ES2208377T3

ES2208377T3 - Composicion para el cuidado de la piel.

Info

Publication number: ES2208377T3
Application number: ES00949315T
Authority: ES
Inventors: Karen Elizabeth Barrett; Martin Richard Green; Anthony V. Unilever Res. Port Sunlight RAWLINGS
Original assignee: Unilever NV
Current assignee: Unilever NV
Priority date: 1999-07-30
Filing date: 2000-07-11
Publication date: 2004-06-16
Anticipated expiration: 2020-07-11
Also published as: CA2391341C; EP1200059B1; JP2013253087A; ATE250921T1; JP5416875B2; WO2001008650A1; MXPA02001030A; CN1376051A; EP1200059A1; AU753782B2; KR100772752B1; DE60005678T2; AU6272100A; TWI232110B; CA2391341A1; JP2003505490A; ZA200200551B; KR20020047100A; GB9918025D0; DE60005678D1

Abstract

Una composición tópica que comprende: a) ácido linoléico conjugado y/o un derivado adecuados para este uso, en el que el derivado de ácido linolénico es un éster glicérido, una amida, una sal o un ácido linoléico conjugado sustituido; b) ácido retinoico, retinol o un éster de retinilo y/o un inhibidor LRAT / ARAT; y c) un vehículo dermatológicamente aceptable.

Description

Composición para el cuidado de la piel.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a composiciones tópicas para aplicación a la piel humana y a su uso para mejorar el estado y apariencia de la piel.

Antecedentes de la invención

La piel está sujeta a deterioro por trastornos dermatológicos, exposición a medio ambiente adverso (viento, aire acondicionado y calefacción central) o a través del proceso de envejecimiento normal (cronoenvejecimiento), que puede acelerarse por la exposición de la piel al sol (fotoenvejecimiento). En los últimos años, la demanda de composiciones cosméticas y procedimientos cosméticos para mejorar el estado y apariencia de la piel han aumentado enormemente.

Los consumidores buscan cada vez más productos cosméticos antienvejecimiento que remedien o retarden los signos visibles del cronoenvejecimiento o fotoenvejecimiento de la piel tales como: arrugas, marcas, descolgamiento, hiperpigmentación y manchas de envejecimiento.

Los consumidores frecuentemente buscan también otros beneficios en los productos cosméticos además del antienvejecimiento. El concepto de piel sensible también ha hecho aumentar la demanda de los consumidores de productos cosméticos que mejoren la apariencia y estado de la piel sensible, seca y/o escamosa, y para calmar la piel enrojecida y/o irritada. Los consumidores también desean productos cosméticos que tengan un efecto de control de la grasa / sebo.

Mucha gente está preocupada acerca del grado de pigmentación de su piel. Por ejemplo, las personas con manchas de envejecimiento o pecas querría que tales manchas pigmentadas fueran menos pronunciadas. Otros pueden desear reducir el oscurecimiento de la piel causado por la exposición a la luz solar, y otros aclarar el color natural de su piel. Para cumplir estas necesidades se han hecho intentos para desarrollar productos que redujeran la producción de pigmentos en los melanocitos. Sin embargo, las sustancias identificadas hace tiempo tiende a tener efectos secundarios indeseables, por ejemplo, irritación de la piel.

Por consecuencia, tales sustancias no son adecuadas para uso cosmético, o sólo pueden aplicarse a concentraciones tales que su efecto sobre el aclaramiento de la piel es inferior al deseado. El usar una combinación de distintas sustancias aclaradoras de la piel puede tenerse en cuenta para reducir los efectos secundarios adversos, pero hay un riesgo sustancial de que usando tal combinación se reduzca la aclaración de la piel así como que aparezcan efectos competitivos. Por tanto, existe una necesidad de mejora de los productos cosméticos para el aclarado de la piel, en particular aquellos que no irriten la piel.

Son bien conocidas en la técnica las composiciones cosméticas y dermatológicas para el cuidado de la piel para mejorar el estado y la apariencia de la piel comprendiendo ésteres triglicéridos de cadena larga de ácidos grasos esenciales poliinsaturados, los ácidos libres y sus sales alcalinas o de amonio. Por ejemplo, el documento GB 2181349 A describe Inter alia una composición compuesta de triglicéridos del ácido linoléico para mejorar la suavidad y elasticidad de la piel. Un producto comercial, Linola Fett n, del Dr August Wolf Gmbh, está disponible para el tratamiento de las enfermedades de la piel seca, y dermatosis, que contiene inter alia una mezcla de los isómeros 9,11 del ácido linoléico conjugado.

Retinol (vitamina A) es un compuesto endógeno que se encuentra de forma natural en el cuerpo humano y es esencial para la diferenciación normal de las células epiteliales. Los derivados de la vitamina A (retinoides, tanto naturales como sintéticos, se han usado ampliamente en el tratamiento de diferentes trastornos de la piel y se han usado como agentes reparadores o renovadores de la piel. El ácido retinoico, por ejemplo, se ha usado para tratar distintas dolencias de la piel, por ejemplo, acné, arrugas, psoriasis, manchas de envejecimiento y decoloración. Ver por ejemplo, Vahlquist, A y col., J. Invest. Dermatol., vol. 94, Holland D. B. y Cunliffe, W. J. (1990), pp. 496-498; Ellis, C. N. y col., "Pharmacology o Retinols in Skin", Vasel, Karger, Vol. 3, (1989), pp. 249-252; Lowe, N. J. y col., "Pharmacology of Retinols in Skin", vol. 3, (1989), pp. 240-248; PCT Solicitud de Patente nº WO 93/19743.

El documento WO 99/26588 describe cremas cosméticas antienvejecimiento para la piel comprendiendo ácido linoléico conjugado y opcionalmente ascorbato de retinoílo, que es un éster del ácido retinoico.

Otras solicitudes de patente incluyen descripciones de composiciones conteniendo ácido linoléico y retinol y/o sus derivados. Entre estas se incluyen WO-A-98/13020, US-A-5.759.556, US-A-5.723.139, EP-A-742.005, y US-A-5.451.405.

Sigue existiendo una necesidad, sin embargo, para composiciones cosméticas efectivas alternativas para aplicación tópica a la piel para tratar / retrasar los signos visibles del envejecimiento y de la piel fotodañada, como son arrugas, marcas, descolgamiento, hiperpigmentación y manchas de envejecimiento.

Hemos encontrado que puede obtenerse un tratamiento efectivo y prevención del las dolencias normales (aunque cosméticamente indeseables) de la piel debido al cronoenvejecimiento y fotoenvejecimiento, como son arrugas, marcas, descolgamiento, hiperpigmentación y manchas de envejecimiento, mediante la aplicación de composiciones cosméticas a la piel que consisten en un ácido graso específico -ácido linoléico conjugado y/o derivados adecuados para este uso en combinación con ácido retinoico, retinol o un éster de retinol (un éster de retinilo) y/o un inhibidor del enzima acil CoA retinol transferasa (ARAT) o el enzima lecitín retinol acil transferasa (LRAT) (denominados a partir de ahora en la presente invención como inhibidores LRAT / ARAT). Hemos encontrado también que el uso de tales composiciones cosméticas proporciona de forma ventajosa más beneficios a la piel adicionales al antienvejecimiento, como suavizar la piel sensible y/o irritada, controlar la secreción de grasa / sebo y para el aclaramiento de la piel.

La técnica discutida anteriormente no describe la combinación sinérgica específica de ácido linoléico conjugado con ácido retinoico, retinol o un éster de retinol y/o inhibidores LRAT / ARAT, ni el uso de tal combinación específica para el tratamiento de arrugas, piel sensible, piel seca, controlar la secreción de grasa / sebo, o aclaramiento de la piel.

Resumen de la invención

De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención, se proporciona una composición tópica comprendiendo:

a): ácido linoléico conjugado y/o derivados adecuados para este uso

b): ácido retinoico, retinol o un éster de retinilo y/o inhibidores LRAT / ARAT); y

c): Un vehículo dermatológicamente aceptable.

