desmineralizada, un lavado de álcali 0.1M adicional y dos lavados de agua caliente. La muestra de aceite de lauril éster enriquecido se secó como antes. 20 (lll) Saponificación de los lauril esteres de CLA c9,t11 enriquecido: Los lauril esteres de CLA enriquecido en c9,t11, fueron saponificados usando hidróxido de sodio de AR/96% de etanol de grado alimenticio y se re-acidificaron usando ácido clorhídrico concentrado de AR. La mezcla de reacción conteniendo los ácidos grasos libres de CLA 25 enriquecidos se secaron a 100°C y se filtraron como antes a ^*¿^-=a. aproximadamente 50°C. Se evaporó alcohol laurílico a 132°C a 25-30 ml por minuto. Con el fin de remover cualquier alcohol laurílico residual, se esterificaron alcoholes libres a los ácidos grasos presentes en la mezcla de reacción, usando lipasa de Mucor miehei SP392 (5%, lote lux 0110 ej Novo Nordisk). Los ácidos grasos conteniendo CLA enriquecido en c9 t11 fueron separados de los lauril esteres usando destilación molecular bajo vacío a 155°C a 15-20 ml por minuto. La composición del CLA enriquecido en c9 t11 producido mediante el método anterior se expone en la tabla 2 a continuación: .!_...» , .„.,?, . . .,.„ . .^. . .t ---*Aat>.

TABLA 2 (II) Separación del CLA enriquecido en 110 , c12: Se removió alcohol laurílico a 130°C a 25-35 ml por minuto mediante destilación molecular. El residuo se separó de manera gruesa en los lauril esteres (enriquecidos en CLA c9,511) y ácidos libres (enriquecidos en CLA t10, c12) mediante evaporación a 158°C a una velocidad de flujo de 25-35 por minuto.

Aislamiento del CLA enriquecido en t10, c12 Los ácidos libres de CLA del paso (II) anterior fueron destilados nuevamente a 160-165? y 20-30 ml/min para reducir el contenido de éster. El alcohol laurílico residual fue reducido además mediante una destilación a 131°C y 25-30 ml/min de velocidad de flujo. Con el fin de remover cualquier alcohol laurílico residual, se esterificaron alcoholes libres a los ácidos grasos presentes en la mezcla de reacción, usando lipasa de Mucor miehei SP392 (5%, lote lux 0110 ej Novo Nordisk). Los ácidos grasos conteniendo CLA enriquecido en 110 , c12 fueron separados de los lauril esteres usando destilación molecular bajo vacío a 155°C a 15-20 ml por minuto. La composición del CLA enriquecido en t10,c12 generado mediante este método se expone en la tabla 3 a continuación: ..•., - .-± ..* t i -fi^iteiWÜÉ TABLA 3 Ejemplo 2 - Preparación de triglicéridos de CLA t10, c12 CLA enriquecido en t10, c12 (10 g) preparado de acuerdo con el ejemplo 1 se mezcló con 1.01 g (10.1%) de glicerol (Pricerine 9083 glicerina CP de Ellis and Everards) y se adicionó 0.5 g (aproximadamente 5%) de lipasa no específica de Mucor Miehei SP392 (Mucor Meihei Ej Novo Nordisk, lote lux 0110). Los materiales mezclados se agitaron bajo vacío en un evaporador rotatorio a 60°C con un ligero sangrado de nitrógeno. j^^^^ajj Después de 96 horas, la reacción se paró al filtrar la mezcla a través de una capa delgada de auxiliar de filtración celite super-cel en un filtro de Buchner que recolecta la fase oleosa de triglicérido de CLA, cuya composición se expone en la tabla 4 a continuación: TABLA 4 10 20 Ejemplo 3 Procedimiento para medir la síntesis de procoláqeno-l y decorina en fibroblastos dérmicos humanos 25 Preparación de medio acondicionado de fibroblastos dérmicos Los fibroblastos de prepucio humano primarios en el paso 2 (P2) fueron sembrados en placas de 12 cavidades a 10000 células/cm2 y se mantuvieron durante 24 horas en una atmósfera de 5% de dióxido de carbono y 4% de oxígeno en medio Eagles modificado de Dulbeccos (DMEM) complementado con 10% de suero de ternera fetal. Después de este tiempo, las células se lavaron con DMEM libre de suero y entonces se incubaron en DMEM libre de suero fresco durante unas 60 horas adicionales. Las monocapas de fibroblastos se lavaron entonces nuevamente con DMEM libre de suero. Los reactivos de prueba y controles de vehículo fueron adicionados a las células por triplicado en un volumen final de 0.4 ml/cavidad de DMEM libre de suero fresco y se incubaron durante unas 24 horas adicionales. Este medio acondicionado de fibroblasto fue ya sea analizado inmediatamente o congelado por chasquido en nitrógeno líquido y se almacenó a -70°C para análisis futuro Las células fueron contadas entonces y los datos del análisis de dot-blot fueron estandarizados subsecuentemente a número de células.

