CN115154384B - 光防护的花椒果提取物衍生材料的制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了光防护的花椒果提取物衍生材料的制备方法及应用，该制备方法包括：一、以超临界CO2为萃取液对花椒粉末进行超临界萃取，得到花椒果提取物；二、取8质量份花椒果提取物与6质量份水杨酸混合，之后溶于去离子水与乙醇的混合液相；加入0.10～0.52质量份的辣根过氧化物酶与1.25～6.50质量份的双氧水，于50～70℃下搅拌反应4～8h，得到棕黄色浑浊反应原液；对反应原液进行离心、洗涤，得花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料。本发明将水杨酸与花椒果提取物的功能集成在纳米材料中，使该材料具备皮肤修复功能、紫外光防护功能；同时还可降低水杨酸的机体刺激性与生物毒性，又可提升花椒果提取物分子的光稳定性。

Description

光防护的花椒果提取物衍生材料的制备方法及应用
技术领域
本发明属于山椒素改性技术领域，特别涉及光防护的花椒果提取物衍生材料的制备方法及应用。
背景技术
在日常生产生活中，紫外线会经常性地与人类皮肤接触并造成损伤。太阳光谱中的紫外线，比如户外紫外线和长波黑斑效应紫外线会对皮肤造成一定程度地刺激，随后表皮黑素细胞通过合成黑素，并转移至角质形成细胞，在一定程度上保护皮肤受到进一步的伤害。然而，当过量程度的紫外线侵袭皮肤会造成一系列的损伤，比如细胞DNA受损、炎症发生甚至光致癌等，此时依靠人体自身的防御机制已经不能起到明显的效果。
在皮肤受到损伤后，继而产生的活性氧会对细胞组分如蛋白质、脂质、核酸等造成氧化损伤，并引起一系列的级联反应，并引发炎症反应，带来最终具有伤害性的皮肤损伤。因此在研发治疗皮肤光损伤材料的同时，需要把更多的关注目光投向如何清除胞内过量的活性氧，以及抑制细胞级联的炎症反应，从而加速皮肤光损伤的愈合过程；此外皮肤光损伤材料还需要具备一定的紫外线抵御能力，从而防止环境中的紫外线对皮肤造成二次损害。
水杨酸是从柳树皮、冬青叶中萃取的，又叫植物酸，具备优异的物理化学性质，具备良好的抗炎抗氧化能力，已经被广泛应用于皮肤相关的炎症治疗之中，然而水杨酸含量较高的皮肤护理材料使用过度，会导致皮肤角质层变薄，皮肤的自我防御崩溃，甚至出现红斑、过敏等现象。而花椒果提取物是从花椒中提取的酰胺类物质，其具有特征的共轭碳链结构，具有优异的紫外吸收能力与抗氧化特性，然而基于其本征化学特点，其性质十分不稳定，极易分解失效，从而限制了其进一步作为皮肤护理及治疗材料的应用。
发明内容
本发明的目的是结合水杨酸与花椒果提取物的优势，提供光防护的花椒果提取物衍生材料的制备方法及应用。
本发明通过高效可控的化学方法，将水杨酸与花椒果提取物的功能集成在纳米材料中，使该材料具备皮肤修复功能的同时，还具备紫外光防护功能；同时还可降低水杨酸的机体刺激性与生物毒性，又可提升花椒果提取物分子的光稳定性，实现天然功能分子特性的传递与改进，从而为其应用于生物防护等领域提供基础。
本发明的技术方案为：
光防护的花椒果提取物衍生材料的制备方法，包括：
一、提取花椒果提取物：以超临界CO2为萃取液对花椒粉末进行超临界萃取，得到花椒果提取物；
二、制备花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料：取8质量份花椒果提取物与6质量份水杨酸混合，之后溶于去离子水与乙醇的混合液相；加入0.10～0.52质量份的辣根过氧化物酶与1.25～6.50质量份的双氧水，于50～70℃下搅拌反应4～8h，得到棕黄色浑浊反应原液；对反应原液进行离心、洗涤，得花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料。
在一些具体实施方式中，步骤一进一步包括：
将对储罐中气态CO2制冷使其液化；
将花椒粉末放入萃取罐中，保持向萃取罐内通入储罐中的CO2作为萃取液进行超临界萃取，萃取罐内压力控制为15～20Mpa，萃取温度控制为40～50℃，萃取 1～3h得到前期萃取液；
前期萃取液进入分离罐，保持向分离罐内通入储罐中的CO2，分离罐内温度升至40～60℃，压力降至6.5Mpa以下，CO2流量控制为100～150m3/h，分离2～4h 得到粗产物；
