ES2220489T3 - Composicion para el cuidado de la piel. - Google Patents
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Abstract
Una composición tópica que comprende: a) un primer componente lípido seleccionado entre ácido petroselínico y/o derivados del mismo; b) un segundo componente lípido, que es un activador de los receptores activados de peroxisomas del subtipo alfa, y/o derivados de los mismos, y/o mezclas de los anteriores de los mismos; y c) Un vehículo dermatológicamente aceptable, con la condición de que el primer y segundo componente lípido no sean el mismo lípido.
Description
Composición para el cuidado de la piel.
Esta invención se refiere a composiciones tópicas
para aplicación a la piel humana y a su uso para mejorar el estado y
apariencia de la piel.
La piel está sujeta a deterioro a través de
trastornos dermatológicos, abuso ambiental (viento, aire
acondicionado y calefacción central) o a través del proceso de
envejecimiento normal (cronoenvejecimiento), que puede acelerarse
por la exposición de la piel al sol (fotoenvejecimiento). En los
últimos años, la demanda de procedimientos cosméticos para mejorar
el estado y apariencia de la piel han aumentado enormemente y, en
particular, para invertir, reducir o evitar los signos visibles de
piel arrugada, envejecida y/o fotodañada.
Los consumidores buscan cada vez más productos
cosméticos "antienvejecimiento" que inviertan o traten o
retarden los signos visibles del cronoenvejecimiento o
fotoenvejecimiento de la piel tales como: arrugas, marcas,
descolgamiento, hiperpigmentación y manchas de envejecimiento.
Se sabe que el colágeno, la proteína matriz
predominante en la piel, confiere resistencia a la tracción a la
piel. También es conocido en la técnica que los niveles de colágeno
en la piel están significativamente reducidos con la edad y/o piel
fotodañada. Varios estudios han demostrado que los niveles de
colágeno tipo I en la piel disminuyen con la edad y/o el incremento
en fotodaño, (por ejemplo, Lavker, R. J. Inv. Derm., (1979), 73,
79-66; Griffiths y col., N. Eng. J. Med. (1993),
329, 530-535). La reducción de los niveles del
colágeno de la piel está asociada razonadamente con una disminución
en la resistencia a la tracción de la piel, causando arrugas y
laxitud.
Es bien conocido en la técnica que el ácido
retinoico es un potente activo antienvejecimiento, e induce la
reparación dérmica de la piel fotodañada. Se ha demostrado que la
desaparición de arrugas y la reparación dérmica siguiendo
tratamiento tópico de la piel con ácido retinoico consigue aumentar
la deposición de colágeno nuevo y síntesis en la piel (por ejemplo,
Griffiths y col., N. Eng. J. Med. (1993), 329,
530-535). Está ampliamente aceptado que fortalecer
la matriz dérmica empujando los niveles de colágeno en la piel
usando ácido retinoico proporciona beneficios de reparación
antienvejecimiento/ dérmico.
El Documento J05271046 describe una composición
para la piel que contiene un ácido graso insaturado que tiene entre
18 y 22 átomos de carbono y dos o más enlaces insaturados, tales
como los ácidos linoléico y araquidónico, y un polifenol. Esta
comoposición es útil para aclarar la piel.
El uso de aceites ricos en ácido petroselínico en
composiciones para el cuidado de la piel como agente hidratante se
ha descrito en el Documento EP A 0709084.
Se conoce el uso de ácidos grasos, incluyendo el
ácido petroselínico en composiciones cosméticas para cuidado el
cabello. El Documento EP-A-116439
describe tónicos capilares, que incluyen ácidos grasos como el ácido
petroselínico, ácido linoléico, ácido linolénico, ácido oleico y
ácido araquidónico para aliviar la caspa y para estimular el
crecimiento del cabello.
El Documento
EP-A-06515753 describe una
composición tópica que comprende ácido dihomo-gamma
linolénico, ácido araquidónico, ácido eicopentanoico y ácido
docohexanoico que es adecuada para uso por fumadores para mitigar
los efectos perjudiciales del hábito de fumar.
El Documento
EP-A-0888773 describe el uso de
ácido petroselínico en composiciones cosméticas para uso tópico o
aplicación oral para tratar la inflamación de la piel y mucosas.
El Documento XP-002152331
describe un aceite que comprende ácido palmítico, ácido
petroselínico, ácido oleico y ácido linoléico para uso en
cosmética.
El Documento
FR-A-2648347 describe una
composición cosmética que puede comprender ácido
alfa-linoleico, ácido eicopentanoico y ácido
docohexanoico.
El Documento
EP-A-0304603 describe una
composición cosmética de aplicación tópica que comprende ácidos
grasos poliinsaturados, tales como ácido eicopentanoico y ácido
docohexanoico.
