KR20020047100A

KR20020047100A - 피부 관리 조성물

Info

Publication number: KR20020047100A
Application number: KR1020027001263A
Authority: KR
Inventors: 카렌 엘리자베쓰 바레트; 마틴 리차드 그린; 안토니 빈센트 롤링스
Original assignee: 알 브이 테이트 (로드니 비버스 테이트), 에이치 드로이. 씨. 지. 오닌크, 이. 에디, 산드라 웨드워즈 (에스 제이 에드워즈); 유니레버 엔.브이.
Priority date: 1999-07-30
Filing date: 2000-07-11
Publication date: 2002-06-21
Also published as: CA2391341C; EP1200059B1; JP2013253087A; ATE250921T1; JP5416875B2; WO2001008650A1; MXPA02001030A; CN1376051A; EP1200059A1; AU753782B2; KR100772752B1; DE60005678T2; AU6272100A; TWI232110B; CA2391341A1; JP2003505490A; ZA200200551B; ES2208377T3; GB9918025D0; DE60005678D1

Abstract

(a) 공액 리놀산 및(또는) 이의 유도체;

(b) 레티노산, 레티놀, 레티닐 에스테르 및(또는) LRAT/ARAT 저해제; 및

(c) 피부학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 국소 조성물. 상기 피부 관리 조성물은 주름, 처짐, 광손상 피부, 건조 피부 및 노화성 반점으로 구성된 군으로부터 선택된 정상적이나, 바람직하지 않은 피부 상태를 치료 및(또는) 에방하고 민감성 피부를 진정하는데 유용하다.

Description

피부 관리 조성물{Skin Care Composition}

피부는 피부병, 환경적 악재(바람, 공조 및 중앙 난방)에 의해, 또는 피부가 햇빛에 노출시 가속화(광노화)될 수 있는 정상적인 노화 과정(시간적 노화)을 통하여 나빠지게 된다. 최근 피부의 외관 및 상태를 개선하기 위한 미용 조성물 및 미용 방법에 대한 요구가 상당히 증가되었다.

시간적 노화 및 광노화 피부의 가시적 신호, 예컨대 주름, 주름선, 처짐, 색소 침착 과다 및 노화성 반점을 치료 또는 지연하는 노화 방지 미용 제품에 대한 소비자들의 요구가 증가되고 있는 실정이다.

소비자들은 종종 미용 제품으로부터 노화 방지 뿐 아니라 다른 이점도 추구한다. 민감성 피부라는 개념은 민감하고, 건조하고(하거나) 박피되는 피부의 외관 및 상태를 개선하고 적색의 및(또는) 자극받은 피부를 진정하는 미용 제품에 대한 소비자의 요구를 또한 창출했다. 소비자들은 유분/피지 조절 효과를 갖는 미용 제품을 또한 원한다.

많은 사람들이 피부의 색소 침착 정도를 염려한다. 예를 들면, 노화성 반점또는 주근깨가 있는 사람들은 그러한 색소 침착 반점이 보다 덜 두드러지는 것을 바랄 것이다. 또 다른 사람들은 햇빛에 노출되어 검어진 피부를 완화시키거나 그들 본래의 피부색을 미백화하고 싶어할 수도 있다. 이러한 요구에 부합하기 위하여, 많은 시도가 행해져서 멜라닌 세포의 색소 생산을 감소시키는 제품이 개발되었다. 그러나, 지금까지 확인된 물질들은 바람직하지 않은 부작용을 갖는데, 예를 들면 피부 자극이 있다.

따라서 상기 물질들은 미용 용도에는 적절하지 않거나 또는 피부 미백 효과가 원하는 수준에 못 미치는 농도로 밖에 사용할 수 없다. 여러 피부 미백 물질을 병용하여 부작용을 완화시키는 것을 생각할 수 있으나, 이러한 병용 방법은 경쟁효과로 인하여 피부 미백 효과가 감소될 수 있다는 상당한 위험성도 존재한다. 그러므로, 미용 피부 미백 제품의 효과에 있어서의 개선이 요구되는데, 특히 피부를 자극하지 않아야 한다.

다불포화 필수 지방산의 장쇄 트리글리세라이드 에스테르 및 이의 알칼리 또는 암모늄 염을 포함하는 피부의 상태 및 외관을 개선하기 위한 피부 관리 미용 및 피부학적 조성물이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들면, 제 GB 2181349 A 호는 특히 피부의 매끄러움 및 탄성을 개선하기 위한 리놀산의 트리글리세라이드로 구성된 조성물을 기술한다. 상업적 제품인 Linola Fett n(예를 들면, Dr. 아우구스트 볼프 Gmbh(Dr. August Wolff Gmbh)은 건조 피부 질병, 특히 피부병의 치료에 유용하며, 특히 공액 리놀산의 9,11 이성질체의 혼합물을 함유한다.

레티놀(비타민 A)는 인체에서 자연적으로 발생되는 내인성 화합물이며 정상적인 상피 세포 분화에 필수적인 것이다. 천연 및 합성 비타민 A 유도체(레티노이드)는 다양한 피부 질병의 치료에 광범위하게 사용되어 왔으며 피부 회복 또는 재생제로서 사용되어 왔다. 예를 들면, 레티노산은 다양한 피부 상태, 예를 들면 여드름, 주름, 건선, 노화성 반점 및 변색을 치료하는데 사용되어 왔다. 예를 들면, 발퀴스트, 에이.(Vahlquist, A.) 등의 문헌[J. Invest. Dermatol., Vol. 94, Holland D.B. and Cunliffe, W.J.(1990), pp. 496-498]; 엘리스, 씨.엔.(Ellis, C.N.) 등의 문헌["Pharmacology of Retinols in Skin", Vasel, Karger, Vol.3, (1989), pp. 249-252]; 로위, 엔. 제이.(Lowe, N.J.) 등의 문헌["Pharmacology of Retinols in Skin", Vol.3, (1989), pp 240-248], PCT 특허 출원 제 WO 93/19743 호를 참고한다.

제 WO99/26588 호는 공액 리놀산 및 임의로 레티노산 에스테르인 레티노일 아스코르베이트를 포함하는 노화 방지 크림을 기술한다.

그러나 노화 및 광손상 피부의 가시적 신호, 예컨대 주름, 주름선, 처짐, 색소 침착 과도 및 노화성 반점을 치료/지연하기 위하여 피부에 국소적으로 사용하기 위한 대안의 효과적인 미용 조성물에 대한 요구가 계속되고 있다.

본 발명에 이르러 시간적 노화 또는 광노화로 인한 정상적인, (그러나 미용적으로 바람직하지 않은), 피부 상태, 예컨대 주름, 주름선, 처짐, 색소 침착 과도 및 노화성 반점의 효과적인 치료 및 예방이, 특정 지방산-공액 리놀산 및(또는) 이의 유도체와 레티노산, 레티놀 또는 레티놀의 에스테르(레티닐 에스테르) 및(또는) 효소 아실 CoA 레티놀 트랜스퍼라제(ARAT) 또는 효소 레시틴 레티놀 아실 트랜스퍼라제(LRAT)의 저해제(하기에는 LRAT/ARAT 저해제로 지칭됨)로 구성된 미용 조성물을 피부에 사용함으로써 달성될 수 있다는 것이 발견되었다. 본 발명자들은 또한 상기 미용 조성물의 사용은 노화 방지에 더한 추가의 피부 관리 이점, 예컨대 민감성 및(또는) 자극된 피부를 진정하고, 유분/피지 분비를 조절하고 피부를 미백하는 효과를 이롭게 제공한다는 것을 발견하였다.

상기 언급된 선행기술은 공액 리놀산과 레티노산, 레티놀 또는 레티닐 에스테르 및(또는) LRAT/ARAT 저해제의 특정 상승적 조합뿐만이 아니라 상기한 특정 조합의 주름, 민감성 피부, 건조 피부를 치료하고, 유분/피지 분비를 조절하고, 또는 피부를 미백하기 위한 용도도 또한 전혀 교시하지 않았다.

발명의 요약

본 발명의 제 1 면에 따르면,

(a) 공액 리놀산 및(또는) 이의 유도체;

(c) 피부학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 국소 조성물이 제공된다.

본 발명의 제 2 면에 따르면, 주름, 처짐, 건조, 노화 및(또는) 광손상 피부의 치료/예방; 피부 중 콜라겐 침착의 증가, 피부 중 데코린 생산의 증가, 조직 회복 증진; 자극받은 적색의 및(또는) 민감성 피부의 진정; 피부 결, 매끄러움 및(또는) 피부 탄력의 개선; 피부 미백; 유분/피지 분비의 조절로부터 선택된 적어도 하나의 피부 관리 이점을 제공하는 미용 방법이 제공되는데, 이 방법은 피부에 상기한 국소 조성물을 사용하는 것을 포함한다.

본 발명은 또한 주름, 처짐, 노화 및(또는) 광손상 피부의 치료/예방; 피부 중 콜라겐 침착의 증가, 피부 중 데코린 생산의 증가, 조직 회복 증진; 자극받은 적색의 및(또는) 민감성 피부의 진정; 피부 결, 매끄러움 및(또는) 피부 탄력의 개선; 피부 미백; 유분/피지 분비의 조절로부터 선택된 적어도 하나의 피부 관리 이점을 제공하기 위한 본 발명 조성물의 용도를 포함한다.