粗产物放入萃取罐，保持通入储罐中的CO2作为萃取液再次超临界萃取，萃取罐内压力控制为20～30Mpa，萃取温度降为38～42℃，萃取1～3h；经排渣即得花椒果提取物。
作为优选，花椒粉末粒径为150～270微米。
在一些具体实施方式中，步骤二进一步包括：
将花椒果提取物与水杨酸溶于去离子水与乙醇的混合液相，对所得混合溶液进行超声处理；
配制辣根过氧化物酶的水溶液，加入所述混合溶液，经搅拌混合后预热至温度稳定于50～70℃；
对反应溶液保持搅拌，同时用注射器将双氧水溶液加入已预热的反应溶液中，当得到均一稳定的棕黄色浑浊反应原液时结束反应；所述双氧水溶液为用去离子水稀释后的质量浓度0.3％的双氧水溶液；
对反应原液保持搅拌，同时使反应原液冷却至室温，对其进行离心、洗涤，得花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料。
在一些具体实施方式中，去离子水与乙醇的混合液相中去离子水与乙醇的体积比为1：1。
作为优选，辣根过氧化物酶用量为0.18～0.52质量份，且双氧水的用量为2.25～6.50质量份。
上述所制备的花椒果提取物衍生材料具有优异的紫外光防护功能，可用作制备光防护剂。
上述所制备的花椒果提取物衍生材料具有优异的皮肤修复功能，可用作制备皮肤修复剂。
和现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：
(1)本发明从化学角度对分子结构进行合理分析，通过高效的酶促化学反应构筑了花椒果提取物-水杨酸纳米粒子，具备优异的应用价值。
(2)可以通过简单地控制酶浓度对纳米粒子粒径进行调节与控制。
(3)所制备的PSAS-1～4纳米粒子均具有良好抵御紫外线侵袭的能力。
(4)所制备的PSAS-1～4纳米粒子均具有优异的光稳定性，直接混合稳定性较差，不需要额外的稳定剂。
(5)所制备的PSAS-1～4纳米粒子均具有良好的自由基清除能力。
(6)所制备的PSAS-1～4纳米粒子均具有良好的抗氧化稳定性，直接混合稳定性较差，可以持续清除过量的自由基。
(7)所优选的PSAS-2纳米粒子具有良好的生物相容性，为其生物应用打下了坚实的基础。
(8)所优选的PSAS-2纳米粒子具有良好的抗炎能力，能促进细胞从M1表型转化为M2表型。
(9)所优选的PSAS-2纳米粒子具有加速光损伤伤口愈合过程的能力，从而为后续应用提供了有力的证据。
附图说明
图1为实施例2样品从扫描电镜测得的粒子粒径；
图2为实施例2样品从动态光散射测得的粒子粒径；
图3为实施例2样品的紫外吸收强度统计图；
图4为实施例2样品及对照样品的光稳定性对比图；
图5为实施例2样品随时间变化的自由基清除曲线；
图6为实施例2样品及对照样品的抗氧化稳定性对比图；
图7为实施例2样品PSAS-2在不同浓度下的细胞相容性测试；
图8为实施例2样品PSAS-2在不同浓度下抵抗炎症能力的统计分析；
图9为实施例2样品PSAS-2加速伤口愈合过程的创口保留率统计图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下将结合具体实施方式以及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明光防护的花椒果提取物衍生材料的制备方法，其具体实施过程如下：
一、制备花椒果提取物：
本步骤通过对花椒粉末进行萃取来获得花椒果提取物，具体步骤如下：
1.1取粒径150～270微米的花椒粉末，该花椒粉末可以直接购买，或对花椒去梗并粉碎获得；
1.2对储罐中气态CO2制冷使其液化；
1.3将花椒粉末放入萃取罐中，保持通入储罐中的CO2作为萃取液进行超临界萃取，萃取罐内压力控制为15～20Mpa，萃取温度控制为40～50℃，萃取1～3h，得到前期萃取液；
1.4前期萃取液进入分离罐，向分离罐内保持通入储罐中的CO2，分离罐内温度升为40～60℃，压力降为6.5Mpa以下，CO2流量控制为100～150m3/h，分离2～4 h得到粗产物；
1.5粗产物放入萃取罐，保持通入储罐中的CO2作为萃取液再次超临界萃取，萃取罐内压力控制为20～30Mpa，萃取温度降为38～42℃，萃取1～3h；经排渣，得到后期萃取物，即花椒果提取物。
二、制备花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料：