Ejemplo 4 Ensavo de dot-blot para proteína de procolágeno-l y decorina en medio acondicionado de fibroblastos dérmicos Las muestras de medio acondicionado de fibroblastos dérmicos tratados con vehículo (como un control) o reactivos de prueba, fueron complementados con ditiotreitol 20 mM (dilución 1:10 de solución madre 200mM) y 0.1% de dodeciisulfato de sodio (dilución 1:100 de solución •y.^y.yS y. ^ madre 10%), se mezclaron bien y entonces se incubaron a 75°C durante 2 minutos. Se generó un estándar para el ensayo mediante dilución serial de medio acondicionado de fibroblastos puro a partir de fibroblastos sembrados a 10000 células/cm2 en un matraz de 175 cm2 y se mantuvieron en DMEM libre de suero como se describe antes. Las muestras de ensayo fueron aplicadas subsecuentemente por triplicado a una hoja prehumedecida de membrana de transferencia Immobilon-P usando el aparato Bío-Dot de 96 cavidades de Bio-Rad, como se describe en las líneas de guía de los fabricantes. Aproximadamente 200 µl de medio se aplicaron por cavidad. Se permitió que el medio se filtrara a través de la membrana bajo gravedad (30 minutos), después de lo cual se lavó dos veces la membrana con PBS (200 µl). Se permitió que estos lavados de PBS se filtraran a través de la membrana bajo gravedad (2x15 minutos). Entonces se unió el aparato Bio-Dot a un colector de vacío y se realizó un tercer y último lavado con PBS bajo succión. El aparato fue desmontado, la membrana se removió y se cortó rápidamente según se requería antes de ser colocada en amortiguador de bloqueo durante la noche a 4°C. Las membranas preparadas para análisis de decorina se bloquearon con 3% (p/v) de BSA/0.1% (v/v) de Tween 20 en PBS, mientras que aquéllas para análisis de procolágeno-l se bloquearon con 5% (p/v) de lecho deshidratada descremtada en polvo/0.05% de Tween 20 en PBS. El día siguiente, las membranas fueron sondeadas con dilución 1:10000 de anticuerpos primarios a ya sea procolágeno-l humano (MAB1912; monoclonal de rata; Chemicon Int. Inc., Temecula, CA) o decorina humana (pol iclonal de conejo; Biogénesis) durante 2 horas a temperatura ambiente. Las membranas se lavaron subsecuentemente con TBS/0.05% de Tween 20 (3 x 5 minutos) y entonces se incubaron con dilución 1:1000 de fragmentos F(ab')2 anti-rata o anti-conejo 125l-conjugados (Amersham) según se requiere durante 1 hora a temperatura ambiente. Siguiendo esto, las tiras de Immobilon fueron lavadas nuevamente con TBS/Tween 20 (3 x 5 minutos) antes de permitir que se secaran en aire a temperatura ambiente. Las membranas secas se envolvieron en celofán y se expusieron a una pantalla de fósforo de almacenamiento Molecular Dynamics durante 16-18 horas. Al final de este tiempo, la pantalla expuesta se exploró mediante un formador de imágenes de fósforo (Molecular Dynamics Phosphori ager SF) usando el programa de cómputo lmageQuantMR. La intensidad de puntos se valoró mediante análisis de imágenes asistido por computadora usando las herramientas de cuantificación en lmageQuantMR, estandarizada a número de células y los efectos de varios reactivos de prueba en la síntesis de decorina y procolágeno-l se determinaron en relación a un valor de control tratado con vehículo de 100 unidades arbitrarias.

Ejemplo 5 PRUEBAS La tabla 5 más adelante indica el efecto sinérgico de ácido linoleico conjugado en combinación con el compuesto fenólico gallato de epigallocatequina (EGCG) en síntesis de procolágeno-l y/o decorina en fibroblastos dérmicos humanos, y las cantidades en las cuales los activos fueron aplicados. Con el fin de normalizar los resultados, los efectos de las substancias de prueba fueron determinados en relación a un valor de control tratado con vehículo de 100 unidades arbitrarias. Las concentraciones de reactivos usadas en los ensayos no tuvieron influencia en la viabilidad celular.