본 발명의 또 하나의 면에 따르면 주름, 처짐, 노화 및(또는) 광손상 피부의 치료/예방; 피부 중 콜라겐 침착의 증가, 피부 중 데코린 생산의 증가, 조직 회복 증진; 자극받은 적색의 및(또는) 민감성 피부의 진정; 피부 결, 매끄러움 및(또는) 피부 탄력의 개선; 피부 미백; 유분/피지 분비의 조절로부터 선택된 적어도 하나의 미용 피부 관리 이점을 제공하기 위한 미용 국소 조성물에 공액 리놀산 및 이의 유도체를 레티노산, 레티놀, 레티닐 에스테르 및(또는) LRAT/ARAT 저해제와 함께 사용하는 용도가 제공된다.

그러므로 본 발명의 조성물, 방법 및 용도는 노화 방지 이점을 제공하여 이로 인해 개선된 피부색의 탄력이 개선되고 주름 및 피부의 노화가 완화되거나 지연된 외관의 매끄럽고 유연한 피부로 된다. 피부의 외관, 결 및 상태에 있어서의, 특히 광택, 투명도 및 전반적으로 젊어 보이는 외관에 대한 전반적인 개선이 달성된다. 본 발명의 조성물, 방법 및 용도는 또한 민감성 및(또는) 자극된 피부의 진정 및 안정, 피부 미백 및 유분/피지 분비 조절에 이롭다. 그러므로 본 발명은 광범위한 피부 관리 이점을 유리하게 제공한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "치료하는"은 본 발명의 범위 내에서 상기한정상적인 피부 상태, 예컨대 주름지고, 노화되고(되거나), 광손상 되고(되거나), 자극된 피부를 완화, 지연 및(또는) 예방하는 것과 자극, 주름을 예방 또는 완화하고 피부의 신축성, 피부 탄력, 매끄러움, 유연성 및 탄성을 증진함으로써 피부의 질을 전반적으로 향상시키고 이의 외관 및 결을 개선하는 것을 포함한다. 본 발명에 따른 조성물, 방법 및 용도는 이미 주름지고, 노화되고, 광손상되었으며 자극된 상태의 피부를 치료하거나 정상적 노화/광노화 과정으로 인한 상기한 바와 같은 바람직하지 않은 변화를 예방 또는 완화하기 위해 젊은 피부를 치료하는데 유용할 것이다.

본 발명은 인간 피부에 바르는 국소 조성물 및 피부 상태 및 외관을 개선하기 위한 이의 용도에 관한 것이다.

공액 리놀산(하기에는 CLA로 지칭된다)은 2불포화 장쇄(C18) 지방산이다. CLA는 위치(6,8), (7,9), (8,10), (9,11), (10,12) 또는 (11,13)에서의 여러 형태의 시스 및 트랜스 이중 결합이 가능한 리놀산의 위치 및 기하 이성질체군을 포함한다. 그러므로 24종의 상이한 CLA의 이성질체가 존재한다.

본 발명은 또한 공액 리놀산 부분을 포함하는 유리산의 유도체를 포함한다. 바람직한 유도체는 산의 카르복실기를 치환하여 유도된 것들, 예컨대 에스테르(예를 들면, 트리글리세라이드 에스테르, 모노글리세라이드 에스테르, 디글리세라이드 에스테르, 포스포에스테르), 아미드(예를 들면, 세라미드 유도체), 염(예를 들면, 알칼리금속 및 알칼리토금속 염, 암모늄 염); 및(또는) C18 탄소 사슬의 치환으로 유도된 것들, 예컨대 알파 히드록시 및(또는) 베타 히드록시 유도체를 포함한다.

트리글리세라이드 에스테르 유도체의 경우에 있어서, 글리세롤 주쇄 상의CLA 치환기의 모든 위치 이성질체가 포함된다. 트리글리세라이드는 적어도 하나의 CLA 부분을 함유해야 한다. 예를 들면, 글리세롤 주쇄 상의 3개의 에스테르화 가능한 위치 중, 제1 및 2위치가 CLA로 에스테르화되고, 제3위치에서는 다른 지질에 의해 에스테르화될 수 있고 또는 글리세롤 주쇄는 제1 및 3위치에서 CLA로 에스테르화되고, 제2위치에서는 다른 지질로 에스테르화될 수 있다.

본 발명에 사용되기에 가장 바람직한 CLA의 이성질체는 시스9 트랜스11(c9 t11) 또는 트랜스10 시스12(t10 c12) 이성질체이다. 바람직하게는 조성물에 존재하는 총 CLA 및(또는) CLA 부분의 적어도 1중량％ 이상이 c9, t11 이성질체 및(또는) t10, c12 이성질체의 형태이다. 조성물에 존재하는 총 CLA 및(또는) CLA 부분의 보다 바람직하게는 20중량％ 이상, 가장 바람직하게는 40중량％ 이상이 c9, t11 이성질체 및(또는) t10, c12 이성질체의 형태이다.

특히 바람직한 실시태양에 있어서 공액 리놀산은 c9, t11 또는 t10, c12 이성질체가 풍부한 것이다. 풍부하다는 것은 조성물에 존재하는 총 CLA (및(또는) CLA 부분)의 50중량％ 이상이 시스9, 트랜스11 또는 트랜스 10, 시스 12 이성질체의 형태인 것을 의미한다. 조성물에 존재하는 총 CLA 및(또는) CLA 부분의 바람직하게는 70중량％ 이상, 보다 바람직하게는 80중량％ 이상, 가장 바람직하게는 90중량％ 이상이 c9,t11 이성질체 또는 t10, c12 이성질체의 형태인 것을 의미한다.

본 발명에 따른 CLA 및(또는) CLA 부분을 포함하는 이의 유도체는 공액 리놀산 트리글리세라이드가 풍부한 기름으로서 상업적으로 구입할 수 있는데, 예컨대 Tung 기름 또는 탈수 피마자유(유니케마(Unichema))이다. 혼합 이성질체 제품은시그마(Sigma)로부터 구입할 수 있으며 c9 t11 이성질체가 풍부한 CLA는 마트레야 Inc.(Matreya Inc.)로부터 구입할 수 있다. 또는 본 발명의 바람직한 실시태양에 따른 CLA를 제 WO 97/18320 호에 교시된 방법에 따라서 제조할 수도 있으며 이는 본 명세서에 참고문헌으로 인용된다. 이 제조방법의 바람직한 방법을 하기 실시예 1에 기술한다.

용어 공액 리놀산 또는 CLA가 본 명세서에 사용될 때 CLA 부분을 포함하는 이의 유도체도 또한 포함되는 것으로 이해해야 한다. CLA 부분은 CLA 유도체의 CLA 지방 아실 부분(들)을 지칭한다.

본 발명에 따라서 사용되는 CLA는 국소 조성물 중에 유효량으로 존재한다. 통상적으로 활성 성분의 총량은 조성물의 0.0001중량％ 내지 50중량％의 양으로 존재한다. 최소한의 비용으로 최대한의 효과를 얻기 위하여, 보다 바람직하게는 이 양은 0.01％ 내지 10％, 가장 바람직하게는 0.1％ 내지 5％이다.

본 발명에 따른 조성물은 특한 특이하게 레티노산, 레티놀, 레티닐 에스테르 및(또는) LRAT/ARAT 저해제를 포함한다.

용어 "레티놀"은 레티놀의 하기 이성질체를 포함한다: 모든-트랜스-레티놀, 13-시스-페티놀, 11-시스-레티놀, 9-시스-레티놀, 3,4-디데히드로-레티놀. 바람직한 이성질체는 모든-트랜스-레티놀, 13-시스-레티놀, 3,4-디데히드로-레티놀, 9-시스-레티놀이다. 가장 바람직하게는 모든-트랜스-레티놀인데, 이의 광범위한 상업적 구입 가능성 때문이다.

레티닐 에스테르는 레티놀의 에스테르이다. 용어 "레티놀"은 상기 정의한바와 같다. 본 발명에 사용하기에 적절한 레티닐 에스테르는 레티놀의 C₁-C₃₀에스테르, 바람직하게는 C₂-C₂₀에스테르, 가장 바람직하게는 C₂-C₃및 C₁₆에스테르인데, 이들이 보다 통상적으로 구입 가능하기 때문이다. 본 발명에 사용하기에 바람직한 에스테르는 레티닐 팔미테이트, 레티닐 아세테이트, 레티닐 프로피오네이트 및 레티닐 리놀레이트로부터 선택되는데, 이들이 상업적으로 구입하기가 가장 용이하며 가격이 가장 저렴하기 때문이다. 효능 때문에 레티닐 에스테르가 또한 바람직하다.

LRAT/ARAT 저해제

레티놀은 인체에서 천연으로 생산되는 내인성 화합물이며 정상적 상피 세포 분화에 필수적이다. 레티놀의 에스테르는 생체 내에서 가수분해되어 레티놀이 생산된다. 레티닐 에스테르 및 레티놀은 피부에서 하기 메커니즘에 따라서 레티노산으로 대사적으로 전환된다.