取7～9质量份花椒果提取物与5～7质量份水杨酸混合，之后溶于去离子水与乙醇的混合液相；加入0.10～0.52质量份的辣根过氧化物酶与1.25～6.50质量份的双氧水作为催化剂，于50～70℃下搅拌反应4～8h，得到均一稳定的棕黄色浑浊反应原液；对反应原液进行离心、洗涤，得花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料。
本步骤中，辣根过氧化物酶与双氧水可催化双键(山椒素)和酚羟基(水杨酸)的反应；此外山椒素与水杨酸间的疏水相互作用以及π-π堆积作用，可促进形成花椒果提取物与水杨酸的复合纳米粒子。
下面将提供本步骤的一种具体实施过程：
2.1取相应质量份的花椒果提取物、水杨酸、辣根过氧化物酶与双氧水；
2.2将花椒果提取物与水杨酸溶于去离子水与乙醇的混合液相中，对所得混合溶液进行超声处理4～8分钟，以保证分散均匀；
2.3将辣根过氧化物酶溶于去离子水获得浓度10mg/ml的辣根过氧化物酶水溶液，加入步骤2.2所配制的混合溶液，通过搅拌充分混合，之后置于油浴中预热直至温度稳定于50～70℃；
2.4用去离子水将双氧水稀释为质量浓度0.3％的双氧水溶液，对反应溶液保持搅拌，同时用注射器将稀释后的双氧水溶液缓慢加入已预热的反应溶液中。可以观察到，当加入双氧水溶液后，反应溶液迅速由初始的淡黄色透明溶液转变为深棕色浑浊溶液，随着时间延长，反应溶液逐渐转变为棕黄色，当得到均一、稳定的棕黄色浑浊反应原液时结束反应；一般搅拌反应4～8小时即可获得均一、稳定的棕黄色浑浊反应原液；
2.5对反应原液保持搅拌，同时使反应原液冷却至室温，对其进行离心处理，离心机转速设定为12000～16000r/min，离心时间设定为5～10分钟，得到棕黄色固体；再经去离子水洗涤3次，即得花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料样品。
下面将提供若干实施例和对比例。在实施例和对比例中，水杨酸购于上海市安耐吉化学有限公司，其纯度为98.0％；辣根过氧化物酶购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，其活性＞300U/mg；双氧水购于成都金山化工有限公司，其质量浓度30％。
实施例1
本实施例花椒果提取物的制备步骤如下：
(1)花椒去梗并粉碎至粒径为150～270微米；
(2)对储罐中气态CO2制冷使其液化；
(3)将花椒粉末放入萃取罐中，保持通入储罐中的CO2作为萃取液进行超临界萃取，萃取罐内压力控制为18Mpa，萃取温度控制为45℃，萃取2h，得到前期萃取液；
(4)前期萃取液进入分离罐，保持向分离罐内通入储罐中的CO2，分离罐内温度升为50℃，压力降为5Mpa，CO2流量控制为120m3/h，分离3h，得到粗产物；
(5)粗产物放入萃取罐，保持通入储罐中的CO2作为萃取液再次超临界萃取，萃取罐内压力控制为22Mpa，萃取温度降为40℃，萃取2h；经排渣，得到后期萃取物，即花椒果提取物。
实施例2
本实施例花椒果提取物与水杨酸复合纳米粒子的制备步骤如下：
(1)按表1中配方称取相应质量份的花椒果提取物、水杨酸、辣根过氧化物酶与双氧水；
(2)将花椒果提取物与水杨酸溶于去离子水与乙醇的混合液相中，其中去离子水和乙醇的体积比为1：1，获得花椒果提取物与水杨酸的混合溶液；对混合溶液超声处理5分钟，以保证分散均匀；
(3)将辣根过氧化物酶溶于去离子水获得浓度10mg/ml的辣根过氧化物酶水溶液，加入步骤(2)所配制的混合溶液，通过搅拌充分混合，之后置于油浴中预热直至温度稳定于70℃；
(4)用去离子水将双氧水稀释为质量浓度0.3％的双氧水溶液，用10ml注射器将稀释后的双氧水溶液缓慢加入预热好的反应溶液中。可以观察到，当加入双氧水溶液后，反应溶液迅速由初始的淡黄色透明溶液转变为深棕色浑浊溶液，随着时间延长，反应溶液逐渐转变为棕黄色，保持搅拌反应6h，得到均一、稳定的棕黄色浑浊反应原液；
(5)对反应原液保持搅拌，同时使反应原液冷却至室温，对其进行离心处理，离心机转速设定为15000r/min，离心时间设定为8分钟，得到棕黄色固体；再经去离子水洗涤3次，即得花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料样品。
将表1中4个配方所对应样品分别记为样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4。