De acuerdo con un segundo aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento cosmético para proporcionar al menos un beneficio de cuidado de la piel seleccionado de: tratar / prevenir aparición de arrugas, descolgamiento, sequedad, piel envejecida y/o fotodañada; acelerar/mantener los niveles de colágeno en la piel, acelerar los niveles de decorina en la piel, mejorar la reparación de tejidos; calmar la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de grasa / sebo, el procedimiento comprendiendo aplicar a la piel una composición tópica como se ha descrito anteriormente.

La presente invención también acompasa el uso de las composiciones inventivas para proporcionar al menos un beneficio de cuidado de la piel seleccionado de: tratar / prevenir aparición de arrugas, descolgamiento, sequedad, piel envejecida y/o fotodañada; acelerar/mantener los niveles de colágeno en la piel, acelerar los niveles de decorina en la piel, mejorar la reparación de tejidos; calmar la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y firmeza de la piel; aclarar la piel; y controlar la secreción de grasa / sebo.

De acuerdo con otro aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de ácido linoléico conjugado y derivado adecuados para este uso en combinación con ácido retinoico, retinol, éster de retinilo y/o un inhibidor LRAT / ARAT en una composición cosmética tópica para proporcionar al menos un beneficio de cuidado cosmético de la piel seleccionado de: tratar / prevenir aparición de arrugas, descolgamiento, sequedad, piel envejecida y/o fotodañada; acelerar/mantener los niveles de colágeno en la piel, acelerar los niveles de decorina en la piel, mejorar la reparación de tejidos; calmar la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de grasa / sebo.

Las composiciones inventivas, procedimientos y usos proporcionan así beneficios antienvejecimiento que resultan en la promoción de una piel suave y ligera con elasticidad mejorada y una apariencia reducida o retardada de arrugas y piel envejecida, con color de la piel mejorado. Se consigue una mejora general del aspecto, textura y estado, en particular con respecto a la radiancia, claridad y apariencia en general juvenil de la piel. Las composiciones inventivas, procedimientos y usos son también beneficiosos para suavizar y calmar la piel sensible y/o irritada, para aclarar la piel y para controlar la secreción de grasa / sebo. Así, la presente invención proporciona de forma ventajosa un amplio intervalo de beneficios de cuidado de la piel.

El término tratamiento tal como se usa en la presente invención incluye en su alcance reducir, retrasar y/o prevenir los anteriormente mencionados problemas de la piel normal tales como piel arrugada, envejecida y/o fotodañada, y/o irritada, y mejorando generalmente la calidad de la piel y mejorando su apariencia y textura previniendo o reduciendo irritación, aparición de arrugas e incrementando la flexibilidad, firmeza, suavidad, ligereza y elasticidad de la piel. Las composiciones, procedimientos y usos de acuerdo con la invención pueden ser útiles para tratar la piel que está próxima a un estado de aparición de arrugas, envejecimiento, fotodaño, irritación, o para tratar la piel juvenil para prevenir o reducir los indeseables cambios anteriormente mencionados debido a los procesos normales de envejecimiento / fotoenvejecimiento.

Descripción detallada de la invención

El ácido linoléico conjugado (denominado de ahora en la presente invención como CLA) es un ácido graso diinsaturado de cadena larga (C18). CLA comprende un grupo de isómeros geométricos y posicionales de ácido linoléico con diferentes configuraciones posibles de dobles enlaces cis y trans en las posiciones (6, 8), (7, 9), (8, 10), (9, 11), (10, 12) o (11, 13). Así, existen veinticuatro isómeros diferentes de CLA.

La invención también incluye derivados de los ácidos libres que así comprende fracciones de ácido linoléico conjugado. Entre los derivados preferibles se incluyen aquellos derivados a partir de la sustitución del grupo carboxilo del ácido, tales como ésteres (por ejemplo, ésteres triglicéridos, ésteres monoglicéridos, ésteres diglicéridos, fosfoésteres), amidas, (por ejemplo, derivados de ceramida), sales, (por ejemplo, sales de metales alcalinos y metales alcalinotérreos, sales de amonio); y/o aquellos derivados por sustitución de la cadena de C18 carbono, como derivados alfa hidroxilados y/o beta hidroxilados.

En el caso de los derivados de éster de triglicérido, se incluyen todos los isómeros posicionales de los sustituyentes de CLA sobre el esqueleto del glicerol. Los triglicéridos deben contener al menos una fracción CLA. Por ejemplo, de las tres posiciones esterificables del esqueleto del glicerol, las posiciones 1 y 2 pueden esterificarse con CLA y con otro lípido en la posición 3, o de forma alternativa, el esqueleto de glicerol puede esterificarse con CLA en las posiciones 1 y 3 y con otro lípido en la posición 2.

Los isómeros más preferidos de CLA para uso en la presente invención son los isómeros cis 9 trans 11 (c9 t11) o trans 10 cis 12 (t10 c12). Preferiblemente, al menos 1% en peso del CLA total y/o fracciones de CLA presentes en la composición está en la forma del isómero c9, t11 y/o t10, c12. Más preferiblemente al menos 20% y lo más preferiblemente al menos 40% en peso del CLA total y/o fracciones de CLA presentes en la composición están en la forma del isómero c9, t11 y/o t10, c12.

En una forma de realización preferida, el ácido linoléico conjugado se enriquece en el isómero c9, t11 ó en el t10, c12. Por "enriquecer" se entiende que al menos el 50% en peso del CLA total y/o fracciones de CLA presentes en la composición están en la forma del isómero cis 9, trans 11 o el isómero trans 10, cis 12. Preferiblemente, al menos el 70%, más preferiblemente al menos el 80% y lo más preferiblemente, al menos 90% en peso del CLA total y/o fracciones de CLA presentes en la composición están en la forma del isómero c9, t11 o el isómero t10, c12.

El CLA y/o derivados adecuados del mismo comprendiendo fracciones de CLA de acuerdo con la presente invención se consiguen comercialmente en forma de aceites ricos en triglicéridos de ácido linoléico conjugado, tales como aceite de Tung o aceite de ricino deshidratado (Unichema). Un producto mezcla de isómeros está disponible en Sigma, y un CLA enriquecido en el isómero c9 t11 está disponible en Matreya, Inc. De forma alternativa, CLA de acuerdo con las formas de realización preferidas de esta invención puede prepararse de acuerdo con el procedimiento escrito en el documento WO 97/18320 cuyo contenido se incorpora en la presente invención como referencia. Un procedimiento preferido de preparación se describe en Ejemplo 1 a continuación.

Cualquiera de los términos "ácido linoléico conjugado" o "CLA" que se use en esta memoria debe entenderse que los derivados adecuados para lo mismo comprendiendo fracciones CLA también están incluidos "Fracciones CLA" se refiere a la(s) porción(es) acilo de ácido graso CLA de un derivado de CLA.

El CLA, a emplear de acuerdo con la presente invención se presenta en la composición tópica en una cantidad efectiva. Normalmente, la cantidad total del ingrediente activo está presente en una cantidad entre 0,0001% y 50% en peso de la composición. Más preferiblemente, la cantidad es desde 0,01% a 10% y más preferiblemente de 0,1% a 5% con el objeto de maximizar beneficios a un coste mínimo.

Las composiciones de acuerdo con la presente invención también incluyen de manera específica ácido retinoico, retinol, éster de retinilo y/o un inhibidor LRAT / ARAT.

El término "retinol" incluye los siguientes isómeros de retinol: todo-trans- retinol, 13-cis-retinol, 11-cis-retinol, 9-cis-retinol, 3,4-dihidro-retinol. Los isómeros preferidos son todo-trans-retinol, 13-cis-retinol, 3,4-dihidro-retinol, 9- cis-retinol. El más preferido es todo-trans-retinol, debido a su amplia disponibilidad comercial.

El éster de retinilo es un éster de retinol. El término "retinol" se ha definido anteriormente. Los ésteres de retinilo adecuados para usar en la presente invención son ésteres C_{1}-C_{30} de retinol, preferiblemente ésteres C_{2}-C_{20}, y más preferiblemente ésteres C_{2}-C_{3} y ésteres C_{16} puesto que estos están disponibles de manera habitual. El éster preferido para uso en la presente invención se selecciona entre palmitato de retinilo, acetato de retinilo, propionato de retinilo y linoleato de retinilo, puesto que estos están disponibles de manera habitual y además son los más baratos. El éster de retinilo se prefiere también debido a su eficacia.