El Documento
GB-A-2202146 describe una
composición cosmética regenerante de la piel que comprende un alga
que contiene selenio y ácidos grasos poliinsaturados, tales como
ácido eicopentanoico y ácido docohexanoico.
El Documento
EP-A-0640581 describe una
composición cosmética que comprende un material nutriente
endodérmico que comprende un producto saponificado de ácido
docohexanoico o un derivado adecuado para lo mismo.
El Documento
FR-A-0659755 describe una
composición cosmética y dermatológica que comprende derivados
fosfolipídicos de ácidos grasos, tales como el ácido \alpha- y
\gamma-linoleico, ácido eicopentanoico y ácido
docohexanoico.
El Documento
WO-A-99/47110 describe el uso de
ácido petroselínico en la preparación de composiciones tópicas para
mejorar el estado y la apariencia de la piel.
El Documento
WO-A-00/15179 describe una
composición que comprende ácido alfa hidroxi ácido y ácido
petroselínico.
El Documento XP-002152332
describe una mezcla concentrada de eicopentanoato de etilo y
docosahexanoato de etilo para el tratamiento de pacientes
psoriáticos.
Hemos encontrado que puede obtenerse un
tratamiento efectivo y prevención de las dolencias normales (aunque
cosméticamente indeseables) de la piel debido al cronoenvejecimiento
y fotoenvejecimiento, como son arrugas, marcas, descolgamiento,
hiperpigmentación y manchas de envejecimiento, mediante la
aplicación de composiciones cosméticas a la piel que comprenden una
combinación específica de dos componentes lípidos.
La técnica discutida anteriormente no describe la
combinación sinérgica específica de un primer componente lípido
seleccionado entre ácido petroselínico o ácido docohexanoico, junto
con un segundo componente lípido, ni el uso de tal combinación
específica para el tratamiento del envejecimiento de la piel.
De acuerdo con un primer aspecto de la presente
invención, se proporciona una composición tópica comprendiendo:
- a)
- un primer componente lípido seleccionado entre ácido petroselínico y/o derivados del mismo;
- b)
- un segundo componente lípido, que es un activador de los receptores activadores de peroxisomas, del subtipo alfa, y/o derivados de los mismos, y/o mezclas de los anteriores de los mismos; y
- c)
- Un vehículo dermatológicamente aceptable.
con la condición de que el primer y segundo
componente lípido no sean el mismo lípido.
De acuerdo con un segundo aspecto de la presente
invención, se proporciona un procedimiento cosmético para
proporcionar al menos un beneficio de cuidado de la piel
seleccionado a partir de: tratar / prevenir la aparición de arrugas,
descolgamiento, sequedad, piel envejecida y/o fotodañada; acelerar
la deposición de colágeno en la piel, acelerar la producción de
decorina en la piel, mejorar la reparación de tejidos; mejorar la
textura, suavidad y firmeza de la piel; el procedimiento comprende
aplicar a la piel una composición tópica como la que se ha
descrito
anteriormente.
anteriormente.
La presente invención también acompasa el uso de
las composiciones inventivas para proporcionar al menos un beneficio
de cuidado de la piel seleccionado entre: tratar/ prevenir la
aparición de arrugas, descolgamiento, sequedad, piel envejecida y/o
fotodañada; acelerar la deposición de colágeno en la piel, acelerar
la producción de decorina en la piel, mejorar la reparación de
tejidos; y mejorar la textura, suavidad y firmeza de la piel.
De acuerdo con otro aspecto adicional de la
presente invención, se proporciona el uso de un primer componente
lípido seleccionado entre ácido petroselínico y/o ácido
docohexanoico y/o derivados de los anteriores adecuados para este
uso, en combinación con un segundo componente lípido, que es un
activador de los receptores de peroxisomas activados del subtipo
alfa, y/o derivados adecuados para este uso, y/o mezclas de los
anteriores adecuados para este uso en una composición cosmética
tópica para proporcionar al menos un beneficio de cuidado cosmético
de la piel seleccionado a partir de: tratar/ prevenir la aparición
de arrugas, descolgamiento, sequedad, piel envejecida y/o
fotodañada; acelerar la deposición de colágeno en la piel, acelerar
la producción de decorina en la piel, mejorar la reparación de
tejidos; y mejorar la textura, suavidad y firmeza de la piel.
Las composiciones inventivas, procedimientos y
usos proporcionan así beneficios antienvejecimiento que resultan en
la promoción de una piel suave y ligera con elasticidad mejorada y
una apariencia reducida o retardada de arrugas y piel envejecida,
con color de la piel mejorado. Se consigue una mejora general del
aspecto, textura y estado, en particular con respecto a la
radiancia, claridad y apariencia en general juvenil de la piel.