레티닐 에스테르 ⇔레티놀

↓

레티노산

그러나, 내인성으로 이용되는 레티놀의 대부분은 표피세포(각질세포)에 저장되는 비활성 지방산 에스테르로 빠르게 전환된다.

레티놀의 비활성 레티닐 에스테르로의 에스테르화는 세포 중에서 아실 CoA 레티놀 트랜스퍼라제(ARAT) 효소에 의해 촉매 반응되는 아실 CoA로부터의 지방 아실기의 전달에 의해, 또는 레시틴 레티놀 아실 트랜스퍼라제(LRAT) 효소에 의해 촉매 반응되는 포스파티딜 콜린으로부터의 아실기 전달에 의해 수행된다. 이들 에스테르화 반응은 각질세포에서 매우 효과적이어서--대부분(95％)의 세포 레티노이드는 레티닐 지방 에스테르의 형태이다.

본 명세서에 있어서 용어 LRAT/ARAT 저해제는 이들 에스테르화 반응을 저해하여 레티노산으로의 전환에 사용 가능한 레티놀의 양을 증가시킴으로써 레티놀의 작용을 강화하는 작용제를 의미한다.

본 발명 범위내의 LRAT/ARAT 저해제는 100μM농도에서 하기 실시예 3의 시험관내 마이크로솜 분석에서 측정시 LRAT 또는 ARAT 촉매 반응 레티놀 에스테르화를 20％ 이상 저해하는 화합물로서 확인된다. 본 발명의 바람직한 실시태양에 있어서, LRAT/ARAT 저해제는 100μM농도에서 LRAT 또는 ARAT 촉매 반응 레티놀 에스테르화를 40％ 이상, 가장 바람직하게는 50％ 이상 저해하는 화합물이다. 화합물이 그러한 LRAT/ARAT 저해제인지 아닌지를 결정하기 위한 시험관내 마이크로솜 분석은 하기 실시예 3에 기술되어 있다.

그러므로 만약 화합물이 이러한 시험관내 마이크로솜 분석을 통과한다면, 즉 이것이 시험관내 마이크로솜 분석에 의해 측정시 LRAT 또는 ARAT 촉매 반응 레티놀 에스테르화를 충분히 저해한다면, 이 화합물은 본 명세서에 구체적으로 언급되어 있지 않더라도 본 발명에 포함된다.

상기 LRAT/ARAT의 예는 지방산 아미드, 히드록시 지방산 아미드, 세라미드, 멜린아미드, 이미다졸리디논, 및 환형 지방족 불포화 탄화수소, 테르펜, 및 지방히드록시에틸 이미다졸린 계면활성제를 포함한다.

환형 지방족 불포화 화합물

적절한 환형 지방족 불포화 화합물은 상기 시험관내 마이크로솜 분석 시험에 따라서 선택된다.

바람직한 환형 지방족 불포화 화합물은 환형 지방족 불포화 알데히드, 케톤, 알콜 및 에스테르, 예컨대 알파 다마스콘, 베타 다마스콘, 델타 다마스콘, 이소다마스콘, 다마스케논, 알파 이오논, 베타 이오논, 알릴 알파 이오논, 이소부틸 이오논, 알파 메틸 이오논, 감마 메틸 이오논, 브라만올, 산단올, 알파 테르피네올, 리랄, 에틸 사프라네이트, 및 이의 혼합물로부터 선택된다. 바람직하게는, 최소 비용으로 성능을 최대화하기 위하여 환형 지방족 불포화 화합물은 다마스콘 및 이오논으로 구성된 군으로부터 선택된다.

가장 바람직하게는, 환형 지방족 불포화 화합물은 α-다마스콘 및(또는) α-이오논이다.

디테르펜

적절한 디테르펜은 상기 시험관내 마이크로솜 분석 시험에 따라서 선택된다. 바람직한 디테르펜 화합물은 제라닐 제라니올인데, 이는 레티놀 에스테르화의 강력한 저해제이다.

지방 히드록시에틸 이미다졸린 계면활성제

본 발명에 포함되는 지방 히드록시에틸 이미다졸린 계면활성제는 상기 시험관내 마이크로솜 분석 시험을 통과한다. 바람직한 지방 히드록시에틸 이미다졸린은 하기 화학식을 갖는다:

상기 화학식에서, R은 지방족 포화 또는 불포화된 직쇄 또는 분지쇄의 탄소수 8 내지 20의 탄화수소 사슬이다.

바람직하게는, 지방 히드록시에틸 이미다졸린 중의 R은 탄소수 8 내지 18, 보다 바람직하게는 탄소수 11 내지 18을 갖는다. 가장 바람직하게 지방 히드록시에틸 이미다졸린은, 이의 상업적 구입가능성 및 효능으로 인하여, 올레일 히드록시에틸 이미다졸린이다.

지방산 아미드

바람직하게는, 지방산 아미드는 적어도 탄소수 6을 갖는다. 적절한 지방산은 포화 또는 불포화된 직쇄 또는 분지쇄의 지방산을 포함한다. 적절한 지방산은 바람직하게는 탄소수 8 내지 24, 바람직하게는 탄소수 12 내지 20, 가장 바람직하게는 탄소수 12 내지 18인데, 왜냐하면 지방산 아미드의 사슬 길이가 길수록 피부 조절에 더 이롭기 때문이다. 본 발명의 가장 바람직한 실시태양에 있어서는, 필수 지방산이 피부에 대한 영양분을 제공하기 때문에 필수 지방산의 아미드가 사용된다. 필수 지방산의 예는 리놀산, 리놀렌산, 아라키돈산, 감마-리놀렌산, 호모-감마-리놀렌산 및 이의 혼합물을 포함하는데, 이로 제한되는 것은 아니다. 리놀산이 가장 바람직한데, 이것은 또한 세라미드로의 전구물질이기 때문이다.

본 발명에 포함되는 바람직한 아미드는, 특히 필수 지방산의 모노- 및 디-알칸올 아미드이다. 알칸올 아미드가 알킬 아미드보다 더 구입하기가 용이하다.

가장 바람직한 지방산 아미드는 리놀산, 팔미트산, 및 코코넛 기름의 모노- 및 디에탄올아미드 및 포스파티딜에탄올아미드; 디에틸 코카미드, 리놀레아미딜 디메틸아민, 디메틸 리놀레아미드, 디에틸 리놀레아미드, 디메틸 팔미티드, 미리스토일 사크로신으로부터 선택된다.

히드록시 지방산 아미드

히드록시 지방산 아미드의 구조는 다음과 같다:

상기 화학식에서, R₁, R₂및 R₄각각은 독립적으로 수소 및 히드록실화될 수 있고 탄소수 1 내지 20인 지방족 포화 또는 불포화된 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 사슬로부터 선택되고;

R₃은 -(CH₂)_n이고, 여기에서 n은 0 내지 18의 정수이다.

바람직하게는, R₁, R₂및 R₄각각은 독립적으로 탄수소 2 내지 20이고, 보다 바람직하게는 탄소수 2 내지 15이고, 가장 바람직하게는 탄소수 3 내지 13이다.

바람직하게는 히드록시산 아미드는 α- 또는 β-히드록시산의 아미드인데, 즉 n이 0 또는 1이다.

본 발명의 조성물에 포함되는 가장 바람직한 히드록시 지방산 아미드는: 락트아미드모노에탄올아미드, C₁₃-β-히드록시산 아미드(2-히드록시-C₁₃-아미드), N-히드록시에틸-2-히드록시-C₁₆아미드, 12-히드록시-N-(2-히드록시에틸)옥타데칸아미드, 및 피마자유의 모노에탄올아미드이다.

다환 트리테르펜 카르복실산(PTCA)

적절한 LRAT/ARAT 저해제의 또 다른 예는 시험관내 마이크로솜 분석을 통과한 PCTA이다.

바람직하게는 PTCA는 5환 트리테르펜 모노카르복실산이다.

가장 바람직하게는, PTCA는 우르솔산, 올레놀산, 글리세르레틴산 및 글리시르리즈산으로 구성된 군으로부터 선택된다.

PTCA는 알드리치(Aldrich) 및 시그마로부터 상업적으로 구입 가능하다. PTCA를 함유하는 식물 추출물이 본 발명에 사용하기에 적절한데, 예를 들면 로즈마리너스 오피시날리스(Rosmarinus offcinalis)(로즈마리), 디오스피로스 spp.(Diospyrosspp.)(감나무), 포르시티아 서스펜사(Forsythia suspensa)(개나리속 식물), 라밴둘라 안거스티폴리아(Lavandula angustifolia)(라벤다), 푸르넬라 불가리스(Prunella vulgaris)(꿀풀), 파에오니아 락티폴리아(Paeonia lactifolia), 글리시르리자 글라브라(Glycyrrhiza glabra)(감초)이다.

조성물의 pH에 따라서, PTCA는 조성물 중에 염, 예를 들면 알칼리 또는 알칼리 토금속염으로서 존재할 수 있다는 것이 이해되어야 한다.