Inhibidor LRAT / ARAT

Retinol es un compuesto endógeno que se encuentra de forma natural en el cuerpo humano y es esencial para la diferenciación celular normal del tejido epitelial. Los ésteres de retinol se hidrolizan in-vivo para producir retinol. Se cree que los ésteres de retinilo y retinol se transforman metabólicamente en la piel en ácido retinoico de acuerdo con el siguiente mecanismo:

1

Sin embargo, la mayor parte del retinol aplicado de forma endógena se convierte rápidamente en ésteres grasos inactivos para almacenamiento en las células epidérmicas (queratinocitos).

La esterificación del retinol en ésteres de retinilo inactivos se consigue en las células mediante trasferencia de un grupo acilo graso a partir de un acil CoA, catalizado mediante el enzima acil CoA retinol transferasa (ARAT), o mediante trasferencia de un grupo acilo graso a partir de fosfatidil colina, catalizada mediante el enzima lecitín retinol acil transferasa (LRAT). Estas reacciones de esterificación son muy eficientes en queratinocitos -la mayoría (95%) de los retinoides celulares están en la forma de ésteres grasos de retinilo.

El término "inhibidor LRAT / ARAT" en la presente solicitud significa así un agente que inhiba estas reacciones de esterificación y que potencie así la acción del retinol mediante el aumento del retinol disponible para conversión en ácido retinóico.

Los inhibidores LRAT / ARAT que entran en el alcance de la presente invención se identifican como aquellos compuestos que a una concentración de 100 \mum inhiben al menos un 20% de la esterificación del retinol catalizada mediante LRAT ó ARAT, tal como se determina mediante el Ensayo Microsomal descrito a continuación en Ejemplo 3. En una forma de realización preferida de la invención, el inhibidor LRAT / ARAT es un compuesto que a una concentración de 100 \mum inhibe al menos un 40% y lo más preferiblemente al menos un 50% de la esterificación del retinol catalizada mediante LRAT ó ARAT. El Ensayo Microsomal in vitro empleado para determinar si un compuesto es no un posible inhibidor LRAT / ARAT es como se describe a continuación en el Ejemplo 3.

Así resulta que si un compuesto aprueba el microensayo Microsomal in vitro, esto es, que inhibe suficientemente la esterificación del retinol catalizada mediante LRAT ó ARAT tal como se determina mediante el Ensayo Microsomal in vitro, se incluye en la presente invención aunque no se mencione específicamente en la presente invención.

Entre los ejemplos de tales inhibidores de LRAT / ARAT se incluyen amidas de ácido graso, amidas de hidroxi ácido graso, ceramidas, melinamida, imidazolidinonas, e hidrocarburos insaturados alifáticos cíclicos, terpenos y tensioactivos grasos de hidroxietil imidazolina.

Compuestos cíclicos alifáticos insaturados

Los compuestos cíclicos alifáticos insaturados adecuados insaturados se seleccionan de acuerdo con el Ensayo Microsomal in vitro descrito anteriormente.

Un compuesto cíclico alifático insaturado preferido se selecciona entre aldehídos insaturados alifáticos cíclicos, cetonas, alcoholes y ésteres tales como alfa damascona, beta dasmascona, delta damascona, isodamascona, damascenona, alfa ionona, beta ionona, alil alfa ionona, isobutil ionona, alfa metil ionona, gamma metil ionona, brahmanol, sandanol, alfa terpineol, liral, safranato de etilo, y mezclas de los mismos. Preferiblemente, con el objetivo de maximizar rendimiento a coste mínimo, un compuesto cíclico alifático insaturado preferido se selecciona entre el grupo consistente en damasconas e iononas.

Lo más preferible, el compuesto cíclico alifático insaturado es una \alpha-damascona y/o \alpha-ionona.

Diterpenos

Los diterpenos adecuados se seleccionan de acuerdo con el Ensayo Microsomal in vitro descrito anteriormente. Un compuesto diterpeno preferido es geranil geraniol, que es un potente inhibidor de la esterificación de retinol.

Tensioactivos grasos de hidroxietil imidazolina

Los tensioactivos grasos de hidroxietil imidazolina incluidos en la presente invención aprueban el Ensayo Microsomal in vitro descrito anteriormente. Las hidroxietil imidazolinas grasas preferidas tienen la siguiente estructura general:

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en la que R es una cadena hidrocarbonada saturada o insaturada, lineal o ramificada, conteniendo entre 8 y 20 átomos de carbono.

Preferiblemente, R en la hidroxietil imidazolina grasa contiene entre 8 y 18 átomos de carbono, más preferiblemente entre 11 y 18 átomos de carbono. Lo más preferible, la hidroxietil imidazolina grasa es oleil hidroxietil imidazolina, debido a su disponibilidad comercial y eficacia.

Amida de ácido graso

Preferiblemente, la amida de ácido graso contiene al menos 6 átomos de carbono. Entre los ácidos grasos adecuados se incluyen ácidos grasos saturados e insaturados, lineales o ramificados. Los ácidos grasos adecuados contienen preferiblemente de 8 a 24 átomos de carbono, preferiblemente de 12 a 20 átomos de carbono, y lo más preferible de 12 a 18 átomos de carbono, puesto que las amidas de ácidos grasos de cadena de mayor longitud son más beneficiosas para acondicionado de la piel. En la forma de realización más preferida de la invención, se emplean amidas de ácidos grasos esenciales debido a que los ácidos grasos esenciales proporcionan nutrición a la piel. Entre los ejemplos de ácidos grasos esenciales se incluyen, aunque no se limitan a, linoléico, linolénico, araquidónico, gamma-linolénico, homo-gamma- linolénico, y mezclas de los mismos. El ácido linoléico es el más preferido puesto que es también un precursor de ceramida.

Entre las amidas preferidas en la presente invención se incluyen mono- y dialcanolamidas, particularmente de ácidos grasos esenciales. Las alcanol amidas están más comúnmente disponibles que las alquil amidas.

Las ámidas de ácido graso más preferidas se seleccionan a partir de mono- y dietanolamidas y fosfatidietanolaminas de ácido linoléico, ácido palmítico, y aceite de cómo, dietil cocamida, linoleamidil dimetilamina, dimetil linoleamida, dietil linoleamida, dimetil palmitida, miristoil sarcosina.

Amidas de hidroxi ácido graso

La estructura de una amida de hidroxi ácido graso es como sigue:

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en la que R_{1}, R_{2} y R_{4} se seleccionan cada uno de forma independiente entre hidrógeno y cadenas hidrocarbonadas alifáticas, saturadas o insaturadas, lineales o ramificadas, que pueden estar hidroxiladas; conteniendo de 1 a 20 átomos de carbono; R_{3} es -(CH_{2})_{n} donde n es un entero entre 0 a 18.

Preferiblemente R_{1}, R_{2} y R_{4} cada uno independientemente contiene de 2 a 20 átomos de carbono, más preferiblemente de 2 a 15 átomos de carbono, lo más preferible de 3 a 13 átomos de carbono.

Preferiblemente la amida de hidroxi ácido graso es una amida de \alpha- o \beta- hidroxi ácido, es decir, n es 0 ó 1.

Las amidas de hidroxi ácido graso más preferidas a incluir en las composiciones inventivas son lactamida-monoetanolamina, c_{13}-\beta-hidroxi ácida amida (2-hidroxi-c_{13}-amida), N-hidroxietil-2-hidroxi-c_{16} amida, 12-hidroxi-N-(2-hidroxietil) octadecanamida, y monoetanolamida de aceite de ricino.

Ácido policíclico triterpeno carboxílico (PTCA)

Un ejemplo adicional de un inhibidor LRAT / ARAT adecuado es un PCA que apruebe el ensayo Microsomal in vitro.

Preferiblemente, el PCTA es un ácido pentacíclico triterpeno monocarboxílico.