El término "tratamiento" tal como se usa en
la presente invención incluye en su alcance reducir, retrasar y/o
prevenir las anteriormente mencionadas dolencias de la piel, comunes
aunque cosméticamente indeseables, causadas por el proceso normal de
envejecimiento. Los signos visibles del envejecimiento, tales como
las arrugas, líneas o descolgamiento se retrasan o reducen. De
manera general se mejora apariencia y textura de la piel,
previniendo o reduciendo la aparición de arrugas e incrementando la
flexibilidad, firmeza, suavidad, ligereza y elasticidad de la piel.
Las composiciones, procedimientos y usos de acuerdo con la invención
pueden ser útiles para tratar la piel que está próxima a un estado
de aparición de arrugas, y/o envejecimiento, fotodaño, irritación, o
para tratar la piel juvenil para prevenir o reducir los indeseables
cambios anteriormente mencionados debido a los procesos normales de
envejecimiento / fotoenvejecimiento.
El ácido petroselínico (denominado en lo que
sigue en la presente invención como PA) es un ácido graso
monoinsaturado de cadena larga (C18) que tiene la fórmula
CH_{3}(CH_{2})_{10}CH=CH(CH_{2})_{4}COOH.
El ácido docosanoico (denominado en lo que sigue
en la presente invención como DHA) es un ácido graso poliinsaturado
de cadena larga (C22) que tiene la fórmula CH_{3}(CH_{2}
CH=CH)_{6} CH_{2}CH_{2}COOH.
La invención también incluye derivados de los
ácidos libres que de esta forma comprenden fracciones de ácido
petroselínico/ ácido docohexanoico. Entre los derivados preferibles
se incluyen aquellos derivados a partir de la sustitución del grupo
carboxilo del ácido, tales como ésteres (por ejemplo, ésteres
triglicéridos, ésteres monoglicéridos, ésteres diglicéridos,
fosfoésteres), amidas, (por ejemplo, derivados de ceramida), sales,
(por ejemplo, sales de metales alcalinos y metales alcalinotérreos,
sales de amonio); y/o aquellos derivados por sustitución de la
cadena de C18/C22 átomos de carbono, como derivados alfa
hidroxilados y/o beta hidroxilados.
En el caso de los derivados de éster de
triglicérido, se incluyen todos los isómeros posicionales de los
sustituyentes de PA/DHA sobre el esqueleto del glicerol. Los
triglicéridos deben contener al menos una fracción PA/DHA. Por
ejemplo, de las tres posiciones esterificables del esqueleto del
glicerol, las posiciones 1 y 2 pueden esterificarse con PA/DHA y
con otro lípido en la posición 3, o de forma alternativa, el
esqueleto de glicerol puede esterificarse con PA/DHA en las
posiciones 1 y 3 y con otro lípido en la posición 2.
Los aceites ricos en triglicéridos del ácido
petroselínico son también adecuados para uso en la presente
invención. Tales aceites están comercialmente disponibles, e
incluyen aceite de semillas de perejil, aceite de semillas de
zanahoria, aceite de semillas de hinojo, aceite de semillas de
chirivía, aceite de semillas de cilantro, aceite de semillas de
perifollo, aceite de semillas de alcaravea, y aceite de semillas de
apio.
Los aceites ricos en triglicéridos del DHA son
también adecuados para uso en la presente invención. Tales aceites
están comercialmente disponibles, e incluyen aceites de pescado y
sus concentrados.
En cualquier momento que se empleen los términos
"ácido petroselínico" o "PA", o "ácido docohexanoico"
o "DHA" debe entenderse que los derivados de los anteriores que
comprendan fracciones PA/DHA también quedan incluidos. "Fracciones
PA/DHA" se refiere a porción(es) de acilo graso PA/DHA de
un derivado PA/DHA.
El PA o DHA, a emplear de acuerdo con la presente
invención se presenta en la composición tópica en una cantidad
efectiva. Normalmente, la cantidad total del ingrediente activo está
presente en una cantidad entre 0,0001% y 50% en peso de la
composición. Más preferiblemente, la cantidad es desde 0,01% a 10% y
más preferiblemente de 0,1% a 5% con el objeto de maximizar
beneficios a un coste mínimo. Cuando el primer lípido es DHA o un
derivado de DHA, preferiblemente está presente en un nivel inferior
al 3% en peso para evitar cualquier posible problema de olores.
El término "receptores activados del activador
de peroxisomas, subtipo \alpha" o "activador PPAR
\alpha" en la presente solicitud significa un lípido que activa
el receptor nuclear PPAR \alpha.