TABLA 5 Los resultados en la tabla 5 indican que la combinación de ácido linoleico conjugado con compuesto fenólico sobre-regula de manera sinérgica la síntesis de procolágeno-l y/o decorina en fibroblastos dérmicos humanos. El nivel de decorina en la piel está asociado con una condición y apariencia mejorada de la piel. Aumentar el nivel de decopna en la piel es importante para la deposición controlada y correcta de colágeno en la piel, el cual está asociado con muchos beneficios para la piel, tal como borradura de arrugas y reparación dérmica de piel fotodañada.

Ejemplo 6 Este ejemplo demuestra el efecto sinérgico de la combinación específica de ácido linoleico y un compuesto fenólico al reducir la respuesta inflamatoria de fibroblastos dérmicos.

Ensavo de PGE? e ICAM de fibroblastos La producción de PEG2 y moléculas de adhesión intracelular (ICAM) por fibroblastos de piel humana, puede inducirse mediante el estímulo inflamatorio de PMA (miristato acetato de forbal). PMA representa un tensor externo, el cual induce tensión oxidante y respuestas inflamatorias en células. Este modelo es usado para modelar la inflamación in vivo. Se sembraron fibroblastos de prepucio humano primario en el paso 2 (P2) en placas de 96 cavidades a 10000 células/cavidad y se mantienen durante 24 horas en una atmósfera de 5% de dióxido de carbono en medio Eagles modificado de Dulbeccos (DMEM) complementado con 10% de suero de ternera fetal. Las substancias de prueba como se indica en la tabla 7 a continuación, se adicionaron a medios de células frescos (DMEM, complementado con 10% de suero de ternera fetal) en dimetiisulfóxido y concentración final de etanol <1% por triplicado y se incubaron durante unas 24 horas adiconales. El miristato acetato de forbal (PMA) (Sigma) se adicionó 10 nM al medio y las células se incubaron durante unas 24 horas adicionales. El control solo contenía el vehículo, no contenía ningún compuesto de prueba o PMA. Los fibroblastos/medio fueron analizados entonces como se describe más delante de manera inmediata o se congelaron de golpe en nitrógeno líquido y se almacenan a -70°C para ..... . .i a.. .A=ag.ta. análisis futuro. Las células se contaron entonces y los datos del análisis dot-blot fueron estandarizados subsecuentemente al número de células.

Ensayo de prostaglandina E2 (PGE2): Se tomaron volúmenes de 50 µl para ensayo de PGE2 después de agitar suavemente la placa de cultivo. Los niveles de PGE2 en el medio fueron determinados con un conjunto de inmunoensayo de PGE2 Biotrak (Amersham, UK). El ensayo se basa en la competencia entre PGE2 sin marca en la muestra y una cantidad fija de PGE2 marcada con peroxidasa de rábano picante para una cantidad limitada de anticuerpo específico de PGE2 fija. Las concentraciones de PGE2 de muestra sin marca se determinaron de acuerdo con una curva estándar, la cual se obtuvo al mismo tiempo.

Ensayo de ICAM-1: Se desecharon los medios y las células se lavaron con PBS de Dulbecco. A las células lavadas, se adicionaron 150 µl de Tritón X-100 al 0.1% (Sigma) durante 3 minutos para extraer ICAM de la membrana celular. Los extractos fueron transferidos a tubos de centrífuga Eppendoff y se centrifugaron a 1000 g durante 2 min para remover los desechos celulares. Se usó un volumen de 100 µl de sobrenadante para el ensayo de ICAM. Se valoró ICAM-1 soluble con el conjunto de ensayo inmunoenzimométrico comercialmente disponibles (R&D Systems). Las concentraciones de ICAM-1 en las muestras se determinaron en base a una curva estándar que corre paralela.

Los resultados que fueron obtenidos del ensayo de PGE2 e ICAM se resumen en la tabla 6 a continuación.

Tabla 6 Los resultados anteriores muestran que las células de reto con un estímulo inflamatorio, tal como PMA (miristil acetato de forbol) provoca un aumento en la respuesta inflamatoria como se mide por la producción de prostaglandina E2 (PGE2). La combinación específica de ácido linoleico conjugado y compuesto fenólico reduce, de manera sinérgica, la respuesta inflamatoria como se mide por la producción de PGE2. Los resultados demuestran así, que las combinaciones específicas de activos dentro del alcance de la presente invención exhiben actividad anti-inflamatoria sorprendentemente sinérgica. Los resultados anteriores también demuestran que las células de reto con PMA provocan un incremento en la producción de ICAM. Tratar las células con una combinación de ácido linoleico conjugado con compuesto fenólico disminuye de manera sinérgica, la producción de molécula de adhesión intracelular (ICAM), la cual es otro marcador de inflamación. Estos resultados demuestran, de esta manera, que las combinaciones específicas de activos dentro del alcance de la presente invención, exhiben una actividad anti-inflamatoria buena y sorpendentemente sinérgica.