表1 实施例原料配方
对本实施例样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4进行如下性能检测：
(1)采用台式扫描电镜检测样品粒径。
将样品配制为浓度0.5mg/mL的样品溶液，旋涂于光滑云母片表面，依次经干燥、喷金处理后进行观察，再采用Image J软件对其进行粒径统计，见图1。从图1可以看出，样品PSAS-1的粒径为112～130nm，样品PSAS-2的粒径为165～189nm，样品PSAS-3的粒径为235～261nm，样品PSAS-4的粒径为321～343nm。从图1 可以看出，随着酶浓度(即辣根过氧化物酶质量浓度)的上升，所合成的复合粒子粒径呈逐渐增大的趋势，这是因为辣根过氧化物酶与双氧水配比的提高为粒子提供了更多的生长基元，因此基于上述实施例，可以简易地通过调节辣根过氧化物酶与双氧水配比来调节与控制复合粒子粒径。需要说明的是，图1中酶浓度与辣根过氧化物酶与双氧水配比有关，图1中4个点分别对应样品PSAS-1、PSAS-2、 PSAS-3、PSAS-4。
(2)采用动态光散射法对样品粒径进行表征。
采用动态光散射法对样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4的粒径进行表征，见图2。从图2可以看出，样品PSAS-1的粒径为135～169nm，样品PSAS-2 的粒径为195～227nm，样品PSAS-3的粒径为266～304nm，样品PSAS-4的粒径为350～380nm。对比扫描电镜检测的粒径，动态光散射法检测粒径呈现出略微增大的趋势，这是因为动态光散射测得的粒径为粒子和水的半径综合。此外，两种不同方法检测的样品粒径具有相同趋势，表征调节辣根过氧化物酶与双氧水配比可成功调节与控制粒子粒径。同样的，图2中4个点分别对应样品PSAS-1、PSAS-2、 PSAS-3、PSAS-4。
(3)测定样品在紫外区域的光谱吸收能力。
将样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4分别配制为浓度50μg/mL的水溶液，采用紫外-可见光分光光度计测定样品在200～400nm波长范围内的紫外吸收强度，狭缝宽度为2nm。进一步对200～400nm波长区域进行积分，得出样品在紫外区域的吸收强度，见图3。从图3可以看出，样品PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4均具有较强的紫外吸收能力，其中PSAS-4具有最强的紫外吸收能力，可以看出紫外吸收能力随粒径的增大而逐渐增强，但样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4均可满足后续光防护的需求。
(4)测定样品在紫外区域光谱吸收的稳定性。
将样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4分别配制为浓度50μg/mL的水溶液，采用紫外-可见光分光光度计测定样品在271nm波长处的紫外吸收强度，狭缝宽度为2nm。之后将样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4在功率1.5W的模拟太阳光下照射4h，再次分别测定各样品在271nm处的紫外吸收强度，计算各样品的光稳定性：光稳定性(％)＝照射后紫外吸收强度/照射前紫外吸收强度×100％。
将花椒果提取物与水杨酸直接混合的材料作为对照样品，具体地，按8：6的质量比取花椒果提取物与水杨酸混合，并配制为浓度50μg/mL的水溶液。采用前述方法测定对照样品在紫外区域光谱吸收的稳定性。样品PSAS-1、PSAS-2、 PSAS-3、PSAS-4及对照样品的光稳定性见图4。从图4可以看出，样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4的光稳定性较相似，差距不大，均在80％以上，其中样品PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4的光稳定性均超过85％，证明本发明花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料成功地提升了光稳定性，在光照条件下，仍能保持较为优异地紫外吸收能力。但花椒果提取物与水杨酸直接混合则不能有效提升光稳定性。