Los receptores activados del activador de
peroxisomas son una conocida familia de receptores nucleares de
hormonas que comprende tres subtipos, \alpha, \beta, y \gamma,
de distinta distribución tisular. Los receptores activados del
activador de peroxisomas subtipo \alpha (denominados a partir de
ahora en la presente invención como PPAR \alpha) están presenten
en la piel. Los activadores lípidos de PPAR \alpha tales como el
ácido linoléico son bien conocidos en la técnica. Se ha demostrado
que estos aceleran el desarrollo de la barrera epidérmica de la piel
in vitro (Hanley y col., (1997) J.Clin.Inv. 100,
705-712). Sin embargo, no existe descripción o
sugerencia en la técnica de activadores de PPAR \alpha que tengan
uso en composiciones cosméticas para proporcionar tratamientos
cosméticos antienvejecimiento,
Un procedimiento establecido y ampliamente
aceptado mediante el que puede demostrarse la activación de PPAR, y
por tanto, qué lípidos activadores de PPAR pueden identificarse es
el ensayo del gen indicador. Los lípidos que son activadores de PPAR
\alpha son por tanto fácilmente identificables para aquellos que
sean expertos en la técnica como aquellos compuestos que causan la
expresión de la luciferasa o de la cloranfenicol acetil transferasa
(denominada a partir de ahora en la presente invención como CAT) en
el ensayo de gen indicador que se resume en el Ejemplo 1 siguiente
-el protocolo completo se proporciona en Kliewer y col., (1992)
Nature, 358, 771-774.
Así, si un compuesto lípido pasa este ensayo
in vitro del gen indicador, esto produce la expresión de la
luciferasa o CAT en el ensayo de gen indicador que se resume en el
Ejemplo 1, se incluye como un lípido activador de PPAR \alpha
incluso si no se menciona específicamente en la presente invención.
En una forma preferida de realización de esta invención, el lípido
activador de PPAR \alpha, un compuesto que promueve la activación
del gen indicador al menos dos veces por encime del nivel de fondo
como los agentes anti envejecimiento más efectivos.
Ejemplos de los lípidos activadores de PPAR
\alpha que satisfacen el ensayo del gen indicador incluyen los
ácidos grasos saturados C10-C18, preferiblemente
ramificados, o preferiblemente derivatizados (por ejemplo, con
grupos hidroxilo si la cadena es lineal), ácidos grasos
monoinsaturados C10-C20, y ácidos grasos
poliinsaturados C10-C22.
Los ácidos grasos pueden ser de cadena lineal o
ramificada, saturada o insaturada, y pueden estar sustituidas, por
ejemplo, hidroxiladas tales como alfa hidroxi o beta hidroxi
derivados. Los correspondientes alcoholes, triglicéridos y
fosfolípidos de cualquiera de estos ácidos también son adecuados
para uso en la presente invención. Entre los derivados preferibles
se incluyen aquellos derivados a partir de la sustitución del grupo
carboxilo del ácido, tales como ésteres (por ejemplo, ésteres
triglicéridos, ésteres monoglicéridos, ésteres diglicéridos,
fosfoésteres), amidas, (por ejemplo, derivados de ceramida), sales,
(por ejemplo, sales de metales alcalinos y metales alcalinotérreos,
sales de amonio). En el caso de los derivados de éster de
triglicérido, se incluyen todos los isómeros posicionales del
esqueleto del glicerol.
Los aceites ricos en triglicéridos de ácidos
grasos son también adecuados para uso en la presente invención.
Tales aceites están comercialmente disponibles, e incluyen aceite de
semillas de cilantro (rico en ácido petroselínico), aceite de
semillas de perejil (rico en ácido petroselínico) aceite de onagra
(rico en ácido gamma linolénico), aceite de semillas de borraja
(rico en ácido gamma linolénico), manteca de karité (rico en ácido
oleico y ácido linoleico), aceites de pescado y sus concentrados
(ricos en DHA y EPA), aceite de col marina (rico en ácido erúcico),
aceite de semillas de lino (rico en ácido alfa linolénico), aceite
de almendra (rico en ácido oleico) y aceite de semillas de algodón
(rico en ácido linolénico).
Entre los activadores PPAR \alpha preferibles
de acuerdo con la invención están ácido 12-hidroxi
esteárico, ácido cis 5,8,11,14,17 eicosapentanoico, ácido cis
4,7,10,13,16,19 docosahexenoico, ácido linoléico conjugado (c9,
t11), ácido columbínico, ácido linolenlaídico, ácido ricinolaídico,
ácido estearidónico, ácido 2-hidroxi esteárico,
ácido alfa linolénico, ácido araquidónico, ácido cis eicosadienoico,
ácido linoléico conjugado (t10, c12), ácido linoléico conjugado (t9,
t11), ácido linoléico conjugado (mezcla 50:50 de c9, t11 y t10,
c12), ácidos de cilantro, ácido linolelaídico, ácido ricinoleico,
ácido estearólico, extracto de tuya, y ácido trans vaccémico.