Ejemplo 7 La formulación a continuación describe una crema de aceite en agua adecuada para los métodos y usos de acuerdo con la presente invención. Los porcentajes indicados están en peso de la composición.

V*** 10 *Brij 56 es alcohol cetílíco POE (10) Alfol 16RD es alcohol cetílico 20 Ejemplo 8 La formulación a continuación describe una crema de emulsión de acuerdo con la presente invención. 25 ÉAfchAi» * AA-f * . Ljfe.fe-, a -, fe: Ambas composiciones tópicas anteriores del ejemplo 7 y 8 proporcionan un tratamiento cosmético efectivo para mejorar la apariencia de piel arrugada, envejecida, fotodañada y/o irritada, cuando se aplican a piel normal que se ha deteriorado a través del envejecimiento o fotoenvejecimiento, o cuando se aplican a piel joven para ayudar a prevenir o retardar tales cambios deterioradores. Las composiciones también son efectivas para calmar piel irritada, acondicionar piel seca, ^ J»ata? aclarar el color de la piel y reducir las secreciones de aceite y sebo Las composiciones pueden ser procesadas de manera convencional A* Ajaa*¿Aá fSf A

Claims (11)

REIVINDICACIONES

1. Una composición tópica que comprende: (a) ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo; (b) un compuesto fenólico y/o mezclas del mismo; y (c) un vehículo dermatológica y/o cosméticamente aceptable; con la condición de que el compuesto fenólico no sea un bloqueador solar.

2. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 1, en donde al menos 1% en peso de las porciones de linoleico conjugado del ácido y/o derivados del mismo están presentes como el isómero cis 9, trans 11 y/o el isómero trans 10 cis 12.

3. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 2, en donde al menos 50%, y de preferencia al menos 90% en peso de las porciones de linoleico conjugado del ácido y/o derivados del mismo están presentes como el isómero cis 9, trans 11 y/o el isómero trans 10 cis 12.

4. Una composición tópica de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde el compuesto fenólico es seleccionado de fenoles simples (C6), benzoquinonas (C6), ácidos fenólicos (C6-C?), acetofenonas (C6-C2), ácidos fenilacéticos (C6-C2), ácidos hidroxicinámicos (C6-C3), fenilpropenos (C6-C3), cumarinas, isocumarinas (C6-C3), cromonas (C6-C3), naftoquinonas (C6-C ), xantonas (C6-C?-Ce), estilbenos (C6-C2-C6), flavonoides (C6-C3-C6), lignanos, neolignanos (C6-C3)2 y ligninas (C6-C3)n.

5. Una composición tópica de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde el compuesto fenólico es seleccionado del grupo que comprende ácidos fenólicos, flavonoides o isoflavonoides, o derivados de los mismos o mezclas de los mismos.

6. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el compuesto fenólico es gallato 5 de epigallocatequina, naringenina, quercitina, catequina, daidzeína, genisteína, licetina, ácido gal lico o un fenol de té verde.

7. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el compuesto fenólico está presente a un nivel de 0.01 a 10% en peso de la composición. 10

8. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición es una composición que se deja puesta.

9. Un método cosmético para proporcionar al menos un beneficio cosmético para el cuidado de la piel seleccionado de: tratar/prevenir piel 15 arrugada, colgada, seca, envejecida y/o fotodañada; reforzar/mantener los niveles de colágeno en la piel, reforzar/mantener los niveles de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de aceite/sebo; comprendiendo el método aplicar a 20 la piel una composición tópica como se reclama en cualquier reivindicación precedente.

10. El uso de una composición cosmética como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 en la fabricación de un medicamento para proporcionar al menos un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado 25 de tratar/prevenir piel arrugada, colgada, envejecida, seca y/o fotodañada; •'j>"'rr-Mryrr-?in? ?i- i /.i, ¿..«.iJj reforzar/mantener los niveles de colágeno en la piel, reforzar/mantener los niveles de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; y aclarar la piel; controlar la secreción de aceite/sebo.

11. El uso de ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo en combinación con un compuesto fenólico y/o mezclas del mismo en la fabricación de una composición tópica para proporcionar al menos un beneficio para el cuidado de la piel, seleccionado de tratar/prevenir piel arrugada, colgada, envejecida y/o fotodañada; reforzar la deposición de colágeno en la piel, reforzar la producción de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de aceite/sebo; con la condición de que el compuesto fenólico no es un bloqueador solar.