Más preferiblemente, el PCTA se selecciona entre el grupo consistente en ácido ursólico, ácido oleanólico, ácido glicerretínico y ácido glicirrízico.

Los PCTA están disponibles comercialmente de Aldrich y Sigma. Los extractos de plantas conteniendo PCTA son adecuados para uso en la presente invención por ejemplo Rosmarinus officinalis (romero), Diospyros ssp. (arbol de San Andrés), Forsythia suspensa (forsitia), Lavandula angustifolia (lavandula), Prunella vulgaris (consuelda menor), Paeonia lactifolia (peonía), Glycyrrhiza gabra (regaliz).

Debe entenderse que, dependiendo del pH de la composición, PTCA puede estar presente en la composición en forma de una sal, por ejemplo, sal de alcalino o alcalinotérreo.

Ceramidas

Las ceramidas pueden, por ejemplo, ser ceramidas naturales, fitoceramidas de cadena corta, pseudoceramidas o neoceramidas. La estructura general de esta moléculas se describe en el documento EP A 711558 cuyo contenido se incorpora en la presente invención como referencia. El derivado más preferido de ceramida es acetil esfingosina debido a su eficacia.

El ácido retinoico, retinol, ésteres de retinilo y/o inhibidor LRAT / ARAT pueden estar incluidos en las composiciones inventivas en una cantidad en el intervalo de 0,0001 a 50% en peso de la composición, preferiblemente de 0,01 a 10%, más preferiblemente de 0,1 a 5%.

Vehículo dermatológicamente aceptable

La composición usada de acuerdo con la invención también comprende un vehículo dermatológicamente / cosméticamente aceptable que actúe como un diluyente, dispersante o vehículo para los ingredientes activos. El vehículo puede comprender materiales habitualmente empleados en los productos de cuidado de la piel tales como agua, emolientes líquidos o sólidos, aceites de silicona, emulsificantes, solventes, humectantes, espesadores, polvos, propelentes y similares.

El vehículo formará usualmente entre 5% a 99,9%, preferiblemente entre 25% a 80% en peso de la composición y puede, en la ausencia de otros adjuntos cosméticos, equilibrar la composición.

Materiales opcionales para beneficio de la piel y adjuntos cosméticos.

Además de los ingredientes activos, pueden también incluirse otros agentes activos para beneficio específico de la piel tales como protectores solares, otros agentes aclarantes de la piel, y agentes bronceantes de la piel. El vehículo también puede incluir además adjuntos como perfumes, opacificantes, conservantes, colorantes y tampones.

Preparación del producto, forma, uso y envasado

Para preparar la composición tópica usada en el procedimiento de la presente invención, puede emplearse la forma usual de preparar los productos para cuidado de la piel. Los componentes activos se incorporan generalmente en un vehículo dermatológicamente / cosméticamente aceptable en la forma convencional. Los componentes activos pueden de forma adecuada en primer lugar disolverse o dispersarse en una porción de agua u otro solvente o líquido a incorporar en la composición. Las composiciones preferidas son emulsiones aceite-en-agua o agua-en-aceite o agua-en-aceite-en-agua.

La composición puede estar en la forma de un producto convencional para el cuidado de la piel tal como una crema, gel o loción, cápsulas o similares. La composición también puede esta en la forma así denominada producto "de lavado", por ejemplo, un gel de baño o ducha, posiblemente conteniendo un sistema de liberación de los productos activos para promover adherencias a la piel durante el aclarado. Lo más preferible, el producto es un producto "de deposición", esto es, un producto a aplicar sobre la piel sin una etapa deliberada de aclarado inmediatamente después de su aplicación a la piel. La composición puede envasarse de cualquier forma adecuada como en un frasco, botella, tubo, sistema rol.lon, o similar, en la forma convencional. También se presagia que las composiciones inventivas pueden estar envasadas en forma de un kit de dos composiciones separadas una conteniendo el ácido linoléico conjugado y el segundo conteniendo el ácido retinoico, éster de retinilo / inhibidor LRAT / ARAT para aplicar a la piel de manera simultánea o consecutiva.

La composición de acuerdo con la presente invención puede también estar formulada en una forma adecuada para ingestión oral, tal como un comprimido, cápsula o similar.

El procedimiento de la presente invención puede llevarse a cabo una o más veces al día sobre la piel que requiera tratamiento. La mejora en la apariencia de la piel será visible normalmente tras 3 a 6 meses, dependiendo del estado de la piel, la concentración de los ingredientes activos usados y la frecuencia con la cual se aplique. En general, una pequeña cantidad de la composición por ejemplo de 0,1 a 5 ml se aplica a la piel a partir de un contenedor adecuado o aplicador, y esparcido y/o introducido en la piel usando las manos o dedos o un dispositivo adecuado. Puede seguir una etapa de aclarado de forma opcional, dependiendo si la composición se formula como un producto "de depósito" o "de lavado".

Con el objetivo de que la presente invención se entienda más fácilmente, se proporcionan los siguientes ejemplos, a título meramente ilustrativo.

Ejemplos Ejemplo 1

Este ejemplo ilustra la síntesis de ácido linoléico conjugado comprendiendo el isómero c9 t11 y el isómero t10 c13.

Producción de mezcla de isómeros de CLA

Se disolvieron "Reactivo Analar" (AR), hidróxido de sodio (0,6 kg) en 6 kg de propilén glicol calidad farmacéutica, mezclando y calentando a 80-85ºC. La muestra se enfrió, y se añadieron 2 kg de aceite de cártamo. Usando un equipo escala piloto convencional, la mezcla se calentó a 170ºC a reflujo durante 3 horas con agitación rápida. La mezcla de reacción se enfrió hasta unos 95ºC, la agitación se redujo a una velocidad intermedia, y la mezcla se neutralizó usando 1,280 litros de ácido clorhídrico al 35,5% disuelto en agua desmineralizada (8 litros), manteniendo la temperatura a aproximadamente 90ºC. Se dejó sedimentar la mezcla de reacción y se eliminó la fase acuosa. La fase oleosa se lavó con 2 x 1 litro de solución de sal AR al 5% y mediante 2 x 1 litro de agua desmineralizada a 90ºC, eliminando cualquier material jabonoso. El aceite CLA enriquecido se secó a 100ºC mediante vacío antes del drenaje a aproximadamente 50ºC, y se filtró a través de un sistema Buchner conteniendo un filtro Whatman y una capa fina de filtro celita-hyflo. La mezcla de isómeros de aceite de CLA se almacenó bajo nitrógeno a -25ºC hasta que fue necesaria. La composición del aceite producido por este procedimiento se muestra en la Tabla 1 a continuación:

TABLA 1

Composición de la mezcla de ácidos grasos CLA	Porcentaje relativo de lípidos ácidos grasos totales
(% en peso)
c9, t11	34,1 (47% de CLA total)
t10, c12	34,1 (47% de CLA total)
c9, c11 \textamp c10, c12	2,3
t9, t11t \textamp c10, 12t	0,7
Otros CLA	1,4
CLA total	72,6
16:0	7,0
16:1	0,8
18:0	2,5
18:1	13,3
18:2 (no CLA)	3,3
Otros ácidos grasos	0,5

2. Producción del CLA enriquecido en el isómero c9 t11 (I) preparación de ésteres laurilo

Se añadió CLA preparado de aceite de cártamo (2,0 kg) a 2 x equivalentes molares de lauril alcohol (1-dodecanol, 98%, de Aldrich Chemicals) junto con 5,96 kg de agua desmineralizada. La temperatura se ajustó a 25ºC y se añadió Geotrichum Candidum al 1% p/p (de Amano Pharmaceuticals, Japón) premezclado con un poco de agua, y se mezcló vigorosamente. La reacción se detuvo a 44 horas. El recipiente se calentó hasta 80-90º, la capa acuosa se drenó, y el aceite se lavó con agua desmineralizada a 100ºC y se secó a vacío durante 30 minutos. El aceite se enfrió hasta 50ºC y se filtró a través de un sistema Buchner conteniendo un filtro Whatman y una capa fina de filtro celita-hyflo.