Otros activadores PPAR \alpha adicionales
adecuados incluyen ácido cis 11,14,17 eicosatrienoico, ácido
cis-5 eicosanoico, cis 8,11,14 eicosatrienoico,
ácido hexanodecatrienoico, ácido palmoleico, ácido petroselaídico,
ácido cis vaccémico, cis 11 eicosatrienoico, ácido cis 13,1619
docosatrienoico, ácido cis-13 octadecenoico,
cis-15 octadecanoico, cis-7,10,13,16
docosatretranoico, ácido elaídico, ácido gamma linolénico, ácido
geránico, ácido geranil geranoico, ácido linoléico, ácido oleico,
ácido petroselínico, ácido fitánico, ácido pinolénico, ácido
trans-13 octadecenoico, ácido tridecil salicílico
(TDS).
Otra categoría adicional de activadores PPAR
\alpha adecuados incluyen extractos de plantas, tales como
biochanín A (fitoestrógeno de trébol rojo), extracto de
Chormolaena odorata, extracto hidrolizable saponificable de
granada roja, Blugossoides (extracto de planta,
estearidónico), y zantaleno (extracto de pimienta negra).
Los lípidos particularmente preferidos, debido a
su superior efecto anti envejecimiento cuando se combinan con ácido
petroselínico o DHA (o derivados de los anteriores adecuados para lo
mismo) de acuerdo con la presente invención se seleccionan entre el
grupo que comprende ácidos grasos poliinsaturados tales como ácido
linoleico, ácido linoléico conjugado, ácido linolénico, ácido
eicosatetranoico, ácido araquidónico, ácido eicosapentanoico (EPA),
ácido docosahexanoico (DHA), ácido elaídico, ácido oleico, ácido
erúcico, y ácidos dioicos tales como el ácido hexadecanoico.
Debe también entenderse que el activador PPAR
\alpha adecuado que está presente en las composiciones de acuerdo
con la invención está idealmente presente en la forma "activa",
es decir, no esterificados. De esta forma, aunque se han detallado
anteriormente fuentes naturales del material, tales como aceites, el
activador PPAR \alpha adecuado que se usa en las composiciones de
acuerdo con la invención no es, de forma preferible, la forma
esterificada, original, del activador, sino en su lugar una fuente
de materia prima que, o bien sea rica en el activador PPAR \alpha
no esterificado, o uno que esté en la forma esterificada que se haya
hidrolizado para liberar el ácido graso.
El segundo componente lípido está presente en una
cantidad entre 0,0001% y 50% en peso de la composición. Más
preferiblemente, la cantidad es desde 0,01% a 10% y más
preferiblemente de 0,1% a 5% con el objeto de maximizar beneficios a
un coste mínimo.
La composición usada de acuerdo con la invención
también comprende un vehículo dermatológicamente/ cosméticamente
aceptable que actúe como un diluyente, dispersante o vehículo para
los ingredientes activos. El vehículo puede comprender materiales
habitualmente empleados en los productos de cuidado de la piel tales
como agua, emolientes líquidos o sólidos, aceites de silicona,
emulsificantes, solventes, humectantes, espesadores, polvos,
propelentes y similares.
El vehículo formará usualmente entre 5% a 99,9%,
preferiblemente entre 25% a 80% en peso de la composición y puede,
en la ausencia de otros adjuntos cosméticos, equilibrar la
composición.
Además de los ingredientes activos, pueden
también incluirse otros agentes activos para beneficio específico de
la piel tales como protectores solares, otros agentes aclarantes de
la piel, y agentes bronceantes de la piel. El vehículo también puede
incluir además adjuntos como perfumes, opacificantes, conservantes,
colorantes y tampones.
Para preparar la composición tópica usada en el
procedimiento de la presente invención, puede emplearse la forma
usual de preparar los productos para cuidado de la piel. Los
componentes activos se incorporan generalmente en un vehículo
dermatológicamente / cosméticamente aceptable en la forma
convencional. Los componentes activos pueden de forma adecuada en
primer lugar disolverse o dispersarse en una porción de agua u otro
solvente o líquido a incorporar en la composición. Las composiciones
preferidas son emulsiones
aceite-en-agua o
agua-en-aceite o
agua-en-aceite-en-agua.
La composición puede estar en la forma de un
producto convencional para el cuidado de la piel tal como una crema,
gel o loción, cápsulas o similares. La composición también puede
esta en la forma así denominada producto "de lavado", por
ejemplo, un gel de baño o ducha, posiblemente conteniendo un sistema
de liberación de los productos activos para promover adherencias a
la piel durante el aclarado. Lo más preferible, el producto es un
producto "de deposición", esto es, un producto a aplicar sobre
la piel sin una etapa deliberada de aclarado inmediatamente después
de su aplicación a la piel.