(5)使用2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法评定样品的水相自由基清除能力。
分别制备浓度7mmol/L的ABTS水溶液与浓度2.45mmol/L的过硫酸钾水溶液；将ABTS水溶液与过硫酸钾水溶液以1：2的摩尔比混合，并在室温下静置过夜，使其处于黑暗状态得到ABTS检测试剂。
制作样品溶液：配制浓度1mg/mL的PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4样品水溶液，取100μL的ABTS检测试剂溶液用适当量去离子水稀释，而后加入 100μL的样品水溶液，使溶液最终体积保持为3mL。采用734nm处的吸光度来评价自由基清除效果，30分钟内选不同时间点测定吸光度，得到自由基清除曲线，以评估其水相抗氧化能力，结果见图5。从图5可以看出，随着粒径增大，样品的自由基清除能力逐渐下降，这是由于粒径的增长降低了粒子的比表面积，经过30 分钟后，样品PSAS-1与PSAS-2的清除率均超过80％，显示出较高的抗氧化能力。
(6)使用ABTS法测定样品的抗氧化稳定性。
样品配制方法同前述的ABTS方法，采用734nm处的吸光度来评价其自由基清除能力，室温下保持避光搅拌30min后测定样品溶液的自由基清除能力。之后，将样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4在功率1.5W的模拟太阳光下照射4h，再次分别测定各样品溶液在734nm处的吸光度，计算抗氧化稳定性：抗氧化稳定性(％)＝照射后吸光度/照射前吸光度×100％。
将花椒果提取物与水杨酸直接混合的材料作为对照样品，具体地，按8：6的质量比取花椒果提取物与水杨酸混合，并配制为浓度1mg/mL的水溶液采用前述方法测定对照样品的抗氧化稳定性。样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4及对照样品的光稳定性见图6。从图6可以看出，样品PSAS-1、PSAS-2、PSAS-3、 PSAS-4均具备较高的抗氧化稳定性，其中样品PSAS-2、PSAS-3、PSAS-4的抗氧化稳定性均超过80％，为其长期持续氧化调节提供了必要的条件。但花椒果提取物与水杨酸直接混合则不能有效提升抗氧化稳定性。
基于前述检测结果，样品PSAS-2更具备良好且稳定的紫外吸收能力，以及优异且稳定的自由基清除能力，选择样品PSAS-2作为后续生物应用评测的样品材料。
(7)对样品PSAS-2测试生物相容性。
选取RAW264.7细胞株进行测试，采用阿尔玛蓝测试方法验证样品的细胞毒性。细胞的培养方式为将10％的胎牛血清(FBS)加入到DMEM培养基中共同孵育，培养的氛围为含有5％CO2的潮湿气氛，温度维持在37℃。将培养好的 RAW264.7细胞以每孔2000个细胞的密度在96孔板中孵育24h，以50、100、200、 300、400、500μg/mL的样品PSAS-2再处理24h，然后按照阿尔玛蓝测试说明书检测相应细胞存活率，检测结果见图7。从图7可以看出，在200μg/mL及以下的浓度，细胞相容性较为良好，均超过了90％，在超过200μg/mL后，细胞相容性逐渐下降，因此选取50、100、200μg/mL浓度进行后续性能测试。
选取RAW264.7细胞株进行测试，采用M1与M2标志物表达进行分析。细胞的培养方式为将10％的胎牛血清(FBS)加入到DMEM培养基中共同孵育，培养的氛围为含有5％CO2的潮湿气氛，温度维持在37℃。将培养好的RAW264.7细胞以每孔20万个细胞的密度在6孔板中孵育24h，用0、50、100、200μg/mL的样品对细胞进行处理24h，此后用1μg/mL脂多糖对细胞进行刺激。24h后，用 PBS洗涤细胞三次，用胰蛋白酶消化并通过离心(1200rpm，10min)收集细胞。细胞用0.02％蛋白酶溶液处理10min，然后将其浸入抗体CD 80和CD 206中在室温下保持30分钟。用PBS进行洗涤并施加山羊抗人二抗抗体，在室温下培养60 分钟后将细胞重新悬浮在1mL PBS中，用流式细胞术进行检测，通过FITC通道检测细胞绿色荧光，从而得出细胞M1与M2表型的比例，结果表示为M2/M1，见图8。从图8可以看出，在不施加材料的情况下，M2/M1值较低，表明了M1 型细胞占主导，具有较强的炎症反应，在施加不同浓度材料后M2/M1值均有所上升，M2型细胞比例逐渐增加，炎症得到改善，且随着材料浓度增加而效果增强，因此所制备材料具备良好的抗炎能力。