(II) Separación de ésteres de CLA enriquecidos en c9, t11

Se eliminó el lauril alcohol residual a 130ºC a 25-35 ml por minuto mediante destilación molecular. El residuo se separó rudamente en los ésteres de laurilo (enriquecidos en CLA c9, t11) por evaporación a 158ºC con un caudal de 25-35 ml por minuto. Cualquier ácido libre remanente en el residuo de éster de laurilo se redujo mediante una destilación adicional a 171ºC y a un caudal de a 30-40 ml por minuto. Se neutralizaron 2.790 g de residuo de éster de laurilo a 90ºC usando 330 ml de hidróxido de sodio AR 4M, seguido de separación del aceite de la capa acuosa, 3 x lavados del aceite con agua desmineralizada caliente, otro lavado con álcali 0,1 M y dos lavados con agua caliente. La muestra de éster laurilo se secó como se ha indicado anteriormente.

(III) Saponificación de los ésteres de laurilo CLA enriquecidos en c9, t11

Los ésteres de laurilo de CLA enriquecidos en c9, t11 se saponificaron usando hidróxido de sodio AR / alcohol del 96% calidad alimentaria y se reacidificaron usando ácido clorhídrico concentrado AR. La mezcla de reacción conteniendo los ácidos grasos libres CLA enriquecidos se secó a 100ºC y se secó como se ha indicado anteriormente a aproximadamente 50ºC. Se eliminó el lauril alcohol mediante evaporación a 132ºC a 25-30 ml por minuto. Con el objetivo de eliminar cualquier lauril alcohol residual, los alcoholes libres fueron esterificados a los ácidos grasos presentes en la mezcla de reacción usando lipasa SP392 Mucor miehei (5%, por lotes, de Novo Nordisk). El CLA enriquecido en c9 t11 conteniendo ácidos grasos se separo de los ésteres de laurilo usando destilación molecular a 155ºC a 15-20 ml por minuto. La composición del CLA enriquecido en c9 t11 producido mediante el procedimiento anterior se muestra en la Tabla 2 a continuación:

TABLA 2

Composición de la preparación típica de ácidos grasos CLA	Porcentaje relativo de lípidos ácidos grasos totales
enriquecidos en c9, t11 (% en peso)
c9, t11	66,1 (93% de CLA total)
t10, c12	4,1
c9, c11 \textamp c10, c12	0,3
t9, t11t \textamp c10, 12t	0,4
Otros CLA	0,2
CLA total	71,1
16:0	1,6
16:1	-
18:0	0,4
18:1	22,3
18:2 (no CLA)	4,5
Otros ácidos grasos	0,1

(II) Separación de ésteres de CLA enriquecidos en t10 c12

Se eliminó el lauril alcohol residual a 130ºC a 25-35 ml por minuto mediante destilación molecular. El residuo se separó rudamente en los ésteres de laurilo (enriquecidos en CLA t11, c9) y en ácidos libres (enriquecidos en CLA t10, c12) por evaporación a 150ºC con un caudal de 25-35 ml por minuto.

(III) Aislamiento del CLA enriquecido en t10 c12

Los ácidos libres de la etapa (II) anterior se destilaron de nuevo a 160-165ºC y 20-30 ml/min para reducir el contenido en ésteres. El alcohol laurilo residual se redujo todavía más mediante una destilación a 131ºC y caudal de 25-30 ml/min. Con el objetivo de eliminar cualquier lauril alcohol residual, los alcoholes libres fueron esterificados a los ácidos grados presentes en la mezcla de reacción usando lipasa SP392 Mucor miehei (5%, por lotes, 0110 de Novo Nordisk). El CLA enriquecido en t10 c12 conteniendo ácidos grasos se separo de los ésteres de laurilo usando destilación molecular a 155ºC a 15-20 ml por minuto. La composición del CLA enriquecido en t10 c12 producido mediante el procedimiento anterior se muestra en la Tabla 3 a continuación:

TABLA 3

Composición de la preparación típica de ácidos grasos CLA enriquecidos	B
en t10, c12 (% en peso)
c9, t11	8,3
t10, c12	53,9 (80% de CLA total)
c9, c11 \textamp c10, c12	2,9
t9, t11t \textamp c10, 12t	1,1
Otros CLA	0,7
CLA total	66,9
16:0	13,6
16:1	-
18:0	4,6
18:1	10,3
18:2 (no CLA)	3,1
Otros ácidos grasos	1,5

Ejemplo 2 Preparación de los triglicéridos de CLA t10, c12

Se mezcló CLA enriquecido en t10, c12 (10 g) preparado de acuerdo con el ejemplo 1 con 1,01 g (10,1%) de glicerol (Pricerine 9083, glicerina CP de Ellis and Everards) y se añadieron 0,5 g (aproximadamente 5%) de lipasa no específica SP392 Mucor miehei (5%, por lotes, 0110 de Novo Nordisk). Los materiales mezclados se agitaron bajo vacío en un rotavapor a 60ºC con una ligera purga de nitrógeno.

Tras 96 horas, la reacción se paro filtrando la muestra a través de una capa fina de celita super-cel auxiliar de filtrado en un embudo Buchner, recogiendo la fase de aceite de triglicérido de CLA, la composición de la cual se muestra en la Tabla 4 a continuación.

TABLA 4

Composición de los triglicéridos de la composición de ácidos	Porcentaje relativo de lípidos ácidos grasos totales
grasos
c9, t11	8,3
t10, c12	54,8 (81% de CLA total)
c9, c11 \textamp c10, c12	2,7
t9, t11t \textamp t10, 12t	1,3
Otros CLA	0
CLA total	67,1
16:0	13,5
16:1	0,1

TABLA 4 (Continuación)

Composición de los triglicéridos de la composición de ácidos	Porcentaje relativo de lípidos ácidos grasos totales
grasos
18:0	4,9
18:1	10,3
18:2 (no CLA)	3,4
Otros ácidos grasos	0,7

Ejemplo 3

Este ejemplo demuestra como los inhibidores LRAT / ARAT en el alcance de la presente invención pueden identificarse usando el Ensayo Microsomal in vitro de la esterificación del retinol.

Procedimiento es la esterificación de retinol microsomal in vitro

Los microsomas se obtienen como se describe en J. C. Saari y D. L. Bredberg, "CoA y no CoA Dependent Retinol Esterification In Retinal Pigment Epithelium", J. Biol. Chem., 23, 8084-90 (1988).

Se incubó durante 1 hora a 37ºC una solución conteniendo fosfato sódico 0,1 M tampón a pH 7, ditiotreitol 5 mM, 2 mg/ml de albúmina de suero bovino, palmitoil CoA 40 micromolar, dilauroil fosfatidil colina 40 micromolar, retinol 10 micromolar y un compuesto de ensayo o solvente blanco con una fracción microsomal aislada a partir de de células epiteliales pigmentadas de retina de bovino. Tras incubación, la reacción se detuvo bruscamente por adición de un volumen igual de etanol, y los ésteres de retinilo formados (palmitato de retinilo a partir de la reacción catalizada con ARAT, y laureato de retinilo a partir de la reacción catalizada con LRAT) se extrajeron con hexano, La capa de hexano se eliminó, se evaporó bajo nitrógeno, y el residuo se analizó mediante HPLC en una columna de fase reversa C18 3,9 x 300 mm usando metanol al 80% en fase móvil de tetrahidrofurano y detección por fluorescencia (excitación a 325 nm, emisión a 480 nm) para cuantificar los ésteres de retinilo. La cantidad de éster formado en la presencia del solvente blanco fue tomada como del 100%, y este valor se usó para calcular la inhibición porcentual de la formación de ésteres para los compuestos ensayados. Como control, se inactivó una alícuota de microsomas hirviendo durante 5 minutos, lo que originó una inhibición de al menos el 95% de la formación de ésteres.

Los resultados obtenidos se resumen en la Tabla 5.

(Tabla pasa a página siguiente)

4

Puede observarse que acetil esfingosina, LODEA, LOMEA y el tensioactivo hidroxietil imidazolina son potentes inhibidores de la esterificación de retinol, mientras que otros tensioactivos y otros compuestos heterocíclicos fueron esencialmente inactivos. La caprílico hidroxietil imidazolina (R= CH_{3}(CH_{2})_{6}) no inhibe suficientemente LRAT.