La composición puede envasarse de cualquier forma
adecuada como en un frasco, botella, tubo, sistema rollon, o
similar, en la forma convencional. También se presagia que las
composiciones inventivas pueden estar envasadas en forma de un kit
de dos composiciones separadas una conteniendo el primer componente
lípido de ácido petroselínico y/o el DHA y el segundo conteniendo el
segundo componente lípido de la presente invención, para aplicar a
la piel de manera simultánea o consecutiva.
La composición de acuerdo con la presente
invención puede también estar formulada en una forma adecuada para
ingestión oral, tal como un comprimido, cápsula o similar.
El procedimiento de la presente invención puede
llevarse a cabo una o más veces al día sobre la piel que requiera
tratamiento. La mejora en la apariencia de la piel será visible
normalmente tras 3 a 6 meses, dependiendo del estado de la piel, la
concentración de los ingredientes activos usados y la frecuencia con
la cual se aplique. En general, una pequeña cantidad de la
composición por ejemplo de 0,1 a 5 ml se aplica a la piel a partir
de un contenedor adecuado o aplicador, y esparcido y/o introducido
en la piel usando las manos o dedos o un dispositivo adecuado. Puede
seguir una etapa de aclarado de forma opcional, dependiendo si la
composición se formula como un producto "de depósito" o "de
lavado".
Con el objetivo de que la presente invención se
entienda más fácilmente, se proporcionan los siguientes ejemplos, a
título meramente ilustrativo.
Un procedimiento establecido y ampliamente
aceptado por el que puede demostrarse la activación de PPAR, de esta
forma, identificar activadores de PPAR es el ensayo del gen
identificador. El protocolo se detalla en Kliewer y col. (1992)
Nature, 358, 771-774.
Este ensayo se leva a cabo sobre líneas celulares
(por ejemplo, COS ó CV-1) que presentan bajos
niveles endógenos de expresión PPAR. Estas células se plaquean en un
formato multi pocillo, y, de forma simultánea, se transfectan con 4
plásmidos de expresión en mamíferos. Estos plásmidos contienen ADN
que codifica uno de lo siguiente:
- a)
- El PPAR de interés, en este caso el PPAR subtipo \alpha.
- b)
- El receptor retinoide X (denominado a partir de ahora en la presente invención como RXR), en el caso de la piel RXR subtipo \alpha.
- c)
- Un gen indicador como la luciferasa o cloranfenicol acetil transferasa (CAT) con un elemento de respuesta PPAR insertado en su promotor
- d)
- Un gen indicador expresado constitutivamente, tal como la \beta-galactosidasa, que no es responsable de la activación PPAR.
La activación del complejo trasnfectado RXR/PPAR
por reactivos exógenos se determina midiendo la expresión del gen
indicador de la respuesta PPAR (luciferasa o CAT). Esto se lleva a
cabo usando kits comerciales, tales como Luciferase Assay system
(Promega) o CAT Enzyme Assay System (Promega). La expresión del gen
indicador no responsable de PPAR se determina de forma similar
usando kits comerciales, tales como
\beta-galactosidasa Assay system (Promega), y se
usa como control para determinar la eficiencia de la transfección y
de esta forma, normalizar el ensayo.
De esta manera, aquellos lípidos exógenos que
causen la expresión de la luciferasa o CAT, preferiblemente que
causen un mínimo incremento de dos veces la expresión de luciferasa
o CAT, se podrán identificar rápidamente como lípidos que activan
PPAR \alpha.
Este ejemplo demuestra los beneficios anti
envejecimiento de los ingredientes activos de la presente
invención.
Se sembraron fiibroblastos humanos primarios de
la piel de la frente en paso 2 (P2) en placas de 12 pocillos a 1.000
células/cm^{2}, y se mantuvieron durante 24 horas en una atmósfera
de dióxido de carbono al 5% y oxígeno al 4% en Medio Eagles
modificado de Dulbecco (DMEM) complementado con suero fetal de
ternera al 10%. Tras este tiempo, las células se lavaron con suero
libre de DMEM y a continuación se incubaron en suero fresco libre de
DMEM durante 60 horas más. Las monocapas de fibroblastos se lavaron
a continuación con suero libre de DMEM. Los reactivos de ensayo y
vehículos de control se añadieron a las células por triplicado en un
volumen final de 0,4 ml/pocillo de suero libre de DMEM y se
incubaron durante 24 horas más. Este medio condicionado de
fibroblastos se analizó bien inmediatamente o se congeló en
nitrógeno líquido y fue almacenado a -70ºC para análisis futuro. Las
células se contaron a continuación y los datos del análisis
dot-blot normalizados posteriormente al número de
células.