세라미드

세라미드는 예를 들면 천연 발생 세라미드, 피토 세라미드 단쇄 세라미드,슈도세라미드 또는 네오세라미드일 수 있다. 이들 분자의 일반 구조는 제 EP A 711558 호에 기술되어 있으며, 이는 본 명세서에 참고문헌으로 인용된다. 아세틸 스핀고신이 이의 효능으로 인하여 가장 바람직한 세라미드 유도체이다.

레티노산, 레티놀, 레티닐 에스테르 및(또는) LRAT/ARAT 저해제는 본 발명의 조성물 중에 조성물의 0.0001중량％ 내지 50중량％의 양으로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.01％ 내지 10％의 양으로, 가장 바람직하게는 0.1％ 내지 5％의 양으로 포함된다.

피부학적으로 허용 가능한 부형제

본 발명에 따라서 사용되는 조성물은 또한 활성 성분에 대한 희석제, 분산제 또는 담체로서 작용하는 피부학적으로/미용학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다. 부형제는 피부 관리 제품에 통상적으로 사용되는 물질, 예컨대 물, 액상 또는 고상 연화제, 실리콘 기름, 유화제, 용매, 습윤제, 증점제, 분말, 추진제 등을 포함할 수 있다.

부형제는 통상적으로 조성물 중량의 5％ 내지 99.9％, 바람직하게는 25％ 내지 80％를 형성할 것이며, 다른 미용 보조제를 사용하지 않는다면, 조성물의 나머지 부분을 구성할 수 있다.

임의의 피부에 이로운 물질 및 미용 보조제

활성 성분에 추가하여, 기타 특정한 피부에 이로운 활성 물질, 예컨대 햇빛차단제, 기타 피부 미백제, 피부 일광욕제도 또한 포함될 수 있다. 부형제는 또한 추가로 보조제, 예컨대 향료, 유백제, 보존제, 착색제 및 완충제를 포함할 수 있다.

제품 제조, 형태, 용도 및 포장

본 발명의 방법에 사용되는 국소 조성물을 제조하기 위하여, 피부 관리 제품을 제조하는 통상적인 방법이 사용될 수 있다. 활성 성분은 일반적으로 피부학적으로/미용학적으로 허용 가능한 담체 중에 통상적인 방법에 의해 혼입된다. 활성 성분은 먼저 조성물 중에 혼입되는 물 또는 기타 용매 또는 액체의 일부에 적절하게 용해되거나 분산될 수 있다. 바람직한 조성물은 수중유 또는 유중수 또는 수중유중수 에멀전이다.

조성물은 통상적인 피부 관리 제품의 형태, 예컨대 크림, 겔 또는 로션, 캡슐 등 일 수 있다. 조성물은 또한 소위 세척 제품의 형태, 예를 들면 세정 도중 피부로의 부착을 촉진하는 활성 성분 전달 시스템을 포함할 수 있는 목욕 또는 샤워 겔의 형태일 수도 있다. 가장 바람직하게는 제품은 리브-온(leave-on) 제품인데, 피부에 바른 후의 세정 단계 없이 피부에 사용되는 제품이다. 조성물은 임의의 적절한 방식으로, 예컨대 작은 병, 병, 튜브, 롤-볼(roll-ball) 등으로 통상적인 방법에 의해 포장될 수 있다. 본 발명의 조성물은 제 1 조성물은 공액 리놀산을 함유하고 제 2 조성물은 레티노산, 레티놀, 레티닐 에스테르/LRAT/ARAT 저해제 화합물을 함유하며, 피부에 사용될 때는 동시에 또는 연속적으로 사용되는 두개의 별개의 조성물의 키트로서 포장될 수도 있다.

본 발명에 따른 조성물은 또한 캡슐, 정제 등과 같은 경구 섭취에 적절한 형태로 제형될 수 있다.

본 발명의 방법은 치료를 필요로 하는 피부에 매일 1회 이상 수행될 것이다. 피부 외관의 개선은 피부 상태, 본 발명의 방법에 사용되는 활성 성분의 농도, 사용되는 조성물의 양 및 사용되는 횟수에 따라서, 통상적으로 3 내지 6개월 후에 가시적으로 나타날 것이다. 일반적으로, 소량, 예를 들면 0.1 내지 5ml의 조성물을 적절한 용기 또는 도포기로부터 피부에 도포하고 손 또는 손가락 또는 적절한 기구를 사용하여 피부에 펴 바르고(바르거나) 문지른다. 조성물이 리브-온 또는 세척 제품으로 제형되느냐에 따라서 세정 단계가 임의로 이후에 수행될 것이다.

본 발명을 보다 용이하게 이해하기 위하여, 하기 실시예가 주어졌으며, 이는 단지 설명을 위한 것이다.

실시예 1

본 실시예는 c9 t11 이성질체 및 t10 c12 이성질체를 포함하는 공액 리놀산의 합성을 설명한다.

CLA의 혼합 이성질체의 제조

'어낼러 시약'(Analar Reagent, AR) 수산화나트륨(0.6kg)를 6kg의 제약학적 등급의 프로필렌 글리콜 중에 혼합하여 용해시키고 80-85℃로 가열했다. 샘플을 냉각하고 2kg의 잇꽃 기름을 첨가했다. 표준 실험 규모 장치를 사용하여 혼합물을 고속 교반시켜면서 170℃에서 3시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 약 95℃로 냉각시키고, 교반기를 중간 속도로 감속하고, 혼합물을 탈염수(8리터) 중에 용해된 1.280리터의 35.5％ 염산을 사용하여 온도를 약 90℃로 유지하면서 중화했다. 반응 혼합물을 침강시키고 수성상을 방출했다. 임의의 비누상 물질을 버리면서, 유성 상을 1리터의 5％ AR 염 용액으로 2회 및 1리터의 탈염수로 2회 90℃에서 세척했다. CLA가 풍부한 기름을 100℃에서 진공하에 건조시킨 다음 약 50℃에서 배출하고 와트만(Whatman) 여과기 및 셀라이트-하이플로-여과기 보조제의 박층을 포함하는 부크너(Buchner) 시스템을 통하여 여과했다. 혼합 이성질체 CLA 기름을 질소하 -25℃에서 필요할 때까지 저장했다. 이 방법에 의해 생산된 기름의 조성을 하기 표 1에 기재했다:

혼합 CLA 지방산의 조성(wt％):	총 지방산 지질에 대한 상대 백분율
c9, t11	34.1(총 CLA의 47％)
t10, c12	34.1(총 CLA의 47％)
c9, c11 & c10, c12	2.3
t9, t11t & t10, 12t	0.7
기타 CLA	1.4
총 CLA	72.6
16:0	7.0
16:1	0.8
18:0	2.5
18:1	13.3
18:2(비-CLA)	3.3
기타 지방산	0.5

2. c9 t11 이성질체가 풍부한 CLA의 제조

(I) 라우릴 에스테르의 제조:

잇꽃(2.0kg)으로부터 제조된 CLA를 2배 몰 당량의 라우릴 알콜(1-도데칸올; 98％, 예를 들면 알드리치 케미칼즈(Aldrich Chemicals))에 5.96kg의 탈염수와 함께 첨가했다. 온도를 25℃로 조정하고 소량의 물과 미리 혼합된 1％(w/w)의 지오트리컴 칸디덤(Geotrichum Candidum)(예를 들면, 아마노 파마슈티칼즈(AmanoPharmaceuticals), 일본)을 첨가하고, 강하게 혼합했다. 반응을 44시간만에 정지시켰다. 용기를 80-90℃로 가열하고, 수성 층을 배출하고 기름을 탈염수로 세척하고 100℃ 진공하에서 30분간 건조했다. 기름을 50℃로 냉각하고 와트만 여과기 및 셀라이트-하이플로-여과기 보조제의 박층을 포함하는 부크너 시스템을 통해 여과시켰다.

(II) c9, t11이 풍부한 CLA 에스테르의 제조:

130℃에서 분당 25-35ml로 분자 증류하여 잔류 라우릴 알콜을 제거했다. 158℃에서 분당 25-35ml의 유속으로 증발시켜서 잔류물을 라우릴 에스테르(c9, t11이 풍부한 CLA) 및 유리산(t10, c12이 풍부한 CLA)으로 대강 분리했다. 171℃에서 30-40ml/분의 유속으로 추가 증류시켜서 라우릴 에스테르 잔류물 중의 임의의 잔류 유리산을 줄였다. 2790g의 라우릴 에스테르 잔류물을 90℃에서 330ml의 4M AR 수산화나트륨을 사용하여 중화한 후에, 수성 상으로부터 기름을 분리하고, 뜨거운 탈염수 중에서 기름을 3회 세척하고, 또한 0.1M 알칼리 세척하고, 뜨거운 물로 2회 세척했다. 농축 라우릴 에스테르 기름 샘플을 전술한 바와 같이 건조시켰다.