El ensayo Microsomal Assay in vitro se llevó a cabo con los compuestos relacionados en la Tablas 6A y 6B.

Los compuestos de la Tabla 6A se ensayaron a concentración de 100 \muM. Los compuestos de la Tabla 6B se ensayaron a concentración de 10 \muM.

TABLA 6A

Compuesto	% inhibición ARAT	% inhibición LRAT
Alfa damascona	83	98
Beta damascona	84	92
Delta damascona	87	95
Isodamascona	80	92
Damascenona	70	79
Alfa ionona	45	49
Beta ionona	22	24
Alil alfa ionona	22	36
Isobutil ionona	8	45
Alfa metil ionona	67	77
Gamma metil ionona	21	38
Brhamanol	70	75
Sandanol	15	43
Alfa terpineol	26	25
Timberol	34	33
Lyral	76	71
Tonalid	50	33
Safranato de etilo	51	49
Traseolida	41	21
Sandalona	23	12

TABLA 6B

Compuesto	% inhibición ARAT	% inhibición LRAT
Alfa damascona	67	87
Beta damascona	45	52
Delta damascona	58	64
Damascenona	23	29
Alil alfa ionona	16	17

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Puede verse a partir de los resultados de las Tablas 6A y 6B que ciertos compuestos insaturados alifáticos cíclicos, en particular las iononas y damasconas, son potentes inhibidores de la esterificación de retinol catalizada por LRAT y ARAT. Estos contiene el sistema de cíclico treimetil ciclohexeno presente en retinol.

El ensayo Microsomal Assay in vitro se llevó a cabo con compuestos insaturados alifáticos cíclicos adicionales. Los resultados obtenidos se resumen en Tabla 7.

Los compuestos de la Tabla 7 se ensayaron a una concentración de 100 \muM.

TABLA 7

Compuesto	% inhibición ARAT	% inhibición LRAT
Dihidro alfa ionona	13	18
Alfa ionol	0	0
Beta ionol	0	0
canamaldehido	0	0
Vainillina	0	0
Eucaliptol	0	0
Mentol	0	0
Timol	0	0
Carvona	0	0
Alcanfor	0	0
Mentona	0	0
Fenchil alcohol	12	4
isociclogeraniol	18	16
Dimetil ionona	0	9
Delta metil ionona	0	10

Puede verse a partir de los resultados de la Tabla 7 que no todos los compuestos insaturados alifáticos cíclicos inhiben o inhiben de forma suficiente la esterificación de retinol catalizada por LRAT y ARAT

El ensayo Microsomal Assay in vitro se llevó a cabo con un compuesto diterpeno, geranil geraniol o farnesol.

Los resultados obtenidos se resumen en Tabla 8.

TABLA 8

Compuesto	Concentración (\muM)	% inhibición ARAT	% inhibición LRAT
Geranil Geraniol^{1}	100	81	77
Geranil Geraniol	10	38	16
Farnesol^{2}	100	43	43
Farnesol	10	20	10
1 obtenido de TCI America (Portland, Oregon). También disponible en Sigma y CTC Organincs (Atlanta, Georgia)
2 disponible de Givaudan Co., Bedoukian Co., o Dragoco Co.

Puede verse a partir de los resultados de la Tabla 8 que tanto geranil geraniol como farnesol inhiben la esterificación de retinol. Geranil geraniol es un inhibidor de la esterificación sustancialmente más potente que farnesol.

Ejemplo 4 Identificación de sobreregulación Procolágeno -I y Decorina en piel in vivo tras tratamiento de aplicación tópica de ácido retinoico a efectos comparativos

Se sabe que el colágeno, la proteína matriz predominante en la piel, confiere resistencia a la tracción a la piel. Decorina es un proteoglicano del que se sabe que es importante para una deposición controlada y correcta del colágeno en la matriz extracelular de la piel. También es conocido en la técnica que los niveles de colágeno y decorina en la piel están significativamente reducidos con la edad y/o piel fotodañada. Varios estudios han demostrado que los niveles de colágeno tipo I en la piel disminuyen con la edad y/o el incremento en fotodaño, (por ejemplo, Lavker, R. J. Inv. Derm., (1979), 73, 79-66; Griffiths y col., N. Eng. J. Med. (1993), 329, 530-535). En el caso de decorina, se ha demostrado que la expresión del ARNm y la expresión del proteoglicano está muy reducida en la piel fotodañada in vitro (Berstein y col., Lab. Invest. (1995) 72, 662-669). La reducción de los niveles en estas proteínas de la piel están asociadas razonadamente con una disminución en la resistencia a la tracción de la piel, causando arrugas y laxitud.

Es bien conocido en la técnica que el ácido retinoico es un potente activo antienvejecimiento e induce la reparación dérmica de la piel fotodañada. Se ha demostrado que la desaparición de arrugas y la reparación dérmica siguiendo tratamiento tópico de la piel con ácido retinoico consigue aumentar la deposición de colágeno nuevo y síntesis en la piel (por ejemplo, Griffiths y col., N. Eng. J. Med. (1993), 329, 530-535). Está ampliamente aceptado que fortalecer la matriz dérmica empujando los niveles de colágeno en la piel usando ácido retinoico proporciona beneficios de reparación antienvejecimiento / dérmico. Procolágeno I es un precursor del colágeno. Una producción aumentada de procolágeno I en respuesta a la aplicación de un compuesto de ensayo es un marcador de un nivel de colágeno incrementado.

Se reclutaron dos grupos de mujeres con idénticos o casi idénticos grados de fotodaño suave a moderado en cada antebrazo. Se les suministró ácido retinoico al 0,05% en una base hidratante (Retinova®) y también una crema hidratante de igual color con similares características sensoriales (loción Dermacare®) pero sin ingredientes activos como placebo control. Cada participante de los dos grupos se aplicó Retinova® en un antebrazo y el placebo (Dermacare® en el otro antebrazo. El grupo 1 se aplicó el producto diariamente en sus antebrazos durante 14 semanas, mientras que el Grupo 2 se aplico los productos en sus antebrazos durante 28 semanas. Al final de los estudios se tomaron dos muestras de 4 mm para biopsia completa de las áreas tratadas de cada antebrazo. Se realizaron análisis inmunohistoquímicos de las biopsias de tejido tomadas de las participantes con el objetivo de identificar el efecto del tratamiento con ácido retinoico sobre la expresión de los componentes de la matriz extracelular de la piel, decorina y procolágeno-I, en comparación con el antebrazo tratado con placebo. Se siguió el siguiente procedimiento:

Materiales

Se compuso un tampón de dilución de anticuerpos para secciones en cera a partir de suero salino tamponado tris (TBS), albúmina de suero bovino al 3% (BSA), Tritón X-100 al 0,05% y azida de sodio al 0,05%. Se obtuvieron los anticuerpos primarios para procolágeno-I (amino terminal) de Chemicon International Inc. (cat# MAB 1912, IgG1 de rata) y se usaron sobre las secciones en cera a una dilución de 1:800, toda la noche a 4ºC una vez que la sección se pretrató con tripsina (0,5 mg/ml, 25 minutos, 37º C). Los anticuerpos primarios de decorina se obtuvieron de Biogénesis (conejo policlónico) y se usaron sobre las secciones en cera a una dilución de 1:800, toda la noche a 4ºC. Los anticuerpos secundarios anti-rata biotilinados se obtuvieron de DAKO (cat# E0468, conejo policlónico) se aplicaron sobre las secciones en cera a una dilución de 1:400. Los anticuerpos secundarios anti-conejo biotilinados se obtuvieron de Amersham (cat# RPN 1004, burro policlónico) se aplicaron sobre las secciones en cera a una dilución de 1:400. Streptavidina conjugada fosfatasa alcalina obtenidos de Zymed (cat# 43-4322) se usaron a una concentración de 1:2500. Cromógeno rojo rápido se obtuvo de DAKO (cat# K597). Hematoxilina Gills #3 contratipo nuclear obtenida de Sigma (cat# GHS-3) se filtró y usó sin dilución. Se obtuvo tripsina de Sigma (cat # T-7186) y los portas se montaron con Glycergel de DAKO (cat# C563).