Las muestras de medio condicionado procedente de
fibroblastos dérmicos tratados con placebo (como control) o
reactivos de ensayo se complementaron con ditiotreitol 20 mM
(dilución 1:10 de una solución stock de 200 mM) y dodecilsulfato
sódico (dilución 1:100 de una solución stock al 10%), bien mezclada
y a continuación se incubó a 75ºC durante 2 minutos.
Se generó un patrón para el ensayo por dilución
en serie del medio condicionado con fibroblastos netos a partir de
fibroblastos sembrados a 10.000 células/cm^{2} en un frasco de 175
cm^{2} y mantenido en suero libre de DMEM como se ha descrito
anteriormente. Las muestras de ensayo se aplicaron posteriormente
por triplicado a una hoja prehumedecida de membrana de transferencia
Immobilon-P usando el Equipo Bio-Dot
de 96 pocillos de Bio-Rad como se describe en las
directrices de los fabricantes. Se aplicaron aproximadamente 200
\mul de medio en cada pocillo. Se dejo filtrar por gravedad el
medio a través de la membrana (30 minutos), tras lo cual la membrana
se lavó dos veces con PBS (200 \mul). Estos lavados de PBS se
dejaron filtrar por gravedad a través de la membrana (2 x 15
minutos).
Se conectó a continuación el aparato
Bio-Dot a un manguito de vacío y se realizó un
tercer y último lavado con PBS bajo succión. El aparato fue
desconectado, se retiró la membrana, y se cortó rápidamente como se
requirió anteriormente, colocándose en tampón bloqueante durante
toda la noche a 4ºC. Las membranas preparadas para análisis de
procolágeno-I se bloquearon con una mezcla al 5%
(v/v) de leche en polvo desnatada/ Tween 20 al 0,05% en PBS. Al día
siguiente, las membranas se probaron con dilución 1:10.000 de
anticuerpos primarios de procolágeno-I humano
(MAB1912; rata monoclonal; Chemicon Int. Inc., Temecula, CA) durante
2 horas a temperatura ambiente. Las membranas fueron posteriormente
lavadas con TBS /Tween 20 al 0,05% (3 x 5 minutos) y a continuación
incubadas con dilución 1:1.000 de anti-rata
^{125}I-conjugado (Amersham) como fuera necesario
durante 1 hora a temperatura ambiente. Siguiendo esto, las tiras
Immobilion se lavaron de nuevo con TBS / Tween 20 (3 x 5 minutos)
antes de dejarlas secar al aire a temperatura ambiente.
Las membranas secas se envolvieron en celofán y
se expusieron a una pantalla de fósforo de Molecular Dynamics
durante 16-18 horas. Al final de este tiempo, se
escaneó la pantalla expuesta mediante un fosforimager (Molecular
Dynamics Phosphorimager SF) usando software ImageQuant ^{TM}. La
intensidad de puntos se evaluó mediante análisis de imagen asistido
por ordenador, se normalizó al número de células, y se determinaron
los efectos de los diferentes reactivos de ensayo sobre las síntesis
de procolágeno en relación con un control tratado con placebo de 100
unidades arbitrarias.
La Tabla 1 dada a continuación indica el efecto
sinérgico del ácido petroselínico/DHA en combinación con ácido
linoléico sobre la síntesis de procolágeno-I en
fibroblastos dérmicos humanos, y las cantidades en los que los
productos activos se aplicaron. Con el objetivo de normalizar los
resultados de los efectos del ensayo, las sustancias se determinaron
en relación con un control tratado con placebo de 100 unidades
arbitrarias. Se llevó a cabo un test comparativo con una combinación
de lípidos fuera del alcance de la presente invención, ácido oleico
en combinación con ácido linoléico. Las concentraciones de los
reactivos usados en los sondeos no tuvo influencia sobre la
viabilidad celular.
Los resultados de la Tabla 1 demuestran que la
combinación específica entre ácido petroselínico o DHA con un lípido
activador de los alfa PPAR promueve de forma sorprendente y
sinérgica la síntesis de procolágeno I en fibroblastos dérmicos
humanos, lo que es un conocido marcador antienvejecimiento. En
contraste, la combinación de ácido oleico (que es un lípido es está
estructuralmente muy estrechamente relacionado con el ácido
petroselínico) y el activador de los alfa PPAR (una combinación
fuera del alcance de la presente invención) no presente dicho efecto
sinérgico.
El aumento del nivel de
procolágeno-I en la piel está asociado con muchos
beneficios antienvejecimiento para la piel, como el borrado de
arrugas y reparación dérmica de la piel fotodañada.
La formulación siguiente muestra un aceite en
crema acuosa adecuado para los procedimientos y usos de acuerdo con
la presente invención. Los porcentajes indicados son en peso de la
composición.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
En la composición del ejemplo 3 anterior, se
sustituye el ácido petroselínico (triglicérido) por DHA
(triglicérido) de NU Check prep..