(III) c9,t11이 풍부한 CLA 라우릴 에스테르의 비누화

c9, t11이 풍부한 CLA의 라우릴 에스테르를 AR 수산화나트륨/96％ 식품 등급 에탄올을 사용하여 비누화하고 AR이 풍부한 염산을 사용하여 재-산성화했다. CLA가 풍부한 유리 지방산을 함유하는 반응 혼합물을 100℃에서 건조하고 전술한 바와 같이 약 50℃에서 여과했다. 라우릴 알콜을 132℃에서 분당 25-30ml로 증발시켰다. 임의의 잔류 라우릴 알콜을 제거하기 위하여, SP392 무코 미에헤이(Mucor miehei) 리파제(5％, batch lux 0110, 예를 들면 노보 노르디스크(Novo Nordisk))를 사용하여 유리 알콜을 반응 혼합물 중에 존재하는 지방산으로 에스테르화했다. 진공하 155℃에서 분자 증류하여 분당 15-20ml로 지방산을 함유하는 c9 t11이 풍부한 CLA를 라우릴 에스테르로부터 분리했다. 상기 방법에 의해 생산된 c9 t11이 풍부한 CLA의 조성을 하기 표 2에 기재했다:

c9, t11이 풍부한 CLA 지방산의 전형적인 제조의 조성(wt％):	총 지방산 지질에 대한 상대 백분율
c9, t11	66.1(총 CLA의 93％)
t10, c12	4.1
c9, c11 & c10, c12	0.3
t9, t11t & t10, 12t	0.4
기타 CLA	0.2
총 CLA	71.1
16:0	1.6
16:1	-
18:0	0.4
18:1	22.3
18:2(비-CLA)	4.5
기타 지방산	0.1

(II) t10, c12이 풍부한 CLA의 분리

잔류 라우릴 알콜을 분자 증류에 의해 130℃에서 분당 25-35ml로 제거했다. 158℃에서 분당 25-35ml의 유속으로 증발시켜 잔류물을 라우릴 에스테르(c9, t11이 풍부한 CLA) 및 유리산(t10,c12이 풍부한 CLA)으로 대강 분리했다.

t10, c12이 풍부한 CLA의 분리

상기 단계(II)로부터의 CLA 유리산을 다시 160-165℃ 및 20-30ml/분에서 증류하여 에스테르 함량을 줄였다. 131℃ 및 25-30ml/분 유속에서 증류하여 잔류 라우릴 알콜을 더 줄였다. 임의의 잔류 라우릴 알콜을 제거하기 위하여, 유리 알콜을 SP392 무코 미에헤이 리파제(5％, batch lux 0110, 예를 들면 노보 노르디스크)를 사용하여, 반응 혼합물 중에 존재하는 지방산으로 에스테르화했다. 155℃ 및 진공에서 분당 15-20ml으로 분자 증발시켜서 지방산을 함유하는 t10,c12이 풍부한 CLA를 라우릴 에스테르로부터 분리했다. 이 방법에 의해 생산된 t10, c12이 풍부한 CLA의 조성을 하기 표 3에 기재했다.

t10, c12이 풍부한 CLA 지방산의 통상적인 제제의 조성 (wt％):	B
c9, t11	8.3
t10, c12	53.9(총 CLA의 80.5％)
c9, c11 & c10, c12	2.9
t9, t11t & t10, 12t	1.1
기타 CLA	0.7
총 CLA	66.9
16:0	13.6
16:1	-
18:0	4.6
18:1	10.3
18:2(비-CLA)	3.1
기타 지방산	1.5

실시예 2-t10, c12 CLA 트리글리세라이드의 제조

실시예 1에 따라서 제조된 t10,c12이 풍부한 CLA(10g)를 1.01g(10.1％)의 글리세롤(Pricerine 9083 글리세린 CP, 엘리스 앤드 에베랄즈(Ellis and Everards))과 혼합하고 0.5g(대략 5％)의 SP392 무코 미에헤이 비-특이성 리파제(Mucor Meihei, 예를 들면 노보 노르디스크 Batch Lux 0110)를 첨가했다. 혼합 물질을 회전 증발기 중에서 60℃ 진공하에서 질소를 약하게 유출시키면서 교반했다.

96시간 후에, CLA 트리글리세라이드 유성상을 수거하는 부크너 여과기 상에서 셀라이트 수퍼-셀 여과 보조제의 박층을 통하여 혼합물을 여과함으로써 반응을 정지시켰으며, 이의 조성을 하기 표 4에 기재했다.

트리글리세라이드의 지방산 조성	총 지방산 지질에 대한 상대 백분율
c9, t11	8.3
t10, c12	54.8(총 CLA의 81.7％)
c9, c11 & c10, c12	2.7
t9, t11t & t10, 12t	1.3
기타 CLA	0
총 CLA	67.1
16:0	13.5
16:1	0.1
18:0	4.9
18:1	10.3
18:2(비-CLA)	3.4
기타 지방산	0.7

실시예 3

본 실시예는 레티놀 에스테르화의 시험관내 마이크로솜 분석을 사용하여 본 발명 영역내의 LRAT/ARAT 저해제를 확인하는 방법을 설명한다.

레티놀의 시험관내 마이크로솜 에스테르화 방법

마이크로솜은 제이.씨. 사리(J.C. Saari) 및 디.엘. 브레드버그(D.L. Bredberg)의 문헌["CoA and Non-CoA Dependent Retinol Esterification in Retinal Pigment Epithelium" J. Biol. Chem. 23, 8084-90(1988)]에 기술된 바와 같이 얻었다.

0.1M 인산나트륨 pH 7 완충제, 5mM 디티오트레이톨, 2mg/ml 소 혈청 알부민, 40마이크로몰 팔미토일 CoA, 40마이크로몰 디라우로일 포스파티딜 콜린, 10마이크로몰 레티놀 및 시험 화합물 또는 용매 블랭크를 함유하는 용액을 소 망막 색소 상피 세포로 분리한 마이크로솜 분획과 함께 37℃에서 1시간 동안 배양했다. 배양 후에, 반응산물을 동 부피의 에탄올을 첨가하여 켄칭시키고, 형성된 레티닐 에스테르(ARAT 촉매 반응으로부터는 레티닐 팔미테이트, 및 LRAT 촉매 반응으로부터는 레티닐 라우레이트)를 헥산으로 추출했다. 헥산 층을 제거하고, 질소하 증발시키고, 잔류물을 테트라히드로푸란 이동상 중에 80％ 메탄올을 사용하는 3.9x300mm C18 역상 컬럼 상의 HPLC 및 형광 검출(325nm 여기, 480nm 방출)에 의해 분석하여 레티닐 에스테르를 정량했다. 용매 블랭크 존재 하에 형성된 에스테르의 양을 100％로 하고, 이를 사용하여 시험 화합물의 에스테르 형성 저해 백분율을 계산했다. 대조용으로서, 마이크로솜의 부분표본을 5분간 비등시켜서 불활성화했으며, 이는 에스테르 형성의 적어도 95％ 저해를 야기했다.

얻은 결과를 표 5에 요약했다.

화합물	농도(μM)	％ 저해 ARAT	％ 저해 LRAT
아세틸 스핀고신아세틸 스핀고신리놀레아미드-DEA(LODEA)리놀레아미드-DEA리놀레아미드-MEA(LOMEA)리놀레아미드-MEA올레일 히드록시에틸 이미다졸린올레일 히드록시에틸 이미다졸린카프릴 히드록시에틸 이미다졸린디아졸리디닐 우레아티아민카페인아데닌페닐 벤즈이미다졸 술폰산우라실트립토판코코글루타메이트디메틸 코카민 옥사이드이나트륨 코캄포디아세테이트	10010100101001010010100100100100100100100100100100100	621943123509014-0000000000	50105111350952880000000000

아세틸 스핀고신, LODEA, LOMEA 및 히드록시에틸 이미다졸린 계면활성제는 강력한 레티놀 에스테르화 저해제인 반면에, 기타 계면활성제 및 기타 헤테로시클릭 화합물은 근본적으로 비활성임을 알 수 있다. 카프릴릭 히드록시에틸 이미다졸린(R=CH₃(CH₂)₆)은 LRAT를 충분하게 저해하지 못했다.

시험관내 마이크로솜 분석 시험을 표 6A 및 6B에 나타낸 화합물에 대해 수행했다.

표 6A의 화합물은 100μM 농도에서 시험했다. 표 6B의 화합물을 10μM 농도에서 시험했다.

화합물	％ 저해, ARAT	％ 저해, LRAT
알파 다마스콘	83	98
베타 다마스콘	84	92
델타 다마스콘	87	95
이소다마스콘	80	92
다마스케논	70	79
알파 이오논	45	49
베타 이오논	22	24
알릴 알파 이오논	22	36
이소부틸 이오논	8	45
알파 메틸 이오논	67	77
감마 메틸 이오논	21	38
브라만올	70	75
산단올	15	43
알파 테르피네올	26	25
팀베롤	34	33
리랄	76	71
토날리드	50	33
에틸 사프라네이트	51	49
트라세올리드	41	21
산달론	23	12

화합물	％ 저해, ARAT	％ 저해, LRAT
알파 다마스콘	67	87
베타 다마스콘	45	52
델타 다마스콘	58	64
다마스케논	23	29
알릴 알파 이오논	16	17

표 6A 및 6B의 결과로부터 특정 환형 지방족 불포화 화합물, 특히 이오논 및 다마스콘이 LRAT 및 ARAT 촉매 반응 레티놀 에스테르화의 강력한 저해제인 것을 알 수 있다. 이들은 레티놀 중에 존재하는 트리메틸 시클로헥센 환 시스템을 포함한다.