Procedimientos

Las secciones en cera del tejido de la biopsia se montaron en portaobjetos recubiertos de silano, y se curaron durante 18 horas a 55ºC. Se eliminó la cera de los portaobjetos mediante xileno y alcohol, se llevaron a agua, y a continuación se transfirieron a TBS. Se uso una pluma DAKO® para rodear las secciones. Las secciones se procesaron para la detección de antígenos usando tripsina cuando fuera necesario, como se indica para cada anticuerpo. Cuando se requiere la detección de antígenos, se incubaron los portaobjetos durante 25 minutos a 35ºC con tripsina a 0,5 mg/ml (Sigma cat# T-7186). La proteasa se lavó posteriormente (2 x 2 minutos) con TBS. La detección del antígeno, si es necesario, o bien directamente tras circundar las secciones, se bloquearon los enlaces de anticuerpos no específicos con soluciones al 5% conteniendo suero huésped de anticuerpos secundarios en TBS / BSA al 0,5% / azida de sodio al 0,1% como la solución bloqueante durante al menos 20 minutos a temperatura ambiente en una cámara húmeda. La solución bloqueante en exceso se drenó, pero no se permitió que las secciones se secaran. Las secciones se incubaron a continuación con el anticuerpo primario (adecuadamente diluido como se ha indicado anteriormente) en una cámara húmeda durante toda la noche a 4ºC. Se drenó posteriormente el anticuerpo de las secciones, sin permitir que éstas se secaran. Los portaobjetos fueron lavados a continuación con TBS para eliminar los anticuerpos primarios no ligados -lavado de un minuto seguido de tres aclarados de cinco minutos- y a continuación incubados con el anticuerpo secundario apropiado (adecuadamente diluido como se ha indicado anteriormente) en una cámara húmeda durante 1 hora a temperatura ambiente. Se drenó posteriormente la solución de anticuerpos de los portaobjetos, sin permitir que las secciones se secaran. Los portaobjetos fueron lavados a continuación con TBS, lavado de un minuto seguido de 4 x 5 aclarados con el objetivo de eliminar los anticuerpos secundarios no ligados. Para el anticuerpo secundario biotinilado, las secciones se incubaron posteriormente con conjugado de estreptavidina durante 45 minutos a 37º C y a continuación lavados en TBS para eliminar el conjugado de estreptavidina no ligado. Se añadió el cromógeno y el color se desarrolló bajo observación para evitar sobretintado. A continuación se realizó el contratipo en las secciones y se montaron.

Se determinaron las diferencias en la expresión de procolágeno-I y decorina entre ácido retinoico (Retinova®) y placebo (Dermacare®) en los emplazamientos tratados mediante evaluación visual de las secciones imnmunohistoquímicamente teñidas usando microscopía óptica.

Este análisis identificó la marcada sobreregulación tanto de procolágeno-I como decorina en la piel fotodañada tras la aplicación tópica de ácido retinoico (Retinova®) como se muestra en la Tabla 9 a continuación:

TABLA 9 Efecto del tratamiento con ácido retinoico en la expresión de procolágeno I y decorina en la piel in vivo.

	Nº total de participantes	Nº de participantes mostrando	Nº de participantes mostrando
		marcado incremento en la	marcado incremento en la
		expresión de procolágeno – i	expresión de decorina
Grupo 1 tras	16	9	10
14 semanas
Grupo 1 tras	15	10	15
28 semanas

Los componentes extracelulares de la matriz procolágeno 1 y decorina son así marcadores claramente identificables de la reparación dérmica inducida por ácido retinoico.

Ejemplo 5 Procedimiento para medir la síntesis de procolágeno - I y decorina en fibroblastos dérmicos humanos Preparación de medio condicionado de fibroblastos dérmicos

Se sembraron fiibroblastos humanos primarios de la piel de la frente en paso 2 (P2) en placas de 12 pocillos a 1.000 células/cm^{2}, y se mantuvieron durante 24 horas en una atmósfera de dióxido de carbono al 5% y oxígeno al 4% en Medio Eagles modificado por Dulbecco (DMEM) complementado con suero fetal de ternera al 10%. Tras este tiempo, las células se lavaron con suero libre de DMEM y a continuación se incubaron es suero fresco libre de DMEM durante 60 horas más. Las monocapas de fibroblastos se lavaron a continuación con suero libre de DMEM. Los reactivos de ensayo y vehículos de control se añadieron a las células por triplicado en un volumen final de 0,4 ml/pocillo de suero libre de DMEM y se incubaron durante 24 horas más. Este medio condicionado de fibroblastos se analizó bien inmediatamente o se congeló en nitrógeno líquido y almacenado a -70ºC para análisis futuro. Las células se contaron a continuación y los datos del análisis dot-blot normalizados posteriormente al número de células.

Ejemplo 6 Ensayo dot-blot de procolágeno - I y decorina en medio condicionado de fibroblastos dérmicos

Las muestras de medio condicionado de fibroblastos dérmicos tratados con placebo (como control) o reactivos de ensayo se complementaron con ditiotreitol 20 mM (dilución 1:10 de una solución stock de 200 mM) y dodecilsulfato sódico (dilución 1:100 de una solución stock al 10%), bien mezclada y a continuación se incubó a 75º C durante 2 minutos. Se generó un patrón para el ensayo por dilución en serie del medio condicionado con fibroblastos netos a partir de fibroblastos sembrados a 10.000 células/cm^{2} en un frasco de 175 cm^{2} y mantenido en suero libre de DMEM como se ha descrito anteriormente.

Las muestras de ensayo se aplicaron posteriormente por triplicado a una hoja prehumedecida de membrana de transferencia Immobilon-P usando el Equipo Bio-Dot de 96 pocillos de Bio-Rad como se describe en las directrices de los fabricantes. Se aplicaron aproximadamente 200 \mul de medio en cada pocillo. Se dejo filtrar por gravedad el medio a través de la membrana (30 minutos), tras lo cual la membrana se lavó dos veces con PBS (200 \mul). Estos lavados de PBS se dejaron filtrar por gravedad a través de la membrana (2 x 15 minutos). Se conectó a continuación el aparato Bio-Dot a un manguito de vacío y se realizó un tercer y último lavado con PBS bajo succión. El aparato fue desconectado, se retiró la membrana, y se cortó rápidamente como se requirió anteriormente, colocándose en tampón bloqueante durante toda la noche a 4ºC. Las membranas preparadas para análisis de decorina se bloquearon con BSA al 3% (p/v) / Tween 20 al 0,1% (v/v) en PBS, mientras que las del análisis para procolágeno-I se bloquearon con leche en polvo desnatada al 5% (p/v) / Tween 20 al 0,05% (v/v) en PBS.

Al día siguiente, las membranas se probaron con dilución 1:10.000 de anticuerpos primarios bien de procolágeno-I humano (MAB1912; rata monoclonal; Chemicon Int. Inc., Temecula, CA) o decorina humana (conejo policlonal; Biogénesis) durante 2 horas a temperatura ambiente. Las membranas fueron posteriormente lavadas con TBS / Tween 20 al 0,05% (3 x 5 minutos) y a continuación incubadas con dilución 1:1.000 de anti-rata ^{125}I- conjugado o fragmentos de anti-conejo F(ab')2 (Amersham) como fuera necesario durante 1 hora a temperatura ambiente. Siguiendo esto, las tiras Immobilion se lavaron de nuevo con TBS / Tween 20 (3 x 5 minutos) antes de dejarlas secar al aire a temperatura ambiente. Las membranas secas se envolvieron en celofán y se expusieron a una pantalla de fósforo de Molecular Dynamics durante 16-18 horas.

Al final de este tiempo, se escaneó la pantalla expuesta mediante un fosforimager (Molecular Dynamics Phosphorimager SF) usando software ImageQuant^{TM}. La intensidad de puntos se evaluó mediante análisis de imagen asistido por ordenador, se normalizó al número de células, y se determinaron los efectos de los diferentes reactivos de ensayo sobre las síntesis de decorina y procolágeno en relación con un control tratado con placebo de 100 unidades arbitrarias.