La composición siguiente describe una emulsión en
crema de acuerdo con la presente invención.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
En las composiciones del Ejemplo 5 anterior, el
aceite de semillas de cilantro se sustituye por aceite de pescado,
de Ross.
Las composiciones tópicas anteriores proporcionan
un tratamiento cosmético efectivo para mejorar la apariencia de la
piel arrugada, envejecida, y fotodañada cuando se aplican a piel
normal que ha perdido su lisura y firmeza debido al proceso de
envejecimiento normal, o cuando se aplica a piel juvenil para ayudar
a prevenir o retrasar tales cambios indeseables. Las composiciones
se procesan de la forma convencional.
Claims (9)
1. Una composición tópica que comprende:
- a)
- un primer componente lípido seleccionado entre ácido petroselínico y/o derivados del mismo;
- b)
- un segundo componente lípido, que es un activador de los receptores activados de peroxisomas del subtipo alfa, y/o derivados de los mismos, y/o mezclas de los anteriores de los mismos; y
- c)
- Un vehículo dermatológicamente aceptable.
con la condición de que el primer y segundo
componente lípido no sean el mismo lípido.
2. Una composición tópica de acuerdo con la
reivindicación 1, en la que el activador de PPAR \alpha es un
ácido graso saturado C10-C18, un ácido graso
monoinsaturado C10-C20, o un ácido graso
poliinsaturado C10-C22, o mezclas de los mismos.
3. Una composición tópica de acuerdo con la
reivindicación 2, en la que el segundo lípido se selecciona entre
ácido linoleico, ácido linoléico conjugado, ácido linolénico, ácido
eicosatetranoico, ácido araquidónico, ácido eicosapentanoico (EPA),
ácido docosahexanoico (DHA), ácido elaídico, ácido oleico, ácido
erúcico, y ácido hexadecanoico, y mezclas de los mismos.
4. Una composición tópica de acuerdo cualquiera
de las reivindicaciones anteriores, en la que el segundo lípido es
ácido 12-hidroxi esteárico, ácido cis parinárico,
ácido trans-octadecenoico, ácido cis 5,8,11,14,17
eicosapentanoico, ácido cis 4,7,10,13,16,19 docosahexenoico, ácido
linoléico conjugado (c9, t11), ácido columbínico, ácido
linolenlaídico, ácido ricinolaídico, ácido estearidónico, ácido
2-hidroxi esteárico, ácido alfa linolénico, ácido
araquidónico, ácido cis-11,14 eicosadienoico, ácido
linoléico conjugado (t10, c12), ácido linoléico conjugado (t9, t11),
ácido linoléico conjugado (mezcla 50:50 de c9, t11 y t10, c12),
ácidos de cilantro, ácido linolelaídico, ácido ricinoleico, ácido
estearólico, extracto de tuya, y ácido trans vaccémico.
5. Una composición tópica de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que el segundo
lípido está en la forma libre y no conjugada.
6. Una composición tópica de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que la
composición se suministra en la forma de un kit que comprende dos
composiciones separadas, la primera contiene el primer componente
lípido y la segunda contiene el segundo componente lípido.
7. Un procedimiento cosmético para proporcionar
al menos un beneficio de cuidado de la piel seleccionado de: tratar/
prevenir la aparición de arrugas, descolgamiento, sequedad, piel
envejecida y/o fotodañada; acelerar/ mantener los niveles de
colágeno en la piel, acelerar/ mantener los niveles de decorina en
la piel, mejorar la textura, suavidad y firmeza de la piel, el
procedimiento comprende aplicar a la piel una composición tópica
como la que se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones
anteriores.
8. El uso de una composición tópica como la que
se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para
proporcionar al menos un beneficio de cuidado de la piel
seleccionado entre: tratar/ prevenir la aparición de arrugas,
descolgamiento, sequedad, piel envejecida y/o fotodañada; acelerar/
mantener los niveles de colágeno en la piel, acelerar/ mantener los
niveles de decorina en la piel, mejorar la reparación de los
tejidos, mejorar la textura, suavidad y firmeza de la piel.
9. El uso de un primer lípido seleccionado entre
ácido petroselínico y/o derivados del mismo, en combinación con un
segundo componente lípido, que es un activador de los receptores de
peroxisomas, y/o derivados de los mismos, y/o mezclas de los mismos
para la preparación de una composición tópica para proporcionar al
menos un beneficio de cuidado de la piel seleccionado entre: tratar/
prevenir la aparición de arrugas, descolgamiento, piel envejecida
y/o fotodañada; acelerar/ mantener los niveles de colágeno en la
piel, acelerar/ mantener los niveles de decorina en la piel, mejorar
la reparación de los tejidos, mejorar la textura, suavidad y firmeza
de la piel.
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