시험관내 마이크로솜 분석 시험을 추가의 환형 지방족 불포화 화합물로 수행했다. 얻은 결과를 표 7에 요약했다.

표 7의 화합물은 100μM 농도에서 시험했다.

화합물	％ 저해, ARAT	％ 저해, LRAT
디히드로 알파 이오논	13	18
알파 이오놀	0	0
베타 이오놀	0	0
신남알데히드	0	0
바닐린	0	0
유칼립톨	0	0
멘톨	0	0
티몰	0	0
카르본	0	0
캄포르	0	0
멘톤	0	0
펜칠 알콜	12	4
이소시클로제라니올	18	16
디메틸 이오논	0	9
델타 메틸 이오논	0	10

표 7의 결과로부터 모든 환형 지방족 불포화 화합물이 LRAT 및 ARAT 촉매 반응 레티올 에스테르화를 저해하지는 못하고 또는 충분하게 저해하지 못하였음을 알 수 있다.

시험관내 마이크로솜 분석 시험을 디테르펜 화합물, 제라닐 제라니올 또는 파르네솔로 수행했다.

얻은 결과를 표 8에 요약했다.

화합물	농도(μM)	％ 저해, ARAT	％ 저해, LRAT
제라닐 제라니올¹	100	81	77
제라닐 제라니올	10	38	16
파르네솔²	100	43	43
파르네솔	10	20	10
1 TCI 아메리카(TCI America, 오레곤주 포틀랜드)로부터 구입할 수 있다. 또한 시그마 및CTC 오르가닉스(CTC Organics, 조지아주 아틀란타)로부터도 구입할 수 있다.
2 지바우단 Co.(Givaudan Co.), 베도우키안 Co.(Bedoukian Co.), 또는 드라고코Co.(Dragoco Co.)로부터 구입할 수 있다.

표 8의 결과로부터 제라닐 제라니올 및 파르네솔 모두가 레티놀 에스테르화를 저해함을 알 수 있다. 제라닐 제라니올은 파르네솔보다 상당하게 더 강력한 에스테르화 저해제이다.

실시예 4

비교 목적을 위한 레티노산 국소 치료 후의 생체내 피부의 프로콜라겐-I 및 데코린 상승의 확인

주요한 피부 기질 단백질인 콜라겐은 피부에 인장 강도를 부여하는 것으로 알려져 있다. 데코린은 피부의 세포외 기질 중의 콜라겐의 조절되고 정확한 침착에 중요한 것으로 공지되어 있는 프로테오글리칸이다. 노화 및(또는) 광손상 피부에서는 피부 중 콜라겐 및 데코린의 수치가 현저하게 감소되는 것도 또한 당업계에 공지되어 있다. 다수의 연구가 피부 중 콜라겐 유형 I의 수치가 연령이 증가함에 따라 그리고(또는) 광손상이 증가함에 따라 감소되는 것을 증명했다(예를 들면, 라브커, 알.(Lavker, R.) 등의 문헌[J. Inv. Derm., (1979), 73, 79-66]; 그리피쓰(Griffiths) 등의 문헌[N. Eng. J. med. (1993) 329, 530-535]). 데코린의 경우, mRNA의 발현 및 프로테오글리칸의 발현이 시험관내 광손상 피부에서 상당히 감소된다는 것이 증명되었다(번스타인(Bernstein) 등의 문헌[Lab. Invest. (1995) 72, 662-669]). 따라서 이들 피부 단백질 수치의 저하는 주름 및 이완을 야기하는 피부 인장 강도의 감소와 관련된다.

레티노산이 강력한 노화 방지 활성을 가지며 광손상 피부의 피부 회복을 유도한다는 것이 당업계에 공지되어 있다. 피부를 레티노산으로 국소 치료한 후의주름 제거 및 피부 회복은 피부 중 새로운 콜라겐 침착 및 합성을 통해 이루어진다는 것이 증명되었다(예를 들면, 그리피쓰 등의 문헌[N. Eng. J. med. (1993), 530-535]). 레티노산을 사용하여 피부 중 콜라겐 수치를 상승시킴에 의한 피부 기질의 강화는 노화 방지/피부 회복 이점을 제공하는 것으로 널리 알려져있다. 프로콜라겐 I은 콜라겐의 전구물질이다. 시험화합물의 사용에 반응한 프로콜라겐 I의 생산 증가는 콜라겐 수치가 증가되었음을 나타내는 표지이다.

각각의 팔뚝 외측에 동일하거나 거의 동일한 정도의 약한 내지 보통의 광손상이 있는 2군의 여성을 모집했다. 이들에게 보습 기제(Reinova(등록상표)) 중의 0.05％ 레티노산 및 위약 대조용으로서, 활성 성분을 함유하지 않는 유사한 감촉 특성을 갖는 동일한 색의 보습 크림(Dermacare(등록상표) 로션)을 제공했다. 2군의 각각의 참가자에게 한쪽 팔뚝 외측에는 Retinova(등록상표)를 바르고 다른 한쪽 팔뚝 외측에는 위약(Dermacare(등록상표))을 발랐다. 1군은 제품을 팔뚝 외측에 매일 14주간 바르고, 2군은 제품을 팔뚝 외측에 매일 28주간 발랐다. 연구의 마지막에 전체 두께 4mm 펀치 생검 샘플을 각 팔뚝의 처리 영역으로부터 취했다. 참가자로부터 취한 생검 조직의 면역조직화학적 분석을 수행하여 피부 세포외 기질 성분, 데코린 및 프로콜라겐-I의 발현에 대한 레티노산 치료 효과를 위약 처리 팔뚝과 비교하여 확인했다. 하기 방법에 따랐다:

물질

왁스 절편용의 항체 희석 완충제는 Tris 완충 생리식염수(TBS), 3％ 소 혈청 알부민(BSA), 0.05％ Triton X-100 및 0.05％ 나트륨 아지드로 구성되었다. 프로콜라겐-I(아미노 말단)에 대한 1차 항체(cat# MAB 1912, 쥐 IgGl)는 케미콘 인터내셔날 Inc.(Chemicon International Inc.)로부터 구입했으며, 왁스 절편을 트립신으로 전처리(0.5mg/ml, 25분, 37℃)한 후에 왁스 절편에 1:800의 희석 비율로 4℃ 에서 하룻밤 동안 사용했다. 데코린에 대한 1차 항체(토끼 다클론성)를 바이오제네시스(Biogenesis)로부터 구입했으며 왁스 절편에 1:800의 희석 비율로, 4℃에서 하룻밤동안 사용했다. DAKO로부터 구입한 항-쥐 비오티닐화 2차 항체(cat# E0468, 토끼 다클론성)를 1:400의 희석 비율로 왁스 절편에 사용했다. 아머샴(Amersham)으로부터 구입한 항-토끼 비오티닐화 2차 항체(cat# RPN 1004, 당나귀 다클론성)를 왁스 절편에 1:400의 희석 비율로 사용했다. 지메드(Zymed)로부터 구입한 스트렙트아비딘 접합 알칼리성 포스파타제(cat# 43-4322)를 1:2500의 농도로 사용했다. 파스트 레드 색소생산균을 DAKO로부터 구입했다(#cat K597). 시그마로부터 구입한 Gills #3 헤마톡실린 핵 대비염색물(cat# GHS-3)을 여과하고 희석하지 않고 사용했다. 트립신(cat# T-7186)은 시그마로부터 구입했으며 슬라이드에는 DAKO의 Gycergel(cat# C563)을 놓았다.

방법

생검 조직의 왁스 절편을 실란 코팅 슬라이드 상에 놓고 55℃에서 18시간 동안 구웠다. 슬라이드를 크실렌 및 알콜에 의해 왁스 제거하고 물에 넣은 다음 TBS로 이동시켰다. DAKO(등록상표) 펜을 이용하여 절편을 둥글게 만들었다. 절편을 필요하다면, 항체에 따라 트립신을 이용하여 항원 회복 처리를 했다. 항원 회복이 필요할 때는, 슬라이드를 35℃에서 25분간 0.5mg/ml의 트립신(시그마 cat # T-7186)과 함께 배양했다. 이어서 프로테아제를 TBS로 세정했다(2x2 분). 필요하다면 항원 회복 후에, 또는 절편을 세정한 후에 즉시, 비 특이성 항체 결합을 차단 용액으로서 TBS/0.5％ BSA/0.1％ 나트륨 아지드 중의 5％ 2차 항체 숙주 혈청 용액을 사용하여, 실온의 습윤실 중에서 적어도 20분간 차단했다. 과잉의 차단 용액을 버리되, 절편을 건조 상태로 되게 하지는 않았다. 절편을 1차 항체(상기한 바와 같이 적절하게 희석됨)와 함께 습윤실 중 4℃에서 하룻밤 동안 배양했다. 이어서 절편으로부터 항체를 버리되, 건조 상태로 되게 하지는 않았다. 슬라이드를 TBS로 세척-1분 세정 후 3회의 5분 세척-하여 비결합 1차 항체를 제거한 다음 적절한 2차 항체(상기한 바와 같이 적절하게 희석됨)와 함께 습윤실 중 실온에서 1시간 동안 배양했다. 이어서 슬라이드로부터 항체 용액을 제거하되 건조 상태로 되게 하지는 않았다. 슬라이드를 TBS 중에서 세척하는데, 1분 세정 후에 4x5분 세척하여, 비결합 2차 항체를 제거했다. 비오티닐화 2차 항체를 위하여, 절편을 이어서 스트렙트아비딘 접합체와 함께 37℃에서 45분간 배양한 다음 TBS 중에서 세척하여 비결합 스트렙트아비딘 접합체를 제거했다. 색소원을 첨가하고 과도 염색을 피하기 위하여 관찰하면서 현색하였다. 절편을 대비 염색하고 올려 놓았다.