(8)对样品PSAS-2测试其对光损伤皮肤的修复能力。
所选用的动物为健康的雌性小鼠，来自成都硕达动物公司，大鼠体重约为25g。用功率1.5W的紫外光照射其背部皮肤2h，每天一次，照射三天，形成皮肤创口。此后分别于伤口形成后的第1、3、5、7、10、12、15天对创口进行清创处理并施加PSAS-2样品材料，采用拍照的方式记录伤口变化过程，并分别取第1、3、5、 7、10、12、15天的大鼠创口面积统计伤口保留率，伤口保留率＝实时伤口面积/ 原始伤口面积×100％，伤口保留率统计结果见图9。从图9可以看出，PSAS-2 样品材料的施加可有效加速伤口愈合，具备十分良好的光损伤皮肤修复应用前景。
本领域技术人员在考虑说明书及实践这里发明地公开后，将容易想到本发明的其他实施方案。本申请旨在涵盖本发明的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本发明的一般性原理并包括本发明未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本发明的真正范围和精神由下面的权利要求指出。
应当理解的是，本发明并不局限于上面已经描述，并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本发明的范围仅由所附的权利要求来限制。

Claims (5)

1.光防护的花椒果提取物复合纳米材料的制备方法，其特征是，包括：
提取花椒果提取物：以超临界CO2为萃取液对花椒粉末进行超临界萃取，得到花椒果提取物；
制备花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料：取8质量份花椒果提取物与6质量份水杨酸混合，之后溶于去离子水与乙醇的混合液相；加入0.10～0.52质量份的辣根过氧化物酶与1.25～6.50质量份的双氧水，于50～70℃下搅拌反应4～8h，得到棕黄色浑浊反应原液；对反应原液进行离心、洗涤，得花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料；
步骤一进一步包括：
将对储罐中气态CO2制冷使其液化；
将花椒粉末放入萃取罐中，保持向萃取罐内通入储罐中的CO2作为萃取液进行超临界萃取，萃取罐内压力控制为15～20Mpa，萃取温度控制为40～50℃，萃取1～3h得到前期萃取液；
前期萃取液进入分离罐，保持向分离罐内通入储罐中的CO2，分离罐内温度升至40～60℃，压力降至6.5Mpa以下，CO2流量控制为100～150m3/h，分离2～4h得到粗产物；
粗产物放入萃取罐，保持通入储罐中的CO2作为萃取液再次超临界萃取，萃取罐内压力控制为20～30Mpa，萃取温度降为38～42℃，萃取1～3h；经排渣即得花椒果提取物；
步骤二进一步包括：
将花椒果提取物与水杨酸溶于去离子水与乙醇的混合液相，对所得混合溶液进行超声处理；
配制辣根过氧化物酶的水溶液，加入所述混合溶液，经搅拌混合后预热至温度稳定于50～70℃；
对反应溶液保持搅拌，同时用注射器将双氧水溶液加入已预热的反应溶液中，当得到均一稳定的棕黄色浑浊反应原液时结束反应；所述双氧水溶液为用去离子水稀释后的质量浓度0.3％的双氧水溶液；
对反应原液保持搅拌，同时使反应原液冷却至室温，对其进行离心、洗涤，得花椒果提取物与水杨酸的复合纳米材料；
所述辣根过氧化物酶用量为0.18～0.52质量份，且所述双氧水的用量为2.25～6.50质量份。
2.如权利要求1所述的光防护的花椒果提取物复合纳米材料的制备方法，其特征是：
所述花椒粉末粒径为150～270微米。
3.如权利要求1所述的光防护的花椒果提取物复合纳米材料的制备方法，其特征是：
所述去离子水与乙醇的混合液相中去离子水与乙醇的体积比为1：1。
4.权利要求1～3中任一项所述的制备方法所制备的花椒果提取物复合纳米材料在制备光防护剂中的应用。
5.权利要求1～3中任一项所述的制备方法所制备的花椒果提取物复合纳米材料在制备皮肤修复剂中的应用。
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