Ejemplo 7 Ensayos

La Tabla 10 a continuación indica el efecto sinérgico del ácido linoléico conjugado en combinación con el inhibidor LRAT / ARAT Ceramida 6 sobre la síntesis de decorina en fibroblastos dérmicos humanos, y las cantidades en los que los productos activos se aplicaron. Con el objetivo de normalizar los resultados de los efectos del ensayo, las sustancias se determinaron en relación con un control tratado con placebo de 100 unidades arbitrarias. Las concentraciones de los reactivos usados en los sondeos no tuvo influencia sobre la viabilidad celular.

TABLA 10 Efecto sinérgico del ácido linoléico conjugado en combinación con el inhibidor LRAT / ARAT sobre la síntesis de decorina

Tratamiento	Decorina
Control (placebo)	100
0,1 \muM CLA	96,8%
0,01 \muM Ceramida 6	101,2%
0,1 \muM CLA + 0,01 \muM Ceramida 6	156,5%

Los resultados de la Tabla 10 indican que la combinación entre ácido linoléico conjugado con un inhibidor LRAT / ARAT sobrerregula de forma significativa la síntesis de procolágeno I y/o decorina en fibroblastos dérmicos humanos, cuando se compara con el control.

El nivel de decorina en la piel está asociado con un estado y apariencia de la piel mejorados. Incrementar el nivel de decorina en la piel es importante para una deposición del colágeno controlada y correcta que esta asociada con muchos beneficios para la piel, como el borrado de arrugas y reparación dérmica de la piel fotodañada.

Efecto sinérgico del CLA con ácido retinoico

La tabla 11 a continuación indica el efecto sinérgico de ácido linoléico conjugado en combinación con el ácido retinoico, sobre la síntesis de procolágeno - I en fibroblastos dérmicos humanos y las cantidades en los que los productos activos se aplicaron. Con el objetivo de normalizar los resultados de los efectos del ensayo, las sustancias se determinaron en relación con un control tratado con placebo de 100 unidades arbitrarias. Las concentraciones de los reactivos usados en los sondeos no tuvo influencia sobre la viabilidad celular.

TABLA 11 Control no tratado = 100%. Todos los resultados están normalizados a este valor

Productos activos ensayados	Procolágeno 1
0,1 \muM CLA	78.9%
0,01 \muM ácido trans retinoico	102,8%
0,1 \muM CLA + 0,01 \muM trans retinoico	124,2%

Los resultados de la Tabla 11 indican que la combinación entre ácido linoléico conjugado con un ácido retinoico sobrerregula de forma significativa la síntesis de procolágeno I en fibroblastos dérmicos humanos, cuando se compara con el control.

Ejemplo 8

Este Ejemplo ilustra cremas aceite-en-agua de acuerdo con la invención.

5

Ejemplo 9

Este Ejemplo ilustra lociones alcohólicas de acuerdo con la invención.

6

Ejemplo 10

Este Ejemplo ilustra una cremas de protección solar incorporando la composición de la invención.

7

Ejemplo 11

Este Ejemplo ilustra una emulsión agua-en-aceite de elevada fase interna incorporando la composición del a invención.

8

Los ejemplos 8 a 11 ilustran composiciones tópicas de acuerdo con la presente invención. Las composiciones pueden procesarse de manera convencional. Son adecuadas para uso cosmético. Proporcionan un tratamiento cosmético efectivo para mejorar la apariencia de la piel arrugada, envejecida, fotodañada y/o irritada, cuando se aplica a piel normal que se ha deteriorado debido al envejecimiento o fotoenvejecimiento, o cuando se aplica a piel juvenil ayuda a prevenir o detener tales cambios deteriorantes. Las composiciones son también efectivas para suavizar la piel irritada, acondicionar la piel seca, aclarar el color de la piel y reducir las secreciones de grasa y sebo.

Claims

1. Una composición tópica que comprende:

a): ácido linoléico conjugado y/o un derivado adecuados para este uso, en el que el derivado de ácido linolénico es un éster glicérido, una amida, una sal o un ácido linoléico conjugado sustituido;

b): ácido retinoico, retinol o un éster de retinilo y/o un inhibidor LRAT / ARAT; y

c): un vehículo dermatológicamente aceptable.

2. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el ácido linoléico o derivado adecuado para este uso son los isómeros cis 9 trans 11 o el trans 10 cis 12.

3. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que el componente b) de la composición es un ácido retinoico, retinol o un éster de retinilo.

4. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el componente (b) de la composición es retinol o linoleamida monoetanolamida (MEA).

5. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el éster de retinilo es linoleato de retinilo.

6. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la composición es una composición para su aplicación.

7. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que al menos 1% en peso de las fracciones de linoléico conjugadas del ácido y/o derivados adecuados para este uso está presente como el isómero cis 9 trans 11, o el isómero trans 10 cis 12.

8. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el inhibidor LRAT / ARAT es una amida de ácido graso, una amida de hidroxi ácido graso, una ceramida, una melinamida, una imidazolidinona, un hidrocarburo insaturado alifático cíclico, un terpeno, o un tensioactivo graso de hidroxietil imidazolina, o mezclas de los mismos.

9. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 8, en la que el compuesto cíclico alifático insaturado se selecciona entre aldehídos insaturados alifáticos cíclicos, cetonas, alcoholes y ésteres tales como alfa damascona, beta damascona, delta damascona, isodamascona, damascenona, alfa ionona, beta ionona, alil alfa ionona, isobutil ionona, alfa metil ionona, gamma metil ionona, brahmanol, sandanol, alfa terpineol, liral, safranato de etilo, y mezclas de los mismos.

10. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 9, en la que el compuesto cíclico alifático insaturado es una \alpha damascona o una \alpha ionona.

11. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 8, en la que el ácido graso en la amida de ácido graso se selecciona entre ácido linoléico, ácido linolénico, ácido araquidónico, ácido gamma-linolénico, ácido homo-gamma-linolénico, y mezclas de los mismos.

12. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 11, en la que el ácido graso en la amida de ácido graso es ácido linoléico.

13. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 8, en la que la hidroxi amida de ácido graso es lactamida-monoetanolamida, c_{13}-\beta-hidroxi ácida amida (2-hidroxi-c_{13}- amida), N-hidroxietil-2-hidroxi-c_{16} amida, 12-hidroxi-N-(2-hidroxietil) octadecanamida, y monoetanolamida de aceite de ricino, y mezclas de los mismos.

14. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 8, en la que el terpeno es un ácido monocarboxílico triterpeno pentacíclico.

15. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 8, en la que la ceramida es un derivado de ceramida que es acetil esfingosina.

16. Un procedimiento cosmético para proporcionar al menos un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado de: tratar / prevenir la aparición de arrugas, descolgamiento, sequedad, piel envejecida y/o fotodañada; acelerar/mantener los niveles de colágeno en la piel, acelerar / mantener los niveles de decorina en la piel, mejorar la reparación de tejidos; calmar la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de grasa / sebo, el procedimiento comprendiendo aplicar a la piel una composición tópica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

17. Uso cosmético de una composición como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para proporcionar al menos un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado de: tratar / prevenir la aparición de arrugas, descolgamiento, sequedad, piel envejecida y/o fotodañada; acelerar/mantener los niveles de colágeno en la piel, acelerar / mantener los niveles de decorina en la piel, mejorar la reparación de tejidos; calmar la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de grasa / sebo.

18. Uso cosmético de ácido linoléico conjugado y/o derivados adecuados en combinación con ácido retinoico, retinol o un éster de retinilo y/o un inhibidor LRAT / ARAT en una composición cosmética tópica para proporcionar al menos un beneficio de cuidado de la piel seleccionado de: tratar / prevenir la aparición de arrugas, descolgamiento, sequedad, piel envejecida y/o fotodañada; acelerar/mantener los niveles de colágeno en la piel, acelerar / mantener los niveles de decorina en la piel, mejorar la reparación de tejidos; calmar la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de grasa / sebo.