면역 조직화학적으로 염색된 절편을 광학 현미경을 사용하여 가시적으로 분석함으로써 레티노산(Retinova(등록상표)) 및 위약(Dermacare(등록상표)) 처리 부위 간의 프로콜라겐-I 및 데코린 발현의 차이를 측정했다.

이 분석으로 레티노산(Retoniva(등록상표))의 국소 적용 후 광손상 피부 중 프로콜라겐-I 및 데코린 모두의 현저한 상승을 확인하였으며, 하기 표 9에 기재하였다.

생체내 피부 중 프로콜라겐 I 및 데코린 발현에 대한 레티노산 치료의 효과
	참가자 총 수	프로콜라겐-I의 발현이현저히 증가된 참가자 수	데코린의 발현이 현저히 증가된 참가자 수
14주 후의 1군	16	9	10
28주 후의 2군	15	10	15

그러므로 세포외 기질 성분인 프로콜라겐 I 및 데코린은 레티노산 유도 피부 회복의 명백하게 확인 가능한 표지였다.

실시예 5

인간 피부 섬유아세포 중 프로콜라겐-I 및 데코린 합성의 측정 방법

피부 섬유아세포 조정 배지의 제조

2대째 배양(P2)한 1차 인간 포피 섬유아세포를 12-웰 플레이트에 10000개 세포/cm²로 접종하고 10％ 태아 소 혈청으로 보충된 달베코 변형 이글 배지(DMEM) 중에서 5％ 이산화탄소 및 4％ 산소 분위기에서 24시간 동안 유지했다. 이 시간 후에 세포를 무 혈청 DMEM으로 세척한 다음 새로운 무 혈청 DMEM 중에서 60시간 더 배양했다. 섬유아세포 단분자층을 다시 무 혈청 DMEM으로 세척했다. 시험 시약 및 부형제 대조용을 3개 한조로 최종 부피 0.4ml/웰의 새로운 무 혈청 DMEM 중의 세포에 첨가하고 24시간 동안 더 배양했다. 섬유아세포 조정 배지를 즉시 분석하거나 액체 질소 중에서 급속 냉동하여 차후의 분석을 위하여 -70℃에서 저장했다. 세포를 세고 도트-블로트(dot-blot) 분석 데이타를 이어서 세포 수에 대하여 표준화했다.

실시예 6

피부 섬유아세포 조정 배지 중 프로콜라겐-I 및 데코린 단백질의 도트 블로트 분석

부형제(대조용) 또는 시험 시약으로 처리한 피부 섬유아세포 조정 배지의 샘플에 20mM 디티오트레이톨(200mM 원액의 1:10 희석) 및 0.1％ 나트륨 도데실술페이트(10％ 원액의 1:100 희석)로 보충하고, 잘 혼합한 다음 75℃에서 2분간 배양했다. 175cm²플라스크에 10000개 세포/cm²로 접종하고 상기한 바와 같이 무 혈청 DMEM 중에서 유지한 섬유아세포의 순수한 섬유아세포 조정 배지를 연속 희석하여 분석 표준을 만들었다.

이어서 바이오-라드(Bio-Rad)의 96-웰 Bio-Dot 장치를 제조자 사용법에 따라서 사용하여 분석 샘플을 세개 한조로 Immobilon-P 전달 막의 미리 젖은 시트에 적용했다. 웰 당 대략 200㎕의 배지를 사용했다. 배지를 중력 하에서 막을 통하여 여과하고(30분), 그 후에 막을 PBS(200㎕)로 2회 세척했다. 이들 PBS 세척물을 중력 하에서 막을 통하여 여과했다(2x15분). Bio-Dot 장치를 진공 다기관에 부착하고 제 3 및 최종 PBS 세척을 흡인하면서 수행했다. 장치를 분해하고, 막을 제거하고 필요하다면 신속하게 절단한 후에, 차단 완충제 중에 4℃에서 하룻밤 동안 넣어 두었다. 데코린 분석을 위해 준비한 막은 PBS 중 3％(w/v) BSA/0.1％(v/v) Tween 20으로 차단하고, 프로콜라겐-I 분석을 위해 준비한 막은 PBS 중 5％(w/v) 탈지 건조 분유/0.05％ Tween20으로 차단했다.

다음 날, 막을 1:10000 희석 비율의 인간 프로콜라겐-I에 대한 1차 항체(MAB1912: 쥐 단클론성; 케미콘 Int. Inc.(Chemicon Int. Inc.), 캘리포니아주 테메쿨라) 또는 인간 데코린에 대한 1차 항체(토끼 다클론성; 바이오제네시스)로 실온에서 2시간 동안 프로브했다. 이어서 막을 TBS/0.05％ Tween 20으로 세척(3x5분)한 다음 필요하다면 1:1000 희석 비율의¹²⁵I-접합 항-쥐 또는 항-토끼 F(ab')2 분획(아머샴)과 함께 실온에서 1시간 동안 배양했다. 다음에 Immobilon 스트립을 다시 TBS/Tween 20으로 세척(3x5분)한 다음 공기 중 실온에서 방치하여 건조시켰다. 건조된 막을 셀로판으로 싸고 Molecular Dynamics 저장 인 스크린에 16-18시간 동안 노출시켰다.

이 시간의 마지막에 노출된 스크린을 인영상분석기(Molecular Dynamics Phosphorimager SF)에 의해 ImageQuant^TM소프트웨어를 사용하여 스캐닝했다. 도트 강도를 ImageQuant^TM중의 정량 도구를 사용하는 컴퓨터 보조 영상 분석에 의해 분석하고, 세포수로 표준화하고, 여러 시험 시약의 데코린 및 프로콜라겐 I의 합성에 대한 효과를 100의 임의 단위의 부형제 처리 대조용 값에 비교하여 측정했다.

실시예 7

시험

하기 표 10은 공액 리놀산을 LRAT/ARAT 저해제 세라미드 6과 함께 사용했을 때의 인간 피부 섬유아세포 중의 데코린 합성에 대한 상승 효과를 나타내며, 표 중의 양은 활성 성분이 사용된 양이다. 결과를 표준화하기 위하여 시험 물질의 효과를 100의 임의 단위의 부형제 처리 대조용 값에 비교하여 측정했다. 시험 중 사용된 시약의 농도는 세포 생존율에 영향을 미치지 않았다.

공액 리놀산과 LRAT/ARAT 저해제를 함께 사용함에 의한 데코린 합성에 대한 상승 효과
처리제	데코린
대조용(부형제)	100
0.01μM CLA	96.8
0.01μM 세라미드 6	101.2％
0.01μM CLA + 0.01μM 세라미드 6	156,5％

표 10의 결과는 공액 리놀산과 LRAT/ARAT 저해제를 함께 사용했을 때 인간 피부 섬유아세포 중의 프로콜라겐-I 및(또는) 데코린의 합성이 대조용에 비하여 현저하게 상승됨을 나타낸다.

피부 중 데코린의 수치는 피부의 개선된 상태 및 외관과 관련이 있다. 피부 중 데코린 수치의 상승은 피부 중 콜라겐의 조절되고 정확한 침착에 중요한데 이는 주름 제거 및 광손상 피부의 피부 회복과 같은 다수의 피부 이점에 관련되어 있다.

CLA와 레티노이드의 상승효과

하기 표 11은 공액 리놀산을 레티노산과 함께 사용했을 때의 인간 피부 섬유아세포 중의 프로콜라겐-I 합성에 대한 상승 효과를 나타내며, 표 중의 양은 활성 성분이 사용된 양이다. 결과를 표준화하기 위하여 시험물질의 효과를 100의 임의 단위의 부형제 처리 대조용 값에 비교하여 측정했다. 시도 중 사용된 시약의 농도는 세포 생존율에는 영향을 미치지 않았다.

비처리 대조용=100％. 모든 결과는 이 값에 대하여 표준화된 것이다.
처리된 활성 성분	프로콜라겐 1
0.1μM CLA	78.9％
0.01μM 트랜스 레티노산	102.8％
0.01μM CLA + 0.01μM 트랜스 RA	124.2％

표 11의 결과는 공액 리놀산과 레티노산을 함께 사용했을 때 인간 피부 섬유아세포 중의 프로콜라겐-I 합성이 대조용에 비하여 현저하게 상승됨을 나타낸다.

실시예 8

이 실시예는 본 발명에 따른 수중유 크림을 설명한다.

	％ w/w
	A	B	C	D	E
공액 리놀산(트리글리세라이드) ex Loders Croklaan	1.15	1.15	3	2	1
레티닐 리놀레이트					0.15
레티노산	---		0.001	---
레티놀	0.15	---		0.15
광유	4	4	4	4	4
α-이오논	1	---	---		-
이소다마스콘	---	---	0.3	---	-
Brij 56^*	4	4	4	4	4
Alfol 16RD^*	4	4	4	4	4
트리에탄올아민	0.75	0.75	0.75	0.75	0.75
부탄-1,3-디올	3	3	3	3	3
잔탄 검	0.3	0.3	0.3	0.3	0.3
향료	충분량	충분량	충분량	충분량	충분량
부틸화 히드록시 톨루엔	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01
물	100까지	100까지	100까지	100까지	100까지
* Brij56은 세틸 알콜 POE(10)이다.Alfol 16RD는 세틸 알콜이다.

실시예 9

이 실시예는 본 발명에 따른 알콜성 로션을 설명한다.

	％ w/w
	A	B	C	D
실시예 2에 따라서 제조된 공액 리놀산 트리글리세라이드(총 CLA 부분 중량의 93％ c9, t11 이성질체)	1	0.15	0.15	2
α-다마스콘	0.1	---	0.1	---
제라닐 제라니올	---	1	---	0.2
에탄올	40	40	40	40
향료	충분량	충분량	충분량	충분량
부틸화 히드록시 톨루엔	0.01	0.01	0.01	0.01
물	100까지	100까지	100까지	100까지

실시예 10

이 실시예는 본 발명의 조성물을 포함하는 선케어 크림을 설명한다.

	％ w/w
공액 리놀산(트리글리세라이드) ex Loders Croklaan	4％
레티닐 리놀레이트	0.01
코코일히드록시에틸이미다졸린	0.1
실리콘 유 200 cts	7.5
글리세릴모노스테아레이트	3
세토스테릴 알콜	1.6
폴리옥시에틸렌-(20)-세틸 알콜	1.4
잔탄 검	0.5
Parsol 1789	1.5
옥틸 메톡시신네이트(PARSOL MCX)	7
향료	충분량
색소	충분량
물	100까지

실시예 11

본 실시예는 본 발명의 조성물을 포함하는 고 내상 유중수 에멀전을 설명한다.

	％ w/w
	A	B	C	D
공액 리놀산(트리글리세라이드) ex Loders Croklaan	1	2	0.5	3
레티놀	0.5	-	-	-
LODEA		2	-	-
LOMEA ex. Rhone Poulenc	-	1	-	-
완전 수소화 코코넛유	3.9	3.9	3.9	3.9
Brij 92^*	5	5	5	5
벤톤 38	0.5	0.5	0.5	0.5
MgSO₄7H₂O	0.3	0.3	0.3	0.3
부틸화 히드록시 톨루엔	0.01	0.01	0.01	0.01
향료	충분량	충분량	충분량	충분량
물	100까지	100까지	100까지	100까지
* Brij 92는 폴리옥시에틸렌(2) 올레일 에테르이다.

실시예 8 내지 11은 본 발명에 따른 국소 조성물을 설명한다. 조성물은 통상적인 방법으로 가공될 수 있다. 이들은 미용 용도에 적절하다. 특히 이들은 노화 또는 광손상을 통하여 열화된 정상적인 피부에 사용되어 주름지고, 노화되고, 광손상되고(되거나) 자극된 피부의 외관을 개선하고 또는 건강한 피부에 사용되어 상기 열화 변화를 예방 또는 지연하는데 적절하다. 이 조성물들은 또한 자극된 피부를 진정하고, 건조 피부를 조절하고, 피부색을 미백하고 유분 및 피지 분비를 감소시키는데 효과적이다.

Claims

(a) 공액 리놀산 및(또는) 이의 유도체(여기에서 리놀산 유도체는 글리세라이드 에스테르, 아미드, 염 또는 치환 공액 리놀산이다);

(b) 레티노산, 레티놀, 레티닐 에스테르 및(또는) LRAT/ARAT 저해제; 및

(c) 피부학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 국소 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 공액 리놀산 또는 이의 유도체가 시스9 트랜스 11 이성질체 또는 트랜스 10 시스 12 이성질체인 국소 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 조성물의 성분 (b)가 레티노산, 레티놀 또는 레티닐 에스테르인 국소 조성물.
제 3 항에 있어서, 상기 성분 (b)가 레티놀 또는 리놀레아미드 모노에탄올아미드(MEA)인 국소 조성물.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 레티닐 에스테르가 레티노일 리놀레에이트인 국소 조성물.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 리브 온(leave on) 조성물인 국소 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 산 및(또는) 이의 유도체의 공액 리놀산 부분의 1중량％ 이상이 시스9, 트랜스 11 이성질체 및(또는) 트랜스10, 시스 12 이성질체로서 존재하는 국소 조성물.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LRAT/ARAT 저해제가 지방 아미드, 히드록시 지방산 아미드, 세라미드, 멜린아미드, 이미다졸리디논, 환형 지방족 불포화 탄화수소, 테르펜 또는 지방 히드록시에틸 이미다졸린 계면활성제, 또는 이의 혼합물인 국소 조성물.
제 8 항에 있어서, 상기 환형 지방족 불포화 화합물이 환형 지방족 불포화 알데히드, 케톤, 알콜 및 에스테르, 예컨대 알파 다마스콘, 베타 다마스콘, 델타 다마스콘, 이소다마스콘, 다마스케논, 알파 이오논, 베타 이오논, 알릴 알파 이오논, 이소부틸 이오논, 알파 메틸 이오논, 감마 메틸 이오논, 브라만올, 산단올, 알파 테르피네올, 리랄, 에틸 사프라네이트 및 이의 혼합물로부터 선택되는 것인 국소 조성물.
제 9 항에 있어서, 상기 환형 지방족 불포화 화합물이 α 다마스콘 또는 α 이오논인 국소 조성물.
제 8 항에 있어서, 상기 지방산 아미드 중의 지방산이 리놀산, 리놀렌산, 아라키돈산, 감마-리놀렌산, 호모-감마-리놀렌산 및 이의 혼합물로부터 선택되는 것인 국소 조성물.
제 11 항에 있어서, 상기 지방산 아미드 중의 지방산이 리놀산인 국소 조성물.
제 8 항에 있어서, 상기 히드록시 지방산 아미드가 락트아미드-모노에탄올아미드, C₁₃-β-히드록시산 아미드(2-히드록시-C₁₃-아미드), N-히드록시에틸-2-히드록시-C₁₆아미드, 12-히드록시-N-(2-히드록시에틸)옥타데칸아미드 및 피마자유의 모노에탄올아미드, 및 이의 혼합물인 국소 조성물.
제 8 항에 있어서, 상기 테르펜이 5환 트리테르펜 모노카르복실산인 국소 조성물.
제 8 항에 있어서, 상기 세라미드가 아세틸 스핀고신인 세라미드 유도체인 국소 조성물.
피부에 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항의 국소 조성물을 사용하는 것을 포함하는, 주름, 처짐, 건조, 노화 및(또는) 광손상 피부의 치료/예방; 피부 중 콜라겐 수치의 상승/유지, 피부 중 데코린 수치의 상승/유지, 조직 회복 증진; 자극받은 적색의 및(또는) 민감성 피부의 진정; 피부 결, 매끄러움 및(또는) 피부 탄력의 개선; 피부 미백; 유분/피지 분비의 조절로부터 선택된 적어도 하나의 피부 관리 이점을 제공하는 미용 방법.
주름, 처짐, 노화, 건조 및(또는) 광손상 피부의 치료/예방; 피부 중 콜라겐 수치의 상승/유지, 피부 중 데코린 수치의 상승/유지, 조직 회복 증진; 자극받은 적색의 및(또는) 민감성 피부의 진정; 피부 결, 매끄러움 및(또는) 피부 탄력의 개선; 피부 미백; 유분/피지 분비의 조절로부터 선택된 적어도 하나의 피부 관리 이점을 제공하기 위한 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
주름, 처짐, 노화 및(또는) 광손상 피부의 치료/예방; 피부 중 콜라겐 수치의 상승/유지, 피부 중 데코린 수치의 상승/유지, 조직 회복 증진; 자극받은 적색의 및(또는) 민감성 피부의 진정; 피부 결, 매끄러움 및(또는) 피부 탄력의 개선; 피부 미백; 유분/피지 분비의 조절로부터 선택된 적어도 하나의 미용 피부 관리 이점을 제공하기 위한 미용 국소 조성물 중에 공액 리놀산 및(또는) 이의 유도체를 레티노산, 레티놀, 레티닐 에스테르 및(또는) LRAT/ARAT 저해제와 함께 사용하는